PL248084B1 - Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia i jego zastosowanie jako lek - Google Patents
Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia i jego zastosowanie jako lekInfo
- Publication number
- PL248084B1 PL248084B1 PL437784A PL43778421A PL248084B1 PL 248084 B1 PL248084 B1 PL 248084B1 PL 437784 A PL437784 A PL 437784A PL 43778421 A PL43778421 A PL 43778421A PL 248084 B1 PL248084 B1 PL 248084B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- amino acid
- yariant
- peptide
- xaa xaa
- calcium pyrophosphate
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia i jego zastosowanie jako lek, w szczególności do leczenia i/lub profilaktyki dny rzekomej.
Description
Opis wynalazku
Dziedzina wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest krótki peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia oraz jego zastosowanie jako lek.
Stan techniki
Chondrokalcynoza, zwana inaczej CPPD (ang. Calcium Pyrophosphate Deposition), lub też dna rzekomą, jest chorobą o podłożu metabolicznym atakującą ludzi starszych. Jej przyczyną jest obecność kryształów dwuwodnego pirofosforanu wapnia (CaPP) w mazi stawowej. W fazie początkowej schorzenie charakteryzuje się występowaniem niebolących grud, a następnie rozwija się w formę ostrą krystalicznego zapalenia stawów lub przewlekłą artropatię ze zmianami strukturalnymi choroby zwyrodnieniowej stawów (zobacz, np. Zitnan, D., i S. Sitaj, 1960, “[Chondrocalcinosis polyarticularis (familiaris): roentgenological and clinical analysis]” Ceskoslovenska rentgenologie', Mccarty, Daniel J. 1962, “The Significance of Calcium Phosphate Crystals in the Synovial Fluid of Arthritic Patients: The ‘Pseudogout Syndrome.” Annals of Internal Medicine. https://doi.org/10.7326/0003-4819-56-5-711).
Chondrokalcynoza ma podłoże metaboliczne i jest spowodowana przez zmniejszoną aktywność enzymów hydrolitycznych oraz zwiększoną hydrolizę ATP w komórkach. Nadprodukcja pozakomórkowego pirofosforanu sprawia, że tworzy on w tych warunkach nierozpuszczalną sól z jonami wapnia (zobacz, np., Abhishek, Abhishek, Sally Doherty, Rosę Maciewicz, Kenneth Muir, Weiya Zhang, and Michael Doherty. 2012. “Chondrocalcinosis Is Common in the Absence of Knee lnvolvement.” Arthritis Research & Therapy 14 (5): R205).
Jak dotąd leczenie dny rzekomej pozostaje wyłącznie symptomatyczne. Formę ostrą leczy się zaleceniami odpoczynku, okładami lodu, artrocentezą (nakłuciem jamy stawowej w celu usunięcia części płynu stawowego), kolchicyną oraz wewnątrzstawową iniekcją kortykosteroidów (zobacz, np., Abhishek, Abhishek, and Michael Doherty. 2016. “Update on Calcium Pyrophosphate Deposition.” Clinical and Experimental Rheumatology 34 (4 Suppl 98): 32-38) oraz immunosupresantami (zobacz, np., Parperis, Konstantinos, Eleni Papachristodoulou, Loukas Kakoullis, and Ann K. Rosenthal. 2020. “Management of Calcium Pyrophosphate Crystal Deposition Disease: A Systematic Review.” Seminars in Arthritis and Rheumatism). W ciężkich przypadkach leczenie artropatii spowodowanej dna rzekomą obejmuje endoprotezoplastykę stawu dotkniętego chorobą (zobacz, np., Hernigou, Philippe, Walter Pascale, Valerio Pascale, Yasuhiro Homma, and Alexandre Poignard. 2012. “Does Primary or Secondary Chondrocalcinosis Influence Long-Term Survivorship of Unicompartmental Arthroplasty?” Clinical Orthopaedics and Related Research®, https://doi.org/10.1007/s11999-011-2211-5; Rosenthal, Ann K., and Lawrence M. Ryan. 2016. “Calcium Pyrophosphate Deposition Disease.” The New England Journal of Medicine 374 (26): 2575-84).
Podejmowane były próby rozpuszczania kryształów pirofosforanu wapnia poprzez działanie na nie różnymi enzymami, takimi jak np. alkaliczna fosfataza i nieorganiczna pirofosfataza, ale nie przyniosły większych pozytywnych rezultatów. Sugeruje to, że raz skrystalizowany pirofosforan nie jest zdolny do dostania się do miejsca aktywnego enzymu i nie może ulegać już dalszym reakcjom (zobacz, np., Bennett, R. M., J. R. Lehr, and D. J. McCarty. 1975. “Factors Affecting the Solubility of Calcium Pyrophosphate Dihydrate Crystals.” Journal of Clinical lnvestigation. https://doi.org/10.1172/jci108239; Shinozaki, T., Y. Xu, T. F. Cruz, and K. P. Pritzker. 1995. “Calcium Pyrophosphate Dihydrate (CPPD) Crystal Dissolution by Alkaline Phosphatase: Interaction of Alkaline Phosphatase on CPPD Crystals.” The Journal of Rheumatology 22 (1): 117-23).
Podjęte próby zwiększania rozpuszczalności kryształów pirofosforanu wapnia z użyciem jonów magnezu i czynników chelatujących takich jak EDTA także zakończyły się „terapeutycznym niepowodzeniem” (zobacz, np., Bennett, Robert M., James R. Lehr, i Daniel J. McCarty. 1976. “Crystal Shedding and Acute Pseudogout. An Hypothesis Based on a Therapeutic Failure.” Arthritis & Rheumatism. https://doi.Org/10.1002/art. 1780190116).
Istnieje zatem zapotrzebowanie na lek mogący in-situ rozłożyć powstałe w torebce stawowej kryształy pirofosforanu wapnia i/lub zapobiegać ich powstawaniu.
