RS49527B

RS49527B - Smeše izolovane iz semena eugenia jambolana lamarck, njihovo dobijanje i primena za proizvodnju lekova

Info

Publication number: RS49527B
Application number: YU4197A
Authority: RS
Inventors: Ratsimamanga Albert Rakoto; Ratsimamanga Suzanne Rakoto; Philippe Rasoanaivo; Jean Leboul; Jean Provost; Daniel Reisdorf
Original assignee: Institut Malgache De Recherches Appliquees; Aventis Pharma S.A.
Priority date: 1996-02-06
Filing date: 1997-02-05
Publication date: 2006-12-15
Also published as: ZA97910B; CN1148178C; AU1727197A; BR9707613A; AU726628B2; EP0879058A1; CA2245701A1; MA24077A1; US6194412B1; PL186798B1; US5972342A; PT879058E; DE69705108D1; CN1210469A; JP5033857B2; CN1325685A; ATE201826T1; DE69705108T2; IL125598A; WO1997028813A1

Abstract

Smeše oslobođene od polifenolnih i sterolnih derivata i koje se mogu izolovati usitnjavanjem semena Eugenia Jambolana Lamarck, maceracijom ovog praha sa nižim alifatičnim alkoholom uz zagrevanje, filtriranjem, rekuperacijom nerastvornog dela koji više ne sadrži polifenolna i sterolna jedinjenja, tretiranjem nerastvornog dela amonijačnim rastvorom, tretiranjem amonijačne smeše nižim alifatičnim alkoholom uz zagrevanje, filtriranjem, rekuperacijom nerastvornog dela i sušenjem ovog nerastvornog dela koji čini smešu I i u datom slučaju tretiranjem smeše I rastvorom voda-niži alifatični alkohol, filtriranjem, delimičnim koncentrovanjem filtrata, prečišćavanjem na nepolarnim adsorpcionim smolama, delimičnim koncentrovanjem, centrifugiranjem, ultra-filtriranjem i izolovanjem smeše II. Prijava sadrži još 4 nezavisna patentna zahteva i 23 zavisna patentna zahteva.

Description

Ovaj pronalazak se odnosi na smeše koje se mogu izoiovati polazeći od seinena Eugenia Jambolana Lamarck (familija MyrLacee ) , zatim na lekove koji sadrže ove .smeše ili neke od njihovih sastojaka, pr imenu ovih smeša i njihovih sastojaka za dobi vam j ani.id i jahetskog leka i na njegovo dobivanje.

Biljni ekstrakt koji je dobiven polazeći, od semena i I i kore Kugen i a Jambolana koji sadrži mešovit pol. ifeno Ini ili steroini kompleks je opisan u patentu FR 24654 84.

Sada su pronađene nove smeše koje se mogu izoiovati polazeći od seinena Eugenia Jambolana Lamarck, oslobođenih poli fenol .00.^ i st.erolnog kompleksa, "' kao i da su neki sastojci ovih smeša o k arak te r i san i h i pogl i kemi j skini osobinama.

Ove smeše su okarakterisane time što su oslobođene poli fenol - nih i sterolnih derivata i što se mogu izoiovati usitnjavanjem semena Eugenia Jambolana Lamarck, maceracijom praha nižim alifatičnim alkoholom uz zagrevanje, filtriranjem, rekuperacijom nerastvornog dela koji više ne sadrži polifenolna i sterolna jedinjenja, tretiranjem nerastvornog dela amonijačnim rastvorom, tretiranjem amonijačne smeše nižim alifatičnim alkoholom uz zagrevanje, filtriranjem, rekuperacijom nerastvornog dela i sušenjem ovog nerastvornog dela koji čini smešu I, zatim u datoni slučaju tretiranjem smeše I rastvorom vođa-niži alifatični alkohol, filtriranjem, delimičnim koncentrovan jern filtrata, preč i šćavan j em na nepolarnim adsorpcionim smolama, delimičnim koncentrovanjem, centr i f ug Iran jem , ultraf iJtriranjem, cent. r i f ug i ran j em i izoiovati jem smeše II.

Iz smeše TT takođe se mogu odvojiti natrijumoksamat i jedinjenja formule: u kojoj R.označava atom vodonika i R.? označava niz formule :

ili Rj označava niz formule (A) i Rg označava atom vodonika.

Natrijumoksamat je već opisan od strane Toussainta, Ann. , 1 20 , 237 (1861 ) .

Jedinjenja formule (I) su već opisana od strane Kuhn-a et al., Ahn., 644, 122-127 (1961 ); Tsuchida et al. , Agr. Biol . Ghera. , 39 (5), 1143-1148 ( 1975 ); Tsuchida et al. , Agr. Biol. Chem. , 40 (5), 921-925 (1976); Tsuchida et al,, Nippon Shokuhin Kogyo Gakkaishi, 37, 154-161 (1990) i Avalos et al., Tetrahedron, 49, 2655-2675 (1993).

Ovaj pronalazak se odnosi takođe i na postupak za dobivanje smeše I polazeći od semena Eugenia Jambolana Lamarck koja su osušena i fino isitnjena.

Prah je prosejan, prvenstveno pomoću standardizovanog sita sa otvorima prečnika 0,5 /^m zatim podvrgnut sledećem tretmanu koji obuhvata: a) maceraciju uz mešanje u nižem alifatičnom alkoholu, pri temperaturi koja obuhvata između 40 i 70°C, b) filtriranje pod vakuumom i rekuperaciju nerastvornog dela, c) maceraciju uz mešanje nerastvornog dela sa nižim alifatič-nim alkoholom pri temperaturi koja obuhvata između 4 0 i 70 C, d) filtriranje pod vakuumom i eliminisanje alkoholnih faza koje uglavnom sadrže neželjene polifenole i sterole, e) primanje nerastvornog dela u amonijačni rastvor pri temperaturi koja obuhvata između 10 i 30°C, f) primanje celokupne vlažne amonijačne mase u rastvor voda-niži alifatičnl alkohol, pri temperaturi koja obuhvata između 4 0 i 7()°C,

g) filtriranje i eliminisanje alkoholnog rastvora,

h) ispiranje nerastvornog dela nižim alifatičnim alkoholom,

filtriranje i eliminisanje alkoholnog rastvora,

i! rekuperaciju nerastvornog dela i sušenje.

