PL249026B1

PL249026B1 - Novel azetidine-2,4-dione derivative, method for preparation of novel azetidine-2,4-dione derivative and application of novel azetidine-2,4-dione derivative

Info

Publication number: PL249026B1
Application number: PL443102A
Authority: PL
Inventors: Krzysztof Zbigniew Łączkowski; Beata Donarska
Original assignee: Univ Mikolaja Kopernika W Toruniu
Priority date: 2022-12-09
Filing date: 2022-12-09
Publication date: 2026-02-23
Also published as: PL443102A1

Abstract

Przedmiotem wynalazku jest nowa pochodna azetydyno-2,4-dionu, sposób otrzymywania nowej pochodnej azetydyno-2,4-dionu i zastosowanie nowej pochodnej azetydyno-2,4-dionu.The subject of the invention is a new azetidine-2,4-dione derivative, a method for obtaining the new azetidine-2,4-dione derivative and the use of the new azetidine-2,4-dione derivative.

Description

Opis wynalazkuDescription of the invention

Przedmiotem wynalazku jest pochodna azetydyno-2,4-dionu, sposób otrzymywania i zastosowanie.The subject of the invention is an azetidine-2,4-dione derivative, method of preparation and use.

Neutrofile stanowią najliczniejszą grupę białych krwinek i poprzez szybkie uwalnianie cytokin, chemokin, reaktywnych form tlenu oraz proteaz pomagają w obronie przed infekcją bakteryjną i regulowaniu stanu zapalnego. Jednak przedłużona aktywacja neutrofili przyczynia się do zmian patofizjologicznych w płucach i powoduje ostre lub przewlekłe choroby zapalne, takie jak ostre uszkodzenie płuc (ALI), zespół ostrej niewydolności oddechowej (ARDS), przewlekłą obturacyjną chorobę płuc (POChP) i rozstrzenie oskrzeli w zespole ostrej niewydolności oddechowej.Neutrophils are the most abundant white blood cell group and, through the rapid release of cytokines, chemokines, reactive oxygen species, and proteases, help defend against bacterial infection and regulate inflammation. However, prolonged neutrophil activation contributes to pathophysiological changes in the lungs and causes acute or chronic inflammatory diseases such as acute lung injury (ALI), acute respiratory distress syndrome (ARDS), chronic obstructive pulmonary disease (COPD), and bronchiectasis in acute respiratory distress syndrome.

Ludzka neutrofilowa elastaza (HNE, EC 3.4.21.37) jest cytotoksyczną proteazą serynową o masie 29 kDa, składającą się z polipeptydów o pojedynczych łańcuchach i 218 aminokwasach z czterema wewnątrzcząsteczkowymi wiązaniami dwusiarczkowymi łączącymi osiem reszt półcystynowych. Elastaza uwalniana jest przez degranulację neutrofili lub podczas tworzenia zewnątrzkomórkowej sieci neutrofili pełniących funkcję pułapek dla patogenów. Pełni ona również funkcję regulatora odpowiedzi zapalnej, przez co może degradować wszystkie białka macierzy zewnątrzkomórkowej, takie jak elastyna, kolageny, a także może aktywować komórki nabłonka płucnego do produkcji zapalnych cytokin, które mogą dalej aktywować neutrofile, a następnie spowodować ostre uszkodzenie płuc oraz ich zwłóknienie.Human neutrophil elastase (HNE, EC 3.4.21.37) is a 29 kDa cytotoxic serine protease composed of single-chain polypeptides of 218 amino acids with four intramolecular disulfide bonds linking eight hemicystine residues. Elastase is released by neutrophil degranulation or during the formation of the neutrophil extracellular network, which serves as a trap for pathogens. It also acts as a regulator of the inflammatory response, capable of degrading all extracellular matrix proteins, such as elastin and collagens, and can activate lung epithelial cells to produce inflammatory cytokines, which can further activate neutrophils and subsequently cause acute lung injury and fibrosis.

Wysoka aktywność elastazy neutrofilowej jest wskaźnikiem złego rokowania w raku piersi, raku jelita grubego i niedrobnokomórkowym raku płuc. Dlatego hamowanie aktywności elastazy neutrofilowej można uznać za nową strategię leczenia farmakologicznego w chorobach nowotworowych i zapalnych.High neutrophil elastase activity is a marker of poor prognosis in breast cancer, colorectal cancer, and non-small cell lung cancer. Therefore, inhibition of neutrophil elastase activity may be considered a novel pharmacological treatment strategy for neoplastic and inflammatory diseases.

