RS51247B

RS51247B - Kondicionirana kompozicija krvi i postupak za njenu proizvodnju

Info

Publication number: RS51247B
Application number: RSP-2010/0012A
Authority: RS
Inventors: Julio Reinecke; Peter Wehling
Original assignee: Orthogen Ag.
Priority date: 2006-02-03
Filing date: 2007-02-02
Publication date: 2010-12-31
Also published as: US20090047242A1; WO2007090569A8; CN101378768A; CA2640002A1; HRP20090684T1; KR20080100425A; EP1984006A1; EA200870222A1; EP1984006B1; PL1984006T3; ZA200805975B; WO2007090569A1; DE502007001793D1; BRPI0707360A2; JP2009525297A; PT1984006E; DK1984006T3; CY1109735T1; UA90048C2; EA014435B1

Abstract

Postupak za proizvodnju jedne kondicionirane kompozicije krvi iz krvi, koji sadrži sledeće stupnjeve:a) inkubacija krvi, koja je uzeta iz jednog ljudskog ili životinjskog tela u jednom modifikovanom sudu sa unutrašnjom površinom pri temperaturi od 10 do 40 °C, u cilju kondicioniranja krvi, pri čemu dolazi do indukovanja faktora;b) dobijanje jedne kondicionirane kompozicije krvi sa indukovanim faktorima u jednom modifikovanom sudu, pri čemu je sud tako modifikovan da pokazuje unutrašnju površinu od od 200 mm2 do 750 mm2 po 1 mL inkubirane krvi.Prijava sadrži još 35 patentnih zahteva.

Description

Ovo otkriće obuhvata postupak za proizvodnju kondicionirane kompozicije krvi, koja sadrži indukovane faktore ili citokine, kao i kondicionirane kompozicije krvi i njenu primenu za lečenje i zaštitu od tegoba ljudskog ili životinjskog tela.

Stanje tehnike

Poznato je da komponente krvi, pre svega proteini, faktori i citokini kao eritropoietin, insulin ili interferon, koji se nalaze u krvi, odnosno u serumu krvi, imaju terapeutsko ili preventivno dejstvo. Poznati faktori, kao interleukin-l-receptor-antagonist (IL - IRa), usporavaju dejstvo procesa izazvanih zapaljenjem. Nadalje je poznato, da takve komponente krvi mogu delimično da budu proizvedene u tkivu krvi, odnosno da budu otpuštene iz ćelija krvi u krvnu plazmu.

Proizvodnju ili oslobađanje određenih komponenata krvi, kao što su faktori i citokini, moguće je povećati primera radi inkubacijom čiste krvi izvađene iz životinjskog ili čovečijeg tela. Posle inkubacije u krvi se nalazi veća koncentracija određenih faktora. Ove komponente krvi mogu se po potrebi izolovati. Takođe je moguće krv, koja sadrži indukovane faktore, osloboditi od prisutnih ćelija i takozvani indukovani serum kervi (re) aplicirati u životinjsko ili ljudsko telo.

Proces povećanja produkcije ili oslobađanja komponenata krvi u čistoj krvi, kao što su faktori i citokini označava se kao "indukcija". Jedan poznati postupak indukcije komponenata krvi u čistoj krvi sastoji se prevashodno u tome da se iz jednog životinjskog ili ljudskog tela uzme čista krv i zatim u jednom modifikovanom špricu za jednokratnu upotrebu u kojem su prisutne staklene kugle, prethodno opranu sa hrom-sumprnom kiselinom, i inkubira određeno vreme pod uslovima kultiviranja (Meijer et al. Inflamm. res. 52 (2003): 1-4). Zatim se izdvoje ćelijski sastavni delovi, tako da se dobije kondicionirana kompozicija seruma krvi u kojoj su neki faktori i citokini inducirani. Shodno tome iz ljudske čiste venozne krvi dobija se jedan serum u kojem je povećan udeo antizapaljenskih citokina kao što su interleukin-1-receptorantagonist (IL - IRa), interleukin-4 (IL - 4) i interleukin-10 (IL - 10) u odnosu na sveže uzetu čistu krv. Vreme inkubacije čiste krvi pri tome iznosi 24 časa, a temperatura inkubzcije je oko 37 °C.

Na takav način proizvedeni serum krvi dobijenog sastava se koristi za lečenje različitih zapaljenjskih oboljenja i bolesti imuniteta, primera radi reumatoidnnog artritisa. Pokazalo se primera radi, da reumatoidni artritis može lokalnim i/ili sistematskim davanjem, na opisani način pripremljene kondicionirane kompozicije seruma krvi, da bude usporen ili izlečen. Efekat terapije je ipak značajno poboljšanje.

Pored toga, postoje i druge bolesti, primera radi povrede mišićnog tkiva, koje najmanje na modelu životinjskog tkiva mogu da budu lečene lokalnim ili sistematskim davanjem gen tehnikom proizvedenih citokina kao što su IL - IRa i slični. Kompozicije seruma krvi dobijene na već poznati način pokazuju u ovome slučaju nikakve ili nezadovoljavajuće efekte. Pri tome su povrede mišića u oblasti sportske medicine vrlo česte; ove povrede učestvuju sa udelom od 30 % svih u sportu dobijenih bolesti ili povreda. Preko 90 % ovih sportskih povreda mišića su posledica ili pritiska (udara) ili ekstremnog istezanja mišića. Ove povrede su redovno praćene pojavom jakih bolova i nesposobnošću povređenog da dalje trenira, odnosno da se karatko ili duže vreme bavi sportom. Stanje tehnike je stoga potrebno poboljšati.

Jedno oboljenja konja, koje treba shvatiti ozbiljno, predstavlja hronično ili periodično zapaljenje očiju (equine rezidivierende Uveits, ERU). Prema sadašnjem stanju tehnike, kod ovih hroničnih zapaljenja polazi se od toga daje alergija na takozvane leptospiren, kao ijedna akutna ili hronična infekcija sa leptospiren ima značajnu ulogu pri nastajanju hroničnih zapaljenja očiju. U Nemačkoj vlada stepen zaraženosti sa ovim parazitskim mikroorganizmima i do 80 %. Kod jednog dela inficiranih životinja se manifestuju različite slike bolesti, a među njima i hronično zapaljenje očiju. Odlučujući uticaj na pojavu bolesti čini se da ima to da li imuni sistem životinje toleriše ili ne leptospire kao parazitski organizam.

Kod konja može da dođe do ukočenosti izazvane jakim zapaljenjem, odnosno nadražajem tetiva . Jedan dalji razlog ukočenosti mogu da budu degenerativne promene u tkivu tetiva, takozvane "Ćore Lesions". One su praćene odigravajem značajnih zapaljenjskih reakcije. Simptomi zapaljenja i ukočenosti se po pravilu leče sa glukokortikoidima (Cortisonon), maceracijom ćelija (ACell®), koncentracijom trombocita (Osteokin®, Magellan® etc), ili pak preparacijom ćelija iz mekog tkiva iz kosti ili masnog tkiva (matične ćelije).

Slika bolesti neurodermitisa je prouzrokovana prekomernom reakcijom imunog sistema. Jedna terapija, koja se danas često koristi, je terapija sa mastima, koje sadrže kortizon, ali je ona praćena sporednim dejsvima.

Nadalje i kod stanovnika se često pojavljuju zapaljenja, odnosno nadražaji iritacije nervnog sistema sa često nepoznatom genezom. Pri tome dolazi do pojave bolova u leđima kao vrlo čestog simptoma. Preko bolova, kao uzročnik jedno zapaljenje može se pri tome često samo simptomatično lečiti davanjem sredstava protiv bolova, odnosno davanjem glukokortikoida (kao triamcinolon).

