PT1831402E - Variante genética de vkorc1 para prever a sensibilidade à varfarina - Google Patents
Variante genética de vkorc1 para prever a sensibilidade à varfarina Download PDFInfo
- Publication number
- PT1831402E PT1831402E PT05855433T PT05855433T PT1831402E PT 1831402 E PT1831402 E PT 1831402E PT 05855433 T PT05855433 T PT 05855433T PT 05855433 T PT05855433 T PT 05855433T PT 1831402 E PT1831402 E PT 1831402E
- Authority
- PT
- Portugal
- Prior art keywords
- warfarin
- patients
- promoter
- cyp2c9
- vkorc1
- Prior art date
Links
- 208000009825 warfarin sensitivity Diseases 0.000 title abstract description 15
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title description 18
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 146
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 claims abstract description 134
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 40
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 40
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 24
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 20
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 14
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 101150053096 CYP2C9 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 6
- 102100029358 Cytochrome P450 2C9 Human genes 0.000 description 58
- 101710101953 Cytochrome P450 2C9 Proteins 0.000 description 58
- 101150025072 VKORC1 gene Proteins 0.000 description 17
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 17
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 13
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 13
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 13
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 13
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 9
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 9
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 9
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 8
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 7
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 7
- 101100297347 Caenorhabditis elegans pgl-3 gene Proteins 0.000 description 7
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 7
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 7
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 108091035710 E-box Proteins 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 6
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 6
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 5
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 5
- 102100023485 Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1 Human genes 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 102220090104 rs7294 Human genes 0.000 description 5
- 102220090106 rs8050894 Human genes 0.000 description 5
- -1 subtype IIC Proteins 0.000 description 5
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 4
- 102000003849 Cytochrome P450 Human genes 0.000 description 4
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 4
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 4
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 4
- 101000621954 Synechococcus sp. (strain JA-2-3B'a(2-13)) Vitamin K epoxide reductase homolog Proteins 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- BUFJIHPUGZHTHL-NKFFZRIASA-N phyllohydroquinone Chemical compound C1=CC=CC2=C(O)C(C/C=C(C)/CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)=C(C)C(O)=C21 BUFJIHPUGZHTHL-NKFFZRIASA-N 0.000 description 4
- 102220090105 rs2359612 Human genes 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 3
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 3
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 3
- 102000004210 Vitamin K Epoxide Reductases Human genes 0.000 description 3
- 108090000779 Vitamin K Epoxide Reductases Proteins 0.000 description 3
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 3
- 230000006251 gamma-carboxylation Effects 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 3
- 208000026260 warfarin resistance Diseases 0.000 description 3
- VXIXUWQIVKSKSA-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxycoumarin Chemical compound C1=CC=CC2=C1OC(=O)C=C2O VXIXUWQIVKSKSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010051055 Deep vein thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 2
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 2
- 229960002054 acenocoumarol Drugs 0.000 description 2
- VABCILAOYCMVPS-UHFFFAOYSA-N acenocoumarol Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 VABCILAOYCMVPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 description 2
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940072645 coumadin Drugs 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 2
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003468 luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 2
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 2
- HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N (4S)-2-(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,2-f][1,3]benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydro-1,3-thiazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(=N1)c1nc2cc3CCNc3cc2s1 HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- PJVWKTKQMONHTI-HNNXBMFYSA-N (S)-warfarin Chemical compound C1([C@H](CC(=O)C)C=2C(OC3=CC=CC=C3C=2O)=O)=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- JTTIOYHBNXDJOD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-triaminopyrimidine Chemical compound NC1=CC(N)=NC(N)=N1 JTTIOYHBNXDJOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- VEUZZDOCACZPRY-UHFFFAOYSA-N Brodifacoum Chemical compound O=C1OC=2C=CC=CC=2C(O)=C1C(C1=CC=CC=C1C1)CC1C(C=C1)=CC=C1C1=CC=C(Br)C=C1 VEUZZDOCACZPRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWNRRUFOJXFKCU-UHFFFAOYSA-N Bromadiolone Chemical compound C=1C=C(C=2C=CC(Br)=CC=2)C=CC=1C(O)CC(C=1C(OC2=CC=CC=C2C=1O)=O)C1=CC=CC=C1 OWNRRUFOJXFKCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005966 Bromadiolone Substances 0.000 description 1
- UDHXJZHVNHGCEC-UHFFFAOYSA-N Chlorophacinone Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)C(=O)C1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O UDHXJZHVNHGCEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067787 Coagulation factor deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102000002269 Cytochrome P-450 CYP2C9 Human genes 0.000 description 1
- 108010000543 Cytochrome P-450 CYP2C9 Proteins 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- JYGLAHSAISAEAL-UHFFFAOYSA-N Diphenadione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C1C(=O)C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JYGLAHSAISAEAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000724418 Homo sapiens Neutral amino acid transporter B(0) Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 1
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 description 1
- 102100028267 Neutral amino acid transporter B(0) Human genes 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 241000242739 Renilla Species 0.000 description 1
- 108010052090 Renilla Luciferases Proteins 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 101710104199 Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1 Proteins 0.000 description 1
- 102220472497 Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1_V66M_mutation Human genes 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 206010061592 cardiac fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 208000014763 coagulation protein disease Diseases 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000004883 computer application Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229960001912 dicoumarol Drugs 0.000 description 1
- DOBMPNYZJYQDGZ-UHFFFAOYSA-N dicoumarol Chemical compound C1=CC=CC2=C1OC(=O)C(CC=1C(OC3=CC=CC=C3C=1O)=O)=C2O DOBMPNYZJYQDGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIZKPJUTKKJDGA-UHFFFAOYSA-N dicumarol Natural products O=C1OC2=CC=CC=C2C(=O)C1CC1C(=O)C2=CC=CC=C2OC1=O HIZKPJUTKKJDGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 229960000267 diphenadione Drugs 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000002600 fibrillogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000011229 interlayer Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000003228 microsomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229940127216 oral anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- DQDAYGNAKTZFIW-UHFFFAOYSA-N phenprocoumon Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC)C1=CC=CC=C1 DQDAYGNAKTZFIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004923 phenprocoumon Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/172—Haplotypes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
1
DESCRIÇÃO "VARIANTE GENÉTICA DE VKORC1 PARA PREVER A SENSIBILIDADE À VARFARINA"
CAMPO DE INVENÇÃO A presente invenção diz respeito a processos de dosagem de fármacos, em particular a varfarina.
REFERÊNCIAS 1. Hirsh, J. (1992) Antithrombotic therapy in deep vein thrombosis and pulmonary embolism. Am. Heart J., 123, 1115-1122 . 2. Laupacis, A., Albers, G., Dalen, J., Dunn, M., Feinberg, W. E Jacobson, A. (1995) Antithrombotic therapy in atrial fibrillation. Chest, 108, 352S-359S. 3. Stein, P.D., Alpert, J.S., Copeland, J., Dalen, J.E.,
Goldman, S. e Turpie, A.G. (1995) Antithrombotic therapy in patients with mechanical and biological prosthetic heart valves. Chest, 108, 371S-379S. 4. Hirsh, J., Dalen, J., Anderson, D.R., Poller, L., Bussey, H., Ansell, J. e Deykin, D. (2001) Oral anticoagulants: mechanism of action, clinicai effectiveness, and optimal therapeutic range. Chest, 119, 8S-21 S. 5. Loebstein, R., Yonath, H., Peleg, D., Almog, S.,
Rotenberg, M., Lubetsky, A., Roitelman, J., Harats, D.,
Halkin, H. e Ezra, D. (2001) Interindividual variability in sensitivity to warfarin-Nature or nurture? Clin. Pharmacol. Ther., 70, 159-164. 2 6. Takahashi, H., Wilkinson, G.R., Caraco, Y., Muszkat, M., Kim, R.B., Kashima, T., Kimura, S. e Echizen, H. (2003) Population differences in S-warfarin metabolism between CYP2C9 genotype-matched Caucasian and Japanese patients. Clin. Pharmacol. Ther., 73, 253-263. 7. Zhao, F., Loke, C., Rankin, S.C., Guo, J.Y., Lee, H.S., Wu, T.S., Tan, T., Liu, T.C., Lu, W.L., Lim, Y.T. et al. (2004) Novel CYP2C9 genetic variants in Asian subjects and their influence on maintenance warfarin dose. Clin. Pharmacol. Ther., 76,210-219. 8. Yu, H.C., Chan, T.Y., Critchley, J.A. e Woo, K.S. (1996) Factors determining the maintenance dose of warfarin in Chinese patients. QJM 89, 127-135. 9. Xie, H.G., Kim, R.B., Wood, A.J. e Stein, C.M. (2001) Molecular basis of ethnic differences in drug disposition and response. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 41, 815-850. 10. Bogousslavsky, J. and Regli, F. (1985) Anticoagulant-induced intracerebral bleeding in brain ischemia. Evaluation in 200 patients with TIAs, emboli from the heart, and progressing stroke. Acta. Neurol. Scand., 71, 464-471. 11. Landefeld, C.S. e Beyth, R.J. (1993) Anticoagulant-related bleeding: clinicai epidemiology, prediction, and prevention. Am. J. Med., 95, 315-328. 12. Gullov, A.L., Koefoed, B.G. e Petersen, P. (1994) Bleeding Complications to Long-Term Oral Anticoagulant Therapy. J. Thromb. Thrombolysis, 1, 17-25. 13. Kaminsky, L.S., Dunbar, D.A., Wang, P.P., Beaune, P., Larrey, D., Guengerich, F.P., Schnellmann, R.G. e Sipes, I.G. (1984) Human hepatic cytochrome P-450 composition as 3 probed by in vitro microsomal metabolism of warfarin. Drug Metab. Dispôs., 12, 470-477. 14. Rettie, A.E., Korzekwa, K.R., Kunze, K.L., Lawrence, R.F., Eddy, A.C., Aoyama, T., Gelboin, H.V., Gonzalez, F.J. e Trager, W.F. (1992) Hydroxylation of warfarin by human cDNA-expressed cytochrome P-450: a role for P-4502C9 in the etiology of (S)-warfarin-drug interactions. Chem. Res. Toxicol., 5, 54-59. 15. Kaminsky, L.S., de Morais, S.M., Faletto, M.B., Dunbar, D.A. e Goldstein, J.A. (1993) Correlation of human cytochrome P4502C substrate specificities with primary structure: warfarin as a probe. Mol. Pharmacol., 43, 234-239. 16. Xie, H.G., Prasad, H.C., Kim, R.B. e Stein, C.M. (2002) CYP2C9 allelic variants: ethnic distribution and functional significance. Adv. Drug. Deliv. Rev., 54, 1257-1270. 17. Kirchheiner, J. e Brockmoller, J. (2005) Clinicai consequences of cytochrome P450 2C9 polymorphisms. Clin. Pharmacol. Ther., 77, 1-16. 18. Furuya, H., Fernandez-Salguero, P., Gregory, W., Taber, H., Steward, A., Gonzalez, F.J. e Idle, J.R. (1995) Genetic polymorphism of CYP2C9 and its effect on warfarin maintenance dose requirement in patients undergoing anticoagulation therapy. Pharmacogenetics, 5, 389-392. 19. Aithal, G.P., Day, C.P., Kesteven, P.J. e Daly, A.K. (1999) Association of polymorphisms in the cytochrome P450 CYP2C9 with warfarin dose requirement and risk of bleeding complications. Lancet, 353, 717-719. 20. Higashi, M.K., Veenstra, D.L., Kondo, L.M., Wittkowsky, A.K., Srinouanprachanh, S.L., Farin, F.M. e Rettie, A.E. (2002) Association between CYP2C9 genetic variants and 4 anticoagulation-related outcomes during warfarin therapy. JAMA, 287, 1690-1698. 21. Nasu, K., Kubota, T. e Ishizaki, T. (1997) Genetic analysis of CYP2C9 polymorphism in a Japanese population. Pharmacogenetics, 7, 405-409. 22. Bell, R.G. e Matschiner, J.T. (1972) Warfarin and the inhibition of vitamin K activity by an oxide metabolite. Nature, 237, 32-33. 23. Wallin, R. e Martin, L.F. (1985) Vitamin K-dependent carboxylation and vitamin K metabolism in liver. Effects of warfarin. J. Clin. Invest., 76, 1879-1884. 24. Li, T., Chang, C.Y., Jin, D.Y., Lin, P.J., Khvorova, A. e Stafford, D.W. (2004) Identification of the gene for vitamin K epoxide reductase. Nature, 427,541-544. 25. Rost, S., Fregin, A., Ivaskevicius, V., Conzelmann, E., Hortnagel, K., Pelz, H.J., Lappegard, K., Seifried, E., Scharrer, I., Tuddenham, E.G. et al. (2004) Mutations in VK0RC1 cause warfarin resistance and multiple coagulation factor deficiency type 2. Nature, 427, 537-541. 26. Harrington, D.J., Underwood, S., Morse, C., Shearer, M.J., Tuddenham, E.G. e Mumford, A.D. (2005) Pharmacodynamic resistance to warfarin associated with a Val66Met substitution in vitamin K epoxide reductase complex subunit 1. Thromb. Haemost., 93, 23-26. 27. D'Andrea, G., D'Ambrosio, R.L., Di Perna, P., Chetta, M., Santacroce, R., Brancaccio, V., Grandone, E. e Margaglione, M. (2005) A polymorphism in the VKORC1 gene is associated with an interindividual variability in the dose-anticoagulant effect of warfarin. Blood, 105, 645-649. 5 28. Massari, M.E. e Murre, C. (2000) Helix-loop-helix proteins: regulators of transcription in eucaryotic organisms. Mol. Cell Biol., 20, 429-440. 29. Terai, S., Aoki, H., Ashida, K. e Thorgeirsson, S.S. (2000) Human homologue of maid: A dominant inhibitory helix-loop-helix protein associated with liver-specific gene expression. Hepatology, 32, 357-366. 30. Bodin, L., Verstuyft, C., Tregouet, D.A., Robert, A., Dubert, L., Funck-Brentano, C., Jaillon, P., Beaune, P., Laurent-Puig, P., Becquemont, L. et al. (2005) Cytochrome P450 2C9 (CYP2C9) and vitamin K epoxide reductase (VKORC1) genotypes as determinants of acenocoumarol sensitivity. Blood, 106(1) : 135-140. 31. Jones, K.A., Kadonaga, J.T., Rosenfeld, P.J., Kelly, T.J. e Tjian, R. (1987) A cellular DNA-binding protein that activates eukaryotic transcription and DNA replication. Cell, 48, 79-89. 32. Rieder, M. J., A. P. Reiner, et al. (2005). Effect of VKORC1 haplotypes on transcriptional regulation and warfarin dose. N Engl J Med. 352(22): 2285-93. 33. Geisen, C., M. Watzka, et al. (2005). VKORC1 haplotypes and their impact on the inter-individual and interethnical variability of oral anticoagulation. Thromb Haemost, 94(4): 773-9. 34. Veenstra, D. L., J. H. You, et al. (2005). Association of Vitamin K epoxide reductase complex 1 (VKORC1) variants with warfarin dose in a Hong Kong Chinese patient population. Pharmacogenet Genomics, 15(10): 687-91. 35. Sconce, E. A., τ. I. Khan, et al. (2005). The impact of CYP2C9 and VKORC1 genetic polymorphism and patient 6 characteristics upon warfarin dose requirements: proposal for a new dosing regímen. Blood, 106(7): 2329-33.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A varfarina é um anticoagulante vulgarmente prescrito para a prevenção de doenças tromboembólicas em pacientes com trombose das veias profundas, fibrilhação arterial ou em casos de substituição de válvulas cardíacas mecânicas (1-4) . No entanto, o tratamento com varfarina é problemático, uma vez que a dose necessária de varfarina é muitíssimo variável, tanto interindividualmente como interetnicamente (5-7). De um modo geral, as populações asiáticas, incluindo os chineses, necessitam de uma dose de manutenção muito menor do que os caucasianos e hispânicos (6-9) . As hemorragias são, de longe, a complicação mais grave do tratamento com varfarina (10-142). Têm sido efectuados muitos esforços para monitorizar a segurança deste anticoagulante oral. Presentemente, a dose tem de ser monitorizada rigorosamente por determinações sequenciais do tempo de protrombina do sangue, recorrendo-se ao uso do índice internacional normalizado (INR). O citocromo P450, subfamília IIC, polipeptido 9 (CYP2C9) é o principal fármaco que metaboliza a enzima que catalisa a hidroxilação da varfarina (13-15). O CYP2C9*2 e o CYP2C9*3 são os polimorfismos mais frequentemente encontrados na população caucasiana. Tomando o CYP2C9*1 como tipo selvagem, as frequências haplotípicas para CYP2C9*l/*2 e CYP2C9*l/*3 são respectivamente ~ 20% e ~12% (16, 17). Comprovou-se que as variantes CYP2C9*2 e CYP2C9*3 fazem diminuir a actividade enzimática de CYP2C9, o que determina sensibilidade à varfarina e, em casos graves, 7 complicações hemorrágicas (18-20). No entanto, tanto o CYP2C9*2 como o CYP2C9*3 estão totalmente ausentes ou são raros nas populações asiáticas (9,21). As variantes genéticas até agora encontradas em CYP2C9 apenas permitem explicar parcialmente algumas das diferenças interindividuais nas dosagens com varfarina, mas não conseguem explicar as diferenças interétnicas (6, 7,16). A γ-carboxilação dos factores de coagulação dependentes da vitamina K (factor II, VII, IX e X) é essencial para a coagulação do sangue. A γ-carboxilase utiliza a forma reduzida da vitamina K e o oxigénio para acrescentar uma molécula de dióxido de carbono à cadeia lateral do ácido glutâmico nos factores de coagulação. Durante a carboxilação, a vitamina K reduzida é oxidada para originar 2,3-epóxido de vitamina K, a partir do qual a vitamina K reduzida é regenerada pela epóxido redutase da vitamina K, para um outro ciclo de catálise. A varfarina bloqueia a síntese dos factores de coagulação ao inibir a redutase do epóxido de vitamina K (22, 23). Recentemente foi clonado (24, 25) o gene que codifica o complexo de epóxido redutase de vitamina K, a subunidade 1 (VKORC1) e foram encontradas mutações do gene VKORC1 em pacientes resistentes à varfarina (25, 26). Também se concluiu que há um polimorfismo intrónico associado com alguma variabilidade interindividual da varfarina, em pacientes italianos (27).
