RS51119B - Formulacije benzotijazola i njegova upotreba - Google Patents

Abstract

Jedan farmaceutski sastav koji obuhvata benzotijazol Formule (I):kao i njegove tautomere, njegove geometrijske izomere, njegove optički aktivne forme, kao što su enantiomeri, diastereomeri i njegove'racematne forme, kao i njegove farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time daje: G jedna pirimidinil grupa;L je jedna Cl-C6-alkoksi, ili amino grupa, ili 3-8-člani heterocikloalkil, koji sadrži najmanje jedan heteroatom odabran između N, O i S;R1 se odabire iz grupe koja uključuje ili obuhvata vodonik, sulfonil,amino, Cl-C6-alkil, C2-C6-alkenil, C2-C6-alkinil, Cl-C6-alkoksi, aril, halogen,cijano i hidroksi;i jedan makrogol glicerid.Prijava sadrži još 22 patentna zahteva.

Description

Po l je tehnike

Ovaj pronalazak odnosi se na farmaceutske formulacije makrogol glicerida koje sadrže derivate benzotijazola. Pre svega, ovaj pronalazak se odnosi na formulacije stearoil makrogol glicerida derivata benzotijazola, kao i metode za njihovu pripremu i upotrebu.

Stanje tehnike

Makrogol gliceridi, t.j. zasićeni poliglikolizirani gliceridi su ekscipijensi tipa "Gelucire® ". Gelucire® su polu-čvrsti ekscipijensi koji se pripremaju alkoholizom prirodnih ulja sa polioksietilen glikolima. Gelucire® su mešavina mono-, di- i triglicerida (estera masnih kiselina i glicerola) i mono- i di- estera masnih kiselina polietilen glikola (PEG ili makrogol). Estri masnih kiselina glicerola i PEG estri koji su prisutni u Gelucire® potiču od masnih kiselina dugih lanaca (Cl2 do Cl8).

Velika porodica Gelucire® odlikuje se širokim spektrom tačaka topljenja od oko 33°C do oko 64°C kao i hidrofilnim lipofilnim balansom (HLB) od oko 1 do oko 14.

Priroda i proporcija svake komponente specifični su za specifični gradus Gelucires®. Gradus Gelucires®-a određuje se pomoću dva broja koja razdvaja kosa crta, gde prvi broj ukazuje tačku topljenja, a drugi HLB.

Gelucires® su korišćeni kao ekscipijensi u različitim formulacijama, kao na primer u formulacijama teofilna (US 4,988,679), kaptoprila (US 5,433,951) ili inhibitora proteaze HTV( Aungst et al, 1994, Buli.

Tech. Gattefosse, 87, 49- 54).

Komercijalno dostupni Gelucires® obuhvataju Gelucire® 44/14, Gelucire® 50/13, Gelucire® 53/10, Gelucire® 50/02, Gelucire® 54/02 (postoji i pod imenom Precirol®), 30 Gelucire® 62/05, Gelucire® 64/02 (postoji i pod imenom Precirol® WL 2155).

Pokazalo se da derivati benzotijazola mogu da budu korisni za lečenje različitih poremećaja, npr. poremećaja autoimunog i nervnog sistema, kao i zapaljenskih poremećaja (WO 01/47920, WO 03/091249 i WO 03/047570). Prednost se daje oralnom načinu primene, posebno za hronične indikacije.

Kratak opis pronalaska

Ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutske formulacije makrogol glicerida sa sadržajem derivata benzotijazola. Ovaj pronalazak se prvenstveno odnosi na formulacije stearoil makrogol glicerida derivata benzotijazola, kao i na metode njihove prirpeme i upotrebe.

U skladu sa jednim oblikom ovog pronalaska, predstavljamo jednu farmaceutsku formulaciju makrogol glicerida sa sadržajem derivata benzotijazola.

U skladu sa drugim oblikom ovog pronalaska, predstavljamo jednu farmaceutsku formulaciju makrogol glicerida sa dodatnim sadržajem najmanje jednog poloksamera kao ekscipijensa.

U skladu sa drugim oblikom ovog pronalaska, predstavljamo jednu farmaceutsku formulaciju makrogol glicerida sa dodatnim sadržajem najmanje jednog poloksamera i jednog polietilen glikola kao ekscipijensa. U drugom aspektu, ovaj pronalazak predstavlja farmaceutski sastav makrogol glicerida koji uključuje derivat benzotijazola u skladu sa Formulom (I):

Gde su R<!>, G i L definisani u detaljnom opisu.

U drugom aspektu, ovaj pronalazak predstavlja metodu za pripremu farmaceutskog sastava makrogol glicerida koja uključuje sledeće korake: - pripremu derivata benzotijazola iz Formule (I);

-dodavanje benzotijazola u skladu sa Formulom (I) u istopljeni preparat

makrogol glicerida.

Detaljni opis pronalaska

Sledeći paragrafi pružaju definicije različitih hemijskih oblika koji čine jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom, i njihov cilj jeste da se jednako primenjuju u svim specifikacijama i zahtevima, osim ako negde izričito navedena definicija ne daje širu deifniciji.

Definicije

Izraz "makrogol gliceridi" odnosi se na zasićene poliglikolizirane gliceride kao što su stearoil-, lauroil-, oleoli-, lineoil-, kaprilokaproil- makrogol gliceridi. Odgovarajući makrogol gliceridi u skladu sa ovim pronalaskom su Gelucires®.

Izraz "Gelucires®" odnosi se na zasićene poliglikolizirane gliceride koji su mešavine mono-, di- i triglicerida (estri masnih kiselina glicerola) i mono- i di-estri masnih kiselina polietilen glikola (PEG ili makrogol).

Primeri Gelucires® su Gelucire® 37/02, 37/06, 42/12,44/14, 46/07, 48/09, 50/13, 53/10, 50/02, 54/02, 62/05 i 64/02, a prednost se daje 50/13.

Izraz "surfaktant" odnosi se na solubilno jedinjenje koje smanjuje površinski napon tečnosti, ili smanjuje interfejsni napon između dve tečnosti ili tečnosti i čvrste supstancc, gde je površinski napon sila koja deluje na površini tečnosti, koja ima tendenciju da maksimlano smanjuje površinu. Surfaktanti se ponekad koriste u farmaceutskim formulacijama , uključujući i dobijanje lekova niske molekulske mase i polipeptida, da bi se modifikovala apsorpcija leka, ili njegovo dopremanje do ciljnih tkiva. U dobro poznate surfaktante spadaju polisorbati (derivati Polioksietilena; Tween) kao i poloksameri.

Izraz "Poloksamer" odnosi se na jedan blok kopolimer poli(etilen oksid) i poli(propilen oksid), koji su dobro poznati kao ne-jonski surfaktanti, i pominju se i po svojim zaštićenim imenima, Pluronics®. U primere Poloksamera spadaju Poloksamer 407 (Lutrol® F127 ili Pluronic® F127), Poloksamer 338 (Lutrol® F108 ili Pluronic® F108), Poloksamer 108 (Lutrol® F-38 ili Pluronic® F-38) i Poloksamer 188 (Lutrol® F68 ili Pluronic® F68), gde se prednost daje Poloksameru 188 ili Poloksameru 407. Izraz "terapija" u kontekstu ovog prolanaska odnosi se na svako povoljno dejstvo na progresiju boleti, uključujući njeno ublažavanje, smanjenje slabljenje ili umanjenje patološkog razvoja po započinjanju bolesti.

"Cl-C6-alkil" odnosi se na alkil grupe koje imaju 1 do 6 atoma ugljenika. Ovaj izraz se ilustruje primerima kao što su metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, isobutil,terl- but\\,n-butil, n-pentil, n-heksil i slični.

"Ari!" odnosi se na nezasićenu aromatičnu karbocikličnu grupu koju čini od 6 do 14 ugljenikovih atoma koji imaju samo jedan prsten {npr., fenil) ili multiple kondenzovane prstenove {npr., naftil). U preferencija I ne arile spadaju fenil, naftil, fenantrenil i slični.

"Cl-C6-alkil aril" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju arilni supstituent, uključujući benzil, fenetil i slične.

"Heteroaril" odnosi se na jednu monocikličnu heteroaromatičnu, ili jednu bicikličnu ili jednu tricikličnu heteroaromatičnu grupu sa fuziranim prrstenom. U posebne primere heteroaromatičnih grupa spadaju opciono supstituisani piridil, pirolil, fturil, tijenil, imidazolil, oksazolil, isoksazolil, tijazolil, isotijazolil, pirazolii, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadia-zolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil,l,3,4-triazinil, 1,2,3-triazinil, benzofuril, [2,3-dihidro]benzofuril, isobenzofuril, benzotijenil, benzotriazolil, isobenzotijenil, indolil, isoindolil, 3H-indolil, benzimidazolil, imidazo[l,2-a]piridil, benzotijazolil, benzoksa-zolil, kvinolizinil, quinazolinil, ptalazinil, kvinoksalinil, cinnolinil, napthvridinil, pirido[3,4-b]piridil, pirido[3,2-b]piridiI, pirido[4,3-b]piridil, kvinolil, isokvinolil, tetrazolil, 5,6,7,8-tetrahidrokvinolil, 5,6,7,8-tetrahidroisokvinolil, purinil, pteridinil, carbazolil, ksantenil ili benzokvinolil.

"Cl-C6-alkil heteroaril" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju heteroarilni supstituent, uključujući 2-furilmetil, 2-tijenilmetil, 2-(lH-indol-3-il)etil i slične.

"C2-C6-alkenil" odnosi se na alkenil grupe koje po mogućstvu treba da uključuju od 2 do 6 ugljenikovih atoma i da imaju najmanje 1 ili 2 mesta alkenilne nezasićenosti. U preferencijalne alkenil grupe spadaju etenil (-CH=CH2), n-2-propenil (alil, -CH2CH=CH2) i slične.

"C2-C6-alkeniI aril" odnosi se na C2-C6-alkenil grupe koje imaju arilni supstituent, uključujući 2-fenilvinil i slične.

"C2-C6-alkenil heteroaril" odnosi se na C2-C6-alkenil grupe koje imaju heteroarilni supstituent, uključujući 2-(3-piridini!)vinil i slične.

"C2-C6-alkinil" odnosi se na alkinil grupe koje po mogućstvu treba da imaju od 2 do 6 ugljenikovih atoma i da imaju najmanje 1-2 mesta alkinilne nezasićenosti, a u preporučene grupe spadaju etinil (-OCH), propargil (-CH2OCH), i slične.

"C2-C6-alkinil aril" odnosi se na C2-C6-alkinil grupe koje imaju arilni supstituent, uključujući feniletinil i slične.

"C2-C6-alkinil heteroaril" odnosi se na C2-C6-alkinil grupe koje imaju heteroarilni supstituent, uključujući 2-tijeniletinil i slične.

"C3-C8-cikloalkil" odnosi se na jednu zasićenu karbocikličnu grgrupu koja sadrži od 3 do 8 ugljenikovih atoma i ima samo jedan prsten( npr.,cikloheksil) ili multiple kondenzuovane prstenove( npr.,norbornil). U preferencijalne cikloalkile spadaju ciklopentil, cikloheksil, norbornil i slični. "Cl-C6-alkil cikloalkil" odnosi se na Cl-C6-alkilne grupe koje imaju jedan cikioalkilni supstituent, uključujući cikloheksilmetil, ciklopentilpropil, i slične.

"Heterocikloalkil" odnosi se na jednu C3-Cg-cikloalkilnu grupu u skladu sa gore datom definicjom, kod koje su 1 do 3 ugljenikovih atoma zamenjeni hetero atomima izabranim iz grupa koje se sastoje od O, S, NR, R koje se definišu kao vodonik ili CI- C6 alkil. U preporučene heterocikloalkile spadaju pirolidin piperidin, piperazin, 1-metilpiperazin, morfolin, i slične.

"Cl-C6-alkil heterocikloalkil" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju heterocikloalkil supstituent, uključujući 2-(l-pirolidinil)etil, 4-morfolinilmetil, (l-metil-4-piperidinil)metil i slične.

"Karboksi" odnosi se na grupu -C(0)OH.

"Cl-C6-alkil karboksi" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju jedan karboksi supstituent, uključujući 2-karboksietil i slične.

"Acil" odnosi se na grupu -C(0)R gde R uključuje H, "C,-C6-alkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "C3-C8-cicloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "C,.Cc-alkil aril" ili "C-Cfi-alkil heteroaril", "C2-C6-alkenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "C,-C6-alkil cikloalkil", "C,-C6-alkil heterocikloalkil".

"Ci-C6-alkil acil" odnosi se na CrCć-alkilne grupe koje imaju acilni supstituent, uključujući 2-acetiletil i slične.

"Aril acil" odnosi se na arilne grupe koje imaju jedan acilni supstituent, uključujući 2-acetilfenil i slične.

"Heteroaril acil" odnosi se na hetereoarilne grupe koje imaju jedan acilni supstituent, uključujući 2-acetilpiridil i slične.

"C3-C8-(hetero)cikIoalkil acil" odnosi se na 3 - 8-očlane cikloalkilne ili heterocikloalkilne grupe koje imaju jedan acilni supstituent.

"Aciloksi" odnosi se na grupu -OC(0)R gde R uključuje H, "C,-C6-alkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "Cj-Cs-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "d-Ce-alkil aril" ili "Cl-C6-alkil heteroaril", "C2-C6-alkenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "Cl-C6-alkil cikloalkil", "Cl-C6-alkil heterocikloalkil".

"Ci-Cć-alkil aciloksi" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju jedan aciloksi supstituent, uključujući 2-(acetiloksi)etil i slične.

"Alkoksi" odnosi se na grupu -O-R gde R uključuje "Cl-C6-alkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "C3-C8-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "CrC6-alkil aril" ili "C,-C6-alkil heteroaril", "C2-C6-alkenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroariI", "Cl-C6-alkil cikloalkil", "Cl-Ce-alkil heterocikloalkil".

"C l-C6-alkiI alkoksi" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju jedan alkoksi supstituent, uključujući 2-etoksietil i slične.

"Alkoksikarbonil" odnosi se na grupu -C(0)OR gde R uključuje "Ci-C6-alki<r>, "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "CrC8-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "C,-C6-alkiI aril" ili "C,-C6-alkil heteroaril", "C2-C6-alkeniI aril", "C2-Ce-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "Cl-C5-alkil cikloalkil", "Cl-C6-alkil heterocikloalkil".

"Cl-C6-alkil alkoksikarbonil" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju jedan alkoksikarbonil supstituent, uključujući 2-(benziloksikarbonil)etil i slične.

"Aminokarbonil" odnosi se na grupu -C(0)NRR' gde svaki R, R' uključuje nezavisno vodonik, "CrC6-alkil", "C2-C6-alkeniI", "C2-C6-alkinil", "C3-C8-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "C,-C6-alkil aril" ili "Cl-C6-alkil heteroaril", "C2-C6-alkenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "CrC6-alkil cikloalkil", "C,C6-alkil heterocikloalkil". "C,-C6-alkil aminokarbonil" odnosi se na Ci-C6-alkil grupe koje imaju jedan aminokarbonil supstituent, uključujući 2-(dimetilaminokarbonil)etil i slične.

"Acilamino" odnosi se na grupu -NRC(0)R' gde je svaki R, R' nezavisno vodonik, "Ci-Cć-alkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "C3-Cs-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "CrC6-alkil aril" ili "Cr Q,-alkil heteroaril", "C2-C6-alkenil aril", "C2-C6-alkeniI heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "C,C6-alkil cikloalkil", "C,-C6-aIkil heterocikloalkil".

"Ci-C6-alkil acilamino" odnosi se na Cl-C6-aIkil grupe koje imaju jedan aciiamino supstituent, uključujući 2-(propionilamino)etil i slične.

"Ureido" odnosi se na grupu -NRC(0)NR'R" gde je svaki R, R', R" nezavisno vodonik, "C|-C6-alkil", "CV C6-alkenil", "C2-Q,-alkinil", "C3-Cg-cikloalkU", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "C,-C6-alkil aril" ili "C,-C6-alkil heteroaril", "C2-C6-alkenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "Cl-Cć-alkil cikloalkil", "Cl-C6-alkiI heterocikloalkil", i gde R' i R", zajedno sa atomom azora za koji su spojeni, mogu opciono da formiraju jedan 3-8-člani heterocikloalkilni prsten.

"Cl-C6-alkil ureido" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju jedan ureido supstituent, uključujući 2-(JV-metilureido)etil i slične.

"Karbamat" odnosi se na grupu -NRC(0)OR' gde je svaki R, R' nezavisno vodonik, "CiC6-alkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "CrC8-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "C,-C6-alkil aril" ili "Cr C6-alkii heteroaril", "CrCf,-aikenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkiniI aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "CrC6-alkil cikloalkil", "C,-C6-alkil heterocikloalkil".

"Amino" odnosi se na grupu NRR' gde je svaki R, R' nezavisno vodonik, "Cl-C6-alkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-a!kinir', "C3-C8-cikloalkir*, "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "C1-C6-alkilaril" ili "Cl-C6-alkil heteroaril", "C2-C<ralkenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "Cl-C6-alkil cikloalkil", "Cl-C6-alkil heterocikloalkil", "alkoksi" i gde R i R', zajedno sa atomom azota za koji su spojeni, mogu opciono da formiraju jedan 3-8-člani hetero-cikloalkil prsten.

"Cl-C6-aDcil amino" odnosi se na d-C6-alkil grupe koje imaju jedna amino supstituent, uključujući 2-(l-pirolidinil)etil i slične.

"Amonijum" odnosi se na jednu pozitivno naelektrisanu grupu -N<+>RR'R"", gde je svaki R, R',R" nezavisno, "CCValkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkiniI", "C3-C8-cikIoalkil", "heterocikloalkil", "Cl-C6-alki! aril" ili "dCValkil heteroaril", "C2-C6-alkenil aril", "C2-CValkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril","C2-C6-alkinilheteroaril", "Cl-C6-alkil cikloalkil", "C1-C6-alkiI heterocikloalkil", i gde R i R', zajedno sa atomom azota za koji su spojeni, mogu opciono da formiraju jedan 3-8-člani heterocikloalkilni prsten.

"Cl-C6-alkil amonijum" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju amonijumov supstituent, uključujući 2-(l-pirolidinil)etil i slične.

"Halogen" odnosi se na fluoro, hloro, bromo and jodo atome.

"Sulfoniloksi" odnosi se na gupu -OS02-R u kojoj se R odabire od sledećih: H, "Cl-C6-alkil", "C1-C6 -alkil" supstituisane halogenima,npr.,jedna -OS02-CF3grupap, "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil","C3-C8-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "C,C6-alkil aril" ili "C1-C6-aIkil heteroaril", "C2-C6-aikenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "Cl-C6-alki! cikloalkil", "Cl-C6-aIkil heterocikloalkil".

"Cl-C6-alkil sulfoniloksi" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju sulfoniloksi supstituent, uključujući 2-(metilsulfoniloksi)etil i slične.

"Sulfonil" odnosi se na grupu "-S02-R" u kojoj je R odabran iz sledećih: H, "aril", "heteroaril", "Cl-C6-alkil", "Cl-C6-alkiI" supstituisane halogenima,npr.,jedna -SOvCF3 grupa, "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "C3-C8-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "Cl-C6-alkil aril" ili "Cl-C6-alkil heteroaril", "C2-C6-alkenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkiniI aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "Cl-C6-alkil cikloalkil", "CI-C6-alkil heterocikloalkil".

"Cl-C6-alkil sulfonil" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju sulfonil supstituent, uključujući 2-(metilsulfonil)etil i slične.

"Sulfinil" odnosi se na jednu grupu "-S(0)-R" u kojoj je R odabran iz sledećih: H, "Cl-C6-aikil", "Cl-C6-alkil" supstituisane halogenima,npr.,jedna -SO-CF3grupa, "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "C3-C8-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "d-Qs-alkil aril" ili "dCe-alkil heteroaril", "C2-C6-alkenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "Cl-C6-alkil cikloalkil", "Cl-C6-alkil heterocikloalkil".

"Cl-C6-alkil sulfinil" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju sulfinil supstituent, uključujući 2-(metilsulfinil)etil i slične.

"Sulfanil" odnosi se na grupe -S-R gde R uključuje H, "Cl-Q,-alkil", "Cl-C6-alkil" supstituisane halogenima,npr.,jedna -SO-CF3grupa, "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "C3-C8-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "C,C6-alkil aril" ili "C, C6-alkil heteroaril", "C2-C6-alkenil aril", "C2-C6-alkeniI heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinil heteroaril", "Cl-C6-alkil cikloalkil", "Cl-C6-alkil heterocikloalkil". U preferencijalne sulfanil grupe spadaju metilsulfanil, etilsulfanil, i slične.

"Cl-C6-alkil sulfanil" odnosi se na Cl-C6-a!kil grupe koje imaju sulfanil supstituent, uključujući 2-(etilsulfanil)etil i slične.

