PL88470B1 - - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia a-galaktozydazy. a-galaktozydaza jest powszechnie znanym en¬ zymem zdolnym do rozkladania rafinozy zawar¬ tej w melasie buraczanej iub soku buraczanym, zwanych * dalej „melasa buraczana", na sacharoze i galaktoze. Wiadomo tez, ze enzym ten jest wy¬ twarzany przez kilka rodzajów mikroorganizmów., takioh jak n,p. Aerobaoter aerogens i E. coli. Kie¬ dy jednak melase buraczana poddaje sie dziala¬ niu tak* otrzymanego enzymu, wystepujaca obok a-gala!ktozydazy inwertaza posiadajac duza ak¬ tywnosc, powoduje ze rozkladowi ulega nie tylkc rafinoza, ale takze zawarta w melasie sacharoza Z tego powodu, enzym ten nie znalazl dotychczas praktycznego zastosowania.Obecnie wyodrebniono plesn Mortierella vinaoea (ATCC 20034), która na pozywce zawierajacej ra- finoze pozwala ma otrzymanie enzymu o duzej aktywnosci a-galaktozydazy o bardzo slabej ak¬ tywnosci inwertazy. Przy pomocy tak otrzymanego enzymu, udalo sie rozlozyc rafinoze w melasie bu¬ raczanej w celu zwiekszenia wydajnosci sacharo¬ zy.Jednakze, przy tego rodzaju zastosowaniu enzy¬ mu stopien rozkladu rafinozy przez a-galaktozy- daze zalezy bezposrednio' od liczby stopni Brixa uzytej melasy, zmniejszajac sie wraz ze wzrostem tej liczby. W przypadku melasy o duzej liczbie stopni Brixa, -nalezy wiec zwiekszyc stopien roz- kladu przez zwiekszenie ilosci dodanego enizyrnu.Przy produkcji cukru z buraka cukrowego, prócz procesu otrzymywania cukrzanów, pozadana jest melasa o duzej liczbie stopni Brixa, co ula¬ twia przeprowadzanie takich operacjii jak naste¬ pujace po rozlozeniu rafinozy zatezanie roztworu cukru oraz wydzielanie czystego cukru ze stezone¬ go roztworu. Zapewnienie wysokiego i stalego stopnia rozkladu rafinozy wymaga duzych ilosci enzymu, co zwieksza koszt procesu i czyni go nie¬ oplacalnym. Ponadto, dodatek duzej ilosci enzymu stwarza mozliwosc przedostania sie grzybni do roztworu cukru otrzymanego po zakonczeniu roz¬ kladu, co moglaby hamowac krystalizacje sacha¬ rozy.Pomimo ze enzym wytworzony przez wspomnia¬ na plesn posiada rzeczywiscie bardzo mala ak¬ tywnosc inwertazy, to jednak, jezeli zastosuje sie go w tak duzej ilosci, ilosc sacharozy rozlozonej przez zawarta w enzymie inwertaze przekroczy dopuszczalny poziom.Wynalazek ma na celu usuniecie wymienionych braków, a wiec otrzymywanie z hodowli mikroor¬ ganizmu preparatu enzymatycznego o bardzo wy¬ sokiej aktywnosci a-galaktozydazy i wybitnie sla¬ bej aktywnosci inwertazy w przeliczeniu na jed¬ nostke wagi preparatu, rozklad rafinozy zawartej w melasie buraczanej na galaktoze i sacharoze za pomoca tego preparatu oraz zwiekszenie wydajno¬ sci sacharozy. 