PT1565210E - Neurotoxina de clostrídios para utilização no tratamento de congestão nasal - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO

"NEUROTOXINA DE CLOSTRÍDIOS PARA UTILIZAÇÃO NO TRATAMENTO DE CONGESTÃO NASAL"

CAMPO DA INVENÇÃO

Revela-se um método para bloquear ou reduzir a reacção fisiológica num mamífero à interacção de anticorpos IgE presentes no dito mamífero após o contacto com o antigénio correspondente, pela administração ao dito mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma neurotoxina (CnT) derivada de Clostridium sp.

Mais precisamente, a presente invenção dirige-se a uma composição farmacêutica que compreende uma neurotoxina (CnT) derivada de uma espécie de clostrídio seleccionada a partir do grupo que consiste em C. botulinum, C. butyricum e C. baratii numa quantidade terapêutica eficaz, para utilização no tratamento de congestão nasal devido a inchaço da mucosa e pólipos nasais, asma, rinite alérgica, sinusite, doença pulmonar alérgica, alergias alimentares, dermatite alérgica e espirro, tosse e comichão relacionada a reacções alérgicas num mamífero, em que a quantidade de CnT administrada por administração é entre 0,1 e 1000 unidades por administração.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Ao longo desta memória descritiva várias publicações estão referidas dentro de parênteses ou por nota de rodapé.

Introdução A reacção fisiológica num mamífero à interacção de anticorpos IgE presentes no dito mamífero após o contacto com o antigénio correspondente é geralmente denominada como alergia. Acredita-se que a resposta alérgica se desenvolveu para combater infecções com parasitas. Como infecções por parasitas são raras em países industrializados este 2 mecanismo torna-se patológico em certos indivíduos susceptíveis (atópicos) . Característico de alergias é gue o antigénio, também chamado alergénio, é normalmente inócuo, e a reacção do corpo é inapropriada.

As reacções alérgicas podem envolver todos os tecidos do corpo, mas são mais proeminentes nas fronteiras com o ambiente externo: as vias respiratórias, olhos, tracto gastrointestinal e pele. As patologias são conhecidas como rinite alérgica no nariz (febre do feno), asma alérgica nos pulmões, alergias alimentares no tracto GI e hipersensibilidade alérgica (urticária) ou dermatite na pele. Anafilaxia refere-se à reacção sistémica que ocorre quando um alergénio é introduzido directamente na circulação, tal como ocorre com injecção de fármacos e ferrões de insectos. Uma reacção de fase precoce massiva ocorre no corpo todo. Os sintomas incluem inchaço difuso das vias respiratórias e hipotensão que pode ser prejudicial à vida. A cada ano, mais de 50 milhões de americanos sofrem de doenças alérgicas, o que custa ao sistema de cuidados de saúde $18 mil milhões anualmente (American Academy of Allergy, Asthma and Immunology (AAAAI). The Allergy Report: Science Based Findings on the Diagnosis & Treatment of Allergic Disorders, 1996-2001).

De maneira alarmante, a prevalência e a gravidade de distúrbios alérgicos tem aumentado rapidamente nos Estados Unidos ao longo dos últimos vinte anos, assim existe uma necessidade de novas terapêuticas para estas condições patológicas.

Em 1998, estimou-se que 15 milhões de americanos, ou 6,4 por cento da população, tinha asma, com 5 milhões sendo crianças. As crianças representam 4,8 milhões de americanos com asma. A cada ano, 1,8 milhões de visitas a urgências são para asma, cerca de 500.000 americanos são hospitalizados e mais de 5.000 morrem por causa da doença. 3

Embora as mortes por asma não sejam frequentes, têm aumentado significativamente durante as últimas duas décadas. Desde 1975-1979, a taxa de morte foi 8,2 por 100.000 pessoas. Essa taxa saltou em 1993-1995 a 17,9 por 100.000 . Estimou-se que o custo da asma para a economia americana foi de $10,7 mil milhões em 1994, incluindo um custo directo de cuidados de saúde de $6,1 mil milhões e custos indirectos, tais como dias de trabalho perdidos, de $4,6 mil milhões.

Aproximadamente 16,7 milhões de visitas aos consultórios de prestadores de cuidados de saúde anualmente atribuem-se a rinite alérgica somente (CDC. Fast Stats A-Z, Vital and Health Statistics, Series 10, n° 13. 1999).

Uma condição relacionada, sinusite crónica, é a mais comummente relatada doença crónica, afectando 12,6 por cento de pessoas (aproximadamente 38 milhões) nos Estados Unidos em 1996. Outra condição relacionada, otite média serosa, é a condição mais comum em crianças que requerem uma visita ao consultório de um prestador de cuidados de saúde. A dermatite atópica é uma das doenças de pele mais comuns, particularmente em bebés e crianças. A prevalência estimada nos Estados Unidos é de 9 por cento1 Rudikoff D e Lebwohl M. "Atopic dermatitis." Lancet 351 (9117): 1715-21. 19 9 81

Os peritos estimam que a alergia alimentar ocorre em 8 por cento de crianças de 6 anos de idade ou mais jovens, e em 1 a 2 por cento de adultos Sampson HA. In Allergy, Principies and Practice, 5a Ed., E. Middleton et al, ed. Mosby, St. Louis, p. 1162 . 199811.

Fisiopatologia da alergia

Alergia é uma condição patológica que afecta milhões de indivíduos no mundo. Tentativas para dessensibilizar um indivíduo contra um material que causa uma resposta alérgica (a seguir no presente documento designado como um 4 "alergénio") pela injecção de dosagens medidas do alergénio até agora não têm conseguido alcançar o alivio completo dos sintomas de alergia de maneira reproduzível em todos os indivíduos alérgicos. Uma resposta alérgica é um termo da especialidade e tem um significado bem definido. Dentro do contexto da presente invenção, uma resposta alérgica ou reagénica inclui, em particular, pelo menos uma das características de 1.) produção de um nível anormalmente alto de IgE num soro do indivíduo, 2.) interacção imunológica entre um alergénio, uma IgE do indivíduo e leucócitos resultantes da libertação de histaminas, 3.) produção de urticária, erupções, pápula de urticária e intumescência e manifestação dermatológica similar de hipersensibilidade, e 4.) anafilaxia.

Uma resposta alérgica é um estado de hipersensibilidade em gue uma resposta imune exagerada é induzida pela exposição a um antigénio ou alergénio particular. As reacções de hipersensibilidade podem ser classificadas como imediata ou retardada. A hipersensibilidade do tipo I ou imediata (ou resposta anafiláctica) é uma reacção alérgica que se desenvolve muito rapidamente, isto é, dentro de segundos ou minutos de exposição do paciente ao alergénio causador, e é mediada por anticorpos IgE produzidos por linfócitos B. Em pacientes não alérgicos, não existe anticorpo IgE de relevância clínica. No entanto, numa pessoa que sofre com doenças alérgicas, o anticorpo IgE medeia a hipersensibilidade imediata por meio da sensibilização de mastócitos que são abundantes na pele, membranas do olho, nariz e boca, e no tracto respiratório e intestinos. A IgE secretada de células B activadas pode unir-se a receptores de Fc localizados na superfície de mastócitos e granulócitos basófilos, que contêm numerosos grânulos citoplasmáticos recheados com mediadores químicos, por exemplo, histamina (J. Klein, "Immunology", Blackwell Sei. 5

