PL244268B1 - Zastosowanie ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej - Google Patents
Zastosowanie ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej Download PDFInfo
- Publication number
- PL244268B1 PL244268B1 PL441851A PL44185122A PL244268B1 PL 244268 B1 PL244268 B1 PL 244268B1 PL 441851 A PL441851 A PL 441851A PL 44185122 A PL44185122 A PL 44185122A PL 244268 B1 PL244268 B1 PL 244268B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- extract
- inflammatory bowel
- husk
- coffee
- coffee silver
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 44
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 30
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 30
- 239000004332 silver Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 239000010903 husk Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 claims abstract description 9
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 claims abstract description 5
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 5
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 claims abstract description 4
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 7
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 11
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 11
- 229920003045 dextran sodium sulfate Polymers 0.000 description 11
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 10
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 8
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 7
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 5
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 4
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000000956 solid--liquid extraction Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 4
- CWVRJTMFETXNAD-GMZLATJGSA-N 5-Caffeoyl quinic acid Natural products O[C@H]1C[C@](O)(C[C@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-GMZLATJGSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 3
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 3
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 3
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 3
- YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RAGZUCNPTLULOL-KQJPBSFVSA-N 3-Feruloylquinic acid Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)O[C@H]2[C@H]([C@H](O)C[C@@](O)(C2)C(O)=O)O)=C1 RAGZUCNPTLULOL-KQJPBSFVSA-N 0.000 description 2
- BMRSEYFENKXDIS-QHAYPTCMSA-N 3-O-Coumaroylquinic acid Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)C[C@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 BMRSEYFENKXDIS-QHAYPTCMSA-N 0.000 description 2
- SDMADMBVKYOYQN-UHFFFAOYSA-N 4-O-caffeoyl-5-O-feruloylquinic acid Natural products COc1cc(C=CC(=O)OC2CC(O)(CC(O)C2OC(=O)C=Cc3ccc(O)c(O)c3)C(=O)O)ccc1O SDMADMBVKYOYQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RAGZUCNPTLULOL-MDRZDLKXSA-N 5-O-feruloylquinic acid Natural products O[C@@]1(C[C@H]([C@@H]([C@@H](C1)O)O)OC(C=CC1=CC(=C(C=C1)O)OC)=O)C(=O)O RAGZUCNPTLULOL-MDRZDLKXSA-N 0.000 description 2
- RAGZUCNPTLULOL-JSHWQEIDSA-N 5-O-feruoylquinic acid Natural products O[C@@]1(C[C@H]([C@@H]([C@@H](C1)OC(C=CC1=CC(=C(C=C1)O)OC)=O)O)O)C(=O)O RAGZUCNPTLULOL-JSHWQEIDSA-N 0.000 description 2
- BMRSEYFENKXDIS-UNIGVISCSA-N 5-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@H](O)C[C@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C=C1 BMRSEYFENKXDIS-UNIGVISCSA-N 0.000 description 2
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 235000017788 Cydonia oblonga Nutrition 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 241000533293 Sesbania emerus Species 0.000 description 2
- 229960002648 alanylglutamine Drugs 0.000 description 2
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 2
- 230000003217 anti-cancerogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000009048 phenolic acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- RAGZUCNPTLULOL-UHFFFAOYSA-N trans-3-feruloylquinic acid Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)OC2C(C(O)CC(O)(C2)C(O)=O)O)=C1 RAGZUCNPTLULOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFCLZKMFXSILNL-BBLPPJRLSA-N (-) 4,5-dicaffeoylquinic acid Natural products OC=1C=C(C=CC=1O)C=CC(=O)O[C@@H]1C[C@@](C[C@H]([C@H]1OC(C=CC1=CC(=C(C=C1)O)O)=O)O)(C(=O)O)O UFCLZKMFXSILNL-BBLPPJRLSA-N 0.000 description 1
- VTMFDSJJVNQXLT-XQCMRRNBSA-N (3r,5r)-1,3,5-trihydroxy-4-{[(2e)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-propenoyl]oxy}cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)OC2[C@@H](CC(O)(C[C@H]2O)C(O)=O)O)=C1 VTMFDSJJVNQXLT-XQCMRRNBSA-N 0.000 description 1
- KRZBCHWVBQOTNZ-RDJMKVHDSA-N (3r,5r)-3,5-bis[[(e)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-enoyl]oxy]-1,4-dihydroxycyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound O([C@@H]1CC(O)(C[C@H](C1O)OC(=O)\C=C\C=1C=C(O)C(O)=CC=1)C(O)=O)C(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 KRZBCHWVBQOTNZ-RDJMKVHDSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFCLZKMFXSILNL-BKUKFAEQSA-N 3,4-di-O-caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@](O)(C[C@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1OC(=O)C=Cc3ccc(O)c(O)c3)C(=O)O UFCLZKMFXSILNL-BKUKFAEQSA-N 0.000 description 1
- KRZBCHWVBQOTNZ-WXAIXHMISA-N 3,5-di-O-caffeoylquinic acid Natural products O[C@@H]1[C@H](C[C@](O)(C[C@@H]1OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)C(=O)O)OC(=O)C=Cc3ccc(O)c(O)c3 KRZBCHWVBQOTNZ-WXAIXHMISA-N 0.000 description 1
