PL236550B1 - Sposób wytwarzania biosensora kolorymetrycznego do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli i biosensor kolorymetryczny do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli - Google Patents
Sposób wytwarzania biosensora kolorymetrycznego do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli i biosensor kolorymetryczny do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli Download PDFInfo
- Publication number
- PL236550B1 PL236550B1 PL423812A PL42381217A PL236550B1 PL 236550 B1 PL236550 B1 PL 236550B1 PL 423812 A PL423812 A PL 423812A PL 42381217 A PL42381217 A PL 42381217A PL 236550 B1 PL236550 B1 PL 236550B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- biosensor
- detection
- bacteria
- escherichia coli
- amount
- Prior art date
Links
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 title claims description 19
- 230000014670 detection of bacterium Effects 0.000 title claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 claims description 20
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 17
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 11
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 7
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000005294 ferromagnetic effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 7
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 claims description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011554 ferrofluid Substances 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 159000000014 iron salts Chemical class 0.000 claims description 3
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 claims 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229910021577 Iron(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- BGPVFRJUHWVFKM-UHFFFAOYSA-N N1=C2C=CC=CC2=[N+]([O-])C1(CC1)CCC21N=C1C=CC=CC1=[N+]2[O-] Chemical compound N1=C2C=CC=CC2=[N+]([O-])C1(CC1)CCC21N=C1C=CC=CC1=[N+]2[O-] BGPVFRJUHWVFKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 229920001940 conductive polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NMCUIPGRVMDVDB-UHFFFAOYSA-L iron dichloride Chemical compound Cl[Fe]Cl NMCUIPGRVMDVDB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001646719 Escherichia coli O157:H7 Species 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000003302 ferromagnetic material Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N gold(1+) Chemical compound [Au+] ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000008239 natural water Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000767 polyaniline Polymers 0.000 description 1
- 229920000128 polypyrrole Polymers 0.000 description 1
- 229920000123 polythiophene Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000012956 testing procedure Methods 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest Sposób wytwarzania biosensora kolorymetrycznego do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli i biosensor kolorymetryczny do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli. Biosensor służy do szybkiej detekcji komórek bakteryjnych w zbiornikach wodnych, jak i w procesach technologicznych, w których bakterie Escherichia coli często mogą stanowią źródło zanieczyszczenia.
Znany jest z opisu patentowego PL 222994 sposób wytwarzania preparatu diagnostycznego do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli, który polega na tym, że w pierwszym etapie otrzymuje się koloidalne złoto w procesie redukcji chlorku złota III w ilości 5-20 mg w obecności 5 mL 1% cytrynianu trisodowego, po czym w drugim etapie do otrzymanego roztworu koloidalnego złota o objętości 590 μl lub jej krotności zawierającej złoto w ilości 20-80 μg dodaje się przeciwciało specyficzne względem komórek bakteryjnych Escherichia coli w ilości 1-1,5 μg, a następnie dodaje się analizowaną próbkę, po czym dodaje się czynnik wywołujący reakcję barwną.
Z opisu patentowego US 2009/0123939 znane są wzbogacone biologicznie elek tro-aktywne nanocząstki magnetyczne do koncentracji, separacji i wykrywania bakterii utworzone z przewodzącego polimeru (na przykład przewodzących polianilin, polipiroli, politiofenów) związanych z nanocząstkami magnetycznymi (na przykład tlenkami metali magnetycznych Fe2+ i/lub Fe3+). Kompozycję w postaci cząstek można utworzyć w biologicznie zwiększonej, elektroaktywnej magnetycznej nanocząsteczkowej kompozycji (BEAM), zawierając ponadto wiążący element pary (np. przeciwciało) związany z przewodzącym polimerem kompozycji cząstek stałych. Ujawniono również sposoby i zestawy zawierające kompozycję w postaci cząstek oraz kompozycję nanocząsteczkową BEAM.
Bakteriofagi (fagi) to wirusy atakujące bakterie. Charakteryzują się one dużą specyficznością względem infekowanego gospodarza. Rozpoznają one swoiste receptory na powierzchni komórki bakteryjnej, przyłączają się do nich i poprzez wstrzyknięcie swojego materiału genetycznego, infekują bakterię. [Chen J. i wsp., Detection of Escherichia coli in Drinking Water Using T7 Bacteriophage-Conjugated Magnetic Probe. Analitical Chemistry 2015; 87:8977-8984].
