PT84282B - Processo para a preparacao de peptidos antagonistas da bradiquinina - Google Patents
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Description
«PROCESSO PARA A íREPARAÇÃO DE 1'LPTI DOS ANTAGONISTAS DA BRADIQUININA”
CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção diz respeito a novos peptidos activos sob o ponto de vista biológico que actuam co mo antagonistas das actividades biológicas da bradiquinina so? seus sais aceitáveis sob o ponto de vista terapêutico e âs suas aplicações corno agentes terapêuticos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Vinte e cinco anos depois da descrição e síntese da sequência do péptido bradiquinina, potente vasodilatador dos mamíferos (Boisonnas et al., Experientia 16: 326, 1960), sintetizaram-se e ensaiaram-se em sistemas biológicos muitas centenas de análogos de peptidos relacionados com a se. quência de bradiquinina citada antes ^Schroeder, em Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 25, (Springer Verlag) pág. 324-350, 197θ7 Z”Stewart, Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 25 (Suplemento), (Springer Verlag) pág. 227-272, 197^7. Nestes estudos o objectivo era investigar as diversas funções fisiológicas e farmacológicas da bradiquinina.
A bradiquinina e os peptidos calidina (Lys-bradiquinina) e Met-Lys-bradiquinina, importantes sob o ponto de vista fisiológico e com ela relacionados, contraem o músculo liso (causando, por exemplo, diarreia e inflamação intesti-
nal e asma), diminuem a pressão sanguínea, intervêm em processos inflamatórios como alergias, artrite e asma, participam no organismo em reacções cie coagulação sanguínea e em reacções em que intervêm como complemento, intervêm na rinite (virai, alérgica e não alérgica) e são produzidas em excesso em situações patológicas tais como choque séptico, pancreatite aguda, edema angioneurótico hereditário, síndroma depressivo (”dumping”) após uma gastrectomia, síndroma carcinóide, choque anafilático, motilidade reduzida do esperma e algumas outras situações. A produção de bradiquinina a partir do pias ma provoca dor no local patologicamente afectado · a produção em excesso intensifica a dor directamente ou mediante estimulação pela bradiquinina da activação do ciclo do ácido araqui 'ónico que produz prostaglandinas e leucotrienos, os mais antigos e eficazes mediadores da inflamação, Em Handbock of Experimental rharmacology, Vol. 25, Springer-Verlag, 1970 ® Vol 25 Suplemento, 1979» encontram-se referencias a trabalhos científicos que descrevem estas acções da bradiquinina e pcptidos relacionados.
Conforme já foi dito observou-se que a bradiquinina é produzida em reacções inflamatórias no intestino provocando a contracção do músculo liso e a secreção de fluído e iões.
Em Nature, 229:256-259» 19θ2, líanning et al., revelando a influência da bradiquinina em concentrações muito baixas, sobre a secreção de fluído e iões, demonstraram a existência de receptores específicos da bradiquinina no revestimento mucoso do intestino e no músculo liso intestinal.
Kimura. et al.. em American Heart Journal
(85: 635-647, 1973) e Staszewska - Barczak et al.. em Cardiovascular Research (10:314-327, 1976), relataram estudos sobre a produção de bradiquinina e a dor que a acompanha na angina. A acção da bradiquinina, citada antes, e simultaneamente a actuação das prostaglandinas são o estímulo natural que provoca a excitação dos receptores sensoriais que assinalam a dor durante a isquémia do miocárdio.
A bradiquinina e as quininas com ela relacionadas são não só produzidas pelo animal como também podem ser injectadas por meio de picadas e mordeduras. Sabe-se que insectos como, por exemplo, vespões e vespas injectam peptidos relacionados com a bradiquinina que também provocam dor, inchaço e inflamação.
A ausência de antagonistas da bradiquinina competitivos e específicos relacionados com a sua sequência tem impedido seriamente a compreensão do mecanismo de acção da bradiquinina, essencial para o desenvolvimento de agentes de diagnóstico e agentes terapêuticos destinados a aliviar a dor intensa provocada pela produção, por vezes em excesso, de bradiquinina.
Entre compostos tão diversos como analgésicos e substâncias anti-inflamatórias tem-se descrito um grande número de antagonistas não selectivos, não específicos e de natureza não peptídica de uma ou mais das actividades biológicas da bradiquinina que actuam através do sistema da pros, taglandina e não directamente sobre os receptores biológicos da bradiquinina (Rocha e Silva, e Leme, Med. Exp. 8:287, 1963). Como exemplo podemos citar anti-histainínicos (Gecse et al.. J. Pharm. Pharmacol. 21: 544, 1969) * anticorpos contra a bra
-. 4 diquinina fGrez et al., Eu. J. Pharmacol. 29s 35, 1974)j deriva dos da benzodiazepina (Leme e Rocha e Silva, Br. J« Pharmacol , 25: 50, 1965)? polímeros de óxido de etileno de peso molecular elevado (Wilkens e Back, Arch. Intl. Pharmacodynam. 209: 305, 197^)5 ésteres do ácido gálhico (Posati et al.« J. Agri.Food Chem. 18: 632, 1970) e inibidores da serotonina (Go mazkon e Shimkovich, Buli. Exptl, Biol, Med, 80: 6, 1975). Nenhum destes compostos individualmente nem nenhuma classe de compostos inibem especificamente a bradiquinina.
Tem sido apresentadas como substâncias com acção antagónica da bradiquinina ésteres heptílicos de diversas substâncias que contêm aminoácidos corno, por exemplo, aminoácidos básicos isolados tal como Arg e Lys (Gecse, Adv. Exptl, Biol. Med. 7θί 5, 1976), o dipeptido lhe - Gly (Gecse et al.. Int. Aech, Allergy 41: 174, 1971), * análogos de frag mentos de peptidos em posição C-terrninal da bradiquinina tal como Pro-Phe-Arg (Glaesson et alt, Adv, Exptl. Med. Biol. 120Bs 691, 1979)· Quando verificadas em sistemas de ensaio com bradiquinina e dependendo da dose utilizada, estas substâncias provam ser fracos e parciais agonistas/antagonistas exibindo diminuta especificidade no que respeita a acção inibidora da bradiquinina.
Existem informações de preparações de tecido vascular danificado que respondem aos análogos de bradiqui^ nina que não possuem o resto de Arg em posição C-terminal, mas não respondem à bradiquinina pelo que se tem desenvolvido análogos destas bradiquininas que não possuem o aminoácido Arg em posição 9, como antagonistas da actividade não fisioló gica da bradiquinina. Estes antagonistas não possuem signifi
cativos efeitos agonistas semelhantes aos da bradiquinina, nem qualquer efeito antagonista, sobre qualquer dos sistemas de resposta das quininas, significativos sob o ponto de vista fisiológico (Regoli e Barabe, Pharmacol, Reys. 32:1,1080).
Tem sido descrito um grande número de análo* gos de bradiquinina que comportam o éter 0-metílico dos restos da Tyr nas posições 5 e/ou 8 como produzindo uma acção mista agonista/antagonista sobre o útero isolado de ratos galactosémicos mas não sobre o de ratos normais. Nestes animais não se reproduziu com segurança este antagonismo (Stewart e Woolley, em Hypotensive Feptides, Springer Verlag, pág» 23-33, 1966).
Outras alterações que se têm produzido na molécula da bradiquinina são as adições de aminoácidos na extremidade N-terminal que afectam o grau do degradação enzimática da bradiquinina in vivo.
tempo de semi-vida da bradiquinina na cir culação sistémica é inferior a 3C segundos (S,H. Ferreira é J.R. Vane, B~, J« Pharmacol, Chemothorap. 30:417, 1?67)· Uma única passagem através da circulação pulmonar provoca uma des truição da bradiquinina compreendida entre 98 e 99^ (J« Robljs ro, J.W, Ryan e J.M. Stewart, Res, Commun, Pathol, Pharmacol. 6:207, 1973), conforme avaliação ro rato anestesiado medindo os efeitos depressores de um agonista administrado por via intraaórtica (Iã), evitando a circulação pulmonar e via endovenosa (IV), Mediante a adição de restos de saninoácidos básicos singulares, tal como, B-Arg-, D-Lys-, Lys- e duplos, tal como, D-Lys-Lys- à extremidade N-terminal da sequência de bra diquinina estimula-se, in vivo, a resistência dos agonistas
da bradiquinina ã destruição pela quininase pulmonar. Λ adição do dipeptido Lys-Lys ã extremidade N-terminal dos agonistas da bradiquinina confere-lhes, in vivo, uma total resistên cia a destruição, no que respeita à passagem inicial através da circulação pulmonar (Rohlero, Ryan e Stewart, Res. Gomm. Pathol. Pharmacol. 6:207, 1973).