Celem wynalazku jest zatem dostarczenie środka rozkładającego kryształy pirofosforanu wapnia, który pozwala na rozpuszczanie takich kryształów, i pozwalającego w ten sposób na leczenie i/lub profilaktykę chorób, dokładniej do zastosowania jako lek.
PL 248084 Β1
Cel ten został zrealizowany poprzez wynalazki zdefiniowane w załączonych zastrzeżeniach patentowych.
Krótki opis wynalazku
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia składający się z sekwencji H2N-VQEDGVSLARSV-COOH (NR ID. SEKW.: 2).
Przedmiotem wynalazku jest ponadto jest peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia składający się z sekwencji H2N-VQEDGVSLARSV-COOH (NR ID. SEKW.: 2) do zastosowania jako lek.
Korzystnie peptyd do zastosowania według wynalazku stosowany jest w kombinacji z jonami magnezu i/lub manganu.
Szczegółowy opis wynalazku
Przedmioty wynalazku zostały zdefiniowane w załączonych zastrzeżeniach patentowych.
Ogólnie opisano tu peptydy rozkładające kryształy pirofosforanu wapnia zawierające sekwencję motywu N-końcowego o wzorze ogólnym:
H2N-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (NR ID. SEKW.: 1),
W którym:
każdy Χ1, X6, X7, X8 i X9, niezależnie od siebie, oznacza dowolny aminokwas,
X2 oznacza aminokwas z amidową grupą boczną wybrany spośród N i Q, każdy X3 i X4, niezależnie od siebie, oznacza aminokwas z kwasową grupą boczną wybrany spośród D i E,
X5 oznacza aminokwas z krótką grupą boczną wybrany spośród G i A, a
Χ10 oznacza aminokwas z zasadową grupą boczną wybrany spośród R, H i K.
Wszystkie podane oznaczenia aminokwasów są zgodne ze standardowo i powszechnie stosowanym jednoliterowym kodem nazw aminokwasów.
Takie peptydy mogą zawierać wydłużenie lub skrócenie odległości między X5 a Χ10 o 1 do 3 aminokwasów. Mogą one zawierać sekwencję motywu H2N-X1-Q-E-D-G-X6-X7-X8-X9R, zwłaszcza sekwencję motywu H2N-VQEDGVSLARSV, który to motyw zawiera na końcu C wydłużenie o 2 aminokwasy, lub mogą składać się z 12 aminokwasowej sekwencji H2N-VQEDGVSLARSV-COOH (NR ID. SEKW.: 2), przy czym COOH na końcu C oznacza C-terminalną grupę hydroksylową. Opisane tu peptydy mogą wykazywać 80% identyczności sekwencji motywu podanego powyżej, co stanowi zmianę jednego tylko aminokwasu w sekwencji motywu N-końcowego. Motyw N-końcowy o wzorze ogólnym H2N-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 może być wybrany spośród:
H2N-X1-N-E-D-G-X6-X7-X8-X9-R (NR ID. SEKW.: 3), H2N-X1-Q-D-D-GX6-X7-X8-X9-R (NR ID. SEKW.: 4), H2N-X1-Q-E-E-G-X6-X7-X8-X9-R (NR ID.
SEKW.: 5), H2N-X1-Q-E-D-A-X6-X7-X8-X9-R (NR ID. SEKW.: 6), H2N-X1-Q-E-DG-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 7), H2N-X1-Q-E-D-G-X6-X7-X8-X9-K (NR ID.
SEKW.: 8), H2N-X1-N-D-D-G-X6-X7-X8-X9-R (NR ID. SEKW.: 9), H2N-X1-N-E-EG-X6-X7-X8-X9-R (NR ID. SEKW.: 10), H2N-X1-N-E-D-A-X6-X7-X8-X9-R (NR ID.
SEKW.: 11), H2N-X1-N-E-D-G-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 12), Η2Ν-ΧΙ-Ν-ΕD-G-X6-X7-X8-X9-K (NR ID. SEKW.: 13), H2N-X1-Q-D-E-G-X6-X7-X8-X9R (NR
ID. SEKW.: 14), H2N-X1-Q-D-D-A-X6-X7-X8-X9-R(NRID. SEKW.: 15), H2N-X1-QD-D-G-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 16), H2N-X1 -Q-D-D-G-X6-X7-X8-X9-K (NR ID. SEKW.: 17), H2N-X1-Q-E-E-A-X6-X7-X8-X9-R (NR ID. SEKW.: 18), H2NX1-Q-E-E-G-X6-X7-X8-X9H (NR ID. SEKW.: 19), H2N-X1-Q-E-E-G-X6-X7-X8-X9K (NR ID. SEKW.: 20), H2N-X1-Q-E-D-A-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 21),
PL 248084 Β1
H2N-X1-Q-E-D-A-X6-X7-X8-X9-K (NR ID. SEKW.: 22), H2N-X1-N-E-G-X6-X7-X8X9-R (NR ID. SEKW.: 23), H2N-X1-N-D-D-A-X6-X7-X8-X9-R (NR ID. SEKW.: 24), H2N-X1-N-D-D-G-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 25), H2N-X1-N-D-D-G-X6-X7Χ8-Χ9-Κ (NR ID. SEKW.: 26), H2N-X1-N-E-E-G-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 27), H2N-X1-N-E-E-G-X6-X7-X8-X9-K (NR ID. SEKW.: 28), H2N-X1-N-E-D-A-X6Χ7-Χ8-Χ9-Η (NR ID. SEKW.: 29), H2N-X1-N-E-D-A-X6-X7-X8-X9-K (NR ID. SEKW.: 30),H2N-X1-N-E-E-A-X6-X7-X8-X9R(NRID. SEKW.: 31), H2N-X1-Q-D-EA-X6-X7-X8-X9-R (NR ID. SEKW.: 32), H2N-X1 -Q-D-D-A-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 33), H2N-X1-Q-D-D-A-X6-X7-X8-X9-K (NR ID. SEKW.: 34), H2N-X1-Q-DE-G-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 35), H2N-X1-Q-D-E-G-X6-X7-X8-X9-K (NR ID. SEKW.: 36),H2N-X1-Q-E-E-A-X6-X7-X8-X9-H(NRID. SEKW.: 37),H2N-X1-QΕ-Ε-Α-Χ6-Χ7-Χ8-Χ9-Κ (NR ID. SEKW.: 38), H2N-X1-N-D-E-A-X6-X7-X8-X9-R (NR ID. SEKW.: 39), H2N-Xl-N-D-E-G-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 40), H2NXl-N-D-E-G-X6-X7-X8-X9-K (NR ID. SEKW.: 41), H2N-X1-N-D-D-A-X6-X7-X8Χ9-Η (NR ID. SEKW.: 42), H2N-X1-N-D-D-A-X6-X7-X8-X9-K (NRID. SEKW : 43), H2N-X1-N-E-E-A-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 44), H2N-X1-N-E-E-A-X6-X7Χ8-Χ9-Κ (NR ID. SEKW.: 45), H2N-X1-Q-D-E-A-X6-X7-X8-X9-H (NR ID. SEKW.: 46), H2N-X1 -Q-D-E-A-X6-X7-X8-X9-K (NR ID. SEKW.: 47), H2N-X1-N-D-E-A-X6Χ7-Χ8-Χ9-Η (NR ID. SEKW.: 48), H2N-X1-N-D-E-A-X6-X7-X8-X9-K (NR ID. SEKW.: 49), H2N-X1-Q-E-D-G-X6-X7-X8-X9-R (NR ID. SEKW.: 50).