6847088470 Obecnie opracowano sposób wytwarzania prepa¬ ratu enzymatycznego o duzej aktywnosci a-ga- laktozydazy i 'bardzo slabej aktywnosci inwertazy, polegajacy na tym, ze plesn rodzaju Absidia ho¬ duje sie na specjalnej pozywce w scisle okreslo¬ nych warunkach.Do tego celu zastosowano odmiany plesni ro¬ dzaju Absidia. Odmiany te nie byly dotad znane jako zródlo preparatów enzymatycznych bogatych w cMgalaktozydaze a ubogich w inwertaze. Ich nazwy naukowe wraz z nazwiskami odkrywców sa nastepujace: Absidia lichteimi (Lucet et Constan- tin) Lendner (IFO 4009); Absidia lichteimi (Lucet et Comstantin) Lendner (IFO 4010); Absidia refle- xa van Tieghem (IFO 5874); Absidia hyalospora (Salto) Lendner (IFO 8082); Absidia ramosa (Vuil- lemiin) Lendner (IFO 8083); Absidia regnierie (Lu¬ cet et Constantiin) Lendner (IFO 8084).(„IFO" jest .skrótem nazwy spólki o nastepuja¬ cym adresie: Institute for Fermentation, Osaka, 54, 4 ohome, Jusoo Nishinomachi, Higashi — Yo- dogawa-ku, Osaka, Japan) Jezeli plesn rodzaju Absidia hoduje sie na po¬ zywce zawierajacej co najmniej jeden z takich induktorów jak laktoza, melibioza, rafinoza czy galaktoza, wobec substancji dostarczajacych we¬ giel, azot i sole mineralne, to pozadany preparat enzymatyczny. twarzy sie z dobra wydajnoscia glównie w grzybni mikroorganizmu. Induktor do¬ daje sie zwykle w ilosci od 0,5°/o do 1,5% wago¬ wych pozywki. Przy podawaniu wiekszej ilosci niz 1,5% cza:s hodowli wydluza sie, a metoda staje sie nieekonomiczna.- Jako substancje dostarczajaca wegiel stosuje sie zwykle glukoze. Role zródla wegla do wzrostu grzybni moze ispelruiac takze induktor, korzystnie jest jednak dodawac do pozywki osobno substan¬ cje bedaca zródlem tego pierwiastka. Jako zródla azotu stosuje sie substancje organiczne takie jak wyciag namoku kukurydzy, slód, wyciag slodowy, kielki slodowe, wyciag z drozdzy, pepton, wyciag z otrab ryzowych, miazga rybia i kukurydza, oraz substancje pochodzenia nieorganicznego.Na wzrost grzybni korzystnie wplywa jedno¬ czesne stosowanie obu rodzajów substancji. Naj¬ latwiejszy w uzyciu, z uwagi na plynnosc, jest wyciag -namoku kukurydzy. Korzystnymi substan¬ cjami mineralnymi okazaly sie tu stosowane zwy- gle do tego celu sole w rodzaju siarczanu ma¬ gnezowego, fosforanu potasowego i chlorku sodo¬ wego. Prócz wymienionych skladników, do pozyw¬ ki mozna dodac w razie potrzeby biotyne lub in¬ na, odpowiednia substancje przyspieszajaca wzrost.Dodawanie tego rodzaju skladnika do pozywek zawierajacych azot pochodzenia organicznego nie jest 'konieczne. Dobra wydajnosc a-galaktozyda¬ zy, oraz szybki wzrost grzybni zapewnia utrzy¬ manie pH pozywki w zakresie od 4 do 8, szczegól¬ nie od 5 do 7. Temperatura i czas hodowli za¬ leza w pewnym stopniu od rodzaju mikroorganiz¬ mu oraz od skladu pozywki. Dla hodowli na wy¬ trzasarce wystarczy zwykle czas od 40 do 60 go- dziin w temperaturze 30°C. W porównaniu z ho¬ dowla Mortierella vinacea, która wymaga okresu 72 godzin mamy tu do czynienia ze znacznym skróceniem czasu hodowli.Po zakonczeniu okresu wzrostu hodowli' w po¬ danych wyzej warunkach, grzybnie odsacza sie w znany 'sposób, przemywa woda i przerabia da¬ lej metoda rozdrabniania lub