PL242410B1 - Sposób otrzymywania koniugatów wankomycyny i TP10, koniugaty otrzymane tym sposobem oraz ich zastosowanie w leczeniu przeciwbakteryjnym - Google Patents
Sposób otrzymywania koniugatów wankomycyny i TP10, koniugaty otrzymane tym sposobem oraz ich zastosowanie w leczeniu przeciwbakteryjnym Download PDFInfo
- Publication number
- PL242410B1 PL242410B1 PL428782A PL42878219A PL242410B1 PL 242410 B1 PL242410 B1 PL 242410B1 PL 428782 A PL428782 A PL 428782A PL 42878219 A PL42878219 A PL 42878219A PL 242410 B1 PL242410 B1 PL 242410B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- van
- conjugates
- conjugate
- peg4
- dmf
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 15
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 52
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 title claims description 22
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 title claims description 18
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 title claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 7
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 33
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 26
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 20
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 20
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 15
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 13
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 13
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 11
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- -1 Boc-protected amino Chemical group 0.000 claims description 8
- 208000037942 Methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection Diseases 0.000 claims description 7
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 7
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 7
- 238000006736 Huisgen cycloaddition reaction Methods 0.000 claims description 6
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine hydrate Chemical compound O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 6
- 229960001572 vancomycin hydrochloride Drugs 0.000 claims description 6
- LCTORFDMHNKUSG-XTTLPDOESA-N vancomycin monohydrochloride Chemical compound Cl.O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 LCTORFDMHNKUSG-XTTLPDOESA-N 0.000 claims description 6
- WYVAMUWZEOHJOQ-UHFFFAOYSA-N propionic anhydride Chemical compound CCC(=O)OC(=O)CC WYVAMUWZEOHJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 5
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 claims description 4
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 4
- 125000002355 alkine group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 4
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 claims description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 4
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 4
- DJGMNCKHNMRKFM-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pent-4-ynoic acid Chemical class C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC#C)C(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 DJGMNCKHNMRKFM-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 3
- QWENRTYMTSOGBR-UHFFFAOYSA-N 1H-1,2,3-Triazole Chemical compound C=1C=NNN=1 QWENRTYMTSOGBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FPVCVHVTMPCZTH-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(2-azidoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethanamine Chemical compound NCCOCCOCCOCCN=[N+]=[N-] FPVCVHVTMPCZTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007821 HATU Substances 0.000 claims description 3
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 claims description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 claims description 3
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- KTUQUZJOVNIKNZ-UHFFFAOYSA-N butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CCCCO KTUQUZJOVNIKNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 3
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 3
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 claims description 3
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 claims description 3
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 claims description 3
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 claims description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims 7
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 claims 2
- 208000015688 methicillin-resistant staphylococcus aureus infectious disease Diseases 0.000 claims 2
- 101000693243 Homo sapiens Paternally-expressed gene 3 protein Proteins 0.000 abstract description 3
- 102100025757 Paternally-expressed gene 3 protein Human genes 0.000 abstract description 3
- KXSKAZFMTGADIV-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(2-hydroxyethoxy)propoxy]ethanol Chemical compound OCCOCCCOCCO KXSKAZFMTGADIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 8
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 8
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein succinimidyl ester Chemical compound C=1C(O)=CC=C2C=1OC1=CC(O)=CC=C1C2(C1=C2)OC(=O)C1=CC=C2C(=O)ON1C(=O)CCC1=O VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 101100289894 Caenorhabditis elegans lys-7 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 2
- VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N Cu+ Chemical compound [Cu+] VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N chembl3301825 Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)C(O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N 0.000 description 2
- 238000012650 click reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800002011 Amphipathic peptide Proteins 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- JOCOFYRALUROTH-UHFFFAOYSA-N prop-2-ynoyl prop-2-ynoate Chemical compound C#CC(=O)OC(=O)C#C JOCOFYRALUROTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 108010014364 transportan-10 Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/006—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure
- C07K9/008—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure directly attached to a hetero atom of the saccharide radical, e.g. actaplanin, avoparcin, ristomycin, vancomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/14—Peptides containing saccharide radicals; Derivatives thereof, e.g. bleomycin, phleomycin, muramylpeptides or vancomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/10—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a tag for extracellular membrane crossing, e.g. TAT or VP22
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Nowy związek o wzorze ogólnym: gdzie: X - oznacza PEG3; PEG4; Ala-PEG4; TP10 - oznacza X-AGYLLGK(X)INLKALAALAKKIL-X-NH2. Ponadto, zgłoszenie obejmuje też sposób otrzymywania przedmiotowych związków, ich zastosowanie oraz zawierającą je kompozycję farmaceutyczną.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania koniugatów wankomycyny (Van) i transportami 10 (TP10) oraz koniugaty otrzymane tym sposobem do zastosowania jako nowe związki przeciwbakteryjne przeciwko MRSA, w szczególności przeciwko Staphylococcus aureus, Enterococcus spp. i Neisseria spp.
Wankomycyna, antybiotyk glikopeptydowy, który posiada aktywność przeciwbakteryjną przeciwko Gram(+) tlenowcom i beztlenowcom. Wankomycyna jest często stosowana w infekcjach zagrażających życiu wywołanych przez bakterie takie jak Staphylococcus aureus, Enterococcus spp. i Clostridium difficile. Obecnie zakażenia tymi mikroorganizmami często występują w społeczeństwie co jest przyczyną dużej ilości powikłań i śmiertelności wśród pacjentów. Wśród nich, szczególnie niebezpieczne są zakażenia metycilino-opornym Staphylococcus aureus (MRSA) zlokalizowane w tkance mózgowej jak np. bakteryjne zapalenie opon mózgowych, a ich leczenie to główne wyzwanie dla współczesnej medycyny.
HCI CHa
Rys. 1. Struktura wankomycyny
Wankomycyna oraz sposób jej otrzymywania jest znana z opisu patentowego US 3067099 B.
