PL241834B1 - Zastosowanie sulfonowanych pochodnych polistyrenu w leczeniu i/lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirus Zika - Google Patents
Zastosowanie sulfonowanych pochodnych polistyrenu w leczeniu i/lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirus Zika Download PDFInfo
- Publication number
- PL241834B1 PL241834B1 PL433443A PL43344320A PL241834B1 PL 241834 B1 PL241834 B1 PL 241834B1 PL 433443 A PL433443 A PL 433443A PL 43344320 A PL43344320 A PL 43344320A PL 241834 B1 PL241834 B1 PL 241834B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- pssna
- zikv
- cells
- infection
- zika virus
- Prior art date
Links
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 title claims abstract description 52
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 title description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 12
- -1 poly(styrene 4-sulfonate) Polymers 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 57
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 30
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 19
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 208000001455 Zika Virus Infection Diseases 0.000 description 12
- 208000020329 Zika virus infectious disease Diseases 0.000 description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 7
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 6
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000012107 replication analysis Methods 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N Phalloidin Chemical compound N1C(=O)[C@@H]([C@@H](O)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C[C@@](C)(O)CO)NC(=O)[C@H](C2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]3C[C@H](O)CN3C(=O)[C@@H]1CSC1=C2C2=CC=CC=C2N1 KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N 0.000 description 2
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 2
- 208000035332 Zika virus disease Diseases 0.000 description 2
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 208000004141 microcephaly Diseases 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- COCMHKNAGZHBDZ-UHFFFAOYSA-N 4-carboxy-3-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]benzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(C([O-])=O)=CC=C1C(O)=O COCMHKNAGZHBDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 241000256111 Aedes <genus> Species 0.000 description 1
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 1
- 241000567030 Ampulloclitocybe clavipes Species 0.000 description 1
- 208000008037 Arthrogryposis Diseases 0.000 description 1
- 208000031504 Asymptomatic Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000032170 Congenital Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N Deoxyuridine 5'-triphosphate Chemical compound O1[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 208000002682 Hyperkalemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020852 Hypertonia Diseases 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 206010025421 Macule Diseases 0.000 description 1
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010009711 Phalloidine Proteins 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 101710088839 Replication initiation protein Proteins 0.000 description 1
- 206010043101 Talipes Diseases 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 201000010947 Zika virus congenital syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000007698 birth defect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004656 cell transport Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 201000011228 clubfoot Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 208000018697 congenital contractures Diseases 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940112584 kionex Drugs 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O thiamine pyrophosphate Chemical compound CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 231100000747 viability assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000003026 viability measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007501 viral attachment Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014101 wine Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/74—Synthetic polymeric materials
- A61K31/795—Polymers containing sulfur
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Przedmiotem wynalazku jest sól sodowa poli(4-sulfonianu styrenu) do stosowania w leczeniu i/lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirusa Zika.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sulfonowana pochodna polistyrenu (PSS), w szczególności sól sodowa poli(4-sulfonianu styrenu) (PSSNa), do zastosowania w leczeniu i/lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirusa Zika (ZIKV), jak również zastosowanie takiej sulfonowanej pochodnej jako leku lub substancji aktywnej w leczeniu/profilaktyce zakażeń ZIKV.
ZIKV, należący do rodziny Flaviviridae, został wyizolowany po raz pierwszy w 1947 roku z próbki pochodzącej od makaka1. Przez wiele lat nie przyciągał on jednak szczególnej uwagi naukowców ze względu na bardzo rzadkie i często bezobjawowe zakażenia u ludzi. Jednakże obraz ten zaczął zmieniać się od 2007 roku, kiedy wybuchła epidemia ZIKV w Mikronezji (wyspa Yap)2. Kolejna epidemia wybuchła 6 lat później w rejonie Polinezji, gdzie choroba dotknęła blisko 20 000 osób3. Następna fala zachorowań miała miejsce w Brazylii i objęła nawet 1 300 000 osób. ZIKV w stosunkowo krótkim czasie rozprzestrzenił się na całym świecie, a Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) zakwalifikowała go jako patogen stanowiący międzynarodowe zagrożenie zdrowia publicznego. Dane WHO z 2019 r. wskazują, że transmisja wirusa Zika odnotowana została w 87 państwach i terytoriach. Przy zwiększającej się liczbie przypadków zaobserwowano, że chociaż sama choroba ma charakter stosunkowo łagodny, jej konsekwencje mogą być bardzo poważne. Dotyczy to w szczególności zakażenia kobiet w okresie ciąży, ponieważ może ono prowadzić do mikrocefalii u płodu4. ZIKV jest arbowirusem, który do rozprzestrzeniania się wymaga wektora - komara z rodzaju Aedes4, jednakże do zakażenia może dojść również przez bezpośredni kontakt z zakażoną osobą, m.in. w czasie kontaktów seksualnych5. U dzieci kobiet zakażonych podczas ciąży wykrywa się wiele wad wrodzonych i niepełnosprawności, zwanych wrodzonym zespołem Zika6,7. Do najczęstszych wad należą mikrocefalia, uszkodzenie tkanki mózgowej, uszkodzenie tylnej części oka, bliznowacenie plamki żółtej, wrodzone przykurcze, takie jak stopa końskoszpotawa lub artrogrypoza, a także hipertonia ograniczająca ruch ciała wkrótce po urodzeniu8. U osób dorosłych zakażenie ZIKV wiąże się również z powikłaniami ze strony układu nerwowego, takimi jak zespół Guillaina-Barrego.
