PT90507B - Processo para a preparacao de compostos macrolidos - Google Patents

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Derek R Sutherland
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Michael John Dawson
Richard Bell
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American Cyanamid Co
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    • C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
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    • A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
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Description

A presente invenção refere-se a novos compostos de macrolidos possuindo actividade antibiótica, aos processos cara a sua preparação e às composições que os contêm.
Assim, de acordo com um aspecto da presente inven ção, proporcionam-se compostos de fórmula (I)
Ϊ.Α. .
(1) em que R representa um resíduo de açúcar ou um seu derivado acilado;
R3· representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo:
y 2
Y representa -CHg-j 1 representa -CH- e X repre.
senta
-C/ em que R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo 0Rb (em que OR representa um grupo hidroxilo ou um grupo hidroxi lo substituído possuindo até 25 átomos de carbono) e Pm repre. senta um átomo de hidrogénio, ou R e RJ em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >C=0, >C=CH2 ou >C=U0R‘ (em que R( representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo(C, Co) ou um gruno alquenilo(C-)-CQ) e o grupo >C=1IOR está na Configuração E_7 ou -Y -X-Y - represen ta -CH=CH-CH- ou -CH2-CH=C; e
6
R representa um grupo OR conforme anteriormente
- 2 5 ' '45 definido e R representa um atomo de hidrogénio, ou R e R em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >C=0 ou >C=1'TOR (em que R possui as significa7 ções anteriormente definidas para R ), e seus sais» grupo R quando estiver presente nos compostos de fórmula (I) pode representar um grupo acilo, por exemplo um grupo da fórmula R^CO- ou R3OCO- ou R^OCS- (em que R3 representa um grupo alifático, aralifático ou aromático, por exemplo um grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, ciclo-alquilo, aralquilo ou arilo), um grupo formilo, um grupo R1® o qual possui as mesmas significações anteriormente definidas para R3, um grupo R^SOg- (em que R11 representa um grupo alquilo (G.-C.) ou arilo (Cr-Cn n), um grupo sililo, um grupo acetal ci_ ±4 o 2.2.
clico ou aciclico, um grupo -CO(CH2) C02R (em que R repre senta um átomo de hidrogénio ou um grupo conforme anteriormen o te definido para R e n representa 0, 1 ou 2) ou um grupo R13R1z’'1JC0- (em que R13 e R1^ podem representar individual e independentemente um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo
10
Quando R ou R representarem grupos alquilo, po dem ser por exemplo grupos alquilo(C^-Cg), por exemplo metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo, t-butilo ou n-heptilo, podendo 'esses grupos alquilo ser também substituí9 dos. Quando R representar um grupo alquilo substituido, pode ser substituido, por exemplo, por um ou vários, eventualmente dois ou três átomos de halogéneo (por exemplo átomos de cloro ou de bromo), ou por um gruoo carboxi, alcoxi(Cn-C.) (por e1 410 xemplo metoxi, etoxi), fenoxi ou sililoxi. Quando R representar um grupo alquilo substituido, pode ser substituido por um grupo ciclo-alquilo, por exemplo ciclo-propilo.
10
Quando R e R representarem grupos alquenilo ou alquinilo, nreferencialmente possuem 2-8 átomos de carbono e 9 * 10 quando R e R representarem grupos ciclo-alquilo, podem ser
por exemplo cicloalquilo(C^-C^)» tal como ciclo-alquilo(G^-Ογ), por exemplo grupos ciclo-pentilo.
10
Quando R e R representarem grupos aralquilo, possuem preferencialmente 1-6 átomos de carbono no radical alquilo, e os grupos arilo podem ser carbociclicos ou heterociclicos e contêm preferencialmente 4-15 átomos de carbono, por exemplo fenilo. Os Exemplos desses grupos englobam fen-alquilo(G^-Οθ), por exemplo grupos benzilo.
10
Quando R e R representarem grupos arilo, podem ser carbociclicos ou heterociclicos e preferencialmente possuem 4-15 átomos de carbono, por exemplo fenilo.
Quando R^ representar um grupo R^'!'S02-, pode ser por exemplo um grupo metil-sulfonilo ou p-tolueno-sulfonilo.
Quando R^ representar um grupo acetal ciclico, po. de possuir por exemplo 5-7 membros no anel tal como no grupo tetra-hidropiranilo.
9
Quando R representar um grupo sililo ou R conti ver um substituinte sililoxi, o grupo sililo pode suportar 3 grupos que podem ser iguais ou diferentes, seleccionados entre grupos alquilo, alquenilo, alcoxi, ciclo-alquilo, aralqui lo, arilo e ariloxi. Tais grupos podem ser conforme anteriormente definidos e particularmente englobam os grupos metilo, t-butilo e fenilo. Os exemplos particulares desses grupos sililo são trimetil-sililo e t-butildimetil-sililo.
12
Quando R reoresentar um grupo -CO(CH9) CO?RX , , n 12 pode ser por exemplo um grupo -COCO^R ou -COCHgCH^C^R em que R^2 representa um átomo de hidrogénio ou grupo alquilo(C1-G4) (por exemplo metilo ou etilo).
Quando Ηθ representar um grupo R^^R^^HCO-, R^ e
- 4 podem representar individual e independentemente um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo ou etilo.
(Ο-^-Οθ), podem ser por exemplo um grupo metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo ou t-butilo e preferencialmente representa um grupo metilo.
Quando R representar um resíduo de açúcar pode ser por exemplo um mono- ou di-sacarido. Os exemplos de mono-sacaridos englobam açúcares de piranose e de furanose, por exemplo glicose, manose, fructose, galactose, alose, gulose, talose, xilose, treose, lixose, eritrose, altrose, ribose, arabinose, idose, 2-desoxiglicose, glucosamina, galactosamina, desosamina, micaminose, angolosamina, forosamina, megosamina, calcose, aldgarose, micinose, micosamina, micarose, cladinose, oleandrose e 3-demetil-oleandrose. Os exemplos de di-saca ridos englobam c*-L-oleandrosil- W-L-oleandrose e -3-demetil -oleandrosil- <*-3 ’ -demetil-oleandrose.
) Os exemplos particulares do radical R englobam
-L-oleandrosil-cx-L-oleandrose, L-oleandrose, D-desosamina,
D-micaminose, D-angolosamina, D-forosamina, L-megosamina, D-calcose, D-aldgarose, D-micinose, D-micosamina, L-micarose e L-cladinose.
Quando R representar um resíduo de açúcar acilado, o açúcar pode ser conforme anteriormente descrito e o grupo a. cilo node ser conforme definido anteriormente para o grupo R6.
Os compostos de fórmula (I) que contêm um grupo ácido podem formar sais com bases. Os exemplos desses sais en
globam os sais de metais alcalinos tais como os sais de sódio e de potássio.
Os compostos de fórmula (I) nos quais R representa um grupo (X-L-oleandrose ou -L-oleandrosil-c*-L-oleandrose são preferidos.
Nos compostos de fórmula (I), R1 representa prefe rencialmente um grupo isopropilo.
Um grupo importante de compostos de fórmula (I) é 1 2 aquele em que Y representa -CH?-, Y representa -CH- e X reR2 R3 presenta -C-. Os compostos particularmente importantes deste * 2 tioo são aqueles nos quais R representa um átomo de hidrogé3 nio ou um grupo hidroxi, etoxi ou acetiloxi e R representa ,23 um átomo de hidrogénio ou R e R^ em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >0=0, ^0=01^ ou >C=NOCH^.
Outro grupo importante de compostos de fórmula (I) é aquele em que R^ representa um grupo hidroxi, metoxi ou aci loxi (por exemplo acetiloxi) ou R^ e R^ em conjunto com o áto mo de carbono ao qual estão ligados representam >C=N0CH7.
J
Preferencialmente R representa um grupo hidroxilo.
Os compostos activos importantes de acordo com a presente invenção são os de fórmula (I) na qual:
R representa um grupo ιχ-L-oleandrosil- tx-L-olean drose, R1 representa un grupo isopropilo, Y1 representa -CH?-,
4
Y representa -CH-, X representa >C=NOCK_, R representa um grupo hidroxi e R3 representa um átomo de hidrogénio; e
R representa um grupo <x-L-oleandrosil- <X-L-olean 1 η drose, R representa um grupo isopropilo, Y representa -CH^-,
4
Y representa -GH-, X representa -CHO-, R representa um grupo hidroxi e R3 representa um átomo de hidrogénio.
Conforme anteriormente referido, os compostos da presente invenção possuem actividade antibiótica, por exemplo actividade anti-helmintica, por exemplo contra nematoides, e em particular actividade anti-endoparasitica e anti-ectoparasitica. Os compostos da presente invenção também ser utilizados como intermediários para a preparação de outros compostos activos.
Pode demonstrar-se actividade antibiótica dos com postos de fórmula (I), por exemplo, através da sua actividade in vitro contra nematoides que vivam livremente, por exemplo Caenorhabditis elegans.
Os ectoparasitas e os endoparasitas infectam os seres humanos e uma diversidade de animais e são particularmente correntes em animais de explorações pecuárias tais como os suínos, ovídeos, bovinos, caprinos e em avicultura (por exemplo na criação de galinhas e de perús), equídeos, coelhos, aves de caça, aves de gaiola e em animais domésticos tais como os cães, gatos, porcos da índia, gerbos e murganhos. As in fecções parasiticas do gado, provocando anemia, desnutrição de perda de peso constituem uma das causas fundamentais das perdas económicas em todo o mundo.
Os exemplos dos géneros de endoparasitas que infectam esses animais e/ou os seree humanos são Ancylostoma, Ascaridia, Ascaris, Asnicularis, Brugia, Bunostomum, Capillaria, Charbertia, Cooperia, Dictyocaulus, Dirofilaria, Dracunculus, Enterobius, Haemonchus, Heterakis, Loa, ITecator, Eematodirus, Eematospiroides (Heligomoroides), Nippostrongylus, Oesophagostomum, Onchocerca, Ostertagia, Oxyuris, Parascaris, Strongylus, Strongyloides, Syphacia, Toxascaris, Toxocara, Trichonema, Trichostrongylus, Trichinella, Trichuris, Triodon- 7 -
tophorus, Uncinaria e Wuchereria.
