PL443288A1 - Sposób oceny jakości nasion, zwłaszcza pomidora - Google Patents

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest sposób oceny jakości nasion pomidora, który polega na tym, że nasiona pomidora poddaje się obróbce wstępnej oczyszczania w ten sposób, że nasiona liofilizuje się znanymi sposobami, mieli i ekstrahuje poprzez wytrząsanie w kwasie mrówkowym o stężeniu od 1,9 do 2,1 mM, korzystnie 2 mM i sonikację, następnie wiruje i tak uzyskany supernatant zbiera się a resztę materiału poddaje ponownej obróbce wstępnej oczyszczania co najmniej jeden raz, następnie uzyskane supernatanty łączy się, miesza i rozcieńcza z octanem amonu o stężeniu od 49,9 do 50,1 mM, korzystnie 50 mM i pH od 4,49 do 4,51, korzystnie 4,5, w ilości od 1,99 do 2,01 ml, korzystnie 2 ml ocatanu amonu na 2 ml supernatantu, i tak przygotowane próbki supernatantu poddaje się oczyszczaniu na hybyrdowych kolumienkach SPE w ten sposób że supernatant przepuszcza się od 1 do 10 razy korzystnie 3 razy przez kolumienki SPE w porcjach po od 0,5 ml do 1,21 ml korzystnie 1,2 ml, przemywa hybrydowe kolumienki SPE kolejno octanem amonu oraz metanolem przez przepuszczenie roztworu przez złoże hybrydowych kolumienek SPE i wymywa nukleotydy ze złoża hybrydowej kolumienki SPE roztworem metanolu, wody i octanu amonu w stosunku od 1,9/6,9/0,9 do 2,1/7,1/1,1 korzystnie 2/7/1, przy czym czyszczenie hybrydowe prowadzi się w temperaturze od 18 do 30°C korzystnie 20°C utrzymując przepływ cieczy na poziomie nie większym niż 5 ml/min, korzystnie od 3 do 4 ml/min, następnie tak otrzymany i zebrany eluat frakcji nukleotydów odparowuje się w strumieniu azotu gazowego a pozostały osad rozpuszcza w roztworze acetonitrylu i wody w stosunku od 5% do 7% acetonitrylu korzystnie 6% acetonitrylu w wodzie, używając 50 do 250 µl, korzystnie 100 µl tego rozpuszczalnika i tak otrzymany osad poddaje się analizie wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej w urządzeniu UHPLC, a następnie analizuje się otrzymane wykresy analityczne.