Chociaż ZIKV stanowi poważne zagrożenie zdrowia, brak jest skutecznej szczepionki i nie jest dostępne specyficzne względem ZIKV leczenie przeciwwirusowe. Przy zakażeniu zalecane jest jedynie leczenie wspomagające. Istnieje zatem potrzeba stworzenia nowego leku hamującego, który jako substancję czynną zawierałby związek skutecznie hamujący replikację wirusa ZIKV, wykazywałby niską toksyczność, a jego stosowanie zmniejszałoby ryzyko powikłań i łagodziło objawy zakażenia.
Pierwszym przedmiotem wynalazku jest sól sodowa poli(4-sulfonianu styrenu) do stosowania w leczeniu i/lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirusa Zika.
W korzystnej realizacji wynalazku masa cząsteczkowa soli sodowej poli(4-sulfonianu styrenu) wynosi od 1,1 kDa do 3160 kDa.
W innej korzystnej realizacji wynalazku masa cząsteczkowa soli sodowej poli(4-sulfonianu styrenu) wynosi 3160 kDa.
W następnej korzystnej realizacji wynalazku stężenie soli sodowej poli(4-sulfonianu styrenu) wynosi od 0,5 mg/ml do 2 mg/ml.
W jeszcze następnej korzystnej realizacji wynalazku stężenie soli sodowej poli(4-sulfonianu styrenu) wynosi 1 mg/ml.
Celem przeprowadzonych badań było opracowanie nowego inhibitora, który będzie łagodził objawy zakażenia ZIKV i zmniejszał ryzyko powikłań. Najbardziej efektywne były polimery PSSNa (sól sodowa poli(4-sulfonianu styrenu) ), które praktycznie całkowicie hamowały replikację wirusa in vitro. Jednocześnie zastosowane polimery charakteryzowały się niską toksycznością względem komórek ludzkiej glioblastomy (U251) oraz komórek małpiej nerki (Vero PZH), podatnych na zakażenie wirusem Zika. Przeprowadzone badania wykazały, że najefektywniej działają polimery o wysokiej masie cząsteczkowej. Testy mechanistyczne wykazały, że PSSNa wiąże ZIKV i blokuje w ten sposób ich zdolność do zakażania komórek gospodarza.
Przykłady realizacji wynalazku zobrazowano na figurach 1-6. Na fig. 1 przedstawiono cytotoksyczność PSSNa o różnych masach cząsteczkowych w stężeniach 2000, 1000 i 500 μg/ml, wyznaczoną za pomocą testu XTT na komórkach U251 i Vero PZH. Wszystkie eksperymenty przeprowadzono w trzech powtórzeniach. Na fig. 2 przedstawione są średnie wartości z odchyleniami standardowymi (słupki błędów), przedstawiające hamowanie cyklu replikacji ZIKV przez polimery PSSNa o różnych masach cząsteczkowych w komórkach U251. Hamowanie infekcji oceniano przy użyciu ilościowej reakcji Real Time PCR (RT-qPCR). Polimery były obecne w pożywce podczas całego cyklu replikacyjnego
PL 241 834 B1
ZIKV. Dane przedstawiono jako wartości logarytmiczne liczby kopii RNA ZIKV na mililitr. Wszystkie eksperymenty przeprowadzono w trzech powtórzeniach. Wyniki przedstawiono jako wartości średnie ze standardowymi odchyleniami (słupki błędów). Gwiazdka wskazuje wartości statystycznie różniące się od kontroli (P < 0,05). Fig. 3 przedstawia hamowanie cyklu replikacji ZIKV przez PSSNa w różnych typach komórek. Hamowanie infekcji oceniano przy użyciu RT-qPCR. Komórki U251 i Vero PZH zakażano w obecności odpowiedniego stężenia PSSNa odpowiednio przez 4 i 3 dni. Dane są pokazane jako wartości logarytmiczne liczby kopii RNA ZIKV na mililitr. Wyniki przedstawiono jako wartości średnie z co najmniej trzech powtórzeń. Fig. 4 przedstawia aktywność przeciwwirusową PSSNa o różnych masach cząsteczkowych na różnych etapach cyklu infekcji ZIKV. Nazwy odpowiednich testów są zaznaczone nad wykresami. Hamowanie infekcji oceniano przy użyciu RT-qPCR. Wszystkie eksperymenty przeprowadzono w trzech powtórzeniach. Wyniki przedstawiono jako wartości średnie ze standardowymi odchyleniami (słupki błędów). Gwiazdki wskazują wartości statystycznie różniące się od kontroli (P < 0,05). Fig. 5 przedstawia blokowanie przez PSSNa przyłączania się ZIKV do komórek gospodarza. Komórki Vero PZH zakażono ZIKV (TCID50 = 10000/ml) w obecności 250 μg/ml PSSNa. Komórki utrwalono 2 godziny po inkubacji w 4°C i zebrano obrazy konfokalne. Pasek skali = 100 μm. Fig. 6 przedstawia oddziaływanie PSSNa z cząsteczkami ZIKV. PSSNa-FITC lub PBS nałożono na szkiełka nakrywkowe pokryte kolagenem. Następnie dodano ZIKV i inkubowano przez 1 godzinę. Preparaty na szkiełkach utrwalono, wybarwiono immunologicznie stosując przeciwciała specyficznie wykrywające białko E ZIKV i poddano obrazowaniu. Pasek skali = 100 μm.