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção diz respeito à modificação da sequência da bradiquinina, uma hormona peptídica dos «ia míferos ( Arg-Pro-Pro-G-ly-Phe-Ser-Pro—Phe-Arg) e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico no resto de Iro situado em posição 7, utilizando um método invulgar que pela primeira vez produz análogos relacionados com a sequência de bradiquinina, citada antes, que actuam como inibidores competitivos e específicos das actividades biológicas da bradiquini^ na. A presente invenção diz respeito especificamente à substituição da L-Pro em posição 7 por aminoácidos aromáticos com a configuração D, uma troca que converte os agonistas da bradiquinina em antagonistas e inclui modificações adicionais em ou tras posições de um antagonista de bradiquinina modificado em posição 7 que conferem aumento de potência como antagonista, resistência à degradação enzimática e/ou especificidade tecidular em relação ã sequência de bradiquinina que contém um ami. noácido com a configuração D. Mais especificamente a presente invenção diz respeito a peptidos de fórmula geral
Fórmula I
A—Arg-B—C—D—W—X—Y—Z—Arg (θ 1 2345678 9) (número de posição) na qual
A representa um átomo de hidrogénio ou um resto de aminoácido singular acídico, básico, neutro ou aromático com a eon figuração D ou L, tal como, D-Arg, D-Lys ou L-Thi ou um grupo protector do átomo de azoto terminal do enzima do tipo aciJ uretano aromático ou alquilo ou alternativamente A representa um di- ou polipeptido contendo aminoácidos com a con figuração D ou L como, por exemplo, Lys-Lys, Met-Lys ou Gly-Arg-Met-Lys;
B representa um resto de L-Pro, ou outro resto de aminoácido alifático não cíclico ou D- ou L-cíclico, tal como, a L-hidroxiprolina oxi de aminoácido L-aromático ou aromático subjs tituído;
C representa um resto de D- ou L-Fro ou de outro aminoácido aromático eventualmente substituído, alifático ou cíclico com a configuração D ou L;
D representa um resto de Gly ou de outro aminoácido alifático ou aromático eventualmente substituído com a configuração L tal como a Ala;
W representa um resto de Phe com a configuração L, de Phe substituído ou de outro aminoácido alifático ou aromático como, por exemplo, Leu, p -2-tienil-alanina (Thi) ou 2-piridil-alanina (pal);
X representa um resto de Ser com a configuração L, de Gly ou de outro aminoácido alifático ou aromático eventualmente substituído com a configuração D ou L, tal como, pCl-D-Phe
-8ou D-Phe;
Y representa um resto de aminoácido aromático com a configuração D ou de aminoácido aromático substituído como D-Phe, P —(2—tienil)—D—Ala (DThi), p-(2-piridil)-I)-Ala (l)-Pal), P>-2-naftil-D-Ala (D-Nal), DHis, D-homo-Fhe (DhPhe), C-metil-DTyr (DOJíT) , D-alfafenil-Gly (DPhg), DTrp, Dtyr ou pCl-DPhe (CDF);
Z representa um resto de Phe cj? a configuração L, de Phe substituído ou de outro aminoácido aromático ou alifático como, por exemplo, Leu, Thi ou Pal,
Prefere-se os compostos de fórmula geral I na qual A representa um átomo de hidrogénio, B e C representam, cada um, o aminoácido Pro ou Hyp, D representa o aminoácido Gly, W e Z representam, cada um, o aminoácido Phe ou Thi, X representa o aminoácido Ser e Y representa um aminoácido qualquer com a configuração D.
Os sais de peptidos de fórmula geral I incluem sais derivados do ácido clorídrico, do ácido trifluoroacético e do ácido acético bem como outros sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.
Nos Quadros I e II pode observar-se as substituições que se podem realizar na bradiquinina e os resultados dessas substituições. Substituindo, tal como se indica, 0, 1, 2, 3, 5, 7*8 restos de aminoácidos da bradiquinina ob têm-se os antagonistas preferidos da bradiquinina.
» 9 QUADRO I
Substituições em Antagonistas da. Bradiquinina
DNal
| Azt | Azt | DPNF | |
| Thz | Thz | DPhe | |
| Inip | Inip | DTyr | |
| DPro | DPro | DPal | |
| Pro | Pro | Ala | DOMT |
DThi
DAI a f
Pro— Phe—Arg
| D Arg | Thi | Gly | Thi |
| Lys-Lys | OMT | DPhe | OMT |
| DLys-Lys | Pal | CDF | Pal |
| Phe, Thi | GLF | DN alj | CLF |
| PNF | DPal | PNF | |
| Nal | DThi | Nal |
Thi= -(2-Tienil)alanina
Pal= -(2-Piridil)alanina
Hyp= 4-Hidroxipro1ina
Azt=Ácido azetidina-2-carboxxlico
Thz=Ácido tiazolidxna-2-.carboxxlico
Inip-Ácido isonipecótico
OMT=O-metiltirosina
CDF=para-cloro-D-dxfenilalanina
Nal= -(2-Naftil)-alanina
GLF=para-cloiO-L-fenilalanina
PNF-para-nitrofenilalanina
Pro=2, 3-Dihidroprolina
QUADRO II
Características dos Antagonistas da Bradiquinina
Alterações que conferem selectividade tecidular
Alteração crítica em relja ção à acção antagonista
resistência aos enzimas a potência
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA
A síntese dos peptidos de fórmula geral I, inclusive a derivatização, a activação, o acoplamento de restos de aminoácidos protegidos e a sua purificação e os métodos analíticos utilizados na identificação e determinação da pureza estão incluídos na Parte Geral da Química dos Peptidos como des. crito em Methoden der Organische Chemie” Vol. 16, partes I e II, por Houben Weyl (197*0, X^ara a síntese por via húmida e em Solid Phase Peptide Synthesis” por Stewart e Young (1984) para a síntese por via sólida utilizando o método de Merrifield. Qualquer químico com conhecimentos de síntese peptídica jjode sintetizar os peptidos de fórmula geral I utilizando métodos convencionais por via húmida ou métodos manuais ou automáticos por via sólida.
Os símbolos e abreviaturas utilizados quer para os aminoácidos, seus derivados e grupos protectores quer para os peptidos e seus sais são os que habitualmente se utilizam na química dos peptidos (Biochem. J,, 126:773, 1972, jornal citado a título de referencia). Por conveniência muitas abreviaturas encontram-se definidas no Quadro III. Todos os restos de aminoácidos, excepto o de Gly, descritos na meraó ria descritiva da presente invenção nas não nas reivindicações, apresentam a configuração L, salvo indicação em contrá rio
QUADRO III ABREVIATURAS QUE DESIGNAM OS RESTOS DE ATINOÁCIDOS
| Aib | - ácido alfa-aminoisobutárico |
| Azt | - ácido azetidina-2-carboxílico |
| CDP | - para-cloro-D-fenilalanina |
| CLF | - para-cloro-L-fenilalanina |
| hPhe | - homo-fenilalanina |
| Hyp | - 4-hidroxi-pro.lina |
| Tnip | - ácido isonipecótico |
| MDY | - O-metil-D-tirosina |
| Nal | - beta-(2-na.ftil)-alanina |
| APro | - 2,3-desidroprolina |
| Pal | - beta-(3-piridil)-alanina |
| Phg | - alfa-fenilglicina |
| Sar | - sarcosina |
| Thi | - beta-(2-tienil)-alanina |
| Thz | - ácido tiazolidina-2-carboxílico |
(Todas as outras abreviaturas estão de acordo com o estabelecido pela IUPAC para os restos de aminoácidos)
I
Cs exemplos seguintes ilustram os
tos de fórmula geral I de acordo cosi a presente invenção mas não a limitam. Relativamente a compostos sólidos todas as per centagens e proporções estão referidas em peso e em volume quando referidas a compostos líquidos.
Exemplo 1
Preparação de Àrg-lro-Pro-Sly-rhe-Ser-DPhe-Phe-Arg (DPhe? -BK) .
Dissolve-se uma mistura de 6,4 g (15 mKoles) de _t-butiloxicarbonil- (g-paratolueno-sulfonilo)~.arg / BOC- Arg (Tosjy e .183 mg (1,5 ruMoles) de Ν,Ν-dinietilaminopiridina em uma mistura de 20 ml de dimetilformamida (DaF) e 125 ml de diclorometano (DCJl). Adiciona-se, à temperatura ambiente, 15 g de hidroximetil-polistireno-divinil-bonzeno (com 1$ d© re ticulação, contendo 0,74 mMole do grupo hidroxi livre por g de resina) e depois 60 ml de uma solução de diciolobexilcarbodiimida (DCC) 0,25M em diclorometano (DC11). Agita-se a suspensão resultante durante uma noite, à temperatura ambiente, filtra-se e lava-se a resina com 3 x 6C ml de diclorometano, 3 x 6o ml de álcool metílico e rcintumesce-se com 120 ml de diclorome tano. 0 acoplamento de uma outra porção de BOC-Arg (Tos) realiza-se sobre a resina como anteriormente. Após filtração e la vagem da resina esta é reintumescida com 120 ml de diclorometa no e adiciona-se 2,1 ml de cloreto de benzoílo e 1,5 ml de trietilamina. Agita-se a suspensão durante 3G minutos, a tenipe ratura ambiente, depois do que se filtra a resina, se lava com 3 x 60 ml dc diclorometano, 3 x 60 ml de álcool metílico e finalmente com 3x 60 ml de diclorometano. Seca-se a resina ao ar
até peso constante obtendo-se 18,5 g de BOC-Arg(Tos)-hidroximetil-resina com um teor em aminoácido de 0,272 mmole de Arg por g de resina como se determina analisando quantitativamente o aminoácido de uma amostra do complexo aminoácido-resina que se submeteudurante 4 horas a uma hidrólise com a mistura ácido clorídrico óN/ácido propiónico, à temperatura de 130°C.
Introduz-se 1,5 g de resina contendo 0,4 mMole de Arg no reactor de um sintetizador automático (Beckman modelo 900) que opera por via sólida, submetendo-a ao se guinte ciclo de adição para realizar o acoplamento de BOC-Phe:
PROGRAMA A. ACOPLAMENTO PADRÃO COM DICICLOHEXILCARBODIIMIDA (DCC)
Lava-se a resina com 3 x 20 ml de diclorometano e equilibra-se depois, durante 1,5 minutos, com 20 ml de uma mistura a 1:3 de ácido trifluoroacótico com diclorometano contendo 0,1$ de indol. Reequilibra -se novamente a resi na durante 30 minutos. Lava-se depois a resina com 6 x 20 ml de diclorometano, neutraliza-se com uma solução de trietilami na a 10$ em diclorometano durante 1,5 minutos depois do que se repete novamente a fase de neutralização. Lava-se a resina com 6 x 20 ml de diclorometano depois do que se equilibra durante 1,5 minutos com uma solução de BOC-Phe 1,0 mmole em diclorome tano. Adiciona-se depois 4 ml de diciclohexilcarbodiimida 0,25 N em diclorometano e agita-se a mistura reaccional resul . tante durante 2 horas. Lava-se depois a resina com 3 x 20 ml de diclorometano.
De acorde com o Programa B realiza-se um segundo ciclo de adição:
PROGRAMA B. ADIÇÃO INVERSA:
Repete-se a técnica do Programa A através de uma neutralização seguida de lavagens. Adiciona-se depois 1,0 mMole de diciclohexilcarbodiimida (DCC) em 4 ml de diclorometano e agita-se a resina e a solução durante 1,5 minutos. Adiciona-se depois 1,0 mMole de BOC-D-Phe em 12 ml de diclorometano e agita-se a resina e a solução durante 2 horas. La va-se depois a resina com 6 x 20 ml de diclorometano.
