RS55729B1 - Anti-baff-anti-il-17 bispecifična antitela - Google Patents
Anti-baff-anti-il-17 bispecifična antitelaInfo
- Publication number
- RS55729B1 RS55729B1 RS20170160A RSP20170160A RS55729B1 RS 55729 B1 RS55729 B1 RS 55729B1 RS 20170160 A RS20170160 A RS 20170160A RS P20170160 A RSP20170160 A RS P20170160A RS 55729 B1 RS55729 B1 RS 55729B1
- Authority
- RS
- Serbia
- Prior art keywords
- bispecific antibody
- seq
- baff
- antibody
- human
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2875—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/624—Disulfide-stabilized antibody (dsFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
[0001]Ovaj pronalazak je u oblasti medicine, naročito u novoj oblasti bispecifičnih antitela usmerenih protiv aktivirajućeg faktora B-ćelija iz TNF familije (BAFF) i interleukina-17A (IL-17). Očekuje se da bispecifična antitela ovog pronalaska budu korisna u tretiranju lupus nefritisa (LN), sistemskog lupusa eritematozusa (SLE), reumatoidnog artritisa (RA), psorijaze (Ps), ankiloznog spondilitisa (AS), psorijatičnog artritisa (PA), primarnog Sjogren-ovog sindroma (pSS), ili multiplog mijeloma (MM).
[0002] Povećani nivoi IL-17 povezani su sa nekoliko stanja, bolesti ili poremećaja uključujući zapaljenje disajnih puteva, reumatoidni artritis, osteoartritis, eroziju kosti, intraperitonealne abscese i adhezije, inflamatorni poremećaj creva, odbacivanje alografta, psorijazu, određene tipove kancera, angiogenezu, ateroklerozu i multiplu sklerozu. IL-17 i receptor za IL-17 su ushodno regulisani u sinovijalnom tkivu pacijenata sa reumatoidnim artritidom. Blokiranje bioaktivnosti IL-17 smanjuje zapaljenje i eroziju kosti u raznim modelima artritisa kod životinja. Dodatno, IL-17 ima IL-ip nezavisne efekte na razgradnju kolagenog matriksa i zapaljenje i oštećenje zgloba, dok IL-17 deluje sinergistički sa TNF-a u povećanju inflamacije. Stoga, uzimajući u obzir njegovu lokalizovanu distribuciju na mestu zapaljenja, izgleda da je IL-17 moguće ciljno mesto za tretman reumatoidnog artritisa i drugih inflamatornih ili autoimunih boleasti sa potencijalno boljim bezbednosnim profilom od lekova koji ciljaju sistemsku cirkulaciju proinflamatornih citokina kao što je TNF-a.
[00031 Uključenost aktivirajućeg faktora B-ćelija (BAFF) u patogenezi autoimunih bolesti je ilustrovano prekomernom ekspresijom BAFF kod mišjeg modela, što dovodi do autoimune bolesti koja imitira reumatoidni artritis, sitemski lupus eritematozus i primarni Sjogren-ov sindrom, kao i dvostrukim povećanjem pojave B ćelijskog limfoma. Kod ljudi, brojni radovi su pokazali povećane nivoe BAFF u serumu kod pacijenata sa SLE, RA, pSS, i sistemskom sklerozom. Pokazano je da BAFF promoviše ekspanziju Thl7 ćelija i IL-17 je ključni efektorski citokin za BAFF-posredovane proinflamatorne efekte tokom razvoja kolagen-indukovanog artritisa. Takođe je pokazano da IL-17 deluje sinergistički sa BAFF utičući na biologiju B ćelija i patofiziologiju SLE. Takođe postoje dokazi da i BAFF i IL-17 imaju ulogu u patologiju povezanoj sa LN, zapravo je objavljeno da pacijenti sa LN imaju povišene nivoe IL-17 i BAFF.
[0004]SLE je visoko heterogena i multisitemska autoimuna bolest koju karakateriše razvoj auto-antitela i formiranje imunih kompleksa. Procenjeno je da su kod 30-60% pacijenata sa SLE pogođeni bubrezi u nekom stadijumu tokom njihove bolesti. LN je kompleksna, multi-faktorska autoimuna bolest. Ukoliko se ne tretira, petogodišnja stopa preživljavanja pacijenata sa LN je 0-20%. Uvođenje imunosupresivne terapije je veoma poboljšalo ovu situaciju i trenutna desetogodišnja stopa preživljavanja je 88%. Međutim, ovo poboljšanje dolazi uz cenu za pacijenta, jer mnogi od ovih tretmana imaju teške štetne efekte, naročito jer se moraju hronično uzimati. Dodatno, odgovor je spor i često nekompletan, sa samo 25-50% pacijenata koji dostižu remisiju.
[0005]Ko-primena BAFF antitela i IL-17 antitela zahteva ili injekcije dva zasebna proizvoda ili jednu injekciju sa ko-formulacijom dva različita antitela. Dve injekcije bi mogle dozvoliti fleksibilnost količine doze i vremena primene, ali su nezgodne za pacijenta i zbog komplijanse i zbog bola. Ko-formulacija može takođe obezbediti nešto fleksibilnosti u odnosu na količine doze, ali je često veliki izazov ili nemoguće pronaći uslove formulacije koji dozvoljavaju hemijsku i fizičku stabilnost oba antitela usled različtih molekulskih karakteristika dva različita antitela.
[0006]US 7,317,089 B2 opisuje monoklonska antitela koja se specifično vezuju sa humanim TNFSF13b ploipeptidima sa visokim afinitetom. Antitela neutrališu TNFSF13b aktivnostin vitroiin vivoi tvrdi se da su korisna u inhibiciji TNFSF13b aktivnosti kod humanog subjekta koji pati od poremećaja u kojem je aktivnost hTNFSF13b štetna. WO19509917 opisuje postupak za proizvodnju bispecifičnih, tetravalentnih antitela (MAb-scFV) korišćenjem tehnologije rekombinantne DNK preko proizvodnje jednolančanog varijabilnog fragmenta antitela fuzionisanog sa kompletnim antitelom različite specifičnosti. Ova genska fuzija je eksprimirana transfekcijom što rezultuje u tetravalentnom antitelu koje ima dvojnu specifičnost. WO2003016468 opisuje anti-BAFF antitela koja se vezuju i neutrališu i rastvorljive membranski vezane oblike humanog BAFF. WO2007070750 opisuje anti-IL-17 antitela koja se vezuju i neutrališu humani IL-17. Međutim, prateći saznanja iz WO199509917 da bi se stvorilo početno bispecifično antitelo koje sadrži anti-BAFF antitela WO2003016468 i anti-IL-17 antitela WO2007070750, pronalazači ovog pronalaska su otkrili značajne probleme povezane sa hemijskom i fizičkom stabilnošću. Mnoge aminokiselinske izmene su bile neophodne u početnom bispecifičnom antitelu da bi se u dovoljnoj meri prevazišli ovi problemi. Niti potreba niti stvarne izmene nisu sugerisane u tehnici. Dodatno, nekoliko izmena nisu rutinske ili izvedene iz uobičajenog opšteg znanja. Takođe, pojedinačna antitela sama po sebi nisu imala ove probleme, sugerišući da se lokalna sredina oko ovih oblasti razlikovala u kontekstu bispecifičnih antitela. Stoga, potrebna je farmakološka intervencija sa bispecifičnim antitelom koje neutrališe i BAFF i IL-17.
[0007]Ovaj pronalazak obezbeđuje bispecifično antitelo koje sadrži dva prva polipeptida i dva druga polipeptida.
[0008]Ovde je opisan molekul DNK koji sadrži polinukleotidnu sekvencu koja kodira prvi polipeptid.
[0009]Ovde je dodatno opisan DNK molekul koji sadrži polinukleotidnu sekvencu koja kodira drugi polipeptid.
[0010]Dodatno je ovde opisan DNK molekul koji sadrži polinukleotidnu sekvencu koja kodira prvi polipeptid i drugi polipeptid.
[0011]Dodatno je ovde opisana ćelija sisara transformisana sa DNK molekulom (molekulima), ćelija koja je sposobna da eksprimira bispecifično antitelo koje sadrži prvi polipeptid i drugi polipeptid.
[0012]Dodatno je ovde opisan postupak za proizvodnju bispecifičnog antitela koje sadrži prvi polipeptid i drugi polipeptid, koji sadrži kultivisanje ćelije sisara pod uslovima takvim da se eksprimira bispecifično antitelo.