Os exemplos de ectoparasitas que infectam os animais e/ou os seres humanos são os ectoparasitas artrópodes tais como os insectos de picada, varejeiras, pulgas, piolhos, ácaros, insectos sugadores, carrapatos e outros pragas de dijo teros.
Os exemplos dos géneros de ectoparasitas que infectam os animais e/ou os seres humanos são Ambylomma, Boophilus, Chorioptes, Culliphore, Demodex, Damalinia, Dermatobia, Gastrophilus, Haematobia, Haematopinus, Haemophysalis, HyaloEia, Hypoderma, Ixodes, Linognathus, Lucilia, Kelophaqus, Oestrus, Otobius, Otodectes, Psorergates, Psoroptes, Rhipicephalus, Sarcoptes, Stomoxys e Tabanus.
Além disso, os compostos de fórmula (I) também são utilizáveis no combate às pragas de insectos, ácaros e ne matoides em agricultura, horticultura, silvicultura, saúde pú blica e produtos armazenados. E possível tratar eficazmente as pragas do solo e das culturas de plantas, incluindo cereais (por exemplo trigo, cevada, milho e arroz), vegetais (por exemplo soja), frutos (por exemplo maças, uvas e citrinos), e bem assim das culturas de raízes (por exemplo beterra ba sacarina, batatas). Os exemplos particulares dessas pragas são os ácaros dos frutos e os afídeos tais como os Aphis fabae, Aulacorthum circumflexum, Kyzus persicae, Nephotettix cincticeps, Niloarvata lugens, Panonychus ulmi, Phorodon. humuli, Phyllocoptruta oleivora, Tetranychus urticae e os membros do género Trialeuroides; nematoides tais como os membros dos géneros Aphelencoides, Globodera, Heterodera, Meloidogyne e Panagrellus; lepidopteros tais como Heliothis, Plutella e Spodoptera; gorgulhos dos grãos tais como Anthonomus grandis e Sitophilus granarius;escaravelhos da farinha tais como Tribolium castaneum; moscas como a Musca domestica; himenópteros mineiros das folhas; Pear psylla; Thrips tabaci; baratas tais
- 8 como Blatella germanica e Periplaneta americana e mosquitos tais como Aedes aegyptio
Deste modo, de acordo com a presente invenção pro porciona-se compostos de fórmula (I) conforme anteriormente definida, os quais podem ser utilizados como antibióticos. Sm particular é possível utilizá-los no tratamento de animais e de seres humanos com infecções endoparasiticas, ectcparasiticas e/ou fúngicas e como pesticidas em agricultura, horticultura ou silvicultura para combater pragas de insectos, ácaros e nematoides. Também podem ser utilizados genericamente como pesticidas para combater ou controlar pragas noutras circunstâncias, por exemplo em armazéns, edifícios ou noutros locais públicos ou onde se localizem as pragas. Em geral, é possível aplicar os compostos quer ao hospedeiro (animal, ser humano, plantas ou qualquer tipo de vegetação) ou às próprias pragas ou ao local onde se desenvolvem.
Os compostos da presente invenção podem ser formu lados para administração por qualquer via conveniente para utilização em medicina veterinária ou humana pelo que a invenção engloba no seu âmbito as composições farmacêuticas consti tuídas por um composto de acordo com a invenção adaptadas para utilização em medicina veterinária ou humana. Tais composições podem ser apresentadas para utilização por um processo convencional com o auxílio de um ou vários veículos ou excipientes adequados. As composições da presente invenção englobam as que se encontram numa forma especialmente formulada p_a ra utilização parenteral (incluindo a administração intramamá ria), oral, rectal, tópica, por implantação, oftálmica, nasal ou genito-urinária.
Os compostos de fórmula (I) podem ser formulados para utilização em medicina veterinária ou humana de acordo com os métodos gerais descritos no Pedido de Patente do Reino Unido i'Jfl 2166436.
As dosagens diárias totais dos compostos da presente invenção utilizados quer em medicina veterinária quer humana estarão adequadamente compreendidas no intervalo entre
1-2000 g/kg de peso do corpo, de preferência entre 50-1000 g/ /kg podendo estas ser administradas em doses divididas, por exemplo 1-4 vezes por dia.
Os compostos de acordo com a presente invenção p£ dem ser formulados por qualquer via conveniente para utilização em horticultura ou agricultura pelo que a invenção engloba no seu âmbito as composições constituídas por um composto de acordo com a presente invenção, adaptadas para utilização hortícola ou agrícola. Tais formulações englobam os tipos secos ou líquidos, por exemplo poeiras, incluindo as bases de ooeiras ou de concentrados, pós, englobando os pós solúveis ou humedecíveis, granulados, incluindo microgrânulos ou grânu los dispersiveis, aglomerados, composições fluidificáveis, emulsões tais como as emulsões diluídas ou os concentrados emulsionáveis, banhos tais como os banhos para raízes e para sementes, revestimentos para sementes, aglomerados para semen tes, concentrados oleosos, soluções oleosas, injecções, por exemplo injecções para os caules, aspersões, fumigações e névoas .
De um modo geral essas formulações englobarão o composto em associação com um veículo ou diluente adequado. Tais veículos e diluentes encontram-se descritos no Fedido de Patente Inglesa n9 2166436.
Das formulações a concentração do material activo está geralmente compreendida entre 0,01$ e 99$ e mais preferencialmente entre 0,01$ e 40$ em peso.
Os produtos comerciais são fornecidos geralmente como composições concentradas para serem diluídas até se obter uma concentração apropriada, por exemplo entre 0,001 e
A proporção de aplicação do composto depende de diversos factores incluindo o tipo de praga envolvido e o grau de infestação. Todavia, de um modo geral considera-se adequada uma proporção entre 10 g/ha e 10 kg/ha; preferencialmente entre 10 g/ha e um 1 kg/ha para o controlo de ácaros e de insectos e entre 50 g/ha e 10 kg/ha para o controlo de nematoides.
Para utilização em medicina veterinária e para utilização hortícola e agrícola pode ser desejável utilizar o caldo de fermentação integral como fonte de composto activo. Também pode ser adequado utilizar o caldo seco (contendo mice. lios) ou utilizar micelios separados do caldo e pasterizados ou mais preferencialmente secos, por exemplo por aspersão, por liofilização ou por centrifugação. Se desejado, é possível formular o caldo ou os micelios em composições que englobem veículos, excipientes ou diluentes inertes convencionais, conforme descrito antes.
Os compostos antibióticos da presente invenção po. dem ser administrados ou utilizados em combinação com outros ingredientes activos.
Em particular é possível utilizar um composto antibiótico da presente invenção em conjunto com outros compostos antibióticos. Por exemplo, isto pode ocorrer quando se uti liza caldo de fermentação integral antes da separação dos com postes da presente invenção ou quando se faz reagir os produtos de fermentação brutos de acordo com processos de fermenta ção da presente invenção, sem separação prévia ou posterior; por exemplo, isto pode ser preferível na utilização agrícola de um composto, quando for importante manter baixos custos de produção.
fí possível preparar os compostos de acordo com a
presente invenção segundo diversos orocessos conforme adiante 14 5 * 1 2 se descreve, em que R , R , R , X, Y e Y possuem as signifi cações anteriormente definidas para a fórmula geral (I), salvo quando especificado de outro modo. Em alguns destes proce_s sos pode ser necessário proteger um grupo hidroxilo na posi* ção 5, 13 e/ou 23 no material de partida antes de se efectuar i a reacção descrita. Nesses casos pode ser necessário desprote 1 ger depois o mesmo grupo hidroxilo logo que a reacção tenha ocorrido para se obter o composto desejado da presente invenção. 2 possível utilizar métodos convencionais de protecção e de desprotecção conforme descrito por exemplo em 'Protective Groups in Organic Synthesis’ por Theodora W. Greene (Wiley' -Interscience, New York 1981) e ’Protective Groups in Organic L Chemistry' por J. P. W. McOmie (Plenurn Press, London 1973).
; Assim, é possível remover um grupo acilo tal como um grupo acetilo por hidrólise alcalina, utilizando por exemplo hidroxi do de sódio ou hidróxido de potássio ou amónia em álcool aquo so como o metanol.
I ' Deste modo, de acordo com um aspecto adicional da i presente invenção, proporciona-se um processo para a prepara: ção de um composto de fórmula (I) o qual consiste em incubar í um composto de fórmula (II).
num meio adequado na presença de um micro-organismo ou de uma enzima deles derivada ou de uma preparação derivada de um micro-organismo que contenha a enzima com interesse, susceptível de efectuar a conversão.
Os micro-organismos e seus extractos Edequados pa ra utilização no processo de acordo com a presente invenção podem ser identificados por ensaios preliminares em pequena escala concebidos para demonstrar a capacidade um micro-organismo ou de um seu extracto para converter compostos de fórmu la (II) em compostos de fórmula (I)° A formação dos compostos de fórmula (I) pode ser confirmada por adequadas análises cro matográficas (por exemplo cromatografia líquida de elevado rendimento) da mistura de reacção.
