RS20060624A - Antimikobakterijska farmaceutska kompozicija - Google Patents

Abstract

Opisanaje antimikobakterijska kombinacija i formulacija namenjena lečenju tuberkuloze. Korisćena jedinjenja su N-(3 -[ [4-(3 -trifiuorometilfenil)piperazinil ]metil]- 2-metil-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamid sa formulom ili njegova farmaceutski prihvatljiva netoksična so i određena količina jednog ili više antituberkulotika prve linije.

Description

ANTEVf IKOBAKTERIJSKA FARMACEUTSKA KOMPOZICIJA

PODRUČJE PRONALASKA

Izloženi pronalazak se odnosi na kombinaciju koja se sastoji od delotvome količine N-(3-[[4-(3-trifluoromenlfenil)piperazinil]m formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i jednog ili više antituberkulotika prve linije za lečenje tuberkuloze, uključujući i multirezistentne varijetete i latentnu tuberkulozu.

Izloženi pronalazak se, takođe, odnosi na farmaceutsku kombinaciju, koja se sastoji od kombinacije delotvorne količine N-(3-[[4-(3-trifluorometilfenil)piperazinil]metil]-2-metil-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamida formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa jednim ili više antituberkulotika prve linije u smesi sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijensa. Kombinacija se može koristiti za lečenje tuberkuloze, uključujući multirezistentne varijetete i latentnu tuberkulozu.

Izloženi pronalazak se, osim toga, odnosi na metod za lečenje tuberkuloze, uključujući multirezistentne varijetete i latentnu tuberkulozu.

POZADINA PRONALASKA

Tuberkuloza ostaje, širom sveta, vodeći uzrok smrtnosti. Svake godine regjstruje se oko 8 miliona aktivnih slučajeva tuberkuloze, uz 3 miliona smrtnih ishoda godišnje. Procenjuje se da oko 1,7 milijardi ljudi (jedna trećina svetske populacije) u sebi nosi latentnu infekcijuMycobacterium tuberculosis[Kochi, A.Tubercle.1991,72, 1- 6]. Osobe sa latentnom tuberkulozom su čitavog svog veka pod rizikom od 2% do 23% za reaktiviranje bolesti u jednom trenutku života [Parrish, NM., Dick, JD., and Bishai, WR.,Trends. Microbial.1980, 6,107 -112]. Osim toga, imunosupresivne bolesti, uključujući i infekciju humanim virusom imuno-deifcijencije (HTV), drastično su povećale rizik za reaktiviranje tuberkuloze.

Zbog pojave patogenih mikroorganizama rezistentnih na lekove, lečenje na aktuelni načinje otežano u, u mnogim slučajevima, i potpuno nedelotvorno. Lečenje multirezistentnih varijeteta tuberkuloze je veoma teško, a bolest često povlači za sobom visoku stopu smrtnosti, posebno u zemljama u razvoju. Procenjuje se da će, u sledećih dvadeset godina, novih slučaje-va infekcije tuberkulozom biti više od jedne milijarde ljudi, a da će bolesti podleći skoro 35 miliona ljudi [WHO Fact Sheet No. 104, Global Alliance For TB Drug Development. Executive Summary of the Scientific Blueprint for TB Development; http:// www. whO. int/ inf-fS/ en/ fact 104. htmll. Pojavom tuberkuloze povezane sa HTV infekcijom, bolest poprima alar-mantne razmere kao jedna od vodećih bolesti-ubica današnjeg sveta. Svetska zdravstvena orga-nizacija (WHO) proglasila je potrebu neodložnog suzbijanja infekcije tuberkulozom priorite-tom, a u cilju prevencije širenja sojeva rezistentnih na lekove.

Jedan od problema aktuelnih terapija protiv tuberkuloze jeprelazak M. tuberculosisu

uspavano ili latentno stanje. Tako, dok terapija aktivne tuberkuloze savremenim režimom kombinacija lekovau značajnoj meri smanjuje bakteriološko opterećenje, jedan deo bacila prelazi u uspavano, odnosno neaktivno stanje i preživljava u organizmu domaćina mesecima ili godina-ma, ne produkujući očiglednu bolest. Bacili se, međutim, mogu kasnije reaktivirati i ponovo izazvati aktivnu tuberkulozu. Smatra se daje ponovno izbijanje tuberkuloze danas posledica reaktivacije latentnih patogenih mikroorganizama koji su preživeli u organizmu domaćina [Stead,WW, Am. Rev. Respir. Dis.,1982,95, 729-745;Stead, WW, Kerby, GR., Schleuter, and Jordahl,CW ,Ann Intern. Med.,1968,68, 731-745].

Prvi lek korišćen u borbiprotiv M. tuberculosisbio je streptomicin, 1944. godine, za koji je otkriveno da inhibiše rast i razvojM. tuberculosis.Tokom poslednjih 30 godina u kliničku praksu je uvedeno nekoliko klasa lekova, na primer:

a) rifamicini dugog dejstva, npr. rifapentin, rifabutin i rifalazil [Javiš, B.,

Lamb,HM., Drugs,1998,56, 607-616; McGregor, MM, Olliaro, P., Wolmarans,L., Am J.

Respir. Crit. Care Med.,1996,154, 1462-1467; Shoen, CM., DeStefano, MS., Cvnamon, MH.,Clin. lnfect. Dis.,2000, 30(Suppl.3), S288-S29]; b) fluorohinolonska jedinjenja, npr. levofloksacin, moksifloksacin i gatifloksacin [Ji, B, Lounis, N., Truffbt-Pernot, C, Grosset.,Antimicrob. Agents Chemother.,1995,39, 1341-1344; Miyazaki, E., Mivazaki, M., Chen, JM., Chaisson, RE., Bishai, WR ,Antimicrob Agents Chemother ,1999,43, 85-89; Fung-Tomc, J., Mmassian, B , Kolek, B., Washo, T., Huczko, E., Boner, D.,Antimicrob. Agents Chemother.,2000,45, 437-446],

c) Oksazolidinonska jedinjenja [Cvnamon, MH., Klemens, SP., Sharpe, CA.,

Chase, SC,Antimicrob. Agents Chemother.,1999, 43, 1189-1191]; i

d) Niroimidazopirani [Strover, CK., Warrener, P., VanDevabter, D.,

Nature,2000,405, 962-966].

Ipak, nijedno od ovih jedinjenja nije ispoljilo željeni potencijal za delotvorno lečenje multirezistentne i/ili latentne tuberkuloze.

Rifapentin i rifalazil su ispoljili efikasnost u lečenju tuberkuloze primenom manjih (intermitentno terapijskih) doza lekova, a kombinacija ova dva leka je, prema iskustvima, efikasnija od rifampicina u sprečavanju latentne tuberkuloze. Međutim, s obzirom na to da ovi lekovi u molekulu imaju istu grupu atoma odgovornu za dejstvo, spektar njihovog dejstva na rezistentne sojeve nije značajnije poboljšan. Ova jedinjenja su prilično nedelotvoma protiv multirezistentnihsojeva M. tuberculosis,a osim toga, dokazano je da su mnoga od ovih jedinjenja toksična.

Čitav niz lekova, npr. p-aminosalicilna kiselina, izonijazid, pirazinamid, etambutol, etionamid, rifampicin itd. korišćen je za lečenje tuberkuloze, bilo kao monoterapija. Ovi lekovi su se pokazali efikasnijim od streptomicina za lečenje bolesnika zaraženih sojevima rezistent-nim na streptomicin, vodeći nas, tako, u eru efikasnog lečenja tuberkuloze.

Savremena terapija za lečenje tuberkuloze sastoji se od primene kombinacije četiri leka prve linije, konkretno izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida, koji se daju pojedi-načno, kao zasebne formulacije, ili u obliku kombinacije fiksne doze. Da bi terapija bila delotvoma, četiri navedena leka prve linije daju se bolesniku u inicijalnoj ili indukcionoj fazi, tokom koje se lekovi koriste u kombinaciji u cilju uništavanje populacijeM. tuberculosiskoja se brzo razmnožava, kao i za prevenciju pojave rezistencije na lekove. Zatim sledi faza nastavka terapije, tokom koje se daju lekovi za sterilizaciju, odnosno izonijazid, rifampicin i pirazinamid sa ciljem da unište populacijuM. tuberculosiskoja se periodično deli [Jindani, A., Aber, VR., Edwards, EA., Mitchison, DA.,Am. Rev. Respir. Dis.,1980,12L 39-49; Grosset, J,Tubercule.,1978,59, 287-297; East African/British Medical Research Council Study inAm. Rev. Respir. Dis.,1977,115, 3-8; Singapore Tuberculosis Service/British Medical Research Councilin Am. Rev. Respir. Dis.,1979, U9, 579-585; British Thoracic Society and Tuberculosis Association inAm. Rev. Respir. Dis.,1982,126, 460-462, Snider, DE., Rogowski, J., Zierski, M, Bek, E., Long,MW,^m. Rev. Respir. Dis.,1982,125,265-267].

Iako navedena kombinacija istovremeno primenjenih lekova prve linije obezbeđuje lečenje infekcije osetljivim sojevimaMtuberculosisza 4 do 6 meseci, ovakva kombinovana terapija nije uvek i uspešna, pogotovo kod bolesnika kod kojih su uzročnici sojevi rezistentni na više lekova (multirezistentni). Pored toga, dugotrajnu terapiju koja podrazumeva pnmenu lekova tokom 6 meseci, najčešće prate neprijatni neželjeni efekti. Nadalje, komplijansa pri relativno dugotrajnoj terapiji je, po pravilu, slaba. To nepridržavanje treapije najčešće vodi neuspehu terapije, koji za posledicu ima nastanak rezistencije na lekove.

S druge strane, lekovi druge linije koji se koriste u lečenju, npr. cikloserin, klofazimin, kapreomicin itd., skuplji su, mogu da izazovi teške neželjene efekte a istovremeno su slabiji od lekova prve linije.

Supstituisani derivati pirola predstavljaju drugu klasu jedinjenja koja obećavaju kao antimikobakterijski lekovi. Sintetisani su mnogi derivati pirola i ispitivani na antituberkuloznu aktivnost [Deidda, D., et.al., Antimicrob. Agents Chemother.,1998, 3035-3037;Biava, M , et. al.,J. Med. Chem Res., 1999, 19-34;Biava, M, et. al.,Bioorg. & Med. Chem. Lett.,1999, 9,

2983-2988; Cerreto, F., et. al.,Eur. J. Med Chem.,1992, 27, 701-708; Gillet, C, et. al.,Eur. J. Med. Chem - Chimica Therapeutica.,1976,11(2), 173-181; Raagno. R, et.al , Bioorg. & Med Chem.,2000, 8,1423-1432]. Ovde opisana jedinjenja su, u najboljem slučaju, kandidati da postanu lekovi, a ne lekovi, s obzirom na to da se u izveštajima o rezultatima ispitivanja ne navodi aktivnostin vivoi toksičnost ovde opisanih jedinjenja u lečenju eksperimentalne tuberkuloze na životinjskim modelima. Ova jedinjenja su, stoga, više od akademskog, nego nekog značajnijeg komercijalnog interesa.