- QHRTZMDBPOUHPU-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3-methoxyphenyl)-2-methoxyaniline;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=C(N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C(N)=CC=2)=C1 QHRTZMDBPOUHPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VTMFDSJJVNQXLT-RYPCIWMOSA-N 4-O-feruloylquinic acid Natural products COc1cc(C=CC(=O)O[C@@H]2[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H]2O)C(=O)O)ccc1O VTMFDSJJVNQXLT-RYPCIWMOSA-N 0.000 description 1
- BMRSEYFENKXDIS-LMRQPLJMSA-N 5-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-LMRQPLJMSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 240000005662 Aronia melanocarpa Species 0.000 description 1
- 235000007425 Aronia melanocarpa Nutrition 0.000 description 1
- ZRIAFKJYZQHRNM-DBEVEAKGSA-N CC1[C@H](C([C@@](CC1(C(=O)O)O)(O)C(\C=C\C1=CC(O)=C(O)C=C1)=O)O)O Chemical compound CC1[C@H](C([C@@](CC1(C(=O)O)O)(O)C(\C=C\C1=CC(O)=C(O)C=C1)=O)O)O ZRIAFKJYZQHRNM-DBEVEAKGSA-N 0.000 description 1
- 102000018208 Cannabinoid Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050007331 Cannabinoid receptor Proteins 0.000 description 1
- 244000236931 Cydonia oblonga Species 0.000 description 1
- 244000019459 Cynara cardunculus Species 0.000 description 1
- 235000019106 Cynara scolymus Nutrition 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- UFCLZKMFXSILNL-UHFFFAOYSA-N NSC 649410 Natural products C=1C=C(O)C(O)=CC=1C=CC(=O)OC1C(O)CC(O)(C(O)=O)CC1OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 UFCLZKMFXSILNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 102000003840 Opioid Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000137 Opioid Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- QTENRWWVYAAPBI-YZTFXSNBSA-N Streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YZTFXSNBSA-N 0.000 description 1
- 238000003639 Student–Newman–Keuls (SNK) method Methods 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 235000010208 anthocyanin Nutrition 0.000 description 1
- 239000004410 anthocyanin Substances 0.000 description 1
- 229930002877 anthocyanin Natural products 0.000 description 1
- 150000004636 anthocyanins Chemical class 0.000 description 1
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001929 anti-hepatotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 235000016520 artichoke thistle Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000012055 fruits and vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000004886 head movement Effects 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 231100000905 neutral red uptake (NRU) test Toxicity 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000010908 plant waste Substances 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- -1 polyphenol compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010149 post-hoc-test Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- OBSYBRPAKCASQB-AGQYDFLVSA-N salvinorin A Chemical compound C=1([C@H]2OC(=O)[C@@H]3CC[C@]4(C)[C@@H]([C@]3(C2)C)C(=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@H]4C(=O)OC)C=COC=1 OBSYBRPAKCASQB-AGQYDFLVSA-N 0.000 description 1
- 230000018448 secretion by cell Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- VTMFDSJJVNQXLT-UHFFFAOYSA-N trans-4-feruloylquinic acid Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)OC2C(CC(O)(CC2O)C(O)=O)O)=C1 VTMFDSJJVNQXLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/74—Rubiaceae (Madder family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D11/00—Solvent extraction
- B01D11/02—Solvent extraction of solids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia jest ekstrakt z kawowej łuski srebrzystej, zawierający co najmniej 4,5% wag. związków polifenolowych w przeliczeniu na kwas chlorogenowy, do zastosowania w profilaktyce i leczeniu chorób zapalnych jelit.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest ekstrakt z kawowej łuski srebrzystej do zastosowania w profilaktyce i leczeniu chorób zapalnych jelit.
Związki bioaktywne, w tym związki polifenolowe charakteryzują się szerokim spektrum aktywności biologicznej, które występują powszechnie w różnych częściach roślin, tj. korzeniach, owocach i warzywach, łodygach, skórkach i innych oraz mogą być otrzymane z niekonwencjonalnego ich źródła pochodzenia tj. roślinnych odpadów przemysłu spożywczego.
Jednym z przykładów dotychczasowego wykorzystania izolowanych związków polifenolowych z wytłoków owocowych jest pozyskiwanie antocyjanów z aronii czarnoowocowej. Również pozyskiwanie kompleksu związków polifenolowych bogatych w kwasy fenolowe z liści karczocha jest powszechnie stosowane celem wykorzystania w produkcji farmakologicznych preparatów roślinnych z zastosowaniem w leczeniu skutków chorób m.in. wywołanych działaniem wolnych rodników.
W ostatnich latach silny nacisk kładziony jest na bezodpadową produkcję w przemyśle spożywczym, stąd istnieje szerokie zainteresowanie nad powtórnym wykorzystaniem pozostałości materiału roślinnego w pozyskiwaniu frakcji aktywnych, w tym związków biologicznie czynnych. Stąd też, stosując różne metody ekstrakcji, ukierunkowuje się ją na pozyskanie kompleksu bądź specyficznych, pojedynczych substancji bioaktywnych.
Pozyskanie ekstraktów z odpadowych surowców roślinnych prowadzone jest poprzez ekstrakcję frakcji biologicznie czynnej rozpuszczalnikami organicznymi i oddzielenie ich od substancji balastowych, tj. cukrów, kwasów organicznych, wosków, za pomocą chromatografii kolumnowej, zgodnie ze znanym stanem techniki w tym zakresie. Otrzymany ekstrakt w formie kompleksu związków biologicznie aktywnych stanowi materiał do dalszych działań związanych z rozdziałem, bądź może być stosowany jako kompleks wykorzystując synergistyczne działanie związków bioaktywnych.
