PL240124B1 - Sposób określania stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą - Google Patents
Sposób określania stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą Download PDFInfo
- Publication number
- PL240124B1 PL240124B1 PL428992A PL42899219A PL240124B1 PL 240124 B1 PL240124 B1 PL 240124B1 PL 428992 A PL428992 A PL 428992A PL 42899219 A PL42899219 A PL 42899219A PL 240124 B1 PL240124 B1 PL 240124B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- gal
- protein
- kidney damage
- concentration
- urine
- Prior art date
Links
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 title claims abstract description 34
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 102100039558 Galectin-3 Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 claims abstract description 8
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 claims abstract 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 13
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 3
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 4
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 24
- 102000000802 Galectin 3 Human genes 0.000 description 7
- 102000007563 Galectins Human genes 0.000 description 6
- 108010046569 Galectins Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 3
- 206010061481 Renal injury Diseases 0.000 description 3
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 3
- 208000037806 kidney injury Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000608757 Homo sapiens Galectin-3 Proteins 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 208000002352 blister Diseases 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 210000002583 cell-derived microparticle Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001580 Albuminuria Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000000795 Galectin 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010001498 Galectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000006479 Heterogeneous-Nuclear Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010019372 Heterogeneous-Nuclear Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010055171 Hypertensive nephropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010069384 Ischaemic nephropathy Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000028208 end stage renal disease Diseases 0.000 description 1
- 201000000523 end stage renal failure Diseases 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 201000007249 familial juvenile hyperuricemic nephropathy Diseases 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 102000048551 human LGALS3 Human genes 0.000 description 1
- 230000002706 hydrostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035990 intercellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000002487 multivesicular body Anatomy 0.000 description 1
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 208000030761 polycystic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012764 semi-quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6827—Total protein determination, e.g. albumin in urine
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
- G01N2800/042—Disorders of carbohydrate metabolism, e.g. diabetes, glucose metabolism
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/34—Genitourinary disorders
- G01N2800/347—Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/5432—Liposomes or microcapsules
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia jest sposób określanie stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą, charakteryzuje się tym, że w próbce moczu od pacjenta cierpiącego na cukrzycę określa się stężenie białka gal-3, przy czym: wartość stężenia białka gal-3 w moczu poniżej 11,06 ng/mL świadczy o istnieniu u tego pacjenta stopnia uszkodzenia nerek odpowiadającego umiarkowanie ciężkiemu lub ciężkiemu obniżeniu współczynnika przesączania kłębuszkowego eGFR poniżej 44 ml/min/1,73 cm2, wartość stężenia białka gal-3 w moczu powyżej 11,06 ng/mL świadczy o istnieniu u tego pacjenta stopnia uszkodzenia nerek odpowiadającego umiarkowanemu, niewielkiemu lub łagodnemu obniżeniu współczynnika przesączania kłębuszkowego eGFR do wartości powyżej 44 ml/min/1,73 cm2.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób określania stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą, na podstawie badania stężenia galektyny-3 w mikropęcherzykach pochodzących z moczu (UEV). Wynalazek powinien znaleźć zastosowanie w terapii, zwłaszcza w diagnostyce klinicznej powikłań cukrzycy.
Galektyna-3 (gal-3) jest białkiem o właściwościach lektyny zwierzęcej, należącym do rodziny białek wiążących anteny cukrowe β-galaktozydy. Cechą charakterystyczną galektyn jest to, że wszystkie posiadają charakterystyczną domenę złożoną z ok. 130 a.a. rozpoznającą cukry - CRD (ang. Carbohydrate Recognition Domaine) [1]. Obecnie zidentyfikowano 15 różnych galektyn, które sklasyfikowano do 3 grup: tandemowej (z 2 powtórzeniami CRD) do których zaliczane są galektyny -4, -6, -8, -9 i -12; prototypową (galektyna-1, -2, -5, -7, -10, -11, -13, -14 i -15) z jedną domeną CRD oraz unikalną grupę chimerową posiadającą jedną domenę CRD oraz długą domenę N-końcową bogatą w prolinę i glicynę, do której zaliczana jest gal-3 [2]. Ponadto odkryto ostatnio nową grupę galektyn zwierzęcych zawierających 4 domeny CRD. Galektynę preferencyjnie wiążą glikany, które zawierają łańcuchy N-acetylogalaktozaminy. Gal-3 zbudowana jest z 2 domen: C-końcowej w obrębie której występuje sekwencja CRD oraz N-końcowej zawierającej miejsce fosforylacji (S6) [3]. Domena N-końcowa jest zbudowana z 110-130 aminokwasów, zawiera szereg homologicznych powtórzeń 9-aminokwasów (P, G, T, E), jest ona silnie konserwatywna, wykazuje znaczącą homologią do heterogennych jądrowych kompleksów rybonukleoproteinowych oraz do łańcucha kolagenu (a1) i jest odpowiedzialna za tworzenie multimetrów [4]. U ssaków, N-końcowy fragment 1-12 jest odpowiedziany za sekrecję gal-3 i [5].