Lako je razumljiva, stoga, neodložna potreba za razvojem i formulisanjem novijih terapijskih režima, koji bi se mogli koristiti za sprečavanje, lečenje i/ili redukovanje tuberkuloze i/ili zaeliminisanje opasnosti od multirezistentne i/ili latentne tuberkuloze.

Alternativni terapijski režim bi morao biti mnogo bolji od postojećih terapijskih režima da može da: a) skrati ukupno trajanje terapije i/ili značajno smanji ukupan broj doza; b) obezbedi efikasnu terapiju multtirezistentnih varijeteta;

c) obezbedi efikasniju terapiju latentne tuberkuloze; i

d) na najmanju meni svede ili čak spreči neželjene efekte.

U našoj PCT prijavi br. PCT/IN02/00189 (W0 04/026828 Al) opisali smo nekoliko

supstituisanih derivata pirola i njihove prihvatljive soli, koji su ispoljili dobro do izvanredno inhibitorno dejstvo naosetljive i rezistentne sojeve M.tuberculosis.Vrednosti MIC nekih od jedinjenja koja ispoljavaju najjače dejstvo protiv osetljivih i multirezistentnih sojevaM.tuberculosisbile su u rasponu od 0.12 do 0.5 u.g/ ml. Osim toga, neka od ovih jedinjenja su tako-đe ispoljila terapijski značajnoin vivodejstvo kod životinja inficiranih saMtuberculosis,a pokazala su se bezbeđnim zbog toga što, kod miševa, imaju vrednost LD50od oko 700 mg/kg, dok je odgovarajuća vrednost za izonijazid 133 mg /kg. Štaviše, ova jedinjenja karakterišu izvanredni farmakokinetski profili. Podrazumeva se daje predmet PCT prijave br. PCT/IN02/00189 (WO 04/026828 A) sastavni deo ovog izlaganja 1 ovo izlaganje se na njega poziva.

Autori ovog pronalaska su utvrdili da izvestan broj derivata pirola, izložen u patentnoj PCT prijavi broj PCT/TN02/00189 (WO 04/026828 Al), kad se kombinuje sa nekim od lekova prve linije, obezbeđuje sinergistički efekat, obezbeđujući time novi način za lečenje tuberkuloze, uključujući multirezistentne varijetete i latentnu tuberkulozu. Ovde izloženi načini lečenja su nadmoćni u odnosu na terapijske rezime koje je struka prethodno poznavala

CILJEVI PRONALASKA

Jedan od ciljeva ovog pronalaska je da na raspolaganje stavi kombinaciju, koja se sastoji od jednog ili više derivata pirola, predstavljenih našom PCT prijavom pod brojem PCT/TN02/00189 (WO 04/026828 Al),1jednog ili više antituberkulotika, a u cilju efikasnog lečenja tuberkuloze, uključujući multirezistentne varijetete i latentnu tuberkulozu.

Nadalje, cilj ovog pronalaska je da učini dostupnom novu kombinaciju koja se sastoji od sinergistički delotvorne količine derivata pirola, opisanog u PCT prijavi pod brojem PCT/TN02/00189 (WO 04/026828 Al), i delotvorne količine jednog ili više antituberkulotika prve linije.

Sledeći, pak, cilj ovog pronalaska je da obezbedi dostupnost kombinacije koju čini jedan ili više derivata pirola, iz izlaganja sadržanog u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/IN02/00189 (WO 04/026828 Al), i jednog ili više ostalih antituberkulotika, koja delotvorno inhibiše i/ili leči mikobakterijske bolest/ćelije, uključujući, a ne ograničavajući se na, jedan ili više osetljivih i multirezistentnihsojeva Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium - intracelulami kompleks, M. fortutium, M. kansasaiiili druge srodne mikobakterijske vrste.

Nadalje, cilj ovog pronalaska je i daobezbedi dostupnost efikasnog načina za lečenje tuberkuloze.

Jedan od daljih ciljeva je da se vreme trajanja terapije od šest meseci skrati.

U ciljeve ispitivanja, osim toga, uključen je i cilj da se učini dostupnim režim lečenja tuberkuloze, koji se sastoji od toga da se bolesniku, kojem je lečenje potrebno, daje kombinacija koji sačinjavaju derivati pirola iz naše PCT prijave broj PCT/TN02/00189 (WO 04/026828 Al) ijedan ili više antituberkulotika prve linije.

Cilj je, nadalje, da se učini dostupnim terapija za tuberkulozu, koja omogućava potpunu eradikaciju osetljivih i rezistentnih sojeva, a koji se sastoji u tome da se bolesniku, kojem je terapija potrebna, daje kombinacija koju čine derivati pirola, opisani u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/IN02/00189(WO 04/026828 Al), i jedan ili više antituberkulotika prve linije.

Osim toga, cilj izloženog pronalaska je da na raspolaganje stavi delotvomu terapiju za lečenje tuberkuloze, koja dovodi do kompletnog istrebljenja osetljivih i rezistentnih sojevaM. tuberculosis,a podrazumeva da se bolesniku kojem je potrebna daje kombinacija derivata pirola, izloženih u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/IN02/00189 (WO 04/026828 Al), i jednog ili više antituberkulotika prve linije.

Sledeći cilj ovog pronalaska je da se ponudi delotvorna terapija za lečenje tuberkuloze, koja dovodi do potpunog istrebljenja jednog ili više osetljivih i rezistentnih sojeva, npr.Mycobacterium tuberculosis, Mycobacierium avium - intracelulami kompleks, M. fortutium, M. kansasaiiili drugih srodnih mikobakterijskih vrsta, a koja podrazumeva da se bolesniku kojem je potrebna, daje kombinacija koja se sastoji od derivata pirola, opisanih u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/IN02/00189(WO 04/026828 Al), i jednog ili više antituberkulotika prve linije.

Cilj ovog pronalaska je i da se na raspolaganje stavi metod za lečenje i/ili inhibisanje jednog ili više multirezistentnih sojeva uključujući, ali se ne organičavajući se na,M. tuberculosis, Mycobacterium avium - intracelulami kompleks, M. fortutium, M. kansasaiii drugih srodnih mikobakterijskih vrsta, koji podrazumeva primenu farmaceutske formulacije koja sadrži kombinaciju derivata pirola, opisanih u PCT prijavi broj PCT/TN02/00189 (WO 04/026828 Al) i jednog ili više antituberkulotika prve linije kod bolesnika kojima je ova terapija neophodna.

Osim navedenog, cilj ovog pronalaska je da obezbedi metod za prevenciju relapsa tuberkuloze posle prekida primene terapijskog režima, koji se sastoji od davanja bolesniku, kojem je ova terapija neophodna, kombinacije koju sačinjavaju derivati pirola iz naše PCT prijave pod brojem PCT/IN02/00189 (WO 04/026828 Al) i jedan ili više antituberkulotika prve linije.

Cilj ovog pronalaska je i da na raspolaganje stavi metod za prevenciju relapsa infekcijeM. tuberculosisposle prekida primene terapijskog režima koji podrazumeva davanje bolesniku, kojem je ta terapija potrebna, kombinacije koju čine derivati pirola, opisani u našoj PCT prijavi broj PCT/IN02/00]89(WO 04/026828 Al), i jedan ili više antituberkulotika prve linije.

Među ciljevima ovog pronalaska je i cilj da se razvije farmaceutska formulacija koja se sastoji od kombinacije derivata pirola, izloženih i opisanih u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/TN02/00189 (WO 04/026828 Al), sa jednim ili više antituberkulotika prve linije za potrebe efikasnog lečenja tuberkuloze, uključujući multirezistentne varijetete i latentnu tuberkulozu.

Uz niz drugih, cilj ovog pronalaska je da na raspolaganje stavi farmaceutsku formulaciju koja sadrži sinergistički delotvomu količinu derivata pirola, opisanih u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/IN02/00189 (WO 04/026828 Al) u kombinaciji sa delotvornom količinom jednog ili više antituberkulotika prve linije.

Jedan od ciljeva ovog pronalaska je, nadalje, da se na raspolaganje stavi farmaceutska formulacija, koju čini kombinacija derivata pirola, opisanih u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/IN02/00189 (WO 04/026828 Al), sa jednim ili više antituberkulotika prve linije, koja delotvorno inhibiše i/ili leči mikobakterijske bolesti/ćelije uključujući, ali se ne ograničavajući na, jedan ili više osetljivih i multirezistentnihsojevaM<y>cobactehum tuberculosis, Mycobactehum avium - intracelulami kompleks, M. fortutium, M. kansasaiii druge srodne mikobakterijske vrste.

Cilj ovog pronalaska je, pored toga, da obezbedi delotvoran način lečenja tuberkuloze, koji se sastoji od toga da se, bolesniku kojem je takav režim lečenja potreban, daje farmaceutska formulacija sačinjena od kombinacije derivata pirola, opisanih u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/IN02/00189 (WO 04/026828 Al) sa jednim ili više antituberkulotika prve linije.

Cilj ovog pronalaska je, potom, da na raspolaganje stavi terapiju za lečenje tuberkuloze, čija primena za posledicu ima potpunu eradikaciju osetljivih i rezistentnih sojeva, a koja se sastoji od davanja bolesniku, kojem je takva terapija neophodna, farmaceutske formulacije koja se sastoji od derivata pirola, opisanih i izloženih u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/IN02/00189(WO 04/026828 Al), i jednog ili više antituberkulotika prve linije.

Ciljevi ovog pronalaska obuhvataju, nadalje, da se na raspolaganje stavi delotvoran način za lečenje tuberkuloze, čija je posledica primene kompletna eradikacija osetljivih irezistentnih M tuberculosis,koji podrazumeva da se bolesniku, kojem je ovakva terapija neophodna, daje farmaceutska formulacija, koja sadrži kombinaciju derivata pirola, opisanih u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/EN02/00189 (WO 04/026828 Al), sa jednim ili više antituberkulotika prve linije.

Od ciljeva ovog pronalaska treba istaći i onaj da se učini dostupnim delotvoran na-čin lečenja tuberkuloze, čija primena za posledicu ima potpunu eradikaciju jednog ili više osetljivih ili rezistentnih sojeva, npr.Mycobactehum tuberculosis, Mycobacterium avium intercelulami kompleks, M. fortutium, M. kansasaiiili druge srodne vrste mikobakterija, a koji podrazumeva da se bolesniku, kojem je neophodna takva terapija, daje farmaceutska formulacija koja sadrži kombinaciju derivata pirola, opisanog u našoj PCT prijavi broj PCT/IN02/00189(WO 04/026828 Al), i jednog ili više antituberkulotika prve linije.

