RS51374B

RS51374B - Primena prirodnog i sintetičkog eugenola kao dodatak stočnoj hrani

Info

Publication number: RS51374B
Application number: YUP-125/04A
Authority: RS
Inventors: Vojin Gligovic
Original assignee: Vojin Gligovic
Priority date: 2004-02-06
Filing date: 2004-02-06
Publication date: 2011-02-28
Also published as: WO2005074965A1; YU12504A

Abstract

Primena prirodnog i sintetičkog eugenola kao dodatka stočnoj hrani čiju osnovu čini prirodni eugenol dobijen iz etarskih ulja: kamforovog drveta (Cinnamomum camphora Sieb), idjirota (Acorus calamus L.), cironele sa Jave (Cymbopogon winterianus Jowitt), ylang ylang drveta (Canangium odoratum Baill.), kanange (Cananga odorata Hook.), orahčića (Myristica fragransHoutt), sasafrasa (Sassafras albidum Nutt.), mirhe (Commiphora myrrha Nees), lista lovora (Laurusnobilis L.), Kalifornijskog lovora (Umbellularia californica Nutt), korena galangalange (Alpinia officinarum Hanee), kajsije (Acacia farnesiana Willd.), bosiljka (Ocimum minimum ili Ocimum gratissimum L.) i ljubičice ( Viola odorata L.), naznačena time, što se za razdvajanje eugenola od ostalih pratećih komponenata etarskog ulja koristi po¬većana kiselost fenolne hidroksilne grupe, koja sa razblaženim vodenim rastvorima alkalija gradi stabilne u vodi rastvome soli, a koje nisu isparljive pod uticajem vodene pare. Prijava sadrži još 6 zavisnih patentnih zahteva.

Description

Oblast tehnike

Primena prirodnog i sintetičkog eugenola kao dodatka stočnoj hrani u preveniranju i lečenju bolesti životinja odnosi se uopšteno posmatrano na oblast primene supstanci koje se ugrađuju u veterinarske preparate, a konkretno se odnosi na postupak dobijanja veterinarskih preparata na bazi prirodnog i sintetičkog eugenola, i etarskih ulja iz biljaka koje sadrže eugenol (karanfllića, pimente i lista cimeta) i na njihovoj primeni u preveniranju i lečenju bolesti životinja izazvanih bakterijama, gljivicama i parazitima.

Prema Međunarodnoj klasifikaciji patenata (MKP, Int.Cl. ), predmet pronalaska je razvrstan i označen klasifikacionim simbolom A61K 31/775 (2010.01) koji se odnosi na medicinske preparate koji sadrže aktivne organske sastojke kao i sekun-darnim klasifikacionim simbolima A61K 31/74 (2010.01) kojim su definisani medi-cinski preparati koji sadrže sintetičke polimerne materije i C08K 5/105 (2010.01) koji se odnosi na upotrebu organskih materija kao sastojaka za smeše sa fenolima.

Tehnički problem

Tehnički problem koji se rešava predmetnim pronalaskom sastoji se u slede-ćem: kako primeniti prirodni i sintetički eugenol koji se dodaje stočnoj hrani a čiji aktivni principi delovanja sastojaka koji ga čine, potpuno ili u značajnoj meri, utiču na sprečavanje ciklusa razmnožavanja bakterija, gljivica i parazita usled čega dolazi do njihovog uništavanja, čime se postiže efikasnija preventivna zaštita životinja od-do njihovog uništavanja, čime se postiže efikasnija preventivna zaštita životinja odnosno lečenje, i omogućava supstitucija antibiotskih, sulfonnmidskih i kokcidiostat-skih preparata, pri čemu primena eugenola omogućava da stočna hrana koja ga sadr-ži može da se koristi bez prekida tokom celog odgoja, da je životinje lakše podnose i daje bez neželjenih dejstava i kontraindikacija.

Stanje tehnike

Moderna intenzivna proizvodnja mesa, mleka i jaja zbog ekonomske oprav-danosti, zahteva držanje velikog broja životinja na što manjem prostoru. Velike koncentracije životinja predstavljaju dobar osnov za izbijanje bolesti, naročito gastroin-testinalnih infekcija, kako kod podmlatka životinja tako i kod starijih kategorija. Zbog toga su se desetinama godina upotrebljavali antibiotici, sulfonamidski preparati, kokcidiostatici da bi se preveniralo nastajanje oboljenja životinja. Ubacivanje ne-kog od pomenutih vrsta lekova u hranu ili vodu za životinje, davalo je efikasne rezultate u preveniranju bolesti. Do pre 15-20 godina na žalost, nije se mnogo računa-lo na negativne posledice koje mogu da nastanu ovakvom preventivom, a one su se javile u vidu: biorezidua u mlcku, mesu i jajima, kao posledica taloženja antibiotskih i drugih preparata. Mikroorganizmi protiv kojih su se koristili ovi preparati postali su vremenom otporni (rezistentni) na pomenute preparate. Čovck je koristeći proizvode životinja sa natoleženim bioreziduama za svoju ishranu, mnoge bakterijske vrste u svom organizmu učinio otpornim na različite vrste antibiotika i sulfonamida.

