PL236035B1 - Układ membranowy do miejscowej, ukierunkowanej immobilizacji komórek oraz sposób jego wytwarzania - Google Patents
Układ membranowy do miejscowej, ukierunkowanej immobilizacji komórek oraz sposób jego wytwarzania Download PDFInfo
- Publication number
- PL236035B1 PL236035B1 PL414931A PL41493115A PL236035B1 PL 236035 B1 PL236035 B1 PL 236035B1 PL 414931 A PL414931 A PL 414931A PL 41493115 A PL41493115 A PL 41493115A PL 236035 B1 PL236035 B1 PL 236035B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- solution
- group
- concentration
- layer
- volume
- Prior art date
Links
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title claims description 38
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 69
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 20
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 20
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 20
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 19
- 229920000867 polyelectrolyte Polymers 0.000 claims description 17
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 claims description 15
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 claims description 15
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 claims description 15
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 14
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims description 13
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims description 13
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 13
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 claims description 11
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 9
- -1 polypropylene Polymers 0.000 claims description 9
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 claims description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 6
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 5
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims description 5
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920005597 polymer membrane Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 claims description 3
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 3
- XMWRBQBLMFGWIX-UHFFFAOYSA-N C60 fullerene Chemical compound C12=C3C(C4=C56)=C7C8=C5C5=C9C%10=C6C6=C4C1=C1C4=C6C6=C%10C%10=C9C9=C%11C5=C8C5=C8C7=C3C3=C7C2=C1C1=C2C4=C6C4=C%10C6=C9C9=C%11C5=C5C8=C3C3=C7C1=C1C2=C4C6=C2C9=C5C3=C12 XMWRBQBLMFGWIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000003287 bathing Methods 0.000 claims 1
- 150000003947 ethylamines Chemical class 0.000 claims 1
- 229910003472 fullerene Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000003956 methylamines Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 47
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 8
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 8
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 4
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 4
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 229920006264 polyurethane film Polymers 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 2
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- 229960002796 polystyrene sulfonate Drugs 0.000 description 2
- 239000011970 polystyrene sulfonate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 238000007444 cell Immobilization Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest układ membranowy oparty o membrany polielektrolitowe, zwłaszcza mający bezpośredni kontakt z grupą immobilizowanych komórek do miejscowej ukierunkowanej immobilizacji komórek eukariotycznych adherentnych oraz sposób jej przygotowania.
Membrany polielektrolitowe dla celów biotechnologicznych są przedmiotem zainteresowania od lat 90-tych, przy czym dla zwiększenia użyteczności membran dla celów biotechnologicznych stosuje się membrany funkcjonalizowane, zawierające grupy modyfikujące ich właściwości w kierunku przewidywanych zastosowań.
Immobilizacja materiału biologicznego w obszarze membrany półprzepuszczalnej pozwalająca na lokalne ukierunkowanie wzrostu, a co za tym idzie umiejscowienie działania wytwarzanych przezeń produktów może znaleźć bezpośrednie zastosowanie biomedyczne.
Nieoczekiwanie okazało się, możliwe skonstruowanie układu membranowego według wynalazku, do immobilizacji komórek Eukariota, pozwalającego na unieruchomienie i izolację komórek, zapewniając ich funkcjonowanie, ukierunkowany wzrost i lokalizację w obrębie rusztowania membranowego, posiadającego potencjał wykorzystania we wspomaganiu odbudowy tkanki dzięki zlokalizowaniu i ukierunkowaniu działania.
Podczas badań nad przydatnością różnego rodzaju materiałów polielektrolitowych do konstrukcji membran do immobilizacji tego typu komórek, stwierdzono, że znane dotychczas materiały albo nie pozwalają na adhezję immobilizowanych komórek lub nie zapewniają dostępu substancji odżywczych do materiału biologicznego w odpowiednim stopniu, nie wykazując jednocześnie oczekiwanej stabilności. Ponadto, nie są podatne na modyfikację czynnikiem ukierunkowującym wzrost.