autolizy. Enzym wy¬ ekstrahowany z grzybni mozna nastepnie przygo¬ towac w pozadanej formie preparatu enzymatycz¬ nego.Odsaczona grzybnie lub otrzymany z niej pre¬ parat enzymatyczny mozna dodawac wprost do melasy buraczanej powodujac rozklad zawartej w niej rafinozy. Mozna tez odsaczona grzybnie umiescic w kolumnie, przez która przepuszcza sie nastepnie melase w sposób ciagly.Duza aktywnosc enzymu na jednostke wagi za¬ pewnia dobry rozklad rafinozy nawet w przypad¬ ku melasy o 50° Brixa. Pozwala to na stosowanie nie rozcienczonej melasy pochodzacej wprost z pro¬ cesu cukrowniczego, która po rozlozeniu (rafinozy mozna zawróaic do tego procesu prawie bez zate- zania.' Metoda ta jest zatem bardzo ekonomicz¬ na.Temperatura rozkladu zawartej w melasie rafi¬ nozy wynosi od 20 do 70°C, najlepiej od 30° do 60°C. Wartosc pH melasy waha sie od 4 do 7, najkorzystniej od 5 do 6.W tabeli porównano wlasnosci preparatu enzy¬ matycznego otrzymanego z plesni rodzaju Absidia z wlasnosciami preparatu otrzymanego z wczesniej proponowanej plesni Mortierella.Z tabeli 1 wynika, ze do rozlozenia 3,86 g ra¬ finozy w melasie o 20° Brixa potrzeba okolo 1.150 X 104 jednostek a-galaktozydazy. Aktywnosc a-galaktozydazy pochodzacej z plesni rodzaju Mor- itiierella \rinacea (odmiana zuzywajaca rafinoze) wynosi 207 X 104 jednostek, zatem w tym przy¬ padku do melasy trzeba dodac 5,6 g grzybni (w przeliczeniu na sucha mase). Poniewaz aktywnosc a-galaktozydazy otrzymanej sposobem wedlug wynalazku wynosi 446 X 104 jednostek, zatem, w opisanym wyzej przypadku wystarczy zastosowac 2,6 g grzybni. Róznica w ilosci uzytej grzybni, sla¬ je sie coraz bardziej widoczna w miare wzrostu liczby stopni Br,ixa. Przy 60° Brixa róznica ta wy- noisi 9g. ...-¦» Sposób wedlug wynalazku pozwala na'Otrzyma¬ nie znacznie wiekszej niz poprzednio aktywnosci a-galaktozydazy na jednostke wagi grzybni, a za¬ tem prowadzi do odpowiedniego- zmniejszenia zu¬ zycia tego enzymu. Sposób ten, jest zatem nie tyl¬ ko ekonomiczny, ale takze ulatwia dalszy prze¬ rób roztworu po rozlozeniu rafinozy i pozwala na zmniejszenie objetosci aparalury.Zalete sposobu wedlug wynalazku stanowi tak¬ ze krótszy czas hodowli mikroorganizmu wytwa¬ rzaj acego a-galakitozydaze w porównaniu z czasem hodowli znanych dotad tego rodzajów mikroorga¬ nizmów.Nizej podane ..przyklady wyjasniaja sposób we¬ dlug wynalazku nie ograniczajac jego zakresu.Przyklad I. Do róznych porcji pozywki pod¬ stawowej zawierajacej l°/o glukozy, 1% wyciagu namoku kukurydzy, l 0,2*/o MgS04, 0,2*/o NaCl i Q,3V$,CaC03 dodaje sie 33 40 45 50 55 6088470 Tabela 1 Aktywnosc a-galaktozydazy/g suchej grzybni Aktywnosc inwertazy/g suchej grzybni Waga suchej grzybni zawierajacej 100X liO4 a-galakltozydazy Brix 20° (zawierajaca 3.26 g rafinozy) Brix 30° (zawierajaca 5.8 g rafinozy) B,rix 40° (zawierajaca 7.74 g rafinozy) Brix 50° (zawierajaca 9.66 g rafinozy) Brix 60° (zawierajaca 11.6 g rafinozy) Mortierella