RS54976B1 - Agonisti mglu 2/3 - Google Patents

Agonisti mglu 2/3

Info

Publication number
RS54976B1
RS54976B1 RS20160611A RSP20160611A RS54976B1 RS 54976 B1 RS54976 B1 RS 54976B1 RS 20160611 A RS20160611 A RS 20160611A RS P20160611 A RSP20160611 A RS P20160611A RS 54976 B1 RS54976 B1 RS 54976B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
hexane
bicyclo
cyclopropane
compound
mmol
Prior art date
Application number
RS20160611A
Other languages
English (en)
Inventor
Stephen Richard Baker
Christopher David Beadle
Barry Peter Clark
James Allen Monn
Lourdes Prieto
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of RS54976B1 publication Critical patent/RS54976B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/46—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino or carboxyl groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C229/50—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino or carboxyl groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups and carboxyl groups bound to carbon atoms being part of the same condensed ring system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C55/00—Saturated compounds having more than one carboxyl group bound to acyclic carbon atoms
    • C07C55/26—Saturated compounds having more than one carboxyl group bound to acyclic carbon atoms containing rings other than aromatic rings
    • C07C55/30—Saturated compounds having more than one carboxyl group bound to acyclic carbon atoms containing rings other than aromatic rings containing condensed ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/45—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • C07C233/52—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C237/12—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to an acyclic carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/24—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atom of at least one of the carbamate groups bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/74—Esters of carboxylic acids having an esterified carboxyl group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C07C69/753—Esters of carboxylic acids having an esterified carboxyl group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring of polycyclic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0606—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing heteroatoms not provided for by C07K5/06086 - C07K5/06139, e.g. Ser, Met, Cys, Thr
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/14—All rings being cycloaliphatic
    • C07C2602/18—All rings being cycloaliphatic the ring system containing six carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/02—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems
    • C07C2603/04—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings
    • C07C2603/06—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings containing at least one ring with less than six ring members
    • C07C2603/10—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings containing at least one ring with less than six ring members containing five-membered rings
    • C07C2603/12—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings containing at least one ring with less than six ring members containing five-membered rings only one five-membered ring
    • C07C2603/18—Fluorenes; Hydrogenated fluorenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/93—Spiro compounds
    • C07C2603/94—Spiro compounds containing "free" spiro atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

[0001]Predstavljeni pronalazak se odnosi na agoniste mGlu2/3, naročito, na nove 4-supstituisane bicikl o [3. l.OJheksane, njihove farmaceutske kompozicije i njihove terapeutske upotrebe.
[0002] L-Glutamat je glavni ekscitatorni neurotransmiter u centralnom nervnom sistemu i označen je kao ekscitatorna aminokiselina. Receptori za metabotropni glutamat (mGlu) su G-protein-spojeni receptori koji moduliraju neuronsku ekscitabilnost. Lečenje neuroloških ili psihijatrijskih poremećaja je povezano sa selektivnom aktivacijom mGlu ekscitatornih aminokiselinskih receptora. Naročito, studije pokazuju da agonisti mGlu2/3 imaju analgetičke, antipsihotične, anksiolitičke, antidepresivne i neuroprotektivne osobine. Prema tome, ove osobine agonista mGlu2/3 mogu biti korisne u lecenju neuoroloških poremećaja, kao što su stanja hroničnog bola, ili psihijatrijski poremećaji, kao što su šizofrenija, bipolarni poremećaj, takođe poznat kao manično depresivni poremećaj, generalizovani anksiozni poremećaj i post-traumatski stresni poremećaj.
[0003] W09717952 opisuje određena 4-supstituisana jedinjenja biciklo[3.1.0]heksana za koja se tvrdi da su ekscitatorni antagonisti aminokiselinskog receptora. M.J. O'Neil et al, Drugs of the Future 2010, 35(4): 307-324 opisuju određena jedinjenja biciklo[3.1.0]heksana kao agoniste mGIu2/3.
[0004] Prekomerni glutamatergični nivo je uključen u mnoge bolesti centralnog nervnog sistema; međutim, efikasna sredstva za ispravljanje takvih patofizioloških stanja nedostaju u kliničkoj praksi. Naročito, klinička primena nije realizovana zbog nedostatka agonista mGlu2/3 sa odgovarajućim osobinama sličnim leku. Na taj način, još uvek postoji potreba za potentnim, efikasnim agonistima mGlu2/3. Predmetni pronalazak daje nove 4-supstituisane biciklo[3.l.OJheksane, koji su potentni i efikasni agonisti mGlu2/3. Naročiti prolekovi unutar obima predmetnog pronalaska su dobro apsorbovani posle oralne primene i zatim hidrolizovani da bi se aktivni metabolit oslobodio u sistemsku cirkulaciju i, prema tome, su pogodni za klinički razvoj. Takva nova jedinjenja prema predmetnom pronalasku bi takođe mogla da odgovore na potrebu za potentnim, efikasnim tretmanima neuroloških poremećaja, kao što su stanja hroničnog bola uključujući perzistentni bol, neuropatski bol. hronični inflamatorni bol ili visceralni bol, ili psihijatrijski poremaćaji, kao što su šizofrenija, bipolarni poremećaj, generalizovani anksiozni poremećaj ili post-traumatski stresni poremećaj.
[0005] Predmetni pronalazak daje jedinjenje formule I
u kojima
R<1>je vodonik, R<2>je vodonik i R<3>je vodonik;
R<1>je vodonik, R2 je (2,S)-2-aminopropanoil, i R<3>je vodonik;
R<1>je vodonik, R<2>je (2<S)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoil, i R<3>je vodonik;
R' je vodonik, R2 je 2-aminoacetil, i R3 je vodonik:
R' je benzil, R2 je vodonik, i R<3>je benzil; ili
R<1>je (2-fluorofenil)metil, R2 je vodonik, i R3 je (2-fluorofenil)metil;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0006]Predmetni pronalazak daje (AS',2,S,,5i?,61S')-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0007]Kao poseban primer izvođenja, predmetni pronalazak daje( lS, 2S, 5R, 6S)- 2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu.
[0008]Kao poseban primer izvođenja, predmetni pronalazak daje so hlorovodonične kiseline( 1S, 2S. 5R,đ5)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,1 *-ciklopropan]-2,6-dikarboksiIne kiseline.
[0009]Predmetni pronalazak daje( 1S. 2S. 5R. <SS)-2-[[(2S)-2-aminopropanoil ] amino] spiro [biciklo [3.1.0] heksan-4, 1' -ciklopropan] -2,6-dikarboksil nu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so. |0010]Kao poseban primer izvođenja, predmetni pronalazak daje hidrohlorid( 1S, 2S, 5R, 6S)-2-[[(25)-2-aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline.
[0011]Kao poseban primer izvođenja, predmetni pronalazak daje( 1S. 2S, 5R. 6S)- 2-\[( 2S)- 2-aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4, l '-ciklopropan]-2.6-dikarboksilnu kiselinu; 1,4-dioksan (1: 0.5); hidrohlorid.
[0012]Predmetni pronalazak daje (/.?,25.5^d5)-2-f[{25,)-2-amino-4-meti]sulfanil-butanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.1 '-ciklopropan]-2.6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so.
[0013]Kao poseban primer izvođenja, predmetni pronalazak daje hidrohlorid( 1S, 2S, J/?,tf5)-2-[[(2lS<T>)-2-amino-4-metilsulfanilbutanoilJaminoJspiro[biciklo[3.] .0jheksan-4.r-ciklopropanJ-2,6-dikarboksilne kiseline.
[0014]Predmetni pronalazak daje( JS, 2S, 5R, 6S)- 2-[( 2-aminoacetil)amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so.
[0015]Kao poseban primer izvođenja, predmetni pronalazak daje hidrohlorid(75,25,5^,6^-2-[(2-aminoacetil)amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2.6-dikarboksilne kiseline.
[0016]Predmetni pronalazak daje dibenzil( 1S. 2S. 5R.65)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l'-ciklopropan]-2.6-dikarboksilat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0017]Kao poseban primer izvođenja, predmetni pronalazak daje dibenzil( IS, 2S. 5R, 6S}- 2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l'-ciklopropan]-2.6-dikarboksilat; 1,4-dioksan; hidrohlorid. ]0018]Predmetni pronalazak daje bis[(2-fluorofenil)metil](75,25,5A65)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat, ili njegovu famiaceutski prihvatljivu so.
[0019]Kao poseban primer izvođenja, predmetni pronalazak daje bis[(2-fluorofenil)metil]
(/lS',2LS',5/?,6'lS)-2-aminospiro[bicikIo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat
hidrohlorid.
[0020]Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži( lS, 2S, 5R, 6S)- 2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l'-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so.(] S. 2S, 5R. 6S)- 2-[[( 2S)- 2-aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.1 '-ciklopropan]-2,6-dikarboksiinu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so,( JS, 2>5,,J/?,(55')-2-[[(25)-2-amjno-4-metilsulfanil-butanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropan]-2.6-đikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so,(7,S',26,,5/?,^lS)-2-[(2-aminoacetil)amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2.6-dikarboksilnu kiselinu. ili njenu farmaceutski prihvatljivu salt, dibenzil( 1<S>, 2S,5R. 6S)~ 2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. ili bis[(2-fluorofenil)metil] (75.255/?,65y2-aminospiro[biciklo[3.1 .Ojheksan-4,1 '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i izborno drugim terapeutskim sastojcima.
[0021] Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži( lS, 2S, 5R, 6S)- 2-aminospiro[biciklo[3.1.0jheksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so.( ISJSJR, 6S)- 2-[[( 2S)- 2-aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.1<*->ciklopropan]-2.6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so,(/5,25,5/?,65)-2-([(25)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so.( LS, 2S, 5R, 6S)- 2-[( 2-aminoacetil)amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropanJ-2.6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu, dibenzil(75,25,5/?, 65)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. ili bis[(2-fluorofenil)metil]( 1S, 2S, 5/?,65J-2-aminospiro[biciklo[3.1,0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijent.
[0022] Predmetni pronalazak daje za upotrebu u lečenju neurološkog ili psihijatrijskog poremećaja, koja sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za tim efikasne količine(75,25,5/?, <55)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-cikIopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli,(75,25, 5R, 6S)- 2-[[(25)-2-aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-ciklopropanJ-Z^-dikarboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli.(75,25, ji?, 65)-2-[[(25)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.1 '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli.(75,25,5/?, 65)-2-| (2-aminoacetil)aminojspiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli, dibenzil(75,25, 5R, 6S)- 2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilata. ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili bis[(2-fluorofenil)metiI](/5,25,5/?.65)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilata, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0023] Predmetni pronalazak daje upotrebu (/5,25,5/?,65)-2-aminospiro[biciklo[3.1 .Ojheksan-4,l'-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli.
(/.S;2,S;5/?(6,S')-2-[[(2.V)-2-aminopropanoiljamino|spiro(biciklo|3.1.0jheksari-4.I?-ciklopropan]-2.6-dikarboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli.
(75,2S,j/?,đ,S^-2-[[(26)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoil]amino]spior[biciklo[3.1.0]heksan-4.1'-ciklopropan]-2.6-dikarboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli.
( IS. 2S. 5R. fj1S')-2-f(2-aminoacetil)amino]spirojbiciklo[3.1.0]heksan-4,l'-ciklopropan]-2.6-
dikarboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli, dibenzil( IS. 2S. 5R, 6S)- 2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2.6-dikarboksilata ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili bis[(2-fluorofenil)metil]( JS. 2S. j/?. đ1S')-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilata. ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za proizvodnju leka za lečenje neurološkog ili psihijatrijskog poremećaja.
[0024]Predmetni pronalazak daje (/5,2.S.57?,6iS')-2-aminospiro[bictklo[3.1.0]lieksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so,( liS. 2S, 5R.65")-2-[[(21S)-2-aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-đikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so,( 1S, 2S, 5R,đ5)-2-[[(25)-2-amino-4-metilsulfanil-bulanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropan]-2.6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so,( JS, 2S. 5R, 6S)- 2-[ (2-aminoacetil)amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so. dibenzil( IS, 2S, 5R, 6S)- 2~aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.1'-đklopropan]-2.6-dikarboksilat. ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili bis[(2-fluorofenil)metil]( JS, 2S. 5R.65^-2-aminospiro[biciklo[3. 1 .Ojheksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak takođe daje (/6,,25,,J7?,6.Sr)-2-aminospiro|biciklo[3.1 .OJheksan-4,1 '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so, (/5,2iS,,5/f,6'1.V)-2-[[(25)-2-aminopropanoil]amino]spiro[biciklof3.1.0] heksan-4,1 '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so,(7»S,,25,,J7?,(5.<<>>)-2-[[(25r)-2-amino-4-metilsulfanilbutanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l'-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so, (/5',25',5/?I6'.S,)-2-[t2-aminoacetil)amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksi!nu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so, dibenzil( IS, 2S. 5R, 6.S)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2.6-dikarboksilat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili bis[(2-fluorofenil)metil]( IS,25,5/?,i5,V)-2-aminospiro[biciklo[3,l .Ojheksan-4,l'-ciklopropan]-2.6-dikarboksilat. ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju neurološkog ili psihijatrijskog poremećaja. |0025] Dodatno, predmetni pronalazak daje poželjne primere izvođenja postupaka i upotreba kao sto je ovde opisano, u kojima je neurološko oboljenje izabrano iz grupe koja se sastoji od perzistentnog bola, neuropatskog bola, hroničnog inflamatornog bola, i visceralnog bola, i psihijatrijski poremećaj je izabran iz grupe koja se sastoji Šizofrenije, bipolarnog poremećaja, generalizovanog anksioznog poremećaja, i post-traumatskog stresnog poremećaja.
[0026] Kao što je prethodno korišćeno, i u opisu pronalaska, sleđeći termini, ukoliko nije drugačije naznačeno, imaju sledeća značenja:
[0027] "Prolek" je klasa lekova, inicijalno u neaktivnom obliku koja se prevodi u aktivni oblik u telu normalnim metaboličkim procesima, gde u Formuli 1, R<1>je vodonik, R<2>je (2<S<T>)-2-aminopropanoil, i R3 je vodonik; R<1>je vodonik, R<2>je (2S)-2-amino-4-rnetilsulfanil-butanoil, i R<3>je vodonik; R<1>je vodonik, R<2>je 2-aminoacetil. i R3 je vodonik; R<1>je benzil, R2 je vodonik, i R<3>je benzil; ili R<1>je (2-fluorofenil)metil. R<2>je vodonik. i R3 je (2-fluorofenil)metil. "Aktivno jedinjenje" ili "aktivno" je drugo ime za aktivni oblik primenjen na telo, na primer, intravenski ili intraperitonealno, gde R<1>, R<2>, i R<J>u Formuli 1 su vodonik. "Aktivni metabolit" je drugo ime za aktivni oblik koji rezultuje iz takve konverzije proleka u telu preko normalnih metaboličkih procesa, gde R<1>, R<2>, i R<3>u Formuli I su vodonik.
[0028] "Farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijent" je medijum opšte prihvaćen u tehnici za dopremanje biološki aktivnih agenasa sisarima, npr., ljudima.
[0029] "Farmaceutski prihvatljvie soli" odnose se na relativno netoksične, neorganske i organske soli jedinjenja ovog pronalaska.
[0030] "Terapeutski efikasna količina" ili "efikasna količina" označava količinu jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ovog jedinjenja ili farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ovog pronalaska koja će izazvati biološki ili medicinski odgovor ili željeni terapeutski efekat na tkivo, sistem, životinju, sisara ili Čoveka koji je tražen od strane istraživača, veterinara, lekara ili drugog kliničkog lica.
[0031] Termini "tretman," "tretiranje." "tretirati," i slično, su određeni tako da obuhvataju usporavanje ili reverziju progresije poremećaja. Ovi termini takođe uključuju olakšavanje, ublažavanje, umanjivanje, eliminisanje, ili smanjivanje jednog ili više simptoma poremećaja ili stanja, čak iako poremećaj ili stanje nije zaista uklonjeno i čak iako sama progresija poremećaja ili stanja nije usporena ili nije izvršena njegova reverzija.
[0032] Po standarnoj nomenklaturi korišćenoj u ovom opisu, terminalni deo naznačenog bočnog lanca je opisan prvo, praćen sa susednom funkcionalnom grupom prema tački vezivanja. Na primer, metilsulfonil supstituent je ekvivalentan sa CH3-SO2-. (0033|Jedinjenja ovog pronalaska su sposobna za reakciju sa, na primer, brojnim neorganskim i organskim kiselinama da bi formirale farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli ili bazne adicione soli. Takve farmaceutski prihvatljive soli i uobičajena metodologija za njihovo pripremanje dobro su poznati u tehnici.Videti, npr.,P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERT1F.S. SELEOTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts, "Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66. No. 1, January 1977.
[0034]Jedinjenja ovog pronalaska su poželjno formulisana kao farmaceutske kompozicije korišćenjem farmaceutski prihvatljivog nosača, razblaživača, ili ekscipijenta i primenjena su na različite načine. Poželjno, takve kompozicije su za oralnu ili intravensku primenu. Takve farmaceutske kompozicije i procesi za njihovo pripremanje dobro su poznati u tehnici.Videti, npr.,Remington: The Science and Practice of Pharmacy (A. Gennaro. et al., eds.. 21 st ed., Mack Publishing Co., 2005).
[0035]Jedinjenja ovog pronalaska koja će stvarno biti primenjena biće određena od strane lekara u odnosu na odgovarajuće uslove. uključujući stanje koje se tretira, izbaranog puta primene, stvarnog primenjenog jedinjenja ili više jedinjenja ovog pronalaska, starosti, težine, i odgovora pojedinačnog pacijenta, i težine simptoma pacijenta. Dnevne doze normalno su u opsegu od oko 0.1 do oko 300 mg. U nekim slučajevima mogu biti više nego odgovarajući dozni nivoi ispod donje granice prethodno pomenutog opsega, dok u drugim slučajevima i veće doze mogu biti primenjene.