De acordo com a sequência seguinte elimina-se o grupo protector do átomo de azoto situado na extremidade:
PROGRAMA C. DESPROTECÇÃO DO TERMINAL:
Repete-se a técnica do PROGRAMA A até à neutralização com trietilamina. Lava-se depois a resina com 6 X 20 ml de álcool etílico e seca-se ao ar o complexo peptjL do-resina obtendo-se 1,66 g de D Phe-Phe-Arg-Resina sob a forma de sal do ácido trifluoroacético. Prossegue-se com a síntese utilizando 410 mg deDPhe-Phe-Arg-Resina sob a forma de sal do ácido trifluoroacético. De acordo com o PROGRAMA D adiciona-se o resto seguinte.
PROGRAMA D. REACOPLAMENTO:
Lava-se primeiro o complexo peptido-resina sob a forma de um sal com 3 x 20 ml de diclorometano, neutraliza-se depois, durante 1,5 minutos, com trietilamina a 10$ em diclorometano. Repete-se depois a neutralização e lava-se o complexo peptido-resina sob a forma de um sal com 6 x 20 ml
- 16 de diclorometano. Equilibra-se depois o complexo peptido-re- ( > sina, durante 1,5 minutos, com uma solução de BOC-Ser(OBzl) 1,0 mMole em dimetilformamida. Adiciona-se 4 ml de diciclohe xilcarbodiimida (DCC) 0,25 N e mistura-se com a resina duran te 2 horas· Lava-se o produto resultante 3 vezes com diclor<> metano.
De acordo com os Programas especificados adicionou-se à cadeia peptídica em crescimento os seguintes dje rivados de aminoácidos: BOC-Phe(A), BOC-Gly (á) , BOC-Pro (a), BOC-Pro(A), seguindo-se primeiro o reacoplamento de BOC-Pr· (d), BOC-Arg (Tos), dissolvido em 2 ml de dimetilformamida e 9 ml de diclorometano, e depois o Programa C, Obtêm-se 530 mg do complexo nonapeptído-resina protegido, sob a forma de sal derivado do ácido trifluoroacético.
Efectua-se uma suspensão de 51θ mg do complexo peptido-resina, citado antes, em 10 ml de ácido fluorídrico líquido anidro contendo 1 ml de anisol, à temperatura de -70®C, e agita-se durante 45 minutos à temperatura de 0°C. Eli minou-se o ácido fluorídrico e o anisol sob vazio (tromba de água 1 hora, bomba de vazio 1 hora), lava-se o peptido e a resina com 3 x 20 ml de éter etílico e extrai-se o peptido com 3 x 6 ml de ácido acético glacial. Liofiliza-se a solução de ácido acético obtendo-se 185 mg de peptido bruto desprotegido.
Purificou-se o peptido mediante distribuição por contracorrente (CCD) / 100 passagens da fase superior através de um aparelho situado depois da coluna destinada à distribuição por contracorrente (CCD_£7 no sistema de dissolventes n-butanol/ácido trifluoroacético (1:1). Separa-se o conteúdo dos tubos correspondente ao pico principal que con- 17
tém o peptido, determinado quantitativamente pelo reagente de Sakaguchi, evapora-se o dissolvente sob pressão reduzida, dissolve-se o resíduo em ácido acético glacial e liofiliza-se para se obter 14o mg de peptido com um coeficiente de par tiçã· (k) de 5,7 por distribuição em contraeorrente. Repetindo a distribuição em contraeorrente no sistema de dissolventes n-butanol/ácido acético glacial/água (4:185) obtém-se, se guindo o processo de detecção e a técnica citada antes, 73 mg de Arg-Pro-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg sob a forma de sal deriva | do do ácido trifluoroacético (κ » 0,2). A cromatografia em ca mada fina realizada sobre placas de vidro revestidas com gel de sílica Merck e utilizando os sistemas de dissolventes n-bu tanol/ácido acético glacial/água (8:3:4) e acetato de etilo/ /piridina/ácido acético glacial/água (5:5sls3) fornece em relação ao peptido puro um Rf (834) de 0,17 ® um Rf (5513) de 0,36 mediante visualização com o spray utilizado na identificação de peptidos e constituído por cloro-tolidina. Uma aná lise quantitativa utilizando um instrumento Beckman 120 e rea lizada após hidrólise ácida (17 horas em ampolas de vidro fechadas sob atmosfera de azoto a temperatura de 110°C em 2 ml de ácido clorídrico 6N contendo 2 gotas de 2-mercaptoetanol e 40 jllI de fenol) fornece as seguintes quantidades de aminoácidos: Arg (2,12)j Pro (1,93)í Gly (1,01); Phe (2,98); Ser (0,96).
Exemplo 2
Preparação de Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DThi-Phe-Arg (DThi^-BK),
Prepara-se este peptido utilizando o método descrito no Exemplo 1 mas utiliza-se em vez de BOC-DPhe, BOC- 18
- β-2-tienil-D-Ala (BOC-DThi): K(415) « 0,24·, Arg (2,02), Pro(2,18), Gly(l,00), Phe(l,99), Ser(o,89), Thi(O,99).
Exemplo 3
Preparação de Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DPal-Phe-Arg (DPal^-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 1, utilizando B0C-2-piridil-DAla (BOC-D-Pal) em vez de BOC-DPhe: k(lil) « 0,22j Arg(2,03), Pro(2,01), Gly(l,02), * Phe(l,99), Pal(l,02).
Exemplo 4
Preparação de Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-DPhe-DPhe-Phe-Arg (DPhe^ _-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 1, utilizando BOC-DPhe em vez de BOC-Ser (Bzl): k(415) l,3í Arg (2,12), Pro (1,94), Gly (1,00), Phe (3,94).
Exemplo 5
I
Preparação de Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-DPhe-CDF-Phe-Arg (DPhe^CDF^-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 1, utilizando BOC-DPhe em vez de BOC-Ser (Bzl) e BOC-p€l-D-Phe (BOC-CDF) em vez de BOC-DPhe: k(415) · 0,82; Arg(l,98), Pro(l,93), Gly(0,97), Phe(3,io), CDF(l,02).
Exemplo 6
Preparação de Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe- 19
-Thi-Arg (Thi^ gDPhey-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 1, utilizando nos dois ciclos de adição BOC-2-tienil-Ala (BOC-Thi) em vez de BOC-Phe: k(415) = 0,21; Arg(l,98), Pro(l,94), Gly(l,04), Phe(l,04), Ser(0,96), Thi (2,05).
Exemplo 7
Preparação de Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DThi-Thi-Arg (Thi^ gDThiy-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 6, utilizando BOC-DThi em vez de BOC-DPheí k(415) - 018; Arg(2,07), Pro(2,08), Gly(l,00), Ser(o,93), Thi(2,88).
Exemplo 8
Preparação de Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DPal-Thi-Arg (Thi5 gDPaly-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 6, utilizando BOC-DPal em vez de BOC-DPhe: k(líl) 0,15; Arg(2,00), Pro(2,20), Gly(l,09), Ser (0,89), Thi(l,92), Pal(0,89).
Exemplo 9
Preparação de Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-DPhe-CDF-Thl-Arg (Th±5 gDPhe^CDF^-BK),
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 5, utilizando nos dois ciclos de adição BOC-Thi em vez de BOC-Phe: k(415) « 0,75? Arg(l,89), Pro(2,08), Gly(l,06), Phe(l,02), Thi(l,88), CDF(1,O7).
Exemplo 10
Preparação de DArg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg (DArgQDPhe^-BK).
Prepara-se este peptido pelo método deserito no Exemplo 1, excepto que se realiza um ciclo adicional que utiliza BOC-(TOS)-DArg com o Programa A seguindo-se a desprotecção terminal com o Programa C: k(l:l) « 3,55} Arg(2,89), Pro(2,07), Gly(l,02), Phe(3,O5), Ser(o,98).
Exemplo 11
Preparação de DArg-Arg-Bro-DPro-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg (DArgQPro^DPhe^-BK).
Prepara -se este peptido pelo método descrjL to no Exemplo 10, utilizando BOC-DPro em vez de BOC-Pro quando da primeira adição deste: k(415) s 0,15; Arg(3,12); Pro(l,90), Gly(l,05), Phe(3,O2), Ser(o,92).
Exemplo 12
Preparação de Arg-Pro-DPro-Gly-Thi-DPhe-CDF-Thi-Arg (DPro^Th^ gDPhe^CDF^-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 9, utilizando BOC-DPro em vez de BOC-Pro quando da primeira adição deste: k(415) e 0,18; Arg(2,00), Pro(l,98), Gly(l,04), Phe(0,99), Thi(l,89), PCF(1,11).
Exemplo 13
Preparação de Lys-Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg (Lys-Lys-DPhe^«BK).
Prepara -se este peptido pelo método des- 21 crito no Exemplo 1, excepto que se realizam mais dois ciclos de adição com BOC-(e-ClZ)Lys, o primeiro com o Programa D e o segundo com o Programa A seguido pelo Programa C: k(l:l) = » 0,52; Arg(2,04), Pro(l,99), Gly(o,9ó), Phe(3,00), Ser(o,96),
Lys(2,01).
Exemplo 14
Preparação de Lys-Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Lys-Lys-Thi^ gDPhey-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 13, utilizando BOC-Thi em vez de BOC-Phe nos dois ciclos de adição de BOC-Phe: k(l;l) = 0,33; Arg(l,98), Pro(l,97), Gly(l,01), Phe(l,03), Ser(0,97), Thi(l,9ó), Lys(2,08).
Exemplo 15
Preparação de DArg-Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (DArgQThi5 gDPhey-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 6, excepto que se realiza com o Programa D mais um ciclo de adição com BOC-(Tos)DArg, seguido pelo Programa C: k(l:l) X 2,33; Arg (3,00), Pro (1,99), Gly(0,9ó), Phe(0,99), Ser(0,95), Thi(2,ll).
Exemplo 16
Preparação de DArg-Arg-Pro-DPro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (DArg()DPro,jThi5 gDPhey-BK).
