Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania no- ^wych mieszanych soli polisiarkowych estrów naturalnych rglikopeptydów z metalami i organicznymi zasadami.Znany jest z opisu patentowego St. Zjedn. Am. nr 3 518 243 sposób sulfonowania oryginalnych glikopeptydów pochodzenia zwierzecego, w wyniku którego uzyskuje sie sulfoglikopeptydy (oznaczone ponizej jako SGLP). Przed¬ miotem wymienionego wynalazku sa takze sole SGLP -z alkalicznymi, ziem alkalicznych i ciezkimi metalami.^Znalazly one zastosowanie jako leki przeciwzapalne, zwlasz¬ cza w zwalczaniu artrozy i wrzodów zoladka. Wymienione .sole, szczególnie sole metali ziem alkalicznych wykazuja jednak pewna toksycznosc, dlatego ich zastosowanie w ce¬ lach terapeutycznych wymaga zmniejszenia toksycznosci.W zgloszeniu patentowym St. Zjedn. Am. nr 405 179 opisane sa sole sulfoglikopeptydów z metalami i amino¬ kwasami, wykazujace wlasciwosci przeciwzapalne, zabliz¬ niajace, przeciwwydzielnicze i przeciwtrawienne. Sole te sa szczególnie korzystne w zwalczaniu chorób zoladkowo- dwunastniczych. Sa one nietoksyczne i wykazuja aktywnosc przeciwzapalna wyzsza niz aktywnosc soli SGLP opisanych w patencie St. Zjedn. Am. nr 3 518 243.Sole opisane w wyzej wymienionym zgloszeniu paten¬ towym nie wykazuja jednak dzialania na obwodowy uklad nerwowy, w wyniku czego charakteryzuja sie nizsza ak¬ tywnoscia przeciwko objawom wyzej wymienionych chorób, szczególnie przeciwko bolesnym skurczom towa¬ rzyszacym chorobom zoladkowo-dwunastniczym. Na przy¬ klad, znane jest, ze sól sodowa sulfoglikopeptydu wykazuje zdolnosc hamowania wzrostu doswiadczalnie wywolanych wrzodów, aktywnosci proteazy zoladkowej, oraz zdolnosci wytwarzania kwasowych wydzielin soków zoladkowych lecz nie zmienia kurczliwosci jelit i nie wykazuje dzialania na obwodowy uklad nerwowy (patrz Prino i wspólpracow¬ nicy) Eur. Pharmacol. 15,126 — 199,1971,Prino i wspólpra¬ cownicy Arzneim. Forzch.21,918—921,1971, Prino i wspól¬ pracownicy Eur. J. Pharmacol, 17, 279—282, 1972, Prino i wspólpracownicy Am. J.Dig.Dis. 17, 863—867, *1972.Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania wyzej wymienionych soli polegajacy na tym, ze roztwór sulfo¬ glikopeptydu w postaci kwasowej traktuje sie roztworem soli metalu alkalicznego lub ziem alkalicznych sulfogli¬ kopeptydu, nastepnie uzyskany roztwór zobojetnia sie roztworem organicznej zasady zawierajacej azot posia¬ dajacej wlasciwosci przeciwskurczowe i antycholinergiczne, a wreszcie z uzyskanego roztworu mieszanej soli oddesty- lowuje rozpuszczalnik pod zmniejszonym cisnieniem.Jak podano powyzej, doswiadczalne badania wykazaly wyzsza, spowodowana synergizmem aktywnosc przeciw- wydzielnicza i przeciwwrzodowa soli w porównaniu z ak¬ tywnoscia zwiazków, z których te sól utworzono. Szcze¬ gólnie te sole, które zawieraly w swym skladzie 5—20% wagowych skladnika