[0036]Jedinjenja ovog pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu se pripremiti različitim procedurama poznatim u tehnici, kao i onima opisanim u Pripremama i Primerima u daljem tekstu. Specifični koraci sinteze za svaki opisani način mogu se na različite načine kombinovati da bi se pripremila jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0037]Supstituenti, ukoliko nije drugačije naznačeno, su kao što je prethodno definisano. Reagensi i početni materijali su generalno lako dostupni stručnjaku. Drugi se mogu napraviti standardnim tehnikama organske i heterociklične hernije, tehnikama koje su analogne sintezi poznatih strukturno sličnih aktivnih jedinjenja. i procedurama opisanim u Pripremama i Primerima koje slede uključujući bilo koje nove porcedure. Imenovanje sledećih Priprema i Primera izvedeno je korišćenjem Symyx Draw 3.1.
[0038]Kao što su ovde korišćeni, sledeći termini imaju naznačena značenja: "HPLC" se odnosi na tečnu hromatografiju pod visokim pritiskom: "LC" se odnosi na tečnu hromatografiju; "MS (ES+)" se odnosi na masenu spektroskopiju korišćenjem elektosprej jonizacije; "MS" se odnosi na masenu spektroskopiju; "SFC" se odnosi na superkriličnu tečnu hromatografiju; "NMR" se odnosi na nuklearnu magnetnu rezonancu; "TLC" se odnosi na tankoslojnu hromatografiju; "RT" se odnosi na retenciono vreme; "UV" se odnosi na ultraljubiČasto; "EDTA" se odnosi na etilendiamintetrasirćetnu kiselinu; "PBS" se odnosi na fosfatno puferovani slani rastvor; "PCR" se odnosi na lančanu reakciju polimeraze: "SCX" se odnosi na snažnu izmenu katjona; i "HLB" se odnosi na hidrofilnu-lipofilnu ravnotežu.
Priprema 1
D//erc-butil ( IS, 2SJR, (5LS*)-2-(/t'rc-butoksikarbonilamino)-4-metilen-biciklo[3.1 .Ojheksan-2,6-dikarboksilat
[0039]
[0040]Napuniti posudu ođ 250 mL koja je osušena u peći i koja ima okruglo dno sa metiltrifenilfosfonijum bromidom (5.41 g, 14.9 mmol) i tetrahidrofuranom (93 mL). Ohladiti suspenziju do 0°C i ukapavanjem dodati IM rastvor natrijum bis(trimetilsilil)amida u tetrahidrofuranu (16.08 mL, 16.08 mmol). Mešati dobijenu svetio žutu smešu na 0°C u trajanju od 20 minuta pre dodavanja rastvoradiferc- butil ( IS, 2S. 5R, 6/?)-2-(/cjrc-butoksikarbonilamino)-4-okso-biciklo[3.1.()]heksan-2,6-dikarboksilata (5.09 g, 12.4 mmol. videti WO03/104217/A2 za detalje sinteze) u tetrahidrofuranu (31 mL). Ostaviti reakciju da se zagreje do sobne temperature i mešati 16 časova. Podeliti smešu između etil acetata (500 mL) i vode (350 mL). Odbaciti vodenu fazu i isprati organsku fazu fiziološkim rastvorom (200 mL). Osušiti organsku fazu preko magnezij um sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti pomoću "flash" hromatografije eluiranjem sa etil acetatom:izo-heksanom (5:95 do 20:80) da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (4.84 g, 11.2 mmol). 'H NMR (CDCh) 5 1.45 (m. 27H), 1.87 (t, J=2.9 Hz, IH), 1.98 (m, IH), 2.43 (m, 2H), 3.07 (brm, IH), 4.86 (brs, IH), 5.03 (d,./=2 Hz, IH), 5.1-5.3 (br s, IH).
Priprema 2
Đ/7erc-buti 1(/5.25,,S'7<',61S)-2-(/e7"c-butoksikarbonilamirio)spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.1 '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat
[0041]
[0042]Pripremiti rastvor bez etanola od diazometana u dietil etru punjenjem hladnog prstolikog dela Aldrich mini-Diazald aparata sa suvim ledom i /zo-propanolskim punjenjem od jedne trećine. U reakcionom delu aparata postaviti rastvor kalijum hidroksida (740 mg, 13.2 mmol) u vodi (1.5 mL). U ovaj rastvor dodati smešu dietilen glikol monoetil etra (4 mL) i dietil etra (2.4 mL). Rastvoriti /V-metil-^'-nitro-jV-nitrozoguanidin (1 g, 6.8 mmol) u smešu dietil etra (13 mL) i dietilen glikol monoetil etra (4 mL). Postaviti ovaj rastvor u levak za dodavanje sa glatkim staklenim zglobovima i povezati za mini-Diazald aparat. Zagrejati rastvor kalijum hidroksida u vođenom kupatilu održavanom na 70°C, osiguravajući da su posuda za sakupljanje i barboter napunjeni dietil etrom na izlazu aparata oba ohlađeni u suvom leduZ/zopropanolskom kupatilu. Omogućiti da se rastvor /V-inetil-A'-nitro-A<7->nitrozoguanidina doda pri stopi koja je jednaka onoj kod rezultirajuće destilacije. Pošto je destilacija završena, dodati dietil etar ukapavanjem kroz levak za dodavanje sve dok kondenzat na hladnom prstolikom delu postane bezbojan. Čuvati dobijeni rastvor u suvom ledu//zć>-propanolskom kupatilu do upotrebe. Suspendovati paladijum acetat (17.2 mg: 76.5 umol) u dietil etru (10 mL). Odliti i fdtrirati dobijeni svetio braon rastvor i pažljivo dodati u smešu diazometanskog rastvoraditerc- b\ x\\\(75'25,5/?,61S')-2-(/t'rc-butoksikarbonilamino)-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (330 mg, 765.5 umol) i dietil etra (10 mL) koji je ostavljen da dostigne temperaturu sredine. Pošto je oslobađanje gasa prestalo, filtrirati dobijenu suspenziju i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se proizvelo 260 mg smeše neodreagovalogditerc- bu\\\(/.S',25,,5/f,65')-2-(/erc-butoksikarbonilamino)-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata i jedinjenja iz naslova.
[0043]Pripremiti rastvor diazometana bez etanola u dietil etru iz rastvora kalijum hidroksida (2.5 g, 44.6 mmol) u vodi (4 mL), dietilen glikol monoetil etru (14 mL) i dietil etru (8 mL) i A-metil-Af,-nitro-ALnitrozoguanidinu (4 g, 27.2 mmol) u smeši dietil etra (30 mL) i dietilen glikol monoetil etru (15 mL). Uzeti rezultujući rastvor diazometana i u delovima ga dodati tokom 30 minuta u suspenziju paladijum acetata (20 mg, 89.1 umol) u rastvoru prethodno pripremljene smeše neizreagovanogdilerc- but\\ ( 1S, 2S, 5R.65)-2-(/e/r-butoksikarbonilamino)-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata i jedinjenja iz naslova (260 mg) u dietil etru (3 mL). Kada je prestalo razvijanje gasa. ostaviti preko noći, zatim filtrirati kroz fritu za razdvajanje faza i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo tamno ulje. Prečistiti "flash'' hromatografijom eluiranjem sa etil acetat: /zo-heksan (0:100 do 75:25) da bi se dobilo 185 mg smeše neizreagovanogđi/ erc- butil { IS, 2S, 5R,6"iSr)-2-(/erc-butoksikarbonilamino)-4-metilenbiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata i jedinjene iz naslova.
[0044]Pripremiti rastvor diazometana bez etanola u dietil etru iz rastvora kalijum hidroksida (3.2 g, 57 mmol) u vodi (5 mL), dietilen glikol monoetil etru (4 mL) i dietil etru (10 mL) iN-metil-/V '-nitro-Ar-nitrozoguanidinu (5 g, 34 mmol) u smeši dietil etra (35 mL) i dietilen glikol monoetil etru (15 mL). Uzeti rezultujući rastvor diazometana i u delovima ga dodati tokom 60 minuta u suspenziju paladijum acetata (20 mg, 89.1 umol) u rastvoru prethodno pripremljene smeše neizreagovanogdiierc- buX\\ ( 1S, 2S, 5R,6lS1)-2-(/e/-c-butoksikarbonilamino)-4-metilen-bicikIo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata i jedinjenja iz naslova (185 mg) u dietil etru (2 mL). Kada je prestalo razvijanje gasa, ostaviti 30 minuta, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo žuto ulje. Prečišćavanje pomoću HPLC sa raspodelom po masi (RT = 6.4 minuta (UV), 6.37 minuta (MS); LC Kolona: Waters XBridge™ 30mm x lOOmm 5um; voda w/0.1% mravljom kiselinom; gradijent: 28-62% acetonitril w/0.1% mravljom kiselinom 1.35 minuta zatim 62-95% 6.65 minuta, zatim držano na 95% 3.55 minuta. Temperatura kolone: sobna; stopa protoka: 45 mL/minul) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (55.3 mg, 130.6 umol). MS (m/z): 446 (M+23).
Priprema3
Dietil (AS',255/?,<5/?)-2-amino-4-okso-biciklo[3.1.0)heksan-2.6-dikarboksilat
[0045]
[0046]Napuniti balon sa tri grlića, od 500 mL, opremljen kondenzatorom, ulaznim otvorom za azot i termometrom saditcrc- b\\ X\\(/1S'25,5/?.<5/0-2-(/ć'rf-butoksikarbonilamino)-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilatom (15 g, 36.4 mmol) u etanolu (365 mL). Dodati tionil hlorid (13.3 mL. 182.3 mmol) u rastvor koji se meša na sobnoj temperaturi preko šprica (slaba egzotermna) zatim zagrevati do refluksa. Nakon 24 časa ohladiti reakciju do sobne temperature i koncentrovatiin vacuo.Rastvoriti ostatak u dihlorometanu (50 mL) zatim koncentrovati na rotacionom evaporatoru (ponoviti 3 puta). Razdvojiti ostatak između etil acetata (200 mL) i zasićenog natrij um hidrogenkarbonata (150 mL). Isprati organsku fazu fiziološkim rastvorom (150 mL), osušiti preko natrij um sulfata, filtrirati zatim koncentrovati do sušenja da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao ulje (8.24 g. 32.3 mmol). MS (m/z): 256 (M+l).
Priprema 4
Dietil ( 1S. 2SJR,(5/?)-2-acetamido-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2.6-dikarboksilat
[0047]
[0048]Dodati anhidrid sirćetne kiseline (5 mL. 50.8 mmol) u mešani rastvor dietil (;IS,,25;5/?,đ/?)-2-amino-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2.6-dikarboksilata (7.2 g, 28.2 mmol) i trietilamina (7.9 mL, 56.4 mmol) u suvom dihlorometanu (72 mL) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 časa, ugasiti sa vodom (100 mL) i snažno mešati 20 minuta. Razdvojiti dihlorometanski sloj preko hidrofobne frite i uparavati do svetio braon ulja (9.6 g). Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom:/zo-heksanom (70:30 do 90:10) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bledožuto staklo koje se peni po sušenju (6.53 g, 22 mmol). MS (m/z): 298 (M+l), 320 (M+23), 617 (2M+23).
Priprema5
Dietil (75,,25,5i?,<55r)-2-acetamido-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
|0049]
|0050]Napuniti balon sa ravnim dnom od 250 mL osušen u peći sa (metil jtrifenilfosfonijum bromidom (9.72 g, 26.7 mmol) i suvim tetrahidrofuranom (122 mL). Rashladiti suspenziju do 0 do -5°C i tretirati sa 2M natrij um 6/,s(lrimetilsilil)airiidom u tetrahidrofuranu (13.3 mL. 26.7 mmol) u kapima. Mešati rezultujuću svetio žutu smešu na 0°C 20 minuta zatim tretirati sa rastvorom dietil (7525,J/?,(5jl?)-2-acetamido-4-okso-biciklo[3.] .0]heksan-2.6-dikarboksilata (6.1g, 20.5 mmol) u tetrahidrofuranu (30 mL). Dozvoliti da se reakcija polako ugreje do sobne temperature tokom 3 časa. Nakon mešanja od 20 časova na sobnoj temperaturi ugasiti sa ledenom vodom (200 mL) i ekstrahovati sa etil acetatom (200 mL). Isprati ekstrakte vodom (100 mL), fiziološkim rastvorom (100 mL), osušiti, filtrirati i upariti do tamno braon ulja. Dodati dietil etar (70 mL) i /zo-heksan (20 mL) i zasejati rastvor sa trifenilfosfin oksidom. Ostaviti da stoji 2 Časa, dekantovati rastvor, dodati silicij um dioksid i koncentrovati pod vakuumom. Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: /zo-heksanom (60:40 do 80:20) da bi se dobilo roze ulje (6.81 g) kontaminirano sa trifenilfosfin oksidom. Ponovo prečisti sa "flash1' hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom:/zo-heksanom (60:40) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao viskozno žuto ulje (3.98 g, 13.5 mmol). MS (m/z): 296 (M+l), 318 (M+23), 613 (2M+23).
Priprema 6
Dietil (/S^i^J^.rj^^-acetamidospirofbiciklofS. 1.0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat
[0051]
[0052]Pod azotom, dodati rastvor trifluorosirćetne kiseline (1.9 mL, 25 mmol) u dihlorometanu (12.5 mL) u kapima veoma sporo hlađenom (ledeno kupatilo) mešanom rastvoru dietilcink (IM u heptanima) (25 mL, 25 mmol) u dihlorometanu (12.5 mL). Nakon 10 minuta, dodati rastvor dijodometana (2.01 mL, 25 mmol) u dihlorometanu (12.5 mL). Nakon 10 minuta, dodati rastvor dietil ( JS, 2S, 5R, (5.S)-2-acetamido-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (2.46 g, 8.3 mmol) u dihlorometanu (12.5 mL). Nakon 60 minuta ukloniti ledeno kupatilo i ostaviti reakcionu smešu da se preko noći meša na sobnoj temperaturi. Ugasiti bistri reakcioni rastvor dodavanjem u kapima reakcione smeše u 0.2M vodeni rastvor hiorovodonične kiseline (200 mL) uz snažno mešanje. Nakon 1 časa razdvojiti dihlorometanski sloj, isprati fiziološkim rastvorom, osušiti preko magnezijum sulfata, filtrirati i koncentrovati u vakuumu da bi se dobio zahtevani proizvod kontaminiran sa neizreagovanim početnim materijalom (4.4 g). Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: cikloheksanom (50:50 do 100:0) da bi se dobilo bezbojno ulje (3.1 g). Prečisiti sa SFC (RT - 2.48 minuta (UV. 200 nm); HPLC Kolona: AD-H 30 mm x 250 mm 5 um; COz gradijent: 5% /zo-propil alkohol w/0.2% dimetiletilaminom 0.5 minuta, zatim 5%-27% 2.2 minuta. Temperatura kolone: 35°C: pritisak: 100000 kPa; stopa protoka: 210 mL/minut) da bi se dobio neizreagovani dietil (75.25,.57Ć.6\S)-2-acetamido-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (580 mg, 2.0 mmol) i jedinjenje iz naslova (1.82 g, 5.9 mmol). MS (m/z): 310 (M+l), 332 (M+23).
Priprema 7
Dietil (75.25.J/i,đ5)-2-amino^-medlen-biciklo[3.1.0]heksan-2f6-dikarboksilat
10053]
Postupak 1:
[0054]Pripremiti rastvor od oko IM hlorovodonika u etanolu sa dodavanjem u kapima trimetilsilil hlorida (13.8 mL, 108 mmol) etanolu (110 mL). Rastvoritiditerc- b\ it\\
( IS, 25,57f,đ5)-2-(/cjrc-butoksikarbonilamino)-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (7.4 g, 18.1 mmol) u ovom kiselom rastvoru i zagrejati do 60°C 16 časova. Upariti do viskoznog žutog ulja, ponovo rastvoriti u vodi (50 mL) i filtrirati mutni rastvor da bi se uklonili tragovi nerastvorljivih supstanci. Neutralizovati vodeni kiseli rastvor sa natrijum bikarbonatom (8.4 g, 0.1 mol) i ekstrahovati sa dihlorometanom (2 x 100 mL). Osušiti kombinovane dihlorometanske rastvore preko hidrofobne frite i upariti do bledo žute tečnosti (4.14 g). Prečistiti hromatografijom na silicijum dioksidu sa vezanim amino grupama eluiranjem sa etil acetatom: /zo-heksanom (20:80 do 80:20) da bi se dobila bezbojna tečnost (3.6 g). Ponovo prečistiti hromatografijom na silicijum dioksidu sa vezanim amino grupama eluiranjem sa etil acetatom: /zo-heksanom (20:80) da bi se dobila bezbojna tečnost jedinjenja iz naslova (2.81 g, 61%). MS (m/z): 254 (M+l).
Postupak 2:
[0055]Osušiti monohidrat/?-toluensuIfonske kiseline (6.97 g, 36.6 mmol)in vacuona 50°C 3 dana. Mešanom rastvoru dodatidilerc- butll ( 1S, 2S. 5R,o^-2-(/e/r-butoksikai+x)ni]amino)-4-metilen-biciklo[3.1.0] heksan-2,6-dikarboksilat (5.0 g, 12.2 mmol) u etanolu (35.5 mL) i zagrevati do 60°C 3 dana. Ukloniti rastvarač pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Preneti ostatak u vodu (100 mL), načiniti baznim korišćenjem natrijum bikarbonata i ekstrahovati sa dihlorometanom (3 x 100 mL). Osušiti ekstrakte preko natrijum sulfata, filtrirati i zatim koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio narandžasti ostatak jedinjenja iz naslova (1.52 g, 51%). MS (m/z): 254 (M+l).
Priprema 8
Dietil(/5,25,5J?,65)-2-(9//-fluoren-9-ilmetoksikarbonilamino)-4-metilen-bicikloL3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
|0056]
|0057]Dodati čvrsti 9-fluorenilmetil hloroformat (3.15 g, 12.2 mmol) u delovima tokom 5 minuta mešanom rastvoru dietil( 1S. 2S,J/?,(55r)-2-amino-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (2.8 g, 11.1 mmol) i natrijum bikarbonata (2.04 g, 24.3 mmol) u tetrahidrofuranu (28 mL) i vodi (8.4 mL) ohlađenom do 0-5°C. Nakon 1 časa, dodati vodu (10 mL) i ekstrahovati sa etil acetatom (50 mL). Isprati ekstrakt fiziološkim rastvorom (20 mL), osušiti, filtrirati i upariti do bledo žutog ulja (6.5 g). Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: /zo-heksanom (10:90 do 20:80) da bi se dobilo viskozno bezbojno ulje (4.58 g). Ponovo prečistiti sa "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom:/zo-heksanom (20:80) do bi se dobila polučvrsta pena jedinjenja iz naslova (4.22 g, 80%). MS (m/z): 476 (M+l).
