PL237494B1 - Mikrosystem przepływowy do warstwowej hodowli komórek prawidłowych i nowotworowych - Google Patents
Mikrosystem przepływowy do warstwowej hodowli komórek prawidłowych i nowotworowych Download PDFInfo
- Publication number
- PL237494B1 PL237494B1 PL426675A PL42667518A PL237494B1 PL 237494 B1 PL237494 B1 PL 237494B1 PL 426675 A PL426675 A PL 426675A PL 42667518 A PL42667518 A PL 42667518A PL 237494 B1 PL237494 B1 PL 237494B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- microsystem
- plate
- microchannels
- culture
- microwells
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title abstract description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title abstract description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 claims description 7
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 35
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 6
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 6
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 4
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 4
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000002032 lab-on-a-chip Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- -1 poly (dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000013334 tissue model Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000003349 alamar blue assay Methods 0.000 description 1
- 239000012996 alamarblue reagent Substances 0.000 description 1
- 229940124650 anti-cancer therapies Drugs 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N calcein am Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=C(OC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(=O)C)C(OC(C)=O)=C1 BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000001608 connective tissue cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002165 photosensitisation Effects 0.000 description 1
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000003746 surface roughness Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- YNHJECZULSZAQK-UHFFFAOYSA-N tetraphenylporphyrin Chemical compound C1=CC(C(=C2C=CC(N2)=C(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(N=2)=C(C=2C=CC=CC=2)C2=CC=C3N2)C=2C=CC=CC=2)=NC1=C3C1=CC=CC=C1 YNHJECZULSZAQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Mikrosystem przepływowy do warstwowej hodowli komórek prawidłowych nowotworowych składa się z trzech płytek: hydrofilowej dolnej płytki szklanej (3), hydrofobowej płytki środkowej (2) z polimeru, wyposażonej w sześć okrągłych otworów zagłębiających (7) oraz hydrofobowej płytki górnej (1) z polimeru, wyposażonej w dwa liniowe mikrokanały (1a) z trzema mikrodołkami (4) każdy w kształcie zbliżonym do owalu. Otwory zagłębiające (7) znajdują się w miejscu odpowiadającym środkowi mikrodołków (4) w górnej płytce (1), ponadto mikrokanały (1a) na wejściu zaopatrzone są w otwory wlotowe (5) a na wyjściu mikrokanały (1a) łączą się i kończą się otworem wylotowym (6). Płytki (1, 2 i 3) są ze sobą trwale połączone przy użyciu generatora plazmy tlenowej a układ komór hodowlanych (4) w mikrosystemie jest liniowy, dwurzędowy i zgodny z układem dołków hodowlanych na standardowej płytce wielodołkowej Sarstedt 5022411.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest mikrosystem przepływowy do warstwowej hodowli komórek prawidłowych i nowotworowych typu Lab-on-a-chip do wielowarstwowej hodowli komórek prawidłowych oraz nowotworowych różnych typów w postaci monokultury lub kokultury komórkowej. Tego typu mikrosystemy znajdują zastosowanie w dziedzinie inżynierii tkankowej i komórkowej, a także w bioanalityce i medycynie. Przedmiot wynalazku może przyczynić się do tworzenia zaawansowanych modeli komórkowych i tkankowych użytecznych w badaniach komórkowych in vitro.
