RS20050637A - Derivati purin-6-ona - Google Patents

Description

Derivati purin-6-ona

Oblast tehnike

Pronalazak se odnosi na nove derivate purin-6-one, koji se primenjuju u farmaceutskoj industriji za proizvodnju farmaceutskih kompozicija.

Stanje tehnike

U Evropskoj patentnoj prijavi EP 07711799, međunarodnoj patentnoj prijavi WO98/40384 i Američkom patentu USP 5,861,396 derivati puri-6-ona su opisani kao odgovarajući, za lečenje kardiovaskularnih obolenja, obolenja u vaskularnom sistemu i urogenitalnom sistemu. U međunarodnoj patentnoj prijavi W098/32755 derivati purindiona su opisani kao inhibitori fosfodiesteraze. U međunarodnoj patentnoj prijavi WO02/50078 supstituisani imidazotriazoni su opisani kao PDE2 inhibitori. U međunarodnoj patentnoj prijavi WO02/09713 i u Nemačkoj patentnoj prijavi DE 10108752 Al selektivni PDE2 inhibitori su opisani kao medikamenti za poboljšavanje saznanja.

Opis pronalaska

Pronađeno je da derivati purin-6-ona, koji su detaljnije opisani dole, imaju iznenađujuće i posebno povoljne osobine.

Pronalazak se prema tome odnosi na jedinjenja sa formulom 1

u kojima

Rl je vodonik, l-4C-alkil, fenil ili fenil-l-4C-alkil grupa,

i u kojima ili

R2 je l-4C-alkil, l-hidroksi-2-4C-alkil, 1-4C-alkilkarbonil ili 1-(acetiloksi)-2-4C-alkil grupa i

R3 je vodonik,

ili

R2 je vodonik, l-4C-alkil, l-hidroksi-2-4C-alkil, l-4C-alkilkarbonil ili 1-(acetiloksi)-2-4C-alkil grupa i

R3 je Arilbutil, Heteroarilbutil, Arilpropil, Heteroarilpropil, Ariletil ili Heteroariletil,

u kojima

Aril je fenil, naftalenil ili indalin, od kojih je svaki opciono supstituisan do tri puta identično ili različito sa halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, karboksil, l-4C-alkil, l-4C-alkoksi ili 1-4C-alkoksikarbonil grupom,

Heteroaril je piridinil, pirazinil, piridazinil, pirimidinil, hinazolinil, hinoksalinil, cinolinil, hinolil,

izohinolil, nafthiridinil, ftalazinil, indolil, izoindolil, indazolil, purinil, pteridinil, benzofuranil, benzoksazolil, benzotiazolil, benzimidazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, imidazolil, pirolil, pirazolil, furanil ili tiofenil, od kojih je svaki opciono supstituisan do tri puta identično ili različito sa halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil,

karboksil, l-4C-alkil, l-4C-alkoksi ili l-4C-alkoksikarbonil grupom,

i u kojima ili

R4 je l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom i

R5 je halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, karboksil, l-4C-alkil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, l-4C-alkoksikarbonil, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil, 1-4C-alkilkarbonilamino, l-4C-alkilkarboniloksi, 1-4C-alkilsulfonilamino, fenilkarbonilamino, fenilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R6 i/ili R7, benzilkarbonilamino, benzilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R8 i/ili R9, fenilsulfonilamino, fenilsulfonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa RIO i/ili Rl 1, benzilsulfonilamino

ili benzilsulfonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R12 i/ili R13,

ili

R4 je halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, karboksil, l-4C-alkil, l-4C/alkoksi, 1-4C-alkoksikarbonil, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil, 1-4C-alkilkarbonilamino, l-4C-alkilkarboniloksi, 1-4C-alkilsulfonilamino, fenilkarbonilamino, fenilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R6 i/ili R7, benzilkarbonilamino, benzilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R8 i/ili R9, fenilsulfonilamino, fenilsulfonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa RIO i/ili Rl 1, benzilsulfonilamino ili benzilsulfonilamino grupa

supstituisana u fenilnom delu sa R12 i/ili R13, i

R5 je l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom i R6 je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil, l-4C-alkilkarbonilamino ili 1-4C-alkilkarboniloksi grupom,

R7 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa,

R8 je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, 1-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil, 1-4C-alkilkarbonilamino ili 1-4C-alkilkarboniloksi grupom,

R9 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa,

RIO je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, 1-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil, 1-4C-alkilkarbonilamino ili 1-4C-alkilkarboniloksi grupom,

Rl 1 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa,

R12 je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil, l-4C-alkilkarbonilamino ili 1-4C-alkilkarboniloksi grupom,

R13 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa,

soli ovih jedinjenja, kao i N-oksidi, enantiomeri i tautomeri ovih jedinjenja i njihove soli. l-4C-alkil je ravan lanac ili razgranat alkil radikal koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma. Primeri su butil, izobutil, sek-butil, propil, izopropil, etil i metil radikali.

Fenil-l-4C-alkil predstavlja jedan od gore navedenih l-4C-alkil radikala, koji je supstituisan sa fenil radikalom. Primeri koji se mogu navesti su fenilpropil, feniletil i benzil radikal. l-hidroksi-2-4C-alkil predstavlja jedan od gore navedenih 2-4C-alkil radikala, koji je supstituisan u položaju 1 sa hidroksi grupom. Primeri koji se mogu navesti su 1-hidroksietil, 1-hidroksipropil i 1-hidroksibutil. l-4C-alkilkarbonil je karbonil grupa za koju je jedan od gore navedenih l-4C-alkil radikala vezan. Primer je acetil radikal [CH3C(0)-]. l-4C-alkilkarboniloksi predstavlja karboniloksi grupu za koju je jedan od gore navedenih 1-4C-alkil radikala vezan. Primer je acetoksi radikal [CH3C(0)-0-]. l-(acetiloksi)-2-4C-alkil predstavlja jedan od gore navedenih 2-4C-alkil radikala, koji je supstituisan u položaju 1 sa acetiloksi grupom. Primer koji se može navesti je 1 -(acetiloksi)etil.

Halogen unutar značenja predmetnog pronalaska je brom, hlor ili fluor.

l-4C-alkoksi je radikal koji, u dodatku atoma kiseonika, sadrži ravan lanac ili razgranat alkil radikal koji ima 1 do 4 ugljenikova atoma. Alkoksi radikali koji imaju 1 do 4 ugljenikova atoma koji se mogu navesti u ovom kontekstu su, na primer, butoksi, izobutoksi, sek-butoksi, terc-butoksi, propoksi, izo-propoksi, etoksi i metoksi radikali. l-4C-alkoksikarbonil je karbonil grupa za koju je jedan od gore navedenih l-4C-alkoksi radikala vezan. Primeri su metoksikarbonil [CH30-C(0)-] i etoksikarbonil [CH3CH20-C(0)-] radikal. l-4C-alkoksi koji je potpuno ili pretežno supstituisan sa fluorom, na primer, 2,2,3,3,3-pentafluoropropoksi, perfluoroetoksi, 1,2,2-trifluoroetoksi i posebno 1,1,2,2-tetrafluoroetoksi, 2,2,2-trifluoroetoksi, trifluorometoksi i difluorometoksi radikal, od kojih je difluoro radikal poželjniji. "Pretežno" u ovom kontekstu znači da su više od polovine atoma vodonika l-4C-alkoksi grupe zamenjeni atomima fluora.

Mono- ili di-l-4C-alkilamino radikali sadrže u dodatku na atom azota, jedan ili dva gore navedena l-4C-alkil radikala. Poželjni su di-l-4C-alkilamino radikali, posebno dimetilamino, dietilamino i dipropilamino radikal.

Mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil radikali sadrže u dodatku na karbonil grupu, jedan ili dva gore navedena mono- ili di-l-4C-alkilamino radikala. Primeri koji se mogu navesti su N-metil-, N,N-dimetil-, N-etil-, N-propil-, N,N-dietil- i N-izopropilaminokarbonil radikal.

Mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil predstavljaju sulfonil grupu za koju je jedan od gore navedenih mono- ili di-l-4C-alkilamino radikala vezan. Primeri koji se mogu navesti su metilaminosulfonil, dimetilaminosulfonil i etilaminosulfonil radikal. l-4C-alkilkarbonilamino radikal je, na primer, propionilamino [C3H7C(0)NH-] i acetilamino radikal [CH3C(0)NH-]. l-4C-alkilsulfonil je sulfonil grupa za koju je jedan od gore navedenih l-4C-alkil radikala vezan. Primer je metansulfonil radikal (CH3SO2-). l-4C-alkilsulfonilamino radikal je, na primer, etilsulfonilamino ili metilsulfonilamino radikal.

N-oksid označava N-oksid u čistom prstenu i/ili N-oksid u bilo kom navedenom heteroaril prstenu koji sadrži atom azota.

Pogodne soli za jedinjenja sa formulom 1 - u zavisnosti od supstitucije - su sve kiselinske dodate soli ili sve soli sa bazama. Posebna napomena može da obuhvata farmaceutske tolerantne neorganske i organske kiseline i beze koje se uobičajeno primenjuju u farmaciji. To su, s druge strane, rastvorne i nerastvorne soli u vodi i one nastaju dodatkom kiselina kao što su, na primer, hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, fosforna kiselina, azotna kiselina, sumporna kiselina, sirćetna kiselina, limunska kiselina, D-glukonska kiselina, benzojeva kiselina, 2-(4-hidroksibenzoil)-benzojeva kiselina, buterna kiselina, sulfosalicilna kiselina, maleinska kiselina, laurinska kiselina, jabučna kiselina, fumarna kiselina, sukcinska kiselina, oksalna kiselina, tartarna kiselina, embonična kiselina, stearinska kiselina, toluensulfonska kiselina, metansulfonska kiselina ili 3-hidroksi-2-naftoična kiselina, koje se upotrebljavaju u dobijanju soli - zavisno od toga da lije mono- ili polubazna kiselina i zavisno od toga koja se so želi dobiti - u ekvimolarnom kvantitativnom odnosu ili nekom različitom od njega.

S druge strane, soli sa bazama su - u zavisnosti od supstitucije - takođe pogodne. Kao primer takvih soli su navedene litijumove, natrijumove, kalijumove, kalcijumove, aluminijumove, magnezijumove, titanijumove, amonijačne, megluminske i gvanidinijumove soli, ovde, baze su upotrebljene u dobijanju soli u ekvimolarnom kvantitativnom odnosu ili nekom različitom od njega.

Farmakološki netolerantne soli koje se mogu dobiti, na primer, kao proizvod postupka u proizvodnji jedinjenja prema pronalasku, na industrijskom nivou, se prevode u farmakološki tolerantne soli uz pomoć postupaka koja su poznata stručnjaku u toj oblasti.

Poznato je stručnjacima u toj oblasti da jedinjenja prema pronalasku kao i njihove soli, na primer kada se izoluju u kristalnom obliku, mogu sadržati različite količine rastvarača. Prema tome, pronalazak takođe obuhvata sve solvate i posebno sve hidrate jedinjenja sa formulom 1, kao i sve solvate i posebno sve hidrate soli jedinjenja sa formulom 1.

Jedinjenja sa formulom 1 koja bi se trebala naglasiti su ona u kojima

Rl je vodonik, l-2C-alkil, fenil, feniletil ili fenilpropil,

R2 je l-hidroksi-2-4C-alkil, l-4C-alkilkarbonil ili 1-(alkoksi)-2-4C-alkil,

R3 je vodonik, Arilbutil, Heteroarilbutil, Arilpropil, Heteroarilpropil, Ariletil ili Heteroariletil,

u kojima

Aril je fenil ili naftalenil,

Heteroaril je piridinil, pirimidinil, tiofuranil, indolil ili furanil,

i u kojima ili

R4 je l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom i

R5 je halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, l-4C-alkil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, 1-4C-alkilkarbonilamino, fenilkarbonilamino, fenilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R6 i/ili R7, benzilkarbonilamino, benzilkarbonilamino grupa supstituisana u

fenilnom delu sa R8 i/ili R9,

ili

R4 je halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, l-4C-alkil, l-4C-alkoksi, amino, mono- ili di-1-4C-alkilamino, 1-4C-alkilkarbonilamino, fenilkarbonilamino, fenilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R6 i/ili R7, benzilkarbonilamino, benzilkarbonilamino

grupa supstituisana u fenilnom delu sa R8 i/ili R9

R5 je l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom i

R6 je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil, l-4C-alkilkarbonilamino ili 1-4C-alkilkarboniloksi grupom,

R7 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa,

R8 je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil, l-4C-alkilkarbonilamino ili 1-4C-alkilkarboniloksi grupom,

R9 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa,

soli ovih jedinjenja, kao i N-oksidi, enantiomeri i tautomeri ovih jedinjenja i njihove soli.