Da bi se sprečile ove i druge neželjene posledice, ekonomski razvijenije ze-mlje Evrope, SAD i Kanada, donele su niz mera kojima se sprečava ili redukuje upo-treba antibiotika i sulfonamida u nutritivne i preventivne svrhe, uvodeći istovremeno propise koji sprečavaju promet proizvoda (mleko. meso, jaja) koji sadrže biorezidue.

U stručnom članku "Antibacterial Activitv of Standard F.ugenol againstSalmone/ hi spp.(Antibaktericidnodejslvo standardnog Eugenola na salmonelu) N'ucha Simasaticul & dr. (Savetovanje Tropentag, 7-9 Oktobar 2008. Hohenhcim, Nemačka) razmatrana je problematika delovanja eugenola u preveniranju bolesti životinja izazvanih salmonelom.

U časopisu Kasetart Journal odcljak Nat.Sci 41(2007) str 319 - 323 autori P. Tippavatum I V. Chonhenchob u članku "Antibacterial Activities of Thymol, Eugenol and Nisin Against Some Food Spoilage Bactcria" (Antibakterijsko dejstvo timola, eugenola i nisina na neke bakterije koje izazivaju kvarenje hrane) su dali prikaz pozitivnog dejstva pomenutih sastojaka na sprečavanju kvarenja hrane koja treba da se tipakuje i iznese na tržište gde treba da stoji upakovana do upotrebe.

Autori S.K. Oxenham, K..P. Svoboda i D.R. VVallcrs u časopisu Phytoparasitica 33(2005)3 str. 247 do 252 u članku "Eugenol Reduces Growth and increases Activity of S-adenosy!methionine Dccarboxilase in the Phytopathogenic FungusBotrvtis Jahač"(Eugenol smanjuje rast i povećava aktivnost S-adenosvlmetionin decarboksilazc u fitopatogcnoj gljiviButrrlis faha)pokazuju do kakvih pramena dolazi delovanjem eugenola u smanjenjem rasta u poliaminskom metabolizmu ove gljive, što se kasnije šire primenjuje u preveniranju raznih bolesti kod životinja.

Na osnovu gore navedenog i sopstvenih dugogodišnjih nistraživanja autor predmetnog pronalaska se odlučio za razvoj preparata, koji u sebi sadrži sastojke či-jom primcnom u znatnoj meri ili potpuno mogu da se prcvaziđu problemi i ograniče-nja povezana sa dužim korišćenjem antibiotskih i sulfonamidskih preparata.

Izlaganje suštine pronalaska

Suština primene prirodnog i sintetičkog eugenola i etarskih ulja iz karanfilića, pimente i lista cimeta, kao dodatka stočnoj hrani, u preveniranju i lečenju bolesti ži-votinja, prema ovom pronalasku, ogleda se u pronalaženju i primeni supstance koja integrisana u predmetni dodatak stočnoj hrani iskazuje pozitivne rezultate na preveniranju i lečenju bolesti životinja izazvanih bakterijama, gljivicama i parazitima. Na-čin dejstva prirodnog i sintetičkog eugenola kao dodatka stočnoj hrani, prema pronalasku, je različit od dejstva klasičnih preparata što se ogleda pre svega kroz po-većanje njihove efikasnosti i dobijanje niza drugih pozitivnih karakteristika. Ovo je postignuto primenom prirodnog eugenola. eugenola u obliku natrijeve i kalijumove soli i etarskih ulja iz biljaka koje sadrže eugenol, pri čemu je iskorišćena njegova osobina kao antiseptika i baktericida odnosno njegova osobina da deluje kao antio-ksidans.

Suština pronalaska dalje se ogleda i u tome što dodaci stočnoj hrani koji sadr-že prirodni eugenol, eugenol u obliku natrijeve i kalijeve soli i etarska ulja iz biljaka koje sadrže eugenol (karanfilić, pimenta i list cimeta), na bakterije, gljivice i parazite deluju tako što:

1. Oštećuju ciloplazmatsku membranu razlažući lipide membrane:

2. Sprečavaju u citoplazmi sintezu albumina koji je odgovoran za prenošenje kiseonika do mitohondrija; 3. Dovode do brzog uginuća bakterija, gljiva i parazita usled nedostatka kiseonika.

Suština pronalaska ogleda se u tome što dodaci stočnoj hrani, u kojima su primenjeni prirodni eugenol, eugenol u obliku natrijeve i kalijumove soli i etarska ulja iz biljaka koje sadrže eugenol, predstavljati potentne entero-septike i uspešna su zamena za antibiotike, sulfonamidske i kokcidiostatske preparate.