Estes estudos não conseguem explicar toda a variabilidade da dosagem com varfarina, em particular as variações interétnicas. Por outro lado, há uma grande parte da população mundial, os asiáticos, não abrangida. Assim sendo, é desejável encontrar um processo para prever o intervalo adequado de dosagem com varfarina, que possa ser aplicado mais generalizadamente. A sequência do gene VK0RC1, que compreende o polimorfismo promotor na posição 1639, está disponível com o número AY587020 de acesso em EMBL. 0 documento WO 2006/044686 descreve processos para a previsão de respostas aos fármacos. Em particular, descreve processos para a determinação das dosagens de varfarina, com base na presença ou na ausência de polimorfismos no gene VKORC1. O documento WO 2006/044686 indica que um paciente portador do ciado homozigótico A/A ou B/B é, respectivamente, sensível ou resistente à varfarina. Os ciados baseiam-se num número de haplotipos que se referem a uma combinação particular de dez polimorfismos nucleotídicos pontuais localizados no gene VKORC1. O documento WO2005030039 descreve uma ligação entre a dosagem de varfarina e os SNP nas posições 6853 e 9041 da SEQ ID NO: 1.
DESCRIÇÃO ABREVIADA
Neste estudo concluiu-se que há um polimorfismo no promotor do gene VKORC1 que está associado à sensibilidade à varfarina. Este polimorfismo consegue explicar tanto as diferenças interindividuais como as diferenças interétnicas em termos de exigências de dosagem com varfarina. Por outro lado, o polimorfismo também está associado à actividade do promotor. O promotor VKORC1 que possui um resíduo G na posição -1639 (numeração feita relativamente ao primeiro nucleótido do códão de iniciação) é 44% mais activo do que o promotor que possui um resíduo A na mesma posição. Os 9 pacientes com o polimorfismo -1639 A são mais sensíveis à varfarina. Os pacientes homozigóticos AA na posição -1639 são os que necessitam das doses mais pequenas, os pacientes heterozigóticos AG necessitam de doses intermédias e os pacientes homozigóticos GG necessitam das posologias mais elevadas. Assim, a sequência do promotor ou a actividade do gene VK0RC1 de um paciente podem servir para se prever a quantidade de varfarina que deve ser prescrita a um paciente. Este método melhora, significativamente, a exactidão das prescrições de doses de varfarina.
Presentemente, administra-se aos pacientes uma dose inicial, sendo o seu INR monitorizado periodicamente, e depois faz-se o ajustamento das doses de varfarina de acordo com os resultados, até se obter uma dose de manutenção que seja segura para o paciente. De acordo com a presente invenção, a dose prevista irá ser muito mais próxima da dose de manutenção, pelo que a dosagem com varfarina irá ser mais rápida, mais segura e mais económica.
Posto isto, de acordo com um dos seus aspectos, a presente invenção proporciona um processo para prever o intervalo de dosagem de varfarina para um ser humano, o qual compreende os passos seguintes: investigar o nucleótido da posição -3673 da SEQ ID NO: 1 do paciente; determinar se o paciente é sensível ou resistente à varfarina, com base no nucleótido da posição -3673, em que os grupos homozigótico AA, heterozigótico AG e homozigótico GG na posição 3673 indicam se o paciente é, respectivamente, sensível, medianamente sensível ou resistente à varfarina; e prever um intervalo de dosagem de varfarina com base na sensibilidade ou na resistência do paciente à varfarina. 10
Quanto mais sensível for o paciente à varfarina, tanto mais elevado é o risco de haver complicações subsequentes, tais como hemorragias.
Em particular investiga-se a sequência na posição -1639 do gene VKORC1. Se o nucleótido nesta posição for um A, o paciente é muito sensível à varfarina. Assim sendo, um paciente que possua o grupo homozigótico AA na posição -1639 do gene VKORC1 é mais sensível do que um paciente heterozigótico que possua um nucleótido A e um outro nucleótido (G, C ou T) nessa posição. Por sua vez, o mesmo paciente heterozigótico é mais sensível à varfarina do que um indivíduo que não tenha nenhum A nessa posição. A sequência pode ser investigada testando um marcador genético equivalente de -1639 A ou do alelo -1639G/C/T, em que a presença do marcador genético equivalente é um sinal indicador da presença do alelo correspondente. Por exemplo, o marcador genético equivalente por ser um SNP seleccionado entre o conjunto constituído por rs9934438, rs8050894, rs2359612 e rs7294 do gene VKORC1, sendo cada um deles indicador de resistência à varfarina.
Em algumas variantes da presente invenção, investiga-se a sequência utilizando um oligonucleótido que híbrida especificamente com o promotor do gene VKORC1. De preferência, o oligonucleótido híbrida especificamente pelo menos com 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 ou 24 nucleótidos que abrangem a posição -1639 do gene VKORC1. A sequência pode ser investigada utilizando ADN preparado a partir do sangue periférico do paciente. O paciente da presente invenção é, preferencialmente, asiático, caucasiano, africano, afroamericano ou hispânico. 11 É possível combinar outros métodos, para determinação das doses de varfarina, com a investigação do gene VK0RC1. Por exemplo, também é possível investigar a sequência do gene de CYP2C9 com base em metodologias conhecidas na especialidade. Por exemplo, ambos os CYP2C9*2 e CYP2C9*3 estão associados à sensibilidade à varfarina. A presente invenção pode ser levada à pratica utilizando um estojo para determinação do intervalo de dosagem de varfarina, o qual contém pelo menos um componente seleccionado entre o conjunto constituído por: (a) um sistema para detectar a sequência A na posição - 1639 do gene VK0RC1; e (b) um sistema para detectar a sequência G na posição -1639 do gene VK0RC1. 0 estojo pode conter também um sistema para detectar as sequências C e T da posição -1639 do gene VK0RC1. Assim, em alguns casos, o estojo pode conter um sistema para detectar cada uma das quatro bases possíveis nessa posição. Noutros casos, o estojo pode conter um sistema para detectar A e um sistema para detectar G, C ou T nessa posição, uma vez que a presença de A nessa posição é o melhor indicador de sensibilidade à varfarina. De preferência, o sistema é um oligonucleótido. 0 estojo pode conter, facultativamente, os reagentes para a hibridação do oligonucleótido, para amplificação por PCR e/ou instruções de utilização. 0 oligonucleótido, ou o seu complemento, híbrida com uma região do promotor do gene VK0RC1, em que a região abrange a posição -1639 do promotor e é constituída pelo menos por 6 nucleótidos. De preferência, o oligonucleótido híbrida especificamente pelo menos com 6, 8, 10, 12, 14, 16, 12 18, 20, 22 ou 24 nucleótidos que abrangem a posição -1639 do gene VKORC1. O oligonucleótido consegue hibridar com esta região em que o nucleótido na posição -1639 é A, G C ou T, de preferência A ou G. Em alguns casos, o oligonucleótido pode ser constituído por cerca de 15 nucleótidos ou menos, 16-20 nucleótidos, 20-25 nucleótidos, 25-30 nucleótidos ou 30-40 nucleótidos. Também é possível prever um sistema que compreenda o oligonucleótido da presente invenção.
Os pormenores de uma ou várias variantes da presente invenção são explicitados adiante nos desenhos anexos e na memória descritiva subsequente. Outras particularidades, objectivos e vantagens da presente invenção tornar-se-ão evidentes a partir da descrição, dos desenhos e das reivindicações anexas.
DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
Figura 1. Gráfico de dispersão de doses de varfarina em presença do genótipo VK0RC1 -1639. Foram feitos gráficos das doses de varfarina em pacientes seleccionados, sensíveis ou resistentes à varfarina (ver o quadro 1 para saber pormenores) em presença de diferentes genótipos na posição -1639 do promotor VKORC1. * Indivíduos com variantes CYP2C9, incluindo CYP2C9*3, T299A (isto é, o resíduo aminoácido 299 passou de T para A) e P382L (isto é, o resíduo aminoácido 382 passou de P para L).
Figura 2. Medições relativas dos níveis de actividade da luciferase em células HepG2. Repórter pGL3 de luciferase contendo o alelo A (pGL3-A) ou o alelo G (pGL3-G) na posição -1639 do promotor. Apresenta-se a média de dados provenientes de 9 experiências e as barras de erro 13 representam o desvio padrão; utilizou-se pGL3 básico como referência, sem nenhuma sequência do promotor inserida.
Figura 3. Sequência genómica do gene VK0RC1 (N° AY587020 de admissão no Genbank). 0 local de inicio da transcrição está no nucleótido número 5086 (a negrito e dentro de um rectângulo) nesta figura, sendo designado por + 1 do gene na nomenclatura tradicional. O A do códão de iniciação da tradução ATG (a negrito) está no nucleótido número 5312 nesta figura, sendo a recomendação da "Human Genome Variation Society" que seja designado por +1 no novo sistema de nomenclatura. O polimorfismo do promotor descrito na presente invenção está sublinhado e a negrito (nucleótido número 3673 nesta sequência) , estando na posição -1413 no sistema tradicional e na posição -1639 no novo sistema recomendado.
DESCRIÇÃO MINUCIOSA
Chegou-se à conclusão de que há um polimorfismo no promotor do gene VKORC1, associado à sensibilidade à varfarina. Este polimorfismo consegue explicar as diferenças interindividuais e interétnicas no que diz respeito às necessidades de dosagem de varfarina. Além disso, o polimorfismo também está associado à actividade do promotor. O promotor de VKORC1 que possui um G na posição -1639 (numerada em relação ao primeiro nucleótido do códão de iniciação) é 44% mais activo do que o promotor que possui um A na mesma posição. Os pacientes com o polimorfismo -1639A são mais sensíveis à varfarina. Os pacientes homozigóticos como o grupo AA na posição -1639 são os que necessitam de menores doses, os pacientes heterozigóticos com o grupo AG têm necessidade de doses intermédias e os pacientes 14 homozigóticos com o grupo GG são os que necessitam das dosagens mais elevadas. Assim, a sequência do promotor ou a actividade do gene VK0RC1 de um paciente pode servir para se prever a quantidade de varfarina que deve ser prescrita a esse paciente.
Antes de se descrever a invenção de forma mais minuciosa, irão ser definidos os termos utilizados na presente memória descritiva, conforme adiante se indica, salvo quando especificado de outro modo.
