PL237977B1 - Zastosowanie liofilizowanego ekstraktu wodnego z całego raka pręgowatego - Google Patents
Zastosowanie liofilizowanego ekstraktu wodnego z całego raka pręgowatego Download PDFInfo
- Publication number
- PL237977B1 PL237977B1 PL429355A PL42935519A PL237977B1 PL 237977 B1 PL237977 B1 PL 237977B1 PL 429355 A PL429355 A PL 429355A PL 42935519 A PL42935519 A PL 42935519A PL 237977 B1 PL237977 B1 PL 237977B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- extract
- gold nanoparticles
- use according
- water
- cells
- Prior art date
Links
- 241001135934 Faxonius limosus Species 0.000 title claims description 3
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 title description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 42
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 28
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 28
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 25
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 25
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 12
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 5
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 5
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 5
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 4
- 241000238017 Astacoidea Species 0.000 claims description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 230000002879 macerating effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 235000001287 Guettarda speciosa Nutrition 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N Propene Chemical compound CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(1-aminoethyl)oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol;(2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2-yl]o Chemical compound OS(O)(=O)=O.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)C(C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N 0.000 description 1
- XHZPRMZZQOIPDS-UHFFFAOYSA-N 2-Methyl-2-[(1-oxo-2-propenyl)amino]-1-propanesulfonic acid Chemical class OS(=O)(=O)CC(C)(C)NC(=O)C=C XHZPRMZZQOIPDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000061520 Angelica archangelica Species 0.000 description 1
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 description 1
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 description 1
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 1
- 240000008955 Dioscorea japonica Species 0.000 description 1
- 235000005251 Dioscorea japonica Nutrition 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010016717 Fistula Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 240000002045 Guettarda speciosa Species 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 240000001439 Opuntia Species 0.000 description 1
- 235000013389 Opuntia humifusa var. humifusa Nutrition 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010039580 Scar Diseases 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N caffeic acid Chemical compound OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000001511 capsicum annuum Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000001608 connective tissue cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 230000003890 fistula Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 230000036074 healthy skin Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229940119485 safflower extract Drugs 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- -1 tetrazole salt Chemical class 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0656—Adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/80—Undefined extracts from animals
- C12N2500/82—Undefined extracts from animals from invertebrates
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Fibroblasty to tzw. komórki twórcze tkanki łącznej, które są zlokalizowane między innymi w skórze właściwej. Produkują kolagen i elastynę, które nadają skórze stabilność, elastyczność i chronią ją przed zbytnim rozciąganiem. Fibroblasty odgrywają kluczową rolę w procesie gojenia ran, biorąc udział w tworzeniu włókien kolagenowych oraz białek macierzy pozakomórkowej, których odkładanie jest konieczne, aby skutecznie zamknąć ranę. Jednak w przypadkach zaawansowanych uszkodzeń tkanki (martwica, choroby nowotworowe skóry) następuje często bezpowrotna utrata funkcji fibroblastów lub zmiana ich działania. W takiej sytuacji stosuje się przeszczepy, w których wykorzystuje się komórki fibroblastów uzyskane in vitro. Wykorzystanie autologicznych fibroblastów, namnożonych w warunkach pozaustrojowych, stwarza ogromne możliwości skutecznej regeneracji skóry bez ryzyka poważnych powikłań. Opisane zostały metody otrzymania i wykorzystywania fibroblastów w leczeniu przetok (US200501476), blizn potrądzikowych (WO/2011/140323), ran pooparzeniowych (US20050147596, US20050271633), zmarszczek (US8097581, US8314065, CA2423301).
Fibroblasty są wykorzystywane także w kosmetologii, w celu badania wpływu substancji kosmetycznych na ekspresję genów, syntezę białek i aktywności wielu enzymów. Hodowle komórkowe pozwalają na obserwacje wpływu różnych czynników na zachowanie się komórek skóry zdrowej oraz w warunkach patologicznych, takich jak bielactwo, czerniak lub łuszczyca. W ostatnich latach hodowle komórkowe prowadzone w wyspecjalizowanych centrach badawczych stały się powszechnie wykorzystywanym narzędziem w badaniach nad nowoczesnymi kosmetykami. W porównaniu z badaniami na zwierzętach, prowadzenie wstępnych badań z wykorzystaniem hodowli komórkowych znacznie ogranicza czas i koszty, co jest ich niewątpliwą zaletą.