3escobriu-se que os micro-organismos do género Streptornyces e os seus extractos são particularmente adequado, para utilização no processo de acordo com a presente invenção
Os micro-organismos Streptornyces particulares pa- 13 ra utilização no processo de acordo com a presente invenção englobam as estirpes de Streptomvces avermitilis, Streptomyces venezuelae, Streptomyces violaceoniger, Streptomyces erythaeus, Streptomyces spinichromogenes var. kujimyceticus, Streptomyces narbonensis, Streptomyces antibioticus, Streetomyces felleus, Streptomyces chryseus, Streptomyces flocculns, Streptomyces griseoflavus, Streptomyces lavendulae, Streptomyces eurythermus, Streptomyces hygroscopicus, Streptomyces halstedii, Streptomyces,albogriseolus, Streptomyces cirratus, Streptomyces deltae, Streptomyces platensis, Streptomyces fun gicidicus var. espinomyceticus, Streptomyces mycarofaciens, Streptomyces rimosus, Streptomyces djakertepsis, Streptomyces platensis subsp malvinus, Streptomyces ambofaciens e Streptomyces fradiae e os mutantes destas estirpes.
Os micro-organismos Streptomyces particularmente adequados para utilização no processo de acordo com a presente invenção englobam as estirpes de Streptomyces avermitilis por exemplo Streptomyces avermitilis ATCG 31272 e Streptomyces avermitilis ATCG 31780 e os seus mutantes.
Os mutantes das estirpes anteriores podem aparecer espontaneamente ou podem ser produzidos segundo uma diver sidade de métodos incluindo os que se encontram descritos no Pedido de Patente Inglesa 2166436.
Outros micro-organismos que podem ser utilizados no processo de acordo com a presente invenção englobam fungos e preparações de células de plantas.
Os exemplos de fungos particulares para utilização no processo de acordo com a presente invenção englobam Roccellaria mollis, Roccellaria galapagoensis, Schismatomma accedens, Ascochyta pisi, Cladosporium herbarum, Septoria nodorum e Stemphylium botryosum.
Os exemplos de preparações de células de plantas
para utilização no processo de acordo com a presente invenção englobam as preparações de Rhaseolus aureus, Retroselinum hortense, Glycine max, Phaseolus vulgaris, Nicotiana tabacum, Pioscorea deltoidea, Paturé innoxia, Digitalis purpurea e Pigitalis lanata.
Também se pode efectuar a bioconversão utilizando um organismo que contenha o material genético de um dos micro -organismos anteriormente referidos que participe na síntese do composto de fórmula (I). Esses organismos podem ser obtidos utilizando técnicas da engenharia genética, incluindo as descritas por D A Hopwood em Oloning genes for Antibiotic Biosynthesis in Streptomyces Spp.: Rroduction of a hybrid antibiotic’ p 409-413 em Ivíicrobiology 1985, Ed. L. Lieve, Ameri can Society of I.íicrobiology, Washington D.G. 1985. 2 possível utilizar essas técnicas por um processo idêntico ao previamente descrito para a clonagem de genes biossintéticos antibióticos, incluindo os genes biossintéticos para actinorodi na (Malpartida, P. e Hopwood, Ρ. A. 1984, Nature 309, p 462-464), eritromicina (Stanzak, R. e outros, 1986, Biotechnology, 4, p 229-232) e uma enzima importante implicada na produção de penicilina e de cefalosporina em Acremonium chrysogenum (Sansom, S. M. e outros, 1985, Hature, 318, p 191-194).
As enzimas adequadas para utilização no processo de acordo com a presente invenção podem derivar de fontes mui tissimo variadas. Todavia, os micro-organismos Streptomyces anteriormente referidos representam uma fonte particularmente adequada de enzimES susceptíveis de converterem os compostos de fórmula (II) em compostos de fórmula (I).
Num dos aspectos do processo de acordo com a invenção, pode efectuar-se a conversão de um composto de fórmula (II) num composto de fórmula (I) fornecendo o composto de fórmula (II), por exemplo num meio solvente adequado, a uma meio de fermentação constituído pelo micro-organismo anterior
- 15 mente referido na presença de fontes assimiláveis de carbono, azoto e sais minerais. As fontes assimiláveis de carbono, azo to e sais minerais podem ser proporcionadas por nutrientes simples ou complexos. As fontes de carbono englobarão geralmente a glicose, maltosé, amido, glicerol, melaços, dextrina, lactose, sacarose, fructose, ácidos carboxílicos, aminoácidos glicéridos, álcoois, alcanos e óleos vegetais. As fontes de carbono serão constituidas geralmente por 0,5 a 10% em peso do meio de fermentação.
As fontes de azoto englobarão geralmente farinha de soja, licores de infusão de cereais, destilados solúveis, extractos de malte, farinha de semente de algodão, peptonas, farinha de amendoim, extracto de malte, melaços, caseína, mis turas de aminoácidos, amónia (em gaz ou em solução), sais de amónio e nitratos. Também é possível utilizar ureia e outras amidas. As fontes de azoto serão constituidas geralmente por 0,1 a 10% em peso do meio de fermentação.
Os sais minerais nutrientes que é possível incorporar no meio de cultura englobam os sais geralmente utilizados susceptíveis de proporcionar iões de sódio, potássio, amo nio, ferro, magnésio, zinco, cobalto, manganês, vandio, crómio, cálcio, cobre, molibdénio, boro, fosfato, sulfato, clore. to e carbonato.
Pode estar presente um anti-espumífero para controlar a espuma excessiva e pode adicionar-se intervaladamente conforme necessário.
No início do desenvolvimento da cultura, ou mais frequentemente, quando o micro-organismo já estiver a desenvolver-se, por exemplo 2 a 4 dias após o início da cultura, é possível adicionar um composto de fórmula (II) num solvente orgânico miscível com água (por exemplo um álcool como o meta, nol ou propan-2-ol, um diol como propan-l,2-ol ou butan-1,3- 16
-ol, uma cetona tal como a acetona, um nitrilo tal como o ace tonitrilo, um éter tal como tetra-hidrofurano ou dioxano, uma amida substituída tal como dimetil-formamida ou um dialquil-sulfóxido tal como o dimetil-sulfóxido).
A cultura do organismo efectuar-se-á geralmente a uma temperatura compreendida entre 20 e 50°C, de preferência entre 25 e 40°C e desejavelmente ocorrerá com arejamento e agitação, por exemplo misturando ou agitando. 0 meio pode ser inicialmente inoculado com uma pequena quantidade de uma suspensão do micro-organismo esporulado, mas no sentido de evitar uma falha no desenvolvimento pode preparar-se um inoculo vegetativo do organismo inoculando uma pequena quantidade do meio de cultura com a forma de esporo do organismo, e o inócu lo vegetativo pode ser transferido para o meio de fermentação ou, mais preferencialmente, para um ou vários passos de disse, minação em que ocorra desenvolvimento adicional antes da transferência para o meio de fermentação principal. Geralmente efectuar-se-á a fermentação para valores de pH compreendidos entre 4,0 e 9,5, preferencialmente entre 5,5 e 8,5 quando estiver presente um organismo Streptornyces e preferencialmente entre 4,0 e 8,5 quando estiver presente um fungo.
Depois de se ter adicionado à cultura um composto de fórmula (II), normalmente com agitação suave, mantem-se a cultura até se acumular o produto desejado. A presença do pr£ duto no caldo de fermentação pode ser determinada efectuando o controlo dos extractos do caldo por cromatografia líquida de elevado rendimento, e por espectroscopia de UV a 238 nm.
possível isolar o produto a partir do caldo de fermentação integral utilizando técnicas convencionais de isjo lamento e de separação, conforme descrito nos Pedidos de Paten te Ingleses 2166436 e 2176182.
Quando se utiliza células de plantas como parte do processo de fermentação é preferível efectuar a cultura utilizando um meio vegetal contendo um regulador do desenvolvi mento das células das plantas tal como o ácido indol-acético, ácido naftaleno-acético, ácido indol-butírico, ácido 2,4-àicloro-fenoxi-acético, quinetina ou benzil-amino-purina a uma temperatura compreendida entre 15 e 35°O, mantendo-se o valor de pH entre 5,0 e 7,5. Os sais de amónio e os nitratos consti tuem também fontes preferenciais de azoto presentes no meio de fermentação. A sacarose, fructose e glicose constituem tam bém fontes preferenciais de carbono presentes no meio de fermentação.
De acordo com um aspecto adicional do processo da presente invenção, pode efectuar-se a conversão de um composto de fórmula (II) num composto de fórmula (I) combinando e incubando um composto de fórmula (II), por exemplo num solven te adequado (por exemplo um solvente orgânico miscível com água conforme anteriormente definido) com uma preparação da en zima da presente invenção e com um açúcar apropriado, desejavelmente numa solução tampão, por exemplo, a uma temperatura entre 0°C e 60°C, preferencialmente entre 20°C e 40°C, por exemplo cerca de 28°C. Geralmente efectuar-se-á a reacção para valores de pH compreendidos entre 3,5 e 8,5, por exemplo entre 5,5 e 7,5. Quando a reacção estiver completa, isto é, quando o composto de fórmula (II) já não for convertível no composto da presente invenção (conforme determinado pelo controlo dos extractos da mistura de reacção por cromatografia líquida de elevado rendimento e por espectroscopia de UV a 238 nm), recupera-se o produto por técnicas convencionais de isolamento e de separação conforme descrito no Pedido de Patente Inglês 2166436 e 2176182.
Pode preparar-se a enzima para utilização no processo da presente invenção, por exemplo, fazendo a cultura de um micro-organismo que produza a enzima num meio nutriente.
Os meios nutrientes e as condições de fermentação adequados para a preparação da enzima englobam os anteriormente descritos para a preparação de um composto de fórmula (I) a partir de um composto de fórmula (II) na presença de um micro-organismo» 0 momento em que a actividade enzimática necessária atinge um máximo variará, como é evidente, de acordo com o micro-organismo utilizado e, consequentemente, o tempo de cultu ra óptimo para cada estirpe utilizada é desejavelmente determinado de forma independente.
Para os micro-organismos em que a enzima seja ex tracelular, é possível utilizar o meio de cultura líquido ou o filtrado, após a remoção de todas as células, como fonte en zimática. Quando a enzima estiver associada às células pode ser libertada por meios convencionais tais como o tratamento por ultrasons, a trituração com esferas de vidro, homogeneíza, ção, tratamento com enzimas líticas ou com detergentes, após suspensão das células num tampão adequado.
