PT100427A - Analogos de colecistoquina (cck) contendo aminoacidos alfa-substituidos e composicoes farmaceeuticas que os contem - Google Patents

Analogos de colecistoquina (cck) contendo aminoacidos alfa-substituidos e composicoes farmaceeuticas que os contem Download PDF

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Description

ί 4
Descrição da patente de invenção de WARIOIR-LAMBERT COM-PANY, norte-americana, industrial e comercial, estabelecida em 201 Tabor Road, Morris Plains, Rew Jersey 07950, Estados Unidos da América, (inventores: David Christopher Horwell e Reginald Stewart Richardson, residentes na Grã--Bretanha, para "AM10G0S DE COLECISTOQUDTA (CCK) COITEUDO AMIUOACIDOS a-SUBSTITUIDOS E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS COUTEM"
Descrição
Antecedentes da invenção
Os agentes que actuam nos receptores c en trais da colecistoquinina (CCK) podem eventualmente induzir saciedade (Schick, Yaksh and Go, Regulatory Peptides 14:277-291 (1986).
GSP
Os peptidos CCK encontram-se amplamente distribuidos pelos diversos órgãos do corpo incluindo o trac-to gastro-intestinal, as glândulas endóerinas e os nervos dos sistemas nervoso periférico e central. Foram já identificadas diversas formas biologicamente activas incluindo uma hormona com 33 aminoácidos e diversos fragmentos da extremi- - 1 -
dacLe carboxilo desse peptido (por exemplo, o octapeptido CCK26-33 e o tetrapeptido CCK30-33). (G. J. Dookray, Br. Med. Buli.. 38 (H2. 3):253-258, 1982).
Admite-se que os diversos peptidos CCK estejam implicados no controlo da contractilidade do músculo liso, na secreção das glândulas exécrinas e endró-orinas, na transmissão dos nervos sensoriais e em numerosas funçães cerebrais. A administração de peptidos nativos origina a contracção da vesícula biliar, a secreção de amilase, a excitação dos neurénios centrais, a inibição da vontade de comer, acçSes anti-convulsivas e outros efeitos sobre o comportamento. ("Cliolecystokinin: Isolation, Struture and Eunotions", G. B. J. Glasse, Ed., Raven Press, New York, 1980, pp 169-221; J. Ξ. Morley, Life Sciences 27:355-368, 1980; "Cholecysto-kinin in the lervous System," J. de Belleroche and G. J. Dookray, Ed., Ellis Horwood, Chichester, England, 1984, pp 110-127). A existência de elevadas concentraçães de peptidos CCK em muitas zonas do cérebro significa também a existência de funçães cerebrais fundamentais desempenhadas por esses peptidos (G. J. Dookray. Br. Med. Buli., 38 (12 3): 253-258, 1982). A forma mais abundante de CCK cerebral deteotada é CCK26-33 embora existam também pequenas quantidades de CCK30-33 (Rehfeld and Gottterman, J. Neuroohem. 32:1339-1341 (1979)). Kâo se conhece exaotamente a função do CCK no sistema nervoso central mas sabe-se que está associado ao controlo da vontade de comer (Della-Eera and Baile, Science 206:471-473 (1979)).
Os fármacos supressores do apetite actualmente disponíveis actuam periferioamente aumentando o consumo de energia (tais como a tiroxina) ou actuam por alguma outra forma (tais como as biguanidas) ou actuam ainda exercendo um efeito c entrai sobre o apetite ou sobre a saciedade. - 2 -
Demonstrou-se recentemente que os pacientes com bulimia possuem nos seus plasmas, níveis de CCK inferiores aos níveis normais Hew England Journal of Medicina 319!683 (1988)). Uma função adicional dos COK na periferia consiste em regular a libertação de insulina. Demonstrou-se que os COK aumentam os níveis de insulina quan do são administrados aos mamíferos J. Clin. Endoorinol. Metab, 65:395 (1987)).
Estudos recentes afirmam que os fragmentos do terminal C dos CCK funcionam como antagonistas dos receptores dos CCK (Jansen, et al, Bioohem. Biophvs.
Acta 757:250 (1983); Spanarkel, J, Biol, Chem, 258:6746 (1983))* 0 pedido de patente japonesa ]P 70/10506 de Miyao e colaboradores revela um derivado tetrapeptídioo da sequência do t erminal carboxi da gastrina (l-Trp-l-Lys--L-Asp-L-Phe-HH^) o qual possui actividade anti-gastrina.
Os fármaoos supressoras do apetite que actuam centralmente potenoiam os percursos da ceteoo-lamina central e tendem a ser estimulantes (por exemplo, as anfetaminas) ou influenciam os percursores serotonérgiços (por exemplo, as fenfluraminas). Outras formasde terapia com fármacos incluem os agentes volumizantes que actuam por enchimento do estômago induzindo desse modo uma "sensação" de saciedade. A patente WO 90/06937 descreve derivados de tetrapeptidos como agonistas de CCK. Esses compostos destinam-se ao tratamento de perturbações gastro-intes-tinais, perturbações do sistema nervoso central, perturbações associadas à insulina, tratamento de dores ou desempenham as funções de reguladores do apetite.
Sumário da invenção A presente invenção refere-se a novos compostos que são ligandos de CCK e são mono-, di-, tri-, - 3 -
composto de acordo com a fórmula geral 1 em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável em formas de dosagem unitárias para a supressão do apetite. em A presente invenção descreve também um método para suprimir o apetite nos mamíferos, o qual consiste administrar aos mamíferos que precisam desse tipo de tratamento uma quantidade eficaz de composição anteriormente descrita para suprimir o apetite. A presente invenção descreve também métodos para o tratamento de perturbações gastro-intestinais, 4
perturbações do sistema nervoso central (SNC) através da utilização de supressoras para o SNC os quais podem exibir efeitos anti-psitóticos, neurolépticos/ ansiolíticos e anti-- convulsivos. A presente invenção descreve também métodos para a redução da secreção dos ácidos gástricos e para o tratamento das úlceras gastro-intestinais. A presente invenção descreve ainda uma reacção de bloqueio provocada pela cessação da utilização de um fármaco ou de álcool e refere-se também à potenciação dos efeitos da morfina e de outros epioides utilizados no tratamento de dores.
Por outro lado a presente invenção proporciona ainda processos para a preparação dos compostos de formula geral I.
Finalmente a presente invenção proporciona novos intermediários úteis para a preparaqão dos compostos de fórmula geral I é proporciona também processos para a preparação desses intermediários,
Breve Descrição dos desenhos: A Figura 1 demonstra que o composto 2 é um agonista parcial. A Figura 2 demonstra que o composto 4 é um agonista e que o composto 5 é um agonista fraco. A Figura 3 demonstra que o composto 6 é um agonista.
As Figuras 1 a 4 caracterizam o CCK8s como padrão de referência para os agonistas. 5
Descrição Pormenorizada 0 quadro a seguir indicado proporciona um dicionário dos termos utilizados na memória descritiva da presente invenção. QUADRO I Descrição abreviada GLY Glicina p-ALA fà-Alanina GABA Ácido 4-aminobutanóico DAVA Ácido f) -aminovalérico MET L-Metionina TYR L-Tirosina ASP Ácido L-aspártico PEH L-fenilalanina TRP L-triptofano BOC 'Uercbutoxicarbonilo 1-ADOC 1-Adamantiloxicarbonilo 2-ADOC 2-Adamantiloxicar.bonilo Z Benziloxicarbonilo FMOC 9-Fluorenilmetoxicarbonilo Aib Ácido a-aminoisobutirico PFP Pen t a f 1 uor o f en i lo
Os compostos da presente invenção são análogos de CCK 30-33 e CCK 26-33 e contem pelo menos um resíduo de um aminoácido que ê a, a-di-stibstituido.
Esses compostos diferem dos peptidos naturais codificados geneticamente existentes nos mamíferos pelo facto de os 6
α-substituintes não poderem ser todos simultaneamente o átomo de hidrogénio.
