RO120505B1 - Metodă pentru stabilirea in vivo la animale de experienţă, a concentraţiei eficiente de apă sărăcită în deuteriu pentru tratamentul cancerului - Google Patents
Metodă pentru stabilirea in vivo la animale de experienţă, a concentraţiei eficiente de apă sărăcită în deuteriu pentru tratamentul cancerului Download PDFInfo
- Publication number
- RO120505B1 RO120505B1 ROA200300685A RO200300685A RO120505B1 RO 120505 B1 RO120505 B1 RO 120505B1 RO A200300685 A ROA200300685 A RO A200300685A RO 200300685 A RO200300685 A RO 200300685A RO 120505 B1 RO120505 B1 RO 120505B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- deuterium
- animals
- tumor
- water
- depleted water
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0004—Homeopathy; Vitalisation; Resonance; Dynamisation, e.g. esoteric applications; Oxygenation of blood
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
- A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la o metodă pentru stabilirea in vivo, la animale de experienţă, a concentraţiei eficiente de apă sărăcită în deuteriu pentru tratamentul cancerului, ce constă în aceea că prevede administrarea apei sărăcită în deuteriu, înainte şi după grefarea tumorală cu grefe animale, şi are următoarele etape: A) administrarea la şobolani, prin dietă, a apei sărăcită în deuteriu la concentraţii de 25, 60 şi 100 ppm deuteriu, timp de 60 de zile, comparativ cu loturi martor, cu un conţinut de 150 ppm deuteriu din apă de la reţea; B) stabilirea viabilităţii celulelor tumorale ce urmează a fi grefate, cu albastru de tripan; C) grefarea la şobolanii de experienţă şi la loturile martor, de diferite tipuri de celule tumorale; D) observarea efectelor administrării continue şi de lungă durată aapei sărăcită în deuteriu; E) stabilirea concentraţiei eficiente de apă sărăcită în deuteriu, pentru regresia tumorală şi vindecarea de cancer.
Description
Prezenta invenție se referă la o metodă pentru stabilirea in vivo, la animale de experiență, a concentrației eficiente de apă sărăcită în deuteriu, pentru tratamentul cancerului, metodă ce poate fi aplicată în oncologia experimentală.
Sunt cunoscute procedee și instalații pentru obținerea apei sărăcite în deuteriu, din apă naturală sau apă provenită din apa grea (R0112422, FR 2 552 324, PCT WO 96/33129, RU 2182562).
De asemenea, sunt cunoscute proprietățile apei sărăcite în deuteriu, în ceea ce privește ameliorările și vindecările diferitelor boli, inclusiv a cancerului, atunci când această apă este administrată pacienților fie ca atare, fie sub forma unor preparate farmaceutice sau cosmetice (US 5788953, WO 96/03996, WO 95/18545).
Din stadiul tehnicii rezultă că este cunoscută o metodă experimentală in vivo, de stabilire a dozelor necesare de apă sărăcită în deuteriu, pentru tratamentul cancerului (US 5788953), dar această metodă prezintă numeroase dezavantaje. Astfel, în metoda descrisă, sunt utilizate tumori umane (tumoră de prostată, tumoră a sânului etc.), grefate la animalele imunosupresate. Această xenotransplantare (tumoră umană, grefată la animale) a fost obținută pe linii de șoareci singeneici (inbred), și anume linia pură CBA/Ca, animalele fiind în prealabil imunosupresate (WO 95/18545, pag. 3).
Este cunoscut însă că, la transplantarea tumorilor maligne umane la animale, există, foarte frecvent, riscul de respingere (Billingham, R.E. și colab., 1953, Nature, 172, 603; Miles, C.P., 1965, J.Natl. Cancer Inst. 34, 103; Comișel, V. și colab, 2001, Rev. Rom. de Oncologie Comparată, 4, 295).
