RS51855B

RS51855B - Mikrobiološki postupak za dobijanje 7alfa-supstituisanih 11alfa-hidroksisteroida

Info

Publication number: RS51855B
Application number: YU20050045A
Authority: RS
Inventors: Rolf Bohlmann; Hermann Künzer; Reinhard Nubbemeyer; Hans-Peter Muhn; Ludwig Zorn; Norbert Gallus
Original assignee: Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft
Priority date: 2002-07-24
Filing date: 2003-07-24
Publication date: 2012-02-29
Also published as: EP1523568A2; KR101041328B1; WO2004011663A2; JP4417838B2; CO5690563A2; CA2492079A1; EA200500224A1; HRP20050172A2; MXPA05001024A; NO20050980L; WO2004011663A9; IL166358A0; CA2492079C; EA010572B1; AU2003281677A1; PH12005500143B1; JP2006503813A; HK1081999A1; WO2004011663A3; RS20050045A

Abstract

MIKROBIOLOŠKI POSTUPAK ZA DOBIJANJE 7ALFA-SUPSTITUISANIH 11ALFA-HIDROKSISTEROIDA. Postupak za dobijanje 7α,17α-supstituisanih 11β-halogensteroida opšte fomiule 10,u kojoj jeR7 grupacija P-Q, pri čemuP predstavlja C1 do C4-alkilen a Q vodonik, C1 do C4-alkil ili C1- do C4-fluoroalkil a grupacija P-Q je vezana preko P za steroidni skelet,R10 stoji za H, CH3 ili CF3,R11 stoji za halogen,R13 stoji za metil ili etil,R17 stoji za CH3, C1- do C18-alkinil, CH2CN ili CF3, iR17 stoji za H,sa sledećim stupnjevima postupka:- Nukleofilna supstitucija na jednom 7a-supstituisanom 11α-hidroksisteroidu opšte formule 4,Bu kojojR7, R10 i R13 imaju gore pomenuto značenje,- u položaju 11 sa nekim halodehidroksilujućim reagensom;- reakcija tako nastalog 7α-supstituisanog 11β-halogensteroida sa nekim alkilujućim sredstvom selektivno na C17-atomu prstenastog skeleta u 7α,17α-supstituisani 11β-halogensteroid opšte formule 10.

Description

Pronalazak se odnosi na postupak za dobijanje 7a-supstituisanih 11a-Hidroksisteroida, 7a,17a-supstituisanih ll|3-halogensteroida koji se iz njih mogu dobiti, postupak dobijanja poslednjih jedinjenja kao i na njihovu primenu i farmaceutske preparate koji sadrže ova jedinjenja. Osim toga pronalazak se odnosi na dalje 7a-supstituisane 11 p-halogensteroide, naime 7<x-supstituisane Estra-l,3,5-(10)-triene, koji se mogu dobiti iz 7a-supstituisanih lla-Hidroksisteroida.

Za terapiju Klimakterijum virile i za razvoj muških seksualnih organa kao

i za mušku kontrolu fertiliteta koriste se androgeni, naročito testosteron. Ovi hormoni poseduju osim toga i parcijalno anabole aktivne komponente koje pored ostalog pospešuju rast mišića.

Klimakterijum virile se odlikuje starošću uslovljenim zaostajanjem telu sopstvene proizvodnje androgena, tako da se radi lečenja sprovodi zamena hormona (HRT: hormone replacement therapv).

LH-RH-davanja za mušku kontrolu fertiliteta dovodi pored smanjene spermatogeneze i do izlučivanja LH i do smanjivanja nivoa testosterona i libida, koje se davanjem testosteronskih lekova izjednačuje (D. E.Cummings et al., "Prostate Sparing Effects of the Potent Androgen 7a-Methvl-19-Nortestosterone: A Potential Alternative to Testosterone for Androgene Replacement and Male Contraception ",Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism,Vol. 83, Nr.12 strane 4212-4219

(1998)).

Kombinovana terapija davanjem androgena i neke gestageno delujuće komponente može da se primeni za kontrolu muškog fertiliteta (vidi na primer WO 01/60376 A kao i u njemu citirane dokumente).

Pri lečenju testosteronom pokazalo se, da se pojavljuju sporedna dejstva, naročito povećanje prostate preko numeričkog porasta ćelija i žlezda stroma (BPH: benigna hiperplazija prostate). Kod metabolizma testosterona posredovanog 5a-reduktazom nastaje dihidrotestosteron (DHT), što pored ostalog može da dovede do nastajanja BPH (Cummings et al, ibid.; W099/13883 Al). Inhibicija 5a-Reduktaze se zbog toga koristi na klinici za lečenje BPH (Finasteridi)

Brzi metabolizam androgenog steroida testosterona u telu ljudi ne dovodi dalje samo do stvaranja neželjenog DHT, već i tome, da je potrebno oralno davanje veće doze, da bi se dosegao nivo delovanja testosterona. Zbog toga su poterbni alternativni oblici davanja, kaoLm.-injekcijeili veliki flasteri.

Kao zamena testosteronu u pomenutim oblastima indikacija, predložen je 7a-Metil-19-nortestosteron (MeNT), koji sa jedne strane ima veću biološku aktivnost nego testosteron, pošto ima veći afinitet vezivanja na receptore androgena. Sa druge strane odoleva verovatno zbog sterne smetnje 7a-Metilgrupe metabolisanju 5a-reduktazom (Cummings et al., ibid., WO 99/13883 Al, WO 99/13812 Al, US-A-5,342,834).

Pri metabolizmu testosterona se dalje, jedan manji deo ovog jedinjenja aromatisanjem prstena A steroidnog sistema prevodi u estradiol, naročito u mozgu, u jetri i u masnom tkivu. Estradiol je obzirom na ukupno dejstvo testosterona i njegovih metabolita merodavan za polno specifično ponašanje i odgovoran za gonadotropin-regulaciju. Zbog toga se njegovo dejstvo, isto kao i testosterona, za odraslog muškarca može smatrati povoljnim. (Cummings et al., ibid.).

Medjutim ispostavilo se da farmakokinetika testosterona nije zadovoljavajuća. Naročito se testosteron pri oralnom davanju ponovo brzo izlučuje, tako da su efikasnost i trajanje dejstva od toga napravljenih lekova nezadovoljavajući. Zbog toga su sintetisani i drugi derivati testosterona. Derivati ove vrste opisani su pored ostalog u US-A-5,952,319, naročito 7a-, 11 P-Dimetilderivati 19-Nortestosterona, naime 7a,l ip-Dimetil-17p-hidroksi-4-en-3-on, 7a,l ip-Dimetil-17f3-heptanoilo-ksiestr-4-en-3-on, 7a, 11 P-Dimetil-17p-[[2-ciklopentiletil)karbonil]-estr-4-en-3-on, 7a,l 1 p-Dimetil-17p-(fenilacetiloksi]-estr-4-en-3-on i 7a,l 1P-Dimetil-17p-[[(trans-4-[w-butil]cikloheksil)-karbonil]-oksi]-estr-4-en-3-on.

Navedeni 7a, 11 P-Dimetilderivati poseduju kao MeNT prethodno pomenute prednosti, uključujući poboljšanu farmakokinetiku, što znači njihova efikasnost i trajanje delovanja su u poredjenju sa testosteronom poboljšani. Ovi derivati se medjutim mogu proizvesti samo preko komplikovanih načina sinteze.

Sinteza steroida mikrobiološkim putem opisana je u EP 0 900 283 BI. Tamo se navodi, da se Estr-4-en-3,17-dion i Canrenon, mogu uz primenu nekih mikroorganizama, izabranih iz grupe, koja obuhvataAspergillus nigricans, Rhizopus arrhizusi sojevePestelotia,transformisati u korespondirajući 1 la-Hidroksi analog. Medjutim u uvodu opisa upućuje se takodje i na Schibahara et al., Biochem. Biophis. Acta (1970), 172-179, koji su izvestili daje mikrobiološka reakcija 1 la-hidroksilovanja na steroidima nepredvidljiva.