Definições 0 termo "varfarina" abrange os derivados da coumarina que possuem uma actividade anticoagulante. De acordo com uma variante preferencial, a varfarina é o composto 4-hidroxi-3-(3-oxo-l-fenilbutil) -2H-l-benzopiran-2-ona (isto é, 3-oí-feneil^-acetiletil-4-hidroxicoumarina) . 0 produto comercial vulgar é uma mistura racémica do isómero R e do isómero S. 0 termo "varfarina" compreende o isómero R, o isómero S, todas as misturas racémicas e todos os seus sais. De uma maneira concreta, são designados por varfarina os produtos "Coumadin, Marevan, Panwarfin, Prothromadin, Tintorane, Warfilone, Waran, Athrombin-K", varfarina deanol, "Adoisine", varfarina ácida, "Coumafene, Zoocoumarin, Phenprocoumon", dicumarol, brodifacoum, difenadiona, clorofacinona, bromadiolona e acenocoumarol. 0 termo "oligonucleótido", tal como aqui utilizado, designa uma molécula que compreende entre 2 e cerca de 100 nucleótidos contíguos ligados através de ligações nucleotidicas. Um oligonucleótido pode ter um comprimento pelo menos igual a cerca de 10, 20, 30, 40, 50 ou 60 nucleótidos. Além disso, um oligonucleótido tem, 15 preferencialmente, um comprimento até cerca de 200, e mais preferencialmente até cerca de 150, 100, 75, 50, 40, 30, ou 20 nucleótidos.
Uma "sonda" de hibridação é um oligonucleótido que se liga, de uma maneira específica, a uma cadeia de ácido nucleico complementar. Tais sondas compreendem os ácidos nucleicos de péptidos. As sondas podem ter um comprimento qualquer, conveniente para hibridação específica com a sequência de ácido nucleico destinatária. O comprimento mais conveniente da sonda pode variar em função do processo de hibridação em que a sonda irá ser utilizada; por exemplo, determinados comprimentos particulares podem ser mais adequados para utilização em microssistemas industriais, ao passo que outros comprimentos podem ser mais convenientes para utilização em processos clássicos de hibridação. Tais optimizações são da competência de especialistas na matéria. As sondas e os iniciadores convenientes possuem, tipicamente, um comprimento compreendido entre cerca de 8 nucleótidos e cerca de 100 nucleótidos. Por exemplo, as sondas e os iniciadores podem ter um comprimento de cerca de 8-20, 10-30, 15-40, 50-80 e, preferencialmente, 12-20 nucleótidos. A sequência de nucleótidos pode corresponder à sequência codificadora do gene, ou ao complemento da sequência codificadora do gene.
Processos e composições
Ao fazer-se a comparação das sequências do ADN de CYP2C9 e VKORC1 de pacientes chineses com sensibilidade ou resistência à varfarina (Exemplo 1) , descobriu-se que as variantes da sequência de ADN de CYP2C9 se encontravam presentes apenas em 5,4-7,3% da população chinesa de Han. 16
As variantes eram fundamentalmente CYP2C9*3. Além disso, duas mutações com sentido incorrecto, identificadas neste estudo, incluindo uma nova mutação (P382L), nunca antes assinalada, são raras e apenas se encontram presentes em pacientes sensíveis à varfarina. As variantes CYP2C9 também revelaram uma prevalência diferente em populações étnicas diferentes. 0 CYP2C9* l/*2 encontrava-se presente em 20% da população caucasiana (17); no entanto, estava totalmente ausente na população chinesa deste estudo. Assim sendo, as mutações em CYP2C9 apenas podem ser responsáveis por uma pequena percentagem de sensibilidade à varfarina na população chinesa e não conseguem explicar as diferenças interétnicas, em termos de necessidades de dosagem de varfarina.
Por outro lado, concluímos que as modificações no gene VKORC1 conseguem alterar as necessidades de dosagem de varfarina, quer interindividualmente na população chinesa quer interetnicamente entre população chinesa e caucasiana. Os pacientes com genótipo de polimorfismo AA do promotor -1639 tinham menores necessidades de dosagem, ao passo que os genótipos AG/GG tinham maiores necessidades de dosagem (Exemplos 1 e 2) . Além disso, os grupos homozigóticos AA são raros na população caucasiana, existindo todavia este genótipo na maior parte da população chinesa (Exemplo 3). As diferenças de frequências de genótipos entre população caucasiana e população chinesa, e a correlação de AA com a sensibilidade à varfarina, estão em conformidade com aquilo que foi observado clinicamente, ou seja, a população chinesa necessita de uma dose menor do que a população caucasiana.
Assim sendo, de acordo com um dos seus aspectos, a presente invenção proporciona um processo para determinar o 17 intervalo de dosagem de varfarina para um paciente, o qual consiste em investigar a sequência do promotor do gene VK0RC1 desse paciente. A sequência do promotor contém, preferencialmente, menos de 10%, 8%, 6%, 4%, 3%, 2% ou 1% de variação no domínio das 3 kb contadas a partir do local de início da tradução, comparativamente com a SEQ ID NO: 1. Mais preferencialmente, o promotor possui menos de 20, 15, 12, 10, 8, 6, 4, 3 ou 2 variações de bases pontuais nesta região de 3 kb. Uma variação sequencial deste tipo, conjuntamente com uma modificação na actividade do promotor, é um indicador do intervalo de dosagem em que a varfarina deve ser prescrita.
Em particular, investiga-se a sequência na posição -1639 do gene VKORC1. Este SNP pode ser utilizado por si só para se prever a sensibilidade à varfarina, sem ter de ser pesquisado nenhum outro genótipo. Assim, o grupo homozigótico AA nesta posição é indicador de sensibilidade à varfarina, o grupo heterozigótico AG indica uma sensibilidade intermédia e os pacientes com o grupo homozigótico GG são relativamente resistentes. A dosagem real de varfarina que deve ser administrada aos pacientes que são sensíveis, medianamente sensíveis ou relativamente resistentes irá variar em função da formulação de varfarina e também com os indícios e os sintomas do paciente e pode ser determinada pelo médico que prescreva a varfarina. Por exemplo, o nosso estudo (Exemplo 1) revela que num grupo seleccionado de pacientes com sensibilidade ou com resistência à varfarina, os que tinham necessidade das doses mais baixas (média de 1,19 mg/dia, variando entre 0,71-1,50 mg/dia) tinham um genótipo AA, os que tinham necessidades de doses intermédias (média de 8,04 mg/dia, variando entre 6,07-10 mg/dia) tinham um genótipo 18 heterozigótico AG e os que necessitavam de doses mais elevadas (média de 9,11 mg/dia, variando entre 8,57-10 mg/dia) estavam associados ao genótipo homozigótico GG. Em pacientes escolhidos aleatoriamente (Exemplo 2) , o genótipo AA está associado a uma dose de manutenção (2,61 ± 1,10 mg/dia) menor do que a dos pacientes associados aos genótipos AG e GG (3,81 ± 1,24 mg/dia). Estes intervalos de variação podem servir de pontos de partida para determinação das doses de varfarina. A sequência genómica do gene VKORC1 pode ser obtida no Genbank com o n° de admissão AY587020 (SEQ ID NO: 1; Figura 3) . A sequência de ARNm da isoforma 1 de VKORC1 está disponível com o número de admissão NM_024006.4. Nestas duas sequências, o local de inicio de transcrição é designado por +1, pelo que o polimorfismo do promotor indicativo da sensibilidade à varfarina, aqui descrito, poderia estar localizado na posição -1413. No entanto, de acordo com
recomendações recentes da 'Human Genome Variation Society (HGVS)' para a descrição das variações de sequências (http://www.genomic.unimelb.edu.au/mdi/mutnomen/), recomenda-se que o promotor SNP seja descrito tomando por referência A do códão de iniciação da tradução ATG. Ao abrigo desta nomenclatura, o A do códão ATG (Met), de iniciação da tradução, de NM__0 24 00 6 .4 ou AY587020 poderia estar na posição +1, 0 promotor SNP aqui descrito poderia estar na posição -1639, e o polimorfismo G>A desta posição poderia ser designado por "NM_024006.4:c.-1639G>A". Convém salientar que o polimorfismo -1639 G>A (ou mais rigorosamente "NM_024006.4:c.-1639G>A") desta memória descritiva é o mesmo polimorfismo -1413 G>A de acordo com a numeração tradicional da sequência do promotor. 19
Para além do polimorfismo especifico (v.g., AA, AG ou GG na posição -1639), os marcadores genéticos que estão ligados a cada um dos SNP especificos podem ser utilizados para se prever também a correspondente sensibilidade à varfarina. Isto deve-se ao facto de os marcadores genéticos próximos do SNP relevante terem tendência para serem segregados conjuntamente, ou para revelarem um desequilíbrio de ligação, com o SNP relevante. Em consequência, a presença destes marcadores (marcadores genéticos equivalentes) é um indicador da presença do SNP relevante, o que é indicador, por sua vez, do nível de sensibilidade à varfarina. 0 polimorfismo do promotor -1639 A > G do VK0RC1 está em desequilíbrio de ligação com o polimorfismo intrónico 1173 C>T de VK0RC1, recentemente descrito por D'Andrea et al. {21), e pode explicar, eventualmente, os resultados que levam a concluir que pacientes italianos com o genótipo 1173 TT necessitavam de uma dose diária média menor do que os de genótipos CT ou CC. 0 nosso estudo também comprovou que o polimorfismo 3730 (isto é, rs7294) G > A que está localizado na região 3' não traduzida, está em desequilíbrio de ligação com -1639 A > G e 1173 C > T na população chinesa. Dito de forma concreta, o alelo 3730G está associado ao alelo -1639A e ao alelo 11731. Outros marcadores genéticos equivalentes do -1639 SNP compreendem o rs9934438 (intrão 1), o rs8050894 (intrão 2) e o rs2359612 (intrão 2). Assim, o -1639A está ligado com T em rs9934438, com C em rs8050894, com T em rs23596l2 e com G em rs7294, ao passo que o -1639G está ligado com C em rs9934438, com G em rs8050894, com C em rs2359612 e com A em rs7294. 20 O marcador genético equivalente pode ser qualquer marcador, incluindo os microssatélites e os marcadores de polimorfismo de nucleótidos singulares (SNP). De preferência, os marcadores genéticos úteis estão a uma distância de 200 kb, ou menos, da posição -1639 do VKORC1. Mais preferencialmente, os marcadores estão a cerca de 100 kb, 80 kb, 60 kb, 40kb, 20 kb, 15 kb, 10 kb ou 5 kb, ou menos, da posição -1639 do VKORC1.
Um dos aspectos da presente invenção proporciona oligonucleótidos que são capazes de hibridar para se obter os SNP da presente invenção. O oligonucleótido irá ser útil, por exemplo, como sonda de hibridação ou como iniciador para a detecção da sequência do promotor do gene VKORC1. O oligonucleótido compreende, preferencialmente, a sequência TGGCCGGGTGC (3668 a 3678 da SEQ ID NO: 1), ou o seu complemento. Com a finalidade de se fazer a hibridação, é preferível que a sequência correspondente à posição -1639 esteja próxima do centro do oligonucleótido. De preferência, há pelo menos 4 nucleótidos em cada lado da sequência correspondente a -1639. A posição correspondente a -1639 é, mais preferencialmente, flanqueada pelo menos por 5, 6, 7, 8 ou 9 nucleótidos em cada lado.
As hibridações são efectuadas normalmente em condições restringentes, por exemplo, com uma concentração salina não superior a 1 M e a uma temperatura não inferior a 25°C. Por exemplo, as condições correspondentes a 5xSSPE (750 mM NaCl, mM fosfato de Na, mM EDTA, pH 7,4) e a uma temperatura de 25-30°C, ou as correspondentes condições equivalentes, são adequadas para hibridações de sondas especificas de nucleótidos. Mais preferencialmente, faz-se uma lavagem em condições menos restringentes após a 21 hibridação, a qual consiste em trabalhar, por exemplo, a 42°C, 5xSSC e com 0,1% de SDS; ou a 50°C, 2xSSC e com 0,1% de SDS. As condições de trabalho de elevado rigor são mais preferíveis e prevêem, por exemplo, que se trabalhe a 65°C, com 0,lxSSC e com 0,1% de SDS. É possível determinar condições equivalentes fazendo variar um ou vários dos parâmetros, conforme é sabido na especialidade, mantendo simultaneamente um grau semelhante de identidade ou de similaridade entre a sequência de nucleótidos destinatária e o iniciador ou sonda utilizados. O promotor -1639 de SNP está localizado numa Caixa E (a sequência de consenso das caixas E é CANNTG) e a menos de uma curta distância (200 bp) há mais três caixas E suplementares. Demonstrou-se que as caixas E são elementos importantes na mediação da transcrição, específica dos tipos de células/tecidos, por exemplo, nos músculos, neurónios, fígado e pâncreas (28, 29). Modificando a segunda base de A para G, conforme observado no local -1639, poderia abolir o consenso da caixa E e alterar a actividade do promotor. Isto foi claramente demonstrado pelo ensaio com o promotor, que permitiu concluir que nas células HepG2 a actividade do promotor aumentou 44% quando as sequências de consenso foram abolidas (figura 2) . Sem se pretender impor qualquer limitação de natureza teórica, isto sugere que a caixa E pode funcionar como um local de ligação do repressor em células HepG2. Uma vez que as células HepG2 são provenientes de um hepatoma, é provável que a caixa E -1639 reprima a transcrição no fígado. O facto de as pessoas com o genótipo -1639 GG necessitarem de uma dose mais elevada de varfarina pode ser explicado conforme a seguir se indica. O gene VKORC1 22 codifica a subunidade 1 do complexo de vitamina K e epóxido-redutase, que é responsável por regenerar a forma reduzida de vitamina K. A forma reduzida de vitamina K é solicitada pela γ-carboxilase e a γ-carboxilação dos factores de coagulação dependentes da vitamina K (factores II, VII, IX e X) é essencial para a coagulação do sangue. Quando a actividade do promotor de VK0RC1 aumenta, um nivel elevado de ARNm de VK0RC1 pode conduzir a uma maior actividade de VKOR (25) e aumentar, consequentemente, a eficiência de regeneração da vitamina K reduzida. Deste modo, a γ-carboxilação dos factores de coagulação, dependentes da vitamina K, aumenta devido ao nivel mais elevado de vitamina K reduzida. A varfarina actua bloqueando a síntese dos factores de coagulação e pelo facto de haver factores de coagulação mais activos poderia fazer com que fosse necessária mais varfarina para que houvesse o seu efeito anticoagulante. Uma vez que o fígado é o órgão primário para a síntese de factores de coagulação dependentes da vitamina K e a expressão do VK0RC1 atinge o seu valor máximo no fígado, é provável que uma alteração de 44% no nível de VK0RC1 no fígado tenha um impacto significativo no processo de coagulação do sangue. Assim, as necessidades de dosagem de varfarina estão associadas ao polimorfismo do gene VK0RC1 e à sua actividade promotora.