U stupnju a) radi se uopšte sa 2 do 10 1 i tara nižeg alifa-tičnog alkohola. kao šio je me t«nol ili etanol , na 1 kg prosejanog praha. Prvenstveno se koristi 5 litara etanola koncentracije 93-95° (po Gej Lisaku) pri 60°C u toku jedan sat.

Filtriranje iz stupnja b) se prvenstveno vrši pod vakuumom od 40 kPa.

U stupnju c), uopšte se radi sa 2 do 10 litara nižeg alifa-tičnog alkohola, kao što je metanol ili etanol, na 1 kg prosejanog praha. Prvenstveno se koristi 4 litra etanola koncentracije 93-95" (po Gej Lisaku) pri 60"C u toku jedan sat.

Filtriranje iz stupnja d) se prvenstveno vrši pod vakuumom od 40 kPa.

U stupnju e), na 1 kg polaznog prosejanog praha uopšte se koristi 750 do 1250 ml amonijačnog rastvora koji prvenstveno sadrži 350 ml 28%-nog rastvora amonijaka na 1000 ml. Naročito je pogodno da se koristi 1 Li tar amonijačnog rastvora i da se radi • < toku perioda od 10 do 30 časova, i, prvenstveno 20 sati, pri temperaturi oko 20°C.

U stupnju f), vlažna amonijačna masa koja je dobivena polazeći od 1 kg polaznog prosejanog praha uopšte je primljena, uz mešanje, u 2 do 10 litara smeše niži alifatični alkohol-voda (na primer, metanol ili etanol) (u zapreminskom odnosu od 70/30 do 80/2)) i prvenstveno, u 5 litara smeše etanol-voda (u zapreminskom odnosu 75/25), pri fi0°C u toku perioda od 1 sat.

U stupnju g), filtriranje se prvenstveno vrši preko pamučnog platna i. pod vakuumom od oko 80 kPa.

U stupnju h) , ispiranje se uopšte vrši sa 500 do 1500 ml nižeg al ifatičnog alkohola (na primer, metanola ili etanola) na 1 kg polaznog prosejanog praha, i prvenstveno sa 1 1. i tar etanola. i filtriranje se vrši preko pamučnog platna i pod vakuumom od oko80kPa.

U stupnju i), sušenje se vrši prvenstveno na slobodnom vazduhu i uz zaštitu od svetlosti.

Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak za dobivanje smeše Ir .

Prethodno dobivena smeša 1 je podvrgnuta sledećim operacijama: j) tretiranju smeše I rastvorom voda-niži alifatični alkohol, k) dekantovanju zatim, jednim delom, odlivanju gornje faze koja je filtrirana radi dovođenja filtratu 1 i, drugim delom, tretiranju donje faze vodom i filtriranju radi dovođenja filtratu 2, spajanju filtrata 1 i 2 i koncentrovanju u vodenoj fazi, 1) tretiranju nepolarnom adsorpcionom smolom potom filtriran j u ,

m) koncentrovanju filtrata, filtriranju, potom ultrafiltri-ranju,

n) i iofi 1 izaciji i izolovanju ekstrakta II.

U stupnju j) uopšte se koristi 10 do 25 litara rastvora voda-niži alifatični alkohol (na primer, metanol ili etanol) (u zapreminskiom odnosu 95/5 do 90/10) na 1 kg smeše I. Prvenstveno se radi u ].8 litara rastvora voda-etanol (u zapreminskom odnosu 17,7-0,93).

U stupnju k) prvenstveno se filtrira gornja faza preko pamučnog platna. Pogodno se dodaje, na 1 kg smeše I, 10 do 25 litara vode u donju fazu, a naročito 10 litara, i filtrira preko frite.

U stupnju k) koncentrovanje se uopšte vrši u termosifonskom koncentratom pri temperaturi od 35°C pod vakuumom od 0,4 kPa.

U stupnju 1) prvenstveno se koristi smola S861 ili smole tipa XAD (komercijalni proizvod firme Rhom i Hass) i filtrira preko frite.

U stupnju m) koncentrovanje se uopšte vrši u termosifonskom koncentratoru pri temperaturi od 35° C pod vakuumom od 0,4 kPa. Takođe je pogodno da se izvrše tri sukcesivna ultrafiltriranja preko čaure 10 kd, 3 kd i 1 kd.

Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak za dobivanje natr i j umpoksarnata i jedinjenja formule (I).

Ovaj se sastoji u podvrgavanju smeše II sledećim operacijama: o) hromatografiji smeše II na koloni sa infuzorijskom zemljom, rekuperaciji frakcija koje sadrže 4 produkta i spajanju ovih frakcija u samo jednu frakciju.

p) hromatografiji prethodno dobivene frakcije na koloni sefadeksa radi dobivanja natrijumoksamata, jedinjenja formule (I) u kojoj Rj označava atom vodonika i R? označava ostatak (B) i smeše jedinjenja formule (I) u kojoj R. označava atom vodonika i R^označava ostatak (A) i jedinjenja formule (I) u kojoj R označava ostatak (B) i R? označava atom vodonika,

q) u datom slučaju hromatografiji smeše jedinjenja formule (1) u kojoj R.|označava atom vodonika i R? označava ostatak (A) i jedi njen ja formule (1 ) u kojoj R. označava ostat,ak (R) i R,( označava atom vodonika uzprimenuHPLC {tečne hromatog ra f i. j c sa visokim performansama).

