PL245203B1 - Mieszaniny 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu i preparatów srebra do zastosowania jako środek przeciwbakteryjny do zwalczania Pseudomonas aeruginosa - Google Patents
Mieszaniny 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu i preparatów srebra do zastosowania jako środek przeciwbakteryjny do zwalczania Pseudomonas aeruginosa Download PDFInfo
- Publication number
- PL245203B1 PL245203B1 PL437062A PL43706221A PL245203B1 PL 245203 B1 PL245203 B1 PL 245203B1 PL 437062 A PL437062 A PL 437062A PL 43706221 A PL43706221 A PL 43706221A PL 245203 B1 PL245203 B1 PL 245203B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- silver
- plumbagin
- nanoparticles
- concentration
- naphthoquinone
- Prior art date
Links
- VCMMXZQDRFWYSE-UHFFFAOYSA-N plumbagin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1O VCMMXZQDRFWYSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 202
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 65
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 title abstract description 61
- 239000004332 silver Substances 0.000 title abstract description 61
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 53
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 36
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 title description 6
- FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N Silver ion Chemical compound [Ag+] FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 70
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 33
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims abstract description 5
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 23
- GWOLZNVIRIHJHB-UHFFFAOYSA-N 11-mercaptoundecanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCS GWOLZNVIRIHJHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 150000003378 silver Chemical class 0.000 claims description 14
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 229960003600 silver sulfadiazine Drugs 0.000 claims description 12
- UEJSSZHHYBHCEL-UHFFFAOYSA-N silver(1+) sulfadiazinate Chemical compound [Ag+].C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)[N-]C1=NC=CC=N1 UEJSSZHHYBHCEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 8
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 8
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 8
- FASSFROSROBIBE-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(11-sulfanylundecoxy)ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound OCCOCCOCCOCCCCCCCCCCCS FASSFROSROBIBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 7
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 7
- SLCWLLVFKQHEIN-UHFFFAOYSA-N trimethyl(11-sulfanylundecyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCS SLCWLLVFKQHEIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 31
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 2
- GGCZERPQGJTIQP-UHFFFAOYSA-N sodium;9,10-dioxoanthracene-2-sulfonic acid Chemical compound [Na+].C1=CC=C2C(=O)C3=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C3C(=O)C2=C1 GGCZERPQGJTIQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- ZMOIGGHUSNHCAB-UHFFFAOYSA-N Isoplumbagin Natural products C1=CC(O)=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1 ZMOIGGHUSNHCAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 84
- ALPCEXCHMFUSAN-UHFFFAOYSA-N beta-Dihydroplumbagin Natural products C1=CC=C2C(=O)C(C)CC(=O)C2=C1O ALPCEXCHMFUSAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 80
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 18
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- -1 plumbagin Chemical compound 0.000 description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- FRASJONUBLZVQX-UHFFFAOYSA-N 1,4-naphthoquinone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C=CC(=O)C2=C1 FRASJONUBLZVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 7
- 238000002354 inductively-coupled plasma atomic emission spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 6
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 5
- 150000000191 1,4-naphthoquinones Chemical class 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 229940083025 silver preparation Drugs 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 3
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 3
- 229930192627 Naphthoquinone Natural products 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 3
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 150000002791 naphthoquinones Chemical class 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000208714 Dionaea muscipula Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N chloromethane Chemical compound ClC NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 229960002292 piperacillin Drugs 0.000 description 2
- WCMIIGXFCMNQDS-IDYPWDAWSA-M piperacillin sodium Chemical compound [Na+].O=C1C(=O)N(CC)CCN1C(=O)N[C@H](C=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C([O-])=O)C(C)(C)S[C@@H]21 WCMIIGXFCMNQDS-IDYPWDAWSA-M 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 125000000182 1,4-naphthoquinonyl group Chemical group C1(C(=CC(C2=CC=CC=C12)=O)*)=O 0.000 description 1
- 241000191380 Byblis gigantea Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 206010048038 Wound infection Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229940126574 aminoglycoside antibiotic Drugs 0.000 description 1
- 239000002647 aminoglycoside antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000003115 checkerboard titration Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940050176 methyl chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000039328 opportunistic pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000001374 post-anti-biotic effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 239000003306 quinoline derived antiinfective agent Substances 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000004416 surface enhanced Raman spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009044 synergistic interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
- A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N31/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic oxygen or sulfur compounds
- A01N31/08—Oxygen or sulfur directly attached to an aromatic ring system
- A01N31/16—Oxygen or sulfur directly attached to an aromatic ring system with two or more oxygen or sulfur atoms directly attached to the same aromatic ring system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
- A01N59/16—Heavy metals; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/38—Silver; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/02—Local antiseptics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Wynalazek dotyczy mieszaniny zawierającej działającą bakteriobójczo wobec P. aeruginosa dawkę soli srebra lub nanocząstek srebra oraz 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu, zaś srebro jest w postaci soli lub nanocząstek i dotyczy zastosowania jej jako środek przeciwbakteryjny wobec P. aeruginosa, zwłaszcza do zastosowania na skórę lub rany.
Description
Wynalazek dotyczy sposobu aktywacji właściwości bakteriobójczych 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu, zwanego plumbaginą, wobec naturalnie opornej pałeczki ropy błękitnej Pseudomonas aeruginosa za pomocą srebra formie jonowej lub nanocząstek srebra, a tym samym za pomocą mieszaniny tych czynników. Wynalazek dotyczy zatem medycznego zastosowania mieszaniny do zwalczania P. aeruginosa.
Zjawisko antybiotykoodporności mikroorganizmów, tj. zdolność do namnażania się w obecności antybiotyku, jest coraz powszechniejszym problemem, z którym musi mierzyć się medycyna. Wraz z rosnącą liczbą drobnoustrojów wykazujących oporność na coraz większy zakres antybiotyków, zmniejsza się pula możliwych terapii stosowanych w leczeniu zakażeń, a tym samym rośnie zagrożenie zdrowia i życia ludzkiego. Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) i Amerykańskie Centrum Kontroli i Zapobiegania Chorób (CDC) wskazują w swoich najnowszych raportach, że w związku z nastąpieniem ery postantybiotykowej niezbędne jest zastosowanie zrównoważonych strategii prewencji i leczenia chorób zakaźnych [1,2].
Pseudomonas aeruginosa jest gram-ujemną bakterią oraz oportunistycznym patogenem człowieka i zwierząt, charakteryzującym się znaczącą wirulencją. P. aeruginosa wykazuje naturalną oporność na wiele cząsteczek chemicznych, które są aktywne wobec innych patogenów [3 ]. W przypadku infekcji ran oparzeniowych P. aeruginosa jest jednym z najczęściej izolowanych gatunków bakterii i stanowi szczególny problemem w ich leczeniu ze względu na wielolekooporność ograniczającą możliwości terapeutyczne [4]. Poza antybiotykami, w terapiach ran oparzeniowych z dużym powodzeniem stosowane jest srebro jonowe, tj. azotan srebra i sulfadiazyna srebra [5]. Niemniej jednak, coraz częściej obserwowane jest zjawisko nabywania oporności na preparaty zawierające srebro przez patogeny infekujące rany [6]. Niezbędne jest więc opracowanie strategii umożliwiających opóźnienie lub zniesienie wykształcania bakteryjnej oporności oraz rozszerzenie możliwości terapeutycznych.