"Sulfonilamino" odnosi se na jednu grupu -NRS02-R' gde svaki R, R' pojedinačno uključuje nezavisno vodonik, "C,C6-alkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "C3-C8-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "Cl-C6-alkil aril" ili "C,C6-alkil heteroaril", "C2-C6-alkeniI aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C,-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroarir', "Cl-C6-alkil cikloalkil", "Cl-C6-alkil heterocikloalkil". "Cl-C6-alkil sulfonilamino" odnosi se na Cl-C6-alkiI grupe koje imaju jedan sulfonilamino supstituent, uključujući 2-(etilsulfonilamino)etil i slične.

"Aminosulfonil" odnosi se na grupu -S02-NRR' gde svaki R, R' pojedinačno uključuje nezavisno vodonik, "Cl-C5-aIkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "C3-C8-cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "Cl-C6-alkil aril" ili "Cl-C6-alkil heteroaril",

"C2-C6-alkenil aril", "C2-C6-alkenil heteroaril", "C2-C6-alkinil aril", "C2-C6-alkinilheteroaril", "Cl-C6-alkil cikloalkil", "Cl-C6-alkil heterocikloalkil".

"Cl-C6-alkil aminosulfonil" odnosi se na Cl-C6-alkil grupe koje imaju aminosulfonil supstituent, uključujući 2-(cikloheksilaminosulfonil)etil i slične.

"Supstituisani ili nesupstituisani": Osim ako nisu drugačije ograničeni definicijom pojedinačnog supstituenta, gore navedene grupe, kao što su "alki!", "alkenil", "alkinil", "aril" i "heteroaril" itd. grupe mogu opciono da budu supstituisane sa od 1 do 5 supstituenata koji su odabrani iz grupa koja se sastoji od opciono supstituisanih: "Cl-C6-alkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "cikloalkil", "heterocikloalkil", "aril", "heteroaril", "Cl-C6-alkil aril", "Cl-C6-alkil heteroaril", "Cl-C6-alkil cikloalkil", "C1-C6-alkil heterocikloalkil", "aramo", "amonijum", "acil", "aciloksi", "acilamino", "aminokarbonil", "alkoksikarbonil", "ureido", "karbamat", "aril", "heteroaril", "sulfinil", "sulfonil", "alkoksi", "sulfanil", "halogen", "karboksi", trihalometil, cijano, hidroksi, merkapto, nitro, i slične. Alternativno, pomenute supstitucije bi mogle da obuhvate i situacije u kojima su susedni supstituenti pretrpeli zatvaranje prstena, a karakteristično kada su uključeni i obližnji funkcionalni supstituenti, i na taj načlin formiraju,npr.,Iaktame, laktone, ciklične anhidride, ali isto tako i acetale, tioacetale, aminale koji se formiraju zatvaranjem prstena , na primer u naporu da se dobije jedna protektivna grupa.

"Farmaceutski prihvatljive soli ili kompleksi" odnosi se na soli ili komplekse dole identifikovanih jedinjenja Formule (I) koji zadržavaju željenu biološku aktivnost. U primere takvih soli spadaju, ali se ne ograničavaju na njih, i soli sa dodatkom kiselina koje se formiraju sa neorganskim kiselinama( npr.hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, azotna kiselina, i slične), i soli formirane sa organskim kiselinama kao što su sirćetna kiselina, oksalična kiselina, vinska kiselina, ćilibarna kiselina, jabučna kiselina, mravlja kiselina, maleinska kiselina, askorbinska kiselina, benzoična kiselina, štavna (taninska) kiselina, pamoična kiselina, algininska kiselina, poliglutaminska kiselina, naftalen sulfonična kiselina, naftalen disulfonična kiselina, metansulfonična kiselina i poli-galakturonična kiselina. Pomenuta jedinjenja se mogu davati kao farmaceutski prihvatljive kvaterne soli koje su poznate stručnjacima za ovu oblast, a u koje konkretno spada kvaterna amonijumova so sledeće formule: NR,R',R" ' Z, i gde je R, R', R" nezavisno vodonik, alkil, ili benzil, Cl-C6-alkil, C2-C6-alkenil, C2-C6~

alkinil, Cl-C6-alkil aril, Cl-C6-alkil heteroaril, cikloalkil, heterocikloalkil, a gde je Z protivjon, uključujući hloride, bromide, jodide, -O-alkil, toluenesulfonate, metilsulfonate, sulfonate, fosfate, ili karboksilate (kao što su benzoat, sukcinat, acetat, glikolat, maleat, malat, fumarat, citrat, tartrat, askorbat, cinamoat, mandeloat, i difenilacetat).

"Enantiomerski višak" (ee) odnosi se na proizvod koji se dobija asimetričnom sintezom, t.j. sintezom koja uključuje ne-racematske početne materijale i/ili regense ili sintezu koji obuhvataju najmanje jedan enantioselektivni kork, pri čemu se dobija višak od jednog enantiomera reda veličine najmanje 52% ee.

"Interferon" ili "1FN", u smislu u kome se ovde koristi, treba da uključi molekul koji je kao takav definisn u literaturi, koji obuhvata sve tipove IFN koji su pomenuti u gornjem odeljku pod naslovom "Stanje tehnike" . Pre svega, u gornju definiciju uključeni su IFN-a, IFN-P i IFN-y. IFN- P je preferencijalni IFN u skladu sa ovim pronalaskom. IFN- p koji je pogodan u skladu sa ovim pronalaskom komercijalno je dostupan npr. kao Rebif® (Serono), Avonex® (Biogen) ili Betaferon® (Schering).

Izraz "interferon-beta (TFN-beta ili IFN-<p>)", u smislu u kome se ovde koristi, treba da uključi fibroblastni interferon posebno humanog porekla, onako kako se dobija izolacijom iz bioloških tečnosti, ili kako se dobija tehnikama rekombinacije DNK iz prokariotskih ili eukariotskih ćelija domaćina, kao i njihove soli, funkcionalne derivate, varijante, analoge i aktivne fragmente. Po mogućstvu, EFN-beta bi ovde trebalo da označava rekombinantni Interferon beta-Ia.

IFN-beta koji je pogodan u skladu sa ovim pronalaskom komercijalno je dostupan npr. Rebif® (Serono), Avonex® (Biogen) ili Betaferon® (Schering). U skladu sa ovim pronalaskom, prednost se daje upotrebi interferona humanog porekla. Izraz interferon, u smislu u kome se ovde koristi, treba da uključi soli, funkcionalne derivate, varijante, analoge i njihove aktivne fragmente.

Rebif® (rekombinantni interferon-(3) predstavlja najnovije dostignuće u terapiji interferonom protiv multiple skleroze (MS) i predstavlja značajni napredak u terapiji. Rebif® je interferon (IFN)-beta la, koji je proizveden iz ćelijskih linija sisara. Utvrđeno je da kada se interferon beta-la daje supkutano tri puta nedeljno, daje efikasan u terapiji recidivirajuće-remitentne Multiple Skleroze (RRMS). Interferon beta-la može da ima pozitivno dejstvo na dugoročni tok MS tako što će smanjiti broj i težinu recidiva, i smanjiti opterećenje bolešću i aktivnost bolesti onako kako to izmeri MRI.

Doziranje IFN-beta u terapiji recidivirajuće-remitentne MS u skladu sa ovim pronalaskom, zavisi od tipa EFN-beta koji se koristi.

U skladu sa predstavljenim pronalaskom, gde je IFN rekombinantni lFN-(beta lb koji se proizvodi u E. Coli, komercijalno dostupan pod zaštićenim imenom Betaseron®, on može preferencijalno da se daje supkutano svakog drugog dana u dozi od otprilike od 250 do 300 pg ili 8 MIU do 9.6 MIU po osobi.

U skladu sa predstavljenim pronalaskom, gde is IFN rekombinantni IFN-(beta la, koji se proizvodi u ćelijama jajnika kineskog hrčka (CHO ćelijama), komercijalno dostupan pod zaštićenim imenom Avonex®, on može preferencijalno da se daje intramuskulamo jednom nedeljno u dozi od otprilike od i 30pg do 33 u,g ili 6 MIU do 6,6 MIU po osobi.

U skladu sa predstavljenim pronalaskom, kada je IFN rekombinantni EFN-beta la, koji se proizvodi u ćelijama jajnika kineskog hrčka (CHO ćelijama), komercijalno dostupan pod zaštićenim imenom Rebif®, on može preferencijalno da se daje supkutano tri puta nedeljno (3XN) u dozi od otprilike 22 to 44 pg ili 6 MIU do 12 MIU po osobi.

Benzotijazoli

Benzotijazols koji se koriste u ovom pronalasku imaju sledeću Formulu (I):

Oni obuhvataju njegove tautomere, njegove geometrijske izomere, optički aktivne forme kao enantiomere, diastereomere i svoje racemantne oblike, kao i njihove farmaceutski prihvatljive soli gde važi sledeće: G je jedna pirimidinil grupa;

Lje opciono supstituisana Cl-C6-alkoksi, ili jedna amino grupa, ili jedan opciono supstituisani 3-8- člani heterocikloalkil, koji sadrži najmanje jedan heteroatom koji je odabran od sledećih: N, O, S;

R' se odabira iz grup koja obuhvata ili kao sadržaj ima vodonik, sulfonil, amino, opciono supstituisani Cl-C6-aIkiI, opciono supstituisani C2-C6-alkeniI, opciono supstituisani C2-C6-alkinil ili opciono supstituisani alkoksi, aril, halogen, cijano ili hidroksi.

U skladu jednim oblikom, benzotijazol tautomeri su jedinjenja čije su formule navedene pod (la), (la<1>) ili da"):

Naznačeno time daje R<1>odabran iz grupe koja obuhvata ili kao sadržaj ima vodonik, sulfonil, amino, opciono supstituisani Cl-C6-alkil, opciono supstituisani C2-C6-alkenil, opciono supstituisani C2-C6-alkinil ili opciono supstituisani alkoksi, opciono supstituisani aril, halogen, cijano ili hidroksi;

L je jedna amino grupa čija je formula -NR<3>R<4>i gde su R<3>i R<4>svaki pojedinačno nezavisno jedan od drugoga, H, opciono supstituisani Cl-C6-alkil, opciono supstituisani C2-C6-alkenil, opciono supstituisani C2-C6-alkinil, opciono supstituisani alkoksi, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heteroaril, opciono supstituisani zasićeni ili nezasićeni 3-8-člani cikloalkil, opciono supstituisani 3-8-člani heterocikloalkil, (naznačeno time da pomenuti cikloalkil, heterocikloalkil, opciono supstituisani aril ili opciono supstituisane heteroaril grupe mogu da budu fuzionisane za 1-2 dodatno opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heterocikloalkil, opciono supstituisani aril ili opciono supstituisanu heteroaril grupu), opciono supstituisani Cl-C6-alkil aril, opciono supstituisani Cl-C6-alkil heteroaril, opciono supstituisani Cl-C6-alkenil aril, opciono supstituisani Cl-C6-aIkenil heteroaril, opciono supstituisani Cl-C6-alkinil aril, opciono supstituisani C]-C6-alkinil heteroaril, opciono supstituisani Cl-C6-alkil cikloalkil, opciono supstituisani Cl-C6-alkil heterocikloalkil, opciono supstituisani Cl-C6-alkenil cikloalkil, opciono supstituisani Cl-C6-alkenil heterocikloalkil, opciono supstituisani Cl-Cg-alkinil cikloalkil, opciono supstituisani Cl-C6-alkinil heterocikloalkil; ili R<3>i R<4>mogu da formiraju prsten zajedno sa azotom za koji su vezani.

U skladu sa jednim oblikom, L grupa u benzotijazolima u skladu sa Formulom (I) odabire se iz sledećih:

Naznačeno time daje n broj od 1 do 10, po mogućstvu odabran iz sledećih: 1, 2, 3, 4, 5 i 6; R<5>i R<5>su odabrani nezavisno jedan od drugoga iz grupe koja se sastoji od sledećeg: H, supstituisani ili nesupstituisani CrC|0 alkil, supstituisani ili nesupstituisani aril ili heteroaril, supstituisani ili nesupstituisani heterocikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani, supstituisani ili nesupstituisani C1-C6 alkii-aril and supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil-heteroaril.

U specifične benzotijazol acetonitrile u skladu sa Formulom (I) spadaju: I,3benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetii-benziloksi)-pirimidin-4-il]- acetonitril; l,3-benzotijazol-2-il[2-(2-piridin-3-ilethoksi)pirimidin-4-il]acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il[2-(kvinolin-6-iloksi)pirimidin-4-il]acetonitril;

13-benzotijazol-2-il{2-[(5-morfolin-4-ilpiridin-3-il)methoksi]pirimidin-4-il} aceton itril;

l,3-benzotijazol-2-il(2-{[4-(3,4-dihidroisokvinolin-2(lH)-ilmetil)benzil]oksi} pirimidin-4-iI) acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il[2-(heksiloksi)pirimidin-4-il]acetonitril; l,3-benzotijazol-2-il(2-{[3-(morfolin-4-ilmetil)benzil]oksi}pirimidin-4-il) acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il(2-{[3-(lH-imidazol-l-ilmetil)benzil]oksi}pirimidin-4-il) acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il(2- {[3-(piperidin-l -iImetil)benzil]oksi}pirimidin-4-il) acetonitril;

1,3 -benzotijazo 1-2-il [2-({4- [(2,6-dimetilmorfolin-4-il)metiI]benzy 1} oksi) pirimidin-4-il]acetonitril;

(2Z)-l,3-benzotijazol-2(3H)-ilidene{2-[(4-{[bis(2-methoksietil)amino]metil} benzil)oksi]pirimidin-4-il} acetonitril;

(2Z)-l,3-benzotijazol-2(3H)-ilidene[2-({4-[(4-tert-butoksipiperidin-l-il)metil]

benzil} oksi)pirimidin-4-il]acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il[2-({4-[(benziIamino)metil]benzil}oksi)pirimidin-4-il] acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il{2-[(2-morfolin-4-ilpiridin-4-il)methoksi]pirimidin-4-il} acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il{2-[(2-piperidin-I-ilpiridin-4-il)methoksi]pirimidin-4-

il} acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il[2-(2-morfolin-4-ilethoksi)pirimidin-4-il]acetonitril; 1,3-benzotijazo 1-2(3 H)-ilidene {2-[( l,4-dimetilpiperazin-2-il)methoksi]pirimidin-4-il} acetonitril;

1,3-benzotijazo 1-2-il {2-[2-(dimetilamino)ethoksi]pirimidin-4-il} acetonitril; l,3-benzotijazol-2(3H)-ilidene[2-({4-[(4-metilpiperazin-l-il)karbonil]benzil}oksi) pirirnidin-4-il]acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il{2-[3-(dimetilamino)propoksi]pirimidin-4-il} acetonitril; l,3-benzotijazol-2-il(2-{2-[2-(dimetilamino)ethoksi]ethoksi}pirirnidin-4-il) acetonitril;

1,3-benzotijazoI-2-iI {2-[2-(4-metilpiperazin-l -il)ethoksi]pirimidin-4-iI} acetonitril.

U skladu sa još jednim oblikom, benzotijazoli u skladu sa Formulom (I) uključuju i benzotijazole koji su prikazani u Formuli (lb):

Naznačeno time da R u formuli (lb) bude odabran iz grupe koja obuhvata ili kao sadržaj ima vodonik, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil aril, supstituisani ili nesupstituisani heteroaril, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil heteroaril, supstituisani ili nesupstituisani Cs-Q-alkenil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-Ce-alkenil aril, supstituisani ili nesupstituisani C2-C6-alkenil heteroaril, supstituisani ili nesupstituisani C2-C6-alkinil, supstituisani ili nesupstituisani C2-C6-alkinil aril, supstituisani ili nesupstituisani C2-C6-alkinil heteroaril, supstituisani ili nesupstituisani C3-C8-cikloalkiI, supstituisani ili nesupstituisani heterocikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-aIkil heterocikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil karboksi, acil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil acil, aciloksi, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil aciloksi, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil alkoksi, alkoksikarbonil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil alkoksikarbonil, aminokarbonil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil aminokarbonil, acilamino, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil acilamino, ureido, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil ureido, amino, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil amino, sulfoniloksi, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil sulfoniloksi, sulfonil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil sulfonil, sulfinil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil sulfinil, sulfanil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil sulfanil, sulfonilamino, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil sulfonilamino; R<1>is selected from the grupa comprising ili consisting of H, halogen, cijano, nitro, amino, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil, in particular C1-C3 alkil, like metil ili etil ili -CF3, supstituisani ili nesupstituisani C2-C6-alkenil, supstituisani ili nesupstituisani C2-C6-alkinil, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil-aril, supstituisani ili nesupstituisani aril ili supstituisani ili nesupstituisani heteroaril, supstituisani ili nesupstituisani Cl-C6-alkil-heteroaiiI, -C(0)-OR<2>, - C(0)-R<2>, -C(0)-NR<2>R<2>', -(S02)R<2>;

R<2>i R2 su nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata ili kao sadržaj ima vodonik, nesupstituisani ili supstituisani Cl-C6-alkil, nesupstituisani ili supstituisani C2-C6 alkenil, nesupstituisani ili supstituisani C2-C6 alkinil, nesupstituisani ili supstituisani aril, nesupstituisani ili supstituisani heteroaril, nesupstituisani ili supstituisani Cl-C6-alkil aril, nesupstituisani ili supstituisani Cl-C6-alkil heteroaril. Preferecnijalno R<1>je H; dok jc n jedan broj odabran između 0,1, 2 i 3, a najbolje je da bude 1 ili 2. Benzotijazoli koji se koriste u pronalasku prikazanom u Formuli (lb) takođe obuhvataju i odgovarajuće tautomere koj imaju sledeću Formulu (lb'):

U konkretne primere jedinjenja prikazanih u Formuli (I) spadaju sledeća:

1,3 -benzotijazol-2-il[2-( {4- [(4-metilpiperazin-l -il)metil]benzil} oksi)pirimidin-4-iljacetonitril; l,3-benzotijazol-2-il-{2-[4-(4-benzil-piperazin-l-ilmetil)-benziloksi]-pirimidin-4-il}-acetonitril; (3H-Benzotijazol-2-ilidene)- {2-[4-(4-etil-piperazin-l -iImetil)-benziloksi]-pirimidin-4-il} -acetonitril; (3H-Benzotijazol-2-ilidene)-(2- {4-[4-(2-methoksi-etil)-piperazin-I -ilmetil]-benziloksi}-pirimidin-4-il)-acetonitril; 1,3 -benzotijazol-2-il[2-( {4- [(4-benzil-piperazin-l -il)metil] -benzil} oksi) pirimidin-4-il] acetonitril: l,3-benzotijazol-2-il[2-( {4-[(4-formilpiperazin-l-il)metil]benzil} oksi) pirimidin-4-iljacetonitril;

(2-{4-[4-(2-Amino-acetil)-piperazin-l-ilmetil]-benziloksi}-pirimidin-4-iI)-(3H-benzotijazol-2-ilidene)-acetonitril;

[2-( {4-[(4-acetiIpiperazin-l-il)metil]benziI} oksi)pirimidin-4-il](l ,3-benzotijazoI-2-

il)acetonitril;

4-(4-{4-[(3H-Benzotijazol-2-ilidene)-cijano-rnetil]-pirirnidin-2-iIoksimetil}-benzil)-piperazine-l-karboksilic kiselina dimetilamid;

4-(4-{4-[(3H-Benzotijazol-2-ilidene)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazine-l-karboksilic kiselina metil ester;

(3H-BenzotijazoI-2-ilidene)-{2-[4-(4-[l,2,4]oksadiazol-3-ilmetil-piperazin-l-il

metil)-benziloksi]-pirimidin-4-il}-acetonitril;

(3H-Benzotijazo!-2-ilidene)-(2-{4-[4-(2-liidroksi-etil)-piperazin-l-ilmetil]-benziloksi}-pirimidin-4-il)-acetonitril;

[4-(4-{4-[(3H-Benzotijazol-2-ilidene)-cijano-metil]-pirimidin-2-iIoksimetil}-

benzil)-piperazin-i-ilj-acetic kiselina metil ester;

2-[4-(4-{4-[(3H-Benzotijazol-2-ilidene)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-

benzil)-piperazin-l -il]-acetamid;

l,3-benzotijazol-2-iI[2-( {3 - [(4-metilpiperazin-l -il)metil]benzil} oksi)pirimidin-4-

iljacetonitril.

Benzotijazoli u skladu sa Formulom (I) su sintetizovani u skladu sa metodama opisanim u WO 01/47920, a preferencijalno u skladu sa metodama opisanim u WO 03/091249.

Benzotijazoli u skladu sa Formulom (I) mogu da se sintetizuju u skladu sa metodama opisanim na shemama 1 do VIII, dole.

