RS56034B1

RS56034B1 - Derivati prolekova supstituisanih triazolopiridina

Info

Publication number: RS56034B1
Application number: RS20170534A
Authority: RS
Inventors: Volker Schulze; Hans-Georg Lerchen; Donald Bierer; Antje Margret Wengner; Gerhard Siemeister; Philip Lienau; Ursula Krenz; Dirk Kosemund; Detlef Stöckigt; Michael Brüning; Ulrich Lücking; Ildikó Terebesi
Original assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 2013-06-11
Filing date: 2014-06-06
Publication date: 2017-09-29
Also published as: NI201500176A; IL242847A0; EA201600002A1; PH12015502746A1; WO2014198647A2; AP2015008898A0; MX2015017119A; CN105377848A; CU20150176A7; MA38654B1; TN2015000545A1; CL2015003605A1; PL3008062T3; EP3008062B1; JP2016526534A; UY35610A; AR096585A1; CA2914745A1; AU2014280356A1; US20160207915A1

Description

[0001] Predmetni pronalazak je vezan za prolekove derivate inhibitora Mps-1 kinaze, postupke za njihovu pripremu, i njihovu primenu za lečenje i/ili profilaksu bolesti.

POZADINA PRONALASKA

[0002] Mps-1 (Monopolarna vretenasta 1) kinaza (takođe poznata kao tirozin treonin kinaza, TTK) je Ser/Thr kinaza sa dvojnom specifičnošću, koja igra ključnu ulogu u aktivaciji kontrolne tačke mitoze (takođe poznata kao kontrolna tačka vretena, kontrolna tačka vretenastog sklopa), čime obezbeđuje pravilnu segregaciju hromozoma tokom mitoze [Abrieu A et al., Cell, 2001, 106, 83-93]. Svaka ćelija koja se deli mora da obezbedi jednaku raspodelu replikovanih hromozoma na dve ćerke ćelije. Po ulasku u mitozu, hromozomi se vezuju svojim kinetohorima za mikrotubule deobnog vretena. Mitotička kontrolna tačka je nadzorni mehanizam koji je aktivan dokle god su prisutni nevezani kinetohori, i sprečava da deoba mitotičkih ćelija uđe u anafazu i da se ćelijska deoba završi sa nevezanim hromozomima [Suijkerbuijk SJ and Kops GJ, Biochemica et Biophysica Acta, 2008, 1786, 24-31; Musacchio A and Salmon ED, Nat Rev Mol Cell Biol., 2007, 8, 379-93]. Kada se svi kinetohori vežu na ispravan amfitelni, tj. bipolarni način sa mitotičkim vretenom, kontrolna tačka je zadovoljna, i ćelija ulazi u anafazu i nastavlja sa deobom. Mitotička kontrolna tačka se sastoji od kompleksne mreže jednog broja esencijalnih proteina, uključujući članove porodica MAD (bez zaustavljanja mitoze, MAD 1-3) i Bub (pupljenje nije inhibirano benzimidazolom, Bub 1-3), motorni protein CENP-E, Mps-1 kinazu, kao i druge komponente, od kojih su mnoge prekomerno eksprimirane u proliferativnim ćelijama (npr. ćelijama kancera) i tkivima [Yuan B et al., Clinical Cancer Research, 2006, 12, 405-10]. Esencijalna uloga aktivnosti Mps-1 kinaze u signalizaciji mitotičkih kontrolnih tačaka dokazana je putem utišavanja shRNK, hemijske genetike, kao i hemijskih inhibitora Mps-1 kinaze [Jelluma N et al., PLos ONE, 2008, 3, e2415; Jones MH et al., Current Biology, 2005, 15, 160-65; Dorer RK et al., Current Biology, 2005, 15, 1070-76; Schmidt M et al., EMBO Reports, 2005, 6, 866-72]. Postoji obimna evidencija koja povezuje redukovanu ali nekompletnu funkciju mitotičke kontrolne tačke sa aneuploidijom i tumorigenezom [Weaver BA and Cleveland DW, Cancer Research, 2007, 67, 10103-5; King RW, Biochimica et Biophysica Acta, 2008, 1786, 4-14]. Nasuprot tome, zaključeno je da potpuna inhibicija mitotičke kontrolne tačke dovodi do ozbiljne pogrešne segregacije hromozoma, i indukovanja apoptoze kod tumorskih ćelija [Kops GJ et al., Nature Reviews Cancer, 2005, 5, 773-85; Schmidt M and Medema RH, Cell Cycle, 2006, 5, 159-63; Schmidt M and Bastians H, Drug Resistance Updates, 2007, 10, 162-81].

[0003] Stoga ukidanje mitotičke kontrolne tačke putem farmakološke inhibicije Mps-1 kinaze ili drugih komponenata mitotičke kontrolne tačke predstavlja novi pristup lečenju proliferativnih poremećaja, uključujući solidne tumore, kao što su karcinomi i sarkomi, i leukemije i limfoidne malignitete ili druge poremećaje vezane za nekontrolisanu ćelijsku proliferaciju.

[0004] Prethodno su u struci objavljena različita jedinjenja koja imaju inhibitorsko dejstvo na Mps-1 kinazu: WO 2009/024824 A1 objavljuje 2-anilinopurin-8-one kao inhibitore Mps-1 za lečenje proliferativnih poremećaja. WO 2010/124826 A1 objavljuje supstituisane imidazohinoksaline kao inhibitore Mps-1 kinaze. WO 2011/026579 A1 objavljuje supstituisane aminohinoksaline kao inhibitore Mps-1. WO 2011/064328 A1, WO 2011/063907 A1, WO 2011/063908 A1 i WO 2012/143329 A1 odnose se na [1,2,4]-triazolo-[1,5-α]-piridine i njihovu primenu za inhibiciju Mps-1 kinaze.