[0013]Dodatno je ovde opisano bispecifično antitelo proizvedeno pomenutim postupkom.
[0014]Dodatno je ovde opisan postupak za tretiranje sistemskog lupusa eritematozusa, lupusa nefritisa, reumatoidnog artritisa, psorijaze, ankiloznog spondilitisa, psorijatičnog artritisa, primarnog Sjogren-ovog sindroma, ili multiplog mijeloma, koji sadrži primenu efikasne količine bispecifičnog antitela na pacijenta kome je to potrebno.
[0015]Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje bispecifično antitelo za upotrebu u terapiji.
[0016]Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje bispecifično antitelo za upotrebu u tretmanu sistemskog lupusa eritematozusa, lupusa nefritisa, reumatoidnog artritisa, psorijaze, ankiloznog spondilitisa, psorijatičnog artritisa, primarnog Sjogren-ovog sindroma, ili multiplog mijeloma.
[0017]Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži bispecifično antitelo i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata.
[0018]Podrazumeva se da humani IL-17 označava homodimerni protein koji sadrži dva humana IL-17A proteina. Humani IL-17A/F heterodimer je humani IL-17A protein i humani IL-17F protein.
[0019]Podrazumeva se da bispecifično antitelo označava molekul imunoglobulina koji sadrži četiri mesta vezivanja antigena, koja vezuju dva različita antigena sa specifičnošću za svaki antigen u MAb-scFV formatu. Bispecifično antitelo je sposobno da važe svaki antigen zasebno ili svaki antigen istovremeno.
[0020] Bispecifično antitelo ovog pronalaska sadrži dva prva polipeptida i dva druga polipeptida. Svaki od prvih polipeptida formira inter-lančanu disulfidnu vezu sa svakim od drugih polipeptida, i prvi polipeptid formira dve inter-lančane disulfidne veze sa drugim prvim polipeptidom, i svaki od prvih polipeptida formira nekoliko intra-lančanih disulfidnih veza. Odnos polipeptida i disulfidnih veza prikazanje na sledećoj šemi:
[0021]Aminokiselinska sekvenca prvog polipeptida je:
[0022]Aminosekvenca drugog polipeptida je:
[0023]Inter-lančana disulfidna veza svakog od prvih polipeptida i svakog od drugih polipeptida formira se između cisteinskog ostatka 137 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 214 SEQ ID NO:2. Prvi polipeptid formira dve inter-lančane disulfidne veze sa drugim prvim polipeptidom. Prva inter-lančana disulfidna veza formira se između cisteinskog ostatka 229 prvog polipeptida SEQ ID NO: 1 i cisteinskog ostatka 229 drugog prvog polipeptida SEQ ID NO: 1. Druga inter-lančana disulfidna veza formira se između cisteinskog ostatka 232 prvog polipeptida SEQ ID NO: 1 i cisteinskog ostatka 232 drugog provog polipeptida SEQ ID NO: 1.
[0024]Unutar scFV, inženjeringom dobijena intra-lančana disufidna veza je formirana između cisteinskog ostatka 507 SEQ ID NO: 1 i cisteinskog ostatka 707 SEQ ID NO:l. Takođe, intra-lančana disulfidna veza je formirana između cisteinskog ostatka 625 SEQ ID NO: 1 i cisteinskog ostatka 695 SEQ ID NO:l. Unutar MAb, intra-lančane disulfidne veze koje se normalno javljaju u IgG4 antitelu se formiraju između cisteinskog ostatka 22 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 95 SEQ ID NO:l, između cisteinskog ostatka 150 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 206 SEQ ID NO:l, između cisteinskog ostatka 264 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 324 SEQ ID NO:l, između cisteinskog ostatka 370 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 428 SEQ ID NO:l, između cisteinskog ostatka 485 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 559 SEQ ID NO:l, između cisteinskog ostatka 23 SEQ ID NO:2 i cisteinskog ostatka 88 SEQ ID NO:2, i između cisteinskog ostatka 134 SEQ ID NO:2 i cisteinskog ostatka 194 SEQ ID NO:2.
[0025]Prvi polipeptid sadrži prvi varijabilni region teškog lanca (HCVR1), konstantni region teškog lanca (CH), drugi varijabilni region teškog lanca (HCVR2) i drugi varijabilni region lakog lanca (LCVR2). Drugi polipeptidi sadrže prvi varijabilni region lakog lanca (LCVR1) i konstanrtni region lakog lanca (CL). HCVR i LCVR regioni se mogu dalje podeliti u hipervarijabilne regione, označene kao regioni koji određuju komplementarnost (CDR), rasute sa okvirnim regionima (FR). Svaki HCVR i LCVR je sastavljen od tri CDRs i četiri FRs, raspoređena od amino-terminusa do karboksil-terminusa u sledećem redosledu: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
[0026]3 CDRs HCVR1 označeni su kao CDRH1-1, CDRH1-2, i CDRH1-3 i 3 CDRs HCVR2 označeni su kao CDRH2-1, CDRH2-2, i CDRH2-3 i 3 CDRs LCVR1 su označeni kao CDRL1-1, CDRL1-2 i CDRL1-3 i 3 CDRs LCVR2 su označeni kao CDRL2-1, CDRL2-2 i CDRL2-3.
[0027]CH je fuzionisan sa HCVR2 sa aminokiselinskim linkerom (LI). HCVR2 je fuzionisan as LCVR2 sa aminokisleinskim linkerom (L2).
[0028]Odnos različitih regiona i linkera je kao što sledi:
Inženjering bispecifičnog antitela
[0029]Naišlo se na značajne probleme povezane sa hemijskom i fizičkom stabilnošću pri konstrukciji bispecifičnog antitela u MAb-scFv formatu sa anti-IL-17 vezujućim delom u scFv konfiguraciji. Hemijske modifikacije su načinjene u CDRL2-1 i CDRH2-2 delovima bispecifičnog antitela koje su poboljšale fizičku stabilnost i smanjile agregaciju zavisnu od koncentracije. Ekstenzivne studije stabilnosti i rastvorljivosti proteina identifikovale su hemijski nestabilne ostatke u CDRL2-1 i CDRH2-2. Ovi labilni ostaci su zamenjeni sa neutralnim aminokiselinama u odnosu na naelektrisanje korišćenjem ciljanih biblioteka konstruisanih preko deplecije kodona. Dodatno, izračunata je elektrostatička površina bispecifičnog antitela i identifilkovani su naelektrisani delovi. Disrupcija ovih naelektrisanih delova u scFv vodila je do smanjenja asocijacije proteina samog sa sobom. Međutim, mutacija je identifikovana u CDRH2-1 delu bispecifičnog antitela koja je rebalansirala distribuciju elektrostatičke površine, i poboljšala fizičku stabilnost i rastvorljivost na visokim koncentracijama. Nijedan od prethodnih problema nije pronađen kod pojedinačnih roditeljskih antitela. Ovi problemi su se susretali samo u kontekstu konstruisanja bispecifičnog antitela u MAb-scFv formatu, sugerišući da se lokalna sredina oko mutiranih oblasti pojedinačnog antitela razlikovala u kontekstu bispecifičnog antitela.
[0030]Načinjene su dodatne hemijske modifikacije da bi se stabilizovao HCVR2/LCVR2 interfejs u IL-17 delu bispecifičnog antitela, i smanjila agregacija bispecifičnog antitela. Studije izvedene da bi se odredila agregacija pokazale su da uočena asocijacija proteina sa samim sobom nije vođena konformacionom nestabilnošću pojedinačnih HCVR2 ili LCVR2 domena, već pre otvaranjem ili "disanjem" HCVR2/LCVR2 interfejsa, dovodeći do intermolekulskih interakcija proteina. Stoga, uvedene su različite intra-lančane disulfidne veze u HCVR2/LCVR2 interfejs IL-17 dela bispecifičnog antitela. Jedna takva intra-lančana disulfidna veza nalazi se u svakom od prvih polipeptida između cisteinskog ostatka 507 SEQ ID NO: 1 i cisteinskog ostatka 707 SEQ ID NO: 1. Ova disulfidna veza kovalnetno vezuje HCVR2/LCVR2 interfejs u IL-17 delu bispecifičnog antitela, koji stabilizuje HCVR2/LCVR2 interfejs i smanjuje intermolekulske interakcije proteina koje mogu dovesti do fizičke nestabilnosti i nepoželjnih ograničenja formulacije. Od testiranih devet različitih disulfidnih veza, od kojih je 8 eksprimiralo funkcionalni protein, veličina gubitka afiniteta bila je u rasponu od oko 2 do oko 35-strukog. Intra-lančana disulfidna veza u u svakom od prvih polipeptida između cisteinskog ostatka 507 SEQ ID NO: 1 i cisteinskog ostatka 707 SEQ ID NO: 1 najbolje je stabilizovala HCVR2/LCVR2 interfejs uz istovremeno održavanje optimalnog afiniteta vezivanja za IL-17.
