RS55421B1 - Virusna partikula sa fuzionim proteinom, oslobođena nakon infekcije sisarskih ćelija humanim citomegalovirusom (hcmv) i njena primena - Google Patents

Virusna partikula sa fuzionim proteinom, oslobođena nakon infekcije sisarskih ćelija humanim citomegalovirusom (hcmv) i njena primena

Info

Publication number
RS55421B1
RS55421B1 RS20161007A RSP20161007A RS55421B1 RS 55421 B1 RS55421 B1 RS 55421B1 RS 20161007 A RS20161007 A RS 20161007A RS P20161007 A RSP20161007 A RS P20161007A RS 55421 B1 RS55421 B1 RS 55421B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
viral particle
particle according
hcmv
viral
heterologous peptide
Prior art date
Application number
RS20161007A
Other languages
English (en)
Inventor
Sabine Becke
Sabine Reyda
Bodo Plachter
Original Assignee
Vakzine Projekt Man Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vakzine Projekt Man Gmbh filed Critical Vakzine Projekt Man Gmbh
Publication of RS55421B1 publication Critical patent/RS55421B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16111—Cytomegalovirus, e.g. human herpesvirus 5
    • C12N2710/16141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/16143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16111—Cytomegalovirus, e.g. human herpesvirus 5
    • C12N2710/16161—Methods of inactivation or attenuation
    • C12N2710/16162—Methods of inactivation or attenuation by genetic engineering

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

[0001]Predmetni pronalazak odnosi se na virusnu partikulu oslobođenu nakon infekcije sisarskih ćelija humanim citomegalovirusom (HCMV), naznačeno time a) da je partikula ograničena lipidnom membranom u koju su uronjeni virusni glikoproteini,
b) da partikula ne sadrži ni virusnu DNK, ni virusne kapside ; i
c) da partikula sadrži fuzioni protein koji obuhvata jedan ili više delova pp65 antigena T-limfocita i najmanje jedan heterologni peptid;
virusna partikula za primenu u postupku tretmana i/ili prevenciji bolesti, kao i primena virusne partikule ili više virusnih partikula.
[0002]Infekcija humanim citomegalovirusom (HCMV) najčešći je uzrok bolesti pacijenata nakon transplantacije organa ili hematopoetskih matičnih ćelija [1-9]. Uz to, u zemljama zapadne hemisfere transmisija virusa tokom trudnoće jedan je najčešćih uzroka trajnih poremećaja kod novorođenih beba [10; 11]. Stoga je razvoj vakcine protiv HCMV virusa definisan kao jedan od prioritetnih ciljeva [12].
[0003]Jedna od ciljeva ove vakcine bila bi prevencija infekcija majke ili, makar smanjenje prenosa virusa kroz posteljicu, sa majke na bebu. Za postizanje ovog cilja suštinski je važan nastanak specifičnih neurtrališućih antitela. Suprotno tome, zaštita od reaktivacije virusa i kontrola infekcije kod primalaca nakon transplantacije može se postići indukcijom ćelijske imunosti, konkretno reakcijama koje uključuju CD8 T limfocite [13-15]. Terapeutska vakcinacija primalaca transplantata usmerena na reakciju limfocita, zajedno sa adoptivnim transferom T limfocita, što predstavlja poželjan način da se ublaže posledice virusne reaktivacije HCMV virusa u post-transplantacionom periodu [16].
[0004]Uprkos brojnim potencijalno korisnim pristupima u razvijanju vakcine protiv HCMV, još uvek nije dostupna licencirana formulacija takve vakcine [10;17-19]. Iz brojnih studija koje se bave istraživanjem imunskih efektora, pokazalo se da idealna vakcina protiv HCMV treba da indukuje i humoralnu reakciju antivirusnih antitela i ćelijsku reakciju T limfocita [10;17;18;38]. Pitanje je međutim, da li će takva univerzalna vakcina ikada biti uspostavljena. Jedna nedavna klinička studija pokazala je da se replikoni alfa-virusa koji eksprimiraju HCMV proteine dobro podnose i da indukuju stabilne ćelijske i humoralne odgovore [19]. Druga studija, u kojoj je prečišćeni gB primenjen kao vakcina, postigla je ohrabrujuće rezulatate, jer je indukovan značajan nivo antitela protiv HCMV virusa [18]. Ove vakcine predstavljaju nadu da će njihova primena u prevenciji kongenitalne infekcije HCMV virusom uskoro biti moguća.
[0005]U prethodnim studijama na miševima, pokazalo se da su takozvana zgusnuta telašca, koja su ovde označena oznakom DB, neočekivano imunogena [20]. Kao što je načelno poznato u stanju tehnike, a ovim patentom i primenjeno, zgusnuto telašce je virusna čestica oslobođena nakon infekcije sisarskih ćelija humanim citomegalovirusom (HCMV), naznačeno time a) da je partikula okružena lipidnom membranom sa uronjenim virusnim glikoproteinima, b) da partikula ne sadrži ni virusnu DNK, ni kapside.
[0006]Poželjno je da zgusnuta telašca uključuju i fuzioni protein koji sadrži jedan ili više delova antigena pp65 T-limfocita i najmanje jedan heterologni peptid. Zgusnuta telašca i njihovo dobijanje opisani su u međunarodnoj patentnoj prijavi WO 00/53729.
[0007]U svetlu neočekivane imunogenosti, bilo je mnogo pokušaja da se DB primeni u razvijenju vakcine protiv HCMV. Nedavna istraživanja su pokazala da se antigeni potencijal DB može modifikovati [21;22]. To se postiže ekspresijom fuzionog proteina, koji se sastoji od jedne glavne DB-komponente pp65 i heterolognog MHC-I prezentujućeg peptida iz virusnog IE1-proteina, u rekombinantnom HCMV. Tako nastaje rekombinantni DB (recDB) u inficiranim humanim fibroblastima prepucijuma (HFF). Ovakvi recDB molekuli, koji u sebi sadrže fuzioni protein, oslobođeni su iz inficiranih HFF ćelija [21]. Primena ovih partkula kod HLA-A2 transgenih HHD-miševa indukovala je odgovor CD8+ T limfocita, što je utvrđeno nakon in vitro peptidne stimulacije izolovanih T ćelija [22]. Međutim, T limfociti specifično usmereni na HCMV ne mogu se odmah detektovati kada se frakcija CD8+ T ćelija testira direktno ex-vivo primenom Elispot analize. Ovo je ukazalo da, iako je u principu pogodna za terapeutsku primenu, aktivacija izazvana ovim partikulama nije onolika koliko bi bilo poželjno. Osim toga, izolovanje recDB iz inhiciranih HFF kultura bilo je sa niskim prinosom.
[0008]Stoga je jedan od ciljeva ovog pronalaska bio da se obezbedi virusnu partikulu pogodnu da se koristi kao vakcina, naznačenu time da partikula sadrži fuzioni protein koji se uključuje jedan ili više delova pp65 antigena T limfocita i najmanje jedan heterologni peptid, i naznačeno time da je takva vakcina sposobna da izazove imunski odgovor na najmanje jedan heterologni peptid.
[0009]Dodatni zadatak ovog pronalaska bio je da se obezbedi virusnu partikulu, naznačenu time da sadrži fuzioni protein sa najmanje jednim ili više delova pp65 antigena T limfocita i najmanj e jednim heterolognim peptidom i naznačeno time da je sposobna da indukuje formiranje specifičnih neutrališućih antitela i/ili da indukuje odgovor CD8+ T limfocita.
[0010]Naredni zadatak ovog pronalaska bio je da se obezbedi virusno telašce, naznačeno time da sadrži fuzioni protein koji uključuje jedan ili više delova antigena pp65 T limfocita i najmanje jedan heterologni peptid i naznačeno time da se ono može dobiti sa visokim prinosom.
[0011]Ovi i drugi ciljevi rešeni su predmetnim pronalaskom i pripadajućim zahtevima. Poželjni oblici izvođenja mogu se izvesti iz pripadajućih zahteva.