[0005] Gore navedene patentne prijave vezane za [1,2,4]-triazolo-[1,5-α]-piridine uglavnom su fokusirane na efikasnost jedinjenja u inhibiciji Mps-1 kinaze, koja se izražava kao polovina maksimalne inhibirajuće koncentracije (IC50) jedinjenja. Na primer, u WO 2011/063908 A1, efikasnost u inhibiranju Mps-1 kinaze merena je u svim testovima Mps-1 kinaza sa koncentracijom od 10 µM adenozin trifosfata (ATP). Koncentracija ATP-a u ćelijama sisara je reda veličine milimola. Stoga je značajno da lekovita supstanca takođe bude efikasna u inhibiranju Mps-1 kinaze u testu kinaze sa milimolskim koncentracijama ATP-a, npr. 2 mM ATP-a, da bi se potencijalno postigao antiproliferativni efekat u ćelijskom testu.

[0006] Pored toga, kao što znaju ljudi sa uobičajenim znanjem iz struke, postoji mnogo više faktora koji određuju da li je jedinjenje potencijalni lek. Cilj pretkliničkog razvoja je procena, npr. parametara bezbednosti, toksičnosti, farmakokinetike i metabolizma pre kliničkih ispitivanja na ljudima. Jedan bitan faktor za procenu da li je jedinjenje potencijalni lek je metabolička stabilnost. Metabolička stabilnost jedinjenja može biti određena npr. inkubacijom jedinjenja sa suspenzijom mikrozoma iz jetre npr. pacova, psa i/ili čoveka (detalje potražite u eksperimentalnom delu).

[0007] Drugi značajan činilac procene da li je neko jedinjenje potencijalni lek za lečenje kancera je inhibicija proliferacije ćelija koja može da se odredi npr. HeLa testom ćelijske proliferacije (detalje potražite u eksperimentalnom delu).

[0008] Uspešna isporuka farmaceutika pacijentu je od kritičnog značaja i u lečenju poremećaja. Primena mnogih kliničkih lekova sa poznatim bioaktivnim osobinama je ograničena veoma slabom rastvorljivošću leka u vodi, usled čega je npr. intravenska primena aktivnog sastojka veoma teška.

[0009] Intravenska (i.v.) primena leka ukazuje na postupak davanja leka direktno u venu pacijenta. Metode primene leka i.v. mogu da uključe davanje leka brzom injekcijom (istiskivanjem) u venu pomoću šprica, davanje leka povremeno tokom određenog vremenskog perioda pomoću sekundarnog i.v. voda, ili davanje leka kontinualno u smeši sa glavnim i.v. rastvorom.

[0010] Primarna svrha davanja i.v. lekova je iniciranje brzog sistemskog odgovora na lek. To je jedan od najbržih načina za isporuku lekova. Lek je odmah na raspolaganju organizmu. Lakše je kontrolisati stvarnu količinu leka isporučenu organizmu primenom i.v. metode, i takođe je lakše održati nivoe leka u krvi radi terapijskog odgovora.

[0011] Kao posledica loše rastvorljivosti u vodi, mnogi lekovi su često formulisani u farmaceutskim vehikulumima koji su korastvarači, ili kao prolekovi.

[0012] Prolek je aktivni lek hemijski transformisan u derivat koji pod hemijskim uticajem ili dejstvom enzima prelazi u matični lek u organizmu, pre nego što dođe do mesta delovanja ili nakon toga. Proces prevođenja aktivnog leka u neaktivni oblik naziva se modifikacija leka. Prolekovi mogu biti prolekovi vezani za nosače i bioprekursori. Prolekovi vezani za nosače nastaju privremenim vezivanjem aktivnog molekula sa transportnom grupom. Takvi prolekovi su manje aktivni ili su neaktivni u poređenju sa matičnim aktivnim lekom. Transportna grupa može se izabrati na osnovu netoksičnosti i sposobnosti da obezbedi oslobađanje aktivnog principa sa efikasnom kinetikom. Pri tome bioprekursor nastaje molekulskom modifikacijom samog aktivnog principa stvaranjem novog molekula koji je u stanju da bude supstrat metabolitičkim enzimima koji oslobađaju aktivni princip kao metabolit.

[0013] Prolekovi se pripremaju da bi se promenila farmakokinetika leka, poboljšala stabilnost i rastvorljivost, smanjila toksičnost, povećala specifičnost i/ili povećalo trajanje farmakološkog efekta leka. Promenom farmakokinetike leka, poboljšava se bioraspoloživost putem povećanja apsorpcije, distribucije, biotransformacije i/ili ekskrecije leka.

[0014] Prilikom dizajniranja prolekova, važno je uzeti u obzir sledeće faktore: a) veza između nosača i leka je obično kovalentna veza, b) prolek je neaktivan ili manje aktivan od aktivnog principa, c) sinteza proleka ne treba da bude skupa, d) prolek mora biti reverzibilni ili bioreverzibilni derivat leka i e) noseća grupa mora biti netoksična i neaktivna prilikom otpuštanja.

