PL246651B1 - Kompozycja bakterii probiotycznych, zastosowanie kompozycji bakterii probiotycznych oraz zestaw zawierający kompozycję bakterii probiotycznych - Google Patents
Kompozycja bakterii probiotycznych, zastosowanie kompozycji bakterii probiotycznych oraz zestaw zawierający kompozycję bakterii probiotycznych Download PDFInfo
- Publication number
- PL246651B1 PL246651B1 PL423964A PL42396417A PL246651B1 PL 246651 B1 PL246651 B1 PL 246651B1 PL 423964 A PL423964 A PL 423964A PL 42396417 A PL42396417 A PL 42396417A PL 246651 B1 PL246651 B1 PL 246651B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- skin
- composition
- bacteria
- growth
- probiotic
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Zgłoszenie dotyczy zwalczania i zapobiegania chorobom związanym z zaburzonym mikrobiomem, w szczególności w leczeniu i zapobieganiu kontaktowemu zapaleniu skóry, a zwłaszcza alergiom kontaktowym na metale. Przedmiotem wynalazku jest kompozycja bakterii probiotycznych, zastosowanie kompozycji probiotycznych oraz sposób wytwarzania spersonalizowanych preparatów priobiotycznych. Przedmiotowe kompozycje są to kompozycje bakterii zdolnych do przeżycia na skórze ssaka, zawierające dodatkowo żywe kultury bakterii probiotycznych, bakteriocyny, małe peptydy przeciwdrobnoustrojowe i/lub polioligosacharydy. Przedmiotem zgłoszenia jest ponadto zestaw obejmujący powyższą kompozycje i sposób jej podawania.
Description
Opis wynalazku
Wynalazek należy do dziedziny zwalczania i zapobiegania chorobom związanym z zaburzonym mikrobiomem skóry. Bardziej szczegółowo przedmiotem wynalazku jest kompozycja bakterii probiotycznych i zastosowanie kompozycji bakterii probiotycznych, które są zdolne do przeżycia na skórze ssaka, przy czym kompozycje zawierają żywe kultury bakterii probiotycznych, bakteriocyny, małe peptydy przeciwdrobnoustrojowe i/lub polioligosacharydy.
Stan techniki
Skóra jest największym organem człowieka skolonizowanym przez wiele różnych populacji mikroorganizmów, z których większość jest niegroźna lub nawet przynosi gospodarzowi korzyści. Wzajemne powiązania i oddziaływania pomiędzy wrodzonymi i dostosowawczymi reakcjami układu immunologicznego a mikrobiomem skóry są niezwykle skomplikowane i stanowią obecnie intensywny obszar badań naukowców w celu opracowania nowego postępowania prowadzącego do ochrony korzystnych mikroorganizmów skóry i zwalczania mikroorganizmów patogennych. To zadanie badacze na całym świecie próbują osiągnąć stosując różne postacie probiotycznych bakterii.
Obecnie na rynku dostępnych jest wiele produktów spożywczych i farmaceutycznych do podawania doustnego zawierających bakterie probiotyczne, występujących najczęściej w formie przetworów mlecznych lub w postaci tabletek, kapsułek i saszetek zawierających liofilizowaną biomasę bakterii probiotycznych. Stężenie bakterii w takich produktach wynosi od kilku milionów do kilku miliardów na dawkę.
Wiele badań świadczy o korzystnym działaniu probiotyków w schorzeniach układu pokarmowego (zespół jelita drażliwego, zapalenie jelit), ale również, na przykład w infekcjach pochwowych. Niektóre szczepy probiotyczne były również badane w kierunku zapobiegania atopowemu zapaleniu skóry, reumatoidalnemu zapaleniu stawów oraz marskości wątroby. Nieliczne dowody kliniczne świadczą o korzystnej roli probiotyków w obniżaniu poziomu cholesterolu, jednak wyniki nie są jednoznaczne.
Można tu wymienić szereg zgłoszeń dotyczących kompozycji doustnych do zwalczania niedoskonałości i chorób skóry. W opisie CN105961768 opisano bezpieczną i zdrową do jedzenia czekoladę do usuwania wyprysków i poprawiających wygląd skóry, zawierającą w swoim składzie bakterie kwasu mlekowego. Ponadto w J2006028050, JP2009035490, opisano szereg doustnych kompozycji zawierających bakterie probiotyczne do leczenia atopowych i innych zmian skórnych. W WO2017063066 opisano kompozycję kosmetyczną zawierającą bakterie probiotyczne, bifidobacteria, stosowaną w postaci mydła. Podobnie w KR2017006064 opisano kompozycję bakterii obejmującą Lactobacillus acidophilus, L. rhamnosus i Bifidobacterium bidifum. Podobnie opisano kompozycję probiotyczną zawierającą lipidy, w której jako szczepy probiotyczne stosuje się szczepy Lactobacillus i Bifidobacteria.
W EP2626076 opisano zastosowanie doustne szczepu Lactobacillus salivarius, wiadomo jednak, że zwykle szczepy tego gatunku niosą ureazę.
Jednak w żadnym z opisanych rozwiązań nie wskazano, że istotne jest występowanie u bakterii białek wiążących nikiel lub inne metale. Ponadto nie ma stanie techniki rozwiązań, w których bakterie probiotyczne nie są wykorzystywane do tworzenia spersonalizowanych preparatów, uwzględniających indywidualny garnitur mikrobiologiczny danej osoby oraz jej indywidualną kondycję skóry i schorzenia.
Chitozan jest liniowym polisacharydem złożonym z losowo rozmieszczonych jednostek D-glukozaminy i N-acetylo-D-glukozoaminy związanych w pozycji β-(1-4). Może być otrzymywany z chityny zwierzęcej roślinnej lub grzybowej o wielu znanych zastosowaniach w przemyśle kosmetycznym oraz w medycynie.
W stanie techniki opisano zastosowanie chitozanu w kosmetykach oraz kompozycjach farmaceutycznych o szerokim zastosowaniu. W opisie US 3879376 A opisano zastosowanie dodatku chitozanu do kosmetyków, jako korzystnego środka nawilżającego, filmotwórczego oraz maskującego jony metali, takiej jak miedź i żelazo. W zgłoszeniu US2010316739 (A1) opisano zastosowanie chitozanu do wytwarzania żelu farmaceutycznego do leczenia poparzonej skóry oraz skóry po zabiegach laserowych. W RU 2357738C2 opisano zastosowanie preparatu dermatologicznego zawierającego 1% chlorowodorek chitozanu do zapobiegania i leczenia platynozy. Ponadto w zgłoszeniu US20100130443 A1 opisano przeciwdrobnoustrojowe właściwości chitozanu i pochodnych chitozanu, a w zgłoszeniu WO2013172725 (A1) zastosowanie chitozanu do przeciwdziałania zakażeniom wirusowym powodowanym przez koronawirusy. W zgłoszeniu EP2706983 A1 ujawniono sposób leczenia ran śluzówki oraz nabłonka skóry za pomocą kompozycji zawierającej chitozan oraz witaminę D lub pochodne witaminy D. Jednak w żadnym z powyżej wymienionych opisów nie ma wzmianki o wykorzystaniu chitozanu lub innego polioligosacharydu do przeciwdziałania zapaleniom skóry jako czynnika filmotwórczego wspomagającego działanie żywych bakterii probiotycznych.
Zapalenia skóry i ich leczenie stanowi jedno z ważniejszych problemów XXI. W przypadku atopowego zapalenia skóry problem ten dotyka około 10-15% populacji świata, a alergii na nikiel 17% populacji kobiet i 3% populacji mężczyzn. Obecnie dodatkowo nasila się wraz z rozwojem cywilizacji. Pomimo wysiłków naukowców i stale doskonalonych metod badawczych, patomechanizm schorzenia nadal nie został jednoznacznie wyjaśniony i nie jest znane skuteczne leczenie.
Często zaburzenia flory bakteryjnej na skórze współistnieją lub są uważane za jedną z istotnych przyczyn atopowego zapalenia skóry. Objawami atopowego zapalenia skóry są: nadmierna suchość skóry oraz uporczywy świąd, który przeszkadza w codziennym funkcjonowaniu i stanowi duży problem zwłaszcza u najmłodszych pacjentów z atopią. W fazie ostrej choroby pojawiają się także zmiany skórne, które są dodatkowo nasilane poprzez drapanie skóry.
W konsekwencji podrapana skóra traci swoje właściwości chroniące ciało od świata zewnętrznego, a zatem ułatwia przedostawanie się w głąb skóry alergenów i innych czynników drażniących, co powoduje nasilenie objawów zapalnych. Uszkodzona przez drapanie skóra dodatkowo ulega bardzo wydajnej utracie wilgoci, co zwiększa świąd i uczucie suchości. Konsekwencją wykwitów skórnych bardzo często są grzybicze lub bakteryjne wtórne zakażenia skóry, które wymagają natychmiastowego i często długotrwałego leczenia preparatami przeciwdrobnoustrojowymi.
W otaczającym nas świecie jest ogromna ilość czynników drażniących, które nasilają atopowe zmiany skórne (AZS). Wymienić należy między innymi: szorstkie tkaniny, resztki niewypłukanych detergentów, zanieczyszczenia znajdujące się w powietrzu, a zwłaszcza znajdujące się w nich metale i jony metali. W AZS niezwykle ważne jest ograniczenie dostępu do skóry wszystkich czynników zewnętrznych, które nasilają świąd oraz odpowiednie nawilżenie skóry i zapobieganie jej nadkażeniom.
