RS54987B1 - Lečenje osteoporoze - Google Patents

Description

Polje pronalaska

[0001]Ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenja za upotrebu u lečenju osteoporoze i osteopenije, i kombinacije koje obuhvataju pomenuta jedinjenja.

[0002]Osteoporoza je bolest kostiju koja vodi ka povećanom riziku od preloma. Kod osteoporoze gustina minerala u kosti (BMD) je smanjena, mikroarhitektura je poremećena, a količina i varijacija ne-kolagenih proteina u kosti je povišena. Te World Healt Organization definiše osteoporozu (kod žena) kao 2.5 standardne devijacije gustine minerala u kosti ispod pika koštane mase (30-godišnji prošek zdrave ženske osobe). Osteoporoza je najčešća kod žena nakon menopauze, kada se zove postmenopauzalna osteoporoza, ali se takođe može razviti i kod muškaraca, a može se pojaviti kod bilo koga u prisustvu određenih hormonalnih poremećaja i drugih hroničnih bolesti ili kao rezultat lečenja, naročito glukokortikoidima, kada se bolest naziva steroid- ili glukokortikoid-indukovana osteoporoza i kao rezultat stanja nutricionalne deficijencije i drugih metaboličkih poremećaja, koji uključuju, ali nisu ograničeni na, hiponatremiju ili kao sekundarne posledice kancera. S obzirom na njen uticaj na rizik od nestabilnog preloma, osteoporoza može značajno uticati na životni vek i kvalitet života.

[0003]Osteopenija je stanje u kojem je gustina minerala u kosti niža od normalne. Mnogi lekari je smatraju prekursorom osteoporoze. Određenije, osteopenija se definiše kao T-zbir gustine minerala u kosti između -1.0 i -2.5. Dalje, osteopenija može biti indukovana pod specifičnim uslovima kao što su dugoročno ležanje u krevetu ili produženo boravljenje u mikrogravitacionom okruženju, kao što je orbita blizu Zemlje ili svemirski let.

[0004]Osnovni mehanizam u svim slučajevima osteoporoze je neravnoteža između resorpcije kosti i stvaranja kosti. Kod normalne kosti, postoji stalno remodelovanje matrice kosti; do 10% ukupne koštane mase može biti podvrgnuto remodelovanju u bilo kom trenutku. Kost se resobuje od strane ćelija osteoklasta (koje su izvedene iz prekursorskih ćelija koštane srži). U postupku remodelovanja nova kost se deponuje od strane ćelija osteoblasta.

[0005]Tri glavna mehanizma kojim se osteoporoza razvija su: neadekvatan pik koštane mase (skelet razvija nedovoljno mase i snage tokom rasta), prekomerna resorpcija kosti i neadekvatno formiranje nove kosti tokom remodelovanja. Interakcija ova tri mehanizma u osnovi je razvoja krhkog koštanog tkiva. Hormonski faktori snažno određuju brzinu resorpcije kosti; nedostatak estrogena (na primer, kao rezultat menopauze) povećava resorpciju kosti kao i smanjenje deponovanja nove kosti koja se obično odvija u kostima koje služe za oslonac. Čini se da je a-oblik receptora estrogena najvažniji u regulisanju koštanog obrta. Pored estrogena, metabolizam kalcijuma igra značajnu ulogu u koštanom obrtu, a nedostatak kalcijuma i vitamina D dovodi do taloženja oštećenje kosti; pored toga, paratiroidne žlezde reaguju na niske nivoe kalcijuma sekrecijom paratiroidnog hormona, što povećava resorpciju kosti kako bi obezbedio dovoljno kalcijuma u krvi.

[0006]Osteoporoza može biti ograničena u obimu razvoja promenama u načinu života i lekovima; kod osoba sa osteoporozom, lečenje može da podrazumeva oba. Promena načina života podrazumeva adekvatnu uravnoteženu ishranu, preveniranje pada i vežbanje. Postojeći lekovi obuhvataju kalcijum, vitamin D, vitamin K, bisfosfonate, kalcitonin, teriparatid, ranelat stroncijum, hormonske zamene i selektivne modulatore estrogenskog receptora.

[0007]Kod potvrđene osteoporoze, biofosfonatni lekovi često su lečenje prve linije. Trenutno najčešće propisani biofosfonati su natrijum alendronat (Fosamax™) oralno, rizedronat (Actone ") oralno ili etidronat (Didronel™) oralno, ili ibandronat (Boniva™) oralno jednom dnevno ili jednom mesečno ili zolendronat (Zometa") jednom mesečno ili jednom godišnje intravenozno ili pamidronat (Aredia ") jednom mesečno ili 3-6 puta mesečno intravenozno. Oralni biofosfonati se relativno slabo apsorbuju, i stoga se moraju uzimati na prazan stomak, najmanje 30 minuta pre obroka/pića. Takođe su povezani sa oezofagitisom i stoga se teško tolerišu; nedeljno ili mesečno davanje povećava verovatnoću za oezofagitisom.

[0008]Međutim prekidanje doziranja intravenskih formulacija kao što su zolendronat umešano je u retku, ali neprijatnu bolest usta koja se naziva osteonekroza vilice.

[0009]Teriparatid ima ograničen vremenski tok za upotrebu u efikasnosti lečenja osteoporoze, ali u mnogim zemljama licenciran je samo za lečenje ako biofosfonati ne deluju ili su kontraindikovani; a mladi pacijenti ili oni sa pretodnom zračnom terapijom, ili Paget-ovom bolesti treba da izbegavaju ovaj lek.

[0010]Oralni stroncijum ranelat je alternativno oralno lečenje, predložen za stimulisanje proliferacije osteoblasta, kao i inhibiciju proliferacije osteoklasta. Međutim, on povećava rizik od venske tromboembolije tako da je manje pogodan za pacijente sa rizikom od tromboze iz različitih razloga. Takođe, stroncijum se ne srne uzimati sa hranom ili preparatima koji sadrže kalcijum kako kalcijum ulazi u kompeticiju sa stroncijumom tokom preuzimanja. Međutim, neophodno je da se kalcijum, magnezijum, i vitamin D u terapeutskoj kolilčini uzuimaju dnevno, ali ne u isto vreme kad i stroncijum.

[0011]Estrogen terapija ostaje dobro lečenje za prevenciju osteoporoze, ali ,u ovom trenutku, univerzalno se ne preporučuje ukoliko nema i drugih indikacija za njegovu upotrebu. Postoji nesigurnost i kontroverza oko toga da li estrogen treba da se preporučuje ženama u prvoj dekati nakon menopauze.

[0012]Stoga postoji potreba za novim lečenjem za osteoporozu i osteopeniju koje prevazilazi nedostatke u lečenjima koja su pretodno dostupna.

[0013]Neočekivano je nađeno da su određena naftohinonska jedinjenja sposobna da inhibiraju gubitak kosti i mogu obezbediti korisno lečenje za osteoporozu i/ili osteopeniju.

[0014]Atkins J G et al. 08/2009 opisuje ispitivanje sprovedeno na familiji vitamina K, pokazujući njihovu ulogu u metabolizmu kosti preko indukcije mineralizacije ljudskog osteoblastain vitroi kao potencijalnim terapeutskim agensima za bolesti skeleta.

[0015]Ovaj pronalazak je kako je opisan u zahtevima 1-13.

[0016]Referenca ovde korišćena za osteoporozu uzeta je tako da takođe uključuje reference za osteopeniju, osim ako nije drugačije naznačeno ili očigledno.

[0017]Ovde su opisane farmaceutske kompozicije koje obuhvataju Jedinjenje formule (I) sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. U daljem aspektu ovog pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata Jedinjenje formule (I) i njegov farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens, za lečenje osteoporoze i/ili osteopenije, i za upotrebu u kombinacijama kako je ovde opisano.

[0018]Izraz "kompozicija", kao u farmaceutska kompozicija, namenjen je da obuhvati proizvod koji obuhvata aktivni sastojak(e), i inertni sastojak(e) (farmaceutski prihvatljive ekscipijense) koji čine nosač, kao i bilo koji drugi proizvod koji rezultira, direktno ili indirektno, iz kombinacije, kompleksacije ili agregacije bilo koja dva ili više sastojaka, ili iz disocijacije jednog ili više sastojaka, ili iz drugih vrsta reakcija ili interakcija jednog ili više sastojaka. Shodno tome, farmaceutske kompozicije ovog pronalaska obuhvataju bilo koju kompoziciju pripremljenu mešanjem Jedinjenja formule (I), dodatnog aktivnog sastojka(a), i farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa. Pogodne farmaceutske kompozicije mogu se naći u, na primer, Remington The Science i Practice of Pharmacv, 19t ed., Mack Printing Companv, Easton, Pennsilvania (1995). Za parenteralno davanje, parenteralno prihvatljiv vodeni rastvor može se uključiti, koji je bez pirogena i ima potrebnu pH, izotoničnost, i stabilnost. Pogodni rastvori poznati su stručnjaku iz ove oblasti, sa brojnim postupcima koji su opisani u literaturi. Kratak pregled postupaka dostave leka takođe se može pronaći u npr, Langer, Science (1990) 249, 1527.

[0019]Referenca za jedinjenje formule (I) ima za cilj da uključi referencu za sve farmaceutski prihvatljive soli ili tautomere, ukoliko nije drugačije očigledno iz konteksta.

[0020]Shodno tome u svom najširem aspektu ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenja formule (I) ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so ili tautomer, za upotrebu u lečenju, i proizvodnji medikamenata za lečenje, osteoporoze i/ili osteopenije.

[0021]Izraz "farmaceutski prihvatljive soli" odnosi se na soli pripremljene od farmaceutski prihvatljivih netoksičnih baza koje uključuju neorganske baze i organske baze (na primer, uzimajući u obzir prisustvo supstituenta -CChR<3>prisutan u R<3>), ili soli pripremljene od farmaceutski prihvatljivih netoksičnih kiselina koje uključuju neorganske kiseline i organske kiseline (na primer, u slučaju gde je bazični supstituent prisutan u bilo kom odR<1>iliR<2>).

[0022]Soli izvedene od neorganskih baza uključuju aluminijum, amonijum, kalcijum, bakar, gvožđe, fero, litijum, magnezijum, kalijum, natrijum, cink, i slično. Soli izvedene od farmaceutski prihvatljivih organskih netoksičnih baza uključuju soli primarnih, sekundarnih i tercijarnih amina, supstituisanih amina koji uključuju prirodne supstituisane amine, ciklične amine, i bazne jonoizmenjivačke smole, kao što je arginin, betain, kafein, holin, N,N'-dibenziletilenediamin, dietilamin, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamin, etilenediamin, N-etilmorfolin, N-etilpiperidin, glukamin, glukozamin, histidin, izopropilamin, lizin, morfolin, piperazin, piperidin, poliaminske smole, prokain, purin, teobromin, trietilamin, trimetilamin, tripropilamin, i slično.