Badano między innymi rusztowania membranowe z polilizyny i sulfonianu polistyrenu oraz z poliaminy i sulfonianu polistyrenu. Okazało się, że nadają się one do enkapsulacji komórek eukariotycznych metodą warstwa po warstwie, ale nie zapewniają spełnienia wyżej wymienionych warunków jeśli chodzi o ukierunkowany wzrost z zagwarantowaniem ich funkcjonowania.
Znane są opisy (z opisu patentowego PL212620) warstw polielektrolitowych służących izolacji komórek, jak np. warstwy na podłożu poliolefinowym zbudowane z przynajmniej jednej biwarstwy utworzonej kolejno z warstwy polielektrolitu, obejmującego aminokwasy alifatyczne, zwłaszcza białkowe, a następnie warstwy z polielektrolitu, wybranego z grupy obejmującej aminy II lub III rzędowe, które jakkolwiek zapewniają izolację mikroorganizmów, to jednak nie służą ukierunkowanemu wzrostowi komórek eukariotycznych.
Nieoczekiwanie okazało się, że sposobem według wynalazku można otrzymać polielektrolitowe, membranowe rusztowania modyfikowane, zwłaszcza nałożone bezpośrednio na szkło, pozwalające na immobilizację komórek adherentnych Eukariota, jednocześnie nie ograniczające ich funkcjonowania i transportu substancji odżywczych przez membranę, pozwalające na ich ukierunkowany wzrost.
Układ membran do miejscowej, ukierunkowanej immobilizacji komórek, według wynalazku charakteryzuje się tym, że zbudowany jest z co najmniej z jednej triwarstwy, zwłaszcza nałożonej bezpośrednio na membranę płaską wybraną z grupy obejmującej szkło lub znane membrany polimerowe, zwłaszcza poliutretanowe lub polipropylenowe, przy czym triwarstwa utworzona jest kolejno z warstwy polianionu, wybranego z grupy obejmującej hydrożele z grupy polisacharydów, zwłaszcza alginiany, a następnie warstwy polielektrolitu, wybranego z grupy obejmującej aminy II lub III rzędowe, korzystnie zawierającego grupy etylowe lub metylowe, z inkorporowanym fulerenolem, i z inkorporowanym czynnikiem wzrostu nerwów, a następna, trzecia warstwa utworzona jest z warstwy polianionu, wybranego z grupy obejmującej hydrożele z grupy polisacharydów, zwłaszcza alginiany.
Membrana do immobilizacji komórek, według wynalazku korzystnie, zawiera triwarstwę w której pierwsza warstwa polisacharydu, zwłaszcza alginianu, najkorzystniej ma grubość od 6 nm do 20 nm, druga warstwa polielektrolitu zwłaszcza polimeru aminy alifatycznej II lub III rzędu, korzystnie zawierającego grupy etylowe lub metylowe do 100% grup metylowych lub etylowych, rozpuszczonego w roztworze NaCI, w ilości od 0,03-0,5% objętościowych, najkorzystniej ma grubość od 4 nm do 10 nm i jest inkorporowana fulerenolem, z inkorporowanym czynnikiem wzrostu nerwów lub czynnikiem neutropowym pochodzenia mózgowego, zaś trzecia warstwa zwłaszcza alginianu, najkorzystniej ma grubość od 6 nm do 20 nm.
Sposób wytwarzania półprzepuszczalnych rusztowań membranowych, zwłaszcza bezpośrednio na szkle lub matrycy polimerowej poliuretanowej lub polipropylenowej, według wynalazku polega na tym, że bezpośrednio na matrycę wprowadza się w znany sposób, zwłaszcza przez moczenie, roztwór
PL 236 035 B1 hydrożelu, wybranego z grupy obejmującej polisacharydy, zwłaszcza alginiany, rozpuszczony w roztworze NaCI, korzystnie o stężeniu fizjologicznym 0,9%, dokładnie 0,87 g/dl, a następnie po odpłukaniu, w strukturę membrany wprowadza się w znany sposób, zwłaszcza przez moczenie, roztwór polimeru aminy II lub III rzędowej, wybranej z grupy obejmującej aminy alifatyczne, zwłaszcza metyloaminy i/lub etyloaminy, korzystnie zawierające 100% grup metylowych lub etylowych, rozpuszczonego w roztworze NaCI, korzystnie o stężeniu fizjologicznym 0,9%, dokładnie 0,87 g/dl, w ilości od 0,03-0,5% objętościowych, z dodatkiem fulerenolu w ilości od 0,03-0,5% objętościowych i kompleksu z czynnikiem wzrostu nerwów w ilości od 0,03-0,5% objętościowych, a następnie po odpłukaniu wprowadza się w znany sposób, zwłaszcza przez moczenie, roztwór hydrożelu, wybranego z grupy obejmującej polisacharydy, zwłaszcza alginiany, rozpuszczonego w roztworze NaCI, korzystnie o stężeniu fizjologicznym 0,9, dokładnie 0,87 g/dl.