H i'omatogral' i.ja stupnja o) se vrši uz primenu organskog rastvarača kao što je heptan, etilacet.at ili niži. alifatični alkohol. Prvenstveno se koristi kolona ^Chem Elut (komercijalni proizvod firme..Prolabo) zasićena vodom, potom sukcesivno eluira heptunuMi, smešom he p f an/e 11 lace tat (u zaprem i tlakom odnosu 50/50 i , e111acetatom, smešom eti 1acetat/n-butano1 (u zapreminskom odnosu 95/5, 90/10, 80/20, 50/50, 20/80), n-butanolom i smešom n-butanol/ voda (u zapreminskom odnosu .98/2 potom 95/5).

Hromatografija stupnja p) pogodno se vrši uz primenu smeše voda/etanol (u zapreminskom odnosu 50/50).

Hromatografija stupnja q) uopšte se vrši na koloni YMC 180DS--AQ (komercijalni proizvod firme AIT) sa smešom voda-0,1%-na mravlja kiselina kao eluensom.

bekovi koji sadrže smeše I ili II ili natrijumoksamat ili jedno ili više jedinjenja formule (I) takođe su deo ovog pronalaska.

Ovaj pi-onalazak se takođe odnosi na primenu smeša I iII, natri jumoksainata i jedinjenja formule (I) ili njihove smeše zadobivanje lekova za tečenje iliprevencijudijabetesa ikomplikacija dijabetesa.

Sledeći primeri ilustruju ovaj pronalazak.

Primer 1

D obivanje smeše X

Semena Eugenia Jambolana Lamarck su osušena na slobodnom vazduhu, zaštićena od sve 1.1 ost. i , zatim su fino isitnjena. Tako dobiven prah je prose jan pomoću sita sa otvorima od 0,5/im.1 kg prosejanog praha je podvrgnut maceraciji uz mehaničko mešanje u 5 Litara etanola koncentracije 93-95° (po Gej Lisaku) u toku jedan sat pri 60°C. Posle filtriranja na vakuumu, nerastvorni deo je ponovo tretiran pod istim usiovima sa 4 litra etanola iste koncentracije na 6 0°C u toku još jedan sat. Ova dva etanol. na ekstrakta koji u uglavnom sadrže neželjeni pol i fenol ni i sterolni kompleks su ol i. m i n i sana . Posle potpunog filtriranja, nerastvorni đc-o je pi Liuljeii u 1 1 i tar amonijačnog rastvora (350 ml 28%-nog NH_jOH i destilovana voda u količini dovoljnoj da se dobije 1 litar rastvora) i smeša je ostavljena u dodiru u toku oko 20 sati pri temperaturi oko 20°C. Vlažna amonijačna masa je ponovo podvrgnuta maceraciji u 5 litara smeše etanola koncentracije 93-95° (prema Gej Lisaku) i vode. (u zapreminskom odnosu 75/25 ), uz mehaničko mešanje u toku 1 sat pri 60°C. Nerastvorni deo je odfiltriran i ispiran sa 1 litar etanola iste koncentracije; filtrat i ispiro-tina su eliminisani. Nerastvorni ostatak je osušen na slobodnom vazduhu i zaštićen od svetlosti. Tako je dobijena smeša, u obliku praha, koja je oslobođena od polifenolnih i sterolnih derivata. Polazeći od sprašenih i isitnjenih semena prinos iznosi 80%.

Primer2

Dobivanje smeše I_I

U toku 3 sata meša se 1 kg smeše I dobivene u primeru 1 , u rastvoru koji sadrži. 17,7 litara vode i 0,93 litra etanola. Po.sie dekantovanja u toku noći, jednim delom je gornja faza (13,5 litara) odlivena, zatim filtrirana preko pamučnog platna, u filtru od 7 litara ( Schott) dajući filtrat 1 (13,..5 litara) i, drugim delom, donja faza je mešana 1 sat sa 2.0 litara ' vode , filtrirana preko frite No. 3 dajući, filtrat 2 (24 litra).. Filtrati 1 i 2 su spojeni , potom koncent-rovani u, vodenoj fazi. (33,5 litara) u t e rmo s i f ons kom koncentratom . (, Scho 11) . pr i 35°C pod vakumom od 0,4 kPa . Koncentrat je mešan 1 sat sa 2,5 litra smole S861 ( R.horo i. Haas), potom filtriran preko frite No. 3. Filtrat je koncentrovan

u tormos i f onskom koncentratom (Schott), pri 35- o"0 pod vakuumom od 0,4 kPa, do 5,5 litara. Koncentrat je centrifugi ran u cevastoj centrifugi (snaga centrifuge 62000 g), filtriran na filtru od 0,22l- im(Gelmanov tip suporcap 100) uz primenu pumpe. Posle tri sukcesivna ul l ra filtri ran ja kroz čauru 10 Kd, 3 Kd i .1 Kd i 1 iofi 1 izacije dobiveno je 25 g smeše II u obliku tamno smedeg higroskopnog praška.

Pr i mer 3^

Sastojci koj i su dobiveni polazeći od smeše , XI

525 mg smeše dobivene u primeru 2 u rastvoru od 1,1 ml filtrirane vode {mili Q) su hromatografisani na. koloni RGhem Elut (komercijalni proizvod firme Prolabo) visine 50 cm, prečnika 1 cm, zasićene filtriranom vodom (mili Q). Eluiranje je izvršeno heptanom sa rastućim gradijentima etilacetata, potom n-butanola," ' " smeše n-butanol/hlorovodoni£na kiselina i voda (frakcija 1: heptan, frakcija 2: heptan/etilacetat (u zapreminskom odnosu 50/50), frakcije 3-4: etilacetat, frakcije 5-6: etilacetat/n-butanol (u zapreminskom odnosu 95/5), frakcije 7-8: etilacetat/n-buta-