[0015] Prolekovi se obično dobijaju putem: a) formiranja estara, hemiestara, karbonatnih estara, nitratnih estara, amida, hidroksamskih kiselina, karbamata, imina, Manihovih baza i enamina aktivnog leka, b) funkcionalizacije leka azo, glikozidnim, peptidnim i etarskim funkcionalnim grupama, c) primenom leka u obliku polimera, soli, kompleksa, fosforamida, acetala, hemiacetala i ketala (na primer, potražite u literaturi Andrejus Korolkovas, "Essentials of Medicinal Chemistry", str.97-118).

[0016] Stoga je cilj predmetnog pronalaska identifikovanje jedinjenja koja inhibiraju Mps-1 kinazu ili njihovih derivata koji su prolekovi, koji su karakterisani velikom verovatnoćom da su potencijalni lekovi i koji mogu da se primenjuju intravenski.

REZIME PRONALASKA

[0017] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja opšte formule (I) :

u kojoj :

R<A>predstavlja grupu odabranu od:

-C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>,

-C(=O)-(CR<4>R<5>)-N(R<6>)R<7>,

-C(=O)-O-(CH2)2-N(H)R<3>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>;

R<1>predstavlja grupu odabranu od metoksi- i 2,2,2-trifluoretoksi-;

R<2>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "*" označava tačku vezivanja na fenilni prsten na koji je pripojen R<2>;

R<3>predstavlja grupu odabranu od:

C1-C6-alkil, C3-C6-cikloalkil-,

4- do 7-člani heterocikloalkil-;

navedena grupa je opciono supstituisana, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od:

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2;

R<4>i R<5>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe C1-C3-alkil-,

ili

R<4>i R<5>, zajedno sa atomom ugljenika za koji su oni vezani, grade C3-C6-cikloalkilni prsten;

R<6>predstavlja atom vodonika ili grupu C1-C3-alkil-;

R<7>predstavlja atom vodonika ili grupu -C(=O)R<9>;

R<8>predstavlja grupu odabranu od:

C1-C6-alkila, C3-C6-cikloalkila-,

4- do 7-članog heterocikloalkila-;

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2;

R<9>predstavlja grupu

ili R<9>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "**" označava tačku vezivanja na karbonilnu grupu na koju je pripojen R<9>; R<10>i R<11>,

nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe C1-C3-alkil-, ili

R<10>i R<11>,

zajedno sa atomom azota za koji su oni vezani grade 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten;

R<12>predstavlja grupu odabranu od atoma vodonika, -OH, -NR<10>R<11>, -NH-C(=NH)-NH2; n je ceo broj od 0, 1, 2, 3 ili 4;

ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0018] Termini pomenuti u predmetnom tekstu poželjno imaju sledeće značenje:

Podrazumeva se da termin „atom halogena“ ili „halo“ znači atom fluora, hlora, broma ili joda.

[0019] Podrazumeva se da termin „C1-C6-alkil“ poželjno znači linearna ili razgranata, zasićena, jednovalentna ugljovodonična grupa koja ima 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika, npr. metil, etil, propil, butil, pentil, heksil, izopropil, izobutil, sec-butil, tert-butil, izopentil, 2-metilbutil, 1-metilbutil, 1-etilpropil, 1,2-dimetilpropil, neo-pentil, 1,1-dimetilpropil, 4-metilpentil, 3-metilpentil, 2-metilpentil, 1-metilpentil, 2-etilbutil, 1-etilbutil, 3,3-dimetilbutil, 2,2-dimetilbutil, 1,1-dimetilbutil, 2,3-dimetilbutil, 1,3-dimetilbutil, ili 1,2-dimetilbutil grupa, ili njen izomer. Konkretno, ta grupa ima 1,2,3 ili 4 ugljenikova atoma („C1-C4-alkil“) npr. metil, etil, propil, butil, izopropil, izobutil, sec-butil, tert-butil grupa, konkretnije 1, 2 ili 3 ugljenikova atoma („C1-C3-alkil“), npr. metil, etil, n-propil- ili izopropil grupa.

[0020] Podrazumeva se da termin poželjno znači linearna ili razgranata, zasićena, dvovalentna ugljovodonična grupa koja ima 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika, npr. metilen, etilen, propilen, butilen, pentilen, heksilen, izopropilen, izobutilen, sec-butilen, tertbutilen, izopentilen, 2-metilbutilen, 1-metilbutilen, 1-etilpropilen, 1,2-dimetilpropilen, neopentilen, 1,1-dimetilpropilen, 4-metilpentilen, 3-metilpentilen, 2-metilpentilen, 1-metilpentilen, 2-etiilbutilen, 1-etilbutilen, 3,3-dimetilbutilen, 2,2-dimetilbutilen, 1,1-dimetilbutilen, 2,3-dimetilbutilen, 1,3-dimetilbutilen ili 1,2-dimetilbutilen grupe, ili njihovi izomeri. Posebno, pomenuta grupa ima 2, 3, 4, 5 ili 6 ugljenikovih atoma („C2-C6-alkilen“), npr. metilen, etilen, propilen, butilen, izopropilen, izobutilen, sec-butilen, tert-butilen grupa, konkretnije 2, 3 ili 4 ugljenikova atoma („C2-C4-alkilen“), npr. etilen, propilen, izopropilen, butilen, ili izobutilen grupa.