Produz-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 15, utilizando BOC-DPro em vez de BOC-Pro na primeira adição deste: k(415) = 0,22; Arg(2,io), Pro(l,9Ó), Gly(l,05),
Phe(0,98), Ser(O,94), Thi(l,96).
Exemplo 17
Preparação de Lys-Lys-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg- (Lys-Lys-Hyp^DPhey-BK),
Prepara -se este peptido pelo método descri, to no Exemplo 13, utilizando B0C-(4-hidroxi)-Pro (BOC-Hyp) em vez de BOC-Pro na primeira adição deste: k(l:l) = 0,35? Arg(2,00), Pro(l,03), Gly(l,00), Phe(3,O8), Ser(O,94), Lys(l,95), Hyp(l,01).
Exemplo 18
Preparação de Arg-Hyp-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (HypgThi^ gDPhey-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 6, utilizando BOC-Hyp em vez de BOC-Pro quando da segunda adição deste, incluindo o reacoplamento com o Programa D: k(l:l) « 2,45; Arg(2,03), Pro(0,98), Gly(l,Oó), Phe(l,05), Ser(0,95), Thi(l,97), Hyp(0,95).
Exemplo 19
Preparação de Lys-Lys-Arg-Hyp-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Lys-Lys-Hyp^Thi^ gDPhey-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 18, excepto que se realiza mais dois ciclos de adição com BOC-(e-ClZ)Lys, o primeiro com o Programa D e o segundo com o Programa A seguido pelo Programa C: k(l:l) = 0,27; Arg(2,07)? Pro(0,92), Gly(o,99), Phe(l,03), Ser(o,93), Thi(l,92), Lys(2,06), Hyp(l,10).
- 23 Exemplo 20
Preparação de Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Hyp3Th±5 gDPhe^BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 6, utilizando BOC-Hyp em vez de BOC-Pro na primeira adição deste: k(l:l) = 2,23$ Arg(2,08), ΡΓο(θ,9θ), Gly(l,04), Phe(l,01), Ser(o,99), Thi(l,95), Hyp(O,94).
Exemplo 21 ( Preparação de DArg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (DArgQ-Hyp3Thi5 gDPhe^BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 20, realizando com o Programa D mais um ciclo de adição com BOC-(Tos)DArg, seguido pelo Programa C: k(l:l) ® = 0,18$ Arg(3,01), Pro(l,02), Gly(o,98), Phe(l,02), Ser(o,92), Thi(2,07), Hyp(0,97).
Exemplo 22
Preparação de Arg-Hyp-Hyp-Gly-Thi-Ser-DPheI -Thi-Arg (Hyp2,3Thi5 gDPhe^BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 6, utilizando BOC-Hyp em vez de BOC-Pro nos ciclos em que se utilizava este último: k(l:l) = 1,56$ Arg(2,o4), Gly(l,06), Phe(l,02), Ser(l,01), Thi(l,9^), Hyp(l,93).
Exemplo 23
Preparação de Arg-Hyp-Hyp-Gly-Thi-DPhe-CDF-Thi-Arg (Hyp2 3Th±3 gDPhe^CDF^-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 9, utilizando BOC-Hyp em vez de BOC-Pro nos ci cloe em que se utilizava este último: k(415) - 0,89; Arg(2,06), Gly(l,00), Phe(l,03), PCF(1,O5), Thi(l,92), Hyp(l,93).
Exemplo 24
Preparação de Arg-Pro-Pro-Gly-Leu-Gly-DPhe-Leu-Arg (Gly^Leu^ gDPhe^-BK).
Prepara-se este peptido pelo método descrito no Exemplo 1, utilizando BOC-Leu em vez de BOC-Phe nos ciclos em que se utilizava este último e BOC-Gly em vez de BOC-(OBzl)Ser: k(415) = 0,30; Arg(2,o4), Pro(2,05), Gly(l,98), Phe(0,98), Leu(l,95).
Exemplos 25 a 103
Nos exemplos seguintes, que não são limitativos, preparam-se peptidos substituídos muito semelhantes, utilizando métodos idênticos aos citados antes:
25· Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DNal-Phe-Arg- (DNal^-BK.): k(415) = 0,37; Arg(2,09), Pro(2,02), Gly(o,98), Phe(2,0Ó), Ser(o,96), Nal(0,95).
26. Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-MDY-Phe-Arg (MDY^BK) : k(l:l) = » 4,88; Arg(2,10), Pro(l,91), Gly(o,9ú), Phe(2,08), Ser(o,94), MDY(1,O4).
27. Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DPhg-Phe-Arg (DPhg^-BK): k(l:l) « * 3,55; Arg(2,01), Pro(l,90), Gly(l,03), Phe(2,07), Ser(o,99), Phg(o,98).
28. Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DHis-Phe-Arg (DHis^-BK): k(l:l) = « 0,30; Arg(2,04), Pro(2,O9), Gly(O,94), Phe(2,00), Ser(l,00),
- 25 His(o,93).
29, Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DTrp-Phe-Arg (DTrp^-BK)t k(415)
- 0,30; Arg(2,04), Pro(l,95), Gly(l,02), Phe(2,05), Ser(O,95), Trp(o,9Ô).
30. Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DTyr-Phe-Arg (DTyr^-BK)» k(lxl) = 2,70; Arg(l,94), Pro(l,88), Gly(l,04), Phe(2,io), Ser(o,97), Tyr(l,08).
31· Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DhPhe-Phe-Arg (DhPhe^-BK)x k(415) = 0,37; Arg(l,99), Pro(l,94), Gly(0,97), Phe(2,02), Ser(0,88), hPhe(l,20).
32. Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-DPhe-DThi-Phe-Arg (DPhegDThi-^-BK) x k(415) » 0,59; Arg(2,14), Pro(l,87), Gly(l,OO), Phe(3,01), Thi(O,98).
33. Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-DThi-DThi-Phe-Arg- (DThi^ ?-BK)x k(415) « 0,54; Arg(2,04), Pro(2,00), Gly(l,01), Phe(2,04), Thi(l,91).
34. Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-DPhe-DNal-Phe-Arg (DPhe^DNal^-BK)x | k(415) - 1,04; Arg(2,02), Pro(2,04), Gly(l,01), Phe(2,94),
Nal(0,99).
35. Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-DPhe-MDY-Phe-Arg (DPhe^MDY^-BK)x k(415) ’ Q59; Arg(2,ll), Pro(l,90), Gly(O,97), Phe(3,02), MDY(l,01).
36. Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-DPhe-DPal-Phe-Arg (DPhe^DPal^-BK)x k(415) = 0,16; Arg(l,86), Pro(2,12), Gly(l,07), Phe(2,9o), Pal(l,05).
37. Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Gly-DVal-Phe-Arg (Gly^DVal^-BK):
k(415) · 0,20; Arg(2,08), Pro(2,00), Gly(l,9ó), Phe(l,98), Val(0,98).
38. Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg (HypgDPhe^-BK): k(ltl) = 3,76; Arg(2,00), Pro(0,93), Gly(l,02), Phe(3,16), Ser(O,94), Hyp(o,94).
39» Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg (Hyp^DPhe^-BK): k(líl) = 3,35; Arg(l,96), Pro(0,97), Gly(l,01), Phe(3,10), Ser(0,94), Hyp(l,02).
40. Arg-Hyp-Hyp-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg (Hyp„ _DPhe_-BK):
> J 7 k(l:l) = 2,33; Arg(2,03), Gly(l,02), Phe(3,10), Ser(o,94), Hyp(l,91).
41. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-DPhe-DPhe-Thi-Arg(ThÍe ôDph®« )· . · 5 9 θ * θ 9 I
42. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-DThi-DThi-Thi-Arg (Thi^ gDThig ?-BK): k(415) « 0,37; Arg(2,08), Pro(2,08), Gly(0,99), Thi(3,86).
43. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-DThi-DPal-Thi-Arg (Th±5 gDThi6DPal7-BK): k(lxl) = 0,70; Arg(l,93), Pro(2,ll),
Gly(l,08), Thi(2,86), Pal(l,02).
44. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-DThi-DNal-Thi-Arg (Thi^ gDThigDNal^BK)s k(415) = 0,59; Arg(2,19), Pro(2,08), Gly(l,00), Nal(O,93), Thi(2,88).
45. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-DThi-CDF-Thi-Arg (Thi^ gDThi^CDF^-ΒΚ) k(415) « 0,54; Arg(2,16), Pro(l,97), Gly(l,00), PCF(1,O6), Thi(2,81).
46. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-DPhe-DAla-Thl-Arg (Thi^ gDPhegDAla^-BK) ·. k(415) « 0,32; Ârg(2,06), Pro(l,89), Gly(0,97), Phe(l,02), Ala(O,96), Th±(2,12).
47. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-CDF-DAla-Thi-Arg (Thi^ gCDF^DAla?-
BK): k(415) « 0,39; Arg(l,96), Pro(l,93), Gly(l,00), Ala(O,99), Thi(2,O5), PCF(1,O8).
48. Thi-Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (ΤΙιίθ-ΤΙιΙ^ gDPh®7-BK): k(415) « 0,27; Arg(2,16), Pro(l,89), Gly(l,03), Phe(l,04), Ser(0,93), Thi(2,95).
49. DArg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DPhg-Phe-Arg (DArgQ-DPhg?BK): k(líl) « 2,03; Arg(3,O5), Pro(2,00), Gly(o,97), Phe(2,04), Ser(0,94), Phg(l,OO).
50. DArg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DTrp-Phe-Arg (DArgQ-DTrp?BK): k(l:l) « 4,88; Arg(3,O7), Pro(l,99), Gly(l,00), Phe(2,O4), Ser(0,89), Trp(O,97).
51. DArg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DTyr-Phe-Arg (DArg^-DTyr^BK)j k(ltl) = 1,56; Arg(2,96), Pro(2,09), Gly(l,03), Phe(l,99), Ser(0,90), Tyr(l,04).
52. DArg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DHis-Phe-Arg (DArg^-DHis^ΒΚ): k(lil) - 0,18; Arg(3,O8), Pro(l,99), Gly(l,02), Phe(2,07), Ser(O,89), His(O,96).
53. DArg-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DhPhe-Phe~Arg (DArgg-
DhPhe7-BK)í k(415) « 0,18; Arg(3,06), Pro(l,98), Gly(o,95), Phe(2,05), Ser(O,86), DhPhe(l,ll).