zasadowego, wykazywaly wieksza zdolnosc do hamowania wzrostu doswiadczalnie wywola¬ nych wrzodów oraz hamowania wydzielania kwasnych skladników soku zoladkowego niz zasad i sulfoglikopeptyd podane oddzielnie.W innych badaniach stwierdzono, ze cechy wlasciwe dla poszczególnych skladników soli na przyklad przeciw¬ trawienne wlasciwosci sulfoglikopeptydów oraz przeciw- 92 52192 52 3 cholinowe i tffcftelwHWrczowe dzialanie zasad nie zmienia sie po zwiazaniu ich w sole.Jako zasady organiczne wyzej wymienione korzystnie stosuje sie atropine, hioscyhe/, anizotrupine i papaweryne.Jako sól metalu alkalicznego korzystnie stosuje sie sole s sodowe.W czasteczkach mieszanych soli wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku tylko czfesc obecnych grup kwasowych wiaze sie w postac soli z zasadami organicznymi wymienio¬ nymi powyzej, zas pozostale wiaze sie za pomoca wiazania 10 jonowego z kationem metalu, korzystnie z jonem sodowym.W celu przeprowadzenia sulfoglikopeptydu z postaci sfcii z metalem (na przyklfcd sodem) w postac wolnego kwasu, jak równiez uwolnienia zasad wykazujacych zdolnosc do hamowania przewodnictwa bodzców nerwowych 15 w zwojach wspólczulnych, z ich soli, szczególnie odpowied¬ nim jest zastosowanie amonitowych i kationitowych wy¬ mieniaczy jonowych, takich jak na przyklad szeroko znane pod nazwami handlowymi AmberliteR IR 120 (zywica kationitowa) i Amberlite1* IRA (zywica anionitowa). 20 Zastosowanie tycL zywic mozna jednak ograniczyc jedynie do otrzymywania sulfoglikopeptydu w postaci wolnej, poniewaz uwolnienie wyzej wymienionych zasad z ich soli mozna uzyskac za pomoca metod tradycyjnych na przyklad przez dzialanie na wodny roztwór soli zasady, inna zasada 25 odpowiedniej mocy (weglanem sodowym, amoniakiem, wodorotlenkiem sodowym i innymi). Zasady te w postaci wolnej sa takze latwo dostepne w handlu.Poniewaz wolne zasady nie sa rozpuszczalne w wodzie, dlatego ich otrzymywaniebtaz ^eifccft z sulfógiikó^eptydem ft posiadajacym wolne lgrup^ kwtifeówt prowadzi sie w innym niz woda rozpuszczalniku. Jako rozpuszczalniki korzystnie stosuje sie mieszajace sie z woda nizsze alkohole i ketony.Szczególnie korzystnie stosuje sie etanol., metanol oraz —80% mieszanine acetonu iwody. J5 Sole wyzej wymienionych sulfoglikopeptydów z amino¬ wymi 1 amónlowynoi zasadami naturalnymi i syntetycznymi wskazuja wlasciwosci przeciwskurczowe i przeciwcholi- nówe. ^Jmiehibne sole lacza w sposób synergiczny prze- ciwwycizieinicze, pfzeciwtrawienhe i ochronne dzialanie 40 suffó#ifcópeptydów z przeciwskurczowym i przeciw- cfiomiowym dzialaniem zasad. Uzyskana wielkosc aktyw¬ nosci stili pozwala otrzymywac te same efekty lecznicze r)fzy znacznie zmniejszonych ilosciach zarówno SGLP jaK i skladnika zasadowego soli niz przy samych skladni- 45 kich stosowanych oddzielnie. Bardzo waznym jest towa¬ rzyszacy soli efekt synergizmu, poniewaz leki wymienio¬ nego 'typu pódafe sie zwykle przez dluzszy okres czasu Oraz czynniKi przeciwcholinowe w dawkach zwykle sto¬ sowanych wykazuja niepozadane dzialanie uboczne. 