PL447389A1 - Sposób pozyskiwania preparatu o podwyższonej zawartości lunazyny - Google Patents

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest sposób pozyskiwania preparatu zawierającego podwyższoną zawartość lunazyny przeznaczonej do stosowania w przemyśle kosmoceutycznym, który charakteryzuje się tym, że przeprowadza się ekstrakcję nasion sojowych w buforze octanowo amonowym w stosunku surowca do czynnika ekstrakcyjnego wynoszącym od 1:5 do 1:50, korzystnie 1:40, w temperaturze od 10°C do 40°C, korzystnie 20°C przez okres od 1 h do 24 h, korzystnie 12 h, następnie nierozpuszczalne cząstki usuwa się na worku ociekowym o wielkości porów 200 µm, dokonuje się obniżenia wartości pH uzyskanego supernatantu do 2,5 – 4,5, korzystnie 3,5 i pozostawia się na okres od 1 h do 24 h, korzystnie 12 h, kolejno zawiesinę poddaje się filtracji mechanicznej bądź odwirowaniu, uzyskany osad odrzuca się, a supernatant nanosi się na kolumnę chromatograficzną ze złożem jonowymiennym typu kationit zrównoważoną buforem octanowo amonowym o pH wynoszącym od 3,0 do 4,0, korzystnie 3,5 i prowadzi się adsorbcję, aż do uzyskania takiego samego stężenia lunazyny w wycieku z kolumny chromatograficznej ze złożem jonowymiennym jak stężenie lunazyny w roztworze przed kolumną chromatograficzną ze złożem jonowymiennym, kolejno kolumnę chromatograficzną ze złożem jonowymiennym przemywa się buforem octanowo-amonowym o pH wynoszącym od 3,0 do 4,0, korzystnie 3,5, aż do uzyskania stabilnej linii bazowej chromatogramu UV 220 nm i rozpoczyna się proces eluacji gradientowej, w której bufor A stanowi octan amonu o pH wynoszącym od 3,0 do 4,0, korzystnie 3,5 i przewodnictwie od 5 do 15 mS/cm, korzystnie 10 mS/cm, a bufor B octan amonu o pH wynoszącym od 5,0 do 6,0, korzystnie 5,5 i przewodnictwie od 20 do 40 mS/cm, korzystnie 30 mS/cm, kolejno zbiera się frakcje otrzymanego supernatantu i oznacza się stężenie zawartej w nich lunazyny metodą HPLC, frakcje zawierające co najmniej 5% i więcej lunazyny w przeliczeniu na całkowite białko zbiera się i przepuszcza przez wymieniacze jonowe w celu pozbycia się soli, na koniec uzyskany supernatant zatęża się z wykorzystaniem kasetowego filtra membranowego z membrany 1 kDa i poddaje się procesowi liofilizacji.