Nadalje, cilj ovog pronalaska je da se definiše i učini dostupnim metod za prevenciju relapsa tuberkuloze posle prekida primene terapije, koja podrazumeva davanje bolesniku, kojem je takva terapija potrebna, farmaceutske formulacije koja sadrži kombinaciju koju čine derivat pirola, opisan u našoj PCT prijavi pod brojem. PCT/IN02/00189(WO 04/026828 Al) i jedan ili više antituberkulotika prve linije.

Još jedan od ciljeva ovog pronalaska je da se obezbedi metod za prevenciju relapsainfekcije M tuberculosisposle prekida primene terapije, koja se sastoji od davanja bolesniku, kojem je takva terapija neophodna, farmaceutske formulacije koja sadrži kombinaciju derivata pirola, izloženog u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/IN02/00189 (WO 04/026828 Al), sa jednim ili više antituberkulotika prve linije.

Pri navođenju ciljeva ovog pronalaska ne srne se izostaviti cilj da se obezbedi metod za lečenje i/ili inhibisanje jednog ili više multirezistentnih sojeva uključujući, i ne ograni-čavajući se na,M. tuberculosis Mycobacterium avium - intracelulami kompleks, M. fortutium, M. kansasaiii ostale srodne vrste mikobakterija, koji podrazumeva da se farmaceutska formulacija, koja se sastoji od kombinacije derivata pirola iz naše PCT prijave pod brojem PCT/TN02/00189 (WO 04/026828 Al) sa jednim ili više antituberkulotika prve linije, daje bolesniku, kojem je terapija neophodna

A cilj ovog pronalaska je i da se ponudi postupak za dobijanje formulacije koja sadrži delotvomu količinu derivata pirola, opisanog u našoj PCT prijavi broj PCT/1N02/00189 (WO 04/026828 Al), u kombinaciji sa delotvornom količinom jednog ili više antituberkulotika prve linije.

KRATAK PRIKAZ PRONALASKA

Pronalazak, dakle, opisuje antimikobakterijsku kombinaciju, koja sadrži od terapeutski delotvornu količinu N-(3-[[4-(3-trifluorometilfenil)piperazinil]metil]-2-metil-5-fenil- pirolil)-4-piridilkarboksamida sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu, netoksičnu so

i terapeutski delotvornu količinu jednog ili više antituberkulotika prve linije, selektovanih iz grupe koju čine izsonijazid, rifampicin, etambutol i pirazinamid. Nadalje je, saglasno pronalasku, ponuđen postupak za pripremanje i dobijanje antimikobakterijske farmaceutske formulacije, koja se dobija kombinovanjem jedinjenja sa formulom (I) ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli

sa jednim ili više antituberkulotika prve linije, korišćenjem metoda suve granulacije, vlažne granulacije ili metoda direktne kompresije.

Ovde izloženi pronalazak nadalje iznosi i čini dostupnim antimikobakterijsku kombinaciju koja sadrži terapeutski delotvornu količinu N-(3-[[4-(3-trilfuorometilfenil) piperazinil]metil]-2-metil-5-fenil-pirolil)-4-pindilkarboksamida sa formulom (I), jedinjenje saformulom (I) ili njegovi farmaceutski prihvatljivu, netoksičnu so

i terapeutski delotvornu količinu jednog ili više antituberkulotika prve linije, po izboru iz grupe koju čine izonijazid, rifampicin, etambutol i pirazinamid, za lečenje multirezistentne tuberkuloze uključujući i latentnu tuberkulozu. Ovde izloženi pronalazak na raspolaganje stavlja antimikobakterijsku kombinaciju koja se sastoji od terapeutski delotvorne količine N-(3-[[4-(3-trifluorometilfenil)piperazinil]metil]-2-metil-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamida sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli i terapeutski delotvorne količine jednog ili više antituberkulotika prve linije, po izboru između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida za lečenje i/ili inhibisanje jednog ili više mikobakterijskih oboljenja/ćelija, uključujući, a ne ograničavajući se na, osetljive i multirezistentnesojeve Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium-intracelulami kompleks. M. fortutium, M. kansasaiii druge srodne vrste mikobakterija.

DETALJNI OPIS PRONALASKA

Ukoliko nije drugačije definisano, tehnički i naučni pojmovi koji se u ovom izlaganju koriste imaju istovetno značenje značenje kao i pojmovi koje će obično razumeti prosečni stručnjak iz područja profesije, kojem ovaj pronalazak pripada. U praktičnoj primeni ili proverama ovde izloženog pronalaska mogu da se koriste svi metodi i materijali slični ili ekvivalentni metodima/materijalima opisanim u ovom izlaganju.

Ukoliko nije drugačije naznačeno, svaka upotreba reči kao što su "uključuje," "sadrži," "sastojati se," "ima" i sličnih, podrazumeva "uključuje bez ograničenja" i ne srne se tumačiti tako da navod, koji odmah za njom sledi, ograničava na određene ili slične pojmove ili pitanj a/ aktivnosti.

Modeli iz ovog pronalaska se ne isključuju uzajamno, već se mogu primenjivati u različitim kombinacijama Opisani modeli ovog pronalaska i izloženi primeri daju se pre kao ilustracije, nego kao ograničenja ovog pronalaska, što se definiše u priloženim zahtevima za patentnu zaštitu.

Za potrebe ovog pronalaska, sledeći pojmovi se definišu na način izložen u daljem tekstu.

Pojmovi "davati (nekome)", "primena (nečega)" i "davanje" jedinjenja, kombinacije ili formulacije treba da se prihvate u značenju davanja jedinjenja, kombinacije ili formulacije ili prekursora jedinjenja bolesniku kojem je neophodna terapija.

Pojam "istovremena primena" u značenju u kojem se koristi u ovom izlaganju, podrazumeva primenu/davanje pojedinačnih jedinjenja, koja ulaze u kombinaciju zajedno ili odvojeno. Pojam istovremene primene može, takođe, da obuhvati kombinovanje davanja dva ili više jedinjenja koja ulaze u kombinaciju, zajedno sa drugim jedinjenjima iz kombinacije, svako zasebno, zajedno ili u obliku varijacija navedenih načina davanja lekova Zasebna primena svakog od jedinjenja iz kombinacije, u različita vremena i različitim načinima primene takođe može da se smatra istovremenom pnmenom. Pojam istovremene primene može, osim toga, da obuhvati i kombinovanu primenu dva ili više jedinjenja od kojih se kombinacija sastoji, ako se pojedinačna jedinjenja primenjuju na isti način. Ako je, na primer, put i način primene za sva posebna jedinjenja kombinacije isti, npr. peroralno, u tom slučaju se jedno ili više zasebnih jedinjenja iz kombinacije mogu formulisati u farmaceutski oblik podesan za isti način primene. Tumačenje pojma "istovremene primene" može da obuhvati davanje jednog ili više jedinjenja iz kombinacije zajedno (tj. u obliku jedinstvenog farmaceutskog oblika) ili zasebno davanje jednog ili više jedinjenja

Predviđeno je da pojam "formulacija", u značenju u kojem se u ovom izlaganju koristi, obuhvati proizvod koji sadrži određene sastojke, kao i svaki proizvod koji je, direktno ili in-direktno, rezultat kombinovanja određenih sastojaka. "Formulacija" može da sadrži jedno jedinjenje ili više jedinjenja. "Formulacija" može da sadrži jedan ili više aktivnih sastojaka.

Pojam "potpuna eradikacija" znači da, posle predviđenog perioda inkubacije, u ciljnom organu, npr. plućima ili slezini inficirane životinje ili čovekapo završetku lečenja na način izložen u ovom pronalasku, nema živih mikobakterija koje bi se mogle zasejavati.

Pojam "pomoćna materija" označava komponentu farmaceutskog proizvoda ili formulacije koja nije aktivni sastojak, npr. punioce, sredstva za razblaživanje, nosače, itd. Najbolje je da pomoćne materije koje se mogu koristiti za spravljanje farmaceutske formulacije budu farmaceutski prihvatljive.

Pojam "farmaceutski prihvatljiv", u značenju u kojem se u ovom izlaganju koristi, zna-či da nosači, punioci, razblaživači ili pomoćne materije moraju biti usklađeni sa ostalim sastoj-cima formulacije i ne smeju biti štetni po primaoca formulacije.

Pojam "farmaceutska formulacija" treba da obuhvati proizvod koji je sačinjen od aktivnih sastojaka, farmaceutski prihvatljivih pomoćnih materija, kao i svaki proizvod koji, posredno ili neposredno, predstavlja rezultat kombinovanja, obrazovanja kompleksa ili agregacije bilo koja dva ili više sastojaka, posledica je izdvajanja jednog ili više sastojaka i/ili pomoćnih materija, ili druge vreste reakcija ili interakcija jednog ili više aktivnih sastojaka i/ili pomoćnih materija Saglasno tome, farmaceutska formulacija ovog pronalaska obuhvata sve formulacije koje se mogu dobiti mešanjem aktivnog sastojka, dopunskih aktivnih sastojaka i farmaceutski prihvatljivij pomoćnih materija

Pojam "sinergija" ili "sinergistički" obuhvata, ali se ne ograničavana,

(i) kvantitet, odnosno količina čime se postiže da se određeno jedinjenje, aktivni sastojak ili lek mogu, ako se u gotovom leku nalazi u kombinaciji sa jednim ili više aktivnih sastojaka, jedinjenja ili lekova, davati u manjim dozama od onih koje su neophodne kad se daje zasebno; i/ili (ii) karakter/vreme, pri čemu određeni aktivni sastojak, jedinjenje ili lek, koji se nalaze u kombinaciji, ispoljava bolju delotvornost ili za posledicu ima skraćenje vremena trajanja terapije u odnosu na primenu u monoterapiji.

Naša PCT prijava pod brojem PCT/IN02/00189 (WO 04/026828 Al) javnosti predstavlja derivate pirola, koji ispoljavaju antimikobakterijsko dejstvo Otkriveno je da su ovi derivati nadmoćni u odnosu na derivate prethodno poznatih jedinjenja, što dokazuju njihova delotvornostin vivoi mala toksičnost. Od svih 90 i nekoliko jedinjenja izloženih u toj prijavi, utvrđeno je da jedinjenje br. 12, odnosno N-(3-[[4-(3-trifluorometilfenil) piperazinil]metil]-2-metil-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamid i njegove farmaceutski aktivne netoksične soli, u ovoj patentnoj prijavi označeno kao jedninjenje sa formulom (I) ispoljava izvanredno antimikobakterijsko dejstvo na osetijive i multirezistentne sojeveM. tuberculosis.