Jedinjenja sa formulom 1 koja bi se trebala naglasiti su ona u kojima

Rl je vodonik, metil, fenil, feniletil ili fenilpropil,

R2 je 1-hidroksietil, acetil ili 1 -(acetiloksi)etil,

R3 je vodonik ili fenilpropil,

i u kojima ili

R4 je difluorometoksi i

R5 je nitro, amino, metoksi, 4-metoksifenilmetilkarbonilamino, 4-metoksikarbonilfenilkarbonilamino, 4-dipropilaminosulfonilfenilkarbonilamino, 3-hloro-4-fluorofenilkarbonilamino ili 3-fluoro-4-metilfenilkarbonilamino,

ili

R4 je hlor ili metoksi i

R5 je difluorometoksi,

soli ovih jedinjenja, kao i N-oksidi, enantiomeri i tautomeri ovih jedinjenja i njihove soli.

Poželjna jedinjenja sa formulom 1 su ona u kojima

Rl je vodonik ili metil,

R2 je 1-hidroksietil, acetil ili l-(acetiloksi)etil,

R3 je fenilpropil,

i u kojima ili

R4 je difluorometoksi i

R5 je metoksi, 4-metoksifenilmetilkarbonilamino, 4-metoksikarbonilfenilkarbonilamino, 4-dipropilaminosulfonilfenilkarbonilamino, 3-hloro-4-fluorofenilkarbonilamino ili 3-fluoro-4-metilfenilkarbonilamino,

ili

R4 je hlor ili metoksi i

R5 je difluorometoksi,

soli ovih jedinjenja, kao i N-oksidi, enantiomeri i tautomeri ovih jedinjenja i njihove soli.

Rešenje poželjnih jedinjenja sa formulom 1 su ona u kojima

Rl vodonik ili metil,

R2 je 1-hidroksietil, acetil ili 1-(acetiloksi)etil,

R3 je fenilpropil,

i u kojima ili

R4 je difluorometoksi i

R5 je metoksi, 4-metoksifenilmetilkarbonilamino, 4-metoksikarbonilfenilkarbonilamino, 4-dipropilaminosulfonilfenilkarbonilamino, 3-hloro-4-fluorofenilkarbonilamino ili 3-fluoro-4-metilfenilkarbonilamino,

ili

R4 je metoksi i

R5 je difluorometoksi,

soli ovih jedinjenja, kao i N-oksidi, enantiomeri i tautomeri ovih jedinjenja i njihove soli.

Posebno rešenje za jedinjenja predmetnog pronalaska uključuje ona jedinjenja sa formulom 1 u kojima Rl je vodonik ili metil.

Drugo posebno rešenje za jedinjenja predmetnog pronalaska uključuje ona jedinjenja sa formulom 1 u kojima R2 je 1-hidroksietil ili acetil.

Još jedno posebno rešenje za jedinjenja predmetnog pronalaska uključuje ona jedinjenja sa formulom 1 u kojima Rl je vodonik ili metil i R2 je 1-hidroksietil ili acetil.

Dalje posebno rešenje za jedinjenja predmetnog pronalaska uključuje ona jedinjenja sa formulom 1 u kojima Rl je vodonik ili metil, R2 je 1-hidroksietil ili acetil i R3 je fenilpropil.

I dalje posebno rešenje za jedinjenja predmetnog pronalaska uključuje ona jedinjenja sa formulom 1 u kojima R4 je difluorometoksi i R5 je metoksi ili u kojima R4 je metoksi i R5 je difluorometoksi.

U onim slučajevima, gde ni R2 ni R3 ne predstavljaju atom vodonika, jedinjenja sa formulom 1 su hiralna jedinjenja koja imaju hiralni centar na ugljenikovom atomu, za koji su vazani supstituenti R2 i R3. Jedinjenja sa formulom 1 mogu imati dodatni hiralni centar u onim slučajevima, gde R2 predstavlja 1-hidroksi-2-4C-alkil ili 1-(acetiloksi)-2-4C-alkil radikal. Pronalazak obuhvata sve shvatljive čiste diasereomere i čiste enantiomere i njhove smeše u bilo kom mešajućem odnosu, uključujući racemate.

Jedinjenja sa formulom 1 prema pronalasku se mogu, na primer, dobiti kao što je opisano u sledećim reakcionim šemama.

Reakciona šema 1 primerno pokazuje dobijanje jedinjenja sa formulom 1 u kojima Rl, R3, R4 i R5 imaju gore navedena značenja i R2 je 1-hidroksietil ili acetil.

Reakciona šema 1: U prvom reakcionom koraku 2-amino-2-cijanoacetamid reaguje (a) sa jedinjenjem formule 5 u kojem Rl ima gore navedeno značenje a zatim (b) sa jedinjenjem formule 4, u kojem R3 ima gore navedeno značenje. U drugom reakcionom koraku dobijeni derivat 5-amino-4-karboksamid-lH-imidazol formule 3 reaguje sa derivatom estra fenil-sirćetne kiseline formule 2, u kojem R4 i R5 imaju gore navedeno značenje i Rl je l-4C-alkil i daje jedinjenje sa formulom 1, u kojem Rl, R3, R4 i R5 imaju gore navedena značenja i R2 je 1-hidroksietil.

Jedinjenja sa formulom 1, u kojima Rl, R3, R4 i R5 imaju gore navedena značenja i R2 je 1-

hidroksietil, se mogu prevesti postupkom oksidacije u odgovarajuća jedinjenja u kojima R2

je acetil.

Poželjne metode za oksidaciju su osnovni protokoli DMSO-a kao stoje Swern ili Pfitzner-Moffat oksidacija. Drugi pogodni oksidansi su Dess-Martin reagens, Mn02, piridinijum hloro hromat (PCC) ili drugi Cr (VI) reagens, DDQ, H202, NaOCl ili NBS.

Reakciona šema 2 pokazuje dobijanje jedinjenja sa formulom 1 u kojima Rl, R3, R4 i R5 imaju gore navedena značenja i R2 je metil.

Reakciona šema 2: Ovde, u prvom reakcionom koraku 2-amino-2-cijanoacetamid reaguje (a) sa jedinjenjem formule 5 u kojem Rl ima gore navedeno značenje a zatim (b) sa jedinjenjem formule 7, u kojem R3 ima gore navedeno značenje. U drugom reakcionom koraku dobijeni derivat 5-amino-4-karboksamid-lH-imidazol formule 6 reaguje sa derivatom estra fenil-sirćetne kiseline formule 2, u kojem R4 i R5 imaju gore navedeno značenje i Rl je l-4C-alkil i daje jedinjenje formule 1, u kojem Rl, R3, R4 i R5 imaju gore navedena značenja i R2 je metil.

Reakciona šema 3 pokazuje dobijanje izvesnih jedinjenja sa formulom 4 i 7.

Dobijena jedinjenja sa formulom 1 se mogu prevesti, opciono, derivatizaciom u druga jedinjenja sa formulom 1.

Na primer, iz jedinjenja sa formulom 1, u kojima

a) R4 ili R5 je estarska grupa, odgovarajuće kiseline se mogu dobiti primenom kiselinske ili alkalne hidrolizom, ili odgovarajući amidi se mogu dobiti reakciom sa pogodnim supstituisanim

aminima; b) R4 ili R5 je l-4C-alkilkarboniloksi grupa, odgovarajuća hidroksil jedinjenja se mogu dobiti primenom kiselinske ili alkalne hidrolize; c) R4 ili R5 je nitro grupa, odgovarajuća amino jedinjenja - koja se za svoj deo mogu ponovo derivatizovati - mogu se dobiti primenom selektivne katalitičke hidrogenacije.

Pomenute metode pod a), b) i c) se celishodno vrše analogno postupcima koja su poznata stručnjaku u toj oblasti.

Jedinjenja sa formulom 1 se mogu prevesti, opciono, u njihove N-okside, na primer uz pomoć vodonik peroksida u metanolu ili uz pomoć m-hloroperoksibenzojeve kiseline u dihlormetanu. Stručnjak u toj oblasti je upoznat na osnovu njegovog/njenog ekspertnog znanja sa uslovima reakcije koja su neophodna za vršenje N-oksidacije.

Pogodno, prevođenje je vršeno analogno postupcima koja su sama po sebi poznata stručnjaku u toj oblasti, na primer, na način koji je opisan u sledećim primerima.

Jedinjenja sa formulom 2,4 i 7 su ili poznata ili se mogu dobiti na već poznat način. Pogodna jedinjenja sa formulom 5, koja se mogu pomenuti su trietil ortoformat, trietil ortoacetat, trietil ortobenzoat, trimetil ortobutirat, (2,2,2-trimetoksi-etil) benzen, (2,2,2-trimetoksi-propil) benzen i (2,2,2-trimetoksi-butil) benzen.

2-amino-2-cijanoacetamid se može dobiti polazeći od etil (hidroksiimino)cijanoacetata kao što je opisao F.I.Logemann i G.Shaw (Chem. Ind. 1980, 541-542).

Stručnjaku u toj oblasti je poznato da ako ima više reaktivnih centara u polaznom ili intermedijarnom jedinjenju moguće je da će biti neophodno da se privremeno blokiraju centri zaštitnim grupama u cilju da se dozvoli reakcija željenog reaktivnog centra. Detaljniji opis primene velikog broja dokazanih zaštitnih grupa je pronađeno, na primer, u T.W. Greene, Protective Groups in Organic Svnthesis, John Wiley & Sons, 1991.

Supstance prema pronalasku su izolovane i prečišćene na način koi je sam po sebi poznat, na primer, destilaciom rastvarača u vakuumu i rekristalizaciom ostatka koji je dobijen iz pogodnog rastvarača ili podvrgavane uobičajenim postupcima prečišćavanja, kao što je kolonska hromatografija na pogodnom podržavajućem materijalu.

Soli su dobijene pomoću rastvaranja slobodnih jedinjenja u odgovarajućem rastvaraču (kao što su na primer, ketoni, kao što su aceton, metil etil keton ili metil izobutil keton, etri, kao što su dietil etar, tetrahidrofuran ili dioksan, hlorovani ugljovodonici, kao što su metilen hlorid ili hloroform, ili alifatični alkoholi male molekulske težine, kao što su etanol ili izopropanol) koji sadrži željenu kiselinu, ili u koji se željena kiselina zatim dodaje. Soli su dobijene pomoću filtriranja, reprecipitacije, precipitacije sa fluidom u kome se ne rastvara dodata so ili pomoću uparavanja rastvarača. Dobijene soli se mogu prevesti u slobodna jedinjenja koja se zatim povratno mogu prevesti u soli, pomoću alkalizacije. Na taj način, farmaceutski neprihvatljive soli se mogu prevesti u farmakološki prihvatljive soli.

Sledeći primeri služe da ilustruju pronalazak u više detalja, bez ograničenja. Dalje, jedinjenja sa formulom 1, čije dobijanje nije eksplicitno opisano, se takođe mogu dobiti na analogan način ili na način koji je poznat stručnjaku u toj oblasti, korišćenjem uobičajenih tehnika dobijanja.

U primerima, h je oznaka za sat(e), min za minute, izr. za izračunato, MS za masenu spektrometriju i ST za sobnu temperaturu. Jedinjenja, pomenuta u primerima kao i njihove soli su poželjna jedinjenja pronalaska.

Primeri

Finalni proizvodi

1.2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzil)- 9-[ l- fl- hidroksietin- 4- fenilbutill- l, 9- dihidropurin- 6- on

Rastvor etil (4-difluorometoksi-3-metoksifenil)acetata (3.3 g, 12.6 mmola) i 5-amino-l-[l-(l-hidroksietil)-4-fenilbutil]-l//-imidazol-4-karboksamida (956 mg, 3.2 mmola) u zagrejanom etanolu (10 ml) je dodat rastvoru natrijuma (363 mg, 15.8 mmola) u etanolu (20 ml), a zatim je smeša zagrevana pod refluksom 16 h. Etanol je potom destilovan primenom rotirajućeg isparivača, ostatak je rastvoren u dihlormetanu (30 ml) i ispran vodom (20 ml) a većina dihlormetana je uklonjena primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (90 g silika gela, etil acetat/voda = 10/1), rekristalizacija iz etil acetata i sušenje pod sniženim pritiskom daje naslovno jedinjenje (0.99 g) u vidu obojenih kristala.

MS: izr.: C26H28F2N404(498.21), pronađeno: [MH<*>] 499.2

2. 9-( l- acetil- 4- fenilbutil)- 2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzin- l, 9- dihloropurin- 6- on

Na < 5°C, dodat je kompleks piridin/sumpor trioksid (700 mg, 4.4 mmola) rastvoru 2-(4-difluorometoksi-3-metoksibenzil)-9-[ 1 -(1 -hidroksietil)-4-fenilbutil]-l ,9-dihidropurin-6-ona (498 mg, 1.0 mmola) i trietilamina (1.39 ml, 10 mmola) u dihlormetanu (10 ml) i DMSO (3 ml), a zatim je smeša mešana 1 sat na < 5°C a potom na ST 15 h. Rastvoru je dodat 1N razvodnjen rastvor natrijum hidroksida (15 ml), organska faza je odvojena i vodena faza je ekstrahovana dva puta sa dihlormetanom (u oba slučaja 10 ml). Spojene organske faze su osušene preko magnezijum sulfata i rastvarač je uklonjen primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (50 g silika gela, etil acetat/voda = 10/1) i sušenje pod sniženim pritiskom daje naslovno jedinjenje (470 mg) u vidu obojene pene.