Mieszaniny charakteryzujące się synergistycznym działaniem bioaktywnym wykazują aktywność biologiczną o szerokim spektrum swojej działalności i wyróżniają się korzystniejszym efektem aktywności biologicznej w zastosowaniu niż pojedyncze, wyizolowane związki. Tym samym należy zwrócić szczególną uwagę na produkt odpadowy powstający w procesie prażenia ziarna kawy, tj. kawową łuskę srebrzystą, która bogata jest w kompleks kwasów fenolowych, zwłaszcza charakteryzuje się wysoką zawartością pochodnych kwasu chlorogenowego, gdzie związki te stanowią dominującą frakcję w ogólnej puli związków polifenolowych.
W publikacji Rita Głowacka i in.: “Kawowa łuska srebrzysta - nowa, naturalna alternatywa pozyskiwania wybranych związków bioaktywnych”, Zeszyty Problemowe Postępów Nauk Rolniczych nr 592, 2018, 15--25, DOI 10.22630/ZPPNR.2018.592.2 ujawniono różne metody ekstrakcji związków bioaktywnych z kawowej łuski srebrzystej. Wskazano, że najczęściej wykorzystywana jest ekstrakcja w układzie ciało stałe-ciecz tzw. SLE (ang. Solid Liquid Extraction). Rozdrobniony materiał roślinny mieszany jest z ciekłym ekstrahentem, który wnika w głąb rozdrobnionego surowca roślinnego. Powoduje to pęcznienie i uwodnienie suchych części surowca oraz rozpuszczanie i dyfuzję związków bioaktywnych. W technice SLE wykorzystywać można różne rozpuszczalniki organiczne polarne, niepolarne oraz ich wodne mieszaniny. Do ekstrakcji związków polifenolowych najczęściej stosowanymi rozpuszczalnikami są wodne roztwory metanolu, etanolu oraz acetonu. Technika SLE odznacza się dość wysoką wydajnością ekstrakcji związków bioaktywnych i jest łatwa do przeprowadzenia. Ujawniono, że spożywanie produktów zawierających kwasy chlorogenowe, a w szczególności żywności bogatej w kwas kawoilochinowy (3-CQA), który jest głównym przedstawicielem kwasów chlorogenowych w łusce srebrzystej, wykazuje wiele pozytywnych efektów na zdrowie człowieka. Związkom tym przypisuje się aktywność hipoglikemiczną, hepatoochronną, przeciwzapalną, przeciwbakteryjną, przeciwwirusową i antykancerogenną. Wskazano również, że kwas protokatechowy i kwas galusowy, podobnie jak pozostałe związki fenolowe, wykazują liczne pozytywne właściwości, do których zaliczyć można właściwości przeciwdrobnoustrojowe, przeciwgrzybiczne, antyhepatotoksyczne, przeciwzapalne, cytotoksyczne oraz ochronne dla układu nerwowego. Kwas galusowy charakteryzuje się właściwościami neoplastycznymi, bakteriostatycznymi, przeciwutleniającymi i anty kancerogennymi.
W publikacji Amaia Iriondo-DeHond et ah: “Coffee silverskin: A low-cost substrate for bioproduction of high-value health promoting products”, Annals of Nutrition & Food Science, 29 Sep, 2017, Volume 1, Issue 1, Article 1005 ujawniono, że ekstrakty pozyskiwane z kawowej łuski srebrzystej mogą byś stosowane do wytwarzania żywności funkcjonalnej, kosmetyków o właściwościach przeciwstarzeniowych oraz do zapobiegania i leczenia otyłości, dyslipidemii i cukrzycy.
Problemem technicznym rozwiązywanym przez wynalazek jest opracowanie nowego zastosowania dla ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej oraz zagospodarowanie produktu odpadowego powstającego w procesie prażenia ziarna kawy jakim jest kawowa łuska srebrzysta.
Przedmiotem wynalazku jest ekstrakt z kawowej łuski srebrzystej, zawierający co najmniej 4,5% wag. związków polifenolowych w przeliczeniu na kwas chlorogenowy, do zastosowania w profilaktyce i leczeniu chorób zapalnych jelit.
Korzystnie choroby zapalne jelit obejmują nieswoiste choroby zapalne jelit.
Korzystnie nieswoiste choroby zapalne jelit obejmują chorobę Leśniowskiego-Crohna oraz wrzodziejące zapalenie jelita grubego.
Korzystnie ekstrakt jest stosowany doustnie dwa razy dziennie w dawce co najmniej 1 mg/kg masy ciała pacjenta.
Korzystnie pacjentami są osoby ze zdiagnozowaną nieswoistą chorobą zapalną jelit lub osoby z historią nieswoistej choroby zapalnej jelit w rodzinie.
Zaletą wynalazku, jest łatwy sposób pozyskiwania kompleksu związków polifenolowych z odpadowego surowca roślinnego o wysokiej wydajności substancji biologicznie czynnej.