[0012]Konkretnije, problem koji je u osnovi predmetnog pronalaska rešen je prvim aspektom koji je istovremeno i prvi oblik izvođenja prvog aspekta, virusnom partikulom koja se oslobađa nakon infekcije sisarskih ćelija humanim citomegalovirusom (HCMV), pri Čemu je virusna partikula zgusnuto telašce, naznačeno time daje
a) partikula okružena lipidnom membranom u koju su uronjeni virusni glikoproteini,
b) partikula ne sadrži ni virusnu DNK ni kapside; i
c) partikula sadrži fuzioni protein koji se sastoji od jednog ili više delova pp65 antigena T
limfocita i najmanje jednog antigenog heterolognog peptida,
i naznačeno time da je najmanje jedan heterologni peptid insertovan na amino-kiselinskoj poziciji W175 ili A534, amino-kiselinske sekvence antigena pp65 T limfocita, čija je sekvenca prikazana u SEQ ID NO: 1.
[0013]U drugom obliku izvođenja prvog aspekta, koje je takođe oblik izvođenja prvog oblika izvođenja prvog aspekta, najmanje jedan antigeni heterologni peptid je insertovan na amino-kiselinskoj poziciji W175, amino-kiselinske sekvence pp65 antigena T limfocita.
[0014]U trećem obliku izvođenja prvog aspekta, koje je takođe oblik izvođenja prvog i drugog oblika izvođenja prvog aspekta, amino-kiselinska sekvenca pp65 antigena T limfocita odgovara amino-kiselinskoj sekvenci saglasno SEQ ID NO: 1.
[0015]U četvrtom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je takođe oblik izvođenja prvog, drugog i trećeg oblika izvođenja prvog aspekta, partikula ima visok antigeni potencijal.
[0016]U petom obliku izvođenja prvog aspekta, koje takođe oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg i četvrtog oblika izvođenja prvog aspekta, ova partikula sposobna je da indukuje formiranje neutrališućih antitela.
[0017]U šestom obliku izvođenja prvog aspekta, koje je takođe oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog i petog oblika izvođenja prvog aspekta, partikula je sposobna da indukuje odgovor CD 8+ T limfocita.
[0018]U sedmom obliku izvođenja prvog aspekta, koje je takođe oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog i šestog oblika izvođenja prvog aspekta, najmanje jedan antigeni heterologni peptid je iz klase MHC-I prezentujućih antigena.
[0019]U osmom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je takođe oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog i sedmog oblika izvođenja prvog aspekta, najmanje jedan antigeni heterologni peptid sadrži ili nastaje formiranjem od jednog ili više proteina koji je/su različiti od pp65.
[0020]U devetom obliku izvođenja prvog aspekta, koje je istovremeno oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog i osmog oblika izvođenja prvog aspekta, najmanje jedan antigeni heterologni peptid sadrži jedan ili više delova HCMV glikoproteina.
[0021]U desetom obliku izvođenja prvog aspekta, koje je takođe oblik izvođenja drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog, osmog i devetog oblika izvođenja prvog aspekta, najmanje jedan antigeni heterologni peptid sadrži jedan ili više delova HCMV glvcoprotein gB.
[0022]U jedanaestom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog, osmog i devetog oblika izvođenja prvog aspekta, najmanje jedan antigeni heetrologni peptid sadrži jedan ili više delova HCMV glikoproteina gH.
[0023]U dvanaestom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog, osmog i devetog oblika izvođenja prvog aspekta, najmanje jedan antigeni heterologni peptid sadrži ili se sastoji od najmanje dva HCMV glikoproteina, koji su varijante konkretnog glikoproteina iz različitih HCMV sojeva.
[0024]U trinaestom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno oblik izvođenja dvanaestog oblika izvođenja prvog aspekta, jedna, od najmanje dve varijante konkretnog glikoperoteina, jeste varijanta HCMV Towne soja, dok je druga, od najmanje dve varijante konkretnog glikoproteina, varijanta HCMV Ad 169 soja.
[0025]U četrnaestom obliku izvođenja prvog aspekta, koje je istovremeno i oblik izvođenja dvanaestog i trinaestog oblika izvođenja prvog aspekta, glikoprotein je gB protein HCMV.
[0026]U petnaestom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je takođe oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog i osmog oblika izvođenja, najmanje jedan antigeni heterologni peptid obuhvata ili jeste jedan ili više delova proteina IE1 HCMV.
[0027]U šesnaestom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je takođe oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog i osmog oblika izvođenja prvog aspekta, naznačeni najmanje jedan antigeni heterologni peptid sadrži ili jeste jedan ili više delova HCMV glikoproteina i jedan ili više delova HCMV proteina IE1.
[0028]U sedamnaestom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno i oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog i osmog oblika izvođenja prvog aspekta, naznačeni najmanje jedan antigeni heterologni peptid jeste jedan ili više delova proteina nekog humanog patogena koji se razlikuje od HCMV.
[0029]U osamnaestom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno oblik izvođenja sedamnaestog oblika izvođenja prvog aspekta, protein koji je deo humanog patogena različitog od HCMV, jeste protein koji indukuje nastanak citotoksičnih T limfocita nakon prirodnih infekcija čoveka nekim humanim patogenom koji se razlikuje od HCMV.
[0030]U devetnaestom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno oblik izvođenja osamnaestog oblika izvođenja prvog aspekta, humani patogen različiti od HCMV jeste humani patogen izabran iz grupe koja obuhvata HIV-1, HBV, HCV i grip.
[0031]U dvadesetom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog, osmog, devetog, desetog, jedanaestog, dvanaestog, trinaestog, četrnaestog, petnaestog, šesnaestog, sedamnaestog, osamnaestog i devetnaestog oblika izvođenja prvog aspekta, naznačeni fuzioni protein je fuzioni protein koji sadrži celu dužinu pp65 antigena T limfocita i najmanje jedan antigeni heterologni peptid.
[0032]U dvadesetprvom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno i oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog, osmog, devetog, desetog, jedanaestog, dvanaestog, trinaestog, četrnaestog, petnaestog, šesnaestog, sedamnaestog, osamnaestog, devetnaestog i dvadesetog oblika izvođenja prvog aspekta, virusna partikula ili više virusnih partikula namenjeno je proizvodnji medikamenta za tretman i/ili prevenciju bolesti.
[0033]U dvadesetdrugom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno i oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog, osmog, devetog, desetog, jedanaestog, dvanaestog, trinaestog, četrnaestog, petnaestog, šesnaestog, sedamnaestog, osamnaestog, devetnaestog i dvadesetog oblika izvođenja prvog aspekta, virusna partikula i više takvih partikula namenjeno je za primenu u postupku terapije i/ili prevencije bolesti.
[0034] U dvadesettrećem obliku izvođenja prvog aspekta predmetnog pronalaska, koji je istovremeno oblik izvođenja dvadesetprvog i dvadesetdrugog oblika izvođenja prvog aspekta, naznačena bolest je neka bolest koja se može tretirati ili sprečiti formiranjem neutrališućih antitela nasuprot najmanje jednog heterolognog peptida ili njegovog derivata, ili indukcijom odgovora CD8+ T limfocita na najmanje jedan antigeni heterologni peptid ili njegov derivat.
[0035] U dvadesetčetvrtom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno oblik izvođenja prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog, osmog, devetog, desetog, jedanaestog, dvanaestog, trinaestog, četrnaestog, petnaestog, šesnaestog, sedamnaestog, osamnaestog, devetnaestog i dvadesetog oblika izvođenja prvog aspekta, virusna partikula ili više takvih partikula namenjeno je za proizvodnju vakcine.
[0036] U dvadesetpetom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno oblik izvođenja dvadesetčetvrtog oblika izvođenja prvog aspekta, vakcina je namenjena za terapiju i/ili prevenciju HCMV infekcije.
[0037] U dvadesetšestom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno i oblik izvođenja dvadesetčetvrtog oblika izvođenja prvog aspekta, vakcina je namenjena terapiji i/ili prevenciji sporednih efekata transplantacije.
[0038] U dvadesetsedmom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno oblik izvođenja dvadesetšestog oblika izvođenja prvog aspekta, naznačena transplantacija se odnosi na transplantaciju organa ili hematopoetskih matičnih ćelija.
[0039] U dvadesetosmom obliku izvođenja prvog aspekta, koji je istovremeno i oblik izvođenja dvadesetšestog i dvadesetsedmog oblika izvođenja prvog aspekta, naznačeni nus-efekti uzrokovani su infekcijom ili se javljaju uporedo sa infekcijom HCMV virusom.
