RS20060086A

RS20060086A - Antagonistički analozi gh-rh(2003)

Info

Publication number: RS20060086A
Application number: YUP-2006/0086A
Authority: RS
Inventors: Andrew V. Schally; Jozsef Varga; Marta Zarandi; Ren Zhi Cai
Original assignee: The Administrattors Of The Tulane Educational Fund (A Not For Profit Corporation); The United States Of America Represented By The Department Of Veterans Affairs
Priority date: 2003-08-05
Filing date: 2004-07-26
Publication date: 2008-08-07
Also published as: CA2534436A1; AR049149A1; NO20061060L; WO2005016953A2; AU2004265280A1; RU2006106701A; MXPA06001369A; PL380437A1; KR20060088875A; IL173201A0; EP1651662A2; SG136958A1; WO2005016953A3; TW200517400A; BRPI0413257A; EP1651662A4; RU2335506C2; US20070042950A1; US7452865B2; CN1871020A

Abstract

Obezbeđene su nove serije sintetskih analoga antagonista hGH-RH(1-29)NH2• Ovi analozi inhibiraju aktivnost endogenog hGH-RH na receptore za GH-RH hipofize i time sprečavaju oslobađanje hormona rasta. Analozi, takođe, inhibiraju proliferaciju humanih kancera preko direktnog dejstva na kancerske ćelije. Veće inhibitorne mogućnosti novih analoga u poređenju sa prethodno opisanim, dobijene su zamenom raznih aminokiselina.

Description

ANTAGONISTIČKI ANALOZI GH-RH (2003)

Oblast tehnike

Ovaj pronalazak je delom izrađen uz Vladinu podršku iz Službe za medicinska istraživanja Odeljenja za poslove veterana. Vlada poseduje određena prava u ovoj prijavi

(VA No. 03-084, dodeljena 25. jula 2003.)

Ovaj pronalazak se odnosi na nove sintetske peptide, koji inhibiraju oslobađanje hormona rasta iz hipofize kod sisara, kao što, isto tako, inhibiraju proliferaciju humanih kancera posredstvom direktnog dejstva na ćelije raka, i na terapeutske smeše, koje sadrže ove nove peptide.

STANJE TEHNIKE

Hormon oslobađanja hormona rasta (GH-RH) je peptid koji pripada sekretin/glukagon familiji neuroendokrinih i gastrointestinalnih hormona, familiji koja,

takođe, obuhvata vazoaktivni intestinalni peptid (VIP), hipofizni peptid koji aktivira adenilat ciklazu (PACAP) i druge. Humani GH-RH (hGH-RH) peptid je sastavljen od 44 aminokiselinska ostatka. Najpoznatije mesto proizvodnje GH-RH je hipotalamus, ali je utvrđeno da ga, takođe, sintetišu razni periferni organi. hGH-RH, takođe, ponekad proizvode u velikim količinama, humana maligna tkiva (kanceri) različitog porekla.

GH-RH vrši različite fiziološke i patofiziološke funkcije. Hipotalamusni GH-

RH je endokrini hormon oslobađanja, koji delujući preko specifičnih GH-RH receptora na hipofizi, reguliše sekreciju hipofiznog hormona rasta (GH). Fiziološke funkcije GH-RH u ekstrahipofiznim tkivima su manje jasne. Međutim, sve je više dokaza o ulozi GH-RH kao autokrino/parakrinog faktora rasta u različitim kancerima. Povezana varijanta receptora, tzv.

splice variant (SV) receptori za GH-RH, razlikuje se od onih koji su ekspresovani u hipofizi

i_ opi^anajeji^ejikom^^

Dejstva tumorskog autokrino/parakrinog GH-RH mogla bi biti ispoljena na ovim receptorima. Pored toga, receptori za VIP i ostale, kao još neidentifikovani receptori ove familije, mogli bi svi biti mete lokalnog GH-RH.

S obzirom na ulogu GH-RH kao endokrinog regulatora oslobađanja GH, smišljene su nove terapeutske strategije za lečenje različitih patoloških stanja, zasnovane na upotrebi agonističkih i antagonističkih analoga GH-RH.

GH je polipeptid sastavljen od 191 aminokiseline, koji stimuliše proizvodnju različitih faktora rasta, npr., insulinu sličnog faktora rasta I (IGF-I) i, posledično, podstiče rast brojnih tkiva (skeleta, vezivnog tkiva, mišića i creva) i stimuliše različite fiziološke aktivnosti (povećavajući sintezu nukleinskih kiselina i proteina i pojačavajući lipolizu, ali smanjujući lučenje ureje). Oslobađanje hipofiznog GH je pod kontrolom oslobađajućih i inhibirajućih faktora, koje luči hipotalamus, pri čemu su primarni oslobađajući faktori GH-RH i grelin, a glavni inhibirajući faktor je somatostatin.

GH je uključen u razne bolesti. Jedna od bolesti u koje je GH uključen je akromegalija, u kojoj su prisutni prekomerni nivoi GH. Abnormalno uvećane facijalne kosti i kosti ekstremiteta i kardiovaskularni simptomi ove bolesti mogu biti lečeni primenom antagonista GH-RH. Ostale bolesti, koje uključuju GH, su dijabetična retinopatija i dijabetična nefropatija. Oštećenje mrežnjače, odnosno bubrega, u ovim bolestima, za koje se veruje da je posledica hipersekrecije GH, dovodi do slepila ili smanjenja bubrežne funkcije. Ovo oštećenje može biti sprečeno ili usporeno primenom delotvornog antagonista

GH-RH.

U nastojanju da intervenišu u ovim bolestima i drugim stanjima, neki istraživači su pokušali da kontrolišu nivoe GH i IGF-I korišćenjem analoga somatostatina, kao inhibitora oslobađanja GH. Međutim, analozi somatostatina, ako se primene sami, ne suprimiraju nivoe GH ili IGF-I do željenog stepena. Ukoliko su primenjeni u kombinaciji sa antagonistom GH-RH, analozi somatostatina će mnogo bolje suprimirati nivoe IGF-I.

Ipak, glavne primene antagonista GH-RH su u oblasti malignih bolesti (prikazane u Schallv AV and Varga JL, Trends Endocrinol Metab 10: 383-391, 1999; Schallv AV et al, Frontiers Neuroendocrinol 22: 248-291, 2001; Schallv AV and Comaru-Schallv AM, in: Kufe DW, Pollock RE, VVeichselbaum RR, Bast Jr. RC, Gansler TS, Holland JF, Frei III E, Eds. Cancer Medicine, 6<th>ed. Hamilton, Ontario: BC. Decker, Inc., 2003, p.911-926). Antagonisti GH-RH inhibiraju proliferaciju maligniteta indireknim endokrinim mehanizmima, zasnovanim na inhibiciji oslobađanja hipofiznog GH i dovođenjem do smanjenja serumskih koncentracija GH i IGF-I, kao i direktnim dejstvima na tumorsko tkivo.

GH-RH i njegovi tumorski receptori povezane varijante (SV) su prisutni u humanim kancerima: pluća, prostate, dojke, jajnika, endometrijuma, želudca, creva, gušterače, bubrega i kostiju (vidi Halmos G et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10555-10560, 2000; Rekasi Z et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10561-10566, 2000; Schally AV et al, Frontiers Neuroendocrinol 22: 248-291, 2001; Schallv AV and Comaru-Schallv AM, in: Kufe DW, Pollock RE, VVeichselbaum RR, Bast Jr. RC, Gansler TS, Holland JF, Frei III E, Eds. Cancer Medicine, 6,<h>ed. Hamilton, Ontario: BC. Decker, Inc., 2003, p. 911-926). Pokazalo se ili se sumnja da tumorski GH-RH deluje kao autokrini faktor rasta u ovim malignim bolestima. Antagonistički analozi GH-RH mogu inhibirati stimulativno dejstvo GH-RH i ispoljiti direktne antiproliferativne efekte in vitro na ćelije raka i, in vivo, na tumore. Direktni antiproliferativni efekti antagonista GH-RH se ispoljavaju na tumorskim receptorima (vezni položaji). Pored specifičnih tumorskih SV receptora za GH-RH, receptora za VIP i drugih, mete antagonista GH-RH su i još neidentifikovani receptori ove familije.

Pored endokrinih inhibitornih efekata na serumske GH i IGF-I, utvrđeno je da antagonisti GH-RH smanjuju autokrinu i parakrinu proizvodnju različitih tumorskih faktora rasta i/ili nishodno regulišu njihove receptore. Ovi faktori rasta uključuju: IGF-I, IGF-II, GH, vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF) i fibroblastni faktor rasta (FGF). Prema tome, prekid autokrino/parakrinih stimulatornih petlji, zasnovan na ovim faktorima rasta, doprinosi efikasnosti antagonista GH-RH, kao tumorskih agenasa.

IGF-I i IGF-II su autokrino/parakrini faktori rasta sa moćnim mitogenim efektima na razne kancere. IGF-I je, takođe, endokrini faktor rasta, a povišeni nivoi serumskog IGF-I se smatraju epidemiološkim faktorom rizika za razvoj raka prostate, raka pluća i kolorektalnog raka. Upletenost IGF-I (somatomedin-C) u rak dojke, rak prostate, rak debelog creva, tumore kostiju i druga maligna stanja neosporno je dokazana. Ipak, autokrino/parakrina kontrola proliferacije posredstvom IGF-II, takođe je važan faktor u mnogim tumorima. IGF-I i IGF-II vrše svoje proliferativne i anti-apoptozne efekte preko

zajedničkog IGF-I receptora. Receptori za IGF-I su prisutni u primarnim humanim ]<aTičeTfrrta"~do]Re, kancerima prostate, kancerima pluća, kancerima debelog creva, tumorima mozga, kancerima gušterače i u kancerima renalnih ćelija. U nekolicini eksperimentalnih

kancera, kao što su kanceri kostiju, pluća, prostate, bubrega, dojke, jajnika, creva, gušterače i mozga, lečenje antagonistima GH-RH dovodi do smanjenja nivoa IGF-I i/ili IGF-II, zajedno sa inhibicijom tumorskog rasta (prikazane u Schallv AV and Varga JL, Trends Endocrinol Metab 10: 383-391, 1999; Schallv AV et al, Frontiers Neuroendocrinol 22: 248-291, 2001; Schallv AV and Comaru-Schallv AM, in: Kufe DW, Pollock RE, VVeichselbaum RR, Bast Jr. RC, Gansler TS, Holland JF, Frei III E, Eds. Cancer Medicine, 6,<h>ed. Hamilton, Ontario: BC. Decker, Inc., 2003, p. 911-926). U nekim slučajevima, ekspresija receptora IGF-I je isto tako smanjena pomoću antagonista GH-RH. Prema tome, prekid endokrinih i autokrino/parakrinih stimulatornih petlji zavisnih od IGF-I i IGF-II, doprinosi antitumorskom dejstvu antagonista GH-RH.

U MXT modelu raka dojke, lečenje sa antagonistima GH-RH inhibiralo je tumorski rast, smanjilo nivo mRNK za GH i koncentraciju GH peptida u tumorima i inhibiralo ekspresiju mRNK za GH receptore (Szepeshazi K et al, Endocrinologv 142: 4371-4378, 2001). Pokazalo se da GH deluje kao faktor rasta za ćelije MXT mišjeg mlečnog karcinoma, ćelije MCF-7 humanog raka dojke i druge tumorske ćelijske loze. Zato, inhibitorno dejstvo antagonista GH-RH na lokalne i serumske nivoe GH doprinosi njihovom antitumorskom efektu.

Pokazalo se da antagonisti GH-RH inhibiraju nivoe mRNK i proteinske koncentracije VEGF-a u modelima humanog androgen-senzitivnog i androgen-nezavisnog raka prostate (Letsch M et al, Proc Natl Acad Sci USA 100: 1250-1255, 2003; Plonowski A et al, Prostate 52: 173-182, 2002) i ovaj fenomen doprinosi njihovom antitumorskom dejstvu pošto VEGF igra važnu stimulatornu ulogu u neovaskularizaciji i rastu raznih tumora. Osim toga, utvrđeno je da su antagonisti GH-RH inhibirali sekreciju VEGF-a i proliferaciju normalnih mišjih endotelnih ćelija očigledno preko direktnog dejstva na te ćelije in vitro (Siejka A et al, Life Sci 72: 2473-2479, 2003).

Naučnici su istražili razne modifikacije GH-RH, da bi rasvetlili vezu između strukture GH-RH i njegove aktivnosti na hipofizne receptore, u nastojanju da obezbede sintetske srodnike sa poboljšanim agonističkim ili antagonističkim svojstvima. Tako je

odranije utvrđeno da fragment GH-RH, koji sadrži ostatke 1 do 29, ili GH-RH(1-29), jeste minimalna sekverica, neophodna zadioiosko dejstvcTlTa^hipofizu. Ovaj fragment zadržava 50% ili više moći nativnog GH-RH. Sledstveno tome, izrađeni su mnogi sintetski analozi

GH-RH, zasnovani na strukturi hGH-RH(1-29)NH2peptida. hGH-RH(1-29)NH2ima sledeću sekvencu aminokiselina: Tyr-Ala-Asp-Ala-lle<5->Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr<10->Arg-Lys-Val-Leu-Gly<15->Gln-Leu-Ser-Aia-Arg<20->Lys-Leu-Leu-Gln-Asp25-lle-Met-Ser-Arg29-NH2

Značajan broj patenata i članaka u dostupnoj literaturi objavljuje analoge GH-RH koji deluju, ili kao agonisti GH-RH (tj. deluju tako da stimulišu oslobađanje GH), ili kao antagonisti GH-RH (tj., deluju tako da inhibiraju oslobađanje GH) na hipofizu. Najveći broj ovih peptida izveden je iz GH-RH(1-29) peptidne sekvence, sa specifičnim strukturnim modifikacijama, koje računaju na njihova povećana agonistička ili antagonistička svojstava na hipofizne receptore. Međutim, osim nekoliko izuzetaka, nije poznato kako bi ponašanje ovi analozi ispoljili na ćelije raka, koje ekspresuju GH-RH receptore, koji se razlikuju od onih nađenih u hipofizi. Samo nekoliko publikovanih naučnih studija pokušalo je da razjasni veze između strukture i aktivnosti i okarakteriše direktne antagonističke (ili agonističke) efekte analoga GH-RH na ćelije raka i tumore (vidi Rekasi Z et al, Endocrinology 141: 2120-2128, 2000; Halmos G et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10555-10560, 2000; Rekasi Z et al, Proc Natl Acad Sci USA 97: 10561-10566, 2000; Kiaris H et al, Proc Natl Acad Sci USA 99: 196-200, 2002), ali do sada nema podnesenih patenata koji dele udeo sa ovim patentom. Posledično, malo se zna o strukturnim karakteristikama analoga GH-RH, koji su potrebni za direktno antagonističko dejstvo na tumorske ćelije.

Utvrđeno je da prvi opisani GH-RH antagonist [Ac-Tyr1-D-Arg2]hGH-RH(1 - 29)NH2, koji je u literaturi uopšteno označen kao "standardni antagonist", sprečava aktivaciju adenilat ciklaze anteriorne hipofize pacova pomoću hGH-RH(1-29)NH2. Isti peptid blokirao je dejstvo GH-RH na njegove receptore u hipofizi i hipotalamusu i inhibirao pulsativnu sekreciju hormona rasta. Standardni antagonist je takođe procenjen klinički (Ocampo-Lim B et al, J Clin Endocrinol Metab 81: 4396-4399, 1996; Jaffe CA et al, J Clin Endocrinol Metab 82: 634-637, 1997). Velike doze ovog antagonista (400 |ig/kg) eliminisale su noćnu sekreciju GH kod normalnih ispitanika i inhibirale odgovor na GH-RH. Standardni GH-RH antagonist, takođe je smanjio nivoe GH kod pacijenata sa akromegalijom. Međutim, za kliničku upotrebu, potrebni su mnogo moćniji antagonisti GH-RH.

Dole pomenuti pronalasci izlažu analoge GH-RH sa antagonističkim ili agonističkim karakteristikama na hipofizne receptore za GH-RH. Međutim, nije prikazano i nije istraženo da li bi ovi analozi mogli izvršiti direktna dejstva na tumorske ćelije.

US Patent 4,659,693 izlaže antagonističke analoge GH-RH, koji sadrže određene N,N'-dialkil-omega-gvanidino alfa-amino acil ostatke na poziciji 2 GH-RH(1-29) sekvence.

Publikovana prijava WO 91/16923 prikazuje ranije pokušaje da se preinači sekundarna struktura hGH-RH modifikovanjem njene aminokiselinske sekvence. Ovi raniji pokušaji uključuju: zamenu Tyr<1>,Ala<2>,Asp<3>ili Asn<8>sa njihovim D-izomerima; zamenu Asn<8>

sa L- ili D-Ser, D-Arg, Asn, Thr, Gln ili D-Lys; zamenu Ser<9>sa Ala, da bi se pojačala amfifilnost regiona; i zamenu Gly<15>sa Ala ili Aib. Kada je R<2>u analozima D-Arg, a R<8>,R<9>i R<15>su supstituisani kao što je prethodno naznačeno, navedeno je, nastaje antagonistička aktivnost. Navedeno je da su ovi antagonistički peptidi korisni za primenu u vidu farmaceutskih smeša za lečenje stanja povezanih sa prekomernim nivoima GH, npr., akromegalija.

Za antagonističku aktivnost hGH-RH analoga "[Ser<9->psi[CH2-NH]Tyr10]hGH-RH(1-29)" iz US Patenta 5,084,555 navedeno je da proističe iz pseudopeptidne veze (tj., peptidna veza je redukovana na [CH2-NH] sponu) između R<9>i R<10>ostataka. Međutim, navedeno je da su antagonističke karakteristike [Ser<9->psi[CH2-NH]Tyr<10>]hGH-RH(1-29) inferiorne u odnosu na standardni antagonist [N-Ac-Tyr<1>,D-Arg<2>]hGH-RH(1-29)-NH2.

US Patent 5,550,212, US Patent 5,942,489 i US Patent 6,057,422, koji pripadaju istom opunomoćeniku kao i ova prijava, izlažu analoge hGH-RH(1-29)NH2, za koje je navedeno da imaju pojačane antagonističke karakteristike i produženo trajanje dejstva što se tiče inhibicije oslobađanja GH izazvanog GH-RH-om. Veruje se da ove karakteristike proizlaze iz zamene raznih aminokiselina i acilacije sa aromatičnim ili nepolamim kiselinama na N-kraju GH-RH(1-29)-NH2. Svojstva antagonista da inhibiraju tumore, koja su opisana u US Patentu 5,942,489 i US Patentu 6,057,422, bila su demonstrirana korišćenjem "golih" miševa, koji nose ksenografte eksperimentalnih humanih modela raka. Primećeno je da je u US Patentu 5,550,212 i US Patentu 5,942,489, R<9>

uvek Ser, dokTt44^ h"° moguDifTATg, D-Arg ili Cit. U slučaju US Patenta"6,057,422 R<9>

može biti Arg, Har, Lys, Om, D-Arg, D-Har, D-Lys, D-Orn, Cit, Nle, Tyr(Me), Ser, Ala ili Aib, dok su R<11>i R<20>uvek Arg.

IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA

Date su nove serije sintetskih analoga hGH-RH(1-29)-NH2i hGH-RH(1-30)-NH2.

Ovi analozi inhibiraju oslobađanje hormona rasta iz hipofize kod sisara, kao i što inhibiraju proliferaciju humanih kancera direktnim dejstvom na ćelije raka. Jače inhibitorne moći novih analoga, u poređenju sa onima koji su prethodno opisani, proizlaze iz zamene raznih aminokiselina.

Pronalazak se pre svega odnosi na peptide koji obuhvataju formulu: Ri.A<D.>A<1->A<2->Asp-Ala-A<5->A<6->Thr-A<8->A<9->A<10->A<11->A<12->Val-Leu-A<16->A<16->Leu-Ser-A<19->A<20->A<21->A<22->Leu-Gln-Asp-lle-A<2>7-A28-A2<9->A<30->R2

u kojoj je Ričlan grupe, koja se sastoji od a) PhAc, Hca, Dat, IndAc, Ipa, 1-

Nac, 2-Nac, 1-Npr, 2-Npr, Ibu; CH3(CH2)nCO ili HOOC(CH2)nCO, gde je n ceo broj od 2 do

20 i b) bilo kog ravnog lanca, cikličnog, razgrantog lanca, zasićene, nezasićene ili poluzasićene alifatične karboksilne grupe od 6-14 atoma ugljenika i bilo koje karbociklične ili heterociklične aromatične karboksilne grupe od 3-8 atoma ugljenika koja sadrži do jedan atom svakog pojedinog iz grupe S, N i O u heterocikličnom prstenu.