Krótki opis figur
Fig. 1 przedstawia wyniki testu NRU dla komórek RAW264.7 - wpływ ekstraktu kawowej łuski srebrzystej w stężeniu 50 μg/ml i 100 μg/ml na żywotność komórek (% kontroli). Dane na wykresie zostały zaprezentowane jako średnia z czterech powtórzeń ± SEM.
Fig. 2 przedstawia wyniki testu Griessa dla komórek RAW264.7 - wpływ 0,5 μg/ml LPS, 0,5 μg/ml LPS + 50 μg/ml ekstraktu kawowej łuski srebrzystej oraz 0,5 μg/ml LPS + 100 μg/ml ekstraktu kawowej łuski srebrzystej na stężenie azotynów. Dane na wykresie zostały zaprezentowane jako średnia z czterech powtórzeń ± SEM. ***p<0,001 vs. kontrola, $$p<0,01 vs. 0,5 μg/ml LPS.
Fig. 3 przedstawia ocenę makroskopową jelita grubego - wpływ 4% w/v DSS oraz 4% w/v DSS + kawowa łuska srebrzysta podawana w dawce 1 mg na kg masy ciała 2 razy dziennie. Dane na wykresie zostały zaprezentowane jako średnia ± SEM. (n w grupie = 6-10) ***p<0,001 vs. kontrola, #p<0,05 vs. DSS.
Fig. 4 przedstawia ocenę stanu zapalnego na podstawie poziomu aktywności mieloperoksydazy - wpływ 4% w/v DSS oraz 4% w/v DSS + kawowa łuska srebrzysta podawana w dawce 1 mg na kg masy ciała 2 razy dziennie. Dane na wykresie zostały zaprezentowane jako średnia ± SEM. (n w grupie = 6-10).
Wynalazek został dokładniej wyjaśniony na przykładach, które jednak nie ograniczają jego zakresu.
Przykłady wykonania
Przykład 1
Sposób otrzymywania ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej
Kawową łuskę srebrzystą zmielono w młynku laboratoryjnym na proszek o średnicy około 2-4 mm. Uzyskany proszek poddano ekstrakcji gdzie na 100 g kawowej łuski srebrzystej użyto 200 ml 50% roztwór etanolu, po czym całość poddano działaniu ultradźwięków o częstotliwości 50 kHz przez 30 minut co 5 minut dodatkowo mieszając, po czym odwirowano (5000x g; Sigma 6K15, Shrewsbury, UK). Ekstrakcję powtórzono 3 krotnie a uzyskany supernatant po połączeniu poddano odparowaniu alkoholu etylowego przy użyciu wyparki obrotowej. Następnie otrzymany ekstrakt poddano frakcjonowaniu na kolumnie stosując wypełnienie żywicą polimerową AmberliteTM XAD-16. W pierwszej kolejności usunięto związki niskocząsteczkowe tj. kwasy organiczne i cukry przemywając złoże z zaabsorbowanym ekstraktem wodą po czym właściwy proces elucji prowadzono 80% etanolem. Zebrane frakcje poddano procesowi usunięcia rozpuszczalnika poprzez odparowanie pod wyparką obrotową (Hei-VAP Expert, Heidolph; Schwabach, Niemcy) w 40°C, otrzymując w ten sposób ekstrakt polifenolowy, który finalnie poddano procesowi liofilizacji przez 24 godziny stosując ciśnienie 0,220 mbar (Christ Alpha 2-4, Braun Biotech Int.; Melsungen, Germany).
Analizę ilościową i jakościową uzyskanego ekstraktu przeprowadzono za pomocą chromatografii cieczowej wyposażonej w detektor PDA oraz QTof/MS/MS zgodnie z metodą opisaną przez Wojdyło i in. [1]. Rozdziału związków dokonano za pomocą kolumny z wypełnieniem C18 (2.1 x 100 mm, 1.7 μm; Waters Corp.), a uzyskaną zawartość związków polifenolowych wyrażono w mg/g sm w przeliczeniu na związek dominujący w danym preparacie. Stwierdzono, że uzyskany ekstrakt z kawowej łuski
PL 244268 Β1 srebrzystej zawiera około 45 mg substancji czynnej w formie związków polifenolowych/g ekstraktu w przeliczeniu na kwas chlorogenowy, gdzie dominującą frakcją związków biologicznie aktywnych są pochodne kwasu chlorogenowego (tabela 1).