A preparação resultante, com ou sem a remoção dos fragmentos celulares, pode ser utilizada como fonte enzimática. Todavia, é preferível purificar melhor a enzima por meios convencionais. Pode utilizar-se convenientemente a cromatogra fia por lotes ou em coluna com celuloses de permuta iónica ou com adsorventes por afinidade ou com outros adsorventes, por exemplo hidroxil-apatite. Adicionalmente é possível concentrar a enzima ou purificá-la ainda mais por técnicas de criva gem molecular, por exemplo ultrafiltração ou salificação. Em geral, durante os procedimentos de purificação, é desejável manter o pH em valores compreendidos entre 3 e 11.
Pode utilizar-se a enzima numa forma imobilizada, por exemplo fazendo a sua insolubilização ou captura numa ma triz adequada. Deste modo é possível ligar ou associar um extracto da enzima a um polímero orgânico ou inorgânico inerte, capturada sobre uma fibra, ou sobre uma membrana ou polímero tal como gel de poliacrilamida, adsorvida por uma resina de permuta iónica, recticulada com um reagente tal como glutaral. deido, ou oclusa num invólucro com a forma de uma pérola. Van tajosamente é possível utilizar enzimas imobilizadas tanto nos processos por lotes, após os quais é possível utilizar no vamente a enzima, como nos processos em fluxo contínuo em que os substractcs passam através de uma coluna contendo a enzima imobilizada.
Hum aspecto particular do processo de fermentação os compostos de fórmula (I) em que R^ representa um grupo hi droxi são convenientemente preparados a partir dos correspondentes compostos de fórmula (II), num meio adequado, na presença de uma estirpe de Streptomyces avermitilis susceptível de efectuar a conversão.
processo de fermentação anteriormente descrito proporcionará geralmente compostos de fórmula (I) em que R re. presenta um resíduo açúcar. £5 possível preparar os seus derivados acilados a partir de produtos do processo de fermentação utilizando condições normalizadas de H- e/ou O-acilação.
Ê possível preparar compostos intermediários de fórmula (II) fazendo a redução de um composto de fórmula (III)
seguindo-se, se necessário, a remoção de quaisquer grupos de protecção presentes.
A redução pode ser efectuada, por exemplo utilizando um agente redutor tal como um boro-hidreto, por exemplo um boro-hidreto de metal alcalino tal como o boro-hidreto de sódio ou um hidreto de alcoxi-alumínio-lítio, por exemplo hidreto de tributoxi-alumínio-lítio.
A reacção envolvendo o agente redutor boro-hidreto ocorre na presença de um solvente tal como um alcanol, por exemplo álcool isopropílico ou álcool isobutílico, convenientemente a uma temperatura compreendida entre -30°C e +80°C, por exemplo 0°C. A reacção envolvendo um hidreto de alcoxi-alumínio-litio ocorre na presença de um solvente tal como um ó_ ter, por exemplo tetra-hidrofurano ou dioxano, convenientemen te a uma temperatura compreendida entre -78°C e 0°C, por exem pio a -78°G.
E possível preparar os compostos intermediários de fórmula (III) oxidando um composto de fórmula (IV)
/ em que R possui as significações anteriormente definidas na fórmula (I) (com a excepção de não poder representar um grupo hidroxilo)_7 seguindo-se, se necessário, a remoção de quaisquer grupos de protecção presentes.
Os agentes de oxidação adequados para a conversão englobam dialquil-sulfóxidos, por exemplo dimetil-sulfóxido, na presença de um agente activador tal como IT,N’-diciclo-hexil -carbo-di-imida ou de um halogeneto de acilo, por exemplo cio. reto de oxalilo. Pode efectuar-se a reacção convenientemente num solvente adequado tal como um hidrocarboneto halogenado, por exemplo cloreto de metileno a uma temperatura compreendida entre -80 °G e +50 °C0
Ê possível preparar os compostos intermediários de fórmula (IV) por oxidação de um composto de fórmula (V)
Sã
Pode efectuar-se a oxidação, por exemplo, com um agente oxidante tal como o dióxido de selénio, de preferência na presença de um activador tal como um peróxido, por exemplo hidroperóxido de terc-butilo. Pode efectuar-se a reacção convenientemente num solvente inerte tal como um hidrocarboneto halogenado, por exemplo dicloro-metano, um ester, por exemplo acetato de etilo ou de um éter, por exemplo tetra-hidrofurano, a uma temperatura compreendida entre 0°C e 50 °C, de preferência à temperatura ambiente.
Sm alternativa é possível tratar um composto de fórmula (V) com um agente oxidante anteriormente descrito, em ácido fórmico, a uma temperatura compreendida entre 20°C e 100°C, por exemplo 60°C, para proporcionar um composto de fór mula (VI)
o qual após hidrólise ácida, utilizando por exemplo ácido cio ridrico, proporciona um composto de fórmula (IV).
Se desejado é possível preparar compostos interme 1 2 diários de fórmula (VI) em que Y representa -CH9-, Y recre7- γ <
senta -CH- e -X- representa >C=I10R (em que R possui as si£ nificações anteriormente definidas), a partir de um composto correspondente de fórmula (VI) em que Y~ representa -CHg-, Y representa -CH- e -X- representa >C=0, por reacção com o rea gente HgHOR^„
Pode efectuar-se convenientemente a reacção de oximação a uma temperatura compreendida entre -20°C e +100°C, por exemplo entre -10°C e +50°C. Utiliza-se convenientemente 7 o reagente H^HOR na forma de um sal, por exemplo na forma de um sal de adição de ácido tal como 0 cloridrato. Quando se ut. liza esse sal pode efectuar-se a reacção na presença de um _a gente de ligação ácido.
Os solventes que é possível utilizar englobam al- 24 -
cocis (por exemplo metanol ou etanol), amidas (por exemplo ΙΊ,Η-dimetil-formamida, Ν,Ν-dimetil-acetamida ou hexametil-fos foramida), eteres (por exemplo eteres ciclicos tais como tetra-hidrofurano ou dioxano, e eteres aciclicos tais como dime tcxi-etano ou eter dietilico), nitrilos (por exemplo acetonitrilo), sulfonas (por exemplo sulfolano) e hidrocarbonetos tais como os hidrocarbonetos halogenados (por exemplo cloreto de metileno) e bem assim misturas de dois ou vários desses solventes. Também se pode utilizar água como um co-solvente.
Quando se utilizam condições aquosas pode tamponar-se convenientemente a reacção com um ácido, base ou tampão apropriados.
Os ácidos apropriados englobam os ácidos minerais tais como o ácido clorídrico ou sulfúrico, e com ácido carboxílico tal como o ácido acético. As bases adequadas englobam os carbonatos e bicarbonatos de metal alcalino tais como o bi carbonato de sódio, hidróxidos tais como o hidróxido de sódio, e carboxilatos de metal alcalino tais como o acetato de sódio. 0 tampão adequado é o acetato de sódio/ácido acético.
'1
Os comoostos intermediários de formula (V) em que 1 2
Y representa -CHg-, Y representa -CH-, e -X- representa R2 R3 —C— (em que R representa um átomo de hidrogénio ou um
3 z 2 3 grupo OR e representa um átomo de hidrogénio ou R e em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >C=0), R representa um grupo OR e R representa um átomo de hidrogénio, são compostos conhecidos descritos nos Pedidos de Patentes Inglesas nss 2166436 e 2176182.
Os compostos intermediários de fórmula (V) em que —Y^—X—Y2 — reoresenta -CH=CH-CH- cu CHO-CH=C-, R^ renresenta
6* 5 4- * um grupo OR e R'’ representa um átomo de hidrogénio, são com- 25 postos conhecidos descritos no Pedido de Patente Europeia ne 215654.
Os comoostos intermediários de formula (V) em que 1 2
Y representa -CH2-, Y representa -CH- e X representa >C=CH2 podem ser preparados por reacção de um composto correspondente de fórmula (V) em que X representa >C=0 com um reagente de Wittig apropriado, por exemplo um fosforano de fórmula (R ^)^P=CH2 (em que R J representa alquilo(C^-C^) ou arilo, por exemplo arilo monociclico tal como o fenilo. Os solventes de reacção adequados englobam os eteres tais como o tetra-hidrofurano ou o eter dietilico ou um solvente aprótico dipolar tal como o simetil-sulfóxido. A reacção pode ser efectuada a qualquer temperatura adequada, por exemplo a 0°C.
E possível preparar compostos intermediários de 1 2 fórmula (V) em que Y representa -CH9-, Y representa -CH-, X 7 7 representa >C=H0R (em que R possui as significações ante4 6 5 riormente definidas), R^ representa um grupo OR e R3 reprez z 4- 5 senta um átomo de hidrogénio ou R^ e R^ em conjunto com o áto. mo de carbono ao qual estão ligados representam >C=0, ou intermediários em que X representa um grupo
-C2 f θ (em que R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo OR z z e RJ representa um átomo de hidrogénio) ou X representa >C=H0r7 ou -Y^X-Y2- representa -CH=CH_CH ou -CH9-CH=C- e R4 e R em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados g
representam >C=HOR , a partir dos correspondentes compostos
5- e/ou 23-ceto de fórmula (I) oor reacção com um reagente 7
H^HOR utilizando as condições da reacçao de oximaçao anterior mente descritas. Paz-se observar que na preparação da 5,23-bis-oxima de fórmula (V) a partir de uma correspondente 5,23.
8
-di-cetona, os grupos >C=H0R e >C=HOR serão equivalentes.
5
Os intermediários de fórmula (V) na qual R e R em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >C=0, podem ser preparados por oxidação dos corres pondentes compostos 5-hidroxi nos quais R representa um grupo hidroxi.
Rode efectuar-se a reacção com um agente oxidante que sirva para converter um grupo hidroxilo secundário alilico num grupo oxo, proporcionando assim um composto de fórmula (V).