Treba napomenuti da se pozivanje na jedinjenje sa formulom (I) odnosi i na njegove netoksične, farmaceutski prihvatljive kiselinske adicione soli. Pogodne soli se grade i sa organ-skim i sa neorganskim kiselinama i obuhvataju soli obrazovane sa maleinskom, fumarinskom, benzojevom, askorbinskom, pamoinskom, sukcininskom, salicilnom, metansulfonskom, etandisulfonskom, sirćetnom, propionskom, vinskom, limunskom, glukonskom, stearinskom, palmitinskom, itakonskom, glikolnom, p-aminobenzojevom, glutaminskom, bensulfaminskom, benzensulfonskom, p-toluensulfonskom, fosfornom, sumpornom, azotnom, hidrohlomom, hidrobromnom kiselinom, itd.

Utvrđeno je da terapeutski delotvoma količina jedinjenja sa formulom (I) poseduje že-ljena antituberkolozna svojstva Sinergistički efekat se, međutim, zapaža kad se jedinjenje sa formulom (I) primenjuje istovremeno sa nekim od antiuberkulotika prve linije, npr. sa izonijazidom, rifampicinom, etambutolom i pirazinamidom. Pojam sinergistički efekat znači daje terapeutski efekat istovremeno primenjenog jedinjenja sa formulom (I) i jednog ili više gore navedenih antituberkulotika prve linije veći od terapeutskog efekta koji se dobija pri primeni delotvorne količine jedinjenja sa formulom (I) ili terapeutski delotvorne količine nekog od antituberkulotika prve linije, ako se primenjuju samostalno. Osim toga, gorepomenuti terapeutski efekat istovremene primene jedinjenja sa formulom (I) i jednog ili više antituberkulotika prve linije veći je od terapeutskog efekta koji se postiže primenom međusobno kombinovanih antituberkulotika prve linije.

Prednost i preimućstvo ove sinergije sastoji se u tome što omogućava davanje svake od komponenata kombinacije u količini manjoj nego što bi bila neophodna ako bi se komponente primenjivale samostalno. Omogućava, stoga, fbrmulisanje terapije za osobe kod kojih se, na primer, ne postiže dovoljan dogovor na primenu maksimalne doze jedne od komponenata.

Utvrđeno je, dakle, da se istovremenom primenom pirolnog jedinjenja sa formulom (I) i jednog ili više lekova iz grupe koju čine izonijazid, rifampicin, etambutol i pirazinamid postiže efekat, koji za posledicu ima popravljanje lečenja tuberkuloze u odnosu na efekat samostalne primene jedinjenja sa formulom (I) ili antituberkulotika prve linije ili efekat primene međusob-no kombinovanih antituberkulotika prve linije.

Utvrđeno je da istovremena primena jedinjenja pirola sa formulom (I) i jednog ili više lekova iz grupe koju čine izonijazid, rifampicin, etambutol i pirazinamid proizvodi efekat, koji za posledicu ima potpunu eradikaciju tuberkuloze, za razliku od nepotpune eradikacije koja se postiže kad se jedinjenje sa formulom (I) ili antituberkulotici prve linije primenjuju samostalno ili kad se daju međusobno kombinovani antituberkulotici prve linije.

Pojam "potpuna eradikacija" znači da se posle sprovođenja terapijskog režima sa kombinacijom koja je predmet ovog pronalaska, u ciljnim organima, tj. plućima ili slezini zaraženih životinja ne zapažaju žive mikobakterije koje bi se mogle kultivisati. Uočeno je da se, po za-vršetku lečenja zaraženih životinja režimom pnmene postojećih lekova, tj. kombinovanjem jednog ili više antituberkulotika prve linije, konkretno etambutola, izonijazida, pirazinamida i rifampicina, iz ciljnih organa, tj. pluća i slezine, izdvaja značajna količina živih bacila tuberkuloze koji se mogu kultivisati. To nedvosmisleno pokazuju podaci iz Tabela X, XI i XII u nastavku izlaganja.

Jedan od metoda za kvantifikovanje mikobakterija koje se mogu kultivisati obuhvata žrtvovanje lečenih životinja po završetku režima lečenja, pri čemu se ciljni organi, tj. pluća i slezina izdvajaju pod aseptičnim uslovima, homogenizuju u sterilnoj podlozi, nakon čega se serijska desetostruka razblaženja homogenata prenose u šolje sa podlogom. Rezidualni homo-genat iz originalne epruvete se, takođe, prenosi u šolju sa hranljivom podlogom, za potrebe prebrojavanja ukupnog broja. Ako posle perioda inkubacije nema rasta mikobakterija, smatra se daje eradikacijaM.tuberculosispotpuna. Osobe kvalifikovane za ovu struku mogu da koriste i druge poznate metode za kvantifikovanje mikobakterija koje se mogu kultivisati.

Aktuelna terapija za lečenje tuberkuloze sastoji se od davanja kombinacije izonijazida, rifampicina, pirazinamida i etambutola u količinama od 25.0, 20.0, 150.0, odnosno 100.0 mg/kg telesne mase, što znači da se ukupno daje 295mg/kg lekova [Enquire, JAF., Jann, LC, i Cvnamon,MH., Antimicrob Agents Chemother.2002, 46,1022-1025;Anne, MJ., Lenerts, A., Sharon, EC, Chemielevvski AJ., i CvnamonMH , Antimicrob. Agents Chemother.,1999,43, 2356-2360; Cvnamon MH., i Klemens,SP., Antimicrob. Agents Chemother.,1996,40. 298-301]. Za razliku od toga, u jednom od primera iz ovog pronalaska, efekat terapije koja koristi jedinjenje sa formulom (I) u kombinaciji sa antituberkuloticima prve linije, može da se postigne sa manje od ukupno 295 mg/kg izonijazida, rifampicina, pirazinamida i etambutola. Na primer, u jednom od primera može da se da ukupno oko 200 mg/kg izonijazida, rifampicina, pirazinamida i etambutola, što je manje od ukupne količine ovih lekova koja se primenjuje u važećoj terapiju.

Osim toga, time što se pojedinačne komponente primenjuju u manjim količinama, neželjeni efekti se mogu, u mnogim slučajevima, svesti na najmanju meru ili izbeći.

Ukratko, kombinovana istovremena primena jedinjenja sa formulom (I) sa jednim ili više antituberkulotika prve linije, daje novu dimenziju lečenju tuberkuloze, o kojoj u ovom pronalasku nije reč.

Utvrđeno je, pored toga, da prethodno navedena kombinacija modulira odgovor rezistentnih sojevaMtuberculosisna lek i daje "brzodelujuća". Značajno se, dakle skraćuje vreme potrebno za postizanje potpune i delotvorne eradikacijeMycobacteriumkod obolelog, u odnosu na vreme potrebno za postizanje tog efekta primenom poznatih lekova koji se u važećoj praksi koriste, nezavisno od toga da li se daju samostalno ili u međusobnim kombinacijama. U jednom od izloženih primera utvrđeno je da lečenje primenom kombinacije iz ovog pronalaska zahteva samo trećinu vremena koje je potrebno kad se sprovodi usvojeni na-čin lečenja propisanim režimom kombinovanja antituberkulotika prve linije.

Još značajnije je što su naša ispitivanja pokazala da, po primeni kombinacije jedinjenja sa formulom (I) sa poznatim antituberkuloticima kao što su rifampicin i pirazinamid, dolazi do povećanja vrednosti Cmaxjedinjenja sa formulom (I) u krvi za približno dvanaest puta Slično povećanje je registrovano i kod vrednosti Tl/2 i AUC.

Značajno otkriće predstavlja i to što je utvrđeno u jednom primera ovog pronalaska da kombinacije jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa jednim ili više antituberkulotika prve linije sprečavaju relaps mikobakterijske infekcije po prekidu primene terapije.

Primena svakog od jedinjenja zasebno, u različito vreme i različitim putem i načinom mogla bi, u nekim slučajevima, biti vrlo korisna. Dakle, sastavni delovi kombinacije, tj. derivat pirola sa formulom (I) i jedan ili više antituberkulotika prve linije, ne moraju obavezno da se daju u približno isto vreme, niti nekim posebnim redom: primena leka se može planirati i rasporediti tako da se vršni farmakokinetički efekat jednog jedinjenja poklopi sa vršnim farmakokinetičkim efektom drugog.

Svi aktivni sastojci mogu da se formulišu u zasebne ili individualne farmaceutske oblike, koji se mogu istovremeno primenjivati jedan za drugim, Druga mogućnost je da, ako se podudara put i način primene (npr. peroralno), dva ili više aktivnih jedinjenja mogu da se, u cilju istovremene primene, formulišu u jedinstven farmaceutski oblik, a oba navedena metoda istovremene primene predstavljaju, ipak, deo iste terapije ili režima lečenja

U jednom od primera ovog pronalaska, jedinjenje pirola sa formulom (I) i antituberkulotici prve linije uzimaju se istovremeno i zasebno u obliku pogodnih farmaceutskih onlika

Formulacije, kombinacije i oblici ovog pronalaska izrađeni su uz korišcenje pogodnih, farmaceutski prihvatljivih pomoćnih materija.

Lečenje tuberkuloze podrazumeva da se bolesniku, kojem je ova terapija neophodna, istovremeno daje antimikobakterijska kombinacija, sastavljena od terapeutski delotvorne količine N-(3-[[4-(3-trifluoromeulfenil)piperazinil]m karboksamida sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli

i terapeutski delotvorne količine jednog ili više antituberkulotika prve linije, selektovanih između izonijazida, rifampicina, etambutola.

Sa jednog drugog stanovišta, ovaj pronalazak stavlja na raspolaganje delotvoran način lečenja tuberkuloze sa kraćim vremenom trajanja.

U jednom od primera ovog pronalaska, vreme lečenja je skraćeno na dva do tn meseca. U drugom, pak, primera dolazi do potpune eradikacije osetljivih i rezistentnih sojeva koji iza-zivaju tuberkulozu. Primeri osetljivih i rezistentnih sojeva suM. tuberculosis, Mycobacterium avium - intracelulami kompleks, M. fortutium, M. kansasaiikao i drage srodne vrste mikobakterija.

U jednom svom drugom aspektu, ovaj pronalazak donosi metod za sprečavanje relapsa tuberkuloze posle prekida terapije. Metod podrazumeva istovremeno davanje bolesniku, kojem je ova terapija neophodna, antimikobakterijske kombinacije, koja sadrži terapeutski delotvornu količinu N-(3-[[4-(3-trifluoormenlfenil)piperazm piridilkarboksamida sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli

i terapeutski delotvornu količinu jednog ili više antituberkulotika prve linije, izabranog između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida.

