PT655192E - Processo para a producao de microtuberculos de batata - Google Patents
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Description
6S5
"PROCESSO PARA A PRODUÇÃO DE MICROTUBÉRCULOS DE BATATA”
FUNDAMENTOS DO INVENTO
Campo do Invento O presente invento relaciona-se com um método para a produção de microtubérculos da batata pelo que microtubérculos grandes que podem ser plantados directamente no campo são produzidos de um modo eficiente.
Descrição da Técnica Afim
Um primeiro método para a produção de microtubérculos de batata que é utilizado popularmente nesta prática compreende os passos de fazer crescer plantas sem vírus e em seguida formar e fazer crescer microtubérculos.
Um segundo método é descrito no Pedido de Patente Exposta Japonesa No. 3-35738. O Pedido de Patente Exposta apresenta um processo para a produção de microtubérculos de batata compreendendo os três passos que se seguem: (A) Plantas de batata são obtidas por cultura de tecidos para produzir plantas sem vírus tendo caules e folhas (Iluminação: 1.000 - 100.000 lux durante 6-24 horas/dia, a 20 - 30° C); (B) As plantas são cultivadas a uma baixa temperatura (10 - 30° C)
<33*®**® durante um período diário curto (1.000 - 100.000 lux durante 12 horas ou menos), desse modo induzindo um estado no qual os rebentos apicais ou os rebentos axilares são convertidos em microtubérculos; C) Rebentos apicais ou axilares induzidos no passo anterior são convertidos em microtubérculos no escuro a uma baixa temperatura (10 - 30° C).
No segundo método, um passo de indução do estádio em que os rebentos apicais e os rebentos axilares são convertidos em microtubérculos a uma baixa temperatura e com períodos de dia curtos é inserido entre os dois passos do primeiro método. Este passo foi presumivelmente inserido tomando em consideração o facto da propriedade geral das batatas para a formação de microtubérculos ser induzida a uma temperatura baixa e com um período de dia curto, propriedade essa que é conhecida e descrita na literatura.
Assim, por meio de um segundo método, microtubérculos são de maneira eficaz produzidos por três passos, isto é, passo A: crescimento de plantas sem vírus; passo B: indução do estádio em que os rebentos apicais e os rebentos axilares são convertidos em microtubérculos; e passo C: formação e crescimento de microtubérculos.
Constitui um outro aspecto característico do segundo método o facto do passo C ser realizado a uma baixa temperatura no escuro. Em geral, a formação e crescimento dos microtubérculos são realizados no escuro ou num período de dia curto. Embora a razão pela qual a condição da temperatura baixa é indispensável não seja clara, isso deve-se provavelmente ao facto da formação de microtubérculos de batata ser promovida a uma temperatura baixa.
Parece ser verdade que a conversão em microtubérculos é promovida, e que o número de microtubérculos formado é aumentado, pelo tratamento com período de dia curto após o passo de caule e crescimento de folhas. Contudo, visto que a eficiência de produção de microtubérculos grandes (não inferiores a 0,5 g) que podem ser directamente plantadas no campo é baixa devido às razões que se seguem , este método não é prático.
No segundo método, subsequente ao passo de crescimento da planta, microtubérculos são induzidos a uma baixa temperatura e com um período de dia curto usando um meio igual ao usado no passo de crescimento da planta. Este meio apresenta um baixo conteúdo em açúcar, e imediatamente após a boca do meio com um meio tendo um elevado conteúdo em açúcar, as plantas da batata são cultivadas no escuro para formar microtubérculos. Visto que as plantas da batata são cultivadas num meio tendo um baixo conteúdo em açúcar a uma temperatura baixa com um período de dia curto no estádio em que o crescimento do caule e das folhas é activo, o crescimento das plantas não é bom, e mesmo que o número total de microtubérculos seja aumentado, o número de microtubérculos grandes é muito pequeno.
Como o crescimento de plantas e a indução do estádio de conversão em microtubérculos são realizados usando um meio de agar num recipiente pequeno (0,3 - 0,6 libo), a eficiência do crescimento das plantas é mais baixa que no caso em que a cultura é realizada por cultura líquida com arejamento usando um recipiente grande. Assim, a produção prática de microtubérculos grandes não pode ser conseguida por este método.
