RS51950B - Ciklični peptidi antagonisti cxcr4 - Google Patents

Description

[0001]Predmetni pronalazak se odnosi na nova jedinjenja cikličnih peptida kao anagonista CXCR4 i upotrebu i lečenju bolesti u kojima suje patogeneza posredovana sa CXCR4 i SDF-1.

[0002]CXCR4, G-protein- spregnuti receptor, i njegov prirodni ligand, stromalne ćelije-izvedeni faktor-1 (SDF-1; CXCL12), su par hemokinski receptor-ligand. CXCR4 je sukcesivno- ili prekomerno (povećano) - eksprimiran u različitim kancerima kod ljudi. SDF-1, jedini poznati ligand CXCR4, je povećano eksprimiran u mikrookolini tumora, kao i u koštanoj srži, plućima, jetri, i limfnim čvorovima, tj., mestima organa koja su ubično uključena u metastazu tumora. Interakcija CXCR4/SDF-1 igra važnu ulogu u višestrukim stupnjevima tumorgeneze, uključujući rast tumora, invaziju, angiogenezu, i metastazu, kao i u reumatoidnom artritisu, plućnoj fibrozi (pulmonarnoj fibrozi), i HIV infekciji (Tsutsumi et al. (2006) Peptide Science 88(2):279-289).

[0003]U pogledu učešća CXCR4/SDF-1 u ovim teškim bolestima, CXCR4 je atraktivan terapeutski cilj.

[0004]AMD3100, biciklam CXCR4 antagonist, je trenutno uFazi IIIkliničkih ispitivanja za mobiliziaciju matičnih ćelija za transplantaciju matičnih ćelija kod pacijenata sa višestrukim mijelomima i ne-Hodgkins-ovim limfomom. AMD070, sledeći msli molekul antagonist CXCR4, je trenutno u Fazi II kliničkih ispitivanja za HIV infekciju. CTCE9908, bivalentni (dimerni) peptid CXCR4 antagonist, je trenutno u Fazi lb/II kliničkih ispitivanja za kancer. FC131, ciklični pentapeptid CXCR4 antagonist, inhibira 125I-SDF-1 vezivanjem za CXCR4 transfektant sa IC504 nM (Fujii et al. (2003) Angevv. Chem. Int. Ed. 42:3251-3253; Araki et al. (2003) Peptide Science. The Japanese Peptide Societv (20041:207-210).

[0005]Postoji potreba za poboljšanim antagonistima CXCR4 koji su snažni i selektivni, ispoljavaju malu aktivnost ili su bez aktivnosti za druge hemokinske receptore. Jedinjenja predmetnog pronalaska su snažni i seletkivni antagonisti CXCR4. Njihova visoka potentnost (jačina) dozvoljava upotrebu malih doza u terapeutskim režimima, dok njihova visoka selektivnost minimizuje ne-ciljno povezane štetne sporedne efekte. Dodatno, ovde data jedinjenja poseduju druge veoma poželjne farmakološke osobine, kao stoje visoka bioraspoložoviost kada se administriraju subkutano, dobrain vivometabolička stabilnost, i farmakokinetičke/farmakodinamičke osobine koje dozvoljavaju prikladno doziranje.

[0006]Shodno ovom, u prvom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid formule I: R rciklopc, - Tyr - X3-DArg - 2Nal - Gly - X7]- X8- X9-X10- R2(SEQ ID NO:1) (I)

gde je:

a) dati laktam obrazovan amidnim vezivanjem izneđu bočnog lanca amino grupeX^i bočnog lanca karboksil grupe X7, gdeXii X7su, respektivno, par odabran iz grupe koju

čine (D/L) Agl/Glu, Dab/Glu, i Dap/Glu, i Rije Ac ili n-heksanoil; ili

b) dati laktam obrazovan amidnim vezivanjem između bočnog lanca karboksilne grupe Xii i bočnog lanva amino grupe X7, gde Xii X7su, respektivno, par odabran iz grupe

koju čine Asp/(D/L)Agl, Asp/Dab, Asp/Dap, Glu/(D/L)Agl, Glu/Dab, Glu/Dap, Glu/DDap, i Glu/Lys, i Rije Ac ili Bz, ili gdeXii X7su, respektivno, par odabran iz grupe koju čine sukcinil/(D/L)Agl, sukcinil/Dab, sukcinil/Dap, sukcinil/Lys, i sukcinil/Orn, iR^je odsutant; ili

c) dat laktam obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe Xii bočnog lanca karboksilne grupe X7, gdeX^i X7su, respektivno, par odabran iz grupe koju čine

Ala/Glu, Ala/DGlu, DAla/Glu, DAla/DGlu, Dap(Ac)/Glu, Gly/Asp, Gly/Glu, Gly/DGIu, Leu/Glu, Leu/DGlu, Lys/DGIu, Lys(Ac)/Glu, 2Nal/Glu, Phe/Glu, Phe/DGlu, DPhe/Glu, i DPhe/DGlu, i R, je odustan; ili

d) dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između ne-a, ne-bočnog lanca amino grupe X-, i bočnog lanca karboksilne grupe X7, gdeX,i X7su, respektivno, par odabran

iz grupe koju čine (3-Ala/Asp, P-Ala/Glu, 5-amino-valeril/Asp, 5-aminovaleril/Glu, 4-AMB/Glu, 4-AMPA/Asp, i 4-AMPA/Glu, i R, je odustan; ili

e) dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe X2i bočnog lanca karboksilne grupe X7, gde X2i X7su, respektivno, par odabran iz grupe koju čine

Tyr/Asp, Tyr/Glu, i Tyr/DGIu, i Rti Xisu odsutni;

R-i je supstituent na a-amino grupiX^gde Xisadrži a-amino grupu i data a-amino grupa nije deo date laktam amidne veze, odabran iz grupe koju čine Ac, Bz, i n-heksanoil, ili je odustan, gdeX,je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dab, Dap, i Glu;

Xije odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Ala, P-Ala, DAla, 5-aminovaleril, 4-AMB, 4-AMPA, Asp, Dab, Dap, Dap(Ac), Glu, Gly, Leu, Lys, Lys(Ac), 2Nal, Phe, DPhe, i sukcinil, ili je odsutan;

X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2);

X7je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dab, Dap, DDap, Glu, DGIu, Lys, i Om;

X8je odabran iz grupe koju čine (3-Ala, Arg, DArg, Gly, Lys, Lys(iPr), i Om, ili je odsutan;

X9je odabran iz grupe koju čine Gly, 2Nal, D2Nal, i DPhe, ili je odsutan;

X10je 2Nal, ili je odsutan;

pri čemu kada je X8odsutan, onda su X9i X10odustni, i kada je X9odustan , onda je X10odsutan, i

R2 je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt, ili

njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0007] Alternativno dat, ovo je ekvivalent laktam-ciklizovanom peptidu formule I: R!- ciklom - Tyr - X3-DArg - 2Nal - Gly - X7]- X8- X9-X10- R2(SEQ ID (I) NO:1)

gde:

Rtje supstituent na a-amino grupiX^gde X-isadrži a-amino grupu i ova a-amino grupa nije deo date laktam amidne veze, odabran iz grupe koju čine Ac, Bz, i n-heksanoil, ili je odsutan, pri čemu Xije odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dab, Dap, i Glu;

X1je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Ala, (3-Ala, DAla, 5-aminovaleril, 4-AMB, 4-AMPA, Asp, Dab, Dap, Dap(Ac), Glu, Gly, Leu, Lys, Lys(Ac), 2Nal, Phe, DPhe, i sukcinil, ili je odsutan;

X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2);

X7 je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dab, Dap, DDap, Glu, DGIu, Lys, i Om;

X8je odabran iz grupe koju čine (3-Ala, Arg, DArg, Gly, Lys, Lys(iPr), i Om, ili je odsutan;

Xg je odabran iz grupe koju čine Gly, 2Nal, D2Nal, i DPhe, ili je odsutan;

Xi0je 2Nal, ili je odsutan;

pri čemu kada je X8odsutan, onda su X9 i X10odsutni, i kada X9je odsutan, onda je X10odsutan, i

R2 je odabran iz grupe koju čine NH2 i NHEt,

gde je:

a) dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između bočnog lanca amino grupe X-i i bočnog lanca karboksilne grupe X7, kada Xii X7su, respektivno, par odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl/Glu, Dab/Glu, i Dap/Glu, i Rije Ac ili n-heksanoil; ili b) dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između bočnog lanca karboksilne grupeX^i bočnog lanca amino grupe X7, kada su X!i X7, respektivno, par odabran iz grupe koju čine Asp/(D/L)Agl, Asp/Dab, Asp/Dap, Glu/(D/L)Agl, Glu/Dab, Glu/Dap, Glu/DDap, i Glu/Lys, iR,je Ac ili Bz, ili kada su X, i X7, respektivno, par odabran iz grupe koju čine sukcinil/(D/L)Agl, sukcinil/Dab, sukcinil/Dap, sukcinil/Lys, i sukcinil/Orn, i R^je odsutant; ili c) dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe Xii bočnog lanca karboksilne grupe X7, gdeX,i X7su, respektivnoy, par odabran iz grupe koju čine Ala/Glu, Ala/DGIU, DAla/Glu, DAla/DGlu, Dap(Ac)/Glu, Gly/Asp, Gly/Glu, Gly/DGIu, Leu/Glu, Leu/DGlu, Lys/DGIu, Lys(Ac)/Glu, 2Nal/Glu, Phe/Glu, Phe/DGlu, DPhe/Glu, i DPhe/DGlu, i Rtje odsutan; ili d) datilaktam obrazovan formiranjem amidne veze između ne-a, ne-sporedni lanaca amino grupe X!i bočnog lanca karboksilne grupe X7, kada suX^i X7, respektivno,

par odabran iz grupe koju čine P-Ala/Asp, (3-Ala/Glu, 5-amino-valeril/Asp, 5-aminovaleril/Glu, 4-AMB/Glu, 4-AMPA/Asp, i 4-AMPA/Glu, i R, je odsutan; ili

e) dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe X2i bočnog lanca karboksilne grupe X7, kada X2i X7su, respektivno, par odabran iz

grupe koju čine Tyr/Asp, Tyr/Glu, i Tyr/DGIu, i R^ i X, su odsutni, ili

njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0008] U narednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid formule I: R , - cikloPd - Tyr - X3- DArg - 2Nal - Gly - X7]- X8- X9-X10- R2(SEQ ID NO:1) (I)

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

gde:

Xuje odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Ala, (3-Ala, DAla, 5-aminovaleril, 4-AMB, 4-AMPA, Asp, Dab, Dap, Dap(Ac), Glu, Gly, Leu, Lys, Lys(Ac), 2Nal, Phe, DPhe, i sukcinil, ili je odsutan,

pri čemu, kada X-i je (D/L)Agl, Dab, ili Dap i a-amino grupa Xinije deo laktam amidne veze, onda je data a-amino grupa supstituisana sa Rikoji je odabran iz grupe koju čine Ac i n-heksanoil;

pri čemu, kada X, je Asp ili Glu i a-amino grupa u Xtnije sastavni deo laktam amidne veze, onda je data a-amino grupa supstituisana sa Rvkoji je odabran iz grupe koju čine Ac i Bz; i

u slučaju kadaX,je Ala, P-Ala, DAla, 5-aminovaleril, 4-AMB, 4-AMPA, Dap(Ac), Gly, Leu, Lys, Lys(Ac), 2Nal, Phe, DPhe ili sukcinil, onda je Riodsutan;

X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2);

X7 je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dab, Dap, DDap, Glu, DGIu, Lys, i Om;

X8 je odabran iz grupe koju čine p-Ala, Arg, DArg, Gly, Lys, Lys(iPr), i Om, ili je odsutan;

X9 je odabran iz grupe koju čine Gly, 2Nal, D2Nal, i DPhe, ili je odsutan;

X10je 2Nal, ili je odsutan,

pri čemu, kada je X8odsutan, onda su Xg i Xi0odsutni, i kjada je X9odsutan, onda je X10je odsutan; i

R2je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt,

i daje, kada je:

dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između bočnog lanca amino grupe uX-,i bočnog lanca karboksilne grupe u X7 i Xi i X7su, respektivno, par odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl/Glu, Dab/Glu, i Dap/Glu, i Rije Ac ili n-heksanoil; ili

dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između bočnog lanca karboksilne grupe uXii bočnog lanca amino grupe u X7, i Xii X7su, respektivno, par odabran iz grupe koju čine Asp/(D/L)Agl, Asp/Dab, Asp/Dap, Glu/(D/L)Agl, Glu/Dab, Glu/Dap, Glu/DDap, i Glu/Lys, i Rije Ac ili Bz, ili pri čemu suX, iX7, respektivno, par odabran iz grupe koju čine sukcinil/(D/L)Agl, sukcinil/Dab, sukcinil/Dap, sukcinil/Lys, i sukcinil/Om, iR,je odsutan; ili

dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe u X-, i bočnog lanca karboksilne grupe u X7, iX^i X7su, respektivno, par odabran iz grupe koju čine Ala/Glu, Ala/DGIU, DAla/Glu, DAla/DGlu, Dap(Ac)/Glu, Gly/Asp, Gly/Glu, Gly/DGIu,

Leu/Glu, Leu/DGlu, Lys/DGIu, Lys(Ac)/Glu, 2Nal/Glu, Phe/Glu, Phe/DGlu, DPhe/Glu, i DPhe/DGlu, iR,je odsutan; ili

dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između ne-a, ne-bočnog lanca amino grupe u Xii bočnog lanca karboksilne grupe u X7, i X, i X7su, respektivno, par odabran iz grupe koju čine P-Ala/Asp, P-Ala/Glu, 5-amino-valeril/Asp, 5-aminovaleril/Glu, 4-AMB/Glu, 4-AMPA/Asp, i 4-AMPA/Glu, i R, je odsutan; ili

dati laktam obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe Tyr na X2i bočnog lanca karboksilne grupe u X7, i X7 je odabran iz grupe koju čine Asp, Glu, i DGIu, iRii Xisu odsutni.

[0009] Periodične motiv sekvence u svim jedinjenjima formule I je prisustvo Tyr na položaju X2, DArg na položaju X4, 2Nal na položaju X5, i Gly na položaju X6.

[0010] U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovane peptide ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde: Rije odabran iz grupe koju čine Ac i Bz, ili je odsutan; X-, je odabran iz grupe koju čine P-Ala, 4-AMB, 4-AMPA, Asp, Dab, Dap, Dap(Ac), Glu, 2Nal, Phe, i sukcinil, ili je odsutan;

X3je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2);

X7 je odabran iz grupe koju čine Asp, Dab, Dap, Glu, DGIu, Lys, i Om;

X8 je odabran iz grupe koju čine Arg i Lys, ili je odsutan;

X9 je odsutan;

X10je odsutan; i

R2 je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt.

[0011] U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde: Rnje odabran iz grupe koju čine Ac i Bz, ili je odsutan;Xt jeodabran iz grupe koju čine DAla, 5-aminovaleril, 4-AMPA, Asp, Glu, Leu, Lys(Ac), Phe, DPhe, i sukcinil;

X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2);

X7 je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dab, Dap, DDap, Glu, i DGIu;

X8 je odabran iz grupe koju čine Arg, DArg, i Lys, ili je odsutan;

X9 je odsutan;

Xi0 je odsutan; i

R2 je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt.

[0012] U narednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO: 1), gde: Rije odabran iz grupe koju čine Ac, Bz, i n-heksanoil, ili je odsutan;

X, je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Ala, 3-Ala, Asp, Dap, Glu, Gly, Lys, i Phe;

X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2);

X7 je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dap, Glu, i DGIu;

X8je odabran iz grupe koju čine P-Ala, Arg, Gly, Lys, Lys(iPr), i Om, ili je odsutan;

X9 je odabran iz grupe koju čine Gly, 2Nal, D2Nal, i DPhe, ili je odsutan;

X10 je 2Nal, ili je odsutan; i

R2je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt.