Os agentes oxidantes adequados englobam, por exemplo, os óxidos de metais de tran. s icção tais como o dióxido de manganês e o oxigénio atmosférico na presença de um catalisador adequado tal como um metal finamente dividido, por exemplo platina.
Geralmente utilizar-se-á o agente oxidante em excesso relativamente à quantidade estequiométrica.
A reacção pode efectuar-se convenientemente num solvente adequado eventualmente seleccionado entre uma cetona por exemplo acetona; um éter, por exemplo éter dietílico, dio. xano ou tetra-hidrofurano; um hidrocarboneto, por exemplo hexano; um hidrocarboneto halogenado, por exemplo clorofórmio ou cloreto de metileno; um ester, por exemplo acetato de etilo. Também é possível utilizar combinações desses solventes quer não aquosas quer aquosas.
Rode efectuar-se a reacção a uma temperatura compreendida entre -50°C e +50°C, de preferência entre 0°C e 30°G.
Num processo adicional é possível preparar os com postos de fórmula (I) na qual OR^ representa um grupo hidroxi lo a partir de um composto correspondente de fórmula (I) na
- 27 qual OR represente um grupo hidroxilo substituido. Normalmen te efectuar-se-á a conversão nas condições de remoção de um grupo de protecção tal como anteriormente referido.
Num outro processo adicional é possível preparar, de um modo geral, compostos de fórmula (I) na qual OR representa um grupo hidroxilo substituido, fazendo reagir os correspondentes composto 5- e/ou 23-hidroxi com um reagente que sirva para formar um grupo hidroxilo substituido.
Geralmente a reacção consistirá numa acilação, sulfonilação, eterificação, sililação ou acetalação e poder-se-á efectuar de acordo com os processos gerais descritos no Pedido de Patente Inglesa n9 2176182.
E possível preparar sais de ácidos de fórmula (I) por meios convencionais, tratando por exemplo o ácido com uma base ou convertendo um sal noutro sal por permuta de iões.
A presente invenção é ainda ilustrada com as preparações e exemplos seguintes em que o composto de fórmula (V) anterior, na qual R1 representa isonronilo, Y1 representa 2
-GHg-, Y representa -CH-, X representa
-C2 3 (em que R representa um grupo hidroxilo e R^ representa um , , λ ς átomo de hidrogénio), R representa um grupo hidroxi e R representa um átomo de hidrogénio, é referido como 'Pactor A’. Os compostos de acordo com a presente invenção são designados em função do Pactor A. Todas as temperaturas estão em °C.
Intermidiário 1 (13R)-hidroxi-23-desoxi Pactor A, 5-ecetato
Adicionou-se 23-desoxi Factor A, 5-acetato (4,79 g; Exemplo 112 no Pedido de Patente Inglesa ns 2176182) a uma mistura agitada de dióxido de selénio (416 mg) e de hidroperó xido de t_-butilo (3M em dicloro-metano; 5 ml) em dicloro-meta no (30 ml). Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 30 horas diluiu-se a mistura de reacção com acetato de eti lo (200 ml), lavou-se com água e com uma solução salina, e de. pois secou-se (ííagSO^). Evaporou-se o solvente e purificou-se o resíduo por cromatografia (250 g de gel de silica, Merck 9385). A eluição com acetato de etilo/petróleo leve (1:4 1:2) proporcionou o. composto em epígrafe (560 mg) na forma de uma espuma amarelo ténue. V (CHBrq) 3600, 3460 (OH), 1732 (OAc) 1712 (COgR), 993 cmx (C-0); os valores ô (CDCl^) englobam 0.69 (3H, t, J 5 Hz), 2.15 (3H, s), 3.32 (1H, m), 3.72 (Ui, d, J 10 Hz) 4.05 (1H, d, J 5 Hz), 5.52 (2H, m).
Intermediário 2
13-ceto-23-desoxi Factor A, 5 -acetato
Adicionou-se gota a gota uma solução de dimetil-sulfóxido (92 pl) em dicloro-metano (1 ml), durante 2 minutos a uma solução de cloreto de oxalilo (57 pl) em dicloro-metano (2 ml) a -50°C, sob uma atmosfera de azoto. Decorridos 5 minu tos adicionou-se gota a gota uma solução do composto do Inter mediário 1 (213 mg) em dicloro-metano (3 ml), durante 2 minutos a -50°C. Decorridos 30 minutos a uma temperatura entre -50°C e -45°O adicionou-se trietil-amina (453 pl). Decorridos 5 minutos removeu-se o banho de arrefecimento e deixou-se a mistura de reacção aquecer até à temperatura ambiente durante 30 minutos. Repartiu-se a mistura de reacção entre dicloro-me. tano (50 ml) e água (50 ml). Separou-se a fase orgânica e extraiu-se a fase aquosa com dicloro-metano (25 ml). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com ácido clorídrico 2M (75 ml), com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (75 ml) e com uma solução salina (75 ml) e depois secou-se (HagSO^). Evaporou-se o solvente e purificou-se o resíduo por
- 29 cromatografia intermitente (35 g de gel de silica, Merck 5385). A eluição com acetato de etilo/petróleo leve (1:2) pro oorcionou o composto em epígrafe (132 mg) na forma de uma eso o puma branca. + 256° (c0.6, CHGl^); os valores £ (GDCl^) englobam 1.76 (3H, s), 1.82 (3H, s), 2.16 (3H, s), 3.40 (2H, m), 5.05 (1H, d, J 9 Hz), 5.52 (2K, m), 6.26 (1H, t, J8 Hz).
Intermediário 3 (13S)-hidroxi-23-desoxi Eactor A. 5-acetato
Adicionou-se gota a gota uma solução de boro-hidreto de sódio (0,2 1,1 em etanol; 3,63 ml) a uma solução do In termediário 2 (431 mg)em etanol (15 ml) a 0°C. Decorridos 30 minutos a 0°C diluiu-se a mistura de reacção com acetato de etilo, lavou-se com ácido clorídrico 2M, com uma solução satu rada de bicarbonato de sódio e com uma solução salina e depois secou-se (Ha2S0^). Evaporou-se o solvente e purificou-se 0 resíduo por cromatografia intermitente (40 g de gel de síli ca, Merck 9385). A eluição com acetato de etilo/petróleo leve (1:3) proporcionou £ composto em epígrafe na forma de uma espuma branca (368 mg); os valores <5 (CDCl^) englobam 0.69 (3H, d, J5Hz), 0.93 (3H, d, J6Hz), 1.04 (3H, d, J6Hz), 1.17 (3H, d, J6Hz), 3.31 (1H, m), 4.00 (lH,s), 4.04 (1H, d, 5Hz), 5.52 (2H, m).
Intermediário 4 (13S)-hidroxi-23-desoxi Eactor A
Adicionou-se uma solução aquosa de hidróxido de sódio (1M; 87 /ul) a uma solução agitada do Intermediário 3 (38 mg) em metanol (1 ml) a 0°C. Decorridas 1,5 horas a 0°C diluiu-se a mistura de reacção com acetato de etilo (25 ml), lavou-se com água e com uma solução salina e depois secou-se (Ha^SO^). Evaporou-se o solvente e purificou-se o resíduo por cromatografia intermitente (10 g de gel de silica, Merck
9385). A eluição com acetato de etilo/petróleo leve (1:2) pro. porcionou £ composto em eoígrafe na forma de uma espuma branca (31 mg); Vnax (CK3r3) 3540, 3460 (OH), 1704 cm-1 (002R); os valores ÔÍCDGl^) englobam 0.69 (3H, d, J5Hz), 0.95 (3H, d, JÔHz), 1.06 (3H, d, J6Hz), 1.18 (3H, d, JôHz), 3.26 (1H, m), 3.96 (1H, d, J5Hz), 4.01 (2H, s), 4.29 (1K, t, JpHz).
Intermediário 5 (13S)-formiIoxi-23-ceto Factor A, 5-acetato
A uma massa de dióxido de selénio (120 mg) em ácido fórmico (1 ml) agitada a 60°C adicionou-se uma solução de 23-ceto Factor A, 5-acetato (420 mg, Exemplo 18 no Pedido de Patente Inglesa 2176182) em ácido fórmico (3 ml). Agitou-se a mistura de reacção a 60°C durante 6 minutos e depois verteu-se em égua (150 ml) e extraiu-se com éter dietílico (4 x 50 ml). Secou-se (MgSO^) a fase orgânica e removeu-se o solvente para proporcionar um sólido castanho que se purificou por meio de cromatografia em coluna de pressão média sobre silica (100 g de Merck Kieselgel 60; malha 230-400). A eluição com dicloro-metano/acetato de etilo (16:1) proporcionou o composto em epígrafe na forma de uma espuma cor de creme (103 mg); ymax (CHEr^) 3480 (0H) e 1714 cm (ester e ketone); os valores <5 (CDCl^) englobam 0.86 (d, 6Hz, 3H), 0.97 (d, 6Hz, 3H), 1.02 (d, 6Hz, 3H), 1.07 (d, 6Hz, 3H), 1.76 (s, 3H), 3.32 (m, 1H), 2.16 (e, 3H), 4.06 (d, 6Hz, 1H), 5.02 (d, 10Hz, 1H), 5.53 (m, 2H), 8.08 (s, 1H).
Intermediário 6 (13S)-formiloxi-23(S)-metoxi-imino Factor A, 5-acetato
A uma solução do Intermediário 5 (80 mg) em metanol (8 ml) adicionou-se uma solução de cloridrato de metoxi-amina (29 mg) e de acetato de sódio (33 mg) em água (0,7 ml). Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 3 horas, depois verteu-se em éter (40 ml) e lavou-se com água.