Wyodrębnia się dwie fazy kliniczne atopowego zapalenia skóry: typ wypryskowaty (najczęściej u dzieci i niemowląt) oraz typ liszajowaty (najczęściej u młodzieży i dorosłych). W leczeniu AZS stosuje się leczenie miejscowe oraz ogólne, właściwą pielęgnację skóry atopowej oraz profilaktykę. Właściwa i systematyczna pielęgnacja skóry atopowej pozwala na odtworzenie i wzmocnienie prawidłowego funkcjonowania bariery skórnej. W tym celu stosuje się emolienty, czyli preparaty nawilżające i natłuszczające skórę. Preparaty te kwalifikowane są do dwóch generacji: starszej (kremy, mleczka, maści i maści tłuste) oraz nowszej (krem nanocząsteczkowy). Mają one ograniczony czas działania i powinny być aplikowane na skórę średnio co 6 godzin. W miejscowym leczeniu przeciwzapalnym atopowego zapalenia skóry stosuje się przeciwdrobnoustrojowe preparaty oraz glikokortykosteroidy, które mogą być stosowane w ograniczonym czasie i są znane z efektów ubocznych, jakie powodują.
Ograniczanie zakażeń skóry jest bardzo istotne, ponieważ leczenie nadkażeń bakteryjnych i innych jest bardzo długotrwałe i niekorzystne dla organizmu. Staphylococcus aureus, czyli gronkowiec złocisty jest bakterią, która występuje u ludzi na skórze często nie powodując objawów chorobowych (nosicielstwo), jednak w przypadku zaburzeń bariery skórnej, obecnych u pacjentów z atopią, zakażenie gronkowcem może prowadzić do poważnych powikłań, szczególnie w przypadku szczepów bakterii antybiotykoopornych. Dla osób z atopowym zapaleniem skóry, bardzo niebezpieczne mogą okazać się także powszechnie występujące w populacji wirusy z rodziny Herpes. Zakażenie się przez pacjenta z AZS, popularnym wirusem opryszczki, może prowadzić do bardzo poważnego zakażenia dużych powierzchni skóry.
Istnieje zatem nagląca potrzeba opracowania skutecznego środka służącego prewencji oraz wspomagającego układ odpornościowy podczas zapaleń skóry, szczególnie kontaktowych zapaleń wywołanych przez jony metali, uwzględniającego kwestie etyczne ingerencji w biom człowieka i dążącego do wspomagania naturalnego biomu i przywrócenia równowagi flory bakteryjnej skóry, zaprojektowanego w sposób spersonalizowany z wykorzystaniem dobroczynnego biomu ze skóry pacjenta wzbogaconego o żywe kultury bakterii probiotycznych, eliminującego zagrożenie nadkażeń bakteryjnych i wirusowych oraz opartego na naturalnych i biozgodnych komponentach, jakimi są peptydy czy polisacharydy.
Istota wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja bakterii probiotycznych tlenowych lub fakultatywnie tlenowych, która charakteryzuje się tym, że zawiera szczepy bakterii Lactobacillus helveticus (108 CFU), Lactobacillus rhamnosus (108 CFU), Lactobacillus plantarum (108 CFU), Lactobacillus casei (108 CFU) i Lactococcus lactis (108 CFU), ureazo-ujemne, wykazujące wzrost w temperaturze 20-37°C, w pH wyższym od 3,0, przy czym szczepy te ponadto są negatywne pod względem ekspresji enzymów niklozależnych, w postaci maści, kremu, balsamu, mleczka lub w postaci sprayu stosowanego na skórę lub błony śluzowe.
Korzystnie kompozycja zawiera dodatkowo przynajmniej jedną z substancji pomocniczych wybraną spośród bakteriocyn, takich jak bakteriocyny przeciwko S. aureus, małych peptydów przeciwdrobnoustrojowych, takich jak histatyny, glutation, i/lub polioligosacharydów, takich jak chitozan i/lub kwas hialuronowy, korzystnie kompozycja zawiera chitozan i/lub kwas hialuronowy, również korzystnie zawiera dodatkowo przeciwzapalny peptyd, L-glutation oraz dodatkowe biopolimery, korzystnie biopolimer będący białkiem wiążącym metale lub funkcjonalnym dendrymerem.
Przedmiotem wynalazku jest również kompozycja według wynalazku do zastosowania w sposobie leczenia i zapobiegania chorobom skóry wywołanym przez Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli lub Candida sp., w szczególności do zwalczania populacji Pseudomonas aeruginosa na skórze lub do zapobiegania i leczenia nadkażeń Staphylococcus aureus, przy czym kompozycja zawiera dodatkowo bakteriocynę lub bakteriocyny.
Ponadto przedmiotem wynalazku jest kompozycja według wynalazku do zastosowania do wytwarzania kompozycji kosmetycznej do ochrony skóry przed patogenami: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli lub Candida sp., zwłaszcza Pseudomonas aeruginosa, w szczególności do zastosowania do ochrony biomu skóry przed populacją Pseudomonas aeruginosa.
Przedmiotem wynalazku jest także zestaw obejmujący w jednym pojemniku kompozycję według wynalazku, korzystnie w postaci zliofilizowanej, a w drugim pojemniku formulację kosmetyczną w postaci żelu, kremu, lotionu, maści lub mleczka, zawierającą 5% chitozan, która zawiera dodatkowo nośnik lub podłoże dla wzrostu bakterii w kompozycji zawartej w pierwszym pojemniku, korzystnie w pojemniku do podawania kompozycji w postaci sprayu, przy czym najpierw nanosi się na skórę lub błony śluzowe formulację kosmetyczną, a następnie po 15 minutach nanosi się suchą kompozycję bakterii probiotycznych z pierwszego pojemnika.
Szczegółowy opis wynalazku
Opisano w niniejszym dokumencie kompozycję bakterii probiotycznych tlenowych lub fakultatywnie tlenowych, wykazujących wzrost w temperaturze 20-37°C, zdolnych do wzrostu w pH wyższym od 3.0, u których nie występuje ekspresja enzymów niklozależnych albo/i innych białek wiażących nikiel, która zawiera szczepy bakterii, w których nie wykryto aktywności enzymatycznej niklozależnej, w szczególności nie stwierdzono aktywności enzymów takich jak: tentoksylizyna 3.4.24.68, ureaza 3.5.1.5, hydrolaza maleimidowa 3.5.2.16, anaerobowa dehydrogenaza tlenku węgla 1.2.7.4, dehydrogenaza wodorowa 1.12.1.2, dehydrogenaza wodorowa (NADP+) 1.12.1.3, dehydrogenaza cytochromu c3, 1.12.2.1, hydrogenaza koenzymu F420 1.12.98.1, 3-hydroksy-4-oksochinolino-2,4-dioksygenaza 1.13.11.47, dioksygenaza acyredukonu (wymagająca Ni(II)) 1.13.11.53, CO-metylująca acetylo-CoA syntaza 2.3.1.169, koenzymu-B sulfoetylothtransferaza hydrogenaza 5,10-metenylotetrahydrometanopteiny 1.12.98.2.
W szczególności kompozycja zawiera szczepy bakterii negatywnych pod względem ureazy spośród Lactobacillus sp., np. Lactobacillus ramnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactococcus sp. np. Lactococcus lactis, Bacillus sp. np. Bacillus subtilis, w szczególności szczepy wybrane spośród: Lactobacillus rhamnosus (108 CFU) albo Lactobacillus plantarum (1010 CFU) albo Lactobacillus acidophilus (109 CFU) albo Lactobacillus acidophilus (109 CFU) i Lactobacillus rhamnosus (109 CFU) albo Lactobacillus helveticus (108 CFU), Lactobacillus rhamnosus (108 CFU), Lactobacillus plantarum (108 CFU), Lactobacillus casei (108 CFU) i Lactococcus lactis (108 CFU).
Kompozycja może zawierać dodatkowo przynajmniej jedną z substancji pomocniczych wybraną spośród bakteriocyn, małych peptydów przeciwdrobnoustrojowych i/lub polioligosacharydów, korzystnie chitozan i/lub kwas hialuronowy i/albo zawiera dodatkowo przeciwzapalny peptyd, korzystnie L-glutation. Według wynalazku kompozycja może zawierać probiotyczne bakterie lub/i małe peptydy o selektywnym działaniu przeciwdrobnoustrojowym lub/i pochodną polioligosacharydu, korzystnie chitozanu, i/lub kwas hialuronowy w połączeniu z typowym podłożem kosmetycznym. Korzystnie kompozycja zawiera co najmniej jeden mały peptyd o selektywnym działaniu przeciwdrobnoustrojowym, od 0,01% do 20% wagowych, co najmniej jedną bacteriocynę od 0,01 do 5% wagowych; co najmniej jeden polioligosacharyd od 0,01% do 10% wagowych; co najmniej jeden szczep bakterii w ilości od 10 * 3 CFU/ml do 10 * 20 CFU/ml.