[0031]Dodatno, studije su ukazivale daje dužina linkera za LI uticala na kinetiku vezivanja. Kinetička analiza (sa površinskom plazmon rezonancom) pokazala je da je aminokiselinski linker od 10 aminokiselina izazvao dvostruko sporiju Konstopu u poređenju sa aminokiselinskim linkerima od 15 i 20 aminokiselina. Stoga, uvedena je dužina linkera od 15 aminokiselina u bispecifično antitelo ovog pronalaska.
Vezivanjebispecifičnog antitela
[0032]Bispecifična antitela ovog pronalaska vezuju i humani BAFF i humani IL-17 i neutrališu najmanje jednu bioaktivnost humanog BAFF i najmanje jednu bioaktivnost humanog IL-17 in vitro ili in vivo. Bispecfična antitela ovog pronalaska su potentni inhibitori IL-17 u prisustvu ili odsustvu BAFF in vitro. Bispecifična antitela ovog pronalaska su potentni inhibitori i rastvori) ivog i membranski vezanog BAFF u prisustvu ili odsustvu IL-17 in vitro. Bispecifična antitela pronalaska su dodatno okarakterisana tako da imaju afinitet vezivanja (Kd) za humani BAFF u opsegu od 150 pM do 1 pM i humani IL-17 u opsegu od 50 pM do 1 pM. Bispecifična antitela imaju afinitet vezivanja za humani IL-17 A/F heterodimer od oko 90 pM.
[0033]Bispecifična antitela efikasno neutrališu rastvorljive kao i membranski vezane BAFF i na ovu neutralizaciju ne utiče prisustvo zasićujućih količina humanog IL-17. Bispecifična anatitela efikasno neutrališu humani IL-17 i na ovu neutralizaciju ne utiče prisustvo zasićujućih količina humanog BAFF.
Ekspresija bispecifičnog antitela
[0034]Ekspresioni vektori sposobni da usmeravaju ekspresiju gena za koje su operativno povezani dobro su poznati u tehnici. Ekspresioni vektori mogu kodirati signalni peptid koji olakšava sekreciju polipeptida (ili više njih) iz ćelije domaćina. Signalni peptid može biti imunoglobulinski signalni peptid ili heterologni signalni peptid. Prvi polipeptid i drugi polipeptid mogu biti eksprimirani nezavisno od strane različitih promotora za koje su operativno vezani u jednom vektoru ili, alternativno, prvi polipeptid i drugi polipeptid mogu biti eksprimirani nezavisno od strane različtih promotora za koje su operativno vezani u dva vektora - jedan koji eksprimira prvi polipeptid i jedan koji eksprimira drugi polipeptid.
[0035]Ćelija domaćin uključuje ćelije stabilno ili prolazno transficirane, transformisane, transdukovane ili inficirane sa jednim ili više ekspresionih vektora koji eksprimiraju prvi polipeptid, drugi polipeptid ili oba, prvi polipeptid i drugi polipeptid pronalaska. Stvaranje i izolacija linija ćelija domaćina koje proizvode bispecifično antitelo pronalaska može se postići korišćenjem standardnih tehnika poznatih u tehnici. Ćelije sisara su poželjne ćelije domaćini za ekspresiju bispecifičnih antitela. Specifične ćelije sisara su HEK 293, NSO, DG-44, i CHO. Poželjno, bispecifična antitela su izlučena u medijum u kojem su kultivisane ćelije domaćini, odakle se bispecifična antitela mogu rekuperovati ili prečistiti.
[0036] U tehnici je dobro poznato da sisarska ekspresija antitela rezultuje u glikozilaciji. Tipično, glikozilacija se odigrava u Fc regionu antitela na visoko konzervativnom N-glikozilacionom mestu. N-glikani se tipično vezuju za asparagin. Svaki od prvih polipeptida je glikozilovan na asparaginskom ostatku 300 SEQ ID NO:l.
[0037] Specifična DNK polinukleotidna sekvenca koja kodira prvi polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:l je:
[0038]Specifična DNK polinukleotidna sekvenca koja kodira drugi polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:2 je:
[0039]Medijum, u koji je izlučeno bispecifično antitelo, može se prečistiti konvencionalnim tehnikama. Na primer, medijum se može primeniti na i eluirati sa Protein A ili G kolone korišćenjem konvencionalnih postupaka. Ratsvorljivi agregat i multimeri mogu se efikasno ukloniti uobičajenim tehnikama, uključujući ekskluzionu, sa hidrofobnom interakcijom, jonoizmenjivačku, ili hidroksiapatitnu hromatografiju. Proizvod se može odmah zamrznuti, na primer na -70°C, ili može biti liofilizovan.
[0040]Može postojati potreba da se smanji nivo pogrešno spakovanog bispecifičnog antitela prisutnog u medijumu. Pogrešno spakovano antitelo je takođe poznato kao diatelo. Pogrešno pakovanje rezultuje kada se jedna ili više disulfidnih veza formiraju nepravilno, bilo inter ili intra lanačano. Pogrešno spakovano bispecifično antitelo može se prečistiti konvencionalnim tehnikama. Na primer, medijum koji sadrži pogrešno spakovano bispecifično antitelo može se primeniti na i eluirati sa jake katjonskoizmenjivačke smole. Na primer, SP-Sepharose HP jaka katjonizmenjivačka smola se koristi da se prečiste korektno spakovana bispecifična antitela od diatela. pH medijuma koji sadrži diatelo je podešen na pH 8 korišćenjem IM Tris baze. Medijum je napunjen u SP-Sepharose HP kolonu, ispran sa 2 zapremine kolone od 20mM Tris, pH 8 i eluiran sa 20mM Tris, lOOmM NaCl, pH8 preko 30 zapremina kolone (0-70 mM NaCl). Sakupljeni pulovi mogu se proceniti u odnosu na visoku molekulsku težinu nasuprot glavnom piku. Tipični rezultat je poboljšanje od 10% diatela do 1% diatela sa 71 % rekuperacije.
[0041]U sledećem primeru, Poros HS 50 jaka katjonizmenjivačka smola je korišćena da se prečiste korektno spakovana bispecifična antitela od diatela. pH medijuma koji sadrži diatela je podešen do pH 8 korišćenjem IM Tris baze. Medijum je napunjen na SP-Sepharose HP kolonu i eluiran sa 20mM Tris, lOOmM NaCl, pH8 preko 15 zapremina kolone (15-50 mM NaCl). Sakupljeni pulovi mogu se proceniti u odnosu na visoku molekulsku težinu nasuprot glavnom piku. Tipični rezultat je poboljšanje od 10% diatela do 1% diatela sa 57 % rekuperacije.
Terapeutskeupotrebe
[0042]Pacijent se odnosi na sisara, poželjno čoveka sa bolešću, poremećajem ili stanjem koji bi imao koristi od smanjenog nivoa BAFF i/ili IL-17 ili smanjene bioaktivnosti BAFF i/ili IL-17.
[0043]Namera je da se tretman i/ili tretiranje odnosi na sve procese gde može postojati usporavanje, remećenje, zastoj, kontrolisanje, ili zaustavljanje napredovanja ovde opisanog poremećaja, ali ne ukazuje obavezno na potpunu eliminaciju svih simptoma poremećaja. Očekuje se da bispecifično antitelo ovog pronalaska leči sistemski lupus eritematozus, lupus nefritis, reumatoidni artritis, psorijazu, ankilozni spondilitis, psorijatični artritis, primarni Sjogren-ov sindrom ili multipli mijelom.
