RO104376B1

RO104376B1 - Procedeu de realizare a uuui vaccin antiaftos

Info

Publication number: RO104376B1
Application number: RO13676888A
Authority: RO
Inventors: Ioan Gugiu; Teofanescu Constantin Stirbu; Anton Titus; Marin Gruia
Original assignee: Inst De Cercetari Pentru Vacci
Priority date: 1988-12-22
Filing date: 1988-12-22
Publication date: 1994-03-25

Abstract

Invenția se referă la unprocedeu de preparare a unui vaccin antiaftos inactivat, din virus d® cultură celulară, pentru Imunizarea rumegătoarelor, dare utilizează sublinia S-G-84 a liniei BHK^tCij și tulpîniîe autohtone ale subtipurilor de virus aftos Â5/O1/C, virusurile replicându-se pe celule BHK21C13, cultivațiinmonostrat 16...24h,preferabil 18...20 h, sau în suspensie 8,..24 b, preferabil 10...13 fa, suspensiile virale sunt eliberate de detritusuri celulare și concentrate prin ultafîltraie sau, preferabil, ps geluri de hidroxid de aluminiu sau bentonită, cupH 7,6...8,5, agitate mecanic 2...12 h, preferabil 4.:.6 h, și lăsate în repaus peste noapte, după care se corecteazăpH-ul la 8,2...8,5 și se inactivează cu o soluție 10'2M de etilenimină binară, neutralizându-se apoi după 24 fa cu 4 mî/I soluție sterilă de tiosulfat de sodiu 50%, produsul astfel obținutputând fi transformatîn vaccinmonovalent, adăugându-se la o doză de 1...2 ml,sau trivalent, cu o doză de 5...6 ml gel de aluminiu 30...50% din volumul dozei, cu asigurarea a 1,6 g% AI2O3 și 0,006 g/ml saponină.

Description

Invenția se referă la un procedeu de preparare a vaccinului antiaftos inactivat, pentru rumegătoare, obținut din virus al febrei aftoase, replicat pe culturi de celule, concentrat și inactivat.

Vaccinurile antiaftoase destinate combaterii celei mai grave boli a animalelor biongulate sunt produse din virus atenuat, inactivat, sau din proteină specific virală, obținută pe calea ingineriei genetice.

Vaccinul care s-a impus până în momentul de față pe plan mondial este acela inactivat produs din virus al febrei aftoase, replicat pe diferite substraturi (limba bovinelor în viață, epiteliu lingual bovin explantat, culturi de linii celulare stabilizate, cultivate în monostrat sau suspensie).

Este utilizată, preferențial, metoda de producție a vaccinului din virus de cultură celulară, care, după prelucrări specifice, este inactivat cu diferite substanțe, apoi concentrat, i se adaugă adjuvanți imimologici, este testat pentru inocuitate și efect protector specific și eliberat spre utilizare în teren.

Scopul invenției este creșterea randamentelor productive.

Se punea problema găsirii unui procedeu de realizare a unui vaccin antiaftos, pornind de la un material de bază superior.

Procedeul conform invenției înlătură dezavantajele procedeelor cunoscute, prin aceea că, în scopul creșterii randamentelor productive, utilizează sublinia S-G-84 a liniei BHK21C13 și tulpinile autohtone ale subtipurilor de virus aftos A5/O1/C, virusurile replicându-se pe celulele BHK21C13, cultivate în monostrat 16...24 h, preferabil

18...20 h, sau în suspensie 8.,.24 h, preferabil 10...13 h, suspensiile virale sunt eliberate de detritusuri celulare și concentrate prin ultrafiltrare sau, preferabil, pe geluri de hidroxid de aluminiu sau bentonită, cu pH 7,6...8,5, agitate mecanic 2...12 h, preferabil 4...6 h, și lăsate în repaus peste noapte, după care '

șe corectează pH-ul la 8,2...8,5 și se înactivează cu o soluție 10'^z M de etilenimină binară, neutralizându-se apoi după 24 h cu 4 ml/1 soluție sterilă, putând fi transformat în vaccin monovalent, adăugându-se la o doză de 1 ...2 ml, sau trivalent, cu o doză de 5...6 ml gel de aluminiu 30...50% din volumul dozei, cu asigurarea a 1,6 g% AI2O3 și 0,006 g/ml saponînă.