[0040] Problem u osnovi predmetnog pronalaska koji je rešen drugim aspektom, koji je istovremeno prvi oblik izvođenja drugog aspekta, primenom virusne partikule saglasno prvom, drugom, trećem, četvrtom, petom, šestom, sedmom, osmom, devetom, desetom, jedanaestom, dvanaestom, trinaestom, četrnaestom, petnaestom, šesnaestom, sedamnaestom, osamnaestom, devetnaestom i dvadesetom obliku izvođenja prvog aspekta, za proizvodnju medikamenta namenjenog terapiji i/ili prevenciji bolesti ili sporednih efekata, pri čemu se bolest ili nus-efekti odnose na bolest ili na nus-efekte kao što je opisano u svakom od prethodnih i svim prethodnim oblicima izvođenja svakog i svih aspekata.
[0041]Problem u osnovi predmetnog pronalaska rešen trećim aspektom, koji je istovremeno prvi oblik izvođenja trećeg aspekta, primenom virusne partikule saglasno svakom od prvog, drugog, trećeg, četvrtog, petog, šestog, sedmog, osmog, devetog, desetog, jedanaestog, dvanaestog, trinaestog, četrnaestog, petnaestog, šesnaestog, sedamnaestog, osamnaestog, devetnaestog i dvadesetog oblika izvođenja prvog aspekta, za proizvodnju vakcine namenjene terapiji i/ili prevenciji bolesti ili sporednih efekata, pri čemu se bolest ili nus-efekti odnose na bolest ili nus-efekte kao što je opisano u svakom i svim prethodnim oblicima izvođenja u svakom i svim aspektima.
[0042]Na osnovu saznanja daje mesto insercije sekvence heterolognog peptida u sekvencu pp65 ključno za postizanje efikasnosti formiranja DB, pronalazači su neočekivano utvrdili da fuzioni protein koji se nalazi u virusnim partikulama predmetnog pronalaska i koji sadrži jedan ili više delova pp65 antigena T limfocita i najmanje jedan heterologni peptid, obezbeđuje DB poželjnih odlika samo ukoliko je heterologni peptid insertovan na amino-kiselinsku poziciju W 175 ili na amino-kiselinsku poziciju A534 amino-kiselinske sekvence pp65. Pogodne odlike ovih fuzionih proteina obuhvataju indukciju odgovora CD8+ T limfocita na heterologni peptid i visok prinos produkcije DB. Uz to, ova dva lokusa u pp65 omogućavaju efikasno formiranje i oslobađanje DB kojs sadrži navedene fuzione proteine. Odgovor CD8+ T limfocita na ova dva fuziona proteina aktivira odgovor CD8 T ćelija, koji se lako može detektovati ex vivo Elispot analizama frakcija CD8 T limfocita.
[0043]Antigen pp65 T limfocita, koji se u stanju tehnike označava i oznakom UL 83, opisan je od strane Pande, H. et al. (Pande, H, Lee, T.D., Churchill, M.A. and Zaia, J.A, "Structural analvsis of a 64-kDa major structural protein of human cvtomegalovirus (Towne): identification of a phosphorvlation site and comparison to pp65 of HCMV (AD169); Virologv 178 (1), 6-14
(1990)).
[0044]Malo se zna o funkciji pp65 i o domenima važnim za funkciju i pravilno oblikovanje ovog proteina. Usled toga, nisu poznati argument za selekciju mesta za insertovanje koje bi očuvalo funkcionalnost relevantnih regiona unutar pp65. Izbor mesta insercije izveden je tako da se izbegnu konzervirani regioni beta-herpesvirusa, kao i regioni odgovorni za uspostavljanje pdgovarajuće sekundarne strukture (a-zavojnica i P-ploča). Pretpostavljeno je, naime, da su konzervirani regioni, kao i regioni a-zavojnice i P-ploče, strukturno i funkcionalno važni i da ih ne treba oštetiti. Međutim većina načinjenih mutanata shodno ovoj strategiji nije dovela do efikasnog formiranja recDB, što ukazuje da takva strategija nije bila efikasna u identifikaciji odgovarajućih mesta insercije. U tom svetlu pronalazači su neočekivano utvrdili da su mesta insercije u RV-SB3 i RV-SB6 adekvatnija za formiranje recDB.
[0045]Kao što je prikazano u predmetnoj aplikaciji, egzogeno uvođenje himernog pp65 pomoću DB-SB3 i DB-SB6 u HFF uslovilo je efikasnu prezentaciju pp65NLV i IE1TMY. Primena ovih partikula kod HLA-A2 transgenih HHD miševa indukovala je reakciju CD8 T limfocita na oba peptida, što se može detektovati nakon in-vitro ekspanzije ovih T limfocita poznatim peptidom. Slični rezultati dobijeni su u prethodnim eksperimentima, uz korišćenje recDB sa insercijom IEl-peptida na poziciji 548 pp65 [21;22]. Međutim, nakon primene ovog poslednjeg recDB, CD8 T limfociti razvijeni na ove peptide nisu se mogli detektovati ex vivo, što ukazuje da je indukcija bila neefikasna. Suprotno tome, primena DB-SB3 uslovila je merljivu pojavu CD8 T limfocita specifičnih na pp65NLV i na IE1TMY. To ukazuje da su takva recDB visoko imunogena i da indukuju odgovor T limfocita i na endogene i na heterologne peptide.
[0046]U jednom obliku izvođenja pronalaska, heterologni peptid je neki antigeni peptid i poželjnije, neki antigeni heterologni peptid.
[0047]U jednom obliku izvođenja predmetnog pronalaska, heterologni peptid razlikuje se od IE1 proteina HCMV virusa ili od nekog njegovog dela.
[0048]U jednom obliku izvođenja predmetnog pronalaska, dužina peptida je 4 to 40 amino-kiselinskih ostataka, poželjno oko 6 do 25 amino-kiselinskih ostataka i poželjnije, oko 8 do 15 amino-kiselinskih ostataka i najpoželjnije od 8-12 amino-kiselinskih ostataka.
[0049]U značenju koje se najčešće primenjuje, bilo koji izraz kojim se precizira limit opsega, kao što su na primer, "od 1 do 5" odnosi se na sve cele brojeve od 1 do 5, odnosno, 1, 2, 3, 4 i 5. Drugim rečima, svaki opseg koji je definisan pomoću dva cela broja obuhvata oba cela broja koja definišu taj limit i sve brojeve koji su obuhvaćeni ili se nalaze unutar naznačenog limita.
[0050]U jednom obliku izvođenja predmetnog pronalaska, antigenost virusne partikule opisane pronalaskom veća je od antigenosti zgusnutih telašaca poznatih u prethodnom stanju tehnike, konkretnije od onih zgusnutih telašaca koja sadrže neki fuzioni protein koji obuhvata celu dužinu pp65 antigena T limfocita.
[0051]U jednom obliku izvođenja predmetnog pronalaska formiranje virusne partikule opisane ovim pronalaskom veće je od od formiranja zgunsutih telašaca opisanih u [25].
[0052]Stručnjaku je poznati da je protein IE1 HCMV virusa takođe poznat pod oznakom ppUL123.
[0053]U stanju tehnike je takođe poznato da je fuzioni protein koji se nalazi u partikulama u poželjnom obliku izvođenja neki himerni protein.
[0054]U tekstu koji sledi predmetni pronalazak će biti ilustrovan slikama i primerima, iz kojih se mogu saznati druge odlike, osobine i oblici izvođenja, naznačeno time da
SI. 1 prikazuje rezultat indirektne imunofluorescentne analize HFF ćelija, inficiranih rekombinantnim HCMV virusima;
SI. 2 prikazuje rezultat imunoblot analize (A), rezultat kvantitativne DNA-PCR analize, u vidu dijagrama koji ukazuje na broj genomskih kopija/ml u funkciji vremena (d.p.i) za različite fuzione proteine (B), kao i rezultat dodatne imunoblot analize (C);
SI. 3 prikazuje rezultat IFN-y-Elispot analize, u vidu dijagrama koji pokazuje procenat aktiviranih CD8+ ćelija za različite fuzione proteine, primenom pp65NLV-CTL (A) ili IE1TMY-CTL (B) kao reaktivne ćelije;
SL. 4 prikazuje rezultat lFN-y-Elispot analize, u vidu dijagrama koji pokazuje procenat aktiviranih CD8+ ćelija za različite fuzione proteine, primenom RMA-S ćelija kao stimulatornih ćelija; i
SI. 5 prikazuje amino-kiselinsku sekvencu pune dužine pp65 (SEQ ID NO: 1)
[0055]SI. 1 prikazuje rezultat indirektne imunofluorescentne analize HFF ćelija, inficiranih rekombinantnim HCMV virusima. Ćelije su inficirane naznačenim virusima tokom četiri dana, a zatim su pripremljene za fluorescentnu analizu. Konfiguracija rekombinantnog pp65, koju eksprimira svaki virus prikazana je na mikrografijama u donjem delu slike. Označena je N-terminalna amino-kiselinska sekvenca pp65, koja bočno ograničava mesto insercije.