Kao što je gore ilustrovano u Shemi [, početna jedinjenja formule III se reaguju sa odgovarajuće supstituisanim (aktiviranim) pirimidinima, kao što su halogeno pirimidini, npr. 2,4-dihloro-pirimidini iz formule VI da se dobiju pirimidino-benzotijazolna jedinjenja IV. Preferencijalno, takve reakcije se obavljaju u prisustvu odgovarajućih baza, npr. natrijum hidrida, kalijum hidrida i sličnih u jednoj anhidrovanoj inertnoj atmosferi, po mogućstvu u jednom polarnom rastvaraču, kao što su DMF, DMA, MeCN ili THF na temperaturi u rasponu od oko -78°C do 100° C( Chabaka et al, Pol. J. Chem. 1994, 1317- 1326).Benzotijazoli iz formule III su bilo komercijalno dostupni, kao recimo oni koje proizvodi Mavbridge Chemical Co. Ltd ili se mogu pripremiti od komercijalno dostupnih konvencionalnim procedurama.

Halogenisani pirimidini, npr. 2,4-dihIoropirimidin iz formule VI, su takođe komercijalno dostupni, kao recimo oni koje proizvodi Aldrich, Fluka, Sigma i slični ili se mogu pripremiti konvencionalnim procedurama.mav.

Za dobijanje finalnih benzotijazola iz formule (II), t.j. benzotijazola ovih formula naznačeno time daje L kao u formuli (g) dole, i naznačeno time da n i R<5>budu onakvi kako je to gore definisano, među-jedinjenja formule (IV) se preferencijalno reaguju sa alkoholima iz formule (V), onako kako je to ilustrovano na Shemi II dole.

Ova reakcija se preferencijalno obavlja u prisustvu rastvarača kao što su DMF, DMA, NMP, DMSO ili ACN, a najbolje DMA ili MeCN, u prisustvu odgovarajuće baze kao što je tBuOK, CS2C03sa ili bez Cul, NaH, ili sličnima, a najbolje NaH, na temperaturi u rasponu od oko 25°C do 120°C. U preporučenoj metodi, početna jedinjenja se zagrevaju na 25° sve do 100°C u rastvoru MeCN u prisustvu NaH.

Među-jedinjcnja formule (V) mogu se dobiti preko komercijalnih izvora, ili sintetičkim pristupom, koji je ilustrovan na Shemaama od III do VII. Na pomenutim Shemama III i IV, početna materija je metil-p-toluat (Shema III) ili njegovmetaanalog (Shema IV) za pripremu odgovarajućih benzil alkohol među-jedinjenja, u procesu koji se odvija u 4 faze, uključujući formiranje estera, brominaciju metil grupe, alkilaciju odgovarajućim aminom i redukciju estera da bi se pristupilo finalnim supstituisanim benzil alkoholima.

Naznačeno time da su R<6>i R7 nezavisno odabrani iz R<5>i R<3>' ili R<6>i R7 i mogu da oforme jedan prsten zajednički odabran, sa azotom za koji su spojeni da bi formirali supstituisani ili nesupstituisani heteroaril ili supstituisani ili nesupstituisani heterociklus.

U pomenutoj Shemi V dole, početni materijal je 2-amino-4-metil-piridin koji služi za pripremu odgovarajućih 4-hidroksimetil piridin intermedijata, u jednom procesu u 5 faza, uključujući i transformaciju 2-amino grupe u jednu 2-bromo, oksidaciju, alkilaciju odgovarajućim aminom, formiranje metil estera i redukciju estera da se pristupi finalnim supstituisanim 4-hidroksimetil piridinima.

U pomenutoj Shemi VI dole, početni materijal je 5-bromo-nikotinska kiselina metil ester koja služi za pripremu odgovarajućih 2-hidroksimetil piridin intermedijata, u jednom procesu u dve faze, uključujući alkilaciju odgovarajućim aminom, kao i formiranje metil estera i redukciju tog estera za pristup finalnim supstituisanim 2-hidroksimetil piridinima.

U pomenutoj Shemi VII dole, početni materijal je l-(2-hidroksietil)-piperazin koji služi za pripremu odgovarajućeg alkoholnog intermedijata reduktivnom alkilacijom.

U pomenutoj Shemi VIII dole, početni materijal je 4-(hidroksimetil)benzoični metil ester koji služi za pripremu odgovarajućeg benzil alkoholnog intermedijata, kupliranjem amina u prisustvu trimetil aluminijuma.

Ekscipijensi

U skladu sa jednim oblikom ovog pronalaska, poloksameri (Pluronics) su surfaktanti koji se preferencijalno koriste u formulacijama makrogol glicerida ovog pronalaska. Primeri poloksamera su sledeći Pluronic® F77 (Poloksamer 217), Pluronic® F87 (Poloksamer 237), Pluronic® F88 (Poloksamer 238) and Pluronic® F68 (Poloksamer 188), a posebno i preferencijalno Pluronic® F68.

U skladu sa jednim oblikom ovog pronalaska, polietilen glikol je jedan ekscipijens koji preferencijalno koristi u formulacijama makrogol glicerida ovog pronalaska, a preferencijalno polimer polietilen oksida kao što su PEG-2000, PEG-4000, PEG-6000, PEG-10 000, PEG-20 000, i po mogućstvu PEG-6000.

Makrogol glicerid formulacije ovog pronalaska

U skladu sa jednim oblikom, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav koji obuhvata benzotijazol kako je prikazan u Formuli (I):

isto kao i njegove tautomere, njegove geometrijske izomere, njegove optički aktivne forme, kao što su enantiomeri, diastereomeri i njegove racematne forme, kao i njihove farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da G, L i R<1>budu kako je gore definisano; ijedan makrogol glicerid.

U narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time daje makrogol glicerid bude jedan stearoil glicerid.

U još jednom narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da taj makrogol glicerid bude Gelucire® 50/13.

U još jednom narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da ovaj sastav obuhvata Gelucire® 50/13 u količini od 40 do 95% w/w (težinski) u odnosu na ukupni sastav, po mogućstvu 40 to 80 % w/w u odnosu na ukupni sastav, uključujući 40, 50, 60, 70 i 80% w/w.

U još jednom narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da taj sastav uključuje Gelucire® 50/13 u količini od 40 to 60% w/vv u odnosu na ukupni sastav.

U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom koji sadrži količinu benzotijazola od 5% w/w do 40% w/w u odnosu na ukupni sastav, po mogućstvu 20% to 40% w/w u odnosu na ukupni sastav, uključujući 20, 30 i 40% w/w.

U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da taj benzotijazol bude 1,3 benzotijazoI-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril.

U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da taj benzotijazol bude 1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so.

U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da taj benzotijazol bude u ne-kristalnoj formi, t.j. da kristalnost benzotijazola bude manja od 50%, po mogućstvu manja od 40 do 10 %, a još bolje ako može da bude manja ili jednaka 5%.

U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da ovaj sastav dodatno uključuje ijedan poloksamer.

U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da ovaj sastav dodatno uključuje i jedan poloksamer i naznačeno time da je taj poloksamer bude Poloksamer 188.

U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da ovaj sastav dodatno uključuje i jedan Polietilen Glikol (PEG).

U narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time daje da ovaj sastav dodatno uključuje i jedan Polietilen Glikol (PEG) i naznačeno time da je taj Polietilen Glikol bude PEG-6 000.

U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav u skladu sa kojim obuhvata najmanje 20% w/w(težinski) 1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatnu so i Gelucire® 50/13 u količini od 40 do 80% w/w u odnosu na ukupni sastav. U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje jedan farmaceutski sastav izabran iz sledećih grupa: 1,3 benzotijazoI-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so 20% w/w

Gelucire® 50/13 80% w/w;

1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-raorpholin-4-ilmetil-bcnziloksi)-piriraidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so 30% w/w

Gelucire® 50/13 70% w/w;

1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidiii-4-il]-acetonitril, mesilatna so 40% w/w

Gelucire® 50/13 60% w/w;

1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so 20% w/w

Gelucire® 50/13 40% w/w

Lutrol® F68 40% w/w;

l,3benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so 20% w/w

Gelucire® 50/13 40% w/w

Lutrol® E6000 40% w/w;

i

13 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so 5% w/w

Gelucire® 50/13 95% w/w.

Formulacije ovog pronalaska povećavaju kako brzinu rastvara, tako i biološku raspoloživost benzotijazola ovog pronalaska.

U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje metodu za pripremu ovog sastava u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da pomenuta metoda uključuje sledeće korake:

-obezbeđivanje benzotijazola u skladu sa Formulom (I)

-dodavanje izračunate količine benzotijazola u skladu sa Formulom (I) u istopljeni preparat

makrogol glicerida.

Tipično je da se preparat makrogol glicerida zagreva na odgovarajućoj temperature dok se istovremeno meša, da bi se dobio istopljeni preparat makrogol glicerida za upotrebu u ovoj metodi u skladu sa ovim pronalaskom. Na primer, makrogol glicerid preparati Gelucire® 50/13 mogu da se tope zagrevanjem do oko 60-80°C odnosno recimo do oko 60-70°C, tokom perioda od oko 30 min do 1 sat, a posebno oko 30 do 40 minuta istovremeno mešajući.

U narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje metodu za pripremu jednog sastava naznačeno time daje benzotijazol inkorporiran u praškasti oblik u istopljeni preparat makrogol glicerida istovremeno mešajući.

U narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje metodu za pripremu jednog sastava naznačeno time daje benzotijazol inkorporiran u praškasti oblik u istopljeni preparat makrogol glicerida istovremeno mešajući i naznačeno time da ta metoda dodatno obuhvata i sledeće korake:

-hlađenje homogene istopljene disperzije

-mlevenje dobijene čvrste supstance u čestice.

Tipično se ovaj korak hlađenja obavlja da bi se postiglo brzo hlađenje preparata, na primer u ledenom kupatilu, ili sipanjem istopljenog preparata u tečni azot. Tipično se hlađenje u ledenom kupatilu može obaviti za period od oko 1 čas do 3 časa.

Fazom mlevenja dobijaju se grube ili fine čestice (prah) zavisno od toga koja oprema za mlevenje se koristi. Tipično je da se u kontekstu ovog pronalaska koristi oprema za mlevenje kao što je čekić i/ili mlin sa oštricama, kao što je na primer FitzMill®.

U još jednom narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje metodu za pripremu sastava naznačeno time da je taj benzotijazol inkorporiran u praškastu formu u istopljeni preparat makrogol glicerida dok se istovremeno meša, naznačeno time da ovaj metod dalje obuhvata fazu hlađenja homogene istopljene disperzije hlađenjem sprejom ili želiranjem spreja.

Tipično, Gelucire formulacija sa benzotijazol punjenjem se meša ili homogenizuje pre nego što se prenese u reaktor. Ovaj ekscipijens/suspenzija tipično se čuva u reaktoru mešajući na temperaturi između 50°C i 80°C. Gelucire formulacija sa benzotijazol punjenjem prenosi se iz reaktora u komoru za hlađenje tako što se posuda stavlja pod pritisak (npr. na 100 mbar ili više) kroz dovodne cevi koje se održavaju na temperaturi dovoljnoj da se izbegava hlađenje suspenzije u samim cevima.

Gelucire formulacija sa benzotijazol punjenjem se uvodi u komoru za hlađenje kroz mlaznicu pod azotnim fluksom (atomizirajući azot) na dovoljno visokoj temperaturi, na primer između 50-80°C.

Hladni azotni gas (azot za želiranje) uliva se u komoru za hlađenje, tipično na temperaturi između -50°C i +20°C, ali po mogućstvu na temperaturi između -30°C i +10°C.

Temperatura mlaznice se po mogućstvu održava na preko 50°C da bi se izbeglo ikakvo začepljenje. Udaljenost između reaktora i mlaznice se smanjuje na najmanju meni, da bi se izbegao pad pritiska u dovodnoj liniji.

Veličina mlaznice se podešava zavisno od viskoznosti suspenzije, npr. veće mlaznice (otvor 1.4 mm/ poklopac 2.2 mm) po mogućstvu se koriste za suspenzije veće viskoznosti.

Čestice i pelete dobijene na ovaj način prikupljaju se i potom objedinjuju u kolektorskoj komori.

Metoda hlađenja sprejom ima tu prednost da se postiže dobar prinos (tipično oko 55% ili više), da se dobiju čestice pravilnog oblika i veličina koje imaju poboljšani profil rastvorljivosti u odnosu na ćelu masu.

U još jednom narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje metodu za pripremu sastava naznačeno time da taj benzotijazol bude inkorporiran u obliku vodenog rastvora (t.j. rastvoren ) u istopljeni preparat makrogol glicerida koji se meša. Tipično, benzotijazol se rastvara u vodi, a potom dodaje u istopljeni preparat makrogol glicerida koji se meša da se dobije emulzija (Ulje/voda ili voda/ulje). Posebno se naglašava da ovaj korak uklučuje i fazu atomizacije, naznačeno time se formirana emulzija u obliku spreja izbacuje kroz nebulizer (rasprašivač) ili kapilarnu mlaznicu u prisustvu tečnog C02. Primer metode atomizacije koji može da se koristi u koraku atomizacije koji je gore opisan, prikazanje i u WO 2005/049192.

U još jednom narednom obliku, metoda za pripremu sastava u skladu sa ovim pronalaskom naznačeno time da taj benzotijazol bude inkorporiran u obliku vodenog rastvora, opciono dodatno obuhvata i korak sušenja zamrzavanjem po fazi atomizacije

Tipično, metode mešanja koje mogu da se koriste u kontektstu ovog pronalaska su metode mešanja elektročnom vrtložnom centrufugom (Vortex).

U narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu gliceridne formulacije benzotijazol makrogola u skladu sa ovim pronalaskom za pripremu jednog farmaceutskog sastava za terapiju poremećaja koji su odabrani iz autoimunih oboljenja, kao što su multipla skleroza i reumatoidni arthritis, respiratorni poremećaji kao što su astma, neurodegenerativni poremećaji ili poremećaji nervnog sistema, kao što je Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, epilepsija and epileptični napadi, Hantingtonova bolest, CNS poremećaji, traumatske povrede mozga kao i ishemični poremećaji i hemoragijski moždani udari, inflamatorni poremećaji, skleroderma i poremećaji slični sklerodermi, kancer, endometrioza, fibroza, kao što su flućna fibroza i dijabetes.

U narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje metodu za terapiju poremećaja koji su odabrani iz autoimunih oboljenja, kao što su multipla skleroza i reumatoidni arthritis, respiratorni poremećaji kao što su astma, neurodegenerativni poremećaji ili poremećaji nervnog sistema, inflamatorni poremećaji, kancer, endometrioza, fibroza, kao što su flućna fibroza i dijabeteskoji uključuju davanje gliceridne formulacije benzotijazol makrogola u skladu sa ovim pronalaskom pacijentu kome je to potrebno.

Formulacije koje su ovde opisane mogu da budu korisne za terapiju bolesti, posebno bolesti odabranih iz grupe autoimunih poremećaja, kao što su multipla skleroza i reumatoidni artritis, respiratorni poremećaji kao što je astma, neurodegenerativni poremećaji ili poremećaji nervnog sistema, kao što je Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, epilepsija and epileptični napadi, Hantingtonova bolest, CNS poremećaji, traumatske povrede mozga kao i ishemični poremećaji i hemoragijski moždani udari, inflamatorni poremećaji, skleroderma i poremećaji slični sklerodermi, kancer, endometrioza, fibroza, kao što su flućna fibroza i dijabetes.

U još jednom narednom obliku, ovaj pronalazak obezbeđuje Gelucire formulacije benzotijazola u skladu sa ovim pronalaskom sa poboljšanom rastvorljivošću i/ili biološkom raspoloživošću u odnosu na ćelu masu.

Benzotijazol u formulacijama kako je ovde opisan, može da se daje pacijentima u skladu sa predstavljenim pronalaskom korišćenjem različitih metoda za davanje terapije, uključujući oralni način davanja, trans-mukozni, ili drugih načina koji su poznati stručnjacima za ovu oblast i koji se u okj onblasti i koriste.

Doza koja se daje pojedincu variraće zavisno od različitih faktora, uključujući farmakokinetiča svojstva, način davanja, stanje samog boelsnika, i njegove karakteristike (pol, godine starosti, telesna težina, opšte zdravstveno stanje i veličina), jačinu i obim simptoma, terapije koje se primenjuju paralelno, učestalost terapije i željeno dejstvo.

Standardno doziranje benzotijazola u formulacijama makrogol glicerida u skladu sa ovim pronalaskom iznosi 1 do 3 000 mg, preferencijalno 10 do 1 000 mg.

Formulacije benzotijazola u skladu sa ovim pronalaskom mogu da se daju oralnim putem, u obliku praha i opciono kao ex tempore suspenzija praha u vodenoj sredini.

Formulacije ovog pronalaska mogu da budu pripremljene u čvrstim jedinicama doziranja (disperzibilni prah ili pelete u kapsulama, kesicama, tabletama), ili u vidu praha ili granula koje se mogu rastvarati u vodi (neposredno pred uzimanje doze), kao vodeni rastvor.

Svi ekscipijensi koji se uobičajeno koriste u čvrstim formulacijama, na primer agensi za dispergovanje, surfaktanti, punioci, lubrikanti, vezivne materije, i koji su poznati ljudima koji su stručni za ovu oblast, mogu da se koriste i u ovom pronalasku. Svi ekscipijensi koji se uobičajeno koriste u formulacijama vodenih suspenzija, na primer agensi za dispergovanje, surfaktanti, viskozirajući agensi, agensi za vlaženje, agensi za suspendovanje, itd., i koji su poznati ljudima koji su stručni za ovu oblast, mogu da se koriste i u ovom pronalasku.

U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje sleđeća nova jedinjenja: l,3-benzotijazol-2-il[2-(2-piridin-3-ilethoksi)pirimidin-4-il]acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il[2-(kvinolin-6-iloksi)pirimidin-4-il]acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il{2-[(5-morfolin-4-ilpiridin-3-iI)methoksi]pirimidin-4-il}

acetonitril;

l,343enzotijazol-2-il[2-({3-[(4-metilpiperazin-l-il)metil]benzil}oksi)pirimidin-4-

iljacetonitril;

l,34oenzotijazol-2-il(2-{[4-(3,4-dihidroisokvinolin-2(IH)-ilmetil)benziI]oksi}

pirimidin-4-il) acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il[2-(heksiloksi)pirimidin-4-iI] acetonitril;

1,3 -benzotijazoI-2-il(2- {[3 - (morfolin-4-ilrnetil)benzil] oksi} pirimidin-4-il)

acetonitril;

l,343enzotijazol-2-il(2- {[3-(lH-imidazol-l -ilmetil)benzil]oksi}pirimidin-4-il)

acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il(2-{[3-(piperidin-l-yhnetil)benzil]oksi}pirimidin-4-il)

acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il[2-({4-[(2,6-dimetilmorfolin-4-il)metil]benzil}oksi)

pirimidin-4-illacetonitril;

(2Z)-l,3-benzotijazol-2(3H)-ilidene{2-[(4-{[bis(2-methoksietil)amino]metil}

benzil)oksi]pirimidin-4-il} acetonitril;

(2Z)-l,3-benzotijazol-2(3H)-ilidene[2-({4-[(4-tert-butoksipiperidin-l-il)metil]

benzil) oksi)pirimidin-4-il]acetonitril;

l,3-benzotijazoI-2-il[2-({4-[(benzilamino)metil]benzil}oksi)pirimidin-4-il]

acetonitril;

1,3 -benzotijazol-2-il {2-[(2-morfoIin-4-ilpiridin-4-il)rnethoksi]pirimidin-4-il}

acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il {2-[(2-piperidin-l -ilpiridin-4-il)methoksi]pirimidin-4-

il} acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il[2-(2-morfolin-4-ilethoksi)pirimidin-4-il]acetonitril;

l,3-benzotijazol-2(3H)-ilidene{2-[(l,4-dimetiIpiperazin-2-iI)methoksi]pirimidin-4-

il} acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il{2-f2-(dimetilamino)ethoksi]pirimidin-4-il} acetonitril;

l,3-benzotijazol-2(3H)-ilidene[2-({4-f(4-metilpiperazin-l-il)karbonil]benzil}oksi)

pirimidin-4-iI]acetonitril;

1,3 -benzotijazo 1-2-il {2- [3 - (dimetilamino)propoksi]pirimidin-4-il} acetonitril;

l,3-benzotijazol-2-il(2-{2-[2-(dimetilamino)ethoksi]ethoksi}pirimidin-4-il)

acetonitril;

l,3-benzotijazoi-2-il{2-[2-(4-metilpiperazin-l-il)ethoksi]pirimidin-4-il}

acetonitril.

Još jedan aspekt ovog pronalaska, uključuje ova jedinjenja kao sredstva koja se koriste za lečenje.

Još jedan aspekt ovog pronalaska, uključuje upotrebu ovde opisanih jedinjenja za pripremu farmaceutskih formulacija za terapiju autoimunih poremećaja, kao što je multipla skleroza i inflamatornih poremećaja uključujući reumatoidni arthritis, dijabetes, fibroza, kao što je flućna fibroza, respiratorni poremećaji kao što je astma, kancer, neurodegenerativni poremećaji ili poremećaji nervnog sistema, kao što je Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, epilepsija and epileptični napadi, Hantingtonova bolest, CNS poremećaji, traumatske povrede mozga kao i ishemični poremećaji i hemoragijski moždani udari, poremećaji slični sklerodermi, endometrioza, kancer, endometrioza, firboza, kao što je plućna fibroza, i dijabetes.