No pedido de patente exposta Japonesa (Kokai) No. 3-35738 (segundo método), as condições dos passos B e C são "a uma temperatura baixa e com um período de dia curto" e "no escuro a uma baixa temperatura" respecti-vamente. Assim, em ambos os passos, uma baixa temperatura é indispensável. -4-
Contudo, as condições de temperatura utilizadas nos dois exemplos são habitualmente condições de temperatura que são geralmente utilizadas na cultura de tecidos de batatas. As condições de temperatura situam-se também na gama conhecida utilizada na produção de microtubérculos. DE-A-37 34 257 descreve um processo para a cultura de microtubérculos in vitro, sendo uma estaca cultivada num meio de cultura que é enriquecido com uma fonte de carbono tal como sacarose a por exemplo 6 ou 8% (p/v), e sais minerais. É também incluído um material biologicamente activo adenina, o qual estimula a formação de tubérculos a uma concentração de 0,01 - 5 mg. A cultura é realizada com iluminação directa a partir de uma lampada do modo que se segue: os primeiros 5-7 dias com iluminação de mais de 12 horas, e os 2-3 meses seguintes com iluminação em ciclos repetidos, cada ciclo envolvendo dia de escuridão seguindo-se 2-5 dias de iluminação durante 4-6, 6-10 e 10-18 horas por dia.
RESUMO DO INVENTO
Um objectivo do presente invento consiste em proporcionar um método para a produção de microtubérculos de batata pelo qual microtubérculos que podem ser directamente plantados no campo são produzidos directamente. Isto é conseguido cultivando plantas da batata num meio contendo um elevado conteúdo em açúcar de 6-10% de açúcar durante 1 a 4 semanas sob um regime de iluminação cíclico; e cultivando as referidas plantas da batata no escuro até seerem produzidos microtubérculos.
Outro âmbito da aplicabilidade do presente invento tomar-se-á aparente a partir da descrição detalhada proporcionada mais abaixo. Contudo, - 5 -
deverá ser tomado em consideração que a descrição detalhada e exemplos específicos, ao indicarem apresentações preferidas do invento, são proporcionados apenas a título de ilustração, visto que várias alterações e modificações tomar-se-ão aparentes para os especialistas nesta técnica a partir desta descrição detalhada.
DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO A descrição detalhada que se segue é proporcionada para auxiliar os especialistas nesta técnica ao porem em prática o presente invento. Mesmo assim, a descrição detalhada que se segue não deve ser elaborada de modo a limitar indevidamente o presente invento, visto que modificações e variações nas apresentações aqui discutidas poderão ser feitas pelos especialistas nesta técnica sem se afastarem do espírito e âmbito do presente invento.
Tal como é utilizada mais abaixo, a frase "período do dia" inclui quer um período de dia curto quer um período de dia longo. "Período de dia curto" indica, de preferência, iluminação durante cerca de 6 a cerca de 12 horas, com maior preferência cerca de 7 a cerca de 10 horas, e com a maior preferência cerca de 8 horas durante um ciclo de crescimento de 24 horas. "Período de dia longo" indica, de preferência, iluminação durante cerca de 12 a cerca de 24 horas, com maior preferência cerca de 14 a cerca de 20 horas, e com a maior preferência cerca de 16 horas durante um ciclo de crescimento de 24 horas. -6-
Passo Π): Crescimento de plantas
Pequenas plantas de batata sem vírus que são feitas crescer essencialmente pelo método de Hussey et al. (1981) Ann. Bot. 48:787-796 são cortadas em estacas nodais, cada uma das quais contem um único nódulo (ou em secções contendo dois ou mais nódulos), cada um dos quais apresenta rebentos axilares e folhas. Os rebentos axilares crescem dando origem a plantas. As estacas nodais resultantes são colocadas nos recipientes indicados no Quadro 1, e plantas são feitas crescer por cultura líquida com arejamento a 18 - 25° C, de preferência 18 - 22° C, sob uma iluminação de 3.000 - 10.00 lux, de preferência 4.000 - 6.000 lux, durante 12-24 horas por dia (isto é, um período de dia longo). O meio pode ser meio de Murashige & Skoog's (Murashige et al. (1962) Phvsiol. Plant. 