Relaps može da bude posledica reaktiviranja uspavanih ili latentnih osetljivih i multirezistentnihsojeva Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium-intracelulami kompleks, M. fortutium. M. kansasaiii drugih srodnih vrsta mikobakterija.

U jednom od svojih aspekata, ovaj pronalazak čini dostupnom sinergističku antimikobakterijsku kombinaciju, koja sadrži sinergistički delotvornu količinu N-(3-[[4-(3-trifluoro-mehlfenil)piperazmil]meul]-2-menl-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamida sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so.

i terapeutski delotvornu količinu jednog ili više antituberkulotika prve linije, izabranog/izabranih između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida, namenjenu lečenju tuberkuloze, uključujući multirezistentne varijetete i latentnu tuberkulozu.

Drugi je, pak, aspekat ovog pronalaska postizanje terapeutski sinergističkog delotvor-nog lečenja tuberkuloze, koji se sastoji u istovremenom davanju bolesniku, kojem je ova terapija neophodna, određene količine: (i) jedinjenja sa formulom (I) ili njegovih farmaceutski prihvatljivih netoksičnih soli, i (ii) jednog ili više antituberkulotika prve linije, izabranog između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida.

gde je količina (i) samostalno i količina izonijazida, rifampicina, etambutola ili pirazinamida samostalno nedovoljna da dostigne sinergistički terapeutski delotvomi nivo za lečenje tuberkuloze, ali gde je kombinovano dejstvo količine (i) i jednog ili više izonijazida, rifampicina, etambutola ili pirazinamida veće od prostog zbira nivoa terapeutskih efekata anti-tuberkulozne terapije koje se može postići samostalnim količinama (i) i izonijazida, rifampicina, etambutola ili pirazinamida.

U jednom od daljih aspekata, ovaj pronalazak čini dostupnom antimikobakterijsku farmaceutsku formulaciju koja sadrži kombinaciju terapeutski delotvorne količine N-(3-[[4-(3-trifluorometilfenil)piperazmil]metil]-2-metil-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamida sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so sa terapeutski delotvomom količinom jednog ili više antituberkulotika prve linije, izabranog između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida uz dodatak farmaceutski prihvatljivog ekscipijensa, za lečenje tumerkuloze.

Ova formulacija se može koristiti i za lečenje multirezistentnih varijeteta i latentne tuberkuloze.

Među svojim aspektima, ovaj pronalazak donosi antimikobakterijsko farmaceutsku formulaciju, koja sadrži kombinaciju terapeutski delotvorne količine N-(3-[[4-(3-trifluoro-menlfenil)piperazmil]metil]-2-metil-5-fenil^irolil)^-piridilkarboksamida sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so

sa terapeutski delotvomom količinom jednog ili više antituberkulotika prve linije, izabranog između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida, uz dodatak farmaceutski prihvatljivog ekscipijensa, namenjenu lečenju i/ili inhibisanju jednog ili više mikobakterijskih oboljenja/ćelija uključujući, ali se ne ograničavajući na, osetljive i multirezistentne sojeve

Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium - intracelulami kompleks, M. fortutium,

M kansasaiii druge srodne vrste mikobakterija.

U daljem svom aspektu, ovaj pronalazak donosi metod koristan za prevenciju relapsa tuberkulozne infekcije posle prekida davanja terapije, koja podrazumeva istovremeno davanje bolesniku, kojem je ova vrsta terapije neophodna, antimikobakterijske farmaceutske formulacije koja sadrži kombinaciju terapeutski delotvorne količine N-(3-[[4-(3-trilfuorometilfenil) piperazinil]metil]-2-metil-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamida sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli

sa terapeutski delotvomom količinom jednog ili više antituberkulotika prve linije, izabranog između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida, uz dodatak farmaceutski prihvatljivog ekscipijensa.

Relaps može da bude posledica reaktiviranja uspavanih ili latentnih osetljivih ili multirezistentnihsojeva Mycobacierium tuberculosis, Mycobacterium avium - intracelhtlar comp1ex, M. fortutium, M. kansasaiii drugih srodnih mikobakterijskih vrsta.

U jednom od daljih aspekata, ovaj pronalazak stavlja na raspolaganje delotvoran način lečenja tuberkuloze, koji ne samo da skraćuje vreme lečenja na dva do tri meseca, već za posledicu ima potpunu eradikaciju osetljivih i rezistentnihM. tuberculosis,a koji se sastoji od davanja bolesniku, kojem je ovakva terapija neophodna, antimikobakterijske farmaceutske formulacije koja sadrži kombinaciju terapeutski delotvorne količine N-(3-[[4-(3-trifluoro-menlfenil)piperazinil]metil]-2-menl-5-fenil^irolil)-4-piridilkarboksamida sa formulom (I) ili negove farmaceutski prihvatljive netoksične soli

sa terapeutski delotvomom količinom jednog ili više antituberkulotika prve linije, izabranog između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida, uz dodatak jedne farmaceutski prihvatljive pomoćne materije ili više pomoćnih materija. U drugom svom aspektu, ovaj pronalazak čini dostupnom antimikobakterijsku farmaceutsku formulaciju, koja sadrži kombinaciju sinergistički delotvorne količine N-(3-[[4-(3-trifluorometilfenil)piperazinil]metil]-2-me sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli

sa terapeutski delotvomom količinom jednog ili više antituberkulotika prve linije, izabranog između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida, uz dodatak jedne farmaceutski prihvatljive pomoćne materije ili više pomoćnih materija, namenjenu lečenju tuberkuloze uključujući multirezistentne varijetete i latentnu tuberkulozu.

U svom daljem aspektu, ovaj pronalazak nudi metod za lečenje i/ili inhibisanje jednog ili više multirezistentnih sojeva izabranih između, ali bez ograničenja samo na,M. tuberculosis

Mycobacterium avium - intracellular complex, M. fortutium, M. kansasaiii drugih srodnih vrsta mikobakterija, koji podrazumeva davanje kombinacije terapeutski delotvorne količine N-(3-[[4-(3-mfluoromeulfenil)pipeiminil]m sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli

sa terapeutski delotvomom količinom jednog ili više antituberkulotika prve linije izabranog između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida, uz dodatak farmaceutski prihvatljive pomoćne materije. U svom sledećem aspektu, ovaj pronalazak čini dostupnim postupak pripremanja antimikobakterijske farmaceutske formulacije, koja sadrži kombinaciju terapeutski delotvorne količine N-(3-[[4-(3-trifluorometilfenil)piperazinil]metil]-2-metil-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamida sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli

sa terapeutski delotvomom količinom jednog ili više antituberkulotika prve linije, izabranog između izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida, uz dodatak farmaceutski

prihvatljive pomoćne materije ili više pomoćnih materija, namenjene lečenju tuberkuloze, uključujući multirezistentne varijetete i latentnu tuberkulozu. Najbolje bi bilo da se farmaceutska formulacija, koja sadrži kombinaciju N-(3-[[4-(3-trifluorometilfenil)piperazinil] metil]-2- metil-5-fenil-piroIil)-4-piridilkarboksamida sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli sa jednim ili više antituberkulotika prve linije uzima oralnim putem. Oralna primena se može postići pomoću tablete koja se sastoji od navedenih sastojaka u smeši sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijensa Oralne formulacije su korisne zato što obezbeđuju precizno doziranje, brzu primenu i, što je veoma važno, podstiču komplijansu bolesnika

U farmaceutski prihvatljive pomoćne materije, koje se mogu koristiti u formulacijama ih formulisanim kombinacijama, spadaju jeddna ili više meterija iz grupe antioksidansa, punilaca, inertnih razblaživača, površinski aktivnih materija i konvencionalnih aditiva, npr. lubrikansa i dodataka za matiranje.

Antioksidansi koji se mogu koristiti obuhvataju, ne ogrničavajući se na, askorbinsku kiselinu, butilisani hudroksianizol, butilisani hidroksitoluen, fumarinsku kiselinu, malinsku kiselinu, propilgalat, natrijum askorbat, natrijum metabisulfit, itd.

Inertni razblaživači koji se mogu koristiti obuhvataju, ne ograničavajući se na, kalcijum karbonat, kalcijum sulfat, dekstrate, dibazni kalcijum fosfat, hidrogenizovano biljno ulje, magnezijum karbonat, magnezijum oksid, manitol, mikrokristalnu celulozu, polimetakrilate, celulozu u prahu, preželatinisani škrob, sorbitol, škrobni tribazni kalcijum fosfat, itd.

Neke od površinski aktivnih materija koje se mogu upotrebiti su, jonske površinski aktivne materije kao dokusat natrijum (dioktil natrijum sulfosukcinat), natrijum lauril sulfat, itd. ili ne-jonske površinski aktivne materije kao gliceril monooleat, polioksietilen, itd., ili sor-bitanski estri masnih kiselina kao polisorbat 80, polivinil alkohol, itd., i ne samo one.

Podesni lubrikansi koji se mogu koristiti u farmaceutskoj formulaciju uključuju, ne ograničavajući se na, magnezijum stearat, natrijum lauril fumarat, hidrogenizovano biljno ulje, hidrogenizovano ricinusovo ulje, hidrogenizovano ulje od semenki pamuka, stearinsku kiselinu i kalcijum stearat, koloidni silicijum dioksid i slične.

Lubrikans se mora izabrati tako daobezbeđuje delotvoran efekat klizanja Na primer, tipična formulacija može da sadrži lubrikansa od 0% do 10% težinski. U jednom od primera, formulacije sadrži težinski od 0.2% do 2% lubrikansa

Pogodne supstance za matiranje koje mogu da se koriste u farmaceutskoj formulaciju obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, titan dioksid, talk, koloidni silicijum dioksid, itd.

Farmaceutska formulacija u kombinaciji fiksne doze, koja sadrži jedinjenje sa fomulom (I) i jedan ili više antituberkulotika i farmaceutski prihvatljive vehikulume, može da se napravi pomoću za struku konvencionalnih metoda Na primer, formulacija tablete koja sadrži kombinaciju može da se proizvede jednim od sledećih metoda, ali ne samo pomoću njih, konkretno: i) Metod suve granulacije: Ovaj metod se sastoji od prosejavanja odgovarajućih aktivnih sastojaka i farmaceutskih pomoćnih materija, posle čega sledi granulisanje dobijene praskaste mešavine kompresijom, bez prisustva toplote i rastvarača [Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. L Page 173, ed. H. A. Lieberman, Marcel Dekker Inc., 1980]. ii) Metod vlažne granulacije: Ovaj metod podrazumeva da se sve aktivne materije i farmaceutski ekscipijensi proseju, a dobijene čestice se povezuju pomoću adhezivnog sredstva da bi se dobio proizvod u obliku granula, sa boljim svojstvima protoka i povećanom sposobnošću međusobnog prianjanja pod pritiskom. iii) Metod direktne kompresije: Ovaj metod podrazumeva da se odgovarajući aktivni sastojci i farmaceutske pomoćne materije direktno komprimuju, bez ikakve prethodne obrade [The Pharmaceutical Codex, Principle and Practice of Pharmaceutics; page 10, ed. W. Lund, The Council of the Royal Pharmaceutical Society of Great Britain]. Neki primeri ovog pronalaska predstavljaju kombinacije i farmaceutske formulacije, koje obuhvataju sledeće mešavine, konkretno a) Jedinjenje sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so i rifampicin. b) Jedinjenje sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so i izonijazid. c) Jedinjenje sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so, izonijazid i rifampicin. d) Jedinjenje sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so, izonijazid, rifampicin i pirazinamid. e) Jedinjenje sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so, pirazinamid i etambutol. f) Jedinjenje sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so, rifampicin i pirazinamid.

ali ne jedino njih.