Jedinjenje ovog pronalaska je korisno za terapiju auto-imunih poremećaja, uključujući multiplu sklerozu, inflamatorne poremećaje, uključujući reumatoidni arthritis, dijabetes, fibrozu kao što je plućna fibroza, pormećaji nervnog sistema nkao što su Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, epilepsija and epileptični napadi, Hantingtonova bolest, CNS poremećaji, traumatske povrede mozga kao i ishemični poremećaji i hemoragijski moždani udari, poremećaji slični sklerodermi, endometrioza, kancer, endometrioza, firboza, U jednom drugom obliku, jedinjenja i/ili formulacije ovog pronalaska mogu da se koriste kao terapija za autoimune bolesti, a posebno demijelinizirajuće bolesti kao što je multipla skleroza, i to se mogu koristiti sami ili u kombinaciji sa drugim agensima koji su korisni za terapiju autoimunih bolesti, naznačeno time daje takav agens na primer odabran iz sledećih jedinjenja: (a) Interferon!, npr. pegilirani ili ne-pegilirani interferoni, npr. Oni koji se daju supkutano, intramuskularno ili oralnim putem, po mogućstvu interferon beta; (b) Glatiramer, npr. u acetatnoj formi; (c) Imunosupresivi koji opciono mogu da imaju i antiproliferativno/antineoplastično dejstvo npr. mitoksantron, metotreksat, azatioprin, ciklofosfamid, ili steroidi, npr. metilprednizolon, prednizon ili deksaametazon, ili steroid-sekretujući agensi, npr. ACTH; (d) Adenosine deaminase inhibitors, npr. kladribin;

(e) Inhibitori ekspresije VCAM-1 ili antagonisti njegovog liganda, npr. antagonisti

a4/(51 integrin VLA-4 i/ili alfa-4-beta-7 integrini, npr. natalizumab

(ANTEGREN).

Dodatni agensi koji se mogu davati istovremeno kao anti-inflamatorni agensi (posebno za demijelinizirajuće bolesti kao što je multipla skleroza) opisani su dole:

Još jedan anti-inflamatorni agens jeste Teriflunomid koji je opisan u WO 02/080897.

Još jedan anti-inflamatorni agens je Fingolimod koji je opisan u EP 727406, WO 2004/028251 i WO 2004/028251.

Još jedan anti-inflamatorni agens je Laquinimod koji je opisan u WO 99/55678.

Još jedan anti-inflamatorni agens je Tensirolimus koji je opisan u WO 02/28866. Još jedan anti-inflamatorni agens je Xaliprodene koji je opisan u WO 98/48802

Još jedan anti-inflamatorni agens je Deskar Pirfenidone koji je opisan u WO 03/068230.

Još jedan anti-inflamatorni agens je dole prikazani benzotijazol'derivative koji je opisan u WO 01/47920.

Još jedan anti-inflamatorni agens je dole prikazani derivat hidroksamične kiseline koji je opisan u WO 03/070711.

Još jedan anti-inflamatorni agens je MLN3897 koji je opisan u WO 2004/043965.

Još jedan anti-inflamatorni agens je CDP323 koji je opisan u WO 99/67230.

Još jedan anti-inflamatorni agensje Simvastatin koji je opisan u WO 01/45698.

Još jedan anti-inflamatorni agensje Fampridine koji je opisan u US

Ovaj pronalazak će sada biti opisan uz pomoć dole navedenih Primera. Primeri će se odnositi na slike koje su takođe navedene dole.

Kratki opis crteža:

Slika 1 pokazuje profil solubilizacije (izražen kao koncentracija (pg/mL) u odnosu na proteklo vreme (min) u prezasićenim uslovima, Simulirana intestinalna tečnost u sitom stanju (FeSSIF), pH=5 kao sredstvo za rastvaranje) jedinjenja A različitim formulacijama čvrstog praha (čestice) u poređenju sa rasutim prahom. Beli rombovi: Jedinjenje A, čvrsta masa; Crni kvadrati: Jedinjenje A, formulacija makrogol glicerida u čvrstom prahu (1); Beli trouglovi: Jedinjenje A, čvrsta formulacija makrogol glicerida (2); Crni rombovi: Jedinjenje A, čvrsta formulacija makrogol glicerida (3); Crni trouglovi: Jedinjenje A, čvrsta formulacija makrogol glicerida (4).

Slika 2 pokazuje profil solubilizacije (izraženo kao koncentracija (pg/mL) u funkciji vremena (min) u prezasićenim uslovima. Simulirana intestinalna tečnost u sitom stanju (FeSSIF), pH=5 kao sredstvo za rastvaranje) jedinjenja A različitim formulacijama čvrstog praha (čestice) u poređenju sa rasutim prahom. Beli rombovi: Jedinjenje A, čvrsta masa; Crni kvadrati: Jedinjenje A, čvrsta formulacija makrogol glicerida (1); Crni krugovi: Jedinjenje A, čvrsta formulacija makrogol glicerida (5).

Slika 3 prikazuje profil disolucije jedinjenja A različitih formulacija čvrstog praha, u poređenju sa čvrstom masom, dobijenom USP metodom disolucije II (Lopatica), u FeSSIF, pH 5, u. Beli rombovi: Jedinjenje A, u čvrstoj masi; Crni rombovi: Jedinjenje A, čvrsta formulacija makrogol glicerida (1); Beli trouglovi: Jedinjenje A, čvrsta formulacija makrogol glicerida (2); Beli krugovi: Jedinjenje A, čvrsta formulacija makrogol glicerida (3).

Slika 4 prikazuje koncentracije (ng/mL) jedinjenja A u plazmi po oralnom davanju doze od 10.6 mg/kg psima, kao formulacije ovog pronalaska u poređenju sa čvrstom masom po ex tempore suspenziji u PBS. Krstići: Jedinjenje A, suspenzija u masi; Crni rombovi: Jedinjenje A, formulacija makrogol glicerida u suspenziji (1); Beli kvadrati: Jedinjenje A formulacija makrogol glicerida u suspenziji (2).

Slika 5 prikazuje jedinicu za hlađenje u spreju naznačeno time da (R2) prikazuje termostatski temperirano vodeno kupatilo SD81 u komori za hlađenje, (A) prikazuje cevi za dovod suspenzije, (B) izvor tečnog azota, (C) azot u obliku gasa, (D) atomizirajući azot, (F) komora za primarno prikupljanje proizvoda (H), komora za sekundarno prikupljanje proizvboda (G) ciklon.

Slika 6 prikazuje profil solubilizacije (izražen kao procenat raslvatanja u funkciji vremena (min) i u prezasićenim uslovima, Simulirana intestinalna tečnost u sitom stanju (FeSSIF), bez lecitina kao sredstva za rastvaranje) jedinjenja A u čvrstoj formulaciji makrogol glicerida (2) pripremljeno hlađenjem u spreju (Crni trouglovi).

Slika 7 prikazuje stereomikroskopske slike formulacija (2) i (6) pripremljene hlađenjem u spreju.

PRIMERI

Sledeće skraćenice odnose se na definicije koje su date uz njih: Cm (centimetar), h (čas), kg (kilogram), mg (miligram), pg (mikrogram), pm (mikrometar), min (minut), mm (milimetar), mmol (milimol), mM (milimolar), mL (mililita), pL, (mikrolitar), ACN (acetonitril), AUC (površina ispod krive), Da (Dalton), DMF (dimetilformamid), DMSO (Dimetil Sulfoksid), DSC (Diferencijalna Scanning kalorimetrija), FeSSIF (Simulirana intestinalna tečnost u sitom stanju), HLB (Hidrofilni Lipofilni Balans), HPLC (Visoko precizna tečna hromatografija), MS (masena spektrometrija), MW (molekulska težina), NMP (N-Metil-2-Pirolidon), PBS (Fosfatno puferovani slani rastvor), RP-HPLC (Visoko precizna tečna hromatografija Reverzne faze), rpm (obrtaja u minuti), THF (tetrahidrofuran), Y (prinos).

Makrogol gliceridi (Gelucires®) komercijalno se mogu nabaviti, recimo od Gattefosse.

Primer 1: Formulacija benzotijazol makrogol glicerida ( 1)

l.Opšta procedura za pripremu

Odgovarajuća količina Gelucire® u obliku praha topi se u termostatski temperiranom vodenom kupatilu. Odgovarajuća količin benzotijazola u obliku praha (20% w/w izračunato u odnosu na ukupni sastav) disperguje se u istopljeni ekscipijens. Ova masa se neprekidno meša tokom 30 min, dok se ne dobije homogena disperzija. Gelucire® u koji je dodat lek potom se hladi u ledenom kupatilu, a čvrsta masa se mehanički redukuje (melje) u grubi prah. Čestice dobijene na taj način mikronizuju se čekićem i/ili mlinom sa oštricama, kao stoje na primer FitzMill®.

2. Benzotijazol

1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirirnidin-4-il]-acetonitril, (Jedinjenje A) sintetizovan je kao što je opisano u Primeru 1 WO 03/047570. Jedinjenje A se koristi kao oblik soli mesilata i ima molekulsku težinu od 649.75 Da, gde odnos so/baza iznosi 1.42 (the molekulska težina jedinjenja A kao slobodne baze iznosi 457.55 Da).

3. Ekscipijensi:

Gelucire® 50/13 (Stearoil makrogol-32 gliceridi) sintetizovan je pomoću jedne reakcije alkoholiza/esterifikacija korišćenjem hidrogenizovanog palminog ulja i PEG-1 500 kao početne materijale. Gelucire® 50/13 se komercijalno može nabaviti od Gattefosse. Predominanta masna kiselina je palmitostearinska kiselina (C16-C18). Gelucire® 50/13 odgovara zahtevima Evropske farmakopeje, 4. izdanje, kada se radi o "Stearoil makrogolgliceridima". Tipična svojstva Gelucire® 50/ 13 navedena su dole: Raspon topljenja (tačka pojave kapi): 46.0 to 51.0°C vrednost HLB: 13.

4. Sastav Makrogol glicerida (1)

Sastav stearoil Makrogol glicerida (1) je sledeći:

Jedinjenje A (so mesilata) 20% w/w

Geludre® 50/13 80% w/w

Ovaj sastav (1) je proizveden u skladu sa opštom procedurom koja je data u Primeru 1, §1 i naznačeno time daje upotrebljeno 4 g praha jedinjenja A i 16 g praha Gelucire® 50/13 a topljenje matrice Gelucire® obavljeno je u vodenom kupatilu sa termostatom na 60°C.

5. Fiziko-hemijske karakteristike

5.1. Sadržaj leka

Sadržaj leka u ovom sastavu (1) meren je pomoću RP-HPLC analize kao što je opisano dole, i iznosio je 20.1 l%,cv: 3.49%.

Stabilnost ove formulacije procenjivana je pomoću određivanja sadržaja leka kada se skladišti na 4°C ili na 25°C tokom perioda od tri smeseca. Sastav (1) se pokazao stabilnim, kao što je pokazano utvrđenim sadržajem leka posle 3 meseca: 19.39%, cv: 0.35% (čuvanje na 4°) i 19.51%), cv: 0.91% (čuvanje na 25°C).

RP - HPLC analiza

Lipidne matrice napunjene lekom potpuno su rastvorene u metanolu, u ultrazvučnom kupatilu, tokom

2 min na sobnoj temperaturi. Zatim su ovi uzorci centrifugirani na 10.000 tokom 5 min na 10°C.

Bistri rastvori dobijeni na ovaj način analizirani su pomoću RP-HPLC.

Primenjena RP-HPLC analiza je obavljana na izokratskoj koloni HPLC : XterraMSC8,

5 uji, 250 x 4.6 mm (Waters) termostatski podešeno na 30°C; Mobilna faza: H20 KH2P0420

mM - ACN 70% (%v/v)-30% (%v/v), podešeno na pH 4 sa H3P0410 % na 1.2 ml/min.

Jedinjenje A eluira se na oko 7 min.

5.2. Termička analiza

Analiza DSC kao stoje opisano dole rađena je da bi se proverila homogenost mešavine i stabilnost leka kada se uključi u samu matricu. Termičko ponašanje "slepih proba" (sama matrica Gelucire® ili samo Jedinjenje A) upoređeni su sa Gelucire® matricom napunjenom benzotijazolom (Sastav (1)) Analiza DSC ukazuje na to da je ova mešavina veoma homogena i da ne dolazi ni do kakvih promena kada Jedinjenje A dostigne tačku topljenja. Ona pokazuje da je Jedinjenje A dispergovano u makrogol matrici uglavnom u kristalnom obliku (oko 85% kristalnosti se održava, kako je izračunato merenjem odnosa vrednosti entalpije maksimalnog topljenja čistog jedinjenja A u poređenju sa jedinjenjem A kada je dispergovano u formulaciji matrice).

Analiza DSC

Analize DSC obavljane su i u modusu grejanja i hlađenja, korišćenjem Pyris 1 Diferencijalnog skaning kalorimetra (Perkin Elmer), pod sledećim operativnim uslovima:

Masa uzorka: 1-5 mg

Raspon: 0°C-250 °C

Brzina skeniranja: 5 °C/min

Kapacitet posude: 50uX (posuda sa otvorima)

Protok gasa za pročišćavanje (N2): 20 cc/min.

Primer 2; Formulacija benzotijazol makrogol giicerida ( 2)

1. Opšta procedura pripreme

Sastav (2) pripremljen je kao što je opisano u Primeru 1, §1, naznačeno time daje odgovarajuća količina 40% w/w benzotijazola izračunata na ukupni sastav dispergovana u istopljeni ekscipijens.

2. Benzotijazol

Upotrebljeno je Jedinjenje A opisano u Primeru 1, § 1.

3. Ekscipijensi:

3.1. Gelucire® 50/13 (Stearoil makrogoI-32 gliceridi)

Upotrebljen je Gelucire® 50/13 koji je opisan u Primeru 1, §1.

4. Sastav Makrogol glicerida (2)

Stearoil makrogol glicerid sastav (2) ima sledeći sastav:

Jedinjenje A (so mesilata) 40% w/w

Gelucire® 50/13 60% w/w

Sastav (2)je proizvedenu skladu sa opštom procedurom opisnom u Primeru 2, §1 i naznačeno time daje upotrebljeno 2 g praha jedinjenja A i 3 g praha Gelucire® 50/13 pa je topljenje matrice Gelucire® obavljeno u vodenom kupatilu sa termostatom na 60°C.

5. Fiziko-hemijske karakteristike

5.1. Sadržaj leka

Sadržaj leka meren je uz pomoć RP-HPLC kao što je opisano gore. Izmereni sadržaj leka sastava (2) iznosio je 39,90%, cv: 1.26%.

Stabilnost ove formulacije pocenjivana je preko sadržaja leka kada se ovaj čuva na 4°C ili na 25°C tokom dva meseca. Ovaj sastav (2) se pokazao stabilnim, kao što je potvrđeno sadržajem leka posle 2 meseca: 39.76%, cv: 2.56% (čuvanje na 4°C) i 38.56%, cv: 1.09% (čuvanje na 25°C).

5.2. Termička analiza

Kao što je opisano obavljena je DSC analiza i nisu utvrđene signifikantne promene u termičkom ponašanju ove formulacije tokom perioda od najmanje 7 meseci.

Primer 3: Benzotijazol makrogol glicerid formulacija ( 3)

1. Opšta procedura pripreme

Sastav (3)je pripremljen kao što je opisano u Primeru 1, §1, naznačeno time daje mešavina 50:50 w/w mešavine Gelucire® i Poloksamer istopljena u vodenom kupatilu sa termostatom, a odgovarajuća količina benzotijazola (20% w/w izračunato na ukupni sastav) dispergovana je u istopljeni ekscipijens.

2. Benzotijazol

Upotrebljeno je Jedinjenje A opisano u Primeru 1, §1.

3. Ekscipijenti:

3.1. Gelucire® 50/13 (Stearoil makrogol-32 gliceridi)

Upotrebljen je Gelucire® 50/13 opisan u Primeru 1, §1.

3.2. Lutrol® F68 ( Poloksamer 188, Pluronic, Synperonic)

Lutrol® F68 (polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimer), koji se komercijalno može nabaviti od BASF, predstavlja jedan Blok Kopolimer poli-etilen-oksida polipropilen-oksida. Uključen je u Vodič za neaktivne sastojke, koji izdaje FDA (i.v. injekcije, inhalacije, oftalmološki preparati, prahovi, suspenzije i sirupi za oralnu upotrebu, kao i preparati za lokalnu/topičku upotrebu). Uključenje i u ne-parenteralne lekove koji su odobreni za upotrebu u Velikoj Britaniji, Evropsku farmakopeju, 4. izdanje str. 1777; USP 24 NF19 str. 2492-2493. Kod Pluronic® F68, procenat polioksietilena (hidrofilnog) iznosi 80%, a molekulska težina hidrofoba (polioksipropilen) iznosi približno 1,967 Da.

Dole su navedena tipična svojstva Pluronic® F68:

Prosečna molekulska težina: 8400;

Tačka topljenja/sipanja: 52°C;

Agregatno (fizičko) stanje na 20°C: čvrsto;

Viskoznost (Brookfield) cps: 1000 [tečnosti na 25°C, paste na 60°C i čvrsto stanje na 77°C];

Površinski napon, dina'cm @ 25°C;

0.1% Koncentracija: 50.3

0.01 % Koncentracija: 51.2

0.001% Koncentracija: 53.6

Napon na interfejsu, dynes/cm @ 25°C vs Nujol;

0.1% Koncentracija: 19.8

0.01% Koncentracija: 24.0

0.01% Koncentracija: 26.0

Vlaženje po Dracves-u, sekundi 25°C

1.0% Koncentracija: > 360

0.1% Koncentracija: > 360

Visina pene

Ross Miles, 0.1%, mm @ 50°C: 35

Ross Miles, 0.1%, mm @ 26°C: 40

Dvnamic, 0.1%, mm @ 400 mL/min: > 600

Tačka zamućenja u vodenom rastvoru, °C

1 % Koncentracija: > 100

10%Koncentracija:>l 00

HLB (hidrofilno-Iipofilni balans): 29.

4. Sastav Makrogol glicerida (3)

Stearoil makrogol glicerid sastav (3) ima sledeći sastav:

Jedinjenje A (mcsilatc so) 20% w/w

Gelucire® 50/13 40% w/w

Lutrol® F68 40% w/w

Sastav (3) je proizveden u skladu sa opštom procedurom koja je opisana uz Primer 2, §1 i naznačeno time daje upotrebljeno 1.2 g praha jedinjenja A, 2.4 g praha Gelucire® 50/13 i 2.4 g Lutrol® F68 a daje topljenje matrice Gelucire® obavljeno u vodenom kupatilu sa termostatom na 60°C.

5. Fiziko-hemijske karakteristike

5.1. Sadržaj leka

Sadržaj leka meren je uz pomoć RP-HPLC kao što je opisano gore. Sadržaj leka sastava (3) iznosio je 18.99%,cv: 2.16%.

5.2. Termička analiza

DSC analiza kao što je opisano gore obavljana je pod istim uslovima kao što su opisani uz

Primer 1.

Primer 4: Formulacija benzotijazol makrogol glicerid ( 4)

1. OpŠta procedura pripreme

Sastav (4) je pripremljen kao što je opisano u Primeru 1, §1, naznačeno time daje mešavina 50:50 w/w mešavina Gelucire® i polietilena (PEG) istoplejna u vodenom kupatilu sa termostatom, a odgovarajuća količina benzotijazola (20% w/w izračunato na ukupni sastav) dispergovana je u istopljeni ekscipijens.

2. Benzotijazol

Upotrebljeno je Jedinjenje A opisano u Primeru 1, § 1.

3. Ekscipijensi:

3.1. Gelucire® 50/13 (Stearoil makrogol-32 gliceridi)

Upotrebljenje Gelucire® 50/13 opisan u Primeru 1, §1.

3.2. Lutrol® R6000 ( Polietilen Glikol)

Lutrol® E6000, koji se komercijalno može dobiti od BASF, je jedan polimer etilen oksida visoke molekulske težine i mešavina polimersa različitih stepena polimerizacije.

Tipična svojstvaLutrol® E6000 navedena su dole:

Molekulska težina: 5400-6600

Hidroksilna vrednost: 16-22

Tačka očvršćavanja: 55-61 °C

Viskoznost (50% vodeni rastvor; 20°C): 200-270 mPa.s

PH (5% voda): 4.5-7.5

Sadržaj vode, po K. Fisher: <0.2%.