[0023]Soli izvedene od kiselina uključuju sirćetnu, benzensulfonsku, benzojevu, kamforsulfonsku, limunsku, etansulfonsku, fumarnu, glutaminsku, bromovodoničnu, hlorovodoničnu, izetionsku, mlečnu, maleinsku, bademovu, metanesulfonsku, azotnu, pamoičnu, pantotensku, fosfornu, ćilibarnu, sumpornu, vinsku, p-toluensulfonsku kiselinu, i slično.

[0024]Kako je prethodno pomenuto, formulom I takođe su obuhvaćeni bilo koji solvati jedinjenja i njihove soli. Poželjni solvati su solvati formirani inkorporiranjem u strukture čvrstog stanja (npr. kristalne strukture) jedinjenja ovog pronalaska molekula netoksičnog farmaceutski prihvatljivog rastvarača (koji se u nastavku odnosi na rastvarajući rastvarač). Primeri takvih rastvarača uključuju vodu, alkohole (kao što je etanol, izopropanol i butanol) i dimetilsulfoksid. Solvati mogu biti pripremljeni rekristalizacijom jedinjenja ovog pronalaska sa rastvaračem ili mešavinom rastvarača koja sadrži rastvarajući rastvarač. Bilo da je solvat formiran ili ne u bilo kojoj istanci mogu se odrediti podvrgavanjem kristalima jedinjena radi analize primenom dobro poznatih standardnih tehnika kao što je termogravimetrijska analiza (TGE), diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC) i kristalografija X-zraka.

[0025]Solvati mogu biti stehiometrijski ili nestehiometrijski solvati. Naročito poželjni solvati su hidrati, a pimeri hidrata uključuju hemihidrate, monohidrate i dihidrate.

[0026]Za detaljnije opise solvata i postupaka za njihovu pripremu i karakterizaciju, pogledati Bryn et al., Solid-State Chemistrv of Drugs, Second Edition, objavljeno od strane SSCI, Ine of West Lafavette, IN, USA, 1999, ISBN 0-967-06710-3.

[0027]Ovaj opis unutar svog obima takođe uključuje upotrebu prolekova jedinjenja formule (I). Uopšteno, takvi prolekovi su funkcionalani derivati jedinjenja formule (I) koji su lako konvertabilniin vivou željeno jedinjenje. Konvencionalni postupci za odabiri pripremanje pogodnih derivata prolekova dobro su poznati u stanju tehnike. Izraz "prolek" relevantnog jedinjenja formule I uključuje bilo koje jedinjenje koje se, nakon davanja (npr. oralnog ili parenteralnog davanja), metabolišein vivoradi formiranja tog jedinjenja u količini koja se može detektovati ekperimentima, i unutar prethodno određenog vremena (npr. unutar doznog intervala od između 6 i 24 sati (tj. jednom do četiri puta dnevno)).

[0028]Prolekovi jedinjenja formule I mogu biti pripremljeni modifikovanjem funkcionalne grupe prisutne na jedinjenju na takav način da su modifikacije pocepane,in vivokada se takav prolek daje subjektu koji je sisar. Modifikacije se obično postižu sintetisanjem roditeljskog jedinjenja sa supstituentom proleka. Prolekovi uključuju jedinjenja formule I u kojoj je hidroksil, amino, sulfhidril, karboksil ili karbonil grupa u Jedinjenju formule I vezana za bilo koju grupu koja može biti pocepanain vivoradi generisanja slobodne hidroksil, amino, sulfhidril, karboksil ili karbonil grupe, respektivno.

[0029]Pimeri prolekova uključuju, ali nisu ograničeni na, estre i karbamate hidroksil funkcionalnih grupa, estarske grupe karboksil funkcionalih grupa, N-acil derivate i N-Mannich bazu. Opšte informacije o prolekovima mogu se naći u npr. Bundegaard, H. "Design of Prodrugs" p. 1-92, Elsevier, New York-Oxford (1985).

[0030]U jednom aspektu prolek nije vitamin K. Ukoliko nije drugačije naznačeno, izraz "vitamin K" kako se ovde koristi odnosi se na vitamin Kii vitamin K2zajedno, a ne na veštačke analoge vitamina K.

[0031]Jedinjenja formule I mogu sadržati dvostruke veze i stoga mogu postojati kaoE ( entgegen)i Z( zusammen)geometrijski izomeri oko svake pojedinačne dvostruke veze. Svi takvi izomeri i njihove mešavine uključene su unutar obima ovog pronalaska.

[0032]Jedinjenja formule I mogu postojati kao regioizomeri i mogu takođe pokazivati tautomerizam. Svi tautomerni oblici i njihove mešavine uključeni su unutar obima ovog pronalaska.

[0033]Jedinjenja formule I mogu sadržati jedan ili više asimetričnih atoma ugljenika i mogu stoga pokazivati optički i/ili diastereoizomerizam. Diastereoizomeri mogu biti odvojeni upotrebom konvencionalnih tehnika, npr. hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom. Razni stereoizomeri mogu biti izolovani odvajanjem racemskih ili drugih mešavina jedinjenja upotrebom konvencionalnih, npr. frakciona kristalizacija ili HPLC, tehnika. Alternativno željeni optički izomeri mogu biti izrađeni reakcijom odgovarajućeg optički aktivnih početnih materijala pod uslovima koji neće prouzrokovati racemizaciju ili epimerizaciju (tj. postupak 'hiralnog bazena'), reakcijom odgovarajućeg početnog materijala sa 'hiralnim pomoćnim sredstvom' koje se može naknadno odstraniti u pogodnoj fazi, derivatizacijom (tj. re rastvara nje, koje uključuje dinamičko rerastvaranje), na primer sa homohiralnom kiselinom praćeno odvajanjem diastereomernih derivata konvencionalnim sredstvima kao što je hromatografija, ili reakcijom sa odgovarajućim hiralnim reagensom ili hiralnim katalistom svi pod uslovima poznatim stručnjaku iz ove oblasti. Svi stereoizomeri i njihove mešavine uključene su unutar obima ovog pronalaska.

[0034]Jedinjenje formule (I), ili farmaceutske kompozicije koje obuhvataju jedinjenje formule (I), za upotrebu pomenutu u gore pomenutim aspektima ovog pronalaska mogu biti primenjene u postupku medicinskog lečenja. Prema tome, ovde je opisan postupak za lečenje ili prevenciju osteoporoze i/ili osteopenije, koji postupak obuhvata davanje efektivne količine Jedinjenje formule (I), ili farmaceutske kompozicije koja obuhvata jedinjenje formule (I), pacijentu kome je takvo lečenje potrebno.

[0035]Lečenje osteoporoze/osteopenije kako je ovde opisano uključuje prevenciju koštanog gubitka, ili umanjivanje koštanog gubitka, ili stimulaciju rasta kosti, ili povećanja u gustini kostiju i takođe uključuje osteoporozu nastala neaktivnošću, na primer kod pacijenata koji su duže vreme u krevetu, onih koji su uslovima niske gravitacije i kod paraplegičara (npr. lečenje osteoporoze/osteopenija kako je ovde opisano uključuje prevenciju koštanog gubitka, ili umanjivanje koštanog gubitka, ili stimulaciju rasta kosti, ili povećanja u gustini kostiju. Ono uključuje osteoporozu nastalu neaktivnošću, na primer kod pacijenata koji su duže vreme u krevetu, onih koji su uslovima niske gravitacije i kod paraplegičara.)

[0036]Prema tome, u drugom aspektu ovaj pronalazak odnosi se na sledeće. (a) Jedinjenje formule (I), ili farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata Jedinjenje formule (I), kako je ovde ranije opisano, za upotrebu u prevenciji koštanog gubitka, umanjivanju koštanog gubitka, stimulisanju koštanog rasta, za proizvodnju povećanja u gustini kostiju i za lečenje ili prevenciju osteoporoze nastale neaktivnošću (npr. kod pacijenata koji su duže vreme u krevetu, kod onih u uslovima niske gravitacije i paraplegičara).

Ovde su opisani:

(b) Upotreba Jedinjenja formule (I), ili farmaceutske kompozicije koja obuhvata Jedinjenje formule (I), kako je ovde prethodno opisano, za pripremanje leka za prevenciju koštanog gubitka, umanjivanje koštanog gubitka, stimulisanje koštanog rasta, za proizvodnju povećanja u gustini kostiju i za lečenje ili prevenciju osteoporoze nastale neaktivnošću (npr. na primer kod pacijenata koji su duže vreme u krevetu, kod onih u uslovima niske gravitacije i paraplegičara). (c) Postupak za prevenciju koštanog gubitka, umanjivanje koštanog gubitka, stimulisanje koštanog rasta, za proizvodnju povećanja u gustini kostiju i za lečenje ili prevenciju osteoporoze nastale neaktivnošću (npr. na primer kod pacijenata koji su duže vreme u krevetu, kod onih u uslovima niske gravitacije i paraplegičara), koji postupak obuhvata davanje efektivne količine Jedinjenje formule (I), ili farmaceutske kompozicije koja obuhvata jedinjenje formule (I), pacijentu kome je takvo lečenje potrebno.

[0037]Ovaj opis odnosi se na upotreba jedinjenje formule (I), ili farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata Jedinjenje formule (I), u lečenju osteoporoze, koji uključuje upotrebu u prevenciji gubitka gustine kostiju, upotrebu u pripremanju lekova za takva lečenja i medicisnka lečenja u kojima se jedinjenje ovog pronalaska daje pojedincu kome je potrebno takvo lečenje.

[0038]U jednom aspektu jedinjenje formule (I), ili farmaceutska kompozicija koja obuhvata Jedinjenje formule (I), koristi se u prevenciji osteoporoze prevencijom smanjenja gustine kostiju, i koristi se u profilaksi. Lečenje se takođe može izvesti kod pacijenata koji već boluju od osteoporoze, kako bi se sprečilo ili smanjilo bilo koje smanjenje u gustini kostiju.

[0039]Prema tome, dalji aspekt ovog pronalaska odnosi se na sledeće.

(A) Jedinjenje formule (I), ili farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata Jedinjenje formule (I), kako je ovde prethodno opisano, za upotrebu u prevenciji ili lečenju osteoporoze i/ili osteopenije kod

pacijenta:

(a) preveniranjem smanjenja gustine kostiju kod pacijenta koji je podložan osteoporozi i/ili osteopeniji; ili (b) preveniranjem ili smanjivanjem bilo kod pada gustine kostiju kod pacijenta koji pati od

osteoporoze i/ili osteopenije.

Ovde su opisani:

(B) Upotreba Jedinjenja formule (I), ili farmaceutske kompozicije koja obuhvata Jedinjenje formule (I), kako je ovde prethodno opisano, za pripremanje leka za prevenciju ili lečenje osteoporoze i/ili

osteopenije kod pacijenta:

(a) preveniranjem smanjenja gustine kostiju kod pacijenta koji je podložan osteoporozi i/ili osteopeniji; ili (b) preveniranjem ili smanjivanjem bilo kod pada gustine kostiju kod pacijenta koji pati osteoporoze i/ili osteopenije.