MS: izr.: C26H28F2N404(496.19), pronađeno: [MFf] 497.2

3.2-( 3- difluorometoksi- 4- metoksibenzil)- 9-[ l-( l- hidroksietil)- 4- fenilbutill- l, 9- dihidropurin- 6- on

Rastvor etil (3-difluorometoksi-4-metoksifenil)acetata (3.1 g, 12 mmola) i 5-amino-l-[l-(l-hidroksietil)-4-fenilbutil]-l//-imidazol-4-karboksamida (907 mg, 3 mmola) u zagrejanom etanolu (10 ml) je dodat rastvoru natrijuma (345 mg, 15 mmola) u etanolu (20 ml), a zatim je smeša zagrevana pod refluksom 16 h. Etanol je potom destilovan primenom rotirajućeg isparivača, ostatk je rastvoren u dihlormetanu (30 ml) i ispran vodom (20 ml) a većina dihlormetana je uklonjena primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (90 g silika gela, etil acetat/voda = 10/1), rekristalizacija iz etil acetata i sušenje pod sniženim pritiskom daje naslovno jedinjenje (1.06 g) u vidu obojenih kristala.

MS: izr.: C26H28F2N404(498.21), pronađeno: [MH<*>] 499.2

4.9-( l- acetil- 4- fenilbutil)- 2-( 3- difluorometoksi- 4- metoksibenzil)- l, 9- dihloropurin- 6- on

Na < 5°C, dodat je kompleks piridin/sumpor trioksida (700 mg, 4.4 mmola) rastvoru 2-(3-difluorometoksi-4-metoksibenzil)-9-[ 1 -(1 -hidroksietil)-4-fenilbutil]-1,9-dihidro-purin-6-ona (498 mg, 1.0 mmola) i trietilamina (1.39 ml, 10 mmola) u dihlormetanu (10 ml) i DMSO (3 ml), a zatim je smeša mešana 1 sat na < 5°C a potom na ST 15 h. Rastvoru je dodat 1N razvodnjen rastvor natrijum hidroksida (15 ml), organska faza je odvojena a vodena faza je ekstrahovana dva puta sa dihlormetanom (u oba slučaja 10 ml). Spojene organske faze su osušene preko magnezijum sulfata i rastvarač je uklonjen primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (50 g silika gela, etil acetat/voda = 10/1) i sušenje pod sniženim pritiskom daje naslovno jedinjenje (470 mg) u vidu obojene pene.

5.2-[ 2-( 4- dilfuorometoksi- 3- metoksibenzin- 6- okso- l, 6- dihidropurin- 9- iil- l- metil- 5- fenil-

pentii acetat

Rastvor etil (4-difluorometoksi-3-metoksifenil)acetata (3.1 g, 12 mmola) i 5-amino-l-[l-(l-hidroksietil)-4-fenilbutil]-lJrY-imidazol-4-karboksamida (907 mg, 3 mmola) u zagrejanom etanolu (10 ml) je dodat rastvoru natrijuma (345 mg, 15 mmola) u etanolu (20 ml), a zatim je smeša zagrevana pod refluksom 16 h. Rastvarač je uklonjen primenom rotirajućeg isparivača a ostatak je rastvoren u etil acetatu (40 ml). Rastvor je ispran vodom (20 ml) i osušen preko magnezijum sulfata, a rastvarač je uklonjen primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom i sušenje pod visokim vakuumom daje naslovno jedinjenje (210 mg) u vidu obojene smole. Dodatno, dobijen je 2-(4-difluorometoksi-3-metoksibenzil)-9-[l-(l-hidroksietil)-4-fenilbutil]-l,9-dihidropurin-6-on (990 mg).

MS: izr.: CasHsoFzN+Oj (540.22), pronađeno: [MH<+>] 541.1

6.2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzil)- 9-[ l-( l- hidroksietin- 4- fenilbutill- 8- metil- l, 9-

dihidropurin- 6- on

Na ST, 4.16 g (16.0 mmola) etil (4-difluorometoksi-3-metoksifenil)acetata i 1.29 g (4.1 mmola) 5-amino-l-[l-(l-hidroksietil)-4-fenilbutil]-2-metil-l//-imidazol-4-karboksamida u 5 ml zagrejanom etanolu su dodati rastvoru 0.47 g (20.4 mmola) natrijuma u 35 ml apsolutnog etanola, i smeša je zagrevana pod refluksom 18 h. Etanol je destilovan primenom rotirajućeg isparivača, 20 ml vode je dodato ostatku i smeša je potom ekstrahovana 4 puta, u svakom slučaju sa 50 ml etil acetata. Spojene organske faze su osušene preko magnezijum sulfata a potom je etil acetat uklonjen primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (200 g silika gela, etil acetat/voda = 10:1) daje naslovno jedinjenje (0.560 g) u vidu čvrstog belog kristala.

MS: izr.: C27H30N4O2F2(512.22), pronađeno: [MH<*>] 513.2

7.^( l- acetil-^ fenilbutiD^- f^ difluorometoksi- S- metoksibenziD- S- metil- l^- dihidropurin-6- on

7 ml apsolutnog dihlormetana i 0.89 ml (6.39 mmola) trietilamina je dodato 0.35 g (0.68 mmola) 2-(4-difluorometoksi-3-metoksibenzil)-9-[ 1 -(1 -hidroksietil)-4-fenilbutil]-8-metil-1,9-dihidropurin-6-onu i smeša je potom ohlađena na 0°C primenom ledenog kupatila. Dodato je 2.2 ml DMSO i 0.48 g (3.0 mmola) kompleksa piridin/sumpor trioksida, a potom je smeša, pod atmosferom azota,

mešana uz hlađenje ledom 1 h i još 15 h na ST. Rastvoru je dodato 20 ml vode, a potom je smeša ekstrahovana tri puta, u svakom slučaju sa 25 ml dihlormetanom. Organske faze su isprane sa vodom i potom osušene preko magnezijum sulfata i koncentrisane primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (35 g silika gela, etil acetat/voda = 10:1) daje naslovno jedinjenje (0.09 g) u vidu čvrstog belog kristala.

MS: izr.: C27H28N402F2(510.21), pronađeno: [MH<+>] 511.2

8.2-( 3- difluorometoksi- 4- metoksibenzil)- 9-| l-( l- hidroksietil)- 4- fenilbutill- 8- metil- l, 9-

dihidropurin- 6- on

Na ST, 2.98 g (11.5 mmola) etil (3-difluorometoksi-4-metoksifenil)acetata i 0.91 g (2.9 mmola) 5-amino-l-[l-(l-hidroksietil)-4-fenilbutil]-2-metil-l//-imidazol-4-karboksamida u 15 ml zagrejanom etanolu su dodati rastvoru 0.34 g (14.5 mmola) natrijuma u 15 ml apsolutnog etanola, i smeša je zagrevana pod refluksom 18 h. Etanol je destilovan primenom rotirajućeg isparivača, 20 ml vode je dodato ostatku i smeša je potom ekstrahovana 5 puta, u svakom slučaju sa 30 ml etil acetata. Spojene organske faze su osušene preko magnezijum sulfata a potom je etil acetat uklonjen primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (120 g silika gela, etil acetat/voda = 10:1) daje naslovno jedinjenje (0.29 g) u vidu neznatno žućkaste pene.

MS: izr.: C27H3oN402F2(512.22), pronađeno: [MH<*>] 513.2

9. 9-( l- acetil- 4- fenilbutil)- 2-( 3- dilfuorometoksi- 4- metoksibenzil)- 8- metil- l, 9- dihloropurin-6- on

0.20 g (0.39 mmola) 2-(3-difluorometoksi-4-metoksibenzil)-9-[l-(l-hidroksietil)-4-fenilbutil]-8-metil-l,9-dihidropurin-6-onaje rastvoreno u 4.3 ml dihlormetanu, 0.57 ml (4.1 mmola) trietilamina je dodato i smeša je potom ohlađena na 0°C upotrebom ledenog kupatila. Dodato je 1.3 ml DMSO i 0.30 g (1.9 mmola) kompleksa piridin/sumpor trioksida, a potom je smeša, pod atmosferom azota, mešana uz hlađenje ledom 1 h i još 15 h na ST. Rastvoru je dodato 20 ml vode, a potom je smeša ekstrahovana 3 puta u svakom slučaju sa 25 ml dihlormetanom. Organske faze su isprane sa vodom i potom osušene preko magnezijum sulfata i koncentrisane primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (25 g silika gela, etil acetat/voda = 10:1) daje naslovno jedinjenje (0.16 g) u vidu žutog ulja.

MS: izr.: C27H28N402F2(510.21), pronađeno: [MH<*>] 511.2

10. 2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzil)- 9-( 2- hidroksipropil)- l, 9- dihidropurin- 6- on

Na ST, 2.3 g (8.8 mmola) etil (4-difluorometoksi-3-metoksifenil)acetata i 0.46 g (2.5 mmola) 5-amino-l-(2-hidroksipropil) -l//-imidazol-4-karboksamida u 5 ml zagrejanom etanolu su dodati rastvoru 0.52 g (11.0 mmola) natrijuma u 20 ml apsolutnog etanola, i smeša je zagrevana pod refluksom 18 h. Etanol je destilovan primenom rotirajućeg isparivača, 20 ml vode je dodato ostatku i smeša je potom neutralizovana primenom 2N sirćetne kiseline. Istaloženi proizvod je filtriran usisavanjem i osušen dok težina ne postane konstantna. Ovo daje naslovno jedinjenje (0.60 g) u vidu čvrstog belog kristala.

MS: izr.: Ci7Hi8N402F2(380.13), pronađeno: [MH<4>] 381.3

11.2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzil)- 9-( 2- oksopropil')- l<9- dihidropurin- 6- on

0.20 g (0.5 mmola) 2-(4-difluorometoksi-3-metoksibenzil)-9-(2-hidroksipropil)-l,9-dihidropurin-6-ona je rastvoreno u 7 ml apsolutnog dihlormetana, 0.66 ml (4.8 mmola) trietilaminaje dodato i smeša je potom ohlađena na 0°C upotrebom ledenog kupatila. Dodato je 2.3 ml DMSO i 0.35 g (2.2 mmola) kompleksa piridin/sumpor trioksida, a potom je smeša, pod atmosferom azota, mešana uz hlađenje ledom 1 h i još 18 h na ST. Rastvoru je dodato 20 ml vode, a potom je smeša ekstrahovana tri puta sa 25 dihlormetanom. Tokom estrakcije, proizvod se taloži iz vodene faze. Ovo daje naslovno jedinjenje (0.12 g) u vidu čvrstog belog kristala.

MS: izr.: C17H16N402F2(378.11), pronađeno: [MH<4>] 379.3

12.2-( 3- difluorometoksi- 4- metoksibenzil)- 9-( 2- hidroksipropil)- l, 9- dihidropurin- 6- on

Na ST, 2.3 g (8.8 mmola) etil (3-difluorometoksi-4-metoksifenil)acetata i 0.46 g (2.5 mmola) 5-amino-l-(2-hidroksipropil)-l//-imidazol-4-karboksamida u 5 ml zagrejanom etanolu su dodati rastvoru 0.25 g (11 mmola) natrijuma u 15 ml apsolutnog etanola, i smeša je zagrevana pod refluksom 18 h. Etanol je destilovan primenom rotirajućeg isparivača, 20 ml vode je dodato ostatku i smeša je potom neutralizovana primenom 2N sirćetne kiseline. Istaloženi proizvod je filtriran usisavanjem, rekristalizovan iz etil acetata i osušen u sušnici na 40°C dok težina ne postane konstantna. Ovo daje naslovno jedinjenje (0.54 g) u vidu čvrstog belog kristala.

MS: izr.: C]7H18N402F2(380.13), pronađeno: [MH<4>] 381.2

13. 2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzin- 9-( 2- oksopropil)- l, 9- dihidropurin- 6- on

0.66 ml (4.8 mmola) trietilamina i 7 ml dihlormetana je dodato u 0.20 g (0.5 mmola) 2-(4-difluorometoksi-3-metoksibenzil)-9-(2-hidroksipropil)-l,9-dihidropurin-6-on, i smeša je potom ohlađena na 0°C upotrebom ledenog kupatila. Dodato je 2.3 ml DMSO i 0.35 g (2.2 mmola) kompleksa piridin/sumpor trioksida, a potom je smeša, pod atmosferom azota, mešana uz hlađenje ledom 1 h i još 15 h na ST. Narandžastom rastvoru je dodato 20 ml vode, koji je sada mutan. Tokom estrakcije sa dihlormetanom, proizvod se taloži. Filtracija usisavanjem i sušenje u sušnici daje naslovno jedinjenje (0.15 g) u vidu čvrstog belog kristala.