Kompozycja może mieć postaci kremu medycznego składającego się z naturalnych składników. W kompozycji mogą być obecne dodatkowe biopolimery, korzystnie biopolimer będący białkiem wiążącym metale lub funkcjonalnym dendrymerem. Rozważa się również kompozycję w postaci kapsułkowanej w bazowej kompozycji farmaceutycznej lub medycznej albo w postaci kapsułki dwudzielnej, która jest przeznaczona do zastosowania po zmieszaniu składników.
W opisie ujawniono również spersonalizowaną kompozycję bakterii probiotycznych zawierająca spersonalizowane bakterie probiotyczne pozbawione aktywności enzymów niklozależnych i/lub innych białek wiążących nikiel. Spersonalizowana kompozycja jest przeznaczona do zastosowania w preparatach leczniczych i prewencyjnych w zapaleniach skóry, a szczególnie zapaleniach kontaktowych, w tym w alergiach kontaktowych na metale, szczególnie nikiel.
Kompozycja według wynalazku jest przeznaczona do zastosowania do wzmacniania obrony organizmu przed patogenami zaburzającymi równowagę biomu organizmu, korzystnie do zwalczania populacji Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli lub Candida sp., zwłaszcza Pseudomonas aeruginosa.
Kompozycja jest przeznaczona do zastosowania do zapobiegania i leczenia nadkażeń grzybiczych i bakteryjnych, korzystnie nadkażeń bakteriami rodzaju Staphylococcus, w tym Staphylococcus aureus, przy czym kompozycja zawiera dodatkowo bakteriocynę lub bakteriocyny i/lub co najmniej jeden mały przeciwdrobnoustrojowy peptyd działający selektywnie i nieszkodliwy dla bakterii probiotycznych albo może być zastosowana do zapobiegania i leczenia nadkażeń wirusowych, korzystnie nadkażeń wirusami z rodziny Herpesviridae, w tym wirusem opryszczki pospolitej.
Kompozycja może być również stosowana w zapobieganiu i leczeniu stanów zapalnych skóry i nabyciu alergii kontaktowych, a w szczególności alergii na metale, w tym nikiel, u dzieci i niemowląt. Ponadto kompozycja może mieć zastosowanie do odbudowywania uszkodzonej bariery skórnej, w tym wspomagania gojenia uszkodzeń skóry powstałych podczas drapania, przez nanoszenie na skórę bakterii probiotycznych tlenowych lub fakultatywnie tlenowych, wykazujących wzrost w temperaturze 20-37°C, zdolnych do wzrostu w pH kwaśnym wyższym od 3,0, u których nie występuje ekspresja enzymów niklozależnych albo/i innych białek wiążących nikiel, w połączeniu z polisacharydem, korzystnie chitozanem lub kwasu hialuronowym.
Kompozycja może mieć również zastosowanie do leczenia i zapobiegania chorobom skóry, a szczególnie kontaktowym zapaleniom skóry wywołanym przez jony metali, w tym kobaltu, chromu, niklu i palladu. Kompozycja zawiera dodatkowe biopolimery, a w szczególności biopolimer będący białkiem wiążącym metale lub funkcjonalnym dendrymerem. Kompozycja może być zastosowana do zapobiegania i leczenia zakażeń patogennych bakteriami z aktywnością enzymów niklozależnych albo/i białek wiążących nikiel, w szczególności Pseudomonas aeruginoza.
Ujawniono również sposób wytwarzania spersonalizowanych preparatów probiotycznych, obejmujący etapy, w których wysiewa się wymaz ze skóry pacjenta, hoduje i identyfikuje główne szczepy biomu skóry z miejsca przejawiającego chorobowe zmiany skórne oraz z miejsca niezmienionego chorobowo, przeprowadza się analizę bioinformatyczną i porównuje się populacje drobnoustrojów z obu miejsc wymazu, następnie dobiera się lub modyfikuje genetycznie kultury bakterii probiotycznych wykazujących antagonistyczne działanie do drobnoustrojów patogennych/oportunistycznie patogennych wykazujących działanie zaburzające biom skóry w miejscu zmiany chorobowej. Korzystnie w sposobie oznacza się aktywność enzymów niklozależnych i/lub innych białek wiążących nikiel.
Przedmiotem wynalazku jest również zestaw obejmujący w jednym pojemniku kompozycję bakterii według wynalazku, korzystnie w postaci zliofilizowanej, a w drugim pojemniku podłoże kosmetyczne lub farmaceutyczne do nanoszenia na skórę, korzystnie krem, lotion, maść lub mleczko, które zawiera również nośnik lub podłoże dla bakterii. Zestaw ten stosuje się przez naniesienie na skórę lub błony śluzowe formulacji kosmetycznej w postaci kremu, lotionu, maści lub mleczka z drugiego pojemnika, po czym po 15 minutach nanosi się suchą kompozycję bakterii probiotycznych w postaci sprayu z pierwszego pojemnika. Korzystnie sucha kompozycja zawiera kompozycje bakterii probiotycznych w postaci liofilizowanej.
Szczegółowy opis wynalazku
Istotą wynalazku jest to, że kiedy równowaga na skórze zostaje zaburzona, co często prowadzi do zapaleń skóry, na skórze zaczynają być obecne w znacznej przewadze bakterie z rodzaju Firmicutes, czy też fakultatywnie patogenne Escherichia coli czy Pseudomonas aeruginosa. Wszystkie te bakterie zawierają białka i enzymy niklozależne. Nikiel silnie związany do tych białek po wydostaniu się z komórek, może wnikać do skóry i indukować odpowiedź zapalną. Kompleksy niklu mogą być immunogenne. Istotą wynalazku jest przywracanie równowagi bakteryjnej w organizmie, a przede wszystkim na skórze człowieka i zwierząt, z wykorzystaniem koktajli bakterii probiotycznych, które są tlenowe lub fakultatywnie tlenowe, zdolne do przetrwania na skórze i nie zawierają enzymów niklozależnych. Według wynalazku wykazano doskonałe działanie koktajli bakterii probiotycznych przeciwko Pseudomonas aeruginosa oraz Escherichia coli. Istotą wynalazku jest wykorzystanie bakteriocyn i substancji produkowanych przez bakterie probiotyczne w leczeniu wewnętrznych zakażeń powodowanych szczególnie przez Pseudomonas aeruginosa i Escherichia coli, w tym sepsy.
Stabilność immunogennych kompleksów niklu maleje wraz z obniżaniem się pH (Inorg. Chem., 2014, 53 (9), str. 4639-4646).
Ujawniono w opisie nowe zastosowanie kompozycji bakterii probiotycznych w tworzeniu spersonalizowanych kompozycji farmaceutycznych do zastosowania w preparatach leczniczych i prewencyjnych w zapaleniach skóry, a szczególnie zapaleniach kontaktowych, w tym w alergiach kontaktowych na metale. Probiotyczne bakterie dobiera się w sposób spersonalizowany, zwłaszcza w przypadku alergii na metale, a szczególnie nikiel. Bakterie probiotyczne w kompozycji według wynalazku nie mają niklozależnych enzymów lub innych białek, które wiążą nikiel i pozostają na skórze w postaci materiału biologicznego, który może być dla osób z alergią niklową wysoce immunogenny.
Sposób tworzenia spersonalizowanych preparatów, polega na pobraniu wymazu ze skóry pacjenta, wyhodowaniu i zidentyfikowaniu głównych szczepów biomu skóry w miejscu przejawiającym chorobowe zmiany skórne oraz w miejscu niezmienionym chorobowo, cechującym się dobrą kondycją skóry. Następnie przeprowadza się analizę bioinformatyczną i porównanie drobnoustrojów z obu miejsc pobrania, po czym dobiera się odpowiednie kultury bakterii probiotycznych wykazujących antagonistyczne działanie do drobnoustrojów patogennych / oportunistycznie patogennych wykazujących działanie zaburzające biomu skóry w miejscu zmiany chorobowej.
W opisanym rozwiązaniu korzystne jest zastosowanie bakterii o odpowiednim garniturze genowym, uwzględniającym etiologię schorzenia, w szczególności w leczeniu i prewencji alergiom na metale, zwłaszcza nikiel, w szczególności zastosowanie w preparatach probiotycznych bakterii nie zawierających niklozależnych enzymów i kluczowych białek wiążących nikiel (np. tentoksylizyna 3.4.24.68, ureaza 3.5.1.5, hydrolaza maleimidowa 3.5.2.16, anaerobowa dehydrogenaza tlenku węgla 1.2.7.4, dehydrogenaza wodorowa 1.12.1.2, dehydrogenaza wodorowa (NADP+) 1.12.1.3, dehydrogenaza cytochromu c3, 1.12.2.1, hydrogenaza koenzymu F420 1.12.98.1, 3-hydroksy-4-oksochinolino-2,4-dioksygenaza 1.13.11.47, dioksygenaza acyredukonu (wymagająca Ni(II)) 1.13.11.53, CO-metylująca acetyloCoA syntaza 2.3.1.169, koenzymu-B sulfoetylothtransferaza hydrogenaza 5,10-metenylotetrahydrometanopteiny 1.12.98.2).