W sposobie według wynalazku, korzystnie wprowadza się roztwór polimeru polisacharydu, wybranego z grupy obejmującej polisacharydy naturalne w roztworze 0,05-0,5 M NaCI, o stężeniu 0,03-0,5% objętościowych, korzystnie przy pH 7,0-7,6.
W sposobie według wynalazku, korzystnie, wprowadza się roztwór polisacharydu w roztworze NaCI 0,05-0,5 M, o stężeniu 0,05-0,2% objętościowych.
W sposobie według wynalazku, korzystnie, układ poddaje się kąpieli w roztworze polisacharydu pod ciśnieniem atmosferycznym, w temperaturze 20-37°C, w czasie do 10 minut.
W sposobie według wynalazku, korzystnie wprowadza się roztwór polimeru aminy II lub III rzędowej w roztworze NaCI 0,05-0,5 M, korzystnie o stężeniu 0,05-0,2% objętościowych.
W sposobie według wynalazku, korzystnie poddaje się układ kąpieli w roztworze polimeru aminy II lub III rzędowej zawierającego grupy etylowe pod ciśnieniem atmosferycznym, w tem peraturze 15-37°C, w czasie do 10 minut, przy czym do roztworu polimeru polisacharydu wprowadza się pochodną fulerenu z grupą hydroksylową we wskazanych wyżej ilościach oraz kompleks z czynnikiem wzrostu nerwów, a przygotowany układ ewentualnie płucze się w soli fizjologicznej.
W sposobie według wynalazku, korzystnie wprowadza się roztwór polimeru aminy II lub III rzędowej w roztworze 0,05-0,5 M NaCI, o stężeniu 0,03-0,5% objętościowych, przy pH 7,0-7,6.
Sposób według wynalazku polega na utworzeniu, co najmniej jednej triwarstwy polielektrolitów na powierzchni suportu - szkła lub membrany płaskiej. Polielektrolity przygotowuje się przez rozpuszczenie polimerów w roztworze NaCI o odpowiednim pH.
Układ poddaje się kąpieli w roztworze kolejno polisacharydu, następnie polimeru aminy, a następnie polisacharydu w odpowiednio dobranych warunkach ciśnieniowych, w odpowiedniej temperaturze i czasie tak, aby triwarstwa polielektrolitów została zaadsorbowanana podłożu tworząc rusztowanie membranowe. Procedurę można powtórzyć kilkakrotnie. Tak przygotowany układ płucze się jeszcze ewentualnie w soli fizjologicznej.
Najkorzystniejsza wersja sposobu polega na tym, że odpowiednie podłoże zalewa się roztworem polimeru polisacharydu na okres 5-6 minut w komorze ciśnieniowej przy odpowiednim ciśnieniu i w temperaturze od 20-37°C.
Następnie, układ zanurza się w pojemniku z roztworem polimeru aminy II lub III rzędowej w roztworze NaCI, zawierającego grupy etylowe, zawierającego fulerenol o stężeniu 0,03-0,5% objętościowych oraz kompleks z czynnikiem wzrostu nerwów o stężeniu 0,03-0,5% objętościowych w roztworze NaCI, korzystnie przy pH 7,0-7,6, na okres 5-10 minut, przy atmosferycznym ciśnieniu i w temperaturze od 15-37°C. Następnie układ poddaje się płukaniu w soli fizjologicznej. Komórki korzystnie posadawia się na warstwie drugiej. Następnie układ pokrywa się roztworem polimeru polisacharydu na okres 2-4 minut w ciśnieniu atmosferycznym i w temperaturze od 20-37°C.