Mikropęcherzyki lub inaczej pęcherzyki zewnątrzkomórkowe (ang. extracellular vesicles - EVs) to drobne, kuliste struktury błonowe o średnicy 20-1000 nm, uwalniane do przestrzeni międzykomórkowej [6]. Termin odnosi się zarówno do mikropęcherzyków pączkujących bezpośrednio z błony komórkowej w trakcie cyklu życiowego komórki - ektosomy (ang. microvesicles) lub podczas programowanej śmierci komórki - pęcherzyki apoptotyczne (ang. apoptotic blebs), jak również do pęcherzyków pochodzenia wewnątrzkomórkowego - egzosomów (ang. exosomes) uwalnianych z ciałek wielopęcherzykowych (ang. multivesicular bodies) [7]. Pomimo odmiennej charakterystyki pod względem rozmiarów (egzosomy: 30-100 nm, ektosomy: 100-1000 nm, pęcherzyki apoptotyczne: 500-1000 nm), EVs wykazują wiele cech wspólnych, jak: dwuwarstwowa błona lipidowa oraz białka i kwasy nukleinowe znajdujące się wewnątrz tych struktur [6, 8, 9]. Zawartość (ang. cargo) transportowana przez EVs, która odzwierciedla status komórki wydzielającej, jest przekazywana do komórki docelowej - bierze czynny udział w sygnalizacji międzykomórkowej.
Wobec opisanego powyżej stanu techniki nadal istnieje zapotrzebowanie na dostarczenie sposobu pozwalającego na określanie stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą.
Nieoczekiwanie sposób taki został uzyskany w niniejszym wynalazku.
Przedmiotem wynalazku jest sposób określania stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą chrakteryzujący się tym, że w próbce moczu od pacjenta cierpiącego na cukrzycę określa się stężenie białka gal-3, przy czym:
- wartość stężenia białka gal-3 w moczu poniżej 11,06 ng/mL świadczy o istnieniu u tego pacjenta umiarkowanie ciężkiego lub ciężkiego stopnia uszkodzenia nerek odpowiadającego obniżeniu współczynnika przesączania kłębuszkowego eGFR poniżej 44 ml/min/1.73 cm2,
- wartość stężenia białka gal-3 w moczu powyżej 11,06 ng/mL jednak obniżona jego podwyższona wartość w porównaniu z obserwowaną u pacjentów zdrowych świadczy o istnieniu u tego pacjenta umiarkowanego, niewielkiego lub łagodnego stopnia uszkodzenia nerek odpowiadającego obniżeniu współczynnika przesączania kłębuszkowego eGFR do wartości powyżej 44 ml/min/1.73 cm2.
W korzystnej realizacji wynalazku dodatkowo określa się stężenie białka gal-3 w mikropęcherzykach obecnych w moczu (UEV) i jego podwyższona wartość w porównaniu z obserwowaną u pacjentów zdrowych potwierdza uszkodzenie nerek.
Korzystnie, stężenie stężenia białka gal-3 określa się ilościową metodą ELISA z wykorzystaniem przeciwciał specyficznych wobec białka gal-3.
Korzystnie, mikropęcherzyki izoluje się moczu poprzez filtrowanie metodą HFD, a następnie ultrawirowanie przy prędkości 150 000 x g przez 1,5 h w temp. 4°C.
PL 240 124 B1
Nieoczekiwanie, w pracach które doprowadziły do niniejszego wynalazku ustalono, że istnieje korelacja pomiędzy poziomem zawartości gal-3 w moczu pełnym oraz poziomem mikropęcherzyków zawierających gal-3, a stopniem uszkodzenia komórek nerek, zwłaszcza w wyniku cukrzycy.
Sposób według wynalazku pozwala na uzyskanie, niezależnie od stanu leczenia cukrzycy, wiarygodnego testu diagnostycznego pozwalającego na określanie stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą.
Poniżej przedstawiono przykłady wykonania wynalazku.