MS: izr.: Ci7H16N402F2(378.11), pronađeno: [Mrf] 379.2

14.2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzil)- 9-( 2- hidroksipropil)- 8- fenil- l, 9- dihidropuriii- 6-

on

Na ST, 3.7 g (14.4 mmola) etil (4-difluorometoksi-3-metoksifenil)acetata i 0.94 g (3.6 mmola) 5-amino-l-(2-hidroksipropil)-2-fenil-li/-imidazol-4-karboksamida u 5 ml zagrejanom etanolu su dodati rastvoru 0.42 g (18 mmola) natrijuma u 35 ml apsolutnog etanola, i smeša je zagrevana pod refluksom 18 h. Etanol je destilovan primenom rotirajućeg isparivača, 20 ml vode je dodato ostatku i smeša je potom neutralizovana primenom 2N sirćetne kiseline. Istaloženi proizvod je filtriran usisavanjem i osušen u sušnici dok težina ne postane konstantna. Ovo daje naslovno jedinjenje (0.560 g) u vidu čvrstog belog kristala.

MS: izr.: C23H22N402F2(456.16), pronađeno: [MF<f>] 457.3

15. 2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzil)- 9-( 2- oksopropin- 8- fenil- l, 9- dihidropurin- 6- on

7 ml apsolutnog dihlormetana i 0.73 ml (5.2 mmola) trietilamina je dodato u 0.25 g (0.55 mmola) 2-(4-difluorometoksi-3 -metoksibenzil)-9-(2-hidroksipropil)-8-fenil-1,9-dihidropurin-6-ona, i smeša je potom ohlađena na 0°C upotrebom ledenog kupatila. Dodato je 2.2 ml DMSO i 0.35 g (2.2 mmola) kompleksa piridin/sumpor trioksida, a potom je smeša , pod atmosferom azota, mešana uz hlađenje ledom 1 h i još 15 h na ST. Dodato je 20 ml vode, i smeša je ekstrahovana 3 puta, u svakom slučaju sa 25 ml dihlormetanom. Organske faze su isprane sa vodom a potom osušene preko magnezijum sulfata i koncentrisane primenom rotirajućeg isparivača. Ostatak je pretvoren u prah sa etil acetatom i osušen u sušnici dajući naslovno jedinjenje (0.20 g) u vidu čvrstog belog kristala.

MS: izr.: C23H2oN402F2(454.15), pronađeno: [MH<*>] 455.3

16. 2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzin- 9-( 2- hidroksipropil)- 8- fenetil- l, 9- dihidropurin-6- on

Rastvor etil (4-difluorometoksi-3-metoksifenil)acetata (2.34 g, 9 mmola) i 5-amino-l-(2-hidroksipropil)-2-fenetil-l#-imidazol-5-karboksamida (865 mg, 3 mmola) u zagrejanom etanolu (20 ml) je dodat rastvoru natrijuma (345 mg, 15 mmola) u etanolu (20 ml), a zatim je smeša zagrevana pod refluksom 16 h. Etanol je potom destilovan primenom rotirajućeg isparivača, ostatk je rastvoren u dihlormetanu (50 ml) i ispran vodom (20 ml) a većina dihlormetana je uklonjena primenom rotirajućeg isparivača. Amorfni ostatak je rekristalizovan iz 30% alkohola (60 ml). Sušenje daje naslovno jedinjenje u vidu obojenih kristala.

MS: izr.: C25H26F2N404(484.19), pronađeno: [MH<4>] 485.3

17. l- f^ difluorometoksi- S- metoksibenziD- g^- oksopropiD- S- fenetil- l. g- dihidropurin^- on

Na < 5°C, dodat je kompleks piridin/sumpor trioksid (700 mg, 4.4 mmola) rastvoru 2-(4-difluorometoksi-3-metoksibenzil)-9-(2-hidroksietil)-8-fenetil-l,9-dihidropurin-6-ona (498 mg, 1

mmola) u dihlormetanu (10 ml), trietilaminu (1.39 ml, 10 mmola) i DMSO (3 ml), a zatim je smeša mešana 1 sat na < 5°C a potom na ST 15 h. Veći deo dihlormetana je uklonjen iz reakcione smeše, a ostatak je pretvoren u prah sa vodom (20 ml), filtriran usisavanjem i dva puta ispran sa vodom (u svakom slučaju 10 ml). Amorfni prah je rekristalizovan iz 70 ml metanola. Filtracija usisavanjem i sušenje pod visokim vakumom daje naslovno jedinjenje (325 mg) u vidu obojenog praha.

MS: izr.: C^H^FjN^ (482.18), pronađeno: [MH<+>] 483.4

18.2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzin- 9-( 2- hidroksipropil)- 8-( 3- fenilpropil)- l, 9-

dihidropurin- 6- on

Rastvor etil (4-difluorometoksi-3-metoksifenil)acetata (1.30 g, 5.1 mmola) i 5-amino-l-(2-hidroksipropil)-3-fenpropil-li/-imidazol-5-karboksamida (865 mg, 3 mmola) u zagrejanom etanolu (20 ml) je dodat rastvoru natrijuma (345 mg, 15 mmola) u etanolu (20 ml), a zatim je smeša zagrevana pod refluksom 16 h. Etanol je potom destilovan primenom rotirajućeg isparivača, ostatak je rastvoren u dihlormetanu (50 ml) i ispran vodom (20 ml). Većina dihlormetana je uklonjena primenom rotirajućeg isparivača, koji daje neznatno kontaminirano naslovno jedinjenje u vidu svetio braon smole. Posle pretvaranja u prah sa vrućom vodom (30 ml) i sušenja u sušnici dobijeno je naslovno jedinjenje (452 g) u vidu belog praha.

MS: izr.: C26H28F2N404(498.21), pronađeno: [MH<*>] 499.4

19.2-( 4- difluorometoksi- 3- metoksibenzil)- 9-( 2- oksopropil)- 8-( 3- fenilpropil)- l, 9- dihidropurin- 6- on

Na < 5°C, dodat je kompleks piridin/sumpor trioksida (350 mg, 2.2 mmola) rastvoru 2-(4-difluoro-3-metoksibenzil)-9-(2-hidroksipropil)-8-fenilpropil-l,9-dihidropurin-6-ona (249 mg, 0.5 mmola) u dihlormetanu (10 ml), trietilaminu (0.69 ml, 5 mmola) i DMSO (1.5 ml), a zatim je smeša mešana 1 sat na < 5°C a potom na ST 96 h. Većina dihlormetana je uklonjena iz reakcione smeše, a ostatak je pretvoren u prah sa vrućom vodom (10 ml), filtriran usisavanjem i ispran 4 puta sa vodom (10 ml

svaki). Amorfni, obojeni prah je osušen pod visokim vakuumom, što daje naslovno jedinjenje (208 mg)-

MS: izr.: C^J^FjN^A (496.19), pronađeno [MH<4>] 497.4

20.2-( 4- difluorometoksi- 3- nitrobenzil)- 9-[ l-( l- hidroksietil)- 4- fenilbutill- l, 9- dihidropurin-6- on

Na ST, 9.6 g (34.8 mmola) etil (4-difluorometoksi-3-nitrofenil)acetata i 3.9 g (12.9 mmola) 5-amino-l-[l-(l-hidroksietil)-4-fenilbutil]-lH-imidazol-4-karboksamidaje dodato rastvoru 1.5 g (64.5 mmola) natrijuma u 140 ml etanola, a potom je smeša zagrevana pod refluksom 22 h. Etanol je destilovan primenom rotirajućeg isparivača. Ostatku je dodato 30 ml vode i smeša je neutralizovana sa 2N sirćetnom kiselinom. Potom je smeša ekstrahovana 3 puta, u svakom slučaju sa 200 ml etil acetata. Ekstrakti su isprani sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, spojene organske faze su osušene preko magnezijum sulfata a potom je etil acetat uklonjen primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (etil acetat/metanol/NHtOH = 10:1:0.5) daje naslovno jedinjenje kao malo kontaminirana, braon smola koja, posle pretvaranja u prah sa izopropanolom, je dobijena kao praktično beli, čvrsti kristali (0.8 g, 10%). Tačka topljenja: 195-196°C.

MS: C25H25F2N505(513.18), pronađeno [MH<4>] 514.3

21.9-( l- acetil- 4- fenilbutil)- 2-( 4- difluorometoksi- 3- nitrobenzin- l, 9- dihidropurin- 6- on

36 ml apsolutnog dihlormetana i 5.2 ml (37.0 mmola) trietilamina je dodato u 2.0 g (3.9 mmola) 2-(4-difluoro-3-nitrobenzil)-9-[l-(l-hidroksietil)-4-fenilbutil]l,9-dihidropurin-6-ona. Uz hlađenje ledom, dodato je 13 ml (151.1 mmola) DMSO i 2.6 g (16.3 mmola) komleksa piridin/sumpor tri oksida. Pod atmosferom azota, smeša je potom mešana 1 h na 0°C a zatim na ST još 15 h. Rastvoru je dodato 20ml vode, a zatim je napravljen baznim dodatkom 2N NaOH i potom ekstrahovan dva puta, u svakom slučaju sa 100 ml dihlormetanom. Organske faze su isprane sa vodom a potom osušene preko magnezijum sulfata i koncentrisane. Hromatografija sa silika gelom (etil acetat/metanol/N^OH = 10:1:0.5) daje naslovno jedinjenje (1.25 g, 63%) u vidu braon čvrste supstance. MS: C25H23F2N505(511.17), pronađeno [MH<4>] 512.4 22. 9-( l- acetil- 4- fenilbutil)- 2-( 3- amino- 4- difluorometoksibenzil)- l, 9- dihidroDurin- 6- on

1.25 g (2.4 mmola) 9-(l-acetil-4-fenilbutil)-2-(4-difluorometoksi-3-nitrobenzil)-l,9-dihidropurin-6-ona je rastvoreno u 20 ml metanola, dodato je 10 ml glacijalne sirćetne kiseline, 4 ml vode i 120 mg paladijuma na aktivnom ugljeniku (10%) a potom je smeša hidrogenovana na ST 18 h. Smeša je filtrirana usisavanjem kroz Celit a metanol je uparen. Ostatak je zatim apsorbovan u etil acetatu i ispran sa zasićenim rastvororm natrijum bikarbonata, osušen preko magnezijum sulfata i oslobođen rastvarača. Hromatografija sa silika gelom (etil acetat/metanol/NHjOH = 10:1:0.5) daje naslovno jedinjenje(0.25 g, 23%) u vidu bež čvrstog kristala. Tačka topljenja: 149-150°C

MS: C25H23F2N503(481.19), pronađeno [MH<4>] 482.3

Sinteze jedinjenja 23- 27:

Rastvor, u svakom slučaju, 0.06 g (0.12 mmola) 9-(l-acetil-4-fenilbutil)-2-(3-amino-4-difluoro-metoksibenzil)-l,9-dihidropurin-6-ona (22) u smeši 2 ml toluena i 1 ml piridinaje domešan sa 0.24 ml kiselim hloridom i mešan 3 h na 70°C. Rastvarač je uklonjen primenom rotirajućeg isparivača, u svakom slučaju ostatku je dodato 10 ml vode i smeša je zakiseljena primenom 2N hlorovodonične kiseline i ekstrahovan sa 3 x 10 ml dihlormetanom. Spojene organske faze su isprane sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i osušene preko magnezijum sulfata, a rastvarač je uklonjen. Ostatak je potom filtriran kroz silika gel. U nekim slučajevima, prečišćavanje je vršeno pripremljenim HPLC-om [gradijent: t0acetonitril/voda = 45:65, ti 5 acetonitril/voda = 50:50, t5 5 acetonitril/voda = 65:35]. Posle 12 h sušenja na temperaturi ispod 0°C, u svakom slučaju, dobijeni su beli liofilizatori (Tabela 1). 23. N-{ 5- r9- fl- acetil- 4- fenilbutin- 6- okso- 6, 9- dihidro- lH- purin- 2- ilmetill- 2- difluorometoksifenil}- 2-( 4- metoksifenil) acetamid 24. N-{ 5-[ 9-( l- acetil- 4- fenilbutil)- 6- okso- 6, 9- dihidro- lH- purin- 2- ilinetill- 2- difluoromet-oksifeniU-( 4- metoksikarboniQbenzamid 25. N-{ 5-[ 9-( l- acetil- 4- fenilbutil)- 6- okso- 6, 9- dihidro- lH- purin- 2- ilmetill- 2- difluorometoksifenil)-( 4- dipropilsulfamoil) benzamid 26. N-{ 5-[ 9-( l- acetil- 4- fenilbutil)- 6- okso- 6, 9- dihidro- lH- purin- 2- ilmetill- 2- difluorometoksifenil)- 3- hloro- 4- fluorobenzamid 27. N-( 5- r9-( l- acetil- 4- fenilbutil)- 6- okso- 6, 9- dihidro- lH- purin- 2- ilmetill- 2- difluorometoksifenil}- 3- fluoro- 4- metilbenzamid

28.2- f4- hloro- 3- fdifluorometoksi)- benzill- 9-[ l-( l- hidroksi- etil)- 4- fenil- butill- l, 9-

dihidropurin- 6- on

Rastvor etil (3-difluorometoksi-4-hlorofenil)acetata (1.32 g, 5 mmola) i 5-amino-l-[l-(l-hidroksietil)-4-fenilbutil]-l//-imidazol-4-karboksamida (605 mg, 2 mmola) u zagrejanom etanolu (10 ml) je dodat rastvoru (345 mg, 15 mmola) natrijuma u etanolu (10 ml), i smeša je zagrevana pod refluksom 24 h. Etanol je destilisan primenom rotirajućeg isparivača, ostatak je rastvoren u zasićenom rastvoru bikarbonata (30 ml), vode (30 ml) i etilacetat (30 ml). Faze su odvojene i vodeni sloj je ekstrahovan dva puta sa etilacetatom (30 ml svaki). Spojene organske faze su osušene preko magnezijum sulfata a rastvarač je uklonjen. Hromatografija sa silika gelom (90 g silika gela, etil acetat/voda = 10/1), kristalizacija iz dietiletra i sušenje pod sniženim pritiskom daje naslovno jedinjenje(587 mg) kao obojene kristale.