Szczepy wykorzystane w rozwiązaniu według wynalazku to tlenowe lub fakultatywnie tlenowe bakterie probiotyczne wykazujące wzrost w temperaturze 20-37 stopni Celsjusza, zdolne do wzrostu w pH kwaśnym wyższym od 3.0, korzystnie nie zawierające enzymów niklozależnych, takich jak: tentoksylizyna 3.4.24.68, ureaza 3.5.1.5, hydrolaza maleimidowa 3.5.2.16, anaerobowa dehydrogenaza tlenku węgla 1.2.7.4, dehydrogenaza wodorowa 1.12.1.2, dehydrogenaza wodorowa (NADP+) 1.12.1.3, dehydrogenaza cytochromu c3, 1.12.2.1, hydrogenaza koenzymu F420 1.12.98.1, 3-hydroksy-4-oksochinolino-2,4-dioksygenaza 1.13.11.47, dioksygenaza acyredukonu (wymagająca Ni(II)) 1.13.11.53, CO-metylująca acetylo-CoA syntaza 2.3.1.169, koenzymu-B sulfoetylothtransferaza 2.8.4.1, hydrogenaza 5,10-metenylotetrahydrometanopteiny 1.12.98.), a szczególnie urease negative Lactobacillus sp., np. Lactobacillus ramnosus, Lactobacillus plantarum Lactobacillus acidophilus, Lactococcus sp. np. Lactococcus Lactis, Bacillus sp. np. Bacillus subtilis.
W rozwiązaniu według wynalazku istotne jest wspieranie naturalnej flory bakteryjnej w obronie organizmu przed patogenami zaburzającymi nadmiernym wzrostem równowagę biomu skóry np. Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Candida sp., w szczególności Pseudomonas aeruginosa.
W opisanym rozwiązaniu przeciwdziałanie objawom zapalenia skóry według wynalazku obejmuje odbudowanie uszkodzonej bariery skórnej, łagodzenie świądu, łagodzenie stanów zapalnych, zapobieganie nadkażeniom grzybiczym i bakteryjnym, gojenie się uszkodzonej drapaniem skóry. Odbudowywanie uszkodzonej bariery skórnej może być wspomagane przez korzystne działanie polisacharydu, zwłaszcza chitozanu lub kwasu hialuronowego, w tym w szczególności do gojenia uszkodzeń skóry powstałych podczas drapania. Łagodzenie świądu może być uzyskiwane poprzez zastosowanie polisacharydu, korzystnie chitozanu, a łagodzenie stanów zapalnych skóry poprzez zastosowanie przeciwzapalnych peptydów, korzystnie L-glutationu. Do nawilżania skóry można dodatkowo stosować w kompozycji farmaceutycznej odpowiedni polisacharyd, korzystnie chitozan lub kwas hialuronowy.
Zapobieganie nadkażeniom grzybiczym i bakteryjnym, korzystnie nadkażeniom bakteriami rodzaju Staphylococcus, w tym Staphylococcus aureus, wzmacnia się poprzez wykorzystanie bakteriocyn i/lub małych przeciwdrobnoustrojowych peptydów działających selektywnie i nieszkodliwych dla bakterii probiotycznych.
W opisanym rozwiązaniu, które obejmuje kompleksowo powyżej wymienione punkty, w tym zwłaszcza leczenie i zapobieganie zapaleniom skóry, a szczególnie kontaktowym zapaleniom skóry wywołanym przez jony metali, w tym kobaltu, chromu, niklu i palladu.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja zawierająca probiotyczne bakterie lub/i małe peptydy o selektywnym działaniu przeciwdrobnoustrojowym lub/i pochodną polioligosacharydu, zwłaszcza chitozanu, i/lub chitozan w połączeniu z typowym podłożem kosmetycznym. Korzystnie kompozycją farmaceutyczną jest krem składający się wyłącznie z naturalnych składników, bezpiecznych dla wrażliwej skóry alergików lub żel chitozanowy (chitozan/dejonizowana woda) lub żel chitozanowo - hialuronowy (chitozan/kwas hialuronowy/woda). Korzystnie kompozycja kosmetyczna jest w postaci maści, kremu, balsamu, mleczka.
Opisana kompozycja jest przeznaczona do zastosowania w zapobieganiu zapaleniom skóry lub wspomaganiu ich leczenia i może być również stosowana w zapobieganiu zapaleniom skóry i nabyciu alergii kontaktowych a w szczególności alergii na metale, w tym nikiel, u dzieci i niemowląt.
W korzystnym zastosowaniu kompozycja kosmetyczna lub farmaceutyczna może być zastosowana do leczenia objawów zapalenia skóry, a także do zapobiegania objawom zapalenia skóry, w tym zapobiegania ich wystąpieniu (prewencja).
Kompozycja może zawierać spersonalizowany koktajl bakterii probiotycznych lub/i przeciwzapalne peptydy lub/i biozgodny polisacharyd działający kompleksowo, korzystnie chitozan, jako substancję wykorzystaną do wspomagania bakterii probiotycznych oraz korzystnie w gojeniu skóry. Chitozan wykazuje działanie kompleksowe.
Krótki opis rysunku
Wynalazek w przykładach realizacji został bardziej szczegółowo objaśniony w oparciu o rysunek, na którym:
fig. 1 przedstawia wzrost mikroorganizmów na szalkach o odpowiednio dobranych podłożach (Mannitol Salt Agar oraz Letheen Agar z lecytyną & TWEEN 80), pobranych ze skóry przed zastosowaniem żelu chitozanowego na skórę oraz 15 minut po zastosowaniu żelu chitozanowego (wspomagającego działanie koktajli probiotycznych poprzez działanie biobójcze na bakterie szczepów patogennych) na skórę u pacjenta numer I.
fig. 2 przedstawia wzrost mikroorganizmów na szalkach przeznaczonych do izolacji szerokiego spektrum mikroorganizmów z kosmetyków (Letheen Agar z lecytyną & TWEEN 80), pobranych ze skóry przed zastosowaniem żelu chitozanowego (wspomagającego działanie koktajli probiotycznych poprzez działanie biobójcze na bakterie szczepów patogennych) na skórę oraz 15 minut po zastosowaniu żelu chitozanowego na skórę u pacjenta numer II oraz III.
fig. 3 przedstawia wzrost bakterii z rodzaju Staphylococcus na szalkach przeznaczonych do izolacji i rozróżnienia bakterii z rodzaju Staphylococcus (Mannitol Salt Agar), pobranych ze skóry przed zastosowaniem żelu chitozanowego na skórę oraz 15 minut po zastosowaniu żelu chitozanowego (wspomagającego działanie koktajli probiotycznych poprzez działanie biobójcze na bakterie szczepów patogennych) na skórę u pacjenta numer II oraz III.
fig. 4 przedstawia wzrost bakterii z rodzaju Staphylococcus na szalkach przeznaczonych do izolacji i rozróżnienia bakterii z rodzaju Staphylococcus (Mannitol Salt Agar), z zaznaczeniem rozróżnienia szczepów Staphylococcus epidermitis oraz Staphylococcus aureus.
Poniżej przedstawiono przykłady wykonania wynalazku. Należy wskazać, że poniższe przykłady nie stanowią ograniczenia wynalazku, lecz przedstawiają jego najkorzystniejszą realizację.
Przykład I
Bioinformatyczna analiza genotypu bakterii popularnie bytujących na skórze człowieka pod kątem obecności enzymów i białek niklozależnych.
Przeprowadzono analizę bioinformatyczną z wykorzystaniem baz Brenda (http://www.brenda-en- zymes.org/index.php) oraz UniProt (np. stosując analizę biosekwencji z użyciem profilu ukrytych modeli Markova) pod kątem obecności enzymów niklozależnych w gatunkach patogennych i fakultatywnie patogennych, które występują na skórze człowieka, do badań włączono szczepy Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphyloccocus epidermitis. Przeszukanie wykonano pod kątem 13 metalozależnych białek, wypunktowanych (punkty a-m) poniżej.
a. 1.2.7.4 anaerobic carbon-monoxide dehydrogenase
b. 1.12.1.2 hydrogen dehydrogenase
| c. | 1.12.1.3 | hydrogen dehydrogenase (NADP+) |
| d. | 1.12.2.1 | cytochrome-c3 hydrogenase |
| e. | 1.12.98.1 | coenzyme F420 hydrogenase |
| f. | 1.12.98.2 | 5,10-methenyltetrahydromethanopterin hydrogenase |
| g. | 1.13.11.47 | 3-hydroxy-4-oxoquinoline 2,4-dioxygenase |
| h. | 1.13.11.53 | acireductone dioxygenase (Ni2+-requiring) |
| i. | 2.3.1.169 | CO-methylating acetyl-CoA synthase |
| j. | 2.8.4.1 | coenzyme-B sulfoethylthiotransferase |
| k. | 3.4.24.68 | tentoxilysin |
| l. | 3.5.1.5 | urease |
| m. | 3.5.2.16 | maleimide hydrolase |
Enzymy i białka niklozależne są obecne we wszystkich wymienionych powyżej patogennych lub fakultatywnie patogennych bakteriach będących częścią biomu skóry człowieka.
Analogiczne przeszukanie przeprowadzono dla tlenowych lub fakultatywnie tlenowych bakterii probiotycznych z rodzaju Lactococcus sp., Lactobacillus sp.. Wytypowano bakterie probiotyczne, które nie zawierają enzymów ani białek niklozależnych takie jak Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus helveticus, Lactococcus lactis. W analizowano również występowanie enzymu ureazy, ponieważ niektóre bakterie mlekowe zawierają niklozależną ureazę. Wybrano więc bakterie ureazo-negatywne.