P r z y k ł a d 1. Określanie stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą. Opis grupy badanej. Do badania zrekrutowano 109 pacjentów z cukrzycą typu 2 oraz 7 osób zdrowych (kontrola). Od wszystkich osób została pobrana próbka pierwszego porannego moczu ze środkowego strumienia. Pacjenci zostali zrekrutowani w Katedrze Nefrologii Szpitala Uniwersyteckiego w Krakowie oraz w Klinicznym Szpitalu Wojewódzkim Nr 2 w Rzeszowie.
Pacjenci zostali podzieleni na 5 grup ze względu na stopień zaawansowania uszkodzenia nerek w przebiegu przewlekłej choroby nerek spowodowanej cukrzycą. Przewlekła choroba nerek (PChN) to wg definicji KDIGO 2012 utrzymujące się >3 mies. nieprawidłowości budowy lub czynności nerek mające znaczenie dla zdrowia. Zaawansowanie PChN określa się na podstawie wielkości GFR (kategoria G) oraz wielkości albuminurii (kategoria A) [10]. Najczęstsze przyczyny PChN to nefropatia cukrzycowa (ok. 30% w schyłkowym stadium), kłębuszkowe zapalenie nerek, nefropatia nadciśnieniowa, ostre uszkodzenie nerek, cewkowo-śródmiąższowe choroby nerek, wielotorbielowate zwyrodnienie nerek, nefropatia niedokrwienna [11].
Kryterium klasyfikacji stopnia uszkodzenia nerek w przebiegu PChN. Kryterium włączenia pacjenta do danej grupy była szacunkowa wartość współczynnika przesączania kłębuszkowego eGFR (z ang. estimated Glomerular Filtration Rate). Współczynnik eGFR został oszacowany na podstawie wartości stężenia kreatyniny w surowicy krwi, wieku, płci oraz rasy pacjenta, a do jego wyliczenia posłużył wzór CKD EPI [12, 13], gdzie:
eGFR = 141 •mini—, , „) •max(—, , „) · 0,993 \k lub 1/ \k lub 1/
1,018 [kobieta] · 1,159[rasa czarna]
Skr - stężenie kreatyniny w surowicy w jednostkach [mg/dL] κ - współczynnik, dla kobiet wynosi 0,7, dla mężczyzn 0,9, lub opcjonalnie wartość 1 α - współczynnik, dla kobiet wynosi -0,329, dla mężczyzn -0.411 min - minimalny---- 3 κ lub 1 . . Skr max - maksymalny ---κ lub 1 wiek - wiek w latach
Powyższy wzór jest lepszy od najczęściej stosowanych wariantów rekomendowanych do oceny i klasyfikacji przewlekłej niewydolności nerek, jak wzór MDRD (ang. Modification of Diet in Renal Disease Study), ze względu na mniejszy błąd systemowy szczególnie przy wyższych wartościach eGFR, co pozwala na rozpoznanie z większą czułością uszkodzenia nerek we wczesnym stadium, to jest stadium II [11].
Podział pacjentów na grupy ze względu na stopień uszkodzenia nerek:
Ze względu na stopień uszkodzenia nerek wyrażony na podstawie eGFR, pacjentów z cukrzycową PChN sklasyfikowano na 5 grup [10, 14]:
powyżej 90 oraz między 60-89 ml/min/1,73 cm2, stadium G1 - prawidłowe lub zwiększone GFR, stadium G2 - uszkodzeniem nerek z łagodnym obniżeniem eGFR, (n=79)
45-59 ml/min/1,73 cm2, stadium G3a - uszkodzenie nerek z obniżeniem eGFR między nie- wielkim a umiarkowanym; (n=5)
30-44 ml/min/1,73 cm2, stadium G3b - uszkodzenie nerek z obniżeniem eGFR między umiar- kowanym a ciężkim; (n=3)
15-29 ml/min/1,73 cm2, stadium G4 - uszkodzenie nerek z ciężkim obniżeniem eGFR (n=11), <15 ml/min/1,73 cm2, stadium G5 - niewydolność nerek krańcowa (n=11)
Za wartość graniczną poniżej której można mówić o niewydolności nerek przyjmuje się umownie 60 ml/min/1,73 cm2 [10,11,14]. Za wartość graniczną rozdzielającą 2 grupy chorych z umiarkowanym uszkodzeniem nerek, na 2 podgrupy z umiarkowanie średnim (stadium G3a, grupa 2) i umiarkowanie
PL 240 124 B1 ciężkim (stadium G3b, grupa 3) uszkodzeniem nerek, przyjęto wartość 44 ml/min/1.73 cm2. Pełny obraz kliniczny PChN w zależności od kategorii GFR zawiera opracowanie „Interna. Choroby. Choroby nerek i dróg moczowych. Przewlekła choroba nerek” [11],
Kryterium wyznaczania cut-off dla galektyny-3. Jako graniczną wartość współczynnika eGFR do różnicowania pacjentów z PChN w powikłaniu cukrzycy przyjęto 44 ml/min/1.73 cm2. Ponieważ klinicznie grupa G3 jest bardzo heterogenna i stopień zaawansowania choroby może być zróżnicowany, co daje wyraz w etiopatologii choroby (podział na G3a i G3b) i różnym obrazie klinicznym [11,12]. Przyjmując to kryterium, pacjentów do oznaczenia stężenia gal-3 w moczu podzielono na 2 grupy:
A. > 44 ml/min/1.73 cm2 (grupy: 1,2; G1,G2, G3a)
B. = < 44 ml/min/1.73 cm2 (grupy: 3,4,5: G3b, G4, G5)
Etyka. Badanie posiadało wymaganą zgodę Komisji Bioetycznej Uniwersytetu Jagiellońskiego Collegium Medicum (nr KBET/206/B/2013). Zgoda ważna do 31-12-2017 roku. Udział w badaniu był możliwy jedynie po wyrażeniu zgody przez pacjenta potwierdzonej własnoręcznym podpisem, a nabór do badania prowadzony był przez lekarzy specjalistów.