Peptyd według wynalazku rozkłada kryształy pirofosforanu wapnia, a zatem posiada właściwości pozwalające na jego zastosowanie jako lek, jak to wykazano w poniższych przykładach (peptyd R25). Taki peptyd można stosować w leczeniu i/lub profilaktyce dny rzekomej. Dokładniej, w poniższych przykładach wykazano, że peptyd według wynalazku, mianowicie peptyd R25, pozwala na skuteczne rozkładanie na drodze hydrolizy kryształów pirofosforanu wapnia w warunkach analogicznych do tych, które występują w torebce stawowej. Pozwala to zatem stwierdzić, że peptyd według wynalazku, peptyd R25, można skutecznie stosować jako lek. Może on być stosowany do leczenia i/lub profilaktyki dny rzekomej poprzez usuwanie kryształów pirofosforanu wapnia występujących w torebkach stawowych, w szczególności dotkniętych dna rzekomą, która charakteryzuje się obecnością kryształów dwuwodnego pirofosforanu wapnia (CaPP) w mazi stawowej. Na podstawie podobieństwa strukturalnego uważa się, że pozostałe opisane tu peptydy mogą wykazywać analogiczne właściwości w zakresie rozkładania kryształów pirofosforanu wapnia.
Peptyd według wynalazku, mianowicie peptyd R25, to liniowy peptyd o sekwencji H2N-VQEDGVSLARSV-COOH (Val-Gln-Glu-Asp-Gly-Val-Ser-Leu-Ala-Arg-Ser-Val) o worze strukturalnym przedstawionym na Fig. 1. Wykazuje on zdolność do zależnej od jonów magnezu hydrolizy kryształów pirofosforanu wapnia, czyli posiada właściwości nieobecne w naturalnie występujących pirofosfatazach. Peptyd R25 wykazuje też hydrolizę pirofosforanu zawartego w krysztale do fosforanu w wysokości ok. 20% w ciągu 8 dni prowadzenia eksperymentu, w którym wystawiono kryształy pirofosforanu wapnia na działanie peptydu R25. Uzyskana poprzez dynamikę molekularną prawdopodobna struktura tego peptydu sugeruje, że wspomniany wyżej rdzeń (motyw) tego peptydu (H2N-VQEDGVSLAR) wykazuje silną koordynację jonu pirofosforanowego przez koniec aminowy, resztę argininy (R) oraz strukturę typu „nest” tworzoną przez grupy -NH łańcucha głównego motywu H2N-VQEDGVS. Jon magnezu jest koordynowany poprzez łańcuchy boczne motywu ED. Otrzymana struktura kompleksu peptyd R25, jon pirofosforanowy, jon magnezu sugeruje, że aktywność peptydu jest w dużej mierze zależna od siły, z jaką ten koordynuje pirofosforan tj. obecność zwartej sieci koordynującej atomy tlenu cząsteczki pirofosforanu polaryzuje zdelokalizowane elektrony, skupiając je na atomach tlenu, to z kolei umożliwia atak nukleofilowej cząsteczki, takiej jak jon hydroksylowy na centralny atom fosforu. Wynikiem takiego ataku będzie rozpad pirofosforanu na jony fosforanowe. Tak silna koordynacja jest także niezbędna do odłączenia pirofosforanu z sieci krystalicznej.
Analiza struktury wykazała także, że reszty aminokwasowe z motywu H2N-X1-Q-E-D-G-X6-X7-X8-X9-R mogą zostać zastąpione przez reszty aminokwasowe z homologiczną grupą funkcyjną jak kwas asparaginowy przez kwas glutaminowy przy zachowaniu ich funkcji jako centrum przyłączające jon magnezu. To samo tyczy się zasadowej reszty aminokwasowej argininy, która mogłaby być zastąpiona lizyną lub histydyną. Ta reszta aminokwasowa mogłaby także zostać przesunięta bliżej lub dalej motywu Q-E-D-G i nadal koordynować pirofosforan. Poza resztami aminokwasowymi pełniącymi funkcje katalityczne ważna w uzyskaniu struktury natywnej peptydu jest glutamina, która mogłaby zostać zastąpiona przez asparaginę z zachowaniem funkcji z uwagi na posiadanie grupy amidowej w łańcuchu bocznym. Ostatnią ważną resztą aminokwasową jest glicyna, której brak łańcucha głównego umożliwia przyłączenie się pirofosforanu do miejsca substratowego. Glicyna jednak mogłaby być zastąpiona przez resztę aminokwasową z bardzo krótkim łańcuchem bocznym takim jak alanina. Wspomniane powyżej mutacje były testowane in silico przy wykorzystaniu pola siłowego Amber IPQ15. Pozostałe, występujące w motywie aminokwasy pełnią funkcję strukturalną jedynie na poziomie łańcucha głównego (tworząc struktury typu “nest”) i mogą zostać zastąpione dowolnymi aminokwasami białkowymi.
