PL236218B1 - Zastosowanie kompozycji probiotycznej - Google Patents
Zastosowanie kompozycji probiotycznej Download PDFInfo
- Publication number
- PL236218B1 PL236218B1 PL406051A PL40605113A PL236218B1 PL 236218 B1 PL236218 B1 PL 236218B1 PL 406051 A PL406051 A PL 406051A PL 40605113 A PL40605113 A PL 40605113A PL 236218 B1 PL236218 B1 PL 236218B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- strains
- patients
- probiotic
- bacteria
- cells
- Prior art date
Links
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims description 52
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims description 52
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title claims description 48
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 40
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 32
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 19
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 16
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 claims description 16
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 16
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 15
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 claims description 14
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 claims description 12
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 8
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 14
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 description 9
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 8
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 8
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 8
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 8
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 8
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 6
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 6
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 238000002052 colonoscopy Methods 0.000 description 5
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 102100025255 Haptoglobin Human genes 0.000 description 4
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- 108010027843 zonulin Proteins 0.000 description 4
- 102000003940 Occludin Human genes 0.000 description 3
- 108090000304 Occludin Proteins 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- PKYCWFICOKSIHZ-UHFFFAOYSA-N 1-(3,7-dihydroxyphenoxazin-10-yl)ethanone Chemical compound OC1=CC=C2N(C(=O)C)C3=CC=C(O)C=C3OC2=C1 PKYCWFICOKSIHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 2
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000741 diarrhetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N mesalamine Chemical compound NC1=CC=C(O)C(C(O)=O)=C1 KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004963 mesalazine Drugs 0.000 description 2
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000008998 Catalase assay kit Methods 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 1
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229940113720 aminosalicylate Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- 229940088592 immunologic factor Drugs 0.000 description 1
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000012073 inactive phase Substances 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000031990 negative regulation of inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O thiamine pyrophosphate Chemical compound CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji probiotycznej do wspomagania leczenia zapalenia jelit.
Wrzodziejące zapalenie jelit, zwane również WZJ, jest przewlekłym procesem zapalnym błony śluzowej jelita o nieustalonej etiologii. Przypuszcza się, że wspólny wpływ na rozwój schorzenia mają czynniki genetyczne, środowiskowe i immunologiczne. Obserwując odpowiedź immunologiczną osób chorych na wrzodziejące zapalenie jelit, zauważono, że dominuje u nich populacja limfocytów Th2 produkujących różne interleukiny IL-4,IL-5,IL-6,IL-10. U tych osób poziomy cytokin prozapalnych TNF-α, IL- 1β, IL-8J, IL-12 przeważają nad poziomami cytokin o działaniu przeciwzapalnym IL1ra, IL-4, IL-10, IL-13.
Zauważono także, że mikroflora bakteryjna (mikrobiota) jelita u osób chorych na wrzodziejące zapalenie jelit różni się jakościowo i ilościowo od flory bakteryjnej osób zdrowych.
W leczeniu chorych z wrzodziejącym zapaleniem jelit stosuje się cztery grupy leków:
- leki należące do grupy aminosalicylanów, takie jak mesalazyna, wykazują one działania niepożądane takie jak bóle brzucha, nudności, objawy alergiczne,
- glikokortykosteridy, leki z tej grupy nie zawsze powodują poprawę stanu pacjenta, a mogą prowadzić do steroidozależności,
- leki immunosupresyjne, mogą wywoływać zaburzenia hematologiczne,
- ostatnio wprowadzono do leczenia WZJ tzw. leki biologiczne, czyli przeciwciała monoklonalne przeciwko cytokinom prozapalnym.
Znana jest z polskiego opisu patentowego pat. 209430 kompozycja probiotyczna i zastosowanie kompozycji probiotycznej.
Opis patentowy nr 209430 ujawnia kompozycję probiotyczną zawierającą co najmniej dwa szczepy bakterii kwasu mlekowego wybrane z grupy • składającej się z Lactobacillusrhamnosus KL 53A PCM B/00011, Lactobacillus plantarum PL02 PCM B/00012 i Bifidobacterium longum PL03 PCM B/00013. Wynalazek dotyczy również zastosowania kompozycji probiotycznej zawierającej co najmniej dwa szczepy bakterii kwasu mlekowego wybrane z grupy składającej się z Lactobacillus rhamnosus KL 53A, Lactobacillus plantarum PL02 i Bifidobacterium longum PL03, do wytwarzania preparatu użytecznego w profilaktyce i leczeniu patologicznych stanów przewodu pokarmowego będącego wynikiem braku właściwej flory bakteryjnej.
