PL84914B1 - - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób nowego (3-hydroksyetylotiolinkosaminidu o wzorze 1.Sposób wedlug wynalazku polega na tym, ze szczep Streptomyces caelestis 22227a o charakte¬ rystycznych cechach hodowli, zdeponowanej pod numerem NRRL 5320, hoduje sie w wodnym sro¬ dowisku odzywczym, w warunkach aerobowych i otrzymana 7-0-demetylocelestycetyne o wzorze 2 poddaje sie hydrazynolizie z wodzianem hydra¬ zyny pod chlodnica zwrotna. (3-hydroksyetylotiolinkosaminid o wzorze 1 moz¬ na przeprowadzic w rózne analogi, które mozna przedstawic wzorem strukturalnym 3.Zwiazki o wzorze 3 mozna przeprowadzic w zwiazki bakteriobójcze przez sprzeganie z kwa¬ sem pirolidynokarboksylowym wedlug opisu paten¬ towego Stanów Zjednoczonych Ameryki Nr 3514440.Zarówno zwiazki, jak i sposób opisane sa w wy¬ mienionym opisie patentowym.W zwiazkach o wzorze 3, X oznacza grupe -OH w konfiguracji /R/ i /S/; grupe alkoksy o najwy¬ zej 20 atomach wegla w konfiguracji /R/ i /S/ za wyjatkiem, gdy X oznacza /R/ -OCH8 i R ozna¬ cza wodór; i R oznacza wodór lub acyl kwasu weglowodorokarboksylowego o najwyzej 18 ato¬ mach wegla, albo acyl kwasu chlorowco-, nitro-, hydroksy-, amino-, tiocyjano- lub nizszego alko- ksyweglowodorokarboksylowego o najwyzej 18 atomach wegla, albo R oznacza grupe 0=P=/OH/2, a Ri oznacza wodór lub acyl kwasu weglowodoro- 2 karboksylowego o najwyzej 18 atomach wegla, albo acyl kwasu chlorowco-, nitro-, hydroksy-, amino-, tiocyjano- lub nizszego alkoksyweglowo- dorokarboksylowego o najwyzej 18 atomach wegla, przy czym, jezeli X oznacza /R/-OCH8 i R ozna¬ cza wodór, wówczas Rt nie oznacza czesci kwasu salicylowego.Przykladami wyzej wymienionych grup alko- ksylowych o najwyzej 20 atomach' wegla sa grupy metoksy, etoksy, propoksy, butoksy, pentyloksy, heksyloksy, heptyloksy, oktyloksy, nonyloksy, de- cyloksy, undecyloksy, dodecyloksy, triodecyloksy, tetradecyloksy, pentadecyloksy, heksadecyloksy, heptadecyloksy, oktadecyloksy, nonadecyloksy i eikozyloksy oraz ich postaci izomeryczne. Przy¬ kladami chlorowca w grupie RA sa chlor, brom i jod. Przyklady acylu kwasu weglowodorokarbo¬ ksylowego o najwyzej 18 atomach wegla i acylu kwasu chlorowco-, nitro-, hydroksy-, amino-, tio¬ cyjano- i nizszego alkoksy — weglowodorokarbo¬ ksylowego o najwyzej 18 atomach wegla, podane sa w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 342%012, kolumna 5, wiersz 64 do ko¬ lumny 6, wiersz 47.Wlasnosci chemiczne i fizyczne nowego chloro¬ wodorku 7-0-demetylocelestycetyny stanowiacego produkt posredni w sposobie wedlug wynalazku podano ponizej.Analiza elementarna: 8491484914 Obliczono dla C^H^N-sOsS • HC1: C-50,22*/o; H-6,41°/o; N-5,09%; S-5,83 Cl-6,450/o _._ _.Obliczono dla C^Hg^O^S • HC1 • H20: C-48,63«/o; H-6,57%; N-4,93%; S-5,68»/o; Cl-6,24*/o.Znaleziono: C-46,57%; H-6,21»/o; N-5,72°/o; S-5,13»/a; Cl-7,35Vo.Ciezar czasteczkowy: Obliczony ciezar czasteczkowy chlorowodorku wy¬ nosi 550. Jednowodzian chlorowodorku 7-0-deme- tylocelestycetyny ma ciezar czasteczkowy 568. Mia¬ reczkowanie potencjometryczne wykazalo ciezar czasteczkowy 534.Grupy dajace sie oznaczyc miareczkowo: Miareczkowanie potencjometryczne w wodzie przy uzyciu wodnego roztworu KOH wykazalo obecnosc grupy zasadowej o wartosci pKs=7,5 i slabo kwa¬ snej grupy o wartosci pKa=9,6.Skrecalnosc wlasciwa [a] ** = + 115° /c=0,85 w wodzie/.Widma absorpcyjne w nadfiolecie: w absolutnym metanolu: X max przy 238m^/Jt=18/ X max przy 304m\i/k= 7,3/ w zasadowym metanolu: X max przy¦242mpA=13,4/ X max przy 335m^/X= 8,7/ Widma absorpcyjne w podczerwieni: Ponizej zestawiono dlugosci fal widma absorpcyj¬ nego w podczerwieni wyrazone w odwrotnosci centymetrów, /oznaczenie wykonano na próbce zawiesiny w oleju mineralnym/.Czestotliwosc pasma (cm-1) 3340 (S) 3070 (M) 2940 (olej) (S) 12860 (olej) (S) 1 17.15 sh (M) 1680 sh (S) 1670 1650 sh (S) 1609 (M) 1578 (M) 11566 (M) .1535 sh (M) 1482 (S) | 1455 (S) Czestotli- jWOSC pasma '(cm—1) 1379 sh(S) 1374 (S) 63 (S) 1321 (S) 1298 (S) 1246 (S) 1233 sh (S) 1214 (S) 1200 sh (S) 1155 (S) 1133 (S) 1085 (S) 1047 (S) Czestotli- 1 iwosc pasma (cm-!) H030sh(M) 1,010 (M) 985 (M) 070 sh (M) 060 sh(M) 000 (W) 865 (M) 850 sh (W) 810 (M) 799 (M) 757 (M) 720 (M) 700 (M) Ponizej zestawiono»dlugosci fal widma absorpcyj¬ nego w podczerwieni wyrazone w odwrotnosci centymetrów, gdy oznaczenie wykonano na zwiaz¬ ku, sprasowanym z KBr w pastylke. 1 Czestotliwosc pasma (cm-1) 3360 (S) ,3070 (M) 2976 (M) 2040 (M) 2000 sh (M) 21840 sh (M) 2700 sh (M) 1717 sh (M) 1673 (S) ,1610 (M) 1580 (M) Czestotli¬ wosc pasma (cm-i) 11560 (M) 1483 (S) 1455 (M) 1385 (S). ' 1323 (S) 1298 (S) 1248 (S) 1212 (S) 1156 (S) 1135 (S) 1085 (S) Czestotli¬ wosc pasma (cm-i) 1048 (S) 1010 (M) 986 (M) 070 (M) 000 (M) 865 (M) 850 sh (W) 813 sh (W) 800 (M) 759 (M) 702 (M) Intensywnosc paisrci w podczeriwieni okreslono odpowiednio literami „S", „A" i „W", (pnzy czym paismo._„S" jest pasmem najisilniejs^yim w widmie.Pasma ,yM" imaja intensywnosc od 1/3 do 2/3 inten¬ sywnosci- pasana najsilniejszego, a intensywnosc pa¬ sma „W" jest mniejisza od 1/3 intensywnosci pasma najisilniejszego. Ocene te przeprowadzono na pod¬ stawie isikali transmisji wyrazonej iw pró&cntaich.Mikroorganizm. Mikroorganiiizmem zastosowanym do wytwarzania 7-O-demetyloceiestycytyny stano¬ wiacej prodiuklt posredni w sposobie wedlug wyna¬ lazku jest mutant szczepu Streptomyces caelestis NRRL 2418, (który zostal nazwany szczepem Strep¬ tomyces caelestis 22227a. Mutant ten odróznia sie iod Streptomyces caelestis taiksonomicznie," jaik wy¬ kazano ponizej i przez zdolnosc wytwarzania 7-0- ^demetyloceieistycetyny. Przeszczep zywego orga¬ nizmu mozna otrzymac ze stalej kolekcji Northeru Utilization and Research Dibision, Agricultural Re¬ search Service, U.S. Department of Agriculture; Peoria, Illinois, U.S.A. gdzie jest do dyspozycji pod numerem NRRL 5320.Ten jmilkroorganiiizm zostal zbadany i scharakte- iryzowainy przez Alma Dieftz z The Upjohn Re¬ search Laboratoiry.Qpis mikroorganizmu. Szczep Stireptomyces cae¬ lestis 22227a.Opis hodowli: Szczep Streptomyces caelestis 22227a porównywano z hodowla macierzysta (takze tego typu) Streptomyces caelestis De Boer et al.NRRL 2418 [De Boer, C, A. Dietz, J. R. Wilkins, C. N. Lewis and G. M. Savage. 