Fazemos observar que qualquer sequência na posição -1639 do promotor de VK0RC1, diferente da de um A, irá destruir a caixa E e aumentar a actividade do promotor. Por sua vez, um aumento da actividade do promotor vai aumentar as necessidades de dosagem de varfarina. Posto isto, a sequência do promotor, em particular a sequência na posição -1639 é um indicador das dosagens de varfarina. Mais ainda, outras 23 variantes da presente invenção proporcionam processos para determinação das doses de varfarina, ou para determinação da sensibilidade à varfarina, mediante a detecção da actividade promotora do gene de VK0RC1. De igual modo, o nivel de produto génico do gene VK0RC1 (quer seja ARNm ou proteina) ou de actividade de VKOR também pode reflectir as necessidades de dosagem de varfarina. A actividade do promotor de VK0RC1, o nivel de ARNm, o nivel de proteínas ou a actividade de VKOR, que é pelo menos 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% ou 40% superior à de um paciente com o genótipo AA, é um indicador da necessidade de se prescrever uma dose de varfarina superior à necessária para o paciente com o genótipo AA.
Os processos para a determinação das actividades do promotor ou dos niveis de ARNm ou de proteínas são perfeitamente conhecidos na especialidade. Em determinados casos, é possível recorrer à PCR para se detectar o nivel de ARNm. Noutros casos, são utilizados anticorpos específicos para medir a proteína VKORC1. As actividades do promotor podem ser examinadas, por exemplo, isolando a sequência do promotor a partir do paciente relevante, recorrendo a uma amostra de sangue periférico, ligando a sequência do promotor a um gene repórter, expressando o gene repórter e determinando a quantidade de repórter produzido. Os processos para a medição das actividades de VKOR também são perfeitamente conhecidos na especialidade.
Os exemplos a seguir apresentados servem para ilustrar a invenção e não devem ser considerados, de forma alguma, como limitativos do âmbito da presente invenção. Embora a presente invenção seja particularmente apresentada e descrita tomando como referência as suas variantes preferenciais, faz-se observar aos especialistas na matéria 24 que é possível introduzir diversas modificações, no que diz respeito à forma e pormenores, sem que haja afastamento do espírito e âmbito da invenção, tal como definida nas reivindicações anexas.
EXEMPLOS
Nos exemplos subsequentes, são utilizadas abreviaturas que possuem as significações a seguir indicadas. As abreviaturas não definidas têm as significações geralmente aceites. °C = graus Celsius hr = hora min = minuto seg ou s = segundo μΜ = micromolar mM = milimolar M = molar mL = mililitro pL = microlitro mg = miligrama pg = micrograma mol = mole pmol = picomole ASO = oligonucleótido específico do alelo CYP2C9 = citocromo P450, subfamilia IIC, polipeptido 9 INR = índice internacional normalizado LD = desequilíbrio de ligação NTP = nucleósido-trifosfato PBS = soluto salino tamponado com fosfato PCR = reacção em cadeia com polimerase SNP = polimorfismo nucleotídico pontual 25 VK0RC1 = complexo de vitamina K e epóxido-redutase, subunidade 1
Materiais e métodos
Pacientes
Foram recrutados 16 pacientes que receberam varfarina em dose baixa ou alta em clinicas cardiovasculares pertencentes a quatro centros médicos importantes em Taiwan (National Taiwan University Hospital, Kaohsiung Medicai University Hospital, Taipei General Veteran Hospital e Shin-Kong Wu Ho-Su Memorial Hospital). A dose média de manutenção de varfarina em pacientes chineses é de 3,3 mg/dia (8, 9) . Assim sendo, considerámos que os pacientes que receberam uma dose de manutenção d 1,5 mg por dia eram sensíveis à varfarina (Quadro 1, 11 pacientes) e os pacientes que receberam uma dose de manutenção h 6 mg por dia foram considerados como resistentes à varfarina (Quadro 1, 5 pacientes) . A definição de paciente resistente à varfarina fundamentou-se no facto de sabermos que nenhum dos pacientes seleccionados aleatoriamente (Quadro 2) tinha uma dose de varfarina superior a 6 mg/dia. Isto está em contraste com os pacientes caucasianos que tinham uma dose de manutenção média compreendida entre 5,1 e 5,5 mg/dia (20, 27) .
Calculou-se a dose média diária de varfarina a partir de um período de uma semana e registou-se o último índice internacional normalizado (INR) de cada paciente. Os 104 pacientes seleccionados aleatoriamente, que receberam varfarina, independentemente da dose, tinham um intervalo de variação dos índices INR entre 1,4 e 3 para os mesmos 4 26 hospitais (Quadro 2). As prescrições de varfarina corresponderam a: substituição de válvulas (90 pacientes), trombose das veias profundas (5 pacientes), fibrilação arterial (5 pacientes) e colapso cardíaco (4 pacientes). Obteve-se informação clínica para cada participante (incluindo idade, sexo, massa corporal e dose média diária de manutenção) . No momento da colheita de amostras sanguíneas, cada paciente havia recebido uma dose de manutenção constante, pelo menos durante 3 semanas. Os pacientes com cancros de fígado, rim e gastrintestinais, ou com problemas hemorrágicos anormais, antes da terapia com varfarina, foram excluídos.
Além disso, foram utilizadas amostras de ADN de 92 caucasianos não tratados (N° de Cat., HD100CAU, National Institute of General Medicai Sciences (NIGMS) Human Genetic Cell Repository, Camden, NJ, EUA), como voluntários de referência caucasianos. Foram utilizadas amostras de ADN de 95 voluntários saudáveis, seleccionados aleatoriamente a partir de um banco de referências biológicas, utilizados como elementos de referência para a etnia chinesa, ao abrigo de um estudo populacional à escala nacional, em que foram recrutados 3312 descendentes de chineses de Han com base na distribuição geográfica em Taiwan. Os indivíduos de referência chineses e todos os pacientes participantes que receberam uma terapia com varfarina eram chineses de Han sem qualquer relação entre si, residentes em Taiwan. Os chineses de Han formam o maior grupo étnico em Taiwan, constituindo genericamente 98% da população. Nenhum dos participantes era aborígene de Taiwan, os quais representam os restantes 2% da população de Taiwan. 27 0 estudo foi aprovado pelo órgão institucional competente, tendo sido obtida a anuência explicita de todos os participantes.
Sequenciação de ADN e genotipificação de polimorfismo de nucleótidos pontuais (SNP
Isolou-se ADN genómico utilizando um sistema de purificação de ADN "PUREGENE™" (Gentra Systems, Minnesota, EUA) . Em primeiro lugar, fez-se a determinação das sequências de ADN de CYP2C9 e VK0RC1, por sequenciação directa (analisador de ADN 3730 da Applied Biosystems, Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) em 16 pacientes chineses de Han que revelavam sensibilidade 1,5 mg/dia, 11 pacientes) e resistência 6,0 mg/dia, 5 pacientes) à varfarina. Os iniciadores foram concebidos especificamente para as junções de tipo intrão-exão, para os exãos e para os 2 kpb a montante do local de inicio da transcrição para ambos CYP2C9 e VKORC1, utilizando o programa para o iniciador de PCR 'Primer3' (http://fokker.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi). Os iniciadores utilizados para detectar as variantes no promotor de VKORC1 foram: 5'-CAGAAGGGTAGGTGCAACAGTAA (SEQ ID NO:2; cadeia de sentido directo localizada 1,5 kb a montante do local de inicio da transcrição) e 5' -CACTGCAACTTGTTTCTCTTTCC (SEQ ID NO: 3; cadeia anti-sentido localizada 0,9 kb a montante do local de inicio da transcrição). As reacções em cadeia com polimerase (PCR) foram efectuadas num volume final de 25 pL, contendo 0,4 μΜ de cada iniciador, 10 mM de Tris-HCl (pH 8,3), 50 mM de KC1, 1,5 mM de MgCl2, 0,2 mM dos dNTP e 1 unidade de Taq™ de HotStart (Qiagen Inc, Valência, CA, EUA) . As condições de amplificação consistiram numa 28 desnaturação inicial durante 12 minutos a 96°C, seguindo-se 34 ciclos de PCR em 30 segundos a 96°C, 30 segundos a 60°C e 40 segundos a 72°C.
Recorreu-se então à espectrometria de massa 'MALDI-TOF' (Sistema SEQUENOM MassARRAY, Sequenom, San Diego, CA, EUA) para se fazer a despistagem das variantes identificadas em 104 pacientes chineses seleccionados aleatoriamente que receberam varfarina, 95 voluntários chineses normais e 92 voluntários caucasianos normais. Dito de forma abreviada, os iniciadores e as sondas foram concebidos utilizando a aplicação informática 'SpectroDESIGNER' (Sequenom). Efectuou-se a PCR multiplex e os dNTP não incorporados foram desfosforilados utilizando fosfatase alcalina de camarão (Hoffman-LaRoche, Basileia, Suíça), seguindo-se o prolongamento dos iniciadores. As reacções de prolongamento dos iniciadores purificados foram distribuídas por pontos sobre uma pastilha de silício elementar 384 (SpectroCHIP, Sequenom), analisadas com o espectrómetro de massa 'Bruker Biflex III MALDI-TOF
SpectroREADER' (Sequenom) e depois fez-se o processamento do espectro resultante com o aparelho 'SpectroTYPER' (Sequenom).
Ensaio repórter de luciferase
Construção do plasmídeo
Para se analisar a actividade do promotor de VKORC1, efectuou-se em primeiro lugar a clonagem do promotor de VKORC1, que abrange o polimorfismo -1639 (desde -1798 até -35) de pacientes com os genótipos -1639 AA e -1639 GG, num vector 'pGEM-T Easy' (Promega, Madison, WI, EUA), sendo o iniciador directo o seguinte: 5'-ccgctcgagtagatgtgagaaacagcatctgg (SEQ ID NO:4; contendo o local de restrição Xhol), e sendo o 29 iniciador inverso o seguinte: 5'-cccaagcttaaaccagccacggagcag (SEQ ID N0:5; contendo um local de restrição HindlII). 0 fragmento que continha o promotor de VK0RC1 foi libertado do vector 'pGEM-T Easy' fazendo digerir esse vector com as enzimas de restrição Xhol e HindlII e depois foi subclonado nos locais múltiplos de clonagem (Xhol e HindlII) do vector básico pGL3 (Promega). 0 vector pGL-3 contém o ADNc codificado para a luciferase do pirilampo, que ao ser fundido com um promotor pode ser utilizado para analisar a actividade do promotor inserido após transfecção em células de mamíferos. 0 vector que contém o genótipo -1639 G/G recebeu a designação de pGL3-G e o vector que contém o genótipo -1639 A/A recebeu a designação de pGL3-A. As sequências do promotor de VK0RC1 em ambos os vectores foram confirmadas por análise de sequenciação directa.
Cultura de células e ensaio duplo do repórter de luciferase
Manteve-se células HepG2 a desenvolverem-se em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) contendo 10% de soro fetal de vitelo enriquecido com penicilina na concentração de 100 unidades /mL, estreptomicina na concentração de 100 pg/mL e 2 mM de L-glutamina. Vinte e quatro horas antes da transfecção, efectuou-se uma inoculação de 1,5 x 105 células em cada cavidade de uma placa de 12 cavidades. No dia da transfecção, cada cavidade foi co-transfectada com 1,5 pg do vector pGL3 e 50 ng do vector pRL-TK (Promega), utilizando lipofectamina 2000 (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA, EUA). O vector pRL-TK codificava a luciferase de Renilla transcrita por um promotor HSV-TK que foi utilizado como referência interna para normalizar a expressão da luciferase do pirilampo. Decorridas quarenta e 30 oito horas após a transfecção, as células foram desmembradas por citólise em tampão de lise passivo (Promega). Acrescentou-se o lisado celular ao substrato de luciferase (sistema duplo repórter de luciferase, Promega) e efectuou-se a medição das actividades das luciferases do pirilampo e de Renilla com um luminómetro (SIRIUS,
Pforzheim, Alemanha).
Análise estatística
Efectuou-se a contagem das frequências dos genótipos de cada SNP. Utilizou-se o teste do X quadrado para comparar as frequências dos genótipos de cada SNP para os três grupos de amostragem. Efectuou-se o teste T e o teste de Wilcoxon-Mann-Whitney para fazer as comparações múltiplas dos níveis das doses médias entre os diferentes grupos genotípicos. Avaliou-se o desequilíbrio das ligações intermarcadores, fazendo duas medições, D' e r2, sendo os cálculos feitos utilizando o algoritmo 'Graphical OverView of Linkage Disequilibrium' (GOLD, http://www.sph.umich.edu/csg/abecasis/GOLD/). EXEMPLO 1
Variantes das sequências de ADN de CYP2C9 e VKORC1 em pacientes chineses seleccionados com sensibilidade ou resistência à varfarina A dose média de manutenção de varfarina nos chineses é de 3,3 mg/dia (8, 9). Assim sendo, considerou-se que os pacientes que receberam uma dose de manutenção ^ 1,5 mg por dia eram sensíveis à varfarina (Quadro 1, 11 pacientes) e que os pacientes que receberam uma dose de manutenção de varfarina > 6 mg por dia era resistentes à varfarina 31 (Quadro 1, 5 pacientes, ver Materiais e Métodos para obter mais pormenores). A sequenciação de regiões codificadores, as junções exão-intrão e a região promotora do gene de CYP2C9 revelaram a existência de três variantes de sequências em 4 dos 11 pacientes sensíveis à varfarina. As variantes foram: 1075 A > C (1359L conhecido por CYP2C9*3), 895 A > G (T299A) e 1145 C > T (P382L) . O CYP2C9*3 foi detectado em 3 pacientes (indivíduos 1, 3 e 5, Quadro 1). O indivíduo 5, para além de CYP2C9*3, também tinha a modificação 895 A > G (T299A), conforme anteriormente descrito (7). Foi detectada uma nova mutação exónica 1145 C >T (P382L) , no quarto paciente (indivíduo 6) . Conforme se observa no quadro 1, as variantes do gene de CYP2C9 não estavam presentes em todos os pacientes sensíveis à varfarina e estavam totalmente ausente em todos os pacientes resistentes à varfarina.
Quadro 1. Demografia dos pacientes e variantes das sequências de ADN identificadas.