Bakterie z rodzaju Lactobacillus i Bifidobacterium wchodzące w skład kompozycji pochodzą z przewodu pokarmowego zdrowych noworodków karmionych mlekiem matki. Szczepy zostały zdeponowane zgodnie z Traktatem Budapeszteńskim w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów (PCM) w Instytucie Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk, 53-114 Wrocław, ul Rudolfa Weigla 12. Depozyty złożono w dniu 16.06.2005 r. Depozytom nadano numery:
Lactobacillus rhamnosus KL53A - numer depozytu - B/00011,
Lactobacillus plantarum PL02 - numer depozytu - B/00012, Bifidobacterium longum PL03 - numer depozytu - B/00013.
Szczepy ujawnione w tej kompozycji zastosowano w suplementach diety dla poprawienia składu flory bakteryjnej przewodu pokarmowego.
Prowadząc dalsze badania kompozycji będącej przedmiotem patentu nieoczekiwanie wykryto w badaniach klinicznych, że kompozycja zawierająca opisane szczepy podawana doustnie chorym z aktywną postacią wrzodziejącego zapalenia jelit powodowała złagodzenie objawów choroby w obserwacjach klinicznych oraz zmniejszenie stanu zapalnego śluzówki jelita stwierdzane w obrazach anatomopatologicznych wycinków jelita. Nieoczekiwanie stwierdzono, że szczepy wchodzące w skład kompozycji probiotycznej nie tylko przywracają właściwą florę bakteryjną ale wpływają na odpowiedź immunologiczną w szczególności na profil cytokinowy.
Istotą wynalazku jest zastosowanie kompozycji probiotycznej, zawierającej trzy szczepy bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus KL 53A, Lactobacillus plantarum PL02 i Bifidobacterium longum PL03, wykazującej zdolność wpływania na profil cytokinowy do wytwarzania preparatu użytecznego w profilaktyce i leczeniu stanu zapalnego jelit.
Opis szczepów wchodzących w skład mieszaniny.
I. Badania zdolności produkcji enzymów antyoksydacyjnych o charakterze przeciwzapalnym przez szczepy probiotyczne.
PL 236 218 Β1
W celu wykazania działania antyoksydacyjnego badanych szczepów bakterii probiotycznych, najpierw przeprowadzono doświadczenia nad produkcją przez nie aktywnych form tlenu na przykładzie nadtlenku wodoru, a następnie nad wykazaniem ich zdolności do jego rozkładu.
1.1 . Pomiar produkcji nadtlenku wodoru przez wybrane szczepy probiotyczne.
Do pomiaru produkcji nadtlenku wodoru przez badane szczepy probiotyczne wykorzystano testy paskowe firmy Merck, które zmieniały intensywność zabarwienia w zależności od ilości nadtlenku wodoru uwalnianego do płynnych hodowli tych bakterii. Barwę porównywano z odpowiednią skalą kolorymetryczną pozwalającą jednocześnie na wyliczenie przybliżonej wartości wyprodukowanego nadtlenku wodoru. Wynik podano w Tabeli 1.
Tabela 1. Produkcja nadtlenku wodoru (mg/l) przez szczepy probiotyczne z rodzaju Lactobacillus i Bifidobacterium.
| Szczepy | Po 4 godzinach inkubacji | Po 24 godzinach inkubacji |
| Lactobacillus rhamnosus KL53 A | 0 | 0 |
| Lactobacillus plantarum PL02 | 0 | 0 |
| Bifidobacterium longum PL03 | 0 | 0 |
| Kontrola ujemna - bulion MRS | 0 | 0 |
W oparciu o powyższe wyniki wykazano, iż badane szczepy probiotyczne nie produkowały nadtlenku wodoru.
I.2 Pomiar kinetyki rozkładu nadtlenku wodoru.
Pomiar kinetyki rozkładu nadtlenku wodoru został przeprowadzony za pomocą dwóch metod tj. w oparciu o test paskowy firmy Merck (test kolorymetryczny zmieniający intensywność zabarwienia w zależności od ilości H2O2) oraz z wykorzystaniem odczynnika Amplex® Red Catalase Assay Kit firmy Molecular Probes (10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine), który w obecności nadtlenku wodoru przechodzi w formę utlenioną. Forma utleniona barwnika pod wpływem światła fluorescencyjnego o długości 590 nm uwalnia światło, którego intensywność jest mierzona za pomocą odpowiedniego czytnika fluorescencyjnego.
Tabela 2. Oznaczenie kinetyki rozkładu nadtlenku wodoru przez badane szczepy Lactobacillus i Bifidobacterium w oparciu o metodę paskową.
| Badane szczepy | 0 min. | 30 min. | 60 min. | 90 min. | 120 min. | 150 min. | 180 min. | 210 min. | 24 godz. |
| Ilość nadtlenku wodoru (mg/l) | |||||||||
| Lactobacillus rhamnosus KL53A | 30 | 10 | 10 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Lactobacillus plantarum PL02 | 30 | 30 | 30 | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Bifidobacterum longum PL03 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 0 |
| Kontrola bulion MRS | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 |
| Kontrola bulion BL | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 10 | 0 |
Tabela 3. Pomiar kinetyki rozkładu H2O2 przez szczepy z rodzaju Lactobacillus i Bifidobacterium poprzez oznaczanie aktywności katalazy.