vinacea odmiana zuzywajaca rafinoze 207 X 104 (jednostek) ,000 (jednoistek) 483 (mg) Waga grzybni potrzebnej do rozlozenia rafinozy w me¬ lasie Mortiella vinacea od¬ miana zuzywajaca rafinoze (g) .6 8.4 11.2 14.0 16.8 Absidia reflexa IFO 5874 446 X 104 (jednostek) 6,538 (jednostek) 224 (mg) Absidia reflexa (g) 2.6 i3.9 .2 6.5 7.8 po I°/o sacharydów wymienionych w tablicy 2.Tak otrzymana pozywke zaszczepia sie zarodni¬ kami Absidia reflexa (IFO 5874) i prowadzi hodo¬ wle w "temperaturze 30°C w ciagu 72 godzin na wytrzasarce o 140 obrotach/minute. Po zakoncze¬ niu hodowli roztwory odsacza sie w celu oddzie¬ lenia grzybni, która przemywa sie dokladnie wo¬ da. Oddzielona grzybnie rozciera sie na paste w mozdzierzu z dodatkiem piasku morskiego i za¬ wiesza w wodzie destylowanej, której objetosc odpowiada objetosci roztworu po odsaczeniu grzy¬ bni. W zawiesinie, traktowanej jako roztwór en¬ zymu, oznacza sie aktywnosc a-galaktozydazy; Wartosci podane w tabeli 2 odpowiadaja aktyw¬ nosci enzymu z grzybni otrzymanej z 1 ml po¬ zywki* Aktywnosc enzymu w zawiesinie grzybni Oznacza sie dodajac 1 ml tej zawiesiny do miesza¬ niny 0,5 ml 0,06 M roztworu melibiozy i 0,5 ml 0,1 M roztworu buforu fosforanowego (pH 5,2), pozostawiajac mieszanine reakcyjna na 2 godziny w temperaturze 40°C, ogrzewajac ja nastepnie na lazni wodnej w ciagu 5 minut w celu dezaktywa¬ cji enzymu, dodajac do tak otrzymanego roztworu 1 ml 1,8% Ba(OH)2 • 8H20 i 1 ml 2% ZnS04 . • 7H20 w celu usuniecia bialka, odwirowujac ten roztwór i oznaczajac w nim zawartosc glukozy metoda glukostatyczna. Poniewaz ilosc glukozy uwolnionej z melibiozy oraz stezenie enzymu sa do siebie proporcjonalne w zakresie 1000 g gluko¬ zy, zawiesine rozciencza sie uprzednio w takim stopniu, aby mierzona wielkosc znajdowala sie w wymienionym zakresie. Ilosc wolnej glukozy mno¬ zy sie przez ilosc rozcienczen. Jako jednostke przyjeto aktywnosc a-galatko-zydazy uwalniajacej 1 g glukozy w podanych wyzej warunkach.Dane przytoczone w tabeli wskazuja wyraznie na to, ze do wytwarzania a-galaktozydazy nadaja sie najlepiej galaktoza, melibioza, rafinoza i lak¬ toza, przy czym najlepsze wyniki osiagnieto przy uzyciu laktozy.Tabela 2 40 45 50 60 65 Weglowodan Ksyloza Arabinoza Ramnoza Glukoza Mannoza Fruktoza Galaktoza Maltaza Cellobioza Laktoza Melibioza Sacharoza Rafinoza Rozpuszczalna skrobia Dekstran Jednostki galaktozydazy 0 0 0 0 0 0 14,900 0 0 53,800 14,340 o ¦ ¦ ¦ 37,240 0 0 Przyklad II. Rózne porcje pozywki zawie¬ rajacej 1% laktozy, 1% glukozy, 1% (NH4)2S04, l°/o namoku kukurydzy, 0,3% KH2P04, 0,2°/o MgS04.7H20, 0,2°/o NaCl i 0,3°/o CaC03 zaszcze¬ pia sie zarodnikami odmian wymienionych w ta¬ beli 3 i przeprowadza hodowle wedlug przykla¬ du I. W otrzymanych. roztworach oznacza sie ak¬ tywnosc a-galaktozydazy oraz inwertazy wytwo¬ rzonych przez grzybnie. Aktywnosc inwertazy oznacza sie przez zmieszanie 1 ml zawiesiny,, grzybni z 0,5 ml 0,06 M roztworu .sacharozy, i 0,5 ml 0,1 M roztworu buforu fosforanowego (pH 5,0), pozostawienie mieszaniny reakcyjne na 2 godziny w warunkach opisanych przy oznaczaniu aktyw¬ nosci a-galaktozydazy, odwirowanie roztworu w celu usuniecia bialek i oznaczenie ilosci zinwerto- wanego cukru metoda Samogyi Nelson. Jako jed¬ nostke przyjeto aktywnosc inwertazy wytwarzaja-8847Ó 7 s Tabela 3 Odmiana Aibsidia reflexa (IFO 5874) Absidia regnierie Absddia hyalospora (IFO 8082) Absidia lichtiheimi (IFO (4010) Absidia liohtheimi (IFO 4009) Absidia ramosa (IFO 8083) Mortierella vinaoea var. raffinose utilizier (ATCC 20034) Sucha grzyb¬ nia w,100 ml (g) 1.3 1.3 1.35 1.40 . 1.40 (1.30 1.40 Jednostki a-galaktozy¬ dazy 58,000 52,000 65,000 79,000 72,000 39,000 29,000 a-galak'tozy- daza/g suchej grzybni (jed¬ nostki) 446 X 104 400 X 104 481 X 104 564 X 104 514 X 104 300 X 104 207 X 104 Jednostki inwertazy 85 84 87 9% 90 84 210 Inwertaza/ /suchej grzybni 6,538 6,461 6,444 6,571 6,428 6,462 ,000 cej 1 g zinwertawanego cukru w podanych wyzej warunkach.Wyniki przytoczono w tabeli 3. Podane w tej tafoeili .aktywnosc inwertazy odnosi sie do aktyw¬ nosci enzymu z grzybni otrzymanej z 1 ml pozyw¬ ki.Wage suchej grzybni oznacza sie suszac w 105°C te ilosc grzybni, która wyrosla w 100 ml pozywki i wazac tak otrzymana sucha mase. Aktywnosc a-galaktozydazy w przeliczeniu na g suchej grzyb¬ ni podano w tabeli 3 w rubryce „a-galaktozyda- za/g suchej grzybni". Podobnie, aktywnosc inwer¬ tazy podano w rubryce ,^nwertaza/g suchej grzyb¬ ni".Dla porównania, przeprowadzono analize roztwo¬ ru z analogicznej hodowli zarodników Mortierel- la vinaoea. Wyniki tej analizy podano w tabeli 3, Z danych przytoczonych w tej tabeli wynika wy¬ raznie, ze w przypadku odmian rodzaju Absidia mamy do czynienia z duzymi aktywnosciami a- -galaktozydazy i malymi wartosciiami aktywnosci inwertazy. Ponadto, aktywnosc a-galaktozydazy z 1 g grzybni byla wyzsza, a aktywnosc inwerta¬ zy nizsza dla odmian rodzaju Absidia, w porów¬ naniu z rodzajem Mortierella vinaoea.Przyklad III. W 10 litrach wpdy rozpuszcza sie 120 g laktozy, 120 g glukozy, 120 g (NH4)2S04, 120 g wyoiagoi namoku kukurydzy, 36 g KH2P04, 24 g MgS04.7H20, 24 g NaCl i 36 g CaC03. Roz¬ twór umieszcza sie w naczyniu fermentacyjnym, poddaje sterylizacji w temperaturze 120°C w cia¬ gu 30 minut, oziebia do temperatury 30°C i roz¬ ciencza wyjalowiona woda destylowana do obje¬ tosci 12 litrów. W roztworze tym przeprowadza sie hodowle odmiany Absidia reilexa IFO 5874 wytrzasaj ac z czestotliwoscia 30 obrotów/minute, i napowiietrzajac z szybkoscia 3 l/minute. Po uply- wie wymienionych w tablicy odstepów czasu po¬ biera sie próbki roztworu i oznacza aktywnosc zawartej w nich a-galaktozydazy, a takze pH próbki. Wyniki podano w tabeli 4.Tabela 4 Czas hodowli (godz.) 0 24 28 32 86 40 42 44 pH hodowli 6.1 6.1 6.6 6.3 6.1 .8 .8 .8 .8 Jednostki a-galatkozydazy 0 9,800 19,900 31,200 45,600 54,500 59,300 62,700 63,000 