Pub., Londres, 1990; E. Benjamini & S. Leskowitz, "Immunology", Wiley-Liss, N.Y. 1991). Este receptor liga-se a IgE circulante com afinidade muito alta e retém a mesma na superfície do mastócito durante períodos de tempo extensos. A activação é conseguida através da ligação de um alergénio simultaneamente a mais de uma molécula polivalente de IgE ligada a receptor de Fc. Esta "ligação cruzada" de pelo menos duas moléculas de IgE ligadas à superfície traz proteínas de receptor de Fc em associação próxima uma com a outra no plano da membrana plasmática do mastócito. Quando a IgE ligada é colocada em contacto pelo alergénio apropriado, o mastócito torna-se activado. Quinases associadas a estes receptores tornam-se activadas como um resultado desta proximidade. Iniciam a cascata do segundo mensageiro, o que tem como resultado a fusão dos grânulos com a membrana da superfície da célula, o que leva à exocitose dos conteúdos do grânulo, tais como histamina, citocinas, e leucotrienos no tecido circundante, e a indução concomitante de sintomas alérgicos. É a actividade destas substâncias que é responsável pelos sintomas clínicos típicos de hipersensibilidade imediata. Estas incluem contracção do músculo liso nas vias respiratórias ou o intestino, a dilatação de pequenos vasos sanguíneos e o aumento na sua permeabilidade a água e proteínas plasmáticas, a secreção de muco pegajoso espesso, e na pele, inchaço e a estimulação das terminações nervosas que tem como resultado o comichão.

As reacções de hipersensibilidade do tipo retardada (DTH) são mediadas pelas células T e macrófagos e tornam-se evidentes somente após 1 a 2 dias e persistem durante diversos dias a algumas semanas. DTH é também denominada como hipersensibilidade mediada por células (isto é, mediada por células T) e é parte de um grande grupo de reacções chamado imunidade mediada por células. 6 A anafilaxia, ou choque anafiláctico, é um tipo sistémico agudo (corpo inteiro) de reacção alérgica, ocorre quando uma pessoa se torna sensibilizada a uma certa substância ou alergénio (isto é, o sistema imune foi desencadeado anormalmente para reconhecer esse alergénio como uma ameaça ao corpo) . Na segunda ou subsequente exposição à substância, uma reacção alérgica ocorre. Esta reacção é repentina, severa, e envolve o corpo todo. A anafilaxia é potencialmente fatal e pode ocorrer em qualquer momento.

Terapeuticamente, muitos agentes são usados para tentar prevenir a libertação de mediadores de mastócitos e basófilos e/ou para tratar os eventos a jusante por meio do bloqueio ou melhora dos efeitos dos mediadores nos tecidos alvo. Agentes terapêuticos comummente utilizados estão sob os seguintes grupos principais.

Anti-histaminicos bloqueiam e limpam a histamina libertada, isto é, o maior mediador da resposta alérgica.

Agonistas 01 02, por exemplo, Epinefrina, Salbutamol superam indirectamente os efeitos a jusante na vasculatura e músculo liso.

Cromoglicato é útil para a prevenção primária de mastócitos/desgranulação de basófilo. Este agente profiláctico precisa ser tomado continuamente. Não previne a ligação cruzada de IgE, mas de algum modo interfere com eventos subsequentes. Teofilina e outros inibidores de fosfodiesterase influenciam de novo eventos bioquímicos a jusante particularmente associados a nucleótidos cíclicos. Esteróides têm múltiplos locais de actividades contra a resposta alérgica. São administrados localmente e/ou sistematicamente/ sistemicamente.

Nenhum dos tratamentos acima é ideal para a modulação de respostas alérgicas porque cada um tem problemas específicos tais como efeitos secundários incluindo sonolência, também carecem de especificidade no sistema 7 imune o que leva à imunosupressão global. Também muitos destes agentes terapêuticos necessitam ser administrados continuamente. Portanto, novos tratamentos melhorados são constantemente buscados para controlar a resposta alérgica profilacticamente e/ou terapeuticamente sem as limitações mencionadas acima.

Indivíduos que desejam se tornar dessensibilizados contra um alergénio com frequência precisam submeter-se ele mesmo/ela mesma a injecções de doses medidas do alergénio, administradas em primeiro lugar em intervalos semanais ou bissemanais, então diminuem gradualmente a intervalos bimensais ou mensais ao longo do ano. Tais injecções geralmente começam com uma pequena dose do alergénio e então se aumenta gradualmente a dosagem até uma dose de manutenção tolerada maximamente ser alcançada. 0 indivíduo é então mantido numa dose de manutenção do alergénio durante longos períodos de tempo ou até o indivíduo não mais exibir uma reacção alérgica ao alergénio.

Outros regimes de tratamento foram previstos para reduzir ou eliminar uma resposta alérgica. A terapêutica de injecção de alergénio (imunoterapia alergénica também conhecida como imunoterapia subcutânea (SCIT) é conhecida para reduzir a gravidade da rinite alérgica. Teoriza-se que este tratamento envolva a produção de uma forma diferente de anticorpo, um anticorpo protector que é denominado um "anticorpo de bloqueio" (Cooke, RA et al., Serologic Evidence of Immunity with Coexisting Sensitization in a Type of Human Allergy, Exp. Med. 1935; 62:733). Agentes químicos foram desenvolvidos os quais inibem as interacções entre a IgE e o seu receptor (Cheng et al., Patente US N° 5.965.605 e Ra et al., Patente US N° 6.090.034). Antagonistas de IgE também foram usados para tratar a doença alérgica (Presta et al., Patente US N° 5.965.709) e compostos que exibem actividade imunosupressora e inibe a libertação de histamina (Bycroft et al., Patente US N° 5.969.158). St. Remy et al., Patente US N° 4.740.371, revelam um complexo imune de um alergénio para tratar alergias que envolvem uma combinação do alergénio especifico e do anticorpo correspondente a esse alergénio. Diz-se que a injecção do complexo num paciente reduz uma reacção alérgica do paciente a esse alergénio especifico. Outros têm sugerido que certas proteínas humanas podem neutralizar a IgE por meio do bloqueio da interacção da mesma com os mastócitos, mas isto não foi estabelecido claramente como uma terapêutica clinicamente eficaz (Stanworth, et al., Allergy Treatment with a Peptide Vaccine, Lancet 1990; 336:1279-81). Patterson et al., Patente US N° 5.314.690 revelaram um método e preparações para reduzir anticorpos IgE a alergénios em sujeitos alérgicos em que a substância P (um neuropéptido) e um alergénio ou fragmentos de alergénios ou haptenos que actuam como alergénios são administrados juntos aos sujeitos alérgicos através de uma via não oral.