Este deja bine cunoscut faptul că această xenotransplantare de celule, țesuturi și organe este extrem de greu de obținut, aproape imposibil, xenotransplantul fiind rejectat, în timp, de către organismul gazdă. De asemenea, sunt rejectate și grefele tumorale maligne în sistem xenogenic. în ceea ce privește xenotransplantarea tumorilor, în general, și a tumorilor maligne, în special, la animalele de experiență, există numeroase lucrări științifice publicate, în care se prezintă și se discută condițiile care facilitează reușita xenotransplantării tumorale, cum sunt:
a) folosirea unortehnici deosebite, de inoculare a celulelortumorale (inocularea intraembrionară, intracraniană, la puii nou născuți, intratesticulară, în camera anterioară a ochiului, sub capsula renală, în punga jugală a hamsterului etc). Xenotransplantarea tumorilor în așa-zisele sedii privilegiate a demonstrat, însă, că procentul de grefe pozitive este neconcludent și variabil, neputând oferi un model experimental, constant și reproductibil (Comișel, V. și colab, 2001, Rev. Rom. de Oncologie Comparată, 4, 295);
b) folosirea animalelor cu imunodeficiențe congenitale sau dobândite, șoarecii „nude homozigoți, atimici congenital, caracterizați printr-o deficiență a răspunsului imun, mediat celular, timectomia chirurgicală a animalelor nou-născute;
c) inhibarea reactivității imune, pentru inducerea toleranței specifice față de xenotransplant, prin diverse metode, cum sunt: iradierea cu doze subletale, sub protecție cu antibiotice; blocarea sistemului imun, prin inoculare intravenoasă, cu doze masive de suspensii coloidale; administrarea de steroizi corticosuprarenali, seruri antilimfocitare, medicamente imunosupresoare (ciclofosfamidă, cytostar etc.) sau ciclosporină.
Mijloacele cunoscute, de producere a imunosupresiei la animalele care urmează să fie supuse xenotransplantărilor tumorale maligne, s-au dovedit a avea efecte nocive asupra stării de sănătate a animalelor imunosupresate, stare care influențează rezultatele testelor experimentale (Comișel, V. și colab, 2001, Rev. Rom. de Oncologie Comparată, 4, 295).
RO 120505 Β1
De asemenea, aplicarea unui tratament de supresie imunologică înainte de efec- 1 tuarea transplantului face ca, ulterior transplantului din timpul experimentului de stabilire a dozei eficiente de apă sărăcită în deuteriu, efectul dozei să nu fie cel real, animalul supresat 3 imunologic având reacții total diferite în comparație cu un animal normal; nu reacționează sau reacționează extrem de slab imunologic. 5
Un alt aspect important, legat de xenotransplantare, este acela că animalele imunosupresate își redobândesc capacitatea de respingere a grefei de țesut normal sau tumoral 7 malign după o perioadă de 4-6 săptămâni, indiferent de modul de inducere a imunosupresiei.
în experimentele prezentate în brevetul US 5855921, se precizează că tumorile ma- 9 ligne umane, xenotransplantate la șoareci și dezvoltate la aceștia, după o perioadă de tratament cu apă sărăcită în deuteriu, au regresat și, apoi, au fost rejectate, datorită acestui 11 tratament.
în acest caz, rejectarea poate fi pusă pe seama unei reacții imunologice normale, 13 gazdă contra grefă tumorală, așa cum a fost arătat mai sus.
De asemenea, precizarea că tumorile maligne, xenotransplantate la animale și tratate 15 apoi cu apă sărăcită în deuteriu, nu metastazează, nu poate fi luată în considerare ca efect al administrării apei, deoarece, așa cum s-a arătat mai sus, tumorile maligne umane, trans- 17 plantate experimental, nu metastazează sau metastazează foarte rar.
în brevetul US 5855921, dozele de deuteriu în apa administrată în experiment nu sunt 19 constante, astfel încât să se poată urmări stabilirea unei doze singulare, eficiente. Astfel, în cursul experimentului, se administrează, pentru început, apă cu un conținut de 30 ppm deu- 21 teriu, timp de 3 săptămâni, iar apoi, la același lot de animale, se administrează apă cu un conținut de deuteriu de 110-120 ppm, până la sfârșitul experimentului. în acest fel, este con- 23 struită plaja concentrațiilor de deuteriu revendicată în brevetul US 5855921.
Având în vedere cele de mai sus, se poate constata că experimentele din stadiul teh- 25 nicii prezentate de invențiile ale căror autor este Gabor Somlayi sunt neconvigătoare, deoarece, pentru xenotransplantarea folosită, rezultatele obținute sunt influențate de condițiile în 27 care experimentele au fost efectuate, respectiv modalitatea de administrare a dozelor pe o plajă prea mare și folosirea tumorilor umane, în cazuri în care a fost folosită, în prealabil, 29 imunosupresarea animalelor de experiență. De asemenea, din experimentele prezentate în brevetul US 5855921, nu rezultă durata totală pentru tratamentului cancerului, respectiv nu 31 este indicată durata și concentrația pentru care efectele sunt maxime.