Od tada predloženom pronalasku leži u osnovi problem, pronalazak derivata testosterona, koji nisu osetljivi prema redukciji pomoću 5a-reduktaze, koji imaju i poboljšanu farmakokinetiku i koji se naročito, mogu lako proizvesti. Vrlo bitan aspekt predloženog pronalaska sastoji se prema tome u tome da se pronadje postupak za bolji pristup stupnjevima koji prethode, da bi stupnjevi koji prethode bili lakši za dobijanje.

Problem koji leži u osnovi predloženog pronalaska rešava se mikrobiološkim postupkom za dobijanje 7a-supstituisanih steroida prema zahtevu 1, 3 i 6, 7a, 17a-supstituisanih 1 ip-halogensteroida prema zahtevu 11, postupak za dobijanje 7a, 17a-supstituisanih lip-halogensteroida prema zahtevima 23, 24 i 25, primena ovih 7a, 17a-supstituisanih 11 P-halogensteroida prema zahtevu 26, farmaceutski preparati koji sadrže ove 7a, 17a-supstituisanih 11 P-halogensteroide prema zahtevu 27 kao i 7a,supstituisane lip-Halogenestra-l,3,5(10)-triene prema zahtevu 21. Favorizovani oblici zahtevanih predmeta navedeni su u podzahtevima.

Definicije:

Definicije koje slede odnose se na sve delove opisa i zahteve kao i na priloženu šemu I: Sve grupacije, ostatci ili ostale strukturne jedinicemogu svaka nezavisno jedna od druge mogu da budu varirane unutar navedenih područja značenja.

Sve alkil-, alkilen-, alkenil-, alkenilen-, alkinil-, alkinilen-grupe mogu da budi ili ravnolančaste ili račvaste. Na primer jedna propenil-grupa može da bude opisana jednom od hemijskih struktura koje slede: -CH=C-CH3, - CH2-OCH2, -C(CH3)=CH2. Tako pod Cr do C18-alkil spadaju na primer metil, etil, n-propil, z-propil, n-butil, i'-butil, «-pentil, z'-pentil,f-pentil, neo-pentil, rc-heksil, 1-Meti-n-pentil, 2-Metil-«-pentil, 3-Metil-n-pentil, 4-Metil-n-pentil, 1 -Etil-w-butil, 2-Etil-w-butil i tako dalje.

Aliciklični alkil je ili cikloalkil ili cikloalkil supstituisan jednom alkilgrupom ili sa više alkilgrupa, koji su direktno vezane preko cikloalkil-prstena ili preko jedne alkilgrupe.

Na isti način je aliciklični alkenil ili cikloalkenil ili jedan sa jednom ili više alkenilgrupa ili jednom ili više alkenil- i alkilgrupa ili jednom ili više alkilgrupama supstituisani cikloalkenil ili cikloalkil, koji je direktno vezan preko cikloalkenilnog prstena ili preko jedne alkenil- ili u datom slučaju alkilgrupe, pri čemu je najmanje jedna dvostruka veza sadržana u alicikličnom alkenilu.

Aril može kao prvo da bude fenil ali takodje i 1-Naftil, 2-Naftil. Aril uključuje principijelno takodje i heteroaril, naročito 2-,3- i 4-piridinil, 2- i 3-furil-, 2- i 3- tienil-, 2- i 3-pirolil-, 2-,4- i 5-imidazolil-, piridazinil, 2-,4-i 5-pirimidinil kao i 3- i 4-piridazinil.

Halogen je fluor, hlor brom ili jod.

Farmaceutski podnošljive adicione soli su soli odgovarajućih jedinjenja sa neorganskim ili organskim kiselinama, na primer sa hlorovodoničnom kiselinom, bromovodoničnom kiselinom, jodovodoničnom kiselinom, sirćetnom kiselinom, limunskom kiselinom, oksalnom kiselinom, vinskom kiselinom i metansulfonskom kiselinom. Estri se mogu graditi naročito sa ćilibarnom kiselinom.

Visoko postavljene brojke na simbolima, na primer R<13>, označavaju njihov položaj na steroidnom skeletu, pri čemu su C-atomi u steroidnom skeletu numerisani prema IUPAC-nomenklaturi. Visoko postavljene brojke na simbolima C, na primer C<10>, označavaju položaj dotičnog atoma ugljenika u steroidnom prstenu.

Opis pronalaska:

Novi mikrobiološki postupci služe za dobijanje 7a-supstituisanih 11a-hidroksisteroida opšte firmule 4,B:

u kojoj je

R grupacija P-Q, pri čemu

P predstavlja Cr do C4-alkilen a Q vodonik, Cr do C4-alkil ili Cido C4-fluoralkil (alkil delimično ili potpuno fluorovan) a grupacija P-Q je preko P vezana za steroidni skelet,

R<10>stoji za H, CH3ili CF3i

R13 je metil ili etil.

U jednoj od prvih varijanti postupka za dobijanje ovih supstanci hidroksiluje se i oksiduje, u jednom stupnju postupka, pogodni 7a-supstituisani steroid opšte formule 3,A:

u kojoj R<7>, R<10>i R<13>i<m>aju isto značenje kako je navedeno za jedinjenja opšte formule 4,B, uz primenu nekog mikroorganizma, izabranog iz grupe, koja obuhvataAspergillus sp., Beauveria sp., Glomerella sp., Gnomonia sp., Haplosporella sp. i Rhizopus sp.Naročito su pogodne

Apergillus Awamori, Aspergilus fischeri, Aspergilus malignus, Aspergilus

niger, Beauveria bassiana, Glomerella cingulata, Gnomonia cingulata,

Haplosporella hesperedica i Rhizopus stoloniferpri čemu se naročito koristeApergillus Awamori(CBS),Aspergilus fischeri(ATCC 9142),Aspergilus malignus(IMI 16061),Aspergilus niger(ATCC 9142),Beauveria bassiana(ATCC 7159),Glomerella cingulata(CBS 15226, CBS 23849, CBS 98069, ATCC 56596, ATCC 64682, IFO 6425,Gnomonia cingulata(CBS 15226),Haplosporella hesperedica(CBS 20837)i Rhizopus stolonifer(ATCC 15441).

Ovaj mikrobiološki postupak dobijanja može da se izvedei u dva stupnja, pri čemu se reakcije hidroksilovanja i oksidacije odvijaju u dva, jedan za drugim, sledeća stupnja. Tokom reakcije može da se upravlja preko trajanja reakcije: Tako što se reakcija nakon odredjenog vremena prekine, mogu se izolovati hidroksilovane , ali ne i oksidovane vrste. Oba stupnja postupka mogu stoga da se izvedu odvojeno ili u jednom fermentoru sa meščem.

Jedinjenje sa opštom formulom 3,A može da se hidroksiluje u položaju 11 u nekom prvom stupnju mikrobiološkog postupka uz primenu nekog od prvih mikrorganizama izabranih iz grupe, koja obuhvataAspergillus

sp., Beauveria sp., Gibberella sp., Glomerella sp., Gnomonia sp.,

Metarrhizium sp., Nigrospora sp., Rhizopus spiVerticillium sp.,pri čemu se gradi 7a-supstituisani steroid sa hidroksilnom grupom u položaju 11a. Ovo jedinjenje ima opštu formulu C:

u kojoj R<7>, R<10>i R<13>i<m>aju isto značenje kao što je prethodno navedeno za jedinjenje opšte formule4,B. Naročito se koristeAspergilus malignus,

Aspergilus melleus, Aspergilus niger, Aspergilus ochraceus, Beauveria

bassiana, Giberella fujikuroi, Giberella zeae, Glomerella cingulata,

Glomerella fusaroides, Gnomonia cingulata, Metarrhizium anisopliae,

Nigrospora sphaerica, Rhizopus stolonifer, Rhizopus oryzaei

Verticillium dahliae.Za hidroksilovanje se naročito koristeAspergilus malignus(IMI 16061),Aspergilus melleus(CBS),Aspergilus niger(ATCC 11394),Aspergilus ochraceus(NRRL 405, CBS 13252, ATCC 46504),Beauveria bassiana(ATCC 7159, IFO 5838, ATCC 13144, IFO 4848, CBS 11025, CBS 12736),Giberella fujikuroi(ATCC 14842),Giberella zeae ( CBS 4474), Glomerella cingulata(ATCC 10534, CBS 23849, CBS 23749, ATCC 16646, ATCC 16052, IFO 6459, IFO 6425, IFO 6470, IFO 5257, ATCC 64682, ATCC 15470),Glomerella fusaroides(ATCC 9552),Gnomonia cingulata(CBS 15226),Metarrhizium anisopliae(IFO 5940),Nigrospora sphaerica(ATCC 12772),Rhizopus stolonifer(ATCC 6227b, ATCC 15441),Rhizopus oryzae(ATCC 4858, ATCC 34102, ATCC 34102) iVerticillium dahliae(ATCC 11405).