[0013] U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde: R-i je odabran iz grupe koju čine Ac i Bz, ili je odsutan;

Xije odabran iz grupe koju čine Ala, 5-aminovaleril, Asp, Glu, Gly, Phe, DPhe, i sukcinil;

X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys(iPr), i Lys(Me2);

X7 je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dap, Glu, i DGIu;

X8je odabran iz grupe koju čine P-Ala, Arg, Gly, Lys, Lys(iPr), i Om, ili je odsutan;

X9 je odabran iz grupe koju čine Gly, D2Nal, i DPhe, ili je odsutan;

Xi0je 2Nal, ili je odsutan; i

R2 je odabran iz grupe koju čine NH2 i NHEt.

[0014] U narednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde: Xtje odabran iz grupe koju čine Gly i Phe;

X3je Lys(iPr); i

X7je DGIu.

[0015] U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde:Rije odsutan;

Xije odabran iz grupe koju čine Gly i Phe;

X3je Lys(iPr);

X7je DGIu;

X8 je odabran iz grupe koju čine Arg i Lys(iPr), ili je odsutan;

X9 je odsutan;

X10je odsutan; i

R2 je odabran iz grupe koju čine NH2 i NHEt.

[0016]U narednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde: dati laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između bočnog lanca amino grupe Xii sporednog lanca karboksilne grupe X7;

Pmje odabran iz grupe koju čine Ac i n-heksanoil;

Xije odabran iz grupe koju čine (U/L)Agl, Dab, i Dap;

X3 je odabran iz grupe koju čine Arg i Lys(iPr);

X7je Glu;

X8je Arg;

X9 je odsutan;

X10 je odsutan; i

R2je NH2.

[0017]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalska, Xije (D/L)Agl ili Dap.

[0018]U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde: dati laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između bočnog lanca karboksilne grupe u Xii bočnog lanca amino grupe u X7;

Rtje odabran iz grupe koju čine Ac i Bz;

X-i je odabran iz grupe koju čine Asp i Glu;

X3 je odabran iz grupe koju čine Arg i Lys(Me2);

X7 je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Dab, Dap, DDap, i Lys;

X8je Arg;

X9 je odsutan;

Xi0 je odsutan; i

R2je NH2.

[0019] U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, X7 je (D/L)Agl, Dab, Dap, ili DDap. A bolje, X7 je (D/L)Agl ili Dap.

[0020] U narednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde: dati laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između bočnog lanca karboksilne grupe uX^i bočnog lanca amino grupe u X7;

Ri je odsutan;

Xtje sukcinil;

X3je Arg;

X7 je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Dab, Dap, Lys, i Om;

X8je Arg;

X9 je odsutan;

Xio je odsutan; i

R2 je NH2.

[0021]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, X7 je (D/L)Agl ili Dap.

[0022]U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde: dati laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe u Xii bočnog lanca karboksilne grupe u X7;

Ri je odsutan;

Xt je odabran iz grupe koju čine Ala, DAla, Gly, Dap(Ac), Leu, Lys, Lys(Ac), 2Nal, Phe, i DPhe;

X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2);

X7 je odabran iz grupe koju čine Asp, Glu, i DGIu;

X8 je odabran iz grupe koju čine P-Ala, Arg, Gly, Lys, Lys(iPr), i Om, ili je odsutan;

X9 je odabran iz grupe koju čine Gly, 2Nal, D2Nal, i DPhe, ili je odsutan;

X10je 2Nal, ili je odsutan;

Pri pemu kada je X8odsutan, onda su X9 i X10odsutni; i

R2 je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt.

[0023]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, Xije Ala, DAla, Gly, Leu, Lys, Lys(Ac), Phe, ili DPhe. A bolje, X, je Ala, Gly, Lys, ili Phe.

[0024]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, X3 je Arg, Lys, Lys(iPr), ili Lys(Me2). A bolje, X3je Arg.

[0025]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, X7je Asp, Glu, ili DGIu. A bolje, X7 je Asp.

[0026]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, X8 je P-Ala, Arg, Gly, Lys, Lys(iPr), Om, ili je odsutan. A bolje, X8 je P-Ala, Gly, Lys, Lys(iPr), Orn, ili je odsutan.

[0027]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, X9 je Gly, 2Nal, D2Nal, DPhe, ili je odsutan. A bolje, X9je Gly, 2Nal, D2Nal, ili DPhe.

[0028]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, X10je 2Nal, ili je odsutan. A bolje, X10je 2Nal.

[0029]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, R2je NHEt.

[0030]U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde: dati laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između ne-a, ne-bočnog-lanca amino grupe uXt ibolčnog lanca karboksilne grupe u X7;

Rtje odsutan;

Xtje odabran iz grupe koju čine p-Ala, 4-AMB, 5-aminovaleril, i 4-AMPA;

X3je Arg;

X7 je odabran iz grupe koju čine Asp i Glu;

X8 je odabran iz grupe koju čine Arg i DArg;

X9 je odsutan;

X10 je odsutan; i

R2je NH2.

[0031] U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, X^je P-Ala, 5-amino-valeril, ili 4-AMPA. A bolje, X, je P-Ala.

[0032]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, X7je Asp.

[0033]U poželjnoj realizaciji ovog aspekta pronalaska, X8je Arg.

[0034] Usledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so formule I (SEQ ID NO:1), gde: dati laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe u X2 i bočnog lanca karboksilne grupe u X7;

Ri je odsutan;

Xi je odsutan;

X3je Arg;

X7 je odabran iz grupe koju čine Asp, Glu, i DGIu;

X8je Arg;

Xg je odsutan;

X10 je odsutan; i

R2 je NH2.

[0035] U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid formule:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe u Phe i bočnog lanca karboksilne grupe u Glu. Farmaceutski prihvatljiva so može sa bude so sirćetne kiseline.

[0036] U sledećem aspektu, predmetni pronalazakl obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so kao to je pretodno opisano, i farmaceutski prihvatljiv nosač, diluent, ili eksipijens.

[0037] U narednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so kao što je prethodno opisano, za upotrebu u terapiji.

[0038] U narednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so kao što je prethodno opisano, za lečenje reumatoidnog artritisa, pulmonarne fibroze, infekcije HlV-om, ili kancera odabranog iz grupe koju čine rak dojke, rak pankreasa, melanom, rak prostate, rak bubrega, neuroblastom, ne-Hodgkin-ov limfom, rak pluća, rak jajnika, kolorektalni kancer, višestruki mijelom, glioblastom multiforme, i hronična limfocitična leukemija.

[0039] U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so kao što je prethodno opisano, za proizvodnju leka za lečenje reumatoidnog artritisa, plućne fibroze, infekcije HIV -om, ili kancera koji je odabran iz grupe koju čine rak dojke, rak pankreasa, melanom, rak prostate, rak bubrega, neuroblastom, ne-Hodgkin-ov limfom, rak pluća, rak jajnika, kolorektalni kancer, višestruki mijelom, glioblastom multiforme, i hronična limfocitična leukemija.

[0040] U narednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak lečenja reumatoidnog artritisa, plućne fibroze, HIV infekcije, ili kancera koji je odabran iz grupe koju čine rak dojke, rak pankreasa, melanom, rak prostate, rak bubrega, neuroblastom, ne-Hodgkin-ov limfom, rak pluća, rak jajnika, kolorektalni kancer, višestruki mijelom, glioblastom multiforme, i hronična limfocitična leukemija, a koji obuhvata administriranje pacijentu efikasnu količinu laktam-ciklizovanog peptida ili njegove faramceutski prihvatljive soli kao što je prethodno opisano.

[0041] U makrocikličnim peptidnim jedinjenjima predmetnog pronalaska (SEQ ID NO:1), amino kiselineX^do X10su ovde označene svojim uobičajenim simbolima koja se sastoje od tri slova, prikazana s leva na desno od amino-terminalnog kraja do karboksi-terminalnog kraja. D- i L- (velika slova) odnose se na apsolutnu stereohemiju. U slučaju ka nema oznake u datoj formuli, prisutan je L- oblik amino kiselina.Xitakođe može da bude ostatak dikarboksilne kiseline, tj., sukcinil grupa. Ostaci amino kiselina ili karboksilnih kiselina dati u zagradama "[ ]" su unutar ciklične strukture; grupe izvan zagrada su izvan cikličnog prstena. U svim slučajevima, ciklizacija preko laktamske (amidne ) veze između Xi(ili X2, npr., Tyr) i X7, koja se može formirati na nekoliko različitih načina, zavisi od struktura Xi, X2, i X7.

[0042] Kada je laktamska veza formriana između bočnog lanca amino grupe u X-, ,i bočnog lanca karboksilne grupe X7(Sheme 1 i 2; Primeri 1-5), onda je a-amino grupa u

Xije zaštićen sa Ac ili n-heksanoilom.

[0043]Kada je laktamska veza formirana izneđu bočnog lanca karboksilne grupe Xii bočnog lanca amino grupe X7, onda je a-amino grupa uX^zaštićena sa Ac ili Bz (Sheme 3 i 4; Primeri 6-19). Xitakođe može da bude bifunkcionalni ostatak pored a-amino kiseline, na primer jedan sa dve karboksilne grupe, npr., sukcinil ostatak. U ovom slučaju, jedna karboksilna grupa formira amidnu vezu sa a-amino grupom Tyr, i druga formira strukturu cikličnog laktama preko amidne veze sa bočnim lancem amino grupe X7(Sheme 3 i 4; Primeri 20-24). Kada je X-, , sukcinil, onda je R, odsutan.

[0044]U većini ovde datih laktam-ciklizovanih peptida (Sheme 5-15; Primeri 25-28, 32-66, i 75-89), a-amino grupaX,formira struktur laktama preko amidne veze sa bočnim lancem karboksilne grupe X7, iR^je odsutan. U shemama sinteza ove kategorije obuhvaćni su ciklični peptidi koji sadržeX^sotatke, tj., P-Ala, 4-AMB, 5-aminovaleril, i 4-AMPA, pri čemu je amino grupa, grupa ne-bočnog lanca, ne -a-amino grupa (Sheme 5 i 6; Primeri 67-74).R^je takođe odustno u ovim slučajevima.

[0045]Kada su odustni R, i Xu struktura laktama je formirana preko amidne veze između a-amino grupe Tyr (X2) i bočnog lanca karboksilne grupe X7(Sheme 5 i 6; Primeri 29-31).

[0046]Strukture uobičajenih amino kiselina, npr., alanina, glicina, itd., su dobro poznate u tehnici. Strukture ne-standardnih i supstituisanih amino kiselina koje su prisutne u jedinjenjima predmetnog pronalaska su date u daljem tekstu.

[0047]Laktam-ciklizovani peptidi predmetnog pronalska mogu se dobiti kao farmaceutski prihvatljive soli. Ove soli, i uobičajena metodologija za njihovo dobijanje, ponate su u tehnici.Videti,npr., P. Stahl et al. (2002) Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection i Use, VCHA/Wiley-VCH; Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences 66(1):1-19.

[0048]Jedinjenja predmetnog pronalska su snažni (potentni) antagonisti interakcija CXCR4/SDF-1. Jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli koje su ovde posebno data primerima pokazuju prosečnu vrednosti za Kiod oko 7.5 nM ili manje što je određeno probom vezivanja CXCR4/<125>l-SDF-1a koja je opisana u daljem tekstu. Preferentnija jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli pokazuju prosečnu vrednost za Kju opsegu od oko 0.2 nM do oko 1 nM u ovoj probi. Posebno poželjna jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli pokazuju prosečnu vrednost za Kiispod 0.2 nM u ovoj probi.

[0049]Dodatno, jedinjenja i farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalska su poželjno visoko selektivne za CXCR4 receptor, pokazuju malu ili ne pokazuju inhibitornu aktivnost za druge hemokinske receptore, uključujući CCR1, CCR2, CXCR2, CXCR3, i druge G-protein spregnuti receptori u testiranim koncentracijama, i ne značajnu aktivnost za receptore serotonina, dopamina, i opioidne receptore. Takođe, poželjlno ispolajvaju dobru stabilnost u krvi i plazmi, dobru subkutanu bioraspoloživost, poželjne farmakokinetičke/farmakodinamičke osobine, i snažnuin vivoefikasnost (delotvronost) u inhibiciji rasta tumora, sa širokom granicom sigurnosti.

[0050]U pogledu ovih farmakoloških osobina, jedinjenja predmetnog pronalaska su indikovana za lečenje poremećaja koja uključuju interakcije CXCR4/SDF-1, ili aktivnost receptora CXCR4, kao kod HIV infekcija. Posebno, jedinjenja su korisna u lečenju maligniteta u kojima su angiogene putanje, putanje rasta, preživljavanja, i metastazne putanje posredovane sa CXCR4 i SDF-1 implicirani u patogenezi, uključujući rak dojke, rak pankreasa, melanom, rak prostate, rak bubrega, neuroblastom, ne-Hodgkin-ov limfom, rak pluća, rak jajnika, kolorektalni kancer, višestruki mijelom, glioblastom multiforme, i hronična limfocitična leukemija, kao i u reumatoidnom artritisu, plućnoj fobrozi, i HIV infekciji (Tsutsumi et al. (2006) Peptide Science 88(2):279-289).

[0051]Agi (aminoglicin) je pro-hiralna gradivna jedinica( engl. building block).Kada se ovaj ostatak pojavi u peptidu ovde date formule, onda a-uzgljenik postaje hiralni centar na kojem je svaka od dve vezane a-amino grupe pojedinačno vezana za različite ostatke. U tom slučaju, krajnji peptidni proizvod sadrži dva diastereomera koji su nerazdvojeni, i koji mogu da budu prisutni i u drugim odnosima pored 1:1. "(D/L)Agl" u formuli peptida označava ovu smešu diastereomera. "(DL)Agl" označava Agi derivat koji je racemski, na primer Fmoc-(DL)Agl(Boc).

[0052]Vrednosti za "Kj" su izračunate pomoću IC50vrednosti koje su označene u probi vezivanja CXCR4/<125>l-SDF-1a koja je opisana u daljem tekstu primenom jednačine 7.22 u Enzvmes, A Practical Introduction to Strukture, Mechanism, i Data Analvsis, Robert A. Copeland, Wiley-VCH, New York, 1996, page 207.

[0053]Izraz "SDF-1" obuhvata sva izoforma, SDF-1 a i SDF-1 (3, za koje se trenutno smatra da ispoljavaju sličnu funkcionalnost.

[0054]"Lečenje/Tretman" kao što je ovde upotrebljen odnosi se na kurativni tretman poremećaja povezanih sa interakcijama CXCR4/SDF-1 ili aktivnošću receptora CXCR4. Kurativni tretman se odnosi na procese koji uključuju usporavanje, prekidanje, zadržavanje, kontrolu ili zasutavaljanje napredovanja bolesti, ali neobuhvata nužno totalnu eliminaciju svih simptoma povezanih sa bolešću, stanjima, ili poremećajima.

[0055]Jedinjenja predmetnog pronalska se mogu upotrebiti kao lekovi u humanoj ili veterinarskoj medicini, adminsitrirana na različite načine. Najpreverentnije, ove kompozicije su za parenteralnu administraciju. Ove farmaceutske kompozicije se mogu pripremiti pomoću metoda koje su poznate u tehnici.See,e.g., Remington: The Science i Practice of Pharmacv, 19th ed. (1995), A. Gennaro et al., Mack Publishing Co., i sadrže jedno ili vipe jedinjenja formule (I) ili njegovu (njegove) farmaceutski prihvatljivu so (soli) i farmaceutski prihvatljiv nosač, diluent, ili eksipijens.

[0056] Efikasna (delotvorna) količina jedinjenja kreće su u opsegu od oko 1 mg do oko 300 mg, a bolje od oko 1 mg do oko 200 mg, još bolje od oko 1 mg do oko 100 mg, i najbolje od oko 1 mg do oko 50 mg, na dan.