Priprema 9
Dietil( 1S, 2S, 5R, (55')-2-(9//-fluoren-9-iIinetoksikarbonilamino)spirofbiciklo[3.1 .Ojheksan-4,1 '-ciklopropan]-2,6-dikarboksiIat
|0058|
[0059]Dodati rastvor trifluorosirćetne kiseline (2.66 g, 23.3 mmol) u dihlorometanu (11.7 mL) u kapima tokom 5 minuta mešanom rastvoru dietil cinka IM u heptanima (23.3 mL, 23.3 mmol) u dihlorometanu (11.7 mL) ohlađenom do 0-5°C pod azotom (egzotermna reakcija). Nakon 10 minuta, dodati rastvor dijodometana (6.25 g, 23.3 mmol) u dihlorometanu (11.7 mL). Nakon 10 minuta, dodati rastvor dietil( 1S. 2S, 5R, (J5>2-(9//-fluoren-9-ilmethoksikarbonilamino)-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (3.70 g, 7.8 mmol) u dihlorometanu (11.7 mL). Nakon 2 časa na 0°C. dozvoliti da se ugreje do sobne temperature i mešati 16 časova. Ugasiti reakcionu smešu sa hladnom 0.5M hlorovodoničnom kiselinom (50 mL) i dihlorometanom (20 mL) i snažno mešati. Razdvojiti dihlorometanski sloj preko hidrofobne frite i zatim upariti do bledo žutog ulja. Prečistiti "flash'' hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: /zo-heksanom (10:90 đo 20:80) da se dobilo bezbojno ulje (3.49 g). Ponovo prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: /zo-heksanom (20:80) uzimajući centralne frakcije da bi se dobila bezbojna pena jedinjenja iz naslova (2.12 g, 56%). MS (m/z): 490 (M+l). Druga serija proizvoda iz manje čistih frakcija dobijena je ponovljenom hromatografijom (363 mg, dodatnih 9%).
Priprema 10
Dietil( IS, 2S, 5R, <5i?)-2-benziloksikarbonilamino-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0060] Postupak 1: |0061] Dodati dibenzil dikabonat (18.6 mL. 76.1 mmol) rastvoru dietil(ASUS.J/č.oT?)^-amino-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (16.2 g, 63.5 mmol) u dihlorometanu (500 mL), zatim u kapima dodati trietilamin (10.6 mL, 76.1 mmol). Mešati reakcionu smešu 30 minuta pre ispiranja sa 3N hlorovodoničnom kiselinom (200 mL). Isprati dihlorometansku fazu sa slanim rastvorom, razdvojiti i koncentrovatiin vacno.Prečistiti "flash"' hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: /20-heksanom (0:100 do 75:25) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (11.6 g, 47%). MS (m/z): 388 (M+l). 410 (M+23).
Postupak 2:
[0062]U balon sa ravnim dnom dodati dietil( lS, 2SJR, 6R)- 2- amino- 4- okso-biciklo[3.1.0]heksan-2.6-dikarboksiIat hidrohlorid (226.86 g, 777.65 mmol), vodu (1.13 L) i tetrahidrofuran (1.13 L). Dodati polako natrijum bikarbonat (143.72 g, 1.71 mol) u 5 delova (posmatrajući razvijanje CO2i internu temperaturu od 31°C do 25°C). Zatim dodati rastvor benzil hloroformata (120.6 mL, 855.42 mmol) u tetrahidrofuranu (226.9 mL) i održavati internu temperaturu ispod 28°C (10 minuta) mešajući reakciju na 25°C 1 čas. Sipati smešu u metil-/-butil etar (1.25 L). Razdvojiti slojeve, ekstrahovati vodeni sa etil acetatom (750 ml) i odbaciti vodenu fazu. Isprati smešu sa slanim rastvorom, osuštiti preko magnezijum sulfata, filtrirati i koncentrovati do sušenja da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (302.82 g, 777.65 mmol). MS (m/z): 388 (M+l).
Priprema 11
Dietil (/.S.i^J^.đ^^-benziloksikarbonilamino^-metilen-biciklotS.l.Olheksan^^-dikarboksilat
[0063]
Postupak 1:
[0064]Napuniti 500 mL balon sa ravnim dnom osušen u peći sa (metil)trifenilfosfonijum bromidom (15.4 g, 43.1 mmol) i suvim tetrahidrofuranom (112 mL). Ohladiti suspenziju do 0 do -5°C i tretirati sa 2M natrijum bis(trimetilsilil)amidom u tetrahidrofuranu (23 mL, 46 mmol) u kapima. Mešati rezultujuću svetio žutu suspenziju na 0°C 30 minuta zatim tretirati sa rastvorom dietil (/5,25,5^,^)-2-benziloksikarbonilamino-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (11.2 g, 28.8 mmol) u tetrahidrofuranu (22.4 mL). Dozvoliti da se reakcija sporo zagreje do sobne temperature. Nakon 4 časa, ugasiti sa ledom (120 g), slanim rastvorom (120 mL) i ekstrahovati sa etil acetatom (250 mL). Isprati ekstrakte sa slanim rastvorom (2 x 100 mL), osušiti, filtrati i upariti do crvenog ulja. Ponovo rastvoriti u dietil etru (100 mL) i dodati/roheksan (80 mL) polako u delovima da bi se istaložio trifenilfosfin oksid kao crvena polu-čvrsta supstanca (5.2 g). Tretirati rastvor sa suvim silicijum dioksidom (~50 g) i koncentrovati do sušenja. Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom:izo-heksan (20:80) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno viskozno ulje (7.37 g, 66%). MS (m/z): 388 (M+l), 410 (M+23).
Postupak 2:
[0065] Dodati kalijum/<?rc-butoksid (104.72 g, 933.18 mmol) suspenziji (metil)trifenilfosfonijum bromida (340.16 g, 933.18 mmol) u tetrahidrofuranu (1.82 L) na sobnoj temperaturi (bez promene interne temperature). Zatim dodati rastvor dietil
( 1S, 2S, 5R, 6/(')-2-benziIoksikarbonilamino-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata
(302.82 g, 777.65 mmol) u tetrahidrofuranu (1.82 L) održavajući temperaturu na 24°C. Mešati smešu na 50°C 3 časa. Razblažiti reakciju sa etil acetatom (1.5 L), isprati vođom (2 x 3 L) i slanim rastvorom. Osušiti organsku fazu preko magnezijum sulfata, filtrirati i koncentrovati da bi se dobilo tamno braon ulje. Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetat: heksani (9:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (183.35 g. 473.25 mmol). MS (m/z). 388 (M+l). 410 (M+23).
Priprema 12
Dietil( IS, 2S, 5R,65T)-2-benziloksikarbonilaminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksiIat
[0066] Postupak 1:|0067]Dodati rastvor IM dietilcinka u heptanima (64.1 mL. 64.1 mmol) u dihlorometanu (14.6 mL) polako u kapima tokom 10 minuta mešanom rastvoru trifluorosirćetne kiseline (4.27 mL, 56.5 mmol) u dihlorometanu (73 mL) ohlađenom do 0-5°C pod azotom. Nakon 10 minuta, dodati rastvor dijodometana (4.6 mL. 56.5 mmol) u dihlorometanu (14.6 mL). Nakon 10 minuta, dodati rastvor dietil (/,S'.2.S'.5<y>f.r),S')-2-benziloksikarbonilamino-4-rnetilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (7.3 g. 18.8 mmol) u dihlorometanu (14.6 mL). Nakon 1 časa. ukloniti ledeno kupatilo i ostaviti mutni rastvor da se meša 20 Časova na sobnoj temperaturi. Nakon 24 časa. ugasiti reakcionu smešu sa ledenim 0.5M vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (160 mL, 80 mmol) i dihlorometana (200 mL) i snažno mešati smešu. Razdvojiti dihlorometanski sloj i zatim osušiti dihlorometansku fazu filtriranjem kroz 2 hidrofobne frite. Upariti do bledo žutog ulja koje postaje braon preko noći. Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: /zo-heksanom (20:80) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao smeša sa neizreagovanim dietil( 1S, 2S, J7?,đ,S')-2-benziloksikarbonilamino-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilatom kao bezbojno ulje (5.1 g).
[0068]Dodati rastvor trifluorosirćetne kiseline (2.93 mL, 38.7 mmol) u dihlorometanu (10 mL) u kapima polako tokom 10 minuta mešanom rastvoru dietilcinka IM u heptanima (38.7 mL, 38.7 mmol) u dihlorometanu (50 mL) ohlađnom do 0-5°C pod azotom. Nakon 10 minuta, dodati u reakcionu smešu rastvor dijodometana (3.12 mL, 38.7 mmol) u dihlorometanu (10 mL). Nakon 10 minuta, dodati rastvor smeše olefina i dietil( lS, 2S, 5R, 6S)- 2-benziloksikarbonilaminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropanj-2.6-dikarboksilata (5 g, 12.9 mmol) u dihlorometanu (10 mL). Nakon 1 časa ukloniti ledeno kupatilo i ostaviti mutni rastvor da se meša 16 časova na sobnoj temperaturi. Nakon 20 Časova, ugasiti reakcionu smešu sa ledenim 0.5M hlorovodonikom (140 mL, 70 mmol) i đihlorometanom (160 mL) i mešati snažno smešu. Isprati dihlorometanski sloj sa 0.5M veodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (100 mL), osušiti preko natrijum sulfata i zatim filtrirati kroz 2 hidrofobne frite. Upariti do bledo žutog ulja (5.89 g). Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: /zo-heksanom (15:85 do 25:75) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (4.28 g) kontaminirano sa malom količinom reaktanta.
[0069]Ponovo rastvoriti u acetonu (40 mL). vodi (20 mL), natrijum bikarbonatu (0.54 g, 6.45 mmol) i magnezijum sulfatu (0.78 g, 6.45 mmol). Ohladiti do 0°C i dodati kalijum permanganat (0.2 g, 1.29 mmol) da bi se dobila svetio ljubičasta smeša. Nakon 3 časa na sobnoj temperaturi, ugastiti sa Čvrstim natrijum tiosulfat pentahiđratom (0.32 g, 1.29 mmol) i filtrirati suspenziju kroz Čep od dijatomejske zemlje, ispirati sa acetonom. Uparati do male zapremine. razblažiti sa vodom (20 mL) i ekstrahovati sa etil acetatom (60 mL). Isprati ekstrakte sa slanim rastvorom, osušiti, filtrirati i upariti do ulja. Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom:izo- heksanom(15:85 do 25:75) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (3.62 g. 70%). MS (m/z): 402 (M+l).
Postupak 2:
[0070] Dodati rastvor IM dietilcinka u heptanima (1.6 L. 1.6 mol)prekokanile dihlorometanu (870.9 mL) na 0°C (temperatura kupatila -5°C), zatim polako dodali rastvor trifluorosirćetne kiseline (121.02 mL, 1.6 mol) u dihlorometanu (870.9 mL) održavajući temperaturu ispod 3°C. Nakon 1 časa dodavanja mešati smešu 5 minuta zatim dodati dijodometan (130.3 mL, 1.6 mol) u jednom delu i mešati 15 minuta. Dodati rastvor dietil (75,2»S',J/^,đ5)-2-benziloksikarbonilamino-4-metilen-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata
(183.35 g, 449.58 mmol) u dihlorometanu (348.4 mL) tokom 10 minuta i mešati smešu preko noći na sobnoj temperaturi. Ohladiti do 0°C, ugasiti sa 0.5M hlorovodoničnom kiselinom (1.5 L) i snažno mešati smešu. Razdvojiti organski sloj, isprati sa slanim rastvorom i koncentrovati do sušenja. Rastvoriti u vodi (733.4 mL) i acetonu (733.4 mL), ohladiti do 0°C zatim dodati magnezijum sulfat (81.17 g, 674.37 mmol), natrijum bikarbonat (56.65 g, 674.37 mmol) a zatim kalijum permanganat (28.42 g, 179.83 mmol). Mešati smešu na sobnoj temperaturi. Nakon 30 minuta dodati natrijum tiosulfat pentahidrat (197.10 g, 311.03 mmol) zatim dijatomejsku zemlju (100 g). Mešati 30 minuta i filtrirati kroz jastučić dijatomejske zemlje. Isprati jastučić sa metil/-butil etrom i ekstrahovati vodeni sloj sa metil-/-butil etrom. Osušiti organski sloj preko magnezijum sulfata, filtrirati i koncentrovatiin vacuo.Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa heksanima: metil-r-butil etrom (10:90 do 50:50) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (92.67 g, 51%). 'H NMR (CDCb) 6: 0.39-0.52 (m, IH), 0.55-0.78 (m, 3H), 1.25 (široki t,J=7.1 Hz, 611), 1.58 (široki dd, J=2.9 i 6.3 Hz, IH), 1.64-1.73 (m, IH), 1.95 (široki t, J=2.9 Hz, IH), 2.03-2.17 (m, IH), 2.52 (dd, J= 2.7 i 6.3 Hz, IH). 4.09 (q, J= 7.1 Hz, 2H), 4.16-4.32 (m, 2H), 5.08 (široki s, 2H), 5.44 (široki s, IH), 7.28-7.41 (m, 5H).
[0071]Takođe dobiti dietil(AS, 2S, 5R, (5.S)-2-(benziloksikarbonil(meti])amino)spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat kao sporedni proizvod (22.67 g, 5.46 mmol). 'H NMR (CDCb) 5: 0.37-0.52 (m, IH), 0.54-0.80 (m, 3H), 1.26 (široki t, ./= 7.1 Hz, 6H), 1.55-1.68 (m, IH), 1.64-1.73 (m. IH), 1.70-1.80 (m, IH), 1.97 (široki t,J=3.1Hz, IH), 2.30 (dd,J= 3. 1i 6.3 Hz, IH), 3.16 (s, 3H), 3.99-4.29 (m, 4H), 5.09 (široki s. 2H), 7.38-7.62 (m, 5H).
Priprema 13
Dietil (7S,2S'5/^&Sy2-aminospiro[biciklo|3. 1.0]heksan-4J '-ciklopropan]-2.6-đikarboksilat
(0072j
Postupak 1:
[0073] Dodati piperidin (3.16 g, 37.2 mmol) mešanom rastvoru dietil(/5.25.J^.<SS)-2-(9//-fluoren-9-ilmetoksikarbonilamino)spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,<r->ciklopropan] 2,6-dikarboksilata (2.10 g, 4.29 mmol) u dihlorometanu (10.5 mL) na sobnoj temperaturi. Nakon 30 minuta, upariti do žute čvrste supstance. Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom:izo- heksanom(30:70 do 80:20) da bi se prvo eluirao l-(9/Y-fluoren-9-ilmetil)-piperidin i zatim da bi se eluirala bledo žuta tečnost jedinjenja iz naslova (3.07 g, 93%). MS (m/z): 268 (M+l).
Postupak2:
[0074]Rastvoriti dietil( 1S, 2S, 5R,6^S)-2-benziloksikarbonilaminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2.6-dikarboksilat (3.62 g, 9 mmol) u etanolu (54 mL) i dodati rastvor 10% paladijumu na ugljeniku (Degussa tip E101 NE/W, 0.18 g, 0.17 mmol). Izvršiti hidrogenizaciju na Parr operni 4 časa na 345 kPa. Filtrirati reakciju kroz jastučić dijatomejske zemlje da bi se uklonio katalizator, isprati sa etanolom i upariti do bezbojnog ulja kao jedinjenja iz naslova (2.23 g, 93%). MS (m/z): 268 (M+l).
Priprema 14
Dietil( 1S, 2S, 5R, điS)-2-[[(25)-2-(/erc-butoksikarbonilamino)propanoil]amino]spiro[bicikIo[3.1.0]heksan-4,l'-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat
[0075]
|0076) Kombinovati dietil(75,25,J7\,65)-2-aminospirolbiciklol3.1.0]heksan-4,lciklopropan]-2,6-dikarboksilat (1.92 g, 7.17 mmol), (25)-2-(/<?re-butoksikarbonilamino) propionsku kiselinu (1.92 g, 10 mmol), 4-dimetilaminopiridin (9 mg, 717 mmol) i 1-hidroksibenzotriazol (1.36 g, 10 mmol) u dihlorometanu (48 mL). Dodati trietilamin (1.5 mL, 10.8 mmol) i l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (1.92 g. 10 mmol) i mešati 2 časa na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Razblažiti reakciju sa etil acetatom (200 mL), vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Snažno mešati zatim razdvojiti etil acetatni sloj, isprati sa 0.2M hlorovodoničnom kiselinom (50 mL), vodom (50 mL), zasićenim natrijum hidrogenkarbonatom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Osušiti, filtrirati i koncentrovati rastvor da bi se dobilo žuto ulje (3.48 g). Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom:izo- heksanom(15:85 do 25:75) zatim (25:75 do 40:60) da bi se dobio materijal kao ulje. Ponovo rastvoriti u dihlorometanu. koncentrovati i osušiti pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beli penasti materijal (3.05 g, 6.95 mmol). MS (m/z): 461 (M+23).
[0077]Sledeća jedinjenja su suštinski pripremljena postupkom iz pripreme 14.