| Szczepy | Kinetyka rozkładu H2O2 Test Amplex Red; intensywność fluorescencji przy długości fali 590nm po czasie inkubacji: | ||
| 1 godz. | 4 godz. | 20 godz. | |
| Bifidobacterium longum PL03 | 5 774 | 12 741 | 45 935 |
| Lactobacillus rhmnosus KL53A | 24 233 | 48 213 | 34 132 |
| Lactobacillus plantarum PL02 | 17 546 | 39 808 | 2 934 |
PL 236 218 Β1
Tabela 4. Wyniki pomiaru kinetyki rozkładu H2O2 dla najbardziej aktywnego szczepu probiotycznego Lactobacillus plantarum PL02 poprzez oznaczanie aktywności katalazy.
| Szczep | Wynik pomiaru fluorescencji w czasie początkowym badania (odczyt A) | Wynik pomiaru fluorescencji w czasie końcowym badania (odczyt B) | Spadek intensywności fluorescencji pomiędzy czasem początkowym a końcowym Stosunek A: B |
| Lactobacillus plantarum PL02 | 17 546 | 2 934 | 5.98 |
Na podstawie pomiarów kinetyki rozkładu wodoru w oparciu o test paskowy oraz z wykorzystaniem zestawu Amplex® Red, można stwierdzić, iż szczególną zdolność rozkładu nadtlenku wodoru posiada szczep Lactobacillus plantarum PL02. Badany szczep z rodzaju Bifidobacterium nie wykazał zdolności do rozkładu chemicznie czystego nadtlenku wodoru.
II. Badanie wpływu wybranych szczepów probiotycznych na poprawę funkcji bariery jelitowej poprzez stymulację produkcji białek połączeń ścisłych (tight junctions), w szczególności okludyny oraz zonuliny (ZO-1).
Badania przeprowadzono na następujących szczepach bakterii probiotycznych: Lactobacillus plantarum PL02, Lactobacillus rhamnosus KL53A, Bifidobacterium longum PL03 przy zastosowaniu przeciwciał anty-okludyna i anty-zonulina znakowanych fluoresceiną. Badane szczepy inkubowano z komórkami jelitowych linii tkankowych. Intensywność świecenia była obserwowana w mikroskopie fluorescencyjnym przy długości fali: wzb. 494 nm - emi. 520 nm., pod powiększeniem 400x, a intensywność świecenia oceniano w skali półilościowej. Wyniki badań umieszono w Tabeli 5.
Tabela 5. Zestawienie wyników oddziaływania wybranych szczepów probiotycznych na stymulację produkcji białek połączeń ścisłych okludyny i zonuliny (ZO-1) wytwarzanych pomiędzy komórkami linii tkankowych Caco-2 i HT-29.
| Badane szczepy | Tkanka Caco-2 | Tkanka HT-29 | ||
| Okludyna | Zonulina ZO-1 | Okludyna | Zonulina ZO-1 | |
| L. rhamnosus KL53A | +++ | ++/+++ | +-H- | + |
| L. plantarum PL02 | +++ | ++ | + | - |
| B. longum PL03 | ++ | + | + | - |
| Kontrola ujemna: Enteropatogenny szczep E.coli (EPEC) | - | - | - | - |
Intensywność świecenia oceniana w skali półilościowej:
- brak świecenia (brak tworzenia białek połączeń ścisłych pomiędzy komórkami) + słabe świecenie (niski poziom tworzenia białek połączeń ścisłych) ++ silne świecenie (wysoki poziom tworzenia białek połączeń ścisłych) +++ bardzo silne świecenie (bardzo wysoki poziom tworzenia białek połączeń ścisłych)
Wykazano wybitne działanie szczepu L. rhamnosus KL53 A stymulujące produkcję białek połączeń ścisłych przez komórki linii nabłonkowych jelita i nieco słabsze działanie pozostałych dwóch szczepów wchodzących w skład kompozycji.
III. Badania produkcji wybranych cytokin przez komórki nabłonka stymulowane przez bakterie probiotyczne.
Badano szczepy bakteryjne: Lactobacillus plantarum PL 02, Lactobacillus rhamnosus KL 53A, Bifidobacterium longum PL 03. Kontrolę dla produkcji cytokin przez komórki nabłonkowe stanowiły bakterie Gram-ujemne: enteropatogenny szczep Escherichia coli 545/00/2B EPEC. Wybrane bakterie z rodzaju Lactobacillus i Bifidobacterium były hodowane w 10 ml płynnego podłoża MRS przez 24 godziny w warunkach beztlenowych w temperaturze 37°C. Po upływie tego czasu, liczba komórek w hodowlach
PL 236 218 B1 szczepów została sprawdzona za pomocą metody rozcieńczeń dziesiętnych. Szczep E.coli hodowano na bulionie Mueller-Hintona w warunkach tlenowych przez 24 godziny w temp. 37°C, a następnie mierzono gęstość hodowli metodą seryjnych rozcieńczeń na tym samym podłożu.