54. Lys-Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg (Lys-LysDPhe7-BK): k(l;l) 0,52; Arg(2,04), Pro(2,01), Gly(0,96), Phe(3,00), Ser(O,96).
55. Lys-Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DTrp-Phe-Arg (Lys-LysDTrp7-BK): k(ltl) = 0,67; Arg(2,01), Pro(2,00), Gly(l,01),
- 28 -
Phe(2,03), Ser(0,91), Ττρ(θ,88), Lys(2,O3).
56. Lys-Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DTyr-Phe-Arg (Lys-LysDTyr7-BK)t k(líl) = 0,21; Arg(2,01), Pro(2,ll), Gly(o,99), Phe(2,02), Ser(O,97), Tyr(l,02), Lys(l,90).
57. Lys-Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DHis-Phe-Arg (Lys-LysDHís7-BK)í k(l:l) « 0,08; Arg(l,91), Pro(2,06), Gly(0,94), Phe(2,08), Ser(0,93), His(0,95), Lys(2,12).
58. Lys-Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DhPhe-Phe-Arg (Lys-LysDhPhe7-BK): k(l:l) = 1,13; Arg(l,99), Pro(l,93), Gly(O,98), Phe(2,06), Ser(O,92), DhPhe(l,ll), Lys(2,01).
59. Arg-Pro-DPro-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg (DPro^DPhe7-BK): k(415) = 0,27; Arg(2,07), Pro(l,97), Gly(O,98), Phe(3,02), Ser(O,95).
60. Arg-Pro-DPro-Gly-Phe-CDF-DAla-Phe-Arg (DPro^CDFgDAla,^BK): k(415) = 0,59; Arg(l,99), Pro(2,03), Gly(o,97), Phe(2,02), Ala(O,99), PCF(1,O2),
61. Arg-Pro-DPro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (DPro^Thi^ gDPhe7-BK): k(415) = 0,22j Arg(2,io), Pro(l,96), Gly(l,05), Phe(O,98), Ser(o,94), Thi(l,9Ó).
62. DArg-Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-DPhe-DAla-Thi-Arg (DArgQ-
Th±5 gDPhe6DAla7-BK)í k(líl) = 4,00; Arg(2,89), Pro(1,95), Gly(l,03), Phe(O,98), Ala(l,01), Thi(2,14).
63. DArg-Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-CDF-DAla-Thi-Arg (DArgQThi5,8CDF6DAla7-BK)s k(415) « 0,19; Arg(3,00), Pro(l,99), Gly(l,00), Ala(O,96), Thi(2,03), PCF(l,02).
64. DArg-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (DArg0Hyp2Thi^^gDPhe^-BK): k(ltl) «= 1,50? Arg(3,ll),
Pro(o,97), Gly(l,03), Phe(l,o4), Ser(o,95), Thi(l,88),
Hyp(l,02).
65. DArg-Arg-Hyp-Hyp-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (DArg^Hyp2,3Thi5,8DPhe7-BK): k(l:l) = 0,96; Arg(3,19), Gly(0,97), Phe(0,98), Ser(l,OO), Thi(l,95), Hyp(l,90).
66, Thi-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Τ1ι±θ-
Hyp2Thi 5 gDPhe7-BK)
67. Thi-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Τΐιίθ-
Hyp^Thl^ θ DPhe7-BK)
68. Thi-Arg-Hyp-Hyp-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (ThiQ-
Hyp2,3Thi5 , gDPhe ?-BK)
69. Arg-Hyp-Pro-Gly-Thi-DPhe-CDF-Thi-Arg (HypgThi^ gDPhe^ CDF7-BK)í k(415) = 1,04; Arg(2,02), Pro(l,01), Gly(l,OO), Phe(l,01), PCF(1,O9), Thi(l,89), Hyp(O,98)
70. Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-DPhe-CDF-Thi-Arg (Hyp3Thi5 g DPhe6CDF7-BK): k(ltl) « 0,96·, Arg(2,01), Pro(l,ll), Gly(o,97), Phe(l,06), Th±(l,86), PCF(l,06), Hyp(o,95)
71. Arg-Hyp-DPro-Gly-Thi-DPhe-CDF-Thi-Arg (Hyp2Pro3Th±5,θ DPhe6CDF7-BK)
72. Lys-Lys-Arg-Hyp-Pro-Gly-Phe-Ser-DPhe-Phe-Arg (Lys-Lys-
Hyp2DPhe7-BK)í k(lsl) = O,37í Arg(l,99), Pro(0,96), Gly(O,99), Phe(3,13), Ser(0,94), Hyp(0,98), Lys(2,00)
73. Lys-Lys-Arg-Hyp-Hyp-Gly-Phe-Ser-DPhe«.Phe-Arg (Lys-LysHyp2j3DPhe7-BK); k(l:l) = 0,28; Arg(2,03>, Gly(o,95), Ser(o,9^·), Phe(3,O8), Lys(2,08), Hyp(l,92)
74. Lya-Lya-Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DThi-Thi-Arg (Lys-LysThi,. gDThi^-BK): k(líl) « 0,22; Arg(2,07), Pro(2,01), Gly(l,04), Ser(O,89), Thi(3,02), Lys(l,96)
75. Lys-Ly&Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DPal-Thi-Arg (Lys-LysTh±5 gDPal^-BK): k(ltl) = 0,06; Arg(2,12), Pro(l,94), Gly(l,01), Ser(0,87), Thi(l,81), Pal(0,98), Lys(2,22)
76. Lys-Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-DPhe-CDF-Thi-Arg (Lys-LysThl^^g DPhe6CDF7-BK): k(415) « 0,11? Arg(2,02), Pro(2,00), Gly(l,02), Phe(l,00), PCF(1,O6), Th±(l,85), Lys(2,0ó)
77· Lys-Lys-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Lys-LysHyp3Th±5,gDPhe7-BK): k(lsl) « 0,22; Arg(2,O5), Pro(0,96), Gly(l,04), Phe(l,03), Ser(O,94), Hyp(l,10), Thi(l,84), Lys(2,04)
78. Lys-Lya-Arg-Hyp-Hyp-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Lys-LysHyp2 3Th±5 gDPhe7-BK): k(líl) = 0,15; Arg(2,00), Pro(2,06), Gly(l,01), Phe(l,03), Ser(O,94), Thi(l,92), Hyp(2,04)
79· Lys-Lya-Arg-Hyp-Pro-Gly-Thi-DPhe-CDF-Thi-Arg (lya-LysHyp2Thi5 gDPhe6CDF7-BK): k(l:l) » 6,69? Arg(l,96), Pro(l,14), Gly(O,96), Phe(l,03), Thi(l,77), PCP(l,o6), Lys(l,93), Hyp(l,14)
80. Lys-Lys-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-DPhe-CDF-Thi-Arg (Lya-LyaHyp3Thi5 gDPhe6CDF7-BK): k(lsl) = 6,14; Arg(2,04), Pro(0,97), Gly(l,01), Phe(o,98), PCF(1,O6), Thi(l,89), Hyp(l,01), Lys(2,05)
81. Lys-Lya-Arg-Hyp-Hyp-Gly-Thi-DPhe-CDF-Thi-Arg (Lya-LyaHyp2 3Th±5 gDPhe6CDF7-BK): k(líl) = 4,88; Arg(2,02), Gly(o,99), Phe(0,9é), PCF(1,1O), Thi(l,84), Hyp(2,01), Lys(2,06)
- 31 Α»
82. Arg-Thz-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (ThZgThi^ gDPhe?-
BK): k(415) = 0,24; Arg(l,97), Pro(l,04), Gly(l,02),
Phe(l,06), Thi(l,91)
83. Arg-Pro-Thz-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Thz^Thi^ gDPhe? BK); k(ljl) = 5,25
84. Arg-Thz-Thz-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Thz£ 3Th±5 , gDPhe7-BK):
= 6,69
85. Arg-Aib-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (AibgThi^ gDPhe?-
BK)í k(415) « 0,18
86. Arg-Pro-Aib-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Aib^Thi^ gDPhe^-
BK)s k(415) « 0,24; Arg(2,09), Pro(0,99), Gly(l,05),
Ser(o,95), Phe(l,07), Thl(l,94), Aib(o,91)
87. Ar g-Aib-Aib-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Aib2 3Ihi5jgDPhe7-BK): k(415) = 4,00
88. Arg-Azt-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (AztgThi^ gDPhe^-
BK): k(415) = 0,18; Arg(2,07), Pro(0,99), Gly(l,02), Phe(l,04), Ser(0,95), Thi(l,97), Azt(o,99)
I 89. Arg-Pro-Azt-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Azt^Thi^ gDPhe?BK)
90. Arg-Azt-Azt-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (Azt2 3Th±5 gDPhe^-BK)
91. Arg-Inip-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (lnip2Thi5 gDPhe^-BK): k(415) « 0,21
92. Arg-Pro-Inip-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (lnip3Thi5,gDPhe7-BK): k(415) « 0,18; Arg(2,10), Pro(0,95),
Gly(l,04), Phe(l,03), Ser(O,93), Thi(l,95)
93. Arg-Inip-Tnip-Gly-Thi-Ser-DPhe-Thi-Arg (lnip2,3Thi5,gDPhe7-BK): k(415) =
0,18
94. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DNal-Thi-Arg (Thi^ gDNal^-BK): k(415) « 0,32
95. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-CDF-Thi-Arg (Thi^ gCDF^-BK): k(415) « 0,28
96. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DTyr-Thi-Arg (Thi^ gDTyr^-BK)s k(415) » 0,12
97. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DVal-Thi-Arg (Th±5 gDVal^-BK): k(415) « 0,11
98. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DIle-Thi-Arg (Th±5 gDIle^-BK); k(415) 0,16
99. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DLeu-Thi-Arg (Thi^ gDLeu^-BK)
100. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DTrp-Thi-Arg (Th±5 gDTrp^-BK)
101. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DPhg-Thi-Arg (Thi^ gDPhg^-BK)
102. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DHis-Thl-Arg (Thi^ gDHis^-BK)
103. Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-DOMT-Thi-Arg (Th±5 gDOMT^-BK): k(415) = 0,18
EXEMPLOS DA ACTIVIDADE DOS ANTAGONISTAS DA BRADIQUININA
De acordo com os métodos habitualmente aceites para ensaiar a bradiquinina e quininas relacionadas, como descreveu Trautschold (Handbook of Expt. Pharmacol. Vol. 25, Springer Verlag, pág. 53-55, 1970) em relação à inibição da acção miotrópica da bradiquinina, ensaiaram-se antagonis /
tas deste composto em úteros estrus natural ou induzido de ra to e no íleo de cobaia. Determinou-se as capacidades de inibi ção no útero de rato (RUT) e no íleo de cobaia (GPl) isolados, como descreveu Schild em relação aos antagonistas de compostos activos sob o ponto de vista biológico (Br. J. Pharmacol. 2; I89, 1947), utilizando métodos habitualmente aceites. Nestes ensaios determina-se a curva dose-resposta para a substância de referência, a bradiquinina. A dose de bradiquinina que pro-
contracção máxima
Administra-se ao tecido 30 segundos antes do inicio da sua incubação com uma dose de antagonista uma quantidade de bradiquinina equivalente duas vezes a dose DE__
Neste protocolo aumenta-se as doses do antagonista até que a pré-incubação com uma dose do mesmo reduza a contracção provocada pela dose dupla
DEt- de bradiquinina até se conseguir uma reacção igual à pro50 vocada por uma única dose de bradiquinina. 0 valor pAo representa o logaritmo negativo da concentração molar de antagonis ta necessário para reduzir a resposta de uma dose dupla DE^ de bradiquinina até à de uma dose ΒΕ^θ. Uma unidade do valor pAo representa uma situação de alteração de magnitude na capa cidade. Semelhantemente o logaritmo negativo da dose de bradi quinina que provoca. 5θ% da contracção máxima dos tecidos é, ha bitualmente conhecido como o valor pD9. A bradiquinina tem um valor de pDo de 7,9 quando actua no útero do rato e de 7,4 quan do actua no íleo da cobaia.