Medjuproizvod C se potom oksiduje u sledećem koraku mikrobiološkog postupka uz primenu drugog mikroorganizma izabranog iz grupe koja obuhvataBacillus sp., Mycobacterium sp., Nocardia spiPseudomonas spuz stvaranje 7a-supstituisanog 1 la-hidroksisteroida opšte formule 4,B. Naročito se primenjujuBacillus lactimorbus, Bacillus sphaericus,

Mycobacterium neoaurum, Micobacterium smegmatis, Nocardia

corallina Nocardia globerula, Nocardia minima, Nocardia restrictus,

Nocardia rubropertincta, Nokarnia salmonicolor i Pseudomonas

testosteroni,pri čemu se posbno primenjujuBacillus lactimorbus(ATCC 245),Bacillus sphaericus(ATCC 7055),Mycobacterium neoaurum(ATCC 9626, NRRL B-3683, NRRL B-3805),Micobacterium smegmatis(ATCC 14468),Nocardia corallina(ATCC 31338)Nocardia globerula,(ATCC 9356),Nocardia minima(ATCC 19150),Nocardia restrictus(NCIB 10027),Nocardia rubropertincta(ATCC 14352),Nokarnia salmonicolor(ATCC 19149)i Pseudomonas testosteroni(ATCC 11996).

U jednoj daljoj varijanti postupka mogu da se dobiju jedinjenja opšte formule4,Bu mikrobiološkoj reakciji iz 7a-supstituisanih steroida opšte formule D :

u kojoj R<7>, R<10>i R<13>i<m>aju ista značenja kao što je navedeno za jedinjenja opšte formule 4,B- Ova reakcija se izvodi uz primenu nekog

mikroorganizma, izabranog iz grupe, koja obuhvataAspergillus sp.,

Beauveria sp., Curvularia sp., Giberella sp., Glomerella sp., Gnomonia

sp., haplosporella sp., Helicostyllum sp., Nigrospora sp., Rhizopus sp., i

Syncephalastrum sp.,pri čemu steroidni skelet biva u položaju 11a hidroksilovan pa tako nastaje 7a-supstituisani 11 a-hidroksisteroid opšte formule 4,B. Prvenstveno se koristeAspergilus alliaceus, Aspergilus

awamori, Aspergilus fischerei, Aspergilus malignus, Aspergillus melleus,

Aspergillus nidualans, Aspergilus niger, Aspergillus ochraceus,

Aspergilus variecolor, Beauveria bassiana, curvularia lunata, Giberella

zeae, Glomerella cingulata, Glomerella fusaroides, Gnomonia cingulata,

Haplosporella hesperedica, Helicostylum piriformea, Nigrospora

sphaerica, Rhizopus oryzaeiSyncephalastrum racemosum,pri čemu naročitoAspergilus alliaceus(ATCC 10060),Aspergilus avvamori(CBS),Aspergilus fischerei(ATCC 1020),Aspergilus malignus(IMI 16061),Aspergillus melleus(CBS),Aspergillus nidualans(ATCC 11267),Aspergilus niger(ATCC 9142, ATCC 11394),Aspergillus ochraceus(NRRL 405, ATCC 13252, ATCCC 46504),Aspergilus variecolor(ATCC 10067),Beauveria bassiana(IFO 5838, ATCC 13144, IFO 4848, CBS 11025, CBS 12736, ATCC 7159),Curvularia lunata(1X3),Giberella zeae(CBS 4474),Glomerella cingulata(ATCC 10534, CBS 23849, CBS 23749, ATCC 16646, IFO 6459, IFO 6425, IFO 6470, ATCC 15093, ATCC 10529, IFO 5257, ATCC 56596, ATCC 64682),Glomerella fusaroides(ATCC 9552),Gnomonia cingulata(CBS 15226),Haplosporella hesperedica(CBS 20837),Helicostylum piriformea(ATCC 8992),Nigrospora sphaerica(ATCC 12772),Rhizopus oryzae(ATCC 4858) iSyncephalastrum racemosum(IFO 4827).

Posbno su pogodni postupci, kojima se dobijaju 7a-supstituisani 11a-hidroksisteroidi opšte formule4,B,u kojima medjusobno nezavisno R stoji za CH3i/ili R<10>stoji za H i/ili R<13>stoji za CH3.

Postupak se izvodi na uobičajeni način. Za to se tipično prvo proizvede sterilisana hranljiva podloga za soj pa se ovaj hranljivi rastvor zaseje rastvorom kulture soja, da bi se soj odgajio. Na ovaj način proizvedena predkultura prenese se onda u fermentor, koji je takodje šaržiran podesnim hranljivim rastvorom. Pogodno je, posle faze odrastanja kulture soja, dodavanje polazne supstance u fermentor, u predloženom slučaju znači ili jedno jedinjenje opšte formule 3,A ili jedno jedinjenje opšte formuleD,tako da reakcija prema pronalasku može da se odvija. Posle završetka reakcije smeša materija se obradjuje na uobičajeni način, da bi se izolovao željeni 7a-supstituisani 1 la-hidroksisteroid.

Iz tako dobijenih jedinjenja opšte formule4,Bmogu da se sintetišu dalja jedinjenja prema pronalasku sa takodje postupcima prema pronalasku. Naročito 7a,17a-supstituisani 11 P-halogensteroidi opšte formule8,10,12predstavljaju vredne aktivne komponente:

u kojoj

U-V-W-X-Y-Z stoji za jednu od prstenastih struktura C -C^-C-C4=C5-C10, C'-C<2->C<3->C<4->C<5>=C<U>) ili C'-C2-C3-C4-C5-C'°, pri čemu je u ovom slučaju jedna oksigrupa (=0) vezana za W (-C°), ili za prstenastu strukturu C-C<2->C<J>=C<4->C°=C<6>, pri čemu je u ovom slučaju ostatak OR<3>vezan na W (=C<3>)

R<3>stoji za H, Crdo C4-alkil, Cr do C4-alkanoiI, ili jedan ciklični C3- do C7etar sa O atomom OR'-ostatka

R7 je grupacija P-Q, pri čemu predstavlja

P jedan Ci- do C4-alkilen a Q jedan vodonik, d - do C4-alkil ili Crdo C4-fluoroalkil

a grupacija P-Q je vezana preko P za steroidni skelet

R<10>može da bude a- ili 13- položajno i da stoji za H, CH3ili CF3i samo je onda prisutan kada X-Y-Z nije C<4->C<3>=C<1>()

R11 je halogen

R13 je metil ili etil

R<17>stoji sa H, Cr do C)8-alkil, aliciklični Cr do Ci8-alkil, Ci - do C]8-alkenil, aliciklični Crdo Ci8-alkenil, Crdo C]8-alkinil, d - do Ci8-alkilaril, Cr do C8-alkiIennitril ili za grupaciju P-Q, pri čemu grupacija P-Q ima prethodnonavedeno značenje R<17>' stoji za H, d - do C|8-alkil, aliciklični Crdo C,8-alkil, Cr do Ci8-alkenil, aliciklični Cr do Ci8-alkenil, Crdo Ci8-alkinil ili C,-do Ci8-alkilaril, pri čemu R<17>može da bude takođe preko keto grupe vezan na 17B-oksi grupu, i pri čemu R<17>dodatno može da bude supstituisan sa jednom ili više grupa NR<I8>R<19>ili sa jednom ili više grupa SOxR<20>, pri čemu je x = 0, 1 ili 2 a R<18>, R19 iR20uvek međusobno nezavisno, mogu da imaju isto značenje kao i R17

kao i njihove farmaceutski podnošljive adicione soli, estri i amidi. Ova jedinjenja koja se daljim stupnjevima postupka mogu dobiti iz 7a-supstituisanih 1 la-hidroksisteroida opšte formule 4,B su dragocene

aktivne materije sa snažnim androgenim dejstvom bez spomenutih sporednih dejstava. Ova jedinjenja su podesna za dobijanje lekova a naročito delotvornih kontraceptiva i aktivnih materija za terapiju zamene hotmona (HRT).