Toxina da Cólera e Subunidade B como Adjuvantes Toxina da Cólera (TC) e a toxina lábil ao calor proximamente relacionada (TL) de Escherichia coli são conhecidas como imunoadjuvantes excepcionalmente potentes quando co-administrada com antigénios por várias vias de mucosas (Elson et al., J. humunol. 1984; 133:2892-2897; Hohngren et al., Vaccine 1973; 1 1:1 179-1184; Lycke et al, Eur. J. Immunol. 1992; 22:2277-228 1. Tanto TC e TL são reconhecidas como toxinas "AB" em que são compostas de dois componentes estrutural e funcional distintos: um único componente de subunidade A activo tóxico e uma subunidade B de ligação a célula não tóxica. A última é um componente homopentámero com forte afinidade de ligação para receptores de gangliósido GMI (Holingren et al., Nature 19 8 1; 292:413 -417). Conhece-se que tais receptores estão presentes na maioria das células de mamíferos, por exemplo, na pele e outras células epiteliais, em todas as células 9 apresentadoras de antigénio conhecidas incluindo células dendríticas (CD) e células de Langerhan (CL), bem como em linfócitos B e T. Recentemente, Gleim et al., Patente US N° 5.980.898 revelaram um sistema para a imunização transcutânea que induz uma resposta imune (por exemplo, efectores humoral e/ou celular) num animal ou ser humano. O sistema proporciona uma simples aplicação à pele intacta de ambos roedores e seres humanos de uma formulação compreendida de antigénio e um adjuvante que era a toxina inteira da cólera.

Comum a alergias é o envolvimento da classe de IgE de anticorpo. Os indivíduos não nasceram com alergias; ao invés disso adquiriram as mesmas pela exposição a alergénios. As etapas da reacção alérgica de IgE são sensibilização após a primeira exposição ao alergénio, e então a resposta alérgica a exposições subsequentes. A resposta alérgica consiste numa resposta imediata e retardada denominada como as respostas de fase precoce e tardia respectivamente. Em indivíduos atópicos, aqueles propensos a alergias, a exposição inicial a um antigénio tem como resultado a produção de anticorpos IgE que reconhecem especificamente esse alergénio. Este processo é chamado sensibilização. A resposta de fase precoce (RFP) é a reacção imediata que ocorre dentro de minutos da exposição a um alergénio. As IgE ligam-se à superfície de uma célula neuroimune chamada o mastócito (na circulação estas células são chamadas basófilos). Números suficientes de anticorpos IgE ligados que reagem com um alergénio fazem com que o mastócito liberte o seu conteúdo das vesículas secretoras, um processo conhecido como desgranulação. As vesículas secretoras contêm histamina e outras substâncias armazenadas tais como factor de crescimento neuronal (NGF). Além disso, o mastócito e células T começam imediatamente a fabricar leucotrienos, citocinas, enzimas e substâncias que 10 activam plaquetas sanguíneas e atraem células secundárias tais como eosinófilos. Os sintomas variam dependendo do local, mas reacções comuns são contracção do músculo liso, secreção de muco, permeabilidade vascular, e estimulação do nervo sensorial. A resposta de fase tardia (RFT) desenvolve-se ao longo de horas a dias de exposição como eosinófilos e outras células são atraídas à área. Eosinófilos produzem proteína básica principal, proteína catiónica do eosinófilo, leucotrienos e factor de crescimento neuronal. As citocinas de libertação de linfócitos TH2 que promovem ainda a produção de IgE e quimioatração de eosinófilos, e números aumentados de mastócitos.

Envolvimento do nervo em alergia A estimulação do nervo sensorial causa reflexos que são desenhados para ajudar na defesa do tecido. Estes reflexos são com frequência um problema maior que o resposta alérgica local. Os reflexos podem variar desde as grandes acções motoras grossas a arcos aferente e eferente regional ou mesmo reflexos axónio-axonal local que envolvem um único neurónio.

Alguns reflexos recrutam acções motoras maiores que são bem reconhecidas. No nariz, o espirro é um reflexo que tenta expelir material indesejado e a tosse é a resposta equivalente nos pulmões.

Arcos reflexos regionais envolvem a detecção do estímulo pelo neurónio sensorial, a transferência da mensagem aos gânglios e o sistema nervoso central e uma resposta eferente via neurónios autónomos. A excitação do reflexo pelo sistema nervoso autónomo directamente faz com que o mastócito desgranule, deste modo espalhando a reacção. Além disso, estes reflexos controlam uma variedade de outras funções. No nariz, estes reflexos causam produção de muco aumentada, movimento ciliar aumentado, congestão nasal e espirro. Nos pulmões, os reflexos causam 11 broncoespasmo, congestão da mucosa aumentada, produção de secreções das vias respiratórias e tosse. No tracto GI os reflexos causam dismotilidade, congestão da mucosa e secreções. Na pele, os reflexos causam inchaço e comichão.

Finalmente, existem reflexos axónio-axonais locais em fibras nervosas nociceptivas sensoriais. A estimulação alérgica de um único neurónio causa libertação de mediadores de outros axónios do mesmo neurónio. (Bames P et al. 1991 Neuropeptides in the respiratory tract. Am Rev

Resp Dis 144: 1187-1198, 1391-1399)

Na estimulação alérgica crónica os mastócitos e eosinófilos libertam factor de crescimento neuronal que causa o crescimento dos nervos na região. Deste modo tomando em consideração respostas neurais aumentadas e hiper-reactividade. Esta hiper-reactividade não é limitada a reacções alérgicas, mas se estende a condições não alérgicas tais como infecções no tracto respiratório incluindo infecções virai e bacteriana. Especificamente rinite virai, sinusite virai e bacteriana, otite média supurativa, bronquite e pneumonia. Portanto, os indivíduos tornam-se mais susceptíveis a estas condições e têm infecções mais frequentes e severas.

Além disso, as reacções alérgicas repetidas causam mudanças na resposta qualitativa dos reflexos neurais tal que são inapropriadamente activados. Isto tem o efeito de maneira negativa de condições não alérgicas, tais como broncoespasmo, produção de muco e tosse em condições pulmonares não alérgicas tais como bronquite e enfisema. Reacções alérgicas diferem de reacções inflamatórias

As reacções alérgicas diferem de inflamação. As alergias representam a resposta inapropriada do corpo ao que é em essência um antigénio inofensivo. Acredita-se que a reacções alérgicas por IgE se desenvolveram para combater infecções por parasitas que são agora raras em sociedades industrializadas. Em contraste, a inflamação é a resposta 12 do corpo à infecção ou dano de tecido real. A inflamação distingue-se clinicamente pelos sintomas clássicos de ardor, rubor e aflição: calor, vermelhidão e dor. A inflamação é um processo que desencadeia uma cascata de mediadores com efeitos amplos, tanto localmente como sistemicamente. Reacções locais incluem dor, vasodilatação e migração de macrófagos e neutrófilos. Reacções sistémicas incluem febre. Certas condições, tais como rinite ou asma, podem ser desencadeadas por alergias, infecções, produtos químicos irritantes ou podem ser neurogénicas inteiramente, o resultado da actividade nervosa sem estimulação inflamatória ou alérgica anterior.

Condições Alérgicas Especificas Rinite

Rinite alérgica 0 revestimento interno do nariz é uma mucosa que contém glândulas serosas e mucosas e grandes números de mastócitos. Esta mucosa estende-se as aberturas que levam a os seios nasais bem como a trompa de Eustáquio onde é contínua com a mucosa dos seios nasais e ouvido médio, respectivamente. A EPR da mucosa nasal causa a desgranulação de mastócitos. A libertação de histamina, heparina e neuropéptidos provoca a vasodilatação e inchaço agudo da mucosa e tem algum efeito estimulador menor directo sobre as glândulas que secretam muco. A excitação do reflexo causa o espirro reflexo, congestão e estimulação neural das glândulas seromucinosas e ainda congestão. RFT atrai eosinófilos e prolonga a reacção.