15:473-497, aqui a seguir referido como "meio MS"), contendo 2% (p/v) de sacarose, pH 5,8. Este meio é aqui em seguida referido como "meio de crescimento da planta". "White's Médium" (White (1963) The Cultivation of Animal and Plant Cells). "Linsmayer and Skoog's Médium" (Linsmayer and Skoog (1965) Phvsiol. Plant. 18:100-127) e outros meios de cultura de tecidos de plantas padrão podem também ser utilizados em vez de "meio MS". Como o açúcar (fonte de carbono) no meio, glucose, frutose, maltose, etc. podem ser utilizados em vez de sacarose. A concentração de açúcar pode variar entre 0,5-5%, de preferência 2-3%, e o pH pode variar entre 4-8, de preferência 5,5-6,5. O número de estacas nodais (explantes) cultivadas, a quantidade de meio, e a taxa de arejamento por recipiente diferem dependendo do tamanho do recipiente indicado no Quadro 1. O número de explantes pode ser 1-30, de preferência 10-20, por litro de meio. O volume de meio por 1 litro de recipiente pode ser de 0,1-0,5 litro, de preferência 0,2-0,3 litro. A taxa de arejamento pode se de 0,02 - 0,5 litro/litro.min., de preferência 0,2 - 0,4 litro/litro.min. Γ- ο43 C3 3 θ'
-8-
Foi soprado ar para o meio líquido no fundo do recipiente.
Nas 3-6 semanas a partir do início da cultura, as plantas cresceram usualmente até uma altura de cerca de 80% da altura do recipiente.
Passo (2): Indução do Estádio em Que Rebentos são Convertidos Em Micro-tubérculos
No passo acima mencionado, quando as alturas das plantas atingem cerca de 80% da altura do recipiente (não se verificam problemas se a altura for de pelo menos 50% da altura do recipiente), o meio restante é descartado e um meio contendo 6-10% (p/v) de açúcar, de preferência 7-9% (p/v) de açúcar, especialmente 8% (p/v) de açúcar, aqui a seguir referido como "meio formador de microtubérculos" é colocado no recipiente na quantidade indicada no Quadro 1. Açúcares úteis no presente passo incluem sacarose, glucose, frutose, e maltose. O meio pode ser qualquer um dos meios acima indicados no passo (1). Em seguida, as plantas são cultivadas durante 1-4 semanas num período de dia longo ou num período de dia curto. Se se desejar obter um certo número de microtubérculos pequenos, as plantas são vultivadas num período de dia curto durante cerca de uma semana; se se desejar obter microtubérculos grandes, as plantas são cultivadas num período de dia longo durante cerca de duas semanas. A intensidade da iluminação, temperatura, volume do meio, e a taxa de arejamento são iguais às do passo de crescimento das plantas (1) acima descrito.
Passo (3): Formação e Crescimento de Microtubérculos
Após o passo (2) acima descrito, as plantas são cultivadas durante 3-10 semanas, de preferência 5-9 semanas, em condições iguais às do passo (2), exceptuando o facto das plantas serem cultivadas no escuro, e dos microtubérculos serem colhidos. -9-
No método utilizando o período de dia curto, a formação de microtubérculos é observada antes ou após vários dias a partir do início da cultura no escuro. No método utilizando o período de dia longo, a formação de microtubérculos é observada após 1-2 semanas a partir do início da cultura no escuro. Após 4-5 semanas a partir do início da cultura no escuro, cada um dos microtubérculos cresce consideravelmente e em seguida o crescimento toma-se mais lento. Embora os microtubérculos possam ser colhidos após cerca de 5 semanas após o início da cultura no escuro, para se obter microtubérculos com maturidade, é preferível colher os microtubérculos depois de pelo menos uma parte dos caules e folhas terem iniciado a senescência.
Diferenças Entre o Presente Invento e Métodos de Técnicas Anteriores
Um aspecto característico do método do presente invento consiste no facto de se levarem as plantas a efectivamente absorverem um meio tendo um elevado conteúdo em açúcar sob iluminação de modo a absorverem e armazenarem suficientemente nutrientes nos caules e folhas de modo a que sejam produzidos de modo eficaz microtubérculos produzidos no passo de escuridão subsequente.