Badania laboratoryjne nowoopracowywanych związków terapeutycznych o potencjalnym charakterze przeciwnowotworowym w szerokim zakresie wykonywane są na dwuwymiarowych (2D) modelach komórkowych, dalekich od struktur naśladujących budowę tkanki nowotworowej in vivo. W warunkach fizjologicznych strukturę tkanki nowotworowej tworzą zarówno komórki nowotworowe, jak i komórki prawidłowe, które stanowią tzw. łącznotkankowo-naczyniowe podścielisko dla nowotworu. Komórki tkanki łącznej, dzięki swoim specyficznych właściwościom, są podstawą wzrostu komórek nowotworowych, zapewniają zachowanie integralności nowotworu i stymulują jego komórki do proliferacji. Opracowanie modeli tkankowych naśladujących specyfikę żywego organizmu jest współcześnie jednym z głównych celów inżynierii komórkowej i tkankowej. Jednym z nowatorskich rozwiązań, które pozwalają na usprawnienie badań w zakresie tych dziedzin nauki jest wykorzystanie mikrosystemów typu Lab-on-a-chip. W literaturze jest mało przykładów nowych rozwiązań technologicznych pozwalających na precyzyjne modelowanie tkanki nowotworowej w warunkach in vitro. Odpowiedzią na to zapotrzebowanie jest mikrosystem przepływowy według wynalazku, który umożliwia hodowlę komórkowego modelu nowotworu 3D jak i 2D w postaci wielowarstwy komórkowej.
Mikrosystem według wynalazku stanowi hybrydowy układ składający się z trzech głównych elementów: hydrofilowej dolnej płytki szklanej, korzystnie ze szkła sodowego o grubości 170 μm, hydrofobowej płytki środkowej z polimeru, korzystnie poli(dimetylosiloksanu) (PDMS), wyposażonej w sześć okrągłych otworów zagłębiających oraz hydrofobowej płytki górnej z polimeru, korzystnie poli(dimetylosiloksanu) (PDMS), wyposażonej w dwa liniowe mikrokanały z trzema mikrodołkami każdy w kształcie zbliżonym do owalu. Otwory zagłębiające znajdują się w miejscu odpowiadającym środkowi mikrodołków w górnej płytce . Mikrokanały na wejściu zaopatrzone są w otwory wlotowe a na wyjściu mikrokanały łączą się i kończą się otworem wylotowym. Płytki są ze sobą trwale połączone przy użyciu generatora plazmy tlenowej. Układ komór hodowlanych w mikrosystemie jest liniowy, dwurzędowy i zgodny z układem dołków hodowlanych na standardowej płytce wielodołkowej Sarstedt 5022411.
Korzystnie mikrokanały (1a) mają wysokość 200 μm.
Korzystnie mikrokomory (4) mają wymiary 2000 μm x 6900 μm i wysokość 200 μm.
Korzystnie otwory zagłębiające (7) mają średnicę 2,0 mm lub 1,2 mm.
PDMS jest biokompatybilnym, nietoksycznym, transparentnym i przepuszczalnym dla gazów materiałem polimerowym, który dzięki specyficznym właściwościom daje możliwość odwzorowywania skomplikowanych mikrostruktur metodą odlewu, korzystnie metodą replikacyjną. Metoda replikacyjna polega na przygotowaniu mieszaniny prepolimeru PDMS z czynnikiem sieciującym w stosunku 10:1, a następnie wykonaniu odlewu do wcześniej przygotowanej formy wyposażonej w wypukły wzór odpowiadający ostatecznej strukturze mikrosystemu. Formę dla wytworzenia mikrosystemu według wynalazku wykonano w płytce polimerowej z polimetakrylanu metylu) (PMMA), metodą mikrofrezowania. Mikrofezowanie jest metodą mechanicznej obróbki bezpośredniej i polega ona na stopniowym usuwaniu warstw polimeru z powierzchni materiału za pomocą obracającego się mikrofrezu. Po wykonaniu odlewu następuje etap sieciowania PDMS w podwyższonej temperaturze (ok. 70°C). Płytkę polimerową wyposażoną w otwory zagłębiające wykonano metodą odlewu cienkiej warstwy PDMS między dwiema płytkami z PMMA, wyposażonymi w zagłębienie. Otwory zagłębiające wykonano w ściśle określonych miejscach, odpowiadających lokalizacji mikrokomór w pierwszej płytce, za pomocą precyzyjnego dziurkacza punktowego typu Uni-Core. Trzy główne elementy mikrosystemu: dwie płytki polimerowe i płytka szklana, zostały ze sobą trwale połączone, dzięki aktywacji ich powierzchni plazmą tlenową wytworzoną przy użyciu generatora plazmy tlenowej.