Os compostos da presente invenção são representados pela fórmula geral
ou são um correspondente sal farmaceuticamente aceitável em que o símbolo R1 representa o átomo de hidrogénio ou um grupo BOC# 1-Adoc, 2-Adoc, Z, FMOC, R12R13R14Si(CHJ OCO- em 12 13 14^ m que cada um dos simbolos R , R e R representa independentemente um grupo alquilo inferior possuindo entre 1 e 3 átomos de carbono e o simbolo m represente um inteiro compreendido entre 0 e 3, um 15 15 15 grupo R C0- ou R NHCO- em que o simbolo R representa um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada possuindo entre 1 e 6 átomos de carbono ou um grupo 1- ou 2-adamantilo; o simbolo A representa uma ligação ou um grupo Gly, fii-ALA, GABA, DAVA, Aib, NH(CHJ em que o simbolo p re-
<U presente um inteiro compreendido entre 1 e 6 7 NHCO,
Met-Gly,
Tyr-Met-Gly,
Asp-Tyr (OSO^H) /
Asp-Tyr-Met-Gly,
Asp-Tyr (0S03H) -Met-Gly; 2 4 6 8 cada um dos símbolos R , R , R e R representa mdependen-temente o átomo de hidrogénio com a condição de não representarem todos simultaneamente o átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, -CH*CEL, OCH, -CH -CH==CH0, -GH_C«CH, -CELAr, 2 “* 2 2 2 “ 2 -CH2OR, -GHgOAr, - (CH2)gCC>2R, - (CHg) N(R) 2 em que o simbolo q representa um inteiro compreendido entre 0 3 e, o simbolo R representa o átomo de hidrogénio ou representa um grupo alquilo inferior, o simbolo Ar representa um radical mono- ou poli-cí-clico insubstituido ou substituído cartoaromático heteroatomático ou hidroaromático; 3 o simbolo R representa um grupo 2- ou 3-indolilo, 1- ou 2- -naftilo, 2- ou 3-benzotienilo, 2- ou 3-benzofuranilo( 2- ou 3-indazolilo ou fenilo, podendo qualquer destes grupos possuir entre 0 e 3 substituintes selecciona- dos individual e independentemente entre átomos de hidrogénio, flúor, cloro, bromo, iodo ou entre grupos metilo, metoxi, trifluoro-metilo, nitro, hidroxi, NH2 e OCP3; 5 o simbolo R representa um grupo alquilo inferior ou representa um grupo (CHL) S(CH ) CH em que o simbolo r « 1Γ A s 3 representa um inteiro compreendido entre 1 e 6 e o simbolo s representa um inteiro compreendido entre 0 e 6; o simbolo n representa um inteiro compreendido entre 1 e 3
o simbolo R representa o grupo -OH, -COOH, tetrazol, triasol, 16 -COOR , 16 -CCNR1°R11/ representa um grupo alquilo inferior e os simfoolos R10 e R^1 possuem as significações seleccionadas entre as anteriormente defi- 3 nidas para o simbolo R ;
em cfue o simbolo R 17 * o simbolo R representa um grupo de fórmula 0 li 10 11 18 -C-NR R , CH^OR ou H ou representa um grupo de fórmula CH20R ou representa o átomo de hidrogénio, em que 10 11 cada um dos símbolos R e R representa índependen-dentemente o átomo de hidrogénio ou representa um grupo alquilo inferior, alcoxi-carbonilo, carboxi--alquilo ou R10 e R11 conjuntamente com o átomo de azoto ao qual estSo ligados formam um anel possuindo entre 3 e 10 átomos possuindo esse anel átomos selec-cionados entre carbono, azoto, oxigénio e enxofre; e o simbolo R^° possuindo as significações definidas para ou representa um grupo R18 e R1 ou CH2C02H ou CHgCONR^R11 ou CONR^R11; r2 e R3, R4 e R5, R6 e R7, R8 e R9 ou R9 e R10 os símbolos R2 e R3, R4 e R5, R6 e R7, R8 e R9 ou R9 e R10 representam radicais que conjuntamente podem formar um anel possuindo entre 3 e 8 átomos sendo esses átomos seleccionados entre carbono, azoto, oxigénio e enxofre. - 9 -
Os compostos preferidos da presente invenção são os compostos de formula geral I em que 1 o símbolo R representa um grupo Fmoc, Z, Boc ou Me^Si (ch2)2oco-; o simbolo A representa uma ligação ou representa um grupo Gly, p-ALA, Aifo, Asp-Tyr-Met-Gly, Asp-Tyr (OSO3H)-Met-Gly? 2 4 6 8
Cada um dos simbolos R , R , R e R representa independentemente um grupo alquilo possuindo entre 1 e 3 átomos de carbono, um grupo carboxi-alquilo possuindo 1 ou 2 átomos de carbono ou um grupo CHgOH; 3 o simbolo R representa um grupo 3-indazolilo, 3-benzotienilo 2-benzofuranilo, 3-benzofuranilo ou 2-bromo-3-benzofuranilo? 5 o simbolo R repfcasenta um grupo isobutilo, sec-butil-etilo, n-propilo ou i-propilo? 7 o simbolo R representa um grupo CONH^, CONMe2 ou OH? 9 o simbolo R possui significações seÊbeccionadas entre as 3 que foram definidas para o simbolo R ?
Cada um dos simbolos R10 e R11 representa independentemente um grupo alquilo possuindo entre 1 e 3 átomos de carbono ou conjuntamente Rx e Rx formam um anel possuindo entre 4 e 8 átomos de carbono incluindo o átomo de azoto ao qual estão ligados.
Os compostos mais preferenciais da presente invenção são os compostos de fórmula geral I 10
em ques R^ representa o átomo de hidrogénio ou um grupo BOC; A representa uma ligação ou um grupo β-ΑΜ;
O A (s Q
Oada um dos simbolos R , R , R e R representa independentemente um grupo OH^ ou um grupo 0Η2002Η; 3 0 símbolo R representa um grupo 3-Sadolilo. 1-naftilo ou 2-naftilo; R^ representa um grupo n-butilo, n-pentilo, (0112)2 SCH5 ou (CH2)2SCH2OH3i η R representa um grupo OH, tetrazol, triazol ou OOgH; R^ representa um grupo fenilo, 1-naftilo ou 2-naftilo; R^ e R"^ representam independentemente o átomo de hidrogénio que representa 0 grupo CH^ ou conjuntamfcnte 0 átomo de hidrogénio que representa 0 grupo OH^ ou conjuntamente R^ e R^ formam um anel de 5 ou 6 átomos incluindo 0 átomo de azoto ao qual estão ligados.
Os compostos espeoialmente preferenciais da presente invenção são seleooionados e n tre 0 grupo - 11 -
constituido pelos compostos a seguir inumerados: Γ-metil-DL-triptofil-L-metionil-L- -aspartil-L-fenil- -alaninamida, d- -metil-D-triptofil-L-metionil-L- £«- -aspartil-L-fenil-alaninamida, 2r -metil-L-triptofil-L-metionil-L- ?T -aspartil-L-fenil--alaninamida, M-/ l_ (l,l-dimetil-etoxi)-oarT3onilJ- fr -metil_7-L-tripto-fil_7-L-metionil-L- -aspartil-L-fenil-alaninamida, ^-^(ljl-dimetil-etoxiJ-carlDonil^J7- d' -metil-DL-triptofil--L-metionil-L- 2r -aspartil-L-fenil-alaninamida, L-triptofil-2-metil-DL-metionil-L- -aspartil-L-fenil-ala- ninamida, 1-/^(1,l-dimetil-etoxi)-carbonil_J- d' -metil-D-triptofil--L-metionil-L- ò -aspartil-L-fenil-alaninamida,
Grlioil- ^ -metil-D-triptofil-L-metionil-L- à\ -aspartil-L--fenil-alaninamida, G-licil- -metil-DL-triptofil-L-metionil-L- -aspartil-L--fenil-alaninamida,
Glicil-th -metil-L-triptofil-L-metionil-L- õ) -aspartil-L--fenil-alaninamida,
Trp-Met-Asp-DL-MePLe-IHo · CP^COgH, e
Trp-Met-DL-MeAsp-Phe-IHg . CI^COgH.
As configurações D e L dos compostos de fórmula geral I são possíveis nos centros de quiralidade - 12
θ consideram-se englobadas no âmbito da presente invenção.
Os compostos preferenciais são aqueles em que os resíduos dos ácidos -aminados possuem a configuração c * J-
Os compostos da presente invenção podem possuir miíltiplos centros de quiralidade consoante as suas estruturas. Pode haver centros de assimetria em átomos de carbono que suportap substituintes representados pelo símbolo R1 na fórmula geral I e nos substituintes R2, R^, R^, Έ?, R^, R^, R8, R^ e R1^ na fórmula geral I. Em particular, os compostos da presente invenção podem existir como diastereómeros, misturas de diastereómeros ou ainda como enantiómeros dpticos individuais ou suas possíveis misturas. A presente invenção abrange todas essas formas possíveis dos compostos. As misturas de diastereómeros são obtidas tipicamente como resultado das reacçSes adiante descritas mais pormenorizadamente. Os diastereómeros individuais podem ser separados das misturas de diastereómeros por técnicas convencionais tais como a cromatografia em coluna ou sucessivas e repetidas recristalizaçães.
Os compostos da presente invenção englobam os solvatos e os hidratos e também os sais farma-ceuticamente aceitáveis de fórmula geral I. 0 termo "alquilo inferior" significa grupos alquilo de cadeia linear ou ramificada possuindo entre 1 e 6 átomos de carbono salvo quando especificado de outro modo, 0 termo "alooxi-carbonilo" significa um grupo que possua entre 1 e 4 átomos de carbono.
Como sais preferenciais farmaceuticamer)i-te aceitáveis refere-se os sais de benzatina, oloro-prooaína, colina, dietanol-amina, etileno-diamina, meglumina, procaína. - 13 -
alumínio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio, zinco, dietil-amina e trometano.
Os sais farmaceuticamente aceitáveis especialmente preferenciais são os sais de N-metil--glucamina e de sódio derivados de ácidos e os sais de H01, sulfatos e trifluoro-acetatos no caso das bases.
Os enantiómeros individuais podem ser separados por métodos convencionais bem conhecidos na especialidade tais como o método da conversão num sal composto optioamente activo, seguindo-se a separação por cromatografia ou por recristalização e a subsequente reconversão na forma não salina. A estereoquímica preferencial dos compostos da presente invenção é a que exibe o composto do exemplo 2.
Os compostos da presente invenção podem ser formados acoplando ácidos -aminados substituídos individuais através de métodos bem conhecidos na especialidade. (Yeja-se por exemplo os métodos de síntese normalizados descritos no manual H0?he Pepdides, Analysis, Synthesis, Biology," por Gross and Meinhofer, Academic Press, Hew York.) Os materiais de partida derivados de áttdos <3r-aminados substituídos individuais são geralmente conhecidos ou, se não for esse o caso, podem ser sintetizados e, se desejado, é possível efectuar a sua resolução por métodos conhecidos pelos especialistas na matéria. (Síntese da forma racémica do éster metílico de ^”DL--metil-triptofano - veja-se BraKa, M. 1., et ai, J. Hete-rocyclic Chem. 17:829 (198o)). A presente invenção engloba também novos intermediários que são úteis para a preparação dos produtos finais. Esses intermediários são os compostos a - 14 -
seguir enumerados ou o composto em resina de fase sólida: a título de exemplo refere-se a e strutura Pmoc-MePhe--Resina.