[0021] Podrazumeva se da termin „halo C1-C6-alkil“ poželjno označava linearnu ili razgranatu, zasićenu jednovalentnu ugljovodoničnu grupu, gde je termin definisan iznad, i gde je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno, identično ili različito, atomom halogena. Posebno, pomenuti atom halogena je F. Pomenuta halo-C1-C6-alkil grupa je, na primer, -CF3, -CHF2, -CH2F, -CF2CF3ili -CH2CF3.

[0022] Podrazumeva se da termin „C1-C6-alkoksi“ poželjno označava linearnu ili razgranatu, zasićenu jednovalentnu ugljovodoničnu grupu formule -O-(C1-C6-alkil), gde je termin

alkil“ definisan iznad, npr. metoksi, etoksi, n-propoksi, izopropoksi, n-butoksi, izobutoksi, tertbutoksi, sec-butoksi, pentoksi, izopentoksi, ili n-heksoksi grupa, ili njen izomer.

[0023] Podrazumeva se da termin „halo C1-C6-alkoksi“ poželjno označava linearnu ili razgranatu, zasićenu jednovalentnu C1-C6-alkoksi grupu, kao što je definisana iznad, u kojoj je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno, identično ili različito, atomom halogena. Konkretno, pomenuti atom halogena je F. Pomenuta halo-C1-C6-alkoksi grupa je, na primer, -OCF3, -OCHF2, -OCH2F -OCF2CF3ili -OCH2CF3.

[0024] Podrazumeva se da termin „C1-C6-alkoksi-C1-C6-alkil“ poželjno označava linearnu ili razgranatu, zasićenu jednovalentnu C1-C6-alkil grupu, kao što je definisana iznad, u kojoj je jedan ili više atoma vodonika zamenjen, identično ili različito, C1-C6-alkoksi grupom, kao što je definisana iznad, npr. metoksialkil, etoksialkil, propiloksialkil, izopropoksialkil, butoksialkil, izobutoksialkil, tert-butoksialkil, sec-butoksialkil, pentiloksialkil, izopentiloksialkil, heksiloksialkil grupa, ili njen izomer.

[0025] Podrazumeva se da termin „halo-C1-C6-alkoksi-C1-C6-alkil“ poželjno označava linearnu ili razgranatu, zasićenu jednovalentnu C1-C6-alkoksi-C1-C6-alkil grupu, kao što je definisana iznad, u kojoj je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno, identično ili različito, atomom halogena. Konkretno, pomenuti atom halogena je F. Pomenuta halo-C1-C6-alkoksi-C1-C6-alkil grupa je, na primer, -CH2CH2OCF3, -CH2CH2OCHF2, -CH2CH2OCH2F, -CH2CH2OCF2CF3ili - CH2CH2OCH2CF3.

[0026] Termin "C2-C6-alkenil" se treba shvatiti da poželjno znači linearnu ili razgranatu, jednovalentnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži jednu ili više dvostrukih veza, te koja ima 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika, naročito 2 ili 3 atoma ugljenika ("C2-C3-alkenil"), treba da se razume da u slučaju u kojem pomenuta alkenil grupa sadrži više od jedne dvostruke veze, tada pomenute dvostruke veze mogu biti izolovane jedna iz druge, ili konjugovane, jedna iz druge. Pomenuta alkenil grupa je, na primer, vinil, alil, (E)-2-metilvinil, (Z)-2-metilvinil, homoalil, (E)-but-2-enil, (Z)-but-2-enil, (E)-but-1-enil, (Z)-but-1-enil, pent-4-enil, (E)-pent-3-enil, (Z)-pent-3-enil, (E)-pent-2-enil, (Z)-pent-2-enil, (E)-pent-1-enil, (Z)-pent-1-enil, heks-5-enil, (E)-heks-4-enil, (Z)-heks-4-enil, (E)-heks-3-enil, (Z)-heks-3-enil, (E)-heks-2-enil, (Z)-heks-2-enil, (E)-heks-1-enil, (Z)-heks-1-enil, izo-propenil, 2-metilprop-2-enil, 1-metilprop-2-enil, 2-metilprop-1-enil, (E)-1-metilprop-1-enil, (Z)-1-metilprop-1-enil, 3-metilbut-3-enil, 2-metilbut-3-enil, 1-metilbut-3-enil, 3-metilbut-2-enil, (E)-2-metilbut-2-enil, (Z)-2-metilbut-2-enil, (E)-1-metilbut-2-enil, (Z)-1-metilbut-2-enil, (E)-3-metilbut-1-enil, (Z)-3-metilbut-1-enil, (E)-2-metilbut-1-enil, (Z)-2-metilbut-1-enil, (E)-1-metilbut-1-enil, (Z)-1-metilbut-1-enil, 1,1-dimetilprop-2-enil, 1-etilprop-1-enil, 1-propilvinil, 1-izopropilvinil, 4-metilpent-4-enil, 3-metilpent-4-enil, 2-metilpent-4-enil, 1-metilpent-4-enil, 4-metilpent-3-enil, (E)-3-metilpent-3-enil, (Z)-3-metilpent-3-enil, (E)-2-metilpent-3-enil, (Z)-2-metilpent-3-enil, (E)-1-metilpent-3-enil, (Z)-1-metilpent-3-enil, (E)-4-metilpent-2-enil, (Z)-4-metilpent-2-enil, (E)-3-metilpent-2-enil, (Z)-3-metilpent-2-enil, (E)-2-metilpent-2-enil, (Z)-2-metilpent-2-enil, (E)-1-metilpent-2-enil, (Z)-1-metilpent-2-enil, (E)-4-metilpent-1-enil, (Z)-4-metilpent-1-enil, (E)-3-metilpent-1-enil, (Z)-3-metilpent-1-enil, (E)-2-metilpent-1-enil, (Z)-2-metilpent-1-enil, (E)-1-metilpent-1-enil, (Z)-1-metilpent-1-enil, 3-etilbut-3-enil, 2-etilbut-3-enil, 1-etilbut-3-enil, (E)-3-etilbut-2-enil, (Z)-3-etilbut-2-enil, (E)-2-etilbut-2-enil, (Z)-2-etilbut-2-enil, (E)-1-etilbut-2-enil, (Z)-1-etilbut-2-enil, (E)-3-etilbut-1-enil, (Z)-3-etilbut-1-enil, 2-etilbut-1-enil, (E)-1-etilbut-1-enil, (Z)-1-etilbut-1-enil, 2-propilprop-2-enil, 1-propilprop-2-enil, 2-izopropilprop-2-enil, 1-izopropilprop-2-enil, (E)-2-propilprop-1-enil, (Z)-2-propilprop-1-enil, (E)-1-propilprop-1-enil, (Z)-1-propilprop-1-enil, (E)-2-izopropilprop-1-enil, (Z)-2-izopropilprop-1-enil, (E)-1-izopropilprop-1-enil, (Z)-1-izopropilprop-1-enil, (E)-3,3-dimetilprop-1-enil, (Z)-3,3-dimetilprop-1-enil, 1-(1,1-dimetiletil)etenil, buta-1,3-dienil, penta-1,4-dienil, heksa-1,5-dienil, ili metilheksadienil grupa. Naročito, pomenuta grupa je vinil ili alil.