Badane komórki.
Hodowlę komórek linii Caco-2 prowadzono przez okres 15 dni w podłożu DMEM (IITD, Wrocław) z dodatkiem 10% płodowej surowicy wołowej (FBS, Sigma) na płytkach hodowlanych 24-dołkowych (TPP, Switzerland) w atmosferze o zwiększonej wilgotności, w atmosferze wzbogaconej 10% CO2 i w temperaturze 37°C. Płyn hodowlany wymieniano co 48 godzin. Po osiągnięciu zlewnego wzrostu jednowarstwowego komórki dwukrotnie przepłukiwano PBS (IITD, Wrocław), przesiewano i następnie poddawano kontaktowi z badanymi bakteriami. Osobno przeprowadzano obliczenie gęstości komórek. W tym celu tkanka w dwóch dołkach została poddana trawieniu trypsyną przez 10 min. w temperaturze pokojowej. Następnie zawiesinę komórek przenoszono do probówek i wirowano 10 min. przy 5000 obr/min. Komórki zawieszano w podłożu hodowlanym. W celu barwienia komórek mieszano zawiesinę z błękitem trypanu w stosunku objętości 1:10, a następnie komórki zliczano w komorze Burkera. Gęstość komórek stosowanych w badaniach wynosiła 1x106 CFU/ml.
III.1 Stymulacja komórek przez badane bakterie.
Szczepy bakterii Lactobacillus i Bifidobacterium po ustaleniu liczby ich komórek w ml (c.f.u./ml) były dwukrotnie przepłukiwane PBS o pH 7,4 i zawieszane w PBS o gęstości 108 CFU/ml. Szczep kontrolny E. coli został przygotowany w formie zawiesiny o takiej samej gęstości. Ponadto przygotowano zawiesiny tych samych bakterii o gęstości 107 i 108 CFU/ml, które zabijano przez tyndalizację poddając je dwukrotnej inaktywacji ciepłem w łaźni wodnej o temperaturze 65°C przez 2 godziny. W badaniach stosowano 108 martwych bakterii. Do czasu przeprowadzenia doświadczeń nad produkcją cytokin, bakterie były przechowywane w temp. -70°C w stanie zamrożenia. Komórki linii Caco-2 były poddawane stymulacji badanymi bakteriami przez 24 godziny. Po tym czasie uzyskiwano supernatanty hodowli stymulowanych komórek Caco-2 i kontrolnych komórek nie stymulowanych bakteriami przez wirowanie przy 5000 obr/min przez 25 minut i odciągnięcie płynu znad osadu.
III. 2 Pomiar poziomu uwalniania cytokin przez komórki Caco-2 pod wpływem bakterii.
Supernatanty hodowli zebrane znad komórek Caco-2 po kontakcie z badanymi bakteriami przechowywano w temperaturze -80°C do czasu wykonania pomiarów. Po rozmrożeniu próbki wirowano (5000 obr/min. przez 5 min., 4°C) i poddawano analizie. W celu przeprowadzenia oznaczenia użyto komercyjnych zestawów do testu ELISA dla ludzkich cytokin:
- TNF-α (BD OptElA™ Set Human - Cat. No. 555212),
- IL-6 (BD OptElA™ Set Human - Cat. No. 555220),
- IL-8 (BD OptElA™ Set Human - Cat. No. 555244),
- IL-10 (BD OptElA™ Set Human - Cat. No. 555157).
Test ELISA przeprowadzono zgodnie z instrukcjami producenta. Płytki 96-dołkowe opłaszczano przeciwciałami przeciwko ludzkim: TNF-α, IL-6, IL-8 i IL-10 rozcieńczonymi w stosunku 1: 250 w buforze opłaszczającym (0,1M węglan sodu, pH 9.5) po 100 μl na dołek. Płytki inkubowano w temperaturze 4°C przez noc, a następnie płukano trzykrotnie (300 μl na dołek) buforem płuczącym (PBS 1x, 0,05% Tween 20). Następnie dodawano po 200 μl bufora blokującego na dołek (PBS 1x, 10%FBS) i inkubowano w temperaturze pokojowej, przez okres 1 godziny. Po ponownym, trzykrotnym płukaniu buforem płuczącym, na płytkę nakładano po 100 μl badanych pożywek oraz próbek standardowych zawierających cytokiny o znanym stężeniu:
- TNF-α (7,8 pg/ml- 500 pg/ml),
- IL-6 (4,7 pg/ml- 300 pg/ml),
- IL-8 (3,1 pg/ml- 200 pg/ml),
- IL-10 (7,8 pg/ml- 500 pg/ml).