MS: C25H25F2N4O3(502.18), pronađeno [MH<4>] 503.2

29.9-( l- acetil- 4- fenil- butiI)- 2-[ 4- hloro- 3-( dilfuorometoksi)- benzill- l<9- dihidropurin- 6- on

Na < 5°C, kompleks piridin/sumpor trioksida (350 mg, 2.2 mmola) je dodat rastvoru 2-[4-hloro-3-(difluorometoksi)-benzil]-9-[l-(l-hidroksi-etil)-4-fenil-butil]-l,9-dihidropurin-6-ona (251 mg, 0.5 mmola) u dihlormetanu (10 ml), trietilaminu (1.39 ml, 10 mmola) i DMSO (2 ml), a zatim je smeša mešana na < 5°C 1 h a potom na ST 15 h. Reakciona smeša je rashlađena sa vodom (20 ml), faze su odvojene i vodeni sloj je ekstrahovan dva puta sa dihlormetanom (20 ml avaki). Spojene organski slojevi su osušeni preko magnezijum disulfata. Posle uparavanja rastvarača, hromatografiom sa silika gelom (50 g silika gela, etil acetat/metanol = 10/1) i sušenjem pod visokim vakumom dobijeno je naslovno jedinjenje (180 mg) kao obojena smola.

MS: izr.: C25H23F2N4O3(500.14), pronađeno [MH<4>] 501.3

Krajnja hemijska jedinjenja

Al.5- amino- l- H-( l- hidroksietil)- 4- feniIbutill- lg- imidazol- 4- karboksamida

2-amino-2-cijanoacetamid (2.65 g, 26.7 mmola) je istovremeno uparen dva puta sa toluenom (u svakom slučaju 20 ml) a potom suspendovan u apsolutni acetonitril. Trietil ortoformat (5.0 ml, 30 mmola) je dodat i reakciona smeša je zagrevana 1 h pod refluksom. Dodat je 3-amino-6-fenilheksan-2-ol (7.7 g 40 mmola) u acetonitrilu (20 ml) i zagrevanje pod refluksom je nastavljeno još 15 min. Posle hlađenja, acetonitril je destilisan primeno rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (200 g, etil acetat/metanol = 10:1), rekristalizacija iz etilacetata (60 ml) i sušenje pod sniženim pritiskom daje naslovno jedinjenje u vidu obojenih kristala (4.95 g). Tačka topljenja: 132 °C

MS: izr.: Ci6H22N402(302.17), pronađeno [MH<4>] 303.2

A2.5- aniino- l-| l-( l- hidroksietil)- 4- fenilbutill- 2- nietil- l//- imidazol- 4- karboksamida

Suspenzija 1.49 g 2-amino-2-cijanoacetamida (15.0 mmola) u 50 ml apsolutnog acetonitrila je zagrevana sa 2.92 ml trietil ortoacetatom (16.0 mmola) 1 h pod refluksom. Dodato je 2.9 g 3-amino-6-fenilheksan-2-ola (15.0 mmola) u 15 ml apsolutnog acetonitrila, a potom je smeša zagrevana pod refluksom još 15 min. Posle hlađenja, acetonitril je destilovan primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (200 g, etil acetat/metanol = 10:1) daje naslovno jedinjenje (1.27 g) u vidu svetio žute čvrste supstance.

MS: izr.: C17H24N402(316.19), pronađeno [MH<+>] 317.1

A3.3- amino- 6- feniIheksan- 2- ol

Rastvor 3-fenilpropilmagnezijumbromid je dobijen iz 3-fenilpropana (35.6 g, 179 mmola) i magnezij uma (4.7 g, 195 mmola) u etru (100 ml). Ovom rastvoru je u kapima dodat 2-trimetilsililoksipropionitril (23.3 g, 162 mmola) u etru (100 ml) i smeša je refluksovana 1 h. Posle hlađenja do ST u kapima je dodat rastvor natrijum boranata (6.8 g, 179 mmola) u etanolu (200 ml) a potom je smeša refluksovana 3 h i naknadno mešana 16 h na ST. U kapima je dodata voda (50 ml), praćeno dodavanjem 4-molarne hlorovodonične kiseline (50 ml). Faze su odvojene i organski sloj je ekstrahovan sa 2-molarnom hlorovodoničnom kiselinom (100 ml). Posle tretiranja sa rastvorom natrijum hidroksida (20%) i čvrstog natrijum karbonata, smeša je ekstrahovana 4 puta sa hloroformom (u svakom slučaju 100 ml), osušen preko natrijum karbonata, filtriran a rastvarač je uparen u vakuumu kako bi se dobio sirovi proizvod (13.8 g), koji se upotrebljava bez prečišćavanja za sledeći korak.

MS: izr.: Ci2H19NO (193.15), pronađeno [MH<4>] 194.2

A4.5- amino- l-( 2- hidroksipropil)- l//- imidazol- 4- karboksamid

Suspenzija 2.48 g 2-amino-2-cijanoacetamida (25.0 mmola) u 90 ml apsolutnog acetonitrila je zagrevano sa 3.71 g trietil ortoformata (25.0 mmola) 1 h pod refluksom. Dodato je 1.88 g 1-amino-2-propanola (25.0 mmola) u 20 ml apsolutnog acetonitrila, a potom je smeša zagrevana pod refluksom još 15 min. Posle hlađenja, acetonitril je destilovan primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (150 g, etil acetat/metanol =10:1) daje naslovno jedinjenje (2.5 g) u vidu čvrstog belog kristala.

MS: izr.: C7H12N402(184.10), pronađeno [MH<4>] 185.1

A5.5- amino- l-( 2- hidroksipropil)- 2- fenil- lg- imidazol- 4- karboksamid

Suspenzija 2.48 g 2-amino-2-cijanoacetamida (25.0 mmola) u 90 ml apsolutnog acetonitrila je zagrevano sa 5.6 g trietil ortobenzoata (25.0 mmola) 1 h pod refluksom. Dodato je 1.88 g 1-amino-2-propanola (25.0 mmola) u 20 ml apsolutnog acetonitrila, a potom je smeša zagrevana pod refluksom još 15 min. Posle hlađenja, acetonitril je destilovan primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (220 g, etil acetat/metanol = 10:1) daje naslovno jedinjenje (1.42 g) u vidu tamno crveno/smeđe pene.

MS: izr.: Ci3H16N402(260.13), pronađeno [MH<4>] 261.1

A6.5- amino- l-[ l-( 2- hidroksipropin- 2- fenetill- lJH- imidazol- 4- karboksamid

Suspenzija 2-amino-2-cijanoacetamida (2.97 g, 30 mmola) u acetonitrilu (60 ml) je zagrevana sa (3,3,3-trietoksi-propil)-benzenom (7.6 g, 30 mmola) 1 h pod refluksom. Potom je dodat aminopropan-2-ol (2.5 ml, 31.5 mmola), a potom je smeša zagrevana pod refluksom još 15 min. Acetonitril je destilovan primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (200 g, etil acetat/metanol = 10/1), rekristalizacija iz etil acetata (130 ml) i sušenje pod sniženim pritiskom daje naslovno jedinjenje (3.7 g) u vidu obojenih kristala.

MS: izr.: Ci5H2oN402(288.16), pronađeno [MH<4>] 289.1

A7.5- amino- l-( 2- hidroksipropin- 2-( 3- fenilpropil)- l- g- imidazol- 4- karboksamid

Suspenzija 2-amino-2-cijanoacetamida (2.97 g, 30 mmola) u acetonitrilu (100 ml) je zagrevana sa (4,4,4-trietoksi-butil)-benzenom (9.3 g, 35 mmola) 1 h pod refluksom. Potom je dodat aminopropan-2-ol (2.5 ml, 31.5 mmola), a potom je smeša zagrevana pod refluksom još 15 min. Acetonitril je destilovan primenom rotirajućeg isparivača. Hromatografija sa silika gelom (200 g, etil acetat/metanol = 10/1), rekristalizacija iz etil acetata (60 ml) i sušenje pod sniženim pritiskom daje naslovno jedinjenje (4.44 g) u vidu obojenih kristala.

MS: izr.: C16H22N402(302.17), pronađeno [Mr<T>] 303.1

A8.Etil ( 3- difliiorometoksi- 4- metoksifenil) acetat

Koncentrovana sumporne kiselina (1 ml) je dodata rastvoru (3-difluorometoksi-4-metoksifenil) sirćetne kiseline (14.2 g, 61 mmola) u etanolu (140 ml), a potom je smeša zagrevana pod refluksom 3 h. Rastvarač je uklonjen primenom rotirajućeg isparivača, a ostatak je rastvoren u etil acetatu (200 ml). Rastvor je ispran sa vodom (50 ml), zasićen rastvorom natrijum bikarbonata (50 ml) i zasićen sa rastvorom natrijum hlorida (50 ml). Rastvor je osušen preko magnezijum sulfata, etil acetat je uklonjen a ostatak je potom destilovan pod visokim vakuumom (b.p.0.07115-119°C). Ovo daje naslovno jedinjenje (15.0 g) u vidu obojenog ulja.

MS: izr.: C12Hi4F204(260.09), pronađeno [MH<1>"] 260

A9.Etil ( 4- difluoromctoksi- 3- mctoksifcnil) acctat

Koncentrovana sumporne kiselina (1 ml) je dodata rastvoru (4-difluorometoksi-3-metoksifenil) sirćetne kiseline (11.6 g, 50 mmola) u etanolu (50 ml), a potom je smeša zagrevana pod refluksom 3 h. Rastvarač je uklonjen primenom rotirajućeg isparivača, a ostatak je rastvoren u etil acetatu (200 ml). Rastvor je ispran sa vodom (50 ml), zasićen rastvorom natrijum bikarbonata (50 ml) i zasićen sa rastvorom natrijum hlorida (50 ml). Rastvor je osušen preko magnezijum sulfata, etil acetat je uklonjen a ostatak je potom destilovan pod visokim vakuumom (b.p.0.o5100-109°C). Ovo daje naslovno jedinjenje (9.7 g) u vidu obojenog ulja.

MS: izr.: C12H14F2O4(260.09), pronađeno [MrT] 261

A10.( 3- difluorometoksi- 4- metoksifenil) sirćetna kiselina

Sa snažnim mešanjem, gasoviti hlorodifluorometan je dodat na 65°C rastvoru homoizovanilinske kiseline (17.5 g, 96 mmola) i natrijum hidroksida (54 g, 960 mmola) u vodi (108 ml) i diksana (500 ml). Posle 1 h, rastvoru je u kapima dodat narijum hidroksid (393 g, 7 mmola) u vodi (590 ml) u toku prioda od 5 h, koji nastavlja da se tretira gasom. Mešanje je nastavljeno još 1 h, a potom je smeša ohlađena. Rastvor je zakiseljen sa limunskom kiselinom (oko 500 g) a potom ekstrahovan tri puta sa etil acetatom (u svakom slučaju 300 ml). Spojene organske faze su isprane dva puta sa vodom (u svakom slučaju 200 ml), a potom sa zasićenim rastvorom natrijum hlorida (200 ml). Smeša je ponovo ekstahovana dva puta sa razbalženim rastvorom amonijaka (u svakom slučaju 250 ml; oko 10 %), i faza amonijaka je uparena do suvog ostatka primenom rotirajućeg isparivača. Ostatak je rastvoren u vodi (150 ml), podešen na pH oko 9 primenom rastvora amonijaka, filtriran i zakiseljen primenom limunske kiseline (oko 30 g), i karboksilna kiselina je iskristalisana koja je praćena pelcovanjem. Sušenjem se dobija naslovno jedinjenje (9.3 g) u vidu obojenih kristala.