Tabela 1. Charakterystyka składu ekstraktu polifenolowego z kawowej łuski srebrzystej '(przypuszczalnie występuj ący
| Rt | MS [M-H] (m/z) | MS/MS [M-H] (m/z) | Nazwa związku | Zawartość polifenoli |
| 3.11 | 353 | 191/179/173 | kwas 3-O-kawoilochinowy | 15.44+2.34 |
| 3.43 | 337 | 191/173/163 | kwas 3-O-p-kumaroilochinowy | 5.11+0.76 |
| 4.08 | 353 | 173/179 | kwas 4-0-kawoilochinowy | 0.45+0.10 |
| 4.37 | 353 | 191/173 | kwas 5-0-kawoilochinowy | 11.57+1.23 |
| 5.06 | 367 | 191/173 | kwas 3-O-feruloilochinowy | 0.43+0.06 |
| 5.45 | 337 | 193/173 | kwas 5-O-p-kumaroilochinowy | 0.47+0.08 |
| 5.62 | 367 | 191/173 | kwas 4-O-feruloilochinowy | 2.45+0.78 |
| 5.66 | 367 | 191/173 | kwas 5-O-feruloilochinowy | 1.72+0.21 |
| 5.73 | 335 | 179/161/135 | lakton 3-O-kawoilochinowyf | 1.21+0.06 |
| 6.06 | 335 | 179/161/135 | lakton 4-O-kawoilochinowy f | 0.44+0.22 |
| 6.38 | 515 | 353 | kwas 3,4-O-dikawoilochinowy | 2.36+0.15 |
| 7.33 | 367 | 179 | kwas metylo-5-kawoilochinowy * | 0.91+0.11 |
| 7.45 | 515 | 353/179/173 | kwas 3,5-O-dikawoilochinowy | 0.94+0.05 |
| 8.16 | 515 | 353/179 | kwas 4,5-O-dikawoilochinowy | 1.59+0.14 |
| 8.73 | 529 | 367/335/193/179 | kwas 3-O-feruloilo-4-O-kawoilochinowy | 0.15+0.02 |
| 9.37 | 529 | 367/353/335/173 | kwas 4-O-kawoilo-5-O-feruloilochinowy | 0.11+0.01 |
| 9.76 | 497 | 335/161 | lakton dikawoilochinowy t | 0.08+0.01 |
| W sumie (mg/g suchej masy) | 45.43 |
Ocena działania przeciwzapalnego ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej
Ocena działania przeciwzapalnego została przeprowadzona dwuetapowo - w modelu in vitro oraz in vivo.
In vitro, badanie przeprowadzono przy udziale mysich komórek makrofagowych linii RAW264.7. Komórki zostały poddane stymulacji lipopolisacharydem (LPS), a następnie przy wykorzystaniu testu Griessa oceniono produkcję tlenku azotu (NO). Zbadano wpływ ekstraktu na wytwarzanie NO.
W następnym etapie przeprowadzono badanie in vivo w chemicznym modelu zapalenia jelita grubego wykorzystującym dekstranowy siarczan sodu (DSS), którego właściwości prowadzą do uszkodzenia komórek nabłonka jelit. Model został wybrany ze względu na dane literaturowe oraz doświadczenie twórców. Model zapalenia jelita grubego przy użyciu DSS doskonale nadaje się do badań laboratoryjnych odzwierciedlających przebieg nieswoistych chorób zapalnych jelit (NChZJ) u ludzi, m.in. ze względu na szybkość powstawania stanu zapalnego, prostotę wywołania stanu zapalnego w badanej grupie zwierząt, odtwarzalność i kontrolę przebiegu wywołanej NChZJ u gryzoni.
Wybrano model krótki, 7-dniowy, przypominający ostry stan zapalny. Zwierzęta dostawały roztwór DSS (4% w/v) w wodzie pitnej przez pierwsze 5 dni, a następnie wodę pitną.
Samce myszy domowej (Mus musculus) szczepu C57BL/6 w wieku 6-8 tygodni (masa ciała 20-25 g) pozyskano ze Zwierzętarni Instytutu Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN w Warszawie. Wszystkie procedury w doświadczeniu zostały zatwierdzone przez Lokalną Komisję Etyczną do Spraw Doświadczeń na Zwierzętach w Łodzi (34/ŁB96/2018) w dniu 14 maja 2018 roku.
W ostatnim dniu badania została przeprowadzona ocena makroskopowa (uwzględniając masę oraz długość jelita, konsystencję stolca, uszkodzenie nabłonka okrężnicy oraz obecność krwi w kale). Pobrano fragmenty jelita do oceny mikroskopowej (analiza histopatologiczna) oraz oznaczenia aktywności enzymu mieloperoksydazy (MPO).
Szczegółowy opis metod użytych w badaniach:
Ocena makroskopowa wraz z parametrem oceny morfologicznej stolca - „stool score”
Parametry choroby oceniano w dniu 7. po dodaniu DSS do wody pitnej. Po eutanazji cała okrężnica została wyizolowana i zważona, z zawartością kału. Następnie okrężnicę otworzono wzdłuż jej długości i oczyszczono z zawartości kału. Całkowity wynik makroskopowy dla każdego zwierzęcia obliczono na podstawie:
(i) konsystencji stolca (gdzie 0 oznacza normalne dobrze ukształtowane pel ety kałowe, a 3 oznacza biegunkę), (ii) uszkodzenia nabłonka okrężnicy rozpatrywanego jako liczba wrzodów (0-3), (iii) wyników długości i masy okrężnicy (wyrażone jako odsetek utraty każdego parametru w stosunku do grupy kontrolnej (0 punktów, utrata masy < 5%; 1 punkt, utrata masy 5-14%; 2 punkty, utrata masy 15-24%; 3 punkty, 25-35% utrata masy/długości i 4 punkty, > 35% utrata masy/długości)).
Całkowity wynik = 0 oznacza brak stanu zapalnego.
Rejestrowano również obecność (wynik = 1) lub brak (wynik = 0) krwi w kale.