Rmoo-MePlie-RHg, i'moc-Asp(0Bu^)-MePhe-IH2,
Pmoc-Met-Asp (OBu"*3) -MePhe-IH2,
Ptno c-Trp-Met-Asp (OBu1") -MePhe-M2,
Asp (OPu*3) -MePhe-M^»
Asp-MePlie-Mg, P mo c-Met-Asp-MePlie-JJHg,
Met-Asp (OBu"*3) -MePhe-HH2,
Met-Asp-MePhe-IHg,
Trp-Met-Asp( OBu*3) -MePhe-lHg, Pmoo-Trp-Met-Asp-MePiie-lHg, P mo c-MeAsp (OBu"*3) -Phe-M2,
Pmoc-MeAsp-Phe-IHg,
Pmoo-Met-MeAsp (OBu"*3)-Plie-BHg,
Pmoc-Prp-Met-MeAsp( OBu"*3)-Phe-EHg j
MeAsp (OBu"*3) -Phe-Mg,
MeAsp-Phe-EEE2 >
Met-MeAsp (OBu"*3) -Phe-RHg?
Met-MeAsp-Phe-IB^,
Pmoo-Met-MeAsp-Phe-IHg,
Pmoc-Trp-Met-MeAsp-Phe-RHg,
MeMet-Asp (OBu"*3)-Plie-MIg,
Pmoc-MeMet-Asp (OBu"*3) -Phe-HSg > Pmoc-MeMet-Asp-Plie-IHg MeMet-Asp-Phe-Mg, Pmoc-Trp-MeMet-Asp(OBu"*3)-P}ie-M2 j 15 -
Fmoc-Trp-MeMet-Asp-Plie-Mk,,
Fmoc-MeTrp-Met-Asp( OBu^ )-Phe-HH2,
Fmoc-MeTrp-Met-Asp-Phe-IHg, Fmoc-Gly-Trp-Met-Asp-MePhe-Mg, Fmoc-Gly-Trp-Met-Asp( OFu^MePhe-HE^ >
Gly-ÍErp-Met-Asp (OBu15 )MePhe-HH2, Fmoo-Gly-Trp-Met-MeAsp-Plie-E^ > F moo -Gly-Trp-Met-MeAsp (OBu^) -Phe-BHg»
Gly-Trp-Met-MeAsp(OFu^)-Phe-NHg, Fmoc-Gly-Trp-MeMet-Asp-Phe-lEL·), Fmoc-Gly-lrp-MeMet-Asp(OBu^) -Phe-HHg, Gly-Trp-MeMet-Asp(OBu^)-Phe-IH2» Fmoo-Gly-MeíDrp-MetAAsp-Plie-lHg, Fmoc-Gly-MeSrp-Met-Asp( OBu"*5 J-Phe-EEg, Gly-Me!Erp-Met-Asp( OFu"^5 )-Phe-IH2,
Fmoc-MeMet-OH,
Fmoc-MeMet-OPEP,
MeAsp (OBu^) OH,
Ftaoo-MeAsp(OBu^)OH e Fmoc-MeAsp(OBu^)OPEP.
Para a preparação de composições farmacêuticas a partir dos compostos da presente invenção os veículos inertes farmaceuticamente aceitáveis utilizáveis podem estar no estado sólido ou podem estar no estado líquido. As preparações no estado sólido englobam os pós, os comprimidos, os grânulos dispersáveis, as cápsulas, as pílulas e os supositórios.
Um veículo sólido pode ser constitui-do por uma ou por várias substâncias que desempenham tambóm - 16
a função de diluentes, agentes aromatizantes, solubiliza-dores, lubrificantes, agentes de suspensão, aglutinantes ou agentes desintegraôõres dos comprimidos; esse veículo sólido também pode ser um material para encapsular. Io caso dos pós o veículo é um produto sólido finamente dividido que se mistura com o componente activo finamente dividido. Io caso dos comprimidos mistura-se o componente activo com um veículo que possua as necessárias propriedades aglutinantes em proporçães adequadas e depois efectua--se a sua compactação conferindo-lhe a forma de as dimensães desejadas.
Para a preparação de supositórios utiliza-se uma cera de baixo ponto de fusão tal como uma mistura de glicéridos de ácidos gordos e manteiga de cacau a qual é primeiro fundida e depois no produto de fusão dispersa-se o ingrediente activo.por exemplo, sob agitação. Depois verte-se essa manteiga homogénea fundida em moldes de dimensães convenientes e deixa-se arrefecer e solidificar.
Os pós comprimidos contém de preferência aproximadamente entre 5 e 70$ de componente activo. Gomo veículos adequados refere-se o carbonato de magnésio, o estearato de magnésio, o talco, a lactose, o açúcar, a pectiva, a textrina, o amido, a goma alcantira, a metil--celulose, a carboxi-metil-celulose de sódio, uma cera de baixo ponto de fusão, a manteiga de cacau e substâncias semelhantes. 0 termo "preparação", quando utilizado, pretende significar a formulação do componente activo com o material de encapsular como veículo que proporciona uma cápsula na qual o componentè activo (em presença ou na ausência de outros veículos) fica envolvida por um veículo com o qual fica dessa forma associado. De modo idêntico considera-se englobadas também as pílulas. - 17 -
Os comprimidos, os pós, as pílulas e as oápsulas podem ser utilizadas oomo formas de dosagem no estado sólido adequadas para administração oral.
As preparações no estado líquido englobam as soluções, suspensões e emulsões. Oomo exemplos de preparações no estado líquido adequadas para administrarão parentérica é possível referir as soluções em água estéril ou as soluções numa mistura de água e de propileno--glicol. As preparações no estado líquido também podem ser formuladas em soluções aquosa contendo polietileno-glicol.
As soluções aquosas para administração oral podem ser preparadas dissolvendo o componente ac-tivo em agentes oorantes, agentes aromatizantes, agentes estabilizadores e agentes dispersantes adequados, conforme desejado. As soluções aquosas para utilização oral podem ser preparadas dispersando o componente aotivo finamente dividido em água conjuntamente com o material viscoso do tipo das gomas sintéticas naturais, resinas, metil-celulose, carboxi-metil-celulose de sódio e ainda com outros agentes de suspensão conhecidos na especialidade de formulação farmacêutica.
De preferência a preparação farmacêutica apresenta-se sob a forma de uma dose unitária. Nessa forâa, a preparação é dividida em doses unitárias que contem quantidades adequadas do componente activo. A forma de dosagem unitá pode ser uma preparação embalada, contendo essa embalagem quantidades discretas da preparação, por exemplo, comprimidos, oápsulas e pós embalados em frascos ou âmpu-las. A forma de dosagem unitária também pode ser a própria cápsula, a própria pílula ou o próprio comprimido ou pode ser um número adequado de quaisquer dessas formas embaladas. . Avaliou-se a aotividade biológica \ dos compostos da presente invenção recorrendo a um teste de 18
rastreio inicial o qual permitiu medir rápida e exactamen-te a ligação do composto testado aos sítios conhecidos dos receptores de CCK. Demonstrou-se que no sistema nervoso central existem receptores específicos de CCK. (Ver Hays et al, leuropeptides 1:53-62 (1980); e Satuer et al, Science 208:11555-56 (1980). leste teste de rastreio extraiu-se os córtex cerebrais de murganhos machos da estirpe CF1P com uma massa compreendida entre 30 e 4-0 g cuja dissecação foi efectuada sobre gelo e depois de pesados procedeu--se à sua homogeneização em 10 volumes de tampão tCris-HCl 50 mM (pH 7.4 a 0-4°C). Submeteu-se a suspensão resultante a centrifugação, eliminou-se o sobrenadante e lavou-se a massa obtida preparando nova suspensão em tampão Iris--HC1, e depois procedeu-se a nova centrifugação. Com a massa final obtida preparou-se nova suspensão em 20 volumes de tampão Hepes 10 mM (pH 7.2 a 23°C) contendo 130 nM de HaCl, 4.7 nM de KOI, 5nM de MgC^» 1 nM de EDTA, albumina de bovino na concentração de 5 mg/ml e bacotracina (0,25 mg/ml). los estudos de saturação efectuou-se a incubação de membranas corticais cerebrais ã temperatura de 23°C durante 120 minutos num volume final de 5^0 micro-litros de tampão Hepes (pH 7.2) oonjuntamente com penta-gastrina tritiada numa concentração compreendida entre 0.2 e 20 nM (Amersham International, England). las experiências de deslocamento essas membranas foram incubadas com uma concentração única (2 nM) de ligando em conjunto com concentrações crescentes (10""“^ a 10-^½) de composto de ensaio competitivo. Em cada um dos casos definiu-se a ligação não especificação como sendo a ligação que persiste em presença do octapepti-do não marcado CCK2g_^ (10 ^ M). - 19 -
Após a incubação a radioactividade ligada às membranas foi separada da radioactividade livre em solução, por filtração rápida através de filtros Wiiatman GrP/B e efectuou-se a lavagem três vezes com 4 ml de tampão Iris-HCl arrefecido com gelo. Os filtros das amostras incubadas com pentagastrina tritiada foram colocadas em frascos de polietileno contendo 4 ml de uma mistura de cintilação e avaliou-se a radioactividade por espeotrometria de cintilação em líquido (eficiência compreendida entre 47 e 52$). A ligação específica aos sítios de re-oeptores de QOK foi definida como s endo a quantidade total de pentagastrina tritiada ligada menos a quantidades de pentagastrina tritiada ligada em presença do octapeptido 00K2g_^2 na concentração de 10~^ M.
Procedeu-se às análises das curvas de saturação da pentagastrina tritiada específica que se liga às membranas corticais dos murganhos utilizando-se os métodos de Scatchard (Ann. lew. York Acad. Soi. 51:660-72 (1949), e Hill (J, Physiol. 40:IY-VIIX (1910) de modo a proporcionar uma avaliação do número máximo de sítios de ligação (Bm_„) e a constante de dissociação em equilíbrio (Ka).