Mogą być stosowane następujące szczepy osobno lub w kombinacji: Bacillus subtilis ATCC® 11774, Bacillus subtilis ATCC® 19659, Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC® 11454, Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC® 19435, Lactobacillus plantarum ATCC® 8014, Lactobacillus rhamnosus ATCC® 7469, Lactobacillus rhamnosus ATCC® 7469, Candida albicans ATCC® 10231, Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC® 25923, Staphylococcus epidermidis ATCC® 12228, Pseudomonas aeruginosa ATCC® 10145, Escherichia coli ATCC® 25922.
Przykład II
Sposób liofilizacji kompozycji zawierających bakterie probiotyczne według wynalazku
W celu zliofilizowania bakterii postępowano zgodnie z procedurą zaproponowaną poniżej. Praca była wykonywana w warunkach jałowych z zachowaniem niezbędnego bezpieczeństwa.
1. Monokulturę bakterii wysiano na szalce lub skosie agarowym z podłożem pełnym lub do bulionu odżywczego.
2. Po 1-2 dobach kilkukrotnie spłukano agar 10 ml jałowego roztworu soli fizjologicznej lub zwirowano bakterie w bulionie i przeniesiono do 10 ml jałowego roztworu fizjologicznego.
3. Zawiesinę bakterii w roztworze fizjologicznym przeniesiono ilościowo do probówki wirówkowej.
4. Zwirowano zawiesinę bakterii.
5. Zlano supernatant i dodać 10 ml roztworu soli fizjologicznej.
6. Zwirowano zawiesinę bakterii lub przefiltrować przez filtr celulozowy 0,45 μm lub 0,22 μm.
7. Zlano supernatant i dodać 10 ml roztworu medium do liofilizacji (np. mleko).
8. W zależności od przewidywanej gęstości rozdzielono zawiesinę do probówek do liofilizacji (najlepiej nie więcej niż 500 μl).
9. Szybko (suchy lód, zmrożony etanol) schłodzono probówki.
10. Zamrożone probówki umieszczono na liofilizatorze ustawionym na maksymalną próżnię i minimalną temperaturę.
11. Po godzinie podniesiono temperaturę do od -25°C do -15°C (w zależności od użytej pożywki - dla sacharozy i mleka -25).
12. Pozostawiono do zakończenia procesu liofilizacji.
Według tej procedury przygotowano 5 zliofilizowanych koktajli bakterii probiotycznych.
1) Lactobacillus rhamnosus (108 CFU)
2) Lactobacillus plantarum (1010 CFU)
3) Lactobacillus acidophilus (109 CFU)
4) Lactobacillus acidophilus (109 CFU)
PL 246651 Β1
Lactobacillus rhamnosus (109 CFU)
5) Lactobacillus helveticus (108 CFU)
Lactobacillus rhamnosus (108 CFU)
Lactobacillus plantarum (108 CFU)
Lactobacillus casei (108 CFU)
Lactococcus lactis (108 CFU)
Przykład III
Badanie działania koktajli probiotycznych na wzrost Pseudomonas aeruginosa
Badano wpływ koktajli zawierających żywe bakterie probiotyczne opisanych w przykładzie II i oznaczonych cyframi od 1 do 5, na wzrost bakterii patogennych Pseudomonas aeruginosa.
Wzorcowy szczep Pseudomonas aeruginosa wysiano do bulionu odżywczego i inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Jednocześnie wysiano do bulionu pięć wzorcowych koktajli probiotycznch i inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Następnie pobrano po 0,5 ml każdego z pięciu koktajli probiotycznych i dodano do nich po 0,5 ml bulionu odżywczego zawierającego szczep wzorcowy Pseudomonas aeruginosa, 5 probówek z mieszaninami szczepów bakteryjnych inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Następnie wysiano na szalki odpowiednie do wzrostu Pseudomonas aeruginosa (agar CETR). Kontrole z koktajli szczepów probiotycznych wysiano na pożywkę pełną TSA Tryptic Soy Agar). Wszystkie szalki inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Po okresie inkubacji dokonano oceny wzrostu i inkubowano kolejne 24 godziny w temperaturze 36°C. Wyniki zestawiono poniżej.
| Oznaczenie szczepów | Czas inkubacji | Posiew kontrolny bakterii probiotycznych (TSA) | |
| 24 godziny | 48 godzin | ||
| Szczep wzorcowy Pseudomonas aeruginosa | wzrost zlewny | wzrost zlewny | nie dotyczy |
| 1 | brak wzrostu | brak wzrostu | +4-++ |
| 2 | brak wzrostu | brak wzrostu | +++ |
| 3 | brak wzrostu | brak wzrostu | + |
| 4 | Wyraźne zahamowanie wzrostu (ok. 70%) | Wyraźne zahamowanie wzrostu (ok. 70%) | |
| 5 | brak wzrostu | brak wzrostu | +++ |
+ - słaby wzrost ++ - średni wzrost +++ - liczne kolonie ++++ - bardzo liczne kolonie
Powyżej przedstawiony przykład ilustruje bardzo silnie, hamujące działanie koktajli zawierających bakterie probiotyczne na wzrost i namnażanie Pseudomonas aeruginosa w warunkach temperatury i pH charakterystycznych dla skóry ludzkiej, co sugeruje potencjalną wysoką aktywność koktajli według wynalazku in vivo, w przypadku leczenia i prewencji chorób powodowanych przez zakażenia P. aeruginosa.
Przykład IV
Badanie działania koktajli probiotycznych na wzrost Staphylococcus aureus
Badano wpływ koktajli zawierających żywe bakterie probiotyczne opisanych w przykładzie II i oznaczonych cyframi od 1 do 5, na wzrost bakterii patogennych Staphylococcus aureus.
Wzorcowy szczep Staphylococcus aureus wysiano do bulionu odżywczego i inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Jednocześnie wysiano do bulionu pięć wzorcowych koktajli probiotycznch i inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Następnie pobrano po 0,5 ml każdego z pięciu koktajli probiotycznych i dodano do nich po 0,5 ml bulionu odżywczego zawierającego szczep wzorcowy Staphylococcus aureus, 5 probówek z mieszaninami szczepów bakteryjnych inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Następnie wysiano na szalki odpowiednie do wzrostu Staphylococcus aureus (podłoża różnicujące: agar Chromagar Staphylococcus aureus (STAPH) oraz podłoże Barid Parker (BP), podłoże pełne Tryptic Soy Agar (TSA)). Kontrole z koktajli szczepów probiotycznych wysiano na
PL 246651 Β1 pożywkę pełną TSA. Wszystkie szalki inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Po okresie inkubacji dokonano oceny wzrostu i inkubowano kolejne 24 godziny w temperaturze 36°C. Wyniki zestawiono poniżej.
| Oznaczenie szczepów | Czas inkubacji | |
| 24 godziny | 48 godzin | |
| Szczep wzorcowy Staphylococcus aureus | wzrost zlewny (TSA, BP, STAPH) | wzrost zlewny (TSA, BP, STAPH) |
| 1 | wzrost zlewny | wzrost zlewny |
| 2 | ++ | |
| 3 | brak wzrostu | brak wzrostu |
| 4 | + | ++ |
| 5 | wzrost zlewny | wzrost zlewny |
+ - słaby wzrost (zahamowany) ++ - średni wzrost (nieznacznie zahamowany)
Powyżej przedstawiony przykład ukazuje silnie hamujące działanie koktajlu numer 3 oraz hamujące w mniejszym stopniu działanie koktajli 2, 4 zawierających bakterie probiotyczne na wzrost i namnażanie Staphylococcus aureus w warunkach temperatury i pH charakterystycznych dla skóry ludzkiej, co sugeruje potencjalną aktywność koktajli według wynalazku in vivo, w przypadku leczenia i prewencji chorób powodowanych przez zakażenia S. aureus. Słabsza aktywność koktajli w porównaniu do działania bójczego na P. aeruginosa, sugeruje w tym przypadku konieczność wspomagania dla skuteczniejszego działania koktajli bazami według wynalazku (baza kosmetyczna według wynalazku lub żel farmaceutyczny zawierającymi polioligosacharyd, szczególnie chitozan, przeciwdrobnoustrojowe peptydy, szczególnie histatyny i glutation lub/i wybrane bakteriocyny skuteczne przeciwko S. aureus).
Przykład V
Badanie działania koktajli probiotycznych na wzrost Escherichia coli
Badano wpływ koktajli zawierających żywe bakterie probiotyczne opisanych w przykładzie II i oznaczonych cyframi od 1 do 5, na wzrost bakterii patogennych Escherichia coli.