1954—196(5. Celesti- cetin — A New Grystalline Antiibiiotiiic. I. Biologie Studies of Celesticetin. Antibioties Anmual. New York, Medical Encyclopedia, Inc., 1055, pp. 831— 836].Obydwie hodowle maja porost napowietrzny ble¬ kitny, isa pozytywne wobec melaniny i maja spoiro- ifory tworzace otwarte spirale, noszace prostokatne gladkie spory o prazkowanym elemencie powiierzciiT niowym.W pozywce syntetycznej podanej przez Shirlirug^ i Gottlieb'a [Shirlin, E. B. i D. Giottlieb. 1066.Methods for Characterization of Streptomyces Spe- cies. Int. J. System, Bacteriol. "16: 313—340] hodowle rozwijaja sie nieznacznie przy negatywnej regul- lalcji (bez dodawania zwiazków /wegla) i rozwijaja sie dobrze przy regulacji — ki-glukoza. Wykorzy¬ stanie wegla bylo silne w syntetycznej pozywce z sacharoza, D-iksyloza, linozyftem, D-fruiktoza, raf- imnoiza i iraifiinoza; w pozyiwce z l-arabinoza bylo dodatnie, z celuloza watpliwe i ujemne z d-man¬ nitem.Obydwie hodowle roztwarzaja tyrozyne i hydra- lizuja skrobie. Kaizieina i (ksantyna nie udegaja roz¬ twarzaniu. Szczep 22227a rózni sie od hodowli ma¬ cierzystej cechami podanymi w tablicy 1. v Szczep Streptomyces caelestis 22227a, mutant szczepu Streptomyces caelestis NRRL 2418 latwo odróznia sie od hodowli macierzystej swa zdolno¬ scia wytwarzania 7-0-demetylocelestycetyny i mniejszymi szczególami, podanymi w tablicy 1.Nie latwo go odróznic od hodowli macierzystej, jesli chodzi o cechy hodowli — zabarwienie, sporo- fory i typy zarodników (sporów). 40 45 50 56 6084914 6 Szczep 222&7a stosowany jest w sensie zalecenia Miedzynaixxiowego Kodu Nazewnictwa Bakterii — Recommendafóon, 8al(l) of ifche International Oode of Nomenolatoe of Bacteria [Internatnonad Code of NomencteUire of Baoteria. 1M66, odtted by the Edjtorial Board of tftie Judiciad Coimimission of the iTrteriniaiional Conwniititee on Nomencdature of Bac¬ teria, Intern. J* System. Bacteriol. 16: 459—490], gdzie liczba bedaca wyrózniajacym znakiem labo¬ ratoryjnym moze byc .stosowana do oznaczenia po¬ chodnych z pojedynczej iizalacji czystej hodowli.Cechy charakterystyczne szczepu Streptomyces caelestis 22227a i NRRL 2418 zestawiono, w przyto¬ czonej tablicy 1.Tablica 1 Róznice hodowlane szczepu S. caelestis 22227a i NRL 2418 Pozywka hodowlana mleczko lakmusowe . bulion z azota¬ nem syntety¬ czny I pozywka* wytworzony antybiotyk S. caelestis szczep 22227a pH^6,3 azotan nie redukuje sie do azotynu azotan nie redukuje sie do azotynu 7-0-demety- locelestyce- tyna S. caelesjtis (macierzysty) NRRL 24)18 pH=4J9 azotan, zre¬ dukowany do azotynu azotan zre¬ dukowany do azotynu Ceiestyce- tyna Nowy zwiazek w sposobie wedlug wynalazku po¬ wstaje, gdy opisany organizm hoduje sie w wod¬ nym srodowisku odzywczym, w warunkach aero- bowych. W celu wytworzenia ograniczonych ilosci mozna stosowac hodowle powierzchniowe