Mikrosystem według wynalazku został zaprojektowany w taki sposób, że możliwe jest uzyskanie w tym samym mikroukładzie dwuwymiarowej (2D - monowarstwa) lub trójwymiarowej (3D przestrzennej, wielowarstwowej) hodowli komórek prawidłowych, nowotworowych lub ich kokultury (jednoczesnej hodowli dwóch typów komórek w tej samej komorze hodowlanej). Odpowiednie typ y
PL 237 494 B1 komórek wprowadzane są równolegle dwoma otworami wlotowymi w postaci zawiesiny komórkowej w medium hodowlanym. Otwory wlotowe przechodzą w sieć mikrokanałów, umożliwiających przepływ medium hodowlanego oraz zawiesiny komórkowej. Mikrosystem został wyposażony w dwa otwory wlotowe, tak aby w jednym układzie możliwa była równoległa i niezależna hodowla dwóch różnych typów komórek. Dodatkowo każdy z typów komórek może być hodowany jednocześnie w trzech komorach hodowlanych, odpowiadających trzem powtórzeniom pomiarowym. Każda komora hodowlana składa się z otworu zagłębiającego, który jest docelowym miejscem hodowli komórek oraz przestrzeni nad otworem zagłębiającym, wypełnionej medium hodowlanym, niezbędnym do utrzymania funkcji życiowych komórek. Otwór zagłębiający umożliwia prowadzenie w mikrosystemie hodowli prawidłowych komórek podstawnych, wykazujących dużą wrażliwość na przepływ, przez minimalizację stresu hydrodynamicznego.
Mikrosystem według wynalazku daje możliwość prowadzenia w tym samym mikroukładzie hodowli komórek w monowarstwie (2D) jak i ułożeniu przestrzennym (3D). W celu uzyskania hodowli 2D komórki prawidłowe lub nowotworowe zawieszane są w medium hodowlanym, a następnie wprowadzane do mikrosystemu za pomocą pompy perystaltycznej. W celu uzyskania hodowli 3D komórki prawidłowe (korzystnie fibroblasty, o charakterze łącznotkankowo-naczyniowym, zdolne do intensywnego wytwarzania macierzy zewnątrzkomórkowej) zawieszane są w medium hodowlanym i wprowadzane do mikroukładu. Po 24 h komórki prawidłowe ulegają adhezji a następnie komórki nowotworowe zawieszane są w medium hodowlanym i wprowadzane do mikrosystemu. Komórki nowotworowe ulegają adhezji częściowo do warstwy komórek prawidłowych, częściowo do warstwy podłoża, po czym rozpoczyna się proces ich intensywnej proliferacji, na skutek stymulacji przez komórki prawidłowe. Następuje wytworzenie trójwymiarowej (3D) wielowarstwy kokultury komórek.
Mikrosystem według wynalazku daje możliwość prowadzenia przestrzennej hodowli kokultury dwóch typów komórek: prawidłowych i nowotworowych. Hodowla komórek w mikrosystemie daje możliwość wykorzystania mikrosystemu jako potencjalnego narzędzia do badania właściwości nowoopracowywanych leków, do szybkich przesiewowych badań cytotoksyczności oraz do testowania terapii przeciwnowotworowych w warunkach in vitro.
Mikrosystem według wynalazku został zilustrowany na rysunku, na którym Fig. 1 przedstawia widok perspektywiczny kolejnych warstw mikrosystemu, Fig. 2 przedstawia widok mikrosystemu z góry a Fig. 3 przedstawia przekrój poprzeczny przez środek mikrokomory hodowlanej.