Niniejszy wynalazek opiera się na zjawisku przywrócenia wrażliwości opornych komórek mikroorganizmu na cząsteczki związku chemicznego dzięki zastosowaniu drugiego czynnika pełniącego funkcję substancji uwrażliwiającej.
Znane jest działanie związków z grupy 1,4-naftochinonów wobec bakterii gram-dodatnich i grzybów [7]. Niemniej jednak, bakterie gram-ujemne wykazują umiarkowaną oporność na 1,4-naftochinony, w tym 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon lub pozostają na nie całkowicie oporne jak w przypadku P. aeruginosa [3].
W publikacji R. BANASIUK, ET AL: CARNIVOROUS PLANTS USED FOR GREEN SYNTHESIS OF SILVER NANOPARTICLES WITH BROAD-SPECTRUM ANTIMICROBIAL ACTIVITY; ARABIAN JOURNAL OF CHEMISTRY; VOLUME 13, ISSUE 1,2020, PAGES 1415-1428 opisano wykorzystanie ekstraktu zawierającego między innymi plumbaginę do syntezy nanocząstek srebra. Wyniki przedstawione pokazują przyłączenie związków fenolowych, do których należą m. in. naftochinony, do powierzchni nanocząstek.
W publikacji Sajan, D., Kuruvilla, T., Laladhas, K.P. et al. Surface-enhanced Raman scattering and DFT theoretical studies on the adsorption behavior of plumbagin on silver nanoparticles. Indian J Phys 85, 477-484 (2011) opisano raport badań nad bezpośrednim oddziaływaniem plumbaginy i nanocząstek srebra i istnienie koniugatów, czy kompleksów nanocząstek i plumbagina. W literaturze istnieje wiele doniesień o aktywności srebra wobec bakterii, w tym wobec P. aeruginosa np. w Bjarnsholt T, Kirketerp-M0ller K, Kristiansen S, Phipps R, Nielsen AK, Jensen P0, H0iby N, Givskov M. Silver against Pseudomonas aeruginosa biofilms. APMIS. 2007 Aug; 115(8):921-8. doi: 10.1111/j.1600-0463.2007.apm_646.x.
Publikacja H. OGIHARA, et al.: Antimicrobial Activity of the Carnivorous Plant Dionaea muscipula Against Food-Related Pathogenic and Putrefactive Bacteria ; Biocontrol Science, 2013, Vol. 18, No. 3, 151-155 opisuje aktywność ekstraktów z tkanek Dionaea muscipula stanowiących mieszaniny różnych związków w tych tkankach syntetyzowanych - nie opisano jednakże analiz w kierunku ustalenia aktywności czystego związku, a jedynie jego obecność w badanych ekstraktach oraz aktywność tych ekstraktów m. in. wobec P. aeruginosa.
W publikacja George Tegos, et al.: Multidrug Pump Inhibitors Uncover Remarkable Activity of Plant Antimicrobials; ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Oct. 2002, Vol. 46, No. 10, p. 3133-3141 znajdują się wyniki analiz aktywności plumbaginy, tj. czystego związku, wobec dwóch szczepów P. aeruginosa, które stwierdzają brak takiej aktywności. Dane zawarte w publikacji wskazują, że minimalne stężenie hamujące (MIC) plumbaginy jest wyższe niż 500 μg/mL.
Zjawisko synergistycznych oddziaływań dwóch czynników przeciwbakteryjnych nie jest powszechne, tak więc również nie jest efektem spodziewanym, co wielokrotnie opisywano w literaturze, na przykład w: Odds FC (2003). Synergy, antagonism, and what the chequerboard puts between them. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 52(1), 1-1. W większości przypadków połączeń czynników biologicznie czynnych nie dochodzi do żadnych interakcji lub interakcje są nieznaczne, a tym samym czynniki zastosowane w połączeniu działają z taką samą aktywnością, co czynniki zastosowane osobno.
Opracowana według wynalazku mieszanina jest przykładem systemu dwuskładnikowego, w którym wykorzystuje się interakcję czynników do zwiększenia ich potencjału biologicznego w oparciu o zjawisko aktywacji i synergii.
Wynalazek dotyczy sposobu aktywacji właściwości bakteriobójczych 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu, tj. plumbaginy, wobec naturalnie opornej pałeczki ropy błękitnej, tj. Pseudomonas aeruginosa , za pomocą srebra w formie jonowej lub nanocząstek srebra. Wynalazek dotyczy medycznego zastosowania tej mieszaniny do zwalczania P. aeruginosa czyli do zastosowania jako środek przeciwbakteryjny wobec P. aeruginosa redukujące liczbę komórek bakteryjnych. Mieszanina według wynalazku zawiera albo sole srebra albo nanocząstki srebra oraz 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon, zwany plumbaginą. Czynnikiem aktywnym w przypadku obu rodzajów preparatów srebra są jony srebra, ale odmienna jest forma ich zastosowania w mieszaninie. Istotą wynalazku jest to, że w mieszaninie 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon jest w dawce równej lub większej niż 8 μg/mL zaś stężenie soli lub nanocząstek srebra wynosi 1 μg Ag/mL lub jest większe niż 1 μg Ag/m. Wykazany mechanizm oddziaływań srebra i wybranego 1,4-naftochinonu (plumbaginy) stanowi specyficzne zjawisko o wysokim potencjale do zwalczania jednego z najgroźniejszych patogenów bakteryjnych człowieka - P. aeruginosa.
Korzystnie, wynalazek dotyczy 7 odmian mieszaniny tj.: zawiera plumbaginę i jeden z preparatów srebra, tj. sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane kwasem 11-merkaptoundekanowym lub azotan srebra lub sulfadiazynę srebra lub sferyczne nanocząstki srebra o ś redniej wielkości 5 nm stabilizowane chlorkiem (11-merkaptoundecylo)-N,N,N-trimetyloamononiowym lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane eterem mono-11-merkaptoundecylowym glikolu trietylenowego lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane cytrynianem sodu lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane poliwinylopirolidonem.
W przykładzie wynalazku mieszanina zawiera sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane kwasem 11-merkaptoundekanowym w stężeniu równym lub wyższym niż 2 μg Ag/mL oraz 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon w stężeniu równym lub wyższym niż 16 μg/mL. Zawiera minimalną dawkę obu składników działającą bakteriobójczo wobec P. aeruginosa występującego w stężeniu około 2,5 χ 105 jednostek tworzących kolonie (JTK)/mL, co oznacza, że dawka ta redukuje o 99,9% liczbę komórek bakteryjnych, tj. do co najmniej 2,5 χ 102 JTK/mL.