A° je Phe, D-Phe, Arg, D-Arg ili jednostruka veza ugljenik - azot,

A<1>je Tyr ili His,

A<2>je D-Arg ili D-Cit,

A<5>je lle ili Val,

A<6>je Phe Tyr, Nal ili Phe(Y), u kome je Y=F, Cl, Br ili J,

A<8>je Asn, D-Asn, Cit, D-Cit, Gln, D-GIn, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Ala, D-Ala, Abu, D-Abu ili

Aib,

A<9>je His, D-His, Amp, D-Amp, Gup ili D-Gup,

A<10>je Tyr, Tyr(Et), Tyr(Me); Phe(Y), u kome je Y=H, F, Cl, Br ili J; Amp, His, Cha, Chg,

Bpa, Dip, Trp, Trp(For), Tpi, 1 -Nal. 2-Nal, 3-Pal, 4-Pal, Phe(NH2) ili Phe(N02),

A11 je His, D-His, Arg, D-Arg, Cit, Har, D-Har, Amp, D-Amp, Gup ili D-Gup, A^leTys7"D:Lysr^rnrD^o7n, Har, D-Har, Cit, D-Cit, Nle ili Ala,

A<15>je Gly, Ala, Abu, Aib, Nle, Gln, Cit ili His,

A16 je Gln ili Arg,

A19 je Ala ili Abu,

A<20>je His, D-His, Arg, D-Arg ili Cit,

A<21>je Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, Cit ili D-Cit,

A22 je Leu, Ala ili Aib,

A<27>je Met, Leu Nle, Abu ili D-Arg,

A<28>je Arg, D-Arg, Har, D-Har, Ser, Asn, Asp, Ala, Abu ili Cit,

A<29>je Arg, D-Arg, Har, D-Har, Cit, D-Cit ili Agm,

A<30>je Arg, D-Arg, Har, D-Har, Cit, D-Cit, Agm ili je jednostruka veza ugljenik-azot ili ugljenik-kiseonik,

R2je -NH2, -NH-NH2, -NH-OH, -NHR3, -NR3R4, -OH ili -OR3, gde su R3i R4bilo koji od: C^alkila, C2.10alkenila, C2.10alkinila, C7.16<f>enilalkila, -CeH5ili -CH(C6H5)2;

uz uslov da ako jeA29Agm onda nema A<30>i R2, a ako je A30Agm onda nema R2,

i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Među poželjnim ostvarenjima su peptidi sa gornjom formulom u kojoj jedan ili oba,A11i A<20>nisu Arg, D-Arg ili Cit.

Posebno, glavni peptidi, koji pripadaju ovoj grupi su:

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 - 29)NH2Peptid 67

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<26>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 68

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, His<9>, Tyr(Me)10, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 69

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 70

[HOOC(CH2)BCO-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>,Amp9, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har^JhGH-RH(1-29)NH2Peptid 71

[HOOCCCH^^CO-Tvr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Ha729]riGl:™ Peptidi

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>Amp<9>, Tyr(Me)10, His11, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 73

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Cit<8>,Amp<9>, Tyr(Me)1<0>,His<11>, Abu<15>, Nle27,D-Arg28,Har<29>]hGH-RH^-29)NH2 Peptid 74

[1'-Nac-Tyr1, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 75

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit8, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His11, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 76

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit8,Amp<9>, Tyr(Me)<10>,His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 77

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 78

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 79

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10 His<11>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 80

[HOOC(CH2)8<C>O-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)10,His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 81

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 82

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)1<0>,His<11>, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 86

[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<16>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 87

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His<11>, Abu<15>, His<20>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 88

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>,Ala<8>,Amp9, Tyr(Et)10, His11, Abu<15>, His20,Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 89

[1-Nac-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 91

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Ab<u15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 92

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<5>, Ala<8>, His<9>, Cit<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hQH-RH(1-29)NH2Peptid 93

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, His<15>, His<20>,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 94

[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10,His<11>, Orn1<2>,Abu<15>, Orn2<1>,Nle<27>, D-Arg28 Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 95

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Om12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>,

Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 96

[CH3(CH2)6C0-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt Peptid 97

[CH3(CH8)8C0-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9,>Tyr(Et)10, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 98

[CH3(CH2)10CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^JhGH-RHO -29)NHEt Peptid 99

[Hca-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His<11>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 100

[CH3(CH2)eCO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NHMe Peptid 101

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10,His11, Orn12Abu<15>, His20

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 102

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>,Tyr(Et)10,His<11>, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>,

Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 103

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Dip<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn21,

Nle<27>, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 104

[CH3(CHa)eCO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Phe(pN02)<10>, His<11>, Om<12>, Abu<15>, His20

Orn<21>, Nle27 D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 105

[CH3(CH2)sCO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Aja^isVTyr(Et)10, His11, Orn<12>, Abu^^iOm<2>^^Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 106

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala8, Amp<9>, Tyr(Et)10,His11, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2 Peptid 107

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Dip<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 108

[HOOClCH^CO^r1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His9, Phe(pN02)<10,>His<11>, Om<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 109

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 110

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, Amp<9>, Dip<10>, His<11>, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^jhGH-RHO -29)NH2 Peptid 111

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, Amp<9>, Phe(N02)<10>, His11, Orn12, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 112

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 113

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Dip<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt Peptid 114

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His9, Phe(pN02)<10,>His11, Orn<12>, Abu<16>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt Peptid 115

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp<9>,Dip<10>, His11, Om12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 116

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>,PheCpNO,)<10>, His11,Orn<12>, Abu<16>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 117

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp9, Dip<10>, His<11>, Om<12>, Abu<16>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<g>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 118

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp9,Phe(NO<j>°,His11, Orn<12>, Abu<16>, His<20>, Orn<21>, Nle27 D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 119

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Am<p9>, Dip<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 120

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp<9>,Phe(pN02)<10>, His<11>, Orn12,Abu<15>, His^Torn<21>, Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt Peptid 121

Bliski peptidi, koji ne pripadaju pređašnjoj generičkoj strukturnoj formuli obuhvataju: [CH3(CH2)4CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu1<5>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 2

[HOOC(CH2)4CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, A<rg9,>Abu'<5>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 3

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ar<g9,>Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 4

[HOOC(C<H>2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 5

[CH3(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Ha<r29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 6

[HOOC(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<16>, Nle27, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 7

[CH3(CH2)10CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ar<g9,>Abu<16>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 8

[HOOC(CH2)10CO-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>,Arg<9>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 9

[CH3(C<H>2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, A<rg9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 10

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 11

[CH3(CH2)14CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 12

[HOOC(CH2)14CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 13

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, Har<28>, D-Arg<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 14

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, Har<28>, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2 Peptid 15

[CH3(CH2)14CO-Phe°, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, A<rg9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 16

[CH3(CH2)14CO-D-Phe°, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 17

[PhAc-Arg°, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 18

[PhAc-D-Arg°, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ar<g9,>Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 19

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 21

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Cit9, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 22

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle<27>, Har<28>, D-Arg29]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 23

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Cit<9>, Abu<15>, Nle<27>, Har28, D-Arg<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 24

[HOOC-(CH2)12-CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Cit8, Cit<9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<23>, Har^hGH-RHO-29)NH2Peptid 25

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, D-Ala<8>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 26

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Abu<8>, Ar<g9,>Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 27

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<9>, Abu<15>, Nle<27>, Har<28>, D-Arg29] hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 28

[PhAc-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Amp<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 30

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Amp<10>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 31

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, His<10,>Abu<16>, Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 P^ptkT32

[PhAc-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Cha<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 33

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tpi<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 34

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, 2-Nal<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 35

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Dip<10>, Abu<16>, Nle2<7>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 36

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Phe(pNH2)<10>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 37

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Trp<10>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 38

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Phe(pN02)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 39

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, 3-Pal<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 40

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Et)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 41

[PhAc-His<1>, D-Arg<2>,Tyr<6>, Har<9>, Bpa<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 42

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Har<12>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 43

[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 45

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<16>, Nle27, D-Arg<28>, Har^hGH-RHO-29)NHEt Peptid 46

[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^JhGH-RHO -29)NHEt Peptid 47

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 48

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10, Aib<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29) NHEt Peptid 49

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<1Q>, Orn12,Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 50

[Hca-Tvr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Agm<29>]h<G>H-RH(1-29)

Peptid 51

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Agm<29>]hGH-RH(1-29)

Peptid 52

[Hca-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29 Har^hGH-RHfl-

30) NH2 Peptid 53

[Dat-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29 Har30]hGH-RH(1-

30)NH2Peptid 54

[lpa-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10, Abu1<5>, Nle<27>, D-Arg28, Har29 Har30]hGH-RH(1-

30)NH2Peptid 55

[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg28, Har29 Har30]hGH-RH(1-30)NHEt Peptid 56

[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, D-Arg29 Har30]hGH-RH(1-

30)NH2Peptid 57

[Hca-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29 D-Arg30]hGH-RH(1-

30)NH2Peptid 58

[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29 Agm30]hGH-RH(1-

30) Peptid 59

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>Agm<30>]hGH-RH(1-30) Peptid 60

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle27 D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-

29)NH2Peptid 62

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)1<0>,Har<11>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 63

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Amp<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28,Har^hGH-RH(1-29)NH2 Peptid 64

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<8>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Cit11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28,Har<29>]hGH-RH(1-

29)NH2Peptid 65

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-

29)NH2Peptid 84

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, His<11>, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 85

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<5>, A<rg9>, Cit<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 90.

Zapaženo je da aminokiselinski ostaci od 30 do 44 nativnog GH-RH molekula

izgleda nisu od značaja za aktivnost; niti izgleda da je njihova istovetnost presudna. Zbog toga, proizilazi da dodavanje tih sledećih, pojedinih ili svih, aminokiselinskih ostataka na C-

kraj hGH-RH(1-29)NH2i hGH-RH(1-30)NH2analoga ovog pronalaska neće uticati na efikasnost ovih analoga kao antagonista GH-RH. Ukoliko su pojedine ili sve od tih aminokiselina dodate na C-kraj hGH-RH(1-29)NH2analoga, dodati aminokiselinski ostaci mogli bi biti isti kao ostaci 30 do 44 u nativnoj hGH-RH sekvenci ili odgovarajući ekvivalenti.

Sintetski postupci

Sintetski peptidi su sintetisani pogodnim postupkom, kao što su tehnike isključivo čvrste faze, tehnike delimično čvrste faze, fragmentarnom kondenzacijom ili klasičnom sintezom u rastvoru.

Kada su analozi ovog pronalaska sintetisani postupkom čvrste faze, ostatak C-

kraja (ovde, A<29>ili A<30>) je prikladno vezan (pričvršćen) na inertni čvrsti nosač (smola),

noseći, za to vreme, zaštitne grupe za njihovu alfa amino grupu (i, gde je to pogodno, za funkcionalnu grupu njihovog bočnog lanca). Po završetku ovog koraka, alfa amino zaštitna grupa je uklonjena sa pričvršćenog aminokiselinskog ostatka i dodat je sledeći aminokiselinski ostatak, A<28>, odnosno A<29>, čija alfa amino grupa (kao i bilo koja odgovarajuća funkcionalna grupa bočnog lanca) je pogodno zaštićena, i tako dalje. Zaštitne grupe N-kraja su uklonjene pošto je svaki ostatak dodat, ali zaštitne grupe bočnog lanca

nisu još uklonjene. Nakon što su sve željene aminokiseline bile vezane prema tačnoj

sekvenci, peptid je otcepljen sa nosača i oslobođen svih zaštitnih grupa bočnog lanca pod

uslovima koji su minimalno destruktivni prema ostacima u sekvenci. Iza ovog je usledilo pažljivo prečišćavanje i savesna karakterizacija sintetskog proizvoda, tako da se potvrdi da je željena struktura zaista ona koja je dobijena.

Posebno je poželjno da se zaštiti alfa amino funkcija aminokiselina tokom koraka kuplovanja sa zaštitnom grupom osetljivom na kiselinu ili bazu. Takve zaštitne grupe trebalo bi da imaju svojstva da su stabilne u uslovima obrazovanja peptidne veze, dok bi njihovo uklanjanje bilo jednostavno, bez razaranja rastućeg lanca peptida i bez racemizacije bilo kog od hiralnih centara, sadržanih u njima. Pogodne alfa amino zaštitne grupe su Boe i Fmoc.

Primene u medicini.

Antagonistički peptidi hGH-RH, ili soli ovih peptida, mogu biti formulisani u farmaceutske dozne oblike, koji sadrže njihove efektivne količine, i primenjeni ljudima ili životinjama u terapeutske ili dijagnostičke svrhe. Peptidi mogu biti upotrebljeni da bi suprimirali nivoe GH i lečili stanja povezana sa prekomernim koncentracijama GH, npr., dijabetična retinopatija i nefropatija i akromegalija. Takođe su dati postupci lečenja ovih bolesti primenom smeše pronalaska jedinci, kojoj treba takvo lečenje. Glavne primene antagonista GH-RH su, međutim, u oblasti malignih bolesti, primera radi, u oblasti, humanih kancera pluća, prostate, dojke, jajnika, endometrijuma, želudca, debelog creva, gušterače, bubrega, kostiju i mozga, gde su prisutni receptori za GH-RH, IGF-I/IGF-II ili GH i, koji zavise od stimulacije faktorima rasta, kao što su GH-RH, IGF-I, IGF-II ili VEGF.

DETALJAN OPIS POŽELJNIH OSTVARENJA

A. Skraćenice

Nomenklatura, koja je korišćena za definisanje peptida, je ona koja je specificirana posredstvom IUPAC-IUB, Komisije za nomenklaturu u biohemiji, u kojoj se, u skladu sa konvencionalnim prikazivanjem, amino grupa na N-kraju pojavljuje levo, a kaboksilna grupa na C-kraju pojavljuje desno. Izraz "prirodna aminokiselina", kao što je ovde korišćen, označava jednu od običnih, u prirodi postojećih L-aminokiselina, koje su nađene u proteinima koji postoje u prirodi: Gly, Ala, Val, Leu, lle, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gln, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp i His. Kada ostatak prirodne aminokiseline ima izomerne forme, to je L-oblik aminokiseline, koja je ovde predstavljena, ukoliko nije izričito drugačije naznačeno.

Ne-kodirane aminokiseline ili analozi aminokiselina, takođe su uključeni u GH-RH antagoniste. ("Ne-kodirane" aminokiseline su one aminokiseline, koje se ne nalaze među približno 20 prirodnih aminokiselina, koji se nalaze u proteinima koji postoje u prirodi.) Kada ove ne-kodirane aminokiseline ili analozi aminokiselina, imaju izomerne forme, to je L-oblik aminokiseline, koja je predstavljena, ukoliko nije izričito drugačije naznačeno.

Ovde korišćene skraćenice su:

Abu alfa-aminobuterna kiselina

Ac acetil

AcOH sirćetna kiselina

Ac20 anhidrid sirćetne kiseline

Agm agmatin

Aib alfa-aminoizobuterna kiselina

Ali alil

Alloc aliloksikarbonil

Amp para-amidino-fenilalanin

Bpa para-benzoil-fenilalanin

Boe terc-butiloksikarbonil

Bom benziloksimetil

2BrZ 2-bromo-benziloksikarbonil Bzl benzil

Cha cikloheksilalanin

Chg cikloheksilglicin

cHx cikloheksil

Cit citrulin (2-amino-5-ureidovalerijanska kiselina) 2CIZ 2-hloro-benziloksikarbonil Dat dez-amino-tirozin

DCM dihlorometan

DIC N,N'-diizopropilkabodiimid

DIEA diizopropiletilamin

Dip (3,3-difenil)alanin

DMF dimetilformamid

Et etil

Fm fluorenilmetil

Fmoc fluorenilmetoksikarbonil

For formil

GH hormon rasta

GH-RH hormon oslobađanja GH

Gup para-gvanidino-fenilalanin

Har homoarginin

HBTU 2-(1 H-benzotriazol-1 -il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum

heksafluorofosfat

Hca hidrocinamoil

Hca-OH hidrocinamska kiselina

hGH-RH humani GH-RH

HOBt 1-hidroksibenzotriazol

HPLC tečna hromatografija pod visokim pritiskom Ibu izobutiril

IndAc indol-3-acetil

Ipa indol-3-propionil

MBHA para-metilbenzhidrilamin

Me metil

MeOH metanol

MeCN acetonitril

Nac naftilacetil

Nal naftilalanin

Nle norleucin

NMM N-metilmorfolin

Npr naftilpropionil

Orn ornitin

Pal piridilalanin

PAM fenilacetamidometil

Ph fenil

PhAc fenilacetil

PhAc-OH fenilsirćetna kiselina

Phe(pCI) para-hloro-fenilalanin

Phe(pNH2) para-amino-fenilalanin

Phe(pNOs) para-nitro-fenilalanin

rGH-RH GH-RH pacova RP-HPLC reverzno fazna HPLC

SPA para-sulfonil-fenoksiacetil

TFA trifluorosirćetna kiselina

Tos para-toluensulfonil

Tpi 1,2,3,4-tetrahidronorharman-3-karboksilna kiselina Tyr(Me) O-metil-tirozin

Tyr(Et) O-etil-tirozin

Z benziloksikarbonil

B. GH-RH analozi

hGH-RH analozi ovog pronalaska su osmišljeni da uvećaju antagonistička ——dejstva na n!vou hipof!ze n!v&u—tm'nora. Nckt- od ovih anatoga, kao što su: Pept!d ?._____ Peptid 7, Peptid 21, Peptid 30, Peptid 31, Peptid 37, Peptid 41, Peptid 42, Peptid 62,

Peptid 67 i Peptid 69, poseduju visoke endokrine antagonističke mogućnosti, prouzrokujući veoma delotvornu i dugotrajnu inhibiciju oslobađanja GH koju stimuliše hGH-RH(1-29)NH2in vitro i in vivo i ispoljavaju visok afinitet vezivanja za GH-RH receptore hipofize. Neki analozi, kao što su: Peptid 4, Peptid 5, Peptid 7, Peptid 11, Peptid 22, Peptid 35, Peptid 36, Peptid 39, Peptid 41, Peptid 62, Peptid 67, Peptid 69, Peptid 70, Peptid 72, Peptid 76, Peptid 77, Peptid 79, Peptid 80, Peptid 86, Peptid 95, Peptid 96 i Peptid 97 otkrivaju uvećanu snagu inhibiranja tumora i pokazuju izrazito visok afinitet vezivanja za tumorske receptore za GH-RH. Peptidi ovog pronalaska su, takođe, tako osmišljeni da se poboljšaju njihove hemijska i metabolička stabilnost.