Po dwu godzinnej inkubacji w temperaturze pokojowej, płytkę płukano pięciokrotnie buforem płuczącym. W następnym etapie dodawano zawieszone w buforze blokującym biotynylowane przeciwciała rozpoznające ludzkie cytokiny w odpowiednim stężeniu:
- TNF-α 1:250,
- IL-6 1:250,
- IL-8 1:500,
PL 236 218 Β1
-IL-10 1:500, oraz roztworów koniugatu streptawidyny z enzymem peroksydazą chrzanową (w rozcieńczeniu 1:250). Inkubacja trwała 1 godzinę, w temperaturze pokojowej. Ostatecznie, po siedmiokrotnym płukaniu płytki buforem płuczącym, do każdego dołka dodawano po 100 μΙ roztworu substratu dla peroksydazy chrzanowej (BD OptElA™ TMB Substrate Reagent Set). Inkubacja przeprowadzana była w ciemności przez 30 minut. Reakcję zatrzymywano poprzez dodawanie do każdej studzienki po 50 μΙ 2M kwasu siarkowego. Absorbancję mierzono przy dwóch długościach fali, właściwej 450 nm oraz korekcyjnej 570 nm.
Wyniki przedstawiono w postaci rycin i tabel.
Wyniki oznaczeń bakterii żywych w dawce 108 CFU/ml przedstawiono na Fig. 1 do Fig. 4.
K— kontrola ujemna
E. c - Escherichia coli
KL53A - Lactobacillus rhamnosus KL 53A
PL02 - Lactobacillus plantarum PL 02
PL03 - Bifidobacterum longum PL 03 w porównaniu do 8 innych szczepów bakterii probiotycznych: KL57A, KL57B, KL57C, 78B, PB01, PB02, PB03, PB04.
Rycina 111/1. Wyniki oznaczania cytokiny IL-8
Rycina III/2. Wyniki oznaczania cytokiny IL-6
Rycina III/3. Wyniki oznaczania cytokiny IL-10
Rycina III/4. Wyniki oznaczania cytokiny TNF-a
Wyniki oznaczeń bakterii martwych w dawce 108/ml przedstawiono na Fig. 5 do Fig. 8.
Rycina III/5. Wyniki oznaczania cytokiny IL-8
Rycina III/6. Wyniki oznaczania cytokiny IL-6
Rycina III/7. Wyniki oznaczania cytokiny IL-10
Rycina III/8. Wyniki oznaczania cytokiny TNF-a
Tabela 6. Analiza proporcji pomiędzy poziomem cytokiny anty-zapalnej IL-10, a poziomami cytokin pro-zapalnych po stymulacji komórek szczepami badanych bakterii uzyskanych w badaniach nad bakteriami żywymi.
| Szczepy/Cytokiny | IL-10/TNF | IL-10/1 L-6 |
| Kontrola | 0 | 0 |
| Escherichia coli | 0 | 0,094 |
| L.fermentum 57A | 0 | 0,057 |
| L.plantarum 57B | 0 | 0,83 |
| L.gasseri 57C | 0 | 0,46 |
| L.rhamnosus KL53A | 14,74 | 3,52 |
| L.plantarum PL02 | 0 | 0 |
| L.plantarum 78B | 0 | 0,58 |
| L.plantarum PB01 | 0 | 1,92 |
| B.longum PL03 | 0 | 1,66 |
| L.plantarum PB02 | 0 | 0,13 |
| B.breve PB03 | 8,26 | 1,73 |
| B.breve PB04 | 0 | 2,98 |
Uwaga: brak proporcji (wartość = 0) oznacza, że jedna z badanych cytokin nie była stymulowana przez analizowany szczep bakterii.
III. 3 Podsumowanie wyników badań.
1. Komórki ludzkiej linii nabłonka jelitowego reagowały na kontakt z bakteriami probiotycznymi z rodzajów Lactobacillus i Bifidobacterium, czego efektem była mierzalna produkcja cytokin.
PL 236 218 B1
2. Bakterie żywe stymulowały produkcję cytokin wyraźniej, niż te same szczepy bakterii zabitych. Można przypuszczać, że podczas kontaktu komórek linii nabłonka jelitowego Caco-2 z żywymi bakteriami, dochodziło do namnażania tych bakterii, a to mogło wpływać na uzyskany sygnał.
3. Spośród badanych szczepów probiotycznych wchodzących w skład mieszaniny odpowiedź przeciwzapalną indukowały szczepy:
- Lactobacillus rhamnosus KL 53A, który dawał wyraźną odpowiedź komórek linii nabłonka jelitowego Caco-2,
- Bifidobacterium longum PL 03, który wykazywał działanie indukujące produkcję cytokin antyzapalnych.
IV. Przykład zastosowania.
Wynalazek zobrazowano poprzez opisanie badania klinicznego, w którym chorym z wrzodziejącym zapaleniem jelit podawano kompozycję probiotyczną.
IV.1 Opis badań klinicznych nad zastosowaniem mieszaniny szczepów.