W związku z szerokim spektrum zastosowań fibroblastów poszukuje się różnych metod przyśpieszania proliferacji tych komórek.
W opisie zgłoszenia patentowego US20050271633 została opisana metoda hodowli ludzkich fibroblastów, z zastosowaniem pożywki Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), suplementowanej dodatkiem płodowej surowicy bydlęcej (Fetal Bovine Serum, FBS) i własną surowicą pacjenta w ilości 5-20%. Medium hodowlane zawierało ponadto L-glutaminę, dwuwęglan sodu, chlorowodorek pirydoksyny, glukozę i siarczan gentamycyny. Odnotowano, że znaczące obniżenie udziału surowicy zwierzęcej powoduje spadek żywotności komórek.
W opisie patentu europejskiego EP2110123 przedstawiono medium przeznaczone do hodowli fibroblastów, w którym jako dodatek do znanej pożywki DMEM z FBS zastosowano ekstrakt z drożdży i ekstrakt z krokosza barwierskiego. Łączne działanie tych dwóch składników zwiększa zdolność proliferacji fibroblastów, które mają potencjał obniżony ze względu na wiek. Tak przygotowane fibroblasty zostały następnie wykorzystane w preparatach dermatologicznych.
Kolejną metodą stymulowania i/lub przyspieszania proliferacji fibroblastów in vivo i ex vivo jest stosowanie w tym celu kopolimeru soli kwasu 2-metylo-2-[(1-okso-2-propenylo)amino]-1-propanosulfonowego i estru 2-hydroksyetylowego kwasu propenowego (EP2148686).
Z opisu polskiego zgłoszenia patentowego nr P.420319 znane jest medium do hodowli ludzkich autologicznych fibroblastów, które stanowi podstawowa pożywka hodowlana z dodatkiem kwasu kofeinowego (kwasu 3,4-dihydroksycynamonowego) lub jego farmaceutycznie dopuszczalnych pochodnych, i N-acetylocysteiny i jej farmaceutycznie dopuszczalnych pochodnych. Podstawową pożywką hodowlaną jest DMEM, RMPI 1640, IMDM, BME, CnT-05 medium.
W opisie zgłoszenia patentowego JP2002068933A opisana jest stymulacja wzrostu fibroblastów ludzkich poprzez podanie in vitro ekstraktu lub soku z roślin z rodzaju opuncji. W opisie zgłoszenia patentowego JPH1045615A opisana jest indukcja wzrostu fibroblastów w badaniach in vitro pod wpływem wielu czynników pochodzenia roślinnego, takich jak: sezam indyjski, pochrzyn japoński, papryka roczna, dzięgiel (Angelica acutobia), pstrolista sercowata.
Obecny wynalazek wpisuje się w nurt poszukiwania naturalnych i skutecznych substancji przyspieszających proces proliferacji fibroblastów w hodowli in vitro.
Istotą wynalazku jest zastosowanie liofilizowanego ekstraktu wodnego z całego raka pręgowatego (Orconectes limosus), ewentualnie z dodatkiem nanocząstek złota, jako środka stymulującego wzrost komórek fibroblastów w hodowli in vitro. Zgodnie z wynalazkiem stosuje się wodny roztwór ekstraktu
PL 237 977 B1 z raka pręgowatego zawierający liofilizowany ekstrakt w ilości od 100 mg do 1000 mg w 1 dm3 wody, do którego ewentualnie dodaje się koloid zawierający od 10 do 100 mg nanocząstek złota w 1 dm3 wody.
Korzystnie ekstrakt wodny z całego raka pręgowatego dodaje się do hodowli komórek fibroblastów po 12-48 godzinach od rozpoczęcia hodowli w pożywce podstawowej, przez zastąpienie 5 do 20% wag., korzystnie 10% wag., pożywki podstawowej ekstraktem z raka pręgowatego, ewentualnie z dodatkiem nanocząstek złota. Korzystnie pożywką podstawową jest DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium), z dodatkiem płodowej surowicy bydlęcej i antybiotyków.
Korzystnie stosuje się nanocząstki złota wielkości od 15-150 nm. Korzystnie co najmniej 50% nanocząstek złota jest mniejsza od 40 nm.
Korzystnie stosuje się liofilizowany wodny ekstrakt z całego raka pręgowatego, otrzymany poprzez macerację homogenizatu z całych raków pręgowatych z dejonizowaną wodą, przesączenie ekstraktu, mrożenie w temperaturze od -20 do -80, korzystnie -80°C, a następnie usunięcie wody. Korzystnie ekstrakt przesącza się przez filtr o wielkości porów od 0,20 μm do 0,25 μm, korzystnie około 0,22 μm.