[0056]SI. 2 prikazuje ekspresiju pp65-fuzionih proteina, replikaciju rekombinantnih virusa i efikasnost pakovanja fuzionih proteina u virione i DB. (A), Imunoblot analizu posle 2- i 4-dana od infekcije HFF ćelija. Ćelije su inhicirane pri m.o.i. od 2 i prikupljene su u naznačeno vreme za analizu. Filteri su inkubirani u prisustvu monoklonskih antitela specifičnih pp65, 65-33. Količina proteina u svakoj traci je normalizovana na količinu p-aktina. (B), Kvantitiativna DNA-PCR analiza virusnog genoma u supernatantu kulture inficiranih HFF ćelija. Ćelije su inficirane pri m.o.i. od 10 genoma/ćeliji. Supernatanti kultura su prikupljeni u naznačeno vreme i zamrznuti. PCR analiza je sprovedena paralelno u istom eseju. (C), Imunoblot analiza pp65, spakovanog unutar recDB ili viriona. Ćelije su inficirane rekombinantnim virusima ili divljim tipom RV-HB5, tokom 6-7 dana. Supernatanti su centrifugirani u gradijentu koncentracije glicerol-tartarata, kako bi se prikupili virioni i frakcije DB. Dobijene frakcije su analizirane imunoblot analizom, uz korišćenje monoklonskog antitela 65-33 ili, u funkciji internog standarda, primenom monoklonskog antitela na virusni gB.
[0057]SI. 3 prikazuje rezultat IFN-y-Elispot analize MHC-I prezentacije HLA-A2 pozitivnim HFF ćelijama, tretiranim pomoću recDB. Ćelije su tretirane naznačenim DB, a zatim se korišćene kao stimulatorne ćelije u IFN-y-Elispot analizi, primenom pp65NLV-CTL (A) ili IE1TMT-CTL (B) kao reagujućih ćelija.
[0058]SI. 4 prikazuje rezultat ex vivo IFN-y-Elispot analize CD8+ obogaćenih ćelija slezine izolovanih iz HHD miševa, imunizovanih sa recDB. RMA-S ćelije, tretirane poznatim peptidima korišćene su kao stimulatorne ćelije. Stubići prikazuju učestalost CD8 T limfocita koji oslobađaju IFN-y, što je utvrđeno linearnom regresionom analizom, koju su opisali Bohm et al
[37]. Stubići greške ukazuju na 95% interval sigurnosti.
Primer1:Material i metode
1. Ćelije
[0059]Primarni fibroblasti humanog prepucijuma, CTL ćelijska linija i T2 ćelije gajene su kao što je ranije opisano [23]. RMA-S ćelije [24] gajene su u RPMI 1640 medijumu (PAA Laboratories, Colbe, Germanv), obogaćenom 10 % FCS, 2 mM L-glutaminom, 50 mg gentamicinom L-l i 5 mM P-merkaptoetanolom.
2. Plazmidi i virusi
Za mutagenezu virusne DNK upotrebi)en je bakterijski artificijelni hromozom HCMV (BAC) pHB5 [25]. Mutageneza pHB5 izvedena je saglasno proceduri galK pozitivne/negativne selekcije
[26], kao što je ranije opisano [21]. Sekvenca DNK insertovana u otvoreni okvir čitanja UL83, kodirala je HLA-A2 prezentujući peptid IE1TMY [IE1297-305], oivičen dodatnim amino-kiselinama, kako bi se omogućilo precizno isecanje proteazama. Dodatni polipeptid fuzionisan sa pp65 koji kodira SDACMMTMYGGTSLLSEFC, sa HLA-A2 prezentujućim nanopeptidom predstavljen je podvučenim slovima. Virusna rekonstitucija iz BAC klonova obavljena je kako je opisano u Hobomi sar. [27].
[0060]Generisani su virusni klonovi, titrovani su kvantifikovani ili brojanjem IE1 pozitivnih ćelija, 48 sati nakon inokulacije ili primenom TaqMan DNK PCR analize vanćelijskog virusnog genoma, kao što je opisano [28]. HFF su inficirane nakon 7 dana. Insercija pri m.o.i od 0.1 uslovila je ugrubo 10 unutarćelijskih virusnih genoma.
3. Prečišćavanje zgusnutih telašaca, indirektna imunofluorescentna analiza i imunobloting
[0061]DB su prečišćeni iz inficiranih HFF u kasnoj fazi, ultracentrifugiranjem na gradijentu glicerol-tartarata, kao što je prvobitno objavljeno od strane Irmiere i Gibson [29] i prethodno detaljno opisano [20]. Indirektna imunofluorescentna analiza sprovedena je kao što je opisano
[30]. Antigen pp65 obeležen je primenom monoklonskog antitela 65-33 (ljubazan poklon W. Britt, Universitv of Alabama, Birmingham, Alabama, USA) i FITC- konjugovanih sekundarnih antitela (DAKO, Hamburg, Germanv). Jedra su kontrastirana DAPI fluorescentnom bojom. Podaci iz imunofluorescentnih analiza prikupljeni su pomoću Axiophot-l mikroskopa (Zeiss) pri uvećanju od 1000 puta. Za imunoblot analizu, proteinski uzorci su denaturisani u redukujućim uslovima, razdvojeni SDS-PAGE elektroforezom i transferirani na nitrocelulozne membrane (Millipore, Schvvalbach, Germanv), elektroblot procedurom, na 400 mA tokom 1 h 45 min. Potporne membrane su zatim inkubirane sa antitelima specifičnim na pp65, na P-aktin (Rockland, Gilbertsville, PA, USA) i na glikoprotein B (gB) [31]). Western blot membrane su inkubirane sa anti-mišjim ili anti-zečjim sekundarnim antitelima, konjugovanim sa ALEXA Fluor 680 (Tnvitrogen, Karlsruhe, Germanv) ili IR bojom 800 (Rockland). Transferirani proteini su detektovani i kvantifikovani pomoću Odyssey infracrvenog sistema za detekciju (LI-COR, Lincoln, Nebraska, USA).
2.4 Interferon y - Elispot esej HFF ćelija inkubiranih sa recDB
[0062]Enzimski-vezan imunospot esej (Elispot) sproveden je kao što je prethodno opisano [23;32]. U analizama su korišćene CTL linije specifične za HLA-A0201 (A2), restriktovane peptidima poreklom od HCMV, pp65495-503 (pp65NLV-CTL) [33;34] i IE1297-305 (IE1TMY-CTL) [35]. CTL linije su generisane imunizacijom HLA-A2/huCD8 dvostruko transgenih (tg) miševa [23].
2.5 Mišji HLA-A2 transgeni model
[0063]Transgeni HLA-A2 miševi (HHD miševi, [36]), starosti 8 do 12 nedelja, imunizovani su intraperitonealnom injekcijom 6 ug DB od RV-HB5 (DB-HB5), RV-SB3 (DB-SB3) ili RV-SB6 (DB-SB6), sa ili bez PBS. Limfociti su dobijeni iz slezina, 7 dana nakon imunizacije. CD8 T limfociti su obogaćeni MACS sortiranjem, a broj ćelija koje oslobađaju IFN-y analiziran je pomoću Elispot, direktno ex vivo, primenom peptida izolovanog iz RMA-S HHD ili T2 stimulatonih ćelija. U ovoj postavci korišćene su Elispot ploče od Millipore (Schwalbach/Ts., Germanv). Elispot esej je sproveden prema uputstvu proizvođača. Učestalost aktiviranih ćelija određena je linearnom regresionom analizom, kao što je opisano kod Bohm i sar. [37].
Primer 2: Selekcija insercionog mesta kritična je formiranje citoplazmatskih DB
[0064] Kao što će biti ilustrovano ovim primerom, selekcija mesta za insertovanje heterolognog peptida kritična je za formiranje citoplazmatskih DB.