(C) Postupak za prevenciju ili lečenje osteoporoze i/ili osteopenije kod pacijenta:

(a) preveniranjem smanjenja gustine kostiju kod pacijenta koji je podložan osteoporozi i/ili

osteopeniji; ili

(b) preveniranjem ili smanjivanjem bilo kod pada gustine kostiju kod pacijenta koji pati

osteoporoze i/ili osteopenije,

koji postupak obuhvata davanje efektivne količine Jedinjenje formule (I), ili farmaceutske kompozicije koja obuhvata jedinjenje formule (I), pacijentu kome je takvo lečenje potrebno.

[0040]U jednom aspektu ovde je opisana upotreba jedinjenja za pojedince koji imaju smanjenje nivoe hormona, na primer smanjene nivoe oestrogena kod žena, ili smanjene nivoe testosterona kod muškaraca, ili smanjene nivoe dehidroepiandrosterona [DHEA], u poređenju sa onim na kojima se održava normalna gustina kostiju. U jednom aspektu to su žene u post menupazi. U jednom aspektu to su odrasle jedinke starije od 50, 55, 60, 65 ili starije od 70 godina.

[0041]Prema tome, izraz, "pacijent podložan osteoporozi i/ili osteopeniji" kako se ovde koristi može se odnositi na: (i) pacijente koji imaju snižene nivoe steroidnih hormona, na primer smanjene nivoe oestrogena kod ženskih subjekata, ili smanjene nivoe testosterona kod muških subjekata, ili smanjene nivoe dehidroepiandrosterona [DHEA], u poređenju sa onim na kojima se održava normalna gustina kostiju; (ii) ženske pacijente u post menopauzi;

(iii) odrasle pacijente starije od 50, 55, 60, 65 ili starije od 70 godina; i/ili

(iv) pacijente koji su duže vreme u krevetu, one u uslovima niske gravitacije i/ili paraplegične pacijente.

[0042]Radi izbegavanja sumnje, u kontekstu ovog pronalaska, izraz" lečenje"uključuje reference za terapeutsko ili palijativno lečenje pacijenta kome je takvo lečenje potrebno, kao i za profilaktičko lečenje i/ili dijagnostiku pacijenata koji su podložni relevantnim stanjima bolesti.

[0043]Izrazi" pacijent"i" pacijenti"uključuju reference za sisare (npr. humane) pacijente.

[0044]Izraz "efektivna količina" odnosi se na količinu jedinjenja, koje daje terapeutski efekat kod tretiranog pacijenta (npr. dovoljan za lečenje ili prevenciju te bolesti). Efekat može biti objektivan (tj. koji se meri nekim testom ili markerom) ili subjektivan (tj. subjekat daje indikacije ili oseća efekat).

[0045]Izraz "halogen" kako se ovde koristi uključuje fluorin, hlorin, bromin i jodin (npr. bromin ili, određenije, hlorin fluorin).

[0046]Izraz "ugljovodonik" kako se ovde koristi sa pozivom na bilo koji odR<1>,R<2>,R<3>,R<a>iR<b>uključuje alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, alkil, aril, aril-alkil, aril-alkenil i aril-alkinil.

[0047]Pogodne alkil grupe uključuju ravnolančane ili razgranate alkil grupe koje sadrže od 1 do 18 atoma ugljenika, ili poželjnije 1 do 9 atoma ugljenika. Na primer, tipični primeri mogu uključivati metil ili etil, ili ravnolančani ili razgranati propil, butil, pentil, heksil, heptil, oktil, nonil ili slično.

[0048]Pogodne alkenil grupe uključuju ravnolančane i razgranate alkenil grupe koje sadrže od 2 do 18 atoma ugljenika, i mogu uključivati vinil, allil ili izopren ostatke, 2-, 3- ili 4-pentenil, ili 2-, 3-, ili 4-heksenil ili slično, i njihove izomerne oblike. Alkenil grupe kako su prisutne ujedinjenjima ovog pronalaska mogu da uključuju jedan ili više stepeni nezasićenosti.

[0049]Pogodne alkinil grupe uključuju ravnolančane i razgranate alkinil grupe koje sadrže od 2 do 18 atoma ugljenika. Na primer, tipični primeri mogu da uključuju etinil i propinil grupe.

[0050]Pogodne cikloalkil grupe uključuju grupe koje sadrže od 3 do 7 atoma ugljenika, na primer ciklopropil ili cikloheksil.

[0051]Pogodne aril grupe mogu da uključuju sisteme aromatičnih ugljovodonika koji imaju jedan prsten ili dva ili tri fuzionisana prstana, kao što je fenil ili naftil. A naročito pogodna aril grupa može biti fenil.

[0052]Pogodne heterociklične grupe mogu da uključuju sisteme prstena koji imaju 5 ili 6 atoma prstena od kojih je najmanje jedan atom prstena kiseonik, sumpor ili azot. Sistemi prstena mogu biti aromatični ili nenaromatični. Primeri mogu da uključuju piperazinil, morfolinil, pirolil, imidazolil, tienil, furanil ili druge poznate heterociklične sisteme prstena.

[0053]Prema poželjnom ostvarenju ovog pronalaska, R<1>predstavlja ugljovodoničnu grupu koja obuhvata ravnolančanu, razgranatu ili cikličnu grupu od kojih svaka sadrži do 18 atoma ugljenika. Poželjnije R<1>predstavlja alkil grupu koja uključuje ravnolančane ili razgranate alkil grupe koje sadrže od 1 do 18 atoma ugljenika, ili poželjnije 1 do 9 atoma ugljenika (npr. 1 do 6 atoma ugljenika, kao što je 1 do 5 atoma ugljenika). Naročito je poželjno da R<1>predstavlja metil.

[0054]Prema daljem poželjnom ostvarenju ovog pronalaska, n predstavlja 0 ili, alternativno, n je 4, a R<2>, u svakom pojavljivanju, je vodonik (npr. R<2>predstavlja vodonik, a n je 4).

[0055]R<3>predstavlja ugljovodoničnu grupu koja obuhvata ravnolančanu ili razgranatu ugljovodoničnu grupu koja sadrži do 18 atoma ugljenika, poželjno odgovarajuća alkil ili alkenil grupa, supstituisana sa najmanje jednim ostatkom koji uključuje -CCbR<3>supstituent. Poželjnije, R<3>predstavlja C1-9alkil ili C2-9alkenil, koji mogu biti ravnolančani ili razgranati, supstituisani sa najmanje jednim ostatkom koji uključuje - C02Ra supstituent, u kojoj je R<a>suštinski kako je ovde prethodno opisano. Poželjno u kontekstu R<3>, R<a>predstavlja vodonik, ili ugljovodoničnu grupu koja obuhvata ravnolančanu ili razgranata ugljovodoničnu grupu koja sadrži do 18 atoma ugljenika, poželjno do 9 atoma ugljenika, a još poželjnije do 6 atoma ugljenika. Poželjno R<a>predstavlja vodonik ili C1-6ravnolančani ili razgranati alkil, određenije metil.

[0056]R<3>predstavljen je sledećom Formulom (II)

u kojoj nedodeljena veza predstavlja mesto vezivanja strukturnog fragmenta formule (II) za ostatak Jedinjenja formule (I);

R<a>je kako je ovde prethodno opisano;

u kojoj R<c>, R<d>i R<e>su nezavisno izabrani zmeđu vodonika ili Ci-6alkila (koji mogu biti ravnolančani ili razgranati);

q je 1, 2, 3 ili 4;

r i s su nezavisno izabrani zmeđu 0,1, 2, 3 ili 4;

" predstavlja dvostruku vezu, i kada je to dvostruka veza, R<e>nije prisutan u gornjoj formuli (II).

[0057]Poželjno formula (II) predstavlja C4-8ravnolančanu ili razgranatu alkil grupu, ili C4-8ravnolančanu ili razgranatu alkenil grupu, supstituisane sa -CChR<3>, u kojoj poželjno R<a>predstavlja vodonik ili Ci-6ravnolančani ili razgranati alkil, određenije metil (npr. kada je R<a>prikačen za R<3>predstavlja H ili CH3).

[0058]Ovde opisana grupa predstavljena formulom (II) je -(ChfehCK^H.

[0059]Naročito poželjne grupe predstavljene formulom (II) uključuju:

[0060]Ovde je opisano jedno ili više sledećih jedinjenja: (i) 2,3-dimetoksi-l,4-naftohinon (XVI); (ii) menadion (III); (iii) KCAT-5C-Me (XIX); (iv) NaHinat-Me (VII); (v) (4E)-6-(l,4-dihidro-2-metil-l,4-dioksonaftalen-3-il)-4-metilheks-4-enska kiselina (VIII);

(vi) (2E)-4-(l,4-dihidro-2-metil-l,4-dioksonaftalen-3-il)-2-metilbut-2-enska kiselina (XIV); i

(vii) 8-(l,4-dihidro-2-metil-l,4-dioksonaftalen-3-il)oktanska kiselina (XV),

za upotrebu u izradi leka za lečenje osteoporoze i/ili ostopenije, ili za upotrebu u lečenju osteoporoze i/ili ostopenije.

[0061]Radi izbegavanja sumnje, ukoliko postoji sukobljavanje između datog hemijskog imena i hemijske strukture, hemijska struktura ima prednost.

[0062]Naročito poželjna je (4E)-6-(l,4-dihidro-2-metil-l,4-dioksonaftalen-3-il)-4-metilheks-4-enska kiselina (VIII) za upotrebu u terapiji prema ovom pronalasku suštinski kako je ovde prethodno opisana.

[0063]Ovde su opisana inovativna jedinjenja za upotrebu u terapiji prema ovom pronalasku suštinski kako je ovde prethodno opisano. Određenije, ova nova jedinjenja su (2E)-4-(l,4-dihidro-2-metil-l,4-dioksonaftalen-3-il)-2-metilbut-2-enska kiselina (XIV) i 8-(l,4-dihidro-2-metil-l,4-dioksonaftalen-3-il)oktanska kiselina (XV).

[0064]U jednom aspektu upotreba ovde opisanog jedinjenja može biti kao deo kombinovane terapije zajedno sa drugim terapeutskim agensom. U daljem aspektu upotreba ovde opisanog jedinjenja u lečenju osteoporoze i/ili osteopenije može biti kao deo kombinovane terapije zajedno sa drugim terapeutskim agensom.

[0065]Ovde opisana jedinjenja mogu se koristiti u kombinaciji sa terapijom biofosfonatnim lekom, teriparatidom, stroncijum ranelatom ili zamenskom oestrogen terapijom, vitaminima, mineralima ili koagulantima.