Drugi primeri ovog pronalaska predstavljaju kombinacije i farmaceutske formulacije koje obuhvataju, ne ograničavajući se na, konkretno mešavine

a) 12.5 ili 25.0 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli i 20.0 mg /kg rifampicina. b) 12.5 ili 25.0 mg /kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli i 25.0 mg /kg izonijazida. c) 12.5 ili 25 .0 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli i 25 0 mg/kg izonijazida i 20 0 mg/kg

rifampicina.

d) 12.5 ili 25.0 mg /kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, 25 0 mg/kg izonijazida, 20.0 mg/kg rifampicina

i 150.0 mg/kg pirazinamida.

e) 12.5 ili 25 .0 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, 150.0 mg /kg pirazinamida i 100.0 mg/kg

etambutola.

f) 3 .12, 6.25 ili 12.5 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, 250.0 mg /kg izonijazida, 20.0 mg/kg

rifampicina i 150.0 mg/kg pirazinamida.

g) 3 .12, 6.25 ili 12.5 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, 20.0 mg/kg rifampicina i

150 0 mg/kg pirazinamida..

Sinteza jedinjenja sa formulom ( I)

Jedinjenje sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli mogu se sintetisati svim poznatim metodima uključujući, a ne ograničavajući se na, metode opisane u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/EN02/00189 (WO 04/026828 Al), koji je ugrađen u ovo izlaganje po osnovu reference.

Primer dobijanja N-(3-[[4-(3-trilfuorometilfenil) piperazinil]metil]-2-metil-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamidaje sledeći: dobijanje N-(3-[[4-(3-trifluoromenlfenil)piperazinil]metil]-2-metil-5-fenil-pirolil)-4- piridilkarboksamida

Korak br. 1

1 -(4-hlorofenil)pentan-l ,4-dion

U dobro izmešanu suspenziju bezvodnog aluminijum hlorida (27.0 g, 205.9 mmol) u 126 ml hlorobenzena dodaje se oksopentanojlhlorid (23.0 g, 171.6 mmol) u kapima, tokom vremenskog perioda od 30-35 minuta u uslovima sobne temperature (25-30°C). Reakciona mešavina se meša na istoj temperaturi 1 sat. Pošto se reakciona mešavina razloži dodavanjem leda i hloridne kiseline (10 ml) izdvojena čvrsta masa se profiltrira, a dobijeni filtrat ispari na rotacionom evaporatoru da bi se uklonili svi rastvarači. Reziduum se rastvara u etil acetatu (400 ml), ispere vodom (2 x 100 ml) i slanom vodom (100 ml) i suši na bezvodnom natrijum sulfatu, a rastvarač se ispari. Tako dobijeni sirovi proizvod se hromatografiše na silika gelu (100-200 mesh) uz upotrebu hloroforma u ulozi eluenta da se dobije 8.6 g (24.07%) jedinjenja iz naslova.

Korak br 2

N-(5-metil-2-fenilpirolil)-4 piridilkarboksamid

Mešavina 1- (hlorofenil)pentan-l,4-diona (6.0 g, 28.50 mmol, dobijenog Korakom br.

1) i izonikotinskog hidrazida (4.30 g, 31.35 mmol) u benzenu (6.0 ml.) propušta se više puta u nizu preko molekularnih sita. Posle dva sata, benzen se, pod smanjenim pritiskom, eliminiše, a reziduum rastvori u etil acetatu, ispere vodom (2 x 100 ml) i slanom vodom (1 x 50 ml). Etil acetatni sloj se suši na bezvodnom natrijum sulfatu, a rastvarač ispari. Tako dobijeni sirovi proizvod prečišćava se hromatografijom na koloni na silika gelu (100-200 mesh), uz primenu 0.2% metanola u hloroformu u ulozi eluenta, da bi se dobila 3.50g (39.42%) jedinjenja iz naslova

Korak br 3

N-(3-{[4-(3-trifaoormen^fenil)piperaan

Promešanom rastvoru N-(5-metil-2-fenilpirolil)-4 piridilkarboksamida (0.300 g, 1.083 mmol, dobijenog Korakom be. 2) u acetonitrilu (5.0 ml) dodaje se u kapima mešavina 1 -(3-trifluorome-hlfenil)piperazin hidrohlorida (0.288 g, 1.083 mmol), 40% formaldehida (0.032 g, 1.083 mmol) i sirćetne kiseline (0.09 ml). Po završetku dodavanja, reakciona mešavina se me-sa na sobnoj temperaturi 4 sata. Reakciona mešavina se neutrališe natrijum hidroksidom (20% aq. Soln.) i ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 50 ml).

Kombinovani etil acetatni ekstrakt se ispira vodom (2 x 25 ml), slanom vodom (1 x

20 ml) i suši na bezvodnom natrijum sulfatu, a rastvarač se ispari. TLC sirovog proizvoda ukazuje na dve tačke, razdvojene hromatografijom na koloni na silika gelu (100-200mesh).

Jedinjenje većeg polariteta se eluira pomoću mešavine 80% etil acetata i heksana, dobija se u količini od 24.34 % (0.130 g) i identifikuje kaoN-(3-{[4-(3-tirfluoromeirlfenil) piperaziniljmetil) -2-metil-5-fenilpirolil)-4- piridilkarboksamid

m.p.80-82°C, MS: m/z 520 (M+l)

'H NMR(CDC13, 6): 2:13 (s, 3H,CH3), 2.60 (bs, 4H, 2xN-CH2),

3 18 (bs, 4H, 2xN-CH2), 3.41 (s, 2H, N-CH2), 6.24 (s, lH,H-4), 6.97-7.03 (4H, m, ArH), 7.22-7.29 (m, 5H,ArH), 7.53 (d, 2H, J=6Hz, piridilski prsten), 8.50 (bs, 1H,NH D20 zamenljivo), 8.70 (d, 2H, J=6Hz, piridilski prsten).

FARMAKOLOŠKO ISPITIVANJE

Preliminarna antimikobakterijska aktivnost jedinjenja sa formulom (I) izneta je u našoj PCT prijavi pod brojem PCT/TN02/00189, koja takođe čeka da bude prihvaćena Nastavljena su mikrobiološka, toksikološka i farmakokinetička ispitivanja i detaljna objašnjena u daljem izlaganju. Jedinjenje sa formulom L korišćeno u ispitivanjima opisanim u nastavku izlaganja, hidrohloridnaje so jedinjenja sa formulom (I) (hidrohloridna so N-(3-[[4-(3-trilfuorometilfenil) piperazinil]metil]-2-meitl-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamida).

IspitivanjaIn vitro

Agar diluciona analiza za određivanje minimalnih inhibitomih komcentraciia

MJC pojedinih jedinjenja za sojeve mikobakterije određena je referentnim agar dilucio-nim metodom prema NCCLS-M24-T2 preporukama Jedinjenja su rastvorena u DMSO, dvaput razblažena da bi se dobilo deset razblaženja svakog od jedinjenja u nizu. Odgovarajuća zapre-mina jedinjenja preneta je u istovetne šolje sa Middlebrook 7H10 agar podlogom, dopunjenom sa 10% Middlebrook dodatkom oleinska kiselina-albumin-dekstroza (OADC) oplemenjivača u koncentraciji od of 0.03 ug/ml do 16 ug/ml. Test mikroorganizmi (sojevi mikobakterije) gajeni su u Middlebrook 7H9 bujonu uz dodatak 0.05% Tween-80 i 10% ADC. Posle 7 dana inkubacije na temperaturi 37°C, bujoni su podešeni na zamućenje od 1 0 McFariandovog standarda; Mikroorganizmi su dalje razblaženi 10 puta u sterilnoj vodi sa dodatkom 0.10%Tween-80. Dobijene suspenzije mikobakterija tačkasto su nakapane (3-5 ul/tačka) u šolje sa 7H10 podlogom obogaćenom lekom. Šolje su hermetički zatvorene i inkubirane u uspravnom položaju 3-4 nedelje na temperaturi 37°C. MIC je registrovana kao najniže razblaženje jedinjenja koje je potpuno inhibisalo rast test mikroorganizama, ispitivani izolati obuhvat ali su kliničke izolate koji su, po pravilu, bili osetlj ivi/rezistentni na jedan ili više standardnih antituberkulotika. U svaku seriju ispitivanja uključeni su i odgovarajući referentni sojevi i kontrolni lek.

Antimikobakteriisko dejstvo jedinjenja sa formulom ( I)

U Tabeli I zbirno je prikazanoin vitrodejstvo koje je, na približno 200 osetljivih i rezistentnih kliničkih izolataM.tuberculosis,ispoljila hidrohloridna so jedinjenja sa formulom (I) (hidrohloridna so N-(3-[[4-(3-trilfuorometilfenil) piperazinil]metil]-2-metil-5-fenil-pirolil)-4-piridilkarboksamida).

Mikobaktericidno dejstvo jedinjenjasaformulom ( 1)

Fig. 1 prikazuje krivu uspešnoguništavanja M tuberculosisH37RVkoje postiže jedinjenje sa formulom (I). Fig. 2 prikazuje krivu uspešnog uništenja koje postiže jedinjenje sa formulom (I) u kombinaciji sa poznatim antituberkuloticima. Fig. 3 prikazuje privu uspešnog uništenja koje postiže jedinjenje sa formulom (I) u kombinaciju sa poznatim antituberkuloticima.

Da bi se utvrdilo da li je inhibitorno dejstvo jedinjenja sa formulom (I) baktericidno ili bakteriostatičko,kultura M. tuberculosis jeinkubirana u prisustvu različitih koncentracija (IX, 2X, 4X, 8X, 16 MIC) jedinjenja sa formulom (I). Definisani volumen (0.1 ml) kulture svakodnevno je, tokom 21 dana, izdvajan iz svakog od erlenmajera. Uzorak je, zatim, dese-tostruko razblažen i tačkasto nakapan na hranljivu podlogu Middlebrook 7H10 za potrebe brojanja bacila tuberkuloze..