Priprema 17
( IS, 2S, 5R, đ5T)-2-[[(25)-2-(/erc-Butoksikarboniiamino)propanoil]amino]
spirof biciklo[3.1.0]heksan-4.1 '-ciklopropan]-2.6-dikarboksilna kiselina
|0078]
Postupak 1:
[0079]Dodati rastvor 2M litijum hidroksida u vodi (27.8 mL, 55.6 mmol) hladnom mešanom rastvoru dietil( IS, 2S, 5R, 6S)- 2-[ [(25)-2-(/erc-butoksikarbonilamino)propanoil]amino]spiro[bicikIo[3.1.0]heksan-4,l'-ciklopropan]-2.6-dikarboksilata (3.05 g, 6.9 mmol) u tetrahidrofuranu (36 mL) pod azotom. Mešati dvoslojni rastvor na sobnoj temepraturi 20 časova. Zakiseliti sa 2M hlorovodoničnom kiselinom (29 mL), ledom (—20 g) i ekstrahovati sa etil acetatom (100 mL). Isprati ekstrakte slanim rastvorom (50 mL), osušili na natrijum sulfatu, filtrirati i upariti do bele polu-čvrste pene. Ponovo rastvoriti materijal u vrućem etil acetatu (15 mL). Filtrirati i osušiti materijal pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela Čvrsta supstanca (2.06 g, 5.4 mmol). MS (m/z): 405 (M+23).
Postupak 2:
[0080]Rastvoriti dietil(/S,2S,5/?,(5.S)-2-benziloksikarbonilaminospiro[biciklo[3.1 .OJheksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat (159 g, 396.05 mmol) u etanolu (792.1 mL), i dodati 10% paladijum na ugljeniku (15.9 g, 14.94 mmol) i zatim 37.5% tež./tež. rastvor hlorovodonične kiseline u vodi (6.62 mL, 79.21 mmol). Izvršiti hidrognizaciju na 2 L Parr opremi na 413 kPa na sobnoj temperaturi. Nakon 4 časa filtrirati smešu kroz dijatomejsku zemlju i stakleni mikrofiber filter (Whatman) i koncentrovatiin vacuo.Rastvoriti sirovu supstancu u tetrahidrofuranu (396 mL), dodati hlorodimetoksitriazin (74.50 g, 415.86 mmol) i (2lS')-2-(/erc-butoksikarbonilamino) propionsku kiselinu (79.88 g 415.86 mmol). Ohladiti ovu smešu do 0°C i dodati N-metilmorfolin (131.06 mL, 1.19 mol). Mešati smešu na sobnoj temperaturi. Nakon 5 Časova filtrirati sirovu supstancu kroz dijatomejsku zemlju i isprati kolač sa tetrahidrofuranom (200 mL). Ukloniti delimično rastvarač pod vakuumom i ohladiti rezultujući narandžasti rastvor do 0°C. Dodati 2M natrijum hidroksid u vodi (792.1 mL, 1.58 mol) u kapima. Mešati smešu preko noći, dozvoljavajući da reakcija postigne sobu temperaturu. Dodati dihlorometan (1 L) i razdvojiti faze. Isprati organski sloj sa više vode (300 mL). Zakiseliti kombinovane vodene slojeve do pH=2-3 sa IN kalijum liidrogen sulfatom i zatim ekstrahovati sa etil acetatom. Osušiti organski sloj preko magnezijum sulfata, filtrirati i upariti pod vakuumom. Rastvoriti sirovu supstancu u tetrahidrofuranu (600 mL) i zagrevati do refluksa. Dodati heptan (2.1 L) i ohladiti rastvor. Filtrirati čvrstu supstancu i osušiti pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (149 g, 98%). MS (m/z): 405 (M+23).
[0081]Sledeća jedinjenja su suštinski pripremljena postupkom 1 pripreme 17.
Priprema 20
Dietil ( IS, 2S, 5R, ^S)-2-(/TCT-butoksikarbonilamino)spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2.6-dikarboksilat
[0082]
Postupak 1:
[0083]Rastvoru dietil(AS',25,57?,o'J.S)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l "-ciklopropanj-2,6-dikarboksilata (0.47 g, 722.38 mmol) u dihlorometanu (5 mL) dodati dnzo-propil-etilamin (1.02 g, 3.61 mmol) na polimernoj podlozi i zatim di-/-butildikabonat (0.41 g, 1.88 mmola) u dihlorometanu (6.00 mL) i mešati reakcionu smešu na sobnoj temperaturi preko noći. Dodati dodatni di-/-butikiikabonat (0.32 g, 1.36 mmol) mešati dodatna 2 časa. Razblažiti sa etanolom (20 mL) i prečistiti sa SCX-2 kertridžom jonizmenjivačke smole (10 g) prethodno tretirane sa 2 zapremine kolone etanola. Nakon punjenja kertridža isprati sa 4 zapremine kolone etanola pre koncentrovanja eluentain vacuoda bi se dobio sirovi proizvod (808 mg). Prečistiti sirovi materijal "flash" fromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: cikloheksanom (0:100 do 40:60) da bi se dobio željeni materijal (100 mg). Isprati kertridž sa 2 zapremine kolone 3M amonijaka u melanolu da bi se dobila žuta čvrsta supstanca (430 mg) neizreagovanog sirovog dietil(} S, 2StJi?,66,)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan|-2,6-dikarboksilata.Dodati di-/-butildikabonat (0.32 g, 1.44 mmol) rekuperovanom dietil( lS, 2S, 5R, 6S)- 2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l'-ciklopropan]-2,6-dikarboksilatu u tetrahidrofuranu (20 mL), mešati na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim dodati trietilamin (201.37 uL, 1.44 mmol) i dodatni di-/-butildikabonat (0.32 g, 1.44 mmol) i nastaviti mešanje 72 časa. Dodati višak trietilamina (201.37 uL, 1.44 mmol). di-/-butildikabonata (0.32 g, 1.44 mmol) i katalitički A'A<?->dimetil 4-aminopiridin (40.93 umol) i mešati preko noći. Razblažiti sa etanolom (30 mL) i prečistiti rastvor sa SCX-2 kertridžom jonoizmenjivačke smole (10 g) prethodno tretirane sa 2 zapremine kolone etanola. Isprati sa 4 zapremine kolone etanola i koncentrovati rastvorin vacuoda bi se dobilo 757 mg sirovog željenog proizvoda. Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: cikloheksanom (0:100 do 40:60) da bi se dobila druga frakcija željenog proizvoda iz naslova (24 mg). Kombinovati obe frakcije da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (337.47 umol, 47%). MS (m/z): 390 (M+23), 757 (2M+23).
Postupak 2:
[0084]Dodati di-/-butildikabonat (0.88 g, 4.01 mmol) rastvoru dietil(/.s;25,J^,65>-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilata (1.4 g, 5.24 mmol) u tetrahidrofuranu (30 mL) i mešati reakcionu smešu na sobnoj temperaturi preko noći pod azotom. Filtrirati kroz hidrofobnu fritu. isprati bezbojni gel, sa etil acetatom. Koncentrovati kombinovane organske slojevein vacuoda bi se dobilo bezbojno ulje. Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom: /zo-heksanom (0:100 do 30:70) da bi se dobilo 1.82 g ulja. Osušiti dodatno pod visokim vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.79 g, 93%). MS (m/z): 390 (M+23), 757 (2M+23).
Priprema 21
(/1S,25'I5/?,6'5)-2-(/erc-Buloksikarbonilamino)spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l "-ciklopropan]-2,6-dikarboksilna kiselina
|0085]
[0086] Dodati dietil (;S,25,5^,tf5)-2-(/erc-butoksikarbonilamino)spiro[biciklo[3.1.Ojheksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat (1.79g, 4.87 mmol) u tetrahidrofuranu (29.2 mL) sveže pripremljenom rastvoru litijum hidroksid monohidrata (1.64 g, 38.97 mmol) u vodi (19.5 mL) i mešati preko noći na 60°C. Razblažiti sa vodom (30 mL), ekstrahovati sa etil acetatom (2 x 50 mL). Razdvojiti vodene i organske slojeve. Isprati organski sloj sa 2M hlorovodoničnom kiselinom. Isprati vodeni sloj sa 2M hlorovodoničnom kiselinom (25 mL), zatim ekstrahovati sa etil acetatom (2 x 50 mL). Kombinovati organske slojeve i isprati sa slanim rastvorom (15 mL). Osušiti na magnezijum sulfatu, filtrirati i koncentrovati do sušenja. Ponovo rastvoriti u dihlorometanu i koncentrovati do sušenja da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.49 g, 98%). MS (m/z): 334 (M+23).
Priprema 22
Dibenzil( IS, 2.S',5/f,d1S)-2-(/e'/-c-butoksikarbonilamino)spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,1 '-cikIopropan]-2,6-dikarboksilat
[0087]
[0088] Dodati cezijum karbonat (0.24 g, 730.7 umol) i benzil bromid (87.16 uL, 730.7 umol) rastvoru (/5>25,5<y>^,4S)-2-(/erc-butoksikarbonilamino)spiro[biciklo[3.L0jheksan-4,r-ciklopropan]-2.6-đikarboksilne kiseline (0.09 g. 292.29 umol) u ;V,A'-dimetilformamidu (2 mL). Mešati na sobnoj temperaturi 1.5 časa pod azotom. Ugasiti vodom i ekstrahovati sa etil acetatom. Razdvojiti slojeve i filtrirati organske delove kroz hidrofobnu fritu pre koncentrovanja do sušenja da bi se dobio sirovi proizvod (334 mg). Prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom:/ro-heksanom (1:99 do 25:75) da bi se dobilo bistro ulje. Dodatno prečistiti "flash" hromatografijom eluiranjem sa etil acetatom:iza-heksanom (1:99 do 10:90) da bi se dobio proizvod iz naslova (105 mg, 68%) kao bistro ulje. MS(m/z): 514 (M+23).
[0089] Sledeće jedinjenje je suštinski pripremljeno postupkom iz pripreme 22.
Primer 1
Hidrohlorid (75,25,57?,f55)-2-Aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline
[0090]
[0091]Napuniti 5 mL ReactiVial saditerc- butil ( 1S. 2S. J7?,^S)-2-(/e/T-butoksikarbonilamino)spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilatom (55 mg, 129.8 umol). Ovome dodati 5N vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (3 mL; 20.8 mmol) i 1,4-dioksan (1 mL). Mešati smešu na 90°C jedan sat. Zapečatiti ReactiVial i nastaviti mešanje na 90°C 3 časa. Ohladiti do ambijentalne temperature i ostaviti da stoji 3 dana. Koncentrovati pod sniženim pritiskom do tamne čvrste supstance. Pripremiti Oasis®) HLB Waters (1 g) kertridž ispiranjem sa 2 zapremine kolone metanola, zatim sa 6 zapremina kolona vode. Rastvoriti tamnu čvrstu supstancu u vodi i napuniti u kertridž. Isprati kertridž sa vodom (2 zapremine kolone) i sakupiti eluent. Osušiti zamrzavanjem rastvor da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (16.1 mg, 65 umol). MS (m/z):212 (M+l). 'H NMR (D20) 6 0.45 (m, IH), 0.53 (m, IH). 0.64 (m, IH), 0.74 (m, IH), 1.72-1.78 (m, 2H) 1.86 (d, J=14.2 Hz, IH). 2.07 (m. IH). 2.37 (m, IH).
Primer 2
(75,25,57?, 65)-2-Aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.1 '-ciklopropan]-2.6-dikarboksilna kiselina
[0092]
[0093]Dodati 2M natrijum bidroksid (11.5 mL, 23.1 mmol) sa dietil(75,25,57?,(5.S)-2-acetamidospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2.6-dikarboksiIatom (1.19 g, 3.8 mmol). Po dodavanju zagrejati reakciju do refluksa u zaštitnoj atmosferi azota. Nakon 21 časa dodati u višku 2M natrijum hidroksid (5.8 mL. 11.5 mmol) i nastaviti zagrevanje 120 časova. Prečistiti pomoću katjonskoizmenjivačke hromatografije (Dowex™ 50X8-100) kao što sledi. Filtrirati bilo koje nerastvorljive čestice i isprati sa vodom HPLC kvaliteta. Koncentrovati rastvor do polovine. Naneti rastvor na smolu, omogućavati da protiče kroz kolonu sa stopom kapanja od oko 1 kapi svakih 1-2 sekunde. Nakon što je inicijalna zapremina iskapana na površinu smole, isprati smolu sa vodom HPLC kvaliteta (~1 do 2 zapremine kolone) i ponoviti 3 puta. Pratiti pH efluenta i nastaviti ispiranje sa vodom HPLC kvaliteta dok se ne završi primena (vraćanje pH nazad do pH=7.). Kada je zabeležen kompletan pH ciklus i kada se efluent vratio na pH=7, isprati kolonu sa najmanje jednom zapreminom kolone svakog od sledećih: vodom HPLC kvaliteta, vodom HPLC kvaliteta: tetrahidrofuranom (3:1), zatim vodom HPLC kvaliteta. Izvaditi proizvod iz smole sa i 0% piridinom: vodom HPLC kvaliteta i nastaviti eluiranje sa 10% piridinom: vodom HPLC kvaliteta do prestanka detekcije dodatnog proizvoda sa TLC. Kombinovati frakcije koje sadrže željeni materijal, koncentrovati do sušenja da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Osušiti zamrzavanjem da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (795 mg, 3.8 mmol). MS (m/z): 212 (M+l). 'H NMR (D20 + 5% d5-piridin) 8: 0.38 (m, IH), 0.45 (m, IH), 0.55 (m, IH), 0.69 (m, IH), 1.50 (dd, .7=2.9 Hz, Ili), 1.62 (d, J-13.7 Hz, IH), 1.78 (m, 2H), 2.11 (dd, J=2.9 Hz, IH).
Primer 3
(75,25,J7?,<5lS,)-2-[[(25)-2-Aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l'-cik!opropan]-2,6-dikarboksilna kiselina; 1,4-dioksan (1: 0.5); hidrohlorid
[0094]
[0095]Dodati rastvor 4M hlorovodonika u 1.4-dioksanu (1.57 mL, 6.3 mmol) mešanoj suspenziji( JS, 2S, 5R,65)-2-[[(2LS)-2-(tor-butoksikarbonilamino)propanoil] amino] spiro [biciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline (0.16 g, 418.4 mmol) u 1,4-dioksanu (1.6 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom. Nakon 3 6 Časova filtrirati belu čvrstu supstancu, isprati sa 1.4-dioksanom, osušiti u vakuumu na 60°C preko noći da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.14 g): MS (m/z): 283 (M+l). 'H NMR (D20 5 0.46 (m, IH), 0.65 (m, IH), 1.47 (d,7=7Hz, 3H), 1.70 (dd, .7=2.7 Hz, IH), 1.81 (q, 7=15 Hz, 2H), 1.87 (široki t,7=2.7i 2.9 Hz, IH), 2.65 (dd, .7=2.7 i 2.9 Hz. IH), 3.68 (s, 4H), 4.00 (q,J=7 Hz, IH), 4.70 (m,2H).
Primer 4
( 1S, 2S, 5R, 4S)-2-[[(2tS)-2-Aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l'-
ciklopropan]-2,6-dikarboksiIna kiselina
|0096]
[0097]Dodati koncentrovanu hlorovodoničnu kiselinu (36.94 mL, 430.11 mmol) rastvoru
( JS, 2S, J/f,6',S1)-2-[[(25)-2-(/<?rc-butoksikarbonilamino)propanoil]amino]
spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2.6-dikarboksilne kiseline (82.24 g, 215.06 mmol) u acetonu (822.4 mL), i mešati smešu na 50°C. Nakon 1.5 časa ohladiti smešu do 0°C i dodati 50% natrijum hidroksid u vodi do pH=3.6-3.8. Mešati dobijenu čvrstu supstancu 1 čas, filtrirati i isprati sa vodom. Sušiti pod vakuumom 48 časova da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (36 g. 127.53 mmol). MS (m/z): 283 (M+l).
Primer 5
Hidrohlorid (/5,25,5/?,65)-2-[[(25)-2-Aminopropanoil]amino]spiro[biciklo|3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline
10098]
[0099]Dodati 4M hlorovodonik u 1,4-dioksanu (20 mL, 80 mmol) mešanoj suspenziji (/1S,,25,,Ji?Jđ5)-2-[[(25)-2-(/erc-butoksikarbonilamino) propanoil] amino] spiro [biciklo [3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline (2.06 g, 5.4 mmol) u 1,4-dioksanu (21 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom. Ultrazvučno obrađivati reakcionu smešu nekoliko minuta i zatim nastaviti mešanje 16 časova. Filtrirati čvrstu supstancu, isprati sa 1,4-dioksanom, osušiti u vakuumu na 60°C 6 časova da bi se dobilo 2.2 g čvrste supstance. Ponovo rastvoriti materijal u vodi HPLC kvaliteta (20 mL), filtrirati da bi se uklonile bilo kakve nerastvorljive čestice i osušiti zamrzavanjem filtrat da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.51 g, 4.75 mmol). MS (m/z): 283 (M+l).<>>H NMR (D20) 5 0.46 (m, IH), 0.65 (m. IH), 1.46 (d, 7=7.1 Hz, 3H), 1.69 (dd, 7=2.9 Hz, IH), 1.81 (q, 7=14.3 Hz, 2H), 1.87 (široki t,J=2.9 Hz, IH), 2.65(dd, J=2. 9 Hz, IH), 4.00(q, J=7.02 Hz, IH), 4.70 (m, 2H).
[0100]Sledeća jedinjenja su suštinski pripremljena postupkom iz Primera 4.
Primer 8
Dibenzil( JS, 2S, 5R. đ»S)-2-aminospiro [biciklo [3.1.0]heksan-4, l'-ciklopropan]-2.6-dikarboksilat; 1,4-đioksan; hidrohlorid
[0101J
[0102]Dodati 4M hlorovodonik u 1,4-dioksanu (493.30 mL, 1.97 mmol) mešanoj suspenziji dibenzil( IS,2S,5R, 6S)- 2-( le7x,-butoksikarbonilamino)s<pi>ro[biciklo[3.1.0]heksan-4,1 '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilata (0.1 g. 0.2 mmol) u 1,4-dioksanu (970 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom i mešati 20 časa. Dodati višak 4M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (493.30 mL, 1.97 mmol) i zagrevati do 80°C. Koncentrovati do sušenja, triturisati sa acetonitrilom i osušiti zamrzavanjem suspenziju da bi sc dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (89.9 mg, 88%) kao (1:1) adukt sa 1,4-dioksanom. MS (m/z): 392 (M+l).