Skuteczność wankomycyny jest niewystarczająca z uwagi na coraz większą ilość wielolekoopornych (MDR) szczepów szpitalnych. Wankomycyna ma wiele ograniczeń także w leczeniu pacjentów zakażonych MRSA, oprócz wspomnianej wcześniej szybko rozwijająca się oporność na ten antybiotyk również osłabia jej penetrację przez barierę krew-mózg (BBB), co ogranicza jej zastosowanie w zakażeniach mózgu np. bakteryjnym zapaleniu opon mózgowych. Niestety brak jest alternatywnych leków do wankomycyny.
Dlatego też, klinicznym wyzwaniem stało się stworzenie zmodyfikowanej wankomycyny, która ma lepszą skuteczność antybakteryjną oraz dobrze penetruje do tkanki mózgowej.
Takie polepszone własności udało się osiągnąć przez skoniugowanie wankomycyny z transportanem 10 (TP10), który jest przedstawicielem peptydów penetrujących komórkę (CPP). TP10, przedstawiciel kationowych CPP, jest krótkim amfipatycznym peptydem (oznacza X-AGYLLGK(X)INLKALAALAKKIL-X-A/H2).
TP10 jest znany z właściwości transportujących przez błony komórkowe, niestety mechanizm transportu jest niewyjaśniony. TP10 ma również zdolność transportowania różnych cząsteczek w tym leków do wnętrza komórki. Dodatkowo TP10 również posiada własności przeciwbakteryjne.
Stworzenie koniugatów Van-TP10 poprawiło własności farmakokinetyczne i farmakodynamiczne w porównaniu do samej wankomycyny, przy zachowaniu niskiej toksyczności komórkowej. Koniugaty Van-TP10 wykazują lepsze efekty przeciwbakteryjne w stosunku do klinicznych szczepów
MRSA a stężenie jednego z koniugatów w mózgu jest 200-krotnie wyższe niż samej wankomycyny, przy jednoczesnym niskim poziomie ich toksyczności.
Koniugaty mogą znaleźć zastosowanie w leczeniu zagrażających życiu infekcji MRSA, szczególnie tych znajdujących w mózgu.
Nowo otrzymane związki (Van-TP10) mogą znaleźć zastosowanie jako leki w przemyśle farmaceutycznym i stanowić alternatywną terapię w stosunku do tradycyjnej wankomycyny.
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie sposobu otrzymywania związków w postaci koniugatów, które mogą być zastosowane do leczenia zagrażających życiu infekcji MRSA, również tych znajdujących w mózgu (nowy antybiotyk z grupy glikopeptydów). Nieoczekiwanie problem ten został rozwiązany w istotnym stopniu w niniejszym wynalazku.
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania koniugatów wankomycyny (Van) i transportami 10 (TP10) o wzorach ogólnych Van-PEG3-TP10 [koniugat I] lub Van-PEG4-TP10 [koniugat II] lub TP10-Ala(PEG4-Van) [koniugat IV] oraz [Lys7(PEG4-Van)]TP10 [koniugat IVa] charakteryzujący się tym, że w pierwszym etapie prowadzi się syntezę łańcucha TP10 i j ego analogów oraz modyfikację struktury wakomycyny, a następnie prowadzi się kowalencyjną koniugację obu związków metodą cykloaddycji Huisgena.
Korzystnie, w sposobie według wynalazku etap otrzymywania łańcucha TP10 i jego analogów obejmuje syntezę peptydów w fazie stałej z wykorzystaniem automatycznego syntetyzatora oraz żywicy TentaGel S RAM mającej osadzenie grup aminowych 0,25 mmol/g, przy czym
a) Fmoc chronione aminokwasy przyłącza się jako aktywne pochodne z wykorzystaniem 3-krotnego molowego nadmiaru TBTU z dodatkiem HOBt i NMP w proporcji molowej 1:1:2 w DMF przez 2 x 30 min; następnie usuwa się grupy Fmoc z użyciem 20% roztworu piperydyny w DMF w 2 cyklach (2 x 3,5 min), gdzie dodatkowo w przypadku syntezy koniugatu I i II N-końcową grupę Fmoc usuwa się za pomocą 20% roztworu piperydyny w DMF (2 x 5 min), a następnie do N-końcowej grupy aminowej przyłącza się grupę propiolową (Prop) stosując 10-krotny molowy nadmiar bezwodnika kwasu propiolowego w DMF przez 1,5 godziny; mieszaninę przechowuje się w temperaturze 0°C przez 10 min; osad odsącza się, a po odparowaniu DCM otrzymany bezwodnik rozpuszcza się w 5 mL DMF i dodaje się do naczynka reakcyjnego z peptydylo-żywicą, lub w przypadku syntezy koniugatu III do żywicy przyłącza się pochodną Fmoc-L-propargiloglicyny (Fmoc-Prg-OH), a następnie kolejne reszty aminokwasowe w sekwencji TP10 w przypadku syntezy koniugatu IV i IVa do osłony grupy ε-aminowej reszty Lys7 stosuje się labilną w środowisku hydrazyny grupę iv Dde, którą usuwa się za pomocą 10% roztworu monohydratu hydrazyny w DMF (3 x 20 min), a następnie przyłącza się grupę alkinową do grupy ε-aminowej reszty Lys7 stosując 10-krotny molowy nadmiar bezwodnika kwasu propiolowego lub w przypadku syntezy koniugatu IV N-końcową resztę Ala przyłącza się jako Boc-chroniony aminokwas, lub w przypadku koniugatu IVa do N-końcowej grupy aminowej przyłącza się 6-karboksyfluoresceinę (FI) stosując 3-krotny molowy nadmiar estru N-hydroksysukcynimidowego 6-karboksyfluoresceiny (Fl-NHS) z dodatkiem DIPEA w proporcji molowej 1:1 w DMF przez 1,5 godziny
b) odszczepianie peptydów od żywicy prowadzi się z jednoczesnym usunięciem osłon grup funkcyjnych w łańcuchach bocznych za pomocą mieszaniny kwas trifluorooctowy (TFA), fenol, triizopropylosilan i woda (w proporcji molowej 88:5:2:5) przez 2 godziny, następnie
c) peptydy wytrąca się z mieszaniny reakcyjnej za pomocą zimnego eteru dietylowego; następnie osad odsącza się, rozpuszcza w wodzie i liofilizuje się; surowe peptydy analizuje się i oczyszcza za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej w układzie faz odwróconych; tożsamość otrzymanych produktów potwierdzano się za pomocą spektrometrii mas.