Farmaceutskekompozicije
[0044]Bispecifično antitelo pronalaska može se inkorporisati u farmaceutsku kompoziciju pogodnu za primenu na pacijenta. Takve farmaceutske kompzicije su dizajnirane da budu odgovarajuće za izabrani način primene, i kao odgovarajući su korišćeni farmaceutski prihvatljivi razblaživači, nosači, i/ili ekscipijenti kao što su sredstva za disperziju, puferi, surfaktanti, konzervansi, agensi za povećanje rastvorljivosti, agensi za izotoničnost, stabilizujući agensi i slično. Pomenute kompozicije mogu se dizajnirati u skladu sa konvencionalnim tehnikama opisanim u,npr.,Remington, The Science and Practice of Pharmacv, 19th Edition, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1995 koji daje rezime tehnika formulacije kao što su generalno poznate stručnjacima. Pogodni nosači za farmaceutske kompozicije uključuju bilo koji materijal koji, kada je kombinovan sa bispecifičnim antitelom pronalaska, zadržava aktivnost molekula i nije reaktivan sa imunim sistemom pacijenta. Farmaceutska kompozicija ovog pronalaska sadrži bispecifično antitelo i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata.
[0045]Farmaceutska kompozicija koja sadrži bispecifično antitelo ovog pronalaska može se primeniti na pacijenta koji je u riziku za ili pokazuje bolesti ili poremećaje kao što je ovde opisano korišćenjem standardnih tehnika primene.
[0046]Farmaceutska kompozicija pronalaska sadrži efikasnu količinu bispecifičnog antitela pronalaska. Efikasna količina se odnosi na količinu neophodnu (u dozama i u vremenskom periodu i načinima primene) da se postigne željeni terapeutski rezultat. Efikasna količina bispecifičnog antitela može varirati u skladu sa faktorima kao što su stanje bolesti, starost, pol, i težina pojedinca, i sposobnosti antitela ili dela antitela da izazove željeni odgovor kod pojedinca. Efikasna količina je takođe ona kod koje je bilo koji toksični ili štetni efekat bispecifičnog antitela, nadjačan terapeutski korisnim efektima.
[0047]Bispecifično antitelo iz sledećeg primera ekspresije i demonstracije osobina sadrži dva prva polipeptida sa aminokiselinskim sekvencama SEQ ID NO: 1 i dva druga polipetida sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO:2 gde svaki od prvih polipeptida formira inter-lančanu disulfidnu vezu sa svakim od drugih polipeptida između cisteinskog ostatka 137 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 214 of SEQ ID NO:2, i prvi polipeptid formira dve inter-lančane disulfidne veze sa drugim prvim polipeptidom između cisteinskog ostatka 229 prvog polipeptida SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 229 drugog prvog polipeptida SEQ ID NO:l i između cisteinskog ostatka 232 prvog polipeptida SEQ ID NO: 1 i cisteinskog ostatka 232 drugog prvog polipeptida SEQ ID NO:l, i svaki od prvih polipeptida formira intra-lančanu disulfidnu vezu između cisteinskog ostatka 22 i cisteinskog ostatka 95 SEQ ID NO:l, između cisteinskog ostatka 150 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 206 SEQ ID NO:l, između cisteinskog ostatka 264 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 324 SEQ ID NO:l, između cisteinskog ostatka 370 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 428 SEQ ID NO:l, između cisteinskog ostatka 485 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 559 SEQ ID NO:l, između cisteinskog ostatka 507 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 707 SEQ ID NO:l, i između cisteinskog ostatka 625 SEQ ID NO:l i cisteinskog ostatka 695 SEQ ID NO:l, i svaki od drugih polipeptida formira intra-lančanu disulfidnu vezu između cisteinskog ostatka 23 SEQ ID NO:2 i cisteinskog ostatka 88 SEQ ID NO:2, i između cisteinskog ostatka 134 SEQ ID NO:2 i cisteinskog ostatka 194 SEQ ID NO:2, i gde je svaki od prvih polipeptida glikozilovan na asparaginskom ostatku 300 SEQ ID NO:l. Odnos korektno spakovanog bispecifičnog antitela i pogrešno spakovanog diatelaje reda veličine 90:10.
Ekspresija bispecifičnog antitela
[0048] Bispecifično antitelo se može eksprimirati i prečistiti suštinski kao što sledi. Glutamin sintetaza (GS) ekspresioni vektor koji sadrži DNK SEQ ID NO:3 (koja kodira prvi polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:l) i SEQ ID NO:4 (koja kodira aminokiselinsku sekvencu lakog lanca SEQ ID NO:2) korišćen je za transfekciju ćelijske linije kineskog hrčka, CHOK1SV (Lonza Biologics PLC, Slough, United Kingdom) putem elektroporacije. Ekspresioni vektor kodira SV rani (Simian Virus 40E) promotor i gen za GS. Ekspresija GS omogućava biohemijsku sintezu glutamina, aminokiseline koje je neophodna CHOK1SV ćelijama. Nakon transfekcije, ćelije prolaze kroz grupnu selekciju sa 50mM L-metionin sulfoksiminom (MSX). Tnhibicija GS sa MSX je korišćena da bi se povećala stringentnost selekcije. Ćelije sa integracijom cDNK ekspresionog vektora u transkripciono aktivne regione genoma ćelije domaćina mogu se selektovati nasuprot CHOK1SV ćelija divljeg tipa, koje eksprimiraju endogeni nivo GS. Transficirani pulovi su postavljeni na ploču sa niskom gustinom da bi se omogućio rast blizu klonskog stabilnih eksprimirajućih ćelija. Izvršen je skrining master komorica u odnosu na ekspresiju bispecifičnog antitela i zatim su povećane razmere proizvodnje u kulturi sa suspenzijom bez seruma. Razbistreni medijum, u koji je izlučeno bispecifično antitelo, primenjen je na Protein A afinitetnu kolonu koja je ekvilibrisana sa kompatibilnim pufreom, kao što je fosfatno puferisani fiziološki rastvor (pH 7.4). Kolona je isprana da bi se uklonile komponente koje se nespecifično vezuju. Vezano bispecifično antitelo je eluirano, na primer, sa pH gradijentom (kao što je 0.1 M natrijum fosfat pufer pH 6.8 do 0.1 M natrijum citrat pufer pH 2.5). Detektovane su frakcije bispecifičnog antitela, kao što je sa SDS-PAGE ili analitičkom ekskluzijom, i zatim su pulovane. Rastvorljivi agregati i multimeri mogu se efikasno ukloniti uobičajenim tehnikama, uključujući ekskluzionu, sa hidbrofobnom interakcijom, jonoizmenjivačkom, ili hidroksiapatitnom hromatografijom. Bispecifično antitelo se može koncentrovati i/ili sterilno filtrirati korišćenjem uobičajenih tehnika. Čistoća bispecifičnog antitela nakon ovih koraka hromatografije je veća od 98%. Bispecifično antitelo se može odmah zamrznuti na -70°C ili uskladištiti na 4°C nekoliko meseci.
Afinitet vezivanja sa IL-17 i BAFF
[0049J Afinitet vezivanja i stehiometrija vezivanja bispecifičnog antitela sa humanim IL-17 i humanim BAFF određena je korišćenjem testa površinske plazmon rezonance na Biacore 2000 instrumentu prajmovanom sa HBS-EP+ (GE Healthcare, 10 mM Hepes pH7.4 +150 mM NaCl + 3 mM EDTA + 0.05% surfaktant P20) tekućim puferom i temepraturom analize postavljenom na 25 °C. CM5 čip sa imobilisanim proteinom A (stvoren korišćenjem standardnog NHS-EDC amin kuplovanja) na sve četiri protočne ćelije (Fc) korišćen je da bi se upotrebila metodologija zarobljavanja. Uzorci antitela su pripremljeni na 10 mcg/mL sa razblaživanjem u tekućem puferu. Humani IL-17 ili humani BAFF su pripremljeni u finalnim koncentracijama od 20.0, 10.0, 5.0, 2.5, 1.25 i 0 (blank) nM razblaživanjem u tekućem puferu. Svaki ciklus analize se sastoji od (1) zarobljavanja uzoraka antitela na zasebnim protočnim ćelijama (Fc2, Fc3, i Fc4), (2) injekcija od 250 mcL (300-sek) humanog IL-17 ili humanog BAFF preko svih Fc na 50 mcL/min, (3) povratak na protok pufera u toku 20 min da bi se pratila faza disocijacije, (4) regeneracija površina čipa sa 5 mcL (30-sek) injekcijom glicina, pH 1.5, (5) ekvilibrisanje površina čipa sa 10 mcL (60-sek) injekcijom HBS-EP+. Podaci su obrađeni korišćenjem standardnih dvostrukih referentnih vrednosti i fitovanja na 1:1 model vezivanja korišćenjem Biacore 2000 Evaluation software, verzija 4.1, da bi se odredila stopa asocijacije (kon, M"'s"' jedinica), stopa disocijacije (k0ff, s"<1>jedinica), i Rmax(RU jedinica). Ravnotežna konstanta disocijacije (Kd) je izračunata kao iz odnosa Kd= k0fr/kon, i u molarnim je jedinicama.