50 Ponadto stwierdzono, ze mieszane sole, które wytwarza si^ sposobem wedlug wynalazku, wykazuja znacznie nizsza toksycznosc niz odpowiednio ilosci wolnych zasad tworza¬ cych te sole. Tym samym nie mozna bylo wyznaczyc wartosci L.t503 nawet "po podaniu szczurom doustnie 55 najwyzszych dawek. Uzyskano jedynie smiertelnosc szczu¬ rów rzedu 10 —16% w zaleznosci od podanej soli.Sposobem wedlug wynalazku wytwarza sie rozpuszczalne w wodzie sole, w których czasteczce anionem jest polianion sulfoglikopeptydu, zas kationami kation metalu alkalicz- 60 nego lub ziem alkalicznych i kation organiczny zawierajacy atom azotu i wykazujacy dzialanie przeciwskurczowe i antycholinergiczne.Badania farmakologiczne. Ponizej przedstawia sie farmakologiczne dzialanie soli mieszanej sulfoglikopeptydu 65 4 otrzymanych srJo^obem wedlug wynalazku. Dzialanie to ilustruje sie na przykladzie sdll femlfotirópmibwc^-sotiowe^ sulfoglikopeptydu. Badania prowadzone na szczurach w licznych próBach FanhakologicznyfcL w porównaniu z wlasciwosciami bromku metyloanizotropiniowego i soli sodowej sulfoglikopeptydu.Stwierdzono, ze anizotropiniowa sól sulfoglikopeptydu charakteryzuje sie bardzo niska toksycznoscia w stosunku, do szczurów po podaniu doustnie. JeSH toksycznosc soli porównuje sie z toksycznoscia zawartej w niej anizotropiny*" to stwierdza sie wyrazny jej spadek.Tablica I 1 Zwiazek SGLP/Na 1 metylobromek ani- zotropiny 1 SGLP(Na)anizotropina LD50 i granica ufnosci 1 nietoksyczny do 4 g/kg f 794 (694-921) mg/kg t nietoksyczny d© 4 g/k8 1 W licznych próbach farmakologicznych stwierdzono* wieksza aktywnosc soli w porównaniu z jej skladnikami..Ten fenomen zaobserwowano szczególnie wyraznie w dzia¬ laniu wymienionymi zwiazkami na wrzody wywolane- przez podwiazanie odzwiernika (tablica II), wrzody wywo¬ lane przez unieruchomienie (tablica) oraz w hamowaniu wydzielania kwasnych skladników soków zoladkowych, (tablica IV i V).Liczne próby wykazaly, ze zarówno wlasciwosci sulfogli- fcapeptydu jak i anizotropiny towarzysza takze ich soli. mieszanej. Na przaklad aktywnosci anizotropiny prze¬ ciwko nadmiernej ruchliwosci jelit wywolanej przez bodziec cholinowy (tablica VI) lub przeciwko skurczom wywo¬ lanym acetylocholina na wyizolowanym od swinek morskich jelicie cienkim pozostaja w takiej samej wartosci w mie¬ szanych solach. Takze aktywnosc przeciwtrawienna SGLP* nie zmienia sie po przeprowadzeniu sulfoglikopeptydu _ w mieszana sol z anizotropina (tablica VII).Tablica la Toksycznosc ostra po podaniu doustnie szczurom (które- utrzymywano pod obserwacja w czasie 10 dni) soli sodowej; SGlJP, bromku metyloanizotropinowego oraz anizo— tropiniowosodowej soli SGLP (zawierajacej 15,6% zasady- anizotropiniowej) Zwiazek SGLP/Na bromek metytoanizotro- piniówy SGLP/Na anizorropina LD$ó i granice f prawdopodobienstwa [ nietoksyczna przy 4 g/kg j 794 (684-921) mg/kg t nietoksyczna przy 4 g/kg i Hamowanie wzrostu wrzodów wywolanych przez- podwiazanie odzwiernika po podaniu doustnie szczurom, soli sodowej SGLP, bromku metyloanizotropiniowego* i mieszanej soli anizotropiniowosodowej sulfoglikopeptydu (zawierajacej 15,6% zasady anizotropiniowej).„Srednica wrzodu" oznacza srednia wartosc dla dowolnie- wybranych wrzodów sposród obserwowanych.SE oznacza poziom bledu.£2 521 Tablica II Ilosc 1 szczurów 1 30 freparat Roztwór soli SGLP Bromek metyloanizotropiniowy SGLP/Na (anizotropina) Dawka podana doustnie ml/kg mg/kg mg/kg mg/kg Srednica wrzodu ± SE 3,17±0,39 2,40±0,39 2,05±0,38 , 1,25±0,28 Hamowanie 24,3 ,3 # NS 0,X)5 6#oi Ilosc szczurów | 30 Preparat Roztwór soli SGLP/Na Bromek metyloanizotropiniowy SGLP/Na (anizotropina) Tablica HI Dawka podana doustnie mg/kg 180 mg/kg mg/kg 200 mg/kg Srednica wrzodu ± SE 3,30 ±0,28 2,96 ±0,35 1,96±0,30 1,26±0,28 Hamowanie ,4 40,6 - 61,8 l P 1 NS <0,005 <0,ÓÓ1 | P oznacza prawdopodobienstwo (znaczenie statystyczne).NS statystycznie nieznaczny.Hamowanie wzrostu wrzodów wywolanych przez unie¬ ruchomienie zoladka, u szczurów po podaniu im doustnie soli sodowej SGLP, bromku metyloanizotropiniowego oraz mieszanej soli anizotropiniowosodowej sulfoglikopeptycTu (zawierajacej 7,8% zasady anizotropiniówej).B) Hamowanie wydzielania soków zoladkowych za odzwiernikiem.Hamowanie wydzielania kwasnych soków zoladkowych przez pentegastrine (80 tneg/kg po podaniu dozylnie) u szczurów po podaniu doustnie soli sodowej SGLP, bromku metyloanizotropiniowego oraz mieszanej soli ahizótrbpmibwbsodówe] sulTóglikópep'ty (zawierajacej 7,8% zasady anizotropiniówej).Tablica IV Ilosc szczurów 24 24 24 1 24 Preparat Roztwór soli SGLP/Na Bromek metyloanizotropiniowy SGLP/Na (anizotropina) Jii; 2 ml/kg 40 mg/kg l mg/kg 50mg/kg H+ milirównowaz- nik/1 godzine 1,31 ±0,1* 1,21 ±0,10 6,85 ±0,2 0,33d;0,04 i fenrówanie 7»6 i ,1 : ...74,8 * NS NS <0,ÓÓ1 j Tablica IVa Ilosc szczurów 24 24 24 1 24 Preparat Roztwór soli SGLP/Na Bromek metyloanizotropiniowy SGLP/Na (anizotropina) Dawka podana doustnie 2 ml/kg 40 mg/kg mg/kg 50 mg/kg Objetosc irri/1 godzine 1,59±0,1 1,65±0,1 1,28±0,2 0,69±0,07 i Hamowanie, •i +3,8 19,5 44,02 i P NS NS Dzialanie na podstawie czynnosci wydzielnicze u szczurów po podaniu im doustnie soli sodowej SGLP, bromek metyloanizotropiniowy oraz anizotropiniowo sodowej soli mieszanej sulfoglikopeptydu (zawierajacej 15,6% zasady anizotropiniówej).A) Hamowanie wydzielania kwasnych soków zoladko¬ wych, zachodzacego w odzwierniku. 