Endometrioza je jedna bolest, kod koje se ćelije, odnosno tkivo iz sluzokože materice naseljava u prostoru stomaka i tamo prouzrokuje najčešće dobroćudne tumore. Ovaj tumor je najčešće osetljiv na hormone i proizvodi zavisno od stanja hormona jake bolove. Operativna resekcija ili obrada hormonima mogu da pomognu protiv bolesti koje se pojavljuju kao posledične tegobe. Ipak pri tome redovno dolazi do povratka bolesti i recidiva. Tumori mogu toliko da postanu hronični i da prerastu druge organe pri čemu se pojavljuju jaki hronični bolovi. Simptomi se mogu učiniti podnošljivim samo uz dejstvo jakih sredstava protiv bolova. Oko 10 % žena između puberteta i menopauze oboljevaju od endometrioze i pri tome pokazuju jače ili slabije simptome. Jedna ekstremna manifestacija ove bolesti može da vodi i ka neplodnosti.

Postoji stoga potreba za poboljšanim alternativnim kompozicijama aktivnih supstanci, koje se mogu jednostavno proizvesti, kao i postupaka njihove proizvodnje za efikasno lečenje napred navedenih bolesti, kao i drugih bolesti koje se mogu lečiti sa faktorima i citokinima, koji se formiraju u krvi. Osnovu ovoga otkrića čini tehnički problem, koji se sastoji pre svega u tome da se stavi na raspolaganje poboljšan postupak za proizvodnju jedne kondicionirane kompozicije krvi, koja sadrži određene indukovane faktore i citokine i može se efikasno koristiti za lečenje i zaštitu.

Osnovni tehnički problem je uglavnom rešen stavljanjem na raspolaganje jednog postupka za proizvodnju kondicionirane kompozicije krvi, pri čemu se postupak izvodi preko sledećih stupnjeva: U stupnju (a) se krv, prevashodno čista venska krv iz ljudskog ili životinjskog tela uzima na poznati način, prvenstveno sveža pomoću punktacije vena. U stupnju (b), koji neposredno sledi, uzeta krv se inkubira u najmanje jednom modifikovanom sudu sa ciljem indukovanja faktora i citokina u sastavu krvi, što znači pospešivanje proizvodnje i otpuštanja takvih faktora i citokina iz tkiva krvi. Prema ovome pronalasku, temperatura krvi pri inkubaciji u modifikovanom sudu se kreće od 10 °C do 40 °C, prioritetno od 25 °C do 40 °C, a posebno prioritetno oko 37 °C. U stupnju (c) se jedan kondicionirana kompozicija krvi, koja je obogaćena određenim indukovanim faktorima i citokinima, dobij a u modifikovanom sudu.

Prema ovome pronalasku se pri inkubaciji krvi primenjuje najmanje jedan modifikovani sud, koji je naznačen time što unutrašnja površina po 1 mL inkubirane krvi iznosi najmanje 200 mm<2>/mL ili više, a naročito 224 mm<2>/mL ili više ili 283 mm 2/mL ili više. Shodno ovome pronalasku sud ima unutrašnju površinu od oko 200 do oko 750 mm<2>/mL, posebno prioritetno oko 250 do oko 650 mm<2>/ mL.

Prioritetno sud ima zapreminu punjenja od 5 mL ili više, 10 mL ili više, 50 mL ili više, 60 mL ili više ili 100 mL ili više. Primera radi, ako je predviđeno da se uzme 50 mL krvi i da se inkubira u tome slučaju unutrašnja površina modifikovanog suda treba prema ovome pronalasku da iznosi najmanje 6600 mm 2 (60 cm 2), prioritetno oko 10000 mm<2>do oko 37500 mm<2>(100 do 375 cm<2>). Ako je primera radi predviđeno da se uzme količina krvi od 10 mL i da se inkubira, u tome slučaju unutrašnja površina modifikovanog suda prema ovome pronalasku treba daje najmanje oko 2300 mm (23 cm<2>), prioritetno oko 2500 mm<2>do oko 7500 mm<2>(25 do 75 cm<2>).

Pod unutrašnjom površinom suda podrazumeva se ona površina u unutrašnjosti suda, koja pri inkubiranju dolazi u kontakt sa sastavom krvi koju treba kondicionirati, što znači daje u najvećem delu njome ovlažena.

Pronalazak predviđa da krv, koja je uzeta iz jednog ljudskog ili životinjskog tela, treba da bude inkubirana u jednom specijalno modifikovanom sudu sa određenim indeksom površine unutrašnje površine od 200 mm<2>/mL ili više. Pronalazači su na opšte iznenađenje pronašli da se po proceduri prema ovome pronalasku već posle relativno kratkog vremena u modifikovanom sudu može da dobije jedan kondicionirana kompozicija krvi, koji sadrži udeo određenih indukovanih faktora, kao što je primera radi faktor IL - 6, sa visokom koncentracijom. Pri tome, procedura prema ovome pronalasku, na opšte iznenađenje vodi ka jednoj kompoziciji krvi, koja ima visoko profilaktičko i terapeutsko dejstvo. Tako primera radi zapaljenjske bolesti zglobova, zapaljenja očiju kod konja, povrede tetiva, povrede nerava, endometrioza, neurodermitis, kao i povrede mišića mogu da budu uspešno lečene tako što se prema ovome pronalasku dobijena kondicionirana kompozicija krvi kao kompozicija seruma krvi daje u oboleli organizam ili na oboleli organ.

Po postupku prema ovome pronalasku može, primera radi, jedna kondicionirana kompozicija krvi dobijena iz čiste krvi ljudskog davaoca, da dostigne udeo IL - 6 od više od 2000 pg/mL. Poređenja radi, udeo IL - 6 u nekondicioniranoj čistoj krvi može da iznosi od 0,5 do oko 15 pg/mL. Po pravilu se prema ovome pronalasku dostiže 200 puta do 4000 puta povećan sadržaj IL - 6 u krvi.

Pored pažnje vređnog faktora IL - 6 u kondicioniranoj kompoziciji krvi sadržane su sa velikim udelom i neke druge terapeutski i profilaktički aktivne komponente, kao što su faktori i citokini. Tu se ubrajaju pored već poznatog faktora IL - 4, IL -10, i IL -IRa i potpuno neočekivano takođe i faktori kao interleukin-13 (IL - 13), interleukin-1 (IL - 1), a pre svega IL - 1(3, Tumor necrosis faktor (TNF), insulin-like growth factor (IGF), Transforming growth faktor (TGF), Platelet-derived grovvth faktor (PDGF), Fibroblast grovvth faktor (FGF) i Hepatocvte growth faktor (HGF). Prema tome, u kondiciranoj kompoziciji krvi, proizvedenoj prema ovome pronalasku, nalazi se prevashodno jedan "koktel" različitio efikasno indukovanih faktora ili citokina. Bez povezivanja sa teorijom može se konstatovati da prema ovome pronalasku dobijen "koktel" faktora i citokina predstavlja terapeutski i profilaktički visoko aktivnu kompoziciju aktivnih supstanci.

Pri tome mogu gore navedene aktivne supstance u okviru kompozicije krvi krvi da se nalaze u obliku vezikula, mikrovezikula ili eksozoma. Pod vezikulama i mikrovezikulama podrazumevaju se subćelijske komponente, koje između ostalog mogu da budu povezane na površini membrana imunih ćelija. Pod eksozomama se podrazuju subćelijske komponente, koje imaju strukturu sličnu vezikulama ali nanometarskih dimenzija i koje nastaju od takozvanog "multivesiculare bodies" i preko sekrecije imunih ćelija.