Korzystnie, w sposobie według wynalazku modyfikację struktury wankomycyny w celu otrzymania jej pochodnych modyfikowanych grupą azydkową prowadzi się w roztworze, gdzie:
a) dla pochodnej Van-PEG4-N3, ester N-hydroksysukcynimidowy kwasu 15-azydo-4,7,10,13-tetraoksypentadekanowego (N3-PEG4-NHS) przyłącza się do chlorowodorku wankomycyny poprzez pierwszorzędową grupę aminową we fragmencie cukrowym przeprowadzając reakcję w roztworze wodnym zawierającym DIPEA, przy proporcjach molowych reagentów 1:1.5:2.5, przy czym roztwór mieszano w temperaturze 4°C przez 30 min;
b) dla pochodnej Van-PEG3-N3, 1-amino-11-azydo-3,6,9-trioksyundekan (N3-PEG3-NH2) przyłącza się do chlorowodorku wankomycyny poprzez grupę karboksylową we fragmencie aglikonowym przeprowadzając reakcję w roztworze DMF z wykorzystaniem HATU (heksafluorofosforan 2-(1 H-9-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetrametylouroniowy) z dodatkiem DIPEA, przy proporcjach molowych reagentów 1:0,8:1:2, przy czym roztwór miesza się w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, po upływie tego czasu, produkty reakcji natychmiast rozdziela się za pomocą preparatywnej RP-HPLC; eluaty frakcjonuje się i analizuje za pomocą analitycznej RP-HPLC;
c) następnie frakcje Van-PEG4-N3 lub Van-PEG3-N3 o czystości powyżej 98% łączy się i liofilizuje się, a tożsamość otrzymanych produktów potwierdza się za pomocą spektrometrii mas.
Korzystnie, w sposobie według wynalazku kowalencyjną koniugację obu związków metodą cykloaddycji Huisgena do uzyskania koniugatów prowadzi się poprzez reakcje 0,8 μM zmodyfikowanych grupą alkinową analogów TP10 otrzymanych sposobem według zastrz. 2 z 0,4 μM zmodyfikowanych grupą azydkową pochodną Van-PEG3-N3 lub Van-PEG4-N3 w obecności 1,5 ml mieszaniny woda/ tert-butanol w stosunku objętościowym 1:1 i 8 μL 0,1 M roztworu CuSO4xH2O oraz 4 μL świeżo przygotowanego 0,5 M roztworu askorbinianu sodu w proporcji molowej 2:1:2:5, przy czym mieszaninę reakcyjną miesza się w temperaturze pokojowej przez około 24 godziny do utworzenia 1,2,3-triazolu, następnie rozpuszczalnik odparowuje się i produkty syntezy liofilizuje się; po czym otrzymane surowe koniugaty oczyszcza się za pomocą preparatywnej lub semi-preparatywnej RP-HPLC; uzyskując koniugaty o czystości powyżej 98%.
Kolejnym przedmiotem wynalazku są koniugaty otrzymane sposobem według wynalazku do zastosowania jako lek przeciwbakteryjny wobec Staphylococcus aureus lub Enterococcus spp lub Neisseria spp.
Korzystnie, koniugaty do zastosowania jako lek przeciwbakteryjny wobec szczepu MRSA N315 i MRSA hetero-YISA 6347.
Korzystnie, koniugaty do leczenia infekcji MRSA zlokalizowanych w mózgu.
Opis rysunków i tabel:
Fig. 1 - przedstawia chemiczną strukturę zsyntetyzowanych koniugatów.
Koniugat: a) Van-PEG3-TP10 (koniugat I);
b) Van-PEG4-TP10 (koniugat II);
c) TP10-Ala(PEG4-Van) (koniugat III);
d) [Lys7(PEG4-Van)]TP10 (koniugat IV);
e) Fl[Lys7(PEG4-Van)]TP10 (koinugat IVa)
Fig. 2 - przedstawia przeciwbakteryjne aktywności [Lys7(PEG4-Van)]TP10 przeciwko wewnątrzkomórkowo zlokalizowanym szczepom MRSA 12673 * istotność statystyczna (p<0.05) w porównaniu do kontroli (bez leczenia) i Van
Fig. 3 - przedstawia przeciwbakteryjne aktywności [Lys7(PEG4-Van)]TP10 przeciwko wewnątrzkomórkowo zlokalizowanym szczepom MRSA h-VISA 6347.
* istotność statystyczna (p<0.05) w porównaniu do kontroli (bez leczenia) i Van
Fig. 4 - przedstawia obecność Fl-[Lys7(PEG4-Van)]TP10 w mózgach mysich uzyskany za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego.
Fig. 5 - przedstawia hemolityczną aktywność Van, Van-PEG3-TP10 i Van-PEG4-TP10 w zakresie stężeń of 100-0.049 μM mierzony spektrofotometryczne przy długości fali 450 nm.
* Van - 0% hemolizy w całym zakresie stężeń * istotność statystyczna (p<0.05) w porównaniu do Van
Tabela 1 - przedstawia strukturę pierwszorzędową otrzymanych koniugatów Van-TP10
Tabela 2 - przedstawia uzyskane koniugaty, ich masy molekularne oraz wydajność reakcji koniugacji.
Tabela 3 - przedstawia antybakteryjną aktywność koniugatów Van-TP10
Tabela 4 - przedstawia stężenie [Lys7(PEG4-Van)]TP10, Van i TP10 w homogenatach mysich mózgów.
Wynalazek ilustrują następujące przykłady wykonania, nie stanowiące jego ograniczenia.
Przykład 1
Z syntetyzowane koniugaty
Otrzymano 4 koniugaty Van z TP10, o strukturach przedstawionych w tabeli 1 oraz na Fig. 1.