Osnovne prednosti primene prirodnog i sintetičkog eugenola kao dodatka stočnoj hrani, u obliku natrijeve i kalijumove soli eugenola i etarskih ulja iz biljaka koje sadrže eugenol prema ovom pronalasku u odnosu na druga sredstva koja se ko-riste kod prcveniranja i lečcnja bolesti izazvanih bakterijama, gljivicama i parazitima ogledaju se u sledećem: - aktivne supstance u preparatima na bazi ovog pronalaska su prirodnog, biljnog porekla i nisu antibiotici, zbog čega se ne odlažu u mesu, mleku i jajima, i nemaju karencu. š'o je osnovni problem kod antibiotskih i sulfonamidskih preparata; - efikasnije i pouzdanije dejstvo uz izbegnut rizik od pojava naglog i neoče-kivanog stvaranja rezistencije; - životinje ih lako podnose bez ikakvih štetnih posledica; - životinje ih lakše prihvataju u jačim dozama nego standardne preparate ko-ji se danas nalaze u širokoj upotrebi; - eugenol kao dodatak stočnoj hrani se može koristiti stalno, bez prekida jer se ne taloži u mesu, mleku i jajima, tako da se zaštita životinja ostvaruje tokom celog odgoja.

Detaljan opis pronalaska

Prirodni eugenol

Eugenol je široko rasprostranjen u aromatičnim i začinskim biljkama koje pripadaju familijiMvrtaceaeiLauraceae.Eugenol je glavni sastojak ulja karanfilića{ Eugenia carvophvllataThumb.). oimente( Pimenta ofjicinalisLindlev) i lista cimeta( Cinnaniomum zevlanicumNees).

Eugenol je i sastojak etarskih ulja: kamforovog drveta( Cinnamoinum camphoraSieb), idjirota( Acorus calaimisL.). cironelc sa Jave( Cvmhopogon winterianitsJowitt.), ylang ylang drveta( Canangium odoratumBaill.). kanange( Cananga odo-ra taHook.), orahcica( Mvristica JragransHoutt.k sasafrasa( Sa. s. safras ( dhiduinNutt.), mirhe{ Cominiphora mvrr/ taNees), lista lovora( Lauriis nohi/ isL), Kalifor-nijskog lovora( Umhe/ lu/ aria californicaNutt.), korcna galangalange( Alpinia ofjici-naruntHanec). kasije( Acacia JarnesianaWilld ). bosiljka( Ociinum minimumiliOcimum gratissimii/ iiL.) i ljubičice( Viola odorala 1..)

Prirodni eugenol se dobija iz etarskih ulja sa visokim sadržajem eugenola. Za razdvajanje eugenola od ostalih pratećih komponenata etarskog ulja koristi se hemij-ska osobina eugenola, koja se zasniva na povećanoj kiselosti fenolne hidroksilne grupe, koja sa razblaženim vodenim rastvorima alkalija gradi stabilne u vodi rastvorne soli a koje nisu isparljive pod uticajem vodene pare.

Sintetički eugenol

Pored prirodnog eugenola poznat je i sintetički eugenol, kao 2-metoksi-4-(2-propenil) fenol, CAS broj 97-53-0. Ovaj eugenol poznat je još i pod nazivima; 4-alil-2-metoksifenol, alilgvajakol (allylguaiacol), eugenična kiselina (eugenic acid) i kariofilenska kiselina (caryophyllic acid), molekulske formule CioH^O?molekulske ma-se 164.20.

Strukturna formula eugenola prikazana je na slici 1.

Eugenol je bezbojna tečnost (na svctlosii i u kontaktu sa vazduhom tamni), tačke ključanja 252,60° C. Može se dcstilovati na atmosferkom pritisku bez znatnije dekompozicije. Mirisa je na karanfilić, začinski. ukusa koji „pali". Tačka topljenja je od-9.2<0>Cdo-9.1°C.Gustinad20/4 1.0664. Indeks refrakcije n 20/D 1.5410.

Rastvorljivost eugenola u vodeno-alkoholnim i alkalnim vodcnnim sredina-ma je značajna. Jedna zapremina eugenola rastvara se u 5-6 zapremina 50% alkohola, 2-3 zapremine 60% alkohola ili 1-2 zapremine 70% alkohola. Jedan mL eugenola se rastvara u 4,27 mL 50% alkohola na 25°C, dok je za rastvaranje iste količine na 15°C potrebno 5,22 mL alkohola iste koncentracije. 12,7 mL 2% rastvor natrijum hidroksida u vodi rastvara 1 mL eugenola.