Pod "kompozicijom krvi" prevashodno se podrazumeva jedana kompozicija krvi, koja se pre svega sastoji od krvne plazme, seruma i krvnih zrnaca i koja sadži najmanje jednu komponentu, koja je izabrana između proteina kao što su faktori i citokini. Pod kompozicijom krvi, u okviru ovoga pronalaska podrazumeva se i jedna kompozicija seruma krvi. Kompozicija seruma krvi razlikuje se od jedne kompozicije krvi, pre svega po tome što kompozicija seruma krvi više ne sadrži ćelijske komponente. Jedna kondicionirana kompozicija seruma krvi dobij a se iz, prama ovome pronalasku proizvedene, kondicionirane kompozicije krvi, primera radi tako što se iz kompozicije krvi pomoću centrifuge, filtriranjem ili nekom drugom pogodnom metodom odstrane ćelijske komponente, tako da se dobije rastvor oslobođen ćelija, koji se sastoji od krvne plazme i komponenata seruma i koji sadrži najmanje još indukovane faktore i citokine.

U jednom prioritetnom načinu izvođenja ovoga pronalaska u jednom daljem stupnju se ćelijske komponente potpuno ili skoro potpuno uklone iz dobijene kondicionirane kompozicije krvi, tako da se dobija jedna kondicionirana kompozicija seruma krvi. Kondicionirani serum krvi može se koristiti, kao i kompozicija krvi dobij ene prema ovome pronalasku i pokazuje po pravilu iste prema ovome pronalasku definisane tehničke prednosti. Stručnjak će prema oblasti primene i svrsishodnosti koristiti kondicioniranu kompoziciju seruma krvi ili kondicioniranu kompoziciju čiste krvi. Prioritetno će stručnjak koristiti kondicioniranu kompoziciju seruma krvi.

Prioritetno se inkubacija krvi izvodi u najmanje jednom modifikovanom sudu, sve dok indukcija faktora i citokina dostigne potrebni nivo. Proizvodnja i lučenje indukovanih faktora i citokina počinje u tkivu krvi prevashodno od početka vremena inkubacije, tako da se količina aktivnih indukovanih faktora i citokina akumulira u kondicioniranoj kompoziciji krvi.

U jednom obliku izvođenja ovoga pronalaska, nastajanje IL - 6 u kompoziciji krvi pokazuje uspešnost i dostignuti stepen indukcije. Pri tome udeo IL - 6 prioritetno iznosi najmanje 30 pg/mL. Prioritetno se inkubacija u modifikovanom sudu izvodi tako dugo dok u kompoziciji krvi sadržaj IL - 6 ne dostigne najmanje 30 pg/mL. U jednoj daljoj prioritetnoj varijanti, inkubacija se izvodi tako dugo dok se ne dobije 200 pg/mL, prioritetno 500 pg/mL, a naročito ptioritetno 1000 pg/mL u kompoziciji krvi.

U jednom daljem obliku izvođenja, inkubacija se izvodi u trajanju od 36 časova. U jedno daljem obliku izvođenja inkubacija se izvodi u intervalu vremena od 9 časova ili manje. U jednom daljem obliku izvođenja inkubacija se izvodi u intervalu od 2 časa i više i do 36 časova i manje, prioritetno do 9 časova i manje.

U jednom daljem obliku izvođenja inkubacija krvi se izvodi pri smanjenom parcijalnom pritisku kiseonika (p02). Naročito prcijalni pritisak kiseonika za vreme inkubacije iznosi manje od 5 kPa, prioritetno manje od 3 kPa. U jednoj prioritetnoj varijanti inkubacija krvi se izvodi u jednom modifikovanom sudu bez prisustva kiseonika.

U jednom prioritetnom obliku izvođenja unose se u modifikovani sud posebni strukturni elementi sa velikom površinom, tako da se iz spoljašnje geometrije suda primarno dobijena unutrašnja površina uz pomoć unetih strukturnih elemenata povećava. Povećanje unutrašnje površine pomoću posebnih strukturnih elemenata iznosi prioritetno od 10 % do 200 %, a u jednoj varijanti od 10 % do 100 %. Tu se prioritetno ubrajaju strukturni elementi sa velikim odnosom površina/zapremina, kao što su kugle ili vlakna, ali i druge čestice kao prah ili granulat, ili kombinacija ovih strukturnih elemenata. Površina ovih strukturnih elemenata je prioritetno glatka. Prioritetno, mogu se u pojedinim slučajevima koristiti i strukturni elementi koji imaju i hrapavu površinu.

Stručnjak bira broj i oblik strukturnih elemenata prema oblasti primene i svrsishodnosti. Samo se po sebi razume, da će pri tome oblik i broj strukturnih elemenata biti tako izabran da suma površina dodatih strukturnih elemenata i unutrašnja površina modifikovanog suda budu jedna drugoj tako prilagođene, da se dobija prema ovome pronalasku predviđeni odnos površina/zapremina (indeks površine).

Modifikovani sudovi prioritetno treba da imaju unutrašnju površinu, koja nije pirogena. Modifikovani sudovi se prevashodno izrađuju od materijala koji nisu pirogeni.

Ako se u svojstvu unutrašnjih strukturnih elemenata koriste kugle, vlakna, prahovi, granulat ili mešvina istih, oni sadrže ili se sastoje prioritetno od sledećih izabranih materijala: metali, oksidi metala ili plastičnih masa ili mešavine istih. Odabrani primeri za to su staklo, korund, kvare, polistiren, polivinilhlorid, polieten i polipropen, kao i mešavine istih. Poseban prioritet ima borsilikatno staklo. Ovi materijali prevashodno ne sadrže pirogene.

Najmanje jedan modifikovani sud u svojoj unutrašnjosti prioritetno sadži staklene kugle, a poseban prioritet imaju kugle od borsilikatnog stakla, koje nije pirogeno i pri tome staklene kugle imaju srednji prečnik od 0,5 do 5 mm, prioritetno 1,5 mm, 2,5 mm ili 3,5 mm. Posebno prioritetno se u modifikovani sud, u zavisnosti od kapaciteta modifikovanog suda, unosi broj kugli od 10 do 500. Ako je primera radi, predviđeno korišćenje modifikovanog suda za 50 mL krvi u njega treba prioritetno uneti od 30 do 300 kugli, a naročito od 50 do 250 kugli, koje imaju prečnik prvenstveno od 3,5 mm.

U posebno prioritetnom izvođenju ovoga pronalaska mogu se primeniti sudovi koji su već poznati i koriste se za transfuzije u medicini ili pri prikupljanju odnosno čuvanju krvi, kao što su špricevi, cevi i kse za krv, koje se unošenjem u njih određenog udela strukturnih elemenata mogu modifikovati, tako da se dobija modifikovana posuda sa povećanom unutrašnjom površinom. Pronalazak prema tome predviđa za proizvodnju kondicionirane kompozicije krvi primenu najmanje jednog modifikovanog suda sa velikom unutrašnjom površinom i sa indeksom površine prema ovome pronalasku, koji sadrži unutrašnje strukturne elemente, koji su izabrani izmeću kugli, vlakana, praha, granulata, čestica ili kombinacije istih.