PSSNa jest łatwym w syntezie i tanim polimerem. Może być otrzymywany na drodze polimeryzacji rodnikowej w bardzo szerokim zakresie mas cząsteczkowych. Jest on też polimerem stosowanym już klinicznie. Jako lek w formie doustnej lub doodbytyniczej zawiesiny jest stosowany w leczeniu hiperkalemii, tj. zbyt wysokiego poziomu potasu w osoczu (np. preparaty Kayexelate, Kionex, Kalexelate). Nie ulega on absorpcji z układu pokarmowego.
Przykład 1
Wpływ soli sodowej poli(4-sulfonianu styrenu) (PSSNa) o różnych masach cząsteczkowych na przeżywalność komórek.
W badaniach zastosowano komercyjnie dostępne (Pressure Chemicals i Sigma-Aldrich) sole sodowe poli(4-sulfonianu styrenu) o różnych masach cząsteczkowych i o małym współczynniku dyspersji (stosowane jako wzorce analityczne w chromatografii żelowej (GPC)).
Metody
Cytotoksyczność polimerów została oznaczona z wykorzystaniem zestawu do testu żywotności XTT (XTT Viability Assay Kit, Biological Industries, Izrael). Test pozwala na ilościowe oznaczenie aktywności metabolizmu komórek. Jedynie żywe, aktywne metabolicznie komórki zdolne są do przekształcenia tetrazoliowego substratu (karboksyanilidu 2,3-bis-(2-metoksy-4-nitro-5-sulfenylo)-(2H)-tetrazoliny, XTT) w jego barwną pochodną, której stężenie, mierzone absorbancją przy 480 nm, koreluje z liczbą żywych komórek oraz ich żywotnością. Do przeprowadzenia doświadczenia wykorzystano permisywne linie komórkowe, tj. komórki ludzkiej glioblastomy (U251) oraz komórki małpiej nerki (Vero PZH). Komórki hodowano przez 48 h w pożywce DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium) z dodatkiem 3% FBS (inaktywowana termicznie płodowa surowica bydlęca), penicyliny, streptomycyny i gentamycyny. Do pożywki dodano wodne roztwory PSSNa o różnych masach cząsteczkowych lub, w przypadku próbek kontrolnych, wodę. Po inkubacji komórek na płytce 96-dołkowej przez 4 doby, usunięto pożywkę i do każdego dołka płytki dodano 100 μl świeżej pożywki oraz 20 μl aktywowanego XTT. Po 2 h inkubacji nadsącz przeniesiono do przezroczystej płytki 96-dołkowej i za pomocą spektrofotometru w standardowy sposób mierzono absorbancję przy długości fali wynoszącej 480 nm. Uzyskane wartości zostały znormalizowane względem absorbancji zmierzonej dla komórek kontrolnych (bez PSSNa), którym przypisano 100% żywotności. Przetestowano roztwory wodne 19 polimerów PSSNa o różnych masach cząsteczkowych (1,1; 2,1; 3,6; 4,2; 6,5; 9,7; 14,9; 20,7; 29,1; 63,9; 104,5; 145; 261; 466; 666; 976; 1000; 2070 i 3160 kDa) w 3 różnych stężeniach (0,5 mg/ml, 1 mg/ml i 2 mg/ml). Wyniki eksperymentu przedstawia fig. 1.
Wyniki
Uzyskane wyniki wskazują na niską cytotoksyczność polimerów w stężeniu 0,5 mg/ml i 1 mg/ml (fig. 1) w przypadku obu testowanych linii komórkowych.
Przykład 2
Wpływ soli sodowej poli(4-sulfonianu styrenu) (PSSNa) na infekcję ZIKV.
PL 241 834 B1
Metody
W celu określenia aktywności przeciwwirusowej soli sodowej sulfonianu polistyrenu (PSSNa) przeciwko ZIKV (szczep H/PF/2013) przeprowadzono test hamowania zakażenia ZIKV przez PSSNa. W tym doświadczeniu polimer był obecny w pożywce na każdym etapie infekcji wirusowej. W doświadczeniu wykorzystano całkowicie konfluentne komórki U251 po 48 h od wysiania na płytce 96-dołkowej. Pożywkę usunięto i dodano 100 μl świeżej pożywki z dodatkiem 3% FBS (inaktywowana termicznie płodowa surowica bydlęca), penicyliny, streptomycyny, gentamycyny oraz polimerów PSSNa o różnych masach cząsteczkowych (1 mg/ml dla PSSNa o 19 różnych masach cząsteczkowych i 0,5 mg/ml dla PSSNa wybranych do testów mechanizmu działania opisanego w przykładzie 3). Próbki kontrolne nie zawierały PSSNa.