nol (u zapreminskom odnosu 90/10), frakcije 9-10: etilacetat/ n-butanol (u zapreminskom odnosu 80/20), frakcije 11-12: etilacetat/n-butanol (u zapreminskom odnosu 50/50), frakcije 13-14: etilacetat/n-butanol (u zapreminskom odnosu 20/80), frakcije 15-16: n-butanol, frakcije 17-18: n-butanol/voda (u zapreminskom odnosu 98/2), frakcije 19-21: n-butano1/voda (u zapreminskom odnosu 95/5). Spojene su frakcije od po 50 ml. Frakcije 19-21 su spojene i koncentrovane do suva pod sniženim pritiskom. Tako je dobiveno 108 mg frakcije koja je hromatogra-fisana na koloni<R>Sefadeksa LH20 {komercijalni proizvod firme Pharmacia) (visine 100 cm, prečnika 1 cm) što je realizovano sa smešom metanol/voda (u zapreminskom odnosu 50/50). Eluiranje je izvršeno sa istom smešom eluenasa, sakupljane su frakcije od 1 ml. 1 . Frakcije 88 do 91 su spojene i koncentrovane do suva. Dobiva se 14,4 mg produkta koji kristalizacijom u 0,5 ml etanola daje 2 mg 2 , 5-di (tetrah idroksibuti 1 )pirazina u obliku belih kristala koji imaju sledeće karakteristike: - optička rotacija [a]*w (Na 589) = -137 ± 2,0 (dimetil-sulfoksid, c = 0,5), - infraorveni spektar snimljen na aparatu Nikolet 60SX-R u rastvoru u KBr, glavne karakteristične apsoprcione trake: 3281 cm"1{ vOH veze od H„0), 2972+2940+2901+2880 cm"<1>{ vCH od CH i CHOH), 2733 cm<-1>( vOH veze), 1635 cm<-1>(deformacije OH, od H 0), 1491 cm (i>C=C i C = N od jezgra pirazina), 1449 cm (uC = C i C=N jezgra pirazina + deformacije OH), 1413 cm (deformacije OH), 1343 cm"<1>( vC=C i C=N jezgra pirazina), 1309+1290+1251+1215+ 1181+1161+112 3 cm<1>(deformacije CH),1092 ( vCO sekundarnih alkohola), 1048+1035( vCO primarnih alkohola + jezgra pirazina), 947+899+854 cm (sekundarni alkoholi), 877 cm{ fCH jezgra pirazina), 727 cm 1 (jezgra pirazina + deformacije OH), 639 cm 1 (jezgra pirazina), 607 + 531 cm 1 široke trake (deformacije OH) , 451+411 cm 1 (jezgra pirazina), - raaseni spektar snimljen na aparatu Finnigan TSQ46, režim

,joni zaci je mase M/z = 321 ( MH ) + ,

- H NMR spektar {600 MHz , DMSO, hemi.jska pomeranja u ppm ) :

aa: n/? i / o — i ^..„1, ' OTT PTI „ „ 4' O K O (Om +- r.,,,-,!- ; O LI 0 , ■! U 1 Oj Ml- V i, lil L. , b V a M «£, II , v^n 2 1 * i ~* / » ^" j ^ \ ^ itiv-, ^ v a r\ i. 11 T CH na 2 ' , 2" , 3 ' , 3" ) , 4,3 6 (širok t, 2H , OH na 4 ' , 4 " ) , 4,4 0 (ci, J = 7,2 Hz, 2H, OH na 2',2"), 4,63 (d, J = 4,8 Hz, 2H, OH na 3',3"), 4,95 (dd, J = 6,0 i 0,6 Hz, 2H, CH na 1',!"), 5,30 (d, J = 6,0 Hz, 2H, OH na i ',]"), 8,61 (s, 2H, CH na 336),

- u 1 tral jubičasti spektar: A.max= 2 75 nm( £- 8260), 206 nm {€ - 10220) (c =19mg/ml, voda), A = 2 76 nm ( £ = 7960), 206 nm

ma x

(.'.: = 9920) (c = 19 mg/ml, 0,1N HC1 ) , \ = 27 5 nm (= 7690) (e =

max

1 9 mg/ml , 0,1N KOH ) ,

U FLC i tečna hromatografi ja sa visokim performansama) na koloni V.M.C 180DS-AQ dimenzija 150x4,6 mm (grupa AIT/DE9403 7 7 )

(komercijalni proizvod firme AIT), izokratno eluiranje l^1^ + ^ ' ^ %-tia mrav 1 ja kisel ina sa ispušnom količinom od 1 ml/min, UV detekcija na 270 nm, retenciona vremena: 2 min 32 sek. 2. Frakcije 92 i 93 su spojene i koncent rovane do suva. Dobijeno je 9 mg frakcije koja je kristalizacijom u 0,5 ml etanola dala 1,2 mg natrijunroksamata koji pokazuje iste karakteristike kao što su one opisane od strane Toussaint-a, Ann., 120, 237 (1861). 3. Frakcije 94 do 97 su spojene i koncent rovane do suva. Dobiveno je 25,9 mg frakcije koja je kristalizacijom u 0,5 ml etanola dala 6,2 mg smeše 2-{tetrahidroksibuti1)-5-(2' ,3 ' ,4 ' - trihidroksibutil)pirazina i 2-(tetrahidroks ibutil)- 6-(2' ,3' , 4 ' - trihidroksi but i1)pirazina koji su ponovo odvojeni pomoću HPLC (tečne hromatografije sa visokim performansama) na koloni Y.M.C 180DS-AO dimenzija 150x4,6 mm (grupa AIT/DE940377), izokratno eluiranje 1^0 + 0,1 %-na mravlja kiselina sa ispušnom količinom od 1 ml/min, UV detekcija na 270 nm.