- 31 Secou-se (LígSO^) a fase orgânica e removeu-se o solvente para proporcionar o. cencosto em epígrafe na forma de uma espuma cor de creme (79 mg); cs valores £ (CDGl^) englobam 0.91 (d, 6Hz, 3H), 0.97 (d, 6Hz, 3K), 1.02 (d, 6Hz, 3H), 1.07 (d, 6Hz,
3H), 1.76 (s, 3H), 2.16 (s, 3H)m, 3.28 (d, 15Hz, 1H), 1.91 (d, 15Hz, 1H), 3.32 (m, 1H); 3.83 (s, 3H), 4.06 (d, 6Hz, 1H),
5.04 (d, 10Hz, 1H), 5.54 (m, 2H), 8.09 (s, 1H).
Intermediário 7 (13R)-hidroxi-23(5)-metoxi-imino Factor A, 5-acetato
A uma solução do Intermediário 6 (65 mg) em metanol (5 ml) adicionou-se ácido clorídrico 21Ί (0,1 ml). Agitou-se a mistura de reacção â temperatura ambiente durante 4 horas, depois verteu-se em dicloro-metano (60 ml) e lavou-se com uma solução saturada de bicarbonato de sódio e com água. Secou-se (MgSO^) a fase orgânica e removeu-se o solvente para proporcionar uma espuma que se purificou por meio de cromatografia em coluna de pressão média sobre silica (30 g, Merck líieselgel 60, malha 230-400. A eluição com dicloro-metano/acetato de etilo (4:1) proporcionou £ composto em epígrafe na forma de uma espuma branca (39 mg); / 0<_7p +126° (0=0.22,
CH^Clg). 0s valores 5 (GDCl^) englobam 0.92 (d, 6Hz, 3H),
0.96 (d, 6Hz, 3H), 1.05 (d, 6Hz, 3H), 1.12 (d, 6Hz, 3H), 1.77 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 3.29 (d, 15Hz, 1H), 1.91 (d, 15Hz, 1H), 3.32 (m, 1H), 3.70 (ddlO, 2Hz, 1H), 3»83 (s, 3H), 4.04 (d,
6Hz, 1H), 5.54 (m, 2H).
Intermediário 8
13-ceto-23(E)-metoxi-imino Factor A, 5-scetato
A uma solução de cloreto de oxalilo (0,24 ml) em dicloro-metano recentemente destilado (3,6 ml), com agitação a -6o°C sob uma atmosfera de azoto, adicionou-se uma solução de dimetil-sulfóxido (0,4 ml) em dicloro-metano recentemente destilado (3,6 ml). Arrefeceu-se a solução para -65°C e decor ridos 5 minutos adicionou-se uma solução do Intermediário 7 (770 mg) em dicloro-metano (6 ml). Deixou-se o banho de arrefecimento aquecer até -60°G e depois deixou-se a mistura de reacção em agitação durante mais 30 minutos a uma temperatura entre -60°C e -50°C.
Adicionou-se trietil-amina (1,5 ml) e deixou-se a mistura de reacção aquecer até à temperatura ambiente. Depois verteu-se a mistura de reacção em dicloro-metano (100 ml) e removeu-se o solvente no vácuo. Adicionou-se éter dietílico (60 ml) e filtrou-se o sal de trietil-amina. Removeu-se o éter no vácuo para proporcionar uma espuma que se purificou por cromatografia em coluna de pressão média sobre silica (180 g, Merck Kieselgel 60, malha 230-400). A eluição com dicloro-metano/acetato de etilo (14/1) proporcionou o composto em epígrafe na forma de uma espuma beje (450 mg); os valores δ (CDGl^) englobam 0.92 (d, 6Hz, 3H), 0.96 (d, 6Hz, 3H),
1.01 (d, 6Hz, 3H), 1.18 (d, 6Hz, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.80 (s,
3H), 2.16 (s, 3H), 3.31 (d, 15Hz, IH), 1.93 (d, 15Hz, IH),
3.39 (m, IH), 3.84 (s, 3H), 4.08 (d, 6Hz, IH), 5.54 (m, 2H),
6.22 (t, 9Hz, IH).
Intermediário 9 (13S)-hidroxi-23(E)-metoxi-imino Eactor A, 5-aceteto
A uma solução do Intermediário 8 (620 mg) em etanol (25 ml), com agitação a 0°C, adicionou-se uma solução de boro-hidreto de sódio (4,9 ml de uma solução 0,2 M em etanol) Agitou-se a mistura de reacção a 0°C durante 30 minutos, depois verteu-se em acetato de etilo (400 ml) e lavou-se com ácido clorídrico 2N, com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, com água e com uma solução salina. Seccu-se (ItígSO^) a fase orgânica e removeu-se o solvente para proporcionar uma espuma beje que se purificou por cromatografia em coluna de pressão média sobre silica (180 g, Merck Kieselgel 60, malha 230-400). A eluição com dicloro-metano/acetato de etilo (10:1) proporcionou £ composto em epígrafe na forma de uma es puma branca (502 mg); os valores ^(GDCl^) englobam 0.92 (d, 6Kz, 3H), 0.97 (d, 6Hz, 3H), 1.05 (d, 6Hz, 3Η), 1.16 (d, 6Hz, 3H), 1.76 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 3.29 (d, 15Hz, IH), 1.91 (d, 15Hz, IH), 3.32 (m, IH), 3x84 (s, 3H), 4.00 (s largo, IH), 4.06 (d, 6Hz, IH), 5.53 (m, 2H).
Intermediário 10 (13S)-hidroxi-23(E)-metoxi-imino Factor A
A uma scluçao do Intermediário 9 (291 mg) em met£ nol (7 ml), com agitação a 0°C, adicionou-se gota a gota uma solução de hidróxido de sódio (17 mg) em água (0,6 ml). Agitou-se a mistura de reacção a 0°G durante 2 horas, depois verteu-se em dicloro-metano (75 ml) e lavou-se com ácido clorídrico 2H (2 x 50 ml), com água e com uma solução salina. S£ cou-se (MgSO^) a fase orgânica e removeu-se o solvente para proporcionar uma espuma beje que se purificou por cromatografia em coluna de pressão média sobre silica (80 g, Merck Ki£ selgel 60, malha 230-400). A eluição com dicloro-metano/acetato de etilo (4:1) proporcionou £ composto em epígrafe na forma de uma espuma branca (228 mg); os valores &(CDG1^) englobam 0.91 (d, 6Hz, 3H), 0.96 (d, 6Hz, 3H), 1.05 (d, 6Hz, 3H), 1.17 (d, 6Hz, 3H), 1.88 (s, 3H), 3.29 (d, 15Hz, IH),
1.92 (d, 15Hz, IH), 3.27 (m, IH), 3.83 (s, 3H), 3.96 (d, 6Hz, IH), 4.00 (s largo, IH), 4.28 (t, 6Hz, IH).
Exemplo 1
Utilizou-se uma cultura de Streptomyces avermitilis para inocular um balão agitado de 250 ml contendo um meio A (2 5 ml):
D-Glicose
Dextrose de malte I.ZD30E Arkasoy 50
2,5
25,0
12,5
3SXES»53a»
I.ielaços aH2po4
Carbonato de cálcio / ácido 3-(U-morfolino)propano-sulfónico_7
Água destilada
1,5
0,125
1,25
21,0 conforme necessá rio pH ajustado para 6,5 com HgSO^ antes de se colocar em autoclave.
Incubou-se o balão a 28°G durante 2 dias num agitador rotativo (250rpm) e colocou-se uma porção (5 ml), dessa cultura com 2 dias num balão agitado de 50 ml e adicionou-se 50 1 de uma solução a 20 mg/ml de (13S)-hidroxi-23(3)-metoxi-imino Factor A em metanol. Incubou-se o balão a 28°C durante 5 dias num agitador rotativo (250 rpm) e decorrido esse tempo adicionou-se igual volume de metanol. 0 balão e o seu conteúdo foram agitados durante 1 hora, centrifugou-se para se remo, verem as células e evaporou-se o sobrenadante in vacuo até se obter 1 ml.
Fez-se o fraccionamento de porções de 180 1 da amostra numa coluna de Spherisorb S5 ODS-2 (100 mm x 4=6 mm) com detecção a 238 nm. Utilizou-se um sistema solvente por gradiente, com um fluxo constante de 3 ml/min. entre o solven te A (acetonitrilo/água 1:1) e o solvente 3 (acetonitrilo/água 65:35). 0 eluente continha inicialmente 80% de solvente A e 20% de Solvente S e decorridos 10 min. continha 100% de Sol. vente B. A partir de cada injecção fes-se a recolha dos picos de absorção de uv com as proporções de retenção relativas ao substracto invariável de 2,13 e 3,45 e procedeu-se à combinação e à evaporação dos picos com proporções de retenção idênticas para proporcionar (a) um composto cie fórmula (1) na ciual R representa «-L-oleandrosil- CX-L-oleandrosilo, R^ re1 2 presenta isopropilo, Y representa -CH9-, Y representa -CH-, X representa >C=NOCH^, R representa um grupo hidroxilo e R representa um átomo de hidrogénio (proporção de retenção 2,13); expectro de massa (impacto de electrões), o valor m/z engloba 907, 795, 764, 620, 618, 566, 476, 408, 376 e 145 (Cl negativo, ML·), m/z 943 (M“)> 925, 907 (01 positivo, 1'®3) m/z
96l (M+I3H,) + , 944 (MH) + e (b) e um composto da fórmula (1) na 4 1 qual R representa cv-L-oleandrosil- <X-L-oleandrosilo, R re1 2 presenta isopropilo, Y representa -CH9-, Y representa -CE-,
A 5
X representa >G=ROGH3, R representa um grupo metoxi e R re presenta um átomo de hidrogénio (proporção de retenção 3,45); espectro de massa (impacto de electrões), o valor m/z engloba 907, 827, 814, 795, 764, 670, 651, 376, 275, 264, 263, 257, 145, 127, 113, 95 e 87 (Cl negativo, ) m/z 957 (M“), 507 (M“E200K30E)t (Cl positivo, UH-j) m/z 975 (M+EH4)+, 958 (MH)+.