Problema pe care o rezolvă invenția este aceea că aceasta permite realizarea unei 33 metode de stabilire experimentală, in vivo, a concentrației eficiente de deuteriu în apă, astfel încât să se obțină rezultate optime în tratamentul cancerului la șobolani. 35
Metoda pentru stabilirea in vivo, la animale de experiență, a concentrației eficiente de apă sărăcită în deuteriu, pentru tratamentul cancerului, constă în aceea că aceasta pre- 37 vede administrarea apei sărăcită în deuteriu înainte și după grefarea tumorală, cu grefe tumorale animale, și are următoarele etape: 39
A) administrarea șobolanilor Wistar outbred, prin dietă, a apei sărăcită în deuteriu, la concentrațiile de 25, 60 și 100 ppm, timp de 60 de zile, concomitent cu animale martor, 41 cărora le-a fost administrată, prin dietă, apă cu un conținut de 150 ppm deuteriu, pe aceeași durată de timp, de la rețea; 43
B) stabilirea viabilității celulelor tumorale ce urmează a fi grefate, cu albastru de tripan;45
C) grefarea animalelor din lotul de experiență și a animalelor martor, în a 60-a zi, subcutan, cu 1 x 107 celule tumorale maligne, în 0,5 ml ser fiziologic, de sarcom Walker 256-47 varianta solidă și epiteliom limfotrop T8 Guerin-variantă solidă, ambele având celule cu viabilitate de peste 98%;49
RO 120505 Β1
D) observarea efectelor administrării continue și de lungă durată, prin dietă, a apei sărăcită în deuteriu, la concentrații de 25, 60 și 100 ppm deuteriu, perioadă în care se efectuează următoarele:
a. începând cu ziua a 4-a postgrefare, se execută, la 2...3 zile, controlul și măsurarea nodulilor tumorali;
b. urmărirea stării fiziologice a animalelor, prin cântărire săptămânală, urmărirea consumului hranei și al apei, observarea apariției toxicității;
c. după 60 de zile, când toate animalele martor au decedat, între ziua
160...200 de la grefare, se urmărește efectul produs de administrarea apei sărăcită în deuteriu, la concentrațiile stabilite, asupra homeostaziei animalelor supraviețuitoare, din loturile de experiență, respectiv modul de influențare a sistemului imun tumoral și celular al acestor animale, efectuându-se o serie de controale a stării imunologice a animalelor, și anume: analiza formulei leucocitare, pentru stabilirea nivelului limfocitelor și a celulelor blastice; analize la nivelul măduvei hematopoietice, pentru stabilirea nivelului plasmocitelor și a nivelului celulelor NK-K;
E) stabilirea concentrației eficiente de apă sărăcită în deuteriu, pentru animalele de experiență, rămase în viață, în funcție de instalarea noii homeostazii și rezultatele obținute privind regresia tumorală, cât și vindecările de cancer.
Metoda pentru stabilirea in vivo, la animale de experiență, a concentrației eficiente de apă sărăcită în deuteriu, pentru tratamentul cancerului, prezintă următoarele avantaje:
- este o metodă ce practică grefarea tumorală alogeneică, ce permite o eventuală extrapolare a rezultatelor la om, față de rezultatele obținute de alți autori, pe animale singeneice;
- permite stabilirea exactă a concentrației eficiente de deuteriu;
- rezultatele aplicării metodei sunt exacte și reproductibile, tumorile grefate în sistem alogeneic având un procent de prindere tumorală de 100%, fără regresii tumorale spontane;
- nu este efectuată supresia imunologică a animalelor, ceea ce permite eliminarea unor rezultate fals pozitive;
- nu introduce nici un factor arbitrar în stabilirea concentrației de deuteriu;
- folosește tumori experimentale, bine cunoscute, de screening, folosite curent la aprecierea efectelor citostaticelor.
Se dă, în continuare, un exemplu de realizare a metodei conform invenției.
Metoda conform invenției constă în administrarea, la animale de experiență (șobolani), a apei sărăcită în deuteriu, înainte și după grefarea tumorală cu grefe animale.
Metoda cuprinde următoarele etape:
A) Administrarea apei sărăcită în deuteriu, înainte de grefarea tumorală
S-au ales circa 800 animale de experiență, respectiv șobolani Wistaroutbred, masculi și femele, cu greutate de 120 ± 20 g, cu stare fiziologică bună, constatată în urma unui examen clinic.
Animalele de experiență au fost repartizate câte 7-8 într-o cușcă (masculii separați de femele).
S-a administrat, la trei loturi de șobolani Wistar outbred, prin dietă, apă sărăcită în deuteriu, cu concentrațiile de 25, 60 și 100 ppm, timp de 60 de zile, concomitent cu animale martor, cărora le-a fost administrată, prin dietă, apă cu un conținut de 150 ppm deuteriu, pe aceeași durată (apă de la rețea).