Ias experiências de deslocamento as curvas de inibição foram analisadas alternativamente pelos tragados "logit-lot" ou pela curva iterativa ajustada pelo programa de computador (DeLean, Munson and Redbard, 1978) de modo a proporcionar uma avaliação dos valores CI^q e nH (coeficiente aparente de Hill).
Por definição os valores CI^q correspoj: dem à concentração do composto de ensaio necessária para produzir 50$ de inibição da ligação específica).
Depois calculou-se a constante de inibição (Kj) dos compostos ensaiados em conformidade com a - 20 -
equação de Cheng-Prusoff} 1 + ZX7 / Ka em que o simbolo /~L_^7 representa a oonoentração do iden-fioador radioactivo e o símbolo K„ representa a constante cl de dissociação em equilíbrio.
Uo quadro II seguinte estão agrupados diversos valores K^/M para alguns compostos representativos da presente invenção.
Quadro II. ligação aos Eeceptores centrais de CCK
Composto K±/m (n) (D 7.16 + 1.95 9 (2) 5.44 (4.23-7.10) 9 (3) (4) 7.80 (5.56-12.9) 3 (5) 9.20 (6.86-11.8) 3 (6) 30.40 (26.6-35.5) 3 (7) (n) = Mmero de ensaios
Dados Electrofisioldgioos E possível encontrar textos explicativos e protocolos para experiências idênticas a estas em J. Hughes, Proo. lati. Acade. Sei. 87:6728-6732 (1990) e βεΐί3 refe- - 21 -
rênoias ali citadas. Â Figura 1 representa a ourva de tipo dose/resposta para C0K8s antes e durante a exposição ao composto (2) e também uma curva para o composto (2) isoladamente. Essas curvas representam o número total de potenciais de acção que ocorrem durante a resposta a CCK8s ao composto (2) e são traçadas em termos de unidade de contagem (eixo y) em função da dose (eixo X). As curvas para o composto (2) indicam que esse composto possui propriedades caraoterísticas de um agonista parcial nesta experiência. A curva traçada com o simbolo —I— é para o CCK8s, a curva traçada com o simbolo == == é para o composto (2) e a curva traçada com o simbolo .... A .... é para a combinação CCK-8s + oomposto (2) (1 ;uM). A figura 2 representa curvas do tipo dose/resposta para os análogos BH-CCK e CCK4 no mesmo neu-rdnio no VM. 0 número total de potenciais de acção que ocorrem durante a resposta é marcada termos de unidades de contagem (eixo Y) em função da dose de ligando (eixo X).
As curvas para a função (X*A) / (X+B) foram ajustadas a esses pontos utilizando-se o programa informático ESI (A = resposta máxima possível, B = CE^q do composto calculado a partir da curva). Essas curvas indicam que tanto o composto (4) como o oomposto (5) possuem propriedades de tipo agonista nesta experiência. A curva traçada com o traço ==o== é para o composto (5). a curva traçada com o traço ... ,J[ .... é para o composto BH-CCK, a curva traçada oom o traço----J ---- é para o composto (4), a curva traçada com o traço - - - - é para (1078. 292444Í1) / (5. 395304e-03+X), a curva traçada com o traço - é para 1149,663878X*) / (0.010686+X), a curva traçada com o traço ........ é para (1100*X) / (X+0.47953), a curva traçada com o traço-------- é para (IlOOseX) / (X+0.014358), a curva traçada com o traço ........ é alisada (0.5) para o composto CGK e a curva traçada com . é para o composto GCK apenas. - 22
lias Figuras 3 e 4 estão representadas as curvas do tipo dose/resposta para CCK e para os compostos (4), (5) e (6) tanto antes oomo depois da exposição ao poderoso antagonista PD 134308 de CCK-8. 0 número total de potenciais de acção que ocorrem durante a resposta ê traçado sob a forma de unidades de contagem (eixo Y) em função da dose (eixo X). As curvas para a função (X*A) / (X+B) foram ajustadas a esses pontos utilizando-se o programa informático ESI. Essas curvas indicam que os compostos (4), (5) e (6) possuem propriedades idênticas às de um antagonista de CCK que são antagonizadas pelos antagonistas de CCK-8.
Ia Pigura 3 a curva traçada com o traço —.— é para CCK. a curva traçada com o traço ==J; = é para o composto (8), a curva traçada com o traço ----£ ---- 4 para a combinação do composto (6), + PD 134308, a curva traçada com o traço -------- é para (X&1126.907666) / )1+9.879552), a curva traçada com o traço é para (1123*Χ) / (X+0.140626) e a curva traçada com o traço ======== é para (1127*X) / (X+0.031476).
Ia Piggra 4 a curva traçada com o traço — . — é para CCK, a curva traçada com o traço ~ |f == e para o composto (5), a curva traçada com o traço ^ .... é para o composto (4), a curva traçada com o traço----$ ---- é para a oombinação do composto (5) + PD 134308 e a curva traçada com o traço -— -4 é para a combinação do composto (4) + PD 134308.
Os quadros III e IV resumem as quatro figuras. - 23
QUADRO III
Composto Perfil Pigura CE50/iíM (2) agonista parcial 1 — (4) Agonista 2 14.0 (5) agonista fraco 2 479.5 (6) Agonista 3 524.0 CCK8s Agonista 1-4. 5.4
Demonstrou-se também que esses compostos são agonistas em conformidade com experiências nas quais houve estimulação com o poderoso e selectivo antagonista de CCK-B anteriormente descrito, o composto de referência PD 134308 designado por ácido ^/-R-(Rmí, R*)-4-Z"Z~2-Z"Z""3-(lH-indol-3-il-)-2-metil-l-oxo-2-/~/_(tricMo Z dec-2-iloxi)carbonil_/ aminoJZ-propil_J amino_7-l-f enetil__7amino_7-4-oxobutanáico. QUADRO I?
Composto Gráfico Ke (PD 134308)/nM (4) composto de referência 4 4.67 (5) + composto de referência 4 3.02 (6) + composto de referência 3 14.4 CCK8s + composto de referência — 5.4 - 24 -
Os resultados demonstram que o composto (4) é equipotente com o composto CCK8s ao passo que o composto (6) possui uma aotividade electrofisiologica ligeiramente inferior e o composto (5) possmi uma aotividade-de agonista relativamente fraca. 0 composto (2) é um agonis-ta parcial.
Os compostos da presente invenção são dteis como supressores do apetite conforme se conclui tomando como "base os testes adiante descritos.
Io ensaio designado pela expressão "Alimentação com Dieta Saborosa" os ratos adultos e machos da estirpe Hooded Lister com uma massa variável entre 200 e 400 g são alojados individualmente e treinados a comer uma dieta saborosa. Essa dieta é constituída por leite condensado e açucarado da lestlé, alimento em pó para ratos e água, sendo todos esses componentes misturados conjuntamente até se obter um produto com uma consistência firme, laculta-se a cada rato uma quantidade compreendida entre 20 e 30 g de dieta saborosa durante 30 minutos por dia durante o período de luminosidade do ciclo diário luz/escu-ridão durante um período de treino correspondente a 5 dias. Mede-se a ingestão de dieta saborosa pesando o recipiente alimentar antes e após decorridos os 30 minutos do período de acesso (com limites de precisão de 0.1 g). E necessário tomar as devidas precauções para recolher qualquer dieta derramada e efectuar as convenientes correcções. Os ratos tem acesso livre a um granulado alimentar e a água excepto durante o período de 30 minutos que dura o teste.
Após o período de treino construiu--se as curvas de tipo dose/resposta para o composto 0CK8 e para vários compostos representativos da presente invenção (n = 8-10 ratos por nível de dosagem). Obteve-se os valores EMP^0 (limites de confiança a + 95$) para os efeitos anorécticos desses compostos. - 25 -
Na sua utilização terapêutica como agentes para a supressão do apetite os compostos da presente invenção são administrados a um paciente em níveis de dosagem compreendidos aproximadamente entre 200 e 2800 mg por dia.
Como agonistas os compostos da presente invenção possuem utilidade terapêutica como supressores do apetite e como antagonistas possuem utilidade como agentes no tratamento de perturbações gastro-intesti-nais, no tratamento de perturbações no sistema nervoso central tal como quando aplicados como supressores para o SNC, podendo esses compostos exibir os seus efeitos como anti--psicóticos, neuroléptioos, ansiolíticos e anti-convulsi-vos.
Como antagonistas é de admitir que os compostos da presente invenção possuam utilidade para reduzir a secreção do ácido gástrico, para reduzir a ansiedade, para o tratamento das úlceras gastro-intestinais, para o tratamento do comportamento psicótico, para bloquear a reaoção provocada pela supressão de um fármaco, do áloool, da cocaína, da benzodiazepina, do diazepam ou da nicotina e também para potenciar o efeito da morfina nos casos de tratamento de dores.
Os análogos de CCE contendo a -metil--aminoácidos foram preparados por três métodos. 0 Método A consiste num procedimento em que há uma fase em solução em que os peptidos são agrupados utilizando-se protocolos normalizados em que há uma fase em solução de modo a proporcionar intermediários totalmente protegidos ou um acoplamento normalizado sob a forma de sal o qual proporciona intermediários desprotegidos de cadeia lateral de ácido as-pártico. Os exemplos 1 e 2 adiante descritos ilustram o Método A. - 26
Os referidos peptidos também podem ser preparados pelo método B que é um método em que existe uma fase solida em que os peptidos são construídos sobre resinas em fase sólida concebidas para proporcionarem amidas de terminal C quer por tratamento da resina com amónia em metanol quer por clivagem directa de uma resina adequadamente substituida utilizando-se ácido trif1uoroacético, em presença dos purificadores necessários/ obtendo-se as amidas di-rectamente.
Este áltimo protocolo foi utilizado com resinas "DuPont RapidAmide ^ ou Nova Biochem Novasyn KR^ num aparelho para borbulhamento simples (resina DuPont) ou num sintetizador automatizado (resina Nova Biochem).