Przy obniżonym stężeniu komórek P. aeruginosa, tj. około 1 χ 104 JTK/mL, minimalna efektywna dawka składników w mieszaninie, tj. dawka hamująca wzrost drobnoustrojów lub redukująca liczbę komórek bakteryjnych w stosunku do ich liczby początkowej, wynosi równo lub więcej niż 1 μg Ag/mL sferycznych nanocząstek srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowanych kwasem 11-merkaptoundekanowym oraz równo lub więcej niż 8 μg/mL 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu.
Zamiast sferycznych nanocząstek srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowanych kwasem 11-merkaptoundekanowym mieszanina może zawierać azotan srebra lub sulfadiazynę srebra lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane chlorkiem (11-merkaptoundecylo)-N,N,N-trimetyloamononiowym lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane eterem mono-11-merkaptoundecylowym glikolu trietylenowego lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane cytrynianem sodu lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane poliwinylopirolidonem.
Wykazano aktywność przeciwbakteryjną mieszaniny wobec wielu szczepów P. aeruginosa, w tym izolatów klinicznych opornych na antybiotyki, hamując ich wzrost. Mieszanina zawierająca aktywne bakteriobójczo wobec P. aeruginosa stężenie srebra w postaci soli lub nanocząstek srebra oraz 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon ma zastosowania jako środek przeciwbakteryjny wobec P. aeruginosa. Literatura cytowana powyżej :
1. CDC, Antibiotic Resistance Threats in the United States, 2019. 2019, U.S. Department of Health and Human Services: Atlanta, GA.
2. WHO, 2019. ANTIBACTERIAL AGENTS IN CLINICAL DEVELOPMENT: an analysis of the antibacterial clinical development pipeline. 2019, WHO: Geneva, Switzerland.
3. Coban, A.Y. i in., Effects of efflux pump inhibitors phenyl-arginine-beta-naphthylamide and 1-(1-naphthylmethyl)-piperazine on the antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa isolates from cystic fibrosis patients. J Chemother, 2009. 21(5): p. 592-4.
4. Church, D. i in. Burn wound infections. Clin Microbiol Rev, 2006. 19(2): p. 403-34.
5. Atiyeh, B.S. i in., Effect of silver on burn wound infection control and healing: review of the literature.
Burns, 2007. 33(2): p. 139-48.
6. Percival, S.L., Bowler P.G. i Russell D. Bacterial resistance to silver in wound care. J Hosp Infect, 2005. 60(1): p. 1-7.
7. Widhalm J.R. i Rhodes D. Biosynthesis and molecular actions of specialized 1,4-naphthoquinone natural products produced by horticultural plants. Hortic Res, 2016, 3: 16046.
Wynalazek opisano bliżej w przykładach potwierdzających efektywność mieszanin i zastosowanie i na rysunku:
Fig. 1. Struktura chemiczna plumbaginy, tj. 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu.
Fig. 2. Zmiany minimalnych stężeń bakteriobójczych plumbaginy i preparatu nanocząstek srebra stabilizowanych kwasem 11-merkaptoundekanowym (AgC10COOH) zastosowanych jednocześnie wobec P. aeruginosa ATCC 27853.
Fig. 3. Wzrost P. aeruginosa ATCC 27853: A) w hodowli bez dodatku plumbaginy przed inkubacją, B) w hodowli bez dodatku plumbaginy po 24 godzinach w 37°C, C) w hodowli traktowanej plumbaginą w stężeniu 8 μg/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, D) w hodowli traktowanej plumbaginą w stężeniu 512 μg/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C.
Fig. 4. Wzrost P. aeruginosa ATCC 27853: A) w hodowli traktowanej azotanem srebra w stężeniu 1 μg Ag/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, B) w hodowli traktowanej azotanem srebra w stężeniu 1 μg Ag/mL i plumbaginą w stężeniu 8 μg/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, C) w hodowli traktowanej sulfadiazyną srebra w stężeniu 1 μg Ag/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, D) w hodowli traktowanej sulfadiazyną srebra w stężeniu 1 μg Ag/mL i plumbaginą w stężeniu 8 μg/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C.
Fig. 5. Wzrost P. aeruginosa ATCC 27853: A) w hodowli traktowanej nanocząstkami srebra stabilizowanymi chlorkiem (11-merkaptoundecylo)-N,N,N-trimetyloamononiowym (AgCuNMes) w stężeniu 1 μg Ag/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, B) w hodowli traktowanej nanocząstkami srebra AgCuNMes w stężeniu 1 μg Ag/mL i plumbaginą w stężeniu 8 μg/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, C) w hodowli traktowanej nanocząstkami srebra stabilizowanymi kwasem 11-merkaptoundekanowym (AgC10COOH) w stężeniu 1 μg Ag/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, D) w hodowli traktowanej nanocząstkami srebra AgC10COOH w stężeniu 1 μg Ag/mL i plumbaginą w stężeniu 8 μg/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, E) w hodowli traktowanej nanocząstkami srebra stabilizowanymi eterem mono-11-merkaptoundecylowym glikolu trietylenowego (AgCnEGaOH) w stężeniu 1 μg Ag/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, F) w hodowli traktowanej nanocząstkami srebra AgCnEGaOH w stężeniu 1 μg Ag/mL i plumbaginą w stężeniu 8 μg/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C.
Fig. 6. Wzrost P. aeruginosa ATCC 27853: A) w hodowli traktowanej nanocząstkami srebra stabilizowanymi cytrynianem (AgCit) w stężeniu 1 μg Ag/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, B) w hodowli traktowanej nanocząstkami srebra AgCit w stężeniu 1 μg Ag/mL i plumbaginą w stężeniu 8 μg/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, C) w hodowli traktowanej nanocząstkami srebra stabilizowanymi poliwinylopirolidonem (AgPVP) w stężeniu 1 μg Ag/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C, D) w hodowli traktowanej nanocząstkami srebra AgPVP w stężeniu 1 μg Ag/mL i plumbaginą w stężeniu 8 μg/mL po 24 godzinach inkubacji w 37°C.
Fig. 7. Potencjał mieszanin plumbaginy (8 μg/mL) i preparatów zawierających srebro (1 μg Ag/mL) do hamowania wzrostu szczepu referencyjnego ATCC 27853 oraz trzech izolatów klinicznych P. aeruginosa opornych na antybiotyki (409, 1430, 3926). Poszczególne panele wskazują następujący sposób traktowania hodowli bakteryjnych: A) hodowle nietraktowane - kontrola, B) plumbagina + azotan srebra, C) plumbagina + nanocząstki AgCnNMe3, D) plumbagina + nanocząstki AgC10COOH, E) plumbagina + nanocząstki AgCnEG3OH, F) plumbagina + nanocząstki AgCit, G) plumbagina + nanocząstki AgPVP. Oś Y: wartość absorbancji przy długości fali 600 nm; oś X: czas (godziny).