[0057] Svi laktam-ciklizovani peptidi predmetnog pronalska mogu se sintetisati bilo sintezom na čvrstoj fazi ili sintezom u tečnoj fazi, ili kombinacijom istih, sa peptidnim lancem na čvrstoj fazi i ciklizacijom ili drugim modifikacijama na smoli ili u rastvoru. Ove metode su dobro poznate u tehnici.

[0058]Sledeće skraćenice imaju data značenja: Ac: acetil;Agi:aminoglicin;AMB:aminometil benzoeva kiselina;AMPA:aminometil fenil sirćetna kiselina; Bn: benzil;Boe:tert-butiloksikarbonil;BOP:(benzotriazol-1-iloksi)-tris(dimetilamino)fosfoniumheksafluorofosfat;2-Br-Z:2-bromobenziloksikarbonil; Bz: benzoil;Bzl:benzil;2-CI-Z:2-hlorbenziloksikarbonil; Dab: 2,4-diaminobuterna kiselina;Dap:2,3-diamino-propionska kiselina;DCC:dicikloheksil-karbodiimid;DCM:dihlormetan;DIC:diizopropil karbodiimid;DIEA:diizopropil-etilamin;DMF,:N, Ndimetil formamid;DMSO:dimetilsulfoksid;EDT:1,2-etan-ditiol;Et:etil; Fm: 9-fluorenilmetil; Fmoc: 9-fluor-enilmetoksi karbonil;HATU:N-[(dimetilamino)-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridin-1-ilmetilen]-N-metilmetanaminium heksafluorofosfat N-oksid;HBTU:O-benzotriazolil-A/,A/,A/',A/'-tetrametiluronium heksafluorofosfat;HCTU:1H-benzotriazo-lium 1-[bis(dimetilamino)metilen]-5-hlor-3-oksid heksafluorofosfat;HF:fluorovodonik;HOBt:hidroksibenzotriazol;IBCF:izobutil hlorformat;iPr:izopropil;IPA:izopropil alkohol; Me: metil;2Nal:2-naftilalanin;NMM:N-metilmorfolin;NMP:A/-metil-pirolidon;OtBu:tert-butil estar;Pbf:2,2,4,6,7-pentametil-dihidrobenzofuran-5-sulfonil;PBS:fosfat puferovani rastvor soli;PyBOP:(benzotriazol-1-iloksi)-tris(pirolidino)-fosfonium heksafluoro-fosfat;PyBrOP:bromotris(pirolidin)fosfonium heksafluorofosfat;tBu:terc-butil;TFA:trifluorsirćetna kiselina;THF:tetrahidrofuran;TIS:triizopropil silan; Tos: p-toluen-sulfonil; Z: benziloksikarbonil;ZOSu:N-(benziloksikarbonil-oksi) sukcinimid.

[0059] Dobijanje jedinjenja predmetnog pronalska kao što je opisano u sledećim primerima treba da budu ilustrativnog karaktera pre nego ograničavajućeg. U svakom od ovih primera, zapažena molekusla težina je objaveljan kao dekonvolucija. Dekonvoluciona vrednost je izedena iz formule MW(MT); zapažena)) = n(m/z)-n, gde m/z predstavlja naelektrisani jon (pozitivni oblik) i n je broj naelektrisanja specifičnih vrsta. Kada su višestruko naleketrisane vrste prisutne u masenom spektru, zapažena molekusla težina je data kao prošek.

[0060] Sitetički postupci dati u Primerima 85-87, i procedure izotopskog obeležavanja opisane u Primeru 89, za ciklične laktam peptide koji sadrže bočni lanac izopropil lizina su jednako primenljive za druge ovde opisane peptide koji sadrže bočni lanac lizin alkila, uz odgovarajuće modifikacije. Sintetičke metode iz Primera 86-88, koje eliminišu potrebu za toksičnim paladijum katalizatorom, su takođe jednako primeljive na druge peptide koji su ovde dati, uz odgovarajuće modifikacije.

Primer 1

Ac- ciklorDap- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- Arq- NH, ( SEQ ID NO:2)

[0061] Sekvenca Ac-Dap(Alloc)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-DArg(Pbf)-2Nal-GlyGlu(Oalil)-Arg(Pbf) (SEQ ID NO:3) je sastavljena prema standardnoj Fmoc herniji korišćenjem ABI 431 Peptide Synthesizer (Applied Biosystems) kao što je dato u Shemi 1 u daljem tekstu . Automatsko sklapanje je izvedeno primenom standardnog Applied Biosystems DCC/HOBt hemijskog protokola ili FastMoc hemijskog HBTU/DIEA protokola prema isntrukcijama klijenta (PE Applied Biosystems Inc., Foster City, CA). Čvrsta podloga je Rink amidna smola (4-(2',4'-dimetoksifenil-Fmoc-aminometil)-fenoksi resin) za C-terminalne amide ili indolska smola [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smola za C-terminalne etil amide (NovaBiochem, EMD Biosciences, Inc., San Diego, CA). Sastavljanje (sklapanje) lanca u koracima počinje od C-terminalnog kraja linearnog peptida i postognuto je u 9 glavnih koraka. U koraku 1, četiri ekvivalenta zaštićenih amino kiselina Fmoc-Arg(Pbf) su aktivirana pomoću DCC/HOBt (or HBTU/DIEA za FastMoc herniju) u NMP, i kuplovani (spregnuti) sa Rink Amidnom smolom sa koje je uklonjena zaštita pomoću 20% piperidina. U koraku 2, četiri ekvivalenta Fmoc-Glu(Oalil) je aktivirano i kuplovano (spregnuto) sa peptidnom smolom iz koraka 1 sa koje je uklonjena zaštita. Odgovarajući koraci su izvedeni do koraka 8, kuplovanja Fmoc-Dap(Alloc). Zatim, Fmoc na N-terminalnom kraju je uklonjen pomoću 20% piperidina u DMF -u i acetilacija a-amino grupe je izvedena pomoću 5 ekvivalenata anhidrida sirćetne kiseline, 10 ekvivalenata DIEA u suvom DMF ili NMP, tokom 1 h na sobnoj temperaturi.

[0062] Zaštitne grupe ANI i Alloc bočnih lanaca su uklonjene pomoću 0.1 ekvivalenta Pd(Ph3P)4u prisustvu 24 ekvivalenata fenilsilana u dihlormetanu (Shema 2). Ovaj proces je još jednom ponovljen kako bi se završilo uklanjanje zaštite sa bočnog lanca. Ostatak karboksilne kiseline u Glu sa kojeg je skinuta zaštita, je aktiviran sa PyBOP/DIEA i ciklizovan u spredni lanac amino grupe Dap -a na smoli. Istovremeno sa ciklizovanog peptida je uklonjena zaštita i peptid je odvojen (otcepljen) od smole pomoću smeše( engl. scavenger coctail)TF A/H20/TIS/EDT (95/2/1/2, z/z/z/z), ili TFA/H20/TIS/anizol (92/2/4/2, z/z/z/z) tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Solevnti su zatim upareni u vakuumu, i peptid je staložen i ispran tri puta hladnim dietil etrom kako bi se uklonila smeša za otcepljivanje( engl. scavenger).Izračunata molekulska težina (MW izrač.): 1142.30; MW uočena (MW zap.): 1142.50.

[0063]Prečišćavanje peptida je izvedeno pomoću standardnih preparativnih HPLC tehnika. Neposredno posle ciklizacije, rastvor peptida je razblažen vodom koja sadrži 0.1% (z/z) TFA, nanet na reversno faznu C18 HPLC kolonu, i eluiran gradijentom koji se sastoji od vodenog rastvora 0.1% trifluorsirćetne kiseline/acetonitrila (z/z) uz praćenje na 214 nm. Odgovarajuće frakcije su sakupljene i liofilizirane. Dalja karakterizacija krajnjeg proizvoda je izveden pomoću analitičke HPLC i masene spektralne analize uobičajenim tehnikama. Za peptide sa baznim bočnim lancem, krajnji liofilizirani proizvod je TFA so.

Primer 2

Ac- ciklorDab- Tvr- Ara- DArq- 2Nal- Glv- Glul- Arg- NH? ( SEQ ID NO:6)

[0064]Pripremiti kao što je dato u Primeru 1, sa izuzetkom što je Fmoc-Dap(Alloc) u koraku 8zamenjen sa Fmoc-Dab(Alloc). MW izrač.: 1156.33; MW zapaž.: 1156.10.

Primer3

Ac- ciklorDap- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- Arg- NH7 ( SEQ ID NO:7)

[0065]Pripremiti kao što je dato u Primeru 1, sa izuzetkom što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 6 zamenjen sa Fmoc-Lys(iPr)(Boc). MVV izrač.: 1156.37; MW zapaž.: 1156.78.

Primer 4

n- Heksanoil- ciklorDap- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- Arq- NH,( SEQ ID NO:8)

[0066]Pripremiti kao što je dato u Primeru 1, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 6 zamenjen sa Fmoc-Lys(iPr)(Boc). Dodatno, anhidrid sirćetne kiseline u koraku 9 je zamenjen sa heksanskom kiselinom koja je aktivirana PyBOP/DIEA. MVV izrač.: 1212.47; MVV zapaž.: 1212.92.

Primer 5

Ac- ciklor( D/ L) Arq- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- Arq- NH, ( SEQ ID NO:9)

[0067]Pripremiti kao što je dato u Primeru 1, izuzev stoje Fmoc-Glu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Glu(OtBu), i Fmoc-Dap(Alloc) u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-(DL)Agl(Boc). Nakon sastavaljanja lanca, nema potrebe za tretiranjem sa Pd(Ph3P)4budući da nije prisutna zaštita alila. Umesto toga, ciklizacija je izvedena u rastvoru posle otcepljenja linearnog peptida od čvrste podloge (nosača) i zaštita je uklonjena. Sirov linearni peptid (0.25 mmol) nastao otcepljenjem je osušen u vakuumu i rasstvoren u 10mL suvog DMF. Ovaj rastvor peptida je je dodat u sledeći rastvor pomoću špric pumpe tokom perioda od 2 h: 15 mL suvog dihlormetana i 15 mL suvog DMF koji sadrži 1.0 mmol PyBOP i 4.0 mmola DIEA. Reakcija je onda ostavljena da se odvija na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvarači su zatim upareni u vakuumu, ostatak je nanet na preparativnu reversno faznu C18 HPLC kolonu, i ciljani ciklični peptid je izolovan i okarakterisan kao što je opisnao u Primeru 1. MVV izrač.: 1128.27; MVV zapaž.: 1128.26.

Primer 6

Ac- ciklorGlu- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Dap1- Arg- NH? ( SEQ ID NO:10)

[0068] SekvencaGlu(OtBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-DArg(Pbf)-2Nal-Gly-Dap(Boc)-Arg(Pbf)

(SEQ ID NO:11) je sastavljena prema standardnoj Fmoc herniji korišćenjem ABI 431 instrumenta kao što je dato u Shemi 3 u dlajem tekstu. Automatizovano sastavaljanje je izvedeno prema standardnom protokolu Applied Biosystems DCC/HOBt hernije ili protokolu FastMoc hernije (HBTU/DIEA) prema uputstvima proizvođača (PE Applied Biosystems Inc., FosterCity, CA). Čvrsti nosač (podloga) je Rink amidna smola za C-terminalne amide ili indolska smola [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smola za C-terminalni etil amid. Sastavljanje (sklapanje) lanca u koracima počinje od C-terminalnog kraja linearnog peptida i je odvija se u 9 glavnih koraka. U koraku 1, četiri ekvivalenta zaštićenih amino kiselina Fmoc-Arg(Pbf) je aktivirano sa DCC/HOBt (ili HBTU/DIEA za FastMoc herniju) u NMP, i kuplovano (spregnuto) kako bi se uklonila zaštita sa Rink Amide smole. U koraku 2, četiri ekvivalenta Fmoc-Dap(Boc) je aktivirano i kuplovano sa smolom iz koraka 1 sa koje je uklonjena zaštita. Odgovarajući koraci su izvedeni do koraka 8, kuplovanja Fmoc-Glu(OtBu). Za korak 9, Fmoc na N-terminalnom kraju je uklonjen pomoću 20% piperidina u DMF-u i acetilacija a-amino grupe je izvedenaoff- linedodatkom 5 ekvivalenata anhidrida sirćetne kiseline, 10 ekvivalenata DIEA u suvom DMF ili NMP, tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Krajnji proizvod je Istovremeno sa dobijenog peptita je uklonjena zaštita i peptid je odvojen (otcepljen) od smole pomoću smeše( engl. scavenger coctail)TFA/H20/TIS/EDT (95/2/1/2, z/z/z/z), ili TFA/H20/TIS/anizol (92/2/4/2, z/z/z/z) tokom 2 h na sobnoj temperaturi (Shema 4). Rastvarači su upareni u vakuumu, i peptide je staložen i ispran tri outa hladnim dietil etrom kako bi se uklonila smeša za otceljivanje( engl. scavenger).Sirov proizvod je upotrebljen dirketno u reakciji ciklizacije. MW izrač.: 1142.30; MVV zapaž.: 1142.83.

[0069]Ciklizacija je izvedena u rastvoru nakon što je linearni peptid odvojen od čvrste podloge (nosača) pri čemu su uklonjene zaštite sa svih bočnih lanaca (Shema 4). Otcepljen sirov linearni peptid (0.25 mmol) je osušen u vakuumu i rastvoren u 10 mL suvog DMF-a. Ovaj rastvor peptida je dodat u sledeću reakcionu smešu pomoću injekcione pumpe tokom perioda od 2 h: 15 mL suvog dihlormetana i 15 mL suvog DMF koji sadrži 1.0 mmol PvBOP i 4.0 mmolova DIEA. Reakcija je zatim ostavljena da se odvija na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvarači su upareni u vakuumu, ostatak je nanet na preparativnu reversno faznu C 18 HPLC kolonu, i ciljani ciklični peptide je izolovan i okarakterisan kao što je opisano u Primeru 1.

Shema 4: Prstenasta ciklizacija bočnog amino lanca i karboksilnog bočnog lanca

Primer 7

Bz- cikloirGlu- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Dap1- Arq- NH? ( SEQ ID NO:14)

[0070]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je anhidrid sirćetne kiseline u koraku 9 zamenjen sa anhidridom benzoeve kiseline. MVV izrač.: 1204.37; MVV zapaž.: 1204.87.

Primer 8

Ac- ciklorGlu- Tvr- Arg- DArq- 2Nal- Glv- DDap1- Arq- NH, ( SEQ ID NO:15)

[0071]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-DDap(Boc). MVV izrač.: 1142.30; MVV zapaž.: 1142.73.

Primer 9

Ac- ciklorGlu- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Lvsl- Arq- NH, ( SEQ ID NO:16)

[0072]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Lvs(Boc). MVV irač.: 1184.38; MVV zapaž.: 1184.23.

Primer 10

Ac- ciklorGlu- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Pab1- Arq- NH, ( SEQ ID NO: 17)

[0073]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev stoje Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Dab(Boc). MVV izrač.: 1156.33; MVV zapaž.: 1156.07.

Primer 11

Ac- ciklorGlu- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv-( D/ L) Agn- Arq- NH7( SEQ ID NO: 18)

[0074]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-(DL)Agl(Boc). MVV izrač.: 1128.27; MVV zapaž.: 1128.86.

Primer 12

Bz- ciklofGlu- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv-( D/ L) Agll- Arg- NH?( SEQ ID NO: 19)

[0075]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-(DL)Agl(Boc). Dodatno, anhidrid u koraku 9 je zamenjen sa benzoic kiselina anhidrid. MVV izrač.: 1190.34; MVV zapaž.: 1190.99.

Primer 13

Bz- ciklorAsp- Tvr- Arq- DArg- 2Nal- Glv- Dab1- Arq- NH7 ( SEQ ID NO:20)

[0076]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Dab(Boc), i Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Asp(OtBu). Dodatno, anhidrid sirćetne kiseline u koraku 9 je zamenjen sa anhidridom benzoeve kiseline. MVV izrač.: 1204.37; MVV zapaž.: 1204.87.