Podrazumeva se da stručnjak može da preduzme i druge mere da bi dobio modifikovani sud sa povećanom unutrašnjom površinom, koji se može koristiti prema ovome pronalasku. U jednom daljem prioritetnom načinu izvođenja predviđena je upotreba jednog suda, čija je unutrašnja površina posebnom obradom toliko povećana da se dostigne ovim pronalaskom predviđeni odnos površina/zapremina (indeks površine).

U jednom prioritetnom obliku izvođenja modifikovani sud ima elastične zidove, koji omogućavaju uzimanje krvi iz životinjskog i ljudskog tela bez prisustva vazduha u sudu. To je moguće izvesti tako što se u modifikovani sudsud bez vazduha uvodi krv i tek tada dolazi do širenja suda, tako da u sudu ne može da dođe do nastajanja prostora ispunjenog vazduhom. Podrazumeva se da se u ovome slučaju broj i oblik izabranih strukturni elemenata unetih u modifikovani sud u cilju povećanja njegove unutrašnje površine ne određuje prema maksimalnom kapacitetu modifikovanog suda već prvenstveno prema zapremini kompozicije krvi koju treba inkubirati.

Prioritetno se takav jedan sud bira među kesama predviđenim za davanje transfuzije, koje prioritetno predstavljaju jednostavne, dvostruke, trostruke ili višestruke sisteme kesa. Dok je jedan jednostavan sistem naznačen time, što po pravilu ima najmanje jedn otvor za punjenje, odnosno pražnjenje, dotle dvostruki, trostruki ili višestruki sistemi kesa predstavljaju sisteme više međusobno povezanih kesa, koje su u međusobnom kontaktu prioritetno povezane odgovarajućim crevima. Prioritetno su takve kese u najjednostavnijem slučaju dobijene zavarivanjem dve elastične folije postavljene jedna preko druge.

U jednom posebno prioritetnom obliku izvođenja najmanje jedan, prema ovome pronalasku korišćeni modifikovani sud predstavlja jednu kesu za krv ili sistem kesa, koje su shodno ovome pronalasku modifikovane punjenjem sa izabranim brojem i vrstom čestica, prioritetno staklenih kugli.

Prioritetno posuda predstavlja sistem kesa, kao što je dvokomorni sistem kesa za krv, koji se primenjuje za razdvajanje komponenata krvi iz uzete sveže čiste krvi pomoću centrifuge. Ako je sud modifikovan prema ovome pronalasku, prioritetno punjenjem staklenim kuglicama, tada se u njemu može izvoditi postupak prema ovome pronalasku za proizvodnju kondicionirane kompozicije krvi. Odmah zatim se iz kondicionirane krvi izdvajaju komponente krvi u sistemu kesa u cilju dobijanja kondicionirane kompozicije krvi oslobođene "čvrstih" komponenata krvi, odnosno kondicionirane kompozicije seruma krvi.

Jedn prioritetni dvokomorni sistem kesa za krv obuhvata najmanje jedan primarni sud i najmanje jedan sekundarni sud, koji zajedno čine jedan međusobno povezan sistem kesa. Primarni i sekundarni sud su povezani najmanje jednom vezom, koja može da se ztvara. U okviru ovoga pronalaska pod jednim "primarnim sudom" se podrazumeva jedan sud, odnosno posuda u koju se unosi krv, koju treba kondicionirati i zatim isto tako razdvojiti u pojedine komponente, i inkubira i zatim izvodi prvo frakcioniranje. Posebno prioritetno se primarni sud, sekundarni sud i crevo koje ih povezuje fiksiraju na jednu noseću ploču. Posebno prioritetno je povezivanje sudova preko creva snabdevenog najmanje jednom slavinom, ventilom i /ili zapušačem pomoću kojih se može prekinuti veza između sudova. Pod "sekundarnim sudom" se podrazumeva jedan sud, odnosno posuda u kojou se može potpuno ili delimično uneti u primarnom sudu potpuno ili delimično frakcionisana tečnost ili suspanzija i podvrgnuti još jednom frakcionisanju. Svaki ovaj sud je prioritetno snabdeven sa najmanje jednim ulazom i / ili izlazom, koji se moše zatvarati, a naročito jednim ulazom za unošenje, odnosno reaplikaciju komponenti krvi i / ili odvođenje, odnosno uzimanje komponenti krvi. Prioritetno je prema ovome pronalasku predviđeno unošenje u primarni sud određenih strukturnih elemenata, kao što su staklene kugle, odnosno punjenje primarnog suda sa staklenim kuglama.

U jednom prioritetnom načinu izvođenja se kese, odnosno sistem kesa sa krvlju, u cilju odvajanja čvrstih komponenata iz kondicionirane kompozicije krvi pomoću centrifugiranja, smešta u jednu kivetu centrifuge. Ona je prioritetno tako oblikovana da se kese, koje su izrađene prioritetno od elastičnog materijala, pri centrifugiranju rastegnu tako da zidovi kesa delimično i/ili potpuno nalegnu na unutrašnje zidove kivete centrifuge. Prioritetno se koristi jedna sterilisana kiveta. Pri tome je posebno pogodno što se opterećenje na istezanje zidova kesa i dobijenih ćelija redukuje za vreme rada centrifuge. Prioritetna primena kiveta pri centrifugiranju dozvoljava korišćenje mehanički lakših, tanjih i manje stabilnih materijala za izradu zida kesa za prioritetno elastične kese.

U jednom prioritetnom načinu izvođenja ovoga postupka, kompozicija ikubirane krvi je jedna alogena kompozicija krvi, prioritetno jedna kompozicija krvi, koja je u obliku čiste krvi uzeta od jednog ljudskog ili životinjskog davaoca i posle izvođenja postupka prema ovome pronalasku, može kao kondicionirana kompozicija krvi, prioritetno kao kondicionirana kompozicija seruma krvi, da se daje jednom ljudskom davaocu. U jednoj drugoj varijanti kompozicija krvi je autologna, što znači da su organizmi davaoca i primaoca identični. U ovoj posebno pogodnoj varijanti mogu sve prednosti identičnog davaoca i primaoca da dođu do izražaja. Stručnjak će birati vrstu i identitet davaoca prema nameni i svrsishodnosti. Pri tome mogu uopšteno rečeno da se koriste poznati kriterijumi i prednosti, koji su relevantni za izbor identičnog davaoca.

U jednoj alternativnoj varijanti je kompozicija krvi ksenogena. To znači daje krv uzeta iz stranog organizma. Prioritetno se pri tome iz organizma jednog životinjskog davaoca, primera radi svinje, uzima nekondicionirana kompozicija krvi u obliku čiste krvi i posle obrade prema ovome pronalasku, dobijena kondicionirana kompozicija krvi daje se individui koja se leči, a koja pripada drudoj vrsti, primera radi konj, čovek ili sportista.

Jedan dalji aspekt ovoga pronalaska je stavljanje na raspolaganje kondicionirane kompozicije krvi, koja može da se proizvede postupkom po ovome pronalasku ili će prioritetno biti proizvedena. Ona može, prema ovome pronalasku, da se koristi za tretman, ublažavanje, lečenje i profilaksu tegoba u ljudskom ili životinjskom telu. Kompozicija krvi prema ovome pronalasku sadrži indukovane faktore, koji nastaju pri izvođenju postupka prema ovome pronalasku i to najmanje 30, prioritetno više od 200, 1000, 5000, 10000 pg/mL, prvenstveno od 30 do 20000 pg/mL interleukina - 6. Podrazumeva se, da kondicionirana kompozicija krvi, dobijena postupkom prema ovome pronalasku, pored interleukina - 6, kao jednog od indukovanih faktora sadrži i druge indukovane faktore. Na opšte iznenađenje, bilo je moguće pokazati, da upravo kompozicija krvi dobijena prema ovome pronalasku sadrži "koktel" indukovanih faktora i prema ovome pronalasku pokazuje značajne prednosti i aktivnosti.