Tako je dobiveno 5,2 mg 2-(tetrahidroksibutil)-5-(2' ,3' ,4'-trihidroksibut.il )pirazina koji pokazuje sledeće karakteristike: - optička rotacija l cl] 20 (Na 589) = -116,3° ± 1,7 (đimetil-sulfoksid, c = 0,5), - mfracrveni spektar snimljen na aparatu Nikolet 60SX-R u rastvoru u KBr, glavne karakteristične apsoprcione trake: 3398 cm"<1>( vOH veze od HgO), 2 9 51 + 2922 + 2891 cm"<1>(f CH od CHOH ) , 2 76 1 cm"<J>( vOH veze), 1 636 cm"<1>(deformacije OH, od H,,0), 1483+1463

-1 -l

cm (i>C = C i C = N od jezgra pirazina), 1411 cm (deformacija Ofl ) , 1367+1328+1270+1227+1191 cm"<1>(deformacije CH), 1071( uCO sekundarnih alkohola), 1041( vCO primarnih alkohola + jezgra pirazina), 943 + 897 cm"1 (sekundarni alkoholi), 869 cm"1 (CH jezgra pirazina), 645 em (CH jezgra pirazina), 607 cm 1 g iroke trake (deformacije OH), 416+409 cm<1>(jezgro pirazina),

- maseni spektar snimljen na aparatu Finnigan TSQ46, režim jonizacije mase M/z = 30 5 (MH)<+>, - ^H NMR spektar (600 MHz, DMSO, hemijska pomeranja u ppm) : 2,70 i 3,04 (2 cld, J = 9,0 i 15,0 Hz i J = 3.0 i 15,0 Hz, svaki IH, CHVna 1"), između 3,3 0 i 3,4 5 (nit, CH na 3",4',4"), između 3,5 3 i 3,65 (mt, 4H, CH na 2',3',4',4"), 3,7 3 (mt, IH, CH na 2"),4,37 (Širok t, IH, OH na 4'), 4,42 (mt, 2H, OH na 2' i 4"), 4,60 (d, J = 6 Hz, IH, OH na 2"), 4,63 (d, J = 6 Hz, IH, OH na 3'), 4,67 (d, J = 6 Hz, IH, OH na 3"), 4,92 (dd, J = 6,0 i 0,6 Hz, IH, CH na 1 ' ) , 5,30 (d, .1 = 6 , 0 Hz, IH, OH na 1 ' ) , 8,39 (s, IH, CH na 6), 8,61 (s, IH, CH na 3), - ultraljubičasti spektar: A = 276 nm (e- 7756), 206 nm max

( c= 8738) (c = 19 mg/ml. voda), X = 277 nm{ c- 7218), 208 nm

max

(£= 7171) (c = 19 mg/ml, 0,1N HC1 ) , A = 276 nm ( c = 7467) (c =

max

19 mg/ml, 0,1N KOH),

- HPLC (tečna hroma tografija sa visokim performansama) na koloni Y.M.C 180DS-AQ dimenzija 150x4,6 mm (grupa AIT/DE940377)

(komercijalni proizvod firme AIT), izokratno eluiranje HgO + 0,1 %-na mravlja kiselina sa ispušnom količinom od 1 ml/min, UV

detekcija na 270 nm, retenciona vremena: 3 min 75 sek,

i 1 mg 2-( tetrahidroks ibut il )-6-( 2 ' , 3 ' , 4 ' -1 r i.hidroks i. but i 1 ) - pirazina koji pokazuje sledeće karakteristike:

- H NMR spektar (600 MHz, DMSO, hemijska pomeranja u ppm):

2,70 i 3,04 (2 dd, J = 9,0 i 15,0 Hz i J = 3,0 i 15,0 Hz, svaki IH, CHg na 1"), između 3,30 i 3,45 (mt, CH na 3", 4',4"), između 3,53 i 3,65 (mt, 4H , CH na 2 ' , 3 ' , 4 ' , 4" ) , 3,73 (mt, 111, CH na 2"), 4,3 7 (širok t, IH, OH na 4'), 4,4 2 (mt, 2H, OH na 2' i 4"), 1,60 (d, J = 6 Hz, IH, OH na 2"), 4,6 3 (d, J = 6 Hz, IH, OH na 3'), 4,67 (d, J = 6 Hz, IH, OH na 3"), 4,92 (dd, J = 6,0 i 0,6 Hz, IH, CH na l'), 5.3 0 (d, J = 6,0 Hz, IH, OH na 1'), 8,31 (s, IH, CH na 5 ) , 8,53 (s, LH, CH na 3) , - lll-'l.C (tečna hromatograf i ja sa visokim performansama) na koloni V.M.C 180DS-.AQ dimenzija 150x4,6 mm (grupa AIT/DE94 0 3 7 7 ) i komercijalni proizvod firme AIT), izokratno eluiranje Ho0 + 0,1 %-na mravlja kiselina sa ispušnom količinom od 1 ml/min, UV detekcija na 270 nm, retenciona vremena: 3 min 61 sek.

H r p o g1 i k e mij s k a a k t i v n o s tsmeša T iII,n a f r i j u m o k s a m a t a i jedinjenja formule (T) je određena kod miša koji je učinjen dijabetičnim sa streptozotocinom i kod normalnog miša sa posle-obročnom hiperg1 ikemijom prema sledećim protokolima: I. Mi ševi k oji su učinjeni d ijabetičnim sa streptozotocinom

S'vajcarski albino miševi koji su teški između 22 i 25 g su učinjeni dijabetičnim sa streptozotocinom koji je davan intrape-ritonalnom injekcijom sa dozom od 210 ili 265 mg/kg miša koja je razblažcna u citratnom puferu pri koncentraciji koja omogućava da svaki miš primi 0,2 ml ovog rastvora prvog dana (Dl). Posle tri do četiri dana kod dva do tri miša se kontroliše da li je prouzrokovan dijabetes (glikemije iznad 7,2 mmol/litar (130 mg na 100 ml)). Zatim se izmeri glikemija posle posta od 4 sata. Kada su miševi postali dijabetični oni su podeljeni u grupe od po 5 do 7 miševa. Svaka od ovih grupa je primila, polazeći od prvog dana (dana Dl) i svakodnevno odabranu dozu ovog proizvoda. Davanje se vrši jedanput na dan i u utvrđeno vreme pomoću želudačne cevi (e ndos kop i j om) i u zapremini od 0,4 ml destiiovane vode kao nosača. Načinjene su dve grupe kontrolnih proba:

- grupa netretiranih dijabetičnih miševa,

- grupa normalnih miševa.