Badania kliniczne przeprowadzono w latach 2008-2011 na grupie 67 chorych, w wieku powyżej 18 roku życia, leczonych w Klinice Gastroenterologii i Hepatologii Szpitala Uniwersyteckiego w Krakowie. W oparciu o kryteria kliniczne do grupy badawczej wybrano 51 osób z rozpoznanym wrzodziejącym zapaleniem jelita grubego (WZJG). Grupę kontrolną stanowiło 16 chorych z biegunkową postacią zespołu jelita nadwrażliwego. Pacjenci zostali szczegółowo poinformowani o celu i konsekwencjach badania i wyrazili na nie pisemną zgodę. Przed rozpoczęciem badania, protokół kliniczny uzyskał akceptację Komisji Bioetycznej Uniwersytetu Jagiellońskiego - opinia nr KBET/5/B/2007.
IV.2 Kryteria włączenia chorych do badania.
Do badania włączeni zostali chorzy, którzy zgłosili się do Poradni Oddziału Klinicznego Kliniki Gastroenterologii i Hepatologii Szpitala Uniwersyteckiego w Krakowie z powodu bólów brzucha, biegunki, niekiedy z domieszką krwi, bądź też, byli wzywani na wizytę kontrolną. U chorych zostały wykonane zabiegi kolonoskopii, na początku i na końcu obserwacji. Przez okres trzech miesięcy przed zabiegiem kolonoskopii wykonywanym na początku obserwacji, pacjenci nie byli poddawani antybiotykoterapii.
IV.3 Kryteria wykluczające chorych z badania.
Z badania wykluczeni zostali: chorzy na cukrzycę, choroby autoimmunologiczne, ciężkie choroby układowe, nadużywający alkoholu, pacjenci uczuleni na białko mleka krowiego, a także przyjmujący niesteroidowe leki przeciwzapalne.
IV.4 Protokół badania.
W celu określenia aktywności WZJG u chorych objętych programem, wykonano badania, które obejmowały: przeprowadzenie wywiadu chorobowego z pacjentem ze szczególnym uwzględnieniem aktualnych objawów choroby, czasu trwania WZJG oraz liczby nawrotów objawów klinicznych w ciągu roku. Na podstawie zebranych informacji oraz oceny zmian endoskopowych w jelicie grubym, dokonanej podczas kolonoskopii, określano aktywność choroby, za pomocą wskaźnika aktywności choroby: Indeksu Kliniki Mayo (The Mayo Clinic Disease Activity Index). Zakres możliwych do uzyskania punktów wahał się od 0 do 12. Większa liczba punktów odpowiadała wyższej aktywności WZJG. Zgodnie z tą klasyfikacją za remisję kliniczną przyjmowano stan, gdy całkowity Indeks Kliniki Mayo nie przekraczał 3 punktów. Natomiast zaostrzenie objawów WZJG było definiowane wartością całkowitą Indeksu Kliniki Mayo, wynoszącą 4 punkty lub więcej.
IV. 5 Klasyfikacja chorych do poszczególnych grup badawczych w ramach wizyty kwalifikacyjnej.
Na podstawie kryteriów oceny, opisanych w protokole badania, przeprowadzonej w czasie wizyty kwalifikacyjnej, chorych przypisano do następujących grup badawczych:
Grupa I - chorzy z WZJG w stanie remisji choroby, u których wskaźnik indeksu aktywności wynosił od 0 do 3 punktów (n=21)
Grupa II - chorzy z WZJG w stanie zaostrzenia choroby, u których wskaźnik indeksu aktywności przekroczył 4 punkty (n=30)
PL 236 218 B1
Grupę III - grupa kontrolna - pacjenci z biegunkową postacią zespołu jelita nadwrażliwego (n=16).
Pacjenci zgłaszający się na badania w ramach wizyty kwalifikacyjnej, przez okres poprzedzających trzech miesięcy, nie byli poddawani antybiotykoterapii.
IV.6 Klasyfikacja chorych do poszczególnych podgrup badawczych, ze względu na podawanie preparatu probiotycznego zawierającego mieszaninę szczepów.
Jednym z założeń badania było sprawdzenie, czy podawanie preparatu probiotycznego, zawierającego mieszaninę szczepów bakterii Lactobacillus rhamnosus KL 53A PCM B/00011, Lactobacillus plantarum PL02 PCM B/00012 i Bifidobacterium longum PL03 PCM B/00013, wpływa na zmiany w mikroflorze jelita grubego w kierunku przywracania jej prawidłowego składu. Na podstawie wywiadu chorobowego oraz wszystkich przeprowadzonych badań w ramach wizyty kwalifikacyjnej, w tym kolonoskopii, pacjenci z WZJG, przypisani do grup I i II, zostali dodatkowo podzieleni na dwie podgrupy: a i b. W podgrupach a - stosowano leczenie ciprofloksacyną podawaną dożylnie, 0,2 g/dobę, 10 dni oraz mesalazyną w standardowej dawce 3,0 g/dobę w fazie aktywnej, oraz 1,5 g/ dobę w fazie nieaktywnej choroby. W podgrupach b - do leczenia takiego jak w podgrupach a, została dołączona mieszanina szczepów probiotycznych.