Oryginalny peptyd R25 został otrzymany jako N-końcowy fragment białka fagowego metodą prezentacji fagowej i również posiadał właściwości hydrolityczne. Z tego powodu nie został w opisie motywu uwzględniony koniec karboksylowy, który według danych strukturalnych nie pełni żadnej istotnej roli (Fig. 2).
Peptyd według wynalazku może być otrzymany dowolną metodą syntezy znaną ze stanu techniki. Przykładowo, peptyd według wynalazku można zsyntetyzować z użyciem standardowej strategii syntezy opartej na chemii Fmoc lub alternatywnie za pomocą syntezatora peptydów wykorzystując strategię Fmoc jak i Boc. Peptyd według wynalazku, mianowicie peptyd R25, zsyntetyzowano tu z użyciem standardowej strategii syntezy opartej na chemii Fmoc na żywicy Wanga, jak szczegółowo opisano poniżej. Pozostałe opisane tu peptydy można zsyntetyzować w analogiczny sposób.
Wszelkie modyfikacje, podstawienia, skrócenia, wydłużenia i substytucje w sekwencji czy też strukturze peptydu według wynalazku syntetyzuje się w znany i powszechnie stosowany w dziedzinie sposób.
Procent identyczności sekwencji z peptydem według wynalazku określa się w znany w dziedzinie sposób, po optymalnym dopasowaniu sekwencji analizowanych peptydów. Optymalne dopasowanie można określić, stosując dowolny odpowiedni algorytm do dopasowywania sekwencji, których niewykluczające przykłady obejmują algorytm Smitha-Watermana i algorytm Needlemana-Wunscha, itp. Uważa się, że peptydy wykazujące 80% identyczności w zakresie sekwencji motywu sekwencji peptydu będącego przedmiotem niniejszego zgłoszenia, co stanowi różnicę jednego aminokwasu, wykazują analogiczne właściwości biologiczne, tj. rozkładanie kryształów pirofosforanu wapnia, jak peptyd według wynalazku, mianowicie peptyd R25.
Zgodnie z wynalazkiem przeprowadzono badania aktywności peptydu według wynalazku, mianowicie peptydu R25, w porównaniu do innych peptydów opisanych w literaturze o podobnych pożądanych właściwościach. Wyniki przeprowadzonych przez twórców wynalazku badań wskazują wyraźnie, że peptyd według wynalazku, R25, wykazuje największą zdolność do hydrolizy pirofosforanu wapnia. Aktywność otrzymanego peptydu według wynalazku, R25, porównano z następującymi peptydami:
1) peptydem W1 o sekwencji H2N-SGAGKT-COOH znanym z uzyskiwania motywu Walkera lub tak zwanej pętli P, która to pętla wiąże fosforan (Bianchi, Antonio, Claudia Giorgi, Paolo Ruzza, Claudio Toniolo i E. James Milner-White. 2012. “A Synthetic Hexapeptide Designed to Resemble a Proteinaceous P-Loop Nest Is Shown to Bind Inorganic Phosphate.” Proteins);
2) cyklicznym peptydem C3 (głowa do ogona) o sekwencji cyklo(RPDDHR), który to peptyd wykazuje właściwości pirofosforanolityczne/syntetazowe (Piast, Radosław W., Maciej Garstka, Aleksandra Misicka i Rafał M. Wieczorek. 2020. “Small Cyclic Peptide for Pyrophosphate
Dependent Ligation in Prebiotic Environments.” Life 10 (7). https://doi.org/10.3390/life10070103); oraz
3) dipeptydem seryno-histydynowym (dipeptyd SH) znanym ze swoich właściwości hydrolitycznych opartych na podobieństwie do triady katalitycznej peptydaz serynowych (MacDonald, Melissa J., Luke D. Lavis, Donald Hilvert, and Samuel H. Gellman. 2016. “Evaluation of the Ser-His Dipeptide, a Putative Catalyst of Amide and Ester Hydrolysis.” Organie Letters).
Otrzymane wyniki wyraźnie wskazują (Fig. 3), że peptyd według wynalazku, mianowicie peptyd R25, wykazuje właściwości pozwalające na skuteczne rozkładanie kryształów pirofosforanu wapnia, co umożliwia jego zastosowanie jako lek. Może on być stosowany jako lek do leczenia i/lub profilaktyki dny rzekomej poprzez rozkładanie kryształów pirofosforanu wapnia w torebce stawowej, w szczególności u osób z dną rzekomą.
Wyniki przeprowadzonych badań sugerują także, że peptyd według wynalazku, mianowicie peptyd R25, można stosować wraz z jonami magnezu lub manganu, dzięki czemu można zwiększyć skuteczność ich aktywności, z następujących powodów:
1) peptyd według wynalazku jest zależny od jonów magnezu, zaś mangan ma podobne właściwości biologiczne co magnez
2) zwiększenie stężenia magnezu, lub manganu, mogłoby zmniejszyć inhibicję katalizy przez jony wapnia znane z takiego właśnie działania (Peeraer, Yves, AnjaRabijns, Jean-Franęois Collet, Emile Van Schaftingen, and Camiel De Ranter. 2004. “How Calcium Inhibits the Magnesium-Dependent Enzyme Human Phosphoserine Phosphatase.” European Journal of Bioehemistry / FEBS 271 (16): 3421-27).
Uważa się zatem, że stosowanie skojarzone peptydu według wynalazku, mianowicie peptydu R25, w kombinacji z jonami magnezu i/lub manganu zwiększy aktywności peptydów w zakresie rozkładania kryształów pirofosforanu wapnia.
Celem zilustrowania wynalazku, poniżej załączono przykłady i rysunki, których nie należy jednak interpretować w jakikolwiek sposób jako ograniczenie zakresu wynalazku, który zdefiniowano w zastrzeżeniach patentowych. Załączone rysunki ilustrują korzystne przykłady realizacji wynalazku.