Do komórek dodano ZIKV w ilości pozwalającej osiągnąć miano końcowe TCID50 (ang. 50% tissue culture infective dose) = 400/ml. Płytki inkubowano przez 2 h w 37°C, następnie komórki przepłukano dwukrotnie roztworem PBS w celu usunięcia niezwiązanych cząstek wirusowych. Na koniec do każdej studzienki dodano 100 μl roztworu polimeru w pożywce hodowlanej i komórki inkubowano przez 4 dni. Po tym czasie nadsącz zebrano w celu oceny liczby kopii wirusowego RNA z zastosowaniem ilościowej reakcji Real Time PCR (RT-qPCR).
Izolację wirusowego RNA przeprowadzono z wykorzystaniem komercyjnie dostępnego zestawu do izolacji RNA (Viral DNA/RNA Isolation Kit, A&A Biotechnology, Polska) zgodnie z protokołem dostarczonym przez producenta. Tak wyizolowane RNA zostało poddane odwrotnej transkrypcji (RT) oraz ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym (qPCR).
W skrócie, reakcję RT-qPCR przeprowadzono w następujący sposób. 3 μl wyizolowanego wirusowego RNA przepisano na matrycę cDNA i powielono w reakcji o objętości 10 μl zawierającej 1 χ GoScript™ RT Mix for 1-Step RT-qPCR, 1 χ GoTaq Probe qPCR Master Mix with dUTP, 100 nM swoistej sondy znakowanej 6-karboksyfluoresceiną (FAM) i 6-karboksytetrametylorodaminą (TAMRA) (5’-FAM-CGGCATACAGCATCAGGTGCATAGGAG-TAMRA-3’), oraz 450 nM każdego startera (5’TTGGTCATGATACTGCTGATTGC-3’ i 5’-CCTTCCACAAAGTCCCTATTGC-3’). Reakcję przeprowadzono w termocyklerze (CFX96 Touch™ Real-197 Time PCR Detection System, Bio-Rad) w następujących warunkach: 45°C 15 min (odwrotna transkrypcja), 95°C 2 min, następnie 40 cykli po 15 sekund w 95°C i 30 sekund w 60°C.
W celu oceny początkowej liczby cząsteczek wirusowego RNA w próbce przygotowano odpowiednie wzorce. Przepisany na cDNA fragment sekwencji powielono z zastosowaniem starterów opisanych powyżej. Tak otrzymany DNA klonowano do plazmidu pTZ57R/T (Thermo Scientific, Polska) z zastosowaniem zestawu InsTAclone PCR Cloning Kit (Thermo Scientific, Polska). Przeprowadzono transformację szczepu E. coli TOP10 (Life Technologies, Polska) i namnażanie wektora plazmidowego w standardowy sposób. Następnie plazmid oczyszczono z zastosowaniem zestawu do izolacji GeneJET Plasmid Miniprep Kit (Thermo Scientific, Polska) i poddawano linearyzacji poprzez trawienie enzymem restrykcyjnym Kpnl. Stężenie linearyzowanego DNA oceniano poprzez pomiar spektrofotometryczny i obliczano liczbę kopii na mililitr. Jako matrycę w reakcji PCR w czasie rzeczywistym stosowano sześć 10-krotnych rozcieńczeń seryjnych. Zdolność polimerów do zahamowania namnażania się ZIKV wyznaczono jako spadek logarytmu liczby kopii RNA wirusowego na mililitr pożywki.
Wyniki
W pierwszym eksperymencie (fig. 2) komórki U251 zakażono ZIKV w obecności każdego z testowanych polimerów PSSNa o 19 różnych masach cząsteczkowych. Analizy RT-qPCR wykazały bardzo silne hamowanie replikacji ZIKV w stężeniu 500 μg/ml. Stwierdzono również, że działanie hamujące jest związane z masą cząsteczkową polimeru. PSSNa o wysokiej masie wykazują silniejsze działanie hamujące (ponad 4 log hamowania), podczas gdy polimery o mniejszej masie cząsteczkowej wykazały słabsze hamowanie (2-4 log spadku). W przypadku niektórych polimerów hamowanie było tak silne, że liczba kopii wirusowego RNA była poniżej dolnej granicy wykrywalności metody RT-qPCR (około 1000 kopii/ml).