Sledeća ostvarenja su posebno poželjna s obzirom na njihovu izvanrednu bioaktivnost: [CH3(CH2)4CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 2

[CH3(C<H>2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCi)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 4

[HOOC(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, A<rg9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 5

[CH3(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Arg9 Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 6

[HOOC(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 7

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 11

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu15, Nle<27>, Har<28>, D-Arg<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 14

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle2<7>, Har<28>, D-Arg29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 15

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2

__^ptid_21

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Cit<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hQH-RH(1-29)NH2

Peptid 22

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Abu<8>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 27

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<9>, Abu<15>, Nle<27>, Har28, D-Arg<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 28

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Amp<10>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 30

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Amp<10>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 31

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, 2-Nal<10>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 35

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<8>, Har<9>, Dip<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2

Peptid 36

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Phe(pNH2)<10>, Abu15,Nle<27>,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-

29)NH2Peptid 37

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Phe(pN02)<10>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-

29)NH2Peptid 39

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Et)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 41

[PhAc-His1, D-Arg<2>, Tyr<6>, Har<9>, Bpa<1D>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 42

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 46

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har^hGH-RHO-

29)NH2Peptid 62

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle27 D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-

29)NH2Peptid 67

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2

Peptid 138

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, His<9>, Tyr(Me)10, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 69

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCi)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 70

[HOOC(CH2)8<C>O-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>,Tyr(Me)<10>, Abu15,Nle<27>,D-Arg2<8>,Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 71

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 72

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>,Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His11,Abu<15>, Nle27,D-Arg28,Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 73

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>,Phe(pCI)<5>, Cit<8>,Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His11,Abu<15>, Nle27,D-Arg28,Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 74

[1-Nac-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>,Amp<9>, Tyr(Me)<i0>, His11, Abu<15>, Nl<e27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 75

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 76

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Amp<9>,Tyr(Me)<10>, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 77

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 78

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 79

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 80

[HOOC(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 81

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)10,His<11>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 82

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 84

[PhAc-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har9, Tyr(Me)<10>, His11,Abu16, His<20>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 85

[CH3(CHa)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<1>0, His<11>, Abu<16>, His<20>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 86

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Am<p9>, Tyr(Et)10, His<11>, Abu<15>, His<20>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 87

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, His<20>, Nle27,D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 88

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala8,Amp9, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg28 Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 89

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Arg<9>, Cit<15>, Nle<27>, D-Arg<2e>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 90

[1-Nac-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH^-29)NH2 Peptid 91

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)6, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 92

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Cit15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 93

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, His15, His<2>0, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 94

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Om<12>, Abu<16>, Om21,Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 95

[CH3(CH2)6CO-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 96

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt Peptid 97

[CH3(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 98

[CH3(CH2)10CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9,>Tyr(Et)10, His<11>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 99

[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, Nle<27>,D-Arg<28>,Har^hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 100

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>,D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHMe Peptid 101

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His<11>, Orn<12>,Abu<15>,His<20>,

Om<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 102

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Am<p9,>Tyr(Et)10 His11, Orn12,Abu<15>, His20,Orn<21>,

Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 103

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Dip<10>, His<11>, Orn12,Abu<15>,His<20>,Orn<21>,

Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 104

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His9, Phe(pN02)<10,>His11, Orn<12>,Abu<15>, His<20>,

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 105

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<1>0, His<11>, Orn<12>, Abu<15>,His20,Orn<21>,

Nle27 D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt Peptid 106

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>,His<11>, Orn12,Abu<15>,His<20>,

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 107

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Dip<10>, His<11>, Orn12,Abu<15>,His20,Orn<21>,

Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 108

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>,His<9>, Phe(pNO2)<i0>, His<11>,Orn<12>,Abu<15>,His<20>,

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 109

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>,His11,Orn<12>,Abu<15>,His20,

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 110

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>,Dip<10>,His<11>,Orn<12>,Abu<15>,His20,Om21,

Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 111

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp9, Phe(pN02)<1>°, His11, Orn<12>,Abu<15>,His<20>,

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 112

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Orn<12>,Abu<15>,His20,Orn21,

Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 113

[ CH3( CH2) 6CO- Tyr1, D- Ar g2, Phe( pCI)6, Ala<8>, His<3>, Dip<10>, His<11>,Orn<12>, Abu<15>,His<20>,Orn21,

Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt Peptid 114

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Phe(pNO2)<i0>, His11,Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt Peptid 115

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp<9>,Dip10, His1<1>,Om12,Abu<15>, His20,Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 116

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp<9>,Phe(pN02)<10>, His11,Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2 Peptid 117

[CH3(CH2)BCO-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Dip<10>, His11, Orn12,Abu<15>, His20,Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 118

[CH3(CH2)eCO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8 Amp<9>, Phe(pN02)<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt Peptid 119

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Am<p9>, Dip<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^JhGH-RHO-29)NHEt Peptid 120

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>,Phe(pN02)<10>, His11,Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1 -29)NHEt Peptid 121

Trideset veoma poželjnih ostvarenja ima formulu: CH3(CH2)6CO-Tyr<1->D-Arg<2-A>sp<3->Ala<4>-lle<5->Phe(pCI)<e->Thr<7>-Asn<8->Arg<9>-Tyr<10->Arg<11->Lys<12->Var<3->Leu<14->Abu^-GIn^-Leu^-Ser^-Ala^-Arg^-Lvs^-Leu^-Leu^-GIn^Asp^-lle^-Nle^-D-Arg^-Ha^-NH, Peptid 4 HOOC(CH2)6CO-Tyr<1->D-Ar<g2-A>sp<3->Ala<4>-lle<5->Phe(pCI)<6->Thr<7>-Asn<8->Arg<9->Tyr<10->Arg11-Lys<12->Var<3->Leu<u->Abu<15->Gln<16->Leu<17->Ser<18->Ala<19->Arg<20->Lys<21->Leu<22->Leu<23->Gln<24->Asp<25->lle<26->Nle<27->D-Arg<28->Har<29->NH2Peptid 5 HOOC(CH2)8CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe(pC0 Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-A^ NH2Peptid 7 HOOC(CH2)12CO-Tyr<1->D-Arg<2>-Asp<3>-Ala<4->lle<6->Phe(pCI)<6->Thr<7->Asn<8->Arg<9>-Tyr<10->Arg<11->Lys<12->Var<3->Leu<14->Abu<15->Gln16-Leu<17->Ser1<8>-Ala<19->Arg<20->Lys<21->Leu<22->Leu<23->Gln<24->Asp<25->lle<26->Nle27-D-Arg<28->Har<29->NH2Peptid 11

PhAc-Tyr<1->D-Arg<2->Asp<3->Ala<4->lle<5->Phe(pCI)<6->Thr<7->Cit<8->Arg<9->Tyr<10->Arg<n->Lys<12->Val<13->Leu<14->Abu<15->Gln<16->Leu<17->Ser<18->Ala<19->Arg<2>0-Lys2<1->Leu<22->Leu<23->Gln<24->Asp<2S->lle<2e->Nle27-D-Arg<28->Har<29->NH2

Peptid 21

PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe(^ Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-^ Peptid 22 PhAcTyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe(pCI)6-Thr7-Asn8-Arg9-Amp10-Arg11-Lys12-^ Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-lle26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 Peptid 30 PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe^ Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-^ Peptid 31 PhAcTyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe(pCO Gln<16->Leu<17->Ser18-Ala<19->Arg20-Lys<21->Leu<22->Leu<23->Gln<24->Asp25-lle<26->Nle<27->D-Arg<28>-Har<29->NH2Peptid 35 PhAcTyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe(p^ Gln<16->Leu<17->Ser<18->Ala<19->Arg<20->Lys<21->Leu<22->Leu<23->Gln<24->Asp<25->lle<26->Nle<27->D-Arg<28->Har<29->NH2Peptid 36 PhAcTyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe(pC^ Abu^-GIn^-Leu^-Ser^-Ala^-Arg^-Lvs^-Leu^-Leu^-Gin^-Asp^-lle^-Nle^-D-Arg^-Har^-NH, Peptid 37 PhAcTyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lles-Phe(pCI)6-^ Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20^ Peptid 39 PhAcTyr<1->D-Arg<2->Asp<3->Ala<4->ile<6->Phe(pCI)Thr<7->Asn<8->Har<s->Tyr(Et)<10->Arg<11->Lys<12->Val<13->Leu<14>^Abu^-GIn^-Leu^-Ser^-Ala^-Arg^Lvs'^Leu^-Leu^GIn^-Asp^lle^Nle^-D-Arg^-Ha^-NH, Peptid 41 P hAc-His1-D-Arg2-Asp3-Ala4-1 le5-Ty r6-T^ ^ Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-lle26-Nle27-D-Arg28-Har29-NH2 Peptid 42 PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe^^ Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-lle26-Nle27-D-Arg28-Har29-N Peptid 46

PhAcTyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe(pCI)6-Thr7-Asn8-Har9Tyr(Me)10-His11-Lys12-Va Abu15-Gln16-LW7-Ser18-Ala19-Ar^

Peptid 62

PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-P^ Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Alai9-Arg20^

Peptid 67

PhAc-Tyr<1->D-Arg<2->Asp<3->Ala<4->lle<5->Phe(pCI)<6->Thr<7->Asn<8->His<9->Tyr(Me)<10->Arg<11->Lys<12->Val<13->Leu<14->Abu16-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg^

Peptid 69

CH3(CH2)6COTyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4^ Leu<14->Abu<15->Gln<16->Leu<17->Ser<18->Ala<19->Arg<2>0-Lys2<1->Leu<22->Leu<23->Gln<24->Asp<25->lle<26->Nle27-D-Arg<28->Har<29->

NH2Peptid 70

HOOC(CH2)12COTyr<1->D-Arg<2->Asp<3->Ala<4->lle<5->Phe(pCI)<6->Thr<7->Asn<8->Amp<9->Tyr(Me)<10->Arg<11->Lys<12->Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala^^ Har<29->NH2Peptid 72

CH3(CH2)6COTyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lte^ Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Ara^^^

NH2Peptid 76

HOOC(C<H>2)12CO-Tyr<1->D-Arg<2->Asp<3->Ala<4->lle<6->Phe(CI)<6->Thr<7->Cit8-Amp<9->Tyr(Me)<10->His11-Lys12-Val13-Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser1W Har29-NH2 Peptid 77

CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-A^ Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg^

NH2Peptid 79

CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-A^ Leuu-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg^

NH2Peptid 80

HOOC(CH2)12COTyr1-D-Arg2^

Leu^-Abu^-GIn^-Leu^-Ser^-Ala^-Arg^-Lvs^-Leu^-Leu^-GIn^-Asp^-lle^-Nie^-D-Arg^-Har<29->NH2 Peptid 82

CH3(CH2)6COTyr1-D-Arg2-Asp3-A^ Leu,4-Abu15-Gln16-Leu17-Seri8-Ala19-His^

NH2Peptid 86

CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-l^ Leu^-Abu^-GIn^-Leu^-Ser^-Ala^-Arg^-Lvs'^Leu^-Leu^-GIn^-Asp^-lle^-Nle^-D-Arg^-Har<29->

NH2Peptid 92

CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg^ Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19^^^

NH2Peptid 95

CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe^ Leu14-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-His2C-0m*^^^

NH2Peptid 96

CH3(CH2)6CO-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle^ Leuu-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu22-Leu23-Gln24-Asp25-lle26-Nle27-D-Ara

NHEt Peptid 97

Prema dobro utvrđenom pravilu, ovi mogu biti skraćeni na sledeći način:

[CH3(C<H>2)6CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 4

[HOOC(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 5

[HOOC(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<16>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 7

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Cit<8>, Arg<9>, Abu16, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 21

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Cit<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg2<8>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 22

[PhAc-Tyr1, £>^ag2T-£be(pCI)6, Arg9, Amjj^biJ^J^Lj^A rg28. Har29] hGH- RH( 1- 29)NH2

Peptid 30

[PhAc-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Amp<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 31

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, 2-Nal<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 35

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<8>, Har<9>, Dip<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 36

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Phe(pNH2)<10>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>,Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 37

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har9, Phe(pN02)<10>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 39

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Et)10, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2

Peptid 41

[PhAc-His<1>, D-Arg<2>, Tyr<6>, Har<9>, Bpa<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2

Peptid 42

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu15,Nle27, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 46

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^jhGH-RH^-29)NH2Peptid 62

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28,Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 67

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, His<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 69

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<8>, Am<p9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 72

[CH3(CH2)6CO-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 76

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Cit<8>,Amp<9>, Tyr(Me)<10>,His<11>, Abu15,Nle2<7>,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptidi

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Cit8, His<9>, Tyr(Et)10,His<11>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 79

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 80

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)10, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 82

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 86

[CH3(CH2)eCO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, His9, Tyr(Et)10,His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^jhGH-RH^-29)NH2 Peptid 92

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, Om<21>, Nle<27>, D-Arg<26>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 95

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Orn<12>, Abu<16>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 96

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His<11>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt Peptid 97

C Postupak izrade

1. Pregled sinteze

Peptidi su sintetisani pogodnim postupcima, kao što su: tehnike isključivo čvrste faze, tehnike delimično čvrste faze, fragmentarna kondenzacija ili klasična sinteza u rastvoru. Na primer, sintetske tehnike isključivo čvrste faze su navedene u udžbeniku "Solid Phase Peptide Synthesis", J.M. Stevvart and J.D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, Illinois, 1984 (2nd. ed.) i M. Bodanszky, "Principles of Peptide Synthesis", Springer Verlag, 1984. Peptidi, koji su antagonisti hGH-RH, poželjno su pripremljeni korišćenjem sinteze čvrste faze, kao što je ona koju je uopšteno opisao Merrifield u J.Am.Chem.Soc., 85 p. 2149 (1963), mada i druge, u struci poznate, ekvivalentne hemijske sinteze, mogu, isto tako, biti upotrebljene kao prethodno pomenute.

Sinteza je izvedena sa aminokiselinama, koje su zaštićene na njihovoj alfa amino grupi. Zaštitne grupe tipa uretana (Boe ili Fmoc) poželjno su korišćene za zaštitu alfa amino grupe.

U sintezi čvrste faze, N-alfa-zaštićeni aminokiselinski deo, koji obrazuje aminoacil grupu finalnog peptida na C-kraju je vezan za nosač polimerne smole preko hemijske veze. Posle završetka reakcije kuplovanja, alfa amino zaštitna grupa je selektivno uklonjena, kako bi se omogućilo izvođenje narednih reakcija kuplovanja na amino-kraju, poželjno sa 50% TFA u DCM kada je N-alfa-zaštitna grupa Boe, ili sa 20% piperidinom u DMF kada je N-alfa-zaštitna grupa Fmoc. Preostale aminokiseline sa istovetno, Boe ili Fmoc-zaštićenim alfa amino grupama kuplovane su postepeno na slobodnu amino grupu prethodne aminokiseline na smoli, da bi se dobila željena peptidna sekvenca. Budući da su aminokiselinski ostaci kuplovani na alfa amino grupu C-kraja ostatka, rast sintetskih peptida, analoga hGH-RH, počinje na C-kraju i napreduje prema N-kraju. Kada je dobijena željena sekvenca, peptid je acilovan na N-kraju i uklonjen sa polimernog nosača.

Svaka zaštićena aminokiselina je upotrebljena u višku (2.5 ili 3 ekvivalenta), a reakcije kuplovanja su uglavnom izvedene u DCM, DMF ili njihovim mešavinama. Stepen kompletiranosti reakcije kuplovanja praćen je na svakom koraku pomoću ninhidrinske reakcije. U slučajevima, gde je utvrđeno nepotpuno kuplovanje, procedura kuplovanja je ponovljena ili je izvršeno pokrivanje acetilacijom neizreagovanih amino grupa, pre uklanjanja alfa amino zaštitne grupe, što prethodi kuplovanju sledeće aminokiseline.

Tipični ciklusi sinteze su prikazani u Tabeli I i Tabeli II.

Po završetku sinteze, uklanjanje peptida sa smole, može biti obavljeno korišćenjem procedura, koje su u oblasti peptidne hernije, dobro poznate.

2. Izbor polimera nosača

Peptidi, koji su antagonisti hGH-RH, mogu biti sintetisani na raznolikim polimerima nosačima, t.j., MBHA, Merrifield, PAM, Rink amid ili Wang smole. Peptidi,

takođe, mogu biti sintetisani na aminometilu, MBHA ili drugim smolama, koje su prethodno bile izvedene sa pogodnim sponama. Primeri takvih spona su bazno-labilna 4-hidroksimetil benzojeva kiselina (HMBA) spona za vezivanje C-terminalnih karboksilnih grupa ili kiselo-

labilna para-sulfonil-fenoksiacetil (SPA) spona, koja dopušta pričvršćivanje agmatina preko njegove gvanidino grupe.

Kada su peptidi sa amidovanim C-krajem sinetisani korišćenjem Boe strategije, poželjna smola je MBHA. Vezivanje C-torminalne aminokisolino na ovu smolu može biti izvedeno standarnim postupkom kuplovanja, koji je posredovan DlC-om i opisan u Tabeli I.

Kako bi se izradili peptidi sa C-terminalnom etilamidnom (-NHEt) modifikacijom, mogu se koristiti Merrifield smola ili HMBA-MBHA smola zajedno sa Boe strategijom. Punjenje C-terminalne aminokiseline na Merrifield smolu izvedeno je kuplovanjem, koje je posredovano kalijum fluoridom (KF) ili cezijumovom solju, na povišenoj temperaturi.

Za sintezu peptida, koji imaju Agm na C-kraju, poželjno je da je faza-nosač MBHA smola ili aminometil smola. Gvanidino grupa Boc-Agm-a je vezana na polimer nosač preko stabilne spone, koja se lako može raskinuti, kao što je para-sulfonil-fenoksiacetilni (SPA) deo. Alfa-amino-Boc-zaštićeni Agm je reagovao sa hlorosulfonil fenoksisirćetnom kiselinom CI-S02-CeH4-0-CH2-COOH, da bi se obrazovao Boc-Agm-S02-C6H4-0-CH2-COOH. Ovo jedinjenje je zatim kuplovano na polimerni nosač, npr., MBHA smolu, korišćenjem DlC-a ili HBTU-HOBt-DlEA, kao reagensa za aktivaciju, da bi se proizveo Boc-Agm-SPA-MBHA.

3. Korišćeni aminokiselinski derivati

Bifunkcionalne aminokiseline, tj., one, koje imaju funkcionalne grupe bočog lanca, najviše su korišćene u obliku njihovih N-alfa Boe- ili Fmoc- derivata za sintezu. Tako, Boc-Gly-OH ili Fmoc-Gly-OH je obično korišćen za uključivanje Gly ostatka. Bifunkcionalne aminokiseline, koje postoje u prirodi su: Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe i Pro, a neke dobro poznate, ne-kodirane bifunkcionalne aminokiseline, korišćene u ovom pronalasku su: Abu, Aib i Nle.

Neki od aminokiselinskih ostataka peptida imaju funkcionalne grupe bočnog lanca, koje reaguju sa reagensima, korišćenim u kuplovanju ili uklanjanju zaštite. Kada su takve grupe bočnog lanca prisutne, na ove funkcionalne grupe su vezane pogodne zaštitne grupe, kako bi se sprečile neželjene hemijske reakcije, koje se dešavaju tokom reakcija, korišćenih za obrazovanje peptida. Pri izboru pojedinačne zaštitne grupe bočnog lanca praćena su sledeća opšta pravila: (a) zaštitna grupa poželjno zadržava svoje zaštitne karakteristike i ne odvaja se pod uslovima kuplovanja, (b) zaštitna grupa bi trebalo da bude stabilna pod uslovima uklanjanja alfa amino zaštitne grupe na svakom koraku sinteze, (c) zaštitnu grupu bočnog lanca mora biti moguće ukloniti po završetku sinteze željene aminokiselinske sekvence, pod reakcionim uslovima, koji neće neželjeno izmeniti peptidni lanac.

Kada su u sintezi korišćene Boc-aminokiseline, reaktivne funkcionalne grupe bočnog lanca mogu biti zaštićene na sledeći način: Tos ili nitro (N02) za Arg i Har; cHx ili Fm za Asp i Glu; Bom za His; 2CIZ ili Fmoc za Lys i Orn; Bzl za Ser i Thr; For za Trp; i 2BrZ za Tyr. Bočni lanci Asn i Gln su nezaštićeni. U slučaju Fmoc sinteze, reaktivne funkcionalne grupe bočnog lanca mogu biti zaštićene drugim pogodnim zaštitnim grupama na sledeći način: 2,2,4,6,7-pentametil-dihidrobenzofuran-5-sulfonil (Pbf) ili bis-Boc za Arg i Har; terc-butil (tBu) za Asp i Glu; bez zaštitne grupe ili zaštita tritilom (Trt) za Asn i Gln; Trt za His; Boe ili 4-metoksitritil (Mmt) za Lys i Orn; tBu ili Trt za Ser i Thr; Boe za Trp; i tBu ili 2-hlorotritil (2CITrt) za Tyr.

Osim širom sveta poznatih, gore pomenutih, kodiranih i nekodiranih aminokiselina, neki od peptida ove prijave sadrže manje uobičajene ne-kodirane aminokiseline, kao što su para-amidino-fenilalanin (Amp); para-gvanidino-fenilalanin (Gup); cikloheksilalanin (Cha); 1,2,3,4-tetrahidronor-harman-3-karboksilna kiselina (Tpi); (2-naftil)alanin (2-Nal); (3,3-difenil)alanin (Dip); para-amino-fenilalanin [Phe(pNH2)]; para-nitro-fenilalanin [Phe(pN02)]; (3-piridil)alanin (3-Pal); O-etil-tirozin [Tyr(Et)] i para-benzoil-fenilalanin (Bpa). Ovi aminokiselinski ostaci su ugrađeni u peptide kuplovanjem pogodnih zaštićenih aminokiselinskih derivata. Lista takvih zaštićenih aminokiselinskih derivata, koji mogu biti upotrebljeni, a koja nije isključiva, je sledeća: Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Amp-OH, Fmoc-Amp(Alloc)-OH, Fmoc-Amp-OH, Boc-Gup(Tos)-OH, Boc-Gup-OH, Fmoc-Gup(Boc)2-OH, Fmoc-Gup-OH, Boc-Cha-OH, Boc-Tpi-OH, Boc-2-Nal-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Phe(pNH-Z)-OH, Boc-Phe(pN02)-OH, Boc-3-Pal-OH, Boc-Tyr(Et)-OH i Boc-Bpa-OH. Gore pomenuti zaštićeni derivati nekodiranih aminokiselina, obično se mogu nabaviti od nekolicine komercijalnih snabdevača, uključujući Bachem (King of Prussia, PA), Peptides International (Louisville, KY), Novabiochem (San Diego, CA), Advanced ChemTech (Louisville, KY) i RSP Amino Acid Analogues DBA (VVorcester, MA).

4. Postepeno kuplovanje aminokiselinskih ostataka

Koristeći, gore pomenute, polimere nosače, a posle punjenja C-terminalnog aminokiselinskog ili Agm ostatka, sam peptid može pogodno biti izgrađen sintezom čvrste faze, na konvencionalni način. Svaka zaštićena aminokiselina je kuplovana u otprilike trostrukom molarnom višku, s obzirom na slobodne amino ostatke vezane za smolu, a kuplovanje može biti izvedeno u medijumu, kao što je DMF-DCM (1:1) ili u samom DMF ili DCM. Izbor odgovarajućeg reagensa za kuplovanje je u okviru stručnosti u ovoj oblasti. Posebno pogodni kao kuplujući reagensi su: N,N'-diizopropil karbodiimid (DIC) ili HBTU kombinovan sa HOBt u prisustvu DIEA. Uspešnost reakcije kuplovanja, na svakom stepenu sinteze, poželjno je praćena ninhidrinskom reakcijom. U slučajevima gde se odvija nepotpuno kuplovanje, ili se postupak kuplovanja ponavlja ili se neizreagovani amino ostaci vezani za smolu aciluju, korišćenjem reagensa za pokrivanje, pre uklanjanja alfa amino zaštitne grupe. Prikladni reagensi za pokrivanje su 1-acetilimidazol i Ac20-piridin.