Krótki opis figur
Figura 1 przedstawia wzór strukturalny peptydu R25 według wynalazku.
Figura 2 przedstawia prawdopodobną strukturę trzeciorzędową peptydu R25 w kompleksie z pirofosforanem i jonem magnezu.
Figura 3 przedstawia wyniki badania hydrolizy pirofosforanu zawartego w kryształach pirofosforanu wapnia przedstawioną jako stosunek ilości fosforanu do pirofosforanu według mikrooznaczania fosforu. Właściwości peptydu R25 zostały zestawione z peptydami W1, C3, SH (jak opisano powyżej) oraz próbami ślepymi bez peptydu (-p) oraz bez peptydu i jonów magnezowych (-p-M). Słupki ppi 100 ppi0 są krzywą wzorcową o procentowej zawartości pirofosforanu równej liczbie w nazwie.
Figura 4 przedstawia wyniki porównania aktywności peptydu R25 w zależności od obecności jonów magnezu w próbie, pokazane jako procent pozostałego po reakcji pirofosforanu. PPiCa oznacza kryształy dwuwodnego pirofosforanu wapnia, -Mg i +Mg odpowiednio brak i obecność jonów Mg2+, -pep oznacza próbę bez peptydu a R25 próbę z peptydem R25. Wariacja kolorystyczna na szczycie kolumn jest odchyleniem standardowym użytym tutaj jako margines błędu.
Figura 5 przedstawia wyniki analizy modelowania molekularnego pojedynczych konserwatywnych substytucji najważniejszych dla katalizy reszt aminokwasowych pokazane na przykładzie peptydu R25 w kompleksie z pirofosforanem i jonem magnezu. Wyniki przedstawiono na Fig. 5: A) konserwatywna substytucja z zachowaniem oryginalnej funkcji odpowiadająca N-końcowemu motywowi H2N-X1-Q-D-D-G-X6-X7-X8-X9-R, B) konserwatywna substytucja z zachowaniem oryginalnej funkcji odpowiadająca N-końcowemu H2N-X1-Q-E-E-G-X6-X7-X8-X9-R, C) konserwatywna substytucja z zachowaniem oryginalnej funkcji odpowiadająca N-końcowemu motywowi H2N-X1-Q-E-D-G-X6-X7-X8-X9-K, D) przesunięcie reszty zasadowej (argininy) o dwa miejsca w stronę końca karboksylowego (oryginalna reszta argininy w peptydzie R25 została zastąpiona alaniną) z zachowaniem jej funkcji jako reszty koordynującej pirofosforan. Dodane aminokwasy w sekwencji motywu H2N-X1-Q-E-D-G-X6-X7-X8-X9-X-X-R oznaczone jako X oznaczają, niezależnie od siebie, dowolny aminokwas.
Przykłady
O ile nie wskazano inaczej, w poniższych przykładach stosowano znane i/lub komercyjnie dostępne urządzenia, metody, warunki reakcji, odczynniki i zestawy, takie jakie powszechnie stosuje się w dziedzinie, do której należy niniejszy wynalazek i jakie są zalecane przez wytwórców odpowiednich odczynników i zestawów.
Przykład 1: Synteza peptydu R25
Peptyd według wynalazku, mianowicie peptyd R25, został zsyntetyzowany z użyciem standardowej strategii syntezy opartej na chemii Fmoc na żywicy Wanga. Pierwszy aminokwas został sprzężony do żywicy w DMF z katalitycznymi ilościami DMAP. Do tej reakcji został użyty bezwodnik pochodnej aminokwasu wygenerowany w bezwodnym DCM i 0,5 ekwiwalenta (eq) DIC. Deprotekcja grupy Fmoc była prowadzona w 20% piperydynie w DMF przez 15 minut. Wydłużanie łańcucha zostało osiągnięte przez reakcję 3 eq pochodnych aminokwasów z wolną grupą aminową w obecności 3 eq Oxyma Pure i 3 eq DIC w DMF przez 2 godziny. Powodzenie reakcji było monitorowane dzięki testowi Kaisera wykonywanemu po każdej reakcji deprotekcji i po każdym sprzęganiu. Całkowita deprotekcja i odłączenie od żywicy zostało osiągnięte w roztworze TFA/TIS/H2O 95/2,5/2,5 v/v przez 2 godziny. Następnie peptyd został strącony w zimnym eterze i oczyszczony z wykorzystaniem preparatywnej HPLC na kolumnie C12 Jupiter Proteo. Pik z masą odpowiadającą przewidzianej masie peptydu został wyizolowany i oczyszczony.
Spektrometria mas była prowadzona na spektrometrze Shimadzu LCMS-IT-TOF z jonizacją typu elektrospray (ESI) wyposażonym w kolumnę Jupiter Proteo 2,0 x 250 mm. Fazą A była woda o standardzie miliQ z 0,1% FA, fazą B acetonitryl z 0,1% FA.
Przykład 2: Analiza aktywności dynamiki molekularnej peptydu R25
Następnie przeprowadzono badania aktywności dynamiki molekularnej peptydu według wynalazku, mianowicie peptydu R25. Badania te przeprowadzono z pomocą programu Yasara 20.8.23 na polu siłowym Amber IPQ15 (Debiec, Karl T., David S. Cerutti, Lewis R. Baker, Angela M. Gronenborn, David A. Case, and Lillian T. Chong. 2016. “Further along the Road Less Traveled: AMBER ff15ipq, an Original Protein Force Field Built on a Self-Consistent Physical Model.” Journal of Chemical Theory and Computation), z periodycznymi warunkami brzegowymi, standardowymi wymiarami komórki symulacyjnej i gęstością wody 0,997 g/ml. Struktura o najniższej energii została wybrana spośród 32 lokalnych minimów energetycznych otrzymanych podczas symulacji z pomocą funkcji “steepest descent” (Fig. 2).