Po tych obiecujących wstępnych eksperymentach przeprowadzono kolejne eksperymenty z wykorzystaniem 4 polimerów obejmujących szeroki zakres mas cząsteczkowych (1,1, 20,7, 29,1 i 3160 kDa). Przeprowadzono test hamowania replikacji wirusa w komórkach U251 i Vero PZH , aby sprawdzić, czy efekt jest zależny od rodzaju komórki. Eksperymenty wykazały bardzo podobny wzorzec hamowania w komórkach U251 i Vero PZH, co sugeruje, że PSSNa działa bezpośrednio na składniki ZIKV, a nie na metabolizm komórkowy (fig. 3). Ponownie zaobserwowano korelację między masą cząsteczkową PSSNa a efektywnością hamowania ZIKV, tj. polimery PSSNa o wyższych masach cząsteczkowych
PL 241 834 B1 (29,1 i 3160 kDa) hamowały ZIKV bardziej skutecznie niż polimery charakteryzujące się niższymi masami cząsteczkowymi. W przypadku komórek U251 zaobserwowano silne, zależne od dawki, hamowanie wirusa tylko dla PSSNa o masach cząsteczkowych 29,1 i 3160 kDa, przy dawce IC50 odpowiednio 14,3 i 8,8 μg/ml. Natomiast w komórkach Vero PZH wszystkie badane polimery PSSNa hamowały zakażenie ZIKV w sposób zależny od dawki, a ich skuteczność rosła wraz ze wzrostem ich masy cząsteczkowej. Test hamowania replikacji wirusa wykazał również całkowite zahamowanie replikacji szczepu ZIKV MR-776 w pierwotnych fibroblastach ludzkiej skóry (HSF) w przypadku wszystkich testowanych polimerów PSSNa (1,1,20,7, 29,1 i 3160 kDa) przy 250 μg/ml (danych nie pokazano).
PSSNa w postaci leku do stosowania w leczeniu lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirusa Zika może mieć postać roztworu do podania dożylnego.
Przykład 3
Znakowany fluorescencyjnie fluoresceiną PSSNa otrzymany został wg procedury opisanej uprzednio w literaturze10.
Określenie mechanizmu przeciwwirusowego działania polimerów PSSNa.
Metody
W celu określenia mechanizmu działania PSSNa i identyfikacji etapu cyklu replikacyjnego, na którym dochodzi do zahamowania infekcji ZIKV, przeprowadzono opisane poniżej testy funkcjonalne przy stężeniu polimeru wynoszącym 0,5 mg/ml. W badaniach wykorzystano cztery różne polimery PSSNa, różniące się masą cząsteczkową (1,1 kDa, 20,7 kDa, 29,1 kDa i 3160 kDa). Wykonano następujące testy komórkowe:
1. Test inaktywacji wińonów przez PSSNa
Stężony ZIKV inkubowano w obecności PSSNa w stężeniu 0,5 mg/ml. Po inkubacji rozcieńczono próbki 1000χ w celu wyeliminowania wpływu PSSNa na same komórki. Przygotowane preparaty poddano analizie z wykorzystaniem miareczkowania wg metody Reed i Muench9 poprzez przygotowanie 10 seryjnych pięciokrotnych rozcieńczeń wirusa i zakażenie nimi monowarstwy komórek U251 w 8 powtórzeniach. Po tym czasie za pomocą mikroskopu optycznego oceniano pojawianie się efektu cytopatycznego na skutek zakażenia ZIKV. Liczba dołków, w których pojawił się CPE koreluje liniowo z wartością logarytmiczną TOD50.
2. Test protekcji komórek przez PSSNa
Wpływ PSSNa na komórki oceniono poprzez inkubację komórek U251 przez 2 h z PSSNa (0,5 mg/ml) w 37°C. Po tym czasie polimer odpłukano, a komórki zakażono ZIKV (TCID50 = 400/ml). Po 5 dniach inkubacji (37°C; 5% CO2) przeprowadzono analizę replikacji ZIKV z wykorzystaniem RT-qPCR. Na podstawie zmian w replikacji wirusa oceniono wpływ PSSNa na komórki.
3. Test oddziaływania PSSNa z receptorem
Wpływ PSSNa jako inhibitora procesu wiązania wirusa do receptora na powierzchni komórki poddano ocenie poprzez adsorpcję wirusa na komórkach U251 w obecności inhibitora, a następnie usunięcie go z pożywki. Na komórki schłodzone do 4°C dodano mieszaninę wirusa (TCID50 = 400/ml, 4°C), próbkę kontrolną z dodatkiem PSSNa (0,5 mg/ml, 4°C) lub próbkę kontrolną (bez PSSNa). Próbki inkubowano 1 h w 4°C, aby pozwolić na związanie wirusa do receptora, a jednocześnie by zablokować internalizację do wnętrza komórki (transport komórkowy został zablokowany przez niską temperaturę). Próbki przepłukano trzykrotnie PBS, a następnie dodano pożywkę hodowlaną i inkubowano przez 5 dni (37°C; 5% CO2). Po tym czasie przeprowadzono analizę replikacji ZIKV z wykorzystaniem RT-qPCR. Na podstawie zmian w replikacji wirusa oceniono wpływ PSSNa na wiązanie się wirusa do receptora komórkowego.