Završna acilacija N-kraja peptida sa monokarboksilnim kiselinama, urađena je na isti način kao prethodna kuplovanja, s tom razlikom što je, umesto aminokiseline, upotrebljena odgovarajuća karboksilna kiselina. Kada su dikarboksilne kiseline vezane za N-kraj, a poželjno je da samo jedna -COOH grupa reaguje sa amino krajem peptida (to jest, pripremljeni su monoamidi ovih kiselina), za kuplovanje mogu biti upotrebljeni anhidridi odgovrajućih dikarboksilnih kiselina. Ciklični anhidridi mnogih dikarboksilnih kiselina su komercijalno dostupni; u drugim slučajevima prethodno obrazovani anhidridi ovih kiselina su pripremljeni obradom sa DlC-om i korišćeni za kuplovanje. 5. Otcepljivanje peptida sa polimera nosača i uklanjanje zaštitnih grupa bočnog lanca Kada je sinteza završena, peptid je uklonjen sa faze-nosača, a njegove zaštitne grupe bočnog lanca su uklonjene.

U slučajevima gde su peptidi sa amidovanim C-krajem (-CONH2) ili sa C-terminalnom karboksilnom grupom (-COOH) pripremljeni Boe strategijom na MBHA, Merrifield ili PAM smoli, uklanjanje peptida sa smole je izvedeno obradom sa reagensom, kao što je tečni vodonik fluorid (HF). Ovo je, takođe, slučaj sa peptidima sintetisanim na Boc-Agm-SPA-MBHA smoli. U nekim slučajevima, tečni HF otklanja, takođe, sve preostale zaštitne grupe bočnog lanca. Međutim, ukoliko su na peptidu prisutne zaštitne grupe bočnog lanca, otporne na obradu HF-om, bili bi izvedeni dodatni koraci otcepljivanja, kako bi se ove zaštitne grupe uklonile. Tako su, Fm i Fmoc zaštitne grupe uklonjene obradom sa 20% piperidinom u DMF, dok su Ali i Alloc grupe otklonjene obradom sa Pd(PPh3)4katalizatorom i nukleofilnim odstranjivačima, pre ili posle obrade HF-om.

Pogodno, osušena i zaštićena peptid-smola je obrađena mešavinom, koja se sastoji od 1.0 ml_ m-krezola i 10 ml_ anhidrovanog vodonik fluorida po gramu peptid-smole, tokom 60-120 minuta, na 0°C, kako bi se otcepio peptid sa smole i, isto tako, uklonile zaštitne grupe bočnog lanca, osetljive na HF. Posle uklanjanja vodonik fluorida pod strujom azota i vakuumom, slobodni peptidi su precipitirani sa etrom, filtrirani, isprani etrom i etil acetatom, ekstrahovani 50% sirćetnom kiselinom i liofilizovani.

U slučajevima gde su peptidi sa etilamidnim (-NHEt) C-krajem pripremljeni Boe strategijom na Merrifield ili HMBA-MBHA smoli, zaštićeni peptidi su najpre otcepljeni sa smole aminolizom posredovanom etilaminom (EtNH2). Pogodno, tečni EtNH2je prenesen u ohlađeni stakleni balon teških zidova, koji sadrži osušenu i zaštićenu peptid-smolu. Količina tečnog EtNH2trebalo bi da bude dovoljna da prekrije peptid-smolu. Balon je zapušen i mućkan sa tečnim EtNH2tokom 3.5 sata, na sobnoj temperaturi, kako bi se omogućilo odvijanje reakcije. Posle ovoga, balon je ohlađen u suvom ledenom kupatilu, otpušen je, a tečni EtNH2je otfiltriran sa čvrstog ostatka koji sadrži mešavinu smole i otcepljenog peptida, peptida koji još ima pričvršćene zaštitne grupe. Čvrsti ostatak je osušen i podvrgnut obradi sa HF-om, kao što je prethodno opisano, kako bi se uklonile zaštitne grupe bočnog lanca peptida.

6. Prečišćavanje

Prečišćavanje sirovih peptida može biti izvedeno korišćenjem postupaka, koji su dobro poznati u peptidnoj herniji. Na primer, prečišćavanje može biti izvedeno na MacRabbit HPLC sistemu (Rainin Instrument Co. Inc., VVoburn, MA) sa Knauer UV fotometrom i Kipp and Zonen BD40 rekorderom, koristeći Vydac 218TP510 reverzno-faznu kolonu (10x250 mm, punjenu C18 silika gelom, veličine pora 300A, veličine čestica 5 p.m)

(The Separations Group Inc., Hesperia, CA). Kolona je eluirana sistemom rastvarača, koji se sastoji od (A) 0.1% vodenog TFA i (B) 0.1% TFA u 70% vodenom MeCN, na način linearnog gradijenta (npr., 30-55% B u 120 min). Eluent je praćen na 220 nm, a frakcije su ispitane pomoću analitičke HPLC, koristeći Hewlett-Packard Model HP-1090 tečni hromatograf i spojene, kako bi se dobila maksimalna čistoća. Analitička HPLC je izvedena na Vydac 218TP52 reverzno-faznoj koloni (2x250 mm, C18, 300A, 5 u.m), koristeći izokratsku eluciju sa sistemom rastvarača, koji se sastoji od, gore definisanih (A) i (B).

Pikovi su praćeni na 220 i 280 nm. Peptidi su, analitičkom HPLC, ocenjeni kao suštinski (>95%) čisti. Njihove molekularne mase su proverene elektrosprej masenom spektrometrijom, a očekivani aminokiselinski sastavi su potvrđeni analizom aminokiselina.

D. Farmaceutske smeše i način primene

Peptidi pronalaska mogu biti primenjeni u obliku farmaceutski prihvatljivih, netoksičnih soli, kao što su soli, koje se obrazuju dodavanjem kiseline. Ilustrativni primeri takvih soli obrazovanih dodavanjem kiselina su: hidrohlorid, hidrobromid, sulfat, fosfat, fumarat, glukonat, tanat, maleat, acetat, trifluoroacetat, citrat, benzoat, sukcinat, alginat, pamoat, malat, askorbat, tartarat i slično. Posebno poželjni antagonisti su soli slabe rastvorljivosti, npr., pamoatne soli i slične. One ispoljavaju dugotrajno dejstvo.

Jedinjenja ovog pronalaska su prikladno primenjena ispitanicima, ljudima ili životinjama: subkutano (s.c), intramuskularno (i.m.) ili intravenski (i.v.); intranazalno ili putem plućne inhalacije; transdermalnim oslobađanjem ili u depo obliku (npr., mikrokapsule, mikrogranule ili implanti oblika cilindrične palice), formulisana iz biorazgradljivog pogodnog polimera (kao što je D,L-laktid-koglikolid), pri čemu su poželjna poslednja dva depo načina. Drugi ekvivalentni načini primene su, takođe, u okviru ovog pronalaska, t.j., kontinuirana infuzija, kožni flasteri, depo injekcije, infuziona pumpa i načini oslobađanja tokom vremena, kao što su mikrokapsule i slično. Primena je u bilo kom fiziološki prihvatljivom nosaču, koji se može injicirati, pri čemu je fiziološki slani rastvor prihvatljiv iako i drugi, u struci poznati nosači mogu, takođe, biti upotrebljeni.

Peptidi se poželjno primenjuju parenteralno, intramuskularno, subkutano ili intravenski, sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, kao što je izotonični slani rastvor. Alternativno, peptidi mogu biti primenjeni u vidu intranazalnog spreja, sa pogodnim nosačem ili putem pulmonalne inhalacije. Jedan pogodan način primene je depo oblik, formulisan iz biorazgradljivog pogodnog polimera, npr., poli-D,L-laktid-koglikolida, u vidu mikrokapsula, mikrogranula ili cilindričnih implanata, koji sadrže dispergovana antagonistička jedinjenja.

Potrebna količina peptida zavisi od tipa farmaceutske smeše i od načina primene. U slučajevima gde humani ispitanici primaju rastvore antagonista GH-RH koji su primenjeni putem i.m. ili s.c injekcije ili u obliku intranazalnog spreja ili plućnom inhalacijom, tipične doze su između 2 i 20 mg/dan/pacijent, date jednom dnevno ili podeljene u 2-4 primanja na dan. Kada su antagonisti GH-RH primenjeni intravenski humanim pacijentima, tipične doze su u rasponu 8-80 ug/kg telesne mase/dan, podeljene u 1-4 bolus injekcije/dan ili date u vidu kontinuirane infuzije. Kada su depo preparati antagonista GH-RH korišćeni, npr., pomoću i.m. injekcija pamoatnih soli ili drugih soli slabe rastvorljivosti ili putem i.m. ili s.c. primene mikrokapsula, mikrogranula ili implanata koji sadrže antagonistička jedinjenja raspršena u biorazgradljivom polimeru, tipične doze su između 1 i 10 mg antagonista, po pacijentu, na dan.

E. Terapeutske upotrebe antagonista GH-RH

Najvažnije terapeutske primene antagonista GH-RH su, očekuje se, u oblasti ontologije i endokrinologije. Neki od antagonista GH-RH deluju prevashodno na hipofiznom nivou i imaju jače endokrine efekte, inhibirajući oslobađanje GH, izazvano GH-RH-om i na kraju, smanjujući serumske nivoe GH i IGF-I. Drugi antagonisti GH-RH deluju prevashodno na nivou tumora, blokirajući tumorske receptore za GH-RH, smanjujući proizvodnju raznih autokrino/parakrinih tumorskih faktora rasta (kao što su IGF-I, IGF-II, GH, VEGF, FGF) i/ili nishodno regulišući njihove receptore, i, tako, vršeći snažnije inhibitorne efekte na tumorski rast. Ovi antagonisti mogu, takođe, biti upotrebljeni kao sistemi nosača, vezani na radionuklide, za lokalizaciju ili terapiju tumora, ili konjugovani na hemioterapeutske agense ili toksine. Takva hibridna jedinjenja mogu biti aktivno usmerena na rak, kao metu, u dijagnostičke ili terapeutske svrhe. Još neki drugi antagonisti GH-RH deluju putem višestrukih mehanizama dejstva, to jest endokrinim mehanizmima i direktnim efektima na tumore, u isto vreme. Tako se glavne terapeutske indikacije raznih antagonista GH-RH razlikuju, na osnovu njihovih prevashodnih mehanizama dejstva.

Analozi GH-RH sa antagonističkim dejstvom na hipofizu, mogu biti korišćeni u situacijama, gde je od koristi da se suprimiraju serumski nivoi GH i IGF-I. Tako su oni indikovani za terapiju endokrinih poremećaja, koji su karakterisani prekomernom proizvodnjom GH i IGF-I, kao i za lečenje malignih bolesti, koje ekspresuju receptore za IGF-I, IGF-II ili GH, i čija proliferacija je stimulisana ovim faktorima rasta.

Analozi somatostatina i antagonisti GH su, takođe, raspoloživi za lečenje endokrinih stanja uzrokovanih GH-om i IGF-I. Međutim, antagonisti GH-RH pružaju jedinstvena terapeutska dejstva, koja se ne mogu postići korišćenjem analoga somatostatina i antagonista GH. Ova dejstva su posledica višestrukih mehanizama dejstva antagonista GH-RH, to jest, takvih da oni vrše direktne, nezavisne od GH i IGF-I, efekte na tumore i druge ciljne položaje, pored toga što inhibiraju endokrinu osovinu za GH i IGF-I. Antagonisti GH-RH mogu biti primenjeni sami ili zajedno sa analozima somatostatina, čija kombinacija mnogo potpunije suprimira nivoe GH i IGF-I. Nepoželjni sporedni efekat antagonista GH, koji je moguće izbeći primenom antagonista GH-RH, jeste porast serumskih nivoa GH, posredstvom mehanizma povratne sprege.

Jedna od bolesti, uzrokovanih viškom GH je akromegalija, koja je manifestovana abnormalnim uvećanjem kostiju lica i ekstremiteta. Antagonisti GH-RH bi mogli ublažiti kliničke manifestacije akromegalije, npr. uvećanje facijalnih kostiju i kostiju ekstremiteta, uvećanje srca i druge strukturne i funkcionalne abnormalnosti kardiovaskularnog sistema. Antagonisti GH-RH mogu, takođe, biti upotrebljeni za lečenje dijabetične retinopatije (glavni uzrok slepila kod dijabetičara) i dijabetične nefropatije, u kojima je oštećenje oka, odnosno bubrega, smatra se, posledica GH. Dijabetični pacijenti, takođe, mogu imati koristi od povećane osetljivosti na insulin, koju proizvode antagonisti GH-RH, što je efekat, vezan sa sposobnošću ovih jedinjenja da smanje nivoe GH i IGF-I. Pored toga, budući da oni inhibiraju oslobađanje GH, antagonisti GH-RH mogu biti korišćeni kako bi usporili napredovanje mišićne distrofije.

Lekovi sa karakteristikama protiv faktora rasta, kao što su antagonisti GH-RH, mogu, isto tako, biti od koristi u kontrolisanju ili usporavanju napredovanja nekih kliničko-patoloških procesa, u stanjima, kao što su: idiopatska plućna fibroza, sistemska skleroza i hipertrofična kardiomiopatija, gde sadašnje medicinske terapije mogu relativno malo da pruže. Pored toga, nije prikazana terapija lekovima, koja bi bila efikasna u smanjivanju incidencije restenoze posle perkutane transluminalne koronarne angioplastike (PTCA), tako da moraju biti osmišljeni novi pristupi, uključujući upotrebu antagonista GH-RH. Neka ginekološka stanja, kao što su miomi, endometrioza i sindrom policističnih jajnika, mogu takođe biti lečeni antagonistima GH-RH, u kombinaciji sa agonistima ili antagonistima

hormona oslobađanja hormona luteinizacije (LH-RH). Antagonisti GH-RH su, isto tako, raspoloživi za lečenje benigne hip^rpTažTje prostate (BPH) i hiperplastičnih i beriignifi

proliferativnih poremećaja drugih normalnih organa u kojima su prisutni receptori za GH-

RH.

Međutim, glavna primena antagonista GH-RH je u oblasti malignih bolesti.

Antagonisti GH-RH, posebno oni sa snažnim direktnim efektima na tumorskom nivou, indikovani su za inhibiciju rasta primarnih tumora i za supresiju njihovog metastatskog širenja. Budući da su antiproliferativni efekti antagonista GH-RH izvedeni pomoću nekoliko mehanizama, ova jedinjenja su raspoloživa za lečenje velikog broja malignih bolesti, kao što su one, koje zavise od autokrino/parakrine i endokrine stimulacije GH-RH-om, IGF-I,

IGF-II, GH-om, VEGF-om i FGF-om.

Antagonisti GH-RH su raspoloživi za lečenje tumora, koji ekspresuju GH-RH receptore i koriste GH-RH kao autokrino/parakrini faktor rasta. Takva maligna stanja uključuju, ali se njima ne ograničavaju, kancere pluća, prostate, dojke, jajnika, endometrijuma, želudca, creva, gušterače, bubrega, kosti, jetre, kao i glioblastome, feohromocitome, melanome i limfome. Blokiranjem tumorskih receptora za GH-RH, ovi antagonisti sprečavaju stimulatorno dejstvo GH-RH, što dovodi do inhibicije tumorskog rasta.

Jedna prednost antagonista GH-RH u odnosu na analoge somatostatina je zasnovana na činjenici da antagonisti GH-RH mogu biti korišćeni za supresiju tumora, koji nemaju receptore za somatostatin, već ekspresuju tumorske receptore za GH-RH, kao na primer, humani osteogeni sarkomi.

Maligniteti, koji ekspresuju receptore za IGF-I i zavise od IGF-I i/ili IGF-II, kao

faktora rasta, raspoloživi su za terapiju antagonistima GH-RH. Ovi maligniteti obuhvataju, između ostalih, kancere pluća, prostate, dojke, jajnika, endometrijuma, želudca, kolorektalne kancere, kancere gušterače, bubrega i jetre, sarkome i tumore mozga. Sposobnost antagonista GH-RH da smanje serumske nivoe IGF-I, inhibiraju autokrino/parakrinu proizvodnju IGF-I i/ili IGF-II u tumorskom tkivu i nishodno regulišu ekspresioni nivo receptora IGF-I, od koristi je u terapiji raka.

Kanceri dojke i drugi tipovi kancera, koji zavise od GH, kao faktora rasta,

mogu biti lečeni antagonistima GH-RH. Sposobnost antagonista GH-RH da smanje serumske nivoe~ GH, inhibiraju autokrinu proizvodnju GH rTrtshc^no^'regtitišti ekspresiju receptora GH, pomaže lečenje određenih kancera dojke, kao i drugih tipova tumora.

GH-RH antagonisti su raspoloživi kao inhibitori angiogeneze, s obzirom na njihovu inhibitornu aktivnost na sintezu VEGF od strane tkiva tumora i normalnih endotelnih ćelija i uzimajući u obzir njihovo antiproliferativno dejstvo na endotelne ćelije. Zato, GH-RH antagonisti mogu da budu od koristi za lečenje onih tumora koji snažno zavise od VEGF i neoangiogeneze.

PRIMERI

Ovaj pronalazak je opisan vezano sa sledećim primerima, koji su pokazani samo u ilustrativne svrhe. U primerima se koriste zaštićene optički aktivne aminokiseline L-konfiguracije, osim tamo gde je posebno naznačeno.

Primeri koji slede objašnjavaju podesne postupke sintetisanja novih GH-RH antagonista tehnikom čvrste faze.

PRIMER I

CH3(CH2)sCO-Tyr'-D-Arg2-Asp3-Ala4-l^ Leu,4-Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-A^^ NH2(Peptid 80)

{[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His11, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2}

Sinteza je izvedena višestepenim postupkom, upotrebom ručne opreme za peptidnu sintezu čvrste faze. Ukratko, para-metilbenzhidrilamin (MBHA) smola (Bachem, King of Prussia, PA) (720 mg, 0.50 mmol) je neutralisana sa 5% DIEA u DCM i ispirana u skladu sa protokolom, opisanim u Tabeli I. Rastvor Boc-Har(N02)-OH (500 mg, 1.5 mmol) u DMF-DCM (1:1) je mućkan sa neutralisanom smolom i DIC (235fJ-, 1.5 mmol) u aparaturi za ručnu peptidnu sintezu čvrste faze u toku 1 sata. Pošto je završetak reakcije kuplovanja dokazan negativnim ninhidrinskim testom, primenjeni su protokoli uklanjanja zaštite i neutralizacije, opisani u Tabeli I sa ciljem uklanjanja Boe zaštitne grupe i pripreme peptid-smole za kuplovanje sledeće aminokiseline. Sinteza je nastavljena i peptidni lanac se postupno izgrađivao kuplovanjem sledećih zaštićenih aminokiselina prema naznačenom redosledu na smoli da bi se dobila željena peptidna sekvenca: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boe-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH.

Ovi zaštićeni aminokiselinski ostaci (takođe, mogu se većinom nabaviti od Bachem-a) gore su predsatavljeni u skladu sa opštim ustaljenim pravilom. Prikladna zaštitna grupa za funkcionalnu grupu bočnog lanca naročite aminokiseline se pojavljuje u zagradama. OH grupe u gornjoj formuli ukazuju na to da je karboksilni kraj svakog ostatka slobodan.

Zaštićene aminokiseline (1,5 mmol svake) su kuplovane sa DIC (235 u,L, 1,5 mmol) osim Boc-Asn-OH i Boc-GIn-OH koje su kuplovane sa svojim prethodno obrazovanim HOBt estrima. Po uklanjanju N<a->Boc zaštitne grupe sa Tyr1, peptid je preko noći acilovan sa oktanskom kiselinom [CH3(CH2)6COOH] (475 p.L, 3 mmol) upotrebom DIC (235 ul, 1,5 mmol) kao kuplujućeg sredstva.

U cilju otcepljivanja peptida sa smole i uklanjanja njegove zaštite, deo od 130 mg osušene peptid-smole je mućen sa 0,5 mL m-krezola i 5 mL vodonik-fluorida (HF) na 0°C tokom 2 sata. Posle uparavanja HF-a pod strujom azota i u vakuumu, ostatak je ispran sa suvim dietil-etrom i etil-acetatom. Otcepljen peptid kome je uklonjena zaštita je rastvoren u 50% sirćetnoj kiselini i razdvojen od smole filtracijom. Posle razblaživanja vodom i liofilizacije dobijeno je 75 mg sirovog proizvoda.