Pacjenci w podgrupach b, zobligowani byli do przyjmowania preparatu probiotycznego jeden raz na dobę przez okres, co najmniej 2 miesięcy. W ten sposób sprawdzono, czy przewlekłe stosowanie mieszaniny szczepów probiotycznych wpływa na przebieg WZJG czyli na nasilenie objawów oraz stan zapalny jelita. Pacjenci przypisani do grupy kontrolnej nie dostawali mieszaniny szczepów probiotycznych.
Uczestnicy badania, w przypadku których została podjęta decyzja o włączeniu do leczenia preparatu probiotycznego, zostali szczegółowo poinstruowani o sposobie i czasie przyjmowania mieszaniny szczepów probiotycznych. Na wyznaczoną kolejną wizytę, po okresie co najmniej 2 miesięcy codziennego przyjmowania mieszaniny szczepów probiotycznych, do poradni ponownie zgłosiło się 31 chorych z poszczególnych podgrup badawczych:
Podgrupa I a - chorzy w fazie remisji nieprzyjmujący probiotyku (n=6)
Podgrupa I b - chorzy w fazie remisji przyjmujący probiotyk (n=8)
Podgrupa II a - chorzy w fazie zaostrzenia nieprzyjmujący probiotyku (n=8)
Podgrupa II b - chorzy w fazie zaostrzenia przyjmujący probiotyk (n=8)
Ze wszystkimi pacjentami przeprowadzono wywiad chorobowy, ze szczególnym uwzględnieniem aktualnych objawów choroby oraz dokonano oceny zmian endoskopowych w jelicie grubym, podczas zabiegu kolonoskopii. Na tej podstawie ponownie określono aktywność choroby za pomocą wskaźnika aktywności choroby według Indeksu Kliniki Mayo.
IV.7 Wpływ podawanej mieszaniny szczepów probiotycznych na poprawę stanu zdrowia chorych z WZJG.
Porównanie przeprowadzono pomiędzy wynikami uzyskanymi na wizytach kwalifikacyjnych, tzn. przed podaniem probiotyku oraz na wizytach kontrolnych, tzn. po co najmniej dwumiesięcznym okresie przyjmowania mieszaniny szczepów probiotycznych. Dla każdej z podgrup pacjentów, wyliczono średni spadek wartości Indeksu Skali Mayo (Tabela 7). W grupach pacjentów będących w fazie zaostrzenia WZJG, zarówno w podgrupie II a, jak i II b, zanotowano istotny spadek wartości Indeksu Skali Mayo. Wynik taki świadczy o tym, że pacjenci będący w fazie zaostrzenia WZJG na wizycie kwalifikującej, wykazywali poprawę stanu zdrowia na wizycie kontrolnej. Wykazano jednakże w osobnej analizie, że podawanie mieszaniny szczepów probiotycznych, miało znamienny wpływ na polepszenie stanu zdrowia pacjentów z grupy II b (przyjmujących mieszaninę szczepów probiotycznych) w porównaniu do pacjentów z grupy II a (nieprzyjmującej mieszaninę szczepów probiotycznych). Różnica pomiędzy tymi grupami była znamienna statystycznie (p=0,07). Wyniki te przedstawiono na Fig. 9, gdzie wykres obrazuje korelację pomiędzy poprawą stanu zdrowia pacjentów z podgrup II a i Il b mierzoną za pomocą Indeksu Kliniki Mayo.
PL 236 218 Β1
Tabela 7. Porównanie średniego spadku wartości Indeksu Kliniki Mayo w poszczególnych podgrupach pacjentów.
| Podgrupa chorych | Średnie wartości indeksu skali Mayo | Średni spadek wartości indeksu skali Mayo | |
| Wizyta kwalifikująca | Wizyta kontrolna | ||
| Podgrupa 1 a — chorzy w fazie remisji nieprzyjmujący probiotyku (n=>6) | 2,5 | 2,16 | 0,34 |
| Podgrupa 1 b —chorzy w fazie remisji przyjmujący probiotyk (n=8j | 2,25 | 1,5 | 0,75 |
| Podgrupa II a — chorzy w fazie zaostrzenia nieprzyjmujący probiotyku (n=8) | 7 | 4 | 3 |
| Podgrupa II b — chorzy w fazie zaostrzenia przyjmujący probiotyk (n=8) | 7,87 | 3 | 4,87 |
IV. 8 Potwierdzenie kolonizacji nabłonka jelita przez szczepy zawarte w podawanej mieszaninie szczepów bakterii probiotycznych przez wykazanie ich obecności w materiałach tkankowych pobranych od chorych z WZJG przyjmujących tę mieszaninę.