i butelki.Hoduje sie organizm w srodowisku odzywczym, zawierajacym zródlo wegla, np. przyswajalny we¬ glowodan i zródlo azotu, np. przyswajalny zwiazek azotowy lub material bialkowy. Korzystnym zród¬ lem wegla jest glukoza, cukier sutrowy (zólty), sa¬ charoza, gliceryna, skrobia, skrobia kukurydziana* laktoza, dekstryna, rnelas iitp. Korzystnym zródlem azotu jest namok kukurydziany, drozdze, autoiizo- wane drozdze browarniane z sucha masa mleka, maka sojowa, maczka z nasienia bawelny, majka kukurydziana, sucha masa mleka, wyciag trzustko¬ wy z kazeiny, stale produfctty podestylacyjne, roz¬ twory peptonu zwierzecego, odpadki miesa i kosci i tym podobne. Korzystnie stosuje sie polaczenie tych zródel wegla i azotu. Nie potrzeba dodawac do srodowiska fermentacyjnego metali sladowych, np. cynku, magnezu, manganu, kobaltu, zelaza dtp. skoro stosuje sie wode wodociagowa i nie oczysz¬ czone skladndki.Fermentacje wedlug wynalazku mozna prowadzic w kazdej temperaturze, zapewniajacej zadowala¬ jacy .rozwój mikroorganizmu, np. w zakresie 16°— 40?C, korzystnie 20°—32°C. Zwykle optymalna wy¬ dajnosc uzyskuje sie w ciagu 2—ftO dni. W czasie fermentacji srodowisko pozostaje zasadowe. Kon¬ cowa wartosc pH zalezy czesciowo od obecnej sub¬ stancji buforowej, o ile jest i czesciowo od poczat¬ kowej wartosci pH srodowiska hodowlanego.Jezeli hodowle prowadzi sie w duzych naczyniach i zbiornikach, korzystniej jet stosowac postac we¬ getatywna, anizeli postac zarodników mikroorganiz¬ mu do posiewu w celu unikniecia wyraznego opóz¬ nienia w produkcji nowego zwiazku i zwiazanego z tym niepelnego (wykorzystania sprzetu. Pozadane jest wiec, aby wytworzyc wegetatywny organizm inokulujacy w hodowli na bulionie — pozywce przez obsiew tej hodowli podwielofcrotna czescia kultury na glebie lub kuibtuiry ze skosu. Jezeli w ten sposób zabezpieczy sie mlody, aktywny we¬ getatywny organizm inokuftujacy, to mozna go prze¬ niesc aseptycznie do wiekszych naczyn lub zbior¬ ników. Srodowisko, w którym wytwarza sie wege¬ tatywny organizm inokulujacy moze byc takie samo lub inne niz zastosowane do produkcji nowego zwiazku, byle tylko mozna bylo uzyskac dobry roz¬ wój mikroorganizmu.Nowa 7- stepuje badz w postaci, nie zawierajacej protonów (wolna zasada), badz w postaci, zawierajacej pro¬ tony (sól) zaleznie od wartosci pH otoczenia. Two¬ rzy ona trwale zwiazki, zawierajace protony, (sole addycyjne z kwasem) przez zobojetnienie wolnej zasady kwasem lub przez reakcje podwójnej wy¬ miany <«netaifceze) miedzy postacia 7-0-demetyio- celestycetyny, zawierajaca protony, a anionem kwa¬ su. Odpowiednimi kwasami stosowanymi do tego celu sa: kwas solny, siarkowy, fosforowy, octowy, bursztynowy, cytrynowy, mlekowy, maleinowy, fu¬ marowy, pamowy, cholowy, palmitynowy, sluzowy, kamforowy, gkitarawy, ftalowy, winowy, lauryno- wy, stearynowy/ salicylowy, 3-fenylosalicylowy, S-fenylosalicyiowy, 3-metylogluitarowy, ortosuifo- benzoesowy, cyklohoksanosudfatriikiowy, cytolopen- tanopropdonowy, l,2HQyklohek5andwukarboksylowy, 