Mikrosystem stanowi hybrydowy układ składający się z trzech głównych elementów: hydrofilowej dolnej płytki szklanej 3 ze szkła sodowego o grubości 170 pm, hydrofobowej płytki środkowej 2 z poli(dimetylosiloksanu) (PDMS), wyposażonej w sześć okrągłych otworów zagłębiających 7 oraz hydrofobowej płytki górnej 1 z poli(dimetylosiloksanu) (PDMS), wyposażonej w dwa liniowe mikrokanały 1a z trzema mikrodołkami 4 każdy w kształcie zbliżonym do owalu. Otwory zagłębiające 7 znajdują się w miejscu odpowiadającym środkowi mikrodołków 4 w górnej płytce 1. Mikrokanały 1a na wejściu zaopatrzone są w otwory wlotowe 5 a na wyjściu mikrokanały łączą się i kończą się otworem wylotowym 6. Płytki są ze sobą trwale połączone przy użyciu generatora plazmy tlenowej. Układ komór hodowlanych 4 w mikrosystemie jest liniowy, dwurzędowy i zgodny z układem dołków hodowlanych na standardowej płytce wielodołkowej Sarstedt 5022411.
Mikrosystem wykonano z dwóch płytek polimerowych górnej 1 i środkowej 2 oraz dolnej płytki szklanej 3. Wytworzenie mikrosystemu rozpoczyna się od zaprojektowania odpowiednich wzorów mikrostruktur w programie AutoCAD. Zaprojektowany model CAD został przetłumaczony na język maszynowy przy pomocy modułu CAM - SolidCAM. Następnie, wzór geometrii mikrosystemu odwzorowano w formie za pomocą metody mechanicznej na drodze mikrofrezowania. W tym celu wykorzystano płytkę z PMMA o wymiarach 100 mm x 100 mm. W pierwszym etapie usunięto wierzchnią warstwę PMMA o grubości około 125 pm, a następnie wyfrezowano właściwą wypukłą formę, korzystanie pieczątkę. Pieczątkę wykonano frezem o średnicy 500 pm, wirującym z prędkością 15 000 obrotów na minutę i poruszającym się w płaszczyźnie równoległej do frezowanej powierzchni z liniową prędkością 500 mm/min. Zachodzenie frezu przy sąsiednich przejazdach nastawiono na 70%. Dzięki takim parametrom zminimalizowano chropowatość powierzchni powstałą w wyniku frezowania. W wyniku tych działań powstał wypukły model sieci mikrokanałów o wysokości 200 pm. Usunięto wióry oraz umyto i osuszono formę. Płynny PDMS wylano na formę i pozostawiono do usieciowania. Usieciowaną strukturę w płytce polimerowej zamrożono w ciekłym azocie, a następnie wywiercono otwory wlotowe 5 służące do wprowadzania zawiesiny komórkowej, medium hodowlanego i badanych substancji do mikrosystemu oraz otwór wylotowy 6. Płytkę polimerową 2
PL 237 494 B1 wycięto z odlanej cienkiej membrany z PDMS powstałej w wyniku usieciowania PDMS między dwiema płytkami z PMMA, wyposażonymi w zagłębienie o wysokości 200 μm. W cienkiej membranie wykonano 6 otworów zagłębiających, posługując się dziurkaczem precyzyjnym typu Uni-Core, umożliwiającym wykonywanie otworów o średnicy 1,2 mm lub 2,0 mm. Obie płytki polimerowe 1 i 2 połączono z płytką szklaną 3 za pomocą plazmy tlenowej, a w wykonanych otworach umieszczono wężyki. Płytki 1,2 i 3 miały wymiary 60 mm x 24 mm.