Fig. 8. Potencjał mieszanin plumbaginy (8 μg/mL) i preparatów zawierających srebro (1 μg Ag/mL) do hamowania wzrostu szczepu laboratoryjnego PA14 oraz trzech izolatów klinicznych P. aeruginosa opornych na antybiotyki (2642, 2721,3109). Poszczególne panele wskazują następujący sposób traktowania hodowli bakteryjnych: A) hodowle nietraktowane - kontrola, B) plumbagina + azotan srebra, C) plumbagina + nanocząstki AgCnNMe3, D) plumbagina + nanocząstki AgC:COOH, E) plumbagina + nanocząstki AgCnEG3OH, F) plumbagina + nanocząstki AgCit, G) plumbagina + nanocząstki AgPVP. Oś Y: wartość absorbancji przy długości fali 600 nm; oś X: czas (godziny).
W przykładzie 1 opisano mieszaninę zawierającą plumbaginę i sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane kwasem 11-merkaptoundekanowym.
W przykładzie 2 opisano mieszaninę plumbaginy i azotan srebra lub sulfadiazyny srebra lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane chlorkiem (11-merkaptoundecylo)-N,N,N-trimetyloamononiowym lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane kwasem 11-merkaptoundekanowym lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane eterem mono-11-merkaptoundecylowym glikolu trietylenowego lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane cytrynianem sodu lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane poliwinylopirolidonem.
W przykładzie 3 opisano mieszaninę plumbaginy i azotan srebra lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane chlorkiem (11-merkaptoundecylo)-N,N,N-trimetyloamononiowym lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane kwasem 11-merkaptoundekanowym lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane eterem mono-11-merkaptoundecylowym glikolu trietylenowego lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane cytrynianem sodu lub sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm stabilizowane poliwinylopirolidonem poza sulfadiazyną srebra.
Przykład 1: Znoszenie oporności Pseudomonasaeruginosa na 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon za pomocą nanocząstek srebra.
W początkowych etapach badań jako źródło srebra wykorzystano preparaty sferycznych nanocząstek srebra (AgNPs) stabilizowanych kwasem 11-merkaptoundekanowym (AgC10COOH) o średniej wielkości rdzenia metalicznego 5 nm (Prochimia Surfaces Sp. z o.o.). Stężenie srebra w preparatach ustalono za pomocą analizy pierwiastkowej z wykorzystaniem techniki optycznej spektrometrii emisyjnej w plazmie sprzężonej indukcyjnie (ICP-OES). Działanie spektrometru optycznego ICP-OES (Perkin Elmer ICP-OES Optima 2000 DV) było optymalizowane przed każdą serią pomiarów. Preparat nanocząstek srebra rozcieńczano wstępnie 10-krotnie za pomocą wody destylowanej. Następnie do 250 μL przygotowanej zawiesiny dodawano 1 mL kwasu azotowego cz.d.a. (65%), a następnie uzupełniano wodą demineralizowaną do objętości 5 mL. Następujące parametry spektrometru ICP-OES zostały wykorzystanie podczas analiz: moc generatora 1300 W, częstotliwość generatora 40 MHz; demontowalny palnik kwarcowy; osiowy widok plazmy; gaz argon (Ar): przepływ gazu plazmowego 15,0 L/min, przepływ gazu wspomagającego 0,2 L/min; przepływ gazu w rozpylaczu 0,8 L/min; szklana cykloniczna komora rozpylająca; prędkość przepływu próbki: 1,5 L/min. Pomiarów stężenia jonów srebra (Ag+) dokonywano przy długości fali 328,068 nm w 3 powtórzeniach. Działanie bakteriobójcze nanocząstek srebra AgC10COOH i plumbaginy (Sigma Aldrich) stosowanych osobno badano wobec referencyjnego szczepu P. aeruginosa ATCC 27853 za pomocą znanej metody mikrorozcieńczeń pożywki jak opisano w: Krychowiak M, Kawiak A, Narajczyk M, Borowik A, Królicka A: Silver Nanoparticles Combined With Naphthoquinones as an Effective Synergistic Strategy Against Staphylococcus aureus. Front Pharmacol 2018, 9:816. W pierwszej kolejności w pożywce Mueller-Hinton suplementowanej kationami (CA-MHB, Beckton Dickinson) przygotowywano roztwory badanych czynników za pomocą seryjnych dwukrotnych rozcieńczeń.
Opis przygotowania mieszaniny
Na potrzeby eksperymentu mieszaniny przygotowywano w pożywce mikrobiologicznej, niemniej jednak mieszaninę można przygotować również w wodzie lub wodnych roztworach, np. soli fizjologicznej. Zatężone wodne zawiesiny nanocząstek srebra po oznaczeniu zawartości srebr a (Ag) dodawano bezpośrednio do pożywki CA-MHB do końcowego stężenia wynoszącego 128 μg Ag/mL, a następnie wykonywano seryjne dwukrotne rozcieńczenia w pożywce do uzyskania mieszaniny o stężeniu 64, 32, 16, 8, 4, 2 lub 1 μg Ag/mL.
W przypadku plumbaginy (Fig. 1) przed dodaniem do pożywki przygotowywano jej skoncentrowane roztwory w dimetylosulfotlenku (DMSO) zawierające 51,2 mg związku w 1 mL. W celu wykonania eksperymentu tak przygotowane roztwory dodawano do pożywki do końcowego stężenia 512 μg/mL, tj w objętości 10 μL do 0,99 mL, a następnie wykonywano seryjne dwukrotne rozcieńczenia w pożywce do uzyskania roztworów o stężeniu 256, 128, 64, 32, 16, 8 lub 4 μg/mL. Z przygotowanych mieszanin
AgCioCOOH i roztworów plumbaginy w pożywce pobierano po 100 μL i przenoszono do studzienek 96-dołkowej płytki mikrotestowej do badania aktywności bakteriobójczej poszczególnych czynników. W procedurze badania interakcji preparatów zawierających srebro i 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon wykorzystano podejście Checkerboard Titration, które opisano również w: Krychowiak M, Kawiak A, Narajczyk M, Borowik A, Królicka A: Silver Nanoparticles Combined With Naphthoquinones as an Effective Synergistic Strategy Against Staphylococcus aureus. Front Pharmacol 2018, 9:816, polegające na jednoczesnym zastosowaniu dwóch badanych czynników na płytce mikrotestowej, gdzie każdy czynnik jest stosowany w następującym gradiencie stężeń w pożywce: 2 x MBC, 1 x MBC, 0,5 x MBC, 0,25 x MBC, 0,125 x MBC, 0,06 x MBC i 0,03 x MBC. Tym sposobem każdy dołek płytki mikrotestowej zawiera unikalną kombinację stężeń badanych czynników. W przypadku związków lub czynników niewykazujących aktywności bakteriobójczej, tak jak ma to miejsce w przypadku plumbaginy, stosuje się gradient stężeń rozpoczynający się od najwyższego możliwego do uzyskania stężenia związku, tj. najczęściej 512, 256, 128, 64, 32, 16 i 8 μg/mL. W przypadku preparatu srebra gradient stężeń zastosowanych w eksperymencie był następujący: 16, 8, 4, 2, 1,0,5 i 0,25 μg Ag/mL.