Zdolność bakteriofagów do selektywnego wiązania bakterii oraz pojedynczych peptydów i białek wskazuje na ich duży potencjał w wytwarzaniu wysoce czułych biosensorów [Anany H. i wsp. Biocontrol of Listeria monocytogenes and Escherichia coli O157:H7 in Meat by Using Phages Immobilized on Modified Cellulose Membranes. Applied and Environmental Microbiology, 2011, 77(18):6379]. Ponadto, zastosowanie fagów jest bezpieczne zarówno dla zwierząt, jak i człowieka [Van Dorst B. i wsp., Recent advances in recognition elements of food and environmental biosensors: A review. Biosensors and Bioelectronics 2010, 26:1178-1194]. Wirusy te wykazują wysoką stabilność podczas przechowywania oraz są odporne na zmienne warunki środowiskowe, np.: kwaśne i zasadowe pH, temperaturę oraz obecność m.in. rozpuszczalników czy detergentów. Jednak główną ich zaletą w porównaniu z równie specyficznymi przeciwciałami, jest o wiele niższy koszt produkcji [Arya S. K., i wsp., Chemically immobilized T4-bacteriophage for specific Escherichia coli detection using surface plasmon resonance. Analyst 2010, 136:486-492].
Sposób wytwarzania biosensora kolorymetrycznego do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli, według wynalazku, charakteryzuje się tym, że przeprowadzając, znanymi metodami, precypitację soli żelaza w środowisku alkalicznym otrzymuje się ferrofluid modyfikowany polietylenoiminą stanowiący matrycę biosensora, którą płucze się co najmniej trzy razy wodą dejonizowaną stabilizując pH na poziome równym 7, po czym dodaje się bakteriofagi T4 w ilości 109 na 1 mg matrycy i inkubuje się co najmniej 12 godzin w temperaturze od 5-10°C z wytrząsaniem. Następnie magnetycznie odseparowuje się cząstki ferromagnetyczne niosące bakteriofaga T4, usuwa supernatant, płucze co najmniej pięciokrotnie buforem SM i dodaje się roztwór nasycony albuminy bydlęcej BSA w ilości 1 mg albuminy na 1 mL cząstek ferromagnetycznych z bakteriofagami T4 i tak otrzymany biosensor inkubuje się co najmniej 5 godzin w temperaturze pokojowej i płucze się buforem SM co najmniej 3 razy. Biosensor w ilości co najmniej 100 mg umieszcza się w przeźroczystym naczyniu szklanym, w buforze o składzie: czerwień fenolowa 0,5 mM, laktoza 100 mM.
Zestaw do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli, według wynalazku, charakteryzuje się tym, że składa się z biosensora kolorymetrycznego w postaci matrycy z ferrofluidu modyfikowanego polietylenoiminą z zimmobilizowanymi na niej bakteriofagami T4 w ilości 109 wirionów/100 mg matrycy, który to biosensor umieszczony jest w przeźroczystym naczyniu szklanym, w buforze, o składzie: czerwień fenolowa 0,5 mM, laktoza 100 mM oraz z magnesu kołowego umożliwiającego odseparowanie złoża
PL 236 550 B1 w trakcie procedury detekcji. Ilość biosensora w naczyniu szklanym wynosi co najmniej 100 mg, zaś ilość buforu co najmniej 0,5 mL. Zestaw może zawierać dodatkowo drugie naczynie szklane, w którym znajduje się próba negatywna. Skażenie wody bada się wówczas spektrofotometrycznie porównując badaną próbkę do próbki kontrolnej, mierząc absorbancję przy długości fali wynoszącej 438 nm i porównując z absorbancją próbki negatywnej.
Zaletą rozwiązania według wynalazku jest duża efektywność w detekcji E. coli w wodzie pitnej, wodociągowej, z wszelkiego rodzaju naturalnych akwenów wodnych z progiem detekcji na poziomie 100 komórek na litr. Proces unieruchomienia bakteriofaga na nośniku, zapobiega dyfuzji wirionów do środowiska reakcji, co uniemożliwia uruchomienie w komórkach bakteryjnych systemu oporności. Ponadto, system fagów związanych z matrycą, charakteryzuje się wyższą wytrzymałością mechaniczną, a co za tym idzie stabilnością całego układu niż systemy zastosowanie niezwiązanych wirionów. Dzięki temu procesy z jego udziałem są powtarzalne a wyniki wiarygodne. Podstawową zasadą wydajnej pracy unieruchomionego systemu jest efektywne wychwytywanie bakterii przez fagi, dzięki poprawnie wykonanej, zorientowanej immobilizacji wirusów na powierzchni nośnika. W tym celu wykorzystano różnicę w ładunku między białkami strukturalnymi faga, a tymi znajdującymi się na powierzchni nośnika. Ujemnie naładowana główka bakteriofaga, wiąże się z dodatnio naładowanymi grupami funkcyjnymi na powierzchni nośnika. W ten sposób dodatnio naładowany ogonek faga, wystawiony do środowiska / medium, efektywnie wychwytuje bakterie. Związanie faga z nośnikiem opartym o ferromagnetyk umożliwia szybką separację całego układu z płynu przy pomocy magnesu. Dzięki temu możliwe jest łatwe i szybkie odseparowanie immobilizowanego systemu ze środowiska reakcji oraz możliwość jego ponownego użycia.