Fenolna hidroksilna grupa daje karakteristične reakcije. Sa fer i hloridom u vodenom rastvoru daje mrko zamućenje, dok se u 2% alkoholnom rastvoru javlja plava boja. Hidroksilna grupa se može prevesti u estarsku odnosno etarsku.

U neposrednoj blizini fenolne hidroksilne grupe, 2-metoksi grupa, svojim snažnim negativnim induktivnim efektom, privlači elektronski par O-H veze i omo-gućava lak odlazak H' jona, odnosno doprinosi povećanoj kiselosti molekula. U po-redjenju sa fenolom i njemu sličnim strukturama kao što su karvakrol i timol. eugenol je znatno kiseliji. Lako reaguje sa karbonatima i bikarbonatima a plavi lakmus boji crveno. Poznata je i homolitička disocijacija O-H veze što dovodi stvaranju slobodnih kiseoničnih radikala. To može biti prednost kada se koristi kao katalizator u nekim polimerizacionim reakcijama po radikalskom mehanizmu (na primer u zubar-stvu). Jonizacija O-H veze, odnosno nastajanje O" Me jonskog para sprečava nastajanje kiseoničnih slobodnih radikala. Kao metali koji mogu stvoriti jonski par mogu-ći su natrijum i kalijum u slučajevima kada jc namera da se eugenol koristi per oralno odnosno, cink ako je primena eugenola u dermatologiji.

Ovako dobijeni eugenol ima baktericidna i fungicidna svojstva i koristi se kao antiseptik, konzervans, antibiotik i antimikotik u farmaceutskim i veterinarskim preparatima, parfemima i kozmetičkim preparatima, zubnim pastama i sapunima. Koristi se spolja, u vidu pasti, i unošenjem u organizam inhalacijom odnosno u vidu peroralnih preparata. Za razliku od nekih strukturno veoma sličnih sintetičkih fenola (npr. gvajakola) odlikuje se povećanom efikasnošću, lakom podnošljivošću i ne tok-sičnošću. Mada u nekim slučajevima čist eugenol može izazvati iritaciju u kontaktu sa kožom i sluzokožom, može se smatrati praktično ne toksičnim pri oralnim aplika-cijama (LD.so oralno na pacovima 2680 mg/kg, na miševima 3000 mg/kg).

U cilju prikazivanja izvodljivosti pronalaska data je metoda uklanjanja prate-ćih komponenata eugenola ekstrakcijom.

Ova metoda se zasniva na osobini eugenola da sa 3% vodenim rastvorom natrijum hidroksida (NaOl I) gradi u vodi rastvornu so, natrijum eugenolat koji se slabo rastvara u organskim neprotičnim rastvaračima kao što su dietiletar i petroletar. Pra-teće komponente etarskog ulja se ekstrahuju petroletrom u kontinualnom procesu ekstrakcije tečno-tečno. Vodeni rastvor se zakiseli (orto fosfornom kislinom) do pH vrednosti 4 i destiluje pomoću vodene pare. Nakon odvajanja (donje) uljane faze ista se suši i destiluje pod sniženim pritiskom. U tabeli 1. data je zavisnost temperature ključanja eugenola od pritiska pod kojim se destiluje.

Čistoća dobijenog proizvoda je > 99% (površina GC).

U cilju dokazivanja izvodljivosti pronalaska data je i metoda dobijanja eugenola uklanjanjem pratećih komponenata destilacijom: Ova metoda se zasniva na osobini eugenola da sa 3% vodenim rastvorom natrijum hidroksida (NaOH) gradi u vodi rastvornu so. natrijum eugenolat, koji je dovoljno stabilan na 100° C. tako da destilacijom pomoću vodene pare destilišu samo prateće komponente ctarskog ulja. Po završetku destilacije vodeni rastvor se zakiseli (orto fosfornom kislinom) do pll vrednosti 4 i destiluje pomoću vodene pare, kada destiluje čist eugenol. Nakon odvajanja (donje) uljane faze ista se suši i destiluje pod sniženim pritisku. Pri destilacije pratećih komponenata koju čine terpeni; a-pinen, kamfen, P-pincn, limonen, cineol. p-cimen, linalol i P-kariofilen proizvod je lakši od vode te je neophodno koristiti za njihovo odvajanje odgovarajuće separatore. Pri de-stilaciji eugenola, znači nakon zakišeljavanja, proizvod je teži od vode te je neophodno koristiti separatore za takve proizvode.

Eugenol u ohlihi natrijeve i kalijeve soli

Pored primene prirodnog eugenola i sintetičkog eugenola u opisu pronalaska naznačena je i priinena eugenola u obliku natrijeve i kalijeve soli.