Z tego względu w ostatnich latach wzrosło zainteresowanie poszukiwaniem nowych grup związków będących inhibitorami ludzkiej neutrofilowej elastazy.For this reason, in recent years there has been an increased interest in searching for new groups of compounds that are inhibitors of human neutrophil elastase.

Obecnie sivelestat sodu (ONO-5046) jest jedynym klinicznie zarejestrowanym, chemicznie syntetyzowanym selektywnym inhibitorem HNE. Łagodzi choroby płuc i poprawia pracę płuc. ONO-5046 jest klinicznie stosowany w leczeniu zapalenia płuc i ALI wywołanego przez infekcje wirusowe. Jednak użycie ONO-5046 jest ograniczone ze względu na słabą farmakokinetykę i potencjalne ryzyko toksyczności narządowej. Innym selektywnym i odwracalnym inhibitorem ludzkiej neutrofilowej elastazy jest alvelestat (MPH966), który obecnie jest w drugiej fazie badań klinicznych. Oczekuje się, że zahamowanie aktywności ludzkiej elastazy zmniejszy uszkodzenie płuc i może spowolnić postęp choroby genetycznej u pacjentów z niedoborem alfa 1-antytrypsyny (AATD).Currently, sivelestat sodium (ONO-5046) is the only clinically approved, chemically synthesized, selective HNE inhibitor. It alleviates lung disease and improves lung function. ONO-5046 is clinically used to treat pneumonia and ALI caused by viral infections. However, its use is limited due to poor pharmacokinetics and the potential risk of organ toxicity. Another selective and reversible inhibitor of human neutrophil elastase is alvelestat (MPH966), which is currently in phase II clinical trials. Inhibition of human elastase activity is expected to reduce lung damage and may slow the progression of the genetic disease in patients with alpha-1 antitrypsin deficiency (AATD).

W międzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO 2017102674 A1 opisano związki triazolinonu jako inhibitory HNE. W kolejnym międzynarodowym zgłoszeniu WO 2014095700 A1 opisano pochodne pirymidynonu jako inhibitory HNE. Natomiast w międzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO2017207433 A1 opisano pochodne imidazolonu i pirazolonu jako inhibitory HNE. Synteza nowych inhibitorów ludzkiej neutrofilowej elastazy została również opisana w pracach: Antonio J.P.M. et al., ACS Omega 2018, 3, 7418-7423; Crocetti L. et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 6259-6272; Butt A.R.S. et al., Bioorg. Chem. 2019, 86, 197-209; Zheng Q. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2019, 116, 18808-18814.The international patent application WO 2017102674 A1 describes triazolinone compounds as HNE inhibitors. Another international application WO 2014095700 A1 describes pyrimidinone derivatives as HNE inhibitors. However, the international patent application WO2017207433 A1 describes imidazolone and pyrazolone derivatives as HNE inhibitors. The synthesis of new human neutrophil elastase inhibitors was also described in the works of: Antonio J.P.M. et al., ACS Omega 2018, 3, 7418-7423; Crocetti L. et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 6259-6272; Butt A.R.S. et al., Bioorg. Chem. 2019, 86, 197-209; Zheng Q. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2019, 116, 18808-18814.

Zastosowanie azetydyno-2,4-dionów, znanych również jako 4-okso-beta-laktamy jako selektywnych inhibitorów ludzkiej elastazy zostało już przedstawione w pracach naukowych: Mulchande J. et al., J. Med. Chem. 2008, 51, 1783-1790; Nunes A. et al., Pharmaceutics 2020, 12, 358; Donarska B. et al., Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 7566.The use of azetidine-2,4-diones, also known as 4-oxo-beta-lactams, as selective inhibitors of human elastase has already been presented in scientific papers: Mulchande J. et al., J. Med. Chem. 2008, 51, 1783-1790; Nunes A. et al., Pharmaceutics 2020, 12, 358; Donarska B. et al., Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 7566.