Rozwiązanie według wynalazku przedstawione jest w przykładzie wykonania i na rysunku, który przedstawia zestaw do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli z dodatkowym naczyniem zawierającym próbkę kontrolną.
P r z y k ł a d 1
W celu otrzymania matrycy biosensora - ferrofluidu modyfikowanego polietylenoiminą (PEI) (stałych cząsteczek ferromagnetyczne zawieszone w cieczy) - przeprowadzono precypitację soli żelaza w środowisku alkalicznym. 0,87 g chlorku żelaza (II) (FeCb) i 2,34 g chlorku żelaza (III) (FeCh) rozpuszczono w 100 mL odgazowanej przy użyciu N2 wody dejonizowanej. Tak przygotowaną mieszaninę, mieszano z wykorzystaniem mieszadła mechanicznego (150 obr/min) przez 30 minut w temperaturze 80°C. Następnie dodano 25 mL (25%) wody amoniakalnej i 0,76 mg cytrynianu sodu mieszając kolejne 30 minut w tej samej temperaturze. Do tak przygotowanej mieszaniny dodano 50 mL wodnego roztworu zawierającego 5 mL polietylenoiminy, całość mieszano przez kolejne 90 minut w niezmienionych warunkach. Po tym czasie, przy pomocy magnesu oddzielono od płynu, ferromagnetyczne cząsteczki modyfikowane PEI i przepłukiwano je wodą dejonizowaną aż do momentu ustabilizowania się pH na poziomie pH = 7,0. Tak przygotowaną matrycę (PCP) suszono w temperaturze 90°C, a następnie przechowywano w wodzie dejonizowanej w temperaturze 4°C. Skład chemiczny przygotowanej matrycy sprawdzano wykorzystując spektroskopię fourierowską w podczerwieni (FTIR). Komponent biologiczny biosensora stanowił bakteriofag T4 dzikiego typu. Wiriony były namnażane w płynnej hodowli Escherichia coli, poprzez infekcję komórek o gęstości optycznej równej 0,5 przy wielokrotności infekcji 0,1. Hodowlę prowadzono do uzyskania kompletnej lizy. Następnie wiriony były zagęszczane metodą precypitacji z PEG8000. Wiriony zostały zimmobilizowane na matrycy w następujący sposób. Matryca była płukana pięciokrotnie wodą dejonizowaną. Następnie 10 mL zawiesiny bakteriofaga T4 zostało dodane do 5 mL matrycy o koncentracji 15 mg x mL-1 i inkubowane przez noc w temperaturze 10°C z wytrząsaniem. Cząstki ferromagnetyczne niosące bakteriofaga T4 zostały odseparowane magnetycznie. W następnym kroku, supernatant został usunięty, a liczba fagów zimmobilizowanych została zweryfikowana poprzez pomiar miana wolnych wirionów w supernatancie. Matryca z zimmobilizowanymi bakteriofagami T4 została pięciokrotnie przepłukana buforem SM (10 mM TRIS, 10 mM Mg2+, 0,1% żelatyny). Do matrycy z immobilizowanymi bakteriofagami T4 dodano roztwór nasycony albuminy bydlęcej (BSA) w celu zablokowania nośnika. Tak przygotowane biosensor inkubowano przez 5 godzin w temperaturze pokojowej, po czym pięciokrotnie płukanie buforem SM. Biosensor do wykorzystania w procesie detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli należy przechowywać w temperaturze 4°C.
Proces detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli przeprowadzono za pomocą zestawu składającego się z probówki 3 o objętości 1,5 mL, w której umieszczono 100 mg biosensora 1 zawierającego 109 wirionów bakteriofagów T4 w 1 mL buforu 2 o składzie: czerwień fenolowa 0,5 mM, laktoza 100 mM oraz magnesu kołowego 4, który umożliwia odseparowanie biosensora 1 w trakcie przeprowadzenia
PL 236 550 B1 procedury badania wody. Do probówki 3 zawierającej biosensor 1 dodano 1 mL badanej wody. Zawiesina uzyskała kolor czerwony. Zawartość probówki 3 dokładnie wymieszano i umieszczono w magnesie kołowym 4 w celu odseparowania biosensora
Próbkę inkubowano w temperaturze 15-37°C przez 30 minut. Zmiana barwy na żółtą oznaczała skażenie wody bakteriami Escherichia coli.