[0065] Unapređivanje potencijala vakcine suštinski zavise od prinosa za dalje povećanje efikasnosti. U prethodnom radu obezbeđeni su dokazi da se antigeni sastav DB može modifikovati, fuzinisanjem heterolognog peptida sa proteinom pp65 poreklom iz rožne prevlake
[21]. Međutim, ćelije inficirane odgovarajućim rekombinantom HCMV oslobodile su malu količinu recDB. Stoga je testirana hipoteza da će insercija heterologne sekvence, na primer amino-kiselinske sekvence heterolognog peptida, na drugu poziciju unutar sekvence pp65, poboljšati prinos recDB.
[0066] Za inserciju je izabrano pet mesta na različitim delovima molekula (SI. 1). Insertovani peptid se sastojao od sekvence od 20 amino kiselina koja obuhvata HLA-A2 prezentujući nonapeptid TMYGGISLL (IE1TMY) koji je deo IE1 proteina HCMV virusa [35]. Modifikacijom HCMV BAC plazmida pHB5 pomoću galK-zasnovane procedure selekcije [21;22] generisani su rekombinantni virusi [25]. Tačnost rekombinantnih BAC-plazmida analizirana je digestijom restrikcionim endonukleazama i sekvencioniranjem redosleda nukleotida na mestu insercije (podaci nisu prikazani). Rekonstitucija rekombinantnih virusa je neposredno izvedena transfekcijom BAC-plazmida u HFF. U tako dobijenim virusima ispitano je formiranje DB. Važna odlika infekcije HFF ćelija HCMV virusom jeste akumulacija DB u citoplazmi, što se može videti indirektnom imunofluorescentnom analizom (IFA). Saglasno tome, HFF ćelije su inficirane novogenerisanim mutantima, a zatim je sprovedena IFA analiza, 4 dana nakon infekcije (d.p.i.), primenom antitela specifičnih prema pp65 (SLI). Samo je u ćelijama koje su inficirane mutantima RV-SB3 i RV-SB6 primećeno prisustvo formiranih DB u citoplazmi, u količina koja je uporediva sa nivoom formiranih DB u ćelijama inficiranim parentalnim virusom. Nasuprot tome, formiranje DB nije uočeno u ćelijama inficiranim RV-SB2, RV-SB4 i RV-SB5 mutantima. Treba naglasiti da je u ovim ćelijama poremećena nuklearno-citoplazmatska translokacija pp65, koja se tipično uočava u kasnim fazama infekcije HFF ćelija. Ovi rezultati ukazuju da je selekcija mesta na kojem će biti insertovana sekvenca heterolognog peptida kritična za formiranje recDB. Na osnovu rezultata IFA analize, za dalje analize su izabrani mutanti virusa RV-SB3 i RV-SB6.
Primer 3: Upoređivanje RV-SB3 i RV-SB6 sa parentalnim sojevima virusa
[0067] U ovom primeru će biti prikazano da su rekombinantni sojevi RV-SB3 i RV-SB6, u pogledu ekspresije pp65, oslobađanja viriona i pakovanja pp65 u partikule, uporedivi su sa parentalnim sojem.
[0068] Nivo ekspresije pp65 u HFF ćelijama inficiranim RV-SB3, odnosno, RV-SB6 mutantima testiranje imunoblot analizom. Ćelije su inficirane mutiranim sojevima ili parentalnim RVHB5 sojem tokom dva, odnosno, četiri dana. Ćelijski lizati su podvrnuti kvantitativnoj imunoblot analizi, primenom infracrvenog sistema za vizuelizaciju Odyssey. Količina aktina u ćeliji korišćena je kao unutrašnji standard (SI. 2A). Dva dana nakon infekcije (2 d.p.i), nivo ekspresije pp65-fuzionih proteina u ćelijama inficiranim RV-SB3, odnosno, RV-SB6 bio je smanjen u odnosu na nivo pp65 u ćelijama inficiranim RV-HB5. Međutim, 4 dana nakon infekcije, nivoi oba fuziona proteina bili su čak i veći od nivoa pp65 u ćelijama inficiranim RV-HB5. Ovaj rezultat je ukazao daje u ćelijama infiiranim mutantima RV-SB3 i RV-SB6, sintetisana dovoljna količina proteina sa koja uslovljava sintezu recDB.
[0069] Da bi se testirao kapacitet rekombinantnih sojeva da se replikuju u HFF, ove ćelije su inficirane pri m.o.i. od 0.1, što je dovelo do nastanka 10 genomskih kopija/ćeliji, a supernatant kulture je prikupljan jednom dnevno tokom 7 dana posle infekcije. Virusna DNK oslobođena u supernatant kvantifikovana je primenom kvantitativne PCR analize (Fig.2B). Pokazalo se da su i RV-SB3 i RV-SB6 sposobne da se replikuju u istom nivou kao i parentalni RV-HB5.
[0070] Pakovanje fuzionih proteina konačno je analizirano imunoblot analizom prečišćenih viriona i DB, prikupljenih iz supernatanta inficiranih HFF ćelija, cenrtifugiranjem na gradijentu glicerola. U ovom slučaju, normalizacija je izvršena pomoću glikoproteina B (gB) iz virusnog omotača, kao unutrašnjeg standarda. Između rekombinantnih i parentalnih sojeva nisu utvrđene razlike u pogledu pakovanju pp65 u virione ili DB (Fig. 2C). Ovi rezultati zajedno ukazuju da su i RV-SB3 i RVSB6 uporedivi sa RV-HB5 u pogledu ekspresije i pakovanja pp65, kao i u pogledu replikacije u inficiranim ćelijama.
Primer 4: Ekspresija pp65NLV i IE1TMY u HFF ćelijama tretiranim DB-SB3 ili DB-SB6
[0071] Ovaj primer pokazuje da su i pp65NLV i IE1TMY prezentovane od strane HFF ćelija tretiranih DB-SB3 ili DB-SB6.
[0072] Jedan cilj primene recDB u razvoju vakcine bio bi da se pojača rekonstitucija citotoksičnih T limfocita kod pacijenata nakon transplantacije. Poznato je da su ove ćelije od presudne važnosti u sprečavanju reaktivacije virusa i bolesti ([13;15], pogledati pregledni članak
[16]). Stoga je provereno da li se recDB sposobne da uvedu pp65NLV poreklom od pp65 i IE1TMY poreklom od IE1 u put prezentacije MHC-I u HFF ćelijama.
[0073] Saglasno tome, ćelije su tretirane recDB, a zatim su testirane pomoću interferon-y Elispot analize (SI. 3). Kao responder ćelije čiji se odgovor meri korišćeni su CTL klonovi na oba peptida (pp65NLV-CTL; IE1TMY-CTL) [23]. I ćelije tretirane DBSB3 i DB-SB6 prezentovale su IE1TMY i pp65NLV. Prezentacija pp65NLV kod recDB bila je uporediva sa wt-DB, što je ukazalo da insercija sekvence poreklom 1E1 nije umanjila prezentaciju pp65 u HFF ćelijama. Tretman ćelija DB-SB3 izazvao je odgovor IE1TMY-CTL sličnog nivoa kao što je specifičan odgovor na pp65. Međutim, tretman ćelija sa DB-SB6 izazvao je značajno smanjenje broja pozitivnih spotova u IE1-specifičnom testu. To je ukazalo da je sposobnost HFF da prezentuje IEl-peptid nakon inkubacije DB zavisi od mesta na kojem se ugradio pp65.
Primer 5: Imunizacija rekombinantnim DB (recDB) dovodi do pojave IElTMY-specifičnih i pp65NLV-specifičnih CD8 T limfocita
[0074] Ovaj primer pokazuje da imunizacija rekombinantnim DB (recDB) aktivira značajan broj IElTMY-specifičnih i pp65NLV-specifičnih CD8 T ćelija.
[0075] Prethodni eksperimenti su pokazali da recDB mogu da indukuju IE1TMY-specifične CD8 T limfocite u miševima. Međutim, ove ćelije se mou detektovati samo nakon in vitro stimulacija frakcije CD8 T limfocita iz imunizovanih miševa poznatim peptidom. S obzirom na to da CD8 T ćelije nisu detektovane direktno ex-vivo, to je ukazalo daje ukupan broj specifičnih ćelija i time i ukupan odgovor na ecDB bio veoma nizak [21]. Da bi se procenio imunološki potencijal novouspostavljenih recDB, HLA-A2 transgeni HHD-miševi su imunizovani različitim DB, bez prisustva adjuvansa. Kao što je očekivano, nakon in-vitro stimulacije mogle su se detektovati aktivirine CD8 T ćelije specifične za IE1TMY ili pp65NLV (rezultati nisu prikazani).