Primer 9
Bis[(2-fluorofenil)metil] (AS,,2»S,5/i,<5,Sj-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat hidrohlorid
|0103]
[0104]Dodati 4M rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4.64 mL, 18.58 mmol) mešanom rastvoru bis[(2-fluorofenil)metil](75,25,5/f,o'xS)-2-(/erc-butoksikarbonilamino)spiro[biciklo [3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilata (0.98 g, 1.86 mmol) u 1,4-dioksanu (4.64 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom i mešati rastvor 20 časova. Koncentrovatiin vacuoda bi se dobilo ulje (0.93 g). Rastvoriti u smeši acetonitrila (10 mL), vode (30 mL) i osušiti zamrzavanjem preko vikenda da bi se dobila bela čvrsta supstanca (820 mg) kao smeša jedinjenja iz naslova kontaminiranog sa( 1S, 2S, 5R, (55)-2-amino-2-[(2-fluorofenil)metoksikarbonil]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropan]-6-karboksilnom kiselinom (-7-10%). MS (m/z): 320 (M+H). Rastvoriti belu čvrstu supstancu u acetonitrilu (8 mL) da bi se dobio providan rastvor. Ostaviti da stoji 1 Čas. pre filtriranja. Koncentrovati filtratin vacuoda bi se dobila lepljiva pena. Ponovo rastvoriti u etil acetatu, isprati sa zasićenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata, osušiti preko magnezijum sulfata, filtrirati i koncentrovatiin vacuoda bi se dobilo 774 mg. Ponovo rastvoriti u dietil etru (11 mL). dodati IM hlorovodonik u dietil etru (1.86 mL. 1.86 mmol), koncentrovatiin vacuoda bi se dobila bela čvrsta pena. Dodatno sušiti preko noćiin vacuona 50°C da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.74 g, 85%). MS (m/z): 428 (M+l), 450 (M+23).
Primer10
Dihidrat( IS, 2S, 5R,đ5,)-2-[[(25)-2-Aminopropanoi]]aminojspiro[bicik]o[3.1.0]heksan-4,1 '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline
[0105]
Korak 1: Dietil (7S,2.S,5if,(57?)-2-amino-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat hidrohlorid
[0106]
[0107]Pod atmosferom azota, dodati acetil htorid (86.5 mL. 1.2 mol) apsolutnom etanolu (1.0 L, 17.2 mol) u kapima uz održavanje interne temperature reakcije ispod 30°C. Mešati rezultujuću smešu 15 minuta i dodatić//-/-butil( lS, 2S. 5R, 6R)- 2-( Serc^\ Aoks\ k?Lrhom\ dimmo)-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (100 g, 0.24 mol) u jednom delu. Zagrevati rezultujuću smešu do refluksa 16-20 Časova. Koncentrovati reakcionu smešu do ulja pod sniženim pritiskom. Rastvoriti sirovi proizvod u metilen hloridu (250 mL) i koncentrovaiin vacuo.Ponoviti proces metilen hlorid/koncentrovanje da bi se dobila bela pena. Dodati etil acetat (150 mL) i zagrevati smešu do 65°C. Dodati metil t-butil etar (100 mL) i mešati smešu na 65°C 15 minuta. Dodati metill-butil etar (300 mL) tokom 1 5 minuta, mešati na 65°C 15 minuta, zatim prekinuti zagrevanje i ostaviti suspenziju da se ohladi do temperature sredine. Filtrirati smešu i isprati filter kolač sa metil t-butil etrom (150 mL). Preneti kolač u vakuum pećnicu i sušiti preko noći na 25°C da bi se dobio sirovi proizvod (67.5 g). Preneti Čvrste supstance u balon sa okruglim dnom, razblažiti sa etil acetatom (170 mL) i zagrevati smešu sa 65°C. Mešati smešu I čas, dodati tetrahidrofuran (68 mL) i elanol (3 mL). Isključiti zagrevanje i dodati metil t-butil etar (272 mL) tokom 20 minuta, ostaviti smešu da se ohladi do temperature sredine. Filtrirati suspenziju, isprati kolač sa 95/5 metil t-butil etrom/etil acetatom (2 x 75 mL) i dodatno sušiti Čvrste supstance u vakuum pećnici preko noći na 25°C da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (60.0g. 98.0%). MS (m/z): 256 (M+l).
Korak2: Dietil (/5,2iS,5J?,6/?)-2-benziloksikarbonilamino-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0108]
[0109]Suspendovati dietil-(/5,25,5/f,^)-2-amino-4-okso-biciklo[3.L0] heksan-2,6-dikarboksilat-hidrohlorid (55.0 g, 188.5 mmol) u tetrahidrofuranu (220 mL). zatim dodati vodu (220 mL) i kalijum karbonat (92.1 g, 659.9 mmol). Mešati rezultujuću smešu 30 minuta. Dodati benzil hloroformat (26.7 mL, 175.3 mmol) smeši tokom 45 minuta, održavajući reakcionu temperaturu ispod 25°C. Mešati reakcionu smešu 30 minuta, zatim razblažiti sa etil acetatom (550 mL) i vodom (275 mL). Razdvojiti faze i povratno ekstrahovati vodeni sloj sa etil acetatom (250 mL). Kombinovati organske faze i isprati sekvencijalno sa vodenim rastvorom HCI (0.5N. 100 mL), zasićenim NaHCOs(100 mL) i slanim rastvorom (100 mL). Osušiti organski rastvor preko NaiS04, filtrirati i koncentrovatiin vacuoda bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bistro ulje (67.6 g, 92.1%).<!>H NMR (CDC13) 5 1.24-1.26 (m, 6H), 2.36 (bs, IH), 2.47(dd, IH), 2.78 (dd, IH), 2.90 (dd, IH). 4.09-4.19 (m. 411), 5.08 (s. 2H), 5.73 (s, 1H). 7.24-7.36 (m, 5H).
Korak3: Dietil (/.S'^.S'.J^ć^^-benziloksikarbonilamino^-metilen-biciklojS.l.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0110]
[0111]Pod atmosferom azota, kombinovati metil-trifenilfosfonijum bromid (67.4 g. 184.9 mmol) i tetrabidrofuran (300 mL) uz mešanje. Dodati rastvor kalijum/trc-butoksida (IM) u tetrahidrofuranu, 184.9 mL, 184.9 mmol) reakcionoj smeši tokom 15 minuta i mešati rezultujuću suspenziju na temperaturi sredine 3 časa. Rastvoriti dietil( 1S. 2S, 5R. 6R)- 2-benziloksikarbonilamino-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (12.3 kg, 3 3.6 mol) u tetrahidrofuranu (120 mL) i dodati u reakcionu smešu tokom 1 Časa. održavajući termperaturu reakcije ispod 30°C. Mešati rezultujuću suspenziju preko noći na temperaturi sredine, zatim razblažiti sa etil acetatom (600 mL) i ugasiti sa vodom (300 mL). Posle mešanja bifazne smeše u trajanju od 30 minuta, razdvojiti slojeve i isprati organske delove sa vodom (300 mL) i nakon toga 0.25M HC1 (300 ml.). Osušiti organske delove preko NaiSOit, filtrirati i koncentrovatiin vacuo(45°C) da bi se dobio sirovi proizvod kao tamno ulje (111.0 g). Prečistiti materijal pomoću hromatografije na silika gelu (1 Kg Kieselgei-60, 4 L 15% EtOAc u heptanima, zatim 10 L 30% EtOAc u heptanima) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bistro ulje (37.3 g. 87.9% potencije, 54.9%). MS (m/z): 388 (M+l).
Korak 4:Dietil (/iS^SJ^^iSO^-benziloksikarbonilaminospirofbiciklofS.l.Ojheksan^,!<7->ciklopropan |-2.6-dikarboksilat
|0H2]
|0113]U reakcionu posudu obloženu košuljicom povezanu sa rashladnom jedinicom, dodati rastvor dietilcinka (157.2 mL, 157.2 mmol, IM u heptanima) pod atmosferom azota. Rashladiti rastvor do -15°C i razblažiti sa hladnim (-15°C), suvim dihloroetanom (157.2 mL). Rastvoriti trifluorosirćetnu kiselinu (11.1 mL, 146.7 mmol) u dihloroetanu (11.1 mL) i dodati u reakcioni sud tokom 50 minuta, održavajući internu temperaturu ispod -10°C. Mešati rezultujuću suspenziju na -10 do -15°C 30 minuta. Rastvoriti dijodometan (12.7 mL, 42.1 g,
157.2 mmol) u dihloroetanu (12.7 mL) i dodali reakcionoj smešilokom 50 minuta, održavajući internu temperaturu ispod -1()°C. Mešati rezultujuću retku, belu suspenziju na -10 do -15°C 30 minuta. Rastvoriti dietil (/»S'25,5/?,6»S')-2-benziloksikarbonilamino-4-metiIen-biciklo[3.1.0]heksan-2.6-dikarboksilat (20.3 g. 87.9% potencija, 46.0 mmol) u dihloroetanu (30.4 mL) i dodati reakcionoj smeši tokom 10 minuta, održavajući internu temperaturu ispod - 10°C. Mešati bistar, bledo žuti rastvor na -10°C 5 minuta i pratiti u odnosu na latentne egzoterme. Promeniti podešavanje na rashladnom uređaju na 0°C i mešati reakcionu smešu na toj temperaturi 48 časova. Ugasiti reakcionu smešu dodavanjem 5N HC1 (62.9 mL, 314.4 mmol) tokom 15 minuta, održavajući internu temperaturu ispod 6°C. Mešati rezultujuću smešu na 0-5°C 20 minuta, zatim preneti na levak i razdvojiti slojeve. Isprati orgnski sloj sa IN HC1 (2 x 50 mL) i nakon toga sa 1:1 zasićenim NaHCOjs/FkO (60 mL), 1:1 zasićenim Na2C03/I-bO (60 mL) i vodom (50 mL). Osušiti organske delove preko Na2S04i koncentrovati in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bledo žuto ulje (19.6 g, 60.3% potencija. 63.9% ispravljeni prinos). 'H NMR (DMSO-d&) 5 0.37 (m, 2H), 0.52-0.55 (dm. 2H), 1.13-1.17 (m, 6H), 1.49-1.50 (m, IH). 1.51-1.56 (m, IH), 1.60-1.79 (m, 2H), 3.97-4.10 (m, 5H), 5.00 (s, 2H), 7.29-7.34 (m, 5H), 8.04 (s. IH).
Korak5: Dietil( IS, 2S, 5R, dV)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat hidrohlorid
|0114]
(0115]Napuniti apsolutni alkohol (100 mL, 10 zapremina), koncentrovanu HC1 (2.1 mL, 1.0 N) i dietil (75,25,57?,65)-2-benziloksikarbonilaminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat (9.7 g, 24.16 mmol) u HEL reaktor nakon čega se dodaje "Pd black'" (3.9 g, 40 tež.%). Pročistiti reaktor tri puta sa azotom i zatim tri čišćenja sa vodonikom i stavljanjem pod pritisak do 40 psi vodonika. Ostaviti reakciju da se meša između 20-30°C najmanje časa do završetka reakcije praćene sa HPLC. Filtrirati suspenziju kroz jastučić Hyflo Super Cei® i isprati vlažni kolač sa apsolutnim etanolom (2 x 30 mL, 3 zapremine). Preneti filtrat u čist reaktor i zameniti etanol sa izopropil acetatom do oko 5 zapremina na osnovuin-sititprinosa proizvoda na osnovu kalibracione krive. Ohladiti rezultujuću suspenziju do 0-5°C tokom najmanje 3 časa. Filtrirati rezultujuću suspenziju i isprati vlažni kolač ispran sa
hladnim izopropil acetatom (3 x 5 mL. 0.5 zapremina). Osušiti pod sniženim pritiskom na 30°C najmanje 12 časova da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.66 g, 15.34 mmol. 63.5%)
'H NMR (DMS0-<4 400 MHz): 5 8.84 (s, 3H), 4.31-4.15 (m. 2H), 4.03 (q. J = 7.0. 2H). 2.42 (dd..1 = 3.1.2.6, IH), 2.24 (dd. J = 6.2. 2.6. IH). 1.94 (d. J = 14.1. IH). 1.68 (d, J = 14.1. IH), 1.63 (dd, .1 = 6.6, 3.1. IH), 1.25 (t, J = 7.0, 3H), 1.17 (t, J = 7.0. 3H), 0.77-0.71 (m. IH). 0.65-0.59 (m, IH). 0.56-0.51 (m, IH), 0.50-0.44 (m. IH).
Korak6: Dietil(] S, 2S, 5R,đ.S)-2-[[(21.S)-2-(/e/c-butoksikarbonilamino)propanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-cikIopropan]-2,6-dikarboksilat
[0116]
[0117]Napunili tetrahidrofuran (45 mL, 10 zapremina) i( 2S)- 2-( terc-butoksikarbonilamino)propionsku kiselinu (3.4 g, 1.2 ekvivalenata) u reaktor a zatim dodati jV-metilmorfolin (1.96 mL, 1.2 ekvivalenata) i 2-hloro-4,6-dimetoksi-l ,3,5-triazin (3.12 g, 1.2 ekvivalenata). Mešati rezultujuću retku suspenziju između 20-25°C najmanje 3 Časa do završetka reakcije sa HPLC. Napuniti dietil( 1S. 2SJR,6»S)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2.6-dikarboksilat hidrohlorid (4.55 g. 14.81 mmol) u jednom delu između 20-25°C, a zatim dodati A'-metilmorfolin (1.63 mL. 1.0 ekvivalenata) tokom najmanje 10 minuta održavajući temperaturu između 20-25°C. Mešati rezultujuću suspenziju između 20-25°C najmanje 2 časa do završetka reakcije sa HPLC. Filtrirati rezultujuće čvrste supstance i isprati vlažni kolač sa tetrahidrofuranom (2 x 10 mL, 2.2 zapremine) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova pretpostavljajući 100% prinos. Koristiti svetio ćilibarni rastvor tetrahidrofurana jedinjenja iz naslova bez daljeg prečišćavanja pretpostavljajući 100% doprinos.<*>H NMR (DMSO-t/d, 400 MHz): 8 8.46 (s, IH), 6.72 (d, J = 7.9, IH). 4.08-3.92 (m, 5H), 2.42-2.37 (m, IH), 1.81-1.64 (m, 3H), 1.47 (dd, .1 = 6.6, 3.1. IH). 1.34 (s, 9H), 1.18-1.08 (m, 9H), 0.66-0.59 (m, IH), 0.57-0.52 (m, IH), 0.46-0.36 (m, 2H).
Korak7:( IS, 2S, 5R, 6S)- 2-[[( 2S)- 2-( le rt-Butoksikarbonilamino)propanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l'-ciklopropan]-2,6-dikarboksilna kiselina
[0118]
10119]Napuniti 2 N NaOH (37 mL, 5.0 ekvivalenata) i dietil (/5.2S,^(đ5)-2-[[(2S)-2-(/e/r-butoksikarbonilamino)propanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat (6.50 g, 14.81 mmol) u reaktor i ostaviti da se meša najmanje 12 časova između 20-30°C do završetka reakcije sa HPLC. Preneti reakciju u levak za odvajanje i ostaviti da se smiri najmanje 10 minuta. Razdvojiti faze i vratiti donji vodeni sloj u reaktor. Dodati etil acetat (90 mL, 13.8 zapremina) smeši, i zatim dodati 1 N NaHSC»4 dok pH ne dostigne 2 do 2.5. Razdvojiti slojeve i isprati organski deo sa vodom (45 mL, 6.9 zapremina). Ukloniti vodu u atmosferskoj destilaciji organske faze sa etil acetatom da bi se uklonila rezidualna voda. Ohladiti rezultujuću suspenziju između 20-30°C tokom najmanje 2 časa i ostaviti da granuliše na toj temperaturi najmanje 90 minuta. Filtrirati rezultujuće Čvrste supstance i isprati vlažni kolač sa etil acetatom (3x15 mL, 2.3 zapremina). Sušiti pod sniženim pritiskom na 45°C da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (4.45 g, 11.64 mmol, 78.6%)<!>H NMR (DMSO-ć/fi, 400 MHz, 50°C): 5 12.01 (s. 2H), 8.22 (s. IH), 6.49 (bs, IH), 4.00 (bs, IH). 2.43 (dd, J = 6.5, 2.8, IH), 1.83 (d, J = 14.0, IH), 1.68-1.62 (m, 2H), 1.42 (dd. J = 6.5, 2.8, IH), 1.36 (s, 9H), 1.15 (d, J = 7.1, 3H), 0.67-0.61 (m, IH), 0.56-0.51 (m, IH), 0.46-0.36 (m. 2H).
Korak 8:Dihidrat(/1S;21<<>?,5^,6,S>2-t[(25)-2-Aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline
[0120]
[0121]Napuniti vodu (32 mL. 8 zapremina) i( lS, 2S. 5R, 6S)- 2-[[( 2S)- 2-( terc-butoksikarbonilamino)propanoil]amino] spiro[biciklo[3.1,0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2,6-dikarboksilnu kiselinu (3.99 g, 10.4 mmol) u reaktor i zatim dodati koncentrovanu HC1 (1.80 mL, 2.0 ekvivalenata) i zatim zagrejati reakciju do 45-55°C do završetka reakcije (praćeno sa HPLC). Ohladiti reakcionu smešu do 20-30°C i podesiti pH do oko 3.6 sa 5 N NaOH. Dodati apsolutni etanol (15 mL. 3.75 zapremina) tokom najmanje 30 minuta između 20-30°C do rezultujuće suspenzije. Ostaviti da rezultujuća suspenzija granuliše između 20-30°C najmanje 12 časova. Ohladiti smešu između -5-5°C i ostaviti da granuliše najmanje 60 minuta. Filtrirati rezultujuće čvrste supstance i isprati kolač sa 30% apsolutnim etanolom u vodi {2x9 mL. 2.25 zapremina). Sušiti čvrste supstance pod sniženim pritiskom na 35°C najmanje 12 časova, i zatim ostaviti rezultujuće čvrste supstance na vagi do prestanka promene dodatne težine najmanje 2 časa da bi se obezbedilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta susptanca (2.73 g, 8.51 mmol, 81.6%). 'H NMR (D20, 400 MHz): 5 3.90 (q, J = 7.2, IH), 2.56 (dd, J = 6.5, 2.9, IH), 1.74-1.66 (m, 2H), 1.62-1.54 (m, 2H), 1.39 (d, J = 7.1, 3H), 0.61-0.56 (m, IH), 0.55-0.49 (m, IH), 0.40-0.30 (m, 2H).