No segundo método convencional descrito supra, apenas o facto da formação de microtubérculos ser promovida "a baixa temperatura e sob período de dia curto" é tomado em consideração. Consequentemente, após o passo de plantas em crescimento, a conversão em microtubérculos é induzida "a uma baixa temperatura e sob um período de dia curto", e em seguida o meio é substituído com um meio apresentando um elevado conteúdo em sacarose, seguindo-se cultura das plantas no escuro para formar e fazer crescer microtubérculos. Assim, o segundo método convencional apenas considera a indução da formação de microtubérculos sob um período de dia curto. A ideia de promover o crescimento das plantas não é considerada. - 10-
No primeiro e segundo métodos convencionais, imediatamente após substituição do meio com um meio tendo um elevado conteúdo em açúcar para a formação de microtubérculos, as plantas são cultivadas no escuro para formar microtubérculos. Contudo, a absorção do meio pelas plantas é lento no escuro, e assim o meio enriquecido com nutrientes não é eficazmente absorvido pelas plantas. O método do presente invento ultrapassa estas desvantagens. O Passo (2) acima descrito não serve meramente para induzir a formação de microtubérculos submetidos a um período de dia curto. Neste passo, as plantas são cultivadas sob luz durante 1-4 semanas após mudança do meio para um meio tando um elevado conteúdo em açúcar de modo a levar as plantas a absorverem de um modo eficiente o meio contendo um nível elevado de nutrientes. Após armazenamento suficiente dos nutrientes nos caules e folhas as plantas são cultivadas no escuro para formarem microtubérculos. Visto que grandes quantidades de nutrientes são armazenadas nos caules e folhas, microtubérculos são formàdos de um modo eficiente.
Ou seja, antes da cultura das plantas no escuro, condição essa em que a absorção dos nutrientes é lenta, a energia para a formação e crescimento dos microtubérculos é armazenada nos caules e folhas sob a luz tanto quanto possível, e microtubérculos são então formados e feitos crescer eficientemente no escuro usando a energia armazenada.
Efeitos do Presente Invento
Aumento no Número Total de Microtubérculos Por Recipiente e Aumento no Número da Microtubérculos Grandes A eficiência da produção de microtubérculos pelo método do presente invento é mais elevada do que a dos primeiro e segundo métodos - 11 - convencionais (ver Quadro 2) em que microtubérculos são formados no escuro após substituição do meio com um meio tando um elevado conteúdo em sacarose após o tratamento sob um período de dia curto.
Embora o número total de microtubérculos incluindo microtubérculos pequenos com pesos não superiores a 0,1 g fosse maior no segundo método convencional do que o obtido pelo primeiro método convencional, o número de microtubérculos com pesos não inferiores a 0,1 g no segundo método convencional foi mais ou menos igual ao obtido pelo primeiro método convencional, e o número de microtubérculos com pesos não inferiores a 0,5g obtidos no segundo método convencional foi consideravelmente mais pequeno do que o obtido pelo primeiro método convencional. Assim, o segundo método convencional não é eficiente visto que aquilo que é desejado são microtubérculos tendo um peso não inferior a 0,5 g. Se o microtubérculo tiver um peso não inferior a 0,5 g, ele poderá ser plantado directamente e feito crescer no campo. Se o microtubérculo tiver um peso inferior a 0,5 g, o crescimento de uma planta a partir desse microtubérculo será lento caso seja plantado directamente no campo.
De acordo com uma apresentação do presente invento em que um período de dia de 8 horas é utilizado após substituição do meio, a eficiência de produção de microtubérculos tendo pesos não inferiores a 0,1 g foi muito mais elevada do que a obtida no primeiro e segundo métodos convencionais, e o número total de microtubérculos também aumentou. Além disso, o número de microtubérculos tendo pesos não inferiores a 0,5 g foi também maior.
De acordo com uma apresentação do presente invento em que se utiliza um período de dia de 16 horas após substituição do meio, o número de microtubérculos grandes tendo pesos não inferiores a 0,5 g ou não inferiores a 1 g foi muito maior do que o obtido pelo primeiro e segundo métodos convencionais. Além disso, o número de microtubérculos tendo pesos não inferiores a 0,1 g foi também maior.