[0066]Drugi terapeutski agens može biti koagulant. On se može korisititi pogotovo kada jedinjenje ovog pronalaska ima antikoagulantnu aktivnost.

[0067]Drugi terapeutski agens može biti prirodni ili sintetički vitamin K (npr. vitamin K3ili, određenije, vitamin Ki, K2, K4ili K5). Pronalazak se takođe odnosi na kombinaciju Jedinjenja formule I sa koagulantom, kao što je vitamin K (npr. vitamin K3ili, određenije, vitamin Ki, K2, K4ili K5). Prema ovom pronalasku takođe je obezbeđen postupak pripremanja kombinacije lečenja za osteoporozu i/ili osteopeniju, u kojoj jedinjenje formule I je kombinovano sa koagulantom kao što je vitamin K (npr. vitamin K3ili, određenije, vitamin Ki, K2, K4ili K5), i opciono farmaceutskim ekscipijensom, nosačem ili razblaživačem.

[0068]U drugom aspektu drugi terapeutski agens može biti vitamin D, u jednom aspektu bilo u obliku kao vitamin D3 ili vitamin D2.

[0069]U drugom aspektu drugi terapeutski agens može biti vitamin BI, ili B2, ili B6 ili drugi vitamini u tragovima ili jedinjenja nalik vitaminima kao što je folna kiselina ili pantotenska kiselina.

[0070]U drugom aspektu drugi terapeutski agens može biti vitamin C ili vitamin A.

[0071]U drugom aspektu drugi terapeutski agens može biti mineral, kao što je kalcijum i magnezijum (npr. magnezijum).

[0072]U drugom aspektu drugi terapeutski agens može biti, biofosfonatni lek, teriparatid, stroncijum ranelat ili oestrogen zamenska terapija (tj. oestrogen).

[0073]Ovde je opisano jedinjenje formule I, ili kombinacija jedinjenja formule I i koagulanta (npr. vitamin Ki, K2, K4ili K5), u kombinaciji sa jednim ili više jedinjenja izabranih sa liste koja se sastoji od: kalcijuma, magnezijuma, biofosfonatnog leka, teriparatida, stroncijum ranelata ili oestrogen zamenske terapije, ili, određenije, vitamina D, vitamina BI, B2, B6 ili drugih jedinjenja nalik vitaminima, kao što je, ali nisu ograničeni na, pantotensku kiselinu ili folnu kiselini ili kombinacije prethodno navedenih.

[0074]U daljem aspektu, ovde opisano jedinjenje koristi se sa vitaminom K (npr. vitamin Ki, K2, K4ili K5)

i jednim ili više drugih vitamina ili jedinjenja nalik vitaminima, kao što je vitamin BI, ili B2, ili B6 ili drugi vitamini u tragovima ili jedinjenja nalik vitaminima kao štojefolna kiselina ili pantoteinska kiselina.

[0075]Jedinjenja mogu da koriste zajedno kao kombinovani preparat za simultanu, odvojenu ili sekvencijalnu upotrebu u terapiji za osteoporozu i/ili osteopeniju. Na primer, jedinjenje formule (I) može biti dostavljeno oralno, a koagulant može biti dostavljen intravenozno.

[0076]Ovde je opisan postupak za pripremanje kombinovanog leka, koji postupak obuhvata kombinovanje koagulanta, na primer vitamina K, sa jedinjenjem formule (I).

[0077]U skladu sa ovim pronalaskom, jedinjenja formule (I) mogu se davati sama (tj. kao monoterapija, kao što je monoterapija za prevenciju ili lečenje osteoporoze i/ili osteopenije). U alternativnim ostvarenjima ovog pronalaska, međutim, jedinjenja formule (I) mogu se davati u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensom.

[0078]Ovde je opisan kombinovani proizvod koji obuhvata:

(A) Jedinjenje formule (I), kako je ovde prethodno opisano, i

(B) drugi terapeutski agens (npr. vitamin C, vitamin A ili, određenije, kalcijum, magnezijum,

biofosfonatni lek, teriparatid, stroncijum ranelat, oestrogen zamenska terapija, koagulant (kao što je

vitamin Ki, K2, K4 ili K5), vitamin D (kao što je vitamin D3 ili vitamin D2), vitamin BI, ili B2, ili B6 ili drugi vitamini u tragovima ili jedinjenja nalik vitaminima kao što je folna kiselina ili pantoteinska

kiselina),

u kojem je svaka od komponenti (A) i (B) formulisana u mešavinu sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem.

[0079]Kako se ovde koristi, izraz" drugi terapeutski agens"uključuje reference za jedan ili više (npr. jedan, dva ili tri) terapeutska agensa (npr. jedan ili dva terapeutska agensa) izabrani zmeđu minerala, biofosfonatnog leka, teriparatida, stroncijum ranelata, oestrogen zamenske terapije ili, određenije, koagulanta ili vitamina.

[0080]Određeni drugi terapeutski agensi koji mogu biti pomenuti uključuju, na primer, kalcijum, magnezijum, biofosfonatni lek, teriparatid, stroncijum ranelat, oestrogen zamensku terapiju ili, određenije, koagulant, vitamin K (kao što je vitamin Ki, K2, K4ili K5), i vitamini kao što je vitamin C, vitamin A ili, određenije, vitamin D (kao što je vitamin D3 ili vitamin D2), vitamin BI, ili B2, ili B6 ili drugi vitamini u tragovima ili jedinjenja nalik vitaminima kao štojefolna kiselina ili pantoteinska kiselina.

[0081]U još daljim aspektima ovaj opis se odnosi na kombinovani proizvod koji obuhvata:

(I) Jedinjenje formule (I), kako je ovde prethodno opisano, i

(II) koagulant (npr. vitamin Ki, K2, K4ili K5),

(III) jedan ili više (npr. tri, dva ili, određenije, jedan) agenasa izabranih između vitamina C, vitamina A ili, određenije, kalcijuma, magnezijuma, biofosfonatnog leka, teriparatida, stroncijum ranelata, oestrogena, vitamina D (kao što je vitamin D3 ili vitamin D2), vitamina BI, ili B2, ili B6 ili drugih

vitamina u tragovima ili jedinjenja nalik vitaminima kao što je folna kiselina ili pantoteinska kiselina, u kojem je svaka od komponenti (I), (II) i (III) formulisana u mešavini sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem.

[0082]Određeni kombinacioni proizvod koji može biti pomenut obuhvata:

(AA) Jedinjenje formule (I), kako je ovde prethodno opisano,

(BB) vitamin K (npr. vitamin Ki, K2, K4ili K5),

(CC) kalcijum, i

(DD) vitamin D,

u kojem je svaka od komponenti (AA), (BB), (CC) i (DD) formulisana u mešavinu sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem.

[0083]Kako se ovde koristi, izraz" sekvencijalno, simultano ili uporedno davanje"odnosi se na: davanje odvojenih farmaceutskih formulacija (jedne koja sadrži jedinjenje formule I ijedne ili više drugih koje sadrže jedan ili više drugi terapeutskih agenasa); i

davanje jedne farmaceutske formulacije koja sadrži jedinjenje formule I i drugi terapeutski agens(e).

[0084]Prethodno opisani kombinovani proizvod obezbeđen je za davanje komponente (A) u konjukciji sa komponentom (B), i stoga mogu biti prisutni bilo kao odvojene formulacije, u kojima najmanje jedna od tih formulacija obuhvata komponentu (A), a najmanje jedna obuhvata komponentu (B), ili mogu biti prisutne (tj. formulisane) kao kombinovani preparat (tj. prisutne kao pojedinačna formulacija koja uključuje komponentu (A) i komponentu (B)). Kombinacioni proizvodi koji sadrže više od dve komponente (npr. one koje sadrže komponente (I), (II) i (III) ili (AA), (BB), (CC) i (DD)) kako je prethodno opisano mogu biti predstaviti analogno.

[0085]Prema tome, dalje je obezbeđena : (I) farmaceutska formulacija koja uključuje Jedinjenje formule I, kako je ovde prethodno opisano i drugi terapeutski agens, u mešavini sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem (koja formulacija se nadalje odnosi na "kombinovani preparat"); i (II) Komplet delova koji obuhvata komponente: (i) farmaceutska formulacija koja uključuje Jedinjenje formule I, kako je ovde prethodno opisano, u mešavini sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem; i (ii) farmaceutska formulacija koja uključuje drugi terapeutski agens, u mešavini sa

farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem,

koje komponente (i) i (ii) su svaka izrađena u obliku koji je pogodan za davanje sa onim drugim.

[0086]Komponenta (i) kompleta delova je dakle komponenta (A) u mešavini sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem. Slično, komponenta (ii) je komponenta (B) u mešavini sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem. Ostale kombinacije mogu biti pripremljene analogno (npr. tri ili četiri komponenti kombinacije).

[0087]Ovde je opisan postupak pripremanja kombinovanog leka, koji postupak obuhvata kombinovanje koagulanta, na primer vitamina K (vitamin Ki, K2, K4ili K5), sa jedinjenjem formule (I).

[0088]Opciono kombinovani lek zatim može biti kombinovan sa bilo kojim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom, razblaživačem ili nosačem radi formiranja farmaceutske kompozicije.

[0089]Opciono kombinovani lek ili farmaceutska kompozicija mogu biti formulisani u tabletu za oralnu dostavu.

[0090]Ovde je opisana upotreba kombinacije kako je opisana u prethodnom leku, određenije za lečenje osteoporoze. Ovde je opisana upotreba te kombinacija u pripremanju leka za lečenje osteoporoze i/ili osteopenije.

[0091]Ovde je opisan postupak za lečenje ili prevenciju osteoporoze i/ili osteopenije, koji obuhvata davanje pacijentu kome je potrebno lečenje terapeutski efektivne količine jedinjenja ili kombinacije ovog pronalaska.

[0092]Intezitet profilaktičke ili terapeutske doze Jedinjenje formule (I) naravno će varirati sa prirodom i ozbiljnošću stanja koje se tretira i sa određenim jedinjenjem formule I i putanjom njenog davanja. Takože će varirati prema varijaciji faktora koji uključuju starost, težinu, opšte zdravstveno stanje, pol, ishranu, vreme davanja, brzinu izlučivanja, kombinaciju lekova i odgovor pojedinačnog pacijenta. Uopšteno, dnevna doza je od 0.001 mg do 1000 mg (npr. 0.001 mg to 100 mg) po kg telesne težine sisara, poželjno 0.01 mg do 10 mg po kg. Sa druge strane, u nekim slučajevima mogu biti potrebne doze izvan ovih limita.