Prednost ima kondicionirana kompozicija krvi, koja pored interleukina-6 (IL - 6) sadrži najmanje još jednu dalju komponentu, koja je izabrana iz niza: interleukin-1 receptor antagonist (IL - IRa), interleukin-4 (IL - 4), interleukin-13 (IL - 13), interleukin-1 (IL - 1), interleukin -10 (IL - 10), IL - ip, Tumor necrosis factor (TNF), insulin-like growth faktor (IGF), Transforming growth factor (TGF), Platelet-derived growth factor (PDGF), Fibroplast growth factor (FGF) i Hepatocvte growth factor (HGF).

U jednoj varijanti kondicionirana kompozicija krvi sadrži interleukin-1 receptor antagonist (IL - IRa) sa udelom od 30 do 50000 pg/mL. U jednoj daljoj varijanti kondicionirana kompozicija krvi sadrži interleukin-4 (IL - 4) sa udelom od 2 do 100 pg/mL. U jednoj daljoj varijanti kondicionirana kompozicija krvi sadrži interleukin-13 (IL - 13) sa udelom od 2 do 100 pg/mL. U jednoj daljoj varijanti, kondicionirana kompozicija krvi sadrži interleukin-1 (IL - 1) sa udelom od 5 do 1000 pg/mL. U jednoj daljoj varijanti kondicionirana kompozicija krvi sadrži interleukin -10 (IL - 10) sa jednim udelom od 5 do 1000 pg/mL. U jednoj daljoj varijanti kondicionirana kompozicija krvi sadrži Tumor nekrosis factor (TNF) sa jednim udelom od 5 do 1000 pg/mL. U jednoj daljoj varijanti kondicionirana kompozicija krvi sadrži Insulin-like growth factor (IGF) sa jednim udelom od 100 do 15000 pg/mL. U jednoj daljoj varijanti kondicionirana kompozicija krvi sadrži Transforming grovvth factor (TGF) sa jednim udelom od 10 do 20000 pg/mL. U jednoj daljoj varijanti kondicionirana kompozicija krvi sadrži Platelet-derived grovvth factor (PDGF) sa jednim udelom od 100 do 10000 pg/mL. U jednoj daljoj varijanti kondicionirana kompozicija krvi sadrži Fibroplast growth factor (FGF) sa udelom od 50 do 10000 pg/mL. U jednoj daljoj varijanti kondicionirana kompozicija krvi sadrži Hepatocvte growth factor (HGF) sa udelom od 50 do 10000 pg/mL

Na opšte iznenađenje koktel indukovanih faktora i citokina u kondicioniranoj kompoziciji krvi, dobijene prema ovome pronalasku, ima izuzetno efektivno profilaktičko i terapeutsko dejstvo. Prema ovome pronalasku, sa kondicioniranom kompozicijom krvi, odnosno iz nje dobijenom kondicioniranom kompozicijom seruma krvi, može se vrlo efikasno tretirati čitav niz bolesti, odnosno tegoba u ljudskom i životinjskom telu, koje se pri tome mogu tretirati, lečiti ili umanjiti, odnosno mogu se od ovih bolesti i tegoba zaštititi.

Prema ovome pronalasku, kondicionirana kompozicija krvi, odnosno kompozicija krvnog seruma, dobijena shodno ovome pronalasku, može se koristiti za tretman bolesti mišića, pri oboljenju aparata za kretanje i oslonac, kao i zapaljenja i nadražaja nervnog sistema, pre svega bolesti aparata tetiva, kao povrede tetiva, zapaljenje vaginalne tetive, povreda ligamenata, degeneracija tetiva i degeneracija ligamenata, kao i brzo lečenje, olakšavanje, odnosno zaštita od alergije, odbojnost prema hrani i lekovima, bolesti sa učešćem imunog sistema, pre svega autoimune bolesti, a naročito reumatoiđne bolesti skeletnih mišića i bolesti uslovljene neurodermitisom, kao i za tretman i lečenje hroničnih rana, naročito dijabetskog tumora, terapije endometrioze, kao i tretman hroničnog zapaljenja očiju i regeneraciju odnosno smanjivanje bola kod nadražaja tetiva kod konja. U bolesti mišića ubrajaju se bolesti mišića koje nastaju povredom mišića pri operaciji mišića povezano sa pucanjem vlakana mišića pri degeneraciji mišića, pri defektima mišića, pri atrofiji mišića, pri pucanju mišića pri distrofiji mišića, odnosno koje su povezane sa umorom mišića ili otvorenim ranama mišića.

Ovaj pronalazak obuhvata stoga primenu kompozicije krvi prema ovome pronalasku, kao i iz nje proisteklu kondicioniranu kompoziciju seruma krvi za tretman i zaštitu od tegoba ljudskog ili životinjskog tela. Tegoba ljudskog ili životinjskog tela, koja prioritetno može da bude tretirana, umanjena i lečena ili ostvarena zaštita od nje, se bira među bolestima kao što su reumatsko oboljenje mišića skeleta, bolesti aparata oslonca i kretanja, kao i bolesti koje stoje u vezi sa imunim sistemom, kao i bolesti koje prouzrokuju akutne ili hronične bolove.

Podrazumeva se da za adekvatan tretman svake bolesti stručnjak bira najpogodniji način primene za davanje, prema ovome pronalasku kondicionirane kompozicije krvi. Prioritetno se kondicionirana kompozicija krvi ili kondicioniranoi serum krvi injekcira ili infudira u telo i / ili pogođeni organ, kao što je zglob, mišić, tetiva, koža ili nerv i to pre svega intravenozno, intraarterijalno, subkutano, intradermalno, subkonjuktivalno, topično, intratekalno, perispinalno, u i/ili centralne nerve, u i/ili periferne nerve, intraartikularno i / ili intramuskularno.

U jednom daljem aspektu ovoga pronalaska se kondicionirana kompozicija krvi, dobijena shodno ovome pronalasku, primenjuje za proizvodnju jednog leka za tretman i prevenciju tegobe u ljudskom ili životinjskom telu. Ove tegobe su predhodno već okarakterisane.

Pored toga, predviđena je primena kompozicije krvi, dobijene shodno ovome pronalasku i za neterapijsku kozmetiku, kao takozvano "anti - aging" sredstvo. Pokazalo se da se sistematskim i/ili topičkim korišćenjem mogu umanjiti ili lečiti promene na telu, koje prate starost, a pre svega prethodno naznačeni simptomi, ali se isto tako može poboljšati i spoljašnji izgled: koža, kosa, nokti. U jednom daljem aspektu ovoga pronalaska primenjuje se sastav krvi, dobijene prema ovome pronalasku, za proizvodnju kozmetičkih sredstava.

Ovaj pronalazak na kraju obuhvata takođe i postupak za terapiju ili zaštitu od jedne predhodno okarakterisane tegobe ljudskog ili životinjskog tela, koja sadrži najmanje sledeći stupanj: davanje u ljudski ili životinjski organizam kondicionirane kompozicije krvi, dobijene prema ovome pronalasku, u jednoj terapeutski ili profilaktički aktivnoj dozi. Dozu i način primene bira stručnjak prema oblasti priene i svrsishodnosti.