Izolacja UEV z próbki moczu. Poranny mocz ze środkowego strumienia o objętości ok. 100 mL pobrano od pacjentów z cukrzycą typu II po ich wcześniejszym włączeniu do badania. Mocz został poddany wstępnemu wirowaniu przy prędkości 2000 x g przez 30 min.w temp. pokojowej (wirówka Hermle Z-300K) w celu usunięcia fragmentów komórek, bakterii oraz innych zanieczyszczeń. Po wirowaniu zlano supernatant, który został wykorzystany w kolejnym kroku izolacji pęcherzyków zewnątrzkomórkowych pochodzących z moczu (UEV). Supernatant został poddany filtrowaniu metodą HFD (z ang. Hydrostatic Filtration Dialysis) w celu zagęszczenia populacji EVs. Zagęszczona populacja EVs została poddana ultrawirowaniu przy prędkości 150 000 x g przez 1,5 h w temp. 4°C, zaś uzyskany pelet pęcherzyków zawieszono w 60 μl wody demineralizowanej.
Oznaczenie stężenia galektyny-3 w moczu oraz wyizolowanych pęcherzykach metodą ELISA. Stężenie gal-3 w próbkach moczu oraz w UEV z wykorzystaniem testu Human LGALS3/Galectin-3 ELISA Kit (Sigma Aldrich, nr kat. RAB0661), zgodnie z zaleceniami producenta.
W metodzie tej wykorzystano płytkę 96-dołkową opłaszczoną przeciwciałem dla galektyny-3.
Na płytkę naniesiono standard białkowy (w różnym stężeniu w celu wykreślenia krzywej kalibracyjnej) oraz próbki wyizolowanych pęcherzyków bądź pełnego moczu. Płytkę inkubowano przez 2,5 godziny, temp. pokojowa, wytrząsanie, a następnie płytka została przepłukana 4 razy za pomocą buforu dołączonego do zestawu (Wash Buffer). W kolejnym kroku dodano przeciwciało biotynylowane i pononie inkubowano (1 godzina, temp. pokojowa, wytrząsanie). Po inkubacji płytka została przepłukana 4 razy za pomocą Wash Buffer. Następnie nałożono streptawidynę skoniugowaną z peroksydazą chrzanową (HRP). Płytkę inkubowano przez 45 minut w temp. pokojowej z wytrząsaniem. Płytka po inkubacji została ponownie przepłukana 4 razy. W kolejnym kroku dodany został substrat TMB (3,3’,5,5’-tetrametylobenzydyna) dla enzymu HRP, dzięki któremu zachodzi reakcja barwna. Dodanie na koniec roztworu Stop Solution powoduje zahamowanie reakcji. Odczyt absorbancji został przeprowadzony przy długości fali 450 nm.
Stężenia dla poszczególnych próbek zostały wyliczone na podstawie wykreślonej krzywej kalibracyjnej.