Primer 14

Ac- ciklofAsp- Tvr- Arq- DArg- 2Nal- Glv- Dab1- Arq- NH? ( SEQ ID NO:21)

[0077]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Dab(Boc), i Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Asp(OtBu). MVV izrač.: 1142.30; MVV zapaž.: 1142.81.

Primer 15

Ac- ciklofAsp- Tvr- Arg- PArq- 2Nal- Glv- Dabl- Arq- NH,( SEQ ID NO:22)

[0078]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 zamenjen sa Fmoc-Asp(OtBu). MVV izrač.: 1128.27; MVV zapaž.: 1128.78.

Primer 16

Bz- cvclolAsp- Tvr- Ar2- DAr2- 2Nal- Glv- Dapl- Ar2- NH2 ( SEQ ID NO:23)

[0079]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 zamenjen sa Fmoc-Asp(OtBu). Dodatno, anhidrid sirćetne kiseline u koraku 9 je zamenjen sa anhidridom benzoeve kiseline. MVV izrač.: 1190.34; MVV zapaž.: 1190.69.

Primer 17

Ac- ciklorAsp- Tvr- Arq- DAr2- 2Nal- Glv-( D/ L) Aqn- Arg- NH? ( SEQ ID NO:24)

[0080]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-(DL)Agl(Boc), i Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Asp(OtBu). MVV izrač.: 1114.24; MVV zapaž.: 1114.85.

Primer 18

Ac- ciklorAsp- Tvr- Lvs( Me7)- DArq- 2Nal- Glv- Dap1- Arq- NH,( SEQ ID NO:25)

[0081]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 6 zamenjen sa Fmoc-l_ys(Me2), i Fmoc-Glu(OtBu) in u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Asp(OtBu). MVV izrač.: 1128.31; MVV zapaž.: 1128.92.

Primer 19

Bz- ciklofAsp- Tvr- Lvs( Me7)- DArg- 2Nal- Glv- Dap1- Arq- NH7( SEQ ID NO:26)

[0082]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 6 zamenjen sa Fmoc-Lys(Me2), i Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Asp(OtBu). Dodatno, anhidrid sirćetne kiseline u koraku 9 je zamenjen sa anhidridom benzoeve kiseline. MVV izrač.: 1190.38; MVV zapaž.: 1191.14.

Primer 20

ciklorSukcinil- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv-( D/ L) Aqn- Arq- NH7 ( SEQ ID NO:27)

[0083]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-(DL)Agl(Boc), Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 nije upotrebljen, i ovaj korak je izostavljen. Dodatno, anhidrid sirćetne kiseline u koraku 9 je zamenjen sa anhidridom ćilibarne kiseline. MVV izrač.: 1057.19; MVV zapaž.: 1057.87.

Primer 21

ciklorSukcinil- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Dap1- Arg- NH7 ( SEQ ID NO:28)

[0084]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 nije upotrebljen, i ovaj korak je izostavljen. Dodatno, anhidrid sirćetne kiseline u koraku 9 je zamenjen sa anhidridom ćilibarne kiseline. MW izrač.: 1071.22; MVV zapaž.: 1071.85.

Primer 22

ciklofSukcinil- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Dab1- Arq- NH, ( SEQ ID NO:29)

[0085]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Dab(Boc), Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 nije upotrebljen, i ovaj korak je preskočen. D Dodatno, anhidrid sirćetne kiseline u koraku 9 je zamenjen sa anhidridom ćilibarne kiseline. MVV izrač.: 1085.25; MVV zapaž.: 1085.87.

Primer 23

ciklorSukcinil- Tvr- Arq- DArg- 2Nal- Glv- Orn1- Ar,- NH? ( SEQ ID NO:30)

[0086]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Orn(Boc), Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 nije upotrebljen, i ovaj korak je preskočen. Dodatno, anhidrid sirćetne kiseline u koraku 9 je zamenjen sa anhidridom ćilibarne kiseline. MVV izrač.: 1099.27; MVV zapaž.: 1100.23.

Primer 24

ciklofSukcinil- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Lvs1- Arq- NH?( SEQ ID NO:31)

[0087]Pripremiti kao što je dato u Primeru 6, izuzev što je Fmoc-Dap(Boc) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Glu(OtBu) u koraku 8 nije upotrebljen, i ovaj korak je izostavljen. Dodatno, anhidrid sirćetne kiseline u koraku 9 je zamenjen sa anhidridom ćilibarne kiseline. MVV izrač.: 1113.30; MVV zapaž.: 1114.25.

Primer 25

ciklorGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DArg- 2Nal- Glv- DGIul- Arq- NH7( SEQ ID NO:32)

[0088] Sekvenca Gly-Tyr(tBu)-Lys(iPr)(Boc)-DArg(Pbf)-2Nal-Gly-DGIu(Oalii)-Arg(Pbf)

(SEQ ID NO:33) je sastavljena prema standardnoj Fmoc herniji korišćenjem ABI 431 instrumenta kao što je dato u Shemi 5 u daljem tekstu. Automatizovano sastavljanje je izvedeno prema standardnom hemijskom protokolu Applied Biosystems DCC/HOBt ili FastMoc HBTU/DIEA hemiskom protokolu prema instrukcijama proizvođača (PE Applied Biosystems Inc., Foster City, CA). Čvrsta podloga je Rink amidna smola za amide ili indolska smola [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smola za C-terminalne etil amide. Sastavljanje (sklapanje) lanca u koracima počinje od C-terminalnog kraja linearnog peptida i je izvršeno jeu 8 glavnih koraka (Shema 5). U koraku 1, četiri ekvivalenta zaštićene amino kiseline Fmoc-Arg(Pbf) je aktivirano sa DCC/HOBt (ili HBTU/DIEA za FastMoc herniju) u NMP, i kuplovano sa Rink amidnom smolom sa koje je skinuta zaštita. U koraku 2, četiri ekvivalenta Fmoc-DGIu(Oalil) je aktivirano i kuplovano (spregnuto) sa peptidnom smolom iz koraka 1. Odgovarajući koraci su izvedeni do koraka 8, kuplovanja Fmoc-Gly.

[0089]Zaštitna grupa bočnog lanca alil estra je uklonjena dodatko 0.1 ekvivalenta Pd(Ph3P)4u prisustvu 24 ekvivalenata fenilsilana u dihlormetanu (Shema 6). Ovaj proces je joše jednom ponovljen kako bi se završilo uklanjanje zaštite sa sporednog lanca. Zatim je uklonjen Fmoc na N-terminalnom kraju dodatkom 20% piperidina u DMF. Ostatak karboksiline kiseline DGIu sa koje je uklonjena zaštita ke aktivaran dodatkom PyBOP/DIEA, i ciklizovan sa a-amino grupom glicina na smoli. Istovremeno uklonjena je zaštita sa ciklizovanog peptida i peptid je uklonjen sa smole pomoću smeše{ engl. scavenger coctail)koja se sastoji od TFA/H20/TIS/EDT (95/2/1/2, z/z/z/z), ili TFA/H20/TIS/anizol (92/2/4/2, z/z/z/z) tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Rastvarači su zatim upareni pod vakuumom, i peptid je staložen i ispran tri puta hladnim dietil etrom kako bi se uklonila smeša za odvajanje( engl. scavenger).MVV izrač.: 1085.29; MVV zapaž.: 1085.32.

Primer 25a

ciklorGlv- Tvr- Lys( iPr)- DArg- 2Nal- Glv- DGIul- Arg- NH?- so sirćetne kiseline ( SEQ ID

NO:34)

[0090]TFA so peptida iz Primera 25 je konvertovana u so sirćetne kiseline adsorbovanjem materijala na preparativnu C18 kolonu odgovarajuće veličine, ekvilibrisanu sa 2% sirćetna kiselina/H20 (z/z). Kolona je zatim isprana sa tri do pet zapremina kolone 2% vodenim rastvorom sirćetne kiseline (z/z). Peptid je eluisan rastvorom 1:1 voda/acetonitril (z/z) koji sadrži 2% sirćetnu kiselinu (zapr.), i liofiliziran. MVV izrač.: 1085.29; MVV zapaž.: 1085.32.

Shema 5: peptidno vezivanje a-amino grupe sa bočnim karboksilnim lancem

[0091] Prečišćavanje peptida izvedeno primenom standardnih preparativnih HPLC tehnika. Neposredno posle ciklizacije, rastvor peptida je razblažen vodom koja sadrži 0.1% (z/z) TFA, nanet na reversno faznu C18 HPLC kolonu, i eluiran gradijentom vodenog rastvora 0.1% trifluorsirćetne kiseline/acetonitrila (z/z) uz praćenje na 214 nm. Odgovarajuće frakcije su sakupljene i liofilizirane. Dalja karakterizacija krajnjeg proizvoda je izvedena pmoću analitičke HPLC i masene spektralne analize prema uobičajenim metodama. Za peptide sa baznim bočnim lancima, krajnji liofilizirani proizvod je TFA so.

Primer 26

ciklorGlv- Tvr- LvsriPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- NH, fSEQ ID NO:37)

[0092]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 je izostavljen. MW izrač.: 929.10; MVV zapaž.: 929.39.

Primer 26a

sociklofGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DArq.- 2Nal- Glv- DGIu1- NH7- sirćetne kiseline ( SEQ ID

NO:38)

[0093]TFA so peptida iz Primera 26 je konvertovan u so sirćetne kiseline adsorbovanjem materijala na preparativnu C18 kolonu odgovarajuće veličine, ekvilibrisanu sa rastvorom 2% sirćetne kiseline/H20 (z/z). kolona je zatim isprana sa tri do pet zapremina kolona 2% vodenim rastvorom sirćetne kiseline (z/z). Peptid je eluiran rastvorom 1:1 voda/acetonitril (z/z) koji sadrži 2% sirćetne kiselina (zapr.), i liofiliziran. MVV izrač.: 929.10; MVV zapaž.: 929.39.

Primer 27

ciklorGly- Tvr- Ar,- DAr,- 2Nal- Glv- DGIul- Ar,- NH, ( SEQ ID NO:391

[0094]Pripremiti kao stoje dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf). MVV izrač.: 1071.22; MVV zapaž.: 1071.02.

Primer 28

ciklofGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- LvsnPr)- NH7 ( SEQ ID NO:40)

[0095]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 zamenjen sa Fmoc-Lys(iPr)(Boc). MVV izrač.: 1099.35; MVV zapaž.: 1099.91.

Primer 29

ciklorTvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- Arq- NH, ( SEQIDNO:41)

[0096] Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), Fmoc-Gly u koraku 8 nije upotrebljen, i korak 8 je izostavljen. MVV izrač.: 1014.17; MVV zapaž.: 1014.78.

Primer 30

ciklorTvr- Ar,- nAr,- 2Nal- Glv- DGIul- Ar7- NH?( SEQ ID NO:42)

[0097]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), Fmoc-Gly u koraku 8 nije upotrebljen, i korak 8 je izostavljen. MVV izrač.: 1014.17; MVV zapaž.: 1014.65.

Primer 31

ciklorTvr- Arq- DAr,- 2Nal- Glv- Asp1- Ar,- NH, <SEQ ID NO:43)

[0098]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Asp(alil), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), Fmoc-Gly u koraku 8 nije upotrebljen, i korak 8 je izostavljen. MVV izrač.: 1000.14; MVV zapaž.: 1000.63.

Primer 32

ciklorGlv- Tvr- Arg- DArq- 2Nal- Glv- Asp1- Ar,- NH, ( SEQ ID NO:44)

[0099]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev stoje Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Asp(alil), i Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf). MVV izrač.: 1057.19; MVV zapaž.: 1057.35.

Primer 33

ciklorGlv- Tvr- Lvs( Me7)- DAr?- 2Nal- Glv- Asp1- Ar,- NH, ( SEQ ID NO:45)

[0100]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Asp(alil), i Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Lys(Me2). MVV izrač.: 1057.23; MVV zapaž.: 1057.86.

Primer 34

ciklorGlv- Tvr- LvrnPr)- DArq- 2Nal- Glv- Asp1- Arg- NH, ( SEQ ID NO:46)

[0101]Pripremiti kao stoje dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Asp(alil). MVV izrač.: 1071.26; MVV zapaž.: 1071.76.

Primer 35

ciklorGlv- Tvr- LvsnPr)- DArg- 2Nal- Glv- Asp1- NH? ( SEQ ID NO:47)

[0102]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 je izostavljen, i Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Asp(alil). MVV izrač.: 915.07; MVV zapaž.: 915.38.

Primer 36

ciklorGlv- Tvr- LvsfiPr)- DArq- 2Nal- Glv- Asp1- Lvs( iPr)- NH, ( SEQ ID NO:48)

[0103]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 zamenjen sa Fmoc-l_ys(iPr)(Boc), i Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Asp(alil). MVV izrač.: 1085.33; MVV zapaž.: 1085.78.

Primer 37

ciklorGly- Tvr- Lvs( Me?)- nArq- 2Nal- Glv- Glul- Arq- NH, ( SEQ ID NO:49)

[0104]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Lys(Me2). MVV izrač.: 1071.26; MVV zapaž.: 1071.05.

Primer 38

ciklorGlv- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Clv- Glu1- Arq- NH, ( SEQ ID NO:50)

[0105]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf). MVV izrač.: 1071.22; MVV zapaž.: 1071.50.

Primer 39

ciklorGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- Arg- NH, ( SEO ID NO:51)

[0106]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil). MW izrač.: 1085.29; MW zapaž.: 1085.91.

Primer 40

ciklorGlv. Tvr- Lvs( iPr)- DArsi- 2Nal- Glv- Glu1- NH7 ( SEQ ID NO:52)

[0107]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 je izostavljen, i Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil). MVV cal. ; 929.10; MVV zapaž.: 929.39.

Primer 41

ciklorGlv- Tvr- LvsfiPr)- DArq- 2Nal- Glv- Asp1- NHEt ( SEQ ID NO:53)

[0108]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Rink amidna smola je zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom, korak 1 je izostavljen, i Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Asp(alil). MVV izrač.: 943.13; MVV zapaž.: 943.36.

Primer 42

ciklorGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- NHEt ( SEQ ID NO:54)

[0109]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Rink amidn smola zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom, korak 1 je izostavljen, i Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil). MVV izrač.: 957.15; MVV zapaž.: 957.50.

Primer 43

ciklofGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- NHEt ( SEQ ID NO:55)

[0110] Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Rink amidna smola zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom, i korak 1 je izostavljen. MVV izrač.: 957.15; MVV zapaž.: 957.46.

Primer 44

cikloFGIv- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Arg- NHEt ( SEQ ID NO:56)

[0111] Pripremiti kao stoje dato u Primeru 25, izuzev što je Rink amidna smola zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom. MVV izrač.: 1113.34; MVV zapaž.: 1113.81.

Primer 44a

So ciklorGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DAr2- 2Nal- Gly- DGIu1- Arg- NHEt sirćetne kiseline ( SEQ ID

NO: 57)

[0112] So TFA peptida iz Primera 44 je konvertovana u so sirćetne kiseline adsorbovanjem materijala na preparativnu C18 kolonu odgovarajuće veličine, ekvilibrisana sa 2% sirćetnom kiselinom/H20 (z/z). kolona je zatim isprana sa tri do pet zapremina kolone sa 2% vodenim rastvorom sirćetne kiseline (z/z). Peptid je eluiran sa rastvorom 1:1 voda /acetonitril (z/z) koji sadrži 2% sirćetnu kiselinu (zapr.), i liofiliziran. MVV izrač.: 1113.34; MVV zapaž.: 1113.81.

Primer 45

ciklorGlv- Tvr- Lvs( iPr)- PArg- 2N al- Glv- DGlu1- Lvs( iPr)- NHEt ( SEQ ID NO:58)

[0113] Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Rink amidna smola zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom, i Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 je zamenjen sa Fmoc-Lys(iPr)(Boc). MVV izrač.: 1127.41; MVV zapaž.: 1127.35.