Mieszaniny przygotowywano w taki sposób, że zatężone wodne zawiesiny nanocząstek srebra po oznaczeniu zawartości srebra (Ag) dodawano bezpośrednio do pożywki CA-MHB do końcowego stężenia wynoszącego 32 μg Ag/mL, a następnie wykonywano seryjne dwukrotne rozcieńczenia w pożywce do uzyskania mieszanin o stężeniu 16, 8, 4, 2, 1 oraz 0,5 μg Ag/mL. Przed dodaniem do pożywki plumbaginy przygotowywano jej skoncentrowane roztwory w dimetylosulfotlenku (DMSO) zawierające 51,2 mg związku w 1 mL. W celu wykonania eksperymentu tak przygotowane roztwory dodawano do pożywki do końcowego stężenia 1024 μg/mL, tj w objętości 20 μL do 0,98 mL, a następnie wykonywano seryjne dwukrotne rozcieńczenia w pożywce do uzyskania roztworów o stężeniu 512, 256, 128, 64, 32 oraz 16 μg/mL. Następnie mieszaniny przygotowano przez połączenie zawiesin nanocząstek i roztworów plumbaginy w stosunku objętościowym 1 : 1.
Następnie do studzienek zawierających po 100 μL zawiesin, roztworów lub mieszaniny w pożywce dodawano 10 μL inokulum bakteryjnego zawierającego ok. 2,5 x 105 jednostek tworzących kolonie (JTK) w 1 mL. Inokulum otrzymywano przez rozcieńczenie 6-godzinnej hodowli bakteryjnej (CA-MHB, 37°C, 150 rpm) w świeżej pożywce CA-MHB do uzyskania zmętnienia równego 0,5 stopni w skali McFarlanda mierzonego za pomocą densytometru (DensiMeter II, EMO). Płytki mikrotestowe inkubowano przez 24 godziny w 37°C, po czym zawartość dołków, w których obserwowano zahamowanie wzrostu bakterii, wysiewano na agar odżywczy TSA (ang. Tryptic Soy Agar; BTL Polska Sp. z o.o.). Tak przygotowane szalki z agarem inkubowano przez 24 godziny w temperaturze 37°C w celu zliczenia komórek bakteryjnych (JTK) pozostałych w dołkach po traktowaniu czynnikiem, a tym samym ustalenia minimalnego stężenia bakteriobójczego badanych czynników (MBC, ang. Minimal Bactericidal Concentration). Stężenie MBC definiowano jako najniższe stężenie czynnika redukujące w ciągu 24 godzin wyjściową liczbę JTK w dołku (ok. 2,5 x 105 JTK/mL) o 99,9 %, tj. o 3 logarytmy (ok. 2,5 x 102 JTK/mL).
Jak wskazano w Tabeli 1, plumbagina nie wykazuje aktywności bakteriobójczej wobec P. aeruginosa (MBC >512 μg/mL). Niemniej jednak, zastosowanie plumbaginy w połączeniu z nanocząstkami srebra AgCwCOOH (MBC = 8 μg Ag/mL) skutkowało uzyskaniem efektu bakteriobójczego przy jej stężeniu równym 16 μg/mL i stężeniu nanocząstek odpowiadającym 4 μg Ag/mL (Tabela 1, Fig. 2). Powyższe wyniki wskazują, że srebro efektywnie współdziała z plumbaginą, tj. 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonem, znosząc oporność P. aeruginosa na ten związek. Pozwala to osiągnąć efekt bakteriobójczy mieszaniny przy znacząco zredukowanym stężeniu preparatu srebra (nawet do 75%) i stężeniu plumbaginy do 16 μg/mL. Pozwala to na szeroki zakres możliwości modulowania aktywności biologicznej obu czynników oraz optymalizacji składu mieszaniny.
PL 245203 Β1
Tabela 1
Stężenia plumbaginy (5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu) i nanocząstek srebra w mieszaninach w pożywce CA-MHB warunkujące efekt bakteriobójczy wobec szczepu referencyjnego P. aeruginosa ATCC 27853.
| Plumbagina (pg/mL) | AgCwCOOH (pg Ag/mL) |
| > 512 | 0 |
| 512 | 0,25 |
| 512 | 0,5 |
| 256 | 1 |
| 128 | 1 |
| 64 | 2 |
| 32 | 4 |
| 16 | 4 |
| 0 | 8 |
AgCioCOOH - nanocząstki srebra stabilizowane kwasem 11-merkaptoundekanowym.
Ag, jony srebra.
Przykład 2: Mieszaniny plumbaginy i zróżnicowanych preparatów zawierających srebro jako efektywne preparaty bakteriobójcze wobec P. aeruginosa.
W celu ustalenia potencjału innych źródeł srebra do aktywacji działania bakteriobójczego plumbaginy wykorzystano szeroki zakres zróżnicowanych preparatów (Tabela 2), tj. sole srebra stosowane w terapii ran oparzeniowych, tj. azotan srebra (Sigma Aldrich) i sulfadiazynę srebra (Sigma Aldrich) oraz komercyjnie dostępne preparaty sferycznych nanocząstek srebra (AgNPs) o zróżnicowanej powierzchni. Jako model do badań wybrano AgNPs o średniej wielkości rdzenia metalicznego około 5 nm, ze względu na odwrotnie proporcjonalną zależność wielkości nanostruktur i ich aktywności, którą opisano m. in. w: Martinez-Castanon GA, Nino-Martinez N, Martinez-Gutierrez F, Martinez-Mendoza JR i Ruiz F. Synthesis and antibacterial activity of silver nanoparticles with different sizes. J Nano Res 2008, 10 (8): 1343-1348. W przykładzie wykorzystano nanocząstki srebra dwóch niezależnych producentów: i) Prochimia Surfaces Sp. z o.o., tj. AgNPs stabilizowane chlorkiem (11-merkaptoundecylo)-N,N,N-trimetyloamononiowym (AgCuNMes), AgNPs stabilizowane kwasem 11-merkaptoundekanowym (AgCioCOOH) oraz AgNPs stabilizowane eterem mono-11-merkaptoundecylowym glikolu Metylenowego (AgCnEGsOH), ii) Nanocomposix, tj. AgNPs stabilizowane cytrynianem sodu (AgCit) i AgNPs stabilizowane poliwinylopirolidonem (AgPVP). Sole srebra rozpuszczano w jałowej wodzie destylowanej do stężenia 1 mg Ag/mL. W przypadku preparatów AgNPs korzystano bezpośrednio z zawiesin nanocząstek w wodzie dostarczanych przez producenta. Tak szeroki zakres źródła srebra, a w tym zróżnicowanie czynników stabilizujących powierzchnię nanocząstek, miał na celu zbadanie specyficzności oddziaływań srebra i plumbaginy w zależności od właściwości zastosowanego preparatu.