[0027] Termin "C2-C6-alkinil" se treba shvatiti da poželjno znači linearnu ili razgranatu, jednovalentnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži jednu ili više trostrukih veza, te koja sadrži 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika, naročito 2 ili 3 atoma ugljenika ("C2-C3-alkinil"). Navedena grupa C2-C6-alkinil je, na primer, etinil, prop-1-inil, prop-2-inil, but-1-inil, but-2-inil, but-3-inil, pent-1-inil, pent-2-inil, pent-3-inil, pent-4-inil, heks-1-inil, heks-2-inil, heks-3-inil, heks-4-inil, heks-5-inil, 1-metilprop-2-inil, 2-metilbut-3-inil, 1-metilbut-3-inil, 1-metilbut-2-inil, 3-metilbut-1-inil, 1-etilprop-2-inil, 3-metilpent-4-inil, 2-metilpent-4-inil, 1-metil-pent-4-inil, 2-metilpent-3-inil, 1-metilpent-3-inil, 4-metilpent-2-inil, 1-metilpent-2-inil, 4-metilpent-1-inil, 3-metilpent-1-inil, 2-etilbut-3-inil, 1-etilbut-3-inil, 1-etilbut-2-inil, 1-propilprop-2-inil, 1-izopropilprop-2-inil, 2,2-dimetilbut-3-inil, 1,1 -dimetilbut-3-inil, 1,1-dimetilbut-2-inil, ili 3,3-dimetilbut-1-inil grupa. Naročito, pomenuta grupa alkinil je etinil, prop-1-inil, ili prop-2-inil.

[0028] Podrazumeva se da termin „C3-C7-cikloalkil“ označava zasićeni, jednovalentni, monociklični ugljovodonični prsten koji sadrži 3, 4, 5, 6 ili 7 atoma ugljenika. Pomenuta C3-C7-cikloalkil grupa je, na primer, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil ili cikloheptil prsten. Naročito, pomenuti prsten sadrži 3, 4, 5 ili 6 ugljenikovih atoma („C3-C6-cikloalkil“).

[0029] Podrazumeva se da termin poželjno označava jednovalentni, monociklični ugljovodonični prsten koji sadrži 4, 5, 6, 7 ili 8 atoma ugljenika i jednu ili dve dvogube veze, koje jesu ili nisu konjugovane, kako to dozvoljava veličina pomenutog cikloalkenil prstena. Naročito, pomenuti prsten sadrži 4, 5 ili 6 ugljenikovih atoma („C4-C6-cikloalkenil“). Pomenuta C4-C8-cikloalkenil grupa je, na primer, ciklobutenil, ciklopentenil ili cikloheksenil grupa.

[0030] Podrazumeva se da termin „3- do 10-člani heterocikloalkil“ označava zasićeni, jednovalentni, mono- ili biciklični ugljovodonični prsten koji sadrži 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ili 9 atoma ugljenika i jednu ili više grupa koje sadrže heteroatom, izabranih od C(=O), O, S, S(=O), S(=O)2, NR<a>, gde R<a>predstavlja atom vodonika, ili C1-C6-alkil- grupu; i moguće je da pomenuta heterocikloalkil grupa bude vezana za ostatak molekula putem bilo kog atoma ugljenika ili, ako je prisutan, atoma azota.

[0031] Naročito, pomenuti 3- do 10-člani heterocikloalkil može da sadrži 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika, i jednu ili više gore navedenih grupa koje sadrže heteroatom („3- do 7-člani heterocikloalkil“), konkretnije rečeno, heterocikloalkil može da sadrži 4, 5 ili 6 atoma ugljenika, i jednu ili više gore navedenih grupa koje sadrže heteroatom („4- do 6-člani heterocikloalkil“).