[0122]Obrasci rendgenske difrakcije praha (XRD) kristalnih čvrstih supstanci dobijeni su na Bruker D4 Endeavor rendgenskom difraktometru praha, opremljenom sa CuKa izvorom ( X - 1.54060 A) i Vantec detektorom, koji radi na 35 kV i 50 mA. Uzorak je skeniran između 4 i 40° u 20, sa veličinom koraka od 0.0087° u 20 i stopom skeniranja od 0.5 sekund/korak, i sa divergencijom 0.6 mm, fiksiranim prorezima protiv rasipanja 5.28 mm i prorezima detektora 9.5 mm. Suvi prah je pakovan na kvarcni držač uzorka, a glatka površina dobijena je korišćenjem staklene pločice. Obrasci difrakcije podešeni su na osnovu NIST 675 standardnih pikova na 8.85 i 26.77 stepeni 2-teta. U kristalografskoj tehnici dobro je poznato da za bilo koji dati kristalni oblik, relativni intenziteti difrakcionih pikova mogu varirati usled poželjne orijentacije koja je rezultat faktora, kao što je oblik kristala, i ugaoni položaji pikova mogu malo da variraju. Na primer, pozicije pikova se mogu pomeriti usled varijacija u temperaturi ili vlažnosti na kojima je uzorak analiziran, premeštanje uzorka. U ovom slučaju, varijabilnost pozicije pikova od±0.2 u 29 uzeće u obzir ove potencijalne varijacije bez sprečavanja nedvosmislene identifikacije naznačenog kristalnog oblika. Potvrda kristalnog oblika se može načiniti na osnovu bilo koje jedinstvene kombinacije prepoznatljivih pikova (u jedinicama od °28), tipično prominentnijih pikova. Obrasci difrakcije kristalnog oblika sakupljeni su na temperaturi i relativnoj vlažnosti sredine.
[0123]Stoga, pripremljeni uzorak Primera 10 okarakterisan je sa XRD obrascem korišćenjem CuKa zračenja da ima difrakcione pikove (2-teta vrednosti) kao što je opisano u Tabeli 1 u nastvku. Specifično obrazac sadrži pik na 5.20 u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 10.45, 11.70, 15.75, 21.06 i 23.59 sa tolerancijom za difrakcione uglove od 0.2 stepena.
[0124]mGlu receptori su G-protein-kuplovani receptori koji modulišu ekscitabilnost neurona. Specifičnije, izmenjena neurotransmisija glutamata povezana je sa neurološkim poremećajima kao što su stanja hroničnog bola uključujući perzistentni bol, neuropatski bol, hronični inflamatorni bol, ili visceralni bol; psihijatrijski poremećaji, kao što je šizofrenija, bipolarni poremećaj, generalizovni anksiozni poremećaj, ili postraumalski stresni poremećaj; ili neurodegenerativni poremećaji.
[0125]Pošto su jedinjenja ovog pronalaska mGlu2/3 agonisti. mogu biti pogodni za tretman prethodno pomenutih stanja.
FLIPR analiza agonista humanog mGlu2 i mGlu3
[0126]AV-12 ćelijske linije, izvedene iz fibroblasta sirijskog hrčka i koje stabilno eksprimiraju humani mGlu2 ili mGlu3 receptor i kotransficirane sa glutamat transporterom EAAT 1 (ekscitatorni aminokiselinski transporter 1) pacova i Ga 15 podjedinica, korišćeni su za ove studije. Ekspresija Gal 5 omogućava Gi-kuplovanim receptorima signalizaciju kroz put fosfolipaze C, što rezultuje u mogućnosti merenja aktivacije receptora preko fluorometrijske analize kalcijumovog odgovora. Ćelijske linije su održavane kultivisanjem u Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) sa visokim sadržajem glukoze i piridoksin hlorida sa dodatkom 5% dijaliziranog fetalnog goveđeg seruma, 1 mM natrijum piruvata, 10 mM HEPES (4-(2-hidroksietil)-l-piperazinetansulfonske kiseline). 1 mM L-glutamina, i 5 ug/mL blasticidina (svi medij umi su kupljeni od Invitrogen). Izvršena je pasaža konfluentnih kultura dva puta nedeljno korišćenjem disocijacionog rastvora oslobođenog enzima (Chemicon S-004-B). Ćelije su sakupljene 24 Časa pre testa i nanete korišćenjem Matrix Well-Mate cell seeder sa 85,000 (mGlu2) ili 115.000 (mGlu3) ćelija po komorici u 96-komornim, sa crnim zidovima, poli-D-lizin-obloženim pločama (BD BioC'oat #354640) u medijumu koji sadrži samo 250 (mGlu2) ili 125 (mGlu3) uM L-glutamina (sveže dodat). Nivoi intracelularnog kalcijuma praćeni su pre i posle dodavanja jedinjenja korišćenjem Fluorometric Imaging Plate Reader (FLIPR, Molecular Devices). Test puier se sastoji od Hank's Buffered Salt Solution (HBSS; Sigma) sa dodatkom 20 Mm HEPES. Medijum je uklonjen i ćelije su inkubirane sa 8 uM Fluo-3AM (Molecular Probes, F-1241: 50 pl po komorici) u test puferu tokom 90 minuta (mGlu2) ili 120 minuta (mGlu3) na 25°C. Rastvor boje je uklonjen i zamenjen sa svežim test puferom (50 uL po komorici). FLIPR analiza sa jednim dodavanjem koji stvara krivu odgovora na koncentraciju sa 11-tačaka (3X razređenja mešanjem na lOuM) za agonist glutamat (Fisher A125-100) izveden je pre svakog eksperimenta da bi se potvrdio tipični EC?o odgovor. Rezultati su analizirani korišćenjem Prism v4.03 (GraphPad Softvvare). Jedinjenja pronalaska su testirana u FLIPR analizi sa jednim dodavanjem korišćenjem profila odgovora na koncentraciju u 10-tačaka korišćenjem 3X razređenja sa početkom od finalne koncentracije od 25 uM. Jedinjenjima pronalaska povećana je rastvorljivost kao lOmM slokovima u 0.1N NaOH i uskladištena su na -20°C. Razređena su preko serija trostrukih razblaženja u test puferu. Nakon uzimanja inicijalnog 5-sek fluorescentnog očitavanja na FLIPR instrumentu, jedinjenje pronalaska je dodato na ćelijsku ploču (50 uL po komorici). Podaci su prikupljani svake sekunde prvih 30 sekundi i zatim svake 3 sekunde za ukupno 90 sekundi da bi se detektovala aktivnost agonista. Maksimalni odgovor je definisan kao onaj indukovan sa ECmax (100 uM glutamat). Efekat jedinjenja je meren kao maksimalna minus minimalna visina pikova u relativnim fluorescentnim jedinicama (RFUs) ispravljenim za bazalni nivo fluorescencije merenim u odsustvu glutamata. Određivanja su izvedena korišćenjem pojedinačnih ploča. Efekti agonista su kvantifikovani kao procenat stimulacije indukovan samim jedinjenjem u odnosu na maksimalni odgovor glutamata. Svi podaci su izračunati kao relativne EC50vrednosti korišćenjem programa za fitovanje četvoro parametarske logističke krive (ActivitvBase v5.3.1.22).
[0127]Primer 2 je meren u hmGlu2 FLIPR analizi suštinski izvedenoj kao prethodno da ima EC50od 39.0 nM ± 5.9 (n = 3, greška računala kao SEM). Primer 2 je takođe meren u hmGlu3 FLIPR analizi suštinski izvedenom kao prethodno da ima EC50 od 285 nM ± 52.5 (n = 8, greška raČunata kao SEM). Ovi rezultati pokazuju da je Primer 2 potentni agonist mGlu2 i mGlu3.
Prekidanje perzistentnog bola indukovanog injekcijom formalina
[0128]Primena formalina na površinu stopala zadnje šape pacova rezultuje u dve faze nocifenzivnog ponašanja (kao što je lizanje, griženje, i trazanje injektirane šape): rana laza tokom približno 5 minuta nakon primene formalina i kasna faza od približno minuta 10 do minuta 60 nakon injekcije formalina. Period mirovanja od približno minuta 5 do minuta 10 razdvaja dve faze. Bodovanje ovog formalinom indukovanog ponašanja može se automatizovati korišćenjem komora iznenađenja (SR-Lab, San Diego Instruments, San Diego, CA) koje detektuju pokrete pacova putem akcelerometra. Test jedinjenje (akti vno) je dozirano (intraperitonealni put) kod neizgladnjivanih mužjaka Sprague-Dawley pacova u opsegu od 0.3
- 10 mg/kg 1 čas pre injekcije intraplantarnog formalina. Pacovi su zatim individualno postavljeni u cilindre unutar test komora za aklimatizaciju. Test jedinjenje (prolek) je oralno dozirano unutar opsega od 0.45 - 15 mg/kg, kod neizgladnjivanih Sprague-Dawley pacova dva časa pre injekcije intraplantarnog formalina. Pacovi su zatim individualno postavljeni u cilindre unutar test komora za aklimatizaciju. U naznačenim vremenskim tačkama, pacovi su uklonjeni iz cilindara i primenjen je formalin (50 mL 5% rastvora u slanom rastvoru) potkožno u površinu stopala desne zadnje šape i odmah su postavljeni nazad u cilindre. Cilindri su postavljeni u prihvatne ćelije sistema za detekciju unutar test komora, čime je omogućeno kontinuirano praćenje odgovora u toku 60 minuta u intervalima registrovanja od 3 sekunde. Broj nocifenzivnih događaja [broj registrovanja od 1 sekunde sa >20 jedinica opterećenja] je izražen u 5-minutnim intervalima. Prag od 20 jedinica opterećenja je dovoljno veliki da se eliminiše uključivanje normalnih fizioloških događaja kao što su disanje ili mirisanje, ali dovoljne veličine da se detektuju nocifenzivni događaji. Podaci su konvertovani određujući broj događaja preko praga (20 jedinica opterećenja) u svakom registrovanju od 1 sekunde tokom 60 minuta prikupljanja podataka. Bodovi rane faze su suma događaja veća od 20 jedinica opterećenja od Vremena 0 do 5 minuta. Bodovi kasne faze su dobijeni dodavanjem ukupnog broja događaja veći od 20 jedinica opterećenja od Minuta 11 do Minuta 40 perioda prikupljanja podataka. Podaci za formalin su preocenjeni jednofaktorskom analizom varijanse (ANOVA) i odgovarajuće razlike su analizirane Dunnett-ovim 'f testom za dvostruka poređenja korišćenjem JMP (v 6.0.2) programa za statističku analizu (SAS Institute Inc. Cary, NC). Razlike su smatrane značajnim ukoliko je p vrednost manja od 0.05. Izračunavanja ED50su izvedena korišćenjem fitovanja nelinearne regresione krive na procenat reverznih transformisanih podataka za svaku dozu.
[0129] Primer 2 je meren u ovom testu, suštinski izveden kao prethodno, da ima EDso od 0.7 mg/kg (i.p.). Primer 10 je meren u ovom testu, suštinski izveden kao prethodno, da ima ED50od 4.8 mg/kg (p.o.). Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja unutar obima ovog pronalaska korisni medikamenti za perzistentni bol.
Rcverzija ligacije L5/L6 nerva indukuje taktilnu alodiniju
[0130] Unilateralna ligacija nerava koji inervišu region zadnje noge rezultovaće u hroničnom perzistentnom bolu koji se manifestuje kao taktilna alodinija kod pacova. Izvedena je ligacija L5/L6 nerva (Kim et al. Pain (1992) 50, 355-363). Neuropatska povreda je proizvedena snažnim vezivanjem levih L5 i L6 spinalnih nerava pod gasnom anestezijom sa smešom izoflurana (3% za indukciju i 2% za održavanje) i kiseonikom. Nakon minimalno 14 dana nakon operacije, taktilna alodinija je procenjena merenjem taktilne osetljivosti povređene šape sa von Frey filamentima sa povećavanjem sila savijanja (0.3 do 15 g) (Chaplan et al. J. of Neuroscience Methods (1994) 53, 55-63). Smatralo se da su pacovi hipersenzitivni kada pokazuju taktilnu alodiniju (povlačenje šape kao odgovor na primenu sile savijanja manje od 2 grama). Bazalne vrednosti određene su neposredno pre procenjivanja test jedinjenja. Test jedinjenje (prolek) je oralno dozirano sa 15 mg/kg i taktilni prag za povlačenje šape je meren na 1, 2 i 4 časa posle doziranja. Podaci su izraženi kao prag odgovora u gramima (g) i vrednosti su sa standardnim greškama srednjih vrednosti (± SE srednje vrednosti) za svaku vremensku tačku. Podaci su analizirani korišćenjem analize varijansc nakon čega je izvedena Dunnett-ova post hoc analiza i predstavljaju apsolutnu promenu u pragu bola (Cmax = osnovna vrednost maksimalnog odgovora) i izraženi su kao srednja vrednost [log (maksimalni odgovor) - log skor predoze)] (g).
[0131] Primer 10 doziran sa 15 mg/kg (gde n=8; greška izračunata kao SEM) meren je u ovom testu, suštinski izvedenom kao prethodno, da ima značajno povećani mehanički prag na jedan, dva i četiri časa: 9.06 ± 2.26, 12.31 ± 1.86 i 8.63±1.98, respektivno, u poređenju sa odgovarajućim vrednostima nakon tretmana nosačem: 1.50 ± 0.60,1.34 ±0.75, i 2.35 ± 0.62 na jedan, dva i četiri časa respektivno. Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja unutar obima ovog pronalaska korisni medikamenti za stanja neuropatskog bola.
Reverzija CFA-indukovane mehaničke hiperalgezije
[0132]Indukcija lokalne inflamacije u zadnjoj šapi pacova izazvaće perzistentnu mehaničku hiperalgeziju koja se može meriti određivanjem praga na stimulus pritiska koji daje bolan odgovor. Postupak za izazivanje mehaničke hiperalgezije kompletnim Freund-ov ađuvansom (CFA) kod pacova je uveliko opisan u Iadarola et al. Brain Res. (1988) 455, 205-212. Pacovi su postavljeni pod izofluransku anesteziju dok je u desnu šapu injektirano 50 jul CFA (Sigma C5881. 1 mg/ml ekstrakta mikobakterijuma u 85% parafinskom ulju, 15% manid monooleat) intraplantarno. Ostavljeno je da se životinje oporave u kavezima sa mekom prostirkom i promene u mehaničkoj hiperalgeziji su merene 24 časa post-CFA injekcije. Mehanička hiperalgezija (Randall Sellito Test) određena je nežnim vezivanjem pacova i stavljanjem šape između postolja i potiskivača (Ugo Basile Analgesy-meter). Registrovana je gram sila kada životinja povlači šapu. Maksimalna sila od ne više od 250 grama je primenjena i ukoliko pacov ne povuče šapu, registrovana je vrednosl od 250 grama.
[0133] Pacovi su testirani za bazalni odgovor pre CFA injekcije. Post-CFA odgovor je testiran sledećeg jutra (oko 24 Časa nakon injekcije CFA). Pacovi su randomizovani na osnovu post-CFA odgovora i pacov koji je pokazivao skor >150 grama isključen je iz daljeg testiranja. Test jedinjenje (prolek) je oralno dozirano unutar opsega od 1.5 do 15 mg/kg i mehanički prag za povlačenje šape je meren 1 i 2 časa nakon doziranja. Statistička značajnost je definisana kao p vrednost < 0.05 u analizi kovarijanse praćene sa Dunnett-ovim post hoc testom za svaku vremensku tačku. Tabela 2 u nastavku obezbeđuje statistički značajne rezultate za Primer 10 suštinski izveden kao prethodno. Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja unutar obima ovog pronalaska korisni medikamenti za stanja hroničnnog inflamatornog bola kao što je osteoartritis ili reumatoidni artritis.
Reverzija ponašanja povezanih sa bolom indukovanim kolorektalnom distenzijom
[0134]Visceralni bol kod pacova može se indukovali distenzijom kolorektalne šupljine i bol se može pratiti procenom refleksne kontrakcije abdominalnih mišća. Merenje refleksnih kontrakcija abdominalnih mišića sa bolom izazvanim kolorektalnom distenzijom kod pacova je suštinski izvedeno kao Što je opisano u Fioramonti et al. Neurogastroenterologv and Mobilit)' (2003) 15, 363-369 i Urban et al. J. of Pharmacology and Exp. Ther. (1999) 290. 207-213. Mužjacima Sprague Dawley pacova su hirurški implantirane elektromiografske (EMG) elektrode u kosi abdominalni mišić i ostavljeni da se oporave jednu nedelju, tokom koje su životinje aklimatizovane na rukovanje i delimično vezivanje da bi se minimizovali efekti stresa. Bazalna EMG merenja su sakupljena i registrovana nakon umetanja u rektum (8 cm) balona od lateksa ovlaženog sa lubrikantom povezanom sa monitorom/regulatorom pritiska da bi se regulisao pritisak u koracima između 20. 40, i 60 mm Hg u toku 20 sekundi sa periodom mirovanja od 3 minuta između testova. Set od tri izlaganja svakom pritisku je registrovan pre povećavanja pritiska na sledeći nivo. Podaci su sakupljeni kao površina pod krivom za EMG očitavanje (uvolti po sekundi) tokom stimulacija pritiskom, i određena je srednja vrednost tri testa. Test jedinjenje (prolek) je oralno doziran unutar opsega od 1.5 do 17 mg/kg 90 minuta pre početka kolorektalne distenzije. Statistička značajnost je definisana kao p vrednost < 0.05 u analizi kovarijanse praćene sa Dunnett-ovim post hoc testom. Tabela 3 u nastavku obezbeđuje statistički značajne rezultate za Primer 10 suštinski izveden kao prethodno. Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja unutar obima ovog pronalaska korisni medikamenti za stanja visceralnog bola.
Reverzija hiperlokomotorne aktivnosti indukovane fenciklidinom (PCP) kod pacova
[0135]Primena antagonista NMDA receptora. kao što je ketamin ili fenciklidin (PCP), proizvodi psihotomimetički-slićne efekte kod ljudi koji su slični onim simptomima uočenim kod pacijenata sa šizofrenijom. Sposobnost agenasa da izvrše reverziju lokomotorno-stimulišućih efekata NMDA antagonista često je korišćena kao životinjski model psihoze, pokazujući dobru prediktivnu vrednost za otkrivanje kliničke efikasnosti medikamenata za šizofreniju i bipolarni poremećaj.