As reacções alérgicas podem também ser crónicas, uma condição conhecida como rinite perene. Nestes casos alergénios transmitidos pelo ar estão constantemente no ambiente. Reacções alérgicas crónicas de nível baixo causam um espessamento da mucosa nasal devido a edema e hipertrofia de elementos glandulares. Como um resultado, os sintomas primários de rinite perene são congestão nasal, e 13 corrimento pós-nasal. Após cada reacção alérgica a mucosa incha; reacções alérgicas repetidas aumentam a mucosa permanentemente e podem formar pólipos. 0 espessamento da mucosa pode causar a obstrução das aberturas pequenas que permitem a drenagem do seio nasal. A obstrução destas aberturas permite que as secreções nasais sejam colhidas e se tornem infectadas, deste modo causando sinusite. 0 tratamento tópico da rinite alérgica inclui pulverizações de esteróides e cromolina sódica (Nasocrom®) um produto químico que bloqueia a desgranulação de mastócitos, e/ou descongestionantes nasais (Neo-sinefrina). 0 tratamento sistémico inclui anti-histamínicos orais e anti-histaminicos não sedantes (Allegra®, Zyrtec®, Claritin®). A terapêutica a largo prazo requer dessensibilização imune ao alergénio por injecções intradérmicas progressivas do alergénio ao longo de meses a anos. rinite pode levar A rinite alérgica pode levar a doença pulmonar, incluindo, mas não é limitada a asma e enfisema, asma adequadamente causada pela hiper-reactividade e/ou os sintomas de broncoconstrição, edema da mucosa, secreções aumentadas e tosse. Estas podem ser tratadas pela aplicação de CnT à cavidade nasal de pacientes com rinite alérgica. É bem conhecido na técnica que condições alérgicas do nariz podem causar mudanças de reflexo no pulmão que mimetizam ou exacerbam a asma. (McCusker C et al 2002, Site-specific sensitization in a murine model of allergic rhinitis: Role of the upper airway in lower airway disease, J Allergy Clin Immunol, 110:891-898)

Rinite alérgica perene A rinite perene é uma condição crónica e certos sintomas, tais como congestão nasal, são mais proeminentes que outros tais como espirro. Portanto, a terapêutica para esta condição precisa ser por um período ainda mais prolongado, se não for indefinidamente. Embora os mesmos 14 tratamentos como foram revelados para a rinite alérgica sazonal possam ser usados repetidamente, certos métodos de tratamento que são revelados aqui são mais eficientes e convenientes para a terapêutica de mais larga duração.

Os neurónios parassimpáticos não estendem-se do sistema nervoso central aos seus órgãos alvo no nariz. Ao invés disso, os neurónios pré-gangliónicos parassimpáticos têm os seus corpos celulares no tronco cerebral e têm um axónio que se estende em parte e sinapses no corpo celular de um segundo neurónio chamado o neurónio pós-gangliónico. Os axónios dos neurónios pós-gangliónicos estendem-se em nariz e seios nasais e modulam muitas das respostas biológicas vistas durante as reacções alérgicas. 0 corpo celular do neurónio pós-gangliónico parassimpático também recebe sinapses aferentes colaterais de neurónios sensoriais que são estimulados durante as reacções alérgicas. Portanto, muito do circuito neuronal envolvido na reacção alérgica converge no corpo celular do neurónio pós-gangliónico.

Todos os corpos celulares do neurónio pós-gangliónico são concentrados numa pequena estrutura chamada o gânglio esfenopalatino. Além disso, todas as ligações sinápticas aferentes nestes neurónios são colinérgicas, o neurotransmissor mais sensível a BoNT. Portanto, a aplicação de CnT ao gânglio esfenopalatino é a forma mais eficiente de bloqueio da reacção neural alérgica. 0 gânglio esfenopalatino é acessível a injecção por agulha via o canal esfenopalatino. Este canal passa através do palato duro e é acessível aproximadamente um centímetro medial ao segundo molar. As injecções de agentes anestéticos e vasoconstritores são comummente realizadas pelos médicos peritos na especialidade de cirurgia nasal. Rinite infecciosa

Embora partilhem alguns dos mesmos sintomas, a rinite alérgica difere da rinite infecciosa. As causas mais comuns 15 de rinite infecciosa é uma infecção virai, conhecida como a gripe comum. As infecções bacterianas e fúngicas do nariz ocorrem também, mas estas são comparativamente raras como eventos primários. Durante as infecções virais as células epiteliais libertam secreções que desencadeiam uma resposta inflamatória. Os sinais clássicos de ardor, rubor e aflição; calor, vermelhidão, e dor caracterizam a inflamação. As células sanguíneas brancas tais como macrófagos e neutrófilos migram dos pequenos vasos sanguíneos na área à mucosa infectada. Estas células por sua vez libertam uma variedade de mediadores químicos que aumentam a inflamação. A rinite infecciosa é caracterizada por uma purulência ou pus como corrimento pós-nasal, e congestão nasal. Em muitas infecções virais existem sintomas sistémicos tais como febre. 0 tratamento de infecções virais é sintomático com descongestionantes tópicos e sistémicos, e fármacos antipiréticos e anti-inflamatórios.

Rinite vasomotora e outras causas de rinite

Rinite vasomotora é estritamente uma hiperestimulação neural das glândulas secretoras serosas do nariz. Esta condição é caracterizada por uma descarga nasal aquosa com um conteúdo muito pequeno de muco. A rinite vasomotora resulta directamente da estimulação neural de mudanças de temperatura ou ao comer, e associada a outros sintomas tais como congestão, e espirro não é proeminente. 0 documento US 5.766.605 revela um método de bloqueio do sintoma de rinorreia em rinite vasomotora usando neurotoxinas de clostrídios.

Otite média serosa A reacção directa da mucosa do ouvido médio a alergénios, ou efeitos indirectos pelo bloqueio da trompa de Eustáquio, leva a otite média serosa. Nesta condição, o ouvido médio enche-se com fluido e a audição é prejudicada. Como esta condição afecta com mais frequência crianças 16 jovens existe risco de deficiências de aprendizagem devido à acuidade auditiva diminuída.

Sinusite, uma complicação de rinite A sinusite é uma infecção dos seios nasais. Os seios nasais são cavidades cheias de ar que rodeiam e se abrem na cavidade nasal via pequenas aberturas chamados óstios. Os seios nasais maxilares compõem a massa das bochechas e os óstios estão entre o turbinado inferior e médio. Os seios nasais frontais estão acima da sobrancelha debaixo da pele da testa, abrem-se na cavidade nasal via um dueto que entra debaixo do turbinado médio. Os seios nasais esfenóides estão na nasofaringe e têm óstios na sua superfície anterior. Os seios nasais etmóides estão localizados entre os olhos e são compostos de numerosos alvéolos pequenos. As células anterior e posterior drenam-se independentemente. A região etmóide anterior é especialmente importante devido à confluência de óstios de drenagem. A área é chamada o infundíbulo, e uma pequena quantidade de obstrução pode causar o espalhamento de infecções do seio nasal.