Caso n° >Grupo (dose Dose INR Idade (mg(d) (anos) sensível à varfarina ^1,5 mg/dia, n= 11) Sexo Massa corporal (kg) VK0RC1 -1639 VK0RC1 1173 #CYP2C9 (variantes) 1 0,71 3,23 65 F 42 AA TT CYP2C9*3 2 1 2, 69 74 M 65 AA TT normal 3 1 3,23 70 M 66 AA TT CYP2C9*3 4 1,25 1,5 84 F 50 AA TT normal 5 1,25 1, 96 68 M 75 AA TT CYP2C9*3 895A>G (T299A) 6 1,25 2,5 71 F 70 AA CT 11450T (P382L) 32 32 Caso n° Dose (mg(d) INR Idade (anos) Sexo Massa corporal (kg) VKORC1 -1639 VKORC1 1173 #CYP2C9 (variantes) 7 1,25 2 71 F 80 AA TT normal 8 1,25 2,9 72 F 67 AA TT normal 9 1,25 1,59 67 M 58 AA TT normal 10 1,43 2, 05 58 F 42 AA TT normal 11 1,5 2,24 61 M 65 AA TT normal
Grupo resistente à varfarina (dose ^6 mg/dia, n= =5) 12 6, 07 2, 82 48 F 52 AG CT normal 13 8,57 2, 09 63 F 58 GG CC normal 14 8,75 2,32 26 M 88 GG CC normal 15 10 1,3 46 M 64 AG CT normal 16 10 2,33 58 F 61 GG CC normal
Efectuamos também a sequenciação do promotor, das regiões codificadoras e das junções exão-intrão do gene VK0RC1. Foi detectada uma variante (3730 G>A) que estava localizada na região não traduzida de 3' (UTR) de VKORC1. Além disso, foi detectado um polimorfismo do promotor, -1639 G > A (ou -1413, utilizando o local de inicio de transcrição como sendo +1) na região de montante do VKORC1. Este polimorfismo revelou uma associação com a sensibilidade à varfarina, na medida em que todos os pacientes sensíveis à varfarina eram homozigóticos AA na posição -1639. Por outro lado, os pacientes resistentes à varfarina revelaram ser ou heterozigóticos AG ou homozigóticos GG (Quadro 1) . Quando se traçou um gráfico das doses de varfarina, em função dos genótipos -1639, ficou demonstrado que os pacientes com o genótipo AA tinham necessidade de doses mais baixas (média de 1,19 mg/dia, intervalo entre 0,71-1,50 mg/dia), os heterozigóticos AG tinham uma necessidade de doses intermédias (média de 8,04 33 mg/dia, intervalo entre 6,07-10 mg/dia) e os homozigóticos de genótipo GG tinham necessidade da dose mais elevada (média de 9,11 mg/dia, intervalo entre 8,57-10 mg/dia) (figura 1).
Para além de -1639 G > A, também foi identificado nos nossos pacientes um polimorfismo 1173 C > T do intrão 1, já descrito por D'Andrea et ai. (27). Estes dois polimorfismos pareciam estar em forte desequilíbrio de ligação (LD) (Quadro 1). Concluiu-se que os pacientes sensíveis à varfarina, com o genótipo -1639 AA, estavam associados ao genótipo 1173 homozigótico TT, com excepção de um paciente (indivíduo 6) . Nos pacientes resistentes à varfarina, concluiu-se que os pacientes com o genótipo -1639 heterozigótico AG estavam associados ao genótipo 1173 heterozigótico CT e verificou-se também que os homozigóticos -1639 GG estavam associados aos homozigóticos 1173 TT (Quadro D · EXEMPLO 2
Polimorfismo -1639 G>A de VKORC1 em pacientes chineses aleatórios que receberam varfarina
Para se investigar melhor se o polimorfismo -1639 G > A estava associado com as diferenças interindividuais nas dosagens de varfarina, fez-se a genotipificação de 104 pacientes que receberam varfarina independentemente da dose, recorrendo à espectrometria de massa 'MALDI-TOF'. Os grupos AA e AG/GG não apresentaram diferenças respeitantes à idade, sexo e INR (Quadro 2) . Verificou-se que apenas dois pacientes eram homozigóticos para GG, tendo sido agrupados conjuntamente com os AG para análise estatística. Efectuamos 34 a análise dos dados independentemente da presença de outras variáveis perturbadoras, tais como a dieta e outras medicações. Conforme se observa do Quadro 2, o grupo AA teve necessidade de doses significativamente menores (2,61 mg/dia) do que o grupo AG/GG (3,81 mg/dia). As diferenças foram significativas quer pelo teste T (p< 0,0001) quer pelo teste de Wilcoxon Mann Whitney (p = 0,0002) entre os grupos AA e AG/GG.
Quadro 2. Doses médias e outras caracteristicas clinicas de pacientes seleccionados aleatoriamente, classificados pela resposta à varfarina, de acordo com os genótipos.
Genótipo VKORC1-1639 Dose de varfarina (mg/dia) INR Idade (anos) Sexo (M/F) AA (n=83) 2,61 ± 1,10a 2, 03 ± 0,45 57,5 ± 14,8 43/40 AG+GG (n=21) 3,81 ± 1,24 2, 08 ± 0,47 60,4 ± 13,1 13/8 a valor P de comparação entre os grupos AA e AG+GG. Valor P <0,0001 utilizando o teste T. Valor P = 0,0002 utilizando o teste de Wilcoxon Mann Whitney. Os dados representam a média ± DP . EXEMPLO 3
Frequências dos genótipos do polimorfismo -1630 G>A de VKORC1 e variantes de CYP2C9 em chineses e caucasianos
Sabe-se que a população chinesa necessita de uma dose de manutenção de varfarina muito menor do que a população de caucasianos. Para se testar se as diferenças nas frequências do genótipo -1639 de VKORC1 poderiam ser responsáveis pelas diferenças interétnicas nas dosagens de varfarina, efectuou- 35 se a genotipificação de 95 voluntários chineses normais de Han e de 92 voluntários normais caucasianos. Na população caucasiana, o genótipo homozigótico AA revelou a frequência mais baixa, ao passo que os genótipos AG e GG constituíram a maior parte da população (respectivamente 14,2%, 46,7% e 39,1%, Quadro 3). Pelo contrário, na população chinesa, o genótipo homozigótico AA constitui a maior parte da população (82,1%), sendo a parte restante da população de genótipo heterozigótico AG (17,9%). Não foi detectado nenhum genótipo homozigótico GG nesta população seleccionada aleatoriamente. Esta proporção foi também semelhante nos 104 pacientes testados com varfarina, em que se conclui que 79,8% eram homozigóticos AA, 18,3% eram heterozigóticos AG e a parte restante de 1,8% eram homozigóticos GG. As diferenças nas frequências de genótipos entre o grupo caucasiano e os dois grupos chineses foram significativas, com valores P inferiores a 0,0001. Estas diferenças entre os dois grupos étnicos (caucasianos e chineses) e a correlação AA com a sensibilidade à varfarina estão em concordância com a observação clinica de que a população chinesa necessita de uma dose menor do que a população caucasiana.
Quadro 3. Frequências de genótipos do polimorfismo do promotor de VKORC1 (-1639 G>A) e de variantes de CYP2C9 em chineses e caucasianos.
Genótipo
Caucasianos (n=92)
Chineses (n=95)
Pacientes chineses tratados com varfarina, seleccionados aleatoriamente (n=104) VKORC1 -1639
AA 13 (14,2%) 78 (82,1%) 83 (79, 8%) 36
Genótipo AG GG Caucasianos (n=92) 43(46,7%) 36 (39, 1%) Chineses (n=95) 17 (17,9%) 0 (0%) Pacientes chineses tratados com varfarina, seleccionados aleatoriamente (n=104) 19(18,3%) 2(1,9%) Variantes de CYP2C9 2C9*1*2 20,4% 0 (0%) 0 (0%) 2C9*2*2 0,9% 0 (0%) 0 (0%) 2C9*1*3 11, 6% 7 (7,3%) 4 (5,4%) 2C9*3*3 0,4% 0 (0%) 0 (0%)
Valor P <0,0001, comparação entre populações caucasianas e chinesas.
Valor P <0,0001, comparação entre pacientes caucasianos e chineses tratados com varfarina, seleccionados aleatoriamente.
Valor P = 0,817, comparação entre pacientes chineses e pacientes tratados com varfarina, escolhidos aleatoriamente. a O CYP2C9*1 é o tipo selvagem do CYP2C9. Os CYP2C9*2 e CYP2C9*3 são variantes em que a cistina substitui a arginina no resíduo 144 e a leucina substitui a isoleucina no resíduo 359, respectivamente. As frequências nos caucasianos foram obtidas a partir de dados publicados (17). b A frequência do CYP2C9*3 foi obtida por genotipificação de 74 pacientes tratados com varfarina.
Para além de -1639 G > A, efectuamos o rastreio de três polimorfismos intrónicos (rs9934438, intrão 1 1173 C > T; rs8050894, intrão 2 g.509+124C; e rs2359612, intrão 2 g.509+837C) e de um polimorfismo 3' UTR (rs7294, 3730 G > A) na população chinesa. Todos os quatro polimorfismos estavam em desequilíbrio de ligação com o polimorfismo do promotor -1639 (intermarcador D' e valores r2 = 1,0).
Também foram genotipifiçadas as variantes de CYP2C9 nos grupos chineses. A frequência do CYP2C9*l/*3 foi de 7,3% na população chinesa normal e de 5,4% nos chineses seleccionados aleatoriamente que receberam varfarina. A 37 variante CYP2C9*2 não foi detectada nos pacientes chineses nem nos indivíduos de referência. Comparativamente com os dados publicados sobre a frequência da variante CYP2C9 nos caucasianos, a população caucasiana apresentou uma frequência das variantes CYP2C9 muito mais elevada do que a população chinesa (aproximadamente 30% contra 7%) , se bem que os caucasianos sejam mais resistentes à varfarina. Não foram encontradas outras mutações de sentido incorrecto nos pacientes sensíveis à varfarina, 895 A > G (T299A) e 1145 C > T (P382L) (Quadro 1), em nenhum dos pacientes seleccionados aleatoriamente nem nos indivíduos de referência, sugerindo isso que tais mutações são raras. EXEMPLO 4
Actividade do promotor de VKORC1
As diferenças entre a sensibilidade à varfarina nos pacientes de genótipos AA e GG poderiam ser explicadas pelas modificações na actividade do promotor de VKORC1. O promotor SNP -1639 estava localizado no segundo nucleótido de uma caixa E (CANNTG) e por tal motivo este polimorfismo poderia alterar a sequência de consenso da caixa E e poderia levar a modificações na actividade do promotor de VKORC1. Para se testar esta hipótese, amplificou-se por PCR o promotor de VK0RC1 que abrange a posição -1639, proveniente de pacientes com o genótipo -1639 AA ou GG e efectuou-se a sua clonagem no vector pGL-3. Foi escolhida a célula HepG2 (uma linhagem de células de hepatoma humano) para o ensaio do promotor, uma vez que o VKORC1 é expresso ao nível mais elevado no fígado. Efectuou-se um total de 9 experiências e todas elas levaram a resultados consistentes 38 (traduzidos na figura 2) . 0 promotor de -1639 G do VK0RC1 revelou actividade de luciferase superior (aproximadamente 44% superior) comparativamente com o promotor de -1639 A. 0 vector básico pGL-3 de controlo não tinha nenhum promotor inserido no local de clonagem múltiplo e revelou uma quantidade desprezável de actividade de luciferase. Assim sendo, a sequência na posição -1639 é importante para a actividade do promotor e uma actividade mais elevada do promotor (v.g., -1639G) está associada a necessidades maiores de doses de varfarina. EXEMPLO 5
Combinação de VKORC1 -1639 SNP e de variantes de CYP2C9 na dosagem com varfarina
Embora o VK0RC1 -1639 SNP por si só possa ser utilizado para se prever a sensibilidade à varfarina, este SNP pode ser combinado facultativamente com outros marcadores genéticos. Por exemplo, a presença simultânea do gene VK0RC1 e do gene de CYP2C9 pode ser examinada na dosagem com varfarina. 0 quadro subsequente ilustra as doses sugeridas de Coumadin para cada haplotipo quando estes genes são considerados simultaneamente: 39 VK0RC1 -1639 Variantes de CYP2C9 Dose sugerida (mg/dia) GG *1 5 *2 3,75 *3 3,75 AG *1 3,75 *2 2,5 *3 2,5 AA *1 2,5 *2 1,25 *3 1,25 40 LISTAGEM DAS SEQUÊNCIAS <110> Academia Sinica sensibilidade à <120> Variantes genéticas que prevêem varfarina