Środek zawierający ekstrakt z całego raka pręgowatego, jak również środek zawierający biokompleks nanocząstek i ekstraktu z całego raka pręgowatego powoduje zwiększenie proliferacji komórek fibroblastów, zwiększa przeżywalność komórek i zwiększa potencjał migracji komórek fibroblastów ludzkich. Badania prowadzono na linii komórek HS-5.
Na rysunku przedstawiono:
Fig. 1 - Test rysy przeprowadzony na komórkach fibroblastów linii HS-5 (A - kontrola, B - ekstrakt z raka pręgowatego, C - nanocząstki złota, D - kompleks nanocząstek złota i ekstraktu z raka pręgowatego). Fig. 2 - Test XTT dla komórek fibroblastów linii HS-5 traktowanych kompleksem nanocząstek złota (5 μg/ml) i ekstraktu z raka pręgowatego w różnych stężeniach (* - wynik istotny statystycznie przy p < 0,05).
Fig. 3 - Test XTT dla komórek fibroblastów linii HS-5 traktowanych ekstraktem z raka pręgowatego.
Wynalazek został bliżej przedstawiony w przykładach.
Przykład 1.
Całego raka pręgowatego homogenizuje się, a następnie homogenizat maceruje się z dejonizowaną wodą. Do 1 grama homogenizatu dodaje się 1 dm3 wody, mieszaninę umieszcza się na 30 minut w płuczce ultradźwiękowej, a następnie ekstrakt przesącza się pompką wodną przez filtr o wielkości porów 0,22 μm. W celu uzyskania suchego proszku ekstrakt jest mrożony w -80°C i liofilizowany. Po liofilizacji ekstrakt może być przechowywany w szczelnie zamkniętym opakowaniu bez dostępu do światła.
Bezpośrednio przed doświadczeniem ekstrakt jest rozpuszczany w wodzie dejonizowanej w proporcji 1 g ekstraktu na 1 dm3 wody.
Komórki linii HS-5 hodowano w butelkach o pojemności 75 cm3. Stosowano się pożywkę DMEM, z dodatkiem 10% wag. płodowej surowicy bydlęcej i 1% wag. antybiotyków (streptomycyna i penicylina). Komórki hodowano w inkubatorze w temp. 37°C, w atmosferze 95% powietrza i 5% CO2. Po 24 godzinach pożywkę hodowlaną wymieniano na nową, z tym że 10% wag. pożywki zastępowano ekstraktem z raka pręgowatego, otrzymanym w wyżej opisany sposób. Grupa kontrolna otrzymywała podłoże hodowlane w takim samym składzie, jak przed rozpoczęciem doświadczenia. Komórki były utrzymywane z dodatkiem ekstraktu przez 24 godziny.
P r z y k ł a d 2.
W celu wytworzenia kompleksu ekstraktu z raka pręgowatego i nanocząstek złota wytworzono 100 cm3 koloidu zawierającego 100 mg nanocząstek złota w 1 dm3 wody. Stosowano nanocząstki złota o wielkości od 15 nm do 150 nm, z czego 65% nanocząstek było mniejszych od 40 nm. Koloid nanocząstek złota poddano 30 minut sonifikacji w łaźni ultradźwiękowej w temperaturze pokojowej. Następnie dodano 100 cm3 roztworu zawierającego 1 g ekstraktu z raka w 1 dm3, przygotowanego jak opisano w przykładzie 1, wymieszano z użyciem worteksu i ponownie sonifikowano mieszaninę przez 30 minut w łaźni ultradźwiękowej w temperaturze pokojowej. Tworzenie kompleksu przebiegało w wyniku tzw. samoorganizacji nanocząstek.
Komórki linii HS-5 hodowano w butelkach o pojemności 75 cm3. Stosowano pożywkę DMEM, z dodatkiem 10% wag. płodowej surowicy bydlęcej i 1% wag. antybiotyków (streptomycyna i penicylina). Komórki hodowano w inkubatorze w temp. 37°C, w atmosferze 95% powietrza i 5% CO2. Po 24 godzinach pożywkę hodowlaną wymieniano na nową, z tym że 10% wag. pożywki zastąpiono taką samą ilością kompleksu ekstraktu z raka z nanocząstkami złota. Grupa kontrolna otrzymywała podłoże hodowlane w takim samym składzie, jak przed rozpoczęciem doświadczenia. Komórki były utrzymywane z dodatkiem ekstraktu przez 24 godziny.