4. Test wpływu PSSNa na późne etapy zakażenia
Wpływ PSSNa jako inhibitora późnych etapów zakażenia poddano ocenie poprzez zakażenie komórek U251 bez PSSNa, a następnie po odpłukaniu wirusa inkubację w obecności PSSNa. Zatem w momencie samej adsorpcji wirusa do komórek oraz jego internalizacji, PSSNa nie był obecny. Komórki inkubowano w pożywce zawierającej ZIKV (TCID50 = 400/ml) lub próbkę kontrolną przez 2 h w 37°C. Po tym czasie komórki przepłukano trzykrotnie PBS i nałożono pożywkę hodowlaną suplementowaną PSSNa (0,5 mg/ml) lub kontrolą i inkubowano przez 12 godzin, co jest czasem jednego cyklu replikacyjnego ZIKV (37°C; 5% CO2). Po tym czasie przeprowadzono analizę replikacji ZIKV z wykorzystaniem RT-qPCR. Na podstawie zmian w replikacji wirusa oceniono wpływ PSSNa na późne etapy zakażenia.
PL 241 834 B1
Mikroskopia konfokalna
Komórki wysiewano na szkiełkach nakrywkowych w 12-studzienkowych płytkach (TPP, Szwajcaria). Po przeprowadzeniu eksperymentu, komórki utrwalono przy użyciu 4% formaldehydu, permeabilizowano 0,1 Tritonem Χ-100 i zablokowano przez inkubację z 5% albuminą surowicy bydlęcej (BSA, Bioshop, Kanada) w PBS przez 2 godziny. Następnie preparaty na szkiełkach inkubowano przez 2 godziny z 1 pg/ ml króliczego przeciwciała anty-ZIKV Envelope (GeneTex, USA). Po przepłukaniu 3 razy PBS komórki inkubowano przez 1 godzinę z 2,5 μg/ml drugorzędowego koziego przeciwciała anty-króliczego skoniugowanego z fluoroforem Atto 488 i/lub falloidyną skoniugowaną z Alexa Fluor 647 (0,2 U/ml, Invitrogen, Polska) barwiącą aktynę komórkową. Następnie preparaty przemyto trzy razy PBS, a jądra komórkowe (DNA) wybarwiono DAPI (0,1 pg/ml, Sigma-Aldrich, Polska) przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Szkiełka przemywano kilkukrotnie PBS i osadzono na szkiełkach podstawowych używając medium ProLong Diamond Antifade Mountant (Life Technologies, Polska). Obrazy uzyskano przy użyciu konfokalnego mikroskopu Zeiss LSM 710 (Carl Zeiss Microscopy GmbH; wydanie wersja 8.1) przy użyciu oprogramowania ZEN 2012 SP1 (Carl Zeiss Microscopy GmbH; black edition, wersja 8.1.0.484).
Wyniki
Wyniki testów funkcjonalnych sugerują, że PSSNa działa poprzez bezpośrednią interakcję z wirusem Zika. Świadczy o tym bardzo silne hamowanie zakaźności próbki po inkubacji z roztworem PSSNa, przedstawione na fig. 4 - wyniki testu inaktywacji wirionów. Zaobserwowano tu również wzrost skuteczności działania przeciwwirusowego wraz ze zwiększaniem masy cząsteczkowej polimeru. PSSNa 3160 kDa obniżył wartość TCID50/ml o prawie 3 log, podczas gdy PSSNa 1,1 kDa obniżył tę wartość tylko o 0,5 log. Zaobserwowano jednak znaczące hamowanie dla 2 polimerów PSSNa (o masach cząsteczkowych 20,7 i 3160 kDa) również w teście przyłączania wirusa (test III). Dlatego nie można wykluczyć dodatkowego niezależnego mechanizmu działania, w którym PSSNa blokuje interakcję między cząstką ZIKV a receptorem komórkowym. Jednak efekt ten nie jest spowodowany bezpośrednią interakcją PSSNa z receptorem, ponieważ nie zaobserwowano żadnego spadku replikacji ZIKV w teście ochrony komórek (test II), w którym polimery inkubowano z komórkami przed infekcją. Nie zaobserwowano żadnego hamowania liczby ZIKV w komórkach traktowanych PSSNa po początkowych etapach replikacji wirusa. Dlatego można założyć, że działanie przeciwwirusowe PSSNa wynika głównie z jego bezpośredniej interakcji z cząstkami ZIKV, co zapobiega przyłączaniu się wirusa do komórek gospodarza.
Obrazy konfokalne potwierdziły, że PSSNa uniemożliwia wirusowi przyłączenie się do komórki. Komórki inkubowano z wirusem i PSSNa w 4°C przez 2 h. W niskiej temperaturze ZIKV mógł się przyłączyć do receptora komórkowego, jednak nie mógł ulegać internalizacji do wnętrza komórki. Uzyskane obrazy wykazały, że oba testowane PSSNa (tj. o masach cząsteczkowych 1,1 i 3160 kDa) znacznie zmniejszyły liczbę wirionów (oznaczonych białymi strzałkami) związanych z komórką (fig. 5). Aby bezpośrednio obserwować interakcję między 10 ZIKV i PSSNa, przeprowadzono test wiązania ZIKV, gdy PSSNa wyznakowany fluoresceiną (PSSNa-FITC) unieruchomiono na szkiełkach nakrywkowych pokrytych kolagenem. Zaobserwowano znaczny wzrost sygnału obwiedni ZIKV w porównaniu do kontroli bez PSSNa-FITC. Obrazy konfokalne wykazują zatem silną interakcję między PSSNa-FITC i ZIKV (fig 6).