<130> JB/070217/JH <140> EP 05855433.8 <141> 2005-12-21 <150> US 60/638,837 <151> 2004-12-21 <150> US 60/679,694 <151> 2005-05-10 <160> 5 <170> FastSEQ para Windows Versão 4.0 <210> 1 <211> 11190 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 1 41 cagaggacaa catagatagg ttcggagact actcagagaa agggagagag aatgctaggt 6 0 tatctttcag ctgttttagc tgcttattgt tccagcttta gccaccatct gactgcaatt 120 gtatgagcca gaaatagcca ggtaaaattg tcttcccaaa ttcctagtgc acaaaaactg 180 tcagaggctg ggggcagtgg ctcactcctg taatcccagc agcactttgg gaagccaggg 240 tgggagaaet gcttgagccc aggagttaga ggcaacataa caacaactca tctctaatga 300 aaaaaaaaaa aaaagaaaga aaaaggccag gcacagtggc tcacgcctgt aatcccagca 360 ctttaggaag ccaaggaggg tggatcatga ggtcaggagt ttgagaccag cctggccaat 420 atggtgaaac cccgtctcta ctaaaaacac aaaaatcagc cacgcatagt ggctggtgcc 480 tgtaatcaca gctactcagg aggctaaggc aggagaatca cttgaatccg ggaggcagag 540 gttgcagtga gccgagattg caccactgca tttcagcctg ggcagcagag tgggactgtc 600 tcacattaat taattaattg attaaatgct agaagaaaat atggtcaaaa tcttttataa 660 ctcttggagt gaggaaggca atctcggctc actacaactt ccacctcccg ggttcaaatg 720 attctcctgc ctcagcctcc tgagtagctg ggattacagg cacccaccac catgcccggc 780 taatttttgt atttttagta gagacgaggt ttcgccatgt tggccaagct tgtcttaaac 840 tcctgacctc aggtgatcca cccacctcag cctcccaaat tgctgggatt acaggcatga 900 gccaccatgc cccgcctaat tttaaaaatg tttataaaga cagagtctta ccacgttgtc 960 cagacctgtc tcaaactcct gggctcaagt cattgtcttg tctcagcctc ccaaagttct 1020 gggactacag gtgtgcacca ccacacctgg ctaattttgt ttatttttta tagagtgagg 1080 gtctccctgt gttgtccagg gtgtctcaaa ctcctgggct caagtggtcc tcctgcctca 1140 gcctcccaaa gtgctgggat tataggcata agccactgca cctggcccca gtgtgtgtct 1200 tctgaggcta agtcataaag agattgcggc ttctattttg cttcctctta gatcactcat 1260 tctgggggaa accaacaata aataacagga acacaccagg agatcagaga aagctgagat 1320 acaggcctaa tgcccagtcc tctgtattca tttctaattg ctgctgtaac aagttactgc 1380 acatttaatg atgtaaaaca acacaaattt atcttacagt tctgtagctt agaagtctga 1440 cagagtctca ctgggctgaa atcaagatgt tgatagttcc ttcccggtga ctctagagtg 1500 agaatccagt tctttaccct ttcttgcctt tagaggccac ccgtatttat tagctcacaa 1560 tccccttcct ccatcttcaa accagaaaca ttgcagctct ctgtgtcttt tttctttact 1620 cacatctccc tctgactttc ttctgccatc ctccttcatt ttttaaggac ccctgtgggc 1680 caggcatggt ggcttatgcc tgtaatccca gcactttgag aggcggaggc aggcgggtca 1740 cctgaggtca ggagttccag accagcctgg ccaacatggc aaaaccccat ctccactgaa 1800 aatacaaaaa ttgggccagg cacggcggct cacacccgta atccccatac tttgagaggc 1860 tgaggcaggt ggatcacttg aggtcaggag ttcaagacca gcctggccaa catggtgaaa 1920 42 tcccgtctct actaaaaaaa aaaaaaatta caataattag tcaggcgtgg tggccagcac 1980 ctataatccc agctacttgg gaggttgagg cacaagaatt gcttgaaccc gagaggggga 2040 ggttgcagtg agctgagatt gcaccaccgt actccagcct ggatgacaga gcaagactct 2100 gtctcaaaat aaaaattaag ataaataata aaaaataaat aaaaatcagc aaattaggcc 2160 aggtgtggtg gtggctcatg cctgtactcc cagcactttg aggtgggaag gttgcttgaa 2220 accagaagtt tagaccagcc tgggaaacaa agtgagaccc catctctaca aaaataaaaa 2280 taaattagcc aggtgtggtg ggacgtactt gtactcctag ctactaggga ggctgaggtg 2340 caagaatcgc ttgaacctgg gagacggagg ttgcagtgag ttatgacagt gccactacac 2400 tccagcctgg gtgtcaaggg tctttgaaaa aataaacaaa ataggctggg cgtggtggct 2460 tacacttgta atcccagcac tttgggaggc tgaggcaggc agatcacaaa gtcaggagtt 2520 cgagaccagc ctggccaaca cagtgaaacc ccgtctctac taaaaataca aaaattagcc 2580 aggcatggtt gcacgcgcct gtagtcccaa ctgctcggga ggctgaggca ggagaatggc 2640 ttgaacctgg gggggggcgg aagttataat gagccaagat tgtgccactg cactccagcc 2700 taggcaacag agcgagactc cgtctcaaaa ataaaaataa aaataaatca atagagcctg 2760 gtatgatggc tcacgcctat aatcccagca ctttgggagg cccaggtggg tggatcatct 2820 gaggtcagga gtttgagacc agcctgacca acatggagaa accccatctc tactaaaaat 2880 acaaaaaatt agccaggcgt ggtggcacat gcctataatc ccagctactc aggagcctga 2940 ggcaggagaa tcgctttaac cggggaggtg gaggttgcgg tgagtcgaga tagcaccatt 3000 gcattctagc ctgggcaaca agagcaaaac tccatctcaa aaataaataa ataaatagat 3060 agataggctg ggcacggtgg ctcacgcctg taatcccagc actttgggag gccgaggtgg 3120 gcggatcacc tgaggtcagg agttcaagac cagcctggcc aatatagcga aaccctgtct 3180 ctactaaaaa tttaaaaaat tagccaggca tgatggcggg tgcctgtaat cccagctact 3240 cgggaggctg aggcaggaga atctctcgaa cctggcaggc ggaggttgca gtgagccgag 3300 atcacaccat tgcactccag ttgggcaaca agagcgaaac tccacctcaa aaacaaaata 3360 aaataaaata aaatcaggag attggtcagc ttaattccat ctgcaacctt aattcccttt 3420 tggccattta acctatcata ttcacaagtt ccagggattc atgcagggac atctttggtg 3480 accattattc tgtctaccac actctctaga agagagtaga tgtgagaaac agcatctgga 3540 gagggaggag ccagcaggag agggaaatat cacagacgcc agaggaagag agttcccaga 3600 agggtaggtg caacagtaag ggatccctct gggaagtcaa gcaagagaag acctgaaaaa 3660 caaccattgg ccgggtgcgg tggctcacgc ctataatcct agcattttgg gaggccgagg 3720 tgggtggatc acttgaggtc aggagtttaa gacaagcctg gccaacatgg tgaaaccctg 3780 tctctactaa aaatacaaaa attagccaga catggtggca ggcacctgta gtccaaacta 3840 cttgggaggc tgaggcacga gaaccacttg aaccctggag gcggaagttg cagtgagccg 3900 agatggcacc gctgcactcc agcctgggcg acagagtgag actccgtctc aaaataagta 3960 aataaataaa taaataacca ttgggtctag cgtcttggtg acaccagcca ctaggtgtca 4020 gggcaatgct ggaggcagca gctagtttat ggcgtgggca gcaaggaaga agtgaggaag 4080 tagagactgg gagtgtagaa tctttccaaa aacttgaatg tggaggggta gatgggataa 4140 tgccgggaga ggaggctggt gaaggacctc ttagtgaagg gagatttgtt gctgtttctg 4200 agatgggaaa gagaaacaag ttgcagtgta gatggggagg atggagaggt tgaaggtgta 4260 ggagagatgg gtcaccatca gatgggacgt ctgtgaagga gagacctcat ctggcccaca 4320 gcttggaaag gagagactga ctgttgagtt gatgcaagct caggtgttgc caggcgggcg 4380 ccatgatagt agagaggtta ggatactgtc aagggtgtgt gtggccaaag gagtggttct 4440 gtgaatgtat gggagaaagg gagaccgacc accaggaagc actggtgagg caggacccgg 4500 gaggatggga ggctgcagcc cgaatggtgc ctgaaatagt ttcaggggaa atgcttggtt 4560 cccgaatcgg atcgccgtat tcgctggatc ccctgatccg ctggtctcta ggtcccggat 4620 gctgcaattc ttacaacagg acttggcata gggtaagcgc aaatgctgtt aaccacacta 4680 acacactttt ttttttcttt tttttttttg agacagagtc tcactctgtc ggcctggctg 4740 gagtgcagtg gcacgatctc ggctcactgc aacctccggc tccccggctc aagcaattct 4800 cctgcctcag cctcccgagt agctgggatt acaggcatgt gccaccacgc ccggctaatt 4860 tttgtatttt tagttgagat ggggtttcac catgttggcg aggctggtct tgaactcctg 4920 acctcaggta atccgccagc ctcggcctcc caaagtgctg ggattacaag cgtgagccac 4980 cgtgcccggc caacagtttt taaatctgtg gagacttcat ttcccttgat gccttgcagc 5040 cgcgccgact acaactccca tcatgcctgg cagccgctgg ggccgcgatt ccgcacgtcc 5100 cttacccgct tcactagtcc cggcattctt cgctgttttc ctaactcgcc cgcttgacta 5160 gcgccctgga acagccattt gggtcgtgga gtgcgagcac ggccggccaa tcgccgagtc 5220 agagggccag gaggggcgcg gccattcgcc gcccggcccc tgctccgtgg ctggttttct 5280 ccgcgggcgc ctcgggcgga acctggagat aatgggcagc acctggggga gccctggctg 5340 ggtgcggctc gctctttgcc tgacgggctt agtgctctcg ctctacgcgc tgcacgtgaa 5400 ggcggcgcgc gcccgggacc gggattaccg cgcgctctgc gacgtgggca ccgccatcag 5460 ctgttcgcgc gtcttctcct ccaggtgtgc acgggagtgg gaggcgtggg gcctcggagc 5520 43 agggcggcca ggatgccaga tgattattct ggagtctggg atcggtgtgc ccggggaacg 5580 gacacggggc tggactgctc gcggggtcgt tgcacagggg ctgagctacc cagcgatact 5640 ggtgttcgaa ataagagtgc gaggcaaggg accagacagt gctggggact gggattattc 5700 cggggactcg cacgtgaatt ggatgccaag gaataacggt gaccaggaaa ggcggggagg 5760 caggatggcg gtagagattg acgatggtct caaggacggc gcgcaggtga aggggggtgt 5820 tggcgatggc tgcgcccagg aacaaggtgg cccggtctgg ctgtgcgtga tggccaggcg 5880 ttagcataat gacggaatac agaggaggcg agtgagtggc cagggagctg gagattctgg 5940 ggtccagggc aaagataatc tgcccccgac tcccagtctc tgatgcaaaa ccgagtgaac 6000 cgttatacca gccttgccat tttaagaatt acttaagggc cgggcgcggt ggcccactcc 6060 tgtaatccca gcactttggg aggccgaggc ggatggatca cttgaagtca ggagttgacc 6120 agcctggcca acatggtgaa agcctgtctc taccaaaaat agaaaaatta atcgggcgct 6180 atggcgggtg ccttaatccc agctactcgg gggggctaag gcaggagaat cgcttgaacc 6240 cgggaggcgg aggtttcagt gagccgagat cgcgccactg cactccagcc tgggccagag 6300 tgagactccg tctcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa agagacttac ttaaggtcta 6360 agatgaaaag cagggcctac ggagtagcca cgtccgggcc tggtctgggg agaggggagg 6420 atagggtcag tgacatggaa tcctgacgtg gccaaaggtg cccggtgcca ggagatcatc 6480 gacccttgga ctaggatggg aggtcgggga acagaggata gcccaggtgg cttcttggaa 6540 atcacctttc tcgggcaggg tccaaggcac tgggttgaca gtcctaacct ggttccaccc 6600 caccccaccc ctctgccagg tggggcaggg gtttcgggct ggtggagcat gtgctgggac 6660 aggacagcat cctcaatcaa tccaacagca tattcggttg catcttctac acactacagc 6720 tattgttagg tgagtggctc cgccccctcc ctgcccgccc cgccccgccc ctcatccccc 6780 ttggtcagct cagccccact ccatgcaatc ttggtgatcc acacagctga cagccagcta 6840 gctgctcatc acggagcgtc ctgcgggtgg ggatgtgggg aggtaactaa caggagtctt 6900 ttaattggtt taagtactgt tagaggctga agggccctta aagacatcct aggtccccag 6960 gttttttgtt tgttgttgtt ttgagacagg gtctggctct gttgcccaaa gtgaggtcta 7020 ggatgccctt agtgtgcact ggcgtgatct cagttcatgg caacctctgc ctccctgccc 7080 aagggatcct cccaccttag cctcccaagc agctggaatc acaggcgtgc accactatgc 7140 ccagctaatt tttgtttttg tttttttttg gtagagatgg tgtctcgcca tgttgcccag 7200 gctggtctca agcaatctgt ctgcctcagc ctcccaaagt gctgggggga ttacaggcgt 7260 gagctaccat gccccaccaa caccccagtt ttgtggaaaa gatgccgaaa ttccttttta 7320 aggagaagct gagcatgagc tatcttttgt ctcatttagt gctcagcagg aaaatttgta 7380 tctagtccca taagaacaga gagaggaacc aagggagtgg aagacgatgg cgccccaggc 7440 cttgctgatg ccatatgccg gagatgagac tatccattac cacccttccc agcaggctcc 7500 cacgctccct ttgagtcacc cttcccagct ccagagaagg catcactgag ggaggcccag 7560 caccacggtc ctggctgaca catggttcag acttggccga tttatttaag aaattttatt 7620 gctcagaact ttccctccct gggcaatggc aagagcttca gagaccagtc ccttggaggg 7680 gacctgttga agccttcttt tttttttttt ttaagaaata atcttgctct gttgcccagg 7740 ctggagtgca gtggcacaat catagctcac tgtaacctgg ctcaagcgat cctcctgagt 7800 agctaggact ataggcatgt cactgcaccc agctaatttt tttttttttt tttttttttt 7860 ttttgcgaca tagtctcgct ctgtcaccag gctggagtgc agtggcacga tcttggctca 7920 ctgcaacctc tgcctcccgg gttcaagcaa ttttcctgcc tcagcctcct gagtagctgg 7980 gactacaggc gcgtgtcacc acgcccagct aatttttgta tttttagtgg agacagggtt 8040 tcaccatgtt ggctaggatg gtctcaatct cttgacctgg tgatccatcc gccttggcct 8100 cccaaagtgc taggattaca ggcgtgagtc aacctcaccg ggcatttttt ttttgagacg 8160 aagtcttgct cttgctgccc aagctggaat gtggtggcat gatctcggct cactgcaacc 8220 tccacctcct aggttcaagc gattctccac cttagcctcc ccagcagctg ggattacagg 8280 tgcccatcaa cacacccggc taatttttgt atttttatta gagatggggt tttgccatgt 8340 tggccaggct gctctcgaac tcctaacctc aggtgatcca cccccattgg cctcccaaaa 8400 tactgggatt acaggcatga gccaccgtgc ccagctgaat ttctaaattt ttgatagaga 8460 tcgggtcttt ctatgttgcc caagctggtc ttgaactcct agcctaaagc agtcttccca 8520 cctcggcctc ccagagtgtt tggaatacgt gcgtaagcca ccacatctgc cctggagcct 8580 cttgttttag agacccttcc cagcagctcc tggcatctag gtagtgcagt gacatcatgg 8640 agtgttcggg aggtggccag tgcctgaagc ccacaccgga ccctcttctg ccttgcaggt 8700 tgcctgcgga cacgctgggc ctctgtcctg atgctgctga gctccctggt gtctctcgct 8760 ggttctgtct acctggcctg gatcctgttc ttcgtgctct atgatttctg cattgtttgt 8820 atcaccacct atgctatcaa cgtgagcctg atgtggctca gtttccggaa ggtccaagaa 8880 ccccagggca aggctaagag gcactgagcc ctcaacccaa gccaggctga cctcatctgc 8940 tttgctttgg catgtgagcc ttgcctaagg gggcatatct gggtccctag aaggccctag 9000 atgtggggct tctagattac cccctcctcc tgccataccc gcacatgaca atggaccaaa 9060 tgtgccacac gctcgctctt ttttacaccc agtgcctctg actctgtccc catgggctgg 9120 44 tctccaaagc tctttccatt gcccagggag ggaaggttct gagcaataaa gtttcttaga 9180 tcaatcagcc aagtctgaac catgtgtctg ccatggactg tggtgctggg cctccctcgg 9240 tgttgccttc tctggagctg ggaagggtga gtcagaggga gagtggaggg cctgctggga 9300 agggtggtta tgggtagtct catctccagt gtgtggagtc agcaaggcct ggggcaccat 9360 tggcccccac ccccaggaaa caggctggca gctcgctcct gctgcccaca ggagccaggc 9420 ctcctctcct gggaaggctg agcacacacc tggaagggca ggctgccctt ctggttctgt 9480 aaatgcttgc tgggaagttc ttccttgagt ttaactttaa cccctccagt tgccttatcg 9540 accattccaa gccagtattg gtagccttgg agggtcaggg ccaggttgtg aaggtttttg 9600 ttttgcctat tatgccctga ccacttacct acatgccaag cactgtttaa gaacttgtgt 9660 tggcagggtg cagtggctca cacctgtaat