Analiza półilościowa białka gal-3 w UEV z moczu pacjentów metodą Western Blot. Do oceny ilości białka gal-3 w UEV izolowanych z moczu pacjentów z cukrzycową PChN i kontroli zastosowano metodą Western Blot. W tym celu z wyizolowanych UEV izolowano białko i oznaczano stężenia za pomocą metody BCA. Następnie wykonano rozdział elektroforetyczny białek w żelu metodą PAGE-SDS i wykonano bloty za pomocą przeciwciał: pierwszorzędowe galectin-3 antibody (kat nr. 60207-1-lg, CloneNo.: 1C1B2; producent Prointech Germany) i drugorzędowe : HRP-conjugated (Mouse/Rabbit), w zestawie Lumi-LightPLUS Western Blotting Kit (kat. nr 12015218001, Roche).
Analiza statystyczna. Dla poszczególnych grup wyliczono medianę gal-3 oraz rozstęp międzykwartylowy (Q1-Q3). Wartość p wyliczono za pomocą testu U-Manna-Whitneya w programie Statistica 13. Do oceny poprawności klasyfikatora jakim jest nowy biomarker galektyna-3 (gal-3), wykonano analizę krzywej ROC (ang. Receiver Operating Charactristics) przy użyciu narzędzi w programie Statistica 13 z nakładką do analiz medycznych. Ponadto do analizy zgodności i trafności wybranego modelu wyznaczono pole pod krzywą ROC metodą AUC (ang. Area Under Curve). Wartość wskaźnika AUC przyjmuje wartości z przedziału [0,1], im większa tym lepszy model [15].
PL240 124 Β1
Wyniki:
Stężenie białka gal-3 w moczu. Wyniki oznaczeń i porównanie stężenia gal-3 w moczu między poszczególnymi grupami pokazane są na Fig. 1. Przedstawiono wyniki uzyskane dla kontroli (0) oraz poszczególnych grup pacjentów z różnym stopniem uszkodzenia nerek (1-5). Kwadrat w środku box-u oznacza wartość średnią, zaś linia pozioma wartość mediany.
W Tabeli 1 podano wartości mediany, pierwszego i trzeciego kwartyla (Q1-Q3) oraz wartość p wyliczoną za pomocą testu U-Manna-Whitneya (grupa kontrolna została porównana z każdą z grup pacjentów).
Tabela 1. Wartość mediany dla stężenia gal-3 w moczu dla poszczególnych grup.
| Grupa | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Mediana | 3,59 | 18,93 | 13,25 | 4,37 | 3,64 | 2,89 |
| [ng/mL] | (0,25 - | (13,85 | (1,97 | (3,18 | (1,93 | (1,71 |
| 4,16) | 25,23) | 27,31) | 11,06) | 5,56) | 5,33) | |
| P | — | 0,01 | 0,37 | 0,38 | 0,53 | 0,76 |
Ilość białka gal-3 w UEV izolowanych z moczu metoda HFD. Ilość gal-3 w wyizolowanych pęcherzykach z moczu przedstawiono na Fig. 2. Przedstawiono wyniki uzyskane dla grupy kontrolnej (0) oraz poszczególnych grup pacjentów z różnym stopniem uszkodzenia nerek (1-5). Kwadrat w środku box-u oznacza wartość średnią, zaś linia pozioma wartość mediany. W Tabeli 2 podano wartości mediany, pierwszego i trzeciego kwartyla (Q1-Q3) oraz wartość p wyliczoną za pomocą testu U-Manna-Whitneya (grupa kontrolna została porównana z każdą z grup pacjentów).
Tabela 2. Wartość mediany dla stężenia gal-3 w pęcherzykach dla poszczególnych grup.
| Grupa | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Mediana [ng/mL] | 4,46 (1,79 4,78) | 27, 42 (7,49 29,13) | 15,6 (3,97 21,34) | 13,94 (8,89 23,98) | 3,47 (1,09 6,38) | 1,29 (0,56 2,64) |
| P | — | 0,08 | 0,38 | 0,08 | 0,55 | 0,19 |
Identyfikacja gal-3 metodami półilościowymi (elektroforeza w żelu poliakrylamidowym oraz Western Biot). Na podstawie uzyskanych wartości względnej intensywności prążka dla gal-3 metodą Western Biot sporządzono Fig. 3, na której przedstawiono wartości uzyskane dla poszczególnych grup badanych. Kwadrat w środku box-u oznacza wartość średnią, zaś linia pozioma wartość mediany.
W Tabeli 3 podano wartości mediany, pierwszego i trzeciego kwartyla oraz wartość p wyliczoną za pomocą testu U-Manna-Whitneya (grupa kontrolna została porównana z każdą z grup pacjentów).