Wzorcowy szczep Escherichia coli wysiano do bulionu odżywczego i inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Jednocześnie wysiano do bulionu pięć wzorcowych koktajli probiotycznch i inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Następnie pobrano po 0,5 ml każdego z pięciu koktajli probiotycznych i dodano do nich po 0,5 ml bulionu odżywczego zawierającego szczep wzorcowy Escherichia coli, 5 probówek z mieszaninami szczepów bakteryjnych inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Następnie wysiano na szalki odpowiednie do wzrostu Escherichia coli (MacConkey agar (MC)). Kontrole z koktajli szczepów probiotycznych wysiano na pożywkę pełną TSA (Tryptic Soy Agar). Wszystkie szalki inkubowano 24 godziny w temperaturze 36°C. Po okresie inkubacji dokonano oceny wzrostu i inkubowano kolejne 24 godziny w temperaturze 36°C. Wyniki zestawiono poniżej.
| Oznaczenie szczepów | Czas inkubacji | Posiew kontrolny bakterii probiotycznych (TSA) | |
| 24 godziny | 48 godzin | ||
| Szczep wzorcowy Escherichia coli | wzrost zlewny | wzrost zlewny | nie dotyczy |
| 1 | brak wzrostu | brak wzrostu | 4-+4-4- |
| 2 | brak wzrostu | brak wzrostu | +++ |
| 3 | brak wzrostu | brak wzrostu | + |
| 4 | brak wzrostu | brak wzrostu | +++ |
| 5 | brak wzrostu | brak wzrostu | +++ |
+ - słaby wzrost ++ - średni wzrost +++ - liczne kolonie ++++ - bardzo liczne kolonie
PL 246651 Β1
Powyżej przedstawiony przykład przedstawia bardzo silnie, hamujące działanie koktajli zawierających bakterie probiotyczne na wzrost i namnażanie Escherichia coli w warunkach temperatury i pH charakterystycznych dla skóry ludzkiej, co sugeruje potencjalną wysoką skuteczność koktajli według wynalazku in vivo, w przypadku leczenia i prewencji chorób powodowanych przez zakażenia E. coli.
Przykład VI
Badanie działania koktajli probiotycznych na wzrost Candida albicans
Badano wpływ koktajli zawierających żywe bakterie probiotyczne opisanych w przykładzie II i oznaczonych cyframi od 1 do 5, na wzrost bakterii patogennych Candida albicans.
Wzorcowy szczep Candida albicans wysiano do bulionu odżywczego i inkubowano 24 godziny w temperaturze 25°C. Jednocześnie wysiano do bulionu pięć koktajli probiotycznych i inkubowano 24 godziny w temperaturze 25°C. Następnie pobrano po 0,5 ml każdego z pięciu koktajli probiotycznych i dodano do nich po 0,5 ml bulionu odżywczego zawierającego szczep wzorcowy Candida albicans, 5 probówek z mieszaninami szczepów bakteryjnych inkubowano 24 godziny w temperaturze 25°C. Następnie wysiano na szalki odpowiednie do wzrostu Candida albicans (podłoża różnicujące: agar Chromagar Candida (CAND) oraz podłoże Sabouraud Dextrose Agar (SD), podłoże pełne Tryptic Soy Agar (TSA)). Kontrole z koktajli szczepów probiotycznych wysiano na pożywkę pełną TSA. Wszystkie szalki inkubowano 48 godzin w temperaturze 25°C. Po okresie inkubacji dokonano oceny wzrostu i inkubowano kolejne 48 godzin w temperaturze 25°C. Wyniki zestawiono poniżej.
| Oznaczenie szczepów | Czas inkubacji | |
| 48 godzin | 96 godzin | |
| Szczep wzorcowy Candida albicans | ++++ (TSA, SD, CAND) | 4-4-4- + (TSA, SD, CAND) |
| 1 | ++++ | ++++ |
| 2 | ++ | +++ |
| 3 | ++ | +++ + |
| 4 | +++ | +++ + |
| 5 | 4- | ++ |
+ - słaby wzrost (zahamowany) ++ - średni wzrost (nieznacznie zahamowany) +++ - znaczny wzrost ++++ - liczne kolonie
Przykład VII
A) Przygotowanie bazowej formulacji kosmetycznej A zawierającej chitozan oraz kwas mlekowy w zastosowaniu wspomagającym dla bakterii probiotycznych
Formulacja kosmetyczna według wynalazku zawierająca w swoim składzie polioligosacharyd, chitozan oraz kwas mlekowy, została przygotowana według procedury opisanej poniżej, w procesie technologicznym tworzenia emulsji na gorąco.
PL 246651 Β1
PROCEDURA TECHNOLOGICZNA TWORZENIA EMULSJI NA GORĄCO
| Lp. | Nazwa handlowa | INCI | Faza | |
| 1 | Woda | Woda | 64,2945% | A |
| 2 | Gliceryna (czystość farmaceutyczna) | Gliceryna | 3,000 | A |
| 3 | Tegosoft P | Palmitynian izopropylu | 2,000 | B |
| 4 | Tegosoft CT | Kaprylowy/kaprylowy trigliceryd | 2,000 | B |
| 5 | Tego Care PBS-6 | Stearynian Poliglycerylu-6 (3,92%), Beheman Poliglycerylu-6 (0,6%) | 4,000 | B |
| 6 | Tegin M Peletki | Stearynian glicerolu | 3,000 | B |
| 7 | Purolan IHD | Izoheksadekan | 2,00 | B |
| 8 | Tego Alkanol 1618 | Alkohol cetearylowy | 2,000 | B |
| 9 | Masło Shea | Butyrospermum Parkii Masło | 3,000 | B |
| 10 | Vitamme E | Octan tokoferylu | 0,200 | C |
| 11 | D-panthenol 75% | D-Panthenol | 0,523(=0.3925%) | C |
| 12 | Origanox WS | Ektrakt z lebiodki pospolitej | 0,500 | C |
| 13 | Euxyl K712 | Sorbinan potasu (0,157%), Benzoesan sodu (0,315%) | 1,000 | C |
| 14 | Chitozan Rozpuszczony w kwasie mlekowym | 5% chitozan w 1,5% kwasie mlekowym | Woda: 12,6225 Kwas mlekowy: 0,2025 Chitozan: 0,675 | D |
Substancje należące do fazy wodnej i olejowej należy mieszać osobno, uprzednio ogrzane do 343 K. Połączyć substancje należące do obu faz i homogenizować minimum 1 minutę na 100 g z prędkością 30000 RMP. Następnie ostudzić do 313 K. Dla usunięcia zakumulowanego powietrza mieszać powoli na mieszadle magnetycznym z prędkością nie większą niż 200 RMP. Po ostudzeniu dodać antyoksydanty, małe peptydy, bakteriocyny, konserwanty oraz kompozycje zapachowe. Na końcu do wytworzonej emulsji dodać porcjami, bardzo powoli chitozan, cały czas mieszając, aż do pozyskania homogennej formulacji.
PL 246651 Β1
B) Przygotowanie bazowej formulacji kosmetycznej B zawierającej chitozan, bakteriocyny oraz przeciwdrobnoustrojowe peptydy w zastosowaniu wspomagającym dla bakterii probiotycznych
Formulacja kosmetyczna według wynalazku zawierająca w swoim składzie polioligosacharyd chitozan, kwas mlekowy, zredukowany-L-glutation oraz Histatynę 5 i Histatynę 3, została przygotowana według procedury opisanej poniżej, w procesie technologicznym tworzenia emulsji na gorąco.
PROCEDURA TECHNOLOGICZNA TWORZENIA EMULSJI NA GORĄCO
| Lp. | Nazwa handlowa | INGI ; | (%)B | Faza |
| 1 | Woda | Woda | 54.2945% | A |
| 2 | Histatyna 3 Histatiy n a 5 L-zredukowany glutation | Nie stosuje się, peptydy rozpuszczalne w wodzie do stężenia 1% | 10 | A |
| 2 | Gliceryna (czystość farmaceutyczna) | Gliceryna | 3.000 | A |
| 3 | Tegosoft P | Palmitynian izopropylu | 2.000 | B |
| 4 | Tegosoft CT | Kaprylowy/kaprylowy trigliceryd | 2.000 | B |
| 5 | Tego Care PBS-6 | Stearynian Poliglycerylu-6 (3,92%), Behenian Poliglycerylu-6 (0,6%) | 4.000 | B |
| 6 | Tegin M Peletki | Stearynian glicerolu | 3.000 | B |
| 7 | Purolan IHD | Izoheksadekan | 2.00 | B |
| 8 | Tego Alkanol 1618 | Alkohol cetearylowy | 2.000 | B |
| 9 | Masło Shea | Butyrospermum Parkii Masło | 3.000 | B |
| 10 | Vitamina E | Octan tokoferylu | 0.200 | C |
| 11 | D-pantenol 75% | D-Pantenol | 0.523(=0.3925%) | C |
| 12 | Origanox WS | Ektrakt z lebiodki pospolitej Origanum vulgare | 0.500 | C |
| 13 | Euxyl K712 | Sorbinan potasu (0,157%), Benzoesan sodu (0,315%) | 1.000 | C |
| 14 | Chitozan rozpuszczony w kwasie mlekowym | Chitozan, 5% chitozan w 1,5% kwasie mlekowym | Woda: 12.6225 Kwas mlekowy: 0.2025 Chitozan: 0.675 | D |
PL 246651 Β1
Substancje należące do fazy wodnej i olejowej należy mieszać osobno, uprzednio ogrzane do 343 K. Połączyć substancje należące do obu faz i homogenizować minimum 1 minutę na 100 g z prędkością 30000 RMP. Następnie ostudzić do 313 K. Dla usunięcia zakumulowanego powietrza mieszać powoli na mieszadle magnetycznym z prędkością nie większą niż 200 RMP. Po ostudzeniu dodać antyoksydanty, małe peptydy, bakteriocyny, konserwanty oraz kompozycje zapachowe. Na końcu do wytworzonej emulsji dodać porcjami, bardzo powoli chitozan, cały czas mieszając, aż do pozyskania homogennej formulacji.