PL 242410 Β1
Tabela 1. Struktura pierwszorzędowa otrzymanych koniugatów TP10 z Van
| Nazwa związku | Sekwencja | |
| I | Van-PEG3-TP10 | Van-NH-PEG3-Tra( 1,4)-C(O)- AGYLLGKINLKALAALAKKIL-ir™ |
| II | Van-PEG4-TP10 | Van-C(O)-PEG4-Tra( 1,4)-0(0)- AGYLLGKINLKALAALAKKIL-ćotzć/ |
| III | TP10-Ala(PEG4- Van) | AGYLLGKINLKALAALAKKIL-Ala(Tra(l,4)- PEG4-C(O)-Van)-iZwz7 |
| IV IVa | [Lys7(PEG4- Van)]TP10 | AGYLLGK7(C(O)-Tra(l,4)-PEG4-C(O)- Van)INLKALAALAKKIL-ć//w7 |
| /7-[Lys7(PEG4- Van)]TP10 | F7-AGYLLGK7(C(O)-Tra( 1,4)-PEG4-C(O)- Van)INLKALAALAKKIL-z™/7 |
/7 — fluoresceina, PEG4 - linker 4,7,10,13-tetraoksypentadekanowy, PEG3 - linker
3,6,9-triokyaundekanowy, Tra - pierścień 1,2,3-triazolowy
Synteza łańcucha TP10
TP10 i jego analogi zsyntezowano stosując standardową procedurę syntezy peptydów w fazie stałej (SPPS) z wykorzystaniem automatycznego syntezatora peptydów (Ouartet, Protein Technologies Inc) oraz żywicy TentaGel S RAM (o osadzeniu grup aminowych 0,25 mmol/g). Fmoc-chronione aminokwasy przyłączano jako aktywne pochodne z wykorzystaniem 3-krotnego molowego nadmiaru TBTU (tetrafluoroboran 2-(1/7-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetrametylo-uroniowy) z dodatkiem HOBt (1-hydroksybenzotriazol) i NMP (A/-metylomorfoli na) (w proporcji molowej 1:1:2) w DMF (A/,A/-dimetyloformamid) przez 2 x 30 min. Usuwanie grup Fmoc (fluorenylo-9-metoksykarbonyl) przeprowadzano z użyciem 20% roztworu piperydyny w DMF w 2 cyklach (2 x 3,5 min). Dodatkowo, zastosowano labilną w środowisku hydrazyny grupę /VDde (1-(4,4-dimetylo-2,6-dioksycykloheksadieno)-3-metylobutyl) do osłony grupy ε-aminowej reszty Lys7, zamiast standardowej labilnej w środowisku kwaśnym grupy Boc (ferf-butyloksycarbonyl) (synteza koniugatu IV i IVa). Ze względu fakt, że hydrazyna usuwa grupę Fmoc, A/-końcowa resztę Ala (synteza koniugatu IV) przyłączono jako Boc-chroniony aminokwas. W syntezie koniugatu IVa do A/-końcowej grupy aminowej przyłączono 6-karboksyfluoresceinę (FI) stosując 3-krotny molowy nadmiar estru A/-hydroksysukcynimidowego 6-karboksyfluoresceiny (FI-NHS) z dodatkiem DIPEA (A/,A/-diizopropyloetylamina) (w proporcji molowej 1:1) w DMF przez 1,5 godziny.
Modyfikacja TP10 grupą alkinową
W przypadku syntezy koniugatu I i II, A/-końcową grupę Fmoc usuwano za pomocą 20% roztworu piperydyny w DMF (2x5 min), a następnie do A/-końcowej grupy aminowej przyłączano grupę propiolową (Prop) stosując 10-krotny molowy nadmiar bezwodnika kwasu propiolowego w DMF przez 1,5 godziny. Bezwodnik kwasu propiolowego otrzymano przez zmieszanie A/,A/-diizopropylokarbodiimidu (DIC) z kwasem propiolowym (w proporcji molowej 1:2) w dichlorometanie (DCM). Mieszaninę przechowywano w temperaturze 0°C przez 10 min. Osad odsączono, a po odparowaniu DCM otrzymany bezwodnik rozpuszczono w 5 mL DMF i dodano do naczynka reakcyjnego z peptydylo-żywicą. Natomiast, modyfikowany grupą alkinową koniugat III otrzymano przez przyłączenie do żywicy pochodnej Fmoc-L-propargiloglicyny (Fmoc-Prg-OH), a następnie przez przyłączanie kolejnych reszt aminokwasowych w sekwencji TP10. W przypadku syntezy koniugatu IV i IVa, grupę /VDde usuwano za pomocą 10% roztworu monohydratu hydrazyny w DMF (3 x20 min), a następnie przyłączano grupę alkinową do grupy ε-aminowej reszty Lys7 stosując 10-krotny molowy nadmiar bezwodnika kwasu propiolowego (otrzymanego w sposób wyżej opisany).
PL 242410 Β1
Odszczepianie peptydów od żywicy
Peptydy odszczepiano z żywicy z jednoczesnym usunięciem osłon grup funkcyjnych w łańcuchach bocznych za pomocą mieszaniny kwas trifluorooctowy (TFA), fenol, triizopropylosilan i woda (w proporcji molowej 88:5:2:5) przez 2 godziny. Peptydy wytrącano z mieszaniny reakcyjnej za pomocą zimnego eteru dietylowego. Następnie osad odsączano, rozpuszczano w wodzie i liofilizowano. Surowe peptydy analizowano i oczyszczano za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej w układzie faz odwróconych (RP-HPLC). Tożsamość otrzymanych produktów potwierdzano za pomocą spektrometrii mas, techniką MALDI-TOF (Bruker Daltonics, model HCT Ultra) lub techniką ESI (ABSciex, TripleTOF 5600+).