[0050]Ovi rezultati pokazuju da se bispecifično antitelo ovog pronalaska vezuje sa humanim IL-17 i humanim BAFF.
IstovremenovezivanjeIL-17 i BAFF
[0051]BIAcore 2000 instrument je korišćen da se odredi da li se humani IL-17 i humani BAFF mogu vezati istovremeno sa bispecifičnim antitelom. Osim kada je napomenuto, svi reagensi i materijali su kupljeni od BIAcore AB (Upsala, Sweden). Sva merenja su izvedena na 25°C. HBS-EP+ pufer (150 mM natrijum hlorid, 3 mM EDTA, 0.05 % (w/v) surfaktant P-20, i 10 mM HEPES, pH7.4) je korišćen kao tekući pufer i pufer za uzorke. Protein A je imobilisan na protočnim ćelijama 1 i 2 CM4 senzor čipa korišćenjem kompleta za kuplovanje amina. Bispecifično antitelo je prvo zarobljeno na protočnoj ćeliji 2, nakon čega je usledila injekcija humanog IL-17 sa 20 nM 5 min da bi se zasitilo IL-17 mesto vezivanja. Nakon vezivanja IL-17, humani BAFF sa 20 nM je zatim injektiran 5 min. i uočen je dodatni signal vezivanja. Površina čipa je zatim regenerisana korišćenjem lOmM glicina pH 1.5. Isti proces je ponavljen osim različitog redosleda humanog IL-17 i humanog BAFF. Stehiometrija je izračunata da bi se osiguralo kompletno zasićenje humanog IL-17 ili humanog BAFF sa bispecifičnim antitelom. Stehiometrija humanog IL-17 sa bispecifičnim antitelom je tipično~1.3 na osnovu eksperimenta kinetičkog vezivanja. Slično tome, stehiometrija humanog BAFF sa bispecifičnim antitelom je tipično na~1.0 na osnovu eksperimenta kinetičkog vezivanja. Kontrolni BAFF Ab je 4A5-3.1.1-B4 iz US7,317,089. Kontrolni IL-17 Ab je Fab 126 iz US7,838,638.
[0052]Ovi rezultati pokazuju da se bispecifično antitelo ovog pronalaska može istovremeno vezati humani IL-17 i humani BAFF kao što je pokazano povećanjem u jedinicama odgovora (A RU) od dva liganda koja se vezuju za bispecifično antitelo.
Inhibicija IL-17-indukovane CXCL1 proizvodnjeizHT-29 ćelija in vitro
[0053]HT-29 ćelije su epitelijalne ćelije humanog kolorektalnog adenokarcinoma koje prirodno eksprimiraju IL-17 receptor. Inkubacija HT29 ćelija sa humanim IL-17 rezultuje u proizvodnji CXCL1, koji se može meriti korišćenjem komercijalno dostupne ELISA.
[0054]Procenjivan je dozni opseg bispecifičnog antitela od 41200 do 2.64 pM (finalna koncentracija zasnovana na MW monomera bispecifičnog antitela (=100 kDa)). Svaka test koncentracija bispecifičnog antitela je zatim dodata (50 mcl) komoricama koje sadrže rekombinantni IL-17 (finalna IL-17 koncentracija u komorici je 3.75 nM (zasnovana na monomernoj MW IL-17 (=16 kDa)). Testiranje je izvedeno u triplikatu komorica po tretmanu. Medijum testa je korišćen za "sam medijum" i "sam IL-17" kontrole. IL-17 neutrališuće antitelo (Fab 126 iz US7,838,638) je korišćeno kao pozitivna kontrola u testu. Ploče sa smešama IL-17 i antitela su inkubirane 60 do 90 minuta na 37°C, 95% relativne vlažnosti, 5% CO2u unutrašnjim komoricama 96 komornih ploča sa kulturom tkiva. U varijanti ovog testa, dodata je zasićujuća koncentracija humanog BAFF (1.25 nM finalna koncentracija na osnovu MW monomera BAFF (=20 kDa)), sa ciljem da se odredi da li će bispecifično antitelo i dalje biti sposobno da neutrališe IL-17 kada se istovremeno veže za BAFF. HT-29 ćelije su rutinski kultivisane u test medijumu (McCoy 5A sa 10% FBS, penicilinom G (0.2 U/mL) i streptomicinom (0.2 mcg/mL)). Na dan testa, ćelije su isprane sa HBSS i odvojene od boca kulture sa tripsinom + EDTA. Tripsin je inaktiviran sa test medijumom. HT-29 ćelije su zatim centrifugirane na 500Xg 5 minuta na RT. Celijski talog je resuspendovan u test medijumu. Gustina ćelija je merena sa hemocitometrom, i 20,000 HT-29 ćelija (u 100 mcl) je dodato 96-komornim pločama sa smešom antitelo/IL-17. Dve stotine mcl PBS je dodato svakoj neiskorišćenoj ivičnoj komorici (bez ćelija) da bi se smanjili ivični efekti koji koji su rezultat isparavanja. 96-komorne ploče su stavljene u inkubator za kulturu tkiva (37°C, 95% relativna vlažnost, 5%C02) oko 48 časova.
[0055]Na kraju testa, ploče su centrifugirane (500Xg 5 minuta na RT), i medijum kulture ćelija je prenet na polipropilenske 96-komorne ploče, koje su zaprečaćene i zamrznute na - 80°C. Na dan merenja CXCL1 sa ELISA, ploče su odmrznute na RT. Nivoi CXCL1 u medijumu (nerazblažen, ili razblažen 1:3) su merene sa CXCL1 sandvič ELISA (R&D Svstems DuoSet #DY275), po uputstvu proizvođača, korišćenjem sledećih pufera i modifikacija: IX ELISA pufer za ispiranje od BioFX Labs (od 10X, #WSHW-1000-01); uzorak i standardna zapremina od 50 mcL po komorici; supstrat od BioFX Labs (1 komponenta HRP supstrat, #TMBW-1000-01); stop rastvor od BioFX Labs (#LSTP-1000-01; 100 mcl po komorici). Na kraju ELISA reakcije, ploče su očitane na 450 nm na čitaču mikroploča (Molecular Devices SpectraMax 190). Podaci su prikupljeni kao % maksimalne količine proizvedenog CXCL1 (sa samim IL-17 koji je 100%). Koncentracija gde je 50% IL-17-indukovanog odgovora inhibirano (IC50) bilo bispecifičnim antitelom ili pozitivnom kontrolom je izračunato korišćenjem 4 parametarskog sigmoidalnog fitovanja podataka (GraphPad Prism).
[0056]Podaci pokazuju da je bispecifično antitelo ovog pronalaska inhibiralo IL-17-indukovanu sekreciju CXCL1 od strane HT-29 ćelija na način zavisan od koncentracije. Inhibicija se može uporediti sa onom uočenom sa antitelom upotrebljenim kao pozitivna kontrola (sa IC50za bispecifično antitelo od 2.00 ± 0.21 nM nasuprot 1.86 ± 0.22 nM za antitelo upotrebi) eno kao pozitivna kontrola (prošek 3 nezavisna eksperimenta ± SEM)), dok antitelo upotrebljeno kao negativna kontrola nije inhibiralo proliferaciju. Dodatno, slična inhibicija je uočena u prisustvu zasićujuće količine BAFF, sa IC50za bispecifično antitelo od 1.57 ± 0.45 nM nasuprot 1.41 ± 0.50 nM za antitelo upotrebljeno kao pozitivna kontrola (prošek 3 nezavisna eksperimenta ± SEM). Bispecifično antitelo ovog pronalaska efikasno neutrališe IL-17 i na ovu neutralizaciju ne utiče prisustvo zasićujućih količina BAFF.