Sirovi peptid je proveren analitičkom HPLC korišćenjem Hewlett-Packard Model HP-1090 tečnog hromatografa sa reverzno-faznom kolonom Supelco Discovery HS C18 (2.1 mm x 5 cm, pakovana sa C18 silika gelom, veličinom pora 120 A, veličinom čestica 3 u,m) (Supelco, Bellefonte, PA) i elucijom linearnog gradijenta (npr., 40-70% B), sa sistemom rastvarača koji se sastojao od (A) 0,1% vodene TFA i (B) 0,1% TFA u 70% vodenom MeCN. Za prečišćavanje polupreparativnom HPLC, 75 mg sirovog peptida je rastvoreno u AcOH/H20, mešano, filtrirano i postavljeno na Beckman Ultraprep ODS kolonu (21.2 mm x 15 cm, pakovanu sa C18 silika gelom, veličinom pora 300 A, veličinom čestica 10 u.m). Elucija kolone je izvedena sa gore opisanim sistemom rastvarača po obrascu linearnog gradijenta (npr., 40-60% B za 120 minuta); brzina protoka 10 mL/min.

Eluent je praćen na 220 nm, a frakcije su ispitane analitičkom HPLC. Frakcije čistoće veće

od 95% su sjedinjene i liofilizovane da bi se dobilo 7,7 mg čistog proizvoda. Analitička HPLC je izvedena na gore opisanoj Supelco C18 reverzno-faznoj koloni upotrebom izokratske elucije sa sitemom rastvarača opisanim gore, sa brzinom protoka 0,2 mL/min.

Pikovi su praćeni na 220 i 280 nm. Analitičkom HPLC je procenjeno da je proizvod suštinski (>95%) čist. Molelulska masa je proverena elektrosprej masenom spektrometrijom,

a očekivani aminokiselinski sastav je potvrđen analizom aminokiselina.

Peptid 2, Peptid 4, Peptid 6, Peptid 8, Peptid 10, Peptid 12, Peptid 14, Peptid

16, Peptid 17, Peptid 79, Peptid 86, Peptid 92, Peptid 93, Peptid 94, Peptid 95, Peptid 96,

Peptid 104 i Peptid 105 su sintetisani na isti način kao i Peptid 80 osim što ovi peptidi

sadrže isto tako i druge aminokiselinske supstitucije i druge acilne delove koji potiču od masnih kiselina sa njihovog N-kraja.

Za sintezu Peptida 2, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)4CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, A<rg9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)4COOH.

Za sintezu Peptida 4, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle2<7>,D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc- Thr( Bzl)- OH. Boc- Phe( pCI)-OH. B oc- lle- OH. Boc- Ala- OH. Boc- Asp( OcHx)-O H. Boc- D- Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 6, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<16>, Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)8COOH.

Za sintezu Peptida 8, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)10CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg9 Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)10COOH.

Za sintezu Peptida 10, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 12, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)14CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2, šTedece^astrčene amino RišeMe^e-kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boe-

Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)14COOH.

Za sintezu Peptida 14, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, Har<28>, D-Arg29]hGH-RH(1 -29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 16, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)14CO-Phe°, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Phe-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)14COOH.

Za sintezu Peptida 17, čija je hemijska struktura

[CH3(C<H>2)14CO-D-Phe°, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH. Boc-Tyr(2Rr7)-OH. Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boe-

Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-D-Phe-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)14COOH.

Za sintezu Peptida 79, čija je hemijska struktura

[CH3(C<H>2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 86, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, His<20>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 92, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-DH, Boc-Asn-OH7 Boc"-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc: Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 93, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(CI)<6>, Ala<8>, His<9>, Cit<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hQH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA

smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 94, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, His<15>, His2<0>,Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzi)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 95, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Orn<12>, Abu<16>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^hGH-RHO -29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-AspJOcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 96, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>,

Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-

OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-

OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 104, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Dip<10>, His<11>, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>,

OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-

OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 105, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Phe(pNO2)<i0>, His11,Orn<12>, Abu<15>, His<20>,

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju

po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pN02)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-

OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH. "

Otcepljivanje i uklanjanje zaštite sa HF-om i sledstveno prečišćavanje polupreparativnom HPLC Peptida 2, Peptida 4, Peptida 6, Peptida 8, Peptida 10, Peptida 12, Peptida 14, Peptida 16, Peptida 17, Peptida 79, Peptida 86, Peptida 92, Peptida 93, Peptida 94, Peptida 95, Peptida 96, Peptida 104 i Peptida 105 su urađeni kao što je opisano u slučaju Peptida 80. Prečišćena jedinjenja su analitičkom HPLC ocenjena kao suštinski (>95%) čista. Njihove molekularne mase su proverene elektrosprej masenom spektrometrijom i očekivani aminokiselinski sastavi su potvrđeni aminokiselinskom analizom.

PRIMER II

HOOC(CH2)12CO-Tyr'-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Ph^ Leu14-Abu15-GI n16-Leu17-Ser18-Ala19^

NH2(Peptid 11)

{[HOOC(C<H>2)12CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2}

Sinteza je izvedena višestepenim postupkom, upotrebom ručne opreme za peptidnu sintezu čvrste faze. Ukratko, MBHA smola (Bachem, King of Prussia, PA) (720

mg, 0.50 mmol) je neutralisana sa 5% DIEA u DCM i ispirana u skladu sa protokolom, opisanim u Tabeli I. Rastvor Boc-Har(N02)-OH (500 mg, 1.5 mmol) u DMF-DCM (1:1) je mućkan sa neutralisanom smolom i DIC (235 u.L, 1.5 mmol) u aparaturi za ručnu peptidnu sintezu čvrste faze u toku 1 sata. Pošto je završetak reakcije kuplovanja dokazan negativnim ninhidrinskim testom, primenjeni su protokoli uklanjanja zaštite i neutralizacije, opisani u Tabeli I sa ciljem uklanjanja Boe zaštitne grupe i pripreme peptid-smole za kuplovanje sledeće aminokiseline. Sinteza je nastavljena i peptidni lanac se postupno izgrađivao kuplovanjem sledećih zaštićenih aminokiselina prema naznačenom redosledu na smoli da bi se dobila željena peptidna sekvenca: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-

OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Zaštićene aminokiseline (1,5 mmol svake) su kuplovane sa DIC (235 pL, 1,5 mmol) osim Boc-Asn-OH i Boc-GIn-OH koje su kuplovane sa svojim prethodno obrazovanim HOBt estrima.

Po uklanjanju N<a->Boc zaštitne grupe sa Tyr<1>, peptid je acilovan sa prethodno obrazovanim simetričnim anhidridom 1,12-dodekandi-karboksilne kiseline, koji je pripremljen kako sledi. Za sintezu mere od 0.5 mmol peptida, 388 mg (1.5 mmol) 1,12-dodekandikarboksilne kiseline [HOOC(CH2)12COOH] je rastvoreno u 5 do 10 mL DMF-DCM (1:1), u ovaj rastvor je dodato 235 \ xL (1.5 mmol) DIC i mešavina je ostavljena na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Posle ovog vremenskog perioda, mešavina je prenesena u sud za sintetisanje koji je sadržavao peptid-smolu sa slobodnim amino krajem na Tyr<1>i acilacija se izvodila preko noći.

U cilju otcepljivanja peptida sa smole i uklanjanja njegove zaštite, deo od 274 mg osušene peptid-smole je mućen sa 0,5 mL m-krezola i 5 mL vodonik-fluorida (HF) na 0°C tokom 2 sata. Posle uparavanja HF-a pod strujom azota i u vakuumu, ostatak je ispran sa suvim dietil-etrom i etil-acetatom. Otcepljeni peptid kome je uklonjena zaštita je rastvoren u 50% sirćetnoj kiselini i razdvojen je od smole filtracijom. Posle razblaživanja vodom i liofilizacije dobijeno je 160 mg sirovog proizvoda.

Sirovi peptid je proveren analitičkom HPLC korišćenjem Hewlett-Packard Model HP-1090 tečnog hromatografa sa reverzno-faznom kolonom Supelco Discovery HS C18 (2.1 mm x 5 cm, pakovana sa C18 silika gelom, veličinom pora 120 A, veličinom čestica 3 u,m) (Supelco, Bellefonte, PA) i elucijom linearnog gradijenta (npr., 50-80% B), sa sistemom rastvarača koji se sastojao od (A) 0,1% vodene TFA i (B) 0,1% TFA u 70% vodenom MeCN. Za prečišćavanje polupreparativnom HPLC, 160 mg sirovog peptida je rastvoreno u AcOH/H20, mešano, filtrirano i postavljeno na Beckman Ultraprep ODS kolonu (21.2 mm x 15 cm, pakovanu sa C18 silika gelom, veličinom pora 300 A, veličinom čestica 10 u.m). Elucija kolone je izvedena sa gore opisanim sistemom rastvarača po obrascu linearnog gradijenta (npr., 50-70% B za 120 minuta); brzina protoka 10 mL/min. Eluent je praćen na 220 nm, a frakcije su ispitane analitičkom HPLC. Frakcije čistoće veće od 95% su sjedinjene i liofilizovane da bi se dobilo 6,0 mg čistog proizvoda. Analitička HPLC je izvedena na gore opisanoj Supelco C18 reverzno-faznoj koloni upotrebom izokratske elucije sa sitemom rastvarača opisanim gore, sa brzinom protoka 0,2 mL/min. Pikovi su praćeni na 220 i 280 nm. Analitičkom HPLC je procenjeno da je proizvod

suštinski (>95%) čist. Molelulska masa je proverena elektrosprej masenom spektrometrijom,

a očekivani aminokiselinski sastav je potvrđen analizom aminokiselina.

Peptid 3, Peptid 5, Peptid 7, Peptid 9, Peptid 13, Peptid 25, Peptid 81, Peptid

82, Peptid 88, Peptid 102, Peptid 108 i Peptid 109 su sintetisani na isti način kao i Peptid 11 osim što ovi peptidi isto tako sadrže i druge aminokiselinske supstitucije i druge acilne delove koji potiču od dikarboksilnih kiselina sa njihovog N-kraja.

Za sintezu Peptida 3, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)4CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA

smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)4COOH.

Za sintezu Peptida 5, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^hGH-RHO-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA

smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 7, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Ha<r29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA

smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH,

Bo c- GIn- OH, Boc-L eu- OH, Boc-Leu-OH, Roc-I ys( 2CIZ)- OH, Bo c- Arg( Tns)- OH, Rnc-Alg-OH,

Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boe-

Lys(2CIZ)-0H, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)8COOH.

Za sintezu Peptida 9, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)10CO-Tyr<1>, D-Arg2 Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)10COOH.

Za sintezu Peptida 13, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)14CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu1<5>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)14COOH.

Za sintezu Peptida 25, čija je hemijska struktura

[HOOC(C<H>2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Cit<9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2X2COOH.

Za sintezu Peptida 81, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)8CO-Tyr\ D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2)sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)8<C>OOH.

Za sintezu Peptida 82, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)10, His11, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 88, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, His20, Nle27,D-Arg<28>, Har^JhGH-RHO^NH,, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Ha^NO^-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 102, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 108, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Dip<10>, His11,Orn<12>, Abu<15>, His20,Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 109, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Phe(pN02)<10>, His<11>, Orn12, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pN02)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Otcepljivanje i uklanjanje zaštite sa HF-om i sledstveno prečišćavanje polupreparativnom HPLC Peptida 3, Peptida 5, Peptida 7, Peptida 9, Peptida 13, Peptida 25, Peptida 81, Peptida 82, Peptida 88, Peptida 102, Peptida 108 i Peptida 109 su urađeni kao što je opisano u slučaju Peptida 11. Prečišćena jedinjenja su analitičkom HPLC ocenjena kao suštinski (>95%) čista. Njihove molekularne mase su proverene elektrosprej masenom spektrometrijom i očekivani aminokiselinski sastavi su potvrđeni aminokiselinskom analizom.

PRIMER III

PhAcTyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe(pCI^^ Abu,5-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu^

(Peptid 62)

{[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^JhGH-RH(1-29)NH2}

Sinteza je izvedena višestepenim postupkom, upotrebom ručne opreme za peptidnu sintezu čvrste faze. Ukratko, para-metilbenzhidrilamin (MBHA) smola (Bachem, King of Prussia, PA) (720 mg, 0.50 mmol) je neutralisana sa 5% DIEA u DCM i ispirana u skladu sa protokolom, opisanim u Tabeli I. Rastvor Boc-Har(N02)-OH (500 mg, 1.5 mmol) u DMF-DCM (1:1) je mućkan sa neutralisanom smolom i DIC (235U.L, 1.5 mmol) u aparaturi za ručnu peptidnu sintezu čvrste faze u toku 1 sata. Pošto je završetak reakcije kuplovanja dokazan negativnim ninhidrinskim testom, primenjeni su protokoli uklanjanja zaštite i neutralizacije, opisani u Tabeli I sa ciljem uklanjanja Boe zaštitne grupe i pripreme peptid-smole za kuplovanje sledeće aminokiseline. Sinteza je nastavljena i peptidni lanac se postupno izgrađivao kuplovanjem sledećih zaštićenih aminokiselina prema naznačenom redosledu na smoli da bi se dobila željena peptidna sekvenca: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Zaštićene aminokiseline (1,5 mmol svake) su kuplovane sa DIC (235 U.L, 1,5 mmol) osim Boc-Asn-OH i Boc-GIn-OH koje su kuplovane sa svojim prethodno obrazovanim HOBt estrima. Po uklanjanju N<a->Boc zaštitne grupe sa Tyr<1>, peptid je acilovan sa fenilsirćetnom kiselinom (PhAc-OH) (272 mg, 2 mmol) korišćenjem DIC (313 u±, 2 mmol).

U cilju otcepljivanja peptida sa smole i uklanjanja njegove zaštite, deo od 286 mg osušene peptid-smole je mućen sa 0,5 mL m-krezola i 5 mL vodonik-fluorida (HF) na 0°C tokom 2 sata. Posle uparavanja HF-a pod strujom azota i u vakuumu, ostatak je ispran sa suvim dietil-etrom i etil-acetatom. Otcepljeni peptid kome je uklonjena zaštita je rastvoren u 50% sirćetnoj kiselini i razdvojen je od smole filtracijom. Posle razblaživanja vodom i liofilizacije dobijeno je 155 mg sirovog proizvoda.

Sirovi peptid je proveren analitičkom HPLC korišćenjem Hewlett-Packard Model HP-1090 tečnog hromatografa sa reverzno-faznom kolonom Supelco Discoven/HS C18 (2.1 mm x 5 cm, pakovana sa C18 silika gelom, veličinom pora 120 A, veličinom čestica 3 u.m) (Supelco, Bellefonte, PA) i elucijom linearnog gradijenta (npr., 40-70% B), sa sistemom rastvarača koji se sastojao od (A) 0,1% vodene TFA i (B) 0,1% TFA u 70% vodenom MeCN. Za prečišćavanje polupreparativnom HPLC, 155 mg sirovog peptida je rastvoreno u AcOH/H20, mešano, filtrirano i postavljeno na Beckman Ultraprep ODS kolonu (21.2 mm x 15 cm, pakovanu sa C18 silika gelom, veličinom pora 300 A, veličinom čestica 10 u.m). Elucija kolone je izvedena sa gore opisanim sistemom rastvarača po obrascu linearnog gradijenta (npr., 40-60% B za 120 minuta); brzina protoka 12 mL/min. Eluent je praćen na 220 nm, a frakcije su ispitane analitičkom HPLC. Frakcije čistoće veće od 95% su sjedinjene i liofilizovane da bi se dobilo 13,3 mg čistog proizvoda. Analitička HPLC je izvedena na gore opisanoj Supelco C18 reverzno-faznoj koloni upotrebom izokratske elucije sa sitemom rastvarača opisanim gore, sa brzinom protoka 0,2 mL/min. Pikovi su praćeni na 220 i 280 nm. Analitičkom HPLC je procenjeno da je proizvod suštinski (>95%) čist. Molelulska masa je proverena elektrosprej masenom spektrometrijom, a očekivani aminokiselinski sastav je potvrđen analizom aminokiselina.

Peptid 15, Peptid 18, Peptid 19, Peptid 21, Peptid 22, Peptid 23, Peptid 24, Peptid 26, Peptid 27, Peptid 28, Peptid 32, Peptid 33, Peptid 34, Peptid 35, Peptid 36, Peptid 37, Peptid 38, Peptid 39, Peptid 40, Peptid 41, Peptid 42, Peptid 43, Peptid 53, Peptid 54, Peptid 55, Peptid 57, Peptid 58, Peptid 63, Peptid 65, Peptid 69, Peptid 84, Peptid 85, Peptid 90 i Peptid 91 su sintetisani na isti način kao i Peptid 62 osim što ovi peptidi isto tako sadrže i druge supstitucije.

Za sintezu Peptida 15, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ar<g9,>Abu<15>, Nle27,Har28, D-Arg<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-

OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 18, čija je hemijska struktura

[PhAc-Arg°, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, A<rg9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-

OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 19, čija je hemijska struktura

[PhAc-D-Arg°, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 21, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boe-

Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 22, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Cit9, Abu15,Nle<27>, D-Arg28,Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 23, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Arg<9,>Abu15, Nle<27>, Har<28>, D-Arg<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, B0C-Asp(OcHx)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 24, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Cit<9>, Abu<15>, Nle<27>, Har28, D-Arg29]hGH-RH(1 -29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIŽ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2B>Ž)MDH, Boc-Cit-OH,^ "Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-

OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 26, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, D-Ala<8>, A<rg9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-D-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 27, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Abu<8>, Arg<9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 28, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<9>, Abu<15>, Nle<27>, Har<28>, D-Arg<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boe-D-Arg (Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 32, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg9 His<10>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, BOC-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 33, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<8>,Arg<9>,Cha<10>, Abu<16>, Nle27,D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Cha-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 34, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tpi<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(NOz)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tpi-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 35, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, 2-Nal<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boe-

Gln-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-2-Nal-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 36, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Dip<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Dip-OH, B0C-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 37, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Phe(pNH2)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA

smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Phe(pNH-Z)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 38, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Trp<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH. Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Trp(For)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boe-

Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 39, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har9, Phe(pN02)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Phe(pN02)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 40, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, 3-Pal<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-3-Pal-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 41, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Har<9>, Tyr(Et)<10>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 42, čija je hemijska struktura

[PhAc-His<1>, D-Ar<g2>, T<y>r<6>, Har<9>, Bpa<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Bpa-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-His(Bom)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 43, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Har<12>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 53, čija je hemijska struktura

[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<1>°, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Ha<r29>, Har<30>]hGH-RH(1-30)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA

smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-

OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa hidrocinamskom kiselinom (Hca-OH).

Za sintezu Peptida 54, čija je hemijska struktura

[Dat-Tyrrr D-Arg",Phe(pCI), Har9, Tyr(Me)1u, AbiTVRTe"', D-Arg*B, Har1*-, Ha^JhGHnRTlčn 30)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA

smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, B0C-Har(NO2)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa dezamino-tirozinom (Dat).

Za sintezu Peptida 55, čija je hemijska struktura

[lpa-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har9, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28,Har29,Har<30>]hGH-RH(1-30)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa indol-3-propionskom kiselinom (Ipa-OH).

Za sintezu Peptida 57, čija je hemijska struktura

[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>,D-Arg29,Har<30>]hGH-RH^-30)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NOz)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa Hca-OH.

Za sintezu Peptida 58, čija je hemijska struktura

[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har<29>, D-Arg30] hGH-RH(1-30)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boe-Ile-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH,

Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa Hca-OH.

Za sintezu Peptida 63, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Har<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 65, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10,Cit<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 69, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, His<9>, Tyr(Me)<10>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH,!Toc-Phe(pCi):OH" Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 84, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<5>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA

smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 85, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, His11, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(NOs)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 90, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Ar<g9>, Cit<15>, Nle27D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 91, čija je hemijska struktura

[1-Nac-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(T-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boe-

Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa 1 -naftilsirćetnom kiselinom (1-Nac-OH).

Otcepljivanje i uklanjanje zaštite sa HF-om i sledstveno prečišćavanje polupreparativnom HPLC Peptida 15, Peptida 18, Peptida 19, Peptida 21, Peptida 22, Peptida 23, Peptida 24, Peptida 26, Peptida 27, Peptida 28, Peptida 32, Peptida 33, Peptida 34, Peptida 35, Peptida 36, Peptida 37, Peptida 38, Peptida 39, Peptida 40, Peptida 41, Peptida 42, Peptida 43, Peptida 53, Peptida 54, Peptida 55, Peptida 57, Peptida 58, Peptida 63, Peptida 65, Peptida 69, Peptida 84, Peptida 85, Peptida 90 i Peptida 91 su urađeni kao što je opisano u slučaju Peptida 62. Prečišćena jedinjenja su analitičkom HPLC ocenjena kao suštinski (>95%) čista. Njihove molekularne mase su proverene elektrosprej masenom spektrometrijom i očekivani aminokiselinski sastavi su potvrđeni aminokiselinskom analizom.