Mikrosystem według wynalazku wykorzystano do hodowli w monowarstwie (2D) oraz w ułożeniu przestrzennym wielowarstwowym (3D) prawidłowych fibroblastów jajnika (HOF) oraz komórek nowotworu jajnika (A2780 oraz SCOV-3) w postaci monokultury (2D) lub kokultury (3D) komórkowej. Do wysterylizowanego mikroukładu wprowadzono medium hodowlane. Następnie, do mikrokomór hodowlanych wprowadzono przez otwory wlotowe zawiesiny komórek jajnika przygotowane w medium hodowlanym, o gęstości około 1 ·106 komórek mL-1 (dla komórek nowotworowych) lub około 1 ·105 komórek mL-1 (dla komórek prawidłowych). Wprowadzone komórki inkubowano przez 24 h w inkubatorze w T = 37°C, CO2 = 5%. Przez otwory wlotowe wprowadzano roztwór odczynnika AlamarBlue, w celu określenia żywotności komórek. W trzeciej i czwartej dobie hodowli (po 48 h i po 72 h) codziennie wprowadzano roztwór odczynnika w celu sprawdzenia stopnia proliferacji komórek. Ostatniego dnia hodowli otworami wlotowymi wprowadzano do komórek roztwór jodku propidyny i kalceinyAM, w celu jakościowego określenia żywotności komórek hodowanych w hodowli 2D i 3D. Otrzymany mikrosystem wykorzystano także do oceny skuteczności terapii fotodynamicznej. W tym celu do mikrosystemu wprowadzono zawiesinę dwóch linii komórkowych, a następnie po 24 h do komórek wprowadzono roztwór związku fotouczulającego meso-tetrafenyloporfiryny i naświetlano komórki przez transparentne ściany mikroukładu światłem o długości fali 640 nm, w celu aktywacji zakumulowanego w komórkach związku. Żywotność komórek w mikrosystemie po przeprowadzeniu procedur terapeutycznych analizowano w analogiczny sposób, za pomocą testu AlamarBlue oraz różnicowego barwienia barwnikami fluorescencyjnymi.
Claims (7)
1. Mikrosystem przepływowy do warstwowej hodowli komórek prawidłowych i nowotworowych, posiadający system mikrokanałów i mikrodołków hodowlanych oraz otwory wlotowe i wylotowe, znamienny tym, że składa się z trzech płytek: hydrofilowej dolnej płytki szklanej (3), hydrofobowej płytki środkowej (2) z polimeru, wyposażonej w sześć okrągłych otworów zagłębiających (7) oraz hydrofobowej płytki górnej (1) z polimeru, wyposażonej w dwa liniowe mikrokanały (1a) z trzema mikrodołkami (4) każdy w kształcie zbliżonym do owalu a otwory zagłębiające (7) znajdują się w miejscu odpowiadającym środkowi mikrodołków (4) w górnej płytce (1), ponadto mikrokanały (1a) na wejściu zaopatrzone są w otwory wlotowe (5) a na wyjściu mikrokanały (1a) łączą się i kończą się otworem wylotowym (6), przy czym płytki (1, 2 i 3) są ze sobą trwale połączone przy użyciu generatora plazmy tlenowej a układ komór hodowlanych (4) w mikrosystemie jest liniowy, dwurzędowy i zgodny z układem dołków hodowlanych na standardowej płytce wielodołkowej Sarstedt 5022411.
2. Mikrosystem według zastrz. 1, znamienny tym, że hydrofilowa dolna płytka szklana (3) wykonana jest ze szkła sodowego o grubości 170 μm.
3. Mikrosystem według zastrz. 1, znamienny tym, że hydrofobowa płytka środkowa (2) wykonana jest z poli(dimetylosiloksanu).
4. Mikrosystem według zastrz. 1, znamienny tym, że hydrofobowa płytka górna wykonana jest z poli(dimetylosiloksanu).
5. Mikrosystem według zastrz. 1, znamienny tym, że mikrokanały (1a) mają wysokość
200 μm.
6. Mikrosystem według zastrz. 1, znamienny tym, że mikrokomory (4) mają wymiary
2000 μm x 6900 μm i wysokość 200 μm.