U slučaju dajeR17 dodatno supstituisana sa grupom NR<18>R<19>, tu može da se radi o metilamino-, dimetilamino-, etilamino-, dietilamino-, cikloheksilamino-, dicikloheksilamino-, fenilamino-, difenilamino-, benzilamino- ili dibenzilaminogrupi.

Naročito povoljni 7a,17a-supstituisani 11 p-halogensteroidi opšte formule 8,10,12 su jedinjenja kod kojih U-V-W-X-Y-Z stoji za prstenastu strukturu C'-C^C'-C^-C10,C'-C^-C'-C^C<10>ili C^C^C^C<4->C5=C10.

U prvom slučaju (U-V-W-X-Y-Z= C'-C^-C^C^C10) radi se o steroidu opšte formule 10:

U drugom slučaju (U-V-W-X-Y-Z= C'-C^C^C^C^C<10>) radi se o steroidima opšte formule 12:

Kod jedinjenja opštih formula 10 i 12 radi se o androgenim jedinjenjima.

U trećem slučaju (U-V-W-X-Y-Z = C<!><:<2->C<3><:<4->C<5>=C<6>)radi se o steroidima opšte formule 8:

Ova jedinjenja su estrogeni (estrogenih receptora afmitivna jedinjenja).

U sva tri slučaja ostatci R<3>, R<7>, R10,R11,R1<3>, R<17>i R17 imaju ista značenja kao i odgovarajući ostatci u opštim formulama 8,10,12. Prvenstveno, medjusobno nezavisno stoje R<1>za H, i/ili R<7>za CH3i/ili R<u>za fluor i/ili R<13>za CH3i/ili R<17>za H, CH3, Crdo C,8alkinil, naročitoetinil, CH2CN ili CF3 i/ili R<17>' za H.

Naročito povoljni 7a,17a-supstituisani 11 (3-halogensteroidi prema pronalasku opšte formule8,10,12su: 17a-Etinil-l ip-fluor-17(3-hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-on (formula 10) 17a-Etinil-11 p-fluor-17p-hidroksi-7a-metilestr-5( 10)-en-3-on(formulal2) 17a-Etinil-llp-fluor-7a-metilestr-l,3,5(10)-trien-3-17<p->diol (formula 8). Za dobijanje ovih jedinjenja moguće je krenuti sledećim putevima dobijanja: Za dobijanje 7a-17a-supstituisanih 11 P-halogensteroida opšte formule 10 u kojima U-V-W-X-Y-Z stoji za prstenastu strukturu C'-C^-C'-C^C<5->C<10>koriste se kao polazne supstance 7a-supstituisani 1 la-hidroksisteroidi opšte formule 4.B dobijeni mikrobiološkim postupkom prema pronalasku.

U prvom stupnju sinteze se ovi tako dobijeni 7a-supstituisani 1 la-hidroksisteroidi nukleofilnom supstitucijom sa nekim halodehidro-ksilujućim reagensom prevode u odgovarajuće 7a-supstituisane lip-halogensteroide 5:

Kao halodehidroksilirajući reagensi u obzir dolaze svi za ovo uobičajeni reagensi, na primer fluor-, hlor-, brom-, ili jodovodonična kiselina, tionilhlorid ili tionilbromid, fosforpentahlorid, fosforoksihlorid, N-hlorsukcinimid, trifenilfosfin/ugljentetrahlorid, HF/piridin ili dietilamino-sumportrifluorid ili prvenstveno nonaflilfluorid/l,5-diazabiciklo-[5,4,0]undecen.

Iz 5 se zatim selektivnim alkilovanjem na C prstenastog skeleta dobija jedinjenje10(vidi za ovo šemu I). Za selektivno alkilovanje mogu biti upotrebljeni uobičajeni reagensi za alkilovanje, na primer, Grinjarova jedinjenja, i organometalna jedinjenja, naročito alkillitijum-jedinjenja. Na primer za dobijanje odgovarajućeg 17a-Etinil-17P-hidroksi-estr-4-en-3-ona iz Estr-4-en-3,17-diona može da se kao alkilujući reagens upotrebi etinilmagnezijum bromid.

Za dobijanje 7a,17a-supstituisani 11 P-halogensteroida, u kojima U-V-W-X-Y-Z stoji za prstenastu strukturu C -C -C -C -C =C i koji imaju opštu formulu 12, koriste se jedinjenja opšte formule10koja se izomerizuju, tako što se A<4->dvostruka veza izomerizuje u A<5>(<10>)-dvostruku vezu. Da bi se štitile 3- keto grupe, stvara se prvo zbog toga u položaju 3 ciklični etar. Nakon toga se dvostruka veza A<4>izomerizuje u A5(10)-dvostruku vezu, pri čemu se gradi 7a, 17a-supstituisani 11 [3-halogensteroid opšte formule 12, a zaštitna grupa se odcepi.

Za dobijanje daljih 7a,17a-supstituisani 11 p-halogensteroida, opšte formule 8 u kojima U-V-W-X-Y-Z stoji za prstenastu strukturu C =C -C3=C4-C5=C<10>postupa se kako sledi: Prvo se kako je već prethodno opisano stvara odgovarajući lip-halogensteroid opšte formule 5 iz mikrobiološkim hidroksilovanjem i oksidacijom dobijenog 7a-supstituisanog 11 a-hidroksisteroida opšte formule4Bi halodehidroksilovanjem nukleofilnom reakcijom supstitucije.

Iz ovoga se onda oksidacijom, na primer sa nekom bakar(II)solju stvara 7a-supstituisani Estra-l,3,5(10)-trien opšte formule 6:

u kojoj R3,R7,R11i R<13>im<a>ju ista značenja kao što je prethodno naznačeno. U koliko R<3>stoji za H, ova jedinjenja mogu da se neposredno sintetišu. Ako umesto H stoji neki drugi ostatak za R , moraju da se naprave na poznati način odgovarajući etri ili estri, pošto je oksidacijom napravljen 1,3,5(10)-trien-prsten.

7a-supstituisani 1 ip-halogenestra-l,3,5(10)-trieni opšte formule 6 takodje su novi kao i njihove farmaceutski podnpšljive adicione soli, estri i amidi i zbog toga se štite kao madjuproizvodi pri sintezi, takodje prema pronalasku, 7a,17a-supstituisanih 11 p-halogensteroida opšte formule 8.

Naročito pogodan 7a-supstituisani 1 ip-halogenestra-l,3,5(10)-trien opšte formule 6 je 1 ip~Fluor-3-hidroksi-7a-metilestra-1,3,5(10)-trien-17-on.

Iz 7a-supstituisanih 1 ip-halogenestra-l,3,5(10)-triena ošte formule 6 može se na isti način, kako je prethodno opisano za sintezu jedinjenja opšte formule10,selektivnim alkilovanjem na C<17>prstenastog skeleta napraviti 7a,17a-supstituisani 1 ip-halogensteroid opšte formule 8.