W pierwszej kolejności ustalono zawartość jonów srebra w preparatach AgNPs w celu normalizacji ich stężenia do stężenia srebra za pomocą ICP-OES według metodyki opisanej w Przykładzie 1. W przypadku soli srebra stężenie jonów srebra obliczono na postawie stężenia molowego związków. Następnie wykorzystując metodę mikrorozcieńczeń pożywki opisaną w Przykładzie 1 ustalono stężenia MBC wszystkich preparatów wobec referencyjnego szczepu P. aeruginosa ATCC 27853 uwzględniając zawartość jonów srebra w preparacie ^g Ag/mL). Jak wskazują wyniki przedstawione w Tabeli 2, zastosowane sole srebra wykazywały taką samą aktywność przeciwbakteryjną (MBC = 2 μg Ag/mL). Pomiędzy preparatami nanocząstek srebra różniących się czynnikiem stabilizującym ich powierzchnię obserwowano różnice w aktywności, tj. stężenie MBC wynosiło od 2 do 32 μg Ag/mL. Następnie zbadano efektywność bakteriobójczą wymienionych preparatów srebra w połączeniu z plumbaginą, tj. 5-hydroksy-3-metylo-1,4-naftochinonem.
Sposób przygotowania mieszaniny
Przygotowano następujące roztwory i mieszaniny robocze badanych czynników w pożywce CA-MHB: i) roztwory plumbaginy o stężeniu 16 μg/mL przygotowane poprzez dodanie do 10 mL pożywki mikrobiologicznej zatężonego roztworu tego 1,4-naftochinonu (51,2 mg/mL) w DMSO w objętości 3,125 μL, ii) roztwory plumbaginy o stężeniu 512 μg/mL przygotowane poprzez dodanie do 9,9 mL pożywki mikrobiologicznej 100 μL zatężonego roztworu tego 1,4-naftochinonu (51,2 mg/mL) w DMSO, iii) roztwory lub mieszaniny preparatów zawierających srebro w stężeniu 2 μg Ag/mL uwzględniając ustaloną uprzednio zawartość srebra w wyjściowych roztworach i zawiesinach. Tak przygotowane robocze roztwory i mieszaniny dodawano do dołków na 96-dołkowej płytce mikrotestowej jak opisano poniżej:
a) dodawano 50 μL roztworu zawierającego 16 μg/mL plumbaginy i uzupełniano 50 μL pożywki CA-MHB uzyskując 100 μL pożywki zawierającą plumbaginę w stężeniu 8 μg/mL,
b) dodawano 100 μL roztworu zawierającego 512 μg/mL plumbaginy, c) łączono ze sobą roztwory lub mieszaniny poszczególnych źródeł srebra w pożywce zawierające μg Ag/mL i roztwory plumbaginy o stężeniu 16 μg/mL w pożywce poprzez dodanie 50 μL każdego z nich do dołków płytki mikrotestowej, uzyskując 100 μL pożywki zawierające srebro w stężeniu 1 μg Ag/mL i plumbaginę w stężeniu 8 μg/mL,
d) dodawano 50 μL roztworu lub mieszaniny badanego źródła srebra zawierające 2 μg Ag/mL i uzupełniano 50 μL pożywki CA-MHB uzyskując 100 μL pożywki zawierającej srebro w stężeniu 1 μg Ag/mL.
Do dołków wyznaczonych jako kontrola w postaci nietraktowanych mieszaniną komórek bakteryjnych dodawano 100 μL pożywki CA-MHB. Następnie dołki płytki mikrotestowej uzupełniano inokulum bakteryjnym w objętości 10 μL do finalnego stężenia ok. 1 χ 104 JTK/mL. Inokulum uzyskiwano z 6-godzinnej hodowli bakteryjnej w CA-MHB (37°C, 150 rpm) przez jej rozcieńczenie w świeżej pożywce do 0,5 McFarlanda (Densimeter, Brno) i ponownie 100-krotne rozcieńczenie w świeżej pożywce. Po 24 godzinach inkubacji w 37°C wykonywano po cztery następujące po sobie 10-krotne rozcieńczenia zawartość dołków w jałowej soli fizjologicznej (0,85% NaCl). Następnie z przygotowanych zawiesin pobierano po 90 μL i wysiewano na agar odżywczy TSA (BTL Polska Sp. z o.o.). Po 24 godzinach (37°C) fotografowano kolonie bakteryjne pojawiające się na pożywce agarowej.
Uzyskane wyniki wskazały, że bakterie nietraktowane srebrem, plumbaginą (5-hydroksy-3-metylo-1,4-naftochinonem) lub ich mieszaniną (Fig. 3A) wykazują wzrost po 24 godzinach i dochodzi do zwiększania liczby jednostek tworzących kolonie (JTK) na agarze odżywczym TSA (Fig. 3B). Również w przypadku plumbaginy w stężeniu 8 μg/mL oraz 512 μg/mL po 24 godzinach zwiększała się liczba JTK (Fig. 3C oraz Fig. 3D), co potwierdza brak aktywności bakteriobójczej tego 1,4-naftochinonu wobec P. aeuruginosa. Sole srebra, tj. azotan srebra i sulfadiazyna srebra, zastosowane indywidualnie w stężeniu 1 μg Ag/mL redukowały stukrotnie (o 2 logarytmy dziesiętne) liczbę JTK (Fig. 4A i 4C) w porównaniu do ich wyjściowej zawartości w nietraktowanej kontroli (Fig. 3A). Dodatek plumbaginy w stężeniu 8 μg/mL wzmocnił aktywność bakteriobójczą obu soli srebra prowadząc do eliminacji wszystkich komórek bakteryjnych (Fig. 4B) lub znaczącą redukcję ich liczby (Fig. 4D). W przypadku preparatów nanocząstek srebra zakupionych z Prochimia Surfaces SP. z o.o. (Fig. 5) zastosowanych w stężeniu 1 μg Ag/mL obserwowano zróżnicowany potencjał do redukcji liczby JTK na agarze odżywczym TSA (Fig. 5A, Fig. 5C i Fig. 5E) proporcjonalny do stężenia MBC wyznaczonego uprzednio dla tych preparatów (Tabela 2). W zastosowanej dawce nanocząstki AgCnNMe3 (MBC = 32 μg Ag/mL) nie wykazały efektu bakteriobójczego i nie obserwowano redukcji liczby JTK (Fig. 5A). Z kolei nanocząstki AgC10COOH (MBC = 8 μg Ag/mL) oraz nanocząstki AgCnEG3OH (MBC = 8 μg Ag/mL) zredukowały liczbę komórek bakteryjnych o odpowiednio 2 oraz 3 logarytmy dziesiętne, jak pokazano na Fig. 5C i Fig. 5E. Niemniej jednak, niezależnie od wyjściowej aktywności bakteriobójczej preparatu nanocząstek, we wszystkich przypadkach doszło do zwiększenia efektu bakteriobójczego, tj. zwiększonej redukcji liczny JTK po dodaniu plumbaginy w dawce 8 μg/mL (Fig. 5B, Fig. 5D i Fig. 5F). Takie samo zjawisko obserwowano w przypadku preparatów nanocząstek srebra firmy Nanocomposix (Fig. 6), które zastosowane oddzielnie nie hamowały wzrostu komórek bakteryjnych (Fig. 6A) i nie redukowały liczby JTK
PL 245203 Β1 (Fig. 6C). Po dodaniu plumbaginy (8 pg/mL) obserwowany był efekt zahamowania wzrostu bakterii w przypadku nanocząstek AgCit (Fig. 6B) i efekt znaczącej redukcji liczby JTK w przypadku nanocząstek AgPVP (Fig. 6D), tj. o 3 logarytmy w stosunku do nietraktowanej kontroli (Fig. 3A). Opisywane wyniki pokazują, że samo srebro nie działa tak dobrze jak mieszanina, plumbagina w ogóle nie działa, a dopiero mieszanina daje efekt synergiczny.