As infecções do seio nasal são agudas ou crónicas. Na sinusite aguda uma infecção bacteriana segue uma infecção virai do tracto respiratório superior. No entanto, a sinusite pode também ocorrer a partir da obstrução dos óstios de drenagem dos seios nasais pela inflamação ou lesão de massa. Os descongestionantes nasais tópicos e antibióticos sistémicos são usados para tratar a sinusite aguda. As infecções severas ou complicadas podem requerer a drenagem cirúrgica do seio nasal envolvido. A sinusite crónica é uma infecção de baixo grau em processo ou recorrente dos seios nasais. Nestes casos, a mucosa dos seios nasais torna-se espessa e alargada devido a edema e elementos glandulares secretores aumentados. Nestes casos, um pequeno abcesso pode persistir e estímulos inflamatórios relativamente moderados podem causar a obstrução dos óstios de seio nasal estreitados. 0 tratamento de sinusite crónica 17 inclui pulverizações tópicas de esteróides, anti-histamínicos sistémicos e descongestionantes, e/ou remoção cirúrgica da mucosa doente com alargamento dos óstios.

Asma

Asma é um termo geral dado a um grupo similar de sintomas: broncoespasmo, inchaço da mucosa e secreções aumentadas. A estimulação alérgica, infecções, produtos químicos irritantes, ar frio ou exercício podem desencadear a asma. A asma alérgica é um subconjunto específico de asma que é iniciada por alergénios e envolve a reacção mediada IgE. Reacções locais e nos órgãos incluem constrição do músculo liso bronquial, inchaço da mucosa e secreções aumentadas.

Outras Condições alérgicas

Outras condições alérgicas incluem alergias alimentares, e dermatite alérgica.

Neurotoxinas de clostridios (CnT)

Clostridium (C.) botulinum e as espécies muito aparentadas C. butyricum e beratti produzem uma neurotoxina extremamente poderosa que causa a condição paralítica conhecida como botulismo. A proteína da neurotoxina botúlica (BoNT) consiste num cadeia leve e pesada que juntos pesam aproximadamente 150 kD. Em botulismo o alvo primário é a sinapse do neurónio motor com a fibra do músculo. Aqui BoNT é absorvida pela membrana do neurónio motor e é internalizada. O efeito de BoNT é inibir a libertação de neurotransmissores e neuropéptidos por neurónios. Em utilização clínica cada serotipo parece diferir em sua potência em bloquear diferentes classes de neurónios.

BoNT trabalha por um mecanismo de dois estágios, captação e acção molecular. Terminações de nervo periférico absorvem BoNT. Após translocação através da membrana celular BoNT interfere com o mecanismo molecular de 18 neurosecreção. Especificamente, BoNT cliva as proteínas envolvidas em ancoragem de vesícula sináptica e libertação chamado o complexo SNARE. 0 resultado é bloquear sinais neurais. C. tetani produz neurotoxina tetânica (TeNT). TeNT é similar às BoNTs em que interfere com a libertação de vesícula pela clivagem de VAMP, uma da família SNARE de proteínas. No entanto a actividade biológica in vivo de TeNT é usualmente bastante diferente de BoNT. 0 distúrbio sistémico tétano resulta de TnT produzidos num local ferido e disseminado no corpo todo via a corrente sanguínea. A TeNT é absorvida por neurónios motores periféricos e transportado ao sistema nervoso central. A TeNT então preferencialmente bloqueia neurónios inibidores que se ligam ao neurónio motor, permitindo deste modo entrada excitatória sem oposição. No entanto, em doses maiores TeNT e quando é introduzido directamente no neurónio também bloqueia todos os neurónios da mesma maneira que BoNT. Nesta memória descritiva é assumido que quando BoNT é discutido é incluído o TeNT quando é usado em doses de bloqueio mais altas.

No presente sete serotipos imunologicamente distintos da BoNT são conhecidos, denominados A, B, C, D, E, F e G. 0 serotipo do tipo C é agora conhecido por ser dividido em três toxinas diferentes com efeitos biológicos distintos. Somente Cl é uma neurotoxina, enquanto que C2 e C3 não são. C2 é distintivo para bloquear formação de actina, que pode prevenir desgranulação de mastócitos. Embora todos os serotipos de BoNT interfiram com proteínas que causam a libertação de vesículas sinápticas de células cada um interfere com diferentes proteínas, ou diferentes partes da mesma proteína:

BoNT A & E clivam SNAP-25 (proteína associada a sinapse)

BoNT C cliva SNAP-25 e sintaxina 19 ΒοΝΤ Β, D, F & G (e TeNT) clivam VAMP (proteína de membrana associada a vesícula) A maioria se não todos os tipos de célula usam o sistema de vesículas para secreção, embora as moléculas dentro destas vesículas diferem de cada tipo de célula. Se for experimentalmente introduzido em qualquer célula BoNT parece ser capaz de bloqueio de sua libertação de vesícula. No entanto, na natureza BoNT parece ser internalizado em neurónios, particularmente os neurónios eferentes. As vesículas dentro de neurónios contêm neurotransmissores clássicos (acetilcolina, epinefrina, nor-epinefrina, dopamina, serotonina, glutamato, GABA e outros) e/ou neuropéptidos (substância P, neuroquinina A, péptido relacionado a gene da calcitonina (CGRP), neuropéptido Y, interleucinas, factores de crescimento e outros) . Embora a maior afinidade de BoNT é para neurónios colinérgicos, em várias preparações BoNT tem mostrado que bloqueia a secreção de todas estas moléculas.

Os efeitos clínicos de toxina botúlica sobre diferentes classes de neurónios Nervos motores voluntários A primeira e ainda a principal utilização de BoNT é bloquear a comunicação do nervo motor com as fibras dos músculos. BT é injectada dentro do músculo alvo. A BoNT é então internalizada em neurónios motores onde diminui ou pára a libertação da acetilcolina neurotransmissora (AChE), deste modo causando paresia ou paralisia do músculo. Scott introduzido o conceito de injecções musculares localizadas de BoNT na condição específica de estrabismo (olhos cruzados, estrábicos). Mais tarde encontrou-se que a BoNT era particularmente útil para distúrbios de movimento tais como tiques, espasmos, contracturas, cãibras e tremores. Mais recentemente, encontrou-se que a injecção de BoNT em músculos facial melhora rugas e linhas na pele relacionadas ao envelhecimento. Outra aplicação recente de injecções de 20

BoNT é diminuir a dor que acompanha a tensão muscular em condições tais como dor de cabeça e sindrome da articulação temporo-mandibular.

Neurónios motores autonômicos

Neurónios efectores do sistema autonômico inervam e controlam a contracção de músculos lisos usando AChE como o neurotransmissor. Injecções de BoNT têm sido usadas para diminuir o tónus nos músculos lisos do esfincter esofágico inferior, esófagos, parede do estômago, e esfincter pilórico, esfincter de Odi, esfincter anal, e bexiga urinária.

Neurónios secretores autonômicos

Neurónios efectores do sistema autonômico controlam ou modulam a secreção de vários fluidos aquosos e mucóides no corpo todo. Injecções de BoNT têm sido usadas para diminuir transpiração, fluxo da glândula salivar, secreções gástricas incluindo produção de ácido, secreções nasais e outras secreções respiratórias, e lacrimejamento.