U cilju dokazivanja izvodljivosti pronalaska prikazano je dobijanje natrijeve soli eugenola. Preparat se dobi ja tehnologi jom vlažnog granulisanja. 40 g acrosil-a homogenizuje se sa 6,5 g sprašenog anhidrovanog natrijum karbonata (prethodno prosejanog kroz sito od 125 mikrona). Homogenoj smeši dodaje se rastvor ulja ka-ranfilića u 96% etil alkoholu (15 g ulja sa oko 70%> eugenola rastvorenog u 300 mL alkohola). Nastalu masu. nalik na testo, dobro izmešati u homogenizatoru i nakon to-ga protisnuti kroz sito od 2 mm. Vlažne granule sušiti na temperaturi do 30°C. Suše-njem (otparenjem alkohola) nastaje granulisan materijal dobrih mehaničkih svojstava. Preparat se nakon sušenja propusti kroz sito od 2 mm.

U nastavku dokazivanja izvodljivosti pronalaska prikazano je dobijanje kalijeve soli eugenola. Preparat se dobija tehnologijom vlažnog granulisanja. 40 g aerosil-a homogenizuje se sa 8.5 g sprašenog anhidrovanog kalij um karbonata (prethodno prosejanog kroz sito od 125 mikrona). Homogenoj smeši dodaje se rastvor ulja karanfilića u 96% etil alkoholu (15 g ulja sa oko 70% eugenola rastvorenog u 300 mL alkohola). Nastalu masu, nalik na testo, dobro izmešati u homogenizatoru i nakon toga protisnuti kroz sito od 2 mm. Vlažne granule sušiti na temperaturi do 30° C. Sušenjem (otparenjem alkohola) nastaje granulisan materijal dobrih mehaničkih svojstava. Preparat se nakon sušenja propusti kroz sito od 2 mm.

U skladu sa intencijom pronalaska prikazano je i dobi janje natrijeve i kalijeve soli eugenola. Preparat se dobija tehnologijom vlažnog granulisanja. 40 g aerosil-a homogenizuje se sa 3,5 g sprašenog anhidrovanog natrijum karbonata (prethodno prosejanog kroz sito od 125 mikrona) i 4,25 g anhidrovanog kalijum karbonata (prethodno prosejanog kroz sito od 125 mikrona). Homogenoj smeši dodaje se rastvor ulja karanfilića u 96% etil alkoholu (15 g ulja sa oko 70% eugenola rastvorenog u 300 mL alkohola). Nastalu masu, nalik na testo, dobro izmešati u homogenizatoru i nakon toga protisnuti kroz sito od 2 mm. Vlažne granule sušiti na temperaturi do 30°C. Sušenjem (otparenjem alkohola) nastaje granulisan materijal dobrih mehanič-kih svojstava. Preparat se nakon sušenja propusti kroz sito od 2 mm.

Prime/ ui etarskih ulja iz biljaka koje sadrže eugenol:

karanjtlie. pimenta i listcimeta,

U cilju poboljšanja preparata za preventivno delovanje i lečenje bolesti živo-tinja izazvanih bakterijama, gljivicama i parazitima, veoma dobri rezultati dobijeni su primenom estarskih ulja iz biljaka koje sadrže eugenol:

1. Ulje karanfilića

Drvo karanfilića( Eugeiiia carvop/ ivllataThumb. iliCarvop/ ivl/ us aromati-cusL.) raste u vlažnim toplim tropskim predclima. Geografska područja su Zanzibar i saostrovlje Pemba, Madagaskar, Cejlon. Malezija i Indonezija. Za proizvodnju ulja koristi se plod (sušeni cvet), lastari i list. Plod daje I7%-18% ulja, lastari 6% dok se iz lista može očekivati 2-3%. Kvalitet ulja karanfilića odredjena je sadržajem eugenola. Najveći sadržaj eugenola je u ulju iz ploda i kreće se od 85-95%). Sličan je kvalitet ulja i koji se dobija iz mladih lastara. Ulje dobijeno iz lista je za nijansu slabijeg kvaliteta, odnosno sa manjim sadržajem eugenola od 82-87%. Ulje karanfilića je teže od vode. Specifična težina ulja (25° C) se krede u rasponu od 1.040 do 1.069 (ulja sa višim sadržajem fenola imaju veću specifičnu težinu). Optička aktivnost (rotacija) se kreće u granicama od -0° 36' do-l" 40' (ulja sa višim sadržajem fenola imaju manju vrednost otpičke rotacije. Indeks refrakcije (20°C) se kreće od 1.521 do 1.5391.