60 Aktywnosc soli sodowej SGLP, bromku metyloanizo¬ tropiniowego oraz anizotropiniowosodowej soli mieszanej sulfoglikopeptydu (zawierajacej 15,6% zasady anizotro¬ piniówej) przeciwko zoladkowojelitowej ruchliwosci wy¬ wolanej u szczurów po podaniu im metacholiny (2 mg/kg podane domiesniowo).Dzialanie przeciwtrawienne soli sodowej SGLP, bromku92 521 Tablicra V Ilosc I szczurów | 20 1 20 | 20 Preparat Roztwór soli nie zawierajacej Roztwór fizjologiczny SGLP/Na Bromek metyloanizotropiniowy SGLP/Na (anizotropina) Dawka podana doustnie 2 ml/kg 2 ml/kg 90 mg/kg mg/kg 100 mg/kg H+ milirównowaz- nik/1 godzine Wartosc ±SE 0,72 ±0,10 1,64±0,22 0,80±0,14 1,54±0,16 0,37±0,07 % Hamowania — 51,2 18,5 77,4 P — <0,01 NS Tablica VI 1 Ilosc 1 szczurów 1 20 i 20 1 20 Preparat Roztwór soli (bez metacholiny) Roztwór fizjologiczny SGLP/Na Bromek metyloanizotropiniowy SGLP/Na (anizotropina) Dawka podana doustnie ml/kg ml/kg 40 mg/kg mg/kg 50 mg/kg Wyciek zawiesiny z weglem (ml) srednio ±SE 54,97±1,2 87,41 ±1,9 83,48±2,4 52,1 ±2,7 51,3 ±2,4 % Hamowania — 4,3 40,4 41,3 P — NS <0,001 Tablica VII Ilosc I szczurów I 20 Preparat Roztwórsoli SGL^/Na Bromek metyloizotropiniowy SGLP/Na (anizotropina) Dawka podana doustnie 2 ml/kg 80 mg/kg 8,8 mg/kg 88,8 mg/kg Aktywnosc trawienna (mikromde- tyrazyny) 62,5 ±5,4 57,7±5,6 52,3 ±7,2 32,3±4,6 % Hamowania 39,7 16,3 48,3 P <0,01 NS <0,001 1 metyloanizotropiniowego oraz soli mieszanej anizotro- piniowosodowej sulfoglikopeptydu (zawierajacej 7,8% zasady anizotropiniowej). Odzwiernik podwiazywano w czasie 5 godzin, zas dzialanie preparatami rozpoczynano bezposrednio po podwiazaniu.Modyfikacje i/lub zmiany moga byc dokonane przez specjalistów zarówno w budowie soli jak i ich sposobie wytwarzania bez odstepowania od zakresu i ducha wyna¬ lazku.Przyklad I. Atropiniowo-sodowa sól sulfogliko¬ peptydu. 3,734 g soli sodowej sulfoglikopeptydu otrzymanej sposobem przedstawionym w opisie patentowym St. Zjedn.Am. nr 3 518 243 i charakteryzujacej sie nastepujacym skladem: s N Na heksoaminy heksozy bialka 14,65% 3,05% ,65% 18% 14% 4,7% 45 50 55 60 rozpuszcza sie w 187 ml destylowanej wody, a nastepnie uzyskany roztwór przeprowadza sie przez kolumne wypel¬ niona silna zywica kationitowa (AmberliteR IR 120 H+).Eluat laczy sie z roztworem 41,59 g soli sodowej sulfogli¬ kopeptydu stosowanej poprzednio, w 208 ml wody desty¬ lowanej. Wypelnienie kolumny przemywa sie 100 ml wody destylowanej i uzyskany eluat laczy z poprzednio otrzyma¬ nym roztworem, uzyskujac roztwór o calkowitej objetosci 480 ml oraz wartosci pH okolo 2. Nastepnie do otrzymanej mieszaniny dodaje sie roztwór 5g atropiny w postaci wolnej zasady w 50 ml 95% etanolu. Po wymieszaniu uzyskuje sie roztwór obojetny. Z roztworu tego oddestylowuje sie rozpuszczalniki pod zmniejszonym cisnieniem i otrzymuje 48 g atropinowo-sodowej soli sulfoglikopeptydu o naste¬ pujacym skladzie: wilgoc S N heksozy heksozaniny aminokwasy Na zasada atropinowa ,20% 12,64% 2,83% ,0% 16,6% 0,1% 8,28% ,3%nm to Tak otrzymane mieszane sole rozpuszczaja sie w wodzie nawet w temperaturze pokojowej oraz rozpuszczaja sie w 50% roztworze etanolu.Przyklad ILN-butylohioscyniosodowa sol sulfogli- kopeptydu. 