Oznaczenie aktywności mieloperoksydazy w tkankach jako markera stanu zapalnego
Aktywność mieloperoksydazy (MPO) została określona ilościowo za pomocą metody opisanej wcześniej przez Sałaga i in. [2], 0,3 cm segmenty okrężnicy zważono i szybko homogenizowano w buforze bromku heksadecylo-trimetyloamoniowego (HTAB) (0,5% HTAB w 50 mM buforze fosforanu potasu, pH 6,0; 50 mg tkanki/mL). Następnie homogenat wirowano przez 15 minut (13 200 g, 4°C) i w kolejnych etapach zastosowano supernatant. Na 96-dołkowej płytce do 7 μL supernatantu dodano 200 μL 50 mM bufom fosforanu potasu (pH 6,0), zawierającego 0,167 mg/mL chlorowodorku O-dianizydyny i 0,05 μL 1% nadtlenku wodoru. Absorbancję mierzono (w trzech powtórzeniach) przy 450 nm (iMARK Microplate Reader, Biorad, Wielka Brytania) w 0 s, 30 s i 60 s od rozpoczęciu reakcji. M PO wyrażono w miligramach na gram mokrej tkanki, 1 jednostka to ilość enzymu zdolna do przekształcenia 1 μmola nadtlenku wodoru w wodę przez 1 minutę w temperaturze pokojowej. Jednostki aktywności MPO na 1 minutę obliczono ze standardowej krzywej przygotowanej przy użyciu oczyszczonego enzymu peroksydazy.
Statystyczna analiza danych w przeprowadzonych badaniach
Dane na wykresach dotyczących przykładów badań przedstawiono jako średnie ± błąd standardowy średniej. Analiza została przeprowadzona w programie Prism 8.0 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA) z użyciem testu jednoczynnikowej analizy wariancji (one-way ANOVA) oraz testu post hoc Newmana-Keulsa. Wartości p < 0,05 były uznane za istotne statystycznie.
Przykład 2
Badanie oceniające działanie przeciwzapalne ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej, wykorzystujące mysie komórki makrofagowe linii RAW264.7 stymulowane LPS.
Schemat badania
Komórki linii RAW264.7 hodowano w pożywce Dulbecco's Modified Eagle Medium suplementowanej 10% surowicą (bovine calf serum), 2 mM alanylo-glutaminą (Ala-Gln), 0,5% roztworem penicyliny/streptomycyny, 1 mM pirogronianem sodu oraz 25 mM buforem HEPES. Komórki hodowano w temperaturze 37°C przy stężeniu 5% CO2. Pożywkę wymieniano co drugi lub trzeci dzień, a komórki poddawano pasażom po osiągnięciu ok. 80% konfluencji.
Cytotoksyczność ekstraktu została oceniona z pomocą testu Neutral Red Uptake (NRU). Preparat został przebadany w stężeniach 50 μg/ml oraz 100 μg/ml, wybranych na podstawie badań wstępnych.
Oznaczenie jest oparte na barwieniu żywych komórek czerwienią neutralną, co odzwierciedla aktywność lizosomalną komórek. Komórki zostały wysiane na płytkach 96-dołkowych w gęstości 20 000 komórek na dołek. Przez 48 godzin komórki były wystawione na działanie badanego ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej w stężeniach 50 μg/ml oraz 100 μg/ml w objętości 200 μl na dołek. Następnie pożywka została usunięta i dodano 100 μl roztworu czerwieni neutralnej w pożywce hodowlanej o stężeniu 0,05 mg/ml na dołek. Po godzinnej inkubacji komórki zostały jednokrotnie przemyte roztworem soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS, pH 7,4), a następnie dodano 100 μl rozpuszczalnika na dołek (zawierającego 40% etanolu i 10% kwasu octowego w roztworze wodnym). Płytki wytrząsano przez 10 minut, a następnie zmierzono absorbancję przy długości fali 540 nm za pomocą czytnika mikropłytek (iMARK Microplate Reader, Biorad). Cytotoksyczność wyrażono jako procent kontroli negatywnej (zawierającej pożywkę bez badanych preparatów).
Test Griessa został wykorzystany, aby oznaczyć stężenie azotynów w supernatantach z hodowli komórkowej. Komórki zostały wysiane na płytkach 96-dołkowych w gęstości 20 000 komórek na dołek. Przez 24 godziny komórki były hodowane w medium (kontrola), lub wystawione na działanie 0,5 μg/ml LPS samodzielnie lub w połączeniu z badanym ekstraktem z kawowej łuski srebrzystej w stężeniach 50 μg/ml oraz 100 μg/ml w objętości 200 μl na dołek. Następnie medium zostało usunięte i dodano pożywki zawierające badane preparaty, lecz bez dodatku LPS. Po kolejnych 24 godzinach zmieszano równe objętości supernatantów z hodowli oraz wodnego roztworu odczynnika Griessa w stężeniu 40 mg/ml. Mieszaninę inkubowano przez 15 minut w ciemności, a następnie zmierzono absorbancję przy długości fali 540 nm za pomocą czytnika mikropłytek (iMARK Microplate Reader, Biorad).
Wyniki
Test NRU został wykorzystany do określenia stężeń w których badany ekstrakt nie zmniejszał żywotności komórek RAW264.7. Ekstrakt stosowany w stężeniach 50 μg/ml oraz 100 μg/ml nie spowodował zmniejszenia żywotności komórek (Fig. 1).
Test Griessa wykazał zmniejszone wydzielanie tlenku azotu przez komórki traktowane badanym ekstraktem, co zaobserwowano przez zmniejszone stężenie azotynów w supernatantach z hodowli komórkowej. Ekstrakt z kawowej łuski srebrzystej w stężeniu 50 μg/ml obniżył stężenie azotynów do 77,00 ± 6,74%, a w stężeniu 100 μg/ml do 54,07 ± 9,01% ‘(p < 0,01, Fig. 2).