Este método está ilustrado no exemplo 3 adiante descrito. O terceiro método é o método C e constitui um método em que não se utiliza solvente sendo o componente amino e o éster pentafluorofenílico aquecidos conjuntamente sem qualquer solvente# a uma temperatura compreendida entre 50°C e 100°C durante um período de tempo variável entre 10 e 120 minutos ou eventualmente superior.
Este método encontra-se ilustrado no exemplo 4 adiante descrito.
Procedeu-se ao alojamento individual de ratos machos da estirpe Hooded Lister (175-250 g) os quais permaneceram em jejum durante a noite (com aceSso livre à água). Depois foram anestesiados com uretano (1.5 g/kg IP) e introduziu-se-lhes uma cânula pela traqueia para auxiliar a respiração espontânea. Praticou-se uma perfusão no estômago continuamente utilizando uma modificação do método original descrito por Ghosh & Schild em "Continuous recordisg of acid secretion in the rat". (Br. D. Pharmac, 13:54-51, 1956 em coafirmidade com a descrição de Parsons na publicação "Quantitative studies of drug-induced gastric acid secretion". (Ph. D. Thesis, University of London, 1969). A perfusão na 27
cavidade do estômago foi praticada com um débito de 3 ml/minuto com uma solução de glicose a 5.4% p/v através da canu-la esofágica e corporal. O fluído foi impulsionado por uma boniba centrifuga (Gilson, Minipuls 2) atravessando uma serpentina de aquecimento para elevar a sua temperatura para 0 valor de 37 + 1°G. 0 fluído de perfusSo foi recolhido por um funil de recolha fóndico e fez-se passar através de um electrodo de detecção do pH ligado a um medidor de pH Jenway (PHML6). 0 sinal obtido à saída desse leitor de pH foi transmitido para uma registadora de cartogramas de Rika-denki de modo a permitir o registo em tempo real do valor do pH do perfusato gástrico.
Guardou-se uma aliquota congelada de pentagastrina e diluiu-se para os valores pretendidos de concentração utilizando uma solução estéril de NaCl a 0.9% p/v. Eseses novos compostos foram dissolvidos numa solução estéril de NaCl a 0,9% p/v no dia da experiência. Os fárma-cos foram administrados através de uma cânula aplicada à veia jugular provenientes de uma ampola grande numa dose em voluma correspondente a 1 mlAg com diluição em 0.15 ml de uma solução de NaCl a 0.9 p/v. Deixou-se estabilizar o valor do pH basal antes de se iniciar a administração dos referidos compostos. Normalmente decorrem 30 minutos entre a intervenção cirúrgica e a administração do primeiro composto.
Os compostos da presente invenção podem eventualmente antagonizar também a estimulação da secreção de ácido gástrico que é produzido por uma dose normalizada de pentagastrina na dose de 1 nmoleAg- Um dos compostos atenua tarnbém a quantidade de ácido gástrico segregado em resposta a uma dose de pentagastrina correspondente a 1 nmole/kg (a resposta inicial â pentagastrina foi de 254 umoles/1 H e após a administração do composto (dose cumula-tiva de 1.1 umolesAg) foi de 128 umoles/1 H ). Com ambos os compostos o antagonismo é reversível com recuperação completa da resposta à pentagastrina. 28 -
Os compostos da presente invenção também são úteis como agentes anti-úlcera conforme mais adiante se descreve.
Procedeu-se à avaliação das lesões gástricas induzidas pela aspirina em grupos constituídos por 10 ratos. T0dos os animais foram mantidos em jejum 24 horas antes do tratamento e durante a experiência. Administrou-se fármaco ou veículo 10 minutos antes de se ter administrado uma dose oral de 1 ml de uma suspensão de aspirina em carboximetilcelulose (CMC) a 0.5% numa concentração correspondente a 45 mg/ml.
Os animais foram sacrificados decorridas 5 horas após a administração da aspirina e procedeu-se à remoção dos seus estômagos os guais foram abertos para exame.
As lesães gástricas foram classificadas e ordenadas conforme a seguir se indica: classificação 1 hemorragia pequena 2 hemorragia grande 3 úlcera pequena 4 úlcera grande 5 úlcera perfurada 0 valor médio para a classificação das úlceras no grupo de controlo e a gue se aplicou uma solução salina foi de 12.1 + 6.85 (+ DP). 0 tratamento com ranitidi-na (15 mg/Kg PO) inibe a formação de úlceras em 74% proporcionando um valor de classificação para as úlceras correspondente a 3. 2 + 2.35 (p < 0.001 comparativamente com os animais de controlo). 0 tratamento com um composto da presente invenção (10 mg/kg PO) proporcionou um valor de classificação pa- 29
ra as ulceras correspondentes a 6.3 + 4.14 (p < 0.05 comparativamente com os animais de controlo) o que significa uma redução de 48 % na formação de úlceras.
Contudo, os níveis de dosagem específicos podem variar de acordo com o paciente, de acordo com a grafridade do estado que se pretende tratar e de acordo com a actividade do composto utilizado. A determinação das doses óptimas é da competência dos especialistas na matéria.
Os compostos da presente invenção também são úteis como agentes ansiolíticos conforme mais odian-te se revela e descreve.
Avaliou-se a actividade ansiolítica no teste de exploração lux/escuridão efectuado com murganhos (B. u. Jones, et al, Br. J. Pharmacol. 93:985-993, (1988). 0 número de murganhos utilizados foi de 5 e o tempo de pré-tratamento foi de 40 minutos. 0 composto de ensaio foi administrado p.o. em doses correspondentes a 0.1, 1 e 10 mg/kg. 0 aparelho utilizado foi uma caixa de tampa aberta com 45 cm de comprimido, 27 cm de largura e 27 cm de altura dividida numa área pequena (2 x 5) e numa área grande (3 x 5) por uma parede divisória que se prolonga 20 cm acima das paredes laterais. Nessa parede divisória existe uma abertura com 7.5 x 7.5 cm ao nível do chão. 0 compartimento mais pequeno foi pintado a preto e o compartimento maior foi pintado a branco. 0 chão de cada compartiemento está dividido em quadrados com 9 cm de lado. o compartimento branco foi iluminado com uma lâmpada de tungsténio com a potência de loo watt colocada 17 cm acima da caixa e o compartimento negro foi iluminado de modo idêntico mas por uma lâm-, pada vermelha com a potência de 60 watt. Todo o laboratório • se encontrava iluminado com luz vermelha. 30
Todos os ensaios foram efectuados entre as 13.00 horas e as 18.00 horas. Cada murganho submetido à experiência foi colocado no centro da área branca e permitiu--se-lhe que explorasse o novo ambiente envolvente durante 5 minutos. 0 comportamento dos murganhos foi registado em fita para magnetoscópio e a partir desse registo procedeu-se posteriormente à análise do comportamento. Foram medidos 5 parâmetros: o tempo de latência até a entrada no compartimento escuro# o tempo consumido em cada área. o número de transições entre compartimentos, o número de linhas atravessadas em cada compartimento e o número de recuos em cada compartimento.
Neste teste um acréscimo do tempo consumido à luz constitui uma medida significativa, isto é, di-rectamente correlacionada, dos efeitos ansiolíticos de diversos fármacos ansiolíticos padrão. Os fármacos são dissolvidos em água ou em solução salina fisiológica e depois são administrados por via subcutânea, por via intraperitoneal ou através da boca (PO) utilizando-se uma agulha estomacal.
Esses compostos são activos por via subcutânea. No caso dos animais de controlo observau-se 3% de travessias para o interior da área escura durante períodos de medição de 5 minutos. No caso dos. murganhos tratados com um composto na dose de 1 mg/kg (SC) observou-se 85 travessias para o interior da área iluminada e apenas 24 travessias para o interior da área escura, o que representa a existência de uma diferença significativa (p ·< 0.01) em relação ao murganho de controlo ansioso. 0 composto diazepam (0.25 mg/kg IP) proporciona um efeito idêntico ao de um des ses compostos na mesma experiência.
Os compostos da presente invenção são úteis como agentes anti-psicóticos. Submeteu-se esses compostos a testes para determinação da sua capacidade no sentido de reduzirem os efeitos das anfetaminas intra-acumbeno no rato, conforme a seguir sectescreve. 31
Utilizou-se ratos macho da estirpe Sprague Dawley (Cd) Bradford. Os ratos foram alojados em grupos de 5 à temperatura de 21 + 2°C e sujeitos a um ciclo diário de 12 horas de lus/12 horas de escuridão com as luzes acesas entre as 07.00 horas e as 20.00 horas. Os ratos foram alimentados com dieta CRM (Labsure) e permitiu-se-lhes o consumo de água ad libitum.
Os ratos foram anestesiados com hidrato de cloral (4oo mg/kg SC) e foram colocados numa estrutura estereotéxica de Kopf. Procedeu-se à implantação de cânulas guia cronicamente residentes (feitas de tubo de aço inoxidável com 0.65 mm de diâmetro suportadas bilateralmente em suportes *,PerspexH) utilizando-se técnicas estereotáxicas normalizadas de modo a terminarem 3.5 mm acima do centro de núcleo acumbeno (Ant. 9.4, Vert. 0.0, Lat. 1.6) ou de modo a terminarem 5.0 mm acima do núcleo central da amídlala (Ant. 5.8, Vert. -1.8, Lat. + 4.5) (atlas de De Groot, 1959). Essas guias foram mantidas durante um período de recuperação de 14 dias utilizando-se para esse efeito estiletes de aço inoxidável com 0.3 mm de diâmetro os quais se prolongavam 0.5 mm para além das pontas dessas guias.