4. Sastav Makrogol glicerida (4)

Sastav stearoil makrogol glicerid (4) ima sledeći sastav:

Jedinjenje A (so mesilata) 20% w/w

Gelucire® 50/13 40% w/w

Lutrol® E6000 40% w/w

Sastav (4) je proizveden u skladu sa opštom procedurom opisanom u Primeru2, § 1 i naznačeno time da je upotrebljeno 1.2 g praha Jedinjenja A, 2.4 g praha Gelucire® 50/13 i 2.4 g Lutrol® E6000 praha, a topljenje matrice Gelucire® obavljeno je u vodenom kupatilu sa termostatom na 60°C.

5. Fiziko-hemijske karakteristike

5.1. Sadržaj leka

Sadržaj leka meren je uz pomoć RP-HPLC kao što je opisano gore. Sadržaj leka sastava (4) iznosio je 20.26%, cv: 2.85%.

5.2. Termička analiza

Obavljena je i analiza DSC analiza kao što je opisano gore i došlo se do istih zaključaka kao i u

Primeru 1.

Primer 5: Sastav Makrogol glicerida( 5 )

1. Opšta procedura pripreme:

Pripremljen je koncentrovani vodeni rastvor benzotijazola u skladu sa Formulom (1). Ovaj rastvor benzotijazola potom je snažnim mešanjem inkorporiran u istopljenu matricu Gelucire® 50/13 . Emulzija dobijena na ovaj način potom je atomizirana mlaznicama različitih tipova, korišćenjem tehnologije atomizacije uz pomoć tečnog C02 . Dobijene mikrosfere su opciono podvrgavane sušenju (npr. sušenje zamrzavanjem) da se ukloni rezidualna voda sa mikrosfernog proizvoda, ako je to neophodno.

2. Benzotijazol

Upotrebljeno je Jedinjenje A opisano u Primeru 1, §1.

3. Ekscipijensi:

3.1. Gelucire® 50/13 (Stearoil makrogol-32 gliceridi)

Upotrebljen je Gelucire® 50/13 opisan u Primeru 1, §1.

4. Makrogol glicerid sastav (5)

Stearoil makrogol glicerid sastav (5) ima sledeći sastav:

Jedinjenje A (so mesilata) 5% w/w

Gelucire® 50/13 95% w/w

Sastav (5) proizveden je u skladu sa opštom procedurom koja je opisana u Primeru 5, § 1 i naznačeno time daje 5mL koncentrovanog vodenog rastvora jedinjenja A (200 mg/mL) pripremljeno i sipano u 18 g istopljenog Gelucire® 50/13 istovremeno snažno mešajući (vortex mešalica). Topljenje Gelucire® matrix obavljeno je u vodenom kupatilu sa termostatom na 70°C.

Pripremljene su dve serije, jedna dobijena atomizacijom s mlaznicom koja ima kapilarni protok (veličina čestice određena optičkom mikroskopijom: 100-200 pm u prečniku), a druga dobijena atomizacijom sa nebulizirajućom mlaznicom (veličina čestice određena optičkom mikroskopijom: 50-100 pm u prečniku).

Tehnika atomizacije koja je ovde primenjena, opisana je i u WO 2005/049192 pod sledećim uslovima:

Serija pripremljena sa mlaznicom sa kapilarnim protokom:

Prečnik proizvoda iz mlaznice (kapilarni protok) = 0.25 mm

Prečnik mlaznice za tečni C02 = 0.25 mm

Temperatura proizvoda u mlaznici = 90°C

Temperatura peći =75°C

Pritisak gasovitog C02 u dovodnom sudu= 2.7bar

Pritisak tečnog C02 = oko 60 bar.

Serija pripremljena sa nebulizirajućom mlaznicom

Prečnik mlaznice za tečni C02 = 0.25 mm

Temperatura proizvoda u mlaznici = 90°C

Temperatura peći= 75°C

Pritisak gasovitog C02 u dovodnom sudu = 2.7 bar

Pritisak gasovitog C02 u mlaznici sa proizvodom= 5 bar

Pritisak tečnog C02 = oko 60 bar.

5. Fiziko-hemijske karakteristike

5.1. Sadržaj leka

Sadržaj leka meren je uz pomoć RP-HPLC kao što je opisano gore. Sadržaj leka sastava (5) iznosio je 4.87%.

5.2. Termička analiza

DSC analiza ukazuje na to da je Jedinjenje A dispergovano u makrogol glicerid matrici u ne-kristalnom obliku (amorfna forma ili čvrsti molekulski rastvor) budući da DSC analiza ukazuje na odsustvo kristalnosti ili minimalnu rezidualnu kristalnost (manje od 5%).

5.3. Veličina čestice

Slike dobijene optičkim mikroskopom pokazuju da su čestice leka na matrici srednje veličine od 50 do 200 (pm prečnika, zavisno od toga koja vrsta mlaznice je korišćena.

Primer 6: Solubilizaciia formulacije benzotijazol makrogol glicerida

Formulacije benzotijazol makrogol glicerida (1), (2), (3), (4) kao i sama masa (jedinjenje A) upoređeni su po njihovom profilu solubilizacije leka u FeSSIF (Simulirana intestinalna tečnost u sitom stanju, pH=5), u uslovima prezasićenosti, opisano u protokolu dole.

Njihovi profili solubilizacije u uslovima prezasićenosti, prikazani su na Slici 1, pokazuju da količina jedinjenja A koja je inicijalno rastvorena (t.j. u roku od prva 2 sata ) od formulacije makrogol glicerid ovog pronalaska daleko veća od one koja je rastvorena od proizvda u masi, tokom istog vremenskog intervala. Formulacija benzotijazol makrogol glicerid (5) pripremljena atomizacijom, formulacija benzotijazol makrogol glicerid (1) pripremljena krio-mikronizacijom i proizvod u masi (Jedinjenje A) uporedeni su po njihovim profilima solubilizacije u FeSSIF (Simulirana intestinalna tečnost u sitom stanju, pH=5), u uslovima prezasićenosti.

Profili solubilizacije koji su prikazani na Slici 2, pokazuju da formulacija makrogol glicerida (5) pokazuje veću i dužu solubilizaciju leka, od one koja je dobijena krio mikronizacijom (2) a da su obe izrazito superiorne u odnosu na lek u masi.

Poboljšani profili solubilizacije formulacija Gelucire (1) do (5) u poređenju sa masom, pokazuju da se sa Gelucire formulacijom poboljšava solubilizacija benzotijazola u skladu sa ovim pronalaskom.

Poboljšani profili solubilizacije atomiziranih formulacija (5) pripremljenih pomoću procesa koji podstiče disperziju Jedinjenja A u okviru makrogol glicerida u amorfnom stanju, ukazuje na to se čak i veće koncentracije leka mogu postići u rastvoru FeSSIF čime se onda omogućuje da veća količina leka bude na raspolaganju za apsorpciju.

Kinetika solubilizacije u uslovima prezasićenosti:

Izmerene količine makrogol glicerid formulacije jedinjenja A, o obliku praha, ili jedinjenja A, praha u masi (rasutog), dodate su neprestano mešajući tako da se u podlozi za rastvaranje stalno održava veliki višak Jedinjenja A (mnogo veći od rastvorljivosti koja se može postići u toj ravnoteži). Uzorci podloge za rastvaranje uzeti su u različitim vremenskim tačkama, i analizirani na koncentraciju Jedinjenja A.

Staklena hemijska posuda sa magnetnom mešalicom (320 rpm)

Medijum/podloga: Simulirana intestinalna tečnost u sitom stanju pH = 5 (50 mL)

Temperatura: 37°C

Uslovi prezasićenosti: 4 mg/mL (Teoretski maksimalna količina jedinjenja A koja se dodaje u podlogu za rastvaranje, što ukazuje na višak jedinjenja A).

Ove formulacije benzotijazol makrogol glicerida (1), (2), (3) i same mase (Jedinjenje A) upoređeni su po njihovim profilima disolucije u FeSSIF pH 5, u "sink" uslovima sleganja, u skladu sa USP XXVII Metode za rastvaranje Iekova II (Lopatica), kao što je opisano u protokolu dole.

Test rastvaranja lekova meri količinu rastvorenog leka, i na taj način oslobođenog od čvrste mase, ili iz formučacije u podlozi za rastvaranje, u uslovima ispod rastvorljivosti u ravnoteži ("sink" uslovi ); količina jedinjenja A izražena je kao % ukupne količine oslobođenog leka u posudi za rastvaranje, u poređenju sa ukupnom količinom leka koja je dodata u nju, i na t0.

Profil disolucije koji je prikazan na Slici 3, pokazuje veoma relevantno poboljšanje brzine rastvaranja leka za formulacije ovog pronalaska.

Dve serije formulacije benzotijazol makrogol glicerida (5) - jedna pripremljena sa kapilarnom mlaznicom, druga sa nebulizirajućom mlaznicom, i sama masa (jedinjenje A)- upoređeni su po njihovim profilima disolucije u FeSSIF, pH 5 u "sink" uslovima, u skladu sa USP XXVII, Druga metoda disolucije lekova (Lopatica), kao što je opisano u protokolu dole.

Brzina disolucije leka iz formulacije benzotijazol makrogol glicerida (5) bila je znatno poboljšana u odnosu na masu leka. Staviše, razlike u profilu disolucije leka mogu se uočiti čak i između mikrosfera pripremljenih različitim mlaznicama, gde se delotvornija disolucija leka postiže sa manjom veličinom mikrosfera koje se dobijaju kada se koristi mlaznica sa nebulizatorom.

Brzine disolucije u"sink " uslovima:

Izmcrenc količine makrogol glicerid formulacije jedinjenja A, u obliku praha, ili jedinjenja A kao praha u masi (rasutog) dodate su u izmerenu zapreminu podloge za rastvaranje, koja se nalazila u posudama opisanima u USP XXVTI Aparat za rastvaranje lekova, Tip II (Lopatica). "Sink" uslovi su izračunati kako je dole prikazano .

USP XXVTI Druga metoda za rastvaranje lekova (Lopatica)

Brzina lopatica: 100 rpm

Medium/podloga : Simulirana intestinalna tečnost u sitom stanju pH = 5 (200 mL)

Temperatura: 37°C

"Sink" uslovi: < 0.2 cs(cs= koncentracija rastvora leka u prisustvu viđka leka, posle 24 h na sobnoj temperaturi).

Primer 7: Farmakokinetički profil formulacije benzotijazol makrogol glicerida

Makrogol Glicerid formulacije su davane oralno psima rase bigl, kao ex tempore pripremljena suspenzija u PBS u dozi od 10.6 mg/kg u skladu sa protokolom, dole, nasilnim hranjenjem, odnosno oralnim unošenjem zapremine od 2 mL/kg i formulacije mase leka nasilnim ubacivanjem u grlo.

Ove formulacije su davane životinjama koje preko noći nisu imale pristup hrani (t.j. u trajanju od oko 16 časova) pre terapije, a pristup hrani im je omogućen ponovo, 4 časa po terapiji.

Makrogol Glicerid formulacije (1) i (2) oralno su davane kao što je opisano gore. Period ispiranja između davanja formulacije (1) i formulacije (2) iznosio je najmanje nedelju dana.

Korišćeno je šest pasa rase bigl (3 mužjaka i 3 ženke) telesne težine od otprilike 10-13 kg i uzrasta između 9 i 12 meseci. Životinje su izmerene posle perioda gladovanja, pred davanje leka, kada im je zabeležena telesna težina

Postupano je u skladu sa sledećim eksperimentalnim dizajnom:

Uzimanje krvi i plazme

Krv (najmanje 2.5 ml) je uzimana iz jugularne vene u heparinizovane eprivete pre i posle davanja doze leka, i to u sledećih 15 vremenskih tačaka:

0 (pre-doze), 0.25, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12, 24, 32 i 48 časova po davanju leka.

Krv je centrifugirana u roku od 15 min na oko 2500 g na +4°C u trajanju od 10 min. Krvne ćelije su odbačene, a dobijena plazma je podeljena u tri jednaka dela (gde je svaki imao po najmanje 0.3 mL). Koncentracije jedinjenja A u plazmi (slobodna baza jedinjenja A, mesilat) u nepoznatim uzorcima plazme pasa određivana je visoko preciznom tečnom hromatografijom/ masenom spektrometrijom (HPLC/MS).

Sledeći farmakokinetički parametri dobijeni su ili izračunati iz pojedinačnih koncentracija jedinjenja A u plazmi i upoređeni sa vremenom po davanju leka, korišćenjem programa WinNonlin verzija 3.1 (Pharsight Corporation, Palo Alto, CA, USA):

Cmax: Utvrđena je najveća vrednost koncentracije.

tmax: Vreme od davanja kada je utvrđena vrednost Cmax.

tz: Poslednje vreme uzorkovanja kada su nađene merljive koncentracije.

Cz: Vrednosti koncentracije dobijene u vreme uzorkovanja označeno sa tz.

AUCz: Površina ispod krive koncentracije u plazmi u poređenju sa krivom protoka vremena, do vremena uzorkovanja označenog sa TZ, izračunato log-linearnim trapezoidnim pravilom.

tl/2: Terminali polu-život.

AUC: Površina ispod krive koncentracije u plazmi u poređenju sa krivom protoka

vremena, ekstrapolirano na beskonačnost

F: Apsolutna biološka raspoloživost za orani način davanja, izračunato kao odnos normalizovane AUC. Koristi se intravensva vrednost AUC, iz farmakokinetičkih studija rađenih na psima sa masom jedinjenja A.

Farmakokinetički rezultati prikazani na Slici 4 spokazuju daje oralna apsorpcija jedinjenja A, izrazito povećana kada se daje u makrogol glicerid formulaciji u skladu sa ovim pronalaskom, biološka raspoloživost je povećana sa ispod 15 % (Jedinjenje A u vodi za injekcije) do oko 30% , i preko (formulacije (1) i (2)).

Jedinjenja Primera 8-28 sintetizovana su u skladu sa metodama koje su opisane u

Shemama I do VIII, gore.

Podaci dobijeni korišćenjem metoda HPLC, NMR i MS koji su dati u primerima koji su opisani dole bili su sledeći : HPLC: kolona Waters Symmetry C8 50 x 4.6 mm, Uslovi: a-

MeCN/H20 0.09% TFA, 0 do 100% (10 min); b- MeCN/H20, 5 do 100% (8 min), max

plot 230-400 nm; Maseni spektar: PE-SCIEX API 150 EX (APCI i ESI), LC/MS

spektar: Waters ZMD (ES); 'H-NMR: Bruker DPX-300MHz.

Purifikacije su dobijene na sledeći način: Preparativni HPLC Waters Prep LC 4000

Sistem opremljen kolonama Prep Nova-Pak®HR C186pm 60A, 40x30mm (do

1 OOmg) ili 40x300 mm (sve do lg). Sve ove purifikacije su obavljene s gradijentom MeCN/H20 0.09% TFA.

Međuproizvod 1: Pripremanje l,3-benzotijazol-2-il(2-hloro-4-pirimidinil)-acetonitrila

Neprestano mešajući, u suspenziju NaH (60% u ulju, 9.2 g, 0.23 mol) u suvi THF (200 ml) dodaje se kap po kap u inertnoj atmosferi rastvor I,3-benzotijazol-2il-acetonitril (20 g, 0.15 mol) u suvi THF (200 ml). Posle lh30 neprestano mešajući na sobnoj temperaturi, dodaje se rastvor 2,4-dihloropiri-midine (17.1 g, 0.15 mol) u suvi THF (200 ml) kap po kap. Reakciona mešavina je ostavljena da se meša u inertnoj atmosferi, na sobnoj temperature, do potpunog nestanka polaznog materijala. Reakcija je ugašena dodavanjem vode, a THF je uparen. Dodata je voda, a suspenzija je blago acidifikovana vodenim rastvorom HCL IM. Dobijeni precipitat je isfiltriran, i temeljno ispran vodom, sve dok nije postao neutralan, a onda je ispran heksanom da se ukloni ulje. Sirov čvrsti material je sušen u vakuumu na 40°C, dajući 28 g (84 %) naslovnog jedinjenja u vidu svetio smeđeg praha: mp 246°C dec; MS: 286.8 (M+l); HPLC (Uslovi a, 268 nm) 97%, rt.5.66 min; 'HNMR (DMSO d6) 55 13.25 (br s, IH, izmenljivo), 8.09 (d, ./= 4.14 Hz, IH), 7.90 (d, J = 7.53 Hz, IH), 7.61 (d,J =7.92 Hz, IH), 7.39-7.34 (m, IH), 7.20-7.15 (m, IH), 6.96 (br d, IH). CHN analiza: C3H7CIN4S: Izračunato: C, 54.19 %, H 2.48 %, N 19.45 %; Nađeno: C 53.35 %, H 2.77 %, N 17.62 %.

Međuproizvod 2: Pripremanje (3-MorfoIin-4-ilmetil-fenil)-metanola,

Prvi korak: Metil-m-toluat

U rastvor m-toluične kiseline (175 g, 1.28 mol) u metanolu (2L) kap po kap dodavanje tionilhlorid (612 g, 5.14 mol) neprestano mešajući na 5°C. Ova mešavina je refluksovana preko noći, a onda je rastvarač uparcn. Dobijeni ostatak je tretiran sa 10% vodenim rastvorom NaHC03 (pH~8). Dobijeni proizvod je ekstrahovan etil acetatom, ispran vodom, i osušen. Rastvarač je uklonjen, a sirovi material je prečišćen hromatografijom u koloni (pet eter/etil acetate) da bi se dobio metil-m-toluat kao bezbojna tečnost (180 g, 93%).

Drugi korak: metil 3-(bromometil)benzoat

U mešavinu metil-m-toluata (180g, 1.2mol) i N-bromosukcimida (235 g, 1.32 mol) u CC14 (2L) dodato je u malim procijama benzoil peroksid (18 g, 0.1 puta) na 50°C. Ova mešavina je refluksovana tokom 5h. Zatim je mešavina ostavljena da se ohladi do 40°C, a čvrsta materija je isfiltrirana Ovaj filtrat je koncentrovan da se dobije metil 3-(bromometil)benzoate (252 g, 91%) u vidu bledo žute tečnosti.

Treći korak: metil 3-(morfolin-4-ilmetil)benzoat

U rastvor morfolina (80 g, 0.91 mol) i trietilamina (232 g, 2.29 mol) u EtOH (1750 ml) kap po kap dodavan je na 0°C rastvor metil 3-(bromometil)benzoata (252 g, 1.1034 mol) u apsolutnom alkoholu (250 ml). Ova mešavina je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim je mešavina koncentrovana, a dobijeni ostatak je preuzet u 1.5N HC1 (3L) i potom ispran dietil eterom (3 puta) i etil acetatom. Ovaj rastvor je neutralizovan uz pomoć 10% vodenog rastvora NaOH a potom alkalizovan na pH=8 uz pomoć 10% vopdenog rastvora NaHC03. Proizvod je ekstrahovan uz pomoć CHC13, ispran vodom i slanim rastvorom, a potom osučen nad Na2S04. Rastvarač je uklonjen, a sirovi material je prečišćen hromatografijom u koloni CHC!3/MeOH da se dobije metil 3-(morfolin-4-ilmetil)benzoate (150 g, 70%) u vidu smeđe tečnosti.

Četvrti korak: (3-Morfolin-4-ilmetiI-fenil)-metanol

U mešavinu LAH (36 g, 0.95 7mol) u suvom THF (1750 ml) dodavano je kap po kap na 0°C pod N2rastvor N-(3-methoksikarbonil benzil) bromid (150 g, 0.638 mol) u suvom THF (250 ml). Ova mešavina je mešana preko noći na sobnoj temperaturi pod N2, a potom ugašena 10% vodenim rastvorom NaOH. Čvrsta supstanca je isfiltrirana, a filtrat je koncentrovan. Preostali deo je preuzet u DCM (1L) i ispran vodom. Rastvarač je uparen da se dobije N-(3-hidroksimetilbenzil)morfoIine (96 g, 73%) u visdu bledo-žute tečnosti. 'H NMR (DMSO-d6) 5 7.28-7.23 (m, 2H), 7.19-7.13(m, 2H), 5.14(t, / =5.65 Hz,IH), 4.47 (d, J=5.84 Hz, 2H), 3.57-3.54 (m, 4H), 3.42 (s, 2H), 2.34-2.31 (m, 4H).

Po korišćenju procedure koja je opisana gore u primeru T i uz pomoć odgovarajućih početnih materijala i reagenasa, mogu se dobiti i dodatnipara ili metasupstituisani derivati benzil alkohola.

Međuproizvod 3: (3-Piperidin-l-ilmetil-fenil)-metanol

IH NMR(DMSO-d6) 8 7.26-7.21 (m, 2H), 7.17-7.11 (m, 2H), 5.14 (t,J= 5.65 Hz, IH), 4.47 (d, J= 5.65 Hz, 2H), 3.38 (s, 2H), 2.32-2.25 (m, 4H), 1.60-1.36 (m, 6H).

Međuproizvod 4:(3-(4-Metil-piperazin-l -ilmetil-fenil)-metanol

lHNMR(DMSO-d6) 8 7.27-7.11 (rn, 4H), 5.17-5.13 (m, IH), 4.48-4.46 (m, 2H),3.41 (s, 2H), 2.41-2.21 (m, 8H), 2.13 (s, 3H).