4ncykik)heksenokarboksylowy, okfcariecenyioburszty- nowy, c4ctenylobua^siz4ynowy,metanosuihfonowy, ben- zenosulfonowy, slonecznikowy, kwas Reinecke'a, kwas azobenzenosultfonowy, oktadecyiosiarkowy, pikrynowy i tym podobne kwasy. TeCofle addycyj¬ ne z kwasami sa pomocne do poprawienia wolnej zasady.Zwiazek o wzorze 2 z powodu obecnosci czesci kwasu salicylowego, tworzy sole z metalami alka¬ licznymi i z metalami ziem alkalicznych przy za¬ stosowaniu sposobów znanych w tej dziedzinie.Mozna wytworzyc sól sodowa, potasowa, wapniowa, Mfcowa i tym podobne. Sole te maja zastosowanie podane dla soli addycyjnych z kwasem. 7H0^demetyioceiestycefcyna o wzorze 2 jest roz¬ puszczalna w nizszych alkoholach o l1—4 atomach wegla lacznie i w ketonach,, trudniej rozpuszcza sie w wodzie i w chlorowanych rozpuszczalnikach we¬ glowodorowych, a zasadniczo jest nierozpuszczalna w eterze i nasyconych rozpuszczalnikach weglo¬ wodorowych. .Mozna stosowac rózne metody wydzielania i oczyszczania 7-0-demetylocelestycetyny o wzorze 2, na przyklad ekstrakcje za pomoca rozpuszczalni¬ ków, chromatografie rozdzielcza, chromatografie na zelu krzemionkowym, (rozdzial miedzy ciecz — ciecz w aparacie Craig*a i krystalizacje z rozpuszczal¬ nikowi Korzystny sposób odzyskiwania 7-0^demetyloce- 36 40 45msa 7 8 lestycetyny o wzorze 2 polega na ftyini, ze odzyskuje sie ja z jej pozywki hodowlanej przez oddzielenie gnzybni i nierozpuszczalnych czesci stalych za po¬ moca konwencjonalnych srodków takich, jak od¬ saczenie lub odwirowanie. Nastepnie z przesaczo¬ nego lub odwiirowaihego bulionu usuwa sie anty¬ biotyk za pomoca sorpcjd na zywicy, zawierajacej niejonowy makropoirowaty kopolimer styrenu usie- ciiowanego dwuwunylobenzenem.Odpowiednimi zywicami sa Amberlite XAD-1 i XADn2,, podane w opisie patentowym Stanów Zjedoniczonych Ameryki inr 35)157117. Zywice eluuje sie organicznym lufo nieorganicznym rozpuszczalni- kiiem, w którym zaadsorbowany antybiotyk roz¬ puszcza* sie. Najlepszym (rozpuszczalnikiem stoso¬ wanym do eluowania jest 95% wodny iroztwór me¬ tanolu. Z eluatów metanolowych odzyskuje sie antybiotyk przez zageszczenie tych eluatów do su¬ cha i nastepnie poddanie ich chromatografii na zelu krzemionkowym G (E. Merck AG., Darmstadt, ART. 7734) przy uzyciu odpowiedniego ukladu roz- puszczalniikcw na przyklad chloroformu i metanolu w stosunku 6 :*1 (objetosc/objetosc). Erakcje otrzy¬ mane z chromatografii na zelu krzemionkowym G laczy sie i zageszcza do siuciha. Otrzymana pozo- stalosc rozpuszcza (sie w odpowiedniej mieszaninie rozpuszczalników, np. eter—imetainol <5i0 : 1) i roz¬ twór miesza sie z metanolowym roztworem chloro¬ wodoru w celu wytracenia chlorowodorku 7-0-de- meitylocelestycetyny.Hydrazynoliza 7-iO-demetylocelestycetyny o wzo¬ rze 2 dzialaniem wodzianu hydrazyny w tempera¬ turze wrzenia w ciagu okolo 2i3 godzin daje hydra¬ zyd kwasu higrynowego, który mozfna przeprowa¬ dzic w chlorowodorek kwasu higrynowego przez ogrzewanie z wodnym roztworem kwasu solnego.Drugim produktem powyzszej reakcji hydrazynolizy jest p-hydroksyetylotiolinkosaminid (J3-HETL) o wzorze 1. 