B) Stabilirea viabilității celulelor tumorale ce urmează a fi grefate înainte de efectuarea grefelor, s-a executat stabilirea viabilității celulelortumorale, ce urmau a fi grefate, cu albastru de tripan. Pentru această determinare, pe o lamă de microscop, s-au recoltat celule tumorale, obținute conform unor tehnici cunoscute, din tumora
RO 120505 Β1 alogeneică, în 0,5 ml ser fiziologic, și s-au adăugat 1-2 picături de albastru de tripan. Celulele 1 colorate în albastru sunt celule moarte. Calculul procentului de viabilitate s-a efectuat prin numărarea celulelor moarte la 1000 celule etalate pe lamă și s-a raportat procentual. Viabili- 3 tatea celulelor trebuie să fie de peste 98%.
C) Grefarea animalelor din lotul de experiență și animalelor martor, cu sarcomul 5 Walker 256-varianta solidă și cu epiteliomul limfotrop T8 Guerin- varianta solidă.
în a 60-a zi de la tratamentul preliminar al animalelor, cu apă sărăcită în deuteriu, 7 conform etapei A), s-a procedat la grefarea șobolanilor din lotul de experiență, cât și din lotul martor, prin tehnici bine cunoscute, subcutan, dorsal, cu 1 x 107 celule tumorale maligne, în 9 0,5 ml ser fiziologic de sarcom Walker 256- varianta solidă și epiteliom limfotrop T8 Guerin-variantă solidă, ambele având celule cu viabilitate de peste 98%. 11
Grefarea s-a executat pe câte trei loturi de 220 animale, ce urmau a li se administra apă sărăcită în deuteriu, în trei concentrații, respectiv la 25,60 și la 100 ppm. Din fiecare lot 13 de 220 animale de experiență, două loturi de 79 animale au fost grefate cu sarcomul Walker 256-varianta solidă și un lot de 79 animale a fost grefat cu epiteliomul T8 Guerin- varianta 15 solidă. Celelalte animale s-au folosit ca martori.
D) Observarea efectelor administrării continue și de lungă durată, prin dietă, a apei 17 sărăcită în deuteriu, la concentrații de 25, 60 și 100 ppm deuteriu, comparativ cu administrarea, la animale martor, a apei de la rețea, cu conținut de deuteriu de 150 ppm 19
Animalelor de experiență, împărțite în trei loturi, li s-a administrat, prin dietă zilnică, apă sărăcită în deuteriu, în trei concentrații: 30, 60 și 100 ppm, timp de 700 zile. începutul 21 administrării la animalele de experiență s-a făcut concomitent cu administrarea, la animale martor, tot în dietă zilnică, a apei de la rețea, cu un conținut de deuteriu de 150 ppm. 23 în perioada experimentului, s-au efectuat următoarele :
a. începând cu ziua a 4-a postgrefare, s-a executat la 2-3 zile, la locul inoculului, con- 25 trolul și măsurarea nodulilor tumorali, dezvoltați la animalele de experiență. Incidența tumo- rală a fost, la toate loturile, de 100%. Creșterea tumorilor a fost apreciată prin măsurarea a 27 două diametre, mare și mic, la diferite stadii ale creșterii tumorale. Volumul tumoral a fost calculat după formula V = a x b2 x 0,4, în care V este măsurat în mm3, a și b fiind cele două dia- 29 metre, iar 0,4 fiind o constantă.
b. Zilnic, s-a efectuat urmărirea stării fiziologice a animalelor, prin cântărire; s-a urmă- 31 rit consumul hranei și al apei, cu observarea apariției fenomenelor toxice (hemoragii, diaree, căderea părului etc). De asemenea, zilnic s-a înregistrat mortalitatea. Animalele au fost cân- 33 tărite la data efectuării măsurătorilor tumorale, deoarece scăderea bruscă în greutate poate fi o manifestare a fenomenelor toxice. 35
c. După 60 de zile, când toate animalele martor au decedat, de preferință între ziua
160-200 de la grefare, s-a urmărit efectul produs de administrarea apei sărăcită în deuteriu, 37 la concentrațiile stabilite, asupra homeostaziei animalelor supraviețuitoare, din loturile de experiență, respectiv modul de influențare a sistemului imun, tumoral și celular, al acestor ani- 39 male, efectuându-se o serie de controale a stării imunologice a animalelor, și anume: analiza formulei leucocitare, pentru stabilirea nivelului limfocitelor și a celulelor blastice, inclusiv 41 nivelul prezenței celulelor NK-K și al celulelor dendritice; analize la nivelul măduvei hematopoietice, a teritoriilor limfonodate, satelite zonei de grefare tumorală, inclusiv formațiunea 43 tumorală grefată.