MS: izr.: Ci0H,oF204(232.05), pronađeno [MrT] 232

Ali.( 4- difluorometoksi- 3- metoksifenil) sirćetna kiselina

Sa snažnim mešanjem, gasoviti hlorodifluorometan je dodat na 65°C rastvoru homoizovanilinske kiseline (0.91 g, 5 mmola) i natrijum hidroksida (2.8 g, 50 mmola) u vodi (5.6 ml) i diksana (10 ml). Posle 1 h, rastvoru je u kapima dodat narijum hidroksid (28 g, 500 mmola) u vodi (56 ml) u toku prioda od 5 h, koji nastavlja da se tretira gasom. Mešanje je nastavljeno još 1 h, a potom je ohlađen. Rastvor je zakiseljen sa limunskom kiselinom (oko 25 g) a potom ekstrahovan tri puta sa etil acetatom (u svakom slučaju 20 ml). Spojene organske faze su isprane dva puta sa vodom (u svakom slučaju 20 ml), a potom sa zasićenim rastvorom natrijum hlorida (20 ml), i osušen preko magnezijum sulfata, a rastvarač je uklonjen primenom rotirajućeg isparivača. Amorfni ostatak je rekristalisan iz toluena (15 ml), rezultujući u regeneraciji homovanilinske kiseline (0.28 g). Matični rastvor je koncentrisan primenom rotirajućeg isparivača a amorfni ostatak je rekristalisan iz vode (30 ml), filtriran usisavanjem i isparan sa vodom (10 ml). Sušenjem se dobija naslovno jedinjenje (0.384 g) u vidu obojenih kristala.

MS: izr.: C^H^C^ (232.05), pronađeno [Mr<T>] 232

A12.Etil ( 4- difluorometoksi- 3- nitrofenil) acetat

1.6 ml koncentrovane sumporne kiseline je dodata rastvoru 6.0 g (24.3 mmola) (3-difluorometoksi-4-nitrofenil)sirćetne kiseline u 45 ml etanola, a potom je smeša zagrevana pod refluksom 3.5 h. Rastvarač je uklonjen primenom rotirajućeg isparivača, a ostatak je apsorbovan u 150 ml etil acetata. Smeša je isprana sa 50 ml rastvorom zasićenog natrijum bikarbonata. Organska faza je osušena preko magnezijum sulfata a etil acetat je uklonjen, dajući naslovno jedinjenje (6.3 g, 94%) u vidu tamno-braon ulja.

MS: izr.: CnH^CU (275.06), pronađeno [ME<f>] 275.1

A13. ( 4- difluorometoksi- 3- nitrofenil) sirćetna kiselina

19.1 g (100 mmola) (4-difluorometoksi-3-nitrofenil)sirćetne kiseline i 28 g (500 ml) natrijum hidroksida je rastvoreno u 60 ml vode i 800 ml dioksana. Mešanjem na 50°C, Frigen 22 (CHC1F2) je uvođen sat vremena. Zatim, tokom 8 h, 560 g (10.0 mmola) natrijum hidroksida u 1.2 1 vode je dodat u kapima, takođe na 50°C, i smeša je mešana narednih 6 h u toku kojih je uvođen gas. Posle hlađenja, faze su odvojene. Organska faza je koncentrisana, ostatak je rastvoren u rastvoru od 2.0 g (36.0 mmola) natrijum hidroksida u 150 ml vode, aktivni ugalj je dodat i rastvor je filtriran.

Rastvoru je potom podešena pH = 2.5 primenom limunske kiseline (99% jačine) a potom zagrevan na 60°C. Istaložena supstanca je filtrirana usisavanjem i isprana vodom. Vodena faza je zakiseljena sa limunskom kiselinom (99% jačine) a potom ekstarahovana 3 puta, u svakom slučaju sa 300 ml etil acetata. Spojene organske faze su isprane vodom, osušene preko magnezijum sulfata i koncentrisane. Proizvod koji sadrži dobijene frakcije posle kolonske hromatografije (etol acetat/metanol/NFLtOH = 6:3:1) je oslobođen od rastvarača, ostatak je rastvoren u vodi i zakiseljen sa limunskom kiselinom (99% jačine) i istaloženi proizvod je filtriran usisavanjem. Sušenjem dve frakcije dobija se naslovno jedinjenje (14.9 g, 60%) u vidu svetlo-smeđe čvrste supstance.

MS: izr.: C9H7F2N05(247.16), pronađeno [MF<f>] 245.9

A14.Etil ( 4- hIoro- 3- difluorometoksifenil) acetat

Koncentrovana sumporna kiselina (1 ml) je dodata rastvoru (4-hloro-3-difluorometoksifenil) sirćetne kiseline (13.84 g, 58.5 mmola) u etanolu (70 ml), a potom je smeša zagrevana pod refluksom 4 h. Rastvarač je uklonjen primenom rotirajućeg isparivača, a ostatak je rastvoren u etil acetatu (100 ml). Rastvor je ispran sa vodom (50 ml), zasićen rastvorom natrijum bikarbonata (50 ml) i zasićen sa rastvorom natrijum hlorida (50 ml). Rastvor je osušen. Rastvor je osušen preko magnezijum sulfata a etil acetat je uklonjen, dajući naslovno jedinjenje (14.2 g) u vidu obojenog ulja.

MS: izr.: CnH„ClF203(264.04), pronađeno [Mr<T>] 264.1

A15.( 4- hloro- 3- difluorometoksifenil) sirćetna kiselina

Sa snažnim mešanjem, Frigin 22 (CHC1F2) je uvođen na 50°C u rastvor (3-fluoro-4-hidroksifenil) sirćetne kiseline (18.7 g, 100 mmola) i natrijum hidroksida (28 g, 500 mmola) u vodi (56 ml) i diksana (800 ml) u toku perioda od 1 h. Zatim, u kapima je dodat narijum hidroksid (560 g, 10 mmola) uvodi (1.12 1) u toku prioda od 7 h, a mešanje je nastavljeno još 6 h uz uvođenje gasa. Posle dodatnog 1 h mešeanja, smeša je ohlađena i faze su odvojene. Organska faza je koncentrisana, ostatak je rastvoren u vodi (150 ml), očišćen sa Tonsilom i zakiseljen sa sirćetnom kiselinom. Istaložena supstanca je filtrirana usisavanjem a zatim osušena dajući naslovno jedinjenje (7.9 g) u vidu obojenih kristala. Vodena faza je zakiseljena sa limunskom kiselinom (ca 500 g) i ekstrahovana dva puta sa etilacetatom (400 ml). Spojene organske faze su isprane sa vodom i uparene. Ostatak je rekristalisan dva puta iz vode (150 ml svaki). Sušenjem se dobija druga grupa naslovnog jedinjenja (6.0 g) u vidu obojenih kristala-

MS: izr.: C9H7C1F203(236.00), pronađeno [M<+>] 236

Komerciionalna primenjivost

Jedinjenja prema pronalasku imaju vredne farmakološke osobine koje ih čine industrijski iskoristljivim. Kao selektivni inhibitori cikličnih nukleotidnih fosfodiesteraza (PDE) (posebno tip 2), sajedne strane, su pogodna kao terapeutici za stanja patološki povećane endotelijalne aktivnosti i oštećene barijerne funkcije endotelije kao što je septički šok, vaskularni edem, ili obolenja udružena sa neželjenom neoangiogenezom. S druge strane, davajući izraz PDE2 u neuronom tkivu jedinjenja mogu biti korisna u neurodegenerativnim stanjima. U dodatku, PDE2 je izražen u ljudskim pločicama i pokazano je da PDE2 inhibitori ugušuju funkciju pločica. Značajno, jedinjenja se mogu primeniti kao anti-trombocitni/pločasti skupljajući inhibitori. Dalje, od kad je PDE2 pokazan u miokardiomu, jedinjenja mogu da pruže potencijalnu zaštitu protiv aritmija.

Na račun svojstava inhibicije PDE, jedinjenja prema pronalasku se mogu upotrebiti kao terapeutici u humanoj i u veterinarskoj medicini, gde se mogu upotrebiti, na primer, za lečenje i profilaksu sledećih obolenja: (1) svih stanja patoloških povećanja endotelijalne aktivnosti/oštećenja barijerne funkcije endotelije kao što je više organski prekid, posebno akutni respiratorni distres sindrom (ARDS) u septičkom šoku, pneumonija, akutno i hronično obolenje disajnih puteva različitog porekla (rinitis, bronhitis, bronhijalna astma, emfizem, COPD), angloedem, periferni edem, cerebralni edem na primer traumatski ili prateći udar; (2) svih stanja koja su udružena sa neželjenom neoangiogenezom kao što su svi tipovi tumora (benigni ili maligni) koji su udruženi sa neoangiogenezom i svi tipovi inflamatornih obolenja koja su udružena sa sa neoangiogenezom na primer poremećaji artritičnog tipa (reumatoidni artritis, reumatoidni spondilitis, osteoartritis i druga artritična stanja), svi oblici psorijaze, retinalno slepilo, bronhijalna astma, inflamatorna crevna obolenja, reakcije transplatacije, reakcije alografta, ateroskleroze; (3) svih stanja za koje je poželjna pločasta inhibitorna agregacija u vezi sa povećanom redukcionom aktivnosti kao što je tromboembolično obolenje i ishemija praćena miokardialnim infarktom, celebrani infarkt, prelazni i ishemijski napadi, angina pektoris, periferalno cirkularno obolenje, prevencija od restenoze posle lečenja trombolize, perkutaneozna transluminarna angioplastija (PTA), perkutaneozna transluminarna koronarna angioplastija (PTCA) i bajpas; (4) svih tipova spoznajnih oštećenja, posebno kongitivnih obolenja kao što su blago kongitivno obolenje (MCI), Alchajmerova bolest, Lewy-Body demencija, Parkinsonova bolest i celebrovaskularna demencija; i (5) u kardijalnim aritmijama.

Pronalazak se dalje odnosi na postupak lečenja sisara, uključujući ljude, koji pate od jedne od gore navedene bolesti. Postupak je okarakterisan time, što se terapeutski aktivna i farmakološki efikasna i podnošljiva količina jednog ili više jedinjenja prema pronalasku primenjuje na bolesne sisare. Pronalazak se dalje odnosi na jedinjenja prema pronalasku za primenu u lečenju i/ili profilaksi obolelenja, posebno onih bolesti koja su pomenuta.

Pronalazak se takođe odnosi na korišćenje jedinjenja prema pronalasku za proizvodnju farmaceutskih kompozicija koja su primenjena za lečenje i/ili profilaksu oboljenja koja su pomenuta.

Pronalazak se dalje odnosi na farmaceutske kompozicije za lečenje i/ili profilaksu pomenutih obolenja i koje sadrže jedno ili više jedinjenja prema pronalasku.

Dodatno, pronalazak se odnosi na predmet proizvodnje, koji obuhvata pakovani materijala i farmaceutski agens sadržan unutar navedenog pakovanog materijala, u kome je farmaceutski agens terapeutsi efikasan za antagonizovanje efekta ciklične nukleotidne fosfodiesteraze tipa 2 (PDE2), poboljšavanje simptoma obolenja PDE2-mediuma, i u kome pakovani materijal sadrži etiketu ili informacioni listić koji ukazuje daje farmakološki agens koristan za prevenciju ili lečenje obolenja PDE2-mediuma, u kome navedeni farmaceutski agens prema pronalasku obuhvata jedno ili više jedinjenja. Pakovani materijal, etiketa i informacioni listič inače paraleno ili slično, što se uopšteno smatra kao standardni pakovani materijal, etiketa i informacioni listić imaju srodne koristi.

Primena farmaceutskih kompozicija prema pronalasku se može vršiti na bilo koji opšte prihvatljiv način uzimanja koji je dostupan u praksi. Ilustrativni primeri koji prikazuju pogodne načine uzimanja, uključuju intravenozno, oralno, nazalno, parenteralno, topikalno, transdermalno i rektalno davanje. Poželjno je oralno i intravenozno uzimanje.

Farmaceutske kompozicije su dobijene pomoću postupaka koji su po sebi poznate stručnjaku u toj oblasti. Kao farmaceutske kompozicije, jedinjenja prema pronalasku (= aktivna jedinjenja) su bilo primenjena kao takva, ili poželjno u kombinaciji sa pogodnim farmaceutskim pomoćnim sredstvima i/ili ekscipijentima, na primer, u obliku tableta, obloženih tableta, kapsula, kapleta, supozitorija, flastera (kao na primer, TTS), emulzija, suspenzija, gelova ili rastvora, povoljno je da se aktivno jedinjenje sadrži između 0.1 i 95 % i gde, sa odgovarajućim izborom pomoćnih sredstava i/ili ekscipijenata, farmaceutski oblik za primenu (na primer oblik sa zadržanim otpuštanjem ili ulazni oblik) je tačno određen za aktivno jedinjenje i/ili sa željenim odlaganjem početka delovanja koje se može postići.

Stručnjak u toj oblasti je upoznata sa pomoćnim sredstvima ili ekscipijentima koji su pogodni za željene farmaceutske formulacije na račun njegovog/njenog ekspertskog znanja. Pored dodavanja rastvarača, sredstava za formiranje gelova, uljnih osnova i drugih ekscipijentih aktivnih jedinjenja, na primer antioksidansi, disperzanti, emulgatori, konzervansi, razblaživači, obojivači, agensi za kompleksiranje ili promoteri prodiranja, mogu biti upotrebljeni.