Tabela 3. Wartość mediany dla stężenia gal-3 w pęcherzykach dla poszczególnych grup
| Grupa | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Mediana | 1,15 | 7,3 | 7,29 | 8,32 | 2,44 | 5,32 |
| [RBI] | (0,98 | (3,64 | (3,55 | (5,6 | (2,56 | (5,58 |
| 1,55) | 10,93) | 8,57) | 11,78) | 3,41) | 6,82) | |
| P | — | 0,03 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,02 |
PL240 124 Β1
Analiza Reciver Operating Curve (ROC). Dla wyznaczania wartości cut-off dla stężeń gal-3 u pacjentów z cukrzycową PChN wykonano analizę ROC (patrz Tabela 4). Na podstawie analizy czułości i specyficzności wyznaczono wartość cut-off do różnicowania stopnia uszkodzenia nerek G3a/G3b (eGFR poniżej 44 ml/min/1.73cm2), dla wartości stężeń gal-3, we wszystkich grupach pacjentów z cukrzycową PChN. Istotną wartość p (stopa błędu) uzyskano dla gal-3 przy stężeniu 11,06 ng/mL. Tabela 4. Wyniki analizy ROC dla stężeń gal-3 w moczu pełnym u pacjentów z cukrzycową PChN
| cut-off AUC [ng/mL] | Czułość | 1-Specyficzność | Dokładność (ACC) | Ryzyko eksponowanych | Ryzyko nieeksponowanych | Stopa fałszywie poz. | Stopa fałszywie neg. | Iloraz wiarygodności | Stopa błędu | Iloraz wiarygodności | |
| Gal-3 | 11,06 | 0,960 | 0,786 | 0,214 | 0,826 | 0,571 | 0,985 | 0,214 | 0,040 | 4,480 | 0,05 |
Wartość cut-off 11,06 ng/mL różnicuje chorych z cukrzycowym uszkodzeniem nerek z prawidłowym lub zwiększonym eGFR, łagodnym obniżeniem i umiarkowanym obniżeniem eGFR (G1,G2 i G3a) od pacjentów z umiarkowanie ciężkim i ciężkim obniżeniem eGFR (G3b, G4, i G5). Wykres przebiegu krzywej ROC i wyznaczenia AUC z zaznaczoną wartością cut-off ilustruje Fig. 4, na której zaprezentowano wykres przebiegu krzywej ROC, do wyznaczenia wartości stężenia gal-3 dla różnicowania pacjentów z cukrzycową PChN. Wyznaczony cut-off wynosi 11,06 ng/mL przy p = 0,05. W Tabeli 4 przedstawiono wartości pola pod krzywa ROC, wartość AUC z oceną dobroci testu, wartość prawdopodobieństwa p wyznaczono na p<0,000005.
Tabela 4. Wartość AUC z oceną dobroci testu
| AUC | SE | AUC Dolny 95% | AUC Górny 95% | z | P |
| 0,885 | 0,031 | 0,824 | 0,947 | 12,256 | 0,0000 |
Wnioski:
1. Potwierdzono obecność białka gal-3 w UEV z moczu oraz w pełnym moczu u pacjentów we wczesnym stadium cukrzycowej PChN.
2. Wykazano że, we wczesnym stadium cukrzycowej PChN (G1, G2, G3a) występuje wzrost stężenia białka gal-3 w moczu pacjentów z cukrzycową PChN, po czym następuje spadek stężenia gal-3 u pacjentów z umiarkowanie ciężkim i ciężkim obniżeniem eGFR (G3b, G4, i G5)
3. Wykazano, że wraz ze wzrostem stopnia zaawansowania uszkodzenia nerek wg definicji i skali KDIGO 2012 stężenie białka gal-3 w moczu pacjentów z cukrzycową PChN spada.
4. Wartość cut-off 11,06 ng/mL różnicuje chorych z cukrzycowym uszkodzeniem nerek z prawidłowym lub zwiększonym eGFR, łagodnym obniżeniem i umiarkowanym obniżeniem eGFR (G1,G2 i G3a) od pacjentów z umiarkowanie ciężkim i ciężkim obniżeniem eGFR (G3b, G4, i G5).
5. Niskie stężenia gal-3 w moczu u pacjentów z cukrzycową PChN i wysoka zawartość białka gal-3 w UEV są biomarkerami do opracowania testu diagnostycznego do różnicowania stopnia uszkodzenia nerek w cukrzycowej PChN.