P r z y k ł a d 2
Przygotowano biosensor 1 jak w przykładzie pierwszym. Dodatkowo przygotowano probówkę kontrolną 3a z próbą negatywną. W tym celu w probówce 3a o objętości 1,5 mL umieszczono 100 mg biosensora 1 zawierającego 109 wirionów bakteriofagów T4 w 1 mL buforu 2 o składzie: czerwień fenolowa 0,5 mM, laktoza 100 mM, do której dodano 1 mL wody jałowej. Zawiesina uzyskała kolor czerwony. W probówce 3 o objętości 1,5 mL umieszczono 100 mg biosensora 1 zawierającego 109 wirionów bakteriofagów T4 w lmL buforu 2 o składzie: czerwień fenolowa 0,5 mM, laktoza 100 mM, do której dodano 1 mL badanej wody. Skażenie wody sprawdzono spektrofotometrycznie porównując badaną próbkę do próbki kontrolnej. Zmierzono absorbancję przy długości fali wynoszącej 438 nm i porównano z absorbancją próbki negatywnej. Spektrofotometr umożliwia osiągnięcie maksymalnej czułości biosensora do poziomu detekcji 100 komórek na litr badanej wody.
Claims (3)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania biosensora kolorymetrycznego do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli, znamienny tym, że przeprowadzając, znanymi metodami, precypitację soli żelaza w środowisku alkalicznym otrzymuje się ferrofluid modyfikowany polietylenoiminą stanowiący matrycę biosensora, którą płucze się co najmniej trzy razy wodą dejonizowaną stabilizując pH na poziome równym 7, po czym dodaje się bakteriofagi T4 w ilości 109 na 1 mg matrycy i inkubuje się co najmniej 12 godzin w temperaturze od 5-10°C z wytrząsaniem, następnie magnetycznie odseparowuje się cząstki ferromagnetyczne niosące bakteriofaga T4, usuwa supernatant, płucze co najmniej pięciokrotnie buforem SM i dodaje się roztwór nasycony albuminy bydlęcej BSA w ilości 1 mg albuminy na 1 mL cząstek ferromagnetycznych z bakteriofagami T4 i tak otrzymany biosensor (1) inkubuje się co najmniej 5 godzin w temperaturze pokojowej i płucze się buforem SM, co najmniej 3 razy, następnie biosensor (1) w ilości co najmniej 100 mg umieszcza się w przeźroczystym naczyniu szklanym (3), w buforze (2) o składzie: czerwień fenolowa 0,5 mM, laktoza 100 mM.
- 2. Zestaw do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli, znamienny tym, że składa się z biosensora (1) kolorometrycznego w postaci matrycy z ferrofluidu modyfikowanego polietylenoiminą z zimmobilizowanymi na niej bakteriofagami T4 w ilości 109 wirionów/100 mg matrycy, który to biosensor (1) umieszczony jest w przeźroczystym naczyniu szklanym (3), w buforze (2), o składzie: czerwień fenolowa 0,5 mM, laktoza 100 mM oraz z magnesu kołowego (4) umożliwiającego odseparowanie złoża w trakcie procedury detekcji, przy czym ilość biosensora (1) w naczyniu szklanym (3) wynosi co najmniej 100 mg, zaś ilość buforu (2) wynosi co najmniej 0,5 mL.