Se dă mai jos un exemplu nelimitâtiv, ilustrând modalitatea de obținere a vaccinului antiaftos pentru rumegătoare, conform invenției.

Culturi de celule BHK21C13, sublinia S-G-84, cultivate în monostrat sau în suspensie, după eliminarea mediului de creștere sunt inoculate cu 0,01...1,0 DICPso/celulă din virusul febrei afioase, de exemplu subtipurile A5/O1/C, tulpinile de producție autohtone, adaptate la tipul de celulă (BHK21C13) și, respectiv, la sistemul de cultivare (monostrat sau suspensie). După un interval de

16.. .24 h pentru virusul cultivat pe celule în monostrat și, respectiv, după 8...24 h, pentru acela replicat în celule cultivate în suspensie, se oprește cultivarea. Șe execută clarificarea prin centrifugare sau filtrare și, după prelevarea de probe de suspensie virală pentru testele de laborator concentrarea (de exemplu pe gel de hidroxid de aluminiu). Pentru concentrare la suspensia virală se adaugă

2.. .10%, de preferat 5% dintr-o soluție de gel de aluminiu conținând 1,4...2,0 g % AI2O3 și amestecul se agită 4...6 h, după care se lasă în repaus până a doua zi. Se elimină supematantul aflat deasupra masei de gel, pe care s-a adsorbit virusul până la nivelul dorit.

Suspensia virala este inactivată utilizând 0,5...2%, de preferat 1% diștr-o soluție de etilenimină binară 10’^z M, obținută la cald (37°C), prin introducerea în soluție 8% sodă caustică a 2bromoetilamine hidrobromide. înaintea adăugării inactivantului, pH-ul suspensiei virale este adus la 8,2...8,5 cu tampon glicol (pH 10,2...10,5).

-V

Inactivarea durează 24 h îa 37°C, în condițiile agitării permanente a suspensiei virale supuse inactivării. La sfârșitul ei se adaugă, pentru neutralizarea inactivantului, tiosuîfat de sodiu, în concentrație finală de 0,2%. Produsul inactivat este păstrat la rece, până 1a finalizarea testelor de inocuitate și efect protector specific, după care vaccinul este finalizat prin adăugarea a 0,006 g/ml saponină și a gelului de aluminiu, pentru a asigura 1,6 g % AI2O3. Vaccinul se utilizează monovalent, cu doza de

1...2 ml, sau trivalent, cu doza de 5...6 ml.

Prezenta invenție conduce la obținerea următoarelor avantaje:

- permite utilizarea, în cadrul unei tehnologii unitare, pe capacități adecvate chiar mai mici, realizarea unor producții mari;

- permite realizarea unor producții de vaccin în condiții de înaltă economicitate, cu un randament și o productivitate ridicate;

- asigură obținerea unui vaccin antiaftos cu calități imunogene și conservabilitate foarte bune;

- ansamblul avantajelor sus-menționate conduc la scăderea cel puțin îa jumătate a prețului de producție aî vaccinului antiaftos.

Claims

Procedeu de realizare a unui vaccin antiaftos inactivat, din virus de cultură celulară, pentru imunizarea rumegătoarelor, caracterizat prin aceea că, în scopul creșterii randamentelor productive, se utilizează sublinia S-G-84 a liniei BHK21C13 și tulpinile autohtone ale subtipurilor de virus aftos A5/O1/C, virusurile replicându-se pe celule BHK21C13, cultivate în monostrat

16...24 h, preferabil 18...20 h, sau în suspensie 8...24 h, preferabil 10...13 h, suspensiile virale sunt eliberate de detritusuri celulare și concentrate prin ultrafiîtrare sau, preferabil, pe geluri de hidroxid de aluminiu sau bentonită cu pH=7,6...8,5, agitate mecanic 2...12 h, preferabil 4...6 h, și lăsate în repaus peste noapte, după care se corectează pH-ul îa 8,2...8,5 și se inactivează cu o soluție IO’² M de etilenimină binară, neutralizându-se apoi după 24 h cu 4 ml/1 soluție sterilă de tiosuîfat de sodiu 50%, produsul astfel obținut putând fi transformat în vaccin monovalent, adaugându-se la o doză de 1...2 ml, sau trivalent, cu o doză de 5...6 ml gel de aluminiu 30...50% din volumul dozei, cu asigurarea a 1,6 g% AI2O3 și 0,006 g/mî saponină.

(^Referințe bibliografice Brevet FR nr. 2516385