Aby ocenić przydatność membrany do immobilizacji, poddawano ją badaniu in vitro, sprawdzając stabilność membrany przy użyciu spektroskopii FTIR (Fourier Transformation Infrared), jakość enkapsulacji oraz funkcjonowanie enkapsulowanych w membranie komórek. Badając stabilność opracowanej membrany, wykorzystując widmo promieniowania podczerwonego (FTIR), nie stwierdzono zmian w składzie cząsteczkowym membran inkubowanych przez 2 tygodnie w środowisku symulującym fizjologiczne.
Badano cytotoksyczność zastosowanych materiałów membran na komórki Eukariota poprzez badanie ich żywotności w cytometrze przepływowym. Nie stwierdzono w ciągu 48-godzinnej hodowli istotnej różnicy w żywotności komórek WEHI-164 hodowanych w obecności zastosowanego materiału oraz komórek hodowanych bez obecności badanego materiału - kontroli ujemnej.
PL 236 035 B1
W celu zbadania funkcjonowania immobilizowanych w opracowanym układzie membran komórek, immobilizowano komórki adherentne ze szczególnym uwzględnieniem komórek WEHI-164. Stwierdzono przy użyciu testu MTT oraz przy użyciu cytometrii przepływowej że zachowują żywotność i podtrzymują produkcję białek w czasie 2 tygodniowej hodowli in vitro. Jednocześnie zaobserwowano istotną różnicę we wzroście komórek w porównaniu z kontrolą ujemną (hodowlą w układzie membranowym bez inkorporowanego fulerenolu z czynnikiem wzrostu nerwów. Świadczy to o tym, że zastosowany układ membranowy pozwala na funkcjonowanie immobilizowanego materiału biologicznego, jednocześnie pozwalając na jego ukierunkowany wzrost.
Poniżej przedstawiono przykłady wykonania wynalazku, nie ograniczające jego zakresu.
P r z y k ł a d 1
Płytkę szklaną zalewa się roztworem alginianu sodu w NaCI 0,1 M o stężeniu 0,05% obj., na 5 min, po czym płucze się w soli fizjologicznej w 20°C przez 3 minuty. Następnie, podłoże z nałożoną powłoką poddaje się moczeniu w roztworze polietylenoiminy (100% grup etylowych) z inkorporowanym fulerenolem i czynnikiem wzrostu nerwów o stężeniu odpowiednio 0,200 mg/ml oraz 0,1 mg/ml w roztworze NaCI 0,1 M o stężeniu 0,05% obj., po czym układ umieszcza się w kąpieli z medium hodowlanego RPMI-1640 w 25°C na 4 minuty, następnie posadawia się komórki i pokrywa roztworem alginianu sodu w NaCI 0,1 M o stężeniu 0,05% obj., inkubując przez 2 minuty, a następnie płucze solą fizjologiczną.
P r z y k ł a d 2
Folię poliuretanową zalewa się roztworem alginianu sodu w NaCI 0,1 M o stężeniu 0,05% obj., na 5 min, Następnie, podłoże z nałożoną powłoką poddaje się moczeniu w roztworze polietylenoiminy (100% grup etylowych) z inkorporowanym fulerenolem i czynnikiem wzrostu nerwów o stężeniu odpowiednio 0,200 mg/ml oraz 0,1 mg/ml w roztworze NaCI 0,1 M o stężeniu 0,05% obj., po czym układ umieszcza się w kąpieli z medium hodowlanego RPMI-1640 w 25°C na 4 minuty, następnie posadawia się komórki i pokrywa roztworem alginianu sodu w NaCI 0,1 M o stężeniu 0,05% obj., inkubując przez 2 minuty, a następnie płucze solą fizjologiczną.
P r z y k ł a d 3.