PL 237 977 B1
Przykład 3.
Zbadano zdolność do indukcji proliferacji komórek fibroblastów w podłożu hodowlanym z dodatkiem środków opisanych w przykładzie 1 i w przykładzie 2 oraz koloidu nanocząstek złota, za pomocą testu rysy. Test ten pozwala określić wpływ badanej substancji na zdolność komórek do migracji i proliferacji.
W tym celu końcówką pipety automatycznej wykonano rysę w jednolitej warstwie komórek, a odklejone komórki usuwano przez 2-krotne płukanie roztworem PBS. Do tak przygotowanych hodowli dodawano ekstrakt z raka bądź kompleks ekstraktu z raka z nanocząstkami złota. Płytki inkubowano w temp. 37°C, w wilgotnej atmosferze 95% powietrza i 5% CO2, przez 24 godziny. Po tym czasie hodowlę zabarwiono metodą May-Grunwalda-Giemzy i obserwowano pod mikroskopem optycznym. Stopień migracji komórek określano poprzez ocenę zagęszczenia komórek, które zasiedliły rysę wykonaną uprzednio w warstwie komórek. Wyniki testu przedstawiono na Fig. 1.
Wyniki testu rysy wskazują, że ekstrakt z raka pręgowatego oraz nanocząstki złota w połączeniu z ekstraktem z raka pręgowatego wzmagają procesy proliferacji, wzrostu oraz migracji komórek.
P r z y k ł a d 4.
Zbadano właściwości cytotoksyczne środka według wynalazku celem ustalenia śmiertelności komórek po traktowaniu środkiem, w odniesieniu do nietraktowanej grupy kontrolnej. Badania przeprowadzono przy wykorzystaniu testu XTT - testu kolorymetrycznego bazującego na aktywności mitochondriów i ich zdolności do rozkładu soli tetrazolowej. Wyniki dla ekstraktu z raka pręgowatego i kompleksu nanocząstek złota i ekstraktu z raka pręgowatego przedstawiono na Fig. 2 i Fig. 3.
Komórki fibroblastów linii HS-5 utrzymywane w warunkach opisanych wcześniej przeniesiono na 96-dołkowe płytki hodowlane. 100 μl komórek, zawieszonych w trypsynie (ilość komórek 105/ml), pokrywano 100 μl płynu hodowlanego z 10% wag. dodatkiem płodowej surowicy bydlęcej i 1% wag. dodatkiem antybiotyków. Po 24 godzinnej hodowli w warunkach jak w przykładzie 4 płyn hodowlany wymieniono na nowy. W grupie doświadczalnej 10% wag. płynu hodowlanego zastąpiono ekstraktem z raka lub kompleksem ekstraktu z raka z nanocząstkami złota. Grupa kontrolna otrzymała 100% pożywki bez dodatków. W celu szerszej oceny cytotoksyczności zbadano różne stężenia czynników doświadczalnych.
Test XTT wykazał, że ekstrakt z raków oraz kompleks ekstraktu z raka i nanocząstek złota nie wykazują cytotoksyczności wobec normalnych komórek ludzkich linii HS-5. Przeciwnie, dodatek do pożywki obu ww. ekstraktów wzmaga żywotność oraz proliferację komórek tkanki łącznej, z tym że ekstrakt z dodatkiem nanocząstek złota robi to efektywniej.
Claims (8)
1. Zastosowanie liofilizowanego ekstraktu wodnego z całego raka pręgowatego (Faxonius limosus) jako środka stymulującego wzrost komórek fibroblastów w hodowli in vitro, przy czym w roztworze wodnym stosuje się ekstrakt w ilości od 100 mg do 1000 mg w 1 dm3 wody.
2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że do ekstraktu dodaje się nanocząstki złota.
3. Zastosowanie według zastrz. 2, znamienne tym, że do ekstraktu dodaje się koloid nanocząstek złota zawierający od 10 do 100 mg nanocząstek złota w 1 dm3 wody.