POTÊNCIA DE ANTAGONISTAS DA BRADIQUININA
EXEMPLO # ESTRUTURA pA2/RUT
DPhe^-BK pA2/GPI
5,0
| 2 DThi^-BK | 4,6 | |
| 3 DPal^-BK | 5,0 | 4,8 |
| 4 DPhe,- _-BK °, í | 5,2 | |
| 5 DPhe6CDF7-BK | 4,9 | 5,8 |
| 6 Thi_ QDPhe_-BK 5,0 7 | 6,5 | 6,3 |
| 7 Thi_ aDThi_-BK 5,o 7 | 4,2 | 5,8 |
| 8 ThiK aDPal_-BK 5,o 7 | 4,2 | |
| 10 DArg0-DPhe?-BK | 5,6 | |
| 11 DArgQ-DPro3DPhe7-BK | 4,0 | |
| 13 Lys-Lys-DPhe7-BK | 5,1 | |
| 14 Lys-Lys-Thi^ gDPhe7~BK | 6,0 | 5,3 |
| 15 DArg0-Th±5 gDPhe7-BK | 5,5 | 6,1 |
| 16 DArg -DPro„Thi· QDPhe„-BK 0 j 5,0 7 | 5,2 | |
| 18 Hyp2Thi5 gDPhe^BK | 5,6 | |
| 19 Lys-Lys-Hyp2Thi5 gDPhe^BK | 5,8 | |
| 20 Hyp^Thi^ gDPhe^BK | 7,0 | 4,7 |
| 21 DArgQ-Hyp^Thi^ gDPhe^BK | 7,2 | |
| 22 Hyp2 3Th±5 gDPhe^BK | 6,7 | |
| 23 Hyp2 3Th±5 gDPhe6CDF7-BK | 6,5 | |
| 64 DArg0-Hyp2Thi5 gDPhe^BK | 5,7 | |
| 65 DArg()-Hyp2,3Thi5,gDPhe7-BK | 7,1 | |
| 72 Lys-Lys-Hyp2DPhe7-BK | 5,6 | |
| 77 Lys-Lys-Hyp3Thi5 gDPhe^BK | 6,7 |
EXEMPLO DA ESPECIFICIDADE DO ANTAGONISMO NO MÚSCULO LISO EM RELAÇÃO ÃS QUININAS
Demonstra-se a especificidade dos antagonistas da bradiquinina, de acordo com a presente invenção, pela capacidade que exibem de inibir a actividade miotrópica da bradl- 35 f quinina (BK) e de duas quininas relacionadas com a primeira e importantes sob o ponto de vista fisiológico, a calidina (KAL, Lys-BK) e a metionil-lisil-BK (MK-BK), mas não a actividade miotrópica induzida pelos peptidos relacionados com as quininas como, por exemplo, a angiotensina II (ANG) ou substân cia P (SP). Em cada um destes casos, como se demonstra, os antagonistas relacionados com a bradiquinina inibem as contracções produzidas pelos agonistas com ele relacionados mas não exercem efeito sobre as substâncias peptídicas miotrópicas não relacionadas com a quinina. As capacidades de inibição que se apresentam no quadro seguinte designam-se por valores pAg*
Avaliação da Especificidade dos antagonistas da bradiquinina no íleo de cobaia
EXEMPLO # ESTRUTURA ÍLEO DE COBAIA
| BK | KAL | MK-BK | ANG | SP | ||
| 1 | DPhe^-BK | 5,0 | 5,6 | 6,0 | Não | Não |
| 6 | Thi_ QDPhe -BK 5,o | 6,3 | 6,4 | 5,2 | Não | Não |
| 10 | DArgQ -DPhe^-BK | 5,6 | 6,0 | 6,3 | Não | Não |
| 15 | DArgrt -Thic QDPhe_-BK O 5.0 ( | 6,1 | 6,7 | 6,4 | Não | Não |
EXEMPLO DO ANTAGONISMO EXERCIDO PELOS ANTAGONISTAS DA BRADIQUININA SOBRE A PRESSÃO SANGUÍNEA NO RATO
De acordo com os ensaios descritos por Roblero,
Ryan e Stewart (Res, Commun, Pathol. Pharmacol. 6s2O7, 1973), avaliou-se, in vivo, os efeitos dos antagonistas da bradiqul36 Λ.
nina sobre a pressão sanguínea no rato anestesiado. Quando se
tração de 25 jug/min, reduz-se a resposta a uma dose depresso-
minutos depois de terminar a administração do antagonista o efeito depressor da bradiquinina retorna a uma resposta normal. Estes antagonistas produzem também inibição da resposta a bradiquinina quando injectados sob a forma de uma mistura con centrada de bradiquinina e antagonistas, quer pela via intraaórtica quer pela via intravenosa.
EXEMPLOS DE APARECIMENTO DE RESISTÊNCIA À DEGRADAÇÃO ENZIMÁTICA PELO AUMENTO DA EXTREMIDADE
N-TERMINAL DOS ANÁLOGOS DA BRADIQUININA.
Pode avaliar-se convenientemente a capacidade dos análogos de bradiquinina para resistir à degradação enzimática, in vivo, causada, por exemplo, pelas quininases, determinando, por exemplo, a acção residual vasodepressora de um dado análogo após uma única passagem na circulação pulmonar no rato anestesiado (j. Roblero, J.W. Ryan e J.M. Stewart, Res. Commun. Pathol. Pharmacol. 6:207, 1973) depois de adminis trado por via intraaórtica e intravenosa. Neste sistema e utilizando análogos de bradiquinina substituídos na extremidade N-terminal (agonistas) obtêm-se os resultados seguintes:
.- 37
DESTRUIÇÃO PULMONAR NO RATO DE ANÁLOGOS DE
BRADIQUININA MODIFICADOS NA EXTREMIDADE N-TERMINAL
ESTRUTURA PEPTÍDICA $ DESTRUIÇÃO
Bradiquinina (BK)
Lys-BK95
DArg-BK92
DLys-BK89
Lys-Lys-BK
Thi_ q-BK
5,»
Lys-Lys-Thl^ g-BK
A resistência dos análogos de bradiquinina aumentados na extremidade N-terminal à degradação pela quininase, especialmente os que exibem alongamentos Lys-Lys, sugere que se pode obter antagonistas da actividade da bradiquinina que actuam durante muito tempo modificando os inibidores da / D-Phe^__7-BK com um alongamento Lys-Lys . Além disso, tendo -se observado que a adição de um resto de D-Arg à extremidade
agonistas
origem
mento da potência uterina sem afectar a actividade do íleo procedeu-se a síntese de análogos de D-Phe^-BK aumentados com um resto D-Arg que actuam como inibidores tecidulares especí ficos .
alongamento da extremidade N-terminal da
- 3 8
D-Phey-BK com Lys-Lys ou com o resíduo de D-Arg reduziu a capacidade agonista no ensaio uterino mas não produziu qualquer efeito sobre o antagonismo observado no ensaio do íleo. De um modo semelhante dimtouiu-se a acção inibitória da Thi^ g-DPhe
-BK sobre o útero adicionando à extremidade N-terminal quer um alongamento Lys-Lys quer um resto de D-Arg. No ensaio com o íleo a adição de um resto de D-Arg ao antagonista da Thi^ g-DPhey-BK, que é muito potente, produziu apenas uma acção ligeira sobre a potência inibitória.
EXEMPLOS DE APARECIMENTO DE SELECTIVIDADE TECIDULAR MODIFICANDO OS ANTAGONISTAS DA BRADIQUININA NAS POSIÇÕES
E 3
Os agonistas da bradiquinina preparados modificando a sequência nonapeptídica da bradiquinina exibem, nos clássicos ensaios no útero de rato (RUT) e no íleo de cobaia (GPl), capacidades semelhantes às da bradiquinina. Recentemen te tem sido descrita a dissociação das actividades do músculo liso pelos análogos da bradiquinina contendo ácido aminoisobutírieo (Aib) na posição 7 (R. J· Vavrek e J.M. Stewart, Peptides 1:231, 1980 ) e pelos análogos da bradiquinina com múltiplas substituições por aminoácidos com a configuração D em posição 6 e 7 (R.J. Vavrek e J.M. Stewart, in Kinins 1984, L.M. Greenbaum, cd., Plenum Press, NY, 1985) no que respeita à actividade uterina significativamente intensa vs a activida de do ileo.