Primer 46

ciklofLvs( Ac)- Tvr- Lvs( Me,)- DArq- 2Nat- Glv- Glu1- Arg- NH, ( SEQ ID NO:59)

[0114]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Glu(OtBu), Fmoc-l_ys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Lys(Me2), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Boc-Lys(Fmoc). Posle sklapanja lanca, Fmoc na bočnom lancu N-terminalnog Lys je uklonjen pomoću 20% piperidina u DMF i Lys sporedni lanac je acetilovan sa 10 ekvivalenata anhidrida sirćetne kiseline/DlEA na sobnoj temperaturi tokom jednog sata. Sve zaštitne grupe na boćčnom lancu su uklonjene i linearni peptid je otcepljen od čvrste podloge smešom TFA/water/TIS/anizol (90/5/2.5/2.5, z/z/z/z) tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Ciklizacija sirovog linearnog peptida je izvedena u rastvoru. Otcepljen sirov linearni peptid (-0.25 mmol) je osušen u vakuumu i rastvoren u 10 mL suvog DMF-a. Ovaj peptidni rastvor je dodat u sledeću reakcionu smešu pomoću injekcione pumpe tokom 2 h: 15 mL suvog dihlormetana i 15mL suvog DMF koji sadrži 1.0 mmol PyBOP i 4.0 mmola DIEA. Reakcija je zatim ostavljena da se odvija na sobnoj temperaturi 2 h. Solventi su upareni u vakuumu, ostatak je nanet na reversno faznu C18 preparativnu HPLC kolonu, i cijani ciklični peptid je izolovan i okarakterisan kao šo je opisano u Primeru 1. MVV izrač.: 1184.42; MVV zapaž.: 1184.06.

Primer 47

ciklorDap( Ac>- Tvr- Lvs( Me,)- DArq- 2Nal- Glv- Glul- NH7( SEQ ID NO:60)

[0115]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je kojra 1 izostavljen, Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(OtBu), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Lys(Me2), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Boc-Dap(Fmoc). Posle sklapanja lanca, Fmoc na bočnom lancu N-terminalnog Dap je uklonjen pomoću 20% piperidina u DMF-u, i bočni lanac Dap -a je zatim acetilovan sa 10 ekvivalenata anhidrida sirćetne kiseline /DIEA na sobnoj temperaturi tokom jednog sata. Sve zaštitne grupe bočnog lanca su uklonjene i linearni peptid je odvojen od čvrste podloge primenom smeše TFA/voda/TIS/anizol (90/5/2.5/2.5, z/z/z/z) tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Ciklizacija sirovog linearnog peptida je ivvedena u rastsvoru. Otcepljen sirov linearni peptid (~0.25 mmole) je osušen u vakuumu i rastvoren u 10 mL suvog DMF. Ovaj peptidni rastvor je dodat u sledeću reakcionu smešu pomoću injekcione pumpe tokom perioda od 2 h: 15 mL suvog dihlormetan i 15 mL suvog DMF sa 1.0 mmol PyBOP i 4.0 mmol DIEA. Reakcija je zatim ostavljena da se odvija na sobnoj temperaturi 2 h. Rastvara;i su yatim upareni u vakuumu, ostatak je nanet na preparativnu HPLC kolonu, i ciljani ciklični peptid je izolovan i okarakterisan kao što je opisano u Primeru 1. MVV izrač.: 986.15; MVV zapaž.: 985.97.

Primer 48

cikloirAla- Tvr- Lvs( iPh- DArg- 2Nal- Glv- Glu1- NH7 ( SEQ ID NO:61)

[0116]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 izostavljen, Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Ala. MVV izrač.: 943.13; MVV zapaž.: 942.92.

Primer 49

ciklorDAIa- Tvr- Lvs( iPr)- DArg- 2Nal- Glv- Glul- NH7( SEQ ID NO:62)

[0117]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 izostavljen, Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-DAla. MVV izrač.: 943.13; MVV zapaž.: 943.44.

Primer 50

ciklorDAIa- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- NH7 ( SEQ ID NO:63)

[0118]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 izostavljen, i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-DAla. MVV izrač.: 943.13; MVV zapaž.: 943.42.

Primer 51

ciklorAla- Tvr- Lvs( iPr)- DArg- 2Nal- Glv- DGIu1- NH7 ( SEQ ID NO:64)

[0119]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 jizostavljen, i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Ala. MVV izrač.: 943.13; MVV zapaž.: 943.48.

Primer 52

ciklorLeu- Tvr- Lvs( iPr)- DArg- 2Nal- Glv- DGIu1- NH,( SEQ ID NO:65)

[0120]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 izostavljen, i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Leu. MVV izrač.: 985.21; MVV zapaž.: 985.56.

Primer 53

ciklorLeu- Tvr- Lvs( iPh- DArg- 2Nal- Glv- Glul- NH7 ( SEQ ID NO:66)

[0121]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 izostavljen, Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Leu. MVV izrač.: 985.21; MVV zapaž.: 985.49.

Primer 54

ciklorDPhe- Tvr- LvsfiPr>- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- NH?( SEQ ID NO:67)

[0122]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 izostavljen, Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-DPhe. MVV izrač.: 1019.22; MVV zapaž.: 1019.52.

Primer 55

ciklofPhe- Tvr- LvsnPr)- DArg- 2Nal- Glv- Glul- NH7-( SEQ ID NO:68)

[0123]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 je izostavljen, Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Phe. MVV izrač.: 1019.22; MVV zapaž.: 1019.53.

Primer 56

cikloirDPhe- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- NH,( SEQ ID NO:69)

[0124]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 je izostavljen, i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-DPhe. MVV izrač.: 1019.22; MVV zapaž.: 1019.50.

Primer 57

ciklorPhe- Tvr- Lvr( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Lvs( iPr)- NH?( SEQ IDNO:701

[0125]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 zamenjen sa Fmoc-l_ys(iPr)(Boc), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Phe. MVV izrač.: 1189.48; MVV zapaž.: 1189.92.

Primer 57a

so sirćetnekiseline ciklorPhe- Tyr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Lvs( iPr)- NH?-( SEQIDNO:71)

[0126]TFA so peptida iz Primera 57 je konvertovna u so sirćetne kiseline adsorbovanjem materijala na preparativnu C18 kolonu odgovarajuće veličine, ekvilibrisan sa 2% sirćetna kiselina/H20 (z/z). kolona je zatim isprana sa tri do pet zapremina kolona 2% vodenim rastvorom sirćetne kiseline (z/z). Peptid je eluiran sa smešom 1:1 voda /acetonitril (z/z) koja sadrži 2% sirćetnu kiselinu (zapr.) i liofiliziran. MVV izrač.: 1189.48; MVV zapaž.: 1189.92.

Primer 58

ciklorPhe- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Arg- NH? ( SEQ ID NO:72)

[0127]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Gly u koraku 8 zamenjen sa Fmoc-Phe. MVV izrač.: 1175.41; MVV zapaž.: 1175.81.

Primer 59

ciklorPhe- Tvr- Lvs( iPr)- DArg- 2Nal- Glv- DGIu1- NH, ( SEQ ID NO:73)

[0128]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 izostavljen, i Fmoc-Gly u koraku8 je zamenjen sa Fmoc-Phe. MVV izrač.: 1019.22; MVV zapaž.: 1019.56.

Primer 60

ciklofPhe- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Lvs( iPr)- NHEt ( SEQ ID NO:74)

[0129]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Rink amidna smola zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom, Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 je zamenjen sa Fmoc-l_ys(iPr)(Boc), i Fmoc-Gly in u korakup 8 je zamenjen sa Fmoc-Phe. MVV izrač.: 1217.53; MVV zapaž.: 1217.97.

Primer 60a

So sirćetne kiseline ciklorPhe- Tyr- LvsfiPr)- DArg- 2Nal- Glv- DGIu1- Lvs( iPr)- NHEt-( SEQ ID NO:75)

[0130]TFA so peptida iz Primera 60 je konvenrtovana u so sirćetne kiseline adsorbovanjem materijala na preparativnu C18 kolonu odgovarajuće veličine, ekvilibrisana sa 2% sirćetna kiselina/H20 (z/z). Kolona je zatim isprana sa tri do pet zapremina kolone 2% vodenim rastvorom sirćetne kiseline (z/z). Peptid je eluiran smešom 1:1 voda/acetonitril (z/z) koja sadrži 2% sirćetnu kiselinu (zapr.) i liofiliziran. MVV izrač.: 1217.53; MVV zapaž.: 1217.97.

Primer 61

ciklorDAIa- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- GluVNHEt ( SEQ ID N0. 76)

[0131]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Rink amidna smola zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom, korak 1 je izostavljen, Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc-Gly u koraku8 je zamenjen sa Fmoc-DAla. MVV izrač.: 971.18; MVV zapaž.: 971.49.

Primer 62

ciklor2Nal- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- NHEt ( SEQ ID NO:77)

[0132]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Rink amidna smola zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom, korak 1 je izostavljen, Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-2Nal. MVV izrač.: 1097.34; MVV zapaž.: 1097.53.

Primer 63

ciklorDPhe- Tvr- LvsfiPh- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- NHEt ( SEQ ID NO:78)

[0133]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Rink amidna smola zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom, korak 1 je izostavljen, Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc- u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-DPhe. MVV izrač.: 1047.28; MVV zapaž.: 1047.51.

Primer 64

ciklorPhe- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- NHEt ( SEQ ID NO:79)

[0134]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Rink amidna smola zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom, korak 1 je izostavljen, Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc- Phe. MVV izrač.: 1047.28; MVV zapaž.: 1047.57.

Primer 65

ciklorGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIuVGIv- 2Nal- NH, ( SEQ ID NO:80)

[0135]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 zamenjen sa Fmoc-2Nal, i jedan korak je dodat između koraka 1 i 2 gde je uptorebljen Fmoc-Gly. MVV izrač.: 1183.39; MVV zapaž.: 1183.26.

Primer 66

ciklorGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DArg- 2Nal- Glv- Glv- B- Ala- D2Nal- NH, ( SEQ ID NO:81)

[0136]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 zamenjen sa Fmoc-D2Nal, jedan korak je dodat između koraka 1 i 2 koristeći Fmoc-(3-Ala, i Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil). MVV izrač.: 1197.40; MVV zapaž.: 1196.70.

Primer 67

ciklor6- Ala- Tvr- Arg- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- Arq- NH? ( SEQ ID NO:82)

[0137]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-p-Ala. MVV izrač.: 1085.25; MVV zapaž.: 1085.05.

Primer 68

ciklorB- Ala- Tvr- Arq- DArg- 2Nal- Glv- Aspl- Ara- NH,( SEQ ID NO:83)

[0138]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je FmOC-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Asp(Oalil), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-p-Ala. MVV izrač.: 1071.22; MVV zapaž.: 1071.15.

Primer 69

ciklor5- aminovaleril- Tvr- Arg- DArq- 2Nal- Glv- Glul- Arg- NH?( SEQ ID NO:84)

[0139]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen Fmoc-5-aminovalerijanskom kiselinom. MVV izrač.: 1113.30; MVV zapaž.: 1113.40.

Primer 70

ciklof5- aminovaleril- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Asp1- Arq- NH? ( SEQ ID NO:85)

[0140]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Asp(Oalil), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen Fmoc-5-amino valerijanskom kiselinom. MVV izrač.: 1099.27; MVV zapaž.: 1100.25.

Primer 71

ciklor( 4- AMPA)- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- AspT- Arg- NH, ( SEQ ID NO:86)

[0141]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Asp(Oalil), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen Fmoc-4-aminometil fenilsirćetnom kiselinom (4-AMPA). MVV izrač.: 1147.32; MVV zapaž.: 1148.20.

Primer 72

ciklor( 4- AMPA)- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- Arq- NH? ( SEQ ID NO:87)

[0142]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-4-aminometil fenilsirćetnom kiselinom (4-AMPA). MVV izrač.: 1161.34; MVV zapaž.: 1161.99.

Primer 73

ciklor( 4- AMPA)- Tvr- Arq- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- DArg- NH7 ( SEQ ID NO:88)

[0143]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 zamenjen sa Fmoc-DArg(Pbf), Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 je zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen Fmoc-4-aminometil fenilsirćetnom kiselinom (4-AMPA). MVV izrač.: 1161.34; MVV zapaž.: 1161.83.

Primer 74

ciklor( 4- AMB)- Tvr- Arg- DArq- 2Nal- Glv- Glu1- Arq- NH,( SEQ ID NO. 89)

[0144]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-DGIu(Oalil) u koraku 2 zamenjen sa Fmoc-Glu(Oalil), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Arg(Pbf), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen Fmoc-4-aminometil benzojevom kiselinom (4-AMB). MVV izrač.: 1147.32; MVV zapaž.: 1147.66.

Primer 75

ciklorGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DArg- 2Nal- Glv- DGIu1- Lvs( iPr)- Glv- 2Nal- NH, ( SEQ ID NO:90)

[0145]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 zamenjen sa tri sekvencijalna ostatka kuplovanja (sprezanja): prvo Fmoc-2Nal, onda Fmoc-Gly, i zatim Fmoc-Lys(iPr)(Boc). MVV izrač.: 1353.69; MVV zapaž.: 1354.03.

Primer 76

ciklorPhe- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Lvs( iPr)- Glv- 2Nal- NH, ( SEO ID NO:91)

[0146]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 zamenjen sa tri sekvencijalna ostatka kuplovanja (sprezanja): prvo Fmoc-2Nal, zatim Fmoc-Gly, i na kraju Fmoc-Lys(iPr)(Boc). Dodatno, Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Phe. MVV izrač.: 1443.82; MVV zapaž.: 1444.13.

Primer 77

ciklorGlv- Tvr- Lvs( iPrt- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Glv- DPhe- NH, ( SEQ ID NO:92)

[0147]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 zamenjen sa dva sekvencijalna ostatka kuplovanja (sprezanja): prvo Fmoc-DPhe, pa zatim Fmoc-Gly. MVV izrač.: 1133.36; MVV zapaž.: 1133.73.

Primer 78

ciklorGlv- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Lvs( iPr)- DPhe- NH7 ( SEQ ID NO:93)

[0148]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je korak 1 je izuzev što je korak Fmoc-DPhe, onda Fmoc-Lys(iPr)(Boc). MW izrač.: 1246.58; MVV zapaž.: 1246.88.

Primer 79

ciklorLvs- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIul- Lvs( iPr)- NH7 ( SEQ ID NO:94)

[0149]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 zamenjen sa Fmoc-Lys(iPr)(Boc), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Lys(Boc). MVV izrač.: 1170.50; MVV zapaž.: 1169.80.

Primer 80

ciklorPhe- Tvr- Lvr- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- LvsfiPr)- NH, ( SEQ ID NO:95)

[0150]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 zamenjen sa Fmoc-Lys(iPr)(Boc), Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjen sa Fmoc-Lys(Boc), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Phe. MVV izrač.: 1147.40; MVV zapaž.: 1146.70.

Primer 81

ciklorPhe- Tvr- LvsfiPh- DArq- 2Nal- Glv- DGIul- Lvs- NH,( SEQ ID NO:96)

[0151]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 zamenjen sa Fmoc-Lys(Boc), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Phe. MVV izrač.: 1147.40; MVV zapaž.: 1146.70.

Primer 82

ciklofPhe- Tvr- Lvs( iPh- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Orn- NH,( SEQ ID NO:97)

[0152]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 zamenjen sa Fmoc-Orn(Boc), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Phe. MVV izrač.: 1133.40; MVV zapaž.: 1132.70.

Primer 83

ciklorPhe- Tvr- Lvs- DArq- 2Nal- Glv- nGlu1- Lvs- NH7( SEQ ID NO:98)

[0153]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je svaki od Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 i Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 zamenjen sa Fmoc-Lys(Boc), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Phe. MVV izrač.: 1105.37; MVV zapaž.: 1105.40.