Quadro 2: Efeitos da Iluminação Antes e Depois de Substituição do Meio; Variedade: Russet Burbank
- 13 -
Produção de Microtubérculos Maduros
Cultivando as plantas sob iluminação (5.000 lux) após substituição do meio, não somente os caules e as folhas se desenvolvem bem mas também o número de microtubérculos produzidos aumenta, e o meio é também rapidamente absorvido pelas plantas. Assim, o tempo ao qual as folhas e caules se tomaram amarelos e iniciaram a senescência no último estádio do passo de crescimento do microtubérculo foi precoce, sendo assim obtidos microtubérculos de elevada qualidade, maduros, apropriados para armazenamento e cultivo no campo.
Exemplo 1
Influência do Regime de Período de Dia na Produção de Microtubérculo Antes e Após Substituição do Meio
Plantas sem vírus feitas crescer esencialmente pelo método de Hussey et al. (1981) Ann. Bot. 48:787-796 (variedade: Russet Burbank, plantas armazenadas em Tissue-Grown Corporation foram feitas crescer) foram cortadas em estacas nodais, contendo cada uma delas um único nó, e oito estacas nodais foram colocadas em cada recipiente de vidro tendo um volume interior de 2 litros, um diâmetro de 13 cm, e uma altura de 18 cm, que continha 0,6 litro do meio para fazer crescer a planta. Esses recipientes de vidro são fornecidos por Carolina Biological Supply Company, e são aqui a seguir referidos como "recipientes 2L". As plantas foram cultivadas a 20° C sob iluminação de 5.000 lux durante 16 horas/dia e com uma taxa de arejamento de 0,35-0,4 litros/minuto.
As plantas cresceram até um comprimento médio de 15 cm após cerca de 4 semanas após o início da cultura. - 14-
Em seguida, foi realizado um dos passos a) a d) que se seguem: a) Após cultura das plantas durante 4 semanas nas condições acima descritas, o meio restante foi removido e substituído por 0,7 litro do meio formador de microtubérculo, e a cultura foi continuada durante mais 18 dias a 20° C sob uma iluminação de 5.000 lux durante 8 horas por dia com uma taxa de arejamento de 0,35-0,4 litros/mon. (o presente invento). b) Após cultura das plantas durante 4 semanas nas condições acima descritas, o meio foi substituído tal como no passo a) acima mencionado, e a cultura foi continuada durante mais 25 dias a 20° C sob uma iluminação de 5.000 lux durante 16 horas por dia com uma taxa de arejamento de 0,35-0,4 litro/minuto. (o presente invento). c) Após cultura das plantas durante 4 semanas nas condições acima descritas, a cultura foi continuada durante mais 17 dias nas mesmas condições, exceptuando o facto do período do dia mudar para 8 horas. Em seguida, o meio restante foi removido e 0,7 litro do meio formador de microtubérculo foi adicionado (segundo método convencional). d) A cultura nas condições acima descritas foi continuada durante 7 semanas e em seguida o meio foi substituído (primeiro método convencional, controlo).
Após um dos passos a) a d), as plantas foram cultivadas no escuro a 20° C com uma taxa de arejamento de 0,35-0,4 litros/minuto para formar microtubérculos. Os micro tubérculos foram colhidos durante a 9a semana a partir do início da cultura no escuro.
Os resultados são apresentados no Quadro 2, supra. Quando comparado com o primeiro método convencional (controlo), no método - 15- utilizando passo a) (isto é, 8 horas/dia de iluminação após substituição do meio), o número de microtubérculos tendo pesos não inferiores a 0,1 G e de não menos do que 0,5 g foi muito maior.
Pelo método utilizando o passo b) (isto é, 16 horas/dia de iluminação após substituição do meio), embora o número de microtubérculos tendo pesos não inferiores a 0,1 g não fosse tão diferente do obtido pelo primeiro método convencional (controlo), o número de microtubérculos grandes tendo pesos não inferiores a 0,5 g e não inferiores a 1 g foi muito maior. Assim, cultura sob iluminação após substituição do meio é altamente eficaz para a produção de microtubérculos.