Modyfikacja struktury Van
Pochodne Van modyfikowane grupą azydkową zsyntezowano w roztworze. W przypadku pochodnej Van-PEG4-N3, ester A/-hydroksysukcynimidowy kwasu 15-azydo-4,7,10,13-tetraoksypentadekanowego (N3-PEG4-NHS) przyłączono do chlorowodorku wankomycyny poprzez pierwszorzędową grupę aminową we fragmencie cukrowym. Reakcję przeprowadzono w roztworze wodnym zawierającym DIPEA (proporcje molowe reagentów 1:1.5:2.5). Roztwór mieszano w temperaturze 4°C przez 30 min. Natomiast pochodną Van-PEG3-N3 otrzymano przez przyłączenie 1-amino-11-azydo-3,6,9-trioksyundekanu (N3-PEG3-NH2) do chlorowodorku wankomycyny poprzez grupę karboksylową we fragmencie aglikonowym. Reakcję przeprowadzono w roztworze DMF z wykorzystaniem HATU (heksafluorofosforan 2-(1/-/-9-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetrametylouroniowy) z dodatkiem DIPEA (w proporcji molowej 1:0,8:1:2). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Po upływie tego czasu, produkty reakcji natychmiast rozdzielano za pomocą preparatywnej RP-HPLC. Eluaty frakcjonowano i analizowano za pomocą analitycznej RP-HPLC. Frakcje Van-PEG4-N3 lub Van-PEG3-N3 o czystości powyżej 98% łączono i liofilizowano. Tożsamość otrzymanych produktów potwierdzono za pomocą spektrometrii mass, techniką MALDI-TOF lub ESI.
Koniugacja Van z TP10
Do kowalencyjnej koniugacji TP10z wankomycyną (Van) wykorzystano katalizowaną jonami miedzi Cu(l) specyficzną 1,3-dipolarną reakcję cykloaddycji Huisgena, znaną również jako reakcja klik (rys. 2). Metoda ta jest szybka, wysoce wydajna oraz regio- i chemoselektywna w łagodnych warunkach reakcji.
RŁ J ...... . Óu (I).
—N, + =—R -j 1
Rysunek 2. Ogólny schemat katalizowanej jonami miedzi(l) 1,3-dipolarnej cykloaddycji Huisgena („reakcja klik”); gdzie R - Van, R1 - TP10 o sekwencji aminokwasowej przedstawionej na rysunku 1.
Reakcje modyfikowanych grupą alkinową analogów TP10 (za każdym razem 0,8 μΜ) ze modyfikowaną grupą azydkową pochodną (0,4 μΜ) Van-PEG3-N3 (koniugat I) lub Van-PEG4-N3 (koniugaty ll-IV) prowadzono w 1,5 ml mieszaniny woda/ferf-butanol (1:1 v/v) w obecności 8 pL 0,1 M roztworu CuSO4xH2O i 4 pL świeżo przygotowanego 0,5 M roztworu askorbinianu sodu (w proporcji molowej 2:1:2:5). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez około 24 godziny. Po zakończeniu reakcji tworzenia 1,2,3-triazolu, rozpuszczalnik odparowywano i produkty syntezy liofilizowano. Otrzymane w ten sposób surowe koniugaty oczyszczano za pomocą preparatywnej lub semi-preparatywnej RP-HPLC. Czystość związków sprawdzano za pomocą analitycznej RP-HPLC (z wykorzystaniem różnych metod gradientowych acetonitryl-woda), ich czystość oszacowano na poziomie powyżej 98%. Masy cząsteczkowe otrzymanych związków potwierdzono za pomocą spektrometrii mass, techniką ESI lub MALDI-TOF. Tabela 2 przedstawia porównanie mas cząsteczkowych obliczonych i wyznaczonych doświadczalnie otrzymanych koniugatów, jak również wydajności reakcji koniugacji.
PL 242410 Β1
Tabela 2. Porównanie mas cząsteczkowych otrzymanych koniugatów oraz wydajności reakcji koniugacji
| Nazwa związku | Masa cząsteczkowa | Wydajność** [%] | ||
| Obliczona | Wyznaczona doświadczalnie | |||
| I | Vaii-PEG3-TP10 | 3883,27 | 1294.36 [M+3II]3; 971,03 IMI41IJ4·, | 47 |
| 777,04 [M+5HJ5*, 647,97 [M+6H]6+ | ||||
| II | Van-PEG4-TP10 | 3956,32 | 1318,40 [M+3H]3+, 989,05 [M+4H]4+, 791,45 (M+5H]5+, 659,87 [M+6H]Ć+ | 85 |
| III | TP10-Ala(PEG4-Van) | 4001,40 | 3999,60* [M+H]+ | 76 |
| IV | [Lys7PEGj-Van)]TP10 | 3957,30 | 3956,80* [M+HJ+ | 58 |
| IVa | F7-[Ly s7 (PEGi-Van)] TP10 | 4316,60 | 4317,10* [M+H]+ | 24 |
* otrzymane techniką spektrometrii mas MALDI-TOF ** uwzględniono tylko frakcje o czystości HPLC powyżej 98%
Analiza i oczyszczanie produktów reakcji
Oczyszczanie zsyntezowanych związków przeprowadzono na kolumnie Reprosil 100 C18 (Dr. Maisch GmbH, 40 x 250 mm, rozmiar ziaren 10 pm, przepływ fazy ruchomej 25 mL/min) lub kolumnie Reprosil 100 C18-XBD (Dr. Maisch GmbH, 20 x 250 mm, rozmiar ziaren 10 pm, przepływ fazy ruchomej 10 mL/min) z wykorzystaniem chromatografu SpotPrep (Armen) oraz różnych metod gradientowych. Faza ruchoma 10 składała się z 0,08% TFA w acetonitrylu (ACN) (roztwór A) i 0,1% TFA w wodzie (roztwór B). Kolumnę utrzymywano w temperaturze otoczenia. Eluowane roztwory monitorowano za pomocą detektora UV przy λ = 220 i λ = 254 nm. Eluaty frakcjonowano i analizowano za pomocą analitycznej RP-HPLC.
Analityczne rozdziały przeprowadzano na kolumnie Kinetex XB-C18 (Phenomenex, 4,6 x 150 mm, rozmiar ziaren 5 pm, przepływ fazy ruchomej 1 mL/min) z wykorzystaniem chromatografu Shimadzu Prominence oraz różnych metod gradientowych. Faza ruchoma, temperatura kolumny i parametry monitorowania eluatów były takie same jak w przypadku rozdziałów preparatywnych.
Przykład 2
Sprawdzenie aktywności przeciwbakteryjnei uzyskanych koniugatów
W celu sprawdzenia działania przeciwbakteryjnego uzyskanych koniugatów wykorzystano test MIC in vitro na trzech szczepach bakteryjnych MRSA (N315, 12673, 6347). MRSA N315 to szczep referencyjny, wrażliwy na Van; MRSA 12673 - szczep kliniczny średnio-wrażliwy na Van; MRSA 6347 to szczep kliniczny h-VISA - średnio-oporny na Van. Wszystkie wyniki porównywano do samej Van.