7-0-demetylodesalicetyna i p-HETL wystepuja badz w postni, nie zawierajacej protonów (wolna zasada), badz w postaci,, zawierajacej protony (sól) zaleznie od wartosci pH otoczenia. Sole addycyjne z kwasami tych zwiazków imozna wytworzyc, jak to podano dla 7-<0-demetylocelestycetyny. p-hydroksyetylotiolinkoisaiminid (P-HETL) o wzo¬ rze ,1 moze byc stosowany do rozdzielenia kwasów racemicznych, na przyklad 0-HETL mozna poddac reakcja z kwasami .racemicznymi wytwarzajac dia- stereoizomeryczne sole adidycyjne z kwasem, które mozna iroizdzielic przez frakcjonowana krystalizacje na diastereoizomeryczne, z których mozna wytwo¬ rzyc kwasy optycznie czynne. J3-HETL stosuje sie takze jatko pólprodukt (zwiazek posredni). Dziala on%z izocyjanianami, tworzac uretany i moczniki d moze byc stosowany do modyfikowania zywic poliuretanowych. Na przyklad izwdazek o wzorze 1 mozna poddac reakcji z toluenodwuizócyjanianem w nadmiarze, wytwarzajac. wstepny polimer, który nastepnie mozna poddac reakcji z poliolem i estra¬ mi poliolowymi, powszechnie stosowanymi do wy¬ twarzania poliuretanów. Albo tez (mozna (3-HETL zimieszac ze zwiazkiem poHiolowym i nastepnie mieszanine poddac reakcji z tolluenodwuizocyjainia- nem. J3-HETL mozna tez poddac'reakcji z tlenkiem etylenu, tlenkiem propylenu i podobnymi tlenkami alkilenu, wytwarzajac polioksyailkilerno-P-HETL, który poddaje sie reakcji z tolueno-dwuiiizocyijanda- nem, wytwarzajac poliuretan. P-HETL jest zwla- szcza uzyteczny przy produkcji sztywnej pianki poliuretanowej. Kondensuje on takze z formalde¬ hydem zwlaszcza* gdy stosuje sie sól addycyjna z kwasem tiocyjanowym do wytworzenia polime¬ rów wedlug opisów patentowych Stanów £jedno- czonych Ameryki nr 242l53l2i0 i 2QO60i55, ^kltóre to po¬ limery stosowane sa jako inhibitory : trawienia.Jego sól addycyjna z kwasem fluorokrzemowym jest stosowana takze jako srodek moloodpomy zgodnie z opisami patentowymi Stanów Zjedno- !5 cizonych Ameryki nr 19il5334 i 2i07535&. Mozna tez poddac sprzeganiu 0-HETL z kwasem pirolidyno- karboksylowym, otrzymujac zwiazki o dzialaniu bakteriobójczym, podane w opisie patentowym Sta¬ nów Zjednoczonych Ameryki nr 35114440.Zwiazek J3-HETL o wzorze 1 mozna przeprowa¬ dzic w rózne analogi, przedstawione wzorem struk¬ turalnym 3. Na przyklad 7-epi-HETL mozna wy¬ tworzyc przez hydrazynoliize 7-epi-7^0-demetylOce- lestycetyny lub 7-epi-7-0-demetylodesalicetyny me- todami, podanymi w opisaclh patentowych Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2928944 i 2851463; 7i(S)-chlorowco-7-dezoksy-HETL mozna •wytworzyc przez reakcje HETL o wzorze 1 z chlorkiem kar- bobenzoksy wedlug znanych metod w tej dziedzi- nie, otrzymujac N-kanbobenzoksy-HETL, który na¬ stepnie poddany reakcji z 1 molem bezwodnika octowego wedlug znanych metod daje zwiazek (3-jodocetanowy. Zwiazek ten poddaje sie nastepnie hydrogenolizie, na przyklad metoda, podana w opi- sie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 338099(2, kolumna IB, czesc E-il, powstaly pro¬ dukt imozna wprowadzic w reakcje ze zmodyfiko¬ wanym reagentem Rydona wedlug sposobu, po¬ danego w opisie patentowym Stanów Zjednocze- 40 nych Ameryki nr 3406|li63, otrzymujac 7!