PRIMER IV

PhAc-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe(pCI)^ Abu15-Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys21-Leu^

(Peptid 67)

{[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2}

Sinteza je izvedena višestepenim postupkom, upotrebom ručne opreme za peptidnu sintezu čvrste faze. Ukratko, para-metilbenzhidrilamin (MBHA) smola (Bachem, King of Prussia, PA) (720 mg, 0.50 mmol) je neutralisana sa 5% DIEA u DCM i ispirana u skladu sa protokolom, opisanim u Tabeli I. Rastvor Boc-Har(N02)-OH (500 mg, 1.5 mmol) u DMF-DCM (1:1) je mućkan sa neutralisanom smolom i DIC (235 pL, 1.5 mmol) u aparaturi za ručnu peptidnu sintezu čvrste faze u toku 1 sata. Pošto je završetak reakcije kuplovanja dokazan negativnim ninhidrinskim testom, primenjeni su protokoli uklanjanja zaštite i neutralizacije, opisani u Tabeli I sa ciljem uklanjanja Boe zaštitne grupe i pripreme peptid-smole za kuplovanje sledeće aminokiseline. Sinteza je nastavljena i peptidni lanac se postupno izgrađivao kuplovanjem sledećih zaštićenih aminokiselina prema naznačenom redosledu na smoli da bi se dobila željena peptidna sekvenca: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzi)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Zaštićena, nekodirana aminokiselina Boc-Amp(Alloc)-OH može se nabaviti od RSP Amino Acid Analogues, Inc. (VVorcester, MA). Zaštićene aminokiseline (1,5 mmol svake) su kuplovane sa DIC (235 uX, 1,5 mmol) osim Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH i Boc-GIn-OH koje su kuplovane sa 569 mg HBTU + 203 mg HOBt + 522 uJ_ DIEA (1,5:1,5:3 mmol). Po uklanjanju N<a->Boc zaštitne grupe sa Tyr<1>, peptid je acilovan sa fenilsirćetnom kiselinom (PhAc-OH) (272 mg, 2 mmol) upotrebom DIC (313 u,L, 2 mmol). Dovršena peptidil-smola, sa još uvek vezanim svim zaštitnim grupama bočnih lanaca je isprana 3x sa DCM, 3x sa MeOH i osušena po visokim vakuumom.

Peptid-smola je onda podvrgnuta uklanjanju Alloc zaštitne grupe sa Amp<9>ostatka peptidnog lanca koje je Pd(0)-katalizovano korišćenjem procedure, opisane u Novabiochem (San Diego, CA) Katalogu 2002/2003. Deo od 255 mg peptidil-smole sa procenjenim sadržajem peptida od 0.033 mmol je odmeren u test epruvetu i ova je zatvorena gumenim čepom. Test epruveta je ispunjena strujom gasa argona (Ar) oslobođenog iz igle ubačene kroz čep. U drugu test epruvetu je odmereno 116 mg Pd(PPh3)4(0.1 mmol, ili 3 ekviv. u odnosu na Alloc grupe prisutne na peptidil-smoli), dodato je 4-5 mL CHCI3-AcOH-N-metilmorfolina (37:2:1 vol:vol:vol), katalizator je rastvoren propuštanjem struje Ar kroz rastvor uz stvaranje mehurova i epruveta je zatvorena gumenim čepom. Ovaj rastvor je prenesen u epruvetu sa smolom korišćenjem gasom nabijenog šprica ispunjenog Ar-om i dobijena mešavina je ostavljena da stoji 2 sata uz povremeno pažljivo mućkanje. Dalje, smola je prenesena u levak od sinterovanog stakla i uzastopno isprana sa 0.5% DIEA u DMF (da se smola neutrališe) i natrijum dietilditiokarbamatom (0.5% tež/tež) u DMF (da se ukloni katalizator). Posle još jednog ispiranja sa MeOH, smola je ponovo osušena pre HF otcepljivanja peptida.

Otcepljivanje peptida sa MBHA smole ujedno sa uklanjanjem zaostalih zaštitnih grupa postiže se tretmanom sa HF-om, kao što je opisano u Primerima l-lll. Prerada koja sledi i prečišćavanje HPLC-om, izvedeni kako je opisano u Primerima l-lll, proizveli su 11,6 mg čistog Peptida 67 (čistoća analitičkom HPLC >95%). Molelulska masa je proverena elektrosprej masenom spektrometrijom, a očekivani amino-kiselinski sastav je potvrđen analizom aminokiselina.

Peptid 30, Peptid 31, Peptid 64, Peptid 68, Peptid 73, Peptid 74 i Peptid 75 su sintetisani na isti način kao i Peptid 67 osim što ovi peptidi isto tako sadrže i druge supstitucije.

Za sintezu Peptida 30, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Amp<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 31, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<8>, Har<9>, Amp<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 64, čija je hemijska struktura

[P hA c- Tyr1, D-Ar g2, Phe(pCI)6, _Har 9, Tyr(Me)10, Am p11, Anu15, N le27, D- Arg28, Har<29>]hGH- RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na

MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-

OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Amp(AIIOC)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-

OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 68, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Am<p9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 73, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)6, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-

OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-

OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 74, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Am<p9>, Tyr(Me)10, His11, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-

OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH^ Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 75, čija je hemijska struktura

[1-Nac-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Me)10, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa 1-naftilsirćetnom kiselinom (1-Nac-OH).

Uklanjanje zaštite, otcepljivanje sa smole i sledstveno prečišćavanje polupreparativnom HPLC Peptida 30, Peptida 31, Peptida 64, Peptida 68, Peptida 73, Peptida 74 i Peptida 75 su urađeni kao što je opisano u slučaju Peptida 67. Prečišćena jedinjenja su analitičkom HPLC ocenjena kao suštinski (>95%) čista. Njihove molekularne mase su proverene elektrosprej masenom spektrometrijom i očekivani aminokiselinski sastavi su potvrđeni aminokiselinskom analizom.

PRIMER V

PhAc-Tyr<1->D-Arg<2->Asp<3->Ala<4->lle<5->Phe(pCI)<6->Thr<7->Asn<8->Har<9->Tyr(Me)<10->Arg<11->Lys<12->Val<13->Leu<14->Abu^-GIn^-Leu^-Ser^-Ala^-Arg^-Lvs^-Leu^-Leu^-GIn^-Asp^-lle^-Nle^-D-Arg^-Ha^-NHEt

(Peptid 46)

{[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt}

Sinteza je izvedena višestepenim postupkom, upotrebom ručne opreme za peptidnu sintezu čvrste faze. Ukratko, Merrifield smola (Bachem, King of Prussia, PA) (3,0 g, sa supstitucijom od 0,6 mmol/g) je prethodno nabrekla u DCM i ispirana 3x sa DMF, a zatim je, sa ciljem nanošenja prve aminokiseline na smolu, dodat rastvor od 2390 mg Boc-Har(Tos)-OH (5,4 mmol, što odgovara 3x molarnom višku) u 20-30 mL DMF i 314 mg čvrstog KF (5,4 mmol, 3x molarni višak). Smola je mućkana sa gornjom mešavinom tokom

4 sata na 80°C, a zatim je filtrirana i ispirana na sledeći način: 3xDMF, 3xDMF-voda (1:1)

(da se ukloni KF), 3xDMF, 3xDCM i 3xMeOH. Smola je sušena u vakuumu tokom 24 sata do stalne težine. Težina suve smole sa prvom nanetom aminokiselinom [Boc-Har(Tos)-Merrifield smola] prelazi 3,5 g ukazujući da je prinos punjenja bolji od 70%.

1,5 g Boc-Har(Tos)-Merrifield smole (otprilike 0,5 mmol) je prethodno nabreklo u DCM i, posle uklanjanja zaštite sa 50% TFA u DCM i neutralizacije sa 5% DIEA u DCM, peptidni lanac se postupno izgrađivao kuplovanjem sledećih zaštićenih aminokiselina prema naznačenom redosledu na smoli da bi se dobila željena peptidna sekvenca: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. S obzirom na to da nitro zaštićenu gvanidino grupu napada baza kao što je etilamin, a koja se koristi u ovoj sintezi i pošto se sa Boc-Har(N02)-OH može javiti delimična razgradnja Har u Lys, u ovoj sintezi je korišćen Boc-Har(Tos)-OH umesto Boc-Har(N02)-OH. Zaštićene aminokiseline (1,5 mmol svake) su kuplovane sa DIC (235U.L, 1,5 mmol) osim Boc-Asn-OH i Boc-GIn-OH koje su kuplovane sa svojim prethodno obrazovanim HOBt estrima. Po uklanjanju N<a->Boc zaštitne grupe sa Tyr<1>, peptid je acilovan sa fenilsirćetnom kiselinom (PhAc-OH) (272 mg, 2 mmol) korišćenjem DIC (313 u.L, 2 mmol), ispran sa DCM i MeOH i osušen.

U cilju otcepljivanja zaštićenog peptida sa smole aminolizom posredovanom etilaminom (EtNH2) i dobijanja peptida sa etilamidnom modifikacijom (-NHEt) na C-kraju, deo od 250 mg suve peptid-smole je stavljen u balon okruklog dna od teškog stakla, koji je postavljen u kupatilo za hlađenje sa led-metanolom unutar dobro ventiliranog parnog natkrivača, a tečni EtNH2(b.p.=16.6°C, od Aldrich-a, lagerovan u metalnom cilindru) je prenesen u balon u količini dovoljnoj da prekrije peptid-smolu. Balon je zapušen, zagrejan do sobne temperature (oprez: unutra se razvija pritisak) i mućkan je tokom 3 sata i 30 minuta sa ciljem da se omogući reakciji da se odvija. Posle ovog vremena, balon je ponovo smešten u kupatilo za hlađenje, otpušen je i tečni EtNH2je odfiltriran od čvrstog ostatka koji sadrži mešavinu smole i otcepljenog peptida, peptid još uvek sa vezanim zaštitnim grupama. Posle ovog postupka, čvrsti ostatak je preko noći podvrgnut vakuumu da bi se uklonio zaostali EtNH2, a vlažnost adsorbovala.

Suvi ostatak koji sadrži otcepljeni, zaštićeni peptid je smešten u aparat za tretman sa HF-om i izvedeno je otcepljivanje zaštitnih grupa sa HF-om tretmanom sa 5

mL HF na 0°C tokom 2 sata u prisustvu 0,5 mL m-krezola, kao čistača. Posle uparavanja HF-a pod strujom azota i u vakuumu, ostatak je ispran sa suvim dietil-etrom i etil-acetatom. Otcepljeni peptid kome je uklonjena zaštita je rastvoren u 50% sirćetnoj kiselini i razdvojen je od smole filtracijom. Posle razblaživanja vodom i liofilizacije, dobije se obično oko 90-110 mg sirovog proizvoda.

Peptid je prečišćen polupreparativnom HPLC, a elucione frakcije su ispitane analitičkom HPLC kako je opisano u Primerima l-lll. Frakcije sa čistoćom većom od 95%

su sjedinjene i liofilizovane da bi se dobilo 5 do 10 mg čistog Peptida 46. Molelulska masa je proverena elektrosprej masenom spektrometrijom, a očekivani amino-kiselinski sastav je potvrđen analizom aminokiselina.

Peptid 45, Peptid 47, Peptid 48, Peptid 49, Peptid 50, Peptid 56, Peptid 97,

Peptid 98, Peptid 99, Peptid 100, Peptid 101, Peptid 106, Peptid 110, Peptid 113, Peptid

114, Peptid 115, Peptid 118, Peptid 119, Peptid 120 i Peptid 12i su sintetisani na isti način kao i Peptid 46 osim što ovi peptidi isto tako sadrže i druge supstitucije.

Za sintezu Peptida 45, čija je hemijska struktura

[Hca-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na

Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-

OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa Hca-OH.

Za sintezu Peptida 47, čija je hemijska struktura

[ Hca- Tvr1, D- Arg2, P he( pCI) 6 Arg<9>, Abu15, Nle2 7, D- Arg28, Ha r29] hGH- RH( 1 - 29) NHEt, sledeće

zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boe-

Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-

OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa Hca-OH.

Za sintezu Peptida 48, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>,D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Arg<9>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 49, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Aib15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-

OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Aib-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 50, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Orn12,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^jhGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-

OH, Boc-Ala-OH, Bdc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIti-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boe-

Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 56, čija je hemijska struktura

[Hca-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<2B>, Har<29>, Har<30>]hGH-RH(1-30)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na

Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa Hca-OH.

Za sintezu Peptida 97, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His9, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<16>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 98, čija je hemijska struktura

[CH3(C<H>2)8COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, B^c-T>Arg(Tos)-OH, Bdć-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)8COOH.

Za sintezu Peptida 99, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)10COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boe-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)10COOH.

Za sintezu Peptida 100, čija je hemijska struktura

[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa Hca-OH.

Za sintezu Peptida 101, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHMe, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 106, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<8>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His20,

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju

po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-

Za sintezu Peptida 110, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Om12, Abu<15>, His<20>,

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju

OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 113, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Orn<12>, Abu15,His<20>,

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju

OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-

Za sintezu Peptida 114, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>,Dip10, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>,

Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-

Za sintezu Peptida 115, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Phe(pN02)<10>, His11,Orn<12>, Abu<15>, His<20>,

Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju

po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pN02)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-

OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim,

aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 118, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp<9>, Dip<10>, His<11>, Om12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>,

Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boe-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-

OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH,

Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 119, čija je hemijska struktura

[CHg(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8,Amp<9>,Phe(pN02)<10>, His<11>, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju

po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pN02)-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju

sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 120, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12COO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala8,Amp<9>, Dip<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju

po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 121, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Phe(pN02)<10>, His11, Orn12,Abu<15>,

His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NHEt, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Merrifield smoli: Boc-Har(Tos)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-

OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-

OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pN02)-OH, Boc-Amp-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2).2COOH.

Otcepljivanje sa smole posredovano etilaminom Peptida 45, Peptida 47, Peptida 48, Peptida 49, Peptida 50, Peptida 56, Peptida 97, Peptida 98, Peptida 99, Peptida 100, Peptida 106, Peptida 110, Peptida 113, Peptida 114, Peptida 115, Peptida 118, Peptida 119, Peptida 120 i Peptida 121, kao i otcepljivanje sa smole Peptida 101 koje je posredovano metilaminom, a zatim i uklanjanje njihove zaštite pomoću HF-a i sledstveno prečišćavanje polupreparativnom HPLC su urađeni kao što je opisano u slučaju Peptida 46. Prečišćena jedinjenja su analitičkom HPLC ocenjena kao suštinski (>95%) čista. Njihove molekularne mase su proverene elektrosprej masenom spektrometrijom i očekivani aminokiselinski sastavi su potvrđeni aminokiselinskom analizom.

PRIMER VI

Hca-Tyr1-D-Arg2-Asp3-Ala4-lle5-Phe(pCI)^ Gln16-Leu17-Ser18-Ala19-Arg20-Lys2^

(Peptid 59)

{[Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>, Agm<30>]hGH-RH(1-30)}

Sinteza je izvedena višestepenim postupkom, upotrebom ručne opreme za peptidnu sintezu čvrste faze. Početni materijal sinteze je Boc-agmatin-N<G->su!fonil-fenoksiacetil-MBHA (Boc-Agm-SPA-MBHA) smola sa supstitucijom od 0,3 mmol/g, koja je komercijalno nabavljena od California Peptide Research, Inc. (Napa, CA). Sinteza ove smole je opisana u U.S. Pat. No. 4,914,189 i u naučnoj literaturi (Zarandi M, Serfozo P, Zsigo J, Bokser L, Janaky T, Olsen DB, Bajusz S, Schally AV, Int. J. Peptide Protein Res. 39:211-217, 1992), koja je ovde obuhvaćena kao referenca. Ukratko, Boc-Agm-SPA-MBHA smola (1,67 g, 0,50 mmol) je prethodno nabubrila u DCM i zatim su izvedeni protokoli uklanjanja zaštite i neutralizacije, opisani u Tabeli I, a sa ciljem uklanjanja Boe zaštitne grupe i pripreme peptid-smole za kuplovanje sledeće aminokiseline. Sinteza je nastavljena i peptidni lanac se postupno izgrađivao kuplovanjem sledećih zaštićenih aminokiselina prema naznačenom redosledu na smoli da bi se dobila željena peptidna sekvenca: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-O H, Boe- Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boe-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH. Zaštićene amino-kiseline (1,5 mmol svake) su kuplovane sa DIC (235 p.L,

1,5 mmol) osim Boc-Asn-OH i Boc-GIn-OH koje su kuplovane sa svojim prethodno obrazovanim HOBt estrima. Po uklanjanju N<a->Boc zaštitne grupe sa Tyr<1>, peptid je acilovan sa hidrocinamskom kiselinom (Hca-OH) (300 mg, 2 mmol) korišćenjem DIC (313 u,L, 2 mmol) (cinamska kiselina=P-fenilakrilna kiselina, prim. prev.).

U cilju otcepljivanja peptida sa smole i uklanjanja njegove zaštite, deo od 250

mg osušene peptid-smole je mućen sa 0,5 mL m-krezola i 5 mL vodonik-fluorida (HF) na 0°C tokom 2 sata. Posle uparavanja HF-a pod strujom azota i u vakuumu, ostatak je ispran sa suvim dietil-etrom i etil-acetatom. Otcepljeni peptid kome je uklonjena zaštita je rastvoren u 50% sirćetnoj kiselini i razdvojen je od smole filtracijom. Posle razblaživanja vodom i liofilizacije obično se dobije 100-110 mg sirovog proizvoda.

su sjedinjene i liofilizovane da bi se dobilo 5 do 10 mg čistog Peptida 59. Molelulska masa je proverena elektrosprej masenom spektrometrijom, a očekivani amino-kiselinski sastav je potvrđen analizom aminokiselina.

Peptid 51, Peptid 52 i Peptid 60 su sintetisani na isti način kao i Peptid 59

osim što ovi peptidi isto tako sadrže i druge supstitucije.

Za sintezu Peptida 51, čija je hemijska struktura

[Hca-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<iS>, Nle<27>, D-Arg28, Agm<29>]h<G>H-RH(1-29), sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Boc-Agm-SPA-MBHA smoli: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-

OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa Hca-OH.

Za sintezu Peptida 52, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr1,D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28, Agm<29>]hGH-RH(1-29), sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Boc-Agm-SPA-MBHA smoli: Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Za sintezu Peptida 60, čija je hemijska struktura

[PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>, Agm<30>]hGH-RH(1-30), sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na Boc-Agm-SPA-MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Har(N02)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa PhAc-OH.

Otcepljivanje i uklanjanje zaštite sa HF-om i sledstveno prečišćavanje polupreparativnom HPLC Peptida 51, Peptida 52 i Peptida 60 su urađeni kao što je opisano u slučaju Peptida 59. Prečišćena jedinjenja su analitičkom HPLC ocenjena kao suštinski (>95%) čista. Njihove molekularne mase su proverene elektrosprej masenom spektrometrijom i očekivani aminokiselinski sastavi su potvrđeni aminokiselinskom analizom.

PRIMER VII

CH3(CH2)sCO-Tyr<1->D-Arg<2-A>sp<3->Ala<4>-lle<5>-Phe(pCI)<6->Thr<7>-Asn<8->Amp<9>-Tyr(Me)<10->Arg11-Lys<12->Var<3->Leu<14->Abu<15->Gln<16->Leu<17->Ser<18->Ala<19->Arg<20->Lys<21->Leu<22->Leu<23->Gln<24->Asp<2S->lle<26->Nle<27->D-Arg<28->Har<29->NH2(Peptid 70)

{[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^JhGH- RH(1-P9)NK} ________

Svi koraci sinteze koji prethode kuplovanju N-terminalnog acilnog dela na peptid-smolu su izvedeni kako je opisano u Primeru IV. Po uklanjanju N<a->Boc zaštitne grupe sa Tyr<1>, peptid (0,5 mmol) je preko noći acilovan sa oktanskom kiselinom [CH3(CH2)6COOH] (475 jiL, 3 mmol) upotrebom DIC (235U.L, 1,5 mmol) kao sredstva za kuplovanje. Dovršena peptidil-smola, sa još uvek vezanim svim zaštitnim grupama bočnih lanaca je isprana 3x sa DCM, 3x sa MeOH i osušena po visokim vakuumom.

Peptidil-smola je onda podvrgnuta uklanjanju Alloc zaštitne grupe sa Amp<9>ostatka peptidnog lanca koje je Pd(0)-katalizovano prema postupku opisanom u Primeru IV. Peptid-smola je zatim isprana sa MeOH i osušena pre HF otcepljivanja peptida.

Otcepljivanje peptida sa MBHA smole ujedno sa uklanjanjem zaostalih zaštitnih grupa postiže se tretmanom sa HF-om, kao što je opisano u Primerima l-lll. Prerada koja sledi i prečišćavanje HPLC-om, su izvedeni kako je opisano u Primerima l-lll. Posle tretmana 300 mg osušene peptidil-smole sa HF-om dobijeno je 192 mg čistog liofilizovanog peptida sa HPLC prečišćavanjem prinos je bio 17,1 mg čistog Peptida 70 (čistoća analitičkom HPLC >95%). Molelulska masa je proverena elektrosprej masenom spektrometrijom, a očekivani amino-kiselinski sastav je potvrđen analizom aminokiselina.