Literatura
1. S.H. An Barondes, D.N. Cooper, M.A. Gitt, H. Leffler. Galectins. Structure and function of a large family of animal lectins. J Biol Chem, 269 (1994), pp. 20807-20810
PL 240 124 B1
2. M. Pokrywka, A. Lityńska. Budowa i funkcje biologiczne galektyny-3. Część I. Post Biol Kom, 37 (2010), pp. 677-684
3. Saccon F, Gatto M, Ghirardello A, laccarino L, Punzi L, Doria A. Role of galectin-3 in autoimmune and non-autoimmune nephropathies. Autoimmun Rev. 2016 Sep 23. pii: S1568-9972(16)30218-X.
4. Wang L, Inohara H, Pienta KJ, Raz A: Galectin-3 is a nuclear matrix protein which binds RNA. Biochem Biophys Res Commun 217: 292-303, 1995
5. Menon RP, Hughes RC: Determinants in the N-terminal domains of galectin-3 for secretion by a novel pathway circumventing the endoplasmic reticulum-Golgi complex. Eur J Biochem 264: 569-576, 1999
6. Thery C, Ostrowski M i Segura E. Membrane vesicles as conveyors of immune responses. Nat Rev Immunol. 2009 Aug; 9 (8):581-93.
7. Colombo M, Raposo G, Thery C. Biogenesis, secretion, and intercellular interactions of exosomes and other extracellular vesicles. Annu Rev Cell Dev Biol. 2014; 30:255-89. doi: 10.1146/annurev-cellbio-101512-122326.
8. van der Pol E, Boing AN, Harrison P, Sturk A, Nieuwland R. Classification, functions, and clinical relevance of extracellular vesicles. Pharmacol Rev. 2012 Jul; 64(3):676-705. doi: 10.1124/pr.112.005983.
9. van der Pol E, Boing AN, Gool EL, Nieuwland R. Recent developments in the nomenclature, presence, isolation, detection and clinical impact of extracellular vesicles. J Thromb Haemost. 2016 Jan;14(1):48-56. doi: 10.1111/jth. 13190.
10. Wieczorek-Surdacka E.: Ogólne zasady postępowania u chorych we wczesnych fazach przewlekłej choroby nerek w świetle aktualnych zaleceń KDIGO. Med. Prakt., 2017; 10: 40-49.
11. https://www.mp.pI/interna/chapter/B16.ll.14.2; autorzy Michał Myśliwiec, Robert Drabczyk, aktualizacja 06-08-2018
12. https://qxmd.com/calculate/calculator 251/egfr-using-ckd-epi
13. Levey et al. A New Equation to Estimate Glomerular Filtration Rate. Ann Intern Med. 2009;150:604-612.
14. Król E, Rutkowski B. Przewlekła choroba nerek - klasyfikacja, epidemiologia i diagnostyka. Forum Nefrologiczne. 2008; 1:1-6.
15. Harańczyk G. Krzywe ROC, czyli ocena jakości klasyfikatora i poszukiwanie optymalnego punktu. Statsoft. Czytelnia odcięcia.
https://media.statsoft.pl/olddnn/downloads/krzywe roc czyli ocena jakosci.pdf
Claims (4)
1. Sposób określania stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą, znamienny tym, że w próbce moczu od pacjenta cierpiącego na cukrzycę określa się stężenie białka gal-3, przy czym:
- wartość stężenia białka gal-3 w moczu poniżej 11,06 ng/mL świadczy o istnieniu u tego pacjenta umiarkowanie ciężkiego lub ciężkiego stopnia uszkodzenia nerek odpowiadającego obniżeniu współczynnika przesączania kłębuszkowego eGFR poniżej 44 ml/min/1.73 cm2,
- wartość stężenia białka gal-3 w moczu powyżej 11,06 ng/mL jednak obniżona jego podwyższona wartość w porównaniu z obserwowaną u pacjentów zdrowych świadczy o istnieniu u tego pacjenta umiarkowanego, niewielkiego lub łagodnego stopnia uszkodzenia nerek odpowiadającego obniżeniu współczynnika przesączania kłębuszkowego eGFR do wartości powyżej 44 ml/min/1.73 cm2.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że dodatkowo określa się stężenie białka gal-3 w mikropęcherzykach obecnych w moczu (UEV) i jego podwyższona wartość w porównaniu z obserwowaną u pacjentów zdrowych potwierdza uszkodzenie nerek.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stężenie stężenia białka gal-3 określa się ilościową metodą ELISA z wykorzystaniem przeciwciał specyficznych wobec białka gal-3.
4. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że mikropęcherzyki izoluje się moczu poprzez filtrowanie metodą HFD, a następnie ultrawirowanie przy prędkości 150 000 x g przez 1,5 h w temp. 4°.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL428992A PL240124B1 (pl) | 2019-02-21 | 2019-02-21 | Sposób określania stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą |
| PCT/PL2020/050020 WO2020171724A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-02-21 | Method of determination of the degree of renal damage occurring in subjects with diabetes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL428992A PL240124B1 (pl) | 2019-02-21 | 2019-02-21 | Sposób określania stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL428992A1 PL428992A1 (pl) | 2020-08-24 |
| PL240124B1 true PL240124B1 (pl) | 2022-02-21 |
Family
ID=70334017
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL428992A PL240124B1 (pl) | 2019-02-21 | 2019-02-21 | Sposób określania stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL240124B1 (pl) |
| WO (1) | WO2020171724A1 (pl) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7368856B2 (ja) | 2017-07-25 | 2023-10-25 | トゥルーバインディング，インコーポレイテッド | Ｔｉｍ－３とそのリガンドとの相互作用の遮断によるがん治療 |
| CN120058944A (zh) | 2019-01-30 | 2025-05-30 | 真和制药有限公司 | 抗gal3抗体及其用途 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150275301A1 (en) * | 2012-10-05 | 2015-10-01 | Hitachi Chemical Co., Ltd. | URINE EXOSOME mRNAS AND METHODS OF USING SAME TO DETECT DIABETIC NEPHROPATHY |
-
2019
- 2019-02-21 PL PL428992A patent/PL240124B1/pl unknown
-
2020
- 2020-02-21 WO PCT/PL2020/050020 patent/WO2020171724A1/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL428992A1 (pl) | 2020-08-24 |
| WO2020171724A1 (en) | 2020-08-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bu et al. | Relation of neutrophil-to-lymphocyte ratio to acute kidney injury in patients with sepsis and septic shock: a retrospective study | |
| Matsuura et al. | Use of the renal angina index in determining acute kidney injury | |
| Chen et al. | Circulating nucleosomes as a predictor of sepsis and organ dysfunction in critically ill patients | |
| JP5048838B2 (ja) | ヒト敗血症を測定する方法 | |
| Brubel et al. | Serum galectin-9 as a noninvasive biomarker for the detection of endometriosis and pelvic pain or infertility-related gynecologic disorders | |
| JP4630383B2 (ja) | 虫垂炎の診断のための方法および装置 | |
| JP5272011B2 (ja) | 予後判定の方法 | |
| US20150045245A1 (en) | Biomarkers and test panels useful in systemic inflammatory conditions | |
| CN103946709B (zh) | 基于l-fabp诊断急性事件后或外科手术后的肾损伤 | |
| EP2671083A1 (en) | Methods of prognosis and diagnosis in chronic heart failure | |
| Ramos-Mozo et al. | Increased plasma levels of NGAL, a marker of neutrophil activation, in patients with abdominal aortic aneurysm | |
| AU2006251380B2 (en) | Annexin for cancer risk assessment | |
| Singal et al. | Biomarkers of renal injury in cirrhosis: association with acute kidney injury and recovery after liver transplantation | |
| EP2612152B1 (en) | Method to diagnose infectious peritonitis and predict the severity and outcome thereof in humans. | |
| Kirici et al. | Determination of maternal serum pro-inflammatory cytokine changes in intrauterine growth restriction | |
| Albeltagy et al. | Early diagnosis of acute kidney injury by urinary YKL-40 in critically ill patients in ICU: a pilot study | |
| CN101460852A (zh) | Mrp8/14水平用于鉴别个体处于急性冠状动脉综合症风险中的应用 | |
| PL240124B1 (pl) | Sposób określania stopnia uszkodzenia nerek pojawiającego się u chorych z cukrzycą | |
| JPWO2011148668A1 (ja) | 大腸がんマーカーガレクチン、採血試料中のガレクチン濃度の分析方法及び大腸がんマーカーガレクチン検出キット | |
| Kraemer et al. | Automated Fecal Biomarker Profiling-a Convenient Procedure to Support Diagnosis for Patients with Inflammatory Bowel Diseases. | |
| CN110687285B (zh) | 诊断试剂盒及mak16在制备系统性红斑狼疮早期诊断试剂中的应用 | |
| CN105659094B (zh) | 评估全身炎症反应综合征(sirs)或脓毒症患者的死亡风险的方法 | |
| CN117783534A (zh) | 一种乳腺癌分子标志物及其应用 | |
| Tornai et al. | Serum Villin‐1—A Novel Marker of Gut Barrier Damage in Acutely Decompensated Cirrhosis: A Cohort Study and Validation | |
| Genov et al. | Role of Serum Uromodulin in the Early Diagnosis of Chronic Kidney Disease |