[0076]Ćelije izolovane iz imunizovanih miševa takođe su direktno testirane ex-vivo. S tim ciljem su frakcija CD8+ splenocita razdvojene MACS-sortiranjem i testirane Elispot analizom, pomoću prezentujućih ćelija koje su sadržale peptidni antigen. CD8 T ćelije specifične za IE1TMT mogu se detektovati nakon imunizacije sa DB-SB3 i DB-SB6 (SI. 4). Ovakva IE1-specifična reakcija izavana pomoću DB-SB3 bila je jača od reakcije indukovane u prisustvu DB-SB6, mada su obe dostigle merljive nivoe.
[0077]Nakon imunizacije sa DB-SB3, CD8 T ćelije reaktivne na pp65NLV mogle su se detektovati u gotovo tri puta većem nivou nego kod wt-DB.
[0078]Međutim, neočekivano, ovaj odgovor nije bio detektabilan u eksperimentalnoj postavci izabranoj nakon imunizacije sa DB-SB6, a pp65NLV-specifičan odgovor nije mogao biti detektovan ex vivo. Ovaj rezultat potvrđen je i u drugom eksperimentu, koji je ukazao da CD8+ T ćelijski odgovor protiv imunodominantnog pp65NLV-peptida, izazvan imunizacijom sa DB-SB6 nije bio efikasan. (SI. 4). Slični rezultati dobijeni su u slučaju kada su za prezentaciju antigena izabrane T2 ćelije (podaci nisu prikazani). Ovaj rezultat je ukazao na mali broj indukovanih ćelija, ispod limita detekcije. Saglasno tome, ponovna stimulacija pp65NLV-specifičnih T limfocita in vitro bila je odložena u odnosu na stimulaciju IElTMY-specifičnih ćelija (podaci nisu prikazani).
[0079]Uzevši sve u obzir, ovi eksperimenti posebno dokazuju potencijal DB-SB3 da indukuje odgovor CD8 T ćelija na heterologni antigeni peptid.
Lista referenci:
[0080]Ova prijava poziva se na sledeće reference:
[1] Mwintshi K, Brennan DC. Prevention and management of cvtomegalovirus infection in solid-organ transplantation. Expert Rev Anti Infect Ther 2007; 5(2):295-304.
[2] Rubin RH. The pathogenesis and clinical management of cvtomegalovirus infection in the organ transplant recipient: the end of the 'silo hvpothesis'. Curr Opin Infect Dis 2007; 20(4):399-407.
[3] Arthurs SK, Eid AJ, Pedersen RA, Dierkhising RA, Kremers WK, Patel R, et al. Delaved-onset primarv cvtomegalovirus disease after liver transplantation. Liver Transpl 2007; 13(12): 1703-9.
[4] Arthurs SK, Eid AJ, Pedersen RA, Kremers WK, Cosio FG, Patel R, et al. Delayed-onset primary cvtomegalovirus disease and the risk of allograft failure and mortality after kidney transplantation. Clin Infect Dis 2008; 46(6):840-6.
[5] Peggs KS. Cvtomegalovirus following stem cell transplantation: from pharmacologic to immunologic therapy. Expert Rev Anti Infect Ther 2004; 2(4):559-73.
[6] Hebart H, Einsele H. Clinical aspects of CMV infection after stem cell transplantation. Hum Immunol 2004; 65(5):432-6.
[7] Ljungman P. Risk assessment in haematopoietic stem cell transplantation: viral status. Best Pract Res Clin Haematol 2007; 20(2):209-17.
[8] Boeckh M, Nichols WG, Papanicolaou G, Rubin R, Wingard JR, Zaia J. Cvtomegalovirus in hematopoietic stem cell transplant recipients: Current status, known challenges, and future strategies. Biol Blood Marrow Transplant 2003; 9(9):543-58.
[9] Boeckh M, Nichols WG. The impact of cvtomegalovirus serostatus of donor and recipient before hematopoietic stem cell transplantation in the era of antiviral prophylaxis and preemptive therapy. Blood 2004; 103(6):2003-8.
[10] Plotkin SA. Cvtomegalovirus vaccines. In: Plotkin SA, Orenstein WA, Offit PA, editors. Vaccines. 5 ed. Elsevier, 2008: p. 1147-54.
[11] Cheeran MC, Lokensgard JR, Schleiss MR. Neuropathogenesis of congenital cvtomegalovirus infection: disease mechanisms and prospects for intervention. Clin Microbiol Rev 2009; 22(1):99-126, Table.
[12] Stratton KR, Durch JS, Lawrence R.S. Vaccines for the 21st Century. A Tool for Decisionmaking. Washington, DC: National Academy Press, 2001.
[13] Reddehase MJ, Mutter W, Miinch K, Buhring HJ, Koszinowski UH. CD8-positive T lymphocytes specific for murine cytomegalovirus immediate-early antigens mediate protective immunity. J Virol 1987; 61:3102-8.
[14] Wills MR, Carmichael AJ, Sissons JG. Adaptive Cellular Immunity to Human Cvtomegalovirus. In: Reddehase MJ, urednik. Cvtomegalovirus: Molecular Biology and Immunology. Caister Academic Press, Wymondham, Norfolk, U.K., 2006: p. 341-65.
[15] Walter EA, Greenberg PD, Gilbert MJ, Finch RJ, Watanabe KS, Thomas ED, et al. Reconstitution of cellular iinmunity against cvtomegalovirus in recipients of allogeneic bone marrow by transfer of T-cell clones from the donor. N Engl J Med 1995; 333(16):1038-44.
[16] Herr W, Plachter B. Cvtomegalovirus and varicella-zoster virus vaccines in hematopoietic stem cell transplantation. Expert Rev Vaccines 2009; 8(8): 999-1021.
[17] Schleiss MR. Cvtomegalovirus vaccine development. Curr Top Microbiol Immunol 2008; 325:361-82.
[18] Pass RF, Zhang C, Evans A, Simpson T, Andrevvs W, Huang ML, et al. Vaccine prevention of maternal cvtomegalovirus infection. N Engl J Med 2009; 360(12): 1191-9.
[19] Bernstein Dl, Reap EA, Katen K, Watson A, Smith K, Norberg P, et al. Randomized, double-blind, Phase 1 trial of an alphavirus replicon vaccine for cvtomegalovirus in CMV seronegative adult volunteers. Vaccine 2009; 28(2):484-93.
[20] Pepperl S, Miinster J, Mach M, Harris JR, Plachter B. Dense bodies of human cvtomegalovirus induce both humoral and cellular immune responses in the absence of viral gene expression. J Virol 2000; 74(13):6132-46.
[21] Mersseman V, Besold K, Reddehase MJ, Wolfrum U, Strand D, Plachter B, et al. Exogenous introduction of an immunodominant peptide from the nonstructural IE1 protein of human cvtomegalovirus into the MHC class I presentation pathway by recombinant dense bodies. J Gen Virol 2008; 89(Pt2):369-79.
[22] Mersseman V, Bohm V, Holtappels R, Deegen P, Wolfrum U, Plachter B, et al. Refmement of strategies for the development of a human cvtomegalovirus dense body vaccine. Med Microbiol Immunol 2008; 197(2):97-107.
[23] Besold K, Frankenberg N, Pepperl-Klindworth S, Kuball J, Theobald M, Hahn G, et al. Processing and MHC class I presentation of human cvtomegalovirus pp65-derived peptides persist despite gpUS2-l 1-mediated immune evasion. J Gen Virol 2007; 88(Pt 5): 1429-39.
[24] Townsend A, Ohlen C, Bastin J, Ljunggren HG, Foster L, Karre K. Association of class I major histocompatibility heavy and light chains induced by viral peptides. Nature 1989; 340(6233):443-8.
[25] Borst EM, Hahn G, Koszinowski UH, Messerle M. Cloning of the human cvtomegalovirus (HCMV) genome as an infectious bacterial artificial chromosome in Escherichia coli: a new approach for construction of HCMV mutants. J Virol 1999; 73(10):8320-9.
[26] Warming S, Costantino N, Court DL, Jenkins NA, Copeland NG. Simple and highly efficient BAC recombineering using galK selection. Nucleic Acids Res 2005; 33(4):e36.