PL 242410 Β1
Tabela 3
| Szczep | MIC w μΜ and (gg/ml) | |||||
| Van-HCl | TP10-amirfe | Van-PEGj- TPlO-amrrf | Yan-PEGł- TPlO-amii/ | TP10- Ala(PEGt- Nnń)-amid | [Lys7(PEG4- Van)]TP10amid | |
| I | II | III | IV | |||
| S. mireus MRSA N315 1 | 2,00+0.52 (2.97+0.66) | 6.25+1.28 (13.64+2.78) | 1.56+0.81 (6,06+2.47) | 1.60+0.83 (6.33+2.58) | 12.50*±3.23 (50.01+12.91) | 6.25*±1.61 (24.72+6.38) |
| S awens MRSA 12673 2 | 4.07+1.05 (6.05+1.56) | 6.25+1.61 (13.64+3.52) | 1.56*±0.85 (6.06+3.13) | 1.60*±0.65 (6.33+2.58) | 0.78*±0.40 (3.12+1.61) | 0.78*±0.32 (3.09+1.26) |
| X aureus MRSA hctcro- VISA 6347 2 | 4.07+1.05 (6.05+1.56) | 12.50+3.23 (27.27+7.04) | 1.56*±0.32 (6.06+1.24) | 3.10+0.84 (12.26+3.56) | 1.60*±0.42 (6.40+1.65) | 3.10+0.79 (12.26+3.08) |
1 szczep referencyjny 2 szczep kliniczny * istotność statystyczna (p 0.05) w porównaniu do Van
W przypadku szczepów klinicznych uzyskano statystycznie istotną poprawę działania przeciwbakteryjnego dla wszystkich badanych koniugatów w porównaniu do tradycyjnej Van.
Przykład 3
Ocena skuteczności wewnątrzkomórkowego działania przeciwbakteryjnego badanych koniugatów
W związku z tym, że S.aureus to patogen wewnątrzkomórkowy, sprawdzono czy badane koniugaty mają możliwość penetracji do komórek eukariotycznych. W tym celu wykorzystano ludzką linię komórkową HEK293, którą zakażono szczepem MRSA 12673 a następnie sprawdzano wewnątrzkomórkową skuteczność przeciwbakteryjną jednego z badanych koniugatów Fig. 2.
W tym badaniu otrzymano 70% poprawę inaktywacji bakterii wewnątrzkomórkowych MRSA 12673 w porównaniu do samej Van przy stężeniu 32xMIC. Na drugi szczep kliniczny MRSA h-VISA 6347 również uzyskano znaczą poprawę przeciwbakteryjną przy 8xMIC (Fig.3).
Przykład 4
Jakościowa ocena zdolności przechodzenia koniugatu FI-[Lys7(PEG4-Van1TP10 przez barierę krew-mózg (BBB)
W związku z tym, że zagrażające życiu infekcje MRSA są zlokalizowane w mózgu a sama Van słabo penetruje przez BBB, ważne było aby stworzone koniugaty penetrowały do tkanki mózgowej. W tym celu wybrano koniugat [Lys7(PEG4-Van)]TP10 i połączono go z barwnikiem fluorescencyjnym fluoresceiną (FI). Badany koniugat wstrzykiwano myszom do żyły ogonowej a po dwóch godzinach izolowano mózgi zwierząt w których badano obecność koniugatu za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej. Obecność koniugatu uwidoczniona była w postaci zielonego koloru w preparatach tkanki mózgowej Fig. 4.
Przykład 5
Ilościowa ocena zdolności przechodzenia koniugatu rLys7(PEG4-Van)ITP10 przez barierę krew-mózg (BBB)
PL 242410 Β1
Aby ilościowo oszacować ilość koniugatu w tkance mózgowej w porównaniu do samej Van zastosowano model mysi. Badany koniugat lub Van podano do żyły ogonowej a po 2 h mózgi zwierząt izolowano, homogenizowano a następnie analizowano za pomocą LC-MS. Wyniki przedstawiono w Tab. 4.
Tabela 4
| Związek (/v) | Stężenie w mózgu [nM] jako (Średnia±SD) | ||
| Van | TP10 | [Lys7(PEG4-Van)]TP10 | |
| NaCI | ND | ND | |
| Van | 11±2 | ND | |
| TP10 | ND | ||
| [Lys7(PEG4Van)]TPl0 | ND | 2611*±120 | |
| Van+TP10 | ND | ND |
ND - nie wykryto * istotność statystyczna (p<0.05) w porównaniu do Van
Przykład 6
Badanie toksyczności wybranych koniugatów
W celu sprawdzenia bezpieczeństwa stosowania badanych koniugatów wykonano test lizy erytrocytów. Do badania wybrano 2 koniugaty Van-PEG3-TP10 i Van-PEG4-TP10, które wg. danych literaturowych mogły okazać się najbardziej toksyczne ze względu na ortogonalne ułożenie podstawników. Oba koniugaty okazały się nietoksyczne w stosowanym przeciwbakteryjnym zakresie stężeń, jednak koniugat z linkerem PEG4 wykazuje większe bezpieczeństwo stosowania Fig. 5.
Wnioski
Z syntetyzowane koniugaty wykazały większą aktywność przeciwbakteryjną wobec klinicznych szczepów MRSA, zarówno tych zlokalizowanych zewnątrz- i wewnątrzkomórkowo. Dodatkowo koniugaty mają zdolność penetracji przez BBB (badano na wybranym koniugacie) osiągając 200-krotnie wyższe stężenia w mózgu niż sama Van. Ten fakt jest szczególnie istotny w przypadku infekcji MRSA zlokalizowanych w mózgu. Wartym podkreślenia jest fakt, że badane koniugaty w niskich stężeniach (terapeutycznych) mają toksyczność podobną do tej wykazywanej przez Van.