Neurónios sensoriais

Neurónios sensoriais libertam uma ampla variedade de neuropéptidos, citocinas, factores de crescimento e outras substâncias que afectam células do parênquima, vasos sanguíneos e células imunes. É notável que estas substâncias podem activar mastócitos directamente deste modo estendendo a reacção alérgica. Excepto para óxido nitroso estas substâncias são libertadas via a mecanismo SNARE e podem ser bloqueadas por CnT.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Como é usado no presente documento 'administração local' inclui, mas não é limitado a injecção por meio de agulha e cateter interno (incluindo injectores de jacto de pressão), administração tópica em pó liofilizado, soluções liquidas, cremes, pomadas, aerossolizada ou introduzida por meio de vectores de lipossomas (niossomas) , ou como ácido nucleico introduzido por meio de vectores virais ou outros 21 vectores. A CnT pode também ser incrustada em biopolímeros ou distribuída por meio de bombas implantadas para libertar a CnT em solução ao longo de períodos prolongados.

Por "quantidade terapeuticamente eficaz" se quer dizer para os propósitos desta invenção que a CnT é administrada numa quantidade não tóxica suficiente para causar a redução da ocorrência ou magnitude dos sintomas que são o alvo.

Por "unidade" se quer dizer o equivalente biológico da presente medida de unidade usada para toxina botúlica A comercializada como Botox. No presente BoNT é medida por ensaio biológico; uma unidade de BoNT é a quantidade que causa morte a 50 % de ratinhos quando é injectada intraperitonealmente. A BoNT-A é comercializada como Botox por Allergan Corp, Irvine Ca, e como Dysport por Ipsen Ltd, Berks United Kingdom. Embora o ensaio biológico seja feito da mesma maneira o efeito in vivo de Botox e Dysport varia. A BoNT-B é comercializada como Myobloc por Elan Pharmaceuticals, Dublin, Irlanda. TeNT não está comercialmente disponível, mas outros ensaios têm comparado a potência o efeito de bloqueio de TeNT com BoNT. Todos os serotipos de BoNT bem como TeNT estão comercialmente disponíveis de List Biological laboratories). Uma quantidade terapeuticamente eficaz de BoNT variará dependendo do órgão a ser tratado, de quanto do órgão será tratado, o método de aplicação e a preparação exacta de BoNT usada. Uma quantidade terapeuticamente eficaz variará desde uma fracção de uma unidade a centenas de unidades como é actualmente feito com injecções intramusculares. A dosagem exacta não necessitará experimentação indevida por aqueles peritos na especialidade.

Onde soluções ou suspensões de BoNT ou CnT são denominadas, a menos que seja indicado o contrário, isto significa o número designado de unidades em 1 ml de Solução salina normal. 22

Por "CnT" se quer dizer que qualquer substância biológica que tem essencialmente o mesmo efeito biológico dentro de células como os tipos selvagens de neurotoxinas de clostridios. Especificamente, bloquear ou diminuir a actividade da família de proteínas SNARE envolvida em secreção de neurohumores relacionados com alergia. Numerosas substituições para as partes principais da CnT forma reveladas e estas estão todas incluídas neste pedido de patente. Isto incluiria fragmentos, forma alteradas, e forma recombinantes de CnT. Também estão incluídos quimeras, híbridos e conjugados. Também estão incluídos a utilização de sequências de ADN e ARN que são directamente aplicadas e traduzidas nos locais alérgicos. Também estão incluídos "vectores", várias composições que distribuem uma cadeia leve de toxina botúlica ou tetânica ou seu equivalente tal como Protease A através de membranas celulares. Estes vectores incluem, mas não são limitados a vírus, lipossomas, noissomas, e domínios de transdução de proteína. "Neurohumores" alérgicos são neurotransmissores, neuropéptidos e citocinas que participam em reacções alérgicas e cuja secreção ou acção pode ser bloqueada por CnT. Incluem acetilcolina, noradrenalina, neuropéptido Y, substância P, proteína reactiva do gene da calcitonina (CGRP), histamina, factor de crescimento neuronal, e interleucinas. A invenção dirige-se a um método de bloqueio de ou reduzir a reacção fisiológica num mamífero, adequadamente, mas não limitado a H. sapiens, à interacção de anticorpos IgE presentes no dito mamífero após o contacto com o antigénio correspondente. Este bloqueio é conseguido pela administração ao dito mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma neurotoxina (CnT) derivada de Clostridium sp. Adequadamente, a CnT é derivada de uma espécie de Clostridios seleccionada a partir do grupo que 23 consiste em C. botulinum, C. butyricum, C. beratti, C. tetani. As neurotoxinas (BoNT), derivadas de C. botulinum, são derivadas de serotipos A, B, Cl, D, E, F e G, enquanto a neurotoxina (TeNT), é derivada de C. tetani. A BoNT/A é comercializada como Botox® por Allergan Inc e como Dysport® por Ipsen Ltd como um pó liofilizado que é reconstituído com solução salina normal livre de conservante antes do uso. A BoNT/B é comercializada como Myobloc® por Elan Pharmaceuticals em solução salina normal. As cadeias leves e holotoxinas para cada serotipo de BoNT e TeNT podem ser obtidas de List Biological Labs e/ou Metabologics Inc.

As composições de CnT para utilização na presente invenção são preparadas numa variedade de formas dependendo de se a composição é injectada ou implantada, topicamente aplicada a mucosa respiratória da cavidade nasal ou pulmões, mucosa gastrointestinal, ou a pele.

Para todas as composições de CnT injectáveis fluido formas farmacêuticas são preparadas utilizando o composto e um veículo estéril livre de pirogénio. 0 composto, dependendo do veículo e da concentração usados, pode ser dissolvido ou suspenso no veículo. Na preparação de soluções o composto pode ser dissolvido no veículo, a solução sendo feita isotónica se for necessário pela adição de cloreto de sódio e esterilizada por meio de filtração através de um filtro estéril usando técnicas assépticas antes de preenchimento em frascos ou ampolas estéreis adequados e vedação. Alternativamente, se a estabilidade da solução é adequada, a solução em seus recipientes selados podem ser esterilizados por meio de autoclave. De maneira vantajosa aditivos tais como agentes de tamponamento, solubilizantes, estabilizantes, conservantes ou bactericidas, suspensão ou emulsificantes e/ou anestésicos locais podem ser dissolvidos no veículo. Pós secos, que são dissolvidos ou suspensos num veiculo adequado antes de utilização, podem ser preparados preenchendo substância de fármaco pré-esterilizada e outros ingredientes num recipiente estéril usando técnica asséptica numa área estéril. Alternativamente o fármaco e outros ingredientes podem ser dissolvidos em recipientes adequados usando técnica asséptica numa área estéril. 0 produto é então liofilizado e os recipientes são vedados de maneira asséptica.

Nos sistemas respiratório e gastrointestinal, CnT liga-se a células epiteliais da mucosa e sofre transcitose activamente através da mucosa. Composições adequadas para administração ao tracto respiratório incluem aerossóis, soluções nebulizáveis ou pós micro-finos para insuflação. No último caso, o tamanho de partícula de menos de 50 mícrons, especialmente menos de 10 mícrons, é preferido.