[0032] Naročito, i bez ograničenja u tom pogledu, pomenuti heterocikloalkil može biti 4-člani prsten, kao što je azetidinil, oksetanil, ili 5-člani prsten, kao što je tetrahidrofuranil, dioksolinil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, ili 6-člani prsten, kao što je tetrahidropiranil, piperidinil, morfolinil, ditianil, tiomorfolinil, piperazinil ili tritianil, ili 7-člani prsten, kao što je diazepanil prsten, na primer.

[0033] Podrazumeva se da termin „4- do 10-člani heterocikloalkenil“ označava zasićeni, jednovalentni, mono- ili biciklični ugljovodonični prsten koji sadrži 3, 4, 5, 6, 7, 8 ili 9 atoma ugljenika i jednu ili više grupa koje sadrže heteroatom, izabranih od C(=O), O, S, S(=O), S(=O)2, NR<a>, gde R<a>predstavlja atom vodonika, ili C1-C6-alkil- grupu; i moguće je da pomenuta heterocikloalkenil grupa bude vezana za ostatak molekula putem bilo kog atoma ugljenika ili, ako je prisutan, atoma azota. Primeri za pomenuti heterocikloalkenil mogu da sadrže jednu ili više dvostrukih veza, npr. 4H-piranil, 2H-piranil, 3H-diazirinil, 2,5-dihidro-1H-pirolil, [1,3]dioksolil, 4H-[1,3,4]tiadiazinil, 2,5-dihidrofuranil, 2,3-dihidrofuranil, 2,5-dihidrotiofenil, 2,3-dihidrotiofenil, 4,5-dihidrooksazolil, ili 4H-[1,4]tiazinil grupu.

[0034] Podrazumeva se da termin „aril“ poželjno označava jednovalentni, aromatični, mono-, ili bi- ili triciklični ugljovodonični prsten koji sadrži 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, ili 14 atoma ugljenika („C6-C14-aril“ grupa), naročito prsten sa 6 atoma ugljenika („C6-aril“ grupa), npr. fenil grupa, ili prsten sa 9 atoma ugljenika („C9-aril“ grupa), npr. indanil ili indenil grupa, ili prsten sa 10 atoma ugljenika („C10-aril“ grupa), npr. tetralinil, dihidronaftil ili naftil grupa, ili bifenil grupa („C12-aril“ grupa), ili prsten sa 13 atoma ugljenika („C13-aril“ grupa), npr. fluorenil grupa, ili prsten sa 14 atoma ugljenika („C14-aril“ grupa), npr. antracenil grupa. Poželjno, aril grupa je fenil grupa.

[0035] Podrazumeva se da termin „heteroaril“ poželjno označava jednovalentni, monociklični, biciklični ili triciklični aromatični sistem prstenova koji sadrži 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, ili 14 atoma u prstenu („5- do 14-člana heteroaril“ grupa), naročito 5 ili 6 ili 9 ili 10 atoma, i koji sadrži barem jedan heteroatom koji može biti isti ili različit, pri čemu pomenuti heteroatom može biti takav kao što je kiseonik, azot ili sumpor, i pored toga u svakom slučaju može biti benzokondenzovan. Naročito, heteroaril je izabran od: tienil, furanil, pirolil, oksazolil, tiazolil, imidazolil, pirazolil, izoksazolil, izotiazolil, oksadiazolil, triazolil, tiadiazolil, tia-4H-pirazolil itd., i njihovih benzo derivata, kao što je, na primer, benzofuranil, benzotienil, benzoksazolil, benzizoksazolil, benzimidazolil, benzotriazolil, indazolil, indolil, izoindolil, itd.; ili piridinil, piridazinil, pirimidinil, pirazinil, triazinil, itd., i njihovi benzo derivati, kao što je, na primer, hinolinil, hinazolinil, izohinolinil, itd.; ili azocinil, indolizinil, purinil, itd., i njihovi benzo derivati; ili cinolinil, ftalazinil, hinazolinil, hinoksalinil, naftpiridinil, pteridinil, karbazolil, akridinil, fenazinil, fenotiazinil, fenoksazinil, ksantenil, ili oksepinil, itd.

[0036] Generalno, i ako nije drugačije pomenuto, heteroaril ili heteroarilen radikali uključuju sve moguće njihove izomerne oblike, npr. njihove pozicione izomere. Tako, kao ilustrativni i neograničavajući primer, termin piridil uključuje piridin-2-il, piridin-3-il i piridin-4-il; ili termin tienil uključuje tien-2-il i tien-3-il. Poželjno, heteroaril grupa je piridinil grupa.

[0037] Podrazumeva se da termin kako se koristi u ovom tekstu, npr. u kontekstu definicije „C1-C6-alkil“, „C1-C6-haloalkil“, „C1-C6-alkoksi“ ili „C1-C6-haloalkoksi“, označava alkil grupu koja ima konačan broj ugljenikovih atoma, od 1 do 6, tj. 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika. Dalje se podrazumeva da pomenuti termin treba tumačiti kao bilo koji podniz koji je ovde uključen, npr. C1-C6, C2-C5, C3-C4, C1-C2, C1-C3, C1-C4, C1-C5, C1-C6; konkretno C1-C2, C1-C3, C1-C4, C1-C5, C1-C6;konkretnije C1-C4; u slučaju „C1-C6-haloalkil“ ili čak još konkretnije C1-C2.