1,0 g soli sodowej sulfoglikopeptydu identycznej jak stosowana w przykladzie I, rozpuszcza sie w 50 ml wody destylowanej i roztwór przeprowadza przez kolumne wypelniona silna zywica kationitowa (AmberliteR IR 120 H+). Eluat laczy sie z roztworem 7,464 g wymienionej powyzej soli sodowej sulfoglikopeptydu w 37 ml wody destylowanej. Wypelnienie kolumny przemywa sie 100 ml wody destylowanej i uzyskany eluat laczy z poprzednio otrzymanym roztworem, uzyskujac 190 ml roztworu o pH okolo 2,5.Roztwór 2 g bromku hioscynobutyloamoniowego w 50 ml wody destylowanej poddaje sie dzialaniu silnej zywicy amonitowej (AmberliteR IRA 410 OH+), nastepnie oddziela zywice, przemywa ja woda, obydwa roztwory wodne laczy • sie ze soba i traktuje otrzymanym powyzej roztworem kwasnym. Otrzymuje sie 320 ml roztworu o pH = 6. Po oddestylowaniu rozpuszczalników pod zmniejszonym cisnieniem uzyskuje sie 9 gramów N-butylo- hioscyniowosodowej sioli sulfoglikopeptydu o nastepu¬ jacym skladzie: wilgoc 3,20% S 12,70% N 3,40% Na 8,18% N-butylohioscyna 16,35% heksozy 10,1% heksozaminy 16,8% aminokwasy 8,2% Mieszane sole otrzymane tym sposobem rozpuszczaja sie w wodzie w temperaturze pokojowej i nie rozpuszczaja sie w 80% etanolu.Przyklad III. Anizotropinowosodowa sól sulfogli¬ kopeptydu (zwana w skrócie SGLP/Na/ anizotropina). 3,027 g soli sodowej sulfoglikopeptydu identycznej jak stosowana w przykladzie I rozpuszcza sie w 151 ml wody destylowanej i uzyskany roztwór przeprowadza przez kolumne wypelniona silna zywica kationitowa (AmberliteR IR 120 H+).Eluat laczy sie z roztworem 43,58 g soli so¬ dowej sulfoglikopeptydu identycznej jak wymieniona powyzej, w 216 ml wody destylowanej. Wypelnienie ko¬ lumny przemywa sie 150 ml wody destylowanej i uzyskany eluat laczy z poprzednio otrzymanym roztworem. Tak otrzymany roztwór ma objetosc równa 520 ml i pH = 2,8.Roztwór 5 g bromku metyloanizotropinowego w 100 ml wody destylowanej przeprowadza sie przez kolumne wypelniona silna zywica amonitowa (AmberliteR IRA 410 OH+). Wypelnienie kolumny przemywa sie nastepnie 150 ml wody destylowanej. Eluaty laczy sie uzyskujac 250 ml roztworu o pH = 11. Po polaczeniu roztworu al¬ kalicznego i kwasnego uzyskanego poprzednio, otrzymuje sie klarowny roztwór o pH = 5,5 i objetosci równej 700 ml.Po oddestylowaniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym cisnieniem uzyskuje sie 48 g anizotropinowosodowej soli SGLP o nastepujacym skladzie: wilgoc S N Na heksozy 6,70% 12,82% 3,07% 8,6% ,2% hefcaozaminy 16*8% aminokwasy 8,2% zasada anizotropinowa 7,8% Otrzymane tym sposobem mieszane Me calkowicie rozpuszczaja sie w wodzie, nawet w temperaturze pokojowe) irozpuszczaja siew 50% etanolu.Przyklad IV. Papaweryniowosoddwa sól sulfo¬ glikopeptydu. 