Przykład 3: Analiza aktywności hydrolitycznej peptydu R25
Krystalizacja dwuwodnego pirofosforanu wapnia była prowadzona zgodnie ze wskazówkami zawartymi w publikacji: Hearn, P. R., i R. G. G. Russell. 1980. “Formation of Calcium Pyrophosphate Crystals in Vitro: Implications for Calcium Pyrophosphate Crystal Deposition Disease (pseudogout).” Annals of the Rheumatic Diseases. https://doi.org/10.1136/ard.39.3.222, przez 4 miesiące przed ich użyciem. Taka praktyka daje największą efektywność w otrzymywaniu form jednoskośnych i trójskośnych, które są związane z patogenezą, podczas gdy pierwotny depozyt dwuwodnego pirofosforanu wapnia jest formą amorficzną lub rombową, która nie występuje w stawach ze stwierdzoną chondrokalcynozą. Do otrzymania form krystalicznych charakterystycznych dla dny rzekomej potrzebne są odpowiednie warunki (40 mM bufor tris, pH 7.5, 40 mM CaCl2, 50 mM Na2P2O? * 10 H2O, 37°C) i czas, ponieważ chorobotwórcze kryształy są końcowym wynikiem wewnętrznych przekształceń kryształów dwuwodnego pirofosforanu wapnia.
Aktywność peptydu R25 została stwierdzona poprzez inkubację tego peptydu z zawiesiną kryształów pirofosforanu wapnia. Do mieszaniny reakcyjnej użyto 1,8 μ! 80 mM roztworu peptydu; 20 μ! 200 mM buforu Tris pH 7.5; 5 μ! 100 mM roztworu MgCl2 i 5 μ! zawiesiny 10% (w/w) kryształów CaPP. Stężenie pirofosforanu wapnia w zawiesinie kryształów oszacowano metodą mikrooznaczania fosforu na 1000 mM +/- 50 mM. Reakcję prowadzono 8 dni w temperaturze 50°C.
Po tym czasie próbki zliofilizowano i pozostały osad poddano analizie z użyciem chromatografii jonowymiennej dla oznaczenia procentowego fosforanu i pirofosforanu wapnia pozostałego po reakcji. Chromatografię jonowymienną wykonano według wskazówek w publikacji: Bisaz, Sylvia, R. G. G. Russell, i H. Fleisch. 1968. “Isolation of Inorganic Pyrophosphate from Bovine and Human Teeth.” Archives of Oral Biology. https://doi.org/10.1016/0003-9969(68)90146-5.
Do tego celu użyto żywicy Dowex 1 x 8. Najpierw żywica została przemyta 4 M HCl, a następnie wodą aż pH eluentu nie uzyskało wartości 4. Tak skondycjonowaną kolumnę umieszczono w kolumienkach do chromatografii o objętości 2 ml. Napęczniała żywica miała 2 cm wysokości, co stanowiło ½ wysokości kolumny.
Zliofilizowany osad poreakcyjny rozpuszczono w 10% kwasie trichlorooctowym (TCA) i naniesiono na kolumnę. Po 15 minutach inkubacji w temperaturze pokojowej żywicę przemyto 1,9 ml wody.
Kwas fosforanowy eluował podczas przemywania żywicy 0,05% HCl (użyto 4 ml), a pirofosforanowy przy 0,5% HCl (użyto 2 ml). Zebrano 8 frakcji po 1 ml: dwie dla wody, cztery dla 0,05% HCl i dwie dla 0,5% HCl.
Ilość fosforanów (zarówno fosforanu jak i pirofosforanu) we frakcji była oznaczana za pomocą zmodyfikowanej metody mikrodeterminacji fosforu Chena (Chen, P.S., T. Y. Toribara, and Huber Warner. 1956. “Microdetermination of Phosphorus.” Analytical Chemistry, https://doi.org/10.1021/ac60119a033).
μl frakcji po chromatografii jonowymiennej nałożono bezpośrednio do dołka płytki 96-dołkowej i dopełniono do 200 μl mieszaniną wywołującą składającą się z równych objętości reagentów: 6N kwasu siarkowego, 0,8 M molibdenianu amonu i 10% kwasu askorbinowego. Płytki wywoływano przez 1 godzinę w temperaturze 50°C, po czym zmierzono absorbancję dla 820 nm względem próby ślepej, gdzie zamiast frakcji została użyta woda. Wyniki zostały przedstawione jako stosunek absorbancji frakcji zawierających fosforan do frakcji zawierającej pirofosforan. Dodatkowo wykonano krzywą wzorcową, stosując fosforan wapnia i pirofosforan wapnia o znanym stosunku wagowym.
Oznaczenia spektrofotometryczne zostały wykonane na spektrofotometrze NanoStar BMG na płytkach 96-dołkowych z co najmniej dwoma próbami ślepymi na płytkę. Pojedynczy pomiar był medianą z 16 punktów pomiarowych. Pomiary były powtórzone trzy razy dla każdej płytki.
Uzyskane wyniki przedstawiono na Fig. 3. Właściwości peptydu R25 zostały zestawione z peptydami W1, C3, SH jak opisano powyżej oraz próbami ślepymi bez peptydu (-p) oraz bez peptydu i jonów magnezowych (-p-M). Uzyskane wyniki potwierdzają, że peptyd według wynalazku, mianowicie peptyd R25, skutecznie rozkłada kryształy pirofosforanu wapnia w warunkach przypominających warunki panujące w torebce stawowej. Uzyskane wyniki potwierdzają zatem, że peptyd według wynalazku, mianowicie peptyd R25, posiada właściwości pozwalające na jego zastosowanie jako lek. Możliwe jest jego zastosowanie w leczeniu i/lub profilaktyce dny rzekomej, ponieważ skutecznie rozkłada kryształy pirofosforanu wapnia.