Celem wynalazku jest opracowanie pochodnej azetydyno-2,4-dionu, która będzie mogła mieć zastosowanie jako składnik leków o aktywności inhibitorów ludzkiej neutrofilowej elastazy. Związek ten nie były opisany jak dotąd w literaturze ani pod względem jego budowy, ani jako inhibitor ludzkiej neutrofilowej elastazy.The aim of this invention is to develop an azetidine-2,4-dione derivative that can be used as a component of drugs with activity as inhibitors of human neutrophil elastase. This compound has not yet been described in the literature, either in terms of its structure or as an inhibitor of human neutrophil elastase.

Istotą wynalazku jest pochodna azetydyno-2,4-dionu stanowiąca 3-(4-(3,3-dietylo-2,4-dioksoazetydyn-1-ylo)-1-oksoizoindolin-2-ylo)-piperydyno-2,6-dion o wzorze 1.The essence of the invention is an azetidine-2,4-dione derivative constituting 3-(4-(3,3-diethyl-2,4-dioxoazetidin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)-piperidine-2,6-dione of formula 1.

Istotą wynalazku jest także pochodna azetydyno-2,4-dionu o wzorze 1 do zastosowania w leczeniu nowotworu piersi, nowotworu jelita grubego i niedrobnokomórkowego nowotworu płuc.The essence of the invention is also an azetidine-2,4-dione derivative of formula 1 for use in the treatment of breast cancer, colorectal cancer and non-small cell lung cancer.

Istotą wynalazku jest także sposób otrzymywania pochodnej azetydyno-2,4-dionu o wzorze 1 charakteryzujący się tym, że 3-(4-amino-1-oksoizoindolin-2-ylo)piperydyno-2,6-dion poddaje się reakcji w atmosferze azotu lub argonu z dichlorkiem kwasu dietylomalonowego oraz trietyloaminą w stosunku od 0,8:1:3,2 do 1,5:3:10,5 korzystnie 1:1,5:6, podając mieszaniu w temperaturze od 18°C do 25°C, podgrzewa otrzymany roztwór w temperaturze od 35°C do 40°C najkorzystniej 40°C a następnie po odparo waniu rozpuszczalnika otrzymany produkt poddaje się oczyszczaniu w procesie chromatografii kolumnowej z użyciem eluentu dichlorometanu i metanolu w stosunku od 90:10 do 98:2 korzystnie 95:5. Korzystnie mieszanie prowadzi się w czasie od 10 h do 30 h najkorzystniej 20 h.The essence of the invention is also a method for obtaining an azetidine-2,4-dione derivative of formula 1, characterized in that 3-(4-amino-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione is reacted in a nitrogen or argon atmosphere with diethylmalonic acid dichloride and triethylamine in a ratio of 0.8:1:3.2 to 1.5:3:10.5, preferably 1:1.5:6, while stirring at a temperature of 18°C to 25°C, the obtained solution is heated at a temperature of 35°C to 40°C, most preferably 40°C, and then, after evaporation of the solvent, the obtained product is purified by column chromatography using the eluent of dichloromethane and methanol in a ratio of 90:10 to 98:2, preferably 95:5. Preferably, mixing is carried out for a period of 10 h to 30 h, most preferably 20 h.

Związek według wynalazku wykazuje silne hamowania aktywności enzymatycznej ludzkiej neutrofilowej elastazy, tak więc może znaleźć zastosowanie do wytwarzania nowych leków.The compound of the invention exhibits potent inhibition of the enzymatic activity of human neutrophil elastase and may therefore be used in the production of new drugs.

Wynalazek został ujawniony w poniższych przykładach wykonania.The invention is disclosed in the following embodiments.

Przykład IExample I

Sposób otrzymywania 3-(4-(3,3-dietylo-2,4-dioksoazetydyn-1-ylo)-1-oksoizoindolin-2-ylo)piperydyno-2,6-dionu.Method for obtaining 3-(4-(3,3-diethyl-2,4-dioxoazetidin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione.