Međuproizvod 5: (3-Imidazolil-l-ilmetil-fenil)-rnetanol

'H NMR (DMSO-d6) 5 7.73 (s, IH), 7.32-7.20 (m, 3H), 7.16-7.15 (m, IH), 7.12-7.09 (m, IH), 6.87 (s, IH), 5.20 (t, ./= 5.65 Hz, IH), 5.17 (s, 2H), 4.46 (d,7= 5.65 Hz, 2H).

Međuproizvod 6: (4-(2, 6-Dimetil-morfolin-4-ilmetil)-fenil)-metanol

M<+>(ES):236.0. 'H NMR (DMSO-d6) 5 7.7-7.20 (m, 4H), 5.12 (t, J= 5.7 Hz, IH), 4.46 (d,J =5.7 Hz, 2H), 3.56-3.50 (m, 2H), 3.39 (s, 2H), 2.65-2.61 (m, 2H), 2.50-2.48 (m,IH), 1.64-1.57 (m,2H), 1.01 (s (s, 311), 0.99 (s,3H).

Međuproizvod 7: (4-((Bis-(2-methoksi-etil)-amino)-metil)-fenil)-metanol

M+(ES): 254.2. 'H NMR (DMS0-d6) 6 7.23 (s, 4H), 5.11 (t,J=5.65 Hz, IH), 4.45 (d, J- 5.65 Hz, 211), 3.59 (s, 2H), 3.40-3.36 (m, 4H), 3.19 (s, 6H), 2.61-2.57 (m, 4H).

Međuproizvod 8: (4-(4-tert-butoksi-piperidin-1 -ilmetil)-fenil)-metanol

M+(ES): 278.2. 'H NMR (DMSO d6) 8 7.25-7.18 (m, 4H), 5.11 (t,J=5.65 Hz, IH), 4.45 (d, J = 5.65 Hz, 2H), 3.47-3.38 (m, 2H), 2.65-2.62 (m, 2H), 2.05-1.98 (m, 2H), 1.64-1.58 (m, 2H), 1.41-1.29 (m, 2H), 1.10 (s, 9H).

Međuproizvod 9: (4-(3.4-Dihidro-l H-isokvinolin-2-ilmetil)-fenil)-metanol

'H NMR (DMSO-d6) 8 7.31-7.25 (m, 4H), 7.09-7.03(m, 3H), 6.98-6.96 (m, IH), 5.14 (t, J= 5.47 Hz, IH), 4.47 (d, J= 5.47 Hz, IH), 3.60 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 2.79 (t, J = 5.65 Hz, IH), 2.66-2.62 (m, 2H).

Međuproizvod 10: Pripremanje Benzil-(4-hidroksimetil-benzil)-karbamična kiselina tert-butil ester

Prvi korak : 4-(aminometil) benzoična kiselina

Mešavina 4-cijano benzoične kiseline (500 g, 3.4 mol) i Raney Nickel (100 g) u metanolu (5L) hidrogenizovana je pod pritiskom od 10 kg tokom 16 h. Katalizator je uklonjen filtracijom, posle čega je sledilo uklanjanje rastvarača pod smanjenim pritiskom da se dobije 4-(aminometil) benzoična kiselina (430 g, 84%) u vidu čvrste materije bele boje.

Drugi korak: Metil-4-(aminornetil)benzoat

U rastvor 4-(aminometil)benzoične kiseline (300 g, 1.98 mol) u metanolu (5L) dodat je tionilhlorid (473 g 3.97 mol). Ova reakciona mešavina je potom refluksovana tokom 6h, posle čega je sledilo uklanjanje rastvarača pod smanjenim pritskom da se dobije sirovi proizvod. Ovaj sirovi proizvod potom je purifikovan acido-baznim postupkom da se dobije metil-4-(aminometil)benzoate (300 g, 92%) u vidu tečnosti.

Treći korak: N-(4-Methoksikarbonilbenzil)benzilamin

Mešavina metil-4-(aminometil)benzoata (50 g, 0.302 mol) i benzaldehida (32 g, 0.302 mol) u EtOH (1L) refluksovana je u trajanju od 5h. Po hlađenju do sobne temperature, NaBH4(11.5 g, 0.302 mol) je dodavan u malim porcijama. Ova reakciona mešavina me mešana na sobnoj temperatui u trajanju od 10 h. Rastvarač je uklonjen pod smanjenim pritiskom, a jedinjenje je prečišćeno acido-baznim postupkom, da se dobijeN-( 4-methoksikarbonilbenzil)benzilamin (25 g, 33%).

Četvrti korak: 4-methoksi karbonil-[iV-(BOC]-A^-[benzil]benzilamin

U mešavinu7V-(4-methoksikarbonilfenil)benilamina (25 g, 0.098 mol) u CH2CI2 (500 ml), dodaje se diizopropil etilamin (38 g, 0.294 mol) i (BOC)20 (32g, 0.147mol). Posle neprestanog mešanja na sobnoj temperaturi tokom 5h, rastvarač je uklonjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod je potom purifikovan hromatografski korišćenjem hloroform/metanola (9/1) da se dobije 4-methoksi karbonil-[Ar-(BOC]-7V-[benzil]benzilamin (27 g, 78%) u vidu tečnosti.

Peti korak: Terc-Butil-N-[(4-hidroksimetil)benzil]-Ar-(benzil)karbamat

U suspenziju LAH (4 g, 0.105 mol) u suvi THF (150 mL) dodaje se rastvor 4-methoksi karbonil-/V-[Boc]-/<V->

[benziljbenzilamin (25 g, 0.070 mol) u suvom THF (25 mL) mešajući na —40°C. Ova reakciona mešavina je polako zagrevana do sobne temperature, i mešana tokom 2h. Potom je ugašena sa 20mL 10% vodenog rastvora NaOH a dobijeni precipitat je izfiltriran. Ovaj filtrate je koncentrovan, a ostatak je purifikovan hromatografijom u koloni (hloroform/metanol, 9:1) da bi se dobilo 16g (65%) naslovnog jedinjenja u obliku tečnosti

TLC - Hloroform / metanol (9/1): R/= 0.6. 'H NMR (DMSO-d6) S 7.50-7.00 (m, 9H), 5.15 (t,J=5.65 Hz, IH), 4.48 (d, J = 5.65 Hz, 2H), 4.40-4.15 (m, 4H), 1.40 (s, 9H).

Međuproizvod U: Pripremanje (2-Piperidin-l-il piridin-4-il)metanola

Prvi korak: 2-Bromo-4-metilpiridin

U rastvor 2-amino-4-metilpiridina (120 g, 1.1 mol) u 48% HBr (1.5L) na -20°C dodaje se bromine (160 mL, 3.11 mol) kap po kap. Ova reakciona mešavina meša se tokom 3h na -15°C do -20°C. Gornjoj mešavini se u malim porcijama dodaje vodeni rastvor NaN02 (204 g, 2.95 mol).Reakciona mešavina se potom ostavi da se zagreje do sobne temperature tokom perioda od 3h. Dodaje se 20% vodeni rastvor NaOH (1.2 Kg NaOH u 2L vode) a onda se pH podešava na 12 održavajući temperaturu na 0°C. Ova reakciona mešavina se ekstrahuje dietil eterom (3x250 mL), ispire vodom, slanim rastvorom, i potom suši. Rastvarač se uklanja i purifikuje frakcionom destilacijom da bi se dobio 2-bromo-4-metilpiridin (164 g, 86%) u obliku bledo žute tečnosti

Drugi korak: 2-bromoiz.onikotinična kiselina

U mešavinu 2-bromo-4-pikoline (300 g, 1.74 mol) u piridinu/void (po 1L od oba ) na 95°C dodaje se KMn04(200 g) rastvoren u vodi (1L). Potom se dodaje KMn04(2 Kg) u malim porcijama (svaki put po približno 20 mg) tokom perioda od 4 dana. Ova reakciona mešavina se potom suši do sobne temperature i potom se isfiltrira čvrsti Mn02. Ovaj fdtrate se potpuno uparava pod smanjenim pritiskom i acidifikovan sa 6N HC1. Čvrsti proizvod koji se ovako dobija, potom se filtrira, ispira vodom i suši da se dobije 2-bromoizonikotinična kiselina (166 g, 47%).

Treći korak: 2-Piperidin-l-ilizonikotinična kiselina

Mešavina 2-bromoisonikotinične kiseline (40 g, 0.198 mol) i piperidina (200 mL) refluksovana je na 105°C tokom 24 h u atmosferi N2. Višak piperidina destilovan je pod vakuumom, a sirovi ostatak je razblažen vodom (500 mL), a potom ekstrahovan hloroformom (3x250 mL), ispran slanim rastvorom, i onda osušen. Rastvarač je osučen pod vakuumom da se dobije 2-piperidin-l-il-isonikotinična kiselina (35 g, 85%) kao čvrsta materija.

Četvrti korak: metil 2-piperidin-l-ilisonikotinat

Mešavina 2-Piperidin-l-il-isonikotinične kiseline (30 g, 0.145 mol) u metanolu (500 mL) ohlađena je na 0°C a onda je dodat tionilhlorid (42 mL). Ova reakciona mešavina je refluksovana tokom 20 h. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak je preuzet u EtOAc (500 mL). Organski sloj je ispran sa 10% vodenog rastvora NaHC03, vodom, slanim rastvorom i potom osušen. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije metil 2-piperidin-l-ilisonikotinat (18 g, 56%) u vidu žute tečnosti.

Peti korak: (2-Piperidin-l-il piridin-4-il)metanol

U suspenziju LAH (5.5 g, 0.145 mol) u suvom THF (500 mL) na 0°C dodaje se metil 2-piperidin-l-ilisonikotinat (18 g, 0.095 mol) u suvom THF (100 mL) u atmosferi N2. Ova reakciona mešavina je mešana sobnoj temperaturi tokom 4 h i gašena sa 10% vodenog rastvora NaOH na -20°C. Čvrsti deo je filtriran, opran pomoću THF pa koncentrovan. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2C12 (250 mL), opran vodom, slanim rastvorom i osušen. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a sirovi proizvod prečišćen hromatograijom kolone preko silika gela (CHC13/MeOH, 9:1) da se dobije (2-piperidin-l-il piridin-4-il) metanol (12 g, 65%).

'H NMR (DMSO-r/6) 5 7.98 (d, J = 5.2Hz, IH), 6.71 (s, IH), 6.51 (br d, IH), 5.24 (t, J = 5.2Hz, IH), 4.41

(d, J = 5.2Hz, 2H), 3.49-3.46 (m,4H), 1.58-1.50 (m,6H).

Na sličan način mogu se dobiti i sledeći međuproizvodi, odnosno jedinjenja.

Međuproizvod 12: N-(4-hidroksimetilpiridin-2-il) morfolin

'H NMR (DMSO-ć/6) S 8.04 (d, J - 5.1HZ, IH), 6.74 (s, IH), 6.62 (d, J = 5.1Hz, IH), 5.29 (t, J = 5.7Hz, IH), 4.43 (d, J = 5.7Hz, 2H), 3.69-3.66 (m, 4H), 3.41-3.38 (m, 4H).

Međuproizvod 13: Pripremanje (5-morfolin-4-ilpiridin-3-il)metanola

Step 1: Meti! 5-morfolin-4-ilnikotinat

U mešavinu metil-5-bromonikotinata (10 g, 0.045 mol) i morfolina (4.6 g, 0.054 mol) u suvom toluenu (100 mL) dodat je spojeni CsC03(30 g, 0.09 mol) neprestano mešajući pod argonom. U ovu mešavinu dodat je BINAP (0.45 g, 0.0005 mol), Pd2(dba)3 (0.22 g, 0.00015 mol) a onda je ova reakciona mepšavina refluksovana na 110°C tokomr 50 h. Reakciona mešavina je ohlađena do sobne temperature, a potom razblažena dietil eterom (400 ml) pa fdtrirana kroz celit. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom, i purifikovan fleš hromatografijom kolone (CHC13/MeOH, 4:1) da se dobije 4.2 g (41%) metil 5-morfolin-4-ilnikotinata u vidu tečnosti. TLC - Hloroform / Metanol (8/2): Rf= 0.7.

Drugi korak: (5-morfolin-4-ilpiridin-3-il)metanol

U suspenziju LAH (1 g, 0.027 mol) u suvi THF (70 mL) dodaje se metil 5-morfolin-4-ilnikotinat (4 g, 0.018 mol) u suvi THF (10 mL) na -40°C neprestano mešajući. Reakciona mešavina je mešana na ovoj temperaturi tokom 2 h a potom gašena sa 6 mL 10% vodenog rastvora NaOH na -40°C. Ova reakciona mešavina je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 30 min, filtrirana je kroz celit, isprana pomoću THF i koncentrovana da se dobije 2.8 g, (80%) naslovnog jedinjenja u vidu tečnosti.

TLC - Hloroform / Metanol (8/2): Rf= 0.55. 'H NMR (DMSO-t/6) 8 8.17 (d, J = 2.6Hz, IH), 7.97 (s, IH), 7.23 (s, IH), 5.24 (t, J = 5.6Hz, IH), 4.47 (d, J = 5.6Hz, 2H), 3.75-3.72 (m, 4H), 3.15-3.12 (m, 4H).

Međuproizvod 14: 2-(4-metilpiperazin-l-il)etanol

U THF (30 ml) se dodaje N-(2-hidroksietil)piperazina (500 mg, 3.84 mmol), rastvor formaldehida (3117 mg, 38.41 mmol) i natrijum cijanoborohidrid (1207 mg, 19.20 mmol). Ova mešavina se zagreva do 50°C preko noći neprestano mešajući. Posle hlađenja dodato je malo vode, pa je mešavina ekstrahovana uz pomoć DCM (3x). Ovi organski su sušeni nad MgS04 i upareni. Ostatak je prečišćen nad silica čepom pomoću DCM/MeOH 9:1 kao eluanta da se dobije jendo ulje (370 mg, Y = 67%).<!>H NMR (DMSO-d6) 8 4.45 (t, J = 5.3Hz, IH), 3.51-3.45 (m, 2H), 3.02-2.84 (m, 4H), 2.71-2.64 (m, 2H), 2.61 (s, 3H), 2.58-2.53 (m, 2H), 2.47-2.43 (m, 2H).

Međuproizvod 15: {4-[(4-metilpiperazin-l -il)karbonil]fenil}metanol

U rastvor N-metil piperazina (3.33 ml, 30.09 mmol) dodaje se rastvor trimetilaluminijuma u heptanu (15.04 ml, 30.09 mmol) i onda je ova mešavina mešana tokom 10 min na sobnoj temperaturi. U ovja rastvor dodaje se rastvor 4-(hidroksimetil)benzoične kiselina metil estera (1000 mg, 6.02 mmol) u DCE a ta se mešavina refluksuje pod inertnom atmosferom tokom 3h. Ova mešavina se potom razblažuje sa DCM , a onda se dodaje voda. Suspenzija je filtrirana kroz celit. Sam filtrate je opran rastvorom 5% NaHC03 (2x) a potom vodom i slanim rastvorom. Organski slojevi su sušeni nad MgS04, upareni i osušeni na 40°C pod vakuumom da se dobije 307 mg (Y = 21%) naslovnog jedinjenje u vidu ulja. TI NMR (DMSO-rf/6) 8 7.45-7.37 (m, 4H), 5.33 (t, J = 5.6Hz, IH), 4.58 (br d, 2H), 3.77-3.50 (m, 4H), 2.46-2.30 (m, 4H), 2.26 (s, 3H).

Primer 8: l. 3- benzotiiazol- 2- il[ 2- f2- piridin- 3- iletoksi) pirimidin- 4- 111 acetonitril

U rastvor međuproizvoda 1 (0.200 g, 0.7 mmol) u DMA (3 ml) dodaje se 3-(2-hidroksietil)piridin (0.172 g, 1.4 mmol), cesijum karbonat (1.14 g, 3.5 mmol) i baker jodid (0.133 g, 0.7 mmol) pa se ova suspenzija mućka na 100°C tokom 19 dana. Posle hlađenja na sobnoj temperature, rastvarač se uparava. Ostatak se ispire nekoliko puta vodom, a potom isfiltrira i osuši na 40°C pod vakumom. Čvrsta materija se preuzima u mešavinu DCM/TFA pa se dodaje eter. Formirani precipitat se filtrira, i ispere eterom (3X). Posle prečišćavanja preparativnim HPLC i posle sušenja pod vakuumom na 40°C, dobijeno je 121 mg (29%) naslovnog jedinjenja u vidu žutog praha.

M"(ESI): 371.8; M+(ESI): 374.0; HPLC (Uslovi b, max plot) 96.1% ; Rt 1.89min. 'H NMR (DMSO-d6) 5 8.90 (veoma br d, IH), 8.31 (br d, IH), 7.88-7.73 (m, 4H), 7.45-7.40 (m, IH), 7.30-7.26 (m, IH), 6.67 (br d, IH), 4.94 (br t, 2H), 3.36-3.32 (m, 2H). CHN analiza: C20H15N5OS. 2 C2HF302.0.2H20 Izračunato: C 47.64 %, H 2.90 %, N 11.57 %; Nađeno: C 47.62 %, H 3.21 %, N 11.75 %.

Primer 9: l, 3- benzotiiazoI- 2- il[ 2-( kvinolin- 6- ilok. si) pirimidin- 4- il 1 acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je praćenjem istog protokola kao što je navedeno gore Primer 8, naznačeno time daje upotrebljen 2-naftol umesto 3-(2-hidroksietil)piridina. Y - 16%;M+(ESI): 396.0; HPLC (Uslovi a, max plot) 99.4%; Rt: 3.47min.<*>H NMR (DMSO-d6) 5 9.06 (m, IH), 8.51-8.48 (m, IH), 8.26 (br d, IH), 8.21 (d, J = 9Hz, IH), 8.02 (d, J = 2.3Hz, IH), 7.80 (dd, J = 2.3Hz, J = 9Hz, IH), 7.69 (dd, J = 4.1Hz, J = 8.3Hz, IH), 7.52 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.35-7.29 (m, IH), 7.12-7.07 (m, IH), 6.92 (br d, IH), 6.64(brd,lH).

Primer 10:l, 3- benzotiiazol- 2- il{ 2-[( 5- morfolin- 4- ilpiridin- 3- il) methoksi ] pirimidin - 4- iU

acetonitril

U suspenziju NaH (60% u ulju, 245 mg, 6.14 mmol) u suvi ACN (3ml) dodaje se rastvor (3-morfolin-4-ilfenil)metanol (596 mg, 3.07 mmol) u suvom ACN (3 ml). Dobijena suspenzija se meša na sobnoj temperature tokom lh pod inertnom atmosferom. Međuproizvod 1 (440 mg, 1.53 mmol) se dodaje u malim porcijama, a suspenzija se meša na 80°C pod inertnom atmosferom. Posle 4 sata, reakcija se hladi do sobne termperature i gasi dodavanjem vode. Rastvarači se uparavaju, a ostatak se preuzima u vodu. 2 mL EtOAc i cikloheksana dodaje se da uhvati rezidualno ulje iz NaH a rastvor se čuva na 4°C jedan dan. Oformljeni precipitat se filtrira i opere vodom sve do neutralnog pH a potom cikloheksanom, dajući 542 mg sirove baze.

Sirova baza se preuzima u MeOH (5 ml) pa se dodaje 100 pl of metan sulfokiseline. Nataložena je so, a onda oprana eterom i osušena u vakuumu na 30°C da se dobije 642 mg (Prinos = 43 %) naslovnog jedinjenja u vidu žutog praha Y = 43%; M"(ES): 443.0; M+(ES): 445.2; HPLC (Uslovi b, max plot) 98.8% ; Rt 2.22 min.<!>H NMR (DMSO-d6) 8 8.47-8.43 (m, 2H), 8.32 (br d, IH), 8.00 (br d, IH), 7.95 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.73 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.47-7.42 (m, IH), 7.32-7.27 (m, IH), 6.80 (br d, IH), 5.77 (s, 2H), 3.76-3.73 (m, 4H), 3.40-3.37 (m, 4H), 2.33 (s, 6H).

Primer 11: l, 3- benzotijazol- 2- il[ 2- ( O- f( 4- metilpiperazin- l- i0 metil1benzil} oksi) pirimidin- 4- il] acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi {3-[(4-metilpiperazin-l-il)metiI]fenil}metanol umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Y = 43%; M"(ESI): 469.0; M+(ESI): 471.2; HPLC (Uslovi b, max plot) 96.7%; Rt 2.49 min.'H NMR (DMSO-d6) 8 7.94 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.88 (br s, IH), 7.74 (br d, IH), 7.54-7.52 (m, 2H), 7.46-7.35 (m, 3H), 7.28-7.23 (m, IH), 6.71 (br d, IH), 5.68 (s, 2H), 3.72 (br s, 2H), 3.50-3.40 (m, 8H), 2.75 (s, 3H).