Baktericidnom koncentracijom smatrani su koncentracija i vreme koji za 3 log sma-njuju brojM. tuberculosisu odnosu na netretiranu kontrolnu kulturu. Utvrđeno je da jedinjenje sa formulom (I) ispoljava dozno zavisnu sposobnostuništavanja M. tuberculosiste se smatra da ispoljava baktericidno dejstvo (smanjenje broja živih bakterija za 3 log) pri koncentracijama 8X i 16X MIC. Kriva sposobnosti jedinjenja sa formulom (1) da uništi sojM. tuberculosisH37 Rv određena je metodom procene varijabilnog broja i predstavljena na Slici 1.

Ispitivanja sinergističkog efekta

Sinergistički efekat jedinjenja sa formulom (I) u kombinaciji sa poznatim antituberkuloticima, određen je pomoću analize naizmeničnog mikro razblaženja. Za potrebe provere sinergije, serijsko razblaženje jedinjenja sa formulom (I) dodavano je kulturi mikobakterije u prisustvu drugog antituberkulotika, konkretno izonijazida, rifampicina, etambutola i moksi-floksacina. Šolje su, posle 28 dana, očitavane na potpuno odsustvo rasta u gnezdima u kojima su se nalazile različite kombinacije lekova. Najveće razblaženje kombinacije kod kojeg nije bilo uočljivog rasta smatrano je MIC vrednošću za tu kombinaciju. Smatralo se da jedinjenje poseduje sinergiju sa drugim lekom ukoliko bi se MIC samostalnog jedinjenja popravila četiri ili više puta.

Utvrđeno je da jedinjenje sa formulom (I) ispoljava sinergističko dejstvo uin vitroanalizi mikro razblaženja hranljive podloge sa rifampicinom, da sa etambutolom ostvaruje efekat dopunjavanja dejstva, ali da se ne menja u prisustvu izonijazida, kao što pokazuje Tabela H.

In vivoispitivanja u monoterapiie ili u kombinaciji

Efikasnost jedinjenja sa formulom (I) ispitivana je, takođe, i na modelu plućne tuberkuloze miša.Kulture Mycobacterium tuberculosisgajene su 7 dana na temperaturi 37°C u Middlebrook 7H9 bujonu, koji sadrži 0.05% Tween-80 i 10% ADC dodatka Da bi se izvršila inokulacije životinja, tečna kultura je prvo razbijena kratkotrajnim izlaganjem dejstvu ultra-zvuka i taloženjem, a potom razblažena na odgovarajući način u 7H9 bujonu, da se dobije koncentracija od of lxl07 CFl<T>s /0.2 ml.

U ispitivanju su, od početka do kraja, korišćene četiri nedelje stare ženke gajenih švaj-carskih albino miševa, smeštene u okruženja bez patogenih mikroorganizama, biobezbednos-nog nivoa 3, u mikroizolatorske kaveze. Infekcije su izazvane intravenskom inokulacijom vo-lumena od 0.2 ml obrađene suspenzijeM. tuberculosisu kaudalnu venu repa Pošto su inficira-ni, miševi su metodom nasumičnog rasporeda podeljene u različite grupe od po 6 jedinki Terapija je započeta 14 dana posle infekcije. Za potrebe terapije, jedinjenje sa formulom (I) i izonijazid su rastvoreni u sterilnoj vodi, dok je rifampicin rastvoren u 10% DMSO i razblažen vodom. Lekovi su spravljani svako jutro, uoči pnmene. Terapija je pnmenjivana mesec dana, 5 od 7 dana u nedelji. Svi lekovi su primenjivani preko sonde, u dozama od 50, 25, ili 12.5 mg/kg telesne mase. Kontrolna grupa zaraženih, a nelečenih, miševa žrtvovana je na početku tera-pije (rana kontrola) ili na kraju perioda lečenja (kasna kontrola). Miševi su žrtvovani dislokacijom vrata, 5 dana po primeni poslednje doze leka. Slezine i desna plućna krila su aseptički odstra-njeni, pa homogenizovani u homogenizatoru za tkivo. Na selektivni Middlebrook 7H11 agar zasejano je najmanje 4-6 serijskih desetostrukih razblaženjahomogenata, i to u duplikatu. Bro-jevi kolonija su evidentirani posle inkubacije od 4 nedelje na temperaturi od 37°C. Broj živih ćelija je pretvoren u Logio vrednosti Značajnim je smatrano jedinjenje koje je postiglo, u odnosu na kontrolne jedinke, smanjenje broja živih bakterija za 2 Log.

Dugoročniin vivoeksperimenti sprovedeni su sa ciljem da se izvrši procena dejstva jedinjenja sa formulom (I) u monoterapiji i u kombinaciji sa antituberkuloticima prve linije, kakvi su izonijazid, rifampicin, etambutol i pirazinamid U ovim ispitivanjima je delotvornost različitih kombinacija merena u različitim vremenskim intervalima, tj. posle jednog, dva, tri meseca lečenja.

Rezultatiin vivoispitivanja efikasnosti

Uočeno je daje, u odnosu na kontrolne jedinke, monoterapija jedinjenjem sa formulom (T), za posledicu imala značajno smanjenje (> 21og ) broja živih bacila u ciljnim organima, što je prikazano u Tabeli IJJ.

Jedinjenje sa formulom (I) ispoljilo je 2 log redukciju u organima životinja koje su lečene dozom od 12.5 mg /kg telesne mase kod životinja zaraženih osetljivim/rezistentnim sojevimaMtuberculosis,dok je izonijazid dao sličnu redukciju bakteriološkog opterećenja pn koncentracijama od 25 mg/kg i većim kad su u pitanju osetljivi sojevi, a nije delovao na rezistentne sojeve u dozi manjoj od 50 mg/kg.

Nadalje, ispitivanja sa zadatkom da utvrde dugoročni efekat lečenja (dva do tri meseca) jedinjenjem sa formulom (I), utvrdila su daje rezultat pnmene terapije opadanje mikobakterijskog opterećenja u ciljnim organima Potpuno odsustvo mikobakterija registrovano je kod 33% životinja koje su tri meseca dobijale terapiju. Dobijeni rezultati predstavljeni su u Tabelama IV, odnosno V.

Ispitivanja farmakokinetike

Inicijalna ispitivanja farmakokinetike jedinjenja sa formulom (I) sprovedena su kod miševa i pasa, sa ciljem da se utvrdi bioraspoloživost i nivoi u serumu koje jedinjenja postižu i održavaju.

Rezultati ispitivanja, prikazani u Tabeli VL pokazuju daje jedinjenje sa formulom (I) bioraspoloživo (56 40%) i da ima bolji polu-život i Cmaxod izonijazida, a da se u serumu zadržava duže vreme u koncentraciji > vrednosti MIC.

Ispitivanja toksičnosti

Akutna toksičnost jedinjenja sa formulom (I) određena je kod glodara posle oralne primene. Utvrđeno je daje LD50700 mg/kg kod miševa i 793 mg/kgkod pacova, stoje bolje od LD50izonijazida. Rezultati su prikazani u Tabeli VII.

Pored toga, utvrđeno je da jedinjenje sa formulom (I) karakteriše odsustvo mutagenosti za sve bakterijske sojeve korišćene u Amesovom testu mutagenosti.

Eksperimenti koji pokazuju antimikobakterijsko dejstvo jedinjenja sa formulom ( I) u

kombinaciji sa jednim ili više antituberkulotika

In vitrodejstvo kombinacije

Baktericidni efekat kombinacije jedinjenja sa formulom (I) sa jednim ili više antituberkulotika prve linije određen je u pogledu doze i vremena potrebnog za lečenje.

Utvrđeno je da kombinacija jedinjenja sa formulom (I) sa izonijazidom, rifampicinom i pirazinamidom (LIRZ) desetog dana ispoljava mikobaktericidni efekat (Slika 2) pri koncentraciji od 8x i 16x MFC, za razliku od kombinacije izonijazida, rifampicina i pirazinamida bez jedinjenja sa formulom (I) [IRZ], koja baktericidni efekat produkuje tek dvadesetog dana.

Kriva uništavanja (mikobakterija) jedinjenja sa formulom (I) u kombinaciji sa poznatim antituberkuloticima [Izonijazidom (I); Rifampicinom (R); i Pirazinamidom (Z)] zaM. tuberculosis,određena na osnovu metoda procene broja živih bakterija, prikazana je na Slici 2.

Pored toga, uočeno je da sličan efekat na mikobaktericidnu aktivnost ima kombinacija jedinjenja sa formulom (I) sa rifampicinom i pirazinamidom, a bez izonijazida, označena kao jedinjenje 'A'. Kombinacije je, četrnaestog dana, ispoljilamikobaktericidno dejstvo pri koncentracijama 8x i 16xMIC.

Kriva uspešnosti jedinjenja sa formulom (I) u kombinaciji sa poznatim antituberkuloticima [Rifampicina (R) i Pirazinamida (Z)], a bez izonijazida, u uništavanjuM. tuberculosis,određena na osnovu metoda procene broja živih bakterija, predstavljena je Slikom 3.

In vivoaktivnost kombinacije

Kod miševa lečenih kombinacijom jedinjenja sa formulom (I) i jednog ili više antituberkulotika prve linije, uočeno je značajno smanjenje opterećenja bacilima tuberkuloze i to važi za sve ispitivane/proveravane kombinacije. Maksimalna redukcija je registrovana kod životinja lečenih kombinacijom jedinjenja sa formulom (I) i dva ili tri antituberkulotika, npr. jedinjenja (I) u kombinaciji sa izonijazidom i rifampicinom i u kombinaciji sa izonijazidom, rifampicinom i pirazinamidom posle jednomesečne primene.

Registrovanain vivoefikasnost kombinacije jedinjenja sa formulom (I) sa poznatim antituberkuloticima na modelu miša, a posle jednomesečnog lečenja, prikazana je Tabelom vm

Osim toga, rezultat dvomesečne terapije bilo je odsustvo rasta u organima 66% ži-votinja zaraženih osetljivim/rezistentnimsojevima M. tuberculosis,lečenih kombinacijom jedinjenja sa formulom (I) sa dva ili tri poznata antituberkulotika, kao što su izonijazid, rifampicin i pirazinamid.

Registrovanain vivoefikasnost kombinacije jedinjenja sa formulom (I) sa poznatim antituberkuloticima kod modela miša posle dvomesečne terapije prikazana je Tabelom IX.

Nadalje, tromesečna terapija je dala potpuno odsustvo rasta kod životinja zaraženih osetljivim/rezistentnimsojevima M. tuberculo sis,lečenih kombinacijom jedinjenja sa formulom (I) sa dva ili više poznatih antituberkulotika kakvi su izonijazid, rifampicin i pitazinamid.