Exemplo 2
Inoculou-se 2 x 25 volumes de meio A em balões vi bradores de 250 ml, directamente a partir de uma cultura de 'Streptomyces avermitilis ATCC 31780 e deixou-se desenvolver a cultura 28°C num agitador rotativo è velocidade de 250 rpm, num braço de 5 cm durante 2 dias.
Utilizou-se o conteúdo dos balões para inocular
2,5 1 de meio A num fermentador de 3,5 1 contendo polipropile no-glicol 2000 (1,25 ml). Manteve-se a cultura a 28°C e agitou-se a 250 rpm e arejou-se à razão de 1,25 1 min\ Decorri dos 2 dias adicionou-se 13(S)-hidroxi-23-desoxi Factor A (234 mg) em metanol (25 ml) seguindo-se a adição de sinefugina (30 mg) em água (25 ml). Resta fase procedeu-se ao aumento das ve. locidades de agitação e de arejamento para 500 rpm e para
2,51 min-' re s pe ct ivament e
Decorridos 4 dias centrifugou-se 0 licor de fermentação, decantou-se o sobrenadante e fez-se a lavagem das células com água (0,5 1) e centrifugou-se novamente. Adicionou-se ao sobrenadante o produto de lavagem com água e extraiu -se com acetato de etilo (4 x 0,25 1). 0s extractos de acetato de etilo combinados foram evaporados in vacuo para proporcionar um óleo. Procedeu-se à extràcção das células com metanol e os extractos de metanol combinados foram lavados com he xano (4 x 0,1 1 com adição de 0,1 1 de água em cnda fase) e depois extraiu-se a camada aquosa com cloreto de metileno (3 x 0,2 1) e as camadas de cloreto de .metileno combinadas fo ram evaporadas in vacuo para proporcionar um óleo. 0 óleo de extracçao do sobrenadante foi extraído com acetonitrilo (25 ml) e adicionou-se esta solução ao óleo derivados das células e filtrou-se. Àplicou-se o filtrado a uma coluna (26 x 2 cm) de Sephadex LH20 em acetonitrilo e procedeu-se à recolha das fracções (10 ml) após um ensaio prévio de (50 ml). Pez-se a combinação das fracções 2-18, evaporou-se in vacuo para pro. porcionar um óleo que se dissolveu em acetonitrilo (15 ml) e em água (1 ml) e submeteu-se a cromatografia preliminar sobre Spherisorb S50DS-2 (25 x 2 cm) num solvente constituído por acetonitrilo/água (7:3) com um débito de 25 ml/min e com detecção a X =238 nm. Procedeu-se à combinação das fracções eluídas entre 43 e 46 min a partir de injecções consecutivas (1 ml), diluiu-se com água (1:1) e fez-se a bombagem de retor no à coluna e depois eluiu-se com acetonitrilo. A evaporação do acetonitrilo in vacuo proporcionou um óleo que se dissolveu em metânol (2 ml) e fez-se passar por uma coluna (100 ml) de Sephadex LH20 em metanol. A combinação das fracções de \max ~ ^44 nm e a ©vaporação in vacuo proporcionou novamente um óleo. Dissolveu-se este óleo mais uma vez em acetonitrilo (4 ml) e fraccionou-se (15 ml) numa coluna (25 x 2 cm) de Se. phadex LH20 em acetonitrilo. A combinação das fracções 5-10 e a evaporação destas in vacuo, seguindo-se a liofilização do resíduo a partir de ciclo-hexano-acetona proporcionou um composto de fórmula (1) na qual R representa <x-L-oleandrosil-<X-L-oleandrosilo, R^ representa isopropilo, Y^ representa -CH92 - * 4
Y representa -GH-, X representa >CH2, R representa um grupo hidroxi e R·3 representa um átomo de hidrogénio (19,3 mg) na forma de um sólido incolor, λ (IíeOH) 231.2 inf. (E£ 202), 240 inf. (E^ 256), 244.6 (E^ 278), 250 nm inf. (E^ 206),
Ό (CHBr. 3570, 3550, 1705, 1040, 580 cm
Um espectro ra valores 5 próximos de 173.8, 139.5, 137.9, 137.8, 136.4
C ram a 125 MH^ em CDCl^ proporcionou sinais pa.
134.6 , 131.5, 124 .5, 120 1.3, 118. 4, 117.9, 58.4, 97.5, 94.5,
82.4, 81.5, 80.4, 80.2, 79.2, 79 .0, 78.1, 76.0, 68.5, 68.3,
68.0, 67.6, 67.1, 56.3, 56o2, 45 .6, 40.8, 35.6, 36.8, 35.5,
34.4, 34.1, 31.5, 27.5, 26.5, 22 .8, 22.6, 20.1, 19.8, 18.2,
17.6, 17.5, 15.0 e 10.9.
espectro ^H r.m.n. a 500 MHz proporcionou sinais para valores próximos de 3.78 (1H, dq, 10, 6), 3.82 (1H, dq, 10, 6), 3.18 (1H, t, 9), 3.22 (1H, t, 9) e 3.42 (6H, s)„
Ξ.Μ (I.E.) 900 (Tdt) 882, 756, 738, 612, 594, 576, 484, 333, 315, 261, 245, 221, 179, 145.
Exemplo 3
Incubou-se Streptomyces avermitilis ATGC 31272 com 13S-hidroxi-23-desoxi Factor A, de acordo com o processo do Exemplo 1.
As porções de 180 1 da amostra obtida foram fraccionadas numa coluna de Spherisorb S5 ODS-2 (100 m x 4,6 mm) com deteção a 238 nm utilizando como eluente acetonitrilo/ /água (65:35) com o valor de FH ajustado para 4,2 com ácido acético. De cada injecção recolheu-se o pico de absorção de uv com uma proporção de retenção de 1,87 relativamente ao substracto invariável e procedeu-se à combinação desses picos com proporções de retenção idênticas e evaporou-se in vacuo para proporcionar um composto de fórmula (1) na qual R representa <X-L-oleandrosilo, R^ representa isopropilo, Y^ representa -CH2-, Y2 representa -CH-, X representa >CH2, repre senta um grupo hidroxi e R^ representa um átomo de hidrogénio (proporção de retenção de 1,87); os espectros de massa (impac. to de electrões m/z englobam 756 (I.í7), 738, 720, 594, 576,
333, 315, 261, 249, 221, 179, 151 e 145 (Cl negativo, NH3) m/z 756 (MT).
Apresentam-se a seguir exemplos de formulações de acordo com a presente invenção. 0 termo 'Ingrediente Activo’ tal como agora utilizado significa um composto da presente in vençáo „
Injecção Parenteral Multidose
Exemplo 1 % p/v
Ingrediente activo 2,0
Álcool benzílico 1,0
Poli-sorbato 80 10,0
Eormal glicerol 50,0
Água para injecções até 100,0
variação
0,1 - 6,0% p/v
Dissolve-se o ingrediente activo no poli-sorbato 80 e no formal glicerol. Adiciona-se o álcool benzílico e ajusta-se o volume com água para injecções. Esteriliza-se o produto por métodos convencionais, por exemplo por filtração esterilizadora ou por aquecimento em autoclave e procede-se à embalagem de modo acético.
Exemplo 2
Ingrediente activo Álcool benzílico Triacetato de glicerilo Propileno-glicol % p/y variação
4,0 0,1-7,5% p/v
2,0
30,0 é 100,0
Dissolve-se o ingrediente activo no álcool benzílico e no triacetato de glicerilo. Adiciona-se o propileno-glicol e ajusta-se o volume. Esteriliza-se o produto por métodos farmacêuticos convencionais, por exemplo por filtração esterilizadora; e depois embala-se por um processo acético.
- 39 Exemplo 3 variação
Ingrediente activo
Etanol
Agente tensio-activo não iónico (por exemplo Synperonic PE L44*) Propileno-glicol até
2,0 p/v 36,0 v/v
0,1 - 7,5% p/v
10,0 p/v 100,0
Dissolve-se o ingrediente activo em etanol e no agente tensio-activo e ajusta-se o volume. Esteriliza-se o produto por métodos farmacêuticos convencionais, por exemplo por filtração esterilizadora e depois embala-se por um proce_s so acético.
* Marca comercial da ICI
Exemplo 4 λ/ jO variação
Ingrediente activo 2,0 p/v 0,1 - 3,0% p/v
Agente tensio-activo não iónico
(por exemplo Synperonic PE F68*) 2,0 p/v
Álcool benzílico 1,0 p/v
Miglyol 840 ** 16,0 v/v
Água para injecções até 100,0
Dissolve-se o ingrediente activo emMiglyol 840. Dissolve-se o agente tensio-activo não iónico e o álcool benzílico na maior parte de água. Prepara-se a emulsão adicionan do a solução oleosa à solução aquosa enquanto se homogenisa utilizando meios convencionais. Ajusta-se o volume. Prepara-se e embala-se por um processo acético.
* Marca comercial da ICI ** Marca comercial da Dynamit Nobel
Aspersão para Aerossol
$ p/p variação
Ingrediente aotivo 0,1 0,01 - 2,0$
Tricloro-etano 29,9
Tricloro-fluoro-metano 35,0
Dicloro-difluoro-met ano 35,0
p
Mistura-se o ingrediente activo com tricloro-etano e procede-se ao enchimento do recipiente do aerossol. Limpa-se o espaço superior com propulsor gasoso e fixa-se a válvula na sua posição. Através da válvula procede-se ao enchimento do peso necessário de liquido propulsor sob pressão. Coloca-se o dispositivo de accionamento e a protecção contra o pó.