ccctgtactt tgggaggcca aggcaggagg 9720 atcacttgag gccaggagtt ccagaccagc ctgggcaaaa tagtgagacc cctgtctcta 9780 caaaaaaaaa aaaaaaaaaa aattagccag gcatggtggt gtatgtacct atagtcccaa 9840 ctaatcggga agctggcggg aagactgctt gagcccagaa ggttgaggct gcagtgagcc 9900 atgatcactg cactccagcc tgagcaacag agcaagaccg tctccaaaaa aaaacaaaaa 9960 acaaaaaaaa acttgtgtta acgtgttaaa ctcgtttaat ctttacagtg atttatgagg 10020 tgggtactat tattatccct atcttgatga tagggacaga gtggctaatt agtatgcctg 10080 agatcacaca gctactgcag gaggctctca ggatttgaat ccacctggtc catctggctc 10140 cagcatctat atgctttttt ttttgttggt ttgtttttga gacggacttt cgctcttgtt 10200 gtccaggctg gagtgcaatg gcacaatttc ggctcaccac aacctccacc tcccaggttc 10260 aagtgattct cctgcctcag cctcccgagt agctgggatt acaggcatgc gccaccaggc 10320 ctggctaatt ttgtattttt agtagagaca gtgtttctct atgttggtca ggctggtctc 10380 gcactcccga cctcaggtga tctgcctgct ttggcctccc aaagtgctgg gattacaggc 10440 gtgagccacc atgcccggcc agcatctata atatatgcta aaccttaccc acagctgcct 10500 ctgtcttggg gtcagggttc ttgaatggtc tgggccagcc tgagttagga gtgggaagag 10560 gaagaggagg cacgcgccaa agtgttcttc ccgcctgacc gagtcctctg cgcctatgag 10620 gaaggtgggc accgctgtca ccctgtttcc caggaagcca gcaggcccag ggagatactg 10680 ggatttgcca aaggctcaca gcgagcaagc agcagtgggt gctggctcct caccactcag 10740 cctggcacac actgtctctg agcagacctg ggagaaggca tgtgaaaccc acctagccct 10800 ggctggaaga gaagtggggg agtggaaatg aaaagtgggg actgggagga gctgcccacg 10860 tgccctccat ggttccagga tggcactttc atgctgggag tgagcttgcc ctgtgccagg 10920 ctgtcattga gacgttttcc attcaacaac tgtttctcag acaaggcaca ggcaggttag 10980 ctctcccagg ccactcaagt agtaaggaaa cagatttaaa cccagacaat ttggctccac 11040 ggctaaggcc cagagagggg tggtgacaag cctagggtca cacagccaca gccccagagc 11100 taggaactgc tggctagggc aagcagacag ctgaatccta gccaactgga ggtggagcag 11160 aggtggagcc agggagaccc aggtggcctc 11190
<210> 2 <211> 23 <212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Sequência de iniciador utilizada para detectar as variantes no promotor de VK0RC1 <400> 2 cagaagggta ggtgcaacag taa 23 45 <210> 3 <211> 23 <212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Sequência de iniciador utilizada para detectar as variantes no promotor de VK0RC1 <400> 3 cactgcaact tgtttctctt tcc 23 <210> 4 <211> 32 <212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> iniciador directo contendo um local de restrição XhoI <400> 4 ccgctcgagt agatgtgaga aacagcatct gg 32 <210> 5 <211> 27 <212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0>
<223> iniciador inverso contendo um local de restrição HindiII <400> 5 cccaagctta aaccagccac ggagcag 27
REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pela requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o IEP não assume nenhuma responsabilidade.
Patentes de invenção citadas na descrição • WO 2006044686 A [0006] • WO 2005030039 A [0006] • EP 05855433 A [0060] • US 60638837 B [0060] • US 60679694 B [0060
Literatura citada na descrição, para além das patentes de invenção • Hirsh, J. Antithrombotic therapy in deep vein thrombosis and pulmonary embolism. Am. Heart J., 1992, vol. 123, 1115-1122 [0002] • Laupacis, A.; Albers, G.; Dalen, J.; Dunn, M.; Feinberg, W.; Jacobson, A. Antithrombotic therapy in atrial fibrillation. Chest, 1995, vol. 108, 352S-359S [0002] • Stein, P.D. ; Alpert, J.S.; Copeland, J.; Dalen, J.E.; Goldman, s.; Turpie, A.G. Antithrombotic therapy in patients with mechanical and biological prosthetic heart valves. Chest, 1995, vol. 108, 371S-379S [0002] 47 • Hirsh, J.; Dalen, J.; Anderson, D.R.; Poller, L.; Bussey, H.; Ansell, J.; Deykin, D. Oral anticoagulants: mechanism of action, clinicai effectiveness, and optimal therapeutic range. Chest, 2001, vol. 119, 8S-21 S [0002] • Loebstein, R.; Yonath, H.; Peleg, D.; Almog, S.; Rotenberg, M.; Lubetsky, A.; Roitelman, J.; Harats, D.; Halkin, H.; Ezra, D. Interindividual variability in sensitivity to warfarin—Nature or nurture?. Clin. Pharmacol. Ther., 2001, vol. 70, 159-164 [0002] • Takahashi, H.; Wilkinson, G.R.; Caraco, Y.; Muszkat, M.; Kim, R.B.; Kashima, T.; Kimura, S.; Echizen, H. Population differences in S-warfarin metabolism between CYP2C9 genotype-matched Caucasian and Japanese patients. Clin. Pharmacol. Ther., 2003, vol. 73, 253-263 [0002] • Zhao, F.; Loke, C.; Rankin, S.C.; Guo, J.Y.; Lee, H.S.; Wu, T.S.; Tan, T. ; Liu, T. C .; Lu, W.L.; Lim, Y. T. et al.
Novel CYP2C9 genetic variants in Asian subjects and their influence on maintenance warfarin dose. Clin. Pharmacol. Ther., 2004, vol. 76, 210-219 [0002] • Yu, H.C.; Chan, T.Y.; Critchley, J.A.; Woo, K.S. Factors determining the maintenance dose of warfarin in Chinese patients. QJM, 1996, vol. 89, 127-135 [0002] • Xie, H.G.; Kim, R.B.; Wood, A.J.; Stein, C.M. Molecular basis of ethnic differences in drug disposition and response. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 2001, vol. 41, 815-850 [0002] • Bogousslavsky, J.; Regli, F. Anticoagulant-induced intracerebral bleeding in brain ischemia. Evaluation in 200 patients with TIAs, emboli from the heart, and progressing stroke. Acta. Neurol. Scand., 1985, vol. 71, 464-471 [0002] 48 • Landefeld, C.S.; Beyth, R.J. Anticoagulant-related bleeding: clinicai epidemiology, prediction, and prevention. Am. J. Med., 1993, vol. 95, 315-328 [0002] • Gullov, A.L.; Koefoed, B.G.; Petersen, P. Bleeding Complications to Long-Term Oral Anticoagulant Therapy. J. Thromb. Thrombolysis, 1994, vol. 1, 17-25 [0002] • Kaminsky, L.S.; Dunbar, D. A.; Wang, P.P.; Beaune, P.; Larrey, D.; Guengerich, F.P.; Schnellmann, R.G.; Sipes, I.G. Human hepatic cytochrome P-450 composition as probed by in vitro microsomal metabolism of warfarin. Drug Metab. Dispôs., 1984, vol. 12, 470-477 [0002] • Rettie, A.E.; Korzekwa, K.R.; Kunze, K.L.; Lawrence, R.F.; Eddy, A.C.; Aoyama, T.; Gelboin, H.V.; Gonzalez, F.J.; Trager, W.F. Hydroxylation of warfarin by human cDNA-expressed cytochrome P-450: a role for P-4502C9 in the etiology of (S)-warfarin-drug interactions. Chem. Res. Toxicol., 1992, vol. 5, 54-59 [0002] • Kaminsky, L.S.; de Morais, S.M.; Faletto, M.B.; Dunbar, D.A.; Goldstein, J.A. Correlation of human cytochrome P4502C substrate specificities with primary structure: warfarin as a probe. Mol. Pharmacol., 1993, vol. 43, 234-239 [0002] • Xie, H.G.; Prasad, H.C.; Kim, R.B.; Stein, C.M. CYP2C9 allelic variants: ethnic distribution and functional significance. Adv. Drug. Deliv. Rev., 2002, vol. 54, 1257-1270 [0002] • Kirchheiner, J.; Brockmoller, J. Clinicai consequences of cytochrome P450 2C9 polymorphisms. Clin. Pharmacol. Ther., 2005, vol. 77, 1-16 [0002] • Furuya, H.; Fernandez-Salguero, P.; Gregory, W.; Taber, H.; Steward, A.; Gonzalez, F.J.; Idle, J.R. Genetic 49 polymorphism of CYP2C9 and its effect on warfarin maintenance dose requirement in patients undergoing anticoagulation therapy. Pharmacogenetics, 1995, vol. 5, 389-392 [0002] • Aithal, G.P.; Day, C.P.; Kesteven, P.J.; Daly, A.K.
Association of polymorphisms in the cytochrome P450 CYP2C9 with warfarin dose requirement and risk of bleeding complications. Lancet, 1999, vol. 353, 717-719 [0002] • Higashi, M.K.; Veenstra, D.L.; Kondo, L.M.; Wittkowsky, A.K.; Srinouanprachanh, S.L.; Farin, F.M.; Rettie, A.E. Association between CYP2C9 genetic variants and anticoagulation-related outcomes during warfarin therapy. JAMA, 2002, vol. 287, 1690-1698 [0002] • Nasu, K.; Kubota, T.; Ishizaki, T. Genetic analysis of CYP2C9 polymorphism in a Japanese population. Pharmacogenetics, 1997, vol. 7, 405-409 [0002] • Bell, R.G.; Matschiner, J.T. Warfarin and the inhibition of vitamin K activity by an oxide metabolite. Nature, 1972, vol. 237, 32-33 [0002] • Wallin, R.; Martin, L.F. Vitamin K-dependent carboxylation and vitamin K metabolism in liver. Effects of warfarin. J. Clin. Invest., 1985, vol. 76, 1879-1884 [0002] • Li, T.; Chang, C.Y.; Jin, D.Y.; Lin, P.J.; Khvorova, A.; Stafford, D.W. Identification of the gene for vitamin K epoxide reductase. Nature, 2004, vol. 427, 541-544 [0002] • Rost, S.; Fregin, A.; Ivaskevicius, V.; Conzelmann, E.; Hortnagel, K.; Pelz, H.J.; Lappegard, K.; Seifried, E.; Scharrer, I.; Tuddenham, E.G. et al. Mutations in VK0RC1 cause warfarin resistance and multiple coagulation factor deficiency type 2. Nature, 2004, vol. 427, 537-541 [0002] 50 • Harrington, D.J.; Underwood, S.; Morse, C.; Shearer, M.J.; Tuddenham, E.G.; Mumford, A. D. Pharmacodynamic resistance to warfarin associated with a Val66Met substitution in vitamin K epoxide reductase complex subunit 1. Thromb. Haemost., 2005, vol. 93, 23-26 [0002] • D'Andrea, G.; D'Ambrosio, R.L.; Di Perna, P.; Chetta, M.; Santacroce, R.; Brancaccio, V.; Grandone, E.; Margaglione, Μ. A polymorphism in the VKORC1 gene is associated with an interindividual variability in the dose-anticoagulant effect of warfarin. Blood, 2005, vol. 105, 645-649 [0002] • Massari, M.E.; Murre, C. Helix-loop-helix proteins: regulators of transcription in eucaryotic organisms. Mol. Cell Biol., 2000, vol. 20, 429-440 [0002] • Terai, S.; Aoki, H.; Ashida, K.; Thorgeirsson, S.S. Human homologue of maid: A dominant inhibitory helix-loop-helix protein associated with liver-specific gene expression. Hepatology, 2000, vol. 32, 357-366 [0002] • Bodin, L.; Verstuyft, C.; Tregouet, D.A.; Robert, A.; Dubert, L.; Funck-Brentano, C.; Jaillon, P.; Beaune, P.; Laurent-Puig, P.; Becquemont, L. et al. Cytochrome P450 2C9 (CYP2C9) and vitamin K epoxide reductase (VK0RC1) genotypes as determinants of acenocoumarol sensitivity. Blood, 2005, vol. 106 (1), 135-140 [0002] • Jones, K.A.; Kadonaga, J.T.; Rosenfeld, P.J.; Kelly, T.J.; Tjian, R. A cellular DNA-binding protein that activates eukaryotic transcription and DNA replication. Cell, 1987, vol. 48, 79-89 [0002] • Rieder, M. J.; A. P. Reiner et al. Effect of VK0RC1 haplotypes on transcriptional regulation and warfarin dose. N Engl JMed., 2005, vol. 352 (22), 2285-93 [0002] 51 • Geisen, C.; M. Watzka et al. VK0RC1 haplotypes and their impact on the inter-individual and inter-ethnical variability of oral anticoagulation. Thromb Haemost, 2005, vol. 94 (4), 773-9 [0002] • Veenstra, D. L.; J. H. You et al. Association of Vitamin K epoxide reductase complex 1 (VK0RC1) variants with warfarin dose in a Hong Kong Chinese patient population. Pharmacogenet Genomics, 2005, vol. 15 (10), 687-91 [0002] • Sconce, E. A.; T. I. Khan et al. The impact of CYP2C9 and VK0RC1 genetic polymorphism and patient characteristics upon warfarin dose requirements: proposal for a new dosing regímen. Blood, 2005, vol. 106 (7), 2329-33 [0002]
Lisboa 3/09/2010
Claims (8)
1 REIVINDICAÇÕES 1. Processo para prever o intervalo de dosagem de uma varfarina para um paciente humano, o qual compreende: investigar o nucleótido na posição 3673 da SEQ ID N0:1 do paciente; determinar se o paciente é sensível ou resistente à varfarina, com base no nucleótido da posição 3673; em que o genótipo homozigótico AA, heterozigótico AG e homozigótico GG na posição 3673 indica, respectivamente, que o paciente é sensível, medianamente sensível e resistente à varfarina; e prever um intervalo de dosagem de varfarina, com base na sensibilidade ou resistência do paciente à varfarina.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a sequência é investigada utilizando um oligonucleótido que híbrida especificamente com o promotor do gene VK0RC1.