A adição de um resto de aminoácido com a configuração D, como por exemplo D-Arg, à extremidade N-terminal de
um antagonista da bradiquinina, selectivo do íleo, tal como
DPhey-BK, de que resulta a DArg^-DPhey-BK, não altera a selectividade em relação à actividade inibitória da bradiquinina sobre este órgão. A modificação da DPhey-BK em posição 3 adicionando um resto de DPro de que resulta a DProj-DPhey-BK elimina a actividade antagonista no ensaio do íleo e destrói a actividade agonista no ensaio uterino. A substituição do resto de Pro em posição 3 na DArgQ-DPhey-BK inverte o espectro de actividade do músculo liso em relação ao antagonismo selectivo no útero, com perda total do antagonismo da bradiquinina no en saio do íleo. Do mesmo modo a substituição de um resto de Pro em posição 3 no antagonista não específico DArgQ-Thi^ g-DPheyresto de DPro elimina o antagonismo à acção da bra-BK, pelo diquinina no íleo, mas a acção antagónica no ensaio uterino permanece total
ESPECIFICIDADE ANTAGONISTA NOS ENSAIOS COM MÚSCULO
LISO MEDIANTE MODIFICAÇÃO DA POSIÇÃO 3
| EXEMPLO # | ESTRUTURA | RUT | GPI | |
| 1 | DPhey-BK | (1$ AG) | pA2 | = 5,0 |
| 10 | DArδθ-DPhey-BK | (0,1$ AG) | pA2 | = 5,0 |
| 59 | DPro^-DPhey-BK | 0 | 0 | |
| 11 | DArg0-DPro3-DPhey-BK | pAg = 4,6 | 0 | |
| 15 | DArgQ-Thi5 gDPhey-BK | pA2 = 5,2 | pA2 | = 6,1 |
| 16 | DArg0-DPro^Thi^ g- | |||
| DPhey-BK | P-Ag = 5,2 | 0 |
- 4ο AG « capacidade agonista em relação a 100 partes de bradiqui nina, pAg é a capacidade de inibição de acordo com a definição de Schild (Br,J, Pharmacol. 2:189, 1947).
Também se pode alterar a selectividade tecidular dos análogos da bradiquinina modificando o resto de Pro em posição 2, Observou-se que as substituições realizadas com Vai, Sar, Pro, Ala, Hyp e Aib -aminoisobutirato) em posição 2 conferem uma selectividade tecidular diferente da dos análogos de bradiquinina utilizados no ensaio da actividade miotrópica avaliada no íleo de cobaia versus útero de rato (R.J. Vavrek e J,M, Stewart, Peptides, 231-235, 1980), A selectividade teci dular que estas substituições em posição 2 conferem a diversos análogos de bradiquinina sugere que uma substituição semelhante em qualquer análogo da bradiquinina, incluindo os que exibem actividade antagonista, confere selectividade tecidular.
As aplicações terapêuticas dos novos antagonistas da bradiquinina incluem o tratamento relacionado não só com a produção, pelo próprio animal, de bradiquinina ou quininas relacionadas, mas também com a injecção no animal de peptj. dos relacionados com a bradiquinina como consequência de morde duras e picadas. Pode utilizar-se a aplicação tópica individualmente ou em associação com uma administração subcutânea dos antagonistas da bradiquinina de acordo com a presente invenção, para tratar os efeitos dos peptidos relacionados com a bradiquinina como dor, inflamação e inchaço.
Pode utilizar-se terapeuticamente com êxito, an
tagonistas da bradiquinina de acordo com a presente invenção em outras situações de traumatismo, inflamação ou patológicas que se sabe sofrerem a intervenção da bradiquinina ou serem exarcebadas por uma produção em excesso da mesma. Estas condições incluem traumatismos locais como, por exemplo, feridas, queimaduras e erupções, angina, artrite, asma, alergias, rinite, choque, inflamações estomacais, pressão sanguínea baixa, tratamento sistémico da dor e da inflamação e motilidade reduzida do esperma que origina esterilidade masculina. Como se re feriu pode administrar-se vantajosamente os antagonistas da bradiquinina de acordo com a presente invenção através de vias de administração diversas incluindo a absorção sublingual tal como se administra a nitroglicerina ou por meio de sistemas terapêuticos transdérmicos que utilizam agentes que favorecem a absorção através da pele como se utiliza no tratamento da angina.
Com base nos valores de PAg e DE_rt de acordo com a presente invenção e nos trabalhos científicos já realizados e relacionados com a capacidade agonista é possível aos espe cialistas na matéria calcular a dose dos novos agonistas da bradiquinina de acordo com a presente invenção.
Consequentemente avaliou-se que a dose característica administrada em situações de dor e inflamação de feridas, queimaduras e erupções deveria estar compreendida entre 0,1 e 5 mg/ml; nas apresentações sob a forma de spray” para administração nasal e apropriadas para o tratamento da rinite, alergias e asma a dose conveniente deveria estar compreendida entre 0,1 e 5 mg/ml; nas apresentações para administrar por via intravenosa e apropriadas para o tratamento de inflamação sistémica, choque, artrite, alergias e asma e para aumentar a
motilidade do esperma a dose conveniente deveria estar compreendida entre 0,1 e 10 mg/kg; nas apresentações para administra ção oral e apropriadas para o tratamento da inflamação estomacal ou dor e inflamação geral a dose conveniente deveria estar compreendida entre 10 e 100 mg/kg. Os antagonistas da bradiqui nina também se podem administrar através da vagina, recto, boca ou através de outra via interna aceitável.
Como reconhecem os especialistas na matéria a presente invenção exibe uma grande área de aplicação fornecendo os inibidores competitivos com as actividades biológicas da bradiquinina produzida pelo organismo doente, traumatizado e em estado de choque. As vantagens da presente invenção ao sub_s tituir a L-Pro em posição 7 por aminoácidos com a configuração D, para converter os agonistas da bradiquinina em antagonistas consistem em proporcionar uma grande variedade de antagonistas específicos e competitivos que reduzem os efeitos conhecidos da bradiquinina. As vantagens adicionais de acordo com a presente invenção, modificando a posição 7 da L-Pro em conjunção com modificações em outras posições dos novos antagonistas consistem em proporcionar uma variedade de compostos úteis. Poderá ainda observar-se que a presente invenção é susceptível destas e de outras modificações dentro dos parâmetros da mesma sem se afastar do âmbito das suas reivindicações.
Claims (26)
1,- Processo para a preparação de péptidos derivados da bradiquinina de fórmula geral
A-Arg-B-C-D-W-X-Y-Z-Arg I na qual
A representa um átomo de hidrogénio, um resto de amino-ácido com a configuração D ou L, um dipéptido que contém amino-ácidos com a configuração D ou L, um polipeptido que compreende amino-ácidos com a configuração D ou L, um gru po protector do átomo de azoto terminal de tipo acilo, uretano aromático ou um grupo protec tor de tipo alquilo;
B representa um grupo D ou L-prolina (Pro), D ou L-amino-ácido alifático cíclico, D ou L-amino-ácido alifático, D ou L-amino-ácido aromático ou D ou L-amino-ácido aromático substituído;
C representa um grupo D-prolina (Pro), L-prolina (Pro), D ou L-amino-ácido cíclico, D ou L amino-ácido alif ático, D ou L-amino-ácido aromati co ou D ou L-amino-ácido aromático substituído;
D representa um grupo glicina (Gly), L-amino-áci do alifático, L-amino-ácido aromático ou L-ami no-ácido aromático substituído;
W representa um grupo L-fenilalanina (Phe), L-fe^ nil-alanina (Phe) substituído, L-amino-ácido alifático, L-amino-ácido aromático ou L-amino
-ácido aromático substituído;
X representa um grupo L-serina (Ser), glicina (Gly), D ou L-amino-ácido alifático, D ou L-amino-ácido aromático ou D ou L-amino-ácido aromático substituído ;
Y representa um grupo D-amino-ácido aromático, D-amino-ácido aromático substituído ou D-amino-ácido alifático; e
Z representa um grupo L-fenilalanina (Phe), L-fenilalanina substituído, L-amino-ácido alifático, L-amino-ácido aromático ou L-amino-ácido aromátjl co substituído; e dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se substituir um grupo L-prolina em posição 7 com amino-áci dos de configuração D, para se obterem compostos com actividade antagónica da bradiquinina, de se reforçar esta acção e de se conferir resistência aos enzimas e/ou especificidade tecidu lar mediante substituições adicionais em outras posições.
2,- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo Y representa
DPhe, beta-2-tienil-DAla (DThi), beta-2-piridil-DAla (DPal), beta-2-naftil-DAla(DNal), DHis, D-homo-Phe(DhPhe), O-metil-DTyr(DOMT), D-alfa-fenil-Gly(DPhg), DTrp, DTyr, pN02-DPhe(PNF) ou pCl-DPhe(CDF), caracterizado pelo facto de se partir dos compostos iniciais correspondentemente substituídos,
3. - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I com a seguinte sequência
Η-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-S er-Y-Phe-Arg e dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo fa£ to de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
4. - Processo de acordo com a reivindicação 3, pa ra a preparação de compostos de fórmula geral I na qual o símbç» lo Y representa um grupo D-fenilalanina (DPhe) e dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
5. - Processo de acordo com as reivindicações 1 ou 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual o símbolo Y representa um resto de um D-amino-ácido simples, W representa um amino-ácido que compreende um grupo tienilo e Z representa um amino-ácido que comporta um grupo tienilo, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caract£ rizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
6. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual:
a, o símbolo A representa um átomo ou grupo escolhido entre:
i) um átomo de hidrogénio, ii) um resto de um amino-ácido com a configuração
D ou L, iii) um grupo protector N-terminal,
- Ιι6 iv) um dipéptido, e
v) um polipéptido:
e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais cor respondentemente substituídos.