Primeri izvođenja

Pronalazak će biti bliže pojašnjen preko primera koji slede i jedne slike, pri čemu primere ne treba razumeti kao ograničavajuće. Stručnjak će iz ovih primera prepoznati osnovni princip ovoga pronalaska i samim tim i tehničke prednosti koje pruža. On će biti u stanju da osnovne principe i tehničke prednosti prenese na oblasti koje nisu ovde izričito navedene.

Slika 1 daje šematski pokaz jednog prioritetnog oblika izvođenja uređaja prema ovome pronalasku, koji se sastoji od jednog suda pripremljenog od elastične kese (10) sa jednim prioritetno polukružnim donjim delom (14) i jednim gornjim delom koji se prioritetno gore sužava (15), sa najmanje jednim uvodom i/ili odvodom (11), koji se završava u gornjem delu suda u obliku levka (15). Na njegovom donjem kraju, koji se završava u zapremini suda 10 predviđen je jedan sigurnosni ventil (13), odnosno Flatter ventil.

Primer 1: Set za dobijanje kondicionirane kompozicije krvi iz čiste krvi

Sastavljen je jedan sterilisani set za jednokratnu upotrebu, koji sadrži sledeće delove: - jedan sistem kesa za inkubaciju krvi i odvajanje čvrstih komponenata krvi (slika 1, tabele 1 i 2), napunjen sa staklenim kuglama od borsilikatnog stakl (oko 200 komada) sa prečnikom od 3,5 mm, - 20 - Gauge - kanila za izvlačenje usporivača vrenja u špricu za uzimanje krvi,

- 60 mL špric za uzimanje krvi,

- Butterflv - kanila za uzimanje krvi,

- 60 mL špric za uzimanje kondicionirane kompozicije seruma krvi.

Sve komponente su proizvodi za jednokratnu upotrebu, zapakovani i sterilisani sa gama zracima i u celini upakovana u sterilnu transportnu ambalažu.

U tabelama 1 i 2 dat je spisak materijala primenjenih komponenata.

Primer 2: Pobijanje jedne kondicionirane kompozicije seruma krvi iz čiste krvi

a) Uzimanje krvi

Uzimanje krvi se izvodi sa jednim Luerlock - špricom. Špric se polako puni do marke

od 60 mL sa čistom krvi. Vodi se računa o tome da u krvi nema mehura vazduha i da se prema tome u špricu nalazi tačno 60 mL krvi.

b) Punjenje sistema kesa i inkubacija

Sadržaj šprica se polako i potpuno preko otvora za unošenje i iznošenje (11) unese u

sud formiran kao elastična kesa (10). U sud je već uneto oko 200 kugli od borsilikatnog stakla (Duran®), saprečnikom od 3,5 mm.

Špric se posle unošenja krvi u sud odšrafi i priključak (12) na sudu se ponovo zatvori sa jednim novim poklopcom.

Sud (10) se zatim ostavi da stoji 9 do 36 časova pri temperaturi od 37 °C i to najbolje u visećem stanju. Pri tome se uzeta krv inkubira u sudu, kojem je pomoću kugli povećana unutrašnja površina. Povećana unutrašnja površina iznosi oko 350 mm<2>po 1 mL inkubirane krvi.

c) Odvajanje čvrstih komponenti krvi

U sterilnu kivetu centrifuge se unese sud (10) i kiveta se zatim okači na odgovarajuće

mesto u centrifugi. Posle kontrole ravnomernog rasporeda masa, centrifuga se pušta u rad i centrifugiranje izvodi 3 minuta, pri broju obrta rotora centrifuge od 2500 u minuti. Posle završetka centrifugiranja, pri kome dolazi do separacije ćelijskih od tečnih komponenata krvi, kiveta se zajedno sa sudom (10) pažljivo iznosi iz centrifuge.

Pri centrifugiranju dolaz do nagomilavanja krvnih ćelija, pre svega eritrocita (EZ), na dnu suda (10). Centrifugirnjem se razdvaja serum od koagela krvi. Serum se prenese u drugu kesu i na kraju u datom slučaju se centrifugira još jedan put. Preko priključka za unošenje i iznošenje (11) kondicionirana kompozicija seruma se uzima iz suda pomoću šprica. Napunjeni špric se zatim odšrafi sa suda.

Primer 3: Analiza kondicionirane kompozicije seruma krvi

Proizvedeno je četiri uzorka za ispitivanje A, B, C, D i E , koji su na isti način primenjeni za inkubaciju čiste krvi.

U eksperimentu A je komercijalna kesa za krv (OSTEOKIN, Orthogon, Dusseldorf), koja je pretežno opisana u primerima 1 i 2, napunjena sa 210 kugli od borsilikatnog stakla (Duran®) sa prečnikom od 3,5 mm. Posle dodavanja unutrašnjih struktrnih elemenata (kugli), unutrašnja površina modifikovanog suda u celini iznosi 18.125 mm<2>. Pri inkubirnju 50 mL krvi u ovome slučju odnos površina / zapremina (indeks površine) modifikovanog suda iznosi oko 360 mm /mL.

U jednom daljem eksperimentu B, korišćenje isti sistem kesa kao u eksperimentu A, ali u ovome slučaju nije punjen sa unutrašnjim strukturnim elementima. Prazan sistem kesa pokazuje unutrašnju površinu od nekih 10000 mm<2>. Pri inkubaciji 50 mL krvi to odgovara jednom indeksu površine od oko 200 mm<2>/mL.

U jenom daljem eksperimentu C korišćenje isti sistem kesa kao pri eksperimentu A, ali je napunjen sa 780 staklenih kugli sa prečnikom od 3,5 mm. Ukupna unutrašnja površina u ovome slučaju iznosi oko 40000 mm<2>. Pri zapremini unete krvi od 50 mL dobija se indeks površine od oko 800 mm<2>/mL.

U jednom daljem eksperimentu D, korišćenje jedan drugi sistem za uzimanje krvi, koji ima pretežno cilindričan oblik i koji je napunjen sa 36 staklenih kugli sa prečnikom od 1,5 mm. Ukupna unutrašnja površina je u ovome slučaju izosila oko 4050 mm . Pri punjenju suda sa 10 mL krvi, dobija se indeks površine od 405 mm<2>/mL.

U jednom daljem eksperimentu E, korišćenje jedan drugi sistem za uzimanje krvi, koji ima pretežno cilindričan oblik i koji je napunjen sa 62 staklene kugle sa prečnikom od 3,5 mm. Ukupna unutrašnja površina suda je u ovome slučaju izosila oko 6200 mm<2.>Pri unošenju u sud 10 mL krvi dobija se indeks površine od 620 mm /mL.

Pri svim eksperimentima korišćena je venozna krv neposredno uzeta od davaoca i neposredno uneta u sudove, koji su korišćeni u eksperimentima A, B, i C. Krv u sudovima je inkubirana 24 časa (24 h) pri temperaturi oko 37 °C. Dodatno je u cilju kontrole neposredno po uzimanju krvi odvojeno oko 10 mL sveže čiste krvi od istog davaoca i obrađeno (t = 0 h).

Po isteku inkubacionog vremena u kompoziciji krvi kvantitativno je određen sadržaj komponenata krvi: IL - IRa, IL - 6, TNFa i IL - ip.

Rezultati: Dobijeni rezultati prikazani su u tabeli 3.