Literatura (1) Dick, G. W. A. Zika Virus (I). Isolations and Serological Specificity. 1952, 46 (5), 509-520.
(2) Lanciotti, R. S.; Kosoy, O. L.; Laven, J. J.; Velez, J. O.; Lambert, A. J.; Johnson, A. J.; Stanfield, S. M.; Duffy, M. R. Genetic and Serologic Properties of Zika Virus Associated with an Epidemic, Yap State, Micronesia, 2007. 2008, 14 (8), 1232-1239.
(3) Musso, D.; Bossin, H.; Mallet, H. P.; Besnard, M.; Broult, J.; Baudouin, L.; Levi, J. E.; Sabino, E. C.; Ghawche, F.; Lanteri, M. C.; Baud, D. Zika Virus in French Polynesia 2013-14: Anatomy of a Completed Outbreak. The Lancet Infectious Diseases. 2018.
(4) Kraemer, M. U. G.; Sinka, M. E.; Duda, K. A.; Mylne, A.; Shearer, F. M.; Brady, O. J.; Messina, J. P.; Barker, C. M.; Moore, C. G.; Carvalho, R. G.; Coelho, G. E.; Van Bortel, W.; Hendrickx, G.; Schaffner, F.; Wint, G. R. W.; Elyazar, I. R. F.; Teng, H.-J.; Hay, S. I. The Global Compendium of Aedes Aegypti and Ae. Albopictus Occurrence. Sci. data 2015, 2,150035.
(5) Musso, D.; Roche, C.; Robin, E.; Nhan, T.; Teissier, A.; Cao-Lormeau, V. M. Potential Sexual Transmission of Zika Virus. Emerg. Infect. Dis. 2015, 21 (2), 359-361.
PL 241 834 B1 (6) Baud, D.; Gubler, D. J.; Schaub, B.; Lanteri, M. C.; Musso, D. An Update on Zika Virus Infection. The Lancet. 2017.
(7) Wheeler, A. C. Development of Infants with Congenital Zika Syndrome: What Do We Know and What Can We Expect? Pediatrics 2018.
(8) Rice, M. E.; Galang, R. R.; Roth, N. M.; Ellington, S. R.; Moore, C. A.; Valencia-Prado, M.; Ellis, E. M.; Tufa, A. J.; Taulung, L. A.; Alfred, J. M.; Perez-Padilla, J.; Delgado-López, C. A.; Zaki, S. R.; Reagan-Steiner, S.; Bhatnagar, J.; Nahabedian, J. F.; Reynolds, M. R.; Yeargin-Allsopp, M.; Viens, L. J.; Olson, S. M.; Jones, A. M.; Baez-Santiago, M. A.; Oppong-Twene, P.; VanMaldeghem, K.; Simon, E. L.; Moore, J. T.; Polen, K. D.; Hillman, B.; Ropeti, R.; Nieves-Ferrer, L.; Marcano-Huertas, M.; Masao, C. A.; Anzures, E. J.; Hansen, R. L.; Perez-Gonzalez, S. I.; Espinet-Crespo, C. P.; Luciano-Roman, M.; Shapiro-Mendoza, C. K.; Gilboa, S. M.; Honein, M. A. Vital Signs: Zika-Associated Birth Defects and Neurodevelopmental Abnormalities Possibly Associated with Congenital Zika Virus Infection - U.S. Territories and Freely Associated States, 2018. Morb. Mortal. Wkly. Rep. 2018.
(9) Reed, L. J.; Muench, H. A. Simple Method of Estimating Fifty Percent Endpoints. Am. J. Epidemiol. 1938, 27 (3), 493-497.
(10) Sohn, D., Russo, P.S., Davila, A., Poche, D.S., McLaughlin, M. L., J. Colloid Interface Sci. 1996, 17(1), 31-44.
Claims (5)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sól sodowa poli(4-sulfonianu styrenu) do stosowania w leczeniu i/lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirusa Zika.
- 2. Sól sodowa do stosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że masa cząsteczkowa soli sodowej poli(4-sulfonianu styrenu) wynosi od 1,1 kDa do 3160 kDa.
- 3. Sól sodowa do stosowania według zastrz. 2, znamienna tym, że masa cząsteczkowa soli sodowej poli(4-sulfonianu styrenu) wynosi 3160 kDa.
- 4. Sól sodowa do stosowania według zastrz. od 1 do 3, znamienna tym, że stężenie soli sodowej poli(4-sulfonianu styrenu) wynosi od 0,5 mg/ml do 2 mg/ml.