RO 120505 Β1
F) Stabilirea concentrației eficiente, de apă sărăcită în deuteriu, pentru animalele de experiență, rămase în viață, în funcție de instalarea unei noi homeostazii și de rezultatele obținute, privind regresia tumorală și vindecarea de cancer
Aprecierea activității antitumorale a apei sărăcită în deuteriu s-a făcut conform criteriilor NCI (1990). S-a calculat inhibiția creșterii tumorale (ICT%), o valoare de 50% a acestui indice reprezentând o inhibiție puternică a creșterii tumorale. Pentru supraviețuirea animalelor, s-a calculat:
- timpul mediu de supraviețuire (TMS);
- raportul T/C (tratat/control x 100), care trebuie să fie mai mare de 125;
- creșterea timpului de supraviețuire (ILS%), care trebuie să aibă valoarea peste 25-36, în funcție de sistemul experimental folosit;
- calcularea numărului de animale supraviețuitoare pe termen lung, față de numărul animalelor tratate.
Au fost respectate procedurile standard, pentru validarea GLP a modelelor experimentale utilizate în studiile farmacologice. Au fost respectate cele două variabile cerute de GLP: variabila independentă (de predicție), care constă în utilizarea aceluiași număr de celule tumorale, inoculate în aceleași condiții standard, la toate animalele (1 x 107 celule tumorale) și variabila dependentă (variabila de criteriu);
- perioada de latență (în zile de la transplantul tumoral, până la apariția unui nodul tumoral palpabil);
- incidența tumorală-număr de animale cu tumori, fără tumori, rejecții tumorale;
-timpul mediu de supraviețuire (TMS în zile), de la grefarea tumorii până la moartea ultimului animal.
Rezultate
Ca prim rezultat, s-a evidențiat faptul că există diferențe semnificative în ceea ce privește tumorigeneza și evoluția tumorală între martorii cărora li s-a administrat, în dietă, apă curentă de la rețea, pre- și postgrefare tumorală, și șobolanii cărora le-a fost administrată apă sărăcită în deuteriu, în special la concentrația de 60 ppm.
în ceea ce privește perioada de latență, s-a constatat o lungire a acesteia cu 5 zile, la loturile care au primit, în dietă, apă sărăcită în deuteriu, cu concentrația de 60 ppm, față de martori, atât pentru tumora Walker256, cât și pentru tumora T8 Guerin. Această lungire a perioadei de latență a influențat procentajul șobolanilor cu tumori la diferite stadii ale evoluției tumorale.
Cu privire la supraviețuirea animalelor, s-au constatat următoarele:
- la 60 de zile post inocul tumoral, s-a constatat o ușoară prelungire a TMS, la animalele grefate cu tumora T8 Guerin, la care s-a administrat apă sărăcită în deuteriu, la concentrație 60 ppm, și o prelungire semnificativă a TMS, la animalele grefate cu tumora Walker 256; la animalele grefate cu tumora Walker 256, și criteriile de apreciere ale activității tumorale au valori semnificative (T/C% = 150 și ILS% = 50);
- la animalele grefate cu tumora Walker 256, la care s-a administrat apă sărăcită în deuteriu, în concentrație de 60 ppm deuteriu, în a 60-a zi, mai trăiau 33/79 (41%) din șobolani, față de 20%, la animalele tratate cu apă sărăcită în deuteriu, la concentrație de 25 ppm deuteriu, și 28,5%, la animalele tratate cu apă sărăcită în deuteriu, la concentrație de 100 ppm deuteriu;
- până în a 60-a zi de la inoculul tumoral, toate animalele martor au murit de cancer;
- la 80 de zile, din 79 șobolani grefați cu tumora Walker 256 și tratați cu apă sărăcită în deuteriu, cu concentrația de 60 ppm deuteriu, mai trăiau 27 șobolani, din care 22 fără tumori, procentul șobolanilor care n-au dezvoltat cancer fiind de 34%;
RO 120505 Β1
- pentru tumora T8 Guărin și concentrația de 60 ppm deuteriu, la 184 de zile, au fost 1
8/77 șobolani (10,4%) care nu au dezvoltat cancer, iar 11 /77 (14,2%) au prezentat o evoluție tumorală foarte lentă; 3
- la 584 de zile, pentru tumora Walker și concentrația 60 ppm deuteriu, 20/70 șobolani au rămas în viață, ceea ce reprezintă 28,5%, iar la 8/60 (11,1 %) din șobolani, la care evoluția 5 tumorală a fost foarte mult prelungită.