Por outro lado, pelo segundo método convencional utilizando o passo c) (isto é, 8 horas/dia de iluminação antes da substituição do meio), embora tenha sido produzido um certo número de microtubérculos pequenos com pesos inferiores a 0,1 g (dados não indicados), o número de microtubérculos tendo pesos moleculares não inferiores a 0,1 g foi mais ou menos igual ao obtido no primeiro método convencional, e o número de microtubérculos com pesos não inferiores a 0,5 g foi consideravelmente mais pequeno do que o obtido no primeiro método convencional. Assim, o segundo método convencional não apresenta efeitos superiores em comparação com o primeiro método convencional (controlo).
Exemplo 2
As estacas nodais a partir de pequenas plantas da batata sem vírus (variedade: RUsset Burbank) foram colocadas nos recipientes e as plantas foram deixadas crescer durante 4 semanas do mesmo modo que no Exemplo 1, e o meio foi então substituído com o meio formador de microtubérculos. Em seguida, foi realizado um dos passos a) a d) que se seguem: - 16- a) As plantas foram cultivadas submetidas a um período de dia de 8 horas durante 1 semana sendo então cultivadas no escuro para formar microtubérculos (o presente invento). b) As plantas foram cultivadas submetidas a um período de dia de 8 horas durante 2 semanas sendo então cultivadas no escuro para formar microtubérculos (o presente invento). c) As plantas foram cultivadas submetidas a um período de dia de 16 horas durante 2 semanas sendo então cultivadas no escuro para formar microtubérculos (o presente invento). d) Imediatamente após a substituição do meio, as plantas foram cultivadas no escuro (primeiro método convencional, controlo).
Durante a 9a semana a seguir à substituição do meio, foram colhidos microtubérculos.
Neste exemplo, para além dos recipientes de 2L acima mencionados, recipientes de vidro tendo um volume interior de cerca de 4 litros com um diâmetro de 15 cm e uma altura de 22 cm (fornecido por Carolina Biological Supply Company, aqui a seguir referidos como "recipientes 4L") foram usados para alguns grupos. As condições de cultura nos recipientes 4L foram iguais às do recipientes 2L, exceptuando o facto do número de secções neles colocados ser de 16, a taxa de arejamento ser de 0,7-0,8 litros/min., e a quantidade de meio (tanto o meio de crescimento do caule e das folhas como o meio formador de microtubérculos) ser de 1 litro/recipiente.
Os resultados são indicados no Quadro 3. Tal como no Exemplo 1, o número de microtubérculos com pesos não inferiores a 0,1 g é aumentado pelo tratamento por um período de dia de 8 horas, e o número de microtubérculos com pesos não inferiores a 0,5 g e não inferiores a 1 g é aumentado no tratamento por um período de dia de 16 horas. 0S***0*
Quadro 3: Efeitos de Iluminação Antes e Após Substituição de Meio; Variedade: Russet Burbank
: Os que têm não menos de 1% de significância tendo como base o grupo de controlo. - 18-
Exemplo 3
Usando pequenas plantas de batata cultivadas (variedade: Lemhi Russet, plantas mantidas em Tissue-Grown Corporation foram feitas crescer), os efeitos do período de dia de 8 horas após substituição do meio foram examinados tal como no Exemplo 2.
Como se pode observar a partir dos resultados indicados no Quadro 4, o número de microtubérculos produzido foi maior do que no primeiro método convencional (controlo). σ\
-20-
No método do presente invento, o que se segue foi observado durante a cultura ou após a colheita: (i) As plantas antes da cultura no escuro tinham mais caules e folhas, cada folha era mais espessa embora um pouco mais pequena, e a massa dos caules e das folhas apresentava-se mais desenvolvida que a massa no segundo método convencional. (ii) No método do presente invento utilizando um período de dia de 8 horas, microtubérculos foram formados após o início da cultura no escuro mais rapidamente do que no segundo método convencional, e formação de microtubérculos foi observada após vários dias a partir do início da cultura no escuro.