Peptid 76, Peptid 78, Peptid 87, Peptid 103, Peptid 111 i Peptid 112 su sintetisani na isti način kao i Peptid 70 osim što ovi peptidi isto tako sadrže i druge supstitucije.

Za sintezu Peptida 76, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)sCOO-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Me)<1Q>, His11, Abu<15>, Nl<e27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 78, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)eCOO-Tyr,1D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit8,Amp9, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 87, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, His<20>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 103, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Orn<12>, Abu15,His<20>, Orn<21>, Nle<27>,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)sCOOH.

Za sintezu Peptida 111, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)sCOO-Tyr, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp<9>,Dip<10>, His11,Orn1<2>,Abu<15>, His20,Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 112, čija je hemijska struktura

[CH3(CH2)6COO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Phe(pN02)1° His11,Orn12, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^JhGH-RHO -29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pN02)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa CH3(CH2)6COOH.

Uklanjanje zaštite, otcepljivanje sa smole i sledstveno prečišćavanje polupreparativnom HPLC Peptida 76, Peptida 78, Peptida 87, Peptida 103, Peptida 111 i Peptida 112 su urađeni kao što je opisano u slučaju Peptida 70. Prečišćena jedinjenja su analitičkom HPLC ocenjena kao suštinski (>95%) čista. Njihove molekularne mase su proverene elektrosprej masenom spektrometrijom i očekivani aminokiselinski sastavi su potvrđeni aminokiselinskom analizom.

PRIMER VIII

HOOC(CH2)12CO-Tyr<1->D-Arg<2->Asp<3->Ala<4->lle<6->Phe(pCI)<6->Thr<7->Asn<8->Amp<9->Tyr(Me)<10->Arg<11->Lys<12->Val<13->Leu<14->Abu<15->Gln<16->Leu<17->Ser<18->Ala<19->Arg<2>0-Lys2<1->Leu<22->Leu<23->Gln<24->Asp<25->lle<26->Nle27-D-Arg<28->Har<29->NH2(Peptid 72)

{[HOOC(C<H>2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2}

Svi koraci sinteze koji prethode kuplovanju N-terminalnog acilnog dela na peptid-smolu su izvedeni kako je opisano u Primeru IV. Po uklanjanju N<a->Boc zaštitne grupe sa Tyr<1>, peptid je acilovan sa prethodno obrazovanim simetričnim anhidridom 1,12-dodekandikarboksilne kiseline, koji je pripremljen na sledeći način. Za sintezu mere od 0.5 mmol peptida, 388 mg (1.5 mmol) 1,12-dodekandikarboksilne kiseline [HOOC(CH2)12COOH] je rastvoreno u 5 do 10 mL DMF-DCM (1:1), u ovaj rastvor je dodato 235 pL (1.5 mmol) DIC i mešavina je ostavljena na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Posle ovog vremenskog perioda, mešavina je prenesena u sud za sintetisanje koji je sadržavao peptid-smolu sa slobodnim amino krajem na Tyr<1>i acilacija se izvodila preko noći. Dovršena peptidil-smola, sa još uvek vezanim svim zaštitnim grupama bočnih lanaca je isprana 3x sa DCM, 3x sa MeOH i osušena po visokim vakuumom.

Otcepljivanje peptida sa MBHA smole ujedno sa uklanjanjem zaostalih zaštitnih grupa postiže se tretmanom sa HF-om, kao što je opisano u Primerima l-lll. Prerada koja sledi i prečišćavanje HPLC-om, su izvedeni kako je opisano u Primerima l-lll. Posle tretmana 150 mg osušene peptidil-smole sa HF-om dobijeno je 82 mg čistog liofilizovanog peptida sa HPLC prečišćavanjem prinos je bio 2,5 mg čistog Peptida 72 (čistoća analitičkom HPLC >95%). Molelulska masa je proverena elektrosprej masenom spektrometrijom, a očekivani amino-kiselinski sastav je potvrđen analizom aminokiselina.

Peptid 71, Peptid 77, Peptid 89, Peptid 107, Peptid 116 i Peptid 117 su sintetisani na isti način kao i Peptid 72 osim što ovi peptidi isto tako sadrže i druge supstitucije.

Za sintezu Peptida 71, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)8COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH,

Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, B0C-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, B0C-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)6COOH.

Za sintezu Peptida 77, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Cit8, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Me)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Cit-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 89, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12COO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCI)<6>, Ala<8>, Amp<9>,Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu15,His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Lys(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 107, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp<9>,Tyr(Et)<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boe-

Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Tyr(Et)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 116, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>,Amp<9>, Dip<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har2<9>]hGH-RH(1-29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Dip-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Za sintezu Peptida 117, čija je hemijska struktura

[HOOC(CH2)12COO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala8, Amp<9>, Phe(pN02)<10>, His11,Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2, sledeće zaštićene amino kiseline se kupluju po naznačenom redosledu na MBHA smoli: Boc-Har(N02)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Nle-OH, Boc-lle-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Leu-OH, Boc-GIn-OH, Boc-Abu-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Val-OH, Boc-Orn(2CIZ)-OH, Boc-His(Bom)-OH, Boc-Phe(pN02)-OH, Boc-Amp(Alloc)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe(pCI)-OH, Boc-lle-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Asp(OcHx)-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, a zatim, aciluju sa HOOC(CH2)12COOH.

Uklanjanje zaštite, otcepljivanje sa smole i sledstveno prečišćavanje polupreparativnom HPLC Peptida 71, Peptida 77, Peptida 89, Peptida 107, Peptida 116 i Peptida 117 su urađeni kao što je opisano u slučaju Peptida 72. Prečišćena jedinjenja su analitičkom HPLC ocenjena kao suštinski (>95%) čista. Njihove molekularne mase su proverene elektrosprej masenom spektrometrijom i očekivani aminokiselinski sastavi su potvrđeni aminokiselinskom analizom.

PRIMER IX

Vodeni rastvor za intramuskularne injekcije

[PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>,Amp<9>,Tyr(Me)<10>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2

Želatin i Peptid 67, antagonist GH-RH, se rastvore u vodi za injekcije, zatim se rastvor sterilno filtrira.

PRIMER X

Intramuskularna injektabilna formulacija sa produženim dejstvom ( Gel sa susamovim uljem)

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His9, Tyr(Et)1<0>,His<11>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2

Aluminijum monostearat se kombinuje sa susamovim uljem i uz mešanje zagreva na 125°C sve do formiranja bistro žutog rastvora. Ova mešavina se onda autoklaviše zbog sterilnosti i ostavlja da se ohladi. Peptid 80, antagonist GH-RH, se zatim aseptično dodaje uz trituraciju. Posebno poželjni antagonisti su soli male rastvorljivosti, npr., pamoatne soli i slične. Ove ispoljavaju aktivnost dugog trajanja.

PRIMER XI

Intramuskularne ( IM) injektabilne- biodegradabilne polimerne mikrokapsule sa produženim

dejstvom

Mikrokapsule se proizvode od sledećeg:

25/75 glikolid/laktid kopolimer (0,5 unutrašnji viskozitet) 99%

[CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1 -29)NH2

(Peptid 96) 1%

25 mg gornje mikrokapsule se suspenduje u 1,0 mL sledećeg vehikuluma:

PRIMER XII

Biološka aktivnost u endokrinološkim i ontološkim testovima

Peptidi ovog pronalaska su ispitani u testovima in vitro i in vivo na njihovu sposobnost inhibiranja oslobađanja GH indukovanog hGH-RH(1-29)NH2. Takođe, izmereni su i afiniteti vezivanja jedinjenja za tumorske GH-RH receptore. Antitumorska dejstva peptida i njihovi inhibitorni efekti na serumski IGF-I i na IGF sistem tumora su ispitani u raznim kancerskim modelima in vivo.

Superspojeni hipofizni sistem pacova

Analozi su ispitani in vitro testom koji je ranije opisan (S. Vigh and A.V. Schally, Peptides 5:241-347, 1984) sa modifikacijom (Z. Rekasi and A.V. Schally, P. N. A. S. 90:2146-2149, 1993).

Ukratko, ćelije su prethodno inkubirane sa peptidima tokom 9 minuta (3 mL) pri raznim koncentracijama. Odmah posle inkubacije, primenjen je 1 nM hGH-RH(1-29)NH2u toku 3 minuta (1 mL) [0 minutni odgovor]. Za proveru trajanja antagonističkog dejstva analoga: 30, 60, 90 i 120 minuta kasnije od 3 minuta aplikovan je 1 nM hGH-RH(1-29)NH2[30, 60, 90, 120 minutni odgovori]. Ispitane su čiste integralne vrednosti GH odgovora. GH odgovori su upoređeni sa originalnim GH odgovorima, koji su indukovani sa 1 nM GH-RH(1-29)NH2i izraženi su kao procenti u odnosu na originalne GH odgovore. Dejstvo novih antagonista je upoređeno sa onim, formule [Ac-Tyr<1>, D-Arg<2>]hGH-RH(1-29)NH2, "Standardnim antagonistima".

Radioimunotestovi ( RIA) za GH, IGF- I i IGF- II

GH nivoi kod pacova u alikvotima nerazblaženih i razblaženih superspojenih uzoraka su mereni radioimunotestom sa dvostrukim antitelima, korišćenjem materijala nabavljenih od National Hormone and Pituitarv Program, Baltimore, Marvland. Rezultati RIA su analizirani kompjuterskim programom razvijenim u našem Institutu (V. Csernus and A.V. Schallv, in Neuroendocrine Research Methods, Harwood Academic (Greenstein, B.D. ed., London, pp. 71-109, 1991) ovde obuhvaćen kao referenca.

Za merenje nivoa GH i IGF-I u serumu, kao i IGF-I i IGF-II koncentracija u citozolnim frakcijama tumora, uzorci krvi i uzorci tumora su sakupljani i prerađeni, kao što je opisano (Braczkowski R, Schallv AV, Plonowski A, Varga JL, Groot K, Krupa M, Armatis P, Cancer 95: 1735-1745, 2002), ovde uključen kao referenca. Ukratko, uzorci krvi se centrifugiraju kako bi se izdvojio serum, tumori se homogenizuju i centrifugiraju da se razdvoji citozolna frakcija. Serumski GH se onda meri RIA postupkom sa dvostrukim antitelima. Pre merenja RIA-om, IGF-I i IGF-II se iz seruma i citozolne frakcije ekstrahuju upotrebom krioprecipitacionog postupka sa kiselinom-etanolom koji eliminiše većinu IGF vezujućih proteina, koji mogu interferirati sa RIA-om. IGF-I koncentracija je izmerena RIA-om korišćenjem IGF-I kao standarda i kozjim anti-IGF-l antitelom (oba od DSL Inc., VVebster, TX). IGF-II koncentracija je izmerena RIA-om korišćenjem humanog rekombinantnog IGF-II (Bachem) kao standarda i anti-IGF-ll monoklonskog antitela (Amano International Enzvme, Troy, VA).

U svim RIA merenjima inter-serijska varijacija je bila manja od 15%, a intra-serijska varijacija manja od 10%.

Test vezivanja tumorskog GH- RH receptora

Test kompeticije liganda sa obeleženim-J<125>GH-RH antagonistom JV-1-42 su korišćeni za određivanje afiniteta vezivanja GH-RH analoga za GH-RH receptorske izoforme na membranskim frakcijama humanog PC-3 tumora prostate. Korišćeni postupci su detaljno opisani (Halmos G, Schally AV, Varga JL, Poionowski A, Rekasi Z, Czompoly T, Proc Natl Acad Sci USA 97:10555-10560, 2000; Halmos G, Schally AV, Czompoly T, Krupa M, Varga JL, Rekasi Z, Clin Endocrinol Metab 87: 4707-4714, 2002), ovde obuhvaćeni kao reference. Ukratko, radiojodirani derivati JV-1-42 su pripremljeni hloramin-T postupkom. Za pripremu grubih membrana su korišćeni PC-3 tumori, koji su rasli kao ksenografti u "golim" miševima. Homogenati PC-3 membrana su inkubirani sa [<125->J] JV-1-42 i rastućim koncentracijama (10<12>do 10"<s>M) neradioaktivnog antagonista peptida kao kompetitora. Kuglice su razdvojene centrifugiranjem i brojane na radioaktivnost u gama-brojaču. Konačni afiniteti vezivanja su određeni pomoću K, (konstanta disocijacije kompleksa inhibitor-receptor) i određeni su pomoću Ligand PC i McPherson kompjuterskog programa Munsona i Rodbarda (P.J. Munson and D. Rodbard, Anal. Biochem. 107:220-239, 1980). Relativni afiniteti (R.A.) u poređenju sa referentnim peptidima, kao što su JV-1-36 ili JV-1-38, su izračunati kao odnos K, referntnog peptida premaKttestiranog GH-RH antagonista.

Rezultati superspojenih testova

Rezultati in vitro antagonističkih efekata, testiranih u superspojenom hipofiznom sistemu pacova, zbirno su prikazani u Tabeli III. Kao što se može videti iz ovih podataka, supstitucije prisutne u molekulima prouzrokuju daleko uvećano i produženo inhibitorno dejstvo na GH-RH-izazvano oslobađanje GH in vitro kada se uporede sa standardnim antagonistima.

Rezultati Testa vezivanja za tumorski GH- RH receptor

Kao što se vidi iz Tabele IV, odnosno Tabele V supstitucije prisutne u molekulima prouzrokuju suštinsko povećanje njihovih afiniteta vezivanja za izoforme GH-RH receptora na membranama PC-3 tumora u poređenju sa afinitetima vezivanja referentnih jedinjenja.

Dejstvo GH- RH antagonista na ksenografte PC- 3 humanog kancera prostate u " golim"

miševima

Eksperiment 1:

Mužjaci "golih" miševa su implantirani s.c. sa 3 mm<3->skim parčićima PC-3 humanog hormon-nezavisnog tkiva kancera prostate na oba boka. Kada su tumori dostigli zapreminu od otprilike 50 mm<3>, miševi su podeljeni u 5 eksperimentalnih grupa sa 7 do 8 životinja po svakoj grupi i primali su po jednu dnevnu injekciju u toku 28 dana kako sledi: 1. Kontrola (vehikulumski rastvor); 2. JV-1-38 (10 pg/dan s.c); 3. Peptid 31 (10 pg/dan s.c); 4. Peptid 67 (10 pg/dan s.c); 5. Peptid 62 (10 pg/dan s.c). Zapremine tumora su merene dva puta nedeljno. Eksperiment je okončan 29. dana žrtvovanjem miševa pod izofluranskom anestezijom. Dobijeni tumori su očišćeni, izmereni i naglo zamrznuti do daljih analiza. Telesna krv je sakupljena iz abdominalne aorte i serum je izdvojen za RIA merenja IGF-I. Statističke analize rezultata merenja su urađene dvostranim t-testom; podaci su prikazani kao srednje vrednosti±S.E.

Eksperiment 2:

Eksperiment 2 bio je sličan Eksperimentu 1, uz razliku da je Eksperiment 2 otpočet kada su PC-3 tumori porasli do otprilike 30 mm<3>u zapremini. Tada su životinje podeljene u 8 eksperimentalnih grupa sa 8 životinja po svakoj grupi i primale su po jednu dnevnu injekciju u toku 28 dana kako sledi. 1. Kontrola (vehikulumski rastvor); 2. JV-1-38 (10 pg/dan s.c); 3. Peptid 46 (5 pg/dan s.c); 4. Peptid 77 (5 pg/dan s.c); 5. Peptid 76 (5 pg/dan s.c); 6. Peptid 70 (5 pg/dan s.c); 7. Peptid 79 (5 pg/dan s.c); 8. Peptid 80 (5 pg/dan s.c). Dalji detalji Eksperimenta 2 su identični kao kod Eksperimenta 1.

Eksperiment 3:

Mužjaci "golih" miševa su implantirani s.c. sa 3 mm<3->skim parčićima PC-3 humanog hormon-nezavisnog tkiva kancera prostate na oba boka. Kada su tumori dostigli zapreminu od otprilike 65 mm<3>, miševi su podeljeni u 7 eksperimentalnih grupa sa 8 do 9 životinja po svakoj grupi i primali su po jednu dnevnu injekciju u toku 28 dana kako sledi: 1. Kontrola (vehikulumski rastvor); 2. JV-1-38 (10 pg/dan s.c); 3. Peptid 35 (10 pg/dan s.c); 4. Peptid 36 (10 pg/dan s.c); 5. Peptid 37 (10 pg/dan s.c); 6. Peptid 39 (10 pg/dan s.c); 7. Peptid 41 (10 pg/dan s.c). Zapremine tumora su merene dva puta nedeljno. Eksperiment je okončan 28. dana žrtvovanjem miševa pod izofluranskom anestezijom. Dobijeni tumori su očišćeni, izmereni i naglo zamrznuti do daljih analiza. Telesna krv je sakupljena iz abdominalne aorte i serum je izdvojen za RIA merenja IGF-I. Statističke analize rezultata merenja su urađene analizom varijanse (One-Way ANOVA), a zatim, Fisherovim testom; podaci su prikazani kao srednje vrednosti±S.E.

Eksperiment 4:

Svi eksperimentalni detalji Eksperimenta 4 su isti kao i za Eksperiment 3 sa sledećom razlikom. Kada su tumori dostigli zapreminu od otprilike 55 mm<3>, miševi su podeljeni u 5 eksperimentalnih grupa sa 8 do 9 životinja po svakoj grupi i primali su po jednu dnevnu injekciju u toku 28 dana kako sledi: 1. Kontrola (vehikulumski rastvor); 2. Peptid 80 (5 pg/dan s.c); 3. Peptid 86 (5 pg/dan s.c); 4. Peptid 95 (5 pg/dan s.c); 5. Peptid 96 (5 pg/dan s.c). Dalji detalji Eksperimenta 4 su identični kao kod Eksperimenta 3.

Rezultati

Eksperiment 1:

Među testiranim GH-RH antagonistima, Peptid 67 i Peptid 62 su pokazali jače inhibitorno dejstvo na rast PC-3 tumora od referentnog peptida JV-1-38, izloženog u U.S. Patentu 6,057,422 (Tabela VI). Peptidi ovog pronalaska, takođe, u poređenju sa JV-1-38 daleko moćnije suprimiraju nivoe IGF-I u serumu i nivoe IGF-II u tumorima (Tabela VII).

Eksperiment 2:

Peptid 46, Peptid 77, Peptid 76, Peptid 70, Peptid 79 i Peptid 80 ovog pronalaska, korišćeni pri dozi od 5 pg/dan, smanjuju zapremine tumora i težine tumora PC-3 kancera za 20-64% i povećavaju zapreminu tumora duplirajući vremena za do 101% od kontrolne vrednosti (Tabela VIII). Dejstva Peptida 77, Peptida 70, Peptida 79 i Peptida 80 su statistički značajna za jedan ili više od ovih tumorskih parametara. Suprotno, referentni peptid JV-1-38, predmet U.S. Patenta 6,057,422, nije smanjio zapreminu tumora i, samo je prouzrokovao neznatnu i ne-značajnu inhibiciju od 10% u težini PC-3 tumora, kada se koristio u duploj dozi od 10 pg/dan (Tabela VIII). Osim toga, Peptid 70, Peptid 79 i Peptid 80 ovog pronalaska značajno umanjuju serumske nivoe IGF-I za 31-42% dok peptid JV-1-38 nije imao efekta (Tabela IX).

Eksperiment 3:

Svi testirani peptidi značajno inhibiraju rast PC-3 tumora pri dozi od 10 pg/dan. Peptid 35, Peptid 36 i Peptid 39 su imali daleko moćnije antitumorsko dejstvo od referentnog peptida JV-1-38 (Tabela X).

Eksperiment 4:

Sva četiri peptida, primenjena u dozi od 5 pg/dan, značajno su inhibirala rast PC-3 tumora kod "golih" miševa. Peptid 96 je imao najjače antitumorsko dejstvo u ovom eksperimentu (Tabela XI). Serumski nivoi IGF-I su bili, takođe, inhibisani u svim grupama tretiranim sa antagonistima, dejstva Peptida 86 i Peptida 96 su statistički značajna (Tabela XII).

Dejstvo GH- RH antagonista na ksenografte HT- 29 humanog kancera kolona u " golim"

miševima

HT-29 humani kanceri kolona su transplantirani s.c. u mužjake "golih" miševa. 19 dana posle transplantacije, miševi su podeljeni u dve grupe od po 10 životinja u svakoj i tretman je otpočeo. Miševi u tretiranoj grupi su primali jednu dnevnu injekciju Peptida 67 sc. u dozi od 10 pg/dan tokom 62 dana, dok je kontrolna grupa primala vehikulumski rastvarač. Tumori su mereni redovno i zapremine tumora su izračunate. Na kraju ekspreimenta, miševi su žrtvovani i izmerene su težine tumora.