Przykład 4: Analiza aktywności hydrolitycznej peptydu R25 w obecności jonów magnezu
Przeprowadzono identyczny eksperyment jako opisano w Przykładzie 3 celem porównania aktywności peptydu R25 w roztworze z jonami dwuwartościowymi (na przykładzie magnezu) i bez tych jonów. Wyniki eksperymentu przedstawiono na Fig. 4. Uzyskane wyniki porównania aktywności hydrolitycznej w zależności od obecności jonów magnezu wykazały brak aktywności peptydu R25 w próbach bez jonów dwuwartościowych.
Przykład 5: Analiza wpływu substytucji konserwatywnych na aktywność hydrolityczną peptydu R25 w obecności jonów magnezu
Ponadto przeprowadzono modelowanie in-silico metodą dynamiki molekularnej pojedynczych konserwatywnych substytucji najważniejszych dla katalizy reszt aminokwasowych pokazane na przykładzie peptydu R25 w kompleksie z pirofosforanem i jonem magnezu. Wyniki przedstawiono na Fig. 5: A) konserwatywna substytucja z zachowaniem oryginalnej funkcji odpowiadająca N-końcowemu motywowi H2N-X1-Q-D-D-G-X6-X7-X8-X9-R, B) konserwatywna substytucja z zachowaniem oryginalnej funkcji odpowiadająca N-końcowemu motywowi H2N-X1-Q-E-E-G-X6-X7-X8-X9-R, C) konserwatywna substytucja z zachowaniem oryginalnej funkcji odpowiadająca N-końcowemu motywowi H2N-X1-Q-E-D-G-X6-X7-X8-X9-K, D) przesunięcie reszty zasadowej (argininy) o dwa miejsca w stronę końca karboksylowego (oryginalna reszta argininy w peptydzie R25 została zastąpiona alaniną) z zachowaniem jej funkcji jako reszty koordynującej pirofosforan. Dodane aminokwasy w sekwencji motywu H2N-X1-Q-E-D-G-X6-X7-X8-X9-X-X-R oznaczone jako X oznaczają, niezależnie od siebie, dowolny aminokwas. Wszystkie powyższe przykłady konserwatywnych substytucji wykazują, że homologiczne reszty aminokwasowe zachowują swoją funkcję w peptydzie i prawdopodobnie nie zmieniają jego zdolności katalitycznych.
PL 248084 Β1
WYKAZ SEKWENCJI <110> Uniwersytet Warszawski <120> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia do zastosowania jako lek przeciwko dnie rzekomej <130> 17P48600PL00 <160> 50 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia zawierający sekwencję motywu N-końcowego o wzorze ogólnym H2N-X1-X2-X3-X4-Χ5-Χ6-Χ7-Χ8-Χ9-Χ10 <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARTANT < 222> 2 < 223> X oznacza Asn lub Gin <220>
< 221> YARIANT < 222> 3 <223> X oznacza Asp lub Glu
PL 248084 Β1 <2201 < 2 21> YARIANT < 222> 4 < 223> X oznacza Asp lub Glu <220>
< 2 21> YARIANT < 222> 5 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 2 21> YARIANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> S < 223> X oznacza dowolny aminokwas <2201 < 221> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 10 < 223> X oznacza Arg, His lub Lys < 400> 1
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
10
PL 248084 Β1 <210> 2 <211> 12 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Peptyd R25 <400> 2
Val Gin Glu Asp Gly Val Ser Leu Ala Arg Ser Val
10 <210> 3 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> VARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 3
Xaa Asn Glu Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 4 <211> 10 <212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT <222> 1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> 7ARIANT <222> 6 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> VARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> VARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 4
Xaa Gin Asp Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 5 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
<221> VARIANT <222> 8 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 5
Xaa Gin Glu Glu Gly Kaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 6 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 6
Xaa Gin Glu Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 7 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> YARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 22 1> YARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
<221> VARIANT <222> 8 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> VARIANT <222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 7
Xaa Gin Glu Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> VARIANT <222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> VARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 22 1> YARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 8
Xaa Gin Glu Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 9 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT <222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 22 1> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 22 1> VARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 22 1> VARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 9
Xaa Asn Asp Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 10 <211> 10 <212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT <222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 10
Xaa Asn Glu Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 11 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> YARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
<221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 11
Xaa Asn Glu Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 12 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Feptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
<221> VARIANT <222> 8 <223> X oznacza dowolny aminokwas
| <221> <222> <223> | YARIANT 9 X oznacza | dowolny aminokwas | |
| <400> 12 Xaa Asn Glu Asp 1 | Gly Xaa Xaa Xaa Xaa 5 | His 10 | |
| <210> <211> <212> <213> | 13 10 PRT Sekwencja | sztuczna |
<220>
<223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> 7ARIANT <222> 1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 6 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> VARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 2 21> VARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 13
Xaa Asn Glu Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys 15 10 <210> 14 <211> 10 <212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforana wapnia <220>
< 2 21> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 2 21> VARIANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> VARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 14
Xaa Gin Asp Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 15 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 2 21> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 2 21> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 15
Xaa Gin Asp Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 16 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> YARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 2 21> YARIANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 16
Xaa Gin Asp Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 17 <2L1> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> YARIANT <222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
<221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 17
Xaa Gin Asp Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 18 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> YARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> VARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 18
Xaa Gin Glu Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 19 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 22 1> YARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 19
Xaa Gin Glu Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 20 <211> 10 <212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> YARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> VARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 20
Xaa Gin Glu Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 21 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> VARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 21
Xaa Gin Glu Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 22 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 22 1> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> VARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 22
Xaa Gin Glu Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 23 <211> 10 < 212> PRT < 2L3> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> VARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 23
Xaa Asn Asp Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 24 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> VARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT < 222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 24
Kaa Asn Asp Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 25 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> YARIANT <222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
<221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 <22 3> X oznacza dowolny aminokwas <400> 25
Xaa Asn Asp Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 26 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
< 221> YARIANT < 222> 1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas
PL 248084 Β1 <220>
< 221> 7ARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 22 1> 7ARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 26