Za lečenje obolenja respiratornog trakta, jedinjenja prema pronasku se poželjno, takođe, primenjuju preko inhalacije u obliku aerosola; čestice aerosola, koje mogu biti čvrste, tečne ili mešana kompozicija, poželjno imaju prečnik od 0.5 do 10 pm, prednost imaju od 2 do 6 pm.

Generisanje aerosola može biti izvedeno, na primer, preko raspršivača sa mlaznicom pomoću gasa pod pritiskom ili ultrasoničnih raspršivača, ali prednost ima, pomoću propelantno dobijenog merenog aerosola ili bez propelantna primena mikronizovanih aktivnih jedinjenja iz inhalacionih kapsula.

U zavisnosti od toga koji se inhalacioni sistem koristi, pored dodatka aktivnih jedinjenja, oblici primene koji se koriste dodatno sadrže odgovarajuće ekscipijent, kao što su, na primer, propelanti (na primer, Frigen u slučaju merenog aerosola), površinski aktivna jedinjenja, emulgatori, stabilizatori, konzervansi, davaoci ukusa, punioci (na primer, laktoza u slučaju praškastih inhalatora) ili, ukoliko je podesno, druga aktivna jedinjenja.

Za primenu inhalacije, postoji veliki broj raspoloživih uređaja pomoću kojih se aerosoli optimalne veličine čestica mogu generisati i primeniti, korišćenjem neke inhalacione tehnike koja je što je moguće pogodnija za pacijente. Pored upotrebe punjača (proređivača, raspršivača) i kontejnera kruškastih oblika (na primer, Nebulator®, Volumatic®) i automatskih pokretača koji ispuštaju puferni sprej (Autohaler®), za merene aerosole, posebno za slučaj praškastih inhalatora, brojne tehničke mogućnosti su dostupne (na primer, Diskhaler®, Rotadisk®, Turbohaler® ili inhalator koji je opisan u Evropskoj patentnoj prijavi EP 0 505 321), čijom upotrebom se može postići optimalno uzimanje aktivnog jedinjenja.

Za lečenje obolenja kože, jedinjenja prema ovom pronalasku se posebno koriste u obliku takvih farmaceutskih kompozicija koje su pogodne za topikalnu primenu. Za proizvodnju farmaceutskih kompozicija, jedinjenja prema ovom pronalasku (= aktivna jedinjenja) poželjno je da su izmešana sa pogodnim farmaceutskim pomoćnim sredstvom a dalje da se proces vodi tako da se dobiju odgovarajuće farmaceutske formulacije. Pogodne farmaceutske formulacije su, na primer, puderi, emulzije, suspenzije, sprejevi, ulja, masti, čvrste masti, kreme, paste, gelovi ili rastvori.

Farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku se proizvode pomoću postupaka poznatih po sebi. Doze aktivnih jedinjenja se određuju u cilju postizanja uobičajene količine za inhibitore PDE. Tako, oblici za topikalnu primenu (kao što su, na primer, masti) za lečenje dermatoza, sadrže aktivna jedinjenja u koncentraciji od, na primer, 0.1 - 99 %. Uobičajena doza za upotrebu putem inhalacije je između 0.1 i 3 mg na dan. Uobičajena doza u slučaju sistemske terapije (p.o ili i.v) je između 0.03 i 3 mg po kilogramu na dan.

Biološko ispitivanje

Metod za merenje inhibitorne aktivnosti PDE- a

Skraćenice:

PDE: fosfodiesteraza, PCR: polimerna lančana reakcija, RT-PCR: reverzna transkripcija-polimerne lančane reakcije, dNTPs: dezoksinukleozidne trifosfataze, RNK: ribonukleinska kiselina, cDNK: komplemetarna dezoksiribonukleinska kiselina, bp: par baza, (dT)15: pentadekatimidilna kiselina, ORF: otvoreni čitajući okvir, GB br.: broj pristupa bazi podataka Banke Gena, rBV: rekombinantni bakulovirus, wt: širok tip, ak: amino kiselina, UCR: gornja konzervisana regija (upstream conserved region), PAA: poliakrilamid.

Aminokiseline imaju skraćenicu sa 1 karakterističnom oznakom: A za amin, C za cistein, D za asparaginsku kiselinu, E za glutaminsku kiselinu, F za fenilalanil, G za glicin, H za histidin, I za izoleucin, K za lizin, L za leucin, M za metionin, N za asparagin, P za prolin, Q za glutamin, R za arginin, S za serin, T za treonin, V za valin, W za triptofan, Y za tirozin.

Opšte metode za kloniranje rekombinantnih PDE- a

RNK je prečišćena iz ćelijskih linija primenom Rneasv Mini Kita iz Qiagen. 1 ug RNK je reverzno prepisan u jednostruku cDNK u 20 ul reakcije primenom Proširene Reverzne Transkriptaze (Roche) sa 50 pM primarne (dT)i5i 1 mM dNTPs (oba iz Roche). 5 ul cDNK su korišćene kao šablon za sledeću PCR reakciju. Ljudske cDNK iz tkiva su nabavljene od Clontech ili Invitrogen. 1 pije korišćen za PCR reakciju.

PCR je vršen uStratagene Robocycler 40ili uMWG Primus 96 plustermocikleru. Tipično, PCR je vršen sa Proširenim Lond Šablon PCR Sistemom iz Roche-a u puferu 3 plus 0.75 mM MgCl2, 0.3 uM svakog primera, 500 pM dNTPs.

Proizvodi PCR su prečišćeni sa Opremom Visoke Čistoće PCR Proizvoda Prečišćavanja (Roche) ili agarnim gelom sa QlAquick Gel Extraction opremom iz Qiagen, i klonirani u pCR2.1-TOPO vektor iz Invitrogena. ORF-ovi su subklonirani u bakulovirus ekspresionom vektoru (transfer plazmidi). pCR-Bac i pVL vektori su iz Invitrogena. pBacPak vektori (pBP8 ili pBP9) su iz Clontech. Zabrana endonukleaze su iz Roch i MBI Fermetas. Modifikovani enzimi i T4 DNK ligaze su izNew England Biolabs. DNK je sekvencionirana od strane kompanije GATC GmbH (Konstanz, Nemačka, www. gatc. de) ili u ALTANA Pharma's laboratoriji primenom ABIPRISM 310 i Velike obojene terminator ciklične sekvence v2 hernije (primenjen Biosistem). Sekvencionalna analiza je izvedena sa Hitachi Softvere DNASIS Version 2.5 ili sa Vektorom NTI7. Kada je neophodno,in vitromutageneza je eventualno izvedena sa CjuickChange Site-Directed Mutagenesis Opremom iz Stratagene.

Kloniranje ljudskog PDE 2A3

PDE2A3 (GB br. U67733) je proširen u 2 koraka primenom PCR iz moždane cDNK. Krajnji N-fragment je izolovan primenom primera CP1PD2AS (5'-GAGGAGTGATGGGGCAGGC-3') i PR9PD2AA (5'-GCGAAGTGGGAGACAGAAAAG-3'), krajnji C-fragment je izolovan primenom primera PR7PD2AS (5'-GATCCTGAACATCCCTGACG-3') i CP3PD2AA (5'-GGGATCACTCAGCATCAAGGC-3'). Proizvodi PCR su klonirani u vektor pCR2.1-Topo. Krajnji N-fragment je prvo subkloniran sa EcoRI u pBluescript II KS (-), posle čega je fragment Bstl 1071/EcoRV zamenjen sa odgovarajućim fragmentom zabrane iz krajnjeg C-klona, kako bi se dobila kompletna ORF. ORF iz PDE2A3 je subkloniran u pBP8 primenom Xbal i Kpnl.

Ekspresija rekombinantnog PDE2

rBV je dobijen značajnim homolognim rekombinacijama u Sf9 ćeliji insekta. Ekspresije plazmida su kotrainficirane sa Bac-N-Blue (Invitrogen) ili Baculo-Gold DNK (Pharmingen) primenom standardnog protokola (Pharmingen). Supernatanti wt virus-slobodni rekombinantni virus su selektovani primenom metode pločaste analize. Posle toga, visoki-titar virusnih supernanatanata su dobijeni sa pojačanjem od 3 puta. PDE2 je određen u Sf21 ćelijama 2x10<6>ćelija/ml sa MOI (višestruka infekcija (multipicitv of infection)) između 1 i 10 u slobodnom serumu SF900 medijumu (Life Technologies). Ćelije su kultivisane 48 h na 28°C, posle čega su granulisane 5-10 min. na 1000 g i 4°C. U okretujućem balonu, ćelije su kultivisane na rotacionoj brzini od 75 rpm. SF21 ćelije insekta su resuspendovane, na koncentraciji oko IO<7>ćelija/ml, u ledeno-hladnom (4°C) homogenizovanom puferu (20 mM Tris, pH 8.2, sadrži sledeće dodatke: 140 mM NaCl, 3.8 mM KC1, 1 mM EGTA, 1 mM MgCl2, 1 mM P-merkaptoetanola, 2 mM benzamidina, 0.4 mM Pefablok, 10 uM pepstatin A, 5 pM tripsin inhibitora) i prekunute ultrasonikaciom. Potom je homogenat centrifugiran 10 min na 1000xg a supernatant je čuvan na -80°C do sledeće primene (vidi dole). Sadržaj proteina je određen Bradfod metodom (BioRad, Munich) primenom BAS kao standard. Integritet i veličina rekombinovanih proteina su analizirane sa \vestern blot.

Merenja rekombinovanog ljudskog PDE2A3 inhibitora primenom SPA tehnologije

Rekombinovana ljudska PDE2A3 dejstva su inhibirana sa jedinjenjima prema pronalasku u modifikovanom SPA (blizina scintilacijske analize (scintillation proximity assay)) testu, obezbeđen od strane Amersham Pharmacia Biotech (vidi procedurne instrukcije "fosfodiesteraza [3H]cAMP SPA enzimska analiza, kod TRKQ 7090"), vršen u 96 mikrotitarskih bunarčića (MTP). Testirana zapremina je 100 ul i sadrži 20 mM Tris pufera (pH 7.4), 0.1 mg BSA ( bovin serum albumin)/,l, 5 mM Mg<2+>, 0.5 pM cAMP (uključujući oko 50,000 cpm [3H]cAMP), 5 uM cGMP (da aktivira PDE2A3), 2 pl supstance razblažene u DMSO i dovoljno rekombinovanog PDE (1000xg supernatanta, vidi gore) da obezbedi daje 15-20% cAMP pretvoreno pod navedenim eksperimentalnim stanjima. Posle preinkubacije od 5 min na 37°C, reakcija je poćeta dodavanjem SPA granula (50 pl). U saglasnosti sa proizvođačevim instrukcijama, SPA granule su prethodno bile resuspendovane u vodi a potom razblažene 1:3 (v/v); razblažen rastvor takođe sadrži 3 mM IBMX. Posle sedimentacije granula (> 30 min), MPT su analizirane u komercijalno dostupnim merljivim uređajima i odgovarajuće IC50vrednosti jedinjenja za inhibiciju PDE dejstva su određena iz krivih 'koncentracija-dejstvo' sa značenjem nelinearne regresije.

Metode procene inhibicije makromolekulske permeabilnosti HUVEC monoslojeva

Proceduru merenja makromolekulske permeabilnosti endotelijalne ćelije monoslojeva prati metod kojeg su opisali Langeler & van Hinsbergh (1988) sa izmenama. Endotelijalne ćelije ljudske pupčane vene su izolovane iz pupčane vrpce prema standardnim procedurama (Jaffe i saradnici, 1973) i kultivisane u baznom medijumu endotelijalne ćelije (EBM) koji je dopunjen sa 2% FCS, 0.5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml heparina, 50 pg/ml gentamicina, 50 ng/ml amfotericina B (EGM2 nabavljen od Promocell GmbH, Heidelberg, Nemačka). Na mestu skupljanja, ćelije su tripsinizovane i reobložene na 73000 ćelija po bunaru na 3 pm polikarbonatnom filteru Transvvell inserts (Costar GmbH, Bodenheim, Nemačka) grundiran sa 10 pg cm<2>'<1>Fibronectin (Sigma, Taufkirchen, Nemačka). HUVEC su kultivisani u EGM (100 pl u gornjim bunarčićima i 600 pl u donjim bunarčićima) preko četri dana eksperimenta i medijum je menjan svaki drugi dan. Na dan zamene eksperimentalni kultivisani medijum je zamenjen saM199 sa 1% ljudskim serumom albuminom. Endotelijalne ćelije su preinkubirane 15 min sa modifikovanim cikličnim nukleotidom (selektivni PDE3 inhibitor motapizon, selektivni PDE4 inhibitor RP73401, cGMP generatoi ANP ili SNP i PDE2 inhibitori). Potom su HUVEC stimulisane sa Trombinom (1U ml"<1>) (Sigma, Taufkirchen, Nemačka) peroksidazom iz rotkve (5 pg/ml) (Sigma, Taufkirchen, Nemačka) dok je makromelekulski marker protein dodat u gornje bunarčiće. Posle 1 h inkubacije Transvvells su uklonjeni i aktivnost peroksidaze iz rotkve koja probija enodelijalnu ćeliju je izmerena u nižim bunarčićima sa supstratnim sistemom 3,3',5,5'-tetrametilbenzidin tečnosti iz Sigma (Taufkirchen, Nemačka).