Z przetoczonych danych wynika, ze 42 godziny sa wystarczajacym czasem hodowli dla odmiany Absidia reflexa IFO 5874. Po uplywie tego czasu waga suchej grzybni otrzymanej ze 100 ml pozyw¬ ki wynoisi 1.30 g.Przyklad IV. Hodowle odmiany Absidia hyalospora IFO 8082 przeprowadza sie wedlug 60 przykladu III. Oznaczono zaleznosc pomiedzy dlu¬ goscia czasu hodowli a iloscia a-galaktozydazy.Wyniki podano w tabeli 5.Przytoczone w tabeli dane wskazuja na to, ze dla tej - odmiany dostatecznie dlugi czas hodowli w wynosi 54 godziny. Po uplywie tego czasu waga9 Tabela 5 SS47Ó Tabela 6 Czas hodowli (godz.) -° 6 12 18 24 £0 36 42 48 54 l 57 PH hodowli .9 .8 .85 .50 .20 6.40 6.50 6.60 6.00 .50 .50 Jednostki a-galaktozydazy 0 0 0 0 134 1.240 4.030 19.360 51.360 68.500 69.000 suchej grzytbni otrzymanej ze 100 ml pozywki wy¬ nosila 1.35 g.Przyklad V. Melase z procesu Steffena roz¬ ciencza sie woda do 30° Brixa a pH roztworu do¬ prowadza za pomoca kwasu siarkowego do war¬ tosci 5.2, 200 g tego roztworu (zawierajacego 5.8 g rafinozy) poddaje sie dzialaniu grzybni Absidia reflexa IFO 5874 (3.9 g suchej masy i 17.400.000 jednostek a-galaktozydazy) otrzymana wedlug przykladu II. Mieszanine wstrzasa sie przez 2 go¬ dziny 30 minut w temperaturze 50°C, nastepnie grzybnie odsacza sie i przemywa woda. Przesacz i wode z przemywania laczy sie. Ilosc pozostalej w otrzymanej mieszaninie rafinozy oraz zwiekszo¬ na zawartosc sacharozy oznaczono metoda chro¬ matografii cienkowarstwowej. Chromatogram roz¬ wijano za pomoca roztworu zawierajacego 6 cze¬ sci n-butanolu, 4 czesci pirydyny i 3 czesci wody.Frakcje rafinozy i sacharozy wycieto i ekstraho- warno woda a ekstrakty analizowano metoda cy- steinowo-karbazolowa. Stwierdzono, ze 78% rafi¬ nozy poczatkowo zawartej w roztworze uleglo rozkladowi a ilosc sacharozy wzrosla o 2.41 g.Przyklad VI. 200 g melasy o 30° Brixa otrzymanej wedlug przykladu V poddaje sie dzia¬ laniu grzybni Absidia reflexa IFO 5874 (zawiera¬ jacej 17.400.000 jednostek a-galaktozydazy) wedlug przykladu V. Po zakonczeniu reakcji przemyto woda grzybnie dodaje sie do nowej porcji roz¬ cienczonej melasy i postepuje jak w przykladzie V. W ten sposób grzybnie uzywa sie pieciokrotnie.W otrzymanych po reakcji roztworach oznacza sie pozostala rafinoze oraz przyrost zawartosci sacha¬ rozy. Wyniki przytoczono w tabeli 6.P r z y k lad VII. Melase z procesu Steffena rozcienczono do 50° Brixa a pH roztworu dopro¬ wadzono do wartosci 5.2 za pomoca kwasu siar¬ kowego. 200 g tego roztworu (zawierajacego 9.66 g rafinozy) poddano dzialaniu otrzymanej wedlug przykladu 2 grzybni Absidia reflexa IFO 5874 (zawierajacej 6,5 g suchej masy i 28.980.000 jed¬ nostek a-galaktozydazy) przy temperaturze 50°C w ciagu 2,5 godzin. Po zakonczeniu reakcji, w roz¬ tworze oznaczono stopien rozkladu rafinozy oraz przyrost zawartosci sacharozy. Stwierdzono, ze stopien rozkladu rafimojzy wynosil 56,2% a odpo- Po szarzy No 1 2 3 4 Wzrost