Os ratos foram manualmente contidos e procedeu-se à remoção dos estiletes. Procedeu-se à inserção de cânulas de injecção intracerebral com 0.3 mm de diâmetro e efectuou-se o fornecimento de fármacos numa quantidade correspondente a um volume de 0.5 ^1 durante 5 segundos (esperou-se que decorressem mais 55 segundos para permitir a deposição) utilizando-se para esse efeito seringas de tipo Hamilton ligadas através de um tubo de polietileno âs unidades de injecção. Os animais foram utilizados apenas numa única ocasião.
Foram efectuadas experiências sobre o comportamento entre as 07 horas e 30 minutos e as 21 e 30 minutos em ambiente calmo à temperatura de 22 + 2°C. Os ra- 32 -
tos foram deslocados âo seu compartimento habitacional e durante uma hora permitiu-se-lhes a adaptação ao novo ambiente. Avaliou-se a actividade locomotora em gaiolas individuais de rede (Perspex" (25 x 15 x 15 cm (altura) (em grupos de 30) cada uma delas equipada com uma unidade celular fotoeléctri-ca disposta segundo o eixo maior e afastada 3.5 cm da parede? verificou-se que esta posição minimizava as unidades de contagem sobre a actividade residual provocada, por exemplo, pelos movimentos da cabeça e pelos movimentos de ajustamento corporal quando o animal se encontra estacionário. As interrupções do feixe luminoso são registadas em cada 15 minutos. Nessa altura observa-se também os animais com o objectivo de se pesquisar a presença de qualquer modificação não específica na actividade locomotora, por exemplo, sedação, prostação, movimentos estereotipados e outros que possam interferir com o registo da actividade locomotora.
Efectuou-se também a medição da capacidade dos compostos da presente invenção para inibirem a hiperactividade provocada pela injecção de anfetamina no interior do núcleo acumbeno.
Observa-se um acréscimo da actividade locomotora após a injecção bilateral de anfetamina (20 ,ug) no núcleo acumbeno? o pico de hiperactividade (50 a 60 unidades de contagem em cada 5 minutos) ocorre decorridos 20 a 40 minutos após a injecção. A injecção intraperitoneal dos ratos com o composto nas doses de 20 mg/kg ou 30 mg/kg ou 10 mg/kg reduz a hiperactividade provocada pela injecção de anfetamina intra-acumbeno. Este teste e conhecido pelo facto de permitir prever a actividade anti-psicótica (Costall, Domeney & Naylor & Tyers, Brit J Pharmac 92:881-894). 33 -
Exemplo 1 N~iT (1,1-dimetilletoxi) carbonil 7a-metil-DL-triptof il-L--metionil-L-aspartil-L-fenil-alaninamida
Boc-D-Me-Trp-Met-Asp-Phe-NH2 (1)
Preparou-se uma solução de Asp-Phe-NH2 (o, 6 g, 2.02 mmol) em DMF (10 ml) e tratou-se com di-isopro-pil-etil-amina (261 mg, 2.02 mmol) seguindo-se depois o tratamento com o éster pentafluorofenílieo de Fmoc-metionina (Fmoc-Met-OPFP? 1.10 g, 2.05 mmol) e agitou-se a mistura durante a noite. Após a remoção da DMF efectuou-se a trituração do resíduo com uma mistura constituida por éter dietílico : acetato de etilo (5 : 1) e depois filtrou-se o sólido resultante. Obteve-se um produto impuro no estado sólido, Fmoc--Met-Asp-Phe-NHg/ que foi utilizado sem purificação adicional (1.22 g, 96%). Repetiu-se o procedimento para se obter 1, 29 g de produto. Dissolveu-se o sólido anteriorirente preparado (2,00 g, 3.16 mmol) em DMF contendo piperidina (20% a 50% v/v, 16 mL) e depois agitou-se durante 20 minutos. Após a remoção da DMF e da piperidina efectuou-se a trituração do resíduo com éter para proporcionar um produto sólido e de cor branca, Met-Asp-Fhe-NH^, com um rendimento quantitativo. Também foi possível utilizar este produto sem purificação adicional.
Com o tripeptido livre (205 0.5 mmol) preparou-se uma suspensão em DMF (5 mL) e adicionou-se-lhe di-isopropil-etil-amina (129 mg, 1.0 mmol). Adicionou-se Boc-DL-MeTrp-OPFP (242 mg, 0.5 mmol) e depois agitou-se a mistura até ficar limpida (aproximadamente 2 dias). A remoção dos produtos voláteis proporcionou um resíduo bronzeado claro que foi triturado com uma mistura constituida por éter dietílico í acetato de etilo (1 : 1) proporcionando um produto sólido quase branco. A cromatografia deste produto sólido (gel de sílica, 5% de MeOH em diclorometano com 1% de AcOM) proporcionou um produto sólido quase branco num total 34 wiptanqaa^
de 279 mg e com um rendimento de 78%. mm (DMSO-d, έ 1.21 e 1.28 (3H, 2S), 1.42 e 1.43 (9H,
O 2s) , 1.99 e 2.01 (3H, 2s), 2. 24-2.54 (8H, m), 2.81 (1H, dd), 3.11 (2H. dm), 4.18-4.4 (3H, m), 4.5 (1H, m), 6.78 (1H, s br), 6.86-7.34 (11H, m), 7.47 (1H, d), 7.52 e 7.41 (1H, 2br. s) , 7.7 (1H, mbr), 8.06 (1H, t br), 8.24 (1H, d br). SM-BAR (ião +V0) 749 (M+K), 733 (M+Na), 711 (M+H) (ião-VO) 709 (M-H)
Microanálise; Cale. para 6° θ'3* 0.75 B^O: C, 58.03; H, 6.54; N,11.60: S, 4.42. encontrado: C, 58.13; H,6.48; N, 11.35; S, 4.40. PQr um processo idêntico preparou-se também o composto N-A/~(l,l-dimetileto;K:i)-carbonil_7--<X- -matil^-j^^iptofil-L-metionil-L-a-aspartil-L-fenil-alanina- mida.
Boc-L-&:-Me,rrp-Met-Asp-Phe-KH„/ (2), e o composto ftli N-/“ (l-l-dimetiletoxi) carbonil_7-a-metil-D-tripto£il-L-metio-nil-L-a-aspartil-L-fenil-alaninamida.
Boc-D-a-MeTrp-Met-Asp-Phe-ISIB^, (3), RMN (2; DMSO-dJ ^ 1.25 (3H, s), 1.44 (9H, s), 1.33
O (2H, rn), 2.01 (3H, s), 2.38 (2H, m), 2.65 (1H, m), 2.82 (IS, m), 4.20 (1H, m), 4.33 (1H, m), 4.50 (1¾ m), 6.92- -7.47 (12H, m), 7.82 (2H, m), 8.11 (1H# d br), 10.91 (1H, s). RI® (3, DMS0-d6) S 1.29 (3H, s), 1.44 (9H, s) , 1.92 (2H, m), 2.02 (3K, s), 2.42 (2H, t), 2.60 (1H, ta), 2.84 (1H, dd), 3.13 (2¾ d), 3.31 (2H+água), 4.19 (1H, m), 4.36 (1H, m), 4.48 (1H, m), 6.94-7. 24 (12H, m), 7.3 2 (1H, d),
7.47 (1H, d), 7.84 (1H, d br), 8.14 (1H, d br), 8.22 (1H s br), 10.92 (ΓΗ, s). 35 -
Exemplo 2
Por este método preparou-se também o compo sto a-meti 1-L-tripto fil-L-metionil-L-cc-asparti 1-L--fenil-alaninamida. L-c-MeTrp-Met-Asp-Pbe-NH^, (4), ffi-metil-D-triptofil-Ir-metionil-L-ci-aspartil-Lr-fenil-alanina- mida. D-a-MeTrp-Met-Asp-Phe-NHg/ (5) e cc-metil-DL-triptofil-L-metionil-L-a-aspartil-lj-fenil-alanina- mida. DL-fó-MeTrp-Met-Asp-Phe-NH2/ (6).
Nestes três últimos casos o resíduo final utilizado foi o adequado ester activado de Fmoc-cc--MeTrp que proporciona um tetrapeptido protegido que foi tratado com uma solução de piperidina em DMF para remoção do grupo de protecção. Este tratamento proporcionou os tetrapep-tidos (4—6) completamente desprotegidos. A purificação foi efectuada por cromatografia em líquido de elevada pressão (MeGN-HgO/O.l?^ de TFA) proporcionando o sal trifluoro-aceta-to de cada peptido. RMN (4; D20) ^ 1.73 (3Fi, s), 1.85 (2H. q), 2.04 (3H, s), 2.34 (2H, t), 2.66 (2H, qd), 3.07 (2H, qd), 3.41 (2H, s), 4.34 (1H, t), 4.54 (2H, m), 7.14 (1H, t), 7.21-7.37 (9H, m), 7.48-7.56 (2H, dd). RM (5); D2°) ^ 1·54 (3H, s), 1.78 (2H, m), 1.97 (3H, s), 2.54 (2H, m), 2.93-3.28 (6H, m), 4.13 (1H, t), 4.42 (1H, t), 4.55 (1H, m), 7.13-7.36 (8H, m), 7.51 (1H, d), 8.18 (1H, d). RMN (6); D20) S 1.73 (3H, s), 1.85 (2H, m), 1.94 e 2.03 (3K, 2b), 2.34 (1H, t), 2.74 (2H, m), 3.06 (2H, qd), 3.40 (2H, qab), 4.01 e 4.34 (1H, 2t), 4.60 (2H, m), 7.11-7.48 (10H, m), 7.53 (2H, t). 36 -
Os compostos a seguir enumerados foram preparados pelos processos anteriormente descritos no Método A.