2. Ulje pimente

Drvo pimente( Pimenta ojjicinalisLindlev,Mvrtus pimentaL. iliEitgenia pimentaD.C.) raste na ostrvima zapadne Indije i na ostrvima priobalja srednje i južne Amerike. Široko je rasprostranjen na Jamaici. Najveća količina ulja na tržištu se de-klariše kao porcklom sa Jamaike, bilo da je reč o ulju dobijenog iz plodova ili lista. Ulje koje se proizvodi na drugim ostrvima centralne i južne Amerike potiče iz razli-čitih pimenta vrsta i razlikuje se po izgledu i aromi od proizvoda sa Jamaike. Plod pimente daje prinos od 3.3%) do 4.3%. Iz lista se dobija manje ulja i da bi se dobilo ulje sa visokim sadržajem fenola neophodna je duga destilacija (i preko 10 časova). Ovakvo ulje se obično doradjuje redestilacijom kako bi se popravila boja i aroma. Veoma je teško razlikovati ulje dobijenog od ploda od ulja iz lista. Ulje pimente je teže od vode. Specifična težina ulja (25° C) se krede u rasponu od 1.024 do 1.055, optička aktivnost (rotacija) se kreće u granicama od -0° 32' do -5° 0'. indeks refrakcije (20° C) se kreće od 1.525 do 1.536. Sadržaj fenola (rastvorljivi deo u 3% vodenom rastvoru natrijum hidroksida) kreće se u granicama 65%) do 89%>

3. Ulje lista cimeta

Postoji više vrsta cimeta. Sa aspekta začina i proizvodnje etarskog ulja naj-značajniji je Cejlonski cimet( Ciniuimomum zevlanicumNees). Ulje cimeta se znatno razlikuje u zavisnosti da lije dobijeno iz cimetove kore ili lista. Kvalitetnija cimeto-va kora (finoće 0000, u gradaciji 00000 za najkvalitetniju koru a 0 za najlošiju) daje ulje koje sadrži 62,2% do 75% cimetovog aldehida i svega 6%> do 13,2%) fenola (eugenola). Najkvalitetnije ulje lista cimeta koje dolazi sa juga Cejlona (južnije od Kolomba) može sadržavati 65% do 95%) eugenola a svega do 4% cimet aldehida. Ovo ulje ima specifičnu težinu (25<U>C) u rasponu od 1.044 do 1.065. optičku aktivnost (rotaciju) u granicama od -0° 15' do +2° 20' i indeks refrakcije (20° C) od 1.53 1 do 1.540.

Kvalitativno i kvantitativno odrecljivanje eugenola

Za kvalitativno i kvantitativno odredjivanje eugenola u komercijalnim proizvodima (koji se plasiraju kao eugenol), etarskim uljima karanfilića, pimente i cimeta, čvrstim praškastim premiksima sa oko 20% eugenola, kao i u stočnoj hrani as 0,2-0,04% eugenola (odnos premiks: stočna hrana 1:100 do 1:500) korišćena je gasna hromatografija sa plameno jonizujućim detektorom GC-F1D.

Za prikazivanje rezultata korišćena je kalihraciona prava~direktna metoda

Kao standardni uzorci u ovom elaboratu uzeti su:

Eugenol, firme Merck, Kataloški broj 818455 CAS broj 97-53-0 čistoće 99%. Uzorak je čuvan pod azotom u frižideru na 4°C

/.vo-oklan, firme Kemika Zagreb čistoće za HROMATOGRAFIJU Naftalin, firme Merck, Kataloški broj 820846 CAS broj 91-20-3 čistoće 99%. Kao standardni rastvor uzet je standardni rastvor naftalina u /.vo-oktanomu 14 mg u 25 mL. Kalibracioni rastvori eugenola u/.vo-oktanomu pripremljeni su u rasponu 20 do 160 mg eugenola u litri.

Podaci za kalibracionu pravu ia eugenol

Određivanje eugenola u etarskim uljima. deterpenisanim etarskim uljima i

komercijalnim proizvodima moguće vršiti i na sledeći način:

Pripreme se dva uzorka rastvora etarskog ulja rastvaranjem približno 100 mg ulja u 25 mL /.w-oktanoma. 0.5 mL svakog rastvora razblaži se u volumetrijskom su-du od 25 mL uz dodatak 1 mL internog standarda. Tako pripremljeni rastvor će sadr-žavati oko 80 mg etraskog ulja u litri. Uporedjivanjem dobijenih površina snimlje-nog uzorka sa kalibracionom površinom moguće je izračunati sadržaj eugenola u etarskim uljima

Dobijanje kalihracione prave-metodom hidrodestilacije vrši se na sledeći način:Napravi se serija razblaženja eugenola u/'vc;-oktanomu od 200 do 1600 mg/L. Od pripremljenih rastvora po 2 mL se unese u balon za hidrodestilaciju (za odredjivanje sadržaja etarskog ulja po Clavengcr-u) i destiluje 2 časa. Dobijeni rastvor eugenola u /.vo-oktanomu suši se iznad anhidrovanog natrijum sulfata. 1 mL rastvora unese se u volumetrijski sud od 10 mL doda 0.4 inL rastvora naftalina i dopuni do oznake i analiziraju se pomoću GC-FID.