W kolbie kulistej o poj. 50 ml w atmosferze azotu umieszcza się 10 ml suchego dichlorometanu oraz 3-(4-amino-1 -oksoizoindolin-2-ylo)piperydyno-2,6-dion w ilości 1,93 mmol dodaje się dichlorek kwasu dietylomalonowego w ilości 2,90 mmol, a następnie dodaję się trietyloaminę w ilości 11,60 mmola. Mieszaninę reakcyjną miesza się znanymi metodami przez 20 godzin w temperaturze pokojowej 22°C. Podgrzewa się otrzymany roztwór w temperaturze 40°C. Po tym czasie rozpuszczalnik się odparowuje a produkt oczyszcza poprzez chromatografię kolumnową z wykorzystaniem eluentu dichlorometanu i metanolu w stosunku 95:5. Chromatografię kolumnową prowadzi się w ten sposób, że produkt rozpuszcza się w niewielkiej ilości dichlorometanu a następnie wprowadza się na adsorbent będący żelem krzemionkowym o średnicy złoża (230-400 mesh) umieszczony w cylindrycznej kolumnie. Przepływ eluentu może być grawitacyjny lub wymuszony za pomocą pompy ciśnieniowej. Składniki przemieszczając się ku dołowi kolumny ulegają rozdziałowi na poszczególne frakcje, które analizuje za pomocą chromatografii TLC. Rozpuszczalnik z czystej frakcji się odparowuje i uzyskuje czysty produkt. Otrzymano 0,32 g związku (43,2% wydajności teoretycznej) o temperaturze topnienia 102-105°C. Właściwą budowę związku oraz jego czystość potwierdzono na podstawie analizy widm 1H i ¹³C NMR oraz HRMS.In a 50 ml round-bottom flask under nitrogen atmosphere, 10 ml of dry dichloromethane and 1.93 mmol of 3-(4-amino-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione are placed, 2.90 mmol of diethylmalonic acid dichloride is added, and then 11.60 mmol of triethylamine is added. The reaction mixture is stirred by standard methods for 20 hours at room temperature (22°C). The resulting solution is heated to 40°C. After this time, the solvent is evaporated, and the product is purified by column chromatography using an eluent of dichloromethane and methanol in a 95:5 ratio. Column chromatography is performed by dissolving the product in a small amount of dichloromethane and then loading it onto a 230-400 mesh silica gel adsorbent placed in a cylindrical column. The eluent flow can be gravity-fed or forced by a pressure pump. As the components move down the column, they separate into individual fractions, which are analyzed using TLC. The solvent from the pure fraction is evaporated, yielding the pure product. 0.32 g of the compound (43.2% of theoretical yield) was obtained, with a melting point of 102-105°C. The correct structure and purity of the compound were confirmed by analysis of 1H and ^13C NMR spectra and HRMS.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): 1.01 (t, 6H, 2CH3, J = 7,2 Hz); 1.86 (q, 4H, 2CH2, J = 7,3 Hz); 1,95-2,05 (m, 1H, CH2); 2,37-2,46 (m, 1H, CH2); 2,54-2,63 (m, 1H, CH2); 2,84-2,93 (m, 1H, CH2); 4,53 (q, 2H, CH2, J = 18,0 Hz); 5,12 (dd, 1H, CH, J = 5,2 Hz, J = 13,2 Hz); 7,64-7,69 (m, 1H, CHAr); 7,58-7,81 (m, 2H, 2CHAr); 10.99 (bs, 1H,NH). ^1H NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): 1.01 (t, 6H, 2CH3, J = 7.2 Hz); 1.86 (q, 4H, 2CH2, J = 7.3 Hz); 1.95-2.05 (m, 1H, CH2); 2.37-2.46 (m, 1H, CH2); 2.54-2.63 (m, 1H, CH2); 2.84-2.93 (m, 1H, CH2); 4.53 (q, 2H, CH2, J = 18.0 Hz); 5.12 (dd, 1H, CH, J = 5.2 Hz, J = 13.2 Hz); 7.64-7.69 (m, 1H, CHAr); 7.58-7.81 (m, 2H, 2CHAr); 10.99 (bs, 1H,NH).

¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): 9,41 (2CHs); 22,77 (CH2); 23,12 (2CH2); 31,63 (CH2); 52,26 (CH); 70,63 (C); 123,48 (C), 126,53 (C); 126,97 (C); 129,93 (C); 134,30 (C); 135,16 (C); 167,41 (CO); 171,29 (CO); 171,78 (CO); 173,28 (CO). ¹³ C NMR (100 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): 9.41 (2CHs); 22.77 (CH2); 23.12 (2CH2); 31.63 (CH2); 52.26 (CH); 70.63 (C); 123.48 (C), 126.53 (C); 126.97 (C); 129.93 (C); 134.30 (C); 135.16 (C); 167.41 (CO); 171.29 (CO); 171.78 (CO); 173.28 (CO).

HRMS (m/z) obliczono dla C20H22N3O5: 384,1559 [M+H]+. Wartość zmierzona 384,1560.HRMS (m/z) calculated for C20H22N3O5: 384.1559 [M+H]+. Measured value 384.1560.

W wyniku sposobu otrzymano nową pochodną 3-(4-(3,3-dietylo-2,4- dioksoazetydyn-1-ylo)-1-oksoizoindolin-2-ylo)-piperydyno-2,6-dion o wzorze 1.As a result of the method, a new derivative 3-(4-(3,3-diethyl-2,4-dioxoazetidin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)-piperidine-2,6-dione of formula 1 was obtained.

Oznaczenie zdolności inhibicji ludzkiej neutrofilowej elastazy związku według wzoru 1.Determination of the human neutrophil elastase inhibiting ability of the compound according to formula 1.

Ocena potencjalnej aktywności biologicznej opiera się na zdolności neutrofilowej elastazy pochodzącej z ludzkich leukocytów (E8140, Sigma-Aldrich) do rozkładu niefluorescencyjnego substratu MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC (Carbiochem) specyficznego dla tego enzymu, którym jest peptyd połączony z fluoroforem 7-amino-4-metylokumaryną (AMC). Degradacja substratu-AMC przez elastazę związana jest z uwolnieniem fluoroforu, którego ilość jest wprost proporcjonalna do aktywności enzymu. Wzrost fluorescencji spowodowany aktywnością enzymu był monitorowany przy długości fali wzbudzenia 380 nm i emisji 460 nm za pomocą czytnika mikropłytek (Spektrofluorymetr FP-8500, JASCO). Jako inhibitor referencyjny wykorzystano Sivelestat - zarejestrowany inhibitor elastazy neutrofilowej.The assessment of potential biological activity is based on the ability of human leukocyte-derived neutrophil elastase (E8140, Sigma-Aldrich) to degrade the nonfluorescent substrate MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC (Carbiochem), specific for this enzyme. This substrate is a peptide linked to the fluorophore 7-amino-4-methylcoumarin (AMC). Degradation of the AMC substrate by elastase is associated with the release of the fluorophore, the amount of which is directly proportional to enzyme activity. The increase in fluorescence induced by enzyme activity was monitored at an excitation wavelength of 380 nm and an emission wavelength of 460 nm using a microplate reader (FP-8500 Spectrofluorimeter, JASCO). Sivelestat, a registered neutrophil elastase inhibitor, was used as the reference inhibitor.

Reakcję przeprowadzono w buforze testowym składającym się z 200 mM roztworu Tris-HCl (pH 7,5), 0,01% albuminy wołowej (BSA) oraz 0,05% Tween 20. Początkowo różne stężenia badanego związku (10-100 nM) inkubowano z 20 mU/ml roztworem elastazy neutrofilowej w 25°C. W celu rozpoczęcia reakcji dodano 25 μΜ roztworu substratu. Jako próbę kontrolną wykorzystano mieszaninę enzymu ze substratem bez dodatku inhibitora. Objętość końcowa mieszaniny reakcyjnej wynosiła 100 μΚ Wzrost fluorescencji monitorowano przy długości fali wzbudzenia 380 nm i emisji 460 nm na 96-dołkowej płytce przez 30 min. Doświadczenie wykonano w trzech powtórzeniach, a wyniki przedstawiono w Tabeli 1.The reaction was performed in an assay buffer consisting of 200 mM Tris-HCl solution (pH 7.5), 0.01% bovine serum albumin (BSA), and 0.05% Tween 20. Initially, various concentrations of the test compound (10-100 nM) were incubated with 20 mU/ml neutrophil elastase solution at 25°C. To start the reaction, 25 μM substrate solution was added. An enzyme-substrate mixture without added inhibitor was used as a control. The final volume of the reaction mixture was 100 μK. The increase in fluorescence was monitored at an excitation wavelength of 380 nm and an emission wavelength of 460 nm in a 96-well plate for 30 min. The experiment was performed in triplicate, and the results are presented in Table 1.