Rezultatele obținute prin aplicarea metodei conform invenției sunt datorate, în primul 7 rând, modulării celulelor din sistemul imunitar, mediat tumoral și celular, care determină o inhibiție asupra dezvoltării și evoluției celor două tumori maligne experimentale (Walker 256 9 și T8 Guerin). Dovada acestei acțiuni este ilustrată de următoarele:
- la 162 de zile, pentru tumora Walker 256, și la 192 de zile, pentru tumora T8 Guărin, 11 formula leucocitară, la animalele supraviețuitoare cu evoluție tumorală extrem de lentă, prezintă o creștere procentuală a limfocitelor, de 70-80 %, față de 15...20%. la martori; din pro- 13 centul limfocitelor, 10-15% au fost celule blastîce, față de 0%, la martori;
- s-a înregistrat un procent crescut al celulelor dendritice (5-8%, față de 0-1%, la 15 martori) și a celulelor NK-K (9-15%, față de 0-1%, la martori);
- s-a constatat că măduva hematopoietică a animalelor tratate cu apă sărăcită în deu- 17 teriu, la concentrația de 60 ppm deuteriu, prezintă o masivă infiltrare cu imunoblaști, plasmocite și mastocite, ceea ce dovedește o celularitate specifică pentru reacțiile imune, mediate 19 tumoral;
- teritoriul limfopoietic a prezentat imagini identice cu cele din măduva hemato- 21 poietică;
- celularitatea tumorilor cu evoluție extrem de lentă a fost foarte diferită de cea exis- 23 tentă la martori; astfel, în timp ce la martori, celulele tumorale au fost în proporție de aproape 100% din total celularitate, la animalele care au primit în dietă apă sărăcită în deuteriu, în 25 special cea cu concentrația de 60 ppm deuteriu, pragul acestor celule tumorale nu a depășit
10%, restul celulelor tumorale fiind în necrobioză; 27
- s-a remarcat invazia tumorii de către limfocite și celule NK-K;
- analiza citomorfologică a hematopoiezei a arătat o formulă leucocitară cu un procent 29 ridicat de limfocite (60-75%), celule limfoide blastîce (5-7%), prezența celulelor dendritice (5-8%) și a celulelor NK-K (9-15%) la șobolanii care au consumat 1-2 ani, în exclusivitate și 31 în mod continuu, apă sărăcită în deuteriu, 60 ppm deuteriu.
Rezultă că șobolanii supraviețuitori de cancer au prezentat o remanență pe termen 33 foarte lung a acestei extraordinare stimulări imune, prin administrarea continuă de apă sărăcită în deuteriu, în concentrație de 60 ppm deuteriu, înainte și după grefarea tumorală. 35 în baza rezultatelor obținute prin aplicarea metodei conform invenției, se poate afirma că administrarea continuă de apă sărăcită în deuteriu, la concentrație de 60 ppm deuteriu, 37 timp de 60 de zile, înainte de grefarea tumorală, și administrarea acestei ape timp extrem de îndelungat inhibă dezvoltarea și evoluția celor două tumori maligne experimentale, pe 39 șobolani Wistaroutbred, producând, în final, nedezvoltarea cancerului în procente semnificative, cât și prelungirea semnificativă a timpului de supraviețuire a animalelor cu tumori, 41 determinând o evoluție foarte lentă.
De asemenea, se poate afirma că apa sărăcită în deuteriu, la concentrația de 60 ppm 43 deuteriu, administrată continuu și timp îndelungat, acționează ca un factor homeostazic, de inhibare a dezvoltării și evoluției tumorilor maligne. 45
Deoarece șobolanii supraviețuitori de cancer au prezentat o remanență pe termen foarte lung a sistemului imunitar, în urma administrării continue de apă sărăcită în deuteriu, 47 în concentrație de 60 ppm deuteriu, se poate afirma că apa sărăcită în deuteriu, la concentrația de 60 ppm deuteriu, creează o nouă homeostazie la animalele de experiență la care 49 a fost administrată, producând o modulare a celulelor din sistemul imunitar mediat, tumoral și celular. 51
RO 120505 Β1
Pentru a menține homeostazia indusă de apa sărăcită în deuteriu, este necesar ca administrarea acesteia, odată începută, să fie continuată indefinit (continuu), fără întreruperi accidentale; în caz contrar, homeostazia instalată se perturbă cu ușurință și se poate reveni la faza homeostazică dinaintea administrării apei sărăcite în deuteriu, când condițiile homeostazice pot facilita, din nou, proliferarea clonului malign.