Inhibicija BAFF-indukovane proliferacije T1165 ćelija in vitro
[0057]TI 165.17 je ćelijska linija mišjeg plazmocitoma koja je zavisna od spoljnih faktora (IL-lbeta ili BAFF) za preživljavanje i rast. Ove ćelije prirodno eksprimiraju receptor za BAFF i njhov odgovor na humani BAFF je meren praćenjem proliferacije.
[0058]Opseg doze bispecifičnog antitela od 1 nM do 4.1 pM (finalana koncentracija na osnovu MW monomera bispecifičnog antitela (=100 kDa)) je procenjen u odnosu na sposobnost da neutrališe rastvorljivi BAFF (finalna koncentracija rastvorljivog BAFF u testu je 150 pM na osnovu MW monomera BAFF (=20 kDa)). Različite koncentracije bispecifičnog antitela su inkubirane sa rastvorljivim BAFF 30-60 minuta na 37°C u unutrašnjim komoricama 96 komorne ploče za kulturu tkiva sa ravnim dnom sa ukupnom zapreminom od 50 mcl. BAFF neutrališuće antitelo (4A5-3.1.1-B4 iz US7,317,089) je korišćeno kao pozitivna kontrola u testu. Svaki uslov je testiran u triplikatu. U varijanti ovog testa, testirana je sposobnost bispecifičnog antitela da neutrališe membranski BAFF. Različite koncentracije bispecifičnog antitela su inkubirane sa membranskom frakcijom HEK293 ćelija koje eksprimiraju ne-cepajući oblik BAFF (postignut mutiranjem furinskog mesta cepanja u BAFF, što rezultuje u stalnoj ekspresiji BAFF na ćelijskoj membrani). U sledećoj varijanti ovog testa, zasićujuća koncentracija humanog IL-17 je dodata (15.6 nM finalna koncentracija, na osnovu MW monomera IL-17 (=16 kDa)), u cilju određivanja da li će bispecifično antitelo i dalje biti sposobno da neutrališe bilo rastvorljivi ili membranski BAFF kada je istovremeno vezano sa IL-17.
[0059]TI 165 ćelije su rutinski kultivisane u test medijumu (RPMI1640 sa 10% FBS, HEPES, L-Glutamin, lmM natrijum piruvat, 5 x IO"<5>M 2-merkaptoetanol, IX antibiotik-antimikotik) sa dodatkom 2 ng/mL rekombinantnog humanog IL-lbeta. Na dan testa ćelije su isprane 3 puta sa test medijumom i resuspendovane do lxl0<5>ćelija/mL u test medijumu. Pedeset mcl ćelijske suspenzije je dodato 96 komornoj ploči, koja sadrži smešu antitela i BAFF. Sto mcl test medijuma je dodato svakoj od neiskorišćenih ivičnih komorica (bez ćelija) da bi se smanjili ivični efekti koji su rezultat isparavanja. Ploče su postavljene u inkubator za kulturu tkiva (37°C, 95% relativne vlažnosti, 5%>CC»2) oko 44 časa. Na kraju testa dodato je 20 mcl Promega Cell Titer 96 Aqueous One rastvora svakoj komorici i inkubirane su 1 do 4 časa na 37°C. Ploče su očitane na 490 nm na čitaču mikroploča (Molecular Devices SpectraMax 190). Podaci su prikupljeni kao % inhibicije, korišćenjem komorica bez BAFF kao minimum i komorica sa 150 pM BAFF kao maksimum odgovora. Koncentracija gde je 50% BAFF-indukovanog odgovora inhibirano (IC50) bilo sa bispecifičnim antitelom ili pozitivnom kontrolom izračunata je korišćenjem 4 parametarskog sigmoidalnog fitovanja podataka (SigmaPlot).
[0060]Podaci pokazuju da bispecifično antitelo inhibira rastvorljivim BAFF-indukovanu proliferaciju TI 165 ćelija na način zavisan od koncentracije. Ova inhibicija se može uporediti sa onom uočenom sa antitelom upotrebljenim kao pozitivna kontrola (sa IC50za bispecifično antitelo od 0.064 ±0.021 pM nasuprot 0.071 ± 0.002 pM za antitelo korišćeno kao pozitivna kontrola (prošek 2 nezavisna eksperimenta ± SEM)), dok antitelo upotrebljeno kao negativna kontrola nije inhibiralo proliferaciju. Dodatno, slična inhibicija je uočena u prisustvu zasićujuće količine IL-17, sa IC50za bispecifično antitelo od 0.060 ± 0.014 pM nasuprot 0.073 ± 0.012 pM za antitelo upotrebljeno kao pozitivna kontrola (prošek 2 nezavisna eksperimenta ± SEM). Bispecifično antitelo efikasno neutrališe BAFF i na ovu neutralizaciju ne utiče prisustvo zasićujućih količina IL-17.
[0061]Sposobnost bispecifičnog antitela da inhibira proliferaciju TI 165 ćelija indukovanu sa membranski vezanim BAFF je takođe pokazano. Bispecifično antitelo ovog pronalaska efikasno inhibira proliferaciju indukovanu membranski vezanim BAFF slično antitelu na BAFF korišćenom kao pozitivna kontrola (4A5-3.1.1-B4 iz US7,317,089). Dodatno, slična inhibicija je uočena u prisustvu zasićujućih količina IL-17.
Inhibicija humanim IL-17-indukovane proizvodnje CXCL1 in vivo
[0062] Injekcija humanog IL-17 dovodi do brzog i prolaznog povećanja mišjeg CXCL1 u cirkulaciji. Normalne ženke C57B16 miševa (n=8 po grupi) su injektirane SC bilo sa bispecifičnim antitelom (66 mcg/mišu), ili pozitivnom kontrolom anti-IL-17 antitela (Fab 126 iz US7,838,638, 50 mcg/mišu) ili negativnom kontrolom antitela (hu!gG4, 50 mcg/mišu). Dva dana kasnije, miševi su primili jednu IP injekciju humanog IL-17 (3 mcg/mišu) i 2 časa kasnije prikupljen je serum i uskladišten na -80°C do analize. Koncentracija CXCL1 je određena sa ELISA. Mikrotitarske ploče su obložene sa humanim Fc koji vezuje antitela (Jackson ImmunoResearch 109-005-098, 1 mcg/mL) i inkubirane preko noći na 4°C. Ploče su isprane, blokirane sa kazeinom, i dodato je 100 mcl seruma (1:1000 razređenje). Ploče su inkubirane 2 č na RT, isprane i dodato je HRP-obeleženo antitelo za detekciju (anti-human IgG, Jackson ImmunoResearch 709-035-149). Ploče su inkubirane lč na RT, isprane i razvijene korišćenjem TMB supstrata i očitane korišćenjem čitača ploča. Koncentracija je izračunata na osnovu odgovarajućih standardnih krivih.
[0063]Ovi podaci potvrđuju da humani IL-17 rezultuje u povećanju serumskih nivoa CXCL1. Međutim, u prisustvu bispecifičnog antitela ovi rezultati pokazuju da je IL-17-indukovano povećanje CXCL1 smanjeno (P<0.01, ANOVA) u odnosu na životinje koje primaju negativnu kontrolu antitela. Smanjenje CXCL1 sa bispecifičnim antitelom može se uporediti sa onim uočenim sa pozitivnom kontrolom anti-IL-17 antitela. Ekvivalentno izlaganje bilo bispecifičnom antitelu, pozitivnim i negativnim kontrolama antitela unutar svake grupe je potvrđeno kvantitativnom ELISA. Stoga, bispecifično antitelo ovog pronalaska efikasno neutrališe biološke efekte indukovane humanim IL-17 kod miša. Određivanje P vrednosti je upoređeno sa negativnom kontrolom/IL-17 grupom.
Inhibicija humanogBAFFinvivo
[0064]Miševi koji nose transgen koji kodira rastvorljivi humani BAFF imaju abnormalno veliki broj B limfocita u slezini.