W celu wyznaczenia wartości względnej fluorescencji (RFU) dla próby kontrolnej i badanej, w liniowym zakresie wskazań utworzonego wykresu, wybrano dwa punkty czasowe (T1 i T2) i odczytano odpowiednie wartości fluorescencji (R1 i R2), które podstawiono do równania: ARFU = R2-R1/T2-T1. Procent inhibicji aktywności elastazy przez badany związek wyznaczono wg. wzoru:In order to determine the relative fluorescence (RFU) value for the control and test samples, in the linear range of the generated graph, two time points were selected (T1 and T2) and the corresponding fluorescence values (R1 and R2) were read, which were substituted into the equation: ARFU = R2-R1/T2-T1. The percentage of inhibition of elastase activity by the test compound was determined according to the formula:

PL 249026 Β1 % Inhibicji elastazy = , 4flro_{prłtaładana χ 10}θ_% hRFU_!iontroi_a PL 249026 Β1 % Elastase Inhibition = , 4flro _{prłtadana χ 10} θ _% hRFU _!iontro i _a

Stężenie inhibitora powodujące 50% inhibicję reakcji enzymatycznej (IC50) wyznaczono za pomocą regresji nieliniowej (program Graph Pad Prism), wykreślając % inhibicji w stosunku do badanych stężeń inhibitora. Przedstawione dane są średnimi wartościami uzyskanymi w co najmniej trzech niezależnych eksperymentach.The inhibitor concentration causing 50% inhibition of the enzymatic reaction (IC50) was determined using nonlinear regression (Graph Pad Prism software) by plotting the % inhibition against the inhibitor concentrations tested. Data presented are mean values obtained from at least three independent experiments.

Tabela 1. Aktywność inhibicyjna dla pochodnej według wzoru 1 oraz inhibitora referencyjnego, rozcieńczonych seryjnie w buforze testowym.Table 1. Inhibitory activity for the derivative according to formula 1 and the reference inhibitor, serially diluted in assay buffer.

Nazwa związku Name of the association Stężenie [nM]Concentration [nM] % Inhibicji% Inhibition IC₅₀ [nM] ±SD IC ₅₀ [nM] ±SD 3-(4-(3,3-dietylo-2,4dioksoazetydyn-1 ylo)-l- oksoizoindolm-2ylo)piperydyno-2,6dion 3-(4-(3,3-diethyl-2,4dioxoazetidin-1yl)-l- oxisoindolm-2yl)piperidine-2,6dione 10 10 21,15 21.15 21,78 ±0,45 21.78 ±0.45 25 25 53,35 53.35 40 40 75,59 75.59 50 50 83,93 83.93 100 100 94,77 94.77 SivelestatSivelestat 5 5 10,22 10.22 18,33±0,73 18.33±0.73 10 10 35,38 35.38 25 25 60,06 60.06 50 50 77,66 77.66 75 75 86,03 86.03

Związek według wzoru 1 we wszystkich zastosowanych stężeniach istotnie hamował aktywność ludzkiej neutrofilowej elastazy, a jego aktywność jest porównywalna do aktywności wzorca jakim jest Sivelestat.The compound according to formula 1 at all concentrations used significantly inhibited the activity of human neutrophil elastase, and its activity is comparable to the activity of the standard, Sivelestat.

Udowodnione właściwości 3-(4-(3,3-dietylo-2,4-dioksoazetydyn-1-ylo)-1-oksoizoindolin-2-ylo)-piperydyno-2,6-dionu o wzorze 1, uzasadniają jego zastosowanie jako składnik leków o aktywności inhibitorów ludzkiej neutrofilowej elastazy.The proven properties of 3-(4-(3,3-diethyl-2,4-dioxoazetidin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)-piperidine-2,6-dione of formula 1 justify its use as a component of drugs with the activity of human neutrophil elastase inhibitors.