Uzyskane wyniki potwierdziły brak znaczenia właściwości fizyko-chemicznych źródeł srebra, tj. formy jonowej i właściwości powierzchni nanocząstek dla występowania interakcji srebra i badanego 1,4-naftochinonu. Wszystkie zbadane preparaty srebra aktywowały potencjał plumbaginy do zwalczania P. aeruginosa. Niemniej jednak, na końcowy efekt bakteriobójczy mieszaniny srebra i plumbaginy, tj. na poziom redukcji liczby komórek bakteryjnych, wpływ ma potencjał bakteriobójczy preparatów zawierających srebro. Tym samym niezbędna jest optymalizacji składu mieszaniny z uwzględnieniem efektywnych stężeń bakteriobójczych stosowanych źródeł srebra.
Tabela 2
Charakterystyka preparatów zawierających srebro zastosowanych w badaniach oraz ich potencjał bakteriobójczy wobec P. aeruginosa ATCC 27853.
| Preparat srebra | Czynnik stabilizujący | MBC (pg Ag/mL) |
| Azotan srebra | n/d | 2 |
| Sulfadiazyna srebra | n/d | 2 |
| AgCnNMe3 | Chlorek (1 l-merkaptoundecylo)-N,N,Ntri mety 1 oam ononi owy | 32 |
| AgC10COOH | Kwas 11-merkaptoundekanowy | S |
| AgCnEG3OH | Eter mono-11-merkaptoundecylowy glikolu tri etylenowego | 2 |
| AgCit | Cytrynian sodu | 4 |
| AgPVP | Poliwinylopirolidon | 4 |
MBC - minimalne stężenie bakteriobójcze czynnika; Ag-jony srebra; n/d - nie dotyczy.
Przykład 3. Mieszaniny 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu i preparatów srebra jako środek hamujący wzrost izolatów klinicznych P. aeruginosa niezależnie od profilu oporności na antybiotyki.
W celu zbadania zakresu działania mieszanin zawierających srebro i plumbaginę wobec różnych szczepów i izolatów klinicznych P. aeruginosa przeprowadzono analizy ich zdolności do hamowania wzrostu drobnoustrojów. W badaniach wykorzystano szczep referencyjny ATCC 27853 oraz laboratoryjny szczep PA14. Wykorzystano również izolaty kliniczne uzyskane od pacjentów Szpitala Wojewódzkiego w Gdańsku, dla których wykonano analizy wrażliwości na trzy antybiotyki: piperacylinę (antybiotyk β-laktamowy), gentamycynę (antybiotyk aminoglikozydowy) i cyprofloksacynę (antybiotyk fluorochinolonowy). Wśród 6 badanych izolatów (Tabela 3), zidentyfikowano 3 izolaty wrażliwe na antybiotyki (409, 1430, 3926) oraz 3 izolaty oporne na wszystkie badane antybiotyki (2642, 2721,3109).
Z analiz wykluczono sulfadiazynę srebra, ze względu na wyjściowe zmętnienie jej roztworów w pożywce CA-MHB interferujące z pomiarami wzrostu drobnoustrojów.
Opis sposobu otrzymania mieszaniny
Na potrzebę wykonania badań mieszaniny przygotowywano w pożywce mikrobiologicznej. Niemniej jednak, opisane mieszaniny można przygotować również w wodzie lub w innych wodnych roztworach. Najpierw przygotowywano roztwory robocze plumbaginy przez dodanie do pożywki jej roztworu
PL 245203 Β1 w DMSO (51,2 mg/mL) do końcowego stężenia 16 pg/mL, tj. dodając 3,125 pL roztworu do 10 mL pożywki mikrobiologicznej. Mieszaniny robocze preparatów srebra przygotowano dodając ich roztwory lub zawiesiny w wodzie do pożywki mikrobiologicznej do końcowego stężenia 2 pg Ag/mL uwzględniając ustalone uprzednio za pomocą ICP-OES stężenie srebra w preparatach. Następnie robocze mieszaniny preparatu srebra i plumbaginy mieszano ze sobą w stosunku 1 :1 (v/v) uzyskując pożywkę zawierającą srebro w postaci jonów lub nanocząstek w stężeniu odpowiadającym 1 pg Ag/mL i plumbaginę w stężeniu 8 pg/mL.
Tak uzyskaną mieszaninę umieszczano w dołkach 96-dołkowej płytki mikrotestowej w objętości 100 pL i uzupełniano 10 pL inokulum bakteryjnego zawierającego ok. 1 χ 106 JTK. Inokulum bakteryjne przygotowywano z 6-godzinnej hodowli bakterii w pożywce CA-MHB (37°C, 150 rpm) rozcieńczanej do 0,5 McFarlanda (Densimeter, Brno). Następnie płytki umieszczano w czytniku mikropłytek (Envision, Perkin Elmer) i inkubowano je przez 8 godzin z wytrząsaniem (150 rpm). Co 30 minut czytnik dokonywał automatycznego pomiaru zmętnienia pożywki w dołkach przy długości fali 600 nm (ODeoo).
Wzrost szczepu referencyjnego ATCC 27853 i szczepów wrażliwych na antybiotyki był hamowany przez wszystkie mieszaniny srebra i plumbaginy (Fig. 7). Nie zaobserwowano różnic we wrażliwości izolatów klinicznych wrażliwych na piperacylinę, gentamycynę i cyprofloksacynę na mieszaniny srebra jonowego lub nanocząstek srebra i plumbaginy. Niemniej jednak, preparaty otrzymane z wykorzystaniem nanocząstek AgCuNMes, tj. preparatu o najniższej aktywności bakteriobójczej (Tabela 2), w najmniejszym stopniu hamowały wzrost wszystkich badanych szczepów P. aeruginosa (Fig. 1C). Również szczep laboratoryjny PA14 oraz wszystkie izolaty kliniczne oporne na badane antybiotyki wykazywały zahamowany wzrost w obecności srebra i plumbaginy (Fig. 8). Nie zaobserwowano oporności izolatów klinicznych wobec testowanych mieszanin, a jedynie niższą aktywność mieszaniny zawierającej nanocząstki AgCuNMes (Fig. 8C), jak miało to miejsce dla szczepów wrażliwych (Fig. 1C). Tym samym, potwierdzono aktywność mieszanin srebra i plumbaginy wobec szerokiego zakresu szczepów P. aeruginosa niezależnie od profilu oporności na antybiotyki. Wskazuje to na wysoki potencjał wynalazku w zwalczaniu groźnego antybiotykoopornego patogenu bakteryjnego jakim jest P. aeruginosa.