Folię poliuretanową zalewa się roztworem alginianu sodu w NaCI 0,1 M o stężeniu 0,5% objętościowych. Następnie, podłoże z nałożoną powłoką poddaje się moczeniu w roztworze polietylenoiminy (100% grup etylowych) z inkorporowanym fulerenolem i czynnikiem neutropowym pochodzenia mózgowego o stężeniu odpowiednio 0,200 mg/ml oraz 0,lmg/ml w roztworze NaCI 0,1 M o stężeniu 0,05% obj., po czym układ umieszcza się w kąpieli z medium hodowlanego RPMI-1640 w 25°C na 4 minuty, następnie posadawia się komórki i pokrywa roztworem alginianu sodu w NaCI 0,1 M o stężeniu 0,05% obj., inkubując przez 2 minuty, po czym układ umieszcza się w kąpieli z medium hodowlanego RPMI-1640 w 35°C na 5 minut.
P r z y k ł a d 4
Folię poliuretanową zalewa się roztworem alginianu w roztworze NaCI 0,3 M, o stężeniu 0,5% objętościowych, po czym układ umieszcza się w kąpieli z medium hodowlanego RPMI-1640 w 25°C na 3 minuty. Następnie, podłoże z nałożoną powłoką poddaje się moczeniu w roztworze polietylenoiminy (100% grup metylowych) z inkorporowanym fulerenolem i czynnikiem wzrostu nerwów o stężeniu odpowiednio 0,200 mg/ml oraz 0,1 mg/ml w roztworze NaCI 0,01M, o stężeniu 0,4% obj., po czym układ umieszcza się w kąpieli z medium hodowlanego RPMI-1640 w 25°C na 4 minuty, następnie posadawia się komórki i pokrywa roztworem alginianu sodu w NaCI 0,1 M o stężeniu 0,05% obj., inkubując przez 2 minuty, a następnie płucząc RPMI-1640 w 25°C przez 3 minuty.
P r z y k ł a d 5
Folię polipropylenową zalewa się roztworem alginianu w roztworze NaCI 0,3 M, o stężeniu 0,5% objętościowych, po czym układ umieszcza się w kąpieli z medium hodowlanego RPMI-1640 w 25°C na 3 minuty. Następnie, podłoże z nałożoną powłoką poddaje się moczeniu w roztworze polietyleno-iminy (100% grup metylowych) z inkorporowanym fulerenolem i czynnikiem neutropowym pochodzenia mózgowego o stężeniu odpowiednio 0,200 mg/ml oraz 0,1 mg/ml w roztworze NaCI 0,1 M, o stężeniu 0,4% obj., po czym układ umieszcza się w kąpieli z medium ho dowlanego RPMI-1640 w 25°C na 4 minuty, następnie posadawia się komórki i pokrywa roztworem alginianu sodu w NaCI 0,1 M o stężeniu 0,05% obj., inkubując przez 2 minuty, a następnie płucząc RPMI-1640 w 25°C przez 3 minuty.
Claims (7)
- Zastrzeżenia patentowe1. Układ membranowy do miejscowej, ukierunkowanej immobilizacji komórek, który stanowi membrana polielektrolitowa nałożona bezpośrednio na membranę płaską wybraną z grupy obejmującej szkło lub znane membrany polimerowe, zwłaszcza poliuretanowe, ewentualnie polipropylenowe, w której jedną z warstw jest warstwa polielektrolitu, wybranego z grupy obejmującej aminy II lub III rzędowe, korzystnie zawierające grupy etylowe lub metylowe, znamienny tym, że zbudowany jest z co najmniej jednej triwarstwy, utworzonej kolejno z warstwy polianionu, wybranego z grupy obejmującej hydrożele z grupy polisacharydów, zwłaszcza alginiany, warstwy polielektrolitu, wybranego z grupy obejmującej aminy II lub III rzędowe, korzystnie zawierające grupy etylowe lub metylowe, wraz z inkorporowanym na tej warstwie fulerenolem i z inkorporowanym czynnikiem wzrostu nerwów lub czynnikiem neutropowym pochodzenia mózgowego, oraz warstwy polianionu, wybranego z grupy obejmującej hydrożele z grupy polisacharydów, zwłaszcza alginiany.