[0136]Motorna aktivnost je praćena postavljanjem individualnih mužjaka. Sprague-Dawley (Harlan, Indianapolis, IN) pacova u providne, plastične kaveze slične kutiji za cipele dimenzija 45 x 25 x 20cm, sa 1 cm dubine drvenih čipova kao prostirke, i metalnom rešetkom na vrhu kaveza. Motorni monitori (Kinder Scientific) sastoje se od pravougaonog rafa sa 12 fotozraka raspoređenih u 8 x 4 formaciji, (ili grupama visoke gustine sa 22 u obrascu 15x7) na visini od 5 cm, sa drugim rafom (za merenje ponašanja oporavka) na visini od 15 cm. Kavez sličan kutiji za cipele stavljen je u ove rafove, sa rafovima na stolu visokom 3 stope u izolovanoj sobi. Jedinjenje pronalaska (aktivno) je dozirano (intraperitonealni put) u opsegu od 0.3-10 mg/kg, 30 minuta pre izlaganja dozi od 5 mg/kg fenciklidina (PCP). Jedinjenje pronalaska (prolek) je oralno dozirano u opsegu od 0.3 - 30 mg/kg, kod pacova izgladnjivanih preko noći, 4 časa pre izlaganja dozi od 5 mg/kg PCP. Na dan testa, pacovi su stavljeni u test kavez i ostavljeni da se aklimatizuju 30 minuta pre izlaganja PCP; pacovi su praćeni dodatnih 60 minuta nakon primene PCP.
[0137]Analiza podataka i izračunavanja EDjoizvedena su korišćenjem GraphPad Prism (San Diego, CA. USA). Analize snage odredile su da je potrebno 8-10 pacova po grupi da bi se ispunili statistički uslovi za detektovanje promena u tretmanu (snaga= 0.8). Jednofaktorska analiza varijanse (ANOVA) sa post-hoc Dunnett-ovim testom višestrukih poređenja izvedena je na ukupno 60 minuta lokomotorne aktivnosti. Izračunavanja ED50izvedena su korišćenjem fitovanja nelinearne regresione krive na procenat reverzije transformisanih podataka za svaku dozu.
[0138]Primer 2 je meren u ovom testu izvedenom suštinski kao prethodno da ima ED50od 1.46 mg/kg (i.p.). Primeri 5 i 6 su mereni u ovom testu suštinski izvedenom kao prethodno da ima 2.95 mg/kg (p.o.) i 4.31 mg/kg (p.o.), respektivno. Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja unutar obima ovog pronalaska korisni medikamenti za Šizofreniju i bipolarni poremećaj.
Ublažavanje stresom indukovane hipertermije kod pacova
[0139| Hipertermija, povećanje telesne temperature, je opšti fenomen koji je pouzdano pokazan kod mnogih sisara, uključujući čoveka, kao odgovor na stres. Kod mnogih anksioznih poremećaja, hipertermija se javlja kao deo patologije i smatra se simptomom bolesti. Smatra se da su jedinjenja koja ublažavaju stresom indukovanu hipertermiju kod životinja korisna u tretmanu anksioznih poremećaja kod ljudi. Generalizovani anksiozni poremećaji i post traumatski stresni poremećaj su među poremećajima koji se mogu tretirati takvim jedinjenjima. Konvencionalni i minimalno invazivni postupak za analizu stresom indukovane hipertermije je merenje telesne temperature, i stresom izazvanih povećanja telesne temperature, preko rektalnog termometra. Testirani su mužjaci Fischer F-344 pacova (Harlan, Jndianapolis, IN, USA) težine između 275 - 350 g. Sve životinje su pojedinačno smeštene sa hranom i automatizovanim dopremanjem vode ad libitum, i održavani su na 12 č svetio/tama ciklusu (svetio uključeno od 06:00). Životinje su gladovale oko 12-18 časova pre eksperimenta, koji je izveden tokom svetle faze. Pacovi su dozirani intraperitonealno (IP) u doznoj zapremini od 1 mL/kg sa jedinjenjima pronalaska u opsegu od 0.3, 1. 3. i 10. mg/kg. Nosač je fiziološki rastvor + NaOH dodat da bi se postigla pH od 5-7. mGluR.5 antagonist MTEP (3-[(2-metil-l ,3-tiazol-4-il)etinil]piridin), koji je pokazao robusnu aktivnost sličnu anksiolitiku u prekliničkim modelima, korišćen je za poređenje (5 mg/kg, IP put. rastvoren u vodi). Neposredno nakon doziranja, pacovi su vraćeni u njihove kaveze, i eksperimentalor gasi svetla i napušta prostoriju. Prostorija za doziranje je u tami tokom ostatka od 1- č perioda pretremana.
|0140]Nakon perioda pretretmana. pacovi su pojedinačno preneti u jako osvetljenu susednu prostoriju gde su određene bazalne telesne temperature preko umetanja rektalne probe ovlažene sa mineralnim uljem kao lubrikantom. Temperatura tela je procenjena korišćenjem PHYSITEMP BAT-12® Microprobe Thermometer sa PHYSITEMP RET-2® rektalne probe za pacove (Physitemp Instruments Inc., Clifton, NJ, USA). Proba je umetnuta oko 2 u rektum, da bi se izmerila duboka telesna temperatura (ovo je bazalna telesna temperatura. TI. u stepenima Celzijusa). Deset minuta kasnije registrovano je drugo merenje temperature (T2). Razlika u telesnoj temperaturu (T2 - TI) definisan je kao stresom indukovani hipertermički odgovor. Doza na kojoj jedinjenje pronalaska proizvodi 35% smanjenje u stresom
inđukovanom hipertermičkom odgovoru, u odnosu na odgovor sa nosačem, definisana je kao T35 doza.
[0141]Primer 2 je meren u ovom testu suštinski izvedenom kao prethodno da ima T35 od 0.57 mg/kg. Primer 5 je meren u ovom testu suštinski izvedenom kao prethodno da ima T35 od 6.4 mg/kg. Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja unutar obima pronalaska korisni medikamenti za anksiozne poremećaje. Specifičnije, jedinjenja unutar obima ovog pronalaska mogu biti korisni medikamenti za generalizovani anksiozni poremećaj i/ili postraumatski stresni poremećaj.
In Vi troskrining inhibicije PepTl GlvSar i određivanje ICjo
(0142]PepTl testovi su ustanovljeni da bi se ispitala sposobnost prolekova da interaguju sa intestinalnim apsorpcionim transporterom PepTl.
[0143]HeLa ćelije, izvedene iz humanih creva. (American Type Culture Collection) uzgajane su u Hyclone Medium (Invitrogen, Cat# SH30243) koji sadrži 10% fetalni goveđi serum (FBS), 0.1 mM neesencijalne aminokiseline (NEAA), i 100 jedinica/mL penicilina sa 100 ug/mL streptomicina na 37°C u 5% CO2humidifikovanoj atmosferi. Celijska linija je koiršćena do 40 pasaža i zatim je odbačena. Zamrznute ćelije u 1 ml vijalicama su odmrzavane u vodenom kupatilu 1-2 minuta i dodate u 5 mL ćelijskog medij uma na 37°C. Svaka od T-boca je imala 8.5 mL svežeg medijuma i 1.5 mL ćelijskog stoka. Ćelije su pasažirane dva puta nedeljno. Ovo je postignuto ispiranjem boca sa 10 mL fosfatno puferovane slani rastvor-etilen diamintetrasirćetne kiseline (PBS-EDTA), sa dodavanjem 2 mL tripsina 2-5 minuta, da bi se odvojile ćelije, i dodavanjem 8 mL svežeg medijuma da bi se inhibirala dalja aktivnost tripsina. U svakoj novoj boci dodata je kombinacija 8.5 mL svežeg medijuma i 1.5 mL ćelijskog stoka, da bi se dobilo ćelijsko razblaženje 1:6. Ćelije su inkubirane na 37°C, do njihove spremnosti za studiju preuzimanja.
[0144]Ćelije koje su 70-80% konfluentne u T-bocama postavljene su na ploče 1 dan pre procedure transfekcijc. Boca sa ćelijskim stokom tretirana je sa PBS-EDTA i tripsinom da bi se odvojile ćelije, i korišćen je transfekcioni medijum od ove tačke nadalje. Transfekcioni medijum se sastoji od Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) + NEAA. Svakoj komorici, dodato je 0.5 mL ćelijske smeše (1.3xl0<?>je željena koncentracija ćelija) i ćelije su inkubirane na 37°C preko noći. Dvadeset četiri časa pre testa, ćelije su transficirane sa PEPTL Transfekciona smeša je pripremljena mešanjem 600 uL transfekcionog medijuma bez seruma. 18 uL FuGene6 (Roche Diagnostics). i 11 ug PepTl DNK. Kompleks transfekcioni reagens-DNK je inkubiran 20 minula i 24 uL kompleksa reagens-DNK je dodato u svaku komoricu.
[0145]Inhibicija PEPT1-posredovane [glicil-l-2-14C]glicilsarkozin (GlySar) aktivnosti preuzimanja merena je u ćelijama kultivisanim u 24-komornim pločama 24-časa nakon transfekcije kao što je prethodno objavljeno (Zhang et al. 2004. J. Pharm. Exper Ther. 310:437-445). Da bi se merila sposobnost jedinjenja pronalaska da inhibira preuzimanje [,<4>C]Gly-Sar, prolekovi su inkubirani sa 80 do 90% konfluentnih PepTl prolazno transficiranih HeLa ćelija na 5 mM u pH 6.0 medijumu za preuzimanje u prisustvu 5 uM [<M>C]Gly-Sar (Moravek Biochemicals) i 20 uM hladnog Glv-Sar. Medijum za preuzimanje sastoji se od 140 mM NaCl, 5.4 mM KC1, 1.8 mM CaCb, 0.8 mM MgSCM. 5 mM glukoze, 25 mM tris(hidroksimetil)aminometan pufera (TRIS). Rastvor je zatim doveden do pH 6.0 korišćenjem 2-(N-morfolino)etansulfonske kiseline. Inkubaciona zapremina je 500 uL i izvedena je na sobnoj temperaturi 3 minuta. Da bi se završilo preuzimanje na kraju vremena inkubacije, medijum za preuzimanje je aspiriran od ćelijskog monosloja i komorici je dodato 500 uL ledeno hladnog PBS. Ćelije su isprane 3 puta sa 500 uL PBS na sobnoj temperaturi bez Ca<+2>i Mg<+2>. Ćelije su zatim lizirane sa 300 uL 1% Triton XI00 H20 rastvora. 200 uL alikvota je uklonjeno i radioaktivnost je određena tečnim scintilaionim brojanjem da bi se izmerio [ I4C]Gly-Sar prisutan u svakoj inkubacionoj komorici. Kontrola bez inhibitora je ustanovljena i procenat inhibicije svakog proleka je izračunat u odnosu na ovu kontrolu. Negativna kontrola (Glicin) i dve pozitivne kontrole (cefadroksil i cefaleksin) paralelno su izvedene sa svakim eksperimentom da bi se pokazala vijabilnost test sistema. Prolekovi sa inhibicijom preuzimanja GlySar jednakom ili boljom od one kod cefaleksina smatrani su prihvatljivim. Srednje vrednosti ± standardna devijacija su 10.1 ±9.5% (n=19) za Glicin, 53.2 ± 13.2 % (n=19) za cefadroksil, i 37.5±14.7% (n=18) za cefaleksin.
[0146]Za PepT IC50test, prolekovi su inkubirani u opsegu koncentracija (0.0625 do 25 mM) u prisustvu 5 uM [<14>C]Gly-Sar i 20 uM hladnog Gly-Sar. Procedure inkubacije i uzorkovanja su identične kao za prethodno opisani skrining PepTl. Podaci za preuzimanje [<l4>C]Gly-Sar procenjeni su za svaku koncentraciju proleka i izračunate su IC50vrednosti. |0147]Primeri 5, 6, i 7 mereni su u ovom testu suštinski izvedenom kao prethodno da imaju inhibiciju preuzimanja hPepTl [3H]Gly-Sar na 5mM od 89%, 87%. i 78%, respektivno. Primeri 5 i 6 su mereni u ovom testu suštinski izvedenom kao prethodno da imaju IC50inhibicije preuzimanja hPepTl [3H]Gly-Sar od 1.98 mM i 0.25 mM, respektivno. Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja unutar obima ovog pronalaska oralno apsorbovana preko PepTl transportera.
hi Vi/ rotest intestinalne hidrolize proleka
(0148]Smrznuti homogenati humanog duodenuma (1:2 odnos tkivo:pufer korišćenjem 100 mM Tris fosfatnog pufera, pH 7.4) dobijeni su od CelsiusIn VitroTechnologies (Baltimore, MD) koji su bili oslobođeni i od fenilmetilsulfonilfluorida (PMSF) i od EDTA.
[0149]Svaka serija humanog duodenuma dobijena je od jednog donora i crevo je sastrugano i preseci su zasebno zamrznuti. Sve originalne kolekcije tkiva su izvedene na 4°C i odmah zamrznute na -70°C. Humani intestinalni homogenati su odmrznuti i razblaženi do finalne koncentracije proteina od 0.5 mg/mL u 100 mM PBS pufera, pH 7.4 neposredno pre inkubacija. |0150]Inkubacije su izvedene u 96-komornim pločama i svi prolekovi su puštani u duplikatu svakog dana. Stok rastvori proleka pripremljeni su u vodi na koncentraciji od 1 mM, 200 uL alikvota 0.5 mg/mL intestinalnog homogenata i 196 uL 100 mM PBS pufera su stavljeni u 96-komornu ploču u vodeno kupatilo na 37°C. Korišćenjem 96-komornog pipetora, 4 uL od 1 mM rastvora proleka je preneto u homogenat. Neposredno nakon dodavanja proleka (nulto vreme) i nakon 1 časa inkubacije, 50 uL uzoraka inkubacione smeše uklonjeno je korišćenjem potrošnog automatskog simultanog 96 komornog pipetora i direktno dodato u 200 uL rastvora ugašenog metanolom koji sadrži 100 ng/mL internog standarda. Uzorci su zatim centrifugirani na 3500 rpm 5 minuta na 10°C. Supematant (200 uL) je prenet u finalnu 96 komornu PCR ploču i hermetički zatvoren za analizu sa LC/MS/MS.
[0151]Koncentracije hidrolizovanog aktivnog metabolita u inkubacionim smešama određene su korišćenjem LC/MS/MS detekcije na Sciex API 4000 quadrapole masenog spektrometra sa Analvst verzijom 1.4.2. TurboIonSpray, pozitivne jonizacije i Selected Reaction Monitoring (SRM). Waters Atlantis® T3 (20 x 2.1 mm, 5 uM) HPLC kolona je korišćena na temperaturi sredine sa stopom protoka od 1.0 mL/min i gradijentom mobilne faze od 0.1% mobilne faze A do 99% mobilne faze A. Mobilna faza A je 1000:5 voda: heptafluorobuterna kiselina i mobilna faza B je 1:1 metanohglacijalna sirćetna kiselina.
[0152]Koncentracije hidrolizovanog aktivnog metabolita u intestinalnim inkubacionim smešama određene su preko standardnih krivih pripremljenih preko repliciranih dvostrukih razblaženja sa početkom od 10 uM u 100 mM PBS pH 7.4 i nakon toga su ugašene sa metanol-internim standardnim rastvorom identičnim sa uzorcima. Srednje vrednosti i standardne varijacije izračunate su korišćenjem Microsoft® Office Excel® 2007. Količina hidrolize je određena kao molarni procenat aktivnog metabolita formiranog u odnosu na dodalu koncentraciju proleka. Hidroliza pozitivne kontrole. Interni Prolek A prema Internom Aktivnom Metabolitu Leka A, izvedena u svakoj seriji u prošeku je bila 75.3% (n=20). Finalne vrednosti su zatim normalizovane u odnosu na formiranje Internog Aktivnog Metabolita Leka A.
[0153]Primeri 5. 6, i 7 su mereni u ovom testu izvedenom suštinski kao prethodno da imaju humanu intestinalu hidrolizu u odnosu na Interni Prolek A od 36% (n=3, SD = 2.7), 44%
(n=3, SD = 4.1), i 34% (n=l), respektivno. Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja unutar obima ovoga pronalaska hidrolizovana u humanim crevima.
In Vitrotest hidrolize S-9 homogenata humane jetre
[0154]S9 frakcije jetre dobijene su od Xenotech LLC (Lenexa, MO). Serija je iz pula dva donora, jednog muškog i jednog ženskog. S9 frakcija jetre je pripremljena i razblažena korišćenjem homogenizacionog pufera koji se sastoji od 50mM Tris, pli 7.4 na 4°C i 150mM kalijum hlorida bez EDTA. Prolekovi su inkubirani u homogenatu jetre 2 časa na 37°C, nakon čega je koncentracija aktivnog metabolita određena sa LC/MS/MS. Hidroliza Clopidogrel đo Clopidogrel karboksilne kiseline je korišćena kao pozitivna kontrola testa.