Xaa Asn Asp Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
5 10 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223>
Peptyd rozkładaja.cy kryształy pirofosforanu wapnia <400> 27
Xaa Asn Glu Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 28 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> VARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> S < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 28
Xaa Asn Glu Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 29 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 29
Xaa Asn Glu Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 30 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220 < 221> YARIANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220 < 221> YARIANT < 222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220 < 221> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400 30
Xaa Asn Glu Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210 31 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220 < 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220 <221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 31
Xaa Asn Glu Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 < 210> 32 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
<223>
Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 2 21> YARIANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <22ϋ>
< 2 21> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 32
Xaa Gin Asp Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<2 21> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> VARIANT <222> 6 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT <222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 33
Xaa Gin Asp Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa His
5 10 <210> 34 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> VAR1ANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 22 1> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 34
Xaa Gin Asp Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 35 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARTANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> VARIANT <222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 35
Xaa Gin Asp Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 < 210> 36 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 6 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 7 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 36
Xaa Gin Asp Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 37 <211> 10 <212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARTANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 37
Xaa Gin Glu Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 38 <211> 10 <212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 38
Xaa Gin Glu Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 < 210> 39 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> WARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> WARIANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> WARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> WARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 39
Xaa Asn Asp Glu Ala Kaa Xaa Xaa Xaa Arg
10 <210> 40 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> WARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 22 1> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 40
Xaa Asn Asp Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 41 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARTANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 41
Xaa Asn Asp Glu Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 42 <211> 10 <212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 2 2 1> YARIANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 42
Xaa Asn Asp Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa His
5 10 <210> 43 <211> 10 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223>
Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 43
Xaa Asn Asp Asp Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 44 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARTANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 2 2 1> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 44
Xaa Asn Glu Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 45 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 45
Xaa Asn Glu Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 46 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 46
Xaa Gin Asp Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 47 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<2 21> YARIANT <222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 2 21> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT <222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 47
Xaa Gin Asp Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 48 <211> 10 < 212> PRT < 213> Sekwencja sztuczna <220>
< 223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
<221> YARIANT <222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 48
Xaa Asn Asp Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa His
10 <210> 49 <211> 10 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<2 2 1> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 <223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARTANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 <223> X oznacza dowolny aminokwas <400> 49
Xaa Asn Asp Glu Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
10 <210> 50 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Seguence <220>
<223> Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia <220>
<221> YARIANT <222> 1
PL 248084 Β1 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 6 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 7 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 8 < 223> X oznacza dowolny aminokwas <220>
< 221> YARIANT < 222> 9 < 223> X oznacza dowolny aminokwas < 400> 50
Xaa Gin Glu Asp Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
10
Claims (3)
1. Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia składający się z sekwencji H2N-VQEDGVSLARSV-COOH (NR ID. SEKW.: 2).
2. Peptyd jak zdefiniowano w zastrz. 1 do zastosowania jako lek.
3. Peptyd do zastosowania według zastrz. 2, znamienny tym, że peptyd ten stosowany jest w kombinacji z jonami magnezu i/lub manganu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL437784A PL248084B1 (pl) | 2021-04-30 | 2021-04-30 | Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia i jego zastosowanie jako lek |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL437784A PL248084B1 (pl) | 2021-04-30 | 2021-04-30 | Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia i jego zastosowanie jako lek |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL437784A1 PL437784A1 (pl) | 2022-10-31 |
| PL248084B1 true PL248084B1 (pl) | 2025-10-20 |
Family
ID=83852883
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL437784A PL248084B1 (pl) | 2021-04-30 | 2021-04-30 | Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia i jego zastosowanie jako lek |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL248084B1 (pl) |
-
2021
- 2021-04-30 PL PL437784A patent/PL248084B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL437784A1 (pl) | 2022-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK173757B1 (da) | Blodkoaguleringsnedsættende peptidderivater | |
| Murakami et al. | Inhibition of myotoxic activity of Bothrops asper myotoxin II by the anti-trypanosomal drug suramin | |
| BODE et al. | The crystal and molecular structure of the third domain of silver pheasant ovomucoid (OMSVP3) | |
| ES2400013T3 (es) | Inhibidores de peptidilarginina desiminasa (PAD) | |
| AU638350B2 (en) | Bradykinin antagonists | |
| EA016038B1 (ru) | Антитело к tgf-бета и его применение | |
| US9890208B2 (en) | Compositions and methods for treating inflammation and fibrosis | |
| CN107810190A (zh) | 酶活化因子XII (FXIIa)的新型抑制剂 | |
| JP2015193648A (ja) | 生理活性アルファベータペプチドを作製する方法 | |
| JP2004519215A (ja) | クローディンポリペプチド | |
| JPH11505520A (ja) | Ｏ−マロニルチロシル化合物、ｏ−マロニルチロシル化合物含有ペプチド、およびそれらの使用 | |
| PL248084B1 (pl) | Peptyd rozkładający kryształy pirofosforanu wapnia i jego zastosowanie jako lek | |
| Patard et al. | An insight into the role of human pancreatic lithostathine | |
| CZ334095A3 (en) | Compounds containing chains of amino acids, their use and pharmaceutical compositions containing thereof | |
| EP0443429B1 (en) | Stabilized sulfonate and sulfate derivatives of hirudin | |
| PT95486A (pt) | Processo para a preparacao de derivados peptidicos anticoagulantes | |
| DE68928942T2 (de) | Antikoagulierende Peptide | |
| US20190367583A1 (en) | Thrombin inhibitors for treatment of stroke and related coagulative disorders | |
| US7314726B2 (en) | Beta secretase exosite binding peptides and methods for identifying beta secretase modulators | |
| EP0540574B1 (en) | Anticoagulant peptides | |
| JP2008536803A (ja) | 精子タンパク質に対する新規卵受容体 | |
| JP2004516301A (ja) | 癌治療のためのｅ２ｆ−１／サイクリン相互作用の阻害剤 | |
| US20110098446A1 (en) | Use of a tetraphenylborate (TPB) salt for the separation of biomolecules | |
| Attard et al. | The synthesis of phosphopeptides via the Bpoc-based approach | |
| Ivanov et al. | New peptide mimetics with potential β-secretase inhibition activity |