- 2. Układ według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiera co najmniej jedną triwarstwę, w której warstwa polianionu, zwłaszcza polisacharydu ma grubość od 4nm do 10 nm, druga warstwa polielektrolitu zwłaszcza polimeru aminy alifatycznej II lub III rzędu, zwłaszcza z grupami etylowymi lub metylowymi, inkorporowana fulerenolem, i czynnikiem wzrostu nerwów, ma najkorzystniej grubość od 4 nm do 20 nm, a trzecia warstwa utworzona z warstwy polianionu, zwłaszcza alginianów ma grubość od 4nm do 10 nm
- 3. Sposób wytwarzania układu membranowego do miejscowej, ukierunkowanej immobilizacji komórek, z użyciem membany polielektrolitowej, w którym bezpośrednio na membranę płaską wybraną z grupy obejmującej szkło lub znane membrany polimerowe, zwłaszcza poliuretanowe lub polipropylenowe, wprowadza się w znany sposób, zwłaszcza przez moczenie, roztwór hydrożelu, wybranego z grupy obejmującej polisacharydy, zwłaszcza alginiany, korzystnie rozpuszczonego w roztworze NaCI, korzystnie o stężeniu od 0,05 do 0,5 M, a następnie po odpłukaniu, w strukturę membrany wprowadza się w znany sposób, zwłaszcza przez moczenie, roztwór polimeru aminy II lub III rzędowej, wybranej z grupy obejmującej aminy alifatyczne, zwłaszcza metyloaminy i/lub etyloaminy, korzystnie zawierające 100% grup metylowych lub etylowych, rozpuszczonego w roztworze NaCI, korzystnie o stężeniu od 0,05- do 0,5 M, w ilości od 0,03-0,5% objętościowych, a następnie po odpłukaniu wprowadza się w znany sposób, zwłaszcza przez moczenie, roztwór hydrożelu, wybranego z grupy obejmującej polisacharydy, zwłaszcza alginiany, korzystnie rozpuszczonego w roztworze NaCI, korzystnie o stężeniu fizjologicznym (0,9%), znamienny tym, że stosuje się roztwór polimeru aminy II lub III rzędowej, wybranej z grupy obejmującej aminy alifatyczne, zwłaszcza metyloaminy i/lub etyloaminy, z dodatkiem fulerenolu w ilości od 0,03-0,5% objętościowych i kompleksu z czynnikiem wzrostu nerwów lub czynnikiem neutropowym pochodzenia mózgowego w ilości od 0,03-0,5% objętościowych.
- 4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że do wprowadzania stosuje się roztwór polisacharydu w roztworze NaCI 0,05-0,5 M, korzystnie o stężeniu 0,03-0,5% objętościowych, a roztwór polimeru aminy II lub III rzędowej w roztworze o stężeniu 0,03-0,5% objętościowych, zawierający fulerenol i czynnik wzrostu nerwów o stężeniu odpowiednio 0,03-0,5% i 0,01-0,3% objętościowych, korzystnie przy pH 7,0-7,6.
- 5. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że poddaje się układ kąpieli w roztworze polimeru aminy II lub III rzędowej zawierającego grupy metylowe lub etylowe oraz fulerenol i czynnik wzrostu nerwów o stężeniu odpowiednio 0,03-0,5% oraz 0,01-0,3% objętościowych, pod ciśnieniem 0,09-0,1 MPa w temperaturze 20-37°C, w czasie 2 minut, a przygotowany w ten sposób układ, ewentualnie, moczy się w medium hodowlanym RPMI-1640.
- 6. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że wprowadza się roztwór polimeru aminy II lub III rzędowej zawierający fulerenol wraz z czynnikiem wzrostu nerwów w roztworze NaCI, o stężeniu 0,03-0,5% objętościowych, przy pH 7,0-7,6.