Claims (7)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób otrzymywania koniugatów wankomycyny (Van) i transportami 10 (TP10) o wzorach ogólnych Van-PEG3-TP10 [koniugat I] lub Van-PEG4-TP10 [koniugat II] lub TP10-Ala(PEG4-Van) [koniugat IV] oraz [Lys7(PEG4-Van)]TP10 [koniugat IVa] znamienny tym, że w pierwszym etapie prowadzi się syntezę łańcucha TP10 i jego analogów oraz modyfikację struktury wakomycyny, a następnie prowadzi się kowalencyjną koniugację obu związków metodą cykloaddycji Huisgena.
- 2. Sposób według zastrz. 1 znamienny tym, że etap otrzymywania łańcucha TP10 i jego analogów obejmuje syntezę peptydów w fazie stałej z wykorzystaniem automatycznego syntetyzatora oraz żywicy TentaGel S RAM mającej osadzenie grup aminowych 0,25 mmol/g, przy czyma) Fmoc chronione aminokwasy przyłącza się jako aktywne pochodne z wykorzystaniem 3-krotnego molowego nadmiaru TBTU z dodatkiem HOBt i NMP w proporcji molowej 1:1:2 w DMF przez 2 x 30 min; następnie usuwa się grupy Fmoc z użyciem 20% roztworu piperydyny w DMF w 2 cyklach (2 x 3,5 min), gdzie dodatkowo w przypadku syntezy koniugatu I i II N-końcową grupę Fmoc usuwa się za pomocą 20% roztworu piperydyny w DMF (2 x 5 min), a następnie do N-końcowej grupy aminowej przyłącza się grupę propiolową (Prop) stosując 10-krotny molowy nadmiar bezwodnika kwasu propiolowego w DMF przez 1,5 godziny; mieszaninę przechowuje się w temperaturze 0°C przez 10 min; osad odsącza się, a po odparowaniu DCM otrzymany bezwodnik rozpuszcza się w 5 mL DMF i dodaje się do naczynka reakcyjnego z peptydylo-żywicą, lub w przypadku syntezy koniugatu III do żywicy przyłącza się pochodną Fmoc-L-propargiloglicyny (Fmoc-Prg-OH), a następnie kolejne reszty aminokwasowe w sekwencji TP10 w przypadku syntezy koniugatu IV i IVa do osłony grupy ε-aminowej reszty Lys7 stosuje się labilną w środowisku hydrazyny grupę iv Dde, którą usuwa się za pomocą 10% roztworu monohydratu hydrazyny w DMF (3 x 20 min), a następnie przyłącza się grupę alkinową do grupy ε-aminowej reszty Lys7 stosując 10-krotny molowy nadmiar bezwodnika kwasu propiolowego; lub w przypadku syntezy koniugatu IV N-końcową resztę Ala przyłącza się jako Boc-chroniony aminokwas, lub w przypadku koniugatu IVa do N-końcowej grupy aminowej przyłącza się 6-karboksyfluoresceinę (FI) stosując 3-krotny molowy nadmiar estru N-hydroksysukcynimidowego 6-karboksyfluoresceiny (Fl-NHS) z dodatkiem DIPEA w proporcji molowej 1:1 w DMF przez 1,5 godzinyb) odszczepianie peptydów od żywicy prowadzi się z jednoczesnym usunięciem osłon grup funkcyjnych w łańcuchach bocznych za pomocą mieszaniny kwas trifluorooctowy (TFA), fenol, triizopropylosilan i woda (w proporcji molowej 88:5:2:5) przez 2 godziny, następnie c) peptydy wytrąca się z mieszaniny reakcyjnej za pomocą zimnego eteru dietylowego; następnie osad odsącza się, rozpuszcza w wodzie i liofilizuje się; surowe peptydy analizuje się i oczyszcza za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej w układzie faz odwróconych; tożsamość otrzymanych produktów potwierdzano się za pomocą spektrometrii mas.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że modyfikację struktury wankomycyny w celu otrzymania jej pochodnych modyfikowanych grupą azydkową prowadzi się w roztworze, gdzie:a) dla pochodnej Van-PEG4-N3, ester N-hydroksysukcynimidowy kwasu 15-azydo-4,7,10,13-tetraoksypentadekanowego (N3-PEG4-NHS) przyłącza się do chlorowodorku wankomycyny poprzez pierwszorzędową grupę aminową we fragmencie cukrowym przeprowadzając reakcję w roztworze wodnym zawierającym DIPEA, przy proporcjach molowych reagentów 1:1.5:2.5, przy czym roztwór mieszano w temperaturze 4°C przez 30 min;b) dla pochodnej Van-PEG3-N3, 1-amino-11-azydo-3,6,9-trioksyundekan (N3-PEG3-NH2) przyłącza się do chlorowodorku wankomycyny poprzez grupę karboksylową we fragmencie aglikonowym przeprowadzając reakcję w roztworze DMF z wykorzystaniem HATU (heksafluorofosforan 2-( 1H-9-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetrametylouroniowy) z dodatkiem DIPEA, przy proporcjach molowych reagentów 1:0,8:1:2, przy czym roztwór miesza się w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, po upływie tego czasu, produkty reakcji natychmiast rozdziela się za pomocą preparatywnej RP-HPLC; eluaty frakcjonuje się i analizuje za pomocą analitycznej RP-HPLC;c) następnie frakcje Van-PEG4-N3 lub Van-PEG3-N3 o czystości powyżej 98% łączy się i liofilizuje się, a tożsamość otrzymanych produktów potwierdza się za pomocą spektrometrii mas.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że kowalencyjną koniugację obu związków metodą cykloaddycji Huisgena do uzyskania koniugatów prowadzi się poprzez reakcje 0,8 μM zmodyfikowanych grupą alkinową analogów TP10 otrzymanych sposobem według zastrz. 2 z 0,4 μM zmodyfikowanych grupą azydkową pochodną Van-PEG3-N3 lub Van-PEG4-N3 w obecności 1,5 ml mieszaniny woda/tert-butanol w stosunku objętościowym 1:1 i 8 μL 0,1 M roztworu CuSO4xH2O oraz 4 μL świeżo przygotowanego 0,5 M roztworu askorbinianu sodu w proporcji molowej 2:1:2:5, przy czym mieszaninę reakcyjną miesza się w temperaturze pokojowej przez około 24 godziny do utworzenia 1,2,3-triazolu, następnie rozpuszczalnik odparowuje się i produkty syntezy liofilizuje się; po czy, otrzymane surowe koniugaty oczyszcza się za pomocą preparatywnej lub semi-preparatywnej RP-HPLC; uzyskując koniugaty o czystości powyżej 98%.