3. Processo de acordo com a reivindicação 2, em que o oligonucleótido hibrida especificamente pelo menos com 6 nucleótidos que abrangem a posição 3673 da SEQ ID NO: 1.
4. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a sequência é investigada utilizando ADN preparado a partir do sangue periférico do indivíduo.
5. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o indivíduo é um asiático. 2
6. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o indivíduo é um caucasiano.
7. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o indivíduo é um africano, um afroamericano ou um hispânico.
8. Processo de acordo com a reivindicação 1, o qual consiste também em examinar a sequência do gene CYP2C9 e prever um intervalo de dosagem da varfarina para o paciente, com base no nucleótido na posição 3673 da SEQ ID N0:1 e da sequência do gene de CYP2C9. Lisboa, 3/09/2010
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US63883704P | 2004-12-21 | 2004-12-21 | |
| US67969405P | 2005-05-10 | 2005-05-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PT1831402E true PT1831402E (pt) | 2010-09-10 |
Family
ID=36602356
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PT05855433T PT1831402E (pt) | 2004-12-21 | 2005-12-21 | Variante genética de vkorc1 para prever a sensibilidade à varfarina |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20060166239A1 (pt) |
| EP (2) | EP1831402B1 (pt) |
| JP (1) | JP4516990B2 (pt) |
| KR (1) | KR101178463B1 (pt) |
| CN (1) | CN101142322B (pt) |
| AT (1) | ATE470725T1 (pt) |
| AU (1) | AU2005319028B2 (pt) |
| BR (1) | BRPI0519570A2 (pt) |
| CA (1) | CA2591840C (pt) |
| DE (1) | DE602005021821D1 (pt) |
| DK (1) | DK1831402T3 (pt) |
| ES (1) | ES2347167T3 (pt) |
| MX (1) | MX2007007568A (pt) |
| NZ (1) | NZ556461A (pt) |
| PL (1) | PL1831402T3 (pt) |
| PT (1) | PT1831402E (pt) |
| TW (1) | TWI334886B (pt) |
| WO (1) | WO2006069339A2 (pt) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004074456A2 (en) | 2003-02-20 | 2004-09-02 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods for selecting medications |
| US8688385B2 (en) | 2003-02-20 | 2014-04-01 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods for selecting initial doses of psychotropic medications based on a CYP2D6 genotype |
| PT2380985E (pt) * | 2003-09-23 | 2014-03-26 | Univ North Carolina | Células que expressam a vitamina k epóxido reductase e sua utilização |
| US7445896B2 (en) * | 2004-10-18 | 2008-11-04 | University Of Washington | Methods and compositions for detecting VKORC1 single nucleotide polymorphisms |
| CA2601574C (en) * | 2005-03-15 | 2014-12-02 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and compositions for producing active vitamin k-dependent proteins |
| EP1958111A4 (en) * | 2005-11-29 | 2009-07-08 | Childrens Hosp Medical Center | OPTIMIZATION AND INDIVIDUALIZATION OF THE SELECTION AND DOSAGE OF MEDICAMENTS |
| WO2007133506A2 (en) * | 2006-05-09 | 2007-11-22 | University Of Louisville Research Foundation , Inc. | Personalized medicine management software |
| US8039212B2 (en) * | 2007-11-05 | 2011-10-18 | Celera Corporation | Genetic polymorphisms associated with liver fibrosis, methods of detection and uses thereof |
| WO2010048020A1 (en) * | 2008-10-20 | 2010-04-29 | Epitome Pharmaceuticals Limited | Methods and systems for improved pharmaceutical intervention in coagulation control |
| KR101157135B1 (ko) * | 2008-12-29 | 2012-06-18 | 인제대학교 산학협력단 | 항응고제의 약물반응과 관련된 유전자의 변이 유전형 결정방법 |
| US20100227776A1 (en) * | 2009-03-05 | 2010-09-09 | The Ohio State University | Rapid Genotyping of SNPs |
| US8758997B2 (en) | 2010-06-01 | 2014-06-24 | Arkray, Inc. | Method for detecting polymorphism at nucleotide position-1639 of VKORC1 gene, and nucleic acid probe and kit therefor |
| EP2655607A4 (en) | 2010-12-21 | 2014-05-14 | Univ North Carolina | METHOD AND COMPOSITIONS FOR PRODUCING ACTIVE VITAMIN K-DEPENDENT PROTEINS |
| EP2708895B1 (en) * | 2012-08-21 | 2019-05-08 | Industrial Technology Research Institute | Method for identifying more than one target nucleic acid contained in a sample |
| CN103173443B (zh) * | 2013-03-22 | 2016-08-24 | 卫生部北京医院 | 包括1300a>t突变的cyp2c9基因片段、所编码的蛋白质片段及其应用 |
| BR112018015871B1 (pt) | 2016-12-09 | 2021-12-07 | The Broad Institute, Inc. | Sistema, método e dispositivo para detectar a presença de uma sequência alvo de ácido nucleico em uma amostra |
| JP2020513815A (ja) | 2017-03-15 | 2020-05-21 | ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド | クラスター化短鎖反復回文配列エフェクター系に基づくウイルス検出用診断法 |
| US11174515B2 (en) | 2017-03-15 | 2021-11-16 | The Broad Institute, Inc. | CRISPR effector system based diagnostics |
| US10249389B2 (en) * | 2017-05-12 | 2019-04-02 | The Regents Of The University Of Michigan | Individual and cohort pharmacological phenotype prediction platform |
| US20210371926A1 (en) | 2018-01-29 | 2021-12-02 | The Broad Institute, Inc. | Crispr effector system based diagnostics |
| US12618101B2 (en) | 2019-03-14 | 2026-05-05 | The Broad Institute, Inc. | Sherlock assays for tick-borne diseases |
| CN110592206A (zh) * | 2019-09-11 | 2019-12-20 | 上海交通大学 | 一种利用rs9934438检测华法药效的试剂盒 |
| KR102506347B1 (ko) | 2021-05-11 | 2023-03-03 | 충북대학교 산학협력단 | 와파린 치료에 따른 출혈 부작용 위험 예측용 다형성 마커 및 이를 이용한 와파린 치료에 따른 출혈 부작용 위험 예측 방법 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6492115B1 (en) * | 2000-06-02 | 2002-12-10 | Dna Sciences Laboratories, Inc. | Genetic typing of the human cytochrome P450 2A6 gene and related materials and methods |
| PT2380985E (pt) * | 2003-09-23 | 2014-03-26 | Univ North Carolina | Células que expressam a vitamina k epóxido reductase e sua utilização |
| AU2005295546B2 (en) * | 2004-10-18 | 2011-11-10 | University Of Washington | Methods and compositions for predicting drug responses |
| US7445896B2 (en) * | 2004-10-18 | 2008-11-04 | University Of Washington | Methods and compositions for detecting VKORC1 single nucleotide polymorphisms |
| US20080005732A1 (en) * | 2006-05-11 | 2008-01-03 | Coon Robert F | Method and System for Integrating Software Update Services with Software Applications |
-
2005
- 2005-12-21 AU AU2005319028A patent/AU2005319028B2/en not_active Expired
- 2005-12-21 CN CN2005800485213A patent/CN101142322B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2005-12-21 US US11/316,406 patent/US20060166239A1/en not_active Abandoned
- 2005-12-21 DK DK05855433.8T patent/DK1831402T3/da active
- 2005-12-21 MX MX2007007568A patent/MX2007007568A/es active IP Right Grant
- 2005-12-21 PT PT05855433T patent/PT1831402E/pt unknown
- 2005-12-21 KR KR1020077016947A patent/KR101178463B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2005-12-21 JP JP2007548549A patent/JP4516990B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2005-12-21 EP EP05855433A patent/EP1831402B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2005-12-21 NZ NZ556461A patent/NZ556461A/en unknown
- 2005-12-21 DE DE602005021821T patent/DE602005021821D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2005-12-21 AT AT05855433T patent/ATE470725T1/de active
- 2005-12-21 WO PCT/US2005/046869 patent/WO2006069339A2/en not_active Ceased
- 2005-12-21 CA CA2591840A patent/CA2591840C/en not_active Expired - Lifetime
- 2005-12-21 TW TW094145510A patent/TWI334886B/zh not_active IP Right Cessation
- 2005-12-21 BR BRPI0519570-5A patent/BRPI0519570A2/pt active Search and Examination
- 2005-12-21 ES ES05855433T patent/ES2347167T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2005-12-21 PL PL05855433T patent/PL1831402T3/pl unknown
- 2005-12-21 EP EP10165009A patent/EP2246445A1/en not_active Withdrawn
-
2010
- 2010-03-12 US US12/722,672 patent/US20110236885A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2006069339A3 (en) | 2006-10-12 |
| ES2347167T3 (es) | 2010-10-26 |
| WO2006069339A8 (en) | 2010-06-03 |
| US20060166239A1 (en) | 2006-07-27 |
| BRPI0519570A2 (pt) | 2009-01-27 |
| WO2006069339A2 (en) | 2006-06-29 |
| KR101178463B1 (ko) | 2012-09-07 |
| TWI334886B (en) | 2010-12-21 |
| JP2008523844A (ja) | 2008-07-10 |
| CN101142322B (zh) | 2011-09-21 |
| CA2591840C (en) | 2012-07-10 |
| JP4516990B2 (ja) | 2010-08-04 |
| CN101142322A (zh) | 2008-03-12 |
| EP1831402B1 (en) | 2010-06-09 |
| DE602005021821D1 (de) | 2010-07-22 |
| EP2246445A1 (en) | 2010-11-03 |
| CA2591840A1 (en) | 2006-06-29 |
| ATE470725T1 (de) | 2010-06-15 |
| MX2007007568A (es) | 2008-03-11 |
| PL1831402T3 (pl) | 2010-12-31 |
| EP1831402A2 (en) | 2007-09-12 |
| AU2005319028B2 (en) | 2010-09-16 |
| HK1117571A1 (en) | 2009-01-16 |
| DK1831402T3 (da) | 2010-09-20 |
| TW200637918A (en) | 2006-11-01 |
| US20110236885A1 (en) | 2011-09-29 |
| NZ556461A (en) | 2009-12-24 |
| AU2005319028A1 (en) | 2006-06-29 |
| KR20080005179A (ko) | 2008-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI334886B (en) | Genetic variants predicting warfarin sensitivity | |
| KR102694809B1 (ko) | Pnpla3 i148m 변이를 발현하는 환자의 간 질환의 치료에서의 hsd17b13의 저해 | |
| KR102043077B1 (ko) | 알파 ７ 니코틴성 아세틸콜린 수용체 활성화제 치료에 대한 반응성을 예측하는 바이오마커 | |
| CN101238222B (zh) | 作为2型糖尿病风险诊断标记物的tcf7l2基因的遗传变异体 | |
| TW200808976A (en) | Warfarin dosage prediction | |
| CN107602690B (zh) | 肺动脉高压相关的ptgis基因突变及其应用 | |
| KR20150023904A (ko) | 전립선암의 진단 및 치료에서의 마커의 용도 | |
| KR20220112290A (ko) | 안지오포이에틴 유사 4(angptl4) 관련 질환의 치료를 위한 올리고뉴클레오타이드 | |
| US20030099958A1 (en) | Diagnosis and treatment of vascular disease | |
| CA2651376A1 (en) | Method for diagnosis and treatment of a mental disease | |
| KR102102051B1 (ko) | 아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물 및 이를 이용한 아토피 피부염 예측또는 진단 방법 | |
| KR102003835B1 (ko) | 섬유증 감수성 il22ra2 유전자 및 이의 용도 | |
| KR20230057410A (ko) | Pcsk9 및 ldlr 조절인자를 사용한 패혈증 치료 | |
| KR102074157B1 (ko) | Itpkc 및 slc11a1 유전자 다형성을 이용한 가와사키병 발병 예측 방법 | |
| CN117836412A (zh) | 用含环状结构跨膜蛋白1(kremen1)抑制剂治疗骨矿物质密度降低的方法 | |
| CN117795076A (zh) | 用丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶15(map3k15)抑制剂治疗代谢病症的方法 | |
| US6780587B2 (en) | Methods for diagnosing Pseudoxanthoma elasticum | |
| CN116356008A (zh) | 先天性心脏病相关setd2基因新发变异位点及其应用 | |
| CN107119055A (zh) | 分子标志物bub1b基因及其应用 | |
| CN113825839A (zh) | 用固醇调节元件结合蛋白切割激活蛋白(scap)抑制剂治疗脂质水平升高 | |
| US20040138441A1 (en) | Novel gene functionally related to dyslexia | |
| JP2004000115A (ja) | 糖尿病の発症危険性判定方法 | |
| CA2441701C (en) | Detection of il4 and il13 polymorphisms in determination of type 1 diabetes susceptibility | |
| KR101261018B1 (ko) | 카바마제핀의 신경 약물부작용 예측용 단일염기다형 및 이를 이용한 예측 방법 | |
| KR20240043753A (ko) | Wnt 패밀리 구성원 5B(WNT5B) 저해제를 사용한 감소된 골밀도의 치료 |