[0038] Slično tome, podrazumeva se da termin kako se koristi u ovom tekstu, npr. u kontekstu „C2-C6-alkenil“ i „C2-C6-alkinil“, označava alkenil ili alkinil grupu koja ima konačan broj ugljenikovih atoma, od 2 do 6, tj.2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika. Dalje se podrazumeva da pomenuti termin treba tumačiti kao bilo koji podniz koji je ovde uključen, npr. C2-C6, C3-C5, C3-C4, C2-C3, C2-C4, C2-C5; posebno C2-C3.

[0039] Nadalje, podrazumeva se da termin kako se koristi u ovom tekstu, npr. u kontekstu „C3-C7-cikloalkil“, označava cikloalkil grupu koja ima konačan broj ugljenikovih atoma, od 3 do 7, tj.3, 4, 5, 6 ili 7 atoma ugljenika. Dalje se podrazumeva da pomenuti termin „C3-C7“ treba tumačiti kao bilo koji podniz koji je ovde uključen, npr. C3-C6, C4-C5, C3-C5, C3-C4, C4-C6, C5-C7; posebno C3-C6.

[0040] Kako je ovde upotrebljen, termin „odlazeća grupa“ ukazuje na atom ili grupu atoma koja se zamenjuje u hemijskoj reakciji kao stabilna vrsta, odnoseći sa sobom vezujuće elektrone. Poželjno, odlazeća grupa je izabrana iz grupe koja uključuje: halo, a posebno hloro, bromo ili jodo, metansulfoniloksi, p-toluensulfoniloksi, trifluorometansulfoniloksi, nonafluorobutansulfoniloksi, (4-bromo-benzen)sulfoniloksi, (4-nitro-benzen)sulfoniloksi, (2-nitro-benzen)-sulfoniloksi, (4-izopropil-benzen)sulfoniloksi, (2,4,6-tri-izopropil-benzen)-sulfoniloksi, (2,4,6-trimetil-benzen)sulfoniloksi, (4-tert-butil-benzen)sulfoniloksi, benzensulfoniloksi i (4-metoksi-benzen)sulfoniloksi.

[0041] Kako je ovde upotrebljen, termin „PG<1>“ ukazuje na zaštitnu grupu za hidroksi grupe, npr. TMS grupu ili TBDPS grupu, kao što su, na primer, opisali T.W. Greene i P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3. izdanje, Wiley 1999 (TMS = trimetilsilil, TBDPS = tert-butildifenilsilil).

[0042] Kako je ovde upotrebljen, termin „PG<2>“ ukazuje na zaštitnu grupu za amino grupe, npr. Boc grupu, kao što su, na primer, opisali T.W. Greene i P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3. izdanje, Wiley 1999 ( Boc = tert-butiloksikarbonil).

[0043] Kako je ovde upotrebljen, podrazumeva se da termin „jednom ili više puta“, npr. u definiciji supstituenata jedinjenja opšte formule predmetnog pronalaska, ovde znači „jednom, dvaput, tri, četiri ili pet puta, konkretno jednom, dvaput, tri ili četiri puta, još konkretnije jednom, dvaput ili triput, još konkretnije jednom ili dvaput“.

[0044] Jedinjenja A1, A2, A3, A4, i A5, kako je definisano u eksperimentalnom delu, su veoma efikasni inhibitori Mps-1. Neočekivano je nađeno da ova jedinjenja karakterizira sledeće:

- IC50niža od ili jednaka 1 nM (snažnije od 1 nM) u testu Mps-1 kinaze sa koncentracijom od 10 µM ATP, i

- IC50niža od 2 nM (snažnije od 2 nM) u testu Mps-1 kinaze sa koncentracijom od 2 mM ATP, i

- maksimalna oralna biodostupnost (Fmax) kod pacova koja je veća od 70 % određenu pomoću mikrozoma jetre pacova kao što je opisano u nastavku, i

- maksimalna oralna biodostupnost (Fmax) kod pasa koja je veća od 50 % određenu pomoću mikrozoma jetre psa kao što je opisano u nastavku, i

- maksimalna oralna biodostupnost (Fmax) kod čoveka koja je veća od 60 %, određenu pomoću mikrozoma jetre čoveka kao što je opisano u nastavku, i

- IC50nižu od 400 nM u testu proliferacije HeLa ćelije kao što je opisano u nastavku.

[0045] Međutim, ova jedinjenja imaju samo ograničenu rastvorljivost u vodi i fiziološkim medijima, što čini intravensko davanje teškim.

[0046] U skladu sa prvim aspektom, predmetni pronalazak se odnosi na derivate proleka koji pokazuju veću rastvorljivost u vodi i fiziološkim medijima nego jedinjenja A1, A2, A3, A4 i A5, što ih čini pogodnim za terapeutsku primenu, naročito za intravenoznu primenu

[0047] Derivati proleka su definisani opštom formulom (I)

u kojoj :

R<A>predstavlja grupu odabranu od:

-C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>,

-C(=O)-(CR<4>R<5>)-N(R<6>)R<7>,

-C(=O)-O-(CH2)2-N(H)R<3>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>;

R<1>predstavlja grupu odabranu od metoksi- i 2,2,2-trifluoretoksi-;

R<2>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "*" označava tačku vezivanja na fenilni prsten na koji je pripojen R<2>; R<3>predstavlja grupu odabranu od:

C1-C6-alkil, C3-C6-cikloalkil-,

4- do 7-člani heterocikloalkil-;

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2;

R<4>i R<5>,

nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe C1-C3-alkil-,

ili

R<4>i R<5>, zajedno sa atomom ugljenika za koji su oni vezani, grade C3-C6-cikloalkilni prsten; R<6>predstavlja atom vodonika ili grupu C1-C3-alkil-;

R<7>predstavlja atom vodonika ili grupu -C(=O)R<9>;

R<8>predstavlja grupu odabranu od:

C1-C6-alkila, C3-C6-cikloalkila-,

4- do 7-članog heterocikloalkila-;

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2;

R<9>predstavlja grupu

ili R<9>predstavlja grupu odabranu od:

R<10>i R<11>,

ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.