Ove dve grupe kontrolnih proba su pomoću želudačne cevi (endoskopa) i simultano tretirajući date miševe primile 0,4 ml n o s a č a .

Tretiranje je trajalo četiri dana. Petog dana (D5) nije bilo davanja ovog produkta. Posle posta u toku četiri sata izmerene su krajnje gljkemije.

! 1 . Norm a In i m išev i sa posleobročnom h i pe1 i kem i j om

Svajcarsk i albino miševi koji su teški između 22 i 25 g su podvrgnuti posleobročnoj hiperg1 ikemiji uz primenu sledećeg protokola:

- post dva sata,

- suvišno hranjenje u toku jedan sat,

- post dva sata.

Glikemija se meri na kraju dva poslednja sata posta, koji čini gl i kemiju u vreme TO. Miševi su zatim podeljeni u homogene grupe u zavisnosti od izmerenih glikemija. Testirani produkti su davani bez primene želudačne cevi u 0,4 ral destiiovane vode. Kontrolna grupa je primila ekscipijens (rastvorno sredstvo) (0,4 ml destiiovane vode). Posle jedan sat izmerene su krajnje glikemije koje čine glikemiju u vremenima T60.

Rezultati dobiveni za glikemiju miševa koji su učinjeni dijabe-tičnim sa streptozotocinom

Rezultati dobiveni za glikemiju normalnih miševa sa posleobročnom hiperglikemijom

Rezultati dobiveni za glikemiju normalnih miševa sa posleobročnom hiperglikemijorn sa se panj em i razvoja u pravcu uicera i gangrene, cerebralne vaskularne insuficijencije i njenih komplikacija, seksualne impotencije koja je vaskularnog porekla), dijabetične retinopatije i svih njenih manifestacija (povišenja kapilarne propustijivosti , dilatacije i tromboze kapilara, mikroaneurizama, arterijsko--venskog paralelnog spoja (bajpasa), proširenja vena, probodnih i makularnih hemoragija (krvarenja), eksudata, makularnih edema, manifestacija proliferantne retinopatije: novih krvnih sudova, ožiljaka proliferantnog retinitisa, hemoragija okna (prozora), odlepljivanja retine), dijabetičnog katarakta, dijabetične neuropatije u njenim različitim oblicima (perifernih polineuropati ja i njihovih manifestacija kao što su parestezije, hiperestezije i reume, mononeuropatije, rad ikalo patije, autonomne neuropatije, dijabetične amiotrofije), manifestacija dijabetične noge (uicera donjih ekstremiteta i noge), dijabetične nefropatije u njenim dvojnim - difuznim i nodularnim (čvorastim) oblicima, ateromatoze (povišenja HDL lipoproteina koje favorizuje eliminisanje hole-sterola polazeći od ateromskih pločica, snižavanje LDL 1 ipo-proteina, snižavanje odnosa LDL/HDI. , inhibicije oksidacije LDL, smanjenja adhezivnosti pločica), hiper1ipemija i disiipemija ( hi<p>erholesterolem ja, hipertrigliceridemija, normalizacije sadržaja masnih kiselina, normalizacije urikemije, normalizacije apoproteina A i B), katarakta, arterijske hipertenzije i njenih posledica.

Lekovi prema pronalasku se sastoje od smeše prema pronalasku, natrijumoksamata, jedinjenja formule (I) ili kombinacije ovih produkata, u čistom stanju ili u obliku smeše u kojoj je ovaj udružen sa bilo kojim drugim farmaceutski kompatibilnim produktom, koji može biti inertan ili fiziološki aktivan. Lekovi prema pronalasku mogu se upotrebiti oralnim, parenteralnim, rektalnim ili topikalnim putem.

Kao čvrste smeše za oralno davanje, mogu se koristiti pastile, pilule, praškovi (želatinske kapsule, praškovi) ili granule. U ovim smešama, aktivna materija prema pronalasku je pomešana pod strujom argona sa jednim ili više inertnih razblaži-vrača, kao što su araidon, celuloza, saharoza, laktoza ili silici-jurndioksid. Ove smeše takođe mogu sadržati i druge supstance kao što su razblaživači, na primer, jedno ili više maziva, kao što su magnezijumstearat ili talk, sredstvo za bojenje, zaštitni omotač

(dražee) ili lak.

Kao tečne smeše za oralno davanje mogu se koristiti rastvori, suspenzije, emulzije, sirupi i farmaceutski prihvatljivi eliksiri koji sadrže inertne razblaživače kao što su voda, etanoL, glicerol, biljna ulja ili parafinsko ulje. Ove smeše mogu sadržati i druge supstance kao što su razblaživači, na primer, sredstva za kvašenje, zas 1 ađ i van j e , ugušć i. van j e , aromu ili stabil izovan je .

Sterilne smeše za parenteral.no davanje, prvenstveno mogu biti vodeni ili nevodeni rastvori, suspenzije ili emulzije. Kao rastvarač ili nosač, može se koristiti voda, propi 1eng1 iko1 , po 1 i e t i 1. eng 1 i ko 1 , biljna ulja, naročito maslinovo ulje, organski estrl koji se mogu davati injekcijama, na primer, et. il-oleat ili drugi pogodni orgarski rastvarači. Ove smeše takođe mogu sadržati adjuvanse (pomoćna sredstva), naročito sredstva za kvašenje, i zo fon i. zac i j u , emulgovanje, đ ispergovan je i stabi 1 izovanje. Sterilizacija se može vršiti na više načina, na primer, aseptičnim filtriranjem, inkorporirajući u smešu sredstva za sterilizaciju, zatim ozračivanjem ili zagrevanjem. One se takođe mogu napraviti u obliku čvrstih sterilnih smeša koje se mogu rastvoriti u momentu upotrebe u sterilnoj vodi ili bilo kojem sterilnom medijumu koji se meže davati injekcijom.