Nadalje se mogu dobiti iz, mikrobiološkim hidroksilovanjem i oksidacijom 7a-supstituisanih steroida opšte formule 3,A iliD,dobijenih supstanci opšte formule 4,B takodje 7a-supstituisani 11 P-halogensteroidi opšte formule 9, koji takodje poseduji androgeno dejstvo:

u kojoj R<7>, R<11>i R13 imaju isto značenje kako je prethodno navedeno. Naročito pogodno jedinjenje je 1 i<p->Fluor-17p-hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-on. Jedinjenja opšte formule 9 kao i njihove farmaceutski

podnošljive adicione soli, estri i amidi pokazuju takodje androgeno dejstvo.

Za dobijanje jedinjenja opšte formule 9 redukuje se Estr-4-en-3,17-dion 5 u 17[3-Hidroksi-estr-4-en-3-on 9, na primer sa borhidridom.

Jedinjenja opšte formule 9 mogu dalje da se prevedu u odgovarajuće 7a-supstituisane 1 l|3-halogenestra-5(10)-ene:

pri čemu R<7>, R<10>, R11 i R13 imaju značenja kao u opštim formulama 8,10,12. Za to se jednjenja opšte formule 9 izomerizuju pomeranjem A4-dvostruke veze u A<5>(<10>)-dvostruku vezu. Da bi se 3-ketogrupa zaštitila, napravi se zbog toga prvo ciklični etar upoložaju 3. Zatim se izomerizuje A<4->dvostruka veza u A<5>(<10>)-dvostruku vezu pri čemu se gradi napred pomenuti 7a-supstituisani llp-halogensteroid, a zaštitna grupa se zatim odcepi.

Zaključo, iz jedinjenja opšte formule 5 mogu se izomerizacijom A4-dvostruke veze u A<5>(<10>)-dvostruku vezu dobiti takodje odgovarajući 7a-supstituisani 1 ip-halogenestra-5(10)-eni:

pri čemu R<7>, R<10>, R<n>i R<13>imaju značenja kao u opštim formulama 8,10,12. Za to se jednjenja opšte formule 5 izomerizuju pomeranjem A<4->dvostruke veze u A5(1 ^-dvostruku vezu. Da bi se 3-ketogrupa zaštitila, napravi se zbog toga prvo ciklični etar upoložaju 3. Zatim se izomerizuje A<4->dvostruka veza u A<5>(<10>)-dvostruku vezu pri čemu se gradi napred pomenuti 7a-supstituisani 11 P-halogensteroid, a zaštitna grupa se zatim odcepi.

Navedena jedijenja se mogu takodje dalje esterifikovati ili eterifikovati, u koliko postoje odgovarajuće hidroksilne grupe u položaju 3 ili 17p. Na primer jedinjenje 9 može da se prevede u odgovarajući 17P-etar ili 17P-estar. Pogodno jedinjenje je 1 ip-Fluor-17P-(4-sulfamoilbenzoksi)-7a-metilestr-4-en-3-on. Kao supstituent na oksi atomu kiseonika na C" 17 u obzir dolaze principijelno i• sti ostatci koj* i si navedeni * i za R 17'.

Naročito 7a, 17a-supstituisani 11 P-halogensteroidi opšteformule8,10,12su pogodni za proizvodnju lekova. Zbog toga se predloženi pronalazak odnosi i na primenu navedenih jedinjenja opšte formule8,10,12za proizvodnju lekova kao i farmaceutskih preparata, koji sadrže najmanje jedno od navedenih jedinjenja opšte formule8,10,12kao i najmanje jedan farmaceutski podnošljivi nosač.

Kod 7a,17a-supstituisanih 11 P-halogensteroida opšte formule 10,12 radi se o jedinjenjima sa snažnim androgenim dejstvom bez navedenih sporednih dejstava, na primer stimulacije prostate (naročito bez benigne hiperplazije prostate). Jedinjenja se mogu lako sintetisati. Pokazalo se, da se jedinjenja prema pronalasku opšte formule 10 ilil2 ne mogu upotrebiti samo za muški HRT, već i da su ova jedinjenja bez dodatnog davanja daljih aktivnih materija podesna kao delotvorni muški kontraceptiv, ako se preduzme dovoljno doziranje, da bi se nivo u krvi LH, od testosterona proizvedenog u telu kao i FSH (hormon stimulacije folikule) dovoljno snizio. Ovo je zbog toga, jer 11 p-halogensteroidi inhibiraju izlučivanje LH i FSH. LH stimuliše Levdig-ćelije tako da testosteron biva secerniran. Ako se LH nivo u krvi drži nisko, snižava se takodje i telu sopstveno izlučivanje testosterona. Testosteron je potreban za spermatogenezu, dok FSH stimuliše ćelije kajma. Zbod toga je za delotvornu spermatogenezu potreban dovoljno visok FSH i LH nivo u krvi, pri čemu dovoljno visok LH nivo u krvi vodi izlučivanju testosterona potrebnog za spermatogenezu.

Pošto lečenje isključivo 7a, 17a-supstituisanim 11 p-halogensteroidima bez dodatnih aktivnih materija za sterilizaciju može već da dovede do delotvorne muške kontracepcije, davanje nekog za ovo podesnog leka može da se pojednostavi a troškovi primene da se značajno snize.

7a, 17a-supstituisani 11 P-halogensteroidi prema pronalasku mogu da se koriste takodje i u kombinaciji sa nekim gestagenom, radi kontrole muškog fertiliteta.

Osim ovoga inhibiraju 7a,17a-supstituisani 11 p-halogensteroidi prema pronalasku delotvorno 5a-reduktazu i steroid-ll-hidroksilazu [CYP11B

(P450cll), G. Zhang, W. L. Miller,Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism,Vol. 81 strane 3254-3256)], tako da se selektivno izbegava stimulacija prostate, a ova jedinjenja pokazuju poboljšanu farmakokinetiku. Inhibicija 11-hidroksilaze vodi do umanjene dezaktiva-cije androgenih jedinjenja i do njihovog umanjenog izlučivanja iz ljudskog organizma. Time su delotvornost i trajanje dejstva ovih jedinjenja prema poznatim jedinjenjima, naročito posle oralne aplikacije, poboljšani.

Iz prethodnih razloga ova jedinjenja su pogodna naročito za primenu u muškoj kontroli fertiliteta kao i terapiji zamene androgena sa umanjenom sklonošću ka 5a-redukciji pri istovremeno održanoj sposobnosti aromatiziranja u estrogene steroide i povoljnijem uticaju na lipide seruma i centralni nervni sistem.

Androgeno dejstvo i potvrda da navedena sporedna dejstva ne nastupaju istražen je u jednom testu semenog mehura za jedinjenja prema pronalasku opšte formule 10 i 12. Delotvornost jedinjenja prema pronalasku opšte formule 8 ispitana je testom rasta uterusa na estrogeno dejstvo.

7a, 17a-supstituisani 11 P-halogensteroidi prema pronalasku opšte formule 10 odnosno 12 odnosno farmaceutski preparati prema pronalasku, koji sadže ova jedinjenja, izuzetno su podesna za lečenje ne sterilnih muških osoba kao i principijelno muških sisara. Primena za mušku kontracepciju dovodi do toga da muške osobe postaju samo privremeno sterilne. Po završetku primene aktivnih komponenti prema pronalasku, odnosno farmaceutskih preparata, ponovo se uspostavlja prethodno stanje, tako da muška osoba nije više strilna i spermatogeneza se odvija u prvobitnom

obimu. Da bi se stanje privremenog steriliteta održalo konstantnim u toku željenog perioda vremena, treba aktivna materija odnosno preparat davati kontinualno, pri čemu davanje već prema obliku primene treba ponavljati dnevno, u kraćim ili većim vremenskim razmacima. Posle završetka jednokratnog ili ponovljenog davanja aktivne materije ili preparata, ne-sterilno stanje muške osobe se u datom slučaju ne uspostavlja odmah nego tek lagano, pri čemu za ovo potreban vremenski period zavisi od različitih faktora, na primer od doziranja, telesne konstitucije osobe i paralelnog davanja drugih lekova.