Primer 12: K3- benzotiiazol- 2- il( 2-{[ 4-( 3. 4- dihidroisokvinolin- 2( lH>ilmetil) benzil] oksi} pirimidin-4- il) acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi [4-(3,4-dihidroisokvinolin-2(lH)-ylmetil)fenil]metanol umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol.

Y = 30%; M(ESI): 503.0; HPLC (Uslovi b, max plot) 100% ; Rt 3.1 lmin. 'H NMR (DMSO-d6) 8 710.13 (very br s, IH), 7.95-7.92 (m, 2H), 7.74-7.72 (m, 2H), 7.69 (d, J = 7.9Hz, 2H), 7.61 (d, J = 7.9Hz, 2H), 7.45-7.40 (m, IH), 7.28-7.22 (m, 4H), 7.10-7.07 (m, IH), 6.72 (br d, IH), 5.75 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.40-4.24 (m, 2H), 3.70-3.58 (m, IH), 3.42-3.24 (m, IH), 3.12-2.99 (m, 2H). CHN analiza: C30H25N5OS. 2 C2HF302.1H20 Izračunato: C 54.47 %, H 3.90 %, N 9.34 %; Nađeno: C 54.36 %, H 4.01 %, N 8.93 %.

Primer 13: l, 3- benzotiiazol- 2- iir2-( heksoksi) pirimidin- 4- iljacetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi heksan-l-ol umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Y = 11%; M'(ESI): 350.6; M+ (ESI): 353.2; HPLC (Uslovi a, max plot) 98.1% ; Rt 6.60min.'H NMR (DMSO-d6) 8 12.56 (br s, IH), 7.85 (br d, IH), 7.72-7.69 (m, 2H), 7.38-7.33 (m, IH), 7.23-7.18 (m, IH), 6.56 (brd, IH), 4.60 (brt, 2H), 1.1.80-1.76 (m, 2H), 1.50-1.20 (m, 6H), 0.83 (brt, 3H).

Primer 14: 13- benzotiiazol- 2- il( 2-( r3- rmorfolin- 4- ilmetiDbenzil1 oksi ) pirimidin- 4- il}

acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi (3-morfolin-4-ilmetil-fenil)metanol umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Y = 72%; M'(ESI): 456.0; M+(ESI): 458; HPLC (Uslovi b, max plot): 99.6 %, rt. 2.35 min.<*>H NMR (DMSO-d6) 5 9.92 (br s, IH), 7.93-7.91 (m, 2H), 7.74-7.65 (m, 3H), 7.59-7.49 (m, 2H), 7.45-7.40 (m, IH), 7.29-7.24 (m, IH), 6.74 (br d, IH), 5.72 (s, 2H), 4.05-3.75 (m, 2H), 3.65-3.50 (m, 2H), 3.30-3.02 (m, 4H). CHN analiza: C25H23N502S. 2 C2HF302.IH20 Izračunato: C 49.50 %, H 3.87 %, N 9.95 %; Nađeno: C 49.81 %, H 3.87 %, N 9.96 %.

Primer 15. i3- benzotiiazol- 2- il( 2-{[ 3- lH- imidazol- l— ilmetil) bcnzilloksi} pirimidin- 4- il)

acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi (3-imidazoIil-I-ilmetil-fenil)metanoI umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Y = 41%; M'(ES): 437.2; M+(ES): 439.0; HPLC (Uslovi b, max plot) 100% ; Rt 2.41 min.<]>H NMR (DMSO-d6) 5 9.26 (s, IH), 7.93-7.84 (m, 2H), 7.78 (t, J = 1.5Hz, IH), 7.76 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.67 (t, J = 1.5Hz, IH), 7.61-7.58 (m, 2H), 7.52-7.47 (m, IH), 7.44-7.39 (m, 2H), 7.28-7.23 (m, IH), 6.72 (br d, IH), 5.67 (s, 2H), 5.47 (s, 2H).

Primer 16; 13- benzotiiazol- 2- il( 2-{[ 3-( piperidin- l- ilmetil) benzilloksi} pirimidin- 4-

ipacetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi (3-piperidin-l-ilmetil-fenil)metanol umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Y = 35%; M"(ES): 454.4; M<*>(ES): 456.5; HPLC (Uslovi b, max plot) 91.3% ; Rt 2.50 min.'H NMR (DMSO-d6) 8 9.35 (br s, IH), 7.93-7.91 (m, 2H), 7.74-7.64 (m, 3H), 7.58-7.50 (m, 2H), 7.48-7.40 (m, IH), 7.28-7.23 (m, IH), 6.73 (br d, IH), 5.73 (s, 2H), 4.53 (s, 2H), 3.30-3.26 (m, 2H), 2.87-2.83 (m, 2H), 1.75-1.49 (m, 5H), 1.29-1.16 (m, IH).

Primer 17:1, 3- benzotiiazol- 2- il[ 2-(| 4-|"( 2, 6- dimetilmorfolin- 4- il) metil1benzil} oksi) pirimidin-4- il] acetonitrit

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi (4-(2,6-dimetil-morfolin-4-ilmetil)-feniI)metanol umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Y = 15%; M<+>(ES): 486.2; HPLC (Uslovi b, max plot): 99 %, it. 2.48 min.<5>H NMR (DMSO-d6) 8 10.29 (very br s, IH), 7.92-7.90 (m, 2H), 7.73 (d, J = 7.9 Hz, IH), 7.66 ( d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.44-7.39 (m, IH), 7.28-7.23 (m, IH), 6.72 (br d, IH), 5.73 (s, 2H), 4.33 (s, 2H), 3.78-3.73 (m, 2H), 3.23 (d, J= 11.7 Hz, 2H), 2.66 (t, J= 11.7 Hz, 2H), 1.07 (s, 3H), 1.04 (s, 3H). CHN analiza: C27H27N502S. 2 C2HF302.1.2H20 Izračunato: C 50.64 %, H 4.30 %, N 9.52 %; Nađeno: C 50.98 %, H 4.80 %, N 9.68 %.

Primer 18: 13- benzotiiazol- 2( 3H)- iliden{ 2- Kf4-([ bis( 2- metoksietil) aminol metil) benziDoksil

pirimidin- 4- iU acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi (4-((bis-(2-methoksi-etil)-amino)-metil)-fenil)metanol umesto (3-morfolin-4-iIfenil)metanol. Y = 7%; M<A>ES): 504.2; HPLC (Uslovi b, max plot): 99 %, rt. 2.51min.<*>H NMR( DMSO-d6)8 9.59 (br s, IH), 7.94 (d, J = 7.9 Hz, IH), 7.88 (br d, IH), 7.73 (d, J = 8.2 Hz, IH), 7.66 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.60 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.44-7.40 (m, IH), 7.28-7.23 (m, IH), 6.72 (br d, IH), 5.73 (s, 2H), 4.40 (s, 2H), 3.65-3.63 (m, 4H), 3.33-3.21 (m, 10H). CHN analiza: C27H29N503S. 2 C2HF302. Izračunato: C 50.89 %, H 4.27 %, N 9.57 %; Nađeno: C 50.98 %, H 4.48 %, N 9.83 %.

Primer 19:1. 3- benzotiiazoI- 2( 3HVilidenI2-( f4- l( 4- tert- butoksipiperidin- l- il- metili benzil)

oksi) pirimidin- 4- i}] acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi (4-(4-tert-butoksi-piperidin-l-ilmetil)-fenil)metanol umesto (3-morfolin-4-ilfenil) metanol.Y = 66%; M'(ES): 526.3; M'(ES): 528.2; HPLC (Uslovi b, max plot) 99.2% ; Rt 2.93min.<!>HNMR (DMSO-d6) 5 9.38-9.29 (m, IH), 7.93-7.91 (m, 2H), 7.73 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.67-7.63 (m, 2H), 7.58 (d, J = 8.3Hz, IH), 7.53 (d,J=8.3Hz, IH), 7.44-7.39 (m, IH), 7.28-7.23 (m, IH), 6.73 (brd, IH), 5.73 (s, 2H), 4.35-4.28 (m, 2H), 3.95-3.85 (m, IH), 3.32-2.97 (m, 4H), 1.88-1.42 (m, 4H), 1.12 (d, J = 7.6Hz, 9H). CHN analiza: C30H33N5O2S. 2 C2HF3O2.0.6H2O Izračunato: C 53.27 %, H4.76 %, N 9.14 %; Nađeno: C 53.27 %, H 4.96 %, N 9.23 %.

Primer 20: l, 3- benzotiiazol- 2- il[-({ 4- r( benzilamino) metil1 benziljoksi) pirimidin- 4- il] acetonitril

Nasl ovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi benzil-(4-hidroksimetil-benzil)-karbamična kiselina terc-butil ester umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Korak de-protekcije Boe obavljen je korišćenjem dole opisanog protokola.

U rastvor sirove baze (0.5g, 0.9 mmol) u DCM (18 ml) u inertnoj atmosferi dodat je boron trifluorid dietileterat (0.33 ml, 2.6 mmol) pa je ovaj rastvor mešan 1 sat na sobnoj termperaturi. U ovu reakcionu mešavinu je dodata voda, pa je odbačena organska faza. Formirani precipitat u vodenoj fazi je isfiltriran i preuzet u MeOH. Nerastvorljivi material je uklonjen filtracijom, a filtrate je koncentrovan skoro do suvog na sobnoj termperaturi. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom metodom HPLC. Čiste frakcije su prikupljene i liofilizovane da se dobije 0.055g (11%) naslovnog jedinjenje u vidu žutog praha.Y = 11%; M"(ES): 476.2; M+ (ES): 478.2; HPLC (Uslovi b, max plot) 97.5%; Rt 2.75 min.<!>H NMR (DMSO-d6) 6 9.22 (br s, IH), 7.94 (d, J = 7.5Hz, IH), 7.73 (br d, IH), 7.63 (br d, 2H), 7.54 (d, J = 8.3Hz, 2H), 7.46-7.39 (m, 7H), 7.28-7.23 (m, IH), 6.72 (br d, IH), 5.73 (s, 2H), 4.20-4.16 (m, 4H).

Primer 21: 13- benzotijazol- 2- vl( 2- ff2- morfolin- 4- vIpiridin- 4- vl) methorvj pirimidin- 4- vl|

acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi N-(4-hidroksimetilpiridin-2-il) morfoline umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Y

- 16%; M'(ES): 443.0; M<+>(ES): 445.0; HPLC

(Uslovi b, max plot) 94.4%; Rt 2.23 min.'H NMR (DMSO-d6) 8 8.10 (d, J = 6.4Hz, 1H), 7.99-7.96 (m, 2H), 7.73 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.51-7.42 (m, 2H), 7.32-7.27 (m, IH), 7.07 (br d, IH), 6.78 (br d, IH), 5.75 (s, 2H), 3.73-3.65 (m, 8H).

Primer 22:1, 3- benzotijazol- 2- il { 2- fr2- piperidin- l- ilpiridin- 4- il') methoksij pirimidin- 4-

i 1} aceton i tri I

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi (2-piperidin-l-il piridin-4-il) metanol umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol.Y = 39%; M~(ES): 441.1; TV1TES): 443.6.2; HPLC (Uslovi b. max plot) 100% ; Rt 2.60 min.'H NMR (DMSO-d6) 8 8.05-8.01 (m, 2H), 7.98 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.73 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.61 (s, IH), 7.48-7.43 (m, IH), 7.34-7.29 (m, IH), 7.04 (br d, IH), 6.83 (brd, IH), 5.76 (s, 2H), 3.72-3.62 (m, 4H), 2.37 (s, 6H), 1.70-1.54 (m,6H).

Primer 23: l, 3- benzotiiazol- 2- il[" 2-( 2- morfolin- 4- ilethoksi) pirimidin- 4- il1 acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi 4-(2-hidroksietil) morfoline umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Y = 72%; M"(ES): 380.2; HPLC (Uslovi b, max plot): 100 %, rt. 1.86 min. 'H NMR (DMSO-d6) 8 10.28 (veoma br s, IH), 7.99 (br d, IH), 7.88 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.72 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.47-7.42 (m, IH), 7.32-7.27 (m, IH), 6.78 (brd, IH), 5.01-4.88 (m, 2H), 4.15-3.10 (m, 8H), 3.76-3.65 (m, 2H).

Primer 24. T, 3- benzotiiazol- 2( 3H)- iliden{ 2-[( l, 4- dimctilpiperazin- 2- il) metoksijpirimidin-4- i 1} acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi l,4-dimetil-2-(hidroksimetil)piperazin umesto (3-rnorfolin-4-ilfenil)metanol.Y = 36% ; M+(ES): 394.8 ; HPLC (Uslovi b, max plot): 97.6%, rt. 1.67 min. 'H NMR (DMSO-d6) 5 8.00 (br d, IH), 7.90 (d, J - 7.9HZ, IH), 7.72 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.47-7.42 (m, IH), 7.32-7.27 (m, IH), 6.79 (br d, IH), 4.84-4.70 (m, 2H), 3.62-3.58 (m, IH), 3.45-3.41 (m, IH), 3.25-3.07(m, 4H), 2.90-2.70 (m, IH), 2.81 (s, 3H), 2.62 (s, 3H).

Primer 25:1, 3- benzotiiazol- 2- il{ 2- r2-( dimetilamino) etoksi1pirimdin- 4- il| acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi 2-dimetilaminoetanol umesti (3-morfolin-4-ilfenil) metanol. Y = 66% ; M+(ES): 339.; HPLC (Uslovi b, max plot): 100%, rt. 1.80 min. 'H NMR (DMSO-d6) 59.84 (br s, IH), 8.00 (br d, IH), 7.89 (d, J = 7.9HZ, IH), 7.72 (d, J - 7.9Hz, IH), 7.47-7.42 (m, IH), 7.32-7.27 (m, IH), 6.79 (br d, IH), 4.96-4.86 (m, 2H), 3.70-3.60 (m, 2H), 2.91 (s, 3H).

Primer 26: L3- benzotijazol- 2( 3H)- iliden[ 2-({ 4-[( 4- metilpiperazin- l- il) karbonil] benzil)

oksi) pirimidin- 4- il] acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi {4-[(4-metilpiperazin-l-il)karbonil] fenil}metanol umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Y = 44%; lVf (ES): 485.5; HPLC (Uslovi b, max plot): 100%, rt. 2.21 min. 'H NMR (DMSO-d6) 5 9.88 (br s, IH), 7.93 (br d, IH), 7.95-7.84 (veoma br d, IH), 7.73 (br d, IH), 7.67 (d, J = 8.3Hz, 2H), 7.52 (d, J - 8.3Hz, 2H), 7.45-7.39 (m, IH), 7.28-7.23 (m, IH), 6.73 (br d, IH), 5.74 (s, 2H), 4.50-3.00 (m, 8H), 2.81 (s, 3H).

Primer 27: 13- benzotiiazol- 2- il{ 2-[ 3-( dimetilamino) propoksi] pirimidin- 4- il| acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi 3-dimetilamino-l-propanol umesto (3-morfolin-4-il fenil)metanol. Y = 65%; Nf(ES): 353.2; HPLC (Uslovi b, max plot): 100%, rt. 1.77 min.'H NMR (DMSO-d6) 5 9.46 (brs, IH), 7.94-7.82 (m, 2H), 7.74 (brd, IH), 7.46-7.41 (m, IH), 7.31-7.26 (m, IH), 6.70 (br d, IH), 4.73-4.62 (m, 2H), 3.30-3.20 (m, 2H), 2.83-2.82 (m, 6H), 2.28-2.18 (m, 2H).

CHN analiza: Ci8H,9N5OS. 2 C2HF302.IH20 Izračunato: C 44.08 %, H 3.87 %, N 11.68 %; Nađeno: C 43.71 %, H 4.01 %, N 11.67 %.

Primer 28: l, 3- benzotijazol- 2- iU2-(' 2-( 4- metilpiperazin- l- il) ethoksi] pirimidin- 4- il } acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi 2-(4-metilpiperazin-l-il)etanol umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol.Y = 7%; M"(ES): 393.2; M+(ES): 395.1; HPLC (Uslovi b, max plot) 97.4% ; Rt 1.64 min. 'H NMR (DMSO-d6) 8 7.94-7.88 (m, 2H), 7.75 (d,J = 7.9Hz, IH), 7.46-7.41 (m, IH), 7.31-7.26 (m, IH), 6.71 (brd, IH), 4.83 (brt, 2H),3.58-3.05 (m, 8H), 2.92-2.68 (m, 5H).

Primer 29: L3- benzotiiazol- 2- il( 2- j2-[ 2-( dimetilamino) etoksi| ctoksi} pirimidin- 4- il)

acetonitril

Naslovno jedinjenje dobijeno je primenom istog protokola koji je naveden i gore, u Primeru 10, naznačeno time da se koristi 2-[2-(dimetilamino)ethoksi]etanol umesto (3-morfolin-4-ilfenil)metanol. Y = 56%; M<A>ES): 384.2; HPLC (Uslovi b, max plot): 99 %, rt. 1.77 min.<]>H NMR (DMSO-d6) 5 9.38 (br s, IH), 7.99-7.97 (m, IH), 7.95-7.93 (m, IH), 7.77 (d, J = 7.9Hz, IH), 7.50-7.45 (m, IH), 7.36-7.30 (m, IH), 6.78 (br d, IH), 4.86-4.77 (m, 2H), 3.98-3.91 (m, 2H), 3.84-3.81 (m, 2H), 3.33-3.28 (m, 2H), 2.81-2.80 (m,6H), 2.38 (s,6H).

Primer 30: Pripremaformulacija ( 2 )i ( 6) benzotijazol makrogol glicerida hlađenjem spreja

1. Opšta procedura pripreme

Odgovarajuća količina Gelucire u obliku praha istopljena je u vodenom kupatilu sa termostatom (R2) (Slika 5). Odgovarajuća količina benzotijazola (Jedinjenje A) u obliku praha, opciono mikronizovana mlevenjem pod vazdušnimn mlazom, (40% w/w izračunato na ukupni sastav za formulaciju (2) i 30% w/w izračunato na ukupni sastav za formulaciju (6)) dispergovano je u istopljeni ekscipijens. Ova masa je držana u uslovima neprestanog mešanja u trajanju od oko 30 min, sve dok nije dobijena homogena disperzija. Gelucire napunjen benzotijazolom potom je mešan u trajanju od 5 minut korišćenjem homogenizatora (IKA, model T25-basic Turrax®) na maksimalnoj brzini (24000 rpm) pre nego što je prebačen u reaktor (R2). Ovaj ekscipijens/suspenzije je držan u reaktoru (R2) neprestano mešajući na temperaturi od oko 80°C. Ova temperatura kontrolisana je uz pomoć Digiterm 2 000 grejača i i praćena termometerom.

Gelucire napunjen benzotijazolom je potom premešten iz reaktora (R2) u komoru za hlađenje SD81 stavljanjem ove posude pod pritisak, po mogućstvu na 100 mbar ili više kroz cevi za punjenje (A) koje se održavaju na temperaturi dovoljnoj da se izbegne hlađenje suspenzije u samim cevima. Alternativno, može da se koristi peristaltička pumpa za prenos suspenzije iz reaktora do komore za hlađenje SD81.

Gelucire napunjen benzotijazolom je potom uveden u komoru za hlađenje SD81 kroz mlaznicu pod azotnim fluksom (atomizrajući azot), po mogućstvu na temperaturi od između 50-80°C. Električni otpor se koristi da se obezbedi adekvatna temperatura atomizrajućeg azota kao preporučene alternative propuštanju gasa kroz navoj u zagrejanom kupatilu u cilju zagrevanja.

Hladni azotni gas (azot za želiranje) dobijen mešanjem azota uparenog iz izvora tečnog azota (B) sa azotnim gasom na sobnoj temperaturi (C) proušta se u komoru za hlađenjje SD81, na temperaturi između -50°C i +20°C, ali po mogućstvu na temperaturi između -30°C i +10°C.

Sve cevi za cirkulaciju azota pažljivo su uređene da se na najmanju meru svede izmena toplote sa spoljašnjom sredinom i da se pomogne u održavanju temperature.

Ulazne i izlazne temperature komore za hlađenje SD81 praćene su pomoću senzora PtlOO. Temperatura mlaznice je po mogućstvu drži na temperature preko 50°C da bi se izbegla svaka blokada.

Udaljenost između reaktora i mlaznice treba da bude minimalna, da bi se smanjio pad pritiska u liniji napajanja.

Veće mlaznice (otvor 1.4 mm/ kapica 2.2 mm) po mogućstvu se koriste za suspenziju sa većom viskoznošću, kao što je suspenzija za pripremu formulacije (2).

Čestice i pelete dobijene na ovaj način prikuplkjaju se u F, a potom u H posle separacije od gasnog protoka u ciklonu G.

2. Benzotijazol

1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, (Jedinjenje A) sintetizovan je kao stoje opisano u Primeru 1 opisanom u WO 03/047570. Jedinjenje A se koristi kao oblik soli mesilata koji ima molekulsku težinu od 649.75 Da, sa odnosom so/baza 1.42 ( molekulska težina jedinjenja A kao slobodne baze iznosi 457.55 Da).