Pastilha
Processo de Preparação - C-ranulação a Húmido
Ingrediente activo
Estearato de magnésio Amido de milho Glicolato de amido de sódio Lauril-sulfato de sódio Celulose microcristalina mg
250,0
4,5
22,5
9,0
4,5 até o núcleo da pastilha pesar 450 mg
Adiciona-se ao ingrediente activo uma quantidade suficiente de uma pasta de amida a 10$ para proporcionar uma massa húmida adequada para granulação. Paz-se a preparação dos grânulos e seca-se utilizando um tabuleiro ou um secador de leito fluido. Paz-se passar através de um crivo, adicionam -se os ingredientes restantes e comprime-se em pastilhas.
Se necessário faz-se o revestimento dos núcleos das pastilhas com uma película de revestimento utilizando hi- 41 -
droxi-propil-metil-celulose ou outro material idêntico que proporcione uma película, utilizando um sistema solvente aquo so ou não aquoso. Pode incluir-se na solução da película de revestimento um plastificante ou um corante adequados.
Pastilha para Utilização Veterinária para Utilização em Animais Pequenos / Domésticos
Processo de Preparação - Granulação a Seco mg
Ingrediente activo 50,0
Sstearato de magnésio 7,5
Celulose microcristalina até o núcleo da pastilha pesar 75,0
Mistura-se o ingrediente activo com o estearato de magnésio e com a celulose microcristalina. Compacta-se a mistura em barras. Quebram-se as barras e faz-se passar os pe. daços por um granulador rotativo para proporcionar grânulos que fluam livremente. Comprime-se em pastilhas.
Depois os núcleos das pastilhas podem ser revesti dos com película- se desejado, conforme anteriormente descrito.
Injecção Intramamária para Veterinária mg/dose variação
Ingrediente activo Poli-sorbato 60 Cera branca de abelhas Oleo araquídico
150 mg
3,09 p/p) )
6,0% p/p) até 3g )
9l,O5ó p/p) )
0,05 - 1,0 g até 3 ou 15 g
Aquece-se o óleo araquídico, a cera branca de abelha e o poli-sorbato 60 à temperatura de l60°C com agitação Mantem-se a l60°C durante 2 horas e depois arrefece-se até à temperatura ambiente com agitação. Por um processo acético adiciona-se o ingrediente activo ao veículo e dispersa-se utilizando um misturador de alta velocidade. .Refina-se fazendo passar a mistura através de um moinho de coloides. Por um pro cesso acético enche-se com o produto seringas de plástico esterilizadas .
Pílula Grande de libertação Lenta para Veterinária % p/p variação
Ingrediente activo
Dióxido de silicio coloidal 2,0) Celulose microcristalina até 100,0)
0,25-2 g até se completar o peso pretendido
Mistura-se o ingrediente activo com o dióxido de silicio coloidal e com a celulose microcristalina utilizando uma técnica adequada para misturar aliquotas de modo a conseguir uma distribuição satisfatória do ingrediente activo atra vés do veículo. Paz-se a incorporação no dispositivo de liber tação lenta proporcionando (1) uma libertação constante do in grediente activo ou (2) uma libertação intermitente do ingrediente activo.
Purgante Oral para Veterinária
Ingrediente activo Poli-sorbato 85 Álcool benzílico Propileno-glicol Tampão fosfato
Água i
Dissolve-se
I
85, no álcool benzílico ma quantidade de água e % p/v variação
0,35 0,01 - 2% p/v
5,0 3,0 30,0 para pH 6,0-6,5 até 100,0 o ingrediente activo no poli-sorbato e no propileno-glicol. Adiciona-se uajusta-se o pH para 6,0 - 6,5 com tam
pão fosfato, se necessário. Ajusta-se o volume final com água Snche-se com o produto o recipiente do purgante.
Pasta Oral para Veterinária
% p/p variação
Ingrediente activo Sacarina de sódio Poli-sorbato 85 Distearato de alumínio Oleo de coco fraccionado 4,0 2,5 3,0 5,0 até 100,0 1 - 20% p/p
Dispersa-se o distearato de alumínio no óleo de coco fraccionado e no poli-sorbato 85 com aquecimento. Arrefe ce-se até à temperatura ambiente e dispersa-se a sacarina de sódio no veículo oleoso. Dispersa-se o ingrediente activo na base. Com o produto enchem-se seringas de plástico.
C-rânulos cara Administração Alimentar em Veterinária % p/p variação
Ingrediente activo 2,5 0,05-5% p/p
Hemi-hidrato de sulfato de cálcio até 100,0
Histura-se o ingrediente activo com o sulfato de cálcio. Preparam-se grânulos utilizando um processo de granulação a húmido. Seca-se utilizando um tabuleiro ou um secador de leito fluido. Faz-se o enchimento de recipientes apropriados .
Aglomerados para Veterinária % o/v variação
Ingrediente activo 2,0 0,1 a 30%
Dimetil-sulfóxido 10,0
Hetil-isobutil-cetona 30,0
Propileno-glicol (e pigmentos) até 100,0
Dissolve-se o ingrediente activo em dimetil-sulfó xido e em metil-isobutil-cetona. Adiciona-se o pigmento e ajusta-se o volume com propileno-glicol. Enchem-se os recipien tes para aglomerados.
Concentrado Emulsionável
Ingrediente activo 50 g
Emulsionante aniónico 40 g (por exemplo sulfonato de fenilo CALX)
Emulsionante não iónico 60 g (por exemplo Synperonic NP13)*
Solvente aromático (por exemplo
Solvesso 100) até 1 litro
Mistura-se todos os ingredientes e agita-se até à dissolução.
* Marca comercial da ICI
Grânulos (a) Ingrediente activo 50 g
Resina de madeira 40 g
Grânulos de gesso( malha 20-60) até 1 kg.
(por exemplo Agsorb 100A) (b) Ingrediente activo 50 g
Synperonic NP13 * 40 g
Grânulos de gesso (malha 20-60) até 1 kg.
Dissolve-se os ingredientes num solvente volátil', por exemplo cloreto de metileno, e adiciona-se aos grânulos que caiem no misturador. Seca-se para remoção do solvente.

Claims (1)

  1. REIVINDICAÇÕES
    - 1- Processo para a preparação d.e um composto de formula 1 em que R representa um resíduo de açúcar ou um seu derivado acilado;
    representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo;
    Y* é -CHg, ι é -CH- e X representa -Q- Γ~em que R^ repre senta um átomo de hidrogénio ou um grupo ΟΗθ (no qual OR é um grupo hidroxilo ou um grupo hidroxilo substituído possuindo até 25 átomos de carbono) e RJ representa um átomo de hi2 3 drogénio, ou R e R em cunjunto com o átomo de carbono ao γ qual estão ligados representam >C=0, >C=CHp ou >C=NOR (no 7 qual R reoresenta um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo 7 (C-|-Cg) ou um grupo alquenilo (Ο^-Οθ) e o grupo>C=1'ÍOR está na configuração E_7 ou -Y^-X-Y^- representa -CH=CH-CH- ou
    -CHO-CH=C-;
    c < 5 e R^ representa um grupo OE como definido anteriormente e R*5 x z zl b representa um átomo de hidrogénio, ou R^ e R2 em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >0=0 ou
    8 8, 7 >C=IÍOR (no qual R é como definido para R ) e seus sais, ca. racterizado por se incubar um composto de fórmula 2 (2) num meio adequado na presença de um microorganismo ou um seu derivado enzimático ou uma preparação derivada de um microorganismo que contém a enzima de interesse susceptível de efectuar a conversão; e eventualmente depois:
    i) quando 0R^ for um grupo hidroxilo protegido, se remover o grupo protector, ii) quando OR^ for um grupo hidroxilo, se modificar o grupo hidroxi para proporcionar um grupo hidroxilo substituído, ou iii) se acilar um composto no qual R é ura resíduo de açúcar.
    - 47 Processo rizado por R^ ser um
    - 2ã de acordo ccm a rei grupo isopropilo.
    ndicação 1, caracte.
    - 3§ Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte rizado por R ser um grupo -L-oleandrose ou o(-L-oleandrosil - O<-L-oleandrose.
    - 4§ Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte. ί 2 2 rizado por Y ser -CH9-, Y ser -CH- e X representar -C(R )(RO- em que R é um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, etoxi ou acetiloxi e é wn átomo de hidrogénio ou R e R em conjunto com o átomo de carbono ao qual estavam ligados re presentam >C=0, >C=CH9 ou >C=1TOCH7 ; e R ser um grupo hiaro xi, metoxi ou acetiloxi ou R e RJ em conjunto com o átomo de carbono ao qual estavam ligados representarem >C=HOCH^.
    - 5§ Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte.
    rizado por R representar uru gruno Λ-L-oleandrosil- o<-L-olean
    1 l 2 drose, R ser um grupo isopropilo, Y ser -CH9-, Y sez* -CH-, ' 4 5 !’ X representar >C=HOCHj, R ser um grupo hidroxi e R ser um átomo de hidrogénio; e ι 1 i R representar um grupo ος-L-oleandrosil- oc-h-oleandrose, κ : ser um grupo isopropilo, Y^ ser -CH9-, Y^ ser -CH-, X representar -CH^-, PN ser um grupo hidroxi e P, ser um átomo de hi ; drogénio.
    - il i' . ~ il Processo para a preparação de uma composição far- 48 macêutica, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo uma quantidade eficaz de pelo menos um composto de fó mula 1, quando preparado de acordo com as reivindicações ant riores em associação com um veículo farmaceuticamente aceitável.
    Processo para a preparação de uma composição vete rinária, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo uma quantidade eficaz de um composto de fórmula 1, quando preparado de acordo com as reivindicações de 1 a 5 em asso, ciação com um veículo aceitável sob o ponto de vista de veterinária .
    - 83 Processo para a preparação de uma composição pesticida, caracterizado por se incorporar como ingrediente acti vo uma quantidade eficaz de um composto de fórmula 1, quando preparado de acordo com as reivindicações 1 a 5 em associação com um veículo aceitável sob o ponto de vista pesticida.
    A requerente reivindica a prioridade do pedido britânico apresentado em 10 de Maio de 1588, sob o n8811036.6.
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