Ako se svrha davanja sastoji u kontracepciji, doziranje 7a, 17a-supstituisanih 11 P-halogensteroida mora da se postavi tako visoko, da nivo u krvi LH i FSH za svaki iznosi najviše 2,5I.E./ml (I.E.rinternacionalne jedinice), naročito najviše 1,0 I.E./ml, i testosterona najviše 10 nmol/1, naročitonajviše 3 nmol/1.

Ako 7a,17a-supstituisani 11 P-halogensteroidi treba da se koriste za FIRT, bez da treba da se dostigne kontracepcija, doziranje se postavlja niže. Za ovaj slučaj teži se nivoima dejstva, koji omogućavaju nivo u krvi LH i FSH od po više od 2,5 I.E./ml i za testosteron od više od 10 nmil/1.

Doziranja 7a, 17a-supstituisanih 11 P-halogensteroida prema pronalasku potrebna da se uspostavi nivo u krvi LH, FSH i testosterona, opšte formule10ili12zavise od mnoštva faktora i moraju stoga da se, specifično primeni, odrede. Doziranje je prvo prirodno zavisno od vrste terapije.U koliko jedinjenja treba da se upotrebe za mušku kontracepciju, moraju se davati značajno veće doze nego kod upotrebe za HRT. Dalje doziranje se upravlja takodje i prema vrsti 7a,17a-supstituisanih lip-halogensteroida i njihovoj bioraspoloživosti. Dalje je vrsta primene bitna za količinu koja se aplikuje. Na kraju doziranje zavisi takodje i od telesne konstitucije osobe koja primenjuje i daljih faktora, na primer od situacije, da li se daju paralelno i drugi lekovi.

Jedinjenja se mogu davati oralno i parenteralno, z'./?.(intraperitonealno),/.v.(intravenozno),z.m.(intramuskularno) ili perkutano. Jedinjenja se mogu takodje implantirati u tkivo.Količina koja se daje može da osciluje unutar širokog opsega, u koliko se aplikuje delotvorna količina. Zavisno od stanja koje se leči i vrste davanja može da varira količinu datog jedinjenja u širokom području. Kod ljudi dnevna doza iznosi 0,1 do 10 mg.

Trajanje primene zavisi od svrhe koja treba da se ostvari.

Za primenu u obzir dolaze kapsule, pilule, tablete, dražee, kreme, salbe, losioni, tečnosti, kao sirupi, gelovi, tečnosti za injektiranje, na primer zaLp.-, Lv-, Lm.-ili perkutano injektiranje, i tako dalje, pri čemu pojedine forme davanja jedinjenja prema pronalasku već prema njihovoj vrsti odaju u telo postepeno ili celu količinu u kratkom vremenu.

Za oralno davanje koriste se kapsule, pilule, tablete, dražee i tečnosti ili drugi poznati oralni oblici davanja kao farmaceutski preparati. U tom slučaju lekovi mogu da budu tako formulisani, da se aktivne materije oslobadjaju ili u kratkom vremenu i odaju u telo ili poseduju depo-dejstvo, takoda se ostvaruje duže trajući, lagani dotok aktivne materije u telo. Dozirajuće jedinice mogu da sadrže pored 7a,17a-supstituisanih 11 P-halogensteroida jedan ili više farmaceutski podnošljivih nosača, na primer materije za uspostavljanje reologije leka, površinski aktivne materije, posrednike rastvaranja, mikrokapsule, mikrodeliće, granulate, dalje punioce, kao silicijumova kiselina, talk, klizna sredstva, boje, mirise i druge materije.

7a, 17a-supstituisani 11 p-halogensteroidi prema pronalasku mogu takodje posebno da budu formulisani u obliku rastvora, koji je namenjen oralnoj upotrebi i koji pored aktivnog 11 P-halogensteroida sadrži i sledeće kao komponente farmaceutski podnošljivo ulje i/ili farmaceutski podnošljivu lipofilnu, površinski aktivnu supstancu i/ili farmaceutski podnošljivu hidrofilnu, površinski aktivnu supstancu i/ili farmaceutski podnošljiv, sa vodom mešljiv rastvarač. Za ovo se osim toga upućuje na WO-A-97/21440.

Da bi se ostvarila bolja bioraspoloživost steroida, jedinjenja se mogu formulisati i iz ciklodekstrinklatrata. U tu svrhu reaguju jedinjenja sa a-, P- iliY-ciklodekstrinima ili njihovim derivatima.

U koliko treba da se upotrebe kreme, salbe, losioni i tečnosti koje se primenjuju spolja, ove moraju da budu tako sastavljene da se jedinjenja prema pronalasku dopremaju telu u dovoljnoj količini. U ovim oblicima davanja sadržane su pomoćne materije, na primer materije za uspostavljanje reologije leka, površinski aktivne materije, konzervansi, posrednici rastvaranja, raszblaživači, materije za povećanje permeabiliteta za steroide prema pronalasku kroz kožu, boje, mirisne materije i materije za zaštitu kože kao kondicioneri i regulatori vlage. Zajedno sa steroidima prema pronalasku u leku mogu da budu sadržane i druge aktivne materije.

Za parenteralnu upotrebu, aktivne materije mogu da budu rastvorene ili suspendovane u nekom fiziološki podnošljivom sredstvu za rastvaranje. Kao sredstva za rastvaranje primenjuju se vrlo često ulja sa ili bez dodatka nekog posrednika rastvaranja, nekog površinski aktivnog sredstva, nekog suspendujućeg ili emulgujućeg sredstva. Primeri za primenjena ulja su maslinovo ulje, ulje kikirikija, ulje semena pamuka, sojino ulje, ricinusovo ulje i sezamovo ulje. Za formulisanje preparata za injektiranje može da se primeni proizvoljan tečni nosač, u kome su jedinjenja prema pronalasku rastvorena ili emulgovana. Ove tečnost sadrže često materije za regulaciju viskoziteta, površinski aktivne materije, konzervanse, posrednike rastvaranja, razblaživače, i druge dodatne materije, sa kojima se rastvor postavlja izotonski. Zajedno sa 7a,17a-supstituisanim lip-halogensteroidima modu da se daju takodje i druge aktivne materije. 11 P-halogensteroidi prema pronalasku mogu se tako primenjivati u obliku depo injekcije ili implantacionog preparata, na primer subkutano, koji mogu da budu tako formulisani, da se omogućava usporeno oslobadjanje aktivne materije. Za ovo mogu da se koriste poznate tehnike, na primer depo koji se rastvara ili koji radi sa membranom. Implantati mogu kao inertne materije da sadrže biološki razgradljive polimere ili sintetičke silikone, na primer silikonkaučuk. 11 P-halogensteroidi se mogu dalje za perkutano davanje ugraditi u flaster.

Navedeni primeri koji slede služe za bliže objašnjenje pronalaska:

A. Mikrobiološka sinteza: 1 la-Hidroksi-7a-metil-estr-4-en-3,17-dion (jedinjenje 4.B)

Primer 1:

Erlenmajer od 2 1 koji sadrži 1000 ml hranlivog rastvora, strilisanog 30 min u autoklavu na 121 °C, od 3 tež. % glukoze, 1 tež % vode bubrenja kukuruza, 0,2 tež % NaN03, 0,1 tež % KH2P04, 0,2 tež % K2HP04, 0,05 tež % KC1, 0,05 tež % MgS04x 7H20, i 0,002 tež % FeS04x 7H20 (pH 6,0), zaseje se sa kulturom kose cevčice sojaGnomonia cingulata(CBS 15226) i mućka 72 h na 28°C na rotacionoj mućkalici sa 165 obrtaja u minuti. Sa ovom predzasadom zaseje se fermentor od 20 1, koji je šaržiran sa 19 1 sterilnog medijuma istog krajnjeg sastava kako je opisano i za predkulturu. Osim toga dodato je još, pre sterilizacije, 1,0 ml silikonskog ulja i 1,0 ml svnperonica (oksalugljentetroksilat) kao antipenušavca. Posle faze rasta od 12 sati na 0,7 bara nadpritiska, temperature 28°C, odzračivanja od 20 l/min i brzini mešanja od 250 obrt./min. dodat je rastvor od 4,0 g 17p-Hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-ona u 40 ml DMF-a. Nastavljeno je sa mešanjem i odzračivanjem. Posle 135 sati čorba kulture je obrana i ekstrahovana 12 sati sa 10 1 metilizobutilketona i 5 sati sa 5 1 metilizobutilketona. Spojene organske faze upare se do suva. Silikonsko ulje se ispere sa heksanom. Posle hromatograflje na silika gelu sa gradijentom od heksana i etilacetata izolovano je 1,64 g (39%) 11a-Hidroksi-7a-metil-estr-4-en-3,17-diona.