zawartosci sacharozy (g) 2.45 2.58 2.41 2.37 2.41 Rozklad rafinozy i(%) 78.5 79.0 77.8 76.0 75.1 Pozostala aktywnosc a-galaktozy¬ dazy (%) 90 88 86 86 84 wiadajacy mu przyrost zawartosci sacharozy 3.03 g.Przyklad VIII. Reakcje z udzialem grzybni Absidia Reflexa IFO 5874 (zawierajacej 1.734 g suchej masy i 7,740.000 jednostek a-galaktozydazy) i 100 ml melasy (zawierajacej 3,87 g rafinozy) o 50° Brixa prowadzono w temperaturze 50°C w ciagu 10 godzin. Po uplywie tego czasu usuwa sie grzybnie, dtrzymany roztwór rozciencza sie woda do objetosci 1000 razy wiekszej od poczatkowej i oznacza gestosc optyczna tego roztworu przy dlugosciach fal 280 m i 260 m. W oddzielnej pró¬ bie, te sama melase, w takich samych warunkach poddaje sie dzialaniu grzybni Mortierella vinace;i (zawierajacej 3.730 g suchej masy i 7.740.000 jed¬ nostek a-galaktozydazy) i oznacza gestosc optyczna otrzymanego roztworu przy 280 m i 260 m. Dla porównania oznacza sie tez gestosc optyczna wyj¬ sciowej melasy. Wyniki podano ¦ w "tabeli 7.Tabela 7 Gesitosc optyczna przy 260 mu Gestosc optyczna przy 280 mu Melasa wyjscio¬ wa 0.414 0.302 Mortie- rella vinacea 0.515 0.348 Absidia reflexa IFO r874 u.430 0.310 Z tabeli wynika, ze przy uzyciu dwócli rodza¬ jów grzybni o tej samej aktywnosci a-galaktozy¬ dazy, ilosc mieszaniny poreakcyjnej wydzielonej 50 po usunieciu grzybni byla mniejsza w przypadku Absidia reflexa IFO 5874.Przyklad IX. 200 gramowe porcje soku bu¬ raczanego (zawierajace po 5,8 g rafinozy) rozcien¬ czonego do 30° Brixa i zakwaszonego do pH 5.2 55 poddaje sie dzialaniu grzybni Absidia reflexa IFO 5874 (zawierajacej 17.400.000 jednostek a-ga¬ laktozydazy) w ciagu 3 godzin w temperaturze po¬ danej w tablicy 8. Po zakonczeniu kazdej reakcji oznacza sie stopien rozkladu rafinozy. Wyniki po- 60 dano w tabeli 8. v Z tabeli wynika, ze przy wzroscie temperatury powyzej 30° stopien rozkladu rafinozy znacznie wzrasta, a po przekroczeniu 70° zmniejsza sie wy¬ raznie na skutek dezaktywacji enzymu. 65 Przyklad X. Porcje soku buraczanego, roz-88470 11 Tabela 8 Temperatura reakcji ¦(°C) 40 50 ,60 70 Stopien rozkladu rafinozy (%) 43.1 75.7 78.5 80.2 79.0 55.6 oienczonego do 30° Brixa za pomoca buforu Mcllyaime^ o wartosciach pH przytoczonych w tatyeli 6, ^poddaje sie dzialaniu grzybni Absidia re^leKS IFO *5OT4" ('zawierajacej 17.400.000 jedno¬ stek a-galaktozydazy) w temperaturze 50°C, w ciagu 3 Ejodzm. .Po uplywie tego czasu oznacza sie *^toipien-JW*zkla Z tabeli wynika, ze najlepsze wyniki otrzymuje sie przy pH w zakresie 4 do 8. 1Z Tabela 9 PH 3 4 6 7 8 Stopien rozkladu rafinozy (%) 11.5 68.2 80.2 77.4 39.2 19.0 PL PL PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania a-galaktozydazy znamienny . tym, ze plesn rodzaju Absidia hoduje sie na po¬ zywce zawierajacej przynajmniej jeden z takich skladników jak laktoza, melibioza, rafinoza i ga- laktoza, w ilosci 0,5l0/o do 1,5% wagowych. DN-7, Z.am. 3?30/7« Cena 10 zl PL PL PL