[0065]Miševi transgeni za humani BAFF (n=5 po grupi) injektirani su IP bilo sa jednom dozom bispecifičnog antitela (660 mcg/mišu), ili pozitivnom kontrolom anti-BAFF antitela (4A5-3.1.1-B4 US7,317,089, 500 mcg/mišu) ili negativnom kontrolom antitela (hu!gG4, 500 mcg/mišu). Osam dana kasnije, prikupljeni su serum i slezine. Suspenzija pojedinačnih ćelija ćelija slezine je pripremljena i ukupan broj leukocita je određen nakon liziranja crvenih krvnih ćelija. Relativni procenat B limfocita je određen korišćenjem markera na ćelijskoj površini B220 protočnom citometrijom. Ukupan broj B ćelija po slezini je izračunat množenjem procenta B220 pozitivnih ćelija sa ukupnim brojem limfocita u slezini. Mikrotitarske ploče su obložene sa humanim Fc za vezivanje antitela (Jackson ImmunoResearch 109-005-098, 1 mcg/mL) i inkubirane preko noći na 4°C. Ploče su isprane, blokirane sa kazeinom, i dodato je 100 mcl seruma (1:5000 razblaženje). Ploče su inkubirane 2č na RT, isprane i dodato je HRP-obeleženo antitelo za detekciju (anti-human IgG, Jackson ImmunoResearch 709-035-149). Ploče su inkubirane lč na RT, isprane i razvijene korišćenjem TMB susptrata i očitane korišćenjem čitača ploča. Koncentracija je izračunata na osnovu odgovarajućih standardnih krivih.
[0066]Ovi rezultati pokazuju da je broj B ćelija u slezinama miševa transgenih za humani BAFF redukovan (p<0.0001, ANO VA) sa jednom primenom bispecifičnog antitela. Ova normalizacija broja B ćelija je ekvivalent onome uočenom sa pozitivnom kontrolom BAFF antitela. Ekvivalentno izlaganje bilo bispecifičnom antitelu, pozitivnim i negativnim kontrolama antitela unutar svake grupe je potvrđeno kvantitativnom ELISA. Stoga, bispecifično antitelo ovog pronalaska efikasno neutrališe biološke efekte indukovane humanim BAFF kod miša. Određivanje P vrednosti je upoređeno sa negativnom kontrolnom grupom.
Analiza rastvorljivosti i stabilnosti
[0067]Bispecifično antitelo je formulisano u PBS na pH 7.4. Bispecifično anitelo je koncnetrovano od 1-2 mg/mL do koncentracije u opsegu od 52 mg/mL do 58 mg/mL korišćenjem Amicon koncentratora. Koncentrovani uzorci su uskladišteni na 25°C tokom perioda od 4 nedelje. Uzorci su analizirani u odnosu na procenat velike molekulske težine (%HMW) sa ekskluzionom hromatografijom (SEC) u inicijalnoj koncentraciji, 1 dan, 1 nedelja, i 4 nedelje inkubacije. SEC je izvedena na Agilent 1100 sistemu korišćenjem TSK G3000SW-XL (Tosoh Bioscience) kolone. PBS + 0.35M NaCl, pH 7.4 je korišćeno kao mobilna faza koja je tekla sa 0.5 mL/min u toku 35 minuta. Zapremina od luL koncentrovanog antitela je injektirana u kolonu i detekcija je merena na 280nm. Hromatogrami su analizirani korišćenjem ChemStation i % velike molekulske težine (HMW) je izračunat korišćenjem odnosa AUC pikova eluiranih pre pika monomera prema ukupnoj AUC. Uzorci uskladišteni na 25°C u različitim vremenskim tačkama su analizirani u odnosu na %HMW i rezultati su rezimirani u Tabeli 5.
[0068]Preliminarne studije sa početnim bispecifičnim antitelima koje sadrži BAFF antitelo iz WO2003016468 i IL-17 antitelo iz WO2007070750 pokazale su da nakon koncentrovanja do samo 6 mg/mL, 25% povećanje % HMW vrsta je detektovano sa SE-HPLC nakon 3 nedelje skladištenja na 4°C u PBS, i na 30 mg/mL povećanje % HMW vrsta bilo je 15% nakon samo 2 dana skladištenja na 4°C u PBS. Ovi rezultati pokazuju da bispecifično antitelo pronalaska ima veoma poboljšane osobine, uključujući smanjenu agregaciju i povećanu fizičku stabilnost, u odnosu na početno bispecifično antitelo.
Claims (5)
1. Bispecifično antitelo koje sadrži dva prva polipeptida i dva druga polipeptida gde je aminokiselinska sekvenca prvog polipeptida SEQ ID NO: 1 i aminokiselinska sekvenca drugog polipeptida SEQ ID NO: 2.
2. Bispecifično antitelo prema patentnom zahtevu 1, u kome postoji intra-lančana disulfidna veza između cisteinskog ostatka 507 SEQ ID NO: 1 i cisteinskog ostatka 707 SEQ ID NO: 1.
3. Bispecifično antitelo prema patentnom zahtevu 1 ili 2 za upotrebu u terapiji.
4. Bispecifično antitelo prema patentnom zahtevu 1 ili 2 za upotrebu u tretmanu sistemskog lupusa eritematozusa, lupusa nefritisa, reumatoidnog artritisa, psorijaze, ankiloznog spondilitisa, psorijatičkog artritisa, primarnog Sjogren-ovog sindroma, ili multiplog mijeloma.
5. Farmaceutska kompozicija koja sadrži bispecifično antitelo prema patentnom zahtevu 1 ili 2 ijedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača, ili ekscipijenata.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261636302P | 2012-04-20 | 2012-04-20 | |
| US201361768747P | 2013-02-25 | 2013-02-25 | |
| EP13726321.6A EP2838920B1 (en) | 2012-04-20 | 2013-04-16 | Anti-baff-anti-il-17 bispecific antibodies |
| PCT/US2013/036677 WO2013158577A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-04-16 | Anti-baff-anti-il-17 bispecific antibodies |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RS55729B1 true RS55729B1 (sr) | 2017-07-31 |
Family
ID=48539373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RS20170160A RS55729B1 (sr) | 2012-04-20 | 2013-04-16 | Anti-baff-anti-il-17 bispecifična antitela |
Country Status (39)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9359448B2 (sr) |
| EP (2) | EP3192809B1 (sr) |
| JP (1) | JP6216772B2 (sr) |
| KR (1) | KR101673735B1 (sr) |
| CN (1) | CN104220455B (sr) |
| AP (1) | AP2014008002A0 (sr) |
| AR (1) | AR090626A1 (sr) |
| AU (1) | AU2013249546B2 (sr) |
| BR (1) | BR112014025649A2 (sr) |
| CA (1) | CA2869148C (sr) |
| CL (1) | CL2014002616A1 (sr) |
| CO (1) | CO7160039A2 (sr) |
| CR (1) | CR20140466A (sr) |
| CY (1) | CY1118824T1 (sr) |
| DK (1) | DK2838920T3 (sr) |
| DO (1) | DOP2014000234A (sr) |
| EA (1) | EA029185B1 (sr) |
| EC (1) | ECSP14023405A (sr) |
| ES (2) | ES2789474T3 (sr) |
| GT (1) | GT201400217A (sr) |
| HR (1) | HRP20170468T1 (sr) |
| HU (1) | HUE032153T2 (sr) |
| IL (1) | IL234965B (sr) |
| IN (1) | IN2014MN01876A (sr) |
| LT (1) | LT2838920T (sr) |
| ME (1) | ME02596B (sr) |
| MX (1) | MX367460B (sr) |
| MY (1) | MY173282A (sr) |
| NZ (1) | NZ630865A (sr) |
| PE (1) | PE20142147A1 (sr) |
| PH (1) | PH12014502333A1 (sr) |
| PL (1) | PL2838920T3 (sr) |
| PT (1) | PT2838920T (sr) |
| RS (1) | RS55729B1 (sr) |
| SG (1) | SG11201406726PA (sr) |
| SI (1) | SI2838920T1 (sr) |
| TW (1) | TWI585103B (sr) |
| WO (1) | WO2013158577A1 (sr) |
| ZA (1) | ZA201407272B (sr) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2011254557B2 (en) | 2010-05-20 | 2015-09-03 | Ablynx Nv | Biological materials related to HER3 |
| UA117218C2 (uk) | 2011-05-05 | 2018-07-10 | Мерк Патент Гмбх | Поліпептид, спрямований проти il-17a, il-17f та/або il17-a/f |