Przykład VII
Badanie czystości mikrobiologicznej formulacji kosmetycznej proponowanej według wynalazku jako baza dla koktajli probiotycznych
Formulacja kosmetyczna według wynalazku zawierająca w swoim składzie polioligosacharyd, chitozan, została przebadana pod kątem czystości mikrobiologicznej w zewnętrznym certyfikowanym laboratorium Ita-Test według procedury PB39/ChM Ita-Teast wyd. 2 z dnia 05/08/2008.
Nie stwierdzono obecności Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans oraz Staphylococcus aureus. Ogólna liczba tlenowych drobnoustrojów, w tym bakterii mezofilnych oraz grzybów i pleśni nie przekracza 10 jtk/g.
Na podstawie tych wyników można jednoznacznie stwierdzić czystość mikrobiologiczną bazowej formulacji kosmetycznej według wynalazku.
Przykład VIII
Badania dermatologiczne proponowanej według wynalazku jako baza dla koktajli probiotycznych
Formulacja kosmetyczna według wynalazku zawierająca w swoim składzie polioligosacharyd, chitozan, została przebadana pod kątem bezpieczeństwa dermatologicznego z udziałem 20 probantów według procedury zgodnej z Rozporządzeniem parlamentu Europejskiego nr 1223/2009. Na prośbę zleceniodawcy badania zostały przeprowadzone w firmie zewnętrznej posiadającej odpowiednie certyfikacje oraz pozwolenia dotyczące prowadzenia testów dermatologicznych. Na podstawie wyników opisanych w tabeli poniżej można jednoznacznie stwierdzić bezpieczeństwo zastosowania na skórę bazowej formulacji kosmetycznej według wynalazku.
| Numer probanta - Ochotnika | Wiek | Płeć | Rodzaj skóry | Wynik badania po 48h | Wynik badania po 72h |
| 1 | 44 | K | S | (-) | (-) |
| 2 | 58 | K | N | (-) | (-) |
| 3 | 29 | K | N | (-) | (-) |
| 4 | 35 | K | S | (-) | (-) |
| 5 | 56 | M | N | (-) | (-) |
| 6 | 53 | K | N | (-) | (-) |
| 7 | 48 | K | S | (-) | (-) |
| 8 | 40 | K | S | (-) | (-) |
| 9 | 39 | K | N | (-) | (-) |
| 10 | 30 | K | S | (-) | (-) |
| 11 | 53 | K | S | (-) | (-) |
| 12 | 41 | K | N | (-) | (-) |
| 13 | 49 | M | N | (-) | (-) |
PL 246651 Β1
| Numer probanta - Ochotnika | Wiek | Płeć | Rodzaj skóry | Wynik badania po 48h | Wynik badania po 72h |
| 14 | 37 | K | N | (-) | (-) |
| 15 | 37 | K | N | (-) | (-) |
| 16 | 38 | K | S | (-) | (-) |
| 17 | 59 | K | N | (-) | (-) |
| 18 | 26 | K | N | (-) | (-) |
| 19 | 33 | K | N | (-) | (-) |
| 20 | 33 | K | N | (-) | (-) |
(-) - brak odczynu (+)/(-) - słaby rumień (++) - rumień (+++) - rumień, grudki (++++) - rumień, słaby obrzęk (+++++) - rumień, naciek, pęcherzyki
Płeć: K - kobieta M - mężczyzna
Rodzaj skóry: S - sucha, N - normalna, M - mieszana, Ł - mieszana ze skłonnością do łojotoku
Na podstawie wyników przeprowadzonych testów kontaktowych półotwartych, stwierdzono, że badany od względem dermatologicznych preparat, spełnia wymagania testu zgodności ze skórą (Skin Compatibility Test).
Przykład IX
Badanie wpływu bazowej kompozycji farmaceutycznej na florę skóry człowieka
Na potrzeby badania przygotowano żel, zawierający w swoim składzie 5% chitozanu. Ze skóry 3 ochotników pobierano posiewy bakteryjne i hodowano bakterie na podłożach pełnych i różnicujących względem Staphylococcus aureus oraz Staphylococcus epidermitis (Mannitol Salt Agar oraz Letheen Agar z lecytyną & TWEEN 80). Następnie na miejsca, z których pobrano bakterie nanoszono przygotowany na potrzeby badania żel chitozanowy w celu wyeliminowania flory patogennej. Po 15 minutach powtarzano posiew z danego miejsca i hodowano bakterie na podłożach pełnych i różnicujących. U wszystkich badanych osób żel wyraźnie hamował namnażanie bakterii fakultatywnie patogennych. W ten sposób przygotowano skórę do naniesienia koktajli probiotycznych według wynalazku w celu uzyskania mikrobiomu zapewniającego skórę zdrową i odporną na organizmy patogenne.
Przykład X
Skład kompozycji według wynalazku zawierającej peptydy przeciwdrobnoustrojowe, polioligosacharydy, bakteriocyjny i bakterie
Kompozycja według wynalazku o następującym składzie:
peptydy przeciwdrobnoustrojowe, od 0,01% do 20% wag.;
bakteriocyny od 0,01 do 5%;
polioligosacharydy od 0,01% do 10% wag.;
bakterie - od 10*3 CFU/ml do 10*20 CFU/ml.
Przykład XI
Sposób aplikacji według wynalazku kompozycji zawierających bakterie probiotyczne sposób aplikacji numer I
Po analizie indywidualnej skóry danej osoby zostaje dobrana odpowiednia formulacja bazowa, poprawiająca parametry skóry lub hamująca pomocniczo wzrost fakultatywnie patogennej i patogennej flory skóry. Najpierw zostaje zastosowana formulacja kosmetyczna lub żel farmaceutyczny według wynalazku, a następnie po 15 minutach zostaje naniesiony suchy spray zawierający bakterie probiotyczne. Spray jest równomiernie rozpylany na skórę, wskazaną do poprawy kondycji i/lub leczenia.
Wybór odpowiedniej formulacji bazowej farmaceutycznej lub kosmetycznej zależy od stanu skóry pacjenta. Może być dobierany indywidualnie lub z pomocą lekarza dermatologa.
Sposób aplikacji według wynalazku kompozycji zawierających bakterie probiotyczne sposób aplikacji numer II
Po analizie indywidualnej skóry danej osoby zostaje dobrany koktajl bakterii probiotycznych dla poprawy kondycji skóry lub hamujący wzrost fakultatywnie patogennej i patogennej flory skóry. Koktajl jest stosowany bezpośrednio na skórę, bez poprzedzenia smarowaniem formulacją bazową. Spray zawierający bakterie probiotyczne jest równomiernie rozpylany na umytą, wstępnie osuszoną i lekko wilgotną skórę, wskazaną do poprawy kondycji i/lub leczenia.
Sposób aplikacji według wynalazku kompozycji zawierających bakterie probiotyczne sposób aplikacji numer III
Po analizie indywidualnej skóry danej osoby zostaje dobrany koktajl bakterii probiotycznych dla poprawy kondycji skóry lub hamujący wzrost fakultatywnie patogennej i patogennej flory skóry. Liofilizowany koktajl bakterii jest poddany enkapsulacji a następnie umieszczony w bazowej formulacji kosmetycznej, konserwowanej selektywnie, tak, aby po zastosowaniu kosmetyku i pęknięciu kapsułek, konserwant nie był aktywny względem korzystnych dla skóry bakterii probiotycznych.
Sposób aplikacji według wynalazku kompozycji zawierających bakterie probiotyczne sposób aplikacji numer IV
Po analizie indywidualnej skóry danej osoby zostaje dobrany koktajl bakterii probiotycznych dla poprawy kondycji skóry lub hamujący wzrost fakultatywnie patogennej i patogennej flory skóry. Liofilizowany koktajl bakterii jest umieszczony w kapsułkach dwudzielnych, w drugiej komorze kapsułki jest uwadniający preparat odżywczy dla liofilizatu bakterii probiotycznych. Przed użyciem preparat uwadniający zostaje wstrzyknięty do drugiej komory kapsułki z liofilizatem i wprowadzony do formulacji bazowej bezpośrednio przed użyciem za pomocą kolejnego wstrzyknięcia. Następnie preparat zostaje rozprowadzony na skórze.