1,457 g soli sodowej sulfoglikopeptydu identycznej jak stosowana w przykladzie I, rozpuszcza sie w 7$ ml wody destylowanej i uzyskany roztwór przeprowadza przez kolumne wypelniona silna zywica kationitowa (Amber¬ liteR IR 120 H+). Uzyskany eluat laczy sie z roztworem przygotowanym z 21,432 gramów soli wymienionej powyz*} 16 i 107 ml wody destylowanej. Wypelnienie kolumny prze¬ mywa sie 150 ml wody destylowanej i otrzymany eluat laczy z poprzednio otrzymanym roztworem. Uzyskuje sie roztwór o objetosci 350 ml i pH = 2,8.Przygotowuje sie roztwór 2,5 graaw ehtetoWódorku papaweryny w 50 ml 50% wodnego roztworu etaooluj a nastepnie przeprowadza sie go przez kolumne wypelniona silna zywica amonitowa (AmberliteR IRA 410 OH+)j po czym wypelnienie kolumnyprzemywa 150ml 50%-owego wodnego roztworu etanolu. Roztwór zasadowy laczy sie z poprzednio otrzymanym roztworem kwasnym, uzyskujac 500 ml roztworu o pH = 5,2. Z roztworu tego oddestylo*- wuje sie rozpuszczalniki pod zmniejszonym cisnieniem i otrzymuje 24 gramy papaweryniowosodowej soli sulfo¬ glikopeptydu o nastepujacym skladzie: Tak otrzymana mieszana sól rozpuszcza sie w wodzie 40 w temperaturze pokojowej.Przyklad V. 4-amino-5-chloro-[2-(dwuetyloamino) etylo] -2-metoksybenzamidowosodowa sól sulfogliko¬ peptydu. 7,310 g soli sodowej sulfoglikopeptydu identycznej jak 45 stosowana w przykladzie I rozpuszcza sie w 361 ml wody destylowanej i otrzymany roztwór przeprowadza przez kolumne wypelniona silna zywica kationitowa (AmberliteR IR 120 H+). Eluat laczy sie z roztworem uzyskanym przez rozpuszczenie 37,5 g soli sodowej, identycznej jak stosowana 50 powyzej, w 174 ml wody destylowanej. Wypelnienie kolumny przemywa sie 130 ml wody destylowanej i uzys¬ kany eluat laczy z roztworem poprzednio uzyskanym, otrzymujac 700 ml roztworu o pH = 1,5. g monochlorowodorku 4-amino-3-chloro-[2-dwu- 55 etyloamino)etylo]-2-metoksybenzamidu rozpuszcza sie w 100 ml 96% etanolu i przeprowadza przez kolumne wypel¬ niona siln-* zywica amonitowa (AmberliteR IRA 410 OH+), po czym wypelnienie kolumny przemywa sie 80%-owym etanolem o temperaturze 40°C. 60 Uzyskane roztwory laczy sie ze soba otrzymujac 1300 ml roztworu o pH = 3,2. Z roztworu tego oddestylowuje sie rozpuszczalniki pod zmniejszonym cisnieniem i otrzy¬ muje 49 g 4-amino-5-chloro [2- (dwuetyloamino)etylo] - -2-metoksybenzamidosodowej soli sulfoglikopeptydu o 65 nastepujacym skladzie: wilgoc S N Na heksozy heksozaminy aminokwasy zasada papawerynitowa 2,5% 13,00% 2,92% 8,7% ,4% 17,0% 8,3% 9,0%11 wilgoc S N Na kwas heksozy heksozaminy amizokwasy 4,2% 13% 4,43% 7,98% 1,7% 9,5% ,5% 7,6% zasada 4-amino-5-chloro- [2- (dwumetyloamino)etylo] -2- -metoksy-benzamidowa 17,6% Mieszana sól otrzymana tym sposobem rozpuszcza sie calkowicie w wodzie w temperaturze pokojowej oraz w 50% etanolu. PL