Za vreme dok u eksperimentima A i B dolazi do značajne indukcije analiziranih faktora u sastavu krvi, dotle u eksperimentu C za vreme inkubacije dolazi do homolize. Pokazalo se da intenzitet indukcije zavisi od indeksa površine; kod većeg indeksa površine (veća unutrašnja površina) dobija se veći udeo citokina u krvi. Istovremeno egzistira jedna gornja vrednost indeksa površine; ako se prekorači ova kritična vrednost, dolazi do pojave homolize. Jedan homolizirani sastav krvi ne može se dalje primenjivati. Pri velikom indeksu površine, bliskom kritičnoj vrednosti, može se homoliza suzbiti u određenim granicama na taj način što se vreme inkubacije od 24 časa skrati na 6 do 9 časova (podaci nisu prikazani).

Primer 4: Profil citokina u kondicioniranoj kompoziciji krvi

U jednom daljem eksperimentu je u cilindrični sud za uzimanje krvi unutrašnja površina povećana punjenjem suda sa 36 staklenih kugli od borsilikatnog stakla (Duran®) sa prečnikom od 1,5 mm. Inkubirano je 50 mL sveže uzete čiste krvi. Pri tome je indeks površine iznosio 405 mm /mL.

U sudu za uzimanje krvi, krv je inkubirana pri temperaturi oko 37 °C u vremenu od tri časa, devet časova i 24 časa. Posle toga je određen sadržaj citokina: FGF, IL - 4, IL - 10, IL - lp, TNF, IL - 6, IL- 1 Ra i TGFp.

Rezultati:

Već posle inkubacije od tri časa, došlo je do značajnog skoka sadržaja citokina u kondicioniranoj kompoziciji krvi. U tabeli 4 su prikazane jedne pored drugih vrednosti određene posle inkubacije krvi od 24 časa (t = 24 h) i vrednosti dobijene neposredno posle uzimanja krvi (t = 0 h).

Primer 5: Tretman neurodermitisa

Za tretman neurodermitisa je kondicionirana kompozicija krvi, proizvedena prema ovome pronalasku, aplicirana na pacijentu u obliku injekcija, ali isto tako i u obliku intrartikularnih injekcija. Pri tome je pomoću injekcije davano 2 mL kondicionirane kompozicije krvi u periodu od tri nedelje u razmaku od 2 do 3 dana. Poboljšanje simptoma neurodermitisa bilo je uočljivo već posle 3 dana. Jedan ponovni razvoj bolesti posle oko 2,5 meseci bilo je moguće uspešno izlečiti sa tri injekcije.

Kod drugih pacijenata, kod kojih su korišćene intraartikularne injekcije prvenstveno za lečenje njihovih bolova u kolenima (uslovljenih atrozom i tegobama u meniskusu) do poboljšanja je došlo u toku davanja 6 injekcija kao i simptoma neurodermitisa. Posle toga nije više dolazilo do pojave neurodermitisa.

Primer 6: Tretman zapaljenja ili nadražaja nervnog sistema

Pri ovoj primeni kondicionirane kompozicije krvi, proizvedene prema ovome pronalasku, pacijentima (n = 30), koji najmanje 6 meseci pate od hroničnih ili radikularno uslovljenih bolova u leđima, tretirano je davanjem lokalnih injekcija na koren nerava (epiduralne-peridualne injekcije prema Kramer-u et al.). Bolovi su smanjeni u intervalu od nekoliko nedelja i efekt se manifestovao još šest meseci. Pri tome je konstatovan u najmanju ruku isti ili malo poboljšan rezultat u poređenju sa pacijentima koji su lečeni istom injekcionom tehnikom sa 5 mg ili 10 mg glukokortikoida (Triamcinolon) kao supstancom za poređenje.

Primer 7: Tretman endometrioze

Pacijenti (n = 4), koji boluju od bolne endometrioze, tretirani su davanjem intraperitonalno injekcije od 4 mL po ovome pronalasku proizvedenog kondicioniranog seruma krvi i to direktno u tumomo tkivo, koje je izazvano endometriozom i/ili u prostor stomaka. Posle ove aplikacije, koja je u početku praćena jakim bolovima, dolazi posle nekoliko časova do značajne redukcije bolova. Ovaj efekat se nastavlja i vodi ka skoro potpunom prestanku bolova već sledećeg dana. U nastavku terapije se u rastojanjima od nedelju dana subkutano dalje dalje injekcija od 2 mL kondicioniranog seruma krvi. Povratak, odnosno ponovnu pojavu bolova do sada nije bilo moguće konstatovati. Na opšte iznenađenje se pokazalo da primenjena kondicionirana kompozicija krvi, proizvedena prema ovome pronalasku, ima veći spektar dejstva na smanjenje bola od normalnih sredstava koja se koriste za smanjenje bola.

Primer 8: Hronično zapaljenje očiju kod konja

Za terapiju hroničnog zapaljenja očiju kod konja (equine rezidivierende Uveitis, ERU) korišćrna je kondicionirana kompozicija krvi, proizvedene po ovome pronalasku, tako što je tretirano je 6 konja, od kojih su po tri konja tretirana sa različitim veterinarskim praksama, u oko (subkonjunktiv) injecirana, odnosno u oko je ukapavana (topično). U okviru perioda vremena post ispitivanja od skoro 10 meseci, nije bilo moguće

konstatovati povratak bolesti ni u jednom obrađenom slučaju.

Primer 9: Regeneracija i smanjenje bola nadraženih tetiva kod konja

U jednoj daljoj primeni kondicionirane kompozicije krvi, tretirani su konji sa otežanim kretanjem, koje je prouzrokovano jakim zapaljenjem, odnosno nadražajem tetiva, koje je praćeno jakim otokom u tkivu tetiva i to sa injekcijama od 3 mL kondicioniranog seruma krvi, dobijenog prema ovome pronalasku, koje su davane u tkivo tetive. Pri tome se u jednom prvom stupnju punktira otok u cilju smanjenja pritiska na tkivo i da bi se uklonile inflamatorne supstance. Posle davanja prve injekcije, već u toku jedne nedelje dolazi kako do jasne redukcije otežanog kretanja, tako i do smanjenja otoka uočenog u drugoj nedelji tretiranja. Posle četiri nedelje, znači posle jedne nedelje po davanju treće injekcije i poslednje doze u tkivo tetive, konstatovana je skoro potpuna remisija kako nepokretnosti tako i količine podliva.

Iste injekcije davane u takozvane "ćore lesions" i/ili "superficial lesions", dakle degenerativne promene u okviru tkiva tetive, su takođe imale za posledicu jasnu remisiju ovih kliničkih simptoma. U pojedinim slučajevima uočeno je i ponovno popunjavanje defekata sa vlaknima kolagena.

Primer 10: Tretman rana kod konja

Jedan četrnest godina star kastriran konj sa smanjenom pokretljivošću na više zglobova, bolovao je više nedelja od jedne otvorene rane iznad levog prednjeg kopita. Kondicionirana kompozicija krvi, prema ovome pronalasku, ukapavan je konju na ranu (tri kapi na površinu rane od 1 x 3 cm). Na kraju je rana previjena. Posle završne stručne ocene (posle tri tretmana u razmaku od jedne nedelje) posle vremenskog perioda od 4 nedelje, pokazalo se daje površina otvorene rane redukovana za jednu trećinu.

Claims

1. Postupak za proizvodnju jedne kondicionirane kompozicije krvi iz krvi, koji sadrži sledeće stupnjeve: a) inkubacija krvi, koja je uzeta iz jednog ljudskog ili životinjskog tela u jednom modifikovanom sudu sa unutrašnjom površinom pri temperaturi od 10 do 40 °C, u cilju kondicioniranja krvi, pri čemu dolazi do indukovanja faktora; b) dobijanje jedne kondicionirane kompozicije krvi sa indukovanim faktorima u jednom modifikovanom sudu, pri čemu je sud tako modifikovan da pokazuje unutrašnju površinu od od 200 mm<2>do 750 mm<2>po 1 mL inkubirane krvi.