Przykład XII
Sposób personalizacji koktajli zawierających bakterie probiotyczne
Osoba cierpiąca na problemy ze skórą zgłasza chęć wykorzystania wynalazku. Do osoby tej zostaje wysłany zestaw 3-6 jałowych wymazówek odpowiednich do samodzielnego pobrania posiewów bakteryjnych i grzybiczych z miejsc dotkniętych zmianami skórnymi, a także miejsc ze zdrową skórą. Po analizie indywidualnej posiewów ze skóry badanej osoby, zostaje dobrana odpowiednia formulacja bazowa (kosmetyczna lub farmaceutyczna) lub wskazanie do zastosowania koktajli zawierających bakterie probiotyczne bezpośrednio na skórę bez uprzedniego zastosowania formulacji bazowych. Koktajle zostają spersonalizowane, co oznacza kierowanie się zasadą, dobra pacjenta mającą na celu przywrócenie równowagi mikrobiologicznej na jego skórze, z jak najmniejszą ilością zewnętrznej ingerencji. Koktajle, jeżeli tylko sytuacja skóry pacjenta na to pozwoli, będą oparte na jego własnym biomie, pobranym ze zdrowej skóry, pomocniczo wzbogaconym odpowiednimi szczepami bakterii probiotycznych, dobranych w taki sposób, aby promowały wzrost bakterii nie patogennych naturalnego biomu, a hamowały rozwój bakterii patogennych i fakultatywnie patogennych.
Koktajle będą przygotowane za pomocą namnażania i liofilizacji biomu pacjenta, wzbogacania go o bakterie probiotyczne, ponownego testowania ich wpływu na biom naturalny i przygotowywania końcowego, dobranego indywidualnie koktajlu, który zostanie przygotowany do użycia według jednego ze sposobów opisanych w przykładach wynalazku (np. Spray).
Claims (13)
1. Kompozycja bakterii probiotycznych tlenowych lub fakultatywnie tlenowych, znamienna tym, że zawiera szczepy bakterii Lactobacillus helveticus (108 CFU), Lactobacillus rhamnosus (108 CFU), Lactobacillus plantarum (108 CFU), Lactobacillus casei (108 CFU) i Lactococcus lactis (108 CFU), ureazo-ujemne, wykazujące wzrost w temperaturze 20-37°C, w pH wyższym od 3,0, przy czym szczepy te ponadto są negatywne pod względem ekspresji enzymów niklozależnych, w postaci maści, kremu, balsamu, mleczka lub w postaci sprayu stosowanego na skórę lub błony śluzowe.
2. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera dodatkowo przynajmniej jedną z substancji pomocniczych wybraną spośród bakteriocyn, takich jak bakteriocyny przeciwko S. aureus, małych peptydów przeciwdrobnoustrojowych, takich jak histatyny, glutation, i/lub polioligosacharydów, takich jak chitozan i/lub kwas hialuronowy.
3. Kompozycja według zastrz. 1 albo 2, znamienna tym, że zawiera chitozan i/lub kwas hialuronowy.
4. Kompozycja według zastrz. 1-3, znamienna tym, że zawiera dodatkowo przeciwzapalny peptyd, L-glutation.
5. Kompozycja według zastrz. 1-4, znamienna tym, że zawiera dodatkowe biopolimery, korzystnie biopolimer będący białkiem wiążącym metale lub funkcjonalnym dendrymerem.
6. Kompozycja określona w zastrz. 1-5 do zastosowania w sposobie leczenia i zapobiegania chorobom skóry wywołanym przez Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli lub Candida sp.
7. Kompozycja według zastrz. 6 do zastosowania do zwalczania populacji Pseudomonas aeruginosa na skórze.
8. Kompozycja według zastrz. 6 do zastosowania do zapobiegania i leczenia nadkażeń Staphylococcus aureus, zawierająca dodatkowo bakteriocynę lub bakteriocyny.
9. Kompozycja określona w zastrz. 1-5 do zastosowania do wytwarzania kompozycji kosmetycznej do ochrony skóry przed patogenami: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli lub Candida sp., zwłaszcza Pseudomonas aeruginosa.
10. Kompozycja według zastrz. 9 do zastosowania do ochrony biomu skóry przed populacją Pseudomonas aeruginosa.
11. Zestaw obejmujący w jednym pojemniku kompozycję określoną w zastrz. 1-5, a w drugim pojemniku formulację kosmetyczną w postaci żelu, kremu, lotionu, maści lub mleczka, zawierającą 5% chitozan, która zawiera dodatkowo nośnik lub podłoże dla wzrostu bakterii w kompozycji zawartej w pierwszym pojemniku.
12. Zestaw według zastrz. 11, w którym kompozycja jest w postaci zliofilizowanej.
13. Zestaw według zastrz. 11 albo 12, w którym pojemnik z kompozycją bakterii probiotycznych określoną w zastrz. 1-5 jest pojemnikiem do podawania kompozycji w postaci sprayu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL423964A PL246651B1 (pl) | 2017-12-19 | 2017-12-19 | Kompozycja bakterii probiotycznych, zastosowanie kompozycji bakterii probiotycznych oraz zestaw zawierający kompozycję bakterii probiotycznych |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL423964A PL246651B1 (pl) | 2017-12-19 | 2017-12-19 | Kompozycja bakterii probiotycznych, zastosowanie kompozycji bakterii probiotycznych oraz zestaw zawierający kompozycję bakterii probiotycznych |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL423964A1 PL423964A1 (pl) | 2019-07-01 |
| PL246651B1 true PL246651B1 (pl) | 2025-02-24 |
Family
ID=67105460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL423964A PL246651B1 (pl) | 2017-12-19 | 2017-12-19 | Kompozycja bakterii probiotycznych, zastosowanie kompozycji bakterii probiotycznych oraz zestaw zawierający kompozycję bakterii probiotycznych |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL246651B1 (pl) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090068149A1 (en) * | 2005-01-21 | 2009-03-12 | Jean Francois Nicolas | Use of a Fermented Milk Containing L. Casei for the Manufacture of a Composition for the Prevention or Treatment of a Delayed-Type Hypersensitivity Reaction |
| WO2015134808A2 (en) * | 2014-03-06 | 2015-09-11 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Probiotic formulations and methods for use |
| CA2973223A1 (en) * | 2014-11-25 | 2016-06-02 | Evelo Biosciences, Inc. | Probiotic and prebiotic compositions, and methods of use thereof for modulation of the microbiome |
-
2017
- 2017-12-19 PL PL423964A patent/PL246651B1/pl unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090068149A1 (en) * | 2005-01-21 | 2009-03-12 | Jean Francois Nicolas | Use of a Fermented Milk Containing L. Casei for the Manufacture of a Composition for the Prevention or Treatment of a Delayed-Type Hypersensitivity Reaction |
| WO2015134808A2 (en) * | 2014-03-06 | 2015-09-11 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Probiotic formulations and methods for use |
| CA2973223A1 (en) * | 2014-11-25 | 2016-06-02 | Evelo Biosciences, Inc. | Probiotic and prebiotic compositions, and methods of use thereof for modulation of the microbiome |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL423964A1 (pl) | 2019-07-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7529577B2 (ja) | スキンケアのためのラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ） | |
| RU2728161C2 (ru) | Средство для профилактического и/или терапевтического лечения вызванных патогенными бактериями инфекций и/или воспалений (варианты) | |
| EP3139939B1 (en) | Compositions and methods for treating skin and mucous membrane diseases | |
| Cinque et al. | Use of probiotics for dermal applications | |
| BE1023643B1 (nl) | Vaginale preparaten voor het onderhouden en / of herstellen van een gezonde vrouwelijke microbiota | |
| US10874702B2 (en) | Topical compositions comprising extract of Coriolus versicolor for autoimmunity enhancement | |
| KR102270709B1 (ko) | 복합 세라마이드 및 천연 추출물을 포함하는 피부개선용 화장료 조성물 | |
| US20250009818A1 (en) | Bacteria strains for topical skin care | |
| CN114984063A (zh) | 皮肤外用剂组合物及功能性食品组合物 | |
| EP3682890A1 (en) | Composition comprising non-viable probiotic bacteria and its use in therapy | |
| CN116077415B (zh) | 一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物 | |
| WO2025017520A1 (ko) | 발명의 명칭: 마이크로코커스 루테우스의 선택적 항균 용도 | |
| Cai et al. | A chitosan-modified tea tree oil self-nanoemulsion improves antibacterial effects in vivo and in vitro and promotes wound healing by influencing metabolic processes against multidrug-resistant bacterial infections | |
| Porubsky et al. | The role of probiotics in acne and rosacea | |
| Zhao et al. | From gut to skin: exploring the potential of natural products targeting microorganisms for atopic dermatitis treatment | |
| KR20220073983A (ko) | 유산균 쌀 발효물을 포함하는 피부 마이크로비옴 기능 증진용 조성물 | |
| KR20190060556A (ko) | 초유 발효산물의 항여드름용 화장료 | |
| CN119530099A (zh) | 一种对皮肤有益的青春双歧杆菌及其衍生物和应用 | |
| US20240165188A1 (en) | Method for the treatment of microbial overgrowth, imbalance and infections | |
| PL246651B1 (pl) | Kompozycja bakterii probiotycznych, zastosowanie kompozycji bakterii probiotycznych oraz zestaw zawierający kompozycję bakterii probiotycznych | |
| KR20240013645A (ko) | 천연 추출물을 포함하는 항균성이 우수한 여성 청결제 | |
| Almosilhy et al. | Microbiome Modulation: Probiotics, Prebiotics, and Postbiotics in Acne Vulgaris Therapy | |
| Sarath Chandran et al. | Synbiotics for the Prevention and Treatment of Skin Disorders | |
| RU2367454C1 (ru) | Средство интимной гигиены "фемивит" | |
| El-Shal et al. | Investigation of multifunctional potential of Lactobacillus acidophilus-DSM20079 in wound infection model |