- 5. Koniugaty otrzymane sposobem według któregokolwiek z zastrzeżeń 1-4 do zastosowania jako lek przeciwbakteryjny wobec Staphylococcus aureus lub Enterococcus spp lub Neisseria spp.PL 242410 Β1
- 6. Koniugaty otrzymane sposobem według któregokolwiek z zastrzeżeń 1-4 do zastosowania jako lek przeciwbakteryjny wobec szczepu MRSA N315 i MRSA hetero-VISA 6347.
- 7. Koniugaty do zastosowania według zastrz. 6 do leczenia infekcji MRSA zlokalizowanych w mózgu.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL428782A PL242410B1 (pl) | 2019-01-31 | 2019-01-31 | Sposób otrzymywania koniugatów wankomycyny i TP10, koniugaty otrzymane tym sposobem oraz ich zastosowanie w leczeniu przeciwbakteryjnym |
| PCT/PL2020/000010 WO2020159389A1 (en) | 2019-01-31 | 2020-01-29 | Compounds of vancomycin and tp10, methods of their preparation, composition and use in antibacterial treatment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL428782A PL242410B1 (pl) | 2019-01-31 | 2019-01-31 | Sposób otrzymywania koniugatów wankomycyny i TP10, koniugaty otrzymane tym sposobem oraz ich zastosowanie w leczeniu przeciwbakteryjnym |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL428782A1 PL428782A1 (pl) | 2020-08-10 |
| PL242410B1 true PL242410B1 (pl) | 2023-02-20 |
Family
ID=70050180
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL428782A PL242410B1 (pl) | 2019-01-31 | 2019-01-31 | Sposób otrzymywania koniugatów wankomycyny i TP10, koniugaty otrzymane tym sposobem oraz ich zastosowanie w leczeniu przeciwbakteryjnym |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL242410B1 (pl) |
| WO (1) | WO2020159389A1 (pl) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023225904A1 (zh) * | 2022-05-25 | 2023-11-30 | 深圳先进技术研究院 | 一种用于检测颅内葡萄球菌感染的试剂底物以及试剂盒的应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012129493A1 (en) * | 2011-03-24 | 2012-09-27 | Seachaid Pharmaceuticals, Inc. | Vancomycin derivatives |
| WO2015022335A1 (en) * | 2013-08-12 | 2015-02-19 | Katholieke Universiteit Leuven | Vancomycin analogs |
| EP3158992A1 (en) * | 2015-10-21 | 2017-04-26 | Universität Heidelberg | Liposomes containing cell penetrating peptides and tetraetherlipids for the oral delivery of macromolecules |
| JP7084320B2 (ja) * | 2016-06-15 | 2022-06-14 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | 生体直交型反応を用いた生体材料の代謝標識及び分子増強 |
-
2019
- 2019-01-31 PL PL428782A patent/PL242410B1/pl unknown
-
2020
- 2020-01-29 WO PCT/PL2020/000010 patent/WO2020159389A1/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2020159389A1 (en) | 2020-08-06 |
| PL428782A1 (pl) | 2020-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2926195T3 (es) | Ligandos peptídicos bicíclicos específicos de CD137 | |
| Contreras et al. | Cellular uptake of cyclotide MCoTI-I follows multiple endocytic pathways | |
| Ruczyński et al. | Transportan 10 improves the pharmacokinetics and pharmacodynamics of vancomycin | |
| CA2333145C (en) | Drug delivery system comprising a homeobox peptide and a non-peptide, non-nucleotide drug | |
| US11884708B2 (en) | Stapled peptide inhibitors of nemo as potential anti-inflammatory and anti-cancer drugs | |
| US11046730B2 (en) | Antimicrobial compositions | |
| EP3185880A1 (en) | Improved peptidyl calcineurin inhibitors | |
| KR101171381B1 (ko) | 암세포에 특이적인 활성을 갖는 신규 펩타이드 항암제 | |
| Ptaszyńska et al. | Peptide conjugates of lactoferricin analogues and antimicrobials—Design, chemical synthesis, and evaluation of antimicrobial activity and mammalian cytotoxicity | |
| AU2014228777B2 (en) | BH4 stabilized peptides and uses thereof | |
| WO2017152756A1 (zh) | cRGD-厄洛替尼缀合物及其制备方法 | |
| WO2013073998A2 (ru) | Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью | |
| ES2527432T3 (es) | Agentes antimicrobianos a base de derivados de hemina | |
| Tripodi et al. | Development of novel cyclic NGR peptide–daunomycin conjugates with dual targeting property | |
| PL242410B1 (pl) | Sposób otrzymywania koniugatów wankomycyny i TP10, koniugaty otrzymane tym sposobem oraz ich zastosowanie w leczeniu przeciwbakteryjnym | |
| EP4410816A1 (en) | Peptide | |
| Kubi et al. | Cell-penetrating and mitochondrion-targeting molecules | |
| CN111247162B (zh) | 多黏菌素类似物及其制备方法 | |
| Lee et al. | Stimulus-responsive conformational transformation of peptide with cell penetrating motif for triggered cytotoxicity | |
| Dai et al. | Synthesis and evaluation of redox-sensitive gonadotropin-releasing hormone receptor-targeting peptide conjugates | |
| Lohan et al. | Development of novel membrane active lipidated peptidomimetics active against drug resistant clinical isolates | |
| Feni | Improving cargo delivery in cancer therapy with the help of cell-penetrating peptides | |
| IL323549A (en) | Transmembrane transport system for peptides and its uses | |
| Xie et al. | Structure, biological activity and membrane partitioning of analogs of the isoprenylated a‐factor mating peptide of Saccharomyces cerevisiae | |
| Safaei et al. | The Effect of Synthesized Triazole and Ciprofloxacin Conjugated Peptide Compounds on Biological systems: Biological effects of Triazole and Ciprofloxacin Conjugated Peptide. |