Przykład IIExample II

Sposób otrzymywania pochodnej azetydyno-2,4-dionu o wzorze 1 polega na tym, że w szklanej kolbie kulistej pochodną 3-(4-amino-1-oksoizoindolin-2-ylo)piperydyno-2,6-dion poddaje się reakcji w atmosferze argonu z dichlorkiem kwasu dietylomalonowego oraz trietyloaminą w stosunku 0,8:1:3,2, podając mieszaniu w temperaturze 18°C w czasie 30 h, podgrzewa otrzymany roztwór w temperaturze 35°C a następnie po odparowaniu rozpuszczalnika otrzymany produkt poddaje się oczyszczaniu w procesie chromatografii kolumnowej z użyciem eluentu dichlorometanu i metanolu w stosunku 90:10.The method of obtaining the azetidine-2,4-dione derivative of formula 1 consists in reacting the 3-(4-amino-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivative in a glass round-bottom flask under argon atmosphere with diethylmalonic acid dichloride and triethylamine in a ratio of 0.8:1:3.2, stirring at 18°C for 30 h, heating the obtained solution at 35°C and then, after evaporating the solvent, the obtained product is purified by column chromatography using the eluent dichloromethane and methanol in a ratio of 90:10.

W wyniku sposobu otrzymano nową pochodną 3-(4-(3,3-dietylo-2,4-dioksoazetydyn-1-ylo)-1-oksoizoindolin-2-ylo)-piperydyno-2,6-dion o wzorze 1.As a result of the method, a new derivative 3-(4-(3,3-diethyl-2,4-dioxoazetidin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)-piperidine-2,6-dione of formula 1 was obtained.

Przykład IIIExample III

Sposób otrzymywania pochodnej azetydyno-2,4-dionu o wzorze 1 polega na tym, że w szklanej kolbie kulistej pochodną 3-(4-amino-1-oksoizoindolin-2-ylo)piperydyno-2,6-dion poddaje się reakcji w atmosferze azotu z dichlorkiem kwasu dietylomalonowego oraz trietyloaminą w stosunku 1,5:3:10,5 podając mieszaniu w temperaturze 25°C w czasie 10 h, podgrzewa otrzymany roztwór w temperaturze 38°C a następnie po odparowaniu rozpuszczalnika otrzymany produkt poddaje się oczyszczaniu w procesie chromatografii kolumnowej z użyciem eluentu dichlorometanu i metanolu w stosunku 98:2.The method of obtaining the azetidine-2,4-dione derivative of formula 1 consists in reacting the 3-(4-amino-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivative in a glass round-bottom flask under nitrogen atmosphere with diethylmalonic acid dichloride and triethylamine in the ratio of 1.5:3:10.5, stirring at 25°C for 10 hours, heating the obtained solution at 38°C and then, after evaporating the solvent, the obtained product is purified by column chromatography using the eluent of dichloromethane and methanol in the ratio of 98:2.

W wyniku sposobu otrzymano nową pochodną 3-(4-(3,3 -dietylo-2,4-dioksoazetydyn-1-ylo)-1-oksoizoindolin-2-ylo)-piperydyno-2,6-dion o wzorze 1.As a result of the method, a new derivative 3-(4-(3,3-diethyl-2,4-dioxoazetidin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)-piperidine-2,6-dione of formula 1 was obtained.

Claims

1. Azetidine-2,4-dione derivative consisting of 3-(4-(3,3-diethyl-2,4- dioxoazetidin-1-yl)-1-oxoisoindolin-2-yl)-piperidine-2,6-dione of formula 1.

2. An azetidine-2,4-dione derivative of formula 1 for use in the treatment of breast cancer, colorectal cancer and non-small cell lung cancer.

3. A method for obtaining an azetidine-2,4-dione derivative of formula 1 characterized in that 3-(4-amino-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione is reacted in a nitrogen or argon atmosphere with diethylmalonic acid dichloride and triethylamine in a ratio of 0.8:1:3.2 to 1.5:3:10.5, preferably 1:1.5:6, while stirring at a temperature of 18°C to 25°C, the obtained solution is heated at a temperature of 35°C to 40°C, most preferably 40°C, and then, after evaporation of the solvent, the obtained product is purified by column chromatography using the eluent of dichloromethane and methanol in a ratio of 90:10 to 98:2, preferably 95:5.

4. The method according to claim 3, characterized in that the mixing is carried out for a time of 10 h to 30 h, most preferably 20 h.