Primer 2:

Erlenmajer od 2 1 koji sadrži 1000 ml hranljivog rastvora, sterilisanog 30 min u autoklavu na 121 °C, od 3 tež. % glukoze, 1 tež % vode bubrenja kukuruza, 0,2 tež % NaN03, 0,1 tež % KH2P04, 0,2 tež % K2HF;04, 0,05 tež % KC1, 0,05 tež % MgS04x 7H20, i 0,002 tež % FeS04x 7H20 (pH 6,0), zaseje se sa kulturom kose cevčice soja Glomerella cingulata (IFO 15226) i mućka 72 h na 28°C na rotacionoj mućkalici sa 165 obrtaja u minuti. Sa ovom predkulturom zaseje se fermentor od 20 1, koji je šaržiran sa 19 1 sterilnog medijuma istog krajnjeg sastava kako je opisano i za predkulturu. Osim toga dodato je još, pre sterilizacije, 1,0 ml silikonskog ulja i 1,0 ml svnperonica kao penušavca. Posle faze rasta od 12 sati na 0,7 bara nadpritiska, temperature 28°C, odzračivanje od 10 l/min i brzini mešanja od 350 obrt./min. dodat je rastvor od 2,0 g 173-Hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-ona u 30 ml DMF-a. Nastavljeno je sa mešanjem i odzračivanjem. Posle 19 sati čorba kulture je obrana i ekstrahovana 16 sati sa 20 1 metilizobutilketona i 23 sati sa 20 1 metilizobutilketona. Spojene organske faze upare se do suva. Ostatak se uglavnom rastvori u metanolu. Silikonsko ulje se ispere odfiltruje. Upari se i posle hromatografije na silikagelu sa gradijentom dihlormetana i acetona izoluje 1,55 g (73%) lla,17fi-dihidroksi-7a-metilestr-4-en-3-ona. Posle prekristalizacije iz aceton/diizopropiletar izolovano je 827 mg (39%) belih kristala tačke topljenja 163°C i [a]d=-16° (CHC13, c=0,501).

Erlenmajer od 2 1 koji sadrži 500 ml hranljivog rastvora, sterilisanog 30 min u autoklavu na 121°C, od 0,5 tež. % glukoza, 0,5 tež. ekstrakta Bacto-kvasca, 0,1 tež % peptona, i 0,2 tež % vode bubrenja kukuruza, (pH 7,5), zaseje se sa četiri krio-kugle kulture soja Bacillus sphaericus (ATCC 7055) i mućka 24 h na 28°C na rotacionoj mućkalici sa 165 obrtaja u minuti. Sa ovom predkulturom zaseju se četiri erlenmajera od 2 1 koji sadrže 500 ml sterilnog medijuma istog sastava kako je opisano i za predkulturu, svaki sa 10 % ove čorbe kulture. Posle faze rasta od 4 sati na temperaturi 28°C, i brzini mućkanja od 165 obrt./min. na rotacionoj mućkalici u svaki erlenmajer dodat je rastvor od 50 mg 11 a, 1713-Dihidroksi-7a-metilestr-4-en-3-ona u 2,5 ml DMF-a. Nastavljeno je sa mućkanjem daljih 48 h. Spojene čorbe kulture se ekstrahuju dva puta sa po 2 1 metilizobutilketona. Spojene organske faze se suše preko natrijumsulfata i upare se do suva. Pri tome se dobija 630 mg uljasto-kristalnog ostatka. Posle prekristalizacije iz aceton/diizopropiletar izolovano je 103 mg (42,9%) žućkastih kristala tačke topljenja 189°C i [a]D=+40,4° (CHCI3, c=0,529) (direktna kristalizacija bez prethodnog hromatografskog prečišćavanja).

Primer 3:

Erlenmajer of 2 1 koji sadrži 500 ml hranljivog rastvora, sterilisanog 30 min u autoklavu na 121 °C, od 3 tež. % glukoze, 1 tež % vode bubrenja kukuruza, 0,2 tež % NaN03, 0,1 tež % KH2P04, 0,2 tež % K2HP04, 0,05 tež % KCI, 0,05 tež % MgS04x 7H20, i 0,002 tež % FeS04x 7H20 (pH 6,0), zaseje se kulturom pola kose cevčice soja Aspergillus ochraceus (CBS 13252) i mućka 72 h na 28°C na rotacionoj mućkalici sa 165 obrtaja u minuti. Sa ovom predzasadom zaseje se fermentor od 10 1, koji je šaržiran sa 9,5 1 sterilnog medijuma istog krajnjeg sastava kako je opisano i za predkulturu. Osim toga dodato je još, pre sterilizacije, 0,5 ml silikonskog ulja i 0,5 ml svnperonica kao antipenušavca. Posle faze rasta od 6 sati na 0,7 bara nadpritiska, temperature 28°C, odzračavanja od 5 l/min i brzini mešanja od 350 obrt./min. dodat je rastvor od 1,0 g 7a-metilestr-4-en-3.17-diona u 15 ml DMF-a. Nastavljeno je sa mešanjem i odzračivanjem. Posle 22 sati čorba kulture je obrana i dva puta po 4 sata ekstrahovana sa 7 1 metilizobutilkeotona. Spojene organske faze-upare se do suva. Ostatak se rastvori uglavnom u metanolu. Silikonsko ulje se odfiltruje. Upari se i posle gromatografije na silikagelu sa gradijentom od dihlormetana i acetona izolovano je 0.78 g (74%) 1 la-Hidroksi-7a-metil-estr-4-en-3,17-diona. Posle prekristalivacije iz aceton/diizopropiletar izolovano je 311 mg (29,6%) belih kristala topljenja 200°C i [a]D=+52°

(CHC13, c=0,5905).

B. Chemiiski postupak dobiiania

Primer 4:Dobijanje ll<p->Fluor-17(3-hidroksi-7a-metilestr-4-en-3ona:

a) 11 P-Fluor-7a-metilestr-4-en-3,17-dion

U rastvor od 13,08 g 112-Hidroksi-7a-metilestr-4-en-3,17-diona

(dobijenog uz pomoć mikrobiološke sinteze prema pronalasku [deo A]) u 250 ml toluola i 18,2 ml l,8-Diazabiciklo[5,4,0]undec-7-ena na 0°C ukapa se 11,5 ml perfluorbutan-l-fluorida sulfonske kiseline. Posle 1 h neutrališe se sa 2 M sonom kiselinom, izlije u vodu, ekstrahuje četiri puta etilacetatom, ispere zasićenim rastvorom natrijumhlorida, suši i upari u vakuumu. Posle hromatografije sirovog proizvoda na silikagelu sa gradijentom od heksan/etilacetat dobija se 8,7 g 1 ip-Fluor-7a-metilestr-4-en-3,17-diona tačke topljenja 101,4°C [a]D:+135,8° (CHC13).

b) 1 ip-Fluor-17P-hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-on:

Rastvor od 8,7 g lip-Fluor-7a-metilestr-4-en-3,17-diona u 148 ml

tetrahidrofurana se na 0°C pomeša ukapavanjem sa 29,5 ml IM litijumaluminijumtri-tert-butoksihidrida u tetrahidrofuranu i na 0°C meša 5,5 h. Zatim se na 0°C doda razblažena sumporna kiselina, i reakcioni rastvor izlije na ledenu vodu, ekstrahuje tri puta etilacetatom, ispere

neutralno, suši preko natrijumsulfata,u vakuumu upari i hromatografiše na silikagelu sa heksan/etilacetat. Dobija se 5,8 g 11P-Fluor-17p-hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-ona tačke topljenja 143-144°C [a]D= +89,9° (CHC13).