[27] Hobom U, Brune W, Messerle M, Hahn G, Koszinowski UH. Fast screening procedures for random transposon libraries of cloned herpesvirus genomes: mutational analysis of human cvtomegalovirus envelope glvcoprotein genes. J Virol 2000; 74(17):7720-9.
[28] Besold K, Wills M, Plachter B. Immune evasion proteins gpUS2 and gpUSll of human cvtomegalovirus incompletely protect infected cells from CD8 T cell recognition. Virology 2009; 391(1):5-19.
[29] Irmiere A, Gibson W. Isolation and characterization of a noninfectious virionlike particle released from cells infected with human strains of cvtomegalovirus. Virology 1983; 130:118-33.
[30] Schmolke S, Drescher P, Jahn G, Plachter B. Nuclear targeting of the tegument protein pp65 (UL83) of human cytomegalovirus: an unusual bipartite nuclear localization signal functions with other portions of the protein to mediate its efficient nuclear transport. J Virol 1995; 69:1071-8.
[31] Utz U, Britt W, Vugler L, Mach M. Identification of a neutralizing epitope on glycoprotein gp58 of human cvtomegalovirus. J Virol 1989; 63:1995-2001.
[32] Frankenberg N, Pepperl-Klindworth S, Meyer RG, Plachter B. Identification of a conserved HLA-A2-restricted decapeptide from the IE1 protein (pUL123) of human cvtomegalovirus. Virology 2002; 295(2):208-16.
[33] Wills MR, Carmichael AJ, Mvnard K, Jin X, Weekes MP, Plachter B, et al. The human cytotoxic T-lymphocyte (CTL) response to cytomegalovirus is dominated by structural protein pp65: frequency, specificity, and T-cell receptor usage of pp65- specific CTL. J Virol 1996; 70:7569-79.
[34] Diamond DJ, York J, Sun JY, Wright CL, Forman SJ. Development of a candidate HLA A<*>0201 restricted peptide-based vaccine against human cvtomegalovirus infection. Blood 1997; 90(5): 1751-67. ;[35] Gallez-Hawkins G, Villacres MC, Li X, Sanborn MC, Lomeli NA, Zaia JA. Use of transgenic HLA A<*>0201/Kb and HHD II mice to evaluate frequency of cytomegalovirus IE1-derived peptide usage in eliciting human CD8 cvtokine response. J Virol 2003; 77(7):4457-62.
[36] Pascolo S, Bervas N, Ure JM, Smith AG, Lemonnier FA, Perarnau B. HLAA2.1-restricted education and cytolytic activity of CD8(+) T lymphocytes from beta2 microglobulin (beta2m) HLA-A2.1 monochain transgenic H-2Db beta2m double knockout mice. J Exp Med 1997; 185(12):2043-51.
[37] Bohm V, Simon CO, Podlech J, Seckert CK, Gendig D, Deegen P, et al. The immune evasion parade«: immunoevasins of murine cvtomegalovirus enhance priming of CD8 T cells by preventing negative feedback regulation. J Virol 2008; 82(23): 11637-50.
[38] Pepperl-Klindworth S, Plachter B. Current perspeetives in vaccine development. In: Reddehase MJ, editor. Cvtomegaloviruses: Molecular Biology and Immunology. Caister Academic Press Ltd, Wymondham, Norfolk, U.K., 2006.
[0081]Karakteristike predmetnog pronalaska obelodanjene ovom specifikacijom, zahtevi, lista sekvenci i/ili crteži mogu biti, bilo pojedinačno ili zajedno, materijal za realizaciju pronalaska u svojim različitim oblicima.
LISTA SEKVENCI

Claims (30)

1.Virusna partikula oslobođena nakon infekcije sisarskih ćelija humanim citomegalovirusom (HCMV), naznačeno time daje virusna partkula zgusnuto telo, takvo daje a) partikula okružena lipidnom membranom u koju su uronjeni virusni glikoproteini, b) da ne sadrži ni virusnu DNK ni kapside; i c) da partikula sadrži fuzioni protein koji uključuje jedan ili više delova pp65 antigena T limfocita i najmanje jedan antigeni heterologni peptid, i naznačeno time daje najmanje jedan antigeni heteroloni peptid insertovan na amino-kiselinsku poziciju W175 ili A534 amino-kiselinske sekvence pp65 antigena T limfocita, sa sekvencom SEQ ID NO: 1.
2. Virusna partikula saglasno zahtevu 1, naznačena time da je najmanje jedan antigeni heterologni peptid insertovan na amino-kiselinsku poziciju W175 amino-kiselinske sekvence pp65 antigena T limfocita.
3. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 ili 2, naznačena time da je amino-kiselinska sekvenca pp65 antigena T limfocita sekvenca SEQ ID NO: 1.
4. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 2, naznačeno time da je partikula visoko imunogena.
5. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 4, naznačeno time da je partikula sposobna da indukuje formiranje neutrališućih antitela.
6. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 5, naznačena time da je partikula sposobna da indukuje odgovor CD8+ T limfocita.
7. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 2, naznačena time daje najmanje jedan antigeni heterologni peptid MHC-I prezentujući antigen.
8. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 7, naznačena time da najmanje jedan antigeni heterologni peptid uključuje ili je sačinjen od jednog ili više delova jednog ili više proteina koji je/su različiti od pp65.
9. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 8, naznačena time da najmanje jedan heterologni peptid uključuje jedan ili više delova HCMV glikoproteina.
10. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 9, naznačena time da najmanje jedan antigeni heterologni peptid uključuje ili je jednak jednom ili više delova glikoproteina gB HCMV virusa.
11.Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 9, naznačena time da najmanje jedan antigeni heterologni peptid uključuje ili je jednak jednom ili više delova glikoproteina gH HCMV virusa.
12. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 9, naznačena time da najmanje jedan antigeni heterologni peptid uključuje ili sadrži najmanje dva glikoproteina HCMV virusa, koja su varijante konkretnih glikoproteina iz različitih sojeva HCMV virusa.
13. Virusna partikula saglasno zahtevu 12, naznačena time daje najmanje jedna od dve varijante konkretnog glikoproteina, varijanta HCMV Towne soja i da je druga od najmanje dve varijante konkretnog glikoproteina, varijanta HCMV Adi 69 soja.
14. Virusna partikula saglasno zahtevima 12 do 13, naznačena time da je glikoprotein, gB protein HCMV virusa.
15. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 8, naznačena time da najmanje jedan antigeni heterologni peptid uključuje ili je jednak jednom ili više delova proteina IE1 HCMV soja.
16. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 8, naznačena time da najmanje jedna antigena heterologna partikula uključuje ili je jednaka jednom ili više delova HCMV glikoproteina i da je jednaka jednom ili više delova proteina IE1 HCMV.
17. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 8, naznačena time da je najmanje jedan antigeni heterologni peptid jednak jednom ili više delova proteina humanog patogena različitog od HCMV.
18. Virusna partikula saglasno zahtevu 17, naznačena time da je protein humanog patogena različitog od HCMV, protein koji dovodi do aktivacije citotoksičnih T limfocita, kod ljudi nakon prirodne infekcije humanim patogenom koji je različit od HCMV.
19. Virusna partikula saglasno zahtevu 19, naznačena time daje humani patogen koji je različit od HCMV, humani patogen izabran iz grupe koju čine HIV-1, HBV, HCV i virus gripa.
20. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 19, naznačena time da je fuzioni protein, fuzioni protein koji uključuje celu dužinu antigena pp65 i najmanje jedan antigeni heterologni peptid.
21. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 20, ili većem broju zahteva, za proizvodnju medikamenta za terapiju i/ili prevenciju bolesti.
22. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 20, ili većem broju zahteva, za primenu u postupku terapije i/ili prevencije bolesti.
23. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 20 do 21, naznačena time daje bolest neka bolest koja se može tretirati i/ili sprečiti formiranjem neutrališućih antitela usmerenih protiv najmanje jednog antigenog peptida ili njegovog derivata, ili se može sprečiti indukcijom odgovora CD8+ T limfocita nasuprot najmanje jednom antigenom heterolognom peptidu ili njegovom derivatu.
24. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 20, ili većem broju zahteva, za proizvodnju vakcine.
25. Virusna partikula saglasno zahtevu 24, naznačena time da se vakcina koristi u terapiji i/ili prevenciji infekcije izazvane HCMV virusom.