Claims (2)
- Revendicări1. Metodă pentru stabilirea in vivo, la animale de experiență, a concentrației eficiente de apă sărăcită în deuteriu, pentru tratamentul cancerului, caracterizată prin aceea că aceasta prevede administrarea apei sărăcită în deuteriu, înainte și după grefarea tumorală cu grefe animale, și are următoarele etape:A) administrarea șobolanilor Wistar outbred, prin dietă, a apei sărăcită în deuteriu, la concentrațiile de 25,60 și 100 ppm, timp de 60 de zile, concomitent cu animalele martor, cărora le-a fost administrată, prin dietă, apă cu un conținut de 150 ppm deuteriu, pe aceeași durată, din apă de la rețea;B) stabilirea viabilității celulelor tumorale ce urmează a fi grefate, cu albastru de tripan;C) grefarea animalelor din lotul de experiență și a animalelor martor, în a 60-a zi, subcutan dorsal, cu 1 x 107 celule tumorale maligne, în 0,5 ml ser fiziologic, de sarcom Walker 256- varianta solidă și epiteliom limfotrop T8 Guerin -variantă solidă, ambele având celule cu viabilitate de peste 98%;D) observarea efectelor administrării continue și de lungă durată, prin dietă, a apei sărăcită în deuteriu, la concentrații de 25, 60 și 100 ppm deuteriu, perioadă în care se efectuează următoarele:a. începând cu ziua a 4-a postgrefare, se execută, la 2...3 zile, controlul și măsurarea nodulilor tumorali;b. urmărirea stării fiziologice a animalelor, prin cântărire săptămânală, urmărirea consumului hranei și al apei, observarea apariției toxicității;c. după 60 de zile, când toate animalele martor au decedat, între ziua160...200 de la grefare, se urmărește efectul produs de administrarea apei sărăcită în deuteriu, la concentrațiile stabilite, asupra homeostaziei animalelor supraviețuitoare, din loturile de experiență, respectiv modul de influențare a sistemului imun tumoral și celular al acestor animale, efectuându-se o serie de controale a stării imunologice a animalelor, și anume: analiza formulei leucocitare, pentru stabilirea nivelului limfocitelor și al celulelor blastice; analize la nivelul măduvei hematopoietice, pentru stabilirea nivelului plasmocitelor și nivelului celulelor NK-K;E) stabilirea concentrației eficiente de apă sărăcită în deuteriu, pentru animalele de experiență rămase în viață, în funcție de instalarea noii homeostazii și de rezultatele obținute privind regresia tumorală, cât și vindecările de cancer.
- 2. Metodă conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că aceasta stabilește concentrația de 60 ppm deuteriu în apa sărăcită în deuteriu, concentrație care este cea mai eficientă pentru tratamentul și profilaxia cancerului, prin administrare continuă și de lungă durată a acestei ape în dieta zilnică.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA200300685A RO120505B1 (ro) | 2003-08-13 | 2003-08-13 | Metodă pentru stabilirea in vivo la animale de experienţă, a concentraţiei eficiente de apă sărăcită în deuteriu pentru tratamentul cancerului |
| US10/567,842 US20060257319A1 (en) | 2003-08-13 | 2004-07-20 | Method for in vivo determination on tested animals of the efficient concentration of deuterium depleted water for cancer therapy |
| CA002525624A CA2525624A1 (en) | 2003-08-13 | 2004-07-20 | Method for in vivo determination on tested animals of the efficient concentration of deuterium depleted water for cancer therapy |
| EP04786035A EP1644728A2 (en) | 2003-08-13 | 2004-07-20 | Method for in vivo determination on tested animals of the efficient concentration of deuterium depleted water for cancer therapy |
| PCT/RO2004/000012 WO2005017522A2 (en) | 2003-08-13 | 2004-07-20 | Method for in vivo determination on tested animals of the efficient concentration of deuterium depleted water for cancer therapy |
| JP2006523156A JP2007502406A (ja) | 2003-08-13 | 2004-07-20 | 重水素減少水の癌治療に有効な濃度を試験動物の生体内試験で決定する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA200300685A RO120505B1 (ro) | 2003-08-13 | 2003-08-13 | Metodă pentru stabilirea in vivo la animale de experienţă, a concentraţiei eficiente de apă sărăcită în deuteriu pentru tratamentul cancerului |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO120505B1 true RO120505B1 (ro) | 2006-02-28 |
Family
ID=34192333
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA200300685A RO120505B1 (ro) | 2003-08-13 | 2003-08-13 | Metodă pentru stabilirea in vivo la animale de experienţă, a concentraţiei eficiente de apă sărăcită în deuteriu pentru tratamentul cancerului |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20060257319A1 (ro) |
| EP (1) | EP1644728A2 (ro) |
| JP (1) | JP2007502406A (ro) |
| CA (1) | CA2525624A1 (ro) |