[0093]Količina aktivnog sastojka koja se može kombinovati sa materijalima nosača za proizvodnju jedno doznog oblika variraće u zavisnosti od domaćina koji se tretira i određenog načina davanja. Na primer, formulacija namenjena za oralno davanje kod ljudi može sadržati od 0.05 mg do 5 g aktivnog agensa sastavljenog sa odgovarajućom i prikladnom količinom materijala nosača koja može da varira od 5 do 99.95 procenata od ukupne kompozicije. Oblici dozne jedinice uopšteno će sadržavati između od 0.1 mg do 0.4 g aktivnog sastojka, tipično 0.5 mg, 1 mg, 2 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, ili 400 mg. U bilo kom slučaju, medicinski stručnjak ili drugi stručnjak iz ove oblasti, moćiće rutinski da odredi tačnu dozu, koja će biti najpogodnija za pojedinačnog pacijenta.

[0094]Količina aktivnog sastojka koja se može kombinovati sa materijalima nosača za proizvodnju jednog doznog oblika variraće u zavisnosti od domaćina koji se tretira i određenog načina davanja. Na primer, formulacija namenjena za oralno davanje ljudima može sadržati od 0.05 mg do 5 g aktivnog agensa sastavljenog sa odgovarajućom količinom materijala nosača koja može varirati od 5 to 99.95 procenata od ukupne kompozicije. Oblici dozne jedinice generalno će sadržati od između 0.1 mg do 0.4 g aktivnog sastojka, tipično 0.5 mg, 1 mg, 2 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, ili 400 mg.

[0095]Poželjne doze jedinjenja formule (I) su doze veće od 40 mg dnevno, poželjnije najmanje 45 mg dnevno.

[0096]Ukupna dnevna doza može se dostaviti u jednoj ili više odvojenih doza tokom dana, sama ili u kombinaciji sa drugim terapijama.

[0097]Jedinjenja formule (I) mogu se davati na bilo koji pogodan način, na primer, oralno, putem inhalacionog spreja, topikalno, parenteralno ili rektalno u formulacijama dozne jedinice koje sadrže konvencionalne netoksične farmaceutski prihvatljive nosače, adjuvante i vozila. Izraz "parenteralno" kako se ovde koristi uključuje subkutane injekcije, intravenozne, intramuskularne, intrastemalne injekcije ili infuzione tehnike.

[0098]Farmaceutske kompozicije koje sadrže aktivni sastojak mogu biti u obliku pogodnom za oralnu

upotrebu, na primer, kao tablete, lozenge, vodene ili uljane suspenzije, disperzibilni praškovi ili granule, emulzije, tvrde ili meke kapsule, ili sirupi ili eliksiri. Kompozicije namenjene za oralnu upotrebu mogu biti pripremljene prema bilo kom postupku poznatom u stanju tehnike za izradu farmaceutske kompozicije, a takva kompozicija može sadržati jedan ili više agenasa izabranih zmeđu grupe koja se sastoji od agenasa za zaslađivanje, agenasa za ukus, agenasa za boju i prezervativa u cilju obezbeđivanja farmaceutski elegantnog i palatabilnog preparata. Tablete sadrže aktivni sastojak u mešavini sa netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom koji su pogodni za izradu tableta. Takvi ekscipijensi mogu biti na primer, inertni razblaživači, kao što je kalcijum karbonat, natrijum karbonat, laktoza, kalcijum fosfat ili natrijum fosfat; agensi za granuliranje i dizentegraciju, na primer, kukuruzni škrob, ili algininska kiselina; agensi za vezivanje, na primer škrob, želatin ili akacija, i agensi za podmazivanje, na primer, magnezijum stearat, stearinska kiselina ili talk.

[0099]Tablete mogu biti neprevučene ili mogu biti prevučene poznatim tehnikama kako bi se odložilo rastvaranje i apsorpcija u gastrointestinalnom traktu i time se obezbedila produžena reakcija tokom dužeg perioda. Na primer, može se uključiti materijal za odlaganje kao što je gliceril monostearat ili gliceril distearat. One takođe mogu biti prevučene radi formiranja osmotske terapeutske tablete sa kontrolisanim oslobađanjem.

[0100]Formulacije za oralnu upotrebu mogu takođe biti prisutne kao tvrde želatinaste kapsule u kojoj je aktivni sastojak pomešan sa inertnim čvrstim razblaživačem, na primer, kalcijum karbonatom, kalcijum fosfatom ili kaolinom, ili kao meke želatinske kapsule u kojoj su aktivni sastojci umešani sa rastvaračima mešljivim sa vodom kao što je propilene glikol, PEG i etanol, ili uljani medijum, na primer ulje kikirikija, tečni parafin, ili maslinovo ulje.

[0101]Na primer, čvrsta oralna kompozicija kao što je tableta ili kapsula mogu sadržati od 1 do 99 mas.% aktivnog sastojka; od 0 do 99mas.% razblaživača ili punioca; od 0 do 20mas.% dezintegranta; od 0 do 5mas.% lubrikanta; od 0 do 5mas.% sredstava za bolji protok; od 0 do 50mas.% granulacionog agensa ili veziva; od 0 do 5mas.% antioksidansa; i od 0 do 5mas.% pigmenta. Tablete sa kontrolisanim oslobađanjem dodatno mogu da sadrže od 0 do 90 mas.% polimera za kontrolu oslobađanja.

[0102]Vodene suspenzije sadrže aktivni materijal u mešavini sa ekscipijensom pogodan za izradu vodene suspenzije. Takvi ekscipijensi su agensi za suspendovanje, na primer, natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropil metilceluloza, natrijum alginat, polivinilpirolidon, tragakant guma i guma akacija; agensi za dispergovanje ili ovlaživači koji mogu biti prirodni fosfatid, na primer lecitin. Vodene suspenzije mogu takođe da sadrže jedan ili više konzervanasa, jedno ili više sredstava za bojenje, jedan ili više agenasa za ukus, ijedan ili više zaslađivača.

[0103]Parenteralna formulacija (kao što je rastvor ili suspenzija za injekciju ili rastvor za infuziju) mogu sadržati od 1 do 50 mas.% aktivnog sastojka; i od 50mas.% do 99mas.% tečnog ili polučvrstog nosača ili vozila (npr. rastvarač kao što je voda); i 0-20mas.% jednog ili više drugih ekscipijenasa kao što su agensi za puferovanje, antioksidansi, suspenzioni stabilizatori, agensi za podešavanje toniciteta i prezervativa.

[0104]Uljane suspenzije mogu biti formulisane suspendovanjem aktivnog sastojka u biljnom ulju, na primer ulje od kikirikija, maslinovo ulje, susamovo ulje ili kokosovo ulje, ili u mineralnom ulju kao što je tečni parafin. Uljane suspenzije mogu sadržati agens za zgušnjavanje, na primer pčelinji vosak, tvrdi parafin ili cetil alkohol. Agensi za zaslađivanje i agensi za ukus mogu se dodati kako bi se obezbedio palatabilan oralni preparat. Ove kompozicije mogu se sačuvati dodavanjem bilo kog anti-oksidanta kao što je askorbinska kiselina, vitamin E ili neki takav ekvivalentni agens.

[0105]Disperzibilni praškovi i granule pogodni za pripremanje vodene suspenzije dodavanjem vode obezbeđuju aktivni sastojak u mešavini sa agensom za dispergovanje ili vlaženje, agensom za suspendovanje i jednim ili više prezervativa. Pogodni agensi za dispergovanje i vlaženje i agensi za suspendovanje su pomenuti kao prethodno pomenuti primeri. Dodatni ekscipijensi, na primer agensi za zaslađivanje, ukus boju, mogu takođe biti prisutni.

[0106]Ovde opisane farmaceutske kompozicije mogu takođe biti u obliku emulzije ulje-u-vodi. Uljana faza može biti biljno ulje, na primer maslinovo ulje ili ulje kikirikija, ili mineralno ulje, na primer tečni parafin ili njihove mešavine. Pogodni agensi za emulzifiranje mogu biti prirodni fosfatidi, na primer soja, lecitin, i estri ili delimični estri izvedeni iz masnih kiselina i heksitol anhidrida, na primer sorbitan monooleat, i kondenzacioni proizvodi pomenutih delimičnih etara sa etilen oksidom, na primer polioksietilen sorbitan monooleat. Emulzije mogu takođe sadržati agense za zaslađivanje i ukus.

[0107]Sirupi i eliksiri mogu biti formulisani sa agensima za zaslađivanje, na primer glicerol, propilen glikol, sorbitol ili sukroza. Takve formulacije mogu takođe da sadrže prezervative, i agense za ukus i za

boju. Farmaceutske kompozicije mogu biti u obliku sterilne injektabilne vodene ili uljaste suspenzije. Ove suspenzije mogu biti formulisane prema poznatoj upotrebi pogodnih agenasa za dispergovanje i vlaženje i agenasa za suspendovanje. Sterilni injektabilni preparati mogu takođe biti sterilni injektabilni rastvor ili suspenzije u netoksičnim parenteralno-prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer kao rastvor u 1,3-butan diolu. Među prihvatljivim vozilima i rastvaračima koji se mogu uključiti su voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida. Korastvarači kao što je etanol, propilen glikol ili polietilen glikoli mogu se takođe koristiti. Dodatno, sterilna, fiksirana ulja konvencionalno se koriste kao rastvarač ili suspenzioni medijum. U tom cilju, bilo koje blago fiksno ulje može se uključiti, a koje uključuje sintetičke mono- ili di-gliceride. Dodatno, masne kiseline kao što je oleinska kiselina mogu se koristiti u pripremanju injektabilnih proizvoda.

[0108]Jedinjenja formule (I) mogu se takođe davati u obliku supozitorija za rektalno davanje leka. Ove kompozicije mogu biti pripremljene mešanjem leka sa pogodnim neiritirajućim ekscipijensom koji je čvrst na sobnim temperaturama, a tečan na rektalnoj temperaturi te se stoga topi u rektumu kako bi se lek oslobodio. Takvi materijali su kakao buter i polietilen glikoli.

[0109]Za topikalnu upotrebu, koriste se kreme, masti, gelovi, rastvori ili suspenzije, itd., koji sadrže jedinjenje formule (I). (Za ovu primenu, topikalna primena uključuje tečnost za ispiranje usta i tečnosti za ispiranje grla). Topikalne formulacije mogu se generalno sastojati od farmaceutskog nosača, korastvarača, sredstva za emulziranje, pojačivača penetracije, sistema za čuvanje, i sredstva za razmekšavanje.