Rezultati

Jedinjenja prema pronalasku potencijalno supresuju rekombinantno ljudsko PDE2A3 dejstvo. Inhibitorne vrednosti [izmerena kao -log IC50(mol/l)] određene za primere od 1 do 9 i od 23 do 29 su veće od 7.5.

Paralelno, jedinjenja prema pronalasku inhibiraju Trombin-induciranu permeabilnost HUVEC monoslojeva za peroksidazu iz rotkve (hors radish peroxidase, HRP) kao makromolekulski marker. Prema tome, PDE 2 inhibitori su predloženi da poboljšaju endotelijalnu barijernu funkciju, koja je oštećena u brojnim stanjima kao što je akutni respiratorni distres sindrom (ARDS) ili prekinuta pneumonija. Sistem koji meri ove ćelijske aktivnosti PDE2 inhibitora posmatra enzimološke karakteristike PDE2 koja pokazuju prilično visoku Km za cAMP i dejstvo koje je aktivirano sa cGMP. Trombin-inducirano povećanje permeabilnosti HRP-a je u potpunosti ukinut kompletnom inhibicijom PDE3 (10 pM Motapizona) i PDE4 (1 pM RP73401). Međutim, u dodatnom prisustvu ANP (100 nM) ili SNP (1 mM) da poveća cGMP imhibiciju sa permeabilnom inhibiciom PDE3 i 4 je delimično bila reverzna. PDE2 inhibitori blokiraju trombin-stimulisani HRP-permeabilnost ako su 1 pM RP73401, 10 pM Motapizona, 100 nM ANP ili 1 mM SNP prisutni ukazujući da ANP ili SNP generišući cGMP aktiviraju PDE2. Koncentracija-zavisna inhibicija HRP permeabilnosti na različitim koncentracijama primera 5 je procenjena iz procenta inhibicije u prisustvu i odsustvu PDE2 inhibitora i u prisustvu lpM RP73401, 10 pM Motapizona, 100 nM ANP. U odosustvu PDE3 i PDE4 inhibitora, ANP ili SNP PDE2 inhibitori pokazuju veoma malo dejstvo u Trombin-indukovani makromolekul hiperpermeabilnosti.

Slika 1A/B: Ćelije HUVEC-a na 3 pm polikarbonatnim filterima (Transwells) su preinkubirane sa 1 pM RP73401 (RP, PDE4 blok) i 10 pM Motapizona (M, PDE3 blok), 1 mM SNP ili 100 nM ANP i 1 pM primera 5 tokom 15 min a zatim stimulisane sa lU/ml trombinom. HRP prolaz u donjim bunarčićima je procenjen posle 60 min. RP73401 i Motapizon upotpunosti blokiraju trombin-indukovana hiperpermeabilnost, koja je delimično preokrenuta sa SNP i ANP-om. Primer 5 inhibira ovu povećanje SNO- ili ANP-indukovane permeabilnosti u koncentraciono-zavisnom obliku (Slika 1B).

Claims (11)

1. Jedinjenja sa formulom 1 u kojima Rl je vodonik, l-4C-alkil, fenil ili fenil-1 -4C-alkil grupa, i u kojima ili R2 je l-4C-alkil, 1-hidroksi-2-4C-alkil, l-4C-alkilkarbonil ili 1-(acetiloksi)-2-4C-alkil grupa i R3 je vodonik, ili R2 je vodonik, l-4C-alkil, l-hidroksi-2-4C-alkil, 1-4C-alkilkarbonil ili 1-(acetiloksi)-2-4C-alkil grupa i R3 je Arilbutil, Heteroarilbutil, Arilpropil, Heteroarilpropil, Ariletil ili Heteroariletil, u kojima Aril je fenil, naftalenil ili indalin, od kojih je svaki opciono supstituisan do tri puta identično ili različito sa halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, karboksil, l-4C-alkil, l-4C-alkoksi ili l-4C-alkoksikarbonil grupom, Heteroaril je piridinil, pirazinil, piridazinil, pirimidinil, hinazolinil, hinoksalinil, cinolinil, hinolil, izohinolil, nafthiridinil, ftalazinil, indolil, izoindolil, indazolil, purinil, pteridinil, benzofuranil, benzoksazolil, benzotiazolil, benzimidazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, imidazolil, pirolil, pirazolil, furanil ili tiofenil, od kojih je svaki opciono supstituisan do tri puta identično ili različito sa halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, karboksil, l-4C-alkil, l-4C-alkoksi ili l-4C-alkoksikarbonil grupom, i u kojima ili R4 je l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom i R5 je halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, karboksil, l-4C-alkil, l-4C-alkoksi, 1-4C- alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, 1-4C-alkoksikarbonil, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil, l-4C-alkilkarbonilamino, 1-4C-alkilkarboniloksi, 1-4C-alkilsulfonilamino, fenilkarbonilamino, fenilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R6 i/ili R7, benzilkarbonilamino, benzilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R8 i/ili R9, fenilsulfonilamino, fenilsulfonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa RIO i/ili Rl 1, benzilsulfonilamino ili benzilsulfonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R12 i/ili R13, ili R4 je halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, karboksil, l-4C-alkil, 1-4C-alkoksi, 1-4C- alkoksikarbonil, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminokarbonil, l-4C-alkilkarbonilamino, l-4C-alkilkarboniloksi, 1-4C-alkilsulfonilamino, fenilkarbonilamino, fenilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R6 i/ili R7, benzilkarbonilamino, benzilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R8 i/ili R9, fenilsulfonilamino, fenilsulfonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa RIO i/ili Rl 1, benzilsulfonilamino ili benzilsulfonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R12 i/ili R13, i R5 je l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom i R6 je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, 1-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-1-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil, l-4C-alkilkarbonilamino ili l-4C-alkilkarboniloksi grupom, R7 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa, R8 je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-1-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil, l-4C-alkilkarbonilamino ili l-4C-alkilkarboniloksi grupom, R9 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa, RIO je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-1-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil, 1 -4C-alkilkarbonilamino ili 1 -4C-alkilkarboniloksi grupom, Rl 1 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa, R12 je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-1-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4C-alkilaminosulfonil, 1-4C-alkilkarbonilamino ili l-4C-alkilkarboniloksi grupom, R13 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa, soli ovih jedinjenja, kao i N-oksidi, enantiomeri i tautomeri ovih jedinjenja i njihove soli.

2. Jedinjenja sa formulom 1 prema zahtevu 1 u kojima Rl je vodonik, l-2C-alkil, fenil, feniletil ili fenilpropil, R2 je l-hidroksi-2-4C-alkil, l-4C-alkilkarbonil ili l-(alkoksi)-2-4C-alkil, R3 je vodonik, Arilbutil, Heteroarilbutil, Arilpropil, Heteroarilpropil, Ariletil ili Heteroariletil, u kojima Aril je fenil ili naftalenil, Heteroaril je piridinil, pirimidinil, tiofuranil, indolil ili furanil, i u kojima ili R4 je l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom i R5 je halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, l-4C-alkil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, l-4C-alkilkarbonilamino, fenilkarbonilamino, fenilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R6 i/ili R7, benzilkarbonilamino, benzilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R8 i/ili R9, ili R4 je halogen, hidroksil, nitro, trifluorometil, l-4C-alkil, l-4C-alkoksi, amino, mono- ili di-1- 4C-alkilamino, 1-4C-alkilkarbonilamino, fenilkarbonilamino, fenilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R6 i/ili R7, benzilkarbonilamino, benzilkarbonilamino grupa supstituisana u fenilnom delu sa R8 i/ili R9, i R5 je l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom i R6 je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, l-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-1-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4Calkilaminosulfonil, l-4C-alkilkarbonilamino ili 1 -4C-alkilkarboniloksi grupom, R7 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa, R8 je halogen, hidroksil, cijano, l-4C-alkil, trifluorometil, l-4C-alkoksi, l-4C-alkoksi grupa koja je potpuno ili pretežno supstituisana sa fluorom, karboksil, 1-4C-alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-l-4C-alkilamino, aminokarbonil, aminosulfonil, mono- ili di-1-4C-alkilaminokarbonil, mono- ili di-l-4Calkilaminosulfonil, l-4C-alkilkarbonilamino ili l-4C-alkilkarboniloksi grupom, R9 je halogen, l-4C-alkil ili l-4C-alkoksi grupa, soli ovih jedinjenja, kao i N-oksidi, enantiomeri i tautomeri ovih jedinjenja i njihove soli.

3. Jedinjenja sa formulom 1 prema zahtevu 1 u kojima Rl je vodonik, metil, fenil, feniletil ili fenilpropil, R2 je 1-hidroksietil, acetil ili l-(acetiloksi)etil, R3 je vodonik ili fenilpropil, i u kojima ili R4 je difluorometoksi i R5 je nitro, amino, metoksi, 4-metoksifenilmetilkarbonilamino, 4- metoksikarbonilfenilkarbonilamino, 4-dipropilaminosulfonilfenilkarbonilamino, 3 -hloro-4-fluorofenilkarbonilamino ili 3-fluoro-4-metilfenilkarbonilamino, ili R4 je hlor ili metoksi i R5 je difluorometoksi, soli ovih jedinjenja, kao i N-oksidi, enantiomeri i tautomeri ovih jedinjenja i njihove soli.

4. Jedinjenja sa formulom 1 prema zahtevu 1 u kojima Rl je vodonik ili metil, R2 je 1-hidroksietil, acetil ili l-(acetiloksi)etil, R3 je fenilpropil, i u kojima ili R4 je difluorometoksi i R5 je metoksi, 4-metoksifenilmetilkarbonilamino, 4-metoksikarbonilfenilkarbonilamino, 4- dipropilaminosulfonilfenilkarbonilamino, 3-hloro-4-fluorofenilkarbonilamino ili 3-fluoro-4-metilfenilkarbonilamino, ili R4 je hlor ili metoksi i R5 je difluorometoksi, soli ovih jedinjenja, kao i N-oksidi, enantiomeri i tautomeri ovih jedinjenja i njihove soli.

5. Jedinjenja sa formulom 1 prema zahtevu 1 u kojima Rl je vodonik ili metil, R2 je 1-hidroksietil, acetil ili l-(acetiloksi)etil, R3 je fenilpropil, i u kojima ili R4 je difluorometoksi i R5 je metoksi, 4-metoksifenilmetilkarbonilamino, 4-metoksikarbonilfenilkarbonilamino, 4- dipropilaminosulfonilfenilkarbonilamino, 3-hloro-4-fluorofenilkarbonilamino ili 3-fluoro-4-metilfenilkarbonilamino, ili R4 je metoksi i R5 je difluorometoksi, soli ovih jedinjenja, kao i N-oksidi, enantiomeri i tautomeri ovih jedinjenja i njihove soli.

6. Jedinjenja sa formulom 1 prema zahtevu 1 za lečenje obolenja.

7. Farmaceutska kompozicija sadrži jedno ili više jedinjenja sa formulom 1 prema zahtevu 1 zajedno sa uobičajenim farmaceutskim pomoćnim sredstvima i/ili ekscipijentima.

8. Primena jedinjenja sa formulom 1 prema zahtevu 1 za proizvodnju farmaceutskih kompozicija za lečenje stanja patološki povećane endotelijane aktivnosti i oštećene barijerne funkcije endotelije kao stoje septički šok i vaskularni edem.

9. Primena jedinjenja sa formulom 1 prema zahtevu 1 za proizvodnju farmaceutskih kompozicija za lečenje (1) stanja udružena sa patološki povećanom neoangiogenezom kao što su sve vrste tumora (benigni ili maligni) ili (2) svi tipovi inflamatornih obolenja udružena sa neoangiogenezom kao što su obolenja artritisnog tipa.

10. Metod za lečenje stanja patološki povećane endotelijane aktivnosti i oštećene barijerne funkcije endotelije kao stoje septički šok i vaskularni edem kod pacijenta koji boluje, obuhvata primenu kod navedenog pacijenta terapeutske efektivne količine jedinjenja sa formulom 1 prema zahtevu 1.

11. Metod za lečenje (1) stanja udružena sa patološki povećanom neoangiogenezom kao što su sve vrste tumora (benigni ili maligni) ili (2) svi tipovi inflamatornih obolenja udružena sa neoangiogenezom kao što su obolenja artritisnog tipa kod pacijenta koji boluje, obuhvata primenu kod navedenog pacijenta terapeutske efektivne količine jedinjenja sa formulom 1 prema zahtevu 1.