2. Postupak prema patentnom zahtevu 1, pri kojem se interleukin - 6 (IL - 6) pojavljuje u kompoziciji krvi sa udelom od najmanje 30 pg po 1 mL i ukazuje na uspešnu indukciju.

3. Postupak, prema jednom od prethodnih patentnih zahteva, pri kojem se inkubacija izvodi u vremenskom intervalu od 2 do 36 časova.

4. Postupak, prema jednom od prethodnih patentnih zahteva, pri kojem je parcijalni pritisak kiseonika (p02) za vreme inkubacije manji od 5 kPa.

5. Postupak, prema jednom od prethodnih patentnih zahteva, pri kojem se u jednom daljem stupnju iz kondicionirane kompozicije krvi uklanjaju ćelijske komponente i tako dobija kondicionirana kompozicija seruma krvi.

6. Postupak, prema jednom od prethodnih patentnih zahteva, u kojem modifikovani sud sadrži unutrašnje strukturne elemente sa velikom površinom, koji su izabrani između kugli, vlakana, praha, granulata, čestica i kombinacije istih.

7. Postupak, prema patentnom zahtevu 6, u kojem se koriste unutrašnji strukturni elementi koji sadrđe najmanje jedan materijal izabran iz grupe: metali, oksidi metala i plastične mase, kao što su staklo, korund, kvare, polistiren, polivinilhlorid, polieten, polipropen, ili kobinacije istih.

8. Postupak, prema jednom od prethodnih patentnih zahteva, u kojem modifikovani sud u svojoj unutrašnjosti sadrži staklene kugle sa prečnikom od 0,5 do 5 mm.

9. Postupak, prema jednom od prethodnih patentnih zahteva, u kojem modifikovani sud ima elastične zidove i pogodan je za uzimanje krvi bez vazduha iz životinjskog i ljudskog tela.

10. Postupak, prema patentnom zahtevu 9, u kojem je sud izabran među kesama za krv, koje se koriste u medicini za transfuzije.

11. Postupak, prema patentnom zahtevu 10, u kojem je sud za inkubaciju izabran između jednostavnog, dvostrukog, trostrukog ili višestrukog sistema kesa.

12. Postupak, prema jednom od patentnih zahteva 9 do 11, u kojem elastični zidovi sudova imaju malu propustljivost za kiseonik.

13. Postupak, prema jednom od prethodnih patentnih zahteva, u kojem je kompozicija krvi alogena.

14. Postupak, prema jednom od prethodnih patentnih zahteva, u kojem je kompozicija krvi autologa.

15. Postupak, prema jednom od prethodnih patentnih zahteva, u koj em je kompozicija krvi kserogena.

16. kompozicija krvi, proizvedena po postupku prema jednom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što se koristi za tretman i preventivu tegoba ljudskog ili šivotinjskog tela i koja sadrže od 30 do 20000 pg/mL interleukina - 6 (IL-6).

17. Kompozicija krvi, prema patentnom zahtevu 16, naznačen time što sadrži najmanje jednu dalju komponenatu izabranu iz: - interleukin 1 receptor agonist (IL - IRa) - interleukin - 4 (IL - 4), -interleukin - 13 (IL-13), - interleukin 1 (IL - 1), - interleukin - 10 (IL - 10), - Tumornecrosis factor (TNF), tumor nekrozis faktor - insulin-like growth factor (IGF), insulinu sličan faktor rasta - Transforming growth faktor (TGF), transformacija faktora rasta - Platelet-derived grovvth factor (PDGF), - Fibroblast growth factor (FGF) i fibroblast faktor rasta - Hepatocvte grovvth factor (HGF). hepatocitni faktor rasta

18. Kompozicija krvi, prema patentnom zahtevu 16 ili 17, naznačena time što nadalje sadrži najmanje jednu komponentu izabranu iz vezikula, mikrovezikula, eksozoma, iRNA i smeše istih.

19. Kompozicija krvi, prema patentnom zahtevu 16 do 18, naznačena time što je u njoj prisutan interleukin-1 receptor antagonist (L - IRa) u količini od 30 - 50000 pg/mL.

20. Kompozicija krvi, prema patentnom zahtevu 16 do 19, naznačena time što je u njoj prisutan interleukin - 4 (IL - 4) u količini od 2 - 100 pg/mL.

21. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 16 do 20, naznačena time što je u njoj prisutan interleukin - 13 (IL - 13) u količini od 2 - 200 pg/mL.

22. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 16 do 21, naznačena time stoje u njoj prisutan interleukin - 1(IL - 1) u količini od 5 - 1000 pg/mL.

23. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 16 do 22, naznačena time što je u njoj prisutan interleukin - lo (IL - 10) u količini od 5 - 1000 pg/mL.

24. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 16 do 23, naznačena time što je u njoj prisutan Tumor necrosis factor (TNF) u količini od 5 - 1000 pg/mL.

25. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 16 do 24, naznačena time što je u njoj prisutan insulin-like growth faktor (IGF) u količini od 100 - 15000 pg/mL.

26. Kompozicija krvi, prema patentnim zahtevima 16 do 25, naznačena time što je u njoj prisutan Transforming growth faktor (TGF) u količini od 10 - 20000 pg/mL.

27. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 16 do 26, naznačena time što je u njoj prisutan Platelet - derived grovvth factor (PDGF) u količini od 100 do 10000 pg/mL .

28. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 16 do 27, naznačena time stoje u njoj prisutan Fibroblast growth faktor (FGF) u količini od 50 - 10000 pg/mL.

29. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 16 do 28, naznačena time stoje u njoj prisutan Hepatocvte grovvth faktor (HGF) u količini od 10 - 10000 pg/mL.

30. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 16 do 29, naznačena time što se koristi za tretman i preventivu tegoba ljudskog i životinjskog tela izabranih iz grupe: - bolesti mišića, - bolesti aparata tetiva, - alergija, - odbojnost prema hrani, - odbojnost prema lekovima, - bolestima sa učešćem imunog sistema, - psorijaza i - hroničnih rana kao dijabetskog ulkusa.

31. Kompozicija krvi, prema patentnom zahtevu 30, pri čemu su bolesti mišića jedna povreda mišića, operacija mišića, pucanje vlakana mišića, degradacija mišića, defekti mišića, atrofija mišića, pucanje mišića, distrofija mišića, zamor mišića ili otvorene rane na mišićima..

32. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 30 ili 31, pri čemu tretman bolesti mišića obuhvata i regeneraciju mišićnog tkiva.

33. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 16 do 29, nazačena time što se koristi za tretman ili sprečavanje tegoba ljudskog ili životinjskog tela izabranih iz grupe: neurodermitis, - zapaljenja i nadraženost nervnog sistema, - endometrioza, - hronična zapaljenja očiju kod konja.

34. Kompozicija krvi, prema jednom od patentnih zahteva 30 do 33, naznačena time što zajedno sa drugim farmaceutskim pomoćnim sredstvima može da se pomoću injekcije unosi u telo ili obolele organe.

35. Primena kompozicije krvi, prema jednom od patentnih zahteva 18 do 29, za proizvodnju jednog leka za tretman i zaštitu ljudskog ili životinjskog tela od jedne bolesti okarakterisane u patentnim zahtevima 30 do 33.

36. Primena kompozicije krvi, prema jednom od patentnih zahteva 18 do 29, kao kozmetičkog sredstva.