Spisak crteža

[0110]Pronalazak će biti opisan, samo kao primer, pozivajući se na priložene crteže u kojima: Fig 1 je a grafikon koji prikazuje koncentraciono-zavisno oslobađanje interleukina-6 iz kultivisanih MG63 ćelija nalik osteoblastu pomoćuE. coli lipopolisaharida(LPS); Fig 2 je a grafikon koncentraciono-zavisne inibicijeE. coliLPS-stimulisanog (25ng/ml) interleukin-6 oslobađanja MG63 ćelija nalik osteoblastu pomoću NaHinata; Fig 3 prikazuje grafikon koncentraciono-zavisne inibicijeE. coliLPS-stimulisanog (25ng/ml) interleukin-6 oslobađanja MG63 ćelija nalik osteoblastu pomoću jedinjenja XIV ovog pronalaska koje je samo aktivni inhibitorni lnterleukin-6 kultivisanih MG63 ćelija nalik osteoblastu pri veoma visokim koncentracijama (IO 5 M); Fig 4 prikazuje grafikon koncentraciono-zavisne inibicijaE. coliLPS-stimulisanog (25ng/ml) interleukin-6 oslobađanja MG63 ćelija nalik osteoblastu pomoću jedinjenja XV, za koje se može videti da je potpuno neaktivno u inhibitornom lnterleukinu-6 kultivisanih MG63 osteoblast ćelija nalik osteoblastu; Fig 5 prikazuje efekat jedinjenja ovog pronalaska na vijabilnost kultivisanih MG63 ćelija nalik osteoblastu izmereno preuzimanjem<3>H obeleženog Timina u formiranju DNK; Fig 6A prikazuje kvantifikovane U.CT podatke trabekulanog odeljka tibija miševa (u obliku trabekulanog broja) kod lažno operisanih miševa (tj, onih nakon lažne operacije), Oviarektomizovanih (OVx) miševa i OVx životinja tretiranih sa 15ug/miš/dan jedinjenja ovog pronalaska; Fig 6B prikazuje kvantifikovane U.CT podatke trabekulanog odeljka tibija miševa (u obliku procenta zapremine kostiju) kod lažno operisanih miševa, Oviarektomizovanih (OVx) miševa i OVx životinja tretiranih sa 15ug/miš/dan jedinjenja ovog pronalaska; Fig 7A prikazuje anteriornu-posteriornu X-zračnu u£T sliku trabekulanog odeljka lažnih miševa, OVx miševa i OVx miševa tretiranih sa NaHinatom nakon Oviarektomije; Fig 7B su X-zračna U.CT slike koronarnog zgloba do kolena trabekulanog odeljka lažnih miševa, OVx miševa i OVx miševa tretiranih sa NaHinatom nakon Oviarektomije.

Fig 8 je primer sintetičke putanje za Jedinjenje formule VIII (koje se ovde takođe naziva NaHinat); i

Fig 9 je primer sintetičke putanje za Jedinjenje V korišćeno u putanji prikazanoj na Fig 8.

Fig 10 prikazuje Inibiciju y-karboksilaze pomoću KCAT-5C (XIV) u prisustvu 220u.M vitamin Kihidrohinona (n=D Fig 11 prikazuje inibiciju y-karboksilaze pomoću KCAT-5C-Me (XIX) u prisustvu 220u.M vitamin Kihidrohinona (n=l) Fig 12 prikazuje inhibiciju y-karboksilaze pomoću NaHinata (VIII) u prisustvu 220u.M vitamin Kihidrohinona (n=l) Fig 13 prikazuje inhibiciju y-karboksilaze pomoću NaHinat-Me (VII) u prisustvu 220uM vitamin Kihidrohinona (n=l) Fig 14 prikazuje inhibiciju y-karboksilaze pomoću OCAT-Me (XVIII) u prisustvu 220u.M vitamin Kihidrohinona (n=l) Fig 15 prikazuje inhibiciju y-karboksilaze pomoću DMK (XVI) u prisustvu 220u.M vitamin Kihidrohinona (n=D Fig 16 prikazuje inhibiciju y-karboksilaze pomoću Vitamina K3u prisustvu 220u.M vitamin Kihidrohinona

(n=l)

Fig 17 prikazuje da NaHinat ne povišava trabekulani broj kod normalne kosti

Fig 18 prikazuje da NaHinat inhibira gubitak kosti u neurekromizovanim udovima

Fig 19 prikazuje da NaHinat ne povišava zapreminu normalne kosti

Fig 20 prikazuje da NaHinat inhibira gubitak kosti u neurekromizovanim udovima

[0111]Jedinjenje prema ovom pronalasku može biti sintetizovano pomoću bilo kog pogodnog postupka. Pogodni postupak je opisan u nastavku sa pozivom na Ruttimann et al "Chimica" (1986) 40 (9) 290-306, i Gerorkzan et al "Chem. Hetrocvclik Compound" (Engl. Trans.) (1989) 2, 269 i Fig 8 i 9. Dodatno, jedinjenja ovog pronalaska mogu biti izrađena analogno postupcima opisanim u GB 2,314,773. Kao što će biti jasno, jedinjenja ovog pronalaska mogu biti pripremljen analogno postupcima koji su prethodno opisani u navedenoj referenci ili se mogu nabaviti komercijalnim putem (gde je indikovano).

[0112]Kako je prikazano na Fig 8, uključen je početni materijal menadion (Aldrich Chemical Companv, III) i uveden u reakciju sa ciklopentadienom na 25°C kako bi se generisao njihov fuzionisani derivat (IV). Tretiranje bazom, 0"K<+>(npr. kalijum tert-butoksid), a zatim tretiranje sa metil 4-metil-6-bromo-heks-4-eneoatom (V), uvodi 3-supstituent (VI). Intermedijer je dalje reagovan primenom toplote u rasponu od 70°Cdo 110°C izazivajući eliminaciju ciklopentadiena sa rezultujućom izolacijom proizvoda metil estra NaHinata (VII). Karakterizacija ovog jedinjenja data je od strane Ruttimann et al kako je prethodno navedeno.

[0113]Jedinjenje VII je konvertovano u odgovarajuću karboksilnu kiselinu pomoću bazne hidrolize, na primer upotrebom KOH, i zatim naknadnim tretiranjem sa kiselinom na primer upotrebom HbO<+>(npr. vodena hlorovodonična kiselina), ili ekvivalentom, na poznati način, čime se generiše NaHinat (VIII). Karakterizacija ovog jedinjenja data je od strane Ruttimann et al kako je prethodno navedeno.

[0114]Pripremanje intermedijera (V) koji je pretodno korišćen izvedeno je kako je prikazano na Fig 9A. Prenil bromid (Aldrich Chemical Companv) (IX u kojoj L= Br) konvertovan je u epoksid mCPBA, koji je naknadno zagrevan kako bi dao intermedijer (X) u kojem L = Br. Treiranjem sa AC2O-DMAP generisan je estar (XII) u kojem L = Br, koji je zatim podvrgnut Claisen (npr. Ireland-Claisen) preuređivanju upotrebom standardnih reagenasa kao što je LDA i TMSCI (koji se odnosi na Fig 2A kao TMSU). Njihov preuređeni proizvod (XIII) u kojem L = Br konvertovan je u metil estar (V) reakcijom sa CH2N2za upotrebu u pripremanju NaHinata kako je ovde prethodno opisano. Njegova karakterizacija obezbeđena je od strane Gerorkzan et al kako je pterhodno navedeno.

[0115]Alternativno, određenije pripremanje intermedijera (V) koji je pretodno korišćen izvedeno je kako je prikazano na Fig 9B. Prenil alkohol (17) zaštićen je sa tert-butildimetilsililhloridom (TBDMSCI) radi formiranja TBDMS etra 18. Reakcijom 18 sa meta-hloroperoksibenzojevom kiselinom formiran je epoksid 19, koji je podvrgnut naknadnom preuređivanju radi formiranja alkohola 20 pod visoko temperaturnom reflukus. Reakcijom 20 sa trimetilortoacetatom u prisustvu propionske kiseline proizveden je estar 21, koji je solobođen zaštite kako bi se obezbedio slobodan alkohol 22 (primenom tetrabutilamonijum fluorida). Naknadna interkonverzija funkcionalne grupe od 22 u bromid 23 (koji se ovde takođe odnosi na jedinjenje (V)) postignuta je upotrebom ugljenik tetrabromida i trifenilfosfina.

[0116]Ekvivalentni postupci mogu se koristiti kako bi se pripremila druga jedinjenja unutar obima ovog pronalaska.

[0117]Određivanje Biološke Aktivnosti: Razna jedinjenja formule I mogu se testirati upotrebom naknadnih ispitivanja kako bi se odredila njihova aktivnost u inhibiciji gubitka kosti: 1. Upotrebom jedinjenja u prevenciji oslobađanja IL-6, pogodno ćelijske linije nalik osteoblastu, na primer, MG63 kako je opisano ovde u primerima. U jednom aspektu jedinjenja ovog pronalaska imaju IC5ood 2-5 x 10"<7>M ili manji u takvom eksperimentu.

2. Upotrebom jedinjenja u inibiciji gubitka kosti kod glodara sa deficijentnim oestrogenom, kako je

ovde opisano u primerima. U jednom aspektu jedinjenja ovog pronalaska sposobna su da spreče gubitak gustine kostiju kada se uporede sa Oviarektomizovanim kontrolnim glodarom.

[0118]Radi izbegavanja sumnje izrazi 'koji obuhvata', 'obuhvataju' i 'obuhvata' ovde imaju za nameru da budu opciono zamenljivi sa izrazima 'koji se sastoji od', 'sastoje od', i 'sastoji od', respektivno, u svakoj instanci. Izraz "oko" (ili "približno") kada se koristi u svim numeričkim vrednostima dozvoljava do 5% varijacije, tj. vrednost od približno 1.25% značiće između 1.19%-1.31%.

[0119]Podrazumeva se da određena ostvarenja koja su ovde opisana samo kao ilustracija ne ograničavaju ovaj pronalazak. Glavne karakteristike ovog pronalaska mogu se uključiti u različitim ostvarenjima bez udaljavanja od obima ovog pronalaska. Stručnjacima će biti jasni, ili će zaključiti upotrebom ne više od rutinskog ispitivanja, brojni ekvivalenti postupaka koji su ovde opisani. Takvi ekvivalenti smatraju se unutar obima ovog pronalaska i pokriveni su priloženim patentnim zahtevima. Sve publikacije i patentne prijave koje su ovde pomenute su indikativne za nivo veštine stručnjaka iz oblasti na koju se ovaj pronalazak odnosi.

[0120]Upotreba određenog i neodređenog člana ("a" ili "an") kada se koristi u konjukciji sa izrazom "koji obuhvata" u patentnim zahtevima i/ili specifikaciji mogu imati značenje "jedan," ali su često dosledni značenju "jedan ili više," "najmanje jedan," i "jedan ili više od jedan." Upotreba izraza "ili" u patentnim zahtevima koristi se sa značenjem "i/ili" ukoliko eksplicitno nije drugačije naznačeno da se odnosi samo na altrenative ili da su alternativne međusobno isključive, iako ovaj opis podržava definiciju koja se odnosi samo na alternative i "i/ili." Kroz ovu aplikaciju, izraz "približno" koristi se da indikuje koja vrednost uključuje inherentnu varijaciju greške za merenje, pri čemu je uključen postupak za određivanje te vrednosti, ili varijacija koja postoji među ispitnim subjektima.