4. Zastosowanie według zastrz. 2, znamienne tym, że stosuje się nanocząstki złota wielkości od 15-150 nm.
5. Zastosowanie według zastrz. 4, znamienne tym, że co najmniej 50% nanocząstek złota jest mniejsza od 40 nm.
6. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że ekstrakt dodaje się do hodowli komórek fibroblastów po 12 do 48 godzinach od rozpoczęcia hodowli w pożywce podstawowej, przez zastąpienie od 5 do 20% wag. pożywki podstawowej ekstraktem.
7. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że pożywką podstawową jest DMEM z dodatkiem płodowej surowicy bydlęcej i antybiotyków.
8. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że stosuje się ekstrakt otrzymany poprzez macerację homogenizatu z całych raków pręgowatych z dejonizowaną wodą, przesączenie ekstraktu, mrożenie mieszaniny w temperaturze od -20 do -80, a następnie usunięcie wody.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL429355A PL237977B1 (pl) | 2019-03-21 | 2019-03-21 | Zastosowanie liofilizowanego ekstraktu wodnego z całego raka pręgowatego |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL429355A PL237977B1 (pl) | 2019-03-21 | 2019-03-21 | Zastosowanie liofilizowanego ekstraktu wodnego z całego raka pręgowatego |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL429355A1 PL429355A1 (pl) | 2020-10-05 |
| PL237977B1 true PL237977B1 (pl) | 2021-06-14 |
Family
ID=72669293
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL429355A PL237977B1 (pl) | 2019-03-21 | 2019-03-21 | Zastosowanie liofilizowanego ekstraktu wodnego z całego raka pręgowatego |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL237977B1 (pl) |
-
2019
- 2019-03-21 PL PL429355A patent/PL237977B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL429355A1 (pl) | 2020-10-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Robot-assisted in situ bioprinting of gelatin methacrylate hydrogels with stem cells induces hair follicle-inclusive skin regeneration | |
| EP2582791B1 (en) | Hair follicle neogenesis | |
| EP3453382A1 (en) | Composition including stem cell-derived exosome for skin whitening or wrinkle improvement | |
| Li et al. | Collagen/chitosan/genipin hydrogel loaded with phycocyanin nanoparticles and ND-336 for diabetic wound healing | |
| EP3146973B1 (en) | Hair growth-promoting function of small-sized stem cells and use thereof | |
| Duan et al. | ZIF-8 as a protein delivery system enhances the application of dental pulp stem cell lysate in anti-photoaging therapy | |
| JP6846422B2 (ja) | Ｐａｌｍａｒｉａ ｐａｌｍａｔａとジャスミンとの相乗作用的抽出物、それを含む組成物およびそれらの使用 | |
| KR101551728B1 (ko) | 성장인자 및 아미노산을 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 화장료 조성물 | |
| CN106456676A (zh) | 经刺激的干细胞的培养基的毛发生长促进功能及其用途 | |
| US9592257B2 (en) | Complete human skin organ generated from culture-expanded cells | |
| JP2018512440A (ja) | 皮膚細胞に対する若返り活性および／または創傷治癒活性を有する無細胞植物細胞培養懸濁液上清 | |
| KR101806115B1 (ko) | 피부재생 또는 주름개선 효과를 가지는 인간 지방유래 줄기세포의 배양 농축액 및 이의 용도 | |
| US20110305671A1 (en) | Cell Compositions and Methods for Hair Follicle Generation | |
| CN113164374A (zh) | 用于促进毛发生长的山竹提取物 | |
| CA2689484A1 (en) | Skin-derived precursor cells and uses thereof | |
| Uktamovich et al. | Effects of cellular cord blood on skin pathology in laboratory animals | |
| PL237977B1 (pl) | Zastosowanie liofilizowanego ekstraktu wodnego z całego raka pręgowatego | |
| CN117448404B (zh) | 雨生红球藻提取物的酶解方法及应用 | |
| AU2016357986A1 (en) | Method for the production of hair follicles and de novo papillae, and use thereof for in vitro test and in vivo implants | |
| RU2716159C2 (ru) | Композиция для профилактического или терапевтического лечения состояний, связанных с изменением количества волос | |
| JP7111313B2 (ja) | 医薬品組成物及び化粧品組成物 | |
| CN110317774A (zh) | 中草药的水性萃出物及其组合物与用途 | |
| US6943024B2 (en) | Epidermal melanocyte culture formulations | |
| Hassanpour et al. | The effect of mummy substance on matrix protein synthesis by human adipose-derived stem cells and dermal fibroblast and their behavior on plated PCL scaffold | |
| TWI867713B (zh) | 包含羊水幹細胞或其衍生物的組成物及其用途 |