| AR090626A1 (es) * | 2012-04-20 | 2014-11-26 | Lilly Co Eli | Anticuerpos anti-baff-anti-il-17 biespecificos |
| TW201444867A (zh) | 2013-03-08 | 2014-12-01 | Lilly Co Eli | 抗ｔｎｆ－抗ｉｌ－１７雙特異性抗體 |
| US9458246B2 (en) | 2013-03-13 | 2016-10-04 | Amgen Inc. | Proteins specific for BAFF and B7RP1 |
| PH12022550138A1 (en) | 2013-03-13 | 2023-03-06 | Amgen Inc | Proteins specific for baff and b7rp1 and uses thereof |
| CN105792646B (zh) * | 2013-11-19 | 2018-03-02 | 瑞泽恩制药公司 | 具有人源化的b细胞活化因子基因的非人动物 |
| EA033604B1 (ru) | 2014-01-31 | 2019-11-08 | Boehringer Ingelheim Int | Молекула анти-baff антитела, фармацевтическая композиция, содержащая эту молекулу, способы ее применения и кодирующий ее изолированный полинуклеотид |
| AR102417A1 (es) | 2014-11-05 | 2017-03-01 | Lilly Co Eli | Anticuerpos biespecíficos anti-tnf- / anti-il-23 |
| AU2016297575B2 (en) * | 2015-07-23 | 2021-05-27 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Compound targeting IL-23A and B-cell activating factor (BAFF) and uses thereof |
| CN105061596B (zh) * | 2015-08-05 | 2019-01-29 | 江苏诺迈博生物医药科技有限公司 | 人b淋巴细胞刺激因子的单克隆抗体及其应用 |
| WO2019136311A2 (en) * | 2018-01-05 | 2019-07-11 | Biograph 55, Inc. | Compositions and methods for cancer immunotherapy |
| CN117529506A (zh) * | 2021-06-11 | 2024-02-06 | 海南先声药业有限公司 | 抗人il-17抗体和taci的双功能融合蛋白分子 |
| WO2024140930A1 (en) * | 2022-12-28 | 2024-07-04 | Suzhou Transcenta Therapeutics Co., Ltd. | Bispecific binding protein comprising anti-baff antibody and use thereof |
| TW202440636A (zh) | 2023-03-21 | 2024-10-16 | 美商傳記５５有限公司 | Ｃｄ１９／ｃｄ３８多特異性抗體 |
| WO2025108551A1 (en) | 2023-11-23 | 2025-05-30 | Mabylon Ag | Multispecific anti-allergen antibodies and uses thereof |
| WO2025109206A1 (en) | 2023-11-22 | 2025-05-30 | Mabylon Ag | Multispecific anti-allergen antibodies and uses thereof |
| WO2025222167A1 (en) * | 2024-04-19 | 2025-10-23 | Zb17 Llc | Methods of treatment |
| WO2025222168A1 (en) * | 2024-04-19 | 2025-10-23 | Zb17 Llc | Methods of treatment |
| WO2025222170A1 (en) * | 2024-04-19 | 2025-10-23 | Zb17 Llc | Methods of treatment |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995009917A1 (en) | 1993-10-07 | 1995-04-13 | The Regents Of The University Of California | Genetically engineered bispecific tetravalent antibodies |
| AR035119A1 (es) * | 2001-08-16 | 2004-04-14 | Lilly Co Eli | Anticuerpos humanos antagonistas anti-htnfsf13b |
| EP2500352A1 (en) * | 2005-08-19 | 2012-09-19 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
| LT2481753T (lt) * | 2005-12-13 | 2018-05-25 | Eli Lilly And Company | Anti-il-17 antikūnai |
| US20110293629A1 (en) * | 2010-05-14 | 2011-12-01 | Bastid Jeremy | Methods of Treating and/or Preventing Cell Proliferation Disorders with IL-17 Antagonists |
| AR090626A1 (es) * | 2012-04-20 | 2014-11-26 | Lilly Co Eli | Anticuerpos anti-baff-anti-il-17 biespecificos |
-
2013
- 2013-04-08 AR ARP130101134A patent/AR090626A1/es active IP Right Grant
- 2013-04-12 TW TW102113167A patent/TWI585103B/zh not_active IP Right Cessation
- 2013-04-16 RS RS20170160A patent/RS55729B1/sr unknown
- 2013-04-16 PE PE2014001619A patent/PE20142147A1/es active IP Right Grant
- 2013-04-16 PL PL13726321T patent/PL2838920T3/pl unknown
- 2013-04-16 IN IN1876MUN2014 patent/IN2014MN01876A/en unknown
- 2013-04-16 JP JP2015507095A patent/JP6216772B2/ja active Active
- 2013-04-16 AP AP2014008002A patent/AP2014008002A0/xx unknown
- 2013-04-16 CA CA2869148A patent/CA2869148C/en active Active
- 2013-04-16 NZ NZ630865A patent/NZ630865A/en not_active IP Right Cessation
- 2013-04-16 MX MX2014012692A patent/MX367460B/es active IP Right Grant
- 2013-04-16 HU HUE13726321A patent/HUE032153T2/en unknown
- 2013-04-16 ES ES17153380T patent/ES2789474T3/es active Active
- 2013-04-16 EP EP17153380.5A patent/EP3192809B1/en active Active
- 2013-04-16 CN CN201380020761.7A patent/CN104220455B/zh active Active
- 2013-04-16 PT PT137263216T patent/PT2838920T/pt unknown
- 2013-04-16 LT LTEP13726321.6T patent/LT2838920T/lt unknown
- 2013-04-16 BR BR112014025649A patent/BR112014025649A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2013-04-16 HR HRP20170468TT patent/HRP20170468T1/hr unknown
- 2013-04-16 EA EA201491622A patent/EA029185B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-04-16 MY MYPI2014703075A patent/MY173282A/en unknown
- 2013-04-16 WO PCT/US2013/036677 patent/WO2013158577A1/en not_active Ceased
- 2013-04-16 DK DK13726321.6T patent/DK2838920T3/en active
- 2013-04-16 SI SI201330522A patent/SI2838920T1/sl unknown
- 2013-04-16 ES ES13726321.6T patent/ES2621917T3/es active Active
- 2013-04-16 KR KR1020147028867A patent/KR101673735B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2013-04-16 US US13/863,544 patent/US9359448B2/en active Active
- 2013-04-16 EP EP13726321.6A patent/EP2838920B1/en active Active
- 2013-04-16 ME MEP-2017-41A patent/ME02596B/me unknown
- 2013-04-16 AU AU2013249546A patent/AU2013249546B2/en not_active Ceased
- 2013-04-16 SG SG11201406726PA patent/SG11201406726PA/en unknown
-
2014
- 2014-09-30 CL CL2014002616A patent/CL2014002616A1/es unknown
- 2014-10-02 IL IL234965A patent/IL234965B/en active IP Right Grant
- 2014-10-06 CR CR20140466A patent/CR20140466A/es unknown
- 2014-10-07 ZA ZA2014/07272A patent/ZA201407272B/en unknown
- 2014-10-15 GT GT201400217A patent/GT201400217A/es unknown
- 2014-10-16 DO DO2014000234A patent/DOP2014000234A/es unknown
- 2014-10-17 EC ECIEPI201423405A patent/ECSP14023405A/es unknown
- 2014-10-17 PH PH12014502333A patent/PH12014502333A1/en unknown
- 2014-10-20 CO CO14231938A patent/CO7160039A2/es unknown
-
2016
- 2016-05-18 US US15/157,782 patent/US9708402B2/en active Active
-
2017
- 2017-03-27 CY CY20171100380T patent/CY1118824T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2869148C (en) | Anti-baff-anti-il-17 bispecific antibodies | |
| TWI851860B (zh) | 抗tslp抗體及其用途 | |
| US9416182B2 (en) | Anti-TNF-anti-IL-17 bispecific antibodies | |
| TWI585105B (zh) | 抗ｔｎｆ／抗ｉｌ－２３雙特異性抗體 | |
| US11667704B2 (en) | Anti-IL-17 antibody/TNFR ECD fusion protein and use thereof | |
| AU2016369307A1 (en) | Multi-specific antibody molecules having specificity for TNF-alpha, IL-17A and IL-17F | |
| CN107207623A (zh) | Fc融合高亲和力IgE受体α链 | |
| KR20220113791A (ko) | 이중특이적 항-ccl2 항체 | |
| WO2015113494A1 (zh) | 双功能融合蛋白及其制备方法和用途 | |
| AU2018450414B2 (en) | Anti-IL-25 antibodies and use thereof | |
| CN108135983A (zh) | 抗cgrp /抗il-23双特异性抗体及其用途 | |
| HK1201862B (en) | Anti-baff-anti-il-17 bispecific antibodies | |
| CN113698467A (zh) | Il-6变体及其用途 | |
| CN119301153A (zh) | 结合il-17a和il-17f的抗体分子及其应用 |