Tabela 3
Profil wrażliwości izolatów klinicznych P. aeruginosa na wybrane antybiotyki.
| Szczep P. aeruginosa | MIC (pg/mL) | ||
| PIP* | GEN** | ę jp * * * | |
| 409 | 8 | 0,25 | 0,06 |
| 1430 | 8 | 0,25 | 0,125 |
| 3926 | 8 | 0,5 | 0,125 |
| 2642 | >128 | >128 | >128 |
| 2721 | >128 | 128 | 64 |
| 3109 | 128 | 64 | 64 |
MIC - minimalne stężenie hamujące wzrost mikroorganizmów; PIP, piepracylina; GEN, gentamycyna; CIP, cyprofloksacyna.
Wartość graniczna stężenia MIC dla szczepów opornych według BUCA ST:
* > 16 pg/mL, * * > 4 pg/mL, * ** > i gg/mL.
Claims (4)
1. Mieszanina zawierająca sole srebra lub nanocząstki srebra oraz 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon, przy czym w mieszaninie 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon jest w dawce równej lub większej niż 8 pg/mL zaś stężenie soli lub nanocząstek srebra wynosi 1 pg Ag/mL lub jest większe niż 1 pg Ag/m do zastosowania jako środek przeciwbakteryjny wobec P. aeruginosa redukujące liczbę komórek bakteryjnych.
2. Mieszanina zawierająca sole srebra lub nanocząstki srebra oraz 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon do zastosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera sferyczne nanocząstki srebra o średniej wielkości 5 nm.
3. Mieszanina zawierająca sole srebra lub nanocząstki srebra oraz 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon do zastosowania według zastrz.1-2, znamienna tym, że zawiera nanocząstki srebra stabilizowane kwasem 11-merkaptoundekanowym lub azotan srebra lub sulfadiazynę srebra lub nanocząstki srebra stabilizowane chlorkiem (11-merkaptoundecylo)-N,N,N-trimetyloamononiowym lub nanocząstki srebra stabilizowane eterem mono-11-merkaptoundecylowym glikolu trietylenowego lub nanocząstki srebra stabilizowane cytrynianem sodu lub nanocząstki srebra stabilizowane poliwinylopirolidonem.
4. Mieszanina zawierająca sole srebra lub nanocząstki srebra oraz 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinon do zastosowania według zastrzeżeniu 1-3, znamienna tym, że ma zastosowanie jako środek na skórę lub rany.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL437062A PL245203B1 (pl) | 2021-02-19 | 2021-02-19 | Mieszaniny 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu i preparatów srebra do zastosowania jako środek przeciwbakteryjny do zwalczania Pseudomonas aeruginosa |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL437062A PL245203B1 (pl) | 2021-02-19 | 2021-02-19 | Mieszaniny 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu i preparatów srebra do zastosowania jako środek przeciwbakteryjny do zwalczania Pseudomonas aeruginosa |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL437062A1 PL437062A1 (pl) | 2022-01-10 |
| PL245203B1 true PL245203B1 (pl) | 2024-06-03 |
Family
ID=80053765
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL437062A PL245203B1 (pl) | 2021-02-19 | 2021-02-19 | Mieszaniny 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu i preparatów srebra do zastosowania jako środek przeciwbakteryjny do zwalczania Pseudomonas aeruginosa |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL245203B1 (pl) |
-
2021
- 2021-02-19 PL PL437062A patent/PL245203B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL437062A1 (pl) | 2022-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Miladi et al. | Synergistic effect of eugenol, carvacrol, thymol, p-cymene and γ-terpinene on inhibition of drug resistance and biofilm formation of oral bacteria | |
| Issam et al. | Pharmacological synergism of bee venom and melittin with antibiotics and plant secondary metabolites against multi-drug resistant microbial pathogens | |
| Singh et al. | Antibacterial activities of bacteriagenic silver nanoparticles against nosocomial Acinetobacter baumannii | |
| Zemke et al. | Nitrite modulates bacterial antibiotic susceptibility and biofilm formation in association with airway epithelial cells | |
| AU2014321319B2 (en) | Antimicrobial compositions | |
| Moon et al. | In vitro effects of N-acetyl cysteine alone and in combination with antibiotics on Prevotella intermedia | |
| Mizdal et al. | The antibacterial and anti-biofilm activity of gold-complexed sulfonamides against methicillin-resistant Staphylococcus aureus | |
| B. Aswathanarayan et al. | Antimicrobial, biofilm inhibitory and anti-infective activity of metallic nanoparticles against pathogens MRSA and Pseudomonas aeruginosa PA01 | |
| Abeydeera et al. | Harnessing the toxicity of dysregulated iron uptake for killing Staphylococcus aureus: reality or mirage? | |
| Narayanan et al. | Inactivation of Acinetobacter baumannii biofilms on polystyrene, stainless steel, and urinary catheters by octenidine dihydrochloride | |
| Hendiani et al. | Synthesis of silver nanoparticles and its synergistic effects in combination with imipenem and two biocides against biofilm producing Acinetobacter baumannii | |
| Pant et al. | Bi 2 O 3 nanoparticles exhibit potent broad-spectrum antimicrobial activity and the ability to overcome Ag-, ciprofloxacin-and meropenem-resistance in P. aeruginosa: the next silver bullet of metal antimicrobials? | |
| Sharafutdinov et al. | Targeting Bacillus cereus cells: Increasing efficiency of antimicrobials by the bornyl-possessing 2 (5H)-furanone derivative | |
| Kher et al. | Effect of nanosulfur against multidrug-resistant Staphylococcus pseudintermedius and Pseudomonas aeruginosa | |
| US20090226494A1 (en) | Pathogen - controlling products | |
| AU2003270523B2 (en) | Biocide composition and related methods | |
| CN107073124B (zh) | 增效的抗微生物剂 | |
| Biswas et al. | Vitamin D3 potentiates antimicrobial and antibiofilm activities of streptomycin and thymoquinone against Pseudomonas aeruginosa | |
| Sarah et al. | Combined efficacy of thymol and silver nanoparticles against Staphylococcus aureus | |
| Kim et al. | New antibacterial-core structures based on styryl quinolinium | |
| PL245203B1 (pl) | Mieszaniny 5-hydroksy-2-metylo-1,4-naftochinonu i preparatów srebra do zastosowania jako środek przeciwbakteryjny do zwalczania Pseudomonas aeruginosa | |
| JP2023105515A (ja) | 抗菌、抗カビ、抗ウイルス性消毒剤組成物 | |
| Zareniya et al. | Study the efficacy of antimicrobial activities of eight clinically applied disinfectants against clinical isolated of Enterococci and Pseudomonas aeruginosa | |
| JP7361965B1 (ja) | コロナウイルスを含む抗ウイルス活性、抗カビ活性、および抗菌活性を有する２液エマルジョンコーティング剤、及びコロナウイルスを含むウイルス、カビ、および細菌の除菌方法。 | |
| RU2672869C1 (ru) | Антибактериальное средство на основе бактериофага |