[0155]Inkubacije su izvedene u 96-komornom formatu i svi prolekovi su rađeni u duplikatu svakog dana. Stok rastvori proleka pripremljeni su u vodi sa koncentracijom od 1 mM. S9 frakcija humane jetre je razblažena do finalne koncentracije proteina od 0.5mg/ml u lOOmM PBS pufera, pH 7.4. |0156]200 uL alikvota od 0.5mg/mL S-9 homogenata humane jetre i 196 uL lOOmM PBS pufera je stavljeno u 96-komomu ploču u vodeno kupatilo na 37°C. Korišćenjem 96-komornog pipetora, 4 uL od 1 mM rastvora proleka je preneto u homogenat. Da bi se osiguralo da hidroliza nije nastala usled hemijske nestabilnosti, prolekovi su takođe inkubirani samo sa PBS puferom bez S-9 jetre. Neposredno nakon dodavanja proleka (nulto vreme) i nakon 1 časa inkubacije, 50 uL uzoraka inkubacione smeše je uklonjeno korišćenjem potrošnog automatskog simultanog 96-komornog pipetora i direktno dodato u 200 uL rastvora ugašenog metanolom koji sadrži 100 ng/mL internog standarda. Uzorci su zatim centrifugirani na 3500 rpm 5 minuta na 10°C. Supernatant (200 uL) je prenet u finalnu 96 komornu PCR ploču i zapečaćen za analizu sa LC/MS/MS. |0157]LC/MS/MS kvantifikacija aktivnog metabolita formiranog tokom inkubacije je izvedena na Sciex API 4000, Analvst verzija 1.4.2. TurbolonSprav. pozitivna jonizacija, i Selected Reaction Monitoring (SRM). Korišćena HPLC kolona je Waters Atlantis® T3 (20 x
2.1 mm, 5um) na temperaturi sredine sa stopom protoka mobilne faze od 1.0 mL/min. Mobilna faza A je 1000:5 voda: heptafluorobuterna kiselina i mobilna faza B je 1:1 metanol/ glacijalna sirćetna kiselina. Gradijent mobilne faze je korišćen sa početkom odnosa mobilne faze A/B od 99.9/ 0.1 i završavajući na 1/99.
[0158)Koncentracije hidrolizovanog aktivnog metabolita u inkubacionim smešama su određene preko standardnih krivi pripremljenih replikacijom dvostrukih razblaženja sa početkom na 10 uM u 100 mM PBS pH 7.4 i nakon toga ugašene sa metanolskim internim standardnim rastvorom identičnim sa uzorcima. Srednje vrednosti i standardne devijacije su izračunate korišćenjem Microsoft® Office Excel® 2007. Finalne vrednosti su predstavljene kao molarni procenat aktivnog metabolita formiranog u odnosu na dodatu koncentraciju proleka. Hidroliza Clopidogrel do Clopidogrel karboksilne kiseline je korišćena kao pozitivna kontrola i prosečno je bila 73.0% (n=27).
[0159]Primeri 8 i 9 su mereni u istom testu izvedenom suštinski kao prethodno da imaju hidrolizu S9 jetre ođ 23% i 59.3%, respektivno. Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja unutar obima ovog pronalaska hidrolizovana u humanoj jetri.
[0160]Podaci pokazuju da aminokiselinski prolekovi dati primerima inhibiraju preuzimanje PepT 1 supstrata GlvSar isto ili bolje od cefadroksila i cefaleksina (Zhang et al, 2004. JPET 310:437-445), što sugeriše potencijal za humanu oralnu apsorpciju preko PepTl transportera. Pored apsorpcije proleka, nakon ulaska u telo, esencijalna je hidroliza proleka da bi se dobio aktivni metabolit. Sadašnjein vitrostudije hidrolize sugerišu da se aminokiselinski prolekovi dati primerima mogu hidrolizovati u humanom crevu. Hidroliza diestarskih prolekova datih u primerima dešava se u homogenatima humane jetre što sugeriše potencijal diestarskih prolekova datih u primerima da imaju hidrolizu kod ljudi nakon oralnog izlaganja. Zajedno ovi podaci ukazuju na potencijal aminokiselinskih prolekova datih u primerima da budu hidrolizovani u ljudima da bi oslobodili aktivni metaboliti.
Farmakokinetički test
[0161]Izgladnjivanim, mužjacima Sprague Dawley pacova intravenski je primenjen Primer 2 sa 1 mg/kg ili Primer 5 preko oralne gavaže sa dozom od 7.5 mg/kg (što je jednako 5 mg/kg molarnog ekvivalenata Primera 2) u standardnom unakrsnom dizajnu (N=3 pri čemu svaki pacov prima i intravensku i oralnu dozu). Za intravensku primenu, Primer 2 je rastvoren u vodi i za oralnu dozu Primer 5 je pripremljen u vodenom nosaču hidroksietilceluloze (1%). polisorbata 80 (0.25%>) i sredstva protiv penušanja 1510-US (0.05%). Kanile su hirurški implantirane da bi olakšale serijsko sakupljanje krvi. Krv je sakupljena u EDTA epruvetama tokom perioda od 0-24 časa nakon doziranja, centri fugi rana i plazma je smrznuta uskladištena do vremena analize. [0162jUzorci plazme su ođmrznuti, 50 uL alikvote su prenete na 96-komomu ploču, dodato je 50 uL internog standardnog rastvora, i uzorci su pomešani. Zatim je dodato tri stotine uL, uzorci su vorteksovani 3 minuta i centrifugirani. 300 uL alikvota supernatanta je preneto na posebnu ploču i uparavano pod azotom na 40 stepeni C. Ostatak je rekonstituisan u 100 uL 0.5 % heptafluorobuterne kiseline u vodi, vorteksovan, i centrifugiran. 20 uL alikvota je nakon toga analizirana sa LC/MS/MS korišćenjem Shimadzu autosamplera i HPLC sistema sa interfejsom AB Sciex 4000 masenog spektrometra pod pozitivnim jonskim turbosprej modom. MS/MS tranzicije su 283.2->44.2 amu za prolek Primera 5 i 212.1->103.1 amu za aktivni Primer 2. Korišćena je Atlantis T3. 50 x 2.1 mm, 5 mikronska HPLC kolona sa stopom protoka mobilne faze od 1.0 mL/minut i binarnom mobilnom fazom od (A) 0.2% mravlje kiseline u vodi i (B) acetonitril-voda (1 :l,v/v) i gradijent od 2% B do 98% B tokom 0.8 minuta. Retenciono vreme Primera 2 je oko 0.53 minuta.
[0163]Farmakokinetički parametri su izračunati iz podataka za koncentraciju u plazmi korišćenjem Watson za Windows (Thermo Scientific). Relativna oralna bioraspoloživost je određena poređenjem površine pod krivom plazma koncentracije u odnosu na vreme (AUC) aktivnog Primera 2 nakon intravenske primerne sa AUC aktivnog metabolita nakon oralne primene proleka Primera 5.
[0164]Uspešan prolek mora biti i dobro apsorbovan nakon oralne primene i nakon toga hidrolizovan da bi oslobodio aktivni metabolit u sistemsku cirkulaciju. Relativna bioraspoloživost uključuje i parametre preko poređenja AUC aktivnog metabolita nakon oralne primene proleka sa AUC aktivnog metabolita nakon intravenske primene aktivnog jedinjenja. Kod mužajaka pacova, relativna bioraspoloživost aktivnog metabolita nakon oralne primene proleka Primera 5 kao što je merena u ovom testu suštinski izvedenom kao prethodno je 60 ± 14% (srednja vrednost ± standardna devijacija) pokazuje da prolek Primera 5 je i dobro apsorbovan i ekstenzivno hidrolizovan da bi se dobio aktivni metabolit in vivo.

Claims (27)

1. Jedinjenje Formule I gde R<1>je vodonik, R2 je vodonik, i R3 je vodonik; R<!>je vodonik, R2 je (25)-2-aminopropanoil, i R<3>je vodonik; R<1>je vodonik, R2 je (25)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoil, i R3 je vodonik; R<1>je vodonik, R2 je 2-aminoacetil, i RJ je vodonik; R<1>je benzil, R2 je vodonik i R3 je benzil; ili R<1>je (2-fluorofenil)metil, R2 je vodonik, i R<3>je (2-fluorofenil)metil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je(7,S.2.S',5i?,rjtS)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilna kiselina, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je hidrohlorid (lS,2S,5R,6S)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline.
4.Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je (j'S',2»S,5/?,65')-2-[[(2S')-2-aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikaiboksilna kiselina, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je hidrohlorid( lSJS, 5R, 6S)- 2-[[( 2S)- 2-aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline.
6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je dihidrat(75, 2S.<5>R, 6S)- 2-[[( 2S)- 2-aminopropanoil]amino]spiro[biciklo[3.1 .0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline.
7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je{ 1S, 2S. 5R, 6S)- 2-[ [(2,S')-2-aminopropanoil]aminojspiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2.6-dikarboksilna kiselina; 1,4-dioksan (1: 0.5); hidrohlorid.
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je (/5,2.S,5/?,6iST)-2-[[(25r)-2-amino-4-metilsulfanil-butanoil]amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilna kiselina, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je hidrohlorid( IS, 2S, 5R, đ.Sr)-2-[[(25')-2-amino-4-metilsulfanil-butanoil]aminoJspiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilne kiseline.
10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je{/>S'.25',5/?,(5lS,)-2-[(2-aminoacetil)amino]spirofbiciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilna kiselina, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je hidrohlorid( IS, 2S, 5R, 6S)- 2-[( 2-aminoacetiI)amino]spiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,l '-ciklopropan]-2,6-đikarboksilne kiseline.
12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je dibenzil(/5,25,5<y>?,65)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je dibenzil(75, 2S.<5>R. <55)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4,r-ciklopropan]-2,6-dikarboksilat; 1.4-dioksan; hidrohlorid.
14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je bis[(2-fluorofcnil)metil](75,25,5/?,o'.S)-2-aminospiro[biciklo[3.1.0]heksan-4.r-ciklopropan]-2.6-dikarboksilat, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu l koje je hidrohlorid bis[(2-fluorofenil)metil] (/1S',2.S',5/?.6.S')-2-aminospiro[biciklo[3.1.0jheksan-4.1 '-ciklopropan]-2.6-dikarboksilata.
16. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač, ili ekscipijent.
17. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 za upotrebu u terapiji.
18. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 za upotrebu u tretmanu neurološkog poremećaja izabranog iz grupe koja se sastoji od perzistentnog bola, neuropatskog bola, hroničnog inflamatornog bola, i visceralnog bola.
19. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 18. gde je neurološki poremećaj perzistentni bol.
20. Jedinjnje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 18, gde je neurološki poremećaj neurološki bol.
21. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 18, gde je neurološki poremećaj hronični inflamatorni bol.
22. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 18, gde je neurološki poremećaj visceralni bol.
23. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 za upotrebu u lečenju psihijatrijskog poremećaja izabranog iz grupe koja se sastoji od šizofrenije, bipolarnog poremećaja, generalizovanog anksioznog poremećaja i post traumatskog stresnog poremećaja.
24. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 23. gde je psihijatrijski poremećaj šizofrenija.
25. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 23. gde je psihijatrijski poremećaj bipolarni poremećaj.
26. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 23, gde je psihijatrijski poremećaj generalizovani anksiozni poremećaj.
27. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 23. gde je psihijatrijski poremećaj je post traumatski stresni poremećaj.
RS20160611A 2012-02-01 2013-01-29 Agonisti mglu 2/3 RS54976B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP12382038 2012-02-01
US201261619139P 2012-04-02 2012-04-02
EP13702872.6A EP2809647B1 (en) 2012-02-01 2013-01-29 Mglu 2/3 agonists
PCT/US2013/023529 WO2013116174A1 (en) 2012-02-01 2013-01-29 Mglu 2/3 agonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS54976B1 true RS54976B1 (sr) 2016-11-30

Family

ID=48870759

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20160611A RS54976B1 (sr) 2012-02-01 2013-01-29 Agonisti mglu 2/3

Country Status (35)

Country Link
US (1) US8575214B2 (sr)
EP (1) EP2809647B1 (sr)
JP (1) JP5755821B2 (sr)
KR (1) KR101518365B1 (sr)
CN (1) CN104093703B (sr)
AP (1) AP2014007821A0 (sr)
AR (1) AR089718A1 (sr)
AU (1) AU2013215396B2 (sr)
BR (1) BR112014018760A8 (sr)
CA (1) CA2863085C (sr)
CL (1) CL2014001928A1 (sr)
CO (1) CO7020921A2 (sr)
CR (1) CR20140344A (sr)
DK (1) DK2809647T3 (sr)
DO (1) DOP2014000179A (sr)
EA (1) EA023678B1 (sr)
ES (1) ES2592166T3 (sr)
GT (1) GT201400168A (sr)
HK (1) HK1199014A1 (sr)
HR (1) HRP20160867T1 (sr)
HU (1) HUE028863T2 (sr)
IL (1) IL233732A0 (sr)
LT (1) LT2809647T (sr)
MA (1) MA35884B1 (sr)
MX (1) MX355779B (sr)
NZ (1) NZ626456A (sr)
PE (1) PE20141680A1 (sr)
PH (1) PH12014501725A1 (sr)
PL (1) PL2809647T3 (sr)
PT (1) PT2809647T (sr)
RS (1) RS54976B1 (sr)
SG (1) SG11201404138VA (sr)
SI (1) SI2809647T1 (sr)
TW (1) TW201343610A (sr)
WO (1) WO2013116174A1 (sr)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101481164B1 (ko) * 2008-01-30 2015-01-09 주식회사 미래셀바이오 체세포 유래 다능성 줄기세포의 제조 방법

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9605429D0 (en) * 1995-11-16 1996-05-15 Lilly Co Eli Excitatory amino acid receptor antagonists
IL124487A (en) 1995-11-16 2001-01-11 Lilly Co Eli Excitatory amino acid derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
ZA983930B (en) 1997-05-14 1999-11-08 Lilly Co Eli Excitatory amino acid receptor modulators.
KR100469182B1 (ko) * 1998-08-31 2005-02-02 다이쇼 세이야꾸 가부시끼가이샤 6-플루오로비시클로[3.1.0]헥산 유도체
GB2355982A (en) * 1999-11-03 2001-05-09 Lilly Co Eli Heterocyclic amino acids
US6770676B2 (en) * 2000-06-28 2004-08-03 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. Dicarboxylic acid derivatives
HUP0400620A3 (en) 2001-01-11 2012-09-28 Lilly Co Eli Prodrugs of excitatory amino acids and pharmaceutical compositions containing them and process for preparation the compounds
US7038077B2 (en) 2001-01-11 2006-05-02 Eli Lilly And Company Prodrugs of excitatory amino acids
KR20080058509A (ko) * 2002-06-11 2008-06-25 일라이 릴리 앤드 캄파니 흥분성 아미노산의 전구약물
PL1637517T3 (pl) 2003-06-26 2011-04-29 Taisho Pharmaceutical Co Ltd Pochodne estrowe kwasu 2-aminobicyklo[3.1.0]heksano-2,6-dikarboksylowego
AR079343A1 (es) * 2009-12-21 2012-01-18 Lilly Co Eli Compuesto de acido 2-amino-4-(4h-1,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxilico, composicion farmaceutica que lo comprende y su uso para preparar un medicamento util para tratar un trastorno psiquiatrico

Also Published As

Publication number Publication date
SI2809647T1 (sl) 2016-08-31
TW201343610A (zh) 2013-11-01
GT201400168A (es) 2015-08-27
PE20141680A1 (es) 2014-11-08
AU2013215396A8 (en) 2014-08-07
DOP2014000179A (es) 2014-10-15
SG11201404138VA (en) 2014-08-28
CO7020921A2 (es) 2014-08-11
NZ626456A (en) 2016-02-26
IL233732A0 (en) 2014-09-30
BR112014018760A2 (sr) 2017-06-20
ES2592166T3 (es) 2016-11-28
PL2809647T3 (pl) 2017-07-31
MX355779B (es) 2018-04-30
JP2015512870A (ja) 2015-04-30
HUE028863T2 (en) 2017-01-30
MX2014008598A (es) 2014-08-22
WO2013116174A1 (en) 2013-08-08
AP2014007821A0 (en) 2014-07-31
AR089718A1 (es) 2014-09-10
CN104093703A (zh) 2014-10-08
CR20140344A (es) 2014-08-25
CN104093703B (zh) 2016-01-20
JP5755821B2 (ja) 2015-07-29
CA2863085C (en) 2015-11-17
HRP20160867T1 (hr) 2016-10-07
PH12014501725A1 (en) 2014-11-24
HK1199014A1 (en) 2015-06-19
CL2014001928A1 (es) 2014-11-07
EA201491291A1 (ru) 2014-10-30
CA2863085A1 (en) 2013-08-08
EP2809647A1 (en) 2014-12-10
KR20140107658A (ko) 2014-09-04
MA35884B1 (fr) 2014-12-01
US20130197079A1 (en) 2013-08-01
DK2809647T3 (en) 2016-10-03
KR101518365B1 (ko) 2015-05-08
US8575214B2 (en) 2013-11-05
PT2809647T (pt) 2016-08-29
EA023678B1 (ru) 2016-06-30
LT2809647T (lt) 2016-10-10
AU2013215396B2 (en) 2015-03-12
AU2013215396A1 (en) 2014-07-17
EP2809647B1 (en) 2016-07-06
BR112014018760A8 (pt) 2017-07-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9675571B2 (en) Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO)
US20110275635A1 (en) Small molecule inhibitors of nads, namnat, and nmnat
UA125523C2 (uk) Інгібітори magl
AU2020282975B2 (en) Macrocyclic broad spectrum antibiotics
CA2957046A1 (en) Optionally fused heterocyclyl-substituted derivatives of pyrimidine useful for the treatment of inflammatory, metabolic, oncologic and autoimmune diseases
BR112021005044A2 (pt) compostos antibacterianos
US8318184B2 (en) MGLU2 agonists
KR20180021820A (ko) Ido 억제제
JP2024523020A (ja) Ｃｄｋキナーゼ阻害剤として使用される化合物およびその応用
CA2818116C (en) 4-substituted-3-phenylsulfanylmethyl-bicyclo[3.1.0]hexane antagonists of mglur 2/3 useful in the treatment of depressive disorders and sleep disorders
RS54976B1 (sr) Agonisti mglu 2/3
CA3094939A1 (en) Dipeptide piperidine derivatives
CN118772107B (zh) Hdac抑制剂及其用途
EP3883938A1 (en) Inhibitors of arginase
US12617788B2 (en) Bridged bicyclic compounds as BTK inhibitors
RU2772274C2 (ru) Селективные ингибиторы hdac6, способ их получения и их применение
WO2022037684A1 (en) Compositions and methods for treating systemic lupus erythematosus
WO2020130119A1 (ja) Ｗｎｔシグナル伝達経路阻害剤
EP1873154A1 (en) PYRAZOLO[1,5-a]PYRIDINE DERIVATIVE OR MEDICALLY ACCEPTABLE SALT THEREOF
HK1113678A (en) Pyrazolo[1,5-a]pyridine derivative or medically acceptable salt thereof