Wnioski
Ekstrakt z kawowej łuski srebrzystej wykazuje działanie przeciwzapalne w modelu in vitro z wykorzystaniem komórek RAW264.7 stymulowanych LPS.
Przykład 3
Badanie oceniające działanie lecznicze ekstraktu, wykorzystujące mysi ostry chemiczny model zapalenia jelita grubego przypominający obrazem klinicznym aktywną postać choroby wrzodziejącego zapalenia jelita grubego u ludzi.
Badana populacja
Samce myszy C57BL/6 w wieku 6-8 tygodni (masa ciała 20-25 g).
Na przeprowadzenie badania została wydana zgoda przez Lokalną Komisję Etyczną do Spraw Doświadczeń na Zwierzętach w Łodzi (34/ŁB96/2018 z dn. 14.05.2018 roku).
Schemat badania
Droga podania: doustnie (per os, p.o.), dwa razy dziennie, dawka 1 mg/kg masy ciała.
Podawanie ekstraktu nastąpiło po 3 dniach od rozpoczęcia badania. Podanie ekstraktu odbywało się drogą dożołądkową i było wykonywane za pomocą metalowej sondy dożołądkowej, w objętości całkowitej 100 μL roztworu. Gryzonie były unieruchamiane w pozycji pionowej, przy jednoczesnym ograniczeniu ruchów głowy, poprzez zebranie fałdów skóry na karku. Sonda dożołądkową była powoli wprowadzana do przełyku tak, aby ograniczyć ryzyko jego uszkodzeń i wystąpienia krwawienia. Ekstrakt podawany był stopniowo, aby zapobiec nagłemu wzrostowi ciśnienia w żołądku i przeniesienia treści pokarmowej wzdłuż układu pokarmowego. Całkowity czas unieruchomienia był ograniczony do niezbędnego minimum (<1 minuta). Po podaniu myszy były przenoszone do klatek i obserwowane przez 1-2 minuty w celu potwierdzenia prawidłowości wykonanej procedury. W trakcie podawania nie zaobserwowano silnie wyrażonych odruchów obronnych, nie występowała wokalizacja, myszy nie wydawały „nietypowych” dźwięków świadczących o dystresie, czyli nie było oznak niewłaściwego traktowania zwierząt. Bezpośrednio po podaniu nie odnotowano żadnego deficytu psychomotorycznego.
W celu ewaluacji potencjalnego działania leczniczego dla metod: ocena makroskopowa jelita grubego wraz ze szczególnym uwzględnieniem morfologii stolca oraz oznaczenia aktywności MPO w tkance, zastosowano parametry określone odpowiednio jako: całościową ocenę makroskopową jelita grubego, w tym parametr „stool score” oraz liczba jednostek MPO w badanej tkance.
Wyniki
U zwierząt z wywołanym stanem zapalnym ocena makroskopowa statystycznie znacząco różniła się od oceny przeprowadzonej u zwierząt kontrolnych (13,13 ± 0,42 versus 0,67 ± 0,49, p < 0,001). Podanie ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej obniżyło ocenę makroskopową (11,00 ± 0,61, p < 0,05) (Fig. 3). Różnica ta była istotna statystycznie.
Poziom aktywności MPO osiągnął wyższą wartość u zwierząt z wywołanym stanem zapalnym niż u zwierząt kontrolnych (9,70 ± 3,54 vs. 3,65 ± 1,10). Podanie ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej obniżyło poziom aktywności MPO (3,45 ± 0,61) (Fig. 4).
Wnioski
Podanie ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej złagodziło stan zapalny w mysim modelu zapalenia jelita grubego wywołanego przez DSS.
Pozyskane ekstrakty mogą znaleźć zastosowanie w przemyśle farmaceutycznym w produkcji leków i suplementów diety oraz w przemyśle spożywczym w produkcji żywności funkcjonalnej o ukierunkowanych właściwościach prozdrowotnych.
Literatura:
[1] Wojdyło i in. Comparison of polyphenolic composition, antioxidant activity and PPO activity of some cultivars of quince (Cydonia oblonga Miller) fruits. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2013, 61,2762-2772.
[2] Sałaga i in.: “Novel orally available salvinorin a analog PR-38 protects against experimental colitis and reduces abdominal pain in mice by interaction with opioid and cannabinoid receptors”; Biochem. Pharmacol. 92, 618-626 (2014).
Claims (5)
1. Ekstrakt z kawowej łuski srebrzystej, zawierający co najmniej 4,5% wag. związków polifenolowych w przeliczeniu na kwas chlorogenowy, do zastosowania w profilaktyce i leczeniu chorób zapalnych jelit.
2. Ekstrakt do zastosowania według zastrz. 1, znamienny tym, że choroby zapalne jelit obejmują nieswoiste choroby zapalne jelit.
3. Ekstrakt do zastosowania według zastrz. 2, znamienny tym, że nieswoiste choroby zapalne jelit obejmują chorobę Leśniowskiego-Crohna oraz wrzodziejące zapalenie jelita grubego.
4. Ekstrakt do zastosowania według jednego z powyższych zastrzeżeń, znamienny tym, że jest stosowany doustnie dwa razy dziennie w dawce co najmniej 1 mg/kg masy ciała pacjenta.