Primer 84

ciklorPhe- Tvr- Lvs- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Lvs- NHEt ( SEQ ID NO:99)

[0154]Pripremiti kao što je dato u Primeru 25, izuzev što je Rink smola zamenjena sa [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smolom, svaki od Fmoc-Arg(Pbf) u koraku 1 i Fmoc-Lys(iPr)(Boc) u koraku 6 je zamenjn sa Fmoc-Lys(Boc), i Fmoc-Gly u koraku 8 je zamenjen sa Fmoc-Phe. MW izrač.: 1133.36; MVV zapaž.: 1133.82.

Primer 85

Alternativna sinteza I ciklorPhe- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- LvsnPr)- NH,

( SEO ID NO:70)

[0155]Primer 57 opisna u sintezi SEQ ID NO:70 putem heimjske sinteze peptida na Fmoc čvrstoj fazi koristeći koemercijalno dostupne gradivne jedinice Fmoc-Lys(iPr)Boc, koji je skup i teško ga je dobiti u velikim količinama. Proces opisan u ovom primeru primer omogućava sintezu SEQ ID NO:70 korišćenjem jefitinijeg Fmoc-Lys(Boc), rastvora za ciklizaciju, i aliklovanjem lizina preko reduktivne aminacije korišćenjem natrijum cijanoborhidrida, obezbeđujući tako ekonomičniji put do krajnjeg proizvoda. Dodatne prednosti su te da su reakcioni medijum (sirćetna kiselina, aceton, i metanol) relativelno jefitini, reakcioni uslovi se lako kontrolišu, odnos rastvarača može značajno da varira a da pri tome ne utiče na reakciju alkilovanjem, i prinos iznosi 90% ili više.

[0156]Sekvenca Phe-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-DArg(Pbf)-2Nal-Gly-DGIu(Oalil)-Lys(Boc) (SEQ ID NO:100) je sastavaljena Rink Amidnoj smoli prema standardnoj Fmoc herniji koristeći ABI 431 Peptide Synthesizer kao što je dato u Shemi 7. Automatizovano sastavljanje je izvedeno prema standardnom Applied Biosystems DCC/HOBt hemijskom protokolu ili FastMoc hemijskom (HBTU/DIEA) protokolu prema uputstvima dobaljača (PE Applied Biosystems Inc., Foster City, CA). Shema zaštitnih grupa na bočnom lancu je: Lys(Boc), DGIu(Oalil), DArg(Pbf), Tyr(tBu). Sastavljanje lanca u koracima počinje od C-terminalnog kraja linearnog peptida i je izvedena je u 8 koraka. U koraku 1, četiri ekvivalenta zaštićene amino kiseline Fmoc-Lys(Boc) je aktivirano sa DCC/HOBt (ili HBTU/DIEA za FastMoc herniju) u NMP-u, i kuplovano za Rink amidnu smolu sa koje skinuta zaštita. U koraku 2, četiri ekvivalenta Fmoc-DGIu(Oalil) je aktivirano i kuplovano sa peptidnom smolom iz koraka 1 sa koje je skinuta zaštita. Ovikoraci su ponavljanji do koraka 8, kuplovanja Fmoc-Phe.

[0157]Zaštitna grupa bočnog lanca alil estra je uklonjena pomoću 0.1 ekvivalenta Pd(Ph3P)4u prisustvu 24 ekvivalenata fenilsilana u dihlormetanu (Shema 8). Ovaj proces je jedanput ponovljen kako bi se završio ujlanjanje zaštite sa sporednog lanca. Fmoc na N-terminalnom kraju je zatim uklonjen pomoću 20% piperidina u DMF-u. Ostatak karboksilne kiseline DGIu sa koje je skinuta zaštita je aktiviran sa PyBOP/DIEA i ciklizovan sa a-amino grupom Phe na smoli. Istovermeno sa ikličnog peptida je uklonjena zaštita i peptid je otcepljen od smole pomoćuscavengerkoktela TFA/H2G7TIS/EDT (95/2/1/2, z/z/z/z) ili TFA/H20/TIS/anizol (92/2/4/2, z/z/z/z) tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Rastvarači su zatim upareni u vakuumu, i peptide je staložen i ispran tri puta hladnim dietil etrom u cilju uklanjanja smeše( engl. scavenger coctail).

Shema 7: Sklapanje (sastavljanje) peptidnog lanca na čvrstoj fazi

[0158]Prečišćavanje prekursora cikličnog peptida je postignuto prema standardnim preparativnim HPLC tehnikama. Sirov otcepljen proizvod je rastvoren u minimalnoj količini DMSO, nanet na reversno faznu C18 HPLC kolonu, i eluiran gradijentom smeše 0.1% vodenog rastvora trifluorsirćetne kiseline/acetonitril (z/z) uz praćenje na 214 nm. Odovarajuće frakcije su sakupljene i liofilizirane. Dalja karakterizacija intermedijernog prekursora cikličnog peptida je izvedena pomoću analitičke HPLC i masene spektralne analize prema uobičajenim tehnikama.

[0159]Liofiliziran prekursor cikličnog peptida je zatim alkilovan u rastvoru sirćetne kiseline/aceton/metanol (1:1:4, z/z/z) putem reduktivne aminacije primenom natrijum cijanoborhidrida (Shema 9). Koncentracija peptida iznosi oko 10mg/mL, i može značajno da varira a da pri tome ne utiče na rezultate. Upotrebljeno je tri do 5 ekvivalenata agensa za redukovanje natrijum cijanoborhidrida, i reakcija je normalno završena tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Prinos iznosi 90% ili više. Na primer, 20 mg precursora cikličnog peptida je rastvoreno u 2 mL metanola, u koji je dodato 0.5 mL sirćetne kiseline i 0.5 mL acetona, pomešano, i zatim je uz mešanje dodato 5.6 mg natrijum cijanoborhidrida (2.5 ekvivalenta u metanolu). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 min, nakon čega je dodato još 5.6 mg natrijum cijanoborhidrida. Reakcija je praćena sa HPLC i masenom spektralnom analizom. Nakon završetka reakcije, odrstanivanjem soli iz reakcione smeše i liofilizacijom dobijeo je 18.9 mg krajnjeg proizvoda (SEQ ID NO:70) čistoće 97.5%. MVV izrač.: 1189.48; MVV zapaž.: 1189.6.

[0160]Jedinjenje iz Primera 60 (SEQ ID NO:74) takođe se može dobiti na analogan način, uz odgovarajuće modifikacije bazirao na amino kiselinama koje ulaze u sastav, pomoću [3-({etil-Fmoc-amino}-metil)-indol-1-il]-acetil AM smole. Prvo je pripremljen prekursor peptida (SEQ ID NO:99) kao šot je opisano u Primeru 84, i zatim je izvedena reduktivna aminacija kao što je prikazano u Shemi 9. Ovako se dobija konačni ciklični C-terminalni etil amid peptid čistoće od 99.16%. MVV irač.: 1217.53; MVV zapaž.: 1217.84.

Primer 86

Alternativna sinteza HciklofPhe- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Lvs( iPr)- NH,

( SEQ ID NO. 701

[0161]Primer 85 opisuje jeftinu sintezu SEQ ID NO:70 via hernije sinteze peptida Fmoc čvrste faze upotrebom relativno jeftinog Fmoc-Lvs(Boc) i alkilovanjem lizina preko reduktivne aminacije pomoću natrijum cijanoborhidrida u relativelno jeftinim rastvaračima (sirćetna kiselina, aceton, i metanol). Međutim, ovaj proces obuhvata upotrebu paladijuma kao katalizatora teških metala u cilju uklanjanja zaštitnih grupa sa bočnih lanaca alil estra. Paladijum je veoma toksičan, i kontrola kvaliteta kojom se utvrđuje potpuno uklanjanje ovog elementa je komplikovana i teška. Proces sinteze peptida na Boe čvrstoj fazi sa ciklizacijom na smoli opisan u ovom primeru omogućava dobijanje SEQ ID NO:70 upotrebom relativno jeftinog Boc-Lys(2-CI-Z) bez potrebe za toksičnim i skupim paladijum katalizatorom, dajući još ekonomičniji, manje toksičan način dobijanja krajnjeg proizvoda koji se može lako unaprediti, a koji zahteva jednostavniji proces kontrole kvaliteta.

[0162] Sekvenca Fmoc-Phe-Tyr(2-Br-Z)-Lys(2-CI-Z)-DArg(Tos)-2Nal-GlyDGIu(OFm)-Lys(2-CI-Z) (SEQ ID NO:102) je maneuleno sastavaljena na MBHA (4-metil-benzhidril-amine) smoli (Cat. No. D-2095, BaChem California Inc., Torrance, CA) prema utvrđenoj herniji sitnteze peptida na Boe čvrstoj fazi (Schnolzer et al. (1992) Int. J. Pept. Protein Res. 40:180-193) Kao što je dato u Shemi 10. Sastavaljanje lanca je izvedeno prema proceduriin situprocesa aktivacije neutralizacije/HBTU/DlEA kao što je opisnao u referenci. Shema zaštitnih grupa bočnog lanca je: Lys(2-CI-Z), DGIu(OFm), DArg(Tos), i Tyr(2-Br-Z). Alfa-amino grupa svih sastavnih blokova amino kiselina je zaštićen sa terc-butoksikarbonilom (Boe) izuzev N-terminalnog ostatka Phe, koji je zaštićen sa Fmoc za efikasnost sinteze. Sastavlanje lanca u koracima počinje od C-terminalnog kraja linearnog peptida i postignut je iz 8 koraka. U koraku 1, pet ekvivalenata zaštićenih amino kiselina Boc-Lys(2-CI-Z) je aktivirano sa HBTU/DIEA u DMF-u, i kuplovano sa MBHA smolom. U koraku 2, pet ekvivalenata Boc-DGIu(OFm) je aktivirano i kuplovano sa peptidnom smolom iz koraka 1 sa koje je uklonjena zaštita pomoću čistog TFA. Ovi koraci su ponavljani po potrebi do koraka 8, kuplovanja Fmoc-Phe.

[0163] Zaštitna grupa za Fm bočnog lanca u DGIu, zajedno sa Fmoc na N-terminalnom kraju, je uklonjena pomoću 20% piperidina u DMF-u. Ostatak karboksilne kiseline u DGIu sa kojeg je uklonjena zaštita je aktiviran sa PyBOP/DIEA, HCTU/DIEA, ili drugim odgovarajućim reagensima za aktivaciju, i ciklizova sa a-amino grupom Phe na smoli. Istovremeno sa cikličnog peptida je uklonjena zaštita i peptid je otcepljen od smole pomoću HF sa 5% m-kresolom ilip-/frezolomkao smešom za otsepljenje( engl. scavenger),tokom 1 h na 0 °C. Rastvarači su zatim upareni i sirovi peptid je staložen i ispran tri puta hladnim dietil etrom.

[0164]Prečišćavanje prekursora cikličnog peptida (SEQ ID NO:98 kao šot je dato na Shemi 10) postignuto je primenom standardnih tehnika preparativne HPLC. Sirov otcepljen proizvod je rastvorenu minimalnoj kolličini DMSO, nanet na reversno faznu C18 HPLC kolonu, i eluiran gradijentom vodenog rastvora 0.1% trifluorsirćetne kiseline/acetonitril (z/z) uz praćenje na 214 nm. Odgovarajuće frakcije su sakupljene i liofilizirane. Dalja karakterizacija intermedijernog prekursora ciklično peptida je izvedena pomoću analitičke HPLC i masene spektralne analize uobičajenim tehnikama. Za SEQ

IDNO:98, MVV izrač.: 1105.29; MVV zapaž.: 1105.4.

[0165] Liofilzirani prekursor cikličnog peptida (SEQ ID NO:98) je zatim alkilovan u rastvoru sirćetna kiselina/aceton/metanol (1:1:4, z/z/z) preko reduktivne aminacije upotrebom natrijum cijanoborhidrida kao što je dato u Shemi 9. Koncentracija peptida iznosi oko 10mg/ml_, i može značajno da varira bez uticaja na rezultate. Upotrebljeno je pet ekvivalenata redukujućeg agensa natrijum cijanoborhidrida, i reakcija je normalno završena za 2 h na sobnoj temperaturi. Prinos iznosi 90% ili više. Na primer, 6.6 mg prekursora cikličnog peptida je rastvoreno u 0.8 mL metanola, u koji je dodato 0.2 mL sirćetne kiseline i 0.2 mL acetona, dobro promešano, i zatim je uz mešanje dodato 1.9 mg natrijum cijanoborhidrida (2.5 ekvivalenata in metanolu) u dve jednake porcije. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 min, nakon čega je dodato još 1.9 mg natrijum cijanoborhidrida. Reakcija je praćena HPLC -om i masenom spektralnom analizom. Kada je reakcija završenam izvršeno je uklonjanje soli iz reakcione smeše i liofilizacijom je dobijen krajnji proizvod (SEQ ID NO:70) čistoće od 96.5%. MVV izrač.: 1189.45; MVV zapaž.: 1189.6.

Primer 87

Alternativna sinteza III ciklorPhe- Tvr- Lvs( iPr)- DArg- 2Nal- Glv- DGIul- Lys( iPr)- NH?

( SEQIDNO:70)

[0166] Jedinjenje iz Primera 57 (SEQ ID NO:70) takođe se može dobiti bez upotrebe paladijum katalaizatora via rastvora za ciklizaciju, poboljšanu, na sledeći način.

[0167] Sekvenca Boc-Phe-Tyr(2-Br-Z)-Lys(Fmoc)-DArg(Tos)-2Nal-GlyDGIu(OBzl)-Lys(Fmoc) (SEQ ID NO:103) je manuelno sastavljena na MBHA smoli pomoću sinteze peptida na čvrstoj fazo Boe hernijom (Schnolzer et al. (1992) Int. J. Pept. Protein Res. 40:180-193) kao što je naznačeno u Shemi 11. Sastavaljanje lance je izvedeno primenomin situprocedure neutralizacije/HBTU/DlEA aktivacije kao što je opisao Schnolzer et al. Shema zaštitne grupe bočnog lanca je sledeća: Lys(Fmoc), DGIu(OBzl), DArg(Tos), Tyr(2-Br-Z). Alfa-amino grupa svih amino kiselina kao gradivnih blokova su zaštićene sa terc-butoksikarbonil (Boe). Sastavljanje lanca u koracima počinje od C-terminalnog kraja linearnog peptida i postiže se u 8 koraka kao što je prikazano na Shemi 11. U koraku 1, pet ekvivalenata zaštićenih amino kiselina Boc-Lys(2-CI-Z) je aktivirano sa HBTU (4 eq) /DIEA (10 eq) in DMF, i kuplovano sa MBHA smolom. U koraku 2, pet ekvivalenata Boc-DGIu(OBzl) je aktivirano i kuplovano za peptidnom smolom iz koraka 1 sa koje je skinuta zaštita dodatkom čistog TFA. Ovi koraci su ponovljeni adekvatan borj puta do koraka 8, kuplovanja Boc-Phe. Boe zaštitna grupa je uklonjena dodatkom čiste TFA, smola je neutralisana sa DIEA, i isprana DMF -om i metanolom i osušena na vazduhu pre cepanja sa HF. Istovremeno je uklonjena zaštita sa linearnog peptida i peptid je otcepljen od smole pomoću HF sa 5% m-crezolom ili p-crezolom kao smešom za otcepljenje( engl. scavenger)tokom 1 h na 0 °C. Rastvarači su zatim upareni i sirovi peptid je staložen i ispran tri puta hladnim dietil etrom.

[0168]Prečišćavanje linearnog prekursora peptida (SEQ ID NO: 104) je postignuto primenom standardnih preparativnih HPLC tehnika. Sirov proizvod koji je ocepljen rastvoren je minimalnoj količini DMSO, nanet na reversno faznu C18 HPLC kolonu, i eluiran gradijentom 0.1% vodeni rastvor trifluorsirćetne kiseline/acetonitrila (z/z) uz praćenje na 214 nm. Odgovarajuće frakcije su sakupljene i liofilizirane. Dalja karakterizacija intermedijernog prekursora cikličnog peptida je izvedena primenom analitičke HPLC i masene spektralne analize uobičajenim tehnikama. Za SEQ ID NO: 104, MVV izrač.: 1567.78; MVV zapaž.: 1567.6.