Rezultati

Tretman Peptidom 67 u toku 62 dana prouzrokovao je značajnu inhibiciju od 56.3% u zapreminama i 53.9% u težinama HT-29 tumora koji su rasli u "golim" miševima u poređenju sa kontrolnom grupom (Tabela XIII).

Dejstvo GH- RH antagonista na DMS- 153 humane mikrocelularne karcinome pluća ( SCLC)

koji su postavljeni kao ksenografti u " gole" miševe

Mužjaci "golih" miševa su implantirani s.c. sa parčićima od 3 mm<3>DMS-153 humanog SCLC tkiva. Kada su tumori dostigli zapreminu od otprilike 100 mm<3>, miševi su podeljeni u 3 eksperimentalne grupe od po 6-8 životinja u svakoj i primali su sledeći tretman tokom 6 nedelja: grupa 1 (kontrola), rastvor vehikuluma; grupa 2, Peptid 67 (10 pg/dan s.c); grupa 3, Peptid 31 (10 pg/dan, s.c). Zapremine tumora su beležene dva puta nedeljno. Na kraju tretmana, miševi su anestezirani sa izofluranom, ubijeni dekapitacijom, telesna krv je sakupljena za merenje serumskog IGF-I, a tumori su isečeni i izmereni. Podaci su prikazani kao srednje vrednosti + S.E. Podaci su obrađeni analizom varijanse (One-Way ANOVA) i Student-Newman-Keuls testom.

Rezultati

Težine tumora su značajno pale kod životinja koje su primale tretman bilo sa GH-RH antagonistom Peptidom 67 ili Peptidom 31 u poređenju sa kontrolama (Tabela XIV). Zapremine tumora su, takođe, značajno manje u grupi koja je primala Peptid 67. Osim toga, oba antagonista značajno umanjuju serumske nivoe IGF-I u poređenju sa onima u kontrolnim životinjama (Tabela XIV). Ekspresija mRNK za IGF-II je slično bila inhibisana od strane oba antagonista, nivo ekspresije se kretao 100 + 1.5% u kontrolnoj grupi, 78.0 + 44.3% u grupi tretiranoj Peptidom 67 i 42.7 + 18.5% u grupi koja je primala Peptid 31. Inhibitorni efekat Peptida 31 na mRNK ekspresiju IGF-II je statistički bio značajan (p<0.01 prema kontroli).

Dejstvo GH- RH antagonista na H- 69 humani SCLC koji je postavljen kao ksenograft u

" gole" miševe

Mužjaci "golih" miševa su implantirani s.c. sa parčićima od 3 mm<3>H-69 humanog SCLC tkiva. Kada su tumori dostigli zapreminu od otprilike 80 mm<3>, miševi su podeljeni u 4 eksperimentalne grupe od po 7-8 životinja u svakoj i primali su sledeći tretman tokom 4 nedelje: grupa 1 (kontrola), rastvor vehikuluma; grupa 2, Peptid 67 (10 pg/dan s.c); grupa 3, Peptid 31 (10 pg/dan, s.c); grupa 4, Peptid 72 (10 pg/dan, s.c). Zapremine tumora su beležene dva puta nedeljno. Na kraju tretmana, miševi su anestezirani sa izofluranom, ubijeni dekapitacijom, i tumori su isečeni i izmereni. Podaci su prikazani kao srednje vrednosti ± S.E. Podaci su obrađeni analizom varijanse (One-Way ANOVA) i Student-Newman-Keuls testom.

Rezultati

Svi GH-RH antagonisti, dati kao pojedinačne dnevne injekcije pri dozi od 10 pg/dan, značajno inhibiraju rast tumora H-69 kod "golih" miševa. Među testiranim jedinjenjima, Peptid 72 je imao najjače antiproliferativno dejstvo (Tabela XV).

Claims

1. Peptid, naznačen time što je odabran iz grupe, koja ima formulu: R1-A°-A<1->A<2->Asp-Ala-A<5->A<6->Thr-A<8>-A9-A1<0->A<11->A<12->Val-Leu-A15-A1<6->Leu-Ser-A19-A20-A<2>,-A<22->Leu-Gln-Asp-Ile-A<27->A<28->A<29->A<30->R2 u kojoj je Ričlan grupe koja se sastoji od a) PhAc, Hca, Dat, IndAc, Ipa, 1-Nac, 2-Nac, 1-Npr, 2-Npr, Ibu; CH3(CH2)nCO ili HOOC(CH2)nCO gde je n ceo broj od 2 do 20, i b) bilo kog ravnog lanca, razgrantog lanca, zasićene, nezasićene ili poluzasićene alifatične karboksilne grupe od 2-30 atoma ugljenika i bilo koje karbociklične ili heterociklične aromatične karboksilne grupe od 3-8 atoma ugljenika koja sadrži najmanje jedan atom iz grupe: S, N i 0 u heterocikličnom prstenu, A° je Phe, D-Phe, Arg, D-Arg, ili jednostruka veza ugljenik - azot A<1>je Tyr ili His, A2 je D-Arg ili D-Cit, A5 je Ile ili Val, A6 je Phe Tyr, Nal ili Phe(Y), u kome je Y=F, Cl, Br ili J, A<8>je Asn, D-Asn, Cit,D-Cit, Gln, D-Gln, Ser, D-Ser, Thr, D-Thr, Ala, D-Ala, Abu, D-Abu, ili Aib, A9 je His, D-His, Amp, D-Amp, Gup ili D-Gup, A10 je Tyr, Tur(Et), Tyr(Me); Phe(Y), u kome je Y=H, F, Cl, Br ili J; Amp, His, Cha,Chg, Bpa, Dip, Trp, Trp(For), Tpi, 1-Nal, 2-Nal, 3-Pal, 4-Pal, Phe(NH2) ili Phe(N02), A11 je His, D-His, Arg, D-Arg, Cit, Har, D-Har, Amp, D-Amp, Gup ili D-Gup, A12 je Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, Har, D-Har, Cit, D-Cit, Nle ili Ala, A<15>je Gly, Ala, Abu, Aib, Nle, Gln, Cit ili His, A16 je Gln ili Arg, A19 je Ala ili Abu, A20 je His, D-His, Arg, D-Arg ili Cit, A<21>je Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, Cit ili D-Cit, A<22>je Leu, Ala ili Aib, A27 je Met, Leu Nle, Abu ili D-Arg, A<28>je Arg, D-Arg, Har, D-Har, Ser, Asn, Asp, Ala, Abu, ili Cit, A29 je Arg, D-Arg, Har, D-Har, Cit, D-Cit ili Agm, A<30>je Arg, D-Arg, Har, D-Har, Cit, D-Cit, Agm ili je jednostruka veza ugljenik-azot ili ugljenik-kiseonik, R2je -NH2, -NH-NH2, -NH-OH, -NHR3, -NR3R4, -OH, ili -OR3u kome su R3i R4bilo koji od Ci.10alkila, C2.10alkenila, C2_i0alkinila, Cv^fenilalkila, -C6H5ili -CH(C6H5)2; pod uslovom da ukoliko je A<29>Agm onda nema A<30>i R2, a ako je A<30>Agm onda nema R2, i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

2. Jedinjenje, kao u patentnom zahtevu 1,naznačeno time što jedan ili oba od A11 i A<20>nisu: Arg, D-Arg ili Cit.

3. Jedinjenje, kao u patentnom zahtevu 1,naznačeno time što je odabrano iz grupe, koja se sastoji od: [PhAc-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Amp<9>,Tyr(Me)<10>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 67 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Am<p9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 68 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, His<9>, Tyr(Me)10, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^jhGH-RH(1-29)NH2Peptid 69 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>,Amp9, Tyr(Me)'°, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 70 [HOOC(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)6, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Ab<u15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 71 [HOOC(CH2)12CO-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Amp<9>,Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 72 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His11, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(l -29)NH2 Peptid 73 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Me)10, His11, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har^JhGH-RHC 1 -29)NH2 Peptid 74 [1-Nac-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^hGH-RHC 1 -29)NH2 Peptid 75 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Me)'°, His11, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 76 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Cit8, Amp<9>, Tyr(Me)10, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 77 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>,<A>mp<9>, Tyr(Et)10,His<11>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 78 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His", Abu15,Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 79 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 80 [HOOC(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 81 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu15,Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 82 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu15,His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 86 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, His20, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 87 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu15, His<20>, Nle27, D-Arg28, Har29]hGH-RH(l-29)NH2 Peptid 88 [HOOC(CH2)I2CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(l -29)NH2 Peptid 89 [l-Nac-Tvr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 91 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 92 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Cit<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 93 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, His<15>, His20,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 94 [CH3(CH2)6CO-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 95 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)6, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 96 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NHEt Peptid 97 [CH3(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg2<8>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NHEt Peptid 98 [CH3(CH2)10CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NHEt Peptid 99 [Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His11, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NHEt Peptid 100 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NH Me Peptid 101 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 102 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Or<n21>, Nle27,D-Arg2<8>,Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 103 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Dip<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 104 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Ala8, His<9>, Phe(pN02)<10>, His11, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 105 [CH3(CH2)6CO-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His9, Tyr(Et)<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har29]hGH-RH( 1 -29)NHEt Peptid 106 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Ala8, Amp<9>, Tyr(Et)10,His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 107 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Dip<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 108 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Phe(pN02)<10>, His11, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn2<1>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 109 [HOOC(CH2)i2CO-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Ala8, His<9>, Tyr(Et)10, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NHEt Peptid 110 [CH3(CH2)ćCO-Tyr',D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Dip<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NH2 Peptid 111 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, A<mp9>, Phe(pN02)<10>, His<11>, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 112 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCl)<6>, Ala<8>,<A>mp<9>, Tyr(Et)10,His11, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NHEt Peptid 113 [CH3(CH2)6CO-Tyr, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Dip<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NHEt Peptid 114 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His9, Phe(pN02)<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(l -29)NHEt Peptid 115 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, Am<p9,>Dip<10>, His11, Orn12,Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 116 [HOOC(CH2)12CO-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Phe(pN02)<10>, His11,Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 117 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8,>Amp<9>, Dip<10>, His11, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg28, Har29]hGH-RH(l -29)NHEt Peptid 118 [CH3(CH2)6CO-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, Amp<9>, Phe(pN02)<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NHEt Peptid 119 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, A<mp9,>Dip<10>, His11, Orn12,Abu<15>, His<20>, Or<n21>, Nle27,D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(l-29)NHEt Peptid 120 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala8, Amp<9>, Phe(pN02)<10>, His<11>, Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NHEt Peptid 121

4. Jedinjenje, kao u patentnom zahtevu 3,naznačeno time što je odabrano iz grupe, koja se sastoji od: [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu15,Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 67 [PhAc-Tyr<J>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, His<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^JhGH-RH(1-29)NH2Peptid 69 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^jhGH-RHC 1 -29)NH2 Peptid 70 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>,D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Amp9, Tyr(Me)<1>0,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NH2 Peptid 72 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, Am<p9,>Tyr(Me)<10>, His", Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 76 [HOOC(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, Amp<9>, Tyr(Me)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 77 [CH3(CH2)ćCO-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NH2 Peptid 79 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 80 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)10, His<11>, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 86 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His11, Orn<12>, Abu15,Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 95 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)6, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His", Orn<12>, Abu<15>, His<20>, Orn<21>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 96 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ala<8>, His<9>, Tyr(Et)<10>, His", Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NHEt Peptid 97

5. Jedinjenje, naznačeno time što je odabrano iz grupe, koja se sastoji od: [CH3(CH2)4CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 2 [HOOC(CH2)4CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 3 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har^hGH-RHCl-29)NH2Peptid 4 [HOOC(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu15,Nle<27>, D-Arg28, Har29]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 5 [CH3(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har^hGH-RHCl-29)NH2Peptid 6 [HOOC(CH2)8CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, A<rg9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 7 [CH3(CH2)10CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg28, Har^hGH-RHO-29)NH2Peptid 8 [HOOC(CH2)10CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 9 [CH3(CH2)12CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCI)<6>, A<rg9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 10 [HOOC(CH2)12CO-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, A<rg9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 11 [CH3(CH2)14CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 12 [HOOC(CH2)14CO-Tyr<1>, D-Arg2, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 13 [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,Har<28>, D-Arg29]hGH-RH(l - 29)NH2Peptid 14 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, Har<28>, D-Arg<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 15 [CH3(CH2)14CO-Phe°, D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 16 [CH3(CH2)14CO-D-Phe°, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg28, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 17 [PhAc-Arg°, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 18 [PhAc-D-Arg°, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 19 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)6, Cit<8>, A<rg9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 21 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, Cit<9>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 22 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)6, Cit<8>, Arg<9>, Abu15, Nle<27>, Har<28>, D-Arg29]hGH-RH( 1 - 29)NH2Peptid 23 [PhAc-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, Cit<9>, Abu15, Nle<27>, Har<28>, D-Arg29]hGH-RH( 1 - 29)NH2Peptid 24 [HOOC-(CH2)I2-CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, Cit<9>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NH2 Peptid 25 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, D-Ala<8>,Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 26 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Abu<8,>Arg<9>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 27 [PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<9>, Abu<15>, Nle<27>, Har28, D-Arg<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 28 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>,Arg<9>, Amp<10>, Abu<15>, Nle27,D-Arg28,Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 30 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Amp<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 31 [PhAc-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, His<10>, Abu15,Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 32 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, A<rg9>, Cha<10>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 33 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tpi<10>, Abu<15>, Nle2<7>,D-Arg<28>, Har<9>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 34 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, 2-Nal<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 35 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Dip<10>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 36 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Har<9>, Phe(pNH2)<10>, Abu15,Nle27, D-Arg2<8>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 37 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>,Trp10, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 38 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Har<9>, Phe(pN02)<10>, Abu15,Nle27, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 39 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, 3-Pal<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 40 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Et)<10>, Abu15,Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 41 [PhAc-His<1>, D-Arg<2>, Tyr<6>, Har<9>, Bpa<10>, Abu15,Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 42 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Har<12>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 43 [Hca-Tyr1, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NHEt Peptid 45 [PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NHEt Peptid 46 [Hca-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NHEt Peptid 47 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NHEt Peptid 48 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Aib15,Nle27, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NHEt Peptid 49 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Orn12,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NHEt Peptid 50 [Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10,Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Agm<29>]hGH-RH(l-29) Peptid 51 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10,Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Agm<29>]hGH-RH(l-29) Peptid 52 [Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg2<8>, Har29 Har30]hGH-RH(1-30)NH2Peptid 53 [Dat-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29Har<30>]hGH-RH(1-30)NH2Peptid 54 [Ipa-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg28,Har<29>Har<30>]hGH-RH(1-30)NH2Peptid 55 [Hca-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har29 Har30]hGH-RH(l-30)NHEt Peptid 56 [Hca-Tj'r1, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, D-Arg<29>Har<30>]hGH-RH(l-30)NH2Peptid 57 [Hca-Tyr<!>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10,Abu<1>5, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>D-Arg<30>]hGH-RH(l-30)NH2Peptid 58 [Hca-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29 Agm30]hGH-RH(l-30) Peptid 59 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>Agm30]hGH-RH( 1 -3 0) Peptid 60 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, His<11>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NH2 Peptid 62 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10, Har11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 63 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10, Amp11, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Hai-^hGH-RHC 1 -29)NH2 Peptid 64 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Cit", Abu<15>, Nle27 D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 65 [PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NH2 Peptid 84 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, His11,Abu<15>, His<20>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 85 [PhAc-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, A<rg9>, Cit<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 90.

6. Peptid kao u patentnom zahtevu 5, n a zn a č e n time što je odabran iz grupe sastavljene od: [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, A<rg9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 4 [HOOC(CH2)6CO-Tyr<!>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 5 [HOOC(CH2)8CO-Tyr\ D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Ar<g9>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 7 [HOOC(CH2)12CO-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>,Arg<9>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 11 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, Cit<9>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 22 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Har<9>, 2-Nal<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 35 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Dip<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 36 [PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Phe(pN02)<10,>Abu<15>, Nle2<7>, D-Arg<28>, Har^hGH-RH(1-29)NH2Peptid 39 [PhAc-Tyr<1>,D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Et)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 41 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)<10>, His11, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NH2 Peptid 62

7. Peptid, kao u patentom zahtevu 5, n a z n a č e n time što je odabran iz grupe, koja se sastoji od: [CH3(CH2)6CO-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu<15>, Nle27, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 4 [HOOC(CH2)8<C>O-Tyr<1>, D-Arg<2>,Phe(pCl)<6>, Arg<9>, Abu15,Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 7 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Cit<8>, Arg<9>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 21 [PhAc-Tvr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>,Arg<9>, Amp<10>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 30 [PhAc-Tyr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Amp<10>, Abu15, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 31 [PhAc-Tvr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Phe(pNH2)<10>, Abu<15>, Nle27,D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(1-29)NH2Peptid 37 [PhAc-Tvr<1>, D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Et)<10>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har<29>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 41 [PhAc-His<1>, D-Arg<2>, Tyr<6>, Har9,Bpa1<0>, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har2<9>]hGH-RH(l-29)NH2Peptid 42 [PhAc-Tyr', D-Arg<2>, Phe(pCl)<6>, Har<9>, Tyr(Me)10, His11, Abu<15>, Nle<27>, D-Arg<28>, Har29]hGH-RH( 1 -29)NH2 Peptid 62

8. Upotreba jedinjenja, kao u bilo kom od patentnih zahteva 1 ili 5, naznače-na time što je za proizvodnju farmaceutske smeše za supresiju nivoa GH kod pacijenata kojima je to potrebno.

9. Upotreba jedinjenja, kao u bilo kom od patentnih zahteva 1, ili 5, naznačena time što je za proizvodnju farmaceutske smeše za supresiju nivoa IGF-I ili IGF-II u tkivu tumora pacijenta koji ima kancer sa receptorima za IGF-I.

10. Upotreba jedinjenja, kao u bilo kom patentnom zahtevu 1, ili 5, naznačena time što je za proizvodnju farmaceutske smeše za supresiju nivoa VEGF u tkivu tumora pacijenata koji ima rak.

11. Upotreba jedinjenja, kao u bilo kom patentnom zahtevu 1, ili 5, naznačena time što je za proizvodnju farmaceutske smeše za supresiju nivoa IGF-I kod pacijenata kojima je to potrebno.

12. Upotreba jedinjenja, kao u bilo kom patentnom zahtevu 1, ili 5, naznačena time što je za proizvodnju farmaceutske smeše za supresiju nivoa serumskog IGF-I kod pacijenta koji ima kancer sa receptorima za IGF-I.

13. Upotreba jedinjenja, kao u bilo kom patentnom zahtevu 1, ili 5, naznačena time što je za proizvodnju farmaceutske smeše za supresiju nivoa GH kod pacijenta koji ima kancer sa receptorima za IGF-I ili GH.

14. Upotreba jedinjenja, kao u bilo kom patentnom zahtevu 1, ili 5, naznačena time što je za proizvodnju farmaceutske smeše za blokiranje GH-RH receptora kod pacijenta koji ima kancer sa receptorima za GH-RH.

15. Farmakološki primenjiva smeša za supresiju nivoa GH kod pacijenta, naznačena time što se sastoji suštinski od jedinjenja, kao u patentnom zahtevu 1, ili 5 i farmakološki prihvatljivog nosača.

16. Farmakološki primenjiva smeša za supresiju nivoa IGF-I ili IGF-II u tkivu tumora pacijenta koji ima kancer sa receptorima za IGF-I, naznačena time što se sastoji suštinski od jedinjenja, kao u patentnom zahtevu 1, ili 5 i farmakološki prihvatljivog nosača.

17. Farmakološki primenjiva smeša za supresiju nivoa VEGF u tkivu tumora pacijenta koji ima kancer, naznačena time što se sastoji suštinski od jedinjenja, kao u patentnom zahtevu 1, ili 5 i farmakološki prihvatljivog nosača.

18. Farmakološki primenjiva smeša za supresiju nivoa IGF-I kod pacijenta, naznačena time što se sastoji suštinski od jedinjenja, kao u patentnom zahtevu 1, ili 5 i farmakološki prihvatljivog nosača.

19. Farmakološki primenjiva smeša za supresiju nivoa GH kod pacijenta koji ima kancer sa receptorima za IGF-I ili GH, naznačena time što se sastoji suštinski od jedinjenja, kao u patentnom zahtevu 1, ili 5 i farmakološki prihvatljivog nosača.

20. Farmakološki primenjiva smeša za supresiju nivoa IGF-I kod pacijenta koji ima kancer sa receptorima za IGF-I, naznačena time što se sastoji suštinski od jedinjenja, kao u patentnom zahtevu 1, ili 5 i farmakološki prihvatljivog nosača.

21. Farmakološki primenjiva smeša za blokiranje receptora GH-RH kod pacijenta koji ima kancer sa receptorima za GH-RH, naznačena time što se sastoji suštinski od jedinjenja, kao u patentnom zahtevu 1, ili 5 i farmakološki prihvatljivog nosača.