7. Mikrosystem według zastrz. 1, znamienny tym, że otwory zagłębiające (7) mają średnicę 2,0 mm lub 1,2 mm.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL426675A PL237494B1 (pl) | 2018-08-14 | 2018-08-14 | Mikrosystem przepływowy do warstwowej hodowli komórek prawidłowych i nowotworowych |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL426675A PL237494B1 (pl) | 2018-08-14 | 2018-08-14 | Mikrosystem przepływowy do warstwowej hodowli komórek prawidłowych i nowotworowych |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL426675A1 PL426675A1 (pl) | 2020-02-24 |
| PL237494B1 true PL237494B1 (pl) | 2021-04-19 |
Family
ID=75469977
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL426675A PL237494B1 (pl) | 2018-08-14 | 2018-08-14 | Mikrosystem przepływowy do warstwowej hodowli komórek prawidłowych i nowotworowych |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL237494B1 (pl) |
-
2018
- 2018-08-14 PL PL426675A patent/PL237494B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL426675A1 (pl) | 2020-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rothbauer et al. | Recent advances in microfluidic technologies for cell-to-cell interaction studies | |
| Beckwith et al. | Monolithic, 3D-printed microfluidic platform for recapitulation of dynamic tumor microenvironments | |
| CN111218404A (zh) | 一种仿生多器官芯片及其制备方法和应用 | |
| US20140273223A1 (en) | Micro-device for culturing cells, method for manufacturing same, and method for culturing cells using the micro-device for culturing cells | |
| CN103981096A (zh) | 一种两层细胞培养体系器官芯片及其制备方法 | |
| CN105176816A (zh) | 一种基于细胞聚集体的微脉管肝脏芯片及其制备和使用方法 | |
| Tomecka et al. | Microsystem with micropillar array for three-(gel-embaded) and two-dimensional cardiac cell culture | |
| Johnson et al. | The applications and challenges of the development of in vitro tumor microenvironment chips | |
| Flont et al. | A layered cancer-on-a-chip system for anticancer drug screening and disease modeling | |
| CN212316139U (zh) | 一种仿生多器官芯片 | |
| US9670447B2 (en) | Microfabricated polymeric vessel mimetics | |
| Killinger et al. | Microfluidic device for enhancement and analysis of osteoblast differentiation in three-dimensional cell cultures | |
| CN111826284B (zh) | 高通量培养板、高通量多器官共培养芯片及其应用 | |
| Baranowska et al. | Microfluidic system for generating a three-dimensional (3D) vascularized islet-on-a-chip model | |
| Ornoff et al. | Co-fabrication of chitosan and epoxy photoresist to form microwell arrays with permeable hydrogel bottoms | |
| CN113528334A (zh) | 一种微流控实验板及细胞培养方法 | |
| Salman et al. | Spheroid-formation 3D engineering model assay for in vitro assessment and expansion of cancer cells | |
| JP6296620B2 (ja) | 細胞評価用ハイドロゲル基材、細胞評価用ハイドロゲル基材の作製方法および細胞評価手法 | |
| PL237494B1 (pl) | Mikrosystem przepływowy do warstwowej hodowli komórek prawidłowych i nowotworowych | |
| WO2020226519A1 (en) | Magnetic microfluidic device for high-throughput screening | |
| Kołodziejek et al. | Cardiac tissue modeling using flow microsystems and nanofiber mats: Evaluating hypoxia-induced cellular and molecular changes | |
| Chen et al. | A pump-free dual unidirectional circulation microfluidic device for tumor spheroid microenvironment modulation and motility analysis | |
| Kołodziejek et al. | Heart-on-a-chip: A novel microfluidic approach to organ modelling and cellular mechanobiology | |
| CN115678778A (zh) | 一种培养三维细胞团的微流控芯片装置 | |
| Wang et al. | Innovative Stamp-Structured Organ-on-a-Chip Platform for Vascularized Tumor and Colon Models |