[0121]Izraz "ili njihove kombinacije" kako se ovde koristi odnosi se na sve permutacije i kombinacije navedenih artikala preciziranih u priloženim patentnim zahtevima.

[0122]Elementi za upotrebu u kombinaciji mogu se kombinovati unutar iste formulacije, za simultano dostavljanje, ili se mogu koristiti odvojeno, dostavljeni bilo uporedo ili sekvencijalno, i odnose se na kombinacije koje ovde obuhvataju sve takve mogućnosti.

[0123]Sve kompozicije i/ili postupci koji su opisani ovde ili u patentnim zahtevima mogu se pripremiti ili izvesti bez nepotrebnog eksperimentisanja u svetlu ovog opisa, lako su kompozicije i postupci ovog pronalaska opisani u pogledu poželjnih ostvarenja, stručnjacima će biti jasno koje se varijacije mogu primeniti na kompozicije i/ili postupke i u fazama ili u delovima faza postupka koji je ovde opisan.

[0124]Bilo koji pojedinačni aspekat ovog pronalaska može se kombinovati sa bilo kojim drugim aspektom, osim kada je to očigledno iz konteksta.

[0125]Pronalazak će dalje biti opisan pozivanjem na sledeće, neograničavajuće, primere:

Primeri

[0126]1. Postoje brojni faktori koji regulišu fiziologiju kosti. Ciljanje agenasa koji indukuju koštanu resorpciju regrutovanjem/aktiviranjem ćelija koje indukuju gubitak kosti (osteoklasti) imalo je ograničeno izlaganje/efikasnost. Najčešće terapije ciljaju osteoklaste u trenutku kada se regrutuju ili aktiviraju. Porodica lokalno (u kosti) proizvedenih proteina koji se nazivaju citokini može indukovati raspon stimulansa koji mogu da utiču na broj/aktivnost osteoklasta. Jedan od tih citokina naziva se interleukin-6 (IL-6). IL-6 se oslobađa pomoću mnogo vrsta ćelija, koje uključuju koštano formirajuće ćelije (osteoblasti), nakon čelendžovanja sa raznim agonistima. Ovi agonisti mogu biti fiziološki (l,25(OH)2vitamin D3, interleukin-lB) ili patofiziološki (interleukin-lB; bakterijski endotoksin).

[0127]InMitroispitivanja usmerena su na besmrtnu ćelijsku liniju nalik osteoblastu koja se zove MG63 koja je izvedena iz humanog osteosarkoma (rak kostiju). Ove ćelije su kultivisane i ispitivane na njihovu sposobnost da sintetišu i oslobode niz citokina uključujući IL-6. Zahvaljujući dobro opisanim aktivnostima IL-6 indukovanog gubitka kosti, fokus je napravljen na ovaj citokin (videti Manolagas SC, Ann N Y Acad Sci. 1998 mogu l;840:194-204). Uzeto je u obzir oslobađanje IL-6 iz kultivisanih ćelija MG63 pod uticajem gore opisanih agonista. lako sva tri agonista izazivaju oslobađanje IL-6 iz kultivisanih ćelija MG63 na način zavistan od koncentracije, radi lakše manipulacije eksperimentalnih uslova i upravljanja troškova, bakterijski lipopolisaharid (LPS; E. coli) bio je agonist koji je korišćen. Kao što je prikazano na

Fig 1, IL-6 je oslobođen iz kultivisanih ćelija MG63 na koncentraciono zavistan način pomoću LPS. Ovi podaci su korišćeni za definisanje uslova za dalja ispitivanja; konkretno, koncentracija bakterijskog lipopolisaharida koja indukuje 50% maksimalnog IL-6 odgovora iz MG63, koje su korišćene kao čelendž uslovi za ispitivanja sa jedinjenjem predmetnog pronalaska. Kao što se vidi na Fig 2 jedno jedinjenje predmetnog pronalaska (4E)-6-(l,4-dihidro-2-metil-l,4-dioksonaftalen-3-il)-4-metilheks-4-enska kiselina (VIII) (koja se u ovom primeru takođe naziva NaHinat) inhibira stimulisano oslobađanje IL-6 iz MG63 kultivisanih ćelija na način zavisan od koncentracije sa IC5ood 2-5 x 10"<7>M. IL-6 se može meriti komercijalnim imunološkim testovima, na primer, CiuantiGlo IL-6 Imunoesej od R&Dsvstems.

[0128]Ekvivalenta aktivnost dva različita molekula nalik NaHinatu, određenije (2E)-4-(l,4-dihidro-2-metil-l,4-dioksonaftalen-3-il)-2-metilbut-2-enska kiselina (XIV), i 8-(l,4-dihidro-2-metil-l,4-dioksonaftalen-3-il)oktanska kiselina (XV), prikazani su na Fig 3 i 4, respektivno.

[0129]Inhibicija oslobađanja IL-6 nije zbog MG63 ćelija nalik osteblastu koje su ubijene pomoću NaHinata, budući da nastavljaju normalnu sintezu DNK u svim testiranim koncentracijama ( do 10"<5>M ), što je znatno izvan bilo kakvog terapijskog opsega. Fig 5 prikazuje ekvivalentno inkorporiranje<3>H-timina među kontrolnim uzorcima ("kontrola + LPS " i" kontrola - LPS") MG63 ćelija nalik osteoblastu i onih podvrgnutih koncentraciji NaHinata od između 10"<8>M i 10"<5>M . Ovaj nedostatak ćelijske toksičnosti takođe je pokazan u kultivisanim ćelijskim linijama izvedenim iz kože i jetre.

[0130] Primer 2Najšire prihvaćeni životinjski model osteoporoze je deficijencija estrogena kod glodara, gde je sa ovim modelom efekat ovog pronalaska testiranin vivo.Svi postupci izvedeni su pod Home Office licencom i potpunim lokalnim etičkim principima. C57Black miševi nasumično su određeni da prime ukupne bilateralne Oviarektomije ili lažne operacije. Oviarektomizovane životinja nasumično su raspoređene za lečenje ili u netretiranu kontrolnu grupu. Tokom operacije, bilo je osam životinja u svakoj grupi.

[0131]Miševi su smešteni pod standardnim uslovima za smeštanje životinja sa 12-satnim svetio tama ciklusima pod kontrolisanim uslovima temperature i vlažnosti tokom 5 nedelja. Lažni i kontrolni oviarektomizovani miševi primili su 10% etanol u obliku fizioloških injekcia sa vozilom intraperitonealno jednom dnevno. NaHinatom tretirani miševi primili su jednu injekciju (15mg/miš/dan ) datu sa 10% etanolom u fiziološkim injekcijama intraperitonealno. Svi miševi su dobijali istu zapreminu test uzorka i to u skladu sa Home Office propisima.

[0132]Posle 5 nedelja tretmana životinje su žrtvovane po Rasporedu 1 postupka, a tibije su uklonjene za X-zračne mikro-kompjuterske tomografske (uCT) analize slika. Kao što se može videti pomoću trabekularnog broja (na Fig 6A) i sadržaja procenta kosti u trabekularnom odeljku (na Fig 6B) data doza NaHinata potpuno je oslabila gubitak koštane mase izazvan oviarektomijom koja je primećena kod kontrolnih oviarektomizovanih životinja. Ova zapažanja su prikazana na Fig 7A i B kao uCT slike. Fig 7A prikazuje prednji-zadnji pogled na tibijalni trabekularni odeljak, a Fig 7B pokazuje koronalni pogled zgloba do kolena.

Primer 3 NaHinat inhibira vitamin K-zavisnu enzimsku gama-karboksilacionu reakciju

[0133]Aktivnost NaHinata i povezanih jedinjenja ispitana je u ciklusu vitamina K.

Ispitivanje karboksilaze

[0134]Korišćen je postupak Houbenet al(Houben, R. J. et al (1997)." Assay of Vitamin K-Dependent Carboxylase Activity in Hepatic and ExtrahepaticTissues." Methods in Enzymology 282: 358-368). Sve ekperimentalne epruvete pripremljene su dodavanjem 25ul goveđeg mikrozomskog preparata, 5u.l 10% 3-[(3-holamidopropil)dimetilamonio]-2-hidroksi-l-propanesulfonske kiseline (CHAPS), 25u.l zasićenog rastvora amonijak sulfata i 5ul 0.1 M ditiotreitola (DTT) (Sigma), 25u.l zasićenog amonijak sulfatnog (Sigma) rastvora i 5u.l 500u.M dekarboksilizovanog osteokalcina (d-Oc). Kako su jedinjenja rastvorena u 10ul dimetil sulfoksida (DMSO), 10u.l DMSO je dodato u pozitivne i negativne kontrolne epruvete. Pufer D (500mM NaCI i 25mM Tris-HCI (f 7.5)) dodat je u svaku epruvetu kako bi se dobila uniformna zapremina reakcione mešavine (125ul). Jedinjenja (KCAT-5C (XIV), KCAT-5C-MeXIX, NaHinat (VIII), NaHinat-Me (VII), OCAT-Me (XVIII), DMK (XVI) i vitamin K3 (III)) ili vitamin Kl (pri koncentraciji od 889uM) (Konakion<*>,pomešane micele od Hoffmann-La Roche) dodata su u respektivne epruvete odvojeno od negativne kontrole. Reakcija je inicijalizovana odmah dodavanjem 5u.l NaH14CG*3 (New England Nuclear) rastvora (kako bi se dobila konačna radioaktivnost od 5uCi po epruveti) u svaku epruvetu. Epruvete su umešane vorteksom i smeštene u vodenu kupku (20°C) tokom 30 minuta. 100u.l svake mešavine je pipetirano u bočicu koja sadrži 800ul 5% (w/v) trichlorosirćetne kiseline (TCA) radi taloženja proteina i radi zautavljanja reakcije. Neformirani 14C02 je uklonjen prokuvavanjem tokom 3 minuta. Nakon hlađenja, 5ml Optifluora je dodato i izmeren je nivo<14>CC>2inkorporacije na Wallac 1414 winspectral tečnom scintilacionom brojaču.

Inibicija rekombinantne humane gama- karboksilaze

Pripremanje jedinjenja

[0135]Jedinjenja koja su testirana redukovana su do svojih hidrohinonskih oblika dodavanjem 0.2M DTT u rastvor jedinjenja u DMSO (dajući finalni v/v odnos od 1:3 DTT:DMSO) i inkubacijom preko noći u vodenoj kupki (37°C).

Ispitivanje karboksilaze

[0136]U ovom ispitivanju, korišćeni su različiti mikrozomalni preparati umesto jednog ovde opisanog. Ovaj mikrozomski preparat sastoji se od mikrozoma pripremljenih odTrichoplusia niHigh Five ćelija koje su imale cDNK za humanu y-karboksilazu inkorporiranu u njihovoj DNK. Ovi mikrozomi su kupljeni u radnjama koje ih pripremaju kako je opisano od strane Houben, R. J., D. Jin, et al. (1999)." Osteocalcin binds tightly to the gamma-glutamylcarboxylase at a site distinct from that of the other known vitamin K-dependent proteins." Biochem J 341 (Pt 2): 265-9.