(S)-chlorow- CiO-ianalog. Zwiazek ten mozna potraktowac zasada sposobem, podanym w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nir 2851463, otrzymujac 7(S)-chlorowco-7-dezoksy-HETL. 45 [7i(R)-chlorowco-analog wytwarza sie w ten sam sposób, z tym, ze wytworzony, jak wyzej, 7-epi- -HETL jest materialem wyjsciowym]. 7(R)-0-alkilo- -HETL wytwarza sie, stosujac HETL o wzorze 1 zamiiast MTL w sposobie, podanym w opisie 54 patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 31574187; 7 przez poczatkowe przeprowadzenie (3-0-octanu 7;(S)-cMcox)wco-7-iO-demetylo-HETL w pochodna 6,7-azyrydynowa metoda, podana w opisie paten- 55 towym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3544651, zwlaszcza w kolumnie 8, wiersz 36 i nastepne, i w przykladzie 1, czesc A-.1.Nastepnie pochodna azyrydynowa przeprowadza sie w 7i(S)-tO-alkilo-HETL sposobem podanym w eo zgloszeniu patentowym USA Seria No 26119 z 6.IV. 19i7f0; zas p-0-acylany mozna wytworzyc metoda, podana w opisie patentowym Stanów Zjedonczo- nych Ameryki nr 28j514)63, zwlaszcza w kolumnie 2, wiersz 7i0 i nastepne, stosujac 1 mol srodka acylu- 85 jacego na 1 mol zwiazku HETL o wzorze 1. 27 40 45 5084914 9 10 Ponizszy przyklad wyjasnia sposób wedlug wy¬ nalazku, nie ograniczajac jego zakresu. Podane procenty sa procentami wagowymi, a stosunki mie¬ szanin (rozpuszczalników wyrazone sa objetosciowo, o ile nie zaznaczono inaczej.Przyklad. Fermentacja.Grzybnie i/lub spory ze skosu szczepu Stirepto- myces caelestis 22227a, NEUL 5320, stosuje sie do obsiewu serii 500 ml kolib Erlenmeyera, z których kazda izawiera 100 iml podloza posiewu, skladaja¬ cego Jednowodzian glukozy 26 g/i Phanmaimediis (x) 26 g/l Woda wodociagowa q.s. 1 1 (x) Pharmamedia jest to przemyslowy gatunek maki z ziarna bawelnianego produkcji Trade^s Oil , Company, Pt. Wortlh, Texas.Wartosc pH przy wstepnej sterylizacji podloza posiewu wynosi 7,2. Posiew inkutbuje sie w ciagu 3 doi fw temperaturze 28°C na wstrzasaczu obro¬ towym Guimip^ o szybkosci obrotów 2j50/min. ml 5% organizmu iindkulujacego powyzszego posiewu dodaje sie do kazdej 500 ml koliby zawie¬ rajacej nastepujace podloze (fermentacyjne: Skrobia kukurydziana UjS,P. 3(0 g/l jednowodzian glukozy 10 g/i namok kukurydziany 10 g/l (NH4)2S04 3 g/1 chlorek sodowy 2 g/l woda wodociagowa qjs. 11 Wartosc ipH doprowadza sie 50% wodorotlenkiem sodowym do okolo 7,2*—7,4, ipo cryni dodaje siec g weglanu (wapniowego i sterylizuje kolby w tem¬ peraturze 120°C w oiagu <30 minut.Kolby z posiewem inkubuje sie w temperaturze 28°C na wstrzasaczu abrotowyim Guimp^ o szyb¬ kosci obrotów 250/imin. Optymalna produkcje 7-i0- -demetylocelestycetyny o wzorze 4 otrzymuje sie po okolo 4 dniach fermentacji. Miano 7-Ondeme- tyiocelestycetyny w piwie fermentacyjnym okresla¬ ne jest testem biologicznym w stosunku do mikro¬ organizmu S lutea za pomoca standardowej mikro¬ biologicznej próby na plytach z krazkami 12,5 mm.Odzyskiwanie zwiazku o wzorze 2'. Cale piwo fermentacyjne (okolo 8,5" litrów) uzyskane w po¬ wyzej opisanym procesie fermentacyjnym przesa¬ cza sie przy uzyciu ziemi okrzemkowej jako po¬ mocniczego materialu filtracyjnego. Placek filtra¬ cyjny przemywa sie dwoma litrami wody i po¬ pluczyny laczy sie z klarownym piwem. Otrzy¬ many roztwór przepuszcza sie przez kolumne, przy¬ gotowana iz 500 ml zywicy Amiberlilte XAD-2 umieszczonej w wodzie. Wyczerpane piwo zbiera sie jako jedna frakcje. Kolumne przemywa sie dwoma litra/mi wody i wode z przemycia zbiera sie takze w postaci jednej frakcji. Nastepnie ko- 50 lunine eluuje sie 95°/o wodnym metanolem. Zbiera sie trzy frakcje i oznacza jako metanol —1 (630 ml) metanol —2 (600 ml) i metanol -^3 (380 ml).Wsizystkie wyzej podane frakcje bada sie na bio- aktywnosc w stosunku do milkrooirganizmu Sarcina lutea iza pomoca opisanej próby, przy czym otrzy¬ mano nastepujace wyniki: Frakcja Piwo klarowane Piwo wyczerpane Roztwór z przemycia Metanol — 1 Metanol — 2 -Metanol — 3 Strefa zahamowania mm/0,1 ml 28 0 0 27 | 17 Metanolowe eiuaty 1, 2 i 3 laczy isie i zageszcza do otrzymania suchego preparatu (prep. A).Nastepnie caly bulion fermentacyjny (okolo 4 li¬ trów) traktuje sie powyzej opisanym sposobem, otrzymujac suchy preparat (Prep. B).Wyzej opisane preparaty A i B laczy sie otrzy¬ mujac 3^3 g (Brep. C). Stwierdzono, ze preparat ten zawiera 7-0-demetyflocelestycetyne o wzorze 2, co oznaczono za pomoca cienkowarstwowej chro¬ matografii na zelu krzemionkowym G przy uzyciu chloroformu -^ metanolu (6: X objejtosc/objetosc) lub mieszaniny metyloetyloketon — aceton — woda (lji$6 : 52 : 20) aiibo mieszaniny 2-pentanon —metylo¬ etyloketon — metanol — woda (2 : 2 :1: 1) jako ukladu rozpuszczalników.-Otrzymywanie p-hydroksyetylotiolinikosaminidu (P-HETL). Przez hydrozynolize 7-0-demetylocele- stycetyny o wzorze 2 wodziameim hydrazyny pod chlodnica zwrotna w ciagu okolo 23 godzin wy¬ twarza sie J3-HETL, hydrazyd kwasu higrynowego i hydrazyd kwasu salicylowego. Z mieszaniny re¬ akcyjnej przez rozdaiai w przeciwpradzie w ukla¬ dzie rozpuszczalników równych objetosci 1-buta- nolu i wody odzyskuje sie fl-HETL. W ten sposób oddziela sie fJ-HETL od hydrazydu kwasu higry¬ nowego i hydrazydu kwasu salicylowego. $ o HNH/SCH2CHtOC-^\ H OH M OH \Nz6r 2 CH3 H2N-CH KÓhH ^y^-fSCHaCHjOR^ H OR Wzór 3 Cena zl 10.— Drukarnia Narodowa, Zaklad nr 6 — zam. 2540/76 PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania nowego 0-hydroksyetylotio- liinkosaminidu o wzorze il znamienny tym, ze szczep Streptomyces caelestis 2l2227a o charaktery¬ stycznych cechach hodowli, zdeponowanej pod nu¬ merem NRRL 5000, .hoduije sie w wodnym srodo¬ wisku odzywczym, w warunkach aeroibowych i otrzymana 7-i0-demetylocelestyoetyne o wzorze 2 poddaje sie hydrazynolizie z wodzianem hydrazyny pod chlodnica zwrotna.84914 CH3 HO-CH h2n-Ch SCH*CH,OH H OH Wzór i l2UM2» CH3 C — i CH, HO-CH M—fct %* PL