| RO (1) | RO120505B1 (ro) |
| WO (1) | WO2005017522A2 (ro) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN120078803A (zh) * | 2025-03-05 | 2025-06-03 | 江苏睿景生物技术有限公司 | 低氘水对肿瘤细胞生长抑制的作用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HU208084B (en) * | 1991-10-31 | 1993-08-30 | Hyd Kutato Fejlesztoe Kft | Process for producing compositions suitable for curing tumorous diseases |
| DK0738114T3 (da) * | 1994-01-06 | 2001-11-26 | Hyd Kutato Fejleszto Ktf | Næringsmiddelprodukt til forebyggelse af udvikling af sygdomme og fremgangsmåder til fremstilling af dette |
| HU214593B (hu) * | 1994-03-23 | 1998-06-29 | HYD Kutató-Fejlesztő Kft. | Kozmetikai, higiéniai, valamint szépség- és testápoló készítmények és eljárás azok előállítására |
-
2003
- 2003-08-13 RO ROA200300685A patent/RO120505B1/ro unknown
-
2004
- 2004-07-20 JP JP2006523156A patent/JP2007502406A/ja active Pending
- 2004-07-20 WO PCT/RO2004/000012 patent/WO2005017522A2/en not_active Ceased
- 2004-07-20 EP EP04786035A patent/EP1644728A2/en not_active Withdrawn
- 2004-07-20 CA CA002525624A patent/CA2525624A1/en not_active Abandoned
- 2004-07-20 US US10/567,842 patent/US20060257319A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1644728A2 (en) | 2006-04-12 |
| WO2005017522A3 (en) | 2005-04-14 |
| JP2007502406A (ja) | 2007-02-08 |
| CA2525624A1 (en) | 2005-02-24 |
| WO2005017522B1 (en) | 2005-06-16 |
| US20060257319A1 (en) | 2006-11-16 |
| WO2005017522A2 (en) | 2005-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sava et al. | Antineoplastic activity and toxicity of an organometallic complex of ruthenium (II) in comparison with cis-PDD in mice bearing solid malignant neoplasms | |
| Spruß et al. | Hyaluronidase significantly enhances the efficacy of regional vinblastine chemotherapy of malignant melanoma | |
| Toth et al. | Tumors induced in mice by N-methyl-N-formylhydrazine of the false morel Gyromitra esculenta | |
| Bodgen et al. | Response of human lung tumor xenografts to treatment with a somatostatin analogue (Somatuline) | |
| Shyr et al. | Effect of neonatal prolactin deficiency on prepubertal tuberinfundibular and tuberohypophyseal dopaminergic neuronal activity | |
| US20220202838A1 (en) | Combinational therapies for treatment of cancer comprising a bacteriochlorophyll derivative | |
| Grem et al. | Toxicity of levamisole and 5-fluorouracil in human colon carcinoma cells | |
| Sun et al. | GSH/pH-responsive copper-based cascade nanocomplexes inducing Immunogenic cell death through cuproptosis/ferroptosis/necroptosis in oral squamous cell carcinoma | |
| Giraldi et al. | Effects of stress on tumor growth and metastasis in mice bearing Lewis lung carcinoma | |
| Gilhar et al. | The effect of topical cyclosporin on the immediate shedding of human scalp hair grafted onto nude mice | |
| Jao et al. | Effect of selenium on 1, 2-dimethylhydrazine-induced intestinal cancer in rats | |
| Collery et al. | Negative impact of total body irradiation on the antitumor activity of rhenium-(I)-diselenoether | |
| Weiss et al. | Second-line treatment of advanced measurable ovarian cancer with iproplatin: a Southwest Oncology Group study | |
| Kolanjiappan et al. | Diurnal rhythmicity of thiobarbituric acid reactive substances and antioxidants in experimental mammary carcinogenesis | |
| Chance et al. | Response of tumor and host to hyperalimentation and antiglutamine treatments | |
| Freire-Garabal et al. | Effects of buspirone on the immune response to stress in mice | |
| Dalaklioglu et al. | Substance P prevents vascular endothelial dysfunction in metastatic breast carcinoma | |
| Dréau et al. | Inhibitory effects of fusarochromanone on melanoma growth | |
| EI-Badry et al. | Effect of early heat conditioning and lighting regime on physiological and immune responses of Muscovy ducks during summer season | |
| JP2007502406A (ja) | 重水素減少水の癌治療に有効な濃度を試験動物の生体内試験で決定する方法 | |
| James et al. | Impact of the antimetastatic drug Batimastat on tumor growth and PO2 measured by EPR oximetry in a murine mammary adenocarcinoma | |
| Groch et al. | The effects of goitrogenesis, involution, and goitrogenic rechallenge on the clonogenic cell content of the rat thyroid | |
| Chung et al. | Alterations in lymphocyte recirculation within ultraviolet light-irradiated mice: efferent blockade of lymphocyte egress from peripheral lymph nodes | |
| Zhao et al. | Polymersomal vincristine-PLK1 inhibitor boosts immunogenic cell death and antitumor immunity | |
| Henriksson et al. | Interleukin-2-induced growth inhibition of prostatic adenocarcinoma (Dunning R 3327) in rats |