- 5. Sól sodowa do stosowania według zastrz. 4, znamienna tym, że stężenie soli sodowej poli(4-sulfonianu styrenu) wynosi 1 mg/ml.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL433443A PL241834B1 (pl) | 2020-04-03 | 2020-04-03 | Zastosowanie sulfonowanych pochodnych polistyrenu w leczeniu i/lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirus Zika |
| EP21722586.1A EP4125938B1 (en) | 2020-04-03 | 2021-03-24 | Use of sulfonated polystyrene derivatives in the treatment and/or prophylaxis of infection caused by zika virus |
| PCT/PL2021/000016 WO2021201705A1 (en) | 2020-04-03 | 2021-03-24 | Use of sulfonated polystyrene derivatives in the treatment and/or prophylaxis of infection caused by zika virus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL433443A PL241834B1 (pl) | 2020-04-03 | 2020-04-03 | Zastosowanie sulfonowanych pochodnych polistyrenu w leczeniu i/lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirus Zika |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL433443A1 PL433443A1 (pl) | 2021-10-04 |
| PL241834B1 true PL241834B1 (pl) | 2022-12-12 |
Family
ID=75747007
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL433443A PL241834B1 (pl) | 2020-04-03 | 2020-04-03 | Zastosowanie sulfonowanych pochodnych polistyrenu w leczeniu i/lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirus Zika |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP4125938B1 (pl) |
| PL (1) | PL241834B1 (pl) |
| WO (1) | WO2021201705A1 (pl) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL245308B1 (pl) | 2021-10-15 | 2024-06-24 | Univ Jagiellonski | Kopolimery PAMPS-PAaU do stosowania w leczeniu i/lub profilaktyce infekcji wywołanej przez wirus Zika |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017190193A1 (en) * | 2016-05-05 | 2017-11-09 | Starpharma Pty Ltd | Method of prophylaxis of zika virus infection |
-
2020
- 2020-04-03 PL PL433443A patent/PL241834B1/pl unknown
-
2021
- 2021-03-24 WO PCT/PL2021/000016 patent/WO2021201705A1/en not_active Ceased
- 2021-03-24 EP EP21722586.1A patent/EP4125938B1/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP4125938A1 (en) | 2023-02-08 |
| PL433443A1 (pl) | 2021-10-04 |
| WO2021201705A1 (en) | 2021-10-07 |
| EP4125938B1 (en) | 2024-09-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wang et al. | Antiviral activities of niclosamide and nitazoxanide against chikungunya virus entry and transmission | |
| Ho et al. | Suramin inhibits chikungunya virus entry and transmission | |
| Albulescu et al. | Suramin inhibits Zika virus replication by interfering with virus attachment and release of infectious particles | |
| Adcock et al. | Evaluation of anti-Zika virus activities of broad-spectrum antivirals and NIH clinical collection compounds using a cell-based, high-throughput screen assay | |
| Talarico et al. | Interference in dengue virus adsorption and uncoating by carrageenans | |
| Milewska et al. | Novel polymeric inhibitors of HCoV-NL63 | |
| Mosso et al. | Endocytic pathway followed by dengue virus to infect the mosquito cell line C6/36 HT | |
| Millet et al. | Middle East respiratory syndrome coronavirus infection is inhibited by griffithsin | |
| Lani et al. | Antiviral activity of selected flavonoids against Chikungunya virus | |
| Peña et al. | Dengue virus modulates the unfolded protein response in a time-dependent manner | |
| Talarico et al. | The antiviral activity of sulfated polysaccharides against dengue virus is dependent on virus serotype and host cell | |
| McLean et al. | Flavivirus NS4A-induced autophagy protects cells against death and enhances virus replication | |
| McBride et al. | Dengue viral infections; pathogenesisand epidemiology | |
| Vandergaast et al. | West Nile virus (WNV) replication is independent of autophagy in mammalian cells | |
| Thongtan et al. | Apoptosis in dengue virus infected liver cell lines HepG2 and Hep3B | |
| Nain et al. | Japanese encephalitis virus invasion of cell: allies and alleys | |
| Akay et al. | Activation status of integrated stress response pathways in neurones and astrocytes of HIV‐associated neurocognitive disorders (HAND) cortex | |
| Rothan et al. | Study the antiviral activity of some derivatives of tetracycline and non-steroid anti inflammatory drugs towards dengue virus. | |
| Duncan et al. | Avian reovirus-induced syncytium formation is independent of infectious progeny virus production and enhances the rate, but is not essential, for virus-induced cytopathology and virus egress | |
| Kaur et al. | Glycan-dependent chikungunya viral infection divulged by antiviral activity of NAG specific chi-like lectin | |
| Klawikkan et al. | Effect of Thai medicinal plant extracts against Dengue virus in vitro | |
| Sinha et al. | In-vitro antiviral action of Eupatorium perfoliatum against dengue virus infection: Modulation of mTOR signaling and autophagy | |
| Tokunaga et al. | Novel anti-flavivirus drugs targeting the nucleolar distribution of core protein | |
| de Oliveira et al. | The small molecule AZD6244 inhibits dengue virus replication in vitro and protects against lethal challenge in a mouse model: LC de Oliveira et al. | |
| Basic et al. | A synthetic derivative of houttuynoid B prevents cell entry of Zika virus |