[0169]Ciklizacija liofiliziranog prekursora linearnog peptida (SEQ ID NO: 104) je izvedena u rastvoru (Shema 12). Linearni peptid je rastovren u maloj količini suvog DMF-a (-10 mg/mL). Ovaj rastvor peptida je polako dodat preko injekcione pumpe u reakcionu smešu PyBOP (2 ekv., ili durgi odgovarajući reagenski aktivacije, kao što je HCTU, BOP, HBTU, itd.) i DIEA (10 ekv.) u suvom DMF uz mešanje na magnetnoj mešalici. Ova rekcija je ostavljena da se odvija na sobnoj temperaturi, 2 h. Zatim je u reakcionu smešu dodat čist piperidin do krajnje koncentracije od 25% (z/z). Reakciona smeša j e mešana još 20 min do potpunog uklanjaj zaštite Fmoc. Rastvarači su upareni u vakuumu i ostatak je nanet na preparativnu reversno faznu C18 HPLC kolonu, i eluiran gradijentom 0.1% vodenog rastvora trifluorsirćetne kiseline/acetonitrila (z/z) uz praćenje na 214 nm. Odgovarajuće frakcije su sakupljene i liofilizirane, i dobijeni su ciklični prekursor peptidi (SEQ ID NO:98).. Dalja karakterizacija intermedijernog prekursora cikličnog peptida je izvedena primenom analitičke HPLC i masene spektralne analize uobičajenim tehnikama. Za SEQ ID NO:98, MVV izrač.: 1105.29; MVV zapaž.: 1105.4.

[0170]Alkilovanje cikličnog peptida SEQ ID NO:98 je izvedeno u rastvoru sirćetna kiselina/aceton/metanol (1:1:4, z/z/z) kroz reduktivnu aminaciju pomoću natrijum cijanoborhidrida kao u Shemi 9 za dobijanje krajnjeg proizvoda (SEQ ID NO:70). MVV izrač.: 1189.45; MVV zapaž.: 1189.6.

Primer 88

Alternati vna sinteza IV ciklorPhe- Tvr- Lvs( iPr)- DArq- 2Nal- Glv- DGIu1- Lvs( iPrW

NH,,( SEQ ID NO:70)

[0171]Jedinjenje iz Primera 57 (SEQ ID NO:70) takođe se može pripremiti bez upotrebe paladijum kataklizatora procesom sinteze datim u Shemi 13 u daljem tekstu.

[0172]Dipeptid Fmoc-DGIu-Lys(iPr,Z)-NH2 je prvi dobijen u rastvoru sa otkrivenim bočnim lancem Dglutaminske kiseline. Dipeptid je vezan za hiper-kiselina labilnu CTC (2-hlortritilhlorid PS smola, 1% DVB (100-200 meša) smolu (Senn Chemicals USA Inc., San Diego, CA; katalog broj 40207), i kranji peptidni proizvod je zatim sintetisan na ovoj smoli preko standardne sinteze Fmoc kao što je prethodno opisano. Selektivno uklanjanje peptida sa CTC smole omogućava da samo bočni lanac Dglutaminske kiseline reaguje sa N-krajem peptida u rastvoru i proizvode ciklični peptidni proizvod. Potom, preostali bočni lanci su otcepljeni pomoću 95% TFA ili drugom jakom kiselinom.

[0173]Dipeptide Fmoc-DGIu-Lys(iPr,Z)-NH2 je prvi dobijen kao što je dato u daljem tekstu (Shema 14):

[0174] Boc-Lys(iPr,Z)-OH je reagovao sa NMM i IBCF u THF-u. Posle dodatka NH4OH, rastvarači su upareni u rotacionom uparivaču i proizvodu je dodat etil acetat. Etil acetatna faza je isprana sa 5% NaHC03 i zatim sa 0.1 N HCI, i zatim osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Natrijum sulfat je uparen filtracijom i etil acetate je uklonjen uparavanjem pri sniženom pritisku. Dobijeni Boc-Lys(iPr,Z)-NH2 je rastvoren u DCM-u, i dodat je TFA. Po završetku reakcije, rastvarači su upareni na rotacionom uparivaču. H-Lys(iPr,Z)-NH2 je zatim rastvoren u DMF-u. pH je podešeno na 8 pomoću DIEA. U odovojenom sudu, Fmoc-DGIu(OtBu)-OH, HBTU, i HOBt su rastvoreni u DMF; dodat je DIEA za podešavanje pH na 8. Dva rastvora su pomešana, i reakcija je praćena C18 reversno faznom HPLC. pH je praćen i podešen, po potrebi, sa DIEA. Rastvarači su pareni na rotacinom uaprivaču, i proizvod je rastvoren u etil acetatu. Etil acetatna daza je detaljno isprana sa 5% NaHC03i zatim sa 0.1 N HCI, i onda osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Natrijum sulfat je profiltriran i etil acetate je uparen pod sniženim pritiskom. Uparavanje na rotacionom uaprivaču je nastavljeno do formiranja suvog ostatka. Dobijeni Fmoc-DGIu(OtBu)-Lys(iPr,Z)-NH2 je rastvoren u DCM-u, i dodata je TFA. o završetku reakcije, rastvarači su upareni na rotacionom uparivaču. Čvrsti proizvod je dobijen trituracijom sa dietil etrom. Posle ispiranja taloga etrom, proizvod je osušen u vakuum sušnici.

[0175]Sinteza peptida na čvrstoj fazi krajnjeg proizvoda izvedena je na sledeći način, Fmoc-DGIu(OtBu)-Lys(iPr,Z)-NH2 je rastvoren u DCM i reagovao sa CTC smolom u prisustvu DIEA u reakcionom sudu. Posle 3 h, peptid-smola je isprana od reagensa sa DCM i dodat je Z-OSu. pH je praćeno i podešeno na pH 8-9 dodatkom DIEA po potrebi. Posle 8 h, peptid-smola je isprana od reagenasa sa DCM, prebačena u sud od polipropilena, i osušena u vakuum sušnici.

[0176]Zaštićena peptidna smola je sastavaljena primenom Fmoc-hemije na sledeći način. Primenjen je sledeći ciklus kuplovanja: 1) De-blokiranje: reakcija sa 25% piperidinom u DMF-u; 2) ciklusi ispiricanja sa DMF, IPA i ponovo DMF; 3) Ninhidrinski test (kvalitativno: ukoliko je pozitivan, preći na Korak 4 kuplovanja); 4) kuplovanje sa 2 ekvivalenata Fmoc-amino kiseline u prisustvu HOBt /DIC u DMF-u; 5) Ciklusi ispiranja sa DMF-a; 6) Ninhidrinski test (kvalitativno: ako je negativan, preći na sledeći ciklus de-blokiranja/kuplovanja; ako je pozitivan, nastaviti re-kuplovanje Korak 7; ukoliko je neznatno pozitivan, preći na korak 10 acetilacije); 7) Re-kuplovanje (po potrebi), sa 1 ekvivalentom Fmoc-amino kiseline u prisustvu HOBt, HBTU/DIEA u DMF-u; 8) Ciklusi ispiranja sa DMF-om; 9) Ninhidrinski test (kvalitativno: ako je negativan, preći na sledeći ciklus de-blokiranja/kuplovanja; ako je pozitivan, preći na Korak 10 acetilatilacija); 10) Acetilation (po potrebi) sa 2% anhidrid sirćetne kiseline u 4% DIEA u DMF-u; 11) Ciklusi ispiranja (sa DMF, IPA, i ponovo DMF); 12) Ninhidrinski test (kvantitavni: ako je pozitivan, nastaviti sledeći ciklus de-blokiranja/kuplovanja). Posle kranjeg ciklusa kuplovanja, peptidna- smola (SEQ ID NO:105) je ispranja etrom i osušen u vakuumu.

[0177]Zaštićena peptidna- smola je isprana DCM- om. Odvajanje (otcepljenje) linearnog peptida sa potpunom zaštitom, od smole je izvedeno pomoću 2% TFA u DCM-u i zatim je profiltitran. Rastvarači su upareni rotacionom uparivaču, i potpuno zaštićen linearan peptid (SEQ ID NO: 106) je staložen trituracijom sa etrom. Potpuno zaštien linearni

peptide je prebačen u polipropilenski sud i osušen u vakuum sušnici.

[0178]Potpuno zaštićen linearni peptid je ciklizovan u prisustvu PyBOP, HOBt, i DIEA u DMF-u. pH je održavano između pH 7-8 dodatkom DIEA, po potrebi. Nakon završetka reakcije, rastvarači su upareni u rotacionom uparivaču, i proizvodu je dodat etil acetat. Etil acetatna faza je isprana redom sa 5% NaHC03 i zatim sa 0.1 N HCI i zasićenim rastvorom NaCI. Zatim je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Natrijum sulfat je uklonjen filtraicjom i etil acetat je uparena na rotacionom uparivaču pod sniženim pritiskom. Zaštićeni ciklični peptid (SEQ ID NO:107) je staložen trituracijom sa etrom i osušen u vakuumskoj sušnici.

[0179]Uklanjanje zaštite je izvedeno u TFA:H20:TIS. Kada je reakcija završena, rastvarači su upareni u rotacionom uparivaču i ciklični peptid (SEQ ID NO:70.) je staložen trituracijom sa etrom i osušen u vakuumskoj sušnici. MVV izrač.: 1189.48; MVV zapaž.: 1189.50.

Primer 89

Inkorporaciia izotopskih markera: Sinteza ciklorPhe- Tvr- Lys( iPr- dK)- DArg- 2Nal- Glv-PGIul- Lvs( iPr- cU- NH, ( SEQ iD NO:108)

[0180]Polazeći od izotopski obeleženog (markiranog) acetona kao što je 13C-, 14C-, deuterijumom-, ili tricijumom- obeležei acetoni kao što je dato u daljemt tekstu, procesi dati u Primerima 85-87 omogućavaju mesto-specifična izotopska markiranja (obeležavanja) labeling of cikličnih peptidnih antagonista CXCR4 za različita farmakološka ispitivanja iimidžing ( engl. imaging)ispitivanja. Izotopski obeleženi acetoni su komercijalno dostupna iz različitih izvora. Primer dat u daljem tekstu koristi aceton-d6za dobijanje peptida koji sadrži 12 atoma deuterijuma. Dobijeno jedinjenje, koje se razlukuje u molekulskoj težini za 12 Da u poređenju sa neobeleženom kopijom, se lako razlikuje u masenom spektru i pokazuje afintet receptora ka identičnom cilju.

[0181]Primenom bilo koje od metoda iz Primera 85-87, stručnjak može da pripremi i prečisti prekursore cikličnog peptida (SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:99, itd.). Alkilovanje je izvedeno u rastvoru sirćetne kiseline/acetona/metanola (1:1:4, z/z/z) preko reduktivne aminacije primenom natrijum cijanoborhidrida kao u Shemi 9, sa izuzetkom što je standardni aceton zamenjen željenim izotopski obeleženim acetonom. U ovom primeru, upotrebljen je deuterijum aceton-d6.

[0182]Peptide (97 mg) je rastvoren u 15 mL sirćetne kiseline/acetona-d6/metanola (1:1:4, z/z/z). Koncentracija peptida može značajno da varira a da pri tome ne utiče na rezultate. Upotrebljeno je pet ekvivalenata natrijum cijanoborhidride, i reakcija je normalo završena u toku 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena sa HPLC i masenom spektralnom analizom. Nakon završetka reakcije, odstranjivanjem soli iz reakcione smeše i liofilizacijom dobija se 90.5 mg finalnog proizvoda (SEQ ID NO: 108) čistoće od 99.9%. MVV izrač.: 1201.48; MVV zapaž.: 1201.7.

[0183]Upotreba izotopski obeleženog natrijum cijanoborhidrida (kao što ej NaBD3CN, NaBT3C N, itd.) omogućava inkorporaciju dodatnih varijanti načina mesto-specifičnih obeležavanja (markiranja).

[0184] Farmakološke osobine ovih jedinjenja mogu se odrediti pomoću proba opisanih u daljem tekstu.

Proba inhibicije vezivanja Humanog CXCR4/<125>l-SDF-1a

[0185]Vezivanje SDF-1 za CXCR4 je prvi korak u aktivaciji putanje CXCR4 intracelularne signalizacije. Da bi se odredilo da Ujedinjenje moće da blokira interakciju SDF-1 i CXCR4, korišćene su humane leukemijsk CCRF-CEM ćelije (ATCC CCL 119) koje eksprimiraj endogeni CXCR4 u probi vezivanja 125l-oboleženog SDF-1a. Proba je izvedena na netretiranoj polistirenskoj ploči je sa 96-ležišsta sa dnom u obliku slova U (Corning Incorporated, Costar, No. 3632). Pufer za probu vezivanja je pripremljen sa RPMI 1640 medijumom (Gibco, Grand Island, NY) koji sadrži 10 mM HEPES, pH 7.5, i 0.2% BSA. Ukratko, 200 pL reakcione smeše koja sadrži 300 pM SDF liganda (60 pM<125>l-SDF-1a (Perkin Elmer) i 240 pM hladnog SDF-1 a (R&D Svstems), različitih koncetraicja test jedinjenja u puferu, 100,000 humanih CCRF-CEM ćelija, i 0.5 mg SPA kuglica (VVheatgerm agglutinin beads; Amersham) je inkubirano na sobnoj temperaturi tokom 2 hr. Ploče su zatim očitane pomoću 1450 Microbeta Liquid Scintillation i Luminescence Counter (VVallac) u SPA modu. CXCR4 antagonisti smanjuju vezanu radioaktivnost u ovoj probi na način koji zavisi od doze. Inhibitorna jačina (K| ili IC50) test jedinjenja je izračunata pomoću GraphPad Prism softvera, bazirano na smanjenju vezane radioaktivnost.i koje zavisi od doze.

[0186]Sva prethodno opisana jedinjenja imaju prosečnu vrednost K, od oko 7.5 nM ili manje u ovoj probi. Na primer, jedinjenje iz Primera 1 pokazuje prosečnu Kjvrednost od 3.45 nM u ovoj probi. Mnoga od ovih jedinjenja pokazuju prosečnu vrednost K, između 0.2 nM i oko 1 nM. Na primer, jedinjenje iz Primera 50 pokazuje prosečnu Kivrednost 0.285 nM u ovoj probi. Ostala jedinjenja pokazuje prosečnu Kjvrednost manju od oko 0.2 nM. Na primer, jedinjenje iz Primera 75 pokazuje prosečnu K, vrednost od 0.096 nM u ovoj probi.

Test za hemotaksu

[0187]CXCR4/SDF-1 interakcija reguliše migraciju (hemotaksu) ćelija koje nose CXCR4 na svojoj površini. Za određivanje antagonistčke i celularne aktivnosti test jedinjenja, primenjen je test za hemotaksu korišćenjem humanih ćelija histocitne leukemije U937 (ATCC CRL 1593) koje eksprimiraju endogeni CXCR4. Ukratko, ćelije U937 , gajene u DMEM medijumu(Gibco, Grand Island, NY) koji sadrži 10% FBS, 1% MEM natrijum piruvat (Gibco), 1% MEM neesencijalne amino kiseline (Gibco), i 1% GlutaMAX 1

(Gibco), su sakupljene i jedan put isprane sa puferom za test koji je pripremljen sa 1x RPMI medijum (Gibco) koji sadrži 10 mM HEPES, pH 7.5, i 0.3% BSA. Posle ispiranja, ćelije su resuspendovane u puferu za test pri koncentraciji od 5x10<6>ćelija/mL. Test je izveden na ploči ChemoTx sa 96-ležišta (NeuroProbe) prema uputstvima proizvđača. Generalno, 50 uL ćelijske meše sa ili bez test jedinjenja je naneto na gonju komoru, i u donju komoru je dodato 30 uL SDF-1a (R&D Svstems, 10 ng/mL) pripremljen u 1 x puferu. Posle sklapanja, ploča je inkubirana 2.5 hr na 37°C u 5% C02. Posle inkubacije, u donju komoru je dodato 5 uL CellTiter 96 AQ (Promega, Madison, VVI). Ploča je z atim inkubirana 60 min na 37°C, i migrirane ćelije su detekotvane merenjem absorbance na 492 nm pomoću Tečan Spectrafluor Plus Microplate Reader (Salzburg, Austria). CXCR4 antagonisti inhibiraju ćelijsku migraciju, smanjujući očitanjanja absorbance. Inibitorna jačina (IC50) test jedinjenja u ovom testu je izračunata pomoću GraphPad Prism softvera, na osnovu smanjenja absrobance na 492 nm, koje zavisi od doze.