Podaci za kalibracionu pravu/a eugenol

Odredjivanje eugenola u premiksima sa oko 20% eugenola u obliku soli vrši

se na sledeći način:

Približno 0.100 g uzorka unese se u balon za hidrodestilaciju (za odredjivanje sadržaja etarskog ulja po Clavenger-u) doda se 200 mL demi vode, 1 mL 25% H:S04(pH <3) i 2 mL /.vr;-oktanoma i destiluje 2 časa. Dobijeni rastvor eugenola u w>-oktanomu suši se iznad anhidrovanog natrijum sulfata. 0.5 mL rastvora unese se u volumetrijski sud od 100 mL doda 4 mL rastvora naftalina i analizira pomoću GC-FID.

Odredjivanje eugenola u stočnoj hrani sa 0. 2 do 0. 04 %, eugenola u obliku

soli vrši se na sledeći način:

Priblžino 25 g uzorka stočne hrane unese se u balon za hidrodestilaciju (za odredjivanje sadržaja etarskog ulja po Clavenger-u) doda se 200 mL demi vode. 1 mL 25% FI2SO4 (pH<3) i 2 mL /.vo-oktanoma i destiluje 2 časa. Dobijeni rastvor eugenola u /.w;-oktanomu suši se iznad anhidrovanog natrijum sulfata. 0.5 mL rastvora unese se u volumetrijski sud od 100 mL doda 4 mL rastvora naftalina i analizira pomoću GC-FID.

Na osnovu gore prikazanih metoda i postupaka dobija se eugenol kao bezbojna ili bledožuta, viskozna, uljasta točnost karakterističnog mirisa i ljutog ukusa. Ovakav eugenol ima molekulsku formulu Cmll^O:i molekulsku masu 164,1 i tačku ključanja 251° C do 253° C. Dobro se rastvara u etanolu, etru, hloroformu i glacijalnoj sirćetnoj kiselini, a slabo se rastvara u void. Na vazduhu potamni i povećava mu se viskozitet. Od ovakvog eugenola poznatom metodom dehidracije dobija se praškasti veterinarski preparat od prirodnog i sintetičkog eugenola i etarskih ulja iz karanfilića, pimente i lista cimeta, koji predstavlja jednokomponentni preparat koji se u vidu praška koristi za peroralnu primenu u preveniranju i lečenju bolesti životinja, lg ovog praška sadrži 100 mg eugenola. Prašak je bež do krem boje, jakog, prijatnog aromatičnog mirisa i pomalo ljutog ukusa. Vodena suspenzija ovakvog praška preparata koncentracije 1% ima pH vrednost 6,2. Očuvana stabilnost traje 2 godine u dobro zatvorenoj posudi pri temperaturi ispod 25°C na štivom i tamnom mestu.

Predmetni veterinarski preparat se primenjuje umešan u hrani u koncentraciji od 0,05 kg preparata na tonu hrane (0.5 g/kg hrane) odnosno 0.05 g eugenola na 1 kg hrane. Potrebno je napomenuti da se doziranje količine predmetnog veterinarskog preparata vrši isključivo po nalogu veterinara koji će konkretne doze određivati prema vrsti životinja, njihovoj starosti, težini, uslovima uzgajanja i dr.

Način industrijske ili druge primene pronalaska

Industrijska ili druga primena eugenola, eugenola u obliku natrijeve i kalijumove soli u matriksu hidratisanog aerosila i etarskih ulja biljaka koje sadrže eugenol u preparatima za veterinarsku upotrebu je apsolutno moguća. Stručnjaci iz predmet-ne oblasti mogu bez ikakvih problema proizvesti preparate prema postupku datom u detaljnom opisu pronalaska. Preparate je moguće proizvesti u farmaceutskim pogo-nima za izradu lekova, pa čak i u dobro opremljenim farmaceutskim laboratorijama.

Primena pronalaska se preporučuje naročito u slučajevima kada je potrebno ostvariti izuzetan kvalitet mesa, mleka i jaja kao i kod osetljivih životinja koje teže podnose antibiotske i sulfonamidske preparate. Posebno se naglašava da je njegova primena neophodna kod preveniranja životinja koje se odgajaju u nepovoljnijim kli-matskim i terenskim uslovima.

Naglašava se da je predmetni pronalazak laboratorijski ispitan na Fakultetu veterinarske medicine na Katedri za farmakologiju i toksikologiju u skladu sa čl.20 Zakona o proizvodnji i prometu lekova (SI. list SRJ Br. 18/93) i Uputstvom o metodi za laboratorijsko ispitivanje lekova koji se upotrebljavaju u veterini (SI.List SRJ Br. 34/95) koja je 16. 06. 2004. izdala Mišljenje da veterinarski preparat na bazi eugenola, koji je predmet ovog pronalaska ima izraženo antibakterijsko, antigljivično i antikokcidijalno delovanje i da je efikasan kokcidiocidijalni lek koji ne ispoljava bilo kakva neželjena dejstva. Klinička delotvornost eugenola prema ovom izveštaju je potvrđena kroz ispitivanje na 4000 brojlera čija je starost na početku ispitivanja bila jedan dan.