Smeše za rektalno davanje su supozitorije ili rektalne kapsule koje sadrže, osim aktivne materije, ekscipijense kao što su maslac od kakaoa, polusintetički gliceridi ili polietilen-glikoli.

Smeše za topikalno davanje mogu biti, na primer, kreme, losioni, ogrlice, kolutoari, kapi za nos ili aerosolovi.

Doze zavise od traženog efekta, dužine trajanja lečenja i od korišćenog puta davanja; one uopšte obuhvataju između 150 i 600 mg na dan oralnim putem za odrasle sa jediničnim dozama koje se kreću od 50 mg do 200 mg aktivne supstance.

Uopšte uzevši, lekar određuje odgovarajuću pozologiju u zavisnosti od starosti, težine i svih drugih faktora koji odgovaraju lečenoj osobi.

Sleđeći primeri ilustruju smeše prema pronalasku:

Pri mer A

Prema uobičajenoj tehnici naprave se gelne pilule koje su dozirane sa 50 mg aktivnog produkta koje imaju sledeći sastav:

Primer B

Prema uobičajenoj tehnici naprave se pastile koje su dozirane sa 50 mg aktivnog produkta i koje imaju sledeći sastav:

titandioksića (72:3,5:24,5) q.s.p. 1 pasti-

la prekrivena opnom kompletirana je do 245 mg

Primer C

Napravi se rastvor, koji se može davati injekcijom, koji sadrži 50 mg aktivnog produkta i koji ima sledeći sastav:

Claims

1. Smeše oslobođene od polifenolnih i sterolnih derivata i koje se mogu izoiovati usitnjavanjem semena Eugenia Jambolana Lamarck, maceracijom ovog praha sa nižim alifatičnim alkoholom uz zagrevanje, filtriranjem, rekuperacijom nerastvornog dela koji više ne sadrži polifenolna i sterolna jedinjenja, tretiranjem nerastvornog dela amonijačnim rastvorom, tretiranjem amonijačne smeše nižim alifatičnim alkoholom uz zagrevanje, filtriranjem, rekuperacijom nerastvornog dela i sušenjem ovog nerastvornog dela koji čini smešu I i u datom slučaju tretiranjem smeše I rastvorom voda-niži alifatični alkohol, filtriranjem, delimičnim koncentrovanjem filtrata, prečišćavanjem na nepolarnim adsorpcionim smolama, delimičnim koncentrovanjem, centrifugiranjem, ultra-filtriranjem i izolovanjem smeše II.

2. Postupak za dobivanje smeše I prema zahtevu 1, naznačen time, što se semena Eugenia Jambolana Lamarck osuše, fino isitne, proseju i dobiven prah podvrgava sledećem tretmanu koji obuhvata: a) maceraciju uz mešanje u nižem alifatičnom alkoholu (1-4C), pri temperaturi koja obuhvata između 40 i 70°C, b) filtriranje pod vakuumom i rekuperaciju nerastvornog dela, c) maceraciju uz mešanje nerastvornog dela sa nižim alifatičnim alkoholom (1-4C) pri temperaturi koja obuhvata između 40 i 70°C, d) filtriranje pod vakuumom i eliminisanje alkoholnih faza koje uglavnom sadrže neželjene polifenole i sterole, e) primanje nerastvornog dela u amonijačni rastvor pri temperaturi koja obuhvata između 10 i 30°C, f) primanje celokupne vlažne amonijačne mase u rastvor voda-niži alifatični alkohol(1-4C), pri temperaturi koja obuhvata između 40 i 70°C, g) filtriranje i eliminisanje alkoholnog rastvora, h) ispiranje nerastvornog dela nižim alifatičnim alkoholom (1-4C), filtriranje i eliminisanje alkoholnog rastvora, i) rekuperaciju nerastvornog dela i sušenje smeše I.

3. Postupak prema zahtevu 2, naznačen time, što se u stupnju a) radi sa 2 do 10 litara nižeg alifatičnog alkohola na 1 kg prosejanog praha.

4. Postupak prema jednom od zahteva 2 i 3, naznačen time, što se u stupnju a) koristi 5 litara etanola koncentracije 93-95° (po Gej Lisaku) pri 60°C u toku jedan sat,

5. Postupak prema jednom od zahteva 2 do 4, naznačen time, što se filtriranje iz stupnjeva b) i d) vrši pod vakuumom od 40 kPa.

6. Postupak prema jednom od zahteva 2 do 5, naznačen time, što se u stupnju c) radi sa 2-10 litara nižeg alifatičnog alkohola na 1 kg polaznog prosejanog praha.

7. Postupak prema jednom od zahteva 2 do 6, naznačen time, što se u stupnju c) koristi 4 litra etanola koncentracije 93-95° (po Gej Lisaku) pri 60°C u toku jedan sat.

8. Postupak prema jednom od zahteva 2 do 7, naznačen time, što se u stupnju e) , na 1 kg polaznog prosejanog praha, koristi 750 do 1250 ml vodenog amonijačnog rastvora.

9. Postupak prema jednom od zahteva 2 do 8, naznačen time, što se u stupnju e), na 1 kg polaznog prosejanog praha, koristi 1 litar vodenog amonijačnog rastvora'koji"sadrži 350 ml 28%-nog amonijaka i što se radi pri temperaturi oko 20°C u toku perioda od 10 do 30 časova.

10. Postupak prema jednom od zahteva 2 do 9, naznačen time, što se u stupnju f), vlažna amonijačna masa koja je dobivena polazeći od 1 kg polaznog prosejanog praha primi u 2 do 10 litara rastvora voda-niži alifatični alkohol.

11. Postupak prema jednom od zahteva 2 do 10, naznačen time, što se u stupnju f) radi u 5 litara smeše etanol-voda (zapreminski odnos 75/25) pri 60°C u toku 1 sat.