As composições adequadas para a aplicação mucosa tópica incluem soluções salinas normais como foi descrito acima para injecções. Outras composições adequadas incluem géis e cremes. A pele apresenta uma barreira formidável à aplicação de CnT. CnT pode ser propelida mecanicamente através da barreira dérmica com injectores de pressão de ar ou água ou em associação com micro-precipitados. Outras formas adequadas de administração transdérmica incluem iontoforese. CnT pode ser encapsulada em lipossomas ou niossomas para formar composições transdérmicas adequadas. O método de administração pode levar muitas formas, incluindo tópica, intradérmica, subcutânea, transcutânea, intracavital e por inalação da CnT num portador adequado. Os exemplos de tal administração incluem, mas não são limitados a contacto com pequenas compressas absorventes que têm CnT absorvido nas mesmas, contacto com microprecipitados biodegradáveis que têm CnT incrustada nos mesmos. Também incluído está a injecção, por exemplo, 25 injecção à mucosa nasal ou injecção no espaço pterigopalatino através do palato, ou injecção em áreas afectadas da superfície da pele. De maneira mais invasiva, por miringotomia e injecção no espaço do ouvido médio, membranas timpânicas. Alternativamente, métodos menos invasivos incluem por gotas na pálpebra interior e inalação de uma névoa aquosa que contém a mesma.

As reacções fisiológicas tratadas no presente documento incluem congestão nasal devido a rinite alérgica, alérgica, sinusite, asma, alergias alimentares e dermatite alérgica. A quantidade de CnT administrada por administração é entre 0,1 e 1000 unidades, adequadamente entre 1 e 100 unidades por administração, preferentemente entre 1 e 20 unidades. A invenção é também direccionada à utilização de uma neurotoxina (CnT) derivada de Clostridium sp para a produção de um medicamento para bloquear ou reduzir a reacção fisiológica num mamífero à interacção de anticorpos IgE presentes no dito mamífero após o contacto com o antigénio correspondente. As formulações de CnT, incluindo BoNT e TeNT, que são adequadas para os propósitos designados no presente documento são bem conhecidas, mas não foram designadas anteriormente para este propósito.

Existe uma grande necessidade de um tratamento eficaz para os distúrbios alérgicos. Pensa-se já há muito tempo que a reacção alérgica envolvia somente libertação de histamina por mastócitos. Portanto, a terapêutica de primeira linha para alergia era anti-histamínicos, ou mais recentemente os anti-histamínicos não sedantes. Outras terapêuticas direccionam-se ao bloqueio dos efeitos das secreções de mastócito com agonistas adrenérgicos. Não é óbvio aos peritos na especialidade que um papel central em distúrbios alérgicos envolva o sistema nervoso autónomo e 26 que esta actividade nervosa possa ser bloqueada pela CnT para um efeito benéfico. É um objecto da invenção proporcionar um tratamento para congestão nasal devido a alergia relacionada com rinite, asma, sinusite e dermatite e suas condições relacionadas que ocorrem secundárias ao inchaço da mucosa induzido por alergia. 0 tratamento é por aplicação local de quantidades terapeuticamente eficazes de CnTs à estrutura do corpo e/ou os nervos e gânglios nervosos que fornecem estas estruturas. CnT interfere com o processo alérgico por: 1) Bloqueio directo das secreções neuroimunes pelo mastócito ou outros tipos de célula imune incluindo, mas não são limitados a eosinófilos () 2) Bloqueio da libertação de neurohumores por mastócitos induzida pela actividade nervosa autónoma. 3) Diminuição da libertação neurohumoral durante os reflexos axonais. 4) Diminuição do braço efector parassimpático de respostas alérgicas de reflexo 5) Diminuição da actividade tónica aumentada do sistema autónomo que está relacionado a reacções alérgicas anteriores. 6) Diminuição do alargamento e hipersensibilidade de nervos sensoriais induzida pelo factor de crescimento neuronal e outros neurohumores libertados durante as reacções alérgicas. 7) Reversão de certas complicações de reacções alérgicas tais como espessamento da mucosa pela diminuição da actividade nervosa autónoma. 0 efeito benéfico deste tratamento em: 1) A área nasal, é diminuir os sintomas de espirro, comichão, congestão nasal e gotejamento pós-nasal, bem como condições relacionadas incluindo pólipos nasais e 27 espessamento da mucosa, e complicações tais como sinusite e otite serosa. 2) Os pulmões, é diminuir a tosse e sibilo (broncoconstrição, edema) e a hipersensibilidade sensorial não especifica relacionada a reacções alérgicas crónicas. 3) 0 olho, é diminuir comichão, lacrimejamento e vermelhidão. 4) A pele, é diminuir comichão e inchaço. 5) 0 tracto gastrointestinal, é diminuir dismotilidade gastrointestinal.

Exemplos

Exemplo 1. Rinite alérgica sazonal la) Um homem de 30 anos de idade tem rinite alérgica sazonal. Em Maio, antes da formação de pólen, 30 unidades de BoNT foram aplicadas topicamente em cada narina. Especificamente, a cavidade nasal é pulverizada com uma solução de 1 % de lidocaina e 1/2 % de neo-sinefrina para anestesiar e descongestionar a mucosa nasal, respectivamente. Então 1 cc de solução salina normal que contém 30 unidades de BoNT é pulverizada em cada cavidade nasal. Este método de administração, embora comummente usado para a aplicação de medicação nasal, é inerentemente ineficiente à medida que uma percentagem significativa de uma medicação pulverizada sairá da cavidade nasal posterior e será exalada ou engolida. lb) Em outra forma de realização, o paciente é tratado por meio da colocação de pequenas compressas de algodão de 1x3 cm2 com 20 unidades de BoNT sobre a superfície medial dos turbinados e deixadas durante uma hora, então removidas pelo médico. Este método de administração é mais eficiente que uma pulverização, no entanto uma percentagem significativa da BoNT não difundirá das pequenas compressas à mucosa. 28 lc) Alternativamente, o paciente tem anestesia tópica aplicada somente a uma área localizada, preferentemente a extremidade anterior do turbinado inferior. Então, o paciente tem uma pequena compressa de algodão de lcm2 impregnada com 10 unidades de BoNT colocadas sobre a mucosa do turbinado anterior durante uma hora e então removidas. Dentro da cavidade nasal uma manta mucociliar transporta fluidos e partículas posteriormente, deste modo distribuindo a BoNT. Isto é um exemplo de aplicação de uma BoNT a uma região localizada da cavidade nasal e usando a fisiologia normal da cavidade nasal para a distribuição. As vias de depuração mucociliar do nariz e cavidades do seio nasal são conhecidas de modo que outras variações deste método são aparentes aos peritos na especialidade. ld) Em outra forma de realização, utiliza-se um depot biodegradável tópico para administrar BoNT ao longo de um período de tempo estendido a mucosa nasal para tratar o paciente. Vários compostos biodegradáveis são conhecidos na técnica os quais variam em consistência e taxa de dissolução.

Um exemplo é celulose oxidada (comercializada como Surgicel® por Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ) . A celulose oxidada pode ser fabricada com BoNT como um componente integral, ou a BoNT pode ser adicionada à celulose oxidada antes da sua utilização clínica. Surgicel está disponível na forma de uma fina folha flexível que é com frequência cortada para que se ajuste à área do corpo à qual será aplicada. Para a utilização intranasal o tamanho pode variar desde alguns milímetros quadrados até uma folha de 4 por 8 cm2 que poderia ser colocada em contacto com toda a mucosa exposta da cavidade nasal. BoNT pode ser adicionada ao Surgicel como um pó liofilizado ou após reconstituição em solução. Se for adicionada como um pó pode ser aplicada homogeneamente sobre um lado do Surgicel e o material pode ser dobrado. O material é então 29 humedecido com solução salina normal para ligar-se ao material juntos e imobilizar a BoNT antes da utilização clinica. Em contraste, a BoNT pode primeiro ser constituída em solução e então absorvida no material. Como um exemplo um peça de celulose oxidada de 2 x 6 cm2 é saturada com 1 cc de solução salina normal que contém um total de 10 unidades de BoNT. Usando um espéculo nasal a narina é dilatada e a cavidade nasal é visualizada e a celulose saturada colocada na mesma. A celulose dissolverá gradualmente ao longo de horas ao mesmo tempo em que liberta uma pequena dose continua de BoNT directamente sobre a mucosa nasal.