[0137]Standardne reakcione mešavine sastoje se od 5u.l mikrozomalnog preparata, 5ul 500uM dekarboksilizovanog osteokalcina (d-OC) (izuzev za negativnu kontrolnu epruvetu), 25ul zasićenog rastvora amonijum sulfata, 5ul 5% PC/CHAPS. Pored toga, 1:3 (v/v) DMSO: 0.2M DTT dodato je u epruvete (uzeti u obzir činjenicu da su jedinjenja rastvorena u 1:3 DMSO: 0.2M DTT) kako bi se dobila ukupna zapremina od 40ul DMSO: 0.2M DTT po epruveti. Rastvor pufera D dodat je kako bi se obezbedilo da finalne epruvete imaju uniformnu zapreminu od 125ul. Eksperiment je inicijalizovan dodavanjem 10u.l 1:1 (v/v) mešavine vitamin l< hidrohinona (finalna koncentracija od 220u.M) i NaH<14>C03(finalna radioaktivnost od 5u.Ci) u svaku epruvetu, praćeno jedinjenjima raličitih koncentracija.

Rezultati

Aktivacija gama- karboksilaze u jetri goveda

[0138]Nijedno od ispitivanih jedinjenja nije povećalo inkorporaciju<14>C02u osteokalcinu u većoj meri od negativne kontrole. Stoga se može zaključiti da nijedno od jedinjenja nije imalo aktivnost kao kofaktor za y-karboksilazu.

Inibicija rekombinantne humane gama- karboksilaze

[0139]Sva testirana jedinjenja pokazala su da inhibiraju enzim v-karboksilaze u prisustvu smanjenog vitamina Kl. Krive koncentracionog-odgovora pokazane su ispod. Rezultati su izraženi kao inkorporacija<14>C02nasuprot koncentraciji testiranih jedinjenja i ilustrovani su u Fig 11-16.

[0140]Rezultati su sumirani kako sledi:

Inhibitorna aktivnost test jedinjenja rangirana je prema Inhibitornoj aktivnosti

2,3-dimetoksi-l,4-naftohinon(DMK, XVI)

Vitamin K3=menadion (III)

[0141] KCAT-5C-Me (XIX))

QCAT-Me (XVIII)

[0142]Ovaj pronalazak odnosi se na sva specifična jedinjenja u primerima, za upotrebe kako je ovde opisano.

Primer 4 Osteopenija/osteoporoza nastala neaktivnošću

Šijatička Neurektomija

[0143]Osteoporoza nastala neaktivnošću indukovana je desnom šijatičkom neurektomijom (SN). Miševi su anestezirani kiseonikom i halotanom, a SN je postignuta resekcijom 3-4mm segmenta šijatičkog nerva koji se nalazi iza kuka. Dana 4 nakon operacije, miševi su tretirani bilo sa; kontrolom ili NaHinatom tokom 5dana/nedeljno tokom 2 nedelje. Tibije oba uda analizirane su mikro kompjuterizovanom tomografijom (uCT). Rezultati eksperimenata dati su u Fig 17-20.

[0144]NaHinat inhibira gubitak kosti u neurektomizovanim udovima kako je procenjeno % koštane zapremine i trabekularnim brojem.

Claims (13)

1. Jedinjenje formule (I) u kojoj:R<1>predstavlja vodonik, halogen, cijano, trifluorometil, nitro, -OR<a>,SRa,SOR<a>, -S02R<a>, - S02NRaR<b>, -NRaR<b>, - NR<a>COR<b>, -NR<a>C02R<b>, -CORa, -C02R<a>, -CONRaR<b>, ili ugljovodoničnu grupu koja obuhvata ravnolančanu, razgranatu ili cikličnu grupu od kojih svaka sadrži do 18 atoma ugljenika, ili heterocikličnu grupu koja sadrži do 18 atoma ugljenika i najmanje jedan heteroatom; R<2>predstavlja, nezavisno u svakom pojavljivanju, vodonik, halogen, cijano, trifluorometil, nitro, -OR<a>, SRa;SOR<a>;-S02R<a>;-S02NR<a>R<b>;-NRaR<b>;-NR<a>COR<b>, -NR<a>C02R<b.>-COR<a>;-C02R<a>;- CONR<a>R<b>, ili ugljovodoničnu grupu koja obuhvata ravnolančanu, razgranatu ili cikličnu grupu od kojih svaka sadrži do 18 atoma ugljenika, ili heterocikličnu grupu koja sadrži do 18 atoma ugljenika i najmanje jedan heteroatom; R<3>predstavlja ugljovodoničnu grupu koja obuhvata ravnolančanu, razgranatu ili cikličnu grupu od kojih svaka sadrži do 18 atoma ugljenika, supstituisani sa najmanje jednim ostatkom koji uključuju -C02R<a>substituent, u kojoj R<3>predstavljen sledećom Formulom (II); where nedodeljena veza predstavlja mesto vezivanja strukturnog fragmenta formule (II) za ostatak jedinjenja formule (I); R<c>, R<d>i R<e>su nezavisno izabrani zmeđu vodonika ili Ci-6alkila (koji može biti ravnolančani ili razgranati); q je 1, 2, 3 ili 4; r i s su nezavisno izabrani zmeđu 0,1, 2, 3 ili 4; -»«■-" predstavlja dvostruku vezu, a R<e>nije prisutan iznad formule (II); opciono u kojoj strukturni fragment formula (II) je izabran između: u kojoj R<a>i R<b>nezavisno predstavljaju, u svakom pojavljivanju, vodonik, ili ugljovodoničnu grupu koja obuhvata ravnolančanu, razgranatu ili cikličnu grupu od kojih svaka sadrži do 18 atoma ugljenika, ili heterocikličnu grupu koja sadrži do 18 atoma ugljenika i najmanje jedan heteroatom; i; ili njegov farmaceutski prihvatljiv solvat ili, određenije, so; za upotrebu u lečenju osteoporoze i/ili osteopenije.

2. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, u kojem: R<1>ili R<2>predstavlja vodonik, halogen, cijano, trifluorometil, nitro, -OR<a>, SR<a>, SOR<a>, -S02R<a>, - S02NRaR<b>, - NRaR<b>, -NR<a>COR<b>, -NR<a>C02R<b>, -COR<a>, -C02R<a>, -CONRaR<b>, ili ugljovodoničnu grupu koja obuhvata ravnolančanu, razgranatu ili cikličnu grupu od kojih svaka sadrži do 18 atoma ugljenika, ili heterocikličnu grupu koja sadrži do 18 atoma ugljenika i najmanje jedan heteroatom; u kojem R<a>i R<b>nezavisno predstavljaju vodonik, ili ugljovodoničnu grupu koja obuhvata ravnolančanu, razgranatu ili cikličnu grupu od kojih svaka sadrži do 18 atoma ugljenika, ili heterocikličnu grupu koja sadrži do 18 atoma ugljenika i najmanje jedan heteroatom; nje 1, 2, 3 ili 4; opciono u kojem R<1>predstavlja alkil grupu koja uključuje ravnolančane ili razgranate alkil grupe koje sadrže od 1 do 9 atoma ugljenika.

3. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, u kojem: R<1>predstavlja ugljovodoničnu grupu koja obuhvata ravnolančanu, razgranatu ili cikličnu grupu od kojih svaka sadrži do 18 atoma ugljenika, opciono u kojem R<1>predstavlja metil.

4. Jedinjenje za prema bilo kom od zahteva 1 i zahteva 3 u kojem n predstavlja 0.

5. Jedinjenje za prema bilo kom od zahteva 2 ili 3 u kojem n predstavlja 4, a R<2>, u svakom pojavljivanju, je vodonik.

6. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od prethodnih zahteva, u kojem je jedinjenje formule (I) izabrano sa liste koja obuhvata: (i) NaHinat-Me (VII); određenije, (ii) (4E)-6-(l ,4-dihidro-2-metil-l ,4-dioksonaftalen-3-il)-4-metilheks-4-enska kiselina (VIII); (iii) (2E)-4-(l ,4-dihidro-2-metil-l ,4-dioksonaftalen-3-il)-2-metilbut-2-enska kiselina (XIV).

7. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od zahteva 1 do 6 i njegov farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens, za upotrebu u lečenju osteoporoze i/ili osteopenije.

8. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od zahteva 1 do 6, ili kompozicija prema zahtevu 7, za upotrebu u prevenciji koštanog gubitka, umanjivanju koštanog gubitka, stimulisanju koštanog rasta, da proizvede povećanje gustine kosti kod pacijenta kome je to potrebno i/ili za lečenje ili prevenciju osteoporoze nastala neaktivnošću, ili za upotrebu u prevenciji ili lečenju osteoporoze i/ili osteopenije kod pacijenta: (a) preveniranjem smanjenja gustine kostiju kod pacijenta podložnog osteoporozi i/ili osteopenije; ili (b) preveniranjem ili smanjivanjem bilo kod pada gustine kostiju kod pacijenta koji pati od osteoporoze i/ili osteopenije.

9. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od zahteva 1 do 6, ili farmaceutska kompozicija prema zahtevu 7, za upotrebu kao dela kombinovane terapije zajedno sa drugim terapeutskim agensom koji se koristi u lečenju osteoporoze i/ili osteopenije.

10. Kombinovani proizvod koji obuhvata: (A) Jedinjenje formule (I), prema bilo kom od zahteva 1 do 6, i (B) drugi terapeutski agens, u kojem svaka od komponenti (A) i (B) je formulisana u mešavinu sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u lečenju osteoporoze i/ili osteopenije.

11. Farmaceutska formulacija koja uključuje Jedinjenje formule (I), prema bilo kom od zahteva 1 do 6 i drugi terapeutski agens, u mešavini sa farmaceutski oralno prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u lečenju osteoporoze i/ili osteopenije.

12. Komplet delova koji obuhvata ili: komponente: (i) farmaceutsku formulaciju koja uključuje Jedinjenje formule (I), prema bilo kom od zahteva 1 do 6, u mešavini sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem; i (ii) farmaceutsku formulaciju koja uključuje drugi terapeutski agens, u mešavini sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, koje komponente (i) i (ii) su svaka izrađena u obliku koji je pogodan za davanje sa onim drugim; ili obuhvata Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 6 ili kompoziciju prema zahtevu 7 i koagulant; za upotrebu u lečenju osteoporoze i/ili osteopenije.

13. Kombinovanje Jedinjenja formule (I) prema bilo kom od zahteva 1 do 6 ili kompozicije prema zahtevu 7 sa koagulantom, opciono u kojem je koagulant vitamin K, za upotrebu u lečenju osteoporoze i/ili osteopenije.