- 3. Zestaw według zastrz. 2, znamienny tym, że zawiera dodatkowo drugie naczynie szklane (3a), w którym znajduje się próba negatywna.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL423812A PL236550B1 (pl) | 2017-12-11 | 2017-12-11 | Sposób wytwarzania biosensora kolorymetrycznego do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli i biosensor kolorymetryczny do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL423812A PL236550B1 (pl) | 2017-12-11 | 2017-12-11 | Sposób wytwarzania biosensora kolorymetrycznego do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli i biosensor kolorymetryczny do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL423812A1 PL423812A1 (pl) | 2019-06-17 |
| PL236550B1 true PL236550B1 (pl) | 2021-01-25 |
Family
ID=66809699
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL423812A PL236550B1 (pl) | 2017-12-11 | 2017-12-11 | Sposób wytwarzania biosensora kolorymetrycznego do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli i biosensor kolorymetryczny do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL236550B1 (pl) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115931847A (zh) * | 2022-12-26 | 2023-04-07 | 扬州大学 | 一种基于噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的金黄色葡萄球菌比色分析方法 |
| WO2025104716A1 (en) * | 2023-11-16 | 2025-05-22 | Universidade Católica Portuguesa - Ucp | Kit for concentrating and detecting a target bacterial strain in a sample, methods, products and uses thereof |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL1812585T3 (pl) * | 2004-11-01 | 2015-03-31 | Erber Ag | Bakteriofagi jako czynniki selekcyjne |
-
2017
- 2017-12-11 PL PL423812A patent/PL236550B1/pl unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115931847A (zh) * | 2022-12-26 | 2023-04-07 | 扬州大学 | 一种基于噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的金黄色葡萄球菌比色分析方法 |
| WO2025104716A1 (en) * | 2023-11-16 | 2025-05-22 | Universidade Católica Portuguesa - Ucp | Kit for concentrating and detecting a target bacterial strain in a sample, methods, products and uses thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL423812A1 (pl) | 2019-06-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mosier-Boss et al. | Use of fluorescently labeled phage in the detection and identification of bacterial species | |
| Cai et al. | Single-digit Salmonella detection with the naked eye using bio-barcode immunoassay coupled with recombinase polymerase amplification and a CRISPR-Cas12a system | |
| JP2013503352A (ja) | 統合されたサンプル調製及び検体検出 | |
| US20080135490A1 (en) | Quantum dot biolabeling and immunomagnetic separation for detection of contaminants | |
| HK1245890A1 (zh) | 用於微生物检测的方法和系统 | |
| Smith et al. | Optimization of antibody-conjugated magnetic nanoparticles for target preconcentration and immunoassays | |
| JP2006510002A (ja) | 細菌又はウイルス病原体及び汚染物質を検出又は定量化するための検定 | |
| CN103713134B (zh) | 一种可视化检测病毒的检测试剂盒及其检测方法 | |
| Doostmohammadi et al. | Molecularly imprinted polymer (MIP) based core-shell microspheres for bacteria isolation | |
| Tang et al. | Magnetic bead-based fluorescence immunoassay for aflatoxin B 1 in food using biofunctionalized rhodamine B-doped silica nanoparticles | |
| AU2003250270A1 (en) | Method for identifying and extracting endotoxin | |
| CN110006971A (zh) | 一种双通道输出检测食源性致病菌的适体传感器的制备方法及其应用 | |
| WO2018082405A1 (zh) | 一种多靶分子浓度检测方法 | |
| CN115774103A (zh) | 基于钆量子点爆炸式扩增策略的低场核磁共振均相免疫检测食源性致病菌的方法 | |
| CN114966012A (zh) | 基于超顺磁性二维材料的低场核磁共振均相免疫检测食源性致病菌的方法 | |
| PL236550B1 (pl) | Sposób wytwarzania biosensora kolorymetrycznego do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli i biosensor kolorymetryczny do detekcji bakterii z gatunku Escherichia coli | |
| Ji et al. | Functionalized magnetic nanobeads for SERS-based detection of Staphylococcus aureus | |
| EP3508849B1 (en) | Antibody measurement method using antigen-carrying insoluble carrier particles on which antigen is immobilized by different methods, and reagent for antibody measurement | |
| CN110632301B (zh) | 一种基于生物膜干涉技术的沙门氏菌快速检测方法 | |
| CN116359492A (zh) | 一种应用于革兰氏阳性致病菌拉曼检测的替考拉宁功能化磁珠及其方法 | |
| CN107064485B (zh) | 十面体纳米银探针在利用表面等离子共振成像技术筛选核酸适配体中的应用 | |
| Tu et al. | DETECTION OF IMMUNOMAGNETICALLY CAPTURED, 4′, 6‐DIAMIDINO‐2‐PHENYLINDOLE (DAPI)‐LABELED E. COLI O157: H7 BY FLUORESCENT MICROSCOPE IMAGING 1 | |
| Wang et al. | Magnetic poly (phages) encoded probes–based dual-mode assay for rapid determination of live Escherichia coli and Hafnia paralvei based on microfluidic chip and ATP bioluminescence meter | |
| CN116590008B (zh) | 一种用于大肠杆菌o157:h7检测的基于背景消除的比率荧光探针及制备方法 | |
| CN101788558A (zh) | 一种磁小体抗体复合物及其制备方法和应用 |