Glicil-a-metil-D-triptofil-L-metionil- -Ir-a-aspartil-lf-fenil-alaninamida (Gly-DMeTrp-Met-Asp-Phe-NH2),
Glicil-a-metil-DL-triptofil-L-metionil--L-cf- aspart i 1- L- f eni 1 - al an inamida (Gly-DL-MeTrp-Met-Asp-Hie-NH2),
Glicil-a-metil-L-triptofil-L-metionil- -L-C£-aspartil-L-fenil-alaninamida. (Gly-L-MeTrp-Met-Asp-Phe-NHg)/
Trp-Met-Asp-DL-MePhe-NH2.CP3CO H, e Trp-Met-DL-MeAsp-Phe-NH 2.CF3CO 2H. também podem ser preparados em conformidade com o exemplo seguinte. S&emplo 3 L-tripto fil-ce-metil-DL-metionil-L-a--aspartil-L-fenil-alaninamida Ιι-Trp-DL-g-MeMet-Asp-Phe-NH 2 (7)
Utilizando um sistetizador de peptidos automatizado modelo Nova Biochem 4170 e a aplicação informá-(r) tica Bioplus construiu-se o peptido a partir do terminal C utilizando ésteres DHBt ou pentafluorofenílicos dos amino-ácidos de Fmoc e recorrendo à catalise com HOBt. Cada resíduo esteve presente numa quantidade cinco vezes em excesso para garantir uma rápida e completa acilação. Numa escala correspondente a 0.095 mrnol isolou-se o peptido (4) seguindo--se a clivagem com TFA (94¾) de TFA, 5% de anisol, 1% de etanaditiol) a partir de resina (2 horas à temperatura ambiente) com um rendimento de 45% (isolou-se 32 mg). A croma- - 37 - tografia em líquido de elevada pressão (CLEP) (C18, 20-80% de MeCN-E^O + 0.1% de TFA) demonstrou que a pureza era superior a 90% (detecção a 254 nm) e que o produto obtido era uma mistura de diastereómeros na proporção de 1*1. RMN (d20) & 1.03 (3H, s), 1.69 (2¾ m), 1.91 (2H, m), 1.95 (3H, s), 2.59 (2¾ m), 3.09 (2H. m), 3.38 (CH, m), 4.31 (1H, m), 4.51 (2¾ m), 7.17-7.37 (10¾ m), 7.52 (1¾ d)# 7.68 (1¾ d), 10.94 (1¾ s), Sempre que se efectuou a preparação por métodos em que havia uma fase em solução- o produto obtido foi idêntico.
Por um processo semelhante preparou-se também ]>a-HeTrp-Met-Asp-Phe-NB2, (4)·· produto idêntico em todas as suas características ao produto anteriormente preparado.
Exemplo 4
Trp-Met-Asp-DL-MeEh e-NH 2.CF3C0 2H (8)
Fmoc-Asp(OBu")-DL-MePhe-NH ^
Preparou-se uma mistura de MePhe-NH2 (90 mg, 0.5 mmol) e de Fmoc-Asp- (OBu1')0P£p (290 mg, 0.5 mmol) e dissolveu-se na quantidade mínima necessária de acetato de etilo e depois destilou-se imediatamente o solvente. 0 óleo viscoso resultante foi aquecido em bariho-maria em ebulição durante 2 horas e depois deixou-se arrefecer. Triturou-se a resina resultante com éter dietílico proporcionando um produto precipitado. Obteve-se uma quantidade total de 159 mg com um rendimento de 56%. Teria sido possível obter outra colheita de produto por cromatografia dos produtos de lavagem com éter.
Fmoc-Met-Asp (0Bufc) -DIrMePhe-NH2 0 dipectido anterior (900 mg, 1.58 mmol) foi N-desprotegido utilizando uma solução de 20% de 38 -
piperidina em DMF durante 20 minutos e depois removeu-se completamente o solvente. Triturou-se o resíduo repetidas vezes com n-hexano para proporcionar o dipeptido livre de grupo amino (293 mg, 0.84 mpl). A este produto adicionou-se Fmoc-Met-Qpfp (450 mg, 0.84 mmol) e depois adicionou-se ainda a quantidade mínima necessária de acetato de etilo para proporcionar uma solução límpida. Removeu-se imediatamente o solvente e aqueceu-se o óleo viscoso resultante em banho-maria à temperatura de 65°G durante 45 minutos. A trituração da resina resultante com éter dietílico proporcionou o tri-peptido protegido (418 mg, 78%).
Fmoc-Trp-Met-Asp(OBu^)-DL-MePhe-NH^ 0 tripeptido anterior (300mg, 0.43 mmol) foi N-desprotegido utilizando uma solução de 20% de piperidina em DMF durante 20 minutos. A remoção do solvente seguida por trituração do resíduo com n-hexano proporcionou o tripeptido livre (198 mg, 0.41 mmol). A este produto adicionou-se Fmoc-Trp-OPfp (243 mg, 0.41 mmol) e uma quantidade suficiente de acetato de etilo para proporcionar uma solução límpida. Removeu-se imediatamente o solvente e depois aqueceu-se a mistura resultante à temperatura de 65°C durante 15 minutos. A trituração do resíduo com éter dietílico proporcionou um produto sólido e de cor branca num total de 283 mg com um rendimento de 78%.
Trp-Met-Asp-DL-MePhe-NH2.CF3C02H (8) O tetrapeptido anterior foi N-desprotegido utilizando-se uma solução de 20% de piperidina em DMF durante 20 minutos e depois removeu-se o solvente e triturou-se o resíduo com n-hexano para proporcionar o tetrapeptido livre do grupo amino. Tratou-se este produto com tianisol e com etanoditiol (100-250 uL/mmol e 50-100 /iL/mmol) e a seguir tratou-se ainda com uma solução aquosa de TFA a 95 % ( (3-5 mL/mmol) durante 5 minutos. Procedeu-se à remoção de todas as substâncias voláteis e depois triturou-se o resíduo com éter dietílico para proporcionar um produto no estado 39 - sóliâo e de cor branca que foi purificado por cromatografia em líquido de elevada pressão (CLEP) preparatória.
Trp-Met-DL-MeAsp-Phe-NEU. CF^CO (9)
Fmoc-DL-MeAsp (OBu1) -Phe-NH2
Dissolveu-se uma quantidade de Pmoc-DL--MeAsp(OBu")OPfp (1.46 g, 2.47 mmol) e de H-Phe-NH2 (0.41 g, 2.5 mmol) na quantidade mínima necessária de acetato de etilo para proporcionar uma solução límpida e depois removeu-se imediatamente o solvente. A seguir aqueceu-se a mistura â temperatura de 100°C durante 1 hora e deixou-se arrefecer. A trituração do resíduo com éter dietílico proporcionou o dípepti. do protegido num total de 993 mg com um rendimento de 71%.
Fmoc-Met-DL-MeAsp(0Bur)-Phe-NH 0 dipeptido anterior (571 mg# 1.0 mmol) foi N-desprotegido conforme anteriormente descrito. Após a trituração com n-hexano misturou-se o resíduo com Fmoc-Met-OPfp (350 mg, 0.65 mmol) e com a quantidade suficiente de acetato de etilo que permitisse a dissolução. Após imediata remoção do solvente aqueceu-se o resíduo â temperatura de 65°C durante 4 horas. A trituração do resíduo com éter dietílico proporcionou o tripeptido protegido num total de 210 mg e com um rendimento de 46%. Teria sido possível isolar outra colheita a partir dos produtos de lavagem com éter e recorrendo â técnica de cromatografia.