Claims

/. Primena prirodnog i sintetičkog eugenola kao dodatka stočnoj hrani čiju osnovu čini prirodni eugenol dobijen iz etarskih ulja: kamforovog drveta( Cinnamomum camphoraSieb), idjirota( Acorus calamusL ), cironele sa Jave{ Cymbopogon winterianus Jowitt),ylang ylang drveta( Canangium odoratum Baill.),kanange( Cananga odorataHook.), orahčića{ Myristica fragransHoutt.), sasafrasa( Sassafras albi-dumNutt.), mirhe( Commiphora myrrhaNees), lista lovora( Laurus nobilisL.), Kali-fornijskog lovora{ Umbellularia californicaNutt.), korena galangalange( Alpinia of-ficinarumHanee), kajsije( Acacia farnesianaWilld.), bosiljka{ Ocimum minimumiliOcimum gratissimumL.) i ljubičice( Viola odorataL.),naznačena tim e,što se za razdvajanje eugenola od ostalih pratećih komponenata etarskog ulja koristi po-većana kiselost fenolne hidroksilne grupe, koja sa razblaženim vodenim rastvorima alkalija gradi stabilne u vodi rastvorne soli, a koje nisu isparljive pod uticajem vodene pare.
2.Primena prema zahtevu\, naznačena t i m e,što osnovu predmetnog dodatka stočnoj hrani čini sintetički eugenol tj. 2-metoksi-4-(2-propenil) fenol, poznat kao 4-alil-2-metoksifenol, alilgvajakol (allvlguaiacol), eugenična kiselina (eugenic acid) i kariofilenska kiselina (caryophyllic acid), molekulske formule C10H12O2molekulske mase 164.20 .
3.Primena prema zahtevimali 2, naznačena t i m e,što se uklanjanje pratećih komponenata prirodnog i/ili sintetičkog eugenola vrši destilacijom, pri čemu eugenol sa 3% vodenim rastvorom natrijum hidroksida (NaOH) gradi u vodi rastvornu so, natrijum eugenolat, dovoljno stabilnu na 100°C, tako da se destilacijom pomo-ću vodene pare destilišu samo prateće komponente etarskog ulja, a po završetku destilacije vodeni rastvor se zakiseli (orto fosfornom kislinom) do pH vrednosti 4 i destiluje pomoću vodene pare, koja destiluje čist eugenol, a zatim se nakon odvajanja (donje) uljane faze ista suši i destiluje pod sniženim pritiskom.
4.Primena prema zahtevima \ i2, naznačena t i m e,što je dodatak stočnoj hrani, eugenol u obliku natrijeve soli dobijen tehnologijom vlažnog granulisanja, tako što se 65 mas/% aerosila homogenizuje se sa 10,5 mas/% sprašenog anhidrovanog natrijum karbonata , a zatim se homogenoj smeši dodaje rastvor ulja karan-filića u 96% etil alkoholu pri čemu se nastala masa izmeša u homogenizatoru i nakon toga protisnuli kroz sito od 2 mm, a dobijene vlažne granule osušili na temperaturi do 30°C.
5. Primena prema zahtevima \ \2, naznačena t i m e,što dodatak stočnoj hrani sadrži eugenol u obliku kalijeve soli dobijen tehnologijom vlažnog granulisanja, tako što se 63 mas/% aerosil-a homogenizuje se sa 13,3 mas/% sprašenog anhidrovanog kalijum karbonata (prethodno prosejanog kroz sito od 125 mikrona), a zatim se homogenoj smeši dodaje rastvor ulja karanfilića u 96%> etil alkoholu (23,7 mas/% ulja sa oko 70%> eugenola rastvorenog u 300 mL alkohola), da bi nastalu ma-su, nalik na testo, dobro izmešali u homogenizatoru i nakon toga protisnuli kroz sito od 2 mm, i potom dobijene vlažne granule osušili na temperaturi do 30°C.
6.Primena prema zahtevima \ \2, naznačena t i m e,što se od ulja eugenola poznatom metodom dehidracije dobija praškasti jednokomponentni preparat koji se u vidu praška u razmeri, gde 100 mas/% praška sadrži 10 mas/% eugenola, koristi za peroralnu primenu pri preveniranju i lečenju bolesti životinja.
7. Primena prema zahtevu1, naznače na t i m e,što se dobijeni eugenol dodaje stočnoj hrani u koncentraciji od 0,05 kg/t hrane, 0,5 g/kg odnosno 0,05 gr/kg.