Registrovanain vivoefikasnost kombinacije jedinjenja sa formulom (I) sa poznatim antituberkuloticima kod modela miša posle tromesečne terapije, prikazana je Tabelom X.

Veoma važno je zapažanje da niže doze jedinjenja sa formulom (I), tj. doze od 12.5, 6.25 i 3.12 mg/kg u kombinaciji sa poznatim antituberkuloticima, naime izonijazidom, rifampicinom i pirazinamidom, ispoljavaju izvanrednu efikasnostin vivoi potpuno sterilišu organe životinja inficiranih osetljivim/rezistentnim sojevimaM. tuberculosisposle dvome-sečne terapije. Rezultati su predstavljeni Tabelom XI.

Nadalje, efekatin vivodelotvornosti na nastavak lečenja zaraženih životinja kombinacijom jedinjenja sa formulom (I) sa izonijazidom, rifampicinom i pirazinamidom prikazan je u Tabeli XJX

Efekatin vivodelotvornosti na dvomesečno lečenje miševa primenom druge kombinacije koja sadrži jedinjenje sa formulom (I) i dva poznata antituberkulotika, rifampicin i pirazinamid, koja se takođe pokazala delotvomom u smislu redukovanja mikobakterijskog optere-ćenja ciljnih organa, prikazan je Tabelom XIII.

Farmakokinetička ispitivanja kombinacije

Inicijalna farmakokinetička ispitivanja kombinacije jedinjenja sa formulom (I) sa rifampicinom i pirazinamidom, sprovedena na miševima i psima, imala su za cilj da odrede bioraspoloživost i nivoe u serumu koji se postižu i održavaju primenom kombinacije navedenih jedinjenja.

Rezultati ispitivanja, sažeti u Tabeli XIV, pokazuju da se, po primeni kombinacije jedinjenja sa formulom (I) sa rifampicinom i pirazinamidom, vrednost Cmax jedinjenja sa formulom (I) u krvi povećava oko dvanaest puta Na sličan način se popravljaju i vrednosti Tl/2 i AUC. Rezultati su prikazani u Tabeli XIV

Ispitivanja akutne toksičnosti kombinacije

Kombinacija jedinjenja sa formulom (I) sa izonijazidom, rifampicinom i pirazinamidom, primenjena je u obliku jednokratne oralne doze kod švajcarskih albino miševa. Miševi su praćeni 14 dana. Nisu registrovani klinički simptomi, kao ni smrtnost. Miševi su petnaestog dana žrtvovani, a na organima nisu uočene patološke promene. Dobijeni inicijalni rezultati sažeti su u Tabeli XV.

Osim toga, pokazalo se da kombinacija jedinjenja sa formulom (I) sa poznatim antituberkuloticima prve linije nije genotoksična, a utvrđeno je daje negativna uin vivomicronuclarnom testu.

Prethodna diskusija pruža dovoljno dokaza o tome da kombinacije i farmaceutska formulacija ovog pronalaska, koja sadrži kombinaciju N-(3-[[4-(3-trilfuorometilfenil) piperazi-nil]metil]-2-metil-5-fenil^)irolil)-4-piridilkarboksamida sa formulom (I) njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, sa standardnim antituberkuloticima prve linije, npr. izonijazidom, rifampicinom, etambutolom i pirazinamidom,

a) obezbeđuju izrazito delotvorno lečenje tuberkuloze, uključujući latentnu tuberkulozu i multirezistentne varijetete, nadmoćno u odnosu na izlečenje koje se postiže primenom

lekova koji se danas standardno ordiniraju;

b) za razliku od standardnih lekova koji se danas ordiniraju, kombinacije i formulacije su unlike the currentlv prescribed drugs the combinations and compositions visoko efikasno inhibišu i/ili leče mikobakterijska oboljenja/ćelije uključujući, a ne ograničavajući se na, osetljive i multirezistentnesojeve Mycobaclerium tuberculosis, Mycobacterium avium - intracelulami kompleks, M. fortutium, M. kansasaiii druge srodne vrste mikobakterija; c) za razliku od lekova koji se danas ordiniraju, kombinacije i formulacije visoko efikasno sprečavaju pojavu relapsa infekcijeM. tuberculosisposle ukidanja terapije; d) spadaju u kategoriju "brzodelujućih", te stoga značajno skraćuju vreme potrebno za postizanje potpune i delotvorneeradikacije Mycobacteriumiz organizma bolesnika u odnosu na vreme potrebno poznatim lekovima, koji se standardno u praksi propisuju, za postizanje tog efeka, bilo da se primenjuju samostalno, ili u međusobnim kombinacijama. Vreme potrebno za lečenje primenom kombinacije ili farmaceutske formulacije, uz potpunu readikaciju osetljivih i rezistentnih sojeva M.tuberculosis,predstavlja tek trećinu vremena potrebnog lekovima, koji se u tekućoj praksi propisuju, da postignu željeni efekat; e) utvrđeno je da terapeutski delotvoma količina jedinjenja sa formulom (I) ostvaruje sinergistički efekat kad se daje istovremeno sa nekim od standardnih antituberkulotika prve linije, npr. izonijazidom, rifampicinom, etambutolom i pirazinamidom. Sinergistički efekat je veći od terapijskog efekta koji se dobija primenom delotvorne količine bilo jedinjenja sa formulom (I), bilo terapeutski delotvorne količine bilo kojeg od antituberkulotika prve linije, primenjenog samostalno. Pored toga, terapijski efekat istovremenog davanja jedinjenja sa formulom (I) i navedenih antituberkulotika prve linije, veći je od terapijskog efekta koji se postiže primenom međusobno kombinovanih antituberkulotika prve linije; f) sinergizam je korisno svojstvo, jer dozvoljava da se svaka od komponenata kombinacije daje u količini manjoj od količine koja bi bila neophodna ako bi se primenjivale samostalno, čime doprinosi delotvornosti lečenja kod osoba koje, na primer, ne daju dovoljan odgovor na pnmenu jedne od komponenata u dozi najveće jačine, i/ili g) zato što omogućava pnmenu pojedinačnih komponenti u manjim količinama u odnosu na slučaj kada su kombinovani efekti atitivni, što omoguđava da se na minimum svedu

neželjeni efekti koji prate aktuelno praktikovani terapijski režim.

Claims (23)

1. Antimikobakterijska kombinacija koja sadrži terapeutski delotvornu količinu N-(3-[[4-(3-nifluoromenlfenil)piperazmil]menl]-2-menl-5-fenil-pirolil)-4-^ sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so i terapeutski delotvornu količinu jednog ili više antituberkulotika prve linije, selektovanih iz grupe koja se sastoji od izonijazida, rifampicina, etambutola i pirazinamida.

2. Antimikobakterijska farmaceutska formulacija koja sadrži antimikobakterijsku kombinaciju prema zahtevu 1 u mešavini sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom.

3. Antimikobakteirjska farmaceutska formulacija prema zahtevu 1, karakterisana time što je selektovani farmaceutski prihvatljivi ekscipijens antioksidans, inertni razblaživač, površinski aktivna materija, klizans i sredstvo za matiranje.

4. Antimikobakterijska kombinacija prema zahtevu 1, koja se može koristiti za delotvorno lečenje tuberkuloze

5. Antimikobakterijska kombinacija prema zahtevu 1, za lečenje mikobakterijskih bolesti /ćelija selektovanih među osetljivim i multirezistentnimsojevima Mycobacterium tuberculosis. Mycobacterium avium - intracellular complex, M. fortutium, M. kansasaiii drugih srodnih vrsta mikobakterija.

6. Antimikobakterijska farmaceutska formulacija prema zahtevu 2, koja se može koristiti za delotvomo lečenje tuberkuloze.

7. Antimikobakterijska formulacija prema zahtevu 2, za lečenje mikobakterijskih bolesti /ćelija selektovanih između osetljivih i multirezistentnihsojeva Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium - intracellular complex, M. fortutium, M. kansasaiii drugih srodnih vrsta mikobaktenja.

8. Antimikobakterijska kombinacija prema zahtevu 1 koja, po okončanju terapije, potpuno istrebljuje osetljive i rezistentne Mtuberculosis.

9. Antimikobakterijska farmaceutska formulacija prema zahtevu 2 koja, po okončanju terapije, u potpunosti istrebljuje osetljive irezistentne M. tuberculosis

10. Postupak pripremanja antimikobakterijske farmaceutske formulacije, koji obuhvata kombinovanje jedinjenja sa formulom I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i jednog ili više antituberkulotika prve linije korišćenjem metoda suve granulacije, vlažne granulacije ili metoda direktne kompresije

11. Kombinacija prema zahtevu 1 koja sadrži jedinjenje sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli i rifampicina.

12 Kombinacija prema zahtevu 1 koja sadrži jedinjenje sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli i izonijazida.

13. Kombinacija prema zahtevu 1 koja sadrži jedinjenje sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, izonijazida i rifampicina.

14. Kombinacija prema zahtevu 1 koja sadrži jedinjenje sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, izonijazida, rifampicina i pirazinamida.

15. Kombinacija prema zahtevu 1 koja sadrži jedinjenje sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, pirazinamida i etambutola.

16. Kombinacija prema zahtevu 1 koja sadrži jedinjenje sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, nfampicma i pirazinamida.

17. Kombinacija prema zahtevu 1, koja sadrži 12.5 ili 25.0 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli i 20.0 mg/kg rifampicina

18 Kombinacija prema zahtevu 1, koja sadrži 12 5 ili 25.0 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli i 25.0 mg/kg izonijazida.

19. Kombinacija prema zahtevu 1, koja sadrži 12.5 ili 25.0 mg/kg jedinjenja sa formulom (1) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli i 25.0 mg/kg izonijazida i 20.0 mg/kg rifampicina

20. Kombinacija prema zahtevu 1, koja sadrži 12.5 ili 25 .0 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, 25.0 mg/kg izonijazida, 20.0 mg/kg rifampicina i 150.0 mg/kg pirazinamida.

21. Kombinacija prema zahtevu 1, koja sadrži 12.5 ili 25 .0 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive netoksične soli, 150.0 mg/kg pirazinamida i 100.0 mg/kg etambutola.

22. Kombinacija prema zahtevu 1, koja sadrži 3.12, 6.25 ili 12.5 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so, 250.0 mg/kg izonijazida, 20.0 mg/kg rifampicina i 150.0 mg/kg pirazinamida.

23 Kombinacija prema zahtevu 1, koja sadrži 3.12, 6.25 ili 12.5 mg/kg jedinjenja sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu netoksičnu so, 20.0 mg/kg rifampicina i 150.0 mg/kg pirazinamida.