W podgrupie I b liczącej 8 chorych w fazie remisji otrzymujących mieszaninę szczepów bakterii probiotycznych, u 4 osób potwierdzono kolonizację co najmniej jednym ze szczepów, występujących w podawanej mieszaninie na podstawie badania identyczności przeprowadzonego metodami molekularnymi. Natomiast w podgrupie II b liczącej 8 chorych w fazie zaostrzenia choroby przyjmującej probiotyk, kolonizację co najmniej jednym z trzech szczepów zawartych w mieszaninie, potwierdzono u 6 osób.
IV.9 Przykład wykonania nieograniczający wynalazku.
Postać preparatu farmaceutycznego.
Kompozycja może mieć rozmaite postacie farmaceutyczne, takie jak: proszki, tabletki, kapsułki, łącznie z farmaceutycznie dopuszczalnymi dodatkami. Preparat zawiera substancję aktywną: 10 mld. bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus KL 53A, Lactobacillus plantarum PL02 i Bifidobacterium longum PL03 oraz substancje pomocnicze: maltodekstrynę, inozytol i kwas askorbinowy.
Wnioski.
W trakcie przeprowadzonych badań wykazano statystycznie potwierdzoną korelację pomiędzy stopniem poprawy stanu zdrowia pacjentów z aktywną fazą WZJ, a przyjmowaniem mieszaniny szczepów bakterii probiotycznych. Ponadto wykazano, że przyjmowanie mieszaniny powodowało u większości chorych kolonizację jelita podanymi szczepami probiotycznymi.
Claims (1)
- Zastrzeżenie patentowe1. Zastosowanie kompozycji probiotycznej, zawierającej trzy szczepy bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus KL 53A, Lactobacillus plantarum PL02 i Bifidobacterium longum PL03, wykazującej zdolność wpływania na profil cytokinowy do wytwarzania preparatu użytecznego w profilaktyce i leczeniu stanu zapalnego jelit.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL406051A PL236218B1 (pl) | 2013-11-13 | 2013-11-13 | Zastosowanie kompozycji probiotycznej |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL406051A PL236218B1 (pl) | 2013-11-13 | 2013-11-13 | Zastosowanie kompozycji probiotycznej |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL406051A1 PL406051A1 (pl) | 2015-05-25 |
| PL236218B1 true PL236218B1 (pl) | 2020-12-28 |
Family
ID=53175996
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL406051A PL236218B1 (pl) | 2013-11-13 | 2013-11-13 | Zastosowanie kompozycji probiotycznej |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL236218B1 (pl) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3639834B1 (en) | 2016-02-04 | 2023-07-12 | Universiteit Gent | Use of microbial communities for human and animal health |
-
2013
- 2013-11-13 PL PL406051A patent/PL236218B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL406051A1 (pl) | 2015-05-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI304736B (pl) | ||
| Matsubara et al. | Probiotics as antifungals in mucosal candidiasis | |
| JP6954563B2 (ja) | 代謝障害を処置するための低温殺菌アッカーマンシアの使用 | |
| JP4885452B2 (ja) | 細菌性組成物及びその使用 | |
| RU2754367C2 (ru) | Faecalibacterium prausnitzii и desulfovibrio piger для применения при лечении или предупреждении диабета и заболеваний кишечника | |
| US8476058B2 (en) | Probiotic yeast compositions and methods for inflammatory diseases | |
| JP2024516950A (ja) | ラクトバチルス・ロイテリ及びその使用、組成物、医薬品及び食品 | |
| Núñez et al. | Evaluation of immune response, microbiota, and blood markers after probiotic bacteria administration in obese mice induced by a high-fat diet | |
| US20080268006A1 (en) | Probiotic Lactobacillus Strains for Improved Vaginal Health | |
| KR102181606B1 (ko) | 설사의 치료 및/또는 예방을 위한 생균제 균주들 | |
| CN109496234A (zh) | 用于维持稳态的乳杆菌和双歧杆菌的菌株 | |
| BR112012022755B1 (pt) | composição com bactérias probióticas para uso no tratamento de distúrbios imunológicos | |
| JP2008517014A (ja) | 泌尿生殖器の病原体に対して有用な乳酸菌株およびそれらを含む組成物 | |
| PL236218B1 (pl) | Zastosowanie kompozycji probiotycznej | |
| RU2788397C1 (ru) | Способ лечения затяжного течения кишечной инфекции кампилобактериозной этиологии у детей раннего возраста | |
| TW202539716A (zh) | 益生菌組合物及其用途 | |
| WO2024209109A1 (en) | Nutraceutical compositions for the treatment or prevention of trimethylaminuria | |
| US20230256033A1 (en) | Physiologically acceptable compositions containing microorganisms or microbial products | |
| CN114990004A (zh) | 一种分泌型免疫球蛋白a包裹态罗伊氏乳杆菌及防治妊娠糖尿病的应用 | |
| HK40002356A (en) | Vaginal preparations for maintaining and/or restoring healthy female microbiota |