12. Postupak prema jednom od zahteva 2 do il, naznačen time, što se u stupnju h) ispiranje vrši sa 500 do 1500 mi nižeg alifatičnog alkohola na 1 kg polaznog prosejanog praha.

13. Postupak prema jednom od zahteva 2 do 12, naznačen time, što se u stupnju h) ispiranje vrši sa 1 litar etanola i što se filtriranje vrši preko pamučnog platna i pod vakuumom od oko 80 kPa.

14. Postupak prema jednom od zahteva 2 do 12, naznačen time, što se u stupnju i) sušenje vrši na slobodnom vazduhu i uz zaštitu od svetlosti.

15. Postupak za dobivanje smeše II prema zahtevu 1, naznačen time, što se smeša I prema zahtevu 1 podvrgava sledećim operacijama: j) tretiranju smeše I prema zahtevu 1 rastvorom voda-niži alifatični alkohol(1-4C1 , k) dekantovanju zatim, jednim delom, odlivanju gornje faze koja je filtrirana radi dovođenja filtratu 1 i, drugim delom, tretiranju donje faze vodom i filtriranju radi dovođenja filtratu 2, spajanju filtrata 1 i 2 i koncentrovanju u vodenoj fazi,

1) tretiranju nepolarnom adsorpcionom smolom potom filtriranju, m) koncentrovanju filtrata, filtriranju, potom ultra filtriranju, n) liofilizaciji i izolovanju ekstrakta II.

16. Postupak prema zahtevu 15, naznačen time, što se u stupnju j) koristi 10 do 25 litara rastvora voda-niži alifatični alkohol (u zapreminskom odnosu 95/5 do 90/10) na 1 kg smeše 1.

17. Postupak prema jednom od zahteva 15 ili 16, naznačen time, što se u stupnju j) koristi 18 litara rastvora voda-etanol (u zapreminskom odnosu 17,7-0,93).

18. Postupak prema jednom od zahteva 15 do 17, naznačen time, što se u stupnju k) filtrira gornja faza preko pamučnog platna i doda, na I kg smeše I, 10 do 25 litara vode u donju razu i filtrira oreko frite (sinterovano staklo) .

19. Postupak prema jednom od zahteva 15 do 18, naznačen cime, što se u stupnju k) koncentrovan]e obično vrši u termosifonskom koncentratoru pri temperaturi od 35°C pod vakuumom od 0,4 kPa.

20. Postupak prema jednom od zahteva 15 do 19, naznačen time, što se u stupnju 1) koristi smola S861 ili smole tipa KAD i filtrira preko frite.

21. Postupak prema jednom od zahteva 15 do 20, naznačen time, što se u stupnju m) koncentrovanje vrši u termosifonskom koncentratoru ci i temceratun ođ 35°C pocl vakuumom od 0,4 kPa .

22. Postupak prema jednom od zahteva 15 do 21, naznačen f:rae, što u stupnju m; izvrše tri sukcesivna ultrafiltriranja preko Sa ure 1"ori, o kd i i kd.

2.-i. Postupak za dobivanje natrij um oksamata i jedinjenja i.: kojoj R:označava atom vodonika i R2označava niz formule: il i Rioznačava niz formule (A) i R:; označava atom vodonika, naznačen time, što se smeša II prema zahtevu 1 podvrgava sledećim operacijama: c) hromatografiji smeše II prema pronalasku na koloni sa infuzorijskom zemljom, rekuperaciji frakcija koje sadrže 4 produkta i spajanju ovih frakcija u samo jednu frakciju, p) hromatografiji prethodno dobivene frakcije na koloni sefadeksa radi dobivanja natrijumoksamata, jedinjenja formule (I) u kojoj ?.; označava atom vodonika i R_ označava ostatak (B) i smeše jedinjenja formu]e i I) u kojoj Rioznačava atom vodonika i Rzoznačava ostatak :'A5 i Jedinjenja formule (I) u kojoj r. označava ostatak (A; i ?,.. označava atom vodonika, q! u datom slučaju hromatografiji smeše jedinjenja formule (li o kojoj Rioznačava atom vodonika i R2 označava ostatak (A) i jedinienns formule (I) u kojoj Ri označava ostatak (A) i R- označava atom-vodonika uz primenu HPLC (tečne hromatograf i je sa visokim, performansama)-

21. Postupak prema zahtevu 23, naznačen time, što se hromatografija stupnja o) vrši na koloni Chem Elut zasićenoj vodom, potom sukcesivno eluira heptanom, smešom heptan/etiiacefat ;o -.aprotv.ir.skom odnosu 50/50), smešom etilacetat/n-butanol (u rupi omm.:,kom odnosu 95/5, 90/10, 8U/20, 50/50, 20/80 potom :i/30Us i oincsom n-butanol/voda (u zapreminskom odnosu 98/2 potom 95/5;. 2b.Postupak prema zahtevu 21, naznačen time, što se hromatografija stupnja p) vrši uz primenu smeše voda/ecanoi (u ■ -: 15 r ero ;.skorn odnosu 50/50). .-.':o. Postupak prema zahtevu 24, naznačen time, što se h roma tog raf i j a stupnja q) vrši na koloni YMC 180DS-AQ sa smešom voda-O, i'!.-na mravlja kiselina kao eluensom.

27. Lekovi naznačeni time, što kao aktivnu materiju sadrže smešuIprema zahtevu 1 ili smešu II prema zahtevu 1 ili natrijum-oksar.iat ili jedno ili više jedinjenja formule: u kojoj R-_ označava atom vodonika i R2označava niz formule ili Rioznačava niz formule (A) i R2označava atom vodonika, jedan ili više ekscipijenasa.

28. Prirnena smeše I prema zahtevu 1 ili smeše II prema zahtevu 1 ili natrijumoksamata ili jednog ili više jedinjenja formule : u kojoj R]označava atom vodonika i R2, označava niz formule ili R-, označava niz formule (A) i R2označava atom vodonika, za aobivanje leka za prevenciju i lečenje dijabetesa i komplikacija dijabetesa.