Fmoc-Trp-Met-PL-MeAsp (OBuO -Eh-NHg
0 tripeptido anterior (400 mg, 0.57 mmol) foi N-desprotegido conforme anteriormente descrito. Após trituração do resíduo com n-hexano foi possível isolar uma quantidade de 258 mg de produto. Misturou-se uma quantidade de 200 mg (0.42 mmol) deste produto e Fmoc-Trp-OPfp (246 mg, 0.42 mmol) conjuntamente com uma quantidade suficiente de acetato de etilo que permitisse a dissolução. Removeu-se imediatamente o solvente e depois aqueceu-se o resíduo à temperatura de 65°C 40

Claims (2)

  1. durante 20 minutos· A trituraçSo da mistura resultante com éter dietílico proporcionou o tetrapeptido protegido num total de 283 mg e com um rendimento de 77%. Trp-Met-DL-MeAsp-Phe-NH2 . CF3C02H (9) Tratou-se o tetrapeptido anterior por um processo idêntico para proporcionar o composto (8) após trituração final com éter. REIVINDICAÇÕES
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável em que o símbolo R^· representar o átomo de hidrogénio ou um grupo BOC, 1-Adoc, 12 13 14
  2. 2-AdOC, Z# FMOC, R R R Si(CH0) OCO- em que os simbolos 12 13 14 ^ m R j R e R representam individual e independentemente um grupo alquilo inferior possuindo entre 1 e 3 átomos de 41 -
    carbono e o simbolo m representa um inteiro compreendido 15 15 entre O e 3# um grupo R C0- ou R NHCO- em que o simbolo 15 R representar um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada possuindo entre 1 e 6 átomos de carbono ou um grupo 1 ou 2-adamantiloy o simbolo A representa uma ligação ou representa um grupo Gly, ρ-ALA- GABA, DAVA, Aib, NH(CH2)p em que O simbolo p representa um inteiro compreendido entre X e 6, ou representa um grupo NHCO, Met-Gly, Tyr-Met-Gly ou Asp-Tyr-Met-Gly, Asp-Tyr (OSO^H) -Met-Gly? *^2 4 6 8 os símbolos R * R , R e R representam individual ou independentemente um átomo de hidrogánio com a condição de não representarem todos simultaneamente o átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, -CH=CH2# C»CH, -CH2-CH=CH2, -CH2<>CH# -CH2Ar, -CH2OR, -CH2OAr, -(CH2)g GOgR, -(CH2)qN(R)2 em que o simbolo q representa um inteiro compreendido entre O e 3, o íimbolo R representa o átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, o simbolo Ar representa um radical carboaromático ou heteroaromático ou hidroaromático mono- ou poli-cíclico insubstituido ou substituido? 3 o simbolo R representa um grupo 2- ou 3-indolilo, 1-ou 2-naftilo, 2- ou 3-benzotienilo, 2- ou 3-benzofuranilo, 2- ou 3-indazoilo ou fenilo com a possibilidade de haver entre 0 e 3 substituintes seleccionados independentemente entre átomos de hidrogénio, fluor, cloro, bromo, iodo, ou entre grupos metilo, metoxi, trifluorometilo, nitro, hidro-xi, nh2 e ocf3? o simbolo R representa um grupo alquilo inferior de cadeia linear ou ramificada possuindo entre 1 e 6 átomos de carbono ou representa um grupo (CH2) rs (CH,,) sCfI3 em gue ° simbolo r representa Kum inteiro compreendido entre 1 e 6 e o simbolo s representa um inteiro compreendido entre 0 e 6? o simbolo n representa um inteiro compreendido entre 1 e 3? 7 o radical R representa um grupo -OH, -COOH, tetrazol, triasol, -COOR16, C0NR10R1:L, 42 -
    1 fi em que o simbolo R representa um grupo alquilo inferior e os símbolos R10 e R11 possuem as significações adiante descritas; g o simbolo R representa um grupo seleccionado entre os grupos 3 anteriormente definidos para R ? 0 II 17 10 11 18 o simbolo R representa um grupo -C-NR R ou CHgOR ou representa o átomo de hidrogénio, em que os símbolos R ' e RX,L representam individual e independentemente o átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior; alcoxi-carbonilo, carboxi-alquilo ou os radicais representados pelos simbolos R^ e R^ conjuntamente eom o átomo de azoto ao qual estio ligados formam um anel possuindo entre 3 e 10 átomos, possuindo esse anel átomos seleccionados entre os átomos de carbono, azoto, oxigénio e enxofre; 18 o simbolo R tem as mesmas significações definidas para o simbolo R1 ou representa um grupo CHLC0„H ou CH9C0NR^0R'L1 lo 11 í í & ou CONETAR ; 2 3 4 5 os radicais representados pelos simbolos R e R , R e R , _6 7 _8 _9 „9 _10 „ „ R eR,R eR ouR eR podem formar conjuntamente um anel possuindo entre 3 e 8 átomos sendo esses átomos seleccionados entre átomos de carbono, azoto, oxigénio e enxofre. - 2® - Composto de acordo com a reivindicação 1 caracterizado pelo facto de o simbolo R3, representar um grupo Pmoc, Z, Boc, ou Me^Si (CH2> 20002H; o simbolo A representar uma ligação ou um grupo Gly, -ala, Asp-Tyr-Met-Gly; 2 4 6 8 os simbolos R , R , R e R representarem individual e inde-pendentemente um grupo alquilo possuindo entre 1 e 3 átomos de carbono, um grupo carboxi-alquilo possuindo 1 ou 2 átomos de carbono ou um grupo CH20H? - 43 -
    3 o simbolo R representar um grupo 3-indazolilo# 3-benzotieni-lo, 2-benzofuranilo# 3-benaofuranilo ou 2-bromo-3-benzofurani-lo? 5 o simbolo R representar um grupo isobutilo, sec-butil-etilo, n-propilotou i-propilo; 7 o simbolo R representar um grupo CONH2, CONMe, ou OH? Q Λ Λ o simbolo R ser selectionado entre os grupos definidos para 3 o simbolo R ? 17 o simbolo R representar um grupo O II -C-NR^°R·^, em que os simbolos R10 e R11 representam individual e independentemente um grupo alquilo possuindo entre 1 e 3 átomos de carbono ou conjuntamente os grupos representados pelos simbolos e formam um anel que possui entre 4 e 8 átomos incluindo o átomo de azoto ao qual estão ligados. _ jã — Composto de acordo com a reivindiéação 1 caracterizado pelo facto de o simbolo R1 representar o átomo de hidrogénio ou o grupo BOC? o simbolo A representar uma ligação ou o grupo p-ALA? 2 4 6 8 os simbolos R , R , R e R representarem individual e inde-pendentemente um grupo CH^ ou GH^CC^H? o simbolo R^ representar um grupo 3-indolilo, 1-naftilo ou 2-naftilo? 5 o simbolo R representar um grupo n-butilo# n-pentilo# (ch2)2sch3 ou (ch2) 2sch2ch ? o simbolo R^ representar um grupo 0H# tetrazol, triazol ou C09H; * 9 o simbolo R representar um grupo fenilo, 1-naftilo ou 2-naftilo? 44 ο II ο símbolo R^ representar ura grupo -C-NR^°R^ era que os sim-bolos R3,0 e R11 representara individual e independenteraente o átomo de hidrogénio ou um grupo CH^ ou conjuntamente esses radicais R10 e R11 formam um anel que possui 5 ou 6 átomos incluindo o átomo de azoto ao qual estão ligados. - 4s - Composto designado por a-metil-DL-trip· tofil-L-metionil-L-a-aspartil-L-fenil-alaninaraida. - 5* - Composto designado por a-metil~D~tripto-fil-If-metionil-L-a-aspartil-L-fenil-alaninamida. - 6S - Composto designado por a-metil-L--triptofil-b-raetionil-L-a-aspartil-L-fenil-alaninamida. - 7s _ Composto designado por £ (1,1-di-metil-ctoxi)-carbonil—7-cc-metil _J7-L-triptofil_7-Irmetionil--L-cc-aspartil-L-fenil-alaninamida. _ 8â - Composto designado por N-/“ (1#1-dime-til-etoxi) -carbonil 7-tx-raetil 7-DL-triptofilJ^-L-metionil-L·· - 45 -
    _ 9» - Composto designado por L-triptofil-2--metil-Bl^etionil-l^a-aspartll-L-fenil-alaninamiâa. - 10» - Composto designado por (1,1-dimetil--etoxi)-carboni^Z-cí-metil^Z-D-tripto fil^Z-L—rnetionil-L-c;--aspartil-L-fenil-alaninamida. - ll» * Composto designado por glicil-ct-me-til-D-triptofil-ij-metionil-L-a-aspartil-Xf fenil-alaninamida. - 12» - Composto designado por glicil-a-metil--DL-triptofil-L-metionil-L-a-aspartil-L-fenil-alaninamida. - 13» - Composto designado por glicil-cx-metil-I^-triptofil-L-metionil-L-a-aspartil-L-fenil-alaninamida. _ 46 - 14^ _
    Coaposição farmacêutica caracterizada pelo facto de se incorporar uma quantidade de um composto de acordo com a reivindicação 1 eficaz para suprimir o apetite de um mamífero# conjuntamente com um veículo farmaceutica-mente aceitável. - 15â - Conposto seleccionado entres Fmoc-MePhe-NK2, Fmoc-Asp (OBu**) - MePhe-NH ^, Fmoc-Met-Asp (OBu^) -MePhe-NHg, Fmoc-Trp-Met-Asp (OBu^) -MePhe-KH^/ Asp (OBu**) -MePhe-NH^/ Asp-MeFhe-NH2, Fmo c-Met-Asp-MeFhe-NH 2, Met-Asp (OBut) -MePhe-KH^# Mst-Asp-MePhe-NH2# t Trp-Met-Asp (OBu ) -MePhe-NH^, Fmoc-Trp-Met-Asp-MePhe-NKg/ 4* Fmoc-MeAsp (OBu ) -Phe-MHg F mo c-MeAsp-Phe-KH 2# Fmoc-Ket-MeAsp (OBu^) -Phe-NH2, Fmoc-Trp-Met-MeAsp (OBu**) -Phe-NK^# 4* MeAsp(OBu )-Phe-KH2# MeAsp- Phe-NH 2# Met-MeAsp(OBu**)-Fhe-NH^ 47 -
    Met-MeAsp-Fhe-NH Fmoc-Met-MeAsp-Phe-NH 2 Fmoc-Trp-Met-Me-Asp-Phe-NH2 MeMet-Asp(OBut)-Phe-NH2 Fmoc-MeMet-Asp(OBu^)-Phe-NH u Fmoc-Metóet-Asp-Phe-NH2 MeMet-Asp-Ehe-NH Fmoc-Trp-MeMet-Asp (OBi^) -Phe-NK2 Fmo c-Trp-MeMet-Asp-Phe-NH2 Fmoc-MeTrp-Met-Asp(OBu^)-Phe-NH2 Fraoc-MeTrp-Met-Asp-Phe-NH2 Frnoc-Gly-Trp-Met-Asp-MePhe-NH2 Fmoc-Gly-Trp-Met-Asp(OBu^)MePhe-KHg Gly-Trp-Met-Asp- (OBu^) MePhe-NH^, Fmoc-Gly-Trp-Met-MeAsp-Phe-NH 2, Fmoc-Gly-Trp-Met-MeAsp(OBu^)-Phe-NH £» Gly-Trp-Met-MeAsp (OBu*) -Hie-NH , Fmoc-Gly-Trp-MeMet-Asp-Fhe-NH 2, t Fmoc-Gly-Trp-MeMet-Asp (OBu ) -Phe-NH Gly-Trp-MeMet-Asp (QBu^) -Phe-NH 2, Fmoc-Gly-MeTrp-Met-Asp-Phe-NH 2, Fmoc-Gly-MeTrp-Met-Asp(OBi^)-Phe-NK_, M Gly-MeTrp-Met-Asp(OBu^)-Phe-NH 2# Fmoc-MeMet-OH, Frooc-MeMet-OPFP, MeAs (OBu^OH, Fmoc-MeAsp (OBti**) OH, e 48 - Fmoc-MeAsp (OBu^OPFP. A requerente reivindica a prioridade do pedido norte-americano apresentado em 24 de Abril de 1991, sob o número de série 690,754. Lisboa, 24 de Abril de 1992
    49 -
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