- 7. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że wprowadza się roztwór polimeru aminy II lub III rzędowej zawierający fulerenol wraz z czynnikiem wzrostu nerwów w roztworze NaCI 0,05-0,5 M, o stężeniu 0,01-0,2% objętościowych.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL414931A PL236035B1 (pl) | 2015-11-24 | 2015-11-24 | Układ membranowy do miejscowej, ukierunkowanej immobilizacji komórek oraz sposób jego wytwarzania |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL414931A PL236035B1 (pl) | 2015-11-24 | 2015-11-24 | Układ membranowy do miejscowej, ukierunkowanej immobilizacji komórek oraz sposób jego wytwarzania |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL414931A1 PL414931A1 (pl) | 2017-06-05 |
| PL236035B1 true PL236035B1 (pl) | 2020-11-30 |
Family
ID=58793716
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL414931A PL236035B1 (pl) | 2015-11-24 | 2015-11-24 | Układ membranowy do miejscowej, ukierunkowanej immobilizacji komórek oraz sposób jego wytwarzania |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL236035B1 (pl) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2026017592A1 (en) * | 2024-07-18 | 2026-01-22 | Universiteit Twente | Hydrophobic polyelectrolyte multilayer membranes |
-
2015
- 2015-11-24 PL PL414931A patent/PL236035B1/pl unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2026017592A1 (en) * | 2024-07-18 | 2026-01-22 | Universiteit Twente | Hydrophobic polyelectrolyte multilayer membranes |
| NL2038269B1 (en) * | 2024-07-18 | 2026-02-05 | Univ Twente | Hydrophobic polyelectrolyte multilayer membranes |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL414931A1 (pl) | 2017-06-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nagahama et al. | Novel biodegradable chitin membranes for tissue engineering applications | |
| Gong et al. | Layer-by-layer assembly of chondroitin sulfate and collagen on aminolyzed poly (L-lactic acid) porous scaffolds to enhance their chondrogenesis | |
| Mingyu et al. | Surface modification and characterization of chitosan film blended with poly-L-lysine | |
| Zhang et al. | Comparison of bone marrow stromal cell behaviors on poly (caprolactone) with or without surface modification: studies on cell adhesion, survival and proliferation | |
| Sakai et al. | Enzymatically crosslinked carboxymethylcellulose–tyramine conjugate hydrogel: cellular adhesiveness and feasibility for cell sheet technology | |
| US7041505B2 (en) | Carrier for cell culture | |
| Kulikouskaya et al. | Layer‐by‐layer buildup of polysaccharide‐containing films: Physico‐chemical properties and mesenchymal stem cells adhesion | |
| CN104356402A (zh) | 功能性自组装纳米多肽水凝胶 | |
| Toker-Bayraktar et al. | Plant-derived biomaterials and scaffolds | |
| JP7490668B2 (ja) | 細胞培養用基材及び細胞付き細胞培養用基材 | |
| CA2985414C (en) | Functionalized membranes for bioartificial organs | |
| Iijima et al. | Control of cell adhesion and proliferation utilizing polysaccharide composite film scaffolds | |
| US20210214678A1 (en) | Graphene oxide-based porous 3d mesh | |
| Guo et al. | An in situ mechanical adjustable double crosslinking hyaluronic acid/poly-lysine hydrogel matrix: Fabrication, characterization and cell morphology | |
| Bhatt et al. | Preparation and characterization of PVA/Chitosan cross-linked 3D scaffolds for liver tissue engineering | |
| Yu et al. | Dual-peptide-modified alginate hydrogels for the promotion of angiogenesis | |
| Vargas-Alfredo et al. | Fabrication of biocompatible and efficient antimicrobial porous polymer surfaces by the Breath Figures approach | |
| Park et al. | Cell-adhesive double network self-healing hydrogel capable of cell and drug encapsulation: New platform to construct biomimetic environment with bottom-up approach | |
| Kosik et al. | Electrolyte alginate/poly-l-lysine membranes for connective tissue development | |
| Zhu et al. | The influence of polyelectrolyte charges of polyurethane membrane surface on the growth of human endothelial cells | |
| PL236035B1 (pl) | Układ membranowy do miejscowej, ukierunkowanej immobilizacji komórek oraz sposób jego wytwarzania | |
| KR20190052547A (ko) | 세포 배양 기재 및 세포 시트를 제조하는 방법 | |
| CN115697078A (zh) | 用于合成适用于在大规模生产培养肉中使用的可食用且可灭菌的多孔3d支架的方法 | |
| Detsch et al. | Alginate and gelatine blending for bone cell printing and biofabrication | |
| AU2017354116A1 (en) | Vascular grafts, method of manufacturing thereof and articles comprising the same |