Alternativamente, aplica-se ao paciente 0,5 cc. de solução salina normal que contém 5 unidades de BoNT a celulose oxidada que é agarrada com fórceps baioneta e colocadas planas sobre a superfície medial da extremidade anterior do turbinado inferior de cada cavidade nasal. Como foi revelado acima a acção mucociliar da mucosa nasal transporta líquidos e partículas da cavidade nasal anterior a posterior. le) Em outra forma de realização injecta-se ao paciente solução de BoNT directamente na mucosa nasal. Após anestesiar e descongestionar a mucosa, 5 unidades de BoNT em 1 cc de solução salina são injectadas debaixo da mucosa ao longo do comprimento do turbinado inferior com uma agulha espinhal de 25 de calibre acoplada a uma seringa de 1 cc. lf) Alternativamente, o paciente pode ser tratado com TeNT. As composições de TeNT para administração intranasal, pode variar em dose desde 1 até 1000 unidades em 0,lcc a 10 cc de solução. Uma composição preferível é 10 unidades de TeNT em 1 cc de solução salina normal.

Como um exemplo o mesmo paciente é tratado por meio da pulverização em cada narina com 1 cc de solução salina normal que contém 10 unidades de TeNT. 30

Alternativamente, se somente a descongestão for desejada 10 unidades de TeNT podem ser aplicadas topicamente.

Em outra forma de realização, 1 unidade de ADN recombinante que codifica TeNT é injectada por pressão através da mucosa nasal para transfectar as células mucosas. Estas células então expressam a TeNT durante meses.

Exemplo 2. Rinite alérgica perene 2a) Injecção directa dos gânglios esfenopalatinos.

Uma mulher de 40 anos de idade tem congestão nasal crónica devido a rinite perene. O teste na pele demonstra que ela é alérgica a numerosos antigénios ambientais e examinação intranasal mostra mucosa do turbinado alargada e pólipos nasais. O teste de secreções nasais mostra eosinofilia. Uma injecção de 20 unidades de BoNT num 1 cc de solução salina normal é feita através do canal esfenopalatino na área dos gânglios esfenopalatinos.

Em outra forma de realização, 100 unidades de BoNT incrustadas em precipitados biodegradáveis de 0,1 micron suspensos em solução são injectadas na mucosa de cada turbinado para libertar lentamente os seus conteúdos ao longo de 6 meses.

Alternativamente, um portador biodegradável que contém 5 unidades de BoNT é colocado intranasalmente na maioria do aspecto superior e posterior da parede nasal lateral. Isto permite que a BoNT difunda através da parede nasal aos gânglios esfenopalatinos subjacentes.

Exemplo 3. Sinusite

Um homem de cinquenta anos de idade tem uma história de rinite alérgica e sinusite recorrente. Dez unidades de BoNT são injectadas através do palato no espaço pterigopalatino para bloquear o gânglio esfenopalatino. Exemplo 4. Dermatite alérgica. 31

Um homem de setenta anos de idade tem dermatite alérgica severa da pele do antebraço. Injecta-se a cada antebraço 10 injecções de 0,3 unidades BoNT em 0,1 cc de solução salina normal. Cada injecção é feita intradermicamente a intervalos de 3 cm.

Exemplo 5 Asma alérgica

Um rapaz de 13 anos de idade tem asma alérgica severa. Ele é tratado por meio da terapêutica de inalação bimensalmente de uma solução aerossolizada de 5 unidades de toxina botúlica em 5 cc de solução salina normal.

Alternativamente, a mesma solução de botulinum pode ser injectada directamente na traqueia e brônquios. Após injectar a anestesia local na pele sobrejacente da membrana cricotireóide uma agulha é passada directamente através da pele e membrana cricotireóide e a solução de BoNT é pulverizada na traqueia. A solução goteja até alcançar a mucosa brônquica onde é absorvida topicamente Exemplo 6 Rinite alérgica

Um homem de 40 anos de idade tem rinite alérgica e uma tosse crónica associada ao reflexo. A aplicação de CnT à cavidade nasal como foi descrito acima ou alternativamente injectada ou aplicação tópica aerossolizada de BoNT aos pulmões é usada para tratar a tosse.

Exemplo 7. Alergias alimentares

Um rapaz de 10 anos de idade com alergias alimentares manifestadas por distensão abdominal e diarreia é tratado com um supositório rectal que contém 50 unidades de BoNT. O supositório é composto de material biocompatível desenhado para ser sólido à temperatura ambiente, mas dissolve à temperatura corporal. Os materiais suficientes para a composição são manteiga de cacau, gelatina glicerinada, óleos vegetais hidrogenados, polietileno glicóis de vários pesos moleculares e ésteres gordos de polietileno glicol. 32

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição

us 5965605 A, Cheng us 6090034 A, Ra us 5965709 A, Presta us 5969158 A, Bycroft us 4740371 A, St. Remy us 5314690 A, Patterson us 5980898 A, Gleim us 5766605 A

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Claims (12)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica que compreende uma neurotoxina (CnT) derivada de uma espécie de clostrídio seleccionada a partir do grupo que consiste em C. botulinum, C. butyricum e C. baratii numa quantidade terapêutica eficaz, para utilização no tratamento de congestão nasal devido a inchaço da mucosa e pólipos nasais, asma, rinite alérgica, sinusite alérgica, doença pulmonar alérgica, alergias alimentares, dermatite alérgica e espirro, tosse e comichão relacionadas com reacções alérgicas num mamífero, em que a quantidade de CnT administrada por administração é entre 0,1 e 1000 unidades por administração.

2. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a neurotoxina é derivada de C. botulinum.

3. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 2, em que a neurotoxina (BoNT) derivada de C. botulinum é derivada dos serotipos A, B, Cl, D, E, F e G.

4. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a composição compreende pequenas compressas absorventes que têm CnT absorvido nas mesmas.

5. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a composição compreende um veículo biodegradável que contém CnT.

6. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a composição que contém CnT é injectável ou dispersível como névoa aquosa inalável que 2 contém a mesma ou está compreendida num supositório que contém a mesma.

7. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a doença pulmonar é seleccionada a partir do grupo que consiste em bronquite, enfisema e asma hiper-reactiva.

8. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a quantidade de CnT administrada por administração é entre 1 e 100 unidades por administração.

9. Composição farmacêutica para utilização de acordo com as reivindicações 1-8, para aplicação nasal e/ou aplicação no gânglio esfenopalatino.

10. Composição farmacêutica para utilização de acordo com as reivindicações 1-9, em que o mamífero é preferentemente um membro de H. sapiens.

11. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 8, em que a quantidade de CnT administrada por administração é entre 1 e 20 unidades por administração.

12. Composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 9, para o tratamento de sinusite e asma.