Primer5: Dobijanje 1 ip-Fluor-17P-(4-suIfamoilbenzoksi)-7a-metilestr-4-en-3-ona

Rastvor od 500 mg 1 ip-Fluor-17P-hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-ona u 7,5 ml piridina, pomeša se n sobnoj temperaturi sa 750 mg 4-sulfamoilbenzoeve kiseline, 800 mg N,N-dicikloheksilkarbodiimida kao i 125 mg/7-Toluolsulfonske kiseline i meša 8,5 h. Onda se izlije na rastvor natrijumhidrogenkarbonata, četiri puta ekstrahuje dihlormetanom, ispere neutralno, suši preko natrijumsulfata, upari u vakuumu i hromatografiše na silikagelu sa dihlormetan/aceton. Dobija se 302 mg 1 ip-Fluor-17P-(4-sulfamoilbenzoksi)-7a-metilestr-4-en-3-ona tačke topljenja 232°C. [a]D= +100,5° (CHC13).

Primer6: Dobijanje 17a-Etinil-l ip-fluor-17P-hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-ona:

a) 1 ip-Fluor-3-metoksi-7a-metilestra-3,5-dien-17-on:

Rastvor od 2 g 1 lp-Fluor-7a-metilestr-4-en-3,17-diona u 20 ml 2,2-Di-metoksipropana meša se 6,5 h sa 200 mg piridinijumtozilata na 80°C. Onda se razblaži sa etilacetatom, ispere rastvorom natrij uhidrogen-karbonata i natrijumhlorida, suši preko natrijumsulfata i upari u vakuumu. Dobija se 2 g sirovog 1 ip-Fluor-3-metoksi-7a-metilestra-3,5-dien-17-ona.

b) 17a-Etinil-l ip-fluor-17p-hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-on:

Rastvor od 9,17 g Cer-III-hlorida u 60 ml tetrahidrofuranase na 0°C

pomeša u kapima sa 74,2 ml rastvora etinilmagnezijimbromida (0,5 M u tetrahidrofuranu) i meša lh na 0°C. Zatim se ukapa rastvor od 2 g sirovog 1 ip-Fluor-3-metoksi-7a-metilestra-3,5-dien-17-ona u 40 ml tetrahidrofurana i meša daljih 3,5 h na 0°C. U cilju obrade doda se zasićeni rastvor amonijumhlorida, izlije na vodu, tri puta ekstrahuje etilacetatom, ispira polukoncentrovanom sonom kiselinom, rastvorima natrijumhidrogenkarbonata, natrijumhlorida, upari u vakuumu i hromatografiše heksan/etilacetat. Dobija se 1,15 g čistog 17a-Etinil-l ip-fluor-17p-hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-ona tačke topljenja 218-220°C. [a]D=+19,2°

(CHC13).

Primer7: Dobijanje 17a-Etinil-ll<p->fluor-17P-hidroksi-7a-metilestr-5(10)-en-3-ona: a) 3,3-Etandiildioksi-17a-etinil-11 P-fluor-7a-metilestr-5(l0)-en-17p-ol Rastvor od 700 mg 17a-Etinil-lip-fluor-17p-hidroksi-7a-metilestr-4-en-3-ona u 7 ml dihlormetana i 4,7 ml etilenglikola meša se 6,5 h sa 2,3 ml trietilortoformijata i 30 mg hidrata p-toluolsulfonske kiseline na sobnoj temperaturi. Onda se izlije na rastvor natrijumhidrogenkarbonata, ekstrahuje eri puta etilacetatom, ispere neutralno, suši preko natrijumsulfata, upari u vakuumu i hromatografiše na silikagelu sa heksan/etilacetatm. Dobija se 205 mg 3,3-Etandiildioksi-17a-etinil-1 lp-fluor-7a-metilestr-5( 10)-en-17P-ola. b) 17a-Etinil-11 P-fluor-17p-hidroksi-7a-metilestr-5( 10)-en-3-on: Rastvor od 205 mg 3,3-Etandiildioksi-17a-etinil-l ip-fluor-7a-metilestr-5(10)-en-17|3-ola u 27 ml metanola i 3.6 ml vode meša se 24 h sa 361 mg oksalne kiseline na sobnoj temperaturi. Onda se izlije na rastvor natrijiumhidrogenkarbonata, ekstrahuje tri puta etilacetatom, ispere neutralno, suši preko natrijumsulfata, upari u vakuumu i hromatografiše sa heksan/etilacetat. Dobija se 95 mg 17a-Etinil-11 p-fluor-17(3-hidroksi-7a-metilestr-5(10)-en-3-ona tačke topljenja 112-114°C.

Primer8: Dobijanje 17a-Etinil-l ip-fluor-7a-metilestra-l,3,5(10)-trien-3,17p-diola: Rastvor od 500 mg llp-fluor-7a-metilestr-l,3,5(10)-trien-17-ona u 16,5 ml acetonitrila meša se 6,5 h sa 400 mg bakar-II-bromidana 25°C. Onda se razblaži etilacetatom, ispira rastvorom natrijumbikarbonata i natrijumhlorida, suši preko natruijumsulfata, upari uvakuumu i hromatografiše na silikagelu sa heksan/aceton. Dobijase 280 mg 17a-Etinil-l ip-fluor-7a-metilestra-1,3,5(10)-trien-3,17p-ona tačke topljenja 185-186°C. b) 17a-Etinil-11 P-fluor-7a-metilestra-1,3,5(10)-trien-3,17p-diola: Suspenzija od 20,3 g cer-III-hlorida u 7,5 ml tetrahidrofurana se na 0°C ukapavanjem pomeša sa 16,5 ml rastvora etinilmagnezijumbromida (0.5 M u tetrahidrofuranu) i meša 0,5 h na 0°C. Zatim se ukapavanjem doda rastvor od 280 mg 1 lp-Fluor-3-hidroksi-7a-metilestra-l,3,5(10)-trien-17-ona u 2,8 ml tetrahidrofurana i meša daljih 3,5 h na 0°C. U svrhu obrade dodaje se zasićeni rastvor amonijumhlorida izlije na vodu, ekstrahuje četiri puta etilacetatom, ispira neutralno, suši preko natrijumsulfata, upari u vakuumu i hromatografiše sa heksan/etilacetat. Dobijeno je 220 mg

17a-Etinil-11 P-fluor-7a-metilestra-1,3,5(10)-trien-3,17p-diola tačke topljenja 115-117°C.

Claims

1. Postupak za dobijanje 7a,17a-supstituisanih 1lB-halogensteroida opšte

formule 10,

u kojoj je

R<7>grupacija P-Q, pri čemu

P predstavlja Cr do C4-alkilen a Q vodonik, Ci- do C4-alkil ili Ci- do C4-fluoroalkil a grupacija P-Q je vezana preko P za steroidni skelet,

R1<0>st<o>ji za H, CH3ili CF3,

R<11>stoj i za halogen,

R<13>stoji za metil ili etil,

R<17>st<o>ji za CH3, Cr do C18-alkinil, CH2CN ili CF3, iR1<7>' st<o>ji za H,

sa sledećim stupnjevima postupka: - Nukleofilna supstitucija najednom 7a-supstituisanom 1 la-

hidroksisteroidu opšte formule 4,B

u kojoj

R7,R10i R<13>i<m>aju gore pomenuto značenje, - u položaju 11 sa nekim halodehiđroksilujućim reagensom; - reakcija tako nastalog 7a-supstituisanog 1 lB-halogensteroida sa nekim alkilujućim sredstvom selektivno na C17-atomu prstenastog skeleta u 7a, 17a-supstituisani HB-halogensteroid opšte formule 10.