[0188]Većina prethodno opisanih jedinjenja ima prosečnu IC50vrednost od oko 60 nM ili manje u ovom testu. Brojna jedinjenja imaju prosečnu IC50vrednosti od oko 6 nM ili manje, npr., jedinjenja iz primera Primer 19 imaju prosečnu IC50vrednosti od 2.05 nM u ovom testu. Brojna jedinjenja imaju prosečnu IC50vrednosti od oko 0.6 nM ili manje, npr., jedinjenja iz Primera 50 imaju prosečnu IC50vrednosti od 0.171 nM u ovom testu.

Proba selektivnosti vezivanja hemokinskih receptora

[0189]Selektivnost vezivanja predmetnih jedinjenja za CXCR4 receptorje poređena sa drugim hemokinskim receptorima, kao što su humani CCR1, CCR2, CXCR2, ili CXCR3,

i drugi G-protein-spregnuti receptori, može se odrediti u ćelijama koje su transfektovane sa nukelinskim kiselinama koje kodiraju i eskrpimiraju ove receptore, ili u ćelijama u kojima su ovi receptori endogeno eksprimirani. Cele ćelije ili fragmenti membrana se mogu upotrebiti za određivanje kompeticije test jedinjenja sa odgovarajućim ligandima za ove receptore na način sličan prethodno opisanom za probu inhibicije vezivanja CXCR4/<125>I-SDF-1.

[0190]Na primer, jedinjenje iz Primera 57a pokazuje Kivrednosti veću od 73,000 nM u probi vezivanja liganda primenom humanog hemokinskog receptora CXCR2.

Jedinjenjem indukovane bele krvne ćelije i mobilizacija neutrofila kod C57BL/6

miševa

[0191]Matične ćelije u koštanoj srži aktivno održavaju kontinualnu proizvodnju avih zrelih ćelijskih linija krvi tokom života . Koštana srže je primarno mesto za proizvodnju belih krvnih ćelija (WBC)/neutrofila i njhovo oslobađanje u krvotok. CXCR4/SDF-1 osa je kritična za retenciju i oslobađanje VVBCs, neutrofila, i hematopoieznih matičnih ćelija u koštanoj srži, i prekidanje interakcije CXCR4/SDF-1 u koštanoj srži dovodi do povećanja broja ovih ćelija u perifernoj krvi. Kratkotrajni model mobilizacije VVBC/neutrofila kod miševa se može primeniti za određivanjein vivociljano-modulacione aktivnosti test jedinjenja. Ukratko, ženke miševa C57BL/6 (Taconic) strarosti 5-6 bez patogena je čuvano najmanje nedelju dana pre probe (testiranja). Životinjama je omogućen pristup sterilisanoj hrani za glodatre i zakišeljenoj vodi. Grupama od 5 miševa je subkutano injektirano test jedinjenje u fiziološkom rastvoru, ili fiziološki rastvor kao kontrola, i zatim su usavani gušenjem sa C02i urađena je cervikalna dislokacija u različitim vremenskim intervalima posle administracije jedinjenja. Periferna krv je sakupljena punkcijom iz srca pomoću šprica i epriveta obloženih sa EDTA. Urađena je potpuna analiza krvi pomoćuHemavet Mascot hematology analyzer(Drew Scientific Grup, Dallas, TX). Zabeleženo je: VVBCs, neutrofili, i limfociti u perifernoj krvi. Efikasni CXCR4 antagonisti administrirani miševima subkutano povećavaju broj neutrofila i WBC u perifernoj krvi u poređenu sa kontrolom.

[0192]Značajan broj prethodno datih jedinjenja imaju prosečnu vrednost za odnos neutrofila (odnos povećanja netrofila u tretiranoj grupi vs. povećanje neutrofila u kontrolnoj grupi (fiziološki rastvor)), merenu3 h posle administracije jedinjenja, veću od oko 2 u ovomj probi. Na primer, jedinjenje iz Primera 39 ima prosečni odnos neutrofila od 4.6 pri dozi od 5 mg/kg u ovoj probi.

Anti-Tumorska aktivnost u SCID/Namalwa ksenograft modelu

[0193]interakcija SDF-1/CXCR4 igra važnu ulogu u brojnim stadijumima tumorigeneze, uključujući rast tumora, invaziju, angiogenezu, i metastazu. Za određivanjein vivoanti-tumorske aktivnosti test jedinjenja, korišćen je tumor ksenograft model na NOD/SCID miševima (Jackson Laboratories) i humanim ne-Hodgkinov limfoma Namalwa ćelijama (ATCC CRL 1432). Ukratko, 200,000 Namalwa ćelija pomešanih sa matrigelom (1:1) je subkutano implatirano na zadnji bok životinja. Implantirane ćelije tumorsa rastu kao čvrsti tumori, čije se dimenzije mogu kontinualno pratiti i mereti pomoću nonijuskog merača. Za određivanjein vivoefikasnosti test jedinjenja u ovom modelu, stručnjak može da tretira životinje (1 O/grupi) različitim dozama test jedinjenja rastvorenim u rastvoru soli ili PBS-u, sa početkom 48 ho posle implantacije ćelija tumora. Jedinjenja su dozirana subkutano, i zapremina tumora i telesne težine su određene svaka 2 ili 3 dana. Isptivanja genrealno traju 3-4 nedelje, zavisno od rasta tumora. Aktivnost test jedinjenja na anti-tumorski rast (razvoj) je određena procentom smanjenja zapremine tumora u tretiranim grupama u poređenju sa zapreminom tumora u kontrolnim grupama koje su tretirane smao nosačem.

[0194]Nekoliko prethodno opisanih jedinjenja, na primer jedinjenje iz Primera 26, značajno inhibira rast tumora u ovoj probi kada se administrira u dozi od 1 mg/kg BID.

[0195]Farmakološke osobine kao što je bioraspoloživost jedinjenja,in vivometabolička stabilnost, i farmakokinetičke/farmakodinamičke osobine mogu se odrediti metodama koje su poznate u tehnici razvoja lekova. Poželjna jedinjenja predmetnog pronalska pokazuju viosku bioraspoloživost kada se administriraju subkutano. Neka ovde opisana jedinjenja imaju bioraspoloživost oko 100% kod pacova, na primer jedinjenej iz Primera 44. Poželjna jedinjenja takođe pokazuju dobruin vivometaboličku stabilnost. Na primer, nisu zapaženi metaboliti u plazmi i urinu kod pasa i majmuna, do 24 h posle adminsitracije jedinjenja iz Primera 57a. Preferentna jedinjenja takođe pokazuju povoljne farmakokinetičke/farmakodinamičke osobine koje omogućavaju pogodno doziranje. Na primer, kod miševa, poluživot (T1/2) jedinjenja iz Primera 58 je oko 3 h. Po pitanju farmakodinamičkih osobina, preferenta jedinjenja indukuju produženu mobilizaciju neutrofila i belih ćelija kod miševa. Na primer, jedinjenje iz Primera 25 indukuje značajno povećanje neutrofila i belih krvnih ćelija u perifernoj krvi, kod miševa, najmanje 6 h posle jedne doze od 5 mg/kg administrirane subkutano.

Claims (13)

1. Laktam-ciklizovani peptid formule I: Ri- ciklo[Xi- Tyr - X3- DArg - 2Nal - Gly - X7]- X8- X9- X10- R2(SEQ ID (I) NO:1) naznačen time, što: a) dati laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između bočnog lanca amino grupe u Xti bočnog lanca karboksilne grupe X7, gde suXi'\ X7, par odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl/Glu, Dab/Glu, i Dap/Glu, iRije Ac ili n-heksanoil; ili b) dati laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između bočnog lanca karboksilne grupe Xi i bočnog lanca amino grupe X7, gde suX, iX7, par odabran iz grupe koju čine Asp/(D/L)Agl, Asp/Dab, Asp/Dap, Glu/(D/L)Agl, Glu/Dab, Glu/Dap, Glu/DDap, i Glu/Lys, i Rije Ac ili Bz, ili gde su Xii X7, par odabran iz grupe koju čine sukcinil/(D/L)Agl, sukcinil/Dab, sukcinil/Dap, sukcinil/Lys, i sukcinil/Om, iRije odsutan; ili c) dati laktam je je obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe uXii bočnog lanca karboksilne grupe X7, gde suXi iX7, par odabran iz grupe koju čine Ala/Glu, Ala/DGlu, DAla/Glu, DAla/DGlu, Dap(Ac)/Glu, Gly/Asp, Gly/Glu, Gly/DGIu, Leu/Glu, Leu/DGlu, Lys/DGIu, Lys(Ac)/Glu, 2Nal/Glu, Phe/Glu, Phe/DGlu, DPhe/Glu, i DPhe/DGlu, iR:je odsutan; ili d) dati laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između ne-a amino grupe ne-bočnog lanca naX^i bočnog lanca karboksilne grupe X7, gde su Xii X7, par odabran iz grupe koju čine P-Ala/Asp, p-Ala/Glu, 5-amino-valeril/Asp, 5-aminovaleril/Glu, 4-AMB/Glu, 4-AMPA/Asp, i 4-AMPA/Glu, i R, je odsutan; ili e) dati laktam je obrazovan formiranjem amidne veze između a-amino grupe X2i bočnog lanca karboksilne grupe X7, gde su X2 i X7, par odabran iz grupe koju čine Tyr/Asp, Tyr/Glu, i Tyr/DGIu, i svaki odRii Xije odsutan;Rije supstituent na a-amino grupi uXikadaXisadrži n a-amino grupu i data a-amino grupa nije sastavni deo laktam amidne veze, odabran iz grupe koju čine Ac, Bz, i n-heksanoil, ili je odsutan, gde je Xiodabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dab, Dap, i Glu; Xtje odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Ala, P-Ala, DAla, 5-aminovaleril, 4-AMB, 4-AMPA, Asp, Dab, Dap, Dap(Ac), Glu, Gly, Leu, Lys, Lys(Ac), 2Nal, Phe, DPhe, i sukcinil, ili je odsutan; X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2); X7 je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dab, Dap, DDap, Glu, DGIu, Lys, i Om; X8je odabran iz grupe koju čine P-Ala, Arg, DArg, Gly, Lys, Lys(iPr), i Om, ili je odsutan; X9je odabran iz grupe koju čine Gly, 2Nal, D2Nal, i DPhe, ili je odsutan; X10je 2Nal, ili je odsutan; pri čemu, kada je X8odsutan, onda je svaki od Xg i X10odsutan, i kada je X9odsutan, onda je X10odsutan, i R2 je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

2. Laktam-ciklizovani peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačen time, što: Rije odabran iz grupe koju čine Ac i Bz, ili je odsutan; Xi je odabran iz grupe koju čine P-Ala, 4-AMB, 4-AMPA, Asp, Dab, Dap, Dap(Ac), Glu, 2Nal, Phe, i sukcinil, ili je odsutan; X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2); X7 je odabran iz grupe koju čine Asp, Dab, Dap, Glu, DGIu, Lys, i Orn; X8je odabran iz grupe koju čine Arg i Lys, ili je odsutan; X9je odsutan; X10je odsutan; i R2 je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt.

3. Laktam-ciklizovani peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačen time, što: Rije odabran iz grupe koju čine Ac i Bz, ili je odsutan; Xije odabran iz grupe koju čine DAla, 5-aminovaleril, 4-AMPA, Asp, Glu, Leu, Lys(Ac), Phe, DPhe, i sukcinil; X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2); X7 je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dab, Dap, DDap, Glu, i Glu; X8je odabran iz grupe koju čine Arg, DArg, i Lys, ili je odsutan; X9 je odsutan; Xio je odsutan; i R2 je odabran iz grupe koju čine NH2 i NHEt.

4. Laktam-ciklizovani peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačen time, što: Rije odabran iz grupe koju čine Ac, Bz, i n-heksanoil, ili je odsutan; X-, je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Ala, P-Ala, Asp, Dap, Glu, Gly, Lys, i Phe; X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys, Lys(iPr), i Lys(Me2); X7 je odabran iz grupe koju čine D/L)Agl, Asp, Dap, Glu, i DGIu; X8je odabran iz grupe koju čine p-Ala, Arg, Gly, Lys, Lys(iPr), i Om, ili je odsutan; X9je odabran iz grupe koju čine Gly, 2Nal, D2Nal, i DPhe, ili je odsutan; X10je 2Nal, ili je odsutan; i R2 je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt.

5. Laktam-ciklizovani peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačen time, što: Rije odabran iz grupe koju čine Ac i Bz, ili je odsutan; Xije odabran iz grupe koju čine Ala, 5-aminovaleril, Asp, Glu, Gly, Phe, DPhe, i sukcinil; X3 je odabran iz grupe koju čine Arg, Lys(iPr), i Lys(Me2); X7 je odabran iz grupe koju čine (D/L)Agl, Asp, Dap, Glu, i Glu; X8 je odabran iz grupe koju čine P-Ala, Arg, Gly, Lys, Lys(iPr), i Om, ili je odsutan; X9 je odabran iz grupe koju čine Gly, D2Nal, i DPhe, ili je odsutan; X10je 2Nal, ili je odsutan; i R2je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt.

6. Laktam-ciklizovani peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, 4, ili 5, naznačen time, što: Xi je odabran iz grupe koju čine Gly i Phe; X3je Lys(iPr); i X7je DGIu.

7. Laktam-ciklizovani peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 5, naznačen time, što: Ri je odsutan; Xije odabran iz grupe koju čine Gly i Phe; X3je Lys(iPr); X7je DGIu; X8 je odabran iz grupe koju čine Arg i Lys(iPr), ili je odsutan; X9je odsutan; X10 je odsutan; i R2 je odabran iz grupe koju čine NH2i NHEt.

8. Laktam-ciklizovani peptid formule: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

9. Laktam-ciklizovani peptid iz zahteva 8, naznačen time, što je farmaceutski prihvatljiva so, so sirćetne kiseline.

10. Farmaceutska kompozicija naznačena time, što sadrži laktam-ciklizovani peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so prema jednom od zahteva 1-9, i farmaceutski prihvatljiv nosač, diluent, ili eksipijens.

11. Laktam-ciklizovani peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema jednom zahteva 1-9, za upotrebu u lečenju.

12. Laktam-ciklizovani peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema jednom zahteva 1-9, za uptorebu u lečenju reumatoidnog artritisa, pulmonarne fibroze, HIV infekcije, ili i kancera koji je odabran iz grupe koju čine rak dojke, rak pankreasa, melanom, rak prostate, rak bubrega, neuroblastom, ne-Hodgkin-ov limfom, rak pluća, rak jajnika, kolorektalni kancer, višestruki mijelom, glioblastom multiforme, i hronična limfocitična leukemija.

13. Upotreba laktam-ciklizovanog peptida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema jednom od zahteva 1-9, za proizvodnju leka za lečenje reumatoidnog artritisa, pulmonarne fibroze , HIV infekcije, ili kancera koji je odabran iz grupe koju čine rak dojke, rak pankreasa, melanom, rak prostate, rak bubrega, neuroblastom, ne-Hodgkin-ov limfom, rak pluća, rak jajnika, kolorektalni kancer, višestruki mijelom, glioblastom multiforme, i hronična limfocitična leukemija.