26. Virusna partikula saglasno zahtevu 24, naznačena time da se vakcina koristi u terapiji i/ili prevenciji nus-efekata transplantacije.
27. Virusna partikula saglasno zahtevu 26, naznačena time da se transplantacija odnosi na transplantaciju organa ili hematopoetskih matičnih ćelija.
28. Virusna partikula saglasno bilo kojem od zahteva 26 do 27, naznačena time daje nus-efekat izazvan ili se dešava uporedo sa infekcijom HCMV virusom.
29. Primena virusne partikule saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 20, za proizvodnju medikamenata za terapiju i/ili prevenciju bolesti ili njenih nus-efekata, naznačeno time da se bolest ili nus-efekti odnose na bolest i nus-efekte kao što je definisano nekim od prethodnih zahteva.
30. Primena virusne partikule saglasno bilo kojem od zahteva 1 do 20 za proizvodnju vakcine za terapiju i/ili prevenciju bolesti ili nus-efekata, pri čemu se bolest i nus-efekti odnose na bolest i nus-efekte kao što je definisano nekim od prethodnih zahteva.
RS20161007A 2010-04-06 2011-04-06 Virusna partikula sa fuzionim proteinom, oslobođena nakon infekcije sisarskih ćelija humanim citomegalovirusom (hcmv) i njena primena RS55421B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP10003712 2010-04-06
PCT/EP2011/001712 WO2011124371A1 (en) 2010-04-06 2011-04-06 Viral particle released after infection of mammalian cells by human cytomegalovirus (hcmv) containing a fusion protein and use thereof
EP11713689.5A EP2556150B1 (en) 2010-04-06 2011-04-06 Viral particle released after infection of mammalian cells by human cytomegalovirus (hcmv) containing a fusion protein and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS55421B1 true RS55421B1 (sr) 2017-04-28

Family

ID=43923731

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20161007A RS55421B1 (sr) 2010-04-06 2011-04-06 Virusna partikula sa fuzionim proteinom, oslobođena nakon infekcije sisarskih ćelija humanim citomegalovirusom (hcmv) i njena primena

Country Status (25)

Country Link
US (1) US9486517B2 (sr)
EP (1) EP2556150B1 (sr)
JP (1) JP5827312B2 (sr)
KR (2) KR20170108167A (sr)
CN (1) CN102933706B (sr)
AU (1) AU2011238085B2 (sr)
BR (1) BR112012025392B1 (sr)
CA (1) CA2795346C (sr)
CY (1) CY1118138T1 (sr)
DK (1) DK2556150T3 (sr)
ES (1) ES2601850T3 (sr)
HR (1) HRP20161556T1 (sr)
HU (1) HUE030704T2 (sr)
IL (1) IL222229A (sr)
LT (1) LT2556150T (sr)
MX (1) MX2012011639A (sr)
MY (1) MY162335A (sr)
PL (1) PL2556150T3 (sr)
PT (1) PT2556150T (sr)
RS (1) RS55421B1 (sr)
RU (1) RU2623172C2 (sr)
SG (2) SG184261A1 (sr)
SI (1) SI2556150T1 (sr)
SM (2) SMT201700002T1 (sr)
WO (1) WO2011124371A1 (sr)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102011101446A1 (de) * 2011-05-10 2012-11-15 Aicuris Gmbh & Co. Kg Herstellung von "Dense Bodies" (DB)
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3364981A4 (en) 2015-10-22 2019-08-07 ModernaTX, Inc. VACCINE AGAINST THE HUMAN CYTOMEGALOVIRUS
US10611800B2 (en) 2016-03-11 2020-04-07 Pfizer Inc. Human cytomegalovirus gB polypeptide
EP3528821A4 (en) 2016-10-21 2020-07-01 ModernaTX, Inc. HUMAN CYTOMEGALOVIRUS VACCINE
US11986521B2 (en) 2018-06-08 2024-05-21 Vakzine Projekt Management Gmbh Viral particle-based vaccine
EP3587566A1 (en) 2018-06-29 2020-01-01 Bodo Plachter Hcmv vaccine strain
US11629172B2 (en) 2018-12-21 2023-04-18 Pfizer Inc. Human cytomegalovirus gB polypeptide
TWI871709B (zh) 2020-06-21 2025-02-01 美商輝瑞股份有限公司 人巨細胞病毒糖蛋白Ｂ（ｇＢ）多肽
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5733540A (en) * 1995-03-08 1998-03-31 Lee; Peter Poon-Hang Protection from viral infection via colonization of mucosal membranes with genetically modified bacteria
DE19910044A1 (de) 1999-03-08 2000-09-14 Bodo Plachter Virale Partikel, die nach Infektion durch humanes Cytomegalovirus freigesetzt werden und ihre Verwendung als Impfstoff
WO2006004661A1 (en) 2004-06-25 2006-01-12 Medimmune Vaccines, Inc. Recombinant human cytomegalovirus and vaccines comprising heterologous antigens

Also Published As

Publication number Publication date
IL222229A0 (en) 2012-12-31
BR112012025392B1 (pt) 2021-05-25
KR101839535B1 (ko) 2018-04-27
PL2556150T3 (pl) 2017-05-31
AU2011238085A1 (en) 2012-10-18
WO2011124371A1 (en) 2011-10-13
EP2556150A1 (en) 2013-02-13
SMT201700002B (it) 2017-03-08
MY162335A (en) 2017-06-15
RU2012146775A (ru) 2014-05-20
MX2012011639A (es) 2012-11-29
JP2013529065A (ja) 2013-07-18
PT2556150T (pt) 2016-11-04
US20130202708A1 (en) 2013-08-08
IL222229A (en) 2017-08-31
ES2601850T3 (es) 2017-02-16
SG184261A1 (en) 2012-10-30
AU2011238085B2 (en) 2016-08-04
CA2795346C (en) 2022-05-03
HUE030704T2 (en) 2017-05-29
CN102933706A (zh) 2013-02-13
US9486517B2 (en) 2016-11-08
RU2623172C2 (ru) 2017-06-22
HRP20161556T1 (hr) 2016-12-30
CY1118138T1 (el) 2017-06-28
SG10201502271RA (en) 2015-05-28
LT2556150T (lt) 2016-12-12
KR20130055586A (ko) 2013-05-28
CA2795346A1 (en) 2011-10-13
BR112012025392A2 (pt) 2015-09-22
EP2556150B1 (en) 2016-08-24
KR20170108167A (ko) 2017-09-26
SMT201700002T1 (it) 2017-03-08
CN102933706B (zh) 2016-01-13
JP5827312B2 (ja) 2015-12-02
DK2556150T3 (en) 2016-12-05
SI2556150T1 (sl) 2016-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5827312B2 (ja) 融合タンパク質を含むヒトサイトメガロウイルス（ｈｃｍｖ）による哺乳動物細胞の感染後に放出されるウイルス粒子およびその使用
US20230272013A1 (en) Compositions and methods for treatment of cytomegalovirus
Anderholm et al. Cytomegalovirus vaccines: current status and future prospects
Gerna et al. Human cytomegalovirus (HCMV) infection/re-infection: development of a protective HCMV vaccine
Xiang et al. Immune responses to nucleic acid vaccines to rabies virus
US6713070B1 (en) Viral particles which are released after the infection with the human cytomegalovirus, and the use of said particles as a vaccine
US5591439A (en) Recombinant cytomegalovirus vaccine
Gonczol et al. Development of a cytomegalovirus vaccine: lessons from recent clinical trials
Gönczöl et al. Preclinical evaluation of an ALVAC (canarypox)-human cytomegalovirus glycoprotein B vaccine candidate
US20150307850A1 (en) Conditional replicating viral vectors
Deshpande et al. Induction of cytotoxic T-lymphocytes specific for bovine herpesvirus-1 by DNA immunization
Lockey et al. Epstein-Barr virus vaccine development: a lytic and latent protein cocktail
Becke et al. Optimized recombinant dense bodies of human cytomegalovirus efficiently prime virus specific lymphocytes and neutralizing antibodies without the addition of adjuvant
Mersseman et al. Refinement of strategies for the development of a human cytomegalovirus dense body vaccine
US20060110403A1 (en) Non-human herpesviruses as vectors
Fridkis-Hareli Immune responses and vaccine development for cytomegalovirus infections.
Yue Characterization of potential rhesus cytomegalovirus vaccine candidates: Glycoprotein B and phosphoprotein 65-2