Por outro lado, no método do presente invento utilizando um período de dia de 16 horas, a formação de microtubérculos foi observada cerca de uma semana após o início da cultura no escuro tal como no primeiro método convencional (controlo). Contudo, o crescimento dos microtubérculos em seguida foi mais rápido do que no primeiro método convencional. (iii) Nos métodos utilizando o período de dia de 8 horas ou o período de dia de 16 horas, a senescência dos caules e das folhas no último estádio da fase de formação de microtubérculos prosseguiu mais rapidamente do que no primeiro método convencional (controlo) a pesar do facto das plantas serem transferidas para o escuro mais tarde do que no primeiro método convencional, e assim foram obtidos microtubérculos de alta qualidade, maduros. Isto foi mais acentuado no método utilizando o período de dia de 16 horas do que no método utilizando o período de dia de 8 horas.
Lisboa, 29 de Setembro de 2000 Λ V.
JORGE CRUZ
Agente Oficial da Propriedade Industriai
RUA VICTOR CORDON, 14 1200 USBOA
Claims (16)
- REIVINDICAÇÕES 1. Um método para a produção de microtubérculos de batata, compreendendo os passos de: cultivar as plantas da batata num meio contendo um elevado conteúdo em açúcar de 6-10% p/v de açúcar durante 1 a 4 semanas sob um regime de iluminação cíclico; e cultivar as referidas plantas da batata no escuro até serem produzidos microtubérculos.
- 2. O método da reivindicação 1, em que o referido açúcar é pelo menos um membro seleccionado de entre o grupo consistindo em sacarose, glucose, frutose, e maltose.
- 3. O método da reivindicação 2, em que o referido açúcar é sacarose.
- 4. O método da reivindicação 1, em que o referido elevado conteúdo em açúcar é de 7-9% p/v de açúcar.
- 5. O método da reivindicação 4, em que o referido elevado conteúdo em açúcar é de 8% p/v de sacarose.
- 6. O método da reivindicação 1, em que o referido meio é um membro seleccionado de entre o grupo consistindo em meio Murashige and Skoog's contendo 8% p/v de sacarose, pH 5,8, meio de White contendo 8% p/v de sacarose, e meio de Linsmayer and Skoog's contendo 8% p/v de sacarose. -2-
- 7. O método da reivindicação 6, em que o referido meio é meio de Murashige and Skoog's contendo 8% p/v de sacarose, pH 5,8.
- 8. O método da reivindicação 1, em que o referido regime de iluminação cíclico compreende a iluminação das referidas plantas da batata durante 6 a 12 horas por dia.
- 9. O método da reivindicação 1, em que o referido regime de iluminação cíclico compreende a iluminação das referidas plantas da batata durante 12 a 24 horas por dia.
- 10. O método da reivindicação 8, em que as referidas plantas da batata são cultivadas sob o referido regime de iluminação cíclico durante cerca de uma semana a fim de produzir microtubérculos pequenos.
- 11. O método da reivindicação 9, em que as referidas plantas da batata são cultivadas sob o referido regime de iluminação cíclico durante cerca de duas semanas a fim de produzir microtubérculos grandes.
- 12. O método da reivindicação 1, em que a referida cultura sob iluminação compreende cultura líquida com arejamento a 18-25° C sob iluminação a de 3.000 a 10.000 lux com uma taxa de arejamento de 0,02 a 0,5 litro/litro.min.
- 13. O método da reivindicação 12, em que a referida cultura sob iluminação compreende cultura líquida com arejamento a de 18 a 25° C sob iluminação a de 4.000 a 6.000 lux com uma taxa de arejamento de 0,2 a 0,4 litro/litro.min.
- 14. O método da reivindicação 1, em que a referida cultura das referidas plantas da batata no escuro é realizada durante 3 a 10 semanas.
- 15. O método da reivindicação 14, em que a referida cultura compreende cultura líquida com arejamento a 18-25° C com uma taxa de arejamento de 0,02 a 0,5 litro/litro.min.
- 16. O método da reivindicação 15, em que a referida cultura compreende cultura líquida com arejamento a de 18 a 25° C com uma taxa de arejamento de 0,2 a 0,4 litro/litro.min. Lisboa, 29 de Setembro de 2000Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 USBOA
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