3. Ekscipijensi:

Gelucire 50/13 (Stearoil makrogol-32 gliceridi) kao što je opisano u Primeru 1.

4. Makrogol gliceridni sastavi (2) i (6)

Sastav stearoil makrogol glicerid peleta (2) ima identičan sastav kao što je opisano u Primeru 2. Sastav stearoil makrogol glicerid peleta (6) ima sledeći sastav:

Jedinjenje A (mesilatna so) 30% w/w

Gelucire 50/13 70% w/w

Sastavi (2) i (6) bili su proizvedeni u skladu sa opštom procedurom koja je opisana gore.

Za sastav (2), upotrebljeno je 80 g praha jedinjenja A i 120 g praha Gelucire 50/13, pa je topljenje matrice Gelucire obvljeno u vodenom kupatilu sa termostatom na 60°C.

Za sastav (6), upotrebljeno je 30 g praha jedinjenja A i 70 g praha Gelucire 50/13, pa je topljenje matrice Gelucire obvljeno u vodenom kupatilu sa termostatom na 60°C.

Ovi procesi su davali prinos od 64% za sastav (2), odnosno 55% za sastav (6).

5. Fiziko-hemijske karakteristike

5.1. Sadržaj leka

Sadržaj leka meren je uz pomoć RP-HPLC (37.6% za sastav (2) koji je dobijen hlađenjem spreja).

5.2. Termička analiza

Termička analiza obavljena je uz pomoć DSC analize i rengenskom difrakcijom praha.

5.4. Morfologija čestica

Morfologija čestica sastava (2) i (6) dobijenih hlađenjem spreja analizirana je stereomikroskopijom na suvom (STEMI 2000-C Carl Zeiss, sa uvećanjem 16). Oblik i veličina čestoca pokazali su se pravilnim. Cestice sastava (2) dobijene hlađenjem spreja pokazale su poboljšanu pravilnost u smislu oblika i veličine poređenju sa česticama istog sastava (2) koji je dobijen processom u skladu sa Primerom 2, pre mlevenja (Slika 7).

Ovo pokazuje da metoda u skladu sa Primerom 30 obezbeđuje dobijanje pravilnih čestica bez potrbe za dodatnim korakom mlevenja.

5.5. In vitro test rastvaranja

Analiza testova solubilizacije sastava (2) obavljena je korišćenjem testera za rastvaranje sa aparatom USP II (lopatica). Podloga za rastvaranje bila je FeSSIF (Simulirana intestinalna tečnost u sitom stanju, bez lecitina) a brzina rotacije održavana je na 75 rpm. Pokazalo sc daje profil brzine rastvaranja veoma brz, gde se više od 80% supstance leka rastvaralo posle 1 sat (Slika 6) i bilo je poboljšano u poređenju sa masom.

Primer 31: Model ekperimentalnog alergijskog encefalomijelitisa ( EAE)

Jedinjenja i/ili formulacije u skladu sa ovim pronalaskom mogu sc procenjivati u smislu njihove aktivnosti na modelu multiple skleroza kod životinja.

Životinje

Korišćene su ženke miševa C57BL/6NCHBR . Miševi su držani u žicanim kavezima (cm 32x14x13h) sa hranilicama od nehrđajućeg čelika i držane na standardnoj ishrani (4RF21, Charles River, Italy) i vodi koje su dobijalead Ubitum.Od 7. dana vlažne pelete su takođe stavljane na dno kaveza. Uz automatski ssitem za vodu korišćene su i plastične boce.

Eksperimentalna procedura

Miševi su imunizovani (dan = 0) injiciranjem s.c. u levi bok 0.2 ml emulzije koja se sastojala od 200 pg MOG35-55 peptida (Neosvstem, Strasbourg, France) u kompletnom Freundovom adjuvantu (CFA, Difco, Detroit. U.S.A.) sa sadržajem 0.5 mgMycobacterium tuberculosis.Neposredno posle toga, primale su i.p. injekciju 500 ng toksina pertussisa (List Biological Lab., Campbell, CA, U.S.A.) koji je rastvoren u 400 pL pufera (0.5 M NaCl, 0.017% Triton X-100, 0.015 M Tris, pH = 7.5). Drugog dana, životinjama je data druga injekcija 500 ng pertussis toksina.

Sedmog dana, miševi su primili drugu dozu od 200 pg MOG35.55 peptida u CFA injicirano s.c. u desni bok. Sa početkom posle otprilike 8-10 dana, ova procedura je za posledicu davala progresivnu paralizu, koja je polazila od repa, pa se podizala do prednjih udova.

Životinje su individualno merene, i ispitivane na prisustvo paralize koja je procenjivana u skladu sa sledećim sistemom ocenjivanja(l):

0 = nema znakova boleste

0.5 = parcijalna paraliza repa

1 = paraliza repa

1.5 = paraliza repa + parcijalna jednostrana paraliza zadnjih udova

2 = paraliza repa+ bilateralna slabost zadnjih udova ili parcijalna paraliza

2.5 = paraliza repa + parcijalna paraliza zadnjih udova (donja karlica)

3 = paraliza repa +kompIetna paraliza zadnjih udova

3.5 = paraliza repa + paraliza zadnjih udova + inkontinencija

4 = paraliza repa + paraliza zadnjih udova + slabost ili parcijalna paraliza prednjih udova

5 = moribund ili smrt

Mortalitet i kliniučki znaci su praćeni svakodnevno u svakoj terapijskoj grupi od strane tehničara koji nije znao koju su terapiju životinje primale.

Svakodnevna terapija jedinjenjima ili samo nosačem, ili referentnim jedinjenjem započinje 7. dana i nastavlja se u trajanju od 15 ili 21 uzastopnih dana u svim grupama.

Histopatološki pregled

Na kraju perioda terapije, svaka od životinja je anestezirana natrijum pentobarbitalom i transkardijalno perfundovana, fiksirana sa 4% paraformaldehidom kroz levu komoru. Zatim su fiksirane kičmene moždine pažljivo disecirane.

Režnjevi kičmene moždine su ukalupljeni u parafinske blokove. Rađeno je rezanje i prebojavanje hematoksilinom i eozinom, i prebojavanje CD45 zbog zapaljenja i Kluver-PAS (Luxol fast blue plus Periodična Kiselina, Schiffovo prebojavanje) i prebojavanje po Bielchovvskom u cilju otkrivanja demijelinacije i gubitka aksona.

U kičmenoj moždini, ukupna površina svih preseka izmerena je za svaku životinju kao tačke preseka na mreži 10x10 pri uvećanju od 0.4x0.4 mm po mreži. Perivaskularni inflamatorni infiltrati brojeni su na svakom preseku da bi se dobila ukupna vrednost za svaku životinju i procenila kao broj infiltrata po mm<2>. Demijelinatacija i površine gubitka aksona mereni su za svaku životinju kao tačke preseka mreže 10x10 pri uvećanju od 0.1x0.1 mm po mreži i izražene kao procenat ukupne površine demijelinacije u odnosu na ukupnu površinu svih preseka.

Podaci o proceni i statistička analiza

Rezultati kliničkih i histopatoloških opservacija izraženi su kao srednja vrednost (±SEM) skora za svaku terapijsku grupu. Vrednosti dobijene u grupama koje su primale lekove upoređene u sa rezultatima pozitivne kontrolne grupe. Značajnost razlika između grupa u odnosu na klinički skor analizirana je jednosmernom ANOVA metodom, a potom testiranjem značajnosti (p<0.05) po Fisherovom testu.

Razlike između grupa na prisustvo perivaskularnih imflamatornih infiltrate i obima demijelinizacije i gubitka aksona u kičmenoj moždini kao i podaci o telesnoj težini analizirania su jednosmernom ANOVA metodom, a potom testiranjem značajnosti (p<0.05) po Fisherovom testu.

Primer32;Model astme

Jedinjenja i/ili formulacije u skladu sa ovim pronalaskom mogu se procenjivati i po njihovoj aktivnosti u jednom modelu bolesti koja je povezana sa zapaljenjem pluća, kao što je astma.

Može se opažati dejstvo ovih jedinjenja i/ili sastava ovog pronalaska na responsivnost disajnih puteva kao odgovor na provokaciju metaholinom, upalu disajnih puteva, eozinofiliju i produkciju mukusa. Dejstvo ovih jedinjenja i/ili sastava ovog pronalaska na IL-2 i IFN-g koje proizvode pulmonarni limfociti koji su dobijeni pomoću BAL može se posmatrati i na ovom modelu. Miševi Balb/c su imunizovani pomoću 10 mg ovalbumina (OVA) u 0.2 ml aluma, i ubrizgani i.p.. 14 dana kasnije.

Jedinjenja ili formulacije u skladu sa ovim pronalaskom (20, 45, 70 i 100 mg/kg) ili samo nosač (0.9 % NaCl) davani su p.o. 1 h pre i 4 h posle provokacije OVA intranazalnim putem. Ova procedura je ponavljana svakodnevno tokom 5 dana. Deksametazon testiran na 0.5 mg/kg može da se koristi kao referentna terapija. Kontrolni miševi su senzitizovani slanim rastvorom, i izlagani istome tokom 5 dana korišćenjem samo 0.9% NaCl.

Responsivnost disajnih puteva merena je 24 časa po poslednjoj provokaciji pomoću OVA tako što je beležena kriva respiratornog pritiska pletozmografijom celog tela, kao odgovor na inhalirani metaholin u koncentraciji od 3 x 10-2 M, što je praćeno dokom 15 minutnog perioda. Ova metoda omogućava merenje spontanog disanja kod nesputanog miša unutar komore od Pleksiglasa. Reaktivnost disajnih puteva se izražava kao promenljiva koja je poznata kao pojačana pauza (Penh), jedna izračunata vrednost koja je u korelaciji sa merom otpora disajnih puteva, impedancom, i intrapleuralnim pritiskom kod tog istog miša. Penh = (Te/Tr-1) x Pef/Pif (Te, vreme izdisanja; Tr, vreme relaksacije; Pef, vršni ekspiratorni protok; Pif, vršni inspiratorni protok).

Bronho Alveolarna Lavaža (BAL) rađena je 72 h posle izlaganja OVA. Po utvrđivanju ukupnog broja ćelija, pripremane su pločice (slajdovi), prebojavane, i diferencirane na eozinofile, neutrofde i mononuklearne ćelije, tako što je brojano minimum 200 ćelija po slajdu, a rezultati su izražavani kao brojevi svakog pojedinog tipa ćelija.

Dva dana po poslednjem izlaganju, miševi su žrtvovani. Pluća su nežno naduvavana instilacijom OCT (Optimum rezanog tkiva) jedinjenja (TissueTeck, Miles Inc.), koje je smeštano u OCT, zamrzavano, i tako zamrznuto rezano na slojeve. Rađene su različite vrste prebojavanja: A) May-GrunWald-Giemsa da se ćelijska infiltracija proceni u plavom, B) DiaminoBenzidine za infiltraciju eozinofila smeđom bojom C) Alcian Blue/Periodična Kiselina Schiffovo prebojavanje na produkciju mukusa plavom bojom. Pregled histoloških promena ovih preseka rađen je svetlosnom mikroskopijom. Mikroskopijom su beležene i slike reprezentativnih polja.

Ukupni broj leukocita dobijen iz disajnih puteva metodom BAL stimulisan jein vitropomoću anti-CD3 antitela tokom 48 h. Kvantifikacija IL-4, IL-5, IL-2, IFN-g i TNF-a sekretovanih u supernatantu obavljana je korišćenjem citokinskog kompleta citometričnog snopa perli (CBA) koje proizvodi (BD PharMingen).

Primer 33; Model endometrioze

Jedinjenja i/ili formulacije u skladu sa ovim pronalaskom mogu se procenjivati na njihovu aktivnost u modelu endometrioze kod miševa ili pacova.

Model miša:

Humano endometrijalno tkivo ubrizgava se ogoljenoj ženki miša kojoj su hirurški uklonjeni jajnici da se uspostavi bolest( Bruner- Tran etal, 2002, Ann NYAcadSci, 955:328- 339).Endometrijalne biopsije koje su dobijene od normalnih dobrovoljaca ili pacijenkinja sa endometriozom isečene su na male komade i gajene u kulturi u prisustvu estradiola u trajanju od 24h. Tretirana tkiva su ubrizgavana supkutano ili intraperitoneano ogoljenoj ženki miša kojoj su hirurški uklonjeni jajnici sa implantom estradiola. U roku od 2-4 dana po injekciji, kod ovih životinja razvile su se ektopične endometriotske lezije. Terapija bilo progesteronom ili jedinjenjem ili fomulacijom inhibitora ovog pronalaska započeta je 10-12 dan po ubrizgavanju tkiva. Samo jedinjenje je davano u dozi od lOmg/kg i 30mg/kg/ po životinji u trajanju od 30 dana. Raniji radovi u kojima je korišćen isti model utvrdili su da progesteronska terapija sprečava progresiju bolesti, pa je zato korišćena kao kontrola. Po završetku terapije, životinje su žrtvovane, lezije koje su se razvile od transplantiranog tkiva nađene na supkutanim i intraperitonealnim lokacijama su izmerene (i njihov broj i njihova veličina).

Procenjivano je dejstvo jedinjenja i/ili formulacija ovog pronalaska na regresiju uspostavljene bolesti.

Model pacova:

Endometrioza je indukovana kod pacova, kao što je opisano ranije( D ' Antonio et al, 2000, J. Reprod.

Immimol 48:81- 98).

Ukratko, autologni fragment roga materice transplantiran je na unutrašnju površinu abdominalnog zida kod pacova. Tri nedelje posle ove transplantacije veličina i vijabilnost presađenog tkiva je izmerena. Nedelju dana posle potvrđivanja pripajanja tkiva, započetea su terapije.

Kontrolna grupa je primala samo nosač Jedinjenje i/ili formulacije ovog pronalaska davani su oralno (po) od lOmg/kg i 30mg/kg/ po životinji dnevno.

Terapija jedinjenjem i/ili formulacijom sprovođena je u trajanju od devet dana, životinje su anestetizirane 2 časa po poslednjoj terapiji, pa su uzeti uzorci krvi. Površinski deo fokusa koji liči na endometriozu je meren, pa su te površine koje liče na endometriozu ispirane PBS-om, a uzeti su i ispirci kontralateralnog dela materice za merenje citokina. Fokusi koji liče na endometriozu i slezina su uklonjeni u cilju histološke analize, odnosno merenja aktivnosti NK ćelija .

Procenjivano je dejstvo jedinjenja i/ili formulacija ovog pronalaska na regresij uutvrđene bolesti.

Primer34:Model fibroze

Jedinjenja i/ili formulacije u skladu sa ovim pronalaskom mogu se podvrgnuti i sledećim ispitivanjima a se pokaže njihova korisnost za terapiju skleroderme i njenih terapijskih implikacija kao što su sistemska skleroza, poremećajislični sklerodermi ili bez skleroderme.

Modeli fibroze opisani su u WO 03/047570 i mogu da se koriste za određivanje gubitka telesne težine miševa koje se obično pokreće plućnom fibrozom indukovanom bleomicinom, da se analiziraju fokalne fibroztične lezije koje se histološki određuju 17 dana po davanju bleomicina, da se konkretno izmeri sadržaj hidroksiprolina u plućima miševa tretiranih bleomicinom.

Claims (23)

1. Jedan farmaceutski sastav koji obuhvata benzotijazo] Formule (I): kao i njegove tautomere, njegove geometrijske izomere, njegove optički aktivne forme, kao što su enantiomeri, diastereomeri i njegove racematne forme, kao i njegove farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time daje: G jedna pirimidinil grupa; L je jedna Cl-C6-alkoksi, ili amino grupa, ili 3-8-člani heterocikloalkil, koji sadrži najmanje jedan heteroatom odabran između N, O i S; R' se odabire iz grupe koja uključuje ili obuhvata vodonik, sulfonil, amino, Cl-C6-alkil, C2-C6-alken.il, C2-C6-alkinil, Cl-C6-alkoksi, aril, halogen, cijano i hidroksi; ijedan makrogol glicerid.

2. Sastav u skladu sa zahtevom 1 naznačeno time da makrogol glicerid bude jedan stearoil glicerid.

3. Sastav u skladu sa zahtevima 1 ili 2 naznačeno time da makrogol glicerid bude Gelucire® 50/13.

4. Sastav u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva naznačeno time daje ta formulacija obuhvata Gelucire® 50/13 u količini od 40 do 95% w/w u odnosu na ukupni sastav.

5. Sastav u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva naznačeno time daje ta formulacija obuhvata Gelucire® 50/13 u količini od 40 do 60% w/w u odnosu na ukupni sastav.

6. Sastav u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva koji sadrži količinu benzotijazola od 5% w/w do 40% w/w u odnosu na ukupni sastav.

7. Sastav u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva koji sadrži količinu benzotijazola benzotijazola od 20% w/w do 40% vv/vv u odnosu na ukupni sastav.

8. Sastav u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva naznačeno time daje taj benzotijazol 1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril,.

9. Sastav u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva naznačeno time da je taj benzotijazol 1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfoIin-4-ilmetil-benziloksi)- pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so.

10. Sastav u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva naznačeno time da taj sastav dodatno uključuje ijedan poloksamer.

11. Sastav u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva naznačeno time daje taj sastav dodatno uključuje ijedan poloksamer i naznačeno time dataj poloksamer bude Poloksamer 188.

12. Sastav u skladu sa u skladu sa ma kojim zahtevom od 1 to 9 naznačeno time da taj sastav dodatno uključuje ijedan Polietilen Glikol (PEG).

13. Sastav u skladu sa ma kojim zahtevom od 1 do 9, naznačeno time da taj sastav obuhvata najmanje 20% w/w 1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatne soli i Gelucire® 50/13 u količini od 40 do 80% w/w u odnosu na ukupni sastav.

14. Sastav u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva naznačeno time da taj sastav bude odabran iz sledećih grupa: 1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so 20% w/w Gelucire® 50/13 80% w/w; 1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil43enziloksi)-pirimidin-4-yl]-acetonitril, mesilatna so 40%>w/w Gelucire® 50/13 60% w/w; 1,3 benzotijazoI-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so 30% w/w Gelucire® 50/13 70% w/w; 1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfoIin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so 20% vv/vv Gelucire® 50/13 40% w/w Lutrol® F68 40% w/w; 1,3 benzotijazol-2-iI-f2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so 20% vv/vv Gelucire® 50/13 40% vv/vv Lutrol® E6000 40% w/w; i 1,3 benzotijazol-2-il-[2-(4-morfolin-4-ilmetil-benziloksi)-pirimidin-4-il]-acetonitril, mesilatna so 5% w/w Gelucire® 50/13 95% w/w.

15. Upotreba sastava u skladu sa zahtevima 1 do 14 za pripremu farmaceutske formulacije za terapiju poremećaja odabranih iz auto-imunih poremećaja, respiratornih poremećaja, neurodegenerativnih ili poremećaja nervnog sistema, inflammatornih poremećaja, skleroderme i poremećaja sličjnih sklerodermi, dijabetesa, fibroze, raka i endometrioze.

16. Upotreba u skladu sa zahtevom 15 naznačeno time daje taj poremećaj odabran iz sledećih: multipla skleroza, astma i reumatoidni arthritis.

17. Metodu za pripremu sastav a u skladu sa zahtevima 1 do 14, naznačeno time da pomenuta metoda uključuje korake koji obuhvataju sledeće: -obezbeđivanje benzotijazola u skladu sa Formulom (I); -dodavanje benzotijazola u skladu sa Formulom (I) u istopljeni preparat makrogol glicerida.

18. Metoda u skladu sa zahtevom 17 naznačeno time da taj benzotijazol bude inkorporisan u istopljeni preparat makrogol glicerida u obliku praha neprestano mešajući.

19. Metoda u skladu sa zahtevima 17 ili 18 naznačeno time da taj benzotijazol bude inkorporisan u istopljeni preparat makrogol glicerida u obliku praha neprestano mešajući i naznačeno time da ta metoda dodatno obuhvata i sledeće korake -hlađenje homogene istopljene disperzije -mlevenje dobijenih čvrstih čestica.

20. Metoda u skladu sa zahtevima 19, naznačeno time daje korak hlađenja zapravo atomizacija pod C02.

21. Metoda u skladu sa zahtevima 19 do 20, naznačeno time da ta metoda dodatno obuhvata i korak sušenja zamrzavanjem po koraku melvenja.

22. Metoda u skladu sa zahtevima 17 ili 18 naznačeno time da taj benzotijazol bude inkorporisan u istopljeni preparat makrogol glicerida u obliku praha neprestano mešajući i naznačeno time da ta metoda dodatno obuhvata i korak hlađenja homogene istopljene disperzije hlađenje spreja.

23. Metoda u skladu sa zahtevima 17 naznačeno time da taj benzotijazol bude inkorporisan u istopljeni preparat makrogol glicerida u obliku vodenog rastvora neprestano mešajući.