5. Ekstrakt do zastosowania według zastrz. 4, znamienny tym, że pacjentami są osoby ze zdiagnozowaną nieswoistą chorobą zapalną jelit lub osoby z historią nieswoistej choroby zapalnej jelit w rodzinie.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL441851A PL244268B1 (pl) | 2022-07-27 | 2022-07-27 | Zastosowanie ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL441851A PL244268B1 (pl) | 2022-07-27 | 2022-07-27 | Zastosowanie ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL441851A1 PL441851A1 (pl) | 2023-07-10 |
| PL244268B1 true PL244268B1 (pl) | 2023-12-27 |
Family
ID=87074403
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL441851A PL244268B1 (pl) | 2022-07-27 | 2022-07-27 | Zastosowanie ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL244268B1 (pl) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190088424A (ko) * | 2018-01-18 | 2019-07-26 | 강릉원주대학교산학협력단 | 커피 실버스킨 추출물을 포함하는 근력강화 또는 근감소증의 예방 및 치료용 조성물 |
-
2022
- 2022-07-27 PL PL441851A patent/PL244268B1/pl unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190088424A (ko) * | 2018-01-18 | 2019-07-26 | 강릉원주대학교산학협력단 | 커피 실버스킨 추출물을 포함하는 근력강화 또는 근감소증의 예방 및 치료용 조성물 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Digital; María D. del Castillo et al. "Coffee Silverskin Extract for Aging and Chronic Diseases" , Functional Foods for Chronic Diseases – 2016 First Edition, p.386-402, https://digital.csic.es/bitstream/10261/212888/1/chronidisea.pdf * |
| RITA GŁOWACKA I INNI: "Zeszyty Problemowe Postępów Nauk Rolniczych nr 592, 2018, 15–25", „KAWOWA ŁUSKA SREBRZYSTA – NOWA, NATURALNA ALTERNATYWA POZYSKIWANIA WYBRANYCH ZWIĄZKÓW BIOAKTYWNYCH" * |
| semanticscholar; Amaia Iriondo-DeHond et al. "Coffee Silverskin: A Low-Cost Substrate for Bioproduction of High-Value Health Promoting Products", Annals of Nutrition & Food Science, Remedy Publications LLC.,2017, Volume 1, Issue 1 p. 1-4 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL441851A1 (pl) | 2023-07-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO1992006699A1 (en) | Plant extracts as mucosal-protective agents | |
| IE913421A1 (en) | Plant extracts as mucosal-protective agents | |
| JP2005021006A (ja) | アルコールによる影響を短時間で解消する飲食品用材料、飲食品、及び解毒剤 | |
| RU2586770C2 (ru) | Способ приготовления травяного экстракта | |
| AU2011229601B2 (en) | Compositions of rose hips enriched with seeds of rose hips and their use as anti-inflammatory natural medicine for alleviating/reducing symptoms associated with inflammation and joint diseases such as arthritis, rheumatoid arthritis and/or osteo-arthritis | |
| KR101919161B1 (ko) | 두피 개선 및 탈모 방지용 조성물 | |
| PL244268B1 (pl) | Zastosowanie ekstraktu z kawowej łuski srebrzystej | |
| KR20150097175A (ko) | 발효 더덕 추출물 또는 더덕으로부터 분리된 화합물을 포함하는 비만 또는 비만 관련 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
| KR102685818B1 (ko) | 동과 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬 유발 지질 대사이상으로 인한 지질 축적 예방 또는 개선용 조성물 | |
| JP2004352626A (ja) | 植物由来成分を含有する抗コレステロール剤 | |
| KR20180079920A (ko) | 토사자 추출물을 유효성분으로 함유하는 간섬유화 또는 간경화 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
| KR20150097442A (ko) | 발효 더덕 추출물 또는 더덕으로부터 분리된 화합물을 포함하는 비만 또는 비만 관련 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
| KR102266287B1 (ko) | 벌개미취 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물 | |
| JP2020050593A (ja) | インターロイキン−３３産生抑制剤並びにインターロイキン−３３の増加に関連するアレルギー疾患の予防、治療又は抑制用の医薬品、医薬部外品、化粧料及び飲食品組成物 | |
| JP2019085391A (ja) | 経口組成物 | |
| CN110279730B (zh) | 一种冰川茶藨子提取物及其在制备降低餐后血糖药物中的应用 | |
| KR102499105B1 (ko) | 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬 유발 대사증후군 개선 및 치료용 조성물 | |
| Rahman et al. | Antidepressant-like effect of methanolic extract of Punica granatum (pomegranate) in mice model of depression | |
| JP3980952B2 (ja) | 植物抽出エキスを含有する腸溶性の脂肪吸収抑制剤およびそれを含有する食品 | |
| CN112603982A (zh) | 一种抑制前列腺增生的组合物 | |
| EP4480476A1 (en) | Powder and/or granular composition based on pomegranate extract | |
| KR102472952B1 (ko) | 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역 증진용 조성물 | |
| JP2020195286A (ja) | 経口組成物 | |
| RU2773856C9 (ru) | Средство, обладающее гипогликемическим действием, и способ его получения | |
| JP2014155489A (ja) | サルトリイバラ葉抽出物を含有する糖尿予防及び治療用の組成物 |