7. - Processo de acordo com a reivindicação 6, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual:
A representa um grupo escolhido entre D-Arg, D-Lys, L-Thi, Lys-Lys, Met-Lys e Gly-Arg-Met-Lys;
B representa um grupo escolhido entre L-Pro, L-hidroxiprolina, ácido aminoisobutírico (Aib), ácido L-azetidina-2-carboxílico (Azt), ácido L-tiazolidina-2-carboxílico (Thz), ácido isonipecótico (inip) e L-dehidroprolina;
C representa um grupo D- ou L-prolina (Pro);
D representa um grupo glicina (Gly) ou L-alanina (L-Ala);
W representa um grupo escolhido entre L-fenilalanina (L-Phe) ou fenilalanina substituída, leucina (Leu), beta-2-tienilalanina(Thi), beta-2-naftil-alinina(Nal), 2-
-piridil-alanina (Pal) e O-metil-tirosina (OMT);
X representa um grupo escolhido entre L-serina (Ser), glicina (Gly), p-cloro-D-fenilalanina (pCl-DPhe) ou D-fenilalanina (D-Phe);
Y representa um grupo escolhido entre D-fenilalanina(D-Phe), beta-2-tienil-D-alanina (D-Thi), beta-2-piridil-D-alanina, beta-2-naftil-D-alanina, D-histidina (D-His), D-homo-fenilalanina, orto-metil-D-tirosina (DOMT), D-alfa-fenil-glicina (DPhg), D-triptofano (DTrp), D-tirosina (D-Tyr) e para-cloro-D-fenilalanina (CDF); e
Z representa um grupo escolhido entre Leu, Thi, Pal, Phe, ou Phe substituído, Thi, O-metil-Tyr (OMT) ou beta-2-naftil-Ala-(Nal), caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
8. - Processo de acordo com a reivindicação 6, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual A representa um átomo de hidrogénio, B representa um grupo Pro, C representa um grupo Pro, D representa um grupo Gly, X repr£ senta um grupo Ser, W representa um grupo Phe e Z representa um grupo Phe, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
9. - Processo de acordo com a reivindicação 6, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo Y representa
DPhe, beta-2-tienil-DAla,(DThi), beta-2-piridil-DAla(DPal), 2-naftil-DAla(DNal), DHis, D-homo-
-Phe(DhPhe), O-metil-DTyr(DOMT), D-alfafenil-Gly(DPhg), DTrp, DTyr ou pCl-DPhe(CDF), caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais cor respondentemente substituídos.
10. - Processo de acordo com a reivindicação 6, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual Y r£ presenta um D-amino-ácido simples, W representa um resto de um amino-ácido que comporta um grupo tienilo e Z representa um ami no-ácido que compreende um grupo tienilo, e dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos,
11. - Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 6, 9 ou 10, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual o símbolo B representa hidroxiprolina e/ou o símbolo C representa hidroxiprolina, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
12. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de péptidos antagonistas modificados de fór mula geral (Arg-B-C-D-W-X-Y-Z-Arg) I na qual
A representa arginina;
B representa L-Pro, um L-amino-ácido alifático cíclico, um L-amino-ácido alifático, um L-amino-ácido aro mático ou um L-amino-ácido aromático substituído;
C representa um grupo D-Pro, um grupo L-Pro, um amino-
-ácido cíclico, um amino-ácido alifático, um amino-ácido aromático ou um amino-ácido aromático substituído com a configuração D;
D representa um grupo Gly, um amino-ácido alifático, um amino-ácido aromático ou um amino-ácido aromático substituído com a configuração L;
W representa um grupo L-Phe ou Phe substituído, um amino-ácido alifático ou amino-ácido aromático;
X representa um grupo L-Ser, um grupo Gly, um D- ou L-amino-ácido alifático, um D- ou L-amino-ácido aromático ou um D- ou L-amino-ácido aromático substituído;
Y representa um D-amino-ácido aromático ou um D-amino-ácldo aromático substituído; e
Z representa um grupo L-Phe ou Phe substituído, um amino-ácido alifático ou um amino-ácido aromático;
e dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
13.- Processo de acordo com a reivindicação 12, para a preparação de peptidos antagonistas modificados de fórmula geral I na qual o símbolo Y representa:
(DPhe), beta-2-tienil-DAla (DThi), beta-2-piridil-DAla (DPal), beta-2-naftil-DAla(D-Nal), DHis, D-homo-Phe(DhPhe), O-metil-DTyr(DOMT), D-alfa-fenil-Gly(DPhg), DTrp, DTyr ou pCl-DPhe (CDF); e dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais cor
- 50 respondentemente substituídos.
14, - Processo de acordo com as reivindicações 12 ou 13, para a preparação de compostos peptídicos antagonis tas modificados de fórmula geral (Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Y-Phe-Arg) e dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo fa_c to de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos,
15, - Processo de acordo com a reivindicação 14, para a preparação dos compostos peptídicos antagonistas modificados aí referidos em cuja fórmula geral o símbolo Y representa um grupo D-Phe e dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais cor respondentemente substituídos,
16, - Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 12 ou 13, para a preparação de compostos pept£ dicos antagonistas modificados com a fórmula geral aí referida na qual o símbolo Y representa um D-amino-ácido simples e W e Z representam, cada um, um amino-ácido que compreende um grupo tienilo, ou dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
17, - Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 12 ou 13, para a preparação de compostos peptí dicos antagonistas modificados com a fórmula geral aí definida, na qual o símbolo B representa L-hidroxiprolina, D representa alanina (Ala), W representa leucina (Leu), beta-2-tienil-alanina (Thi) ou 2-piridil-alanina (PaL), X representa pa ra-cloro-D-fenilalanina (pCl-D-Phe) ou D-Phe e Z representa Leu, Thi ou Pal, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos*
18.- Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 12 ou 13, para a preparação de compostos com a fórmula geral aí definida, na qual os símbolos B e C represen tam, cada um, hidroxiprolina, W representa beta-2-tienil-alanina (Thi), Y representa um D-amino-ácido aromático eventualmente substituído e Z representa beta-2-tienilalanina (Thi), caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais corre spondentemente substituídos.
19·- Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado pelo facto de se combinar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula geral I, preparado pelo processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 ou 2, que possui resistência reforçada à degradação enzimática e em que o símbolo A representa D-Arg, D-Lys, Lys-Lys, L-Thi, Met-Lys ou Gly-Arg-Met-Lys ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, como ingre^ diente activo, com um veículo aceitável em farmácia.
20,- Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado pelo facto de se combinar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula geral I, preparado pelo processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, que possui selectividade tecidular reforçada e em que os símbolos A e/ou C representam grupos escolhidos entre L-Pro, L-hidroxiprolina, D-Pro, D-valina, L-valina, ácido alfa-aminoisobutírico (Aib), L-Ala, D-Ala, Sar, D-Gly,
L-Gly e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêu tico, como ingrediente activo, com um veículo aceitável em farmácia.
21. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado pelo facto de se combinar uma quantidade eficaz de um composto de fórmula geral I, preparado pelo processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 ou 2, que possui potência reforçada, e em que os símbjo los V e/ou Z representam grupos escolhidos entre
Phe, O-metil-Tyr(OMT), p-cloro-Phe(CLF), p-nitro-Phe(PNF), beta-2-naftil-Ala (NAL), Tyr, Thi e Pal, e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, como ingrediente activo, com um veículo aceitável em farmácia.
22. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado pelo facto de se combinar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto preparado pelo processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 6 ou 9, que possui resistência reforçada a degradação enzimática, em que o símbolo A representa um grupo D-Arg, D-Lys, Lys-Lys, Met-Lys ou Gly-Arg-Met-Lys ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico como ingrediente activo, com um veículo aceitável em farmácia.
23. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado pelo facto de se combinar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto preparado pelo processo de acordo com uma das reivindicações 6 ou 9, que possui selectividade tecidular reforçada e em que os sím- 53 - bolos B e/ou C representam, cada um, um grupo escolhido entre L-Pro, L-hidroxiprolina, D-Pro,-Pro, D-valina, L-valina, ácido alfa-aminoisobutírico (Aib), L-Ala, D-Ala, Sar, D-Gly ou L-Gly e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêu tico, como ingrediente activo, com um veículo aceitável em farmácia.
24. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado pelo facto de se combinar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto preparado pelo processo de acordo com uma qualquer das reivindicações
6 ou 9, que possui potência reforçada e em que os símbolos W e/ou Z representam grupos escolhidos entre Phe, Thi, Tyr, Pal, O-metil-Tyr(OMT), para-cloro-Phe(CLF), para-nitro-Phe(PNF) e Beta-2-naftil-Ala(Nal), e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, como ingrediente activo, com um veículo aceitável em farmácia.
25. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado pelo facto de se combinar uma quantidade terapêuticamente eficaz de um péptido antagonista modificado preparado pelo processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 12 ou 13, que possui selectividade tecidular reforçada e em que os símbolos B e/ou C representam grupos escolhidos entre L-Pro, L-hidroxiprolina, D-Pro ou D-Pro, D-valina, L-valina, ácido alfa-aminoisobutírico (Acb), L-Ala D-Ala, Sar, D-Gly ou L-Gly, e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, como ingrediente activo, com um veículo aceitável em farmácia.
26. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado pelo facto de se combinar uma quantidade terapêuticamente eficaz de um péptido antagonista modificado preparado pelo processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 12 ou 13, que possui potência reforçada e em que os símbolos W e/ou Z representam grupos escolhidos entre Thi, Pal, Nal, OMT, PNF, CLF, e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, como ingrediente activo, com um veículo aceitável em farmácia.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PT8428287A PT84282B (pt) | 1987-02-12 | 1987-02-12 | Processo para a preparacao de peptidos antagonistas da bradiquinina |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PT8428287A PT84282B (pt) | 1987-02-12 | 1987-02-12 | Processo para a preparacao de peptidos antagonistas da bradiquinina |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PT84282A PT84282A (en) | 1987-03-01 |
| PT84282B true PT84282B (pt) | 1990-11-20 |
Family
ID=20083988
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PT8428287A PT84282B (pt) | 1987-02-12 | 1987-02-12 | Processo para a preparacao de peptidos antagonistas da bradiquinina |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PT (1) | PT84282B (pt) |
-
1987
- 1987-02-12 PT PT8428287A patent/PT84282B/pt not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT84282A (en) | 1987-03-01 |
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