[0048] U poželjnoj realizaciji,

R<A>predstavlja grupu odabranu od:

-C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>,

-C(=O)-O-(CH2)2-N(H)R<3>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>.

[0049] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu odabranu od

-C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>.

[0050] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu odabranu od

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>.

[0051] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu odabranu od

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>.

[0052] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu odabranu od

-C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>,

-C(=O)-(CR<4>R<5>)-N(R<6>)R<7>.

[0053] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu odabranu od

-C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>,

-C(=O)-O-(CH2)2-N(H)R<3>.

[0054] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu odabranu od

-C(=O)-(CR<4>R<5>)-N(R<6>)R<7>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>.

[0055] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu -C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>.

[0056] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu -C(=O)-(CR<4>R<5>)-N(R<6>)R<7>.

[0057] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu -C(=O)-O-(CH2)2-N(H)R<3>.

[0058] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu -C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2.

[0059] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>.

[0060] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<A>predstavlja grupu -C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>.

[0061] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<1>predstavlja grupu odabranu od metoksi- i 2,2,2-trifluoretoksi-.

[0062] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<1>predstavlja grupu 2,2,2-trifluoretoksi-.

[0063] U još poželjnoj realizaciji, R<1>predstavlja metoksi- grupu.

[0064] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<2>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "*" označava tačku vezivanja na fenilni prsten na koji je pripojen R<2>.

[0065] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<2>predstavlja grupu odabranu od

[0066] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<2>predstavlja grupu odabranu od

[0067] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<2>predstavlja

[0068] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<2>predstavlja

[0069] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<2>predstavlja

[0070] U naročito poželjnoj realizaciji, R<2>predstavlja grupu -S(=O)2CH3.

[0071] U sledećoj realizaciji, R<3>predstavlja grupu odabranu od:

C1-C6-alkila, C3-C6-cikloalkila-, 4- do 7-članog heterocikloalkila-;

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2.

[0072] U poželjnoj realizaciji, R<3>predstavlja grupu C1-C6-alkil, navedena grupa je opciono supstituisana, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od: -OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)

[0073] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<3>predstavlja grupu C3-C6-cikloalkil-, navedena grupa je opciono supstituisana, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od:

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2.

[0074] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<3>predstavlja 4- do 7-članu heterocikloalkil- grupu, navedena grupa je opciono supstituisana, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od:

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2.

[0075] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<3>predstavlja grupu C1-C3-alkil-.

[0076] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<3>predstavlja grupu C1-C2-alkil-.

[0077] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<3>predstavlja grupu etil-.

[0078] U naročito poželjnoj realizaciji, R<3>predstavlja grupu metil-.

[0079] U sledećoj realizaciji, R<4>i R<5>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe C1-C3-alkil-, ili R<4>i R<5>, zajedno sa atomom ugljenika za koji su oni vezani, grade C3-C6-cikloalkilni prsten.

[0080] U sledećoj realizaciji, R<4>i R<5>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe C1-C3-alkil-.

[0081] U sledećoj realizaciji, R<4>i R<5>, zajedno sa atomom ugljenika za koji su oni vezani, grade C3-C6-cikloalkilni prsten.

[0082] U poželjnoj realizaciji, R<4>predstavlja atom vodonika ili grupu C1-C3-alkil-, i R<5>predstavlja atom vodonika.

[0083] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<4>predstavlja atom vodonika ili metil- ili izo-propilgrupu, i R<5>predstavlja atom vodonika.

[0084] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<4>i R<5>svaki predstavljaju atom vodonika.

[0085] U naročito poželjnoj realizaciji, R<4>predstavlja grupu metil-, i R<5>predstavlja atom vodonika.

[0086] U sledećoj naročito poželjnoj realizaciji, R<4>predstavlja grupu izo-propil-, te R<5>predstavlja atom vodonika.

[0087] U poželjnoj realizaciji, R<4>predstavlja atom vodonika ili grupu C1-C3-alkil-.

[0088] U naročito poželjnoj realizaciji, R<4>predstavlja atom vodonika ili grupu metil-.

[0089] U sledećoj naročito poželjnoj realizaciji, R<4>predstavlja atom vodonika.

[0090] U sledećoj naročito poželjnoj realizaciji, R<4>predstavlja grupu metil-.

[0091] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<5>predstavlja atom vodonika.

[0092] U sledećoj realizaciji, R<6>predstavlja atom vodonika ili grupu C1-C3-alkil-.

[0093] U poželjnoj realizaciji, R<6>predstavlja atom vodonika ili grupu metil-.

[0094] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<6>predstavlja atom vodonika.

[0095] U naročito poželjnoj realizaciji, R<6>predstavlja grupu metil-.

[0096] U sledećoj realizaciji, R<7>predstavlja atom vodonika ili grupu -C(=O)R<9>.

[0097] U poželjnoj realizaciji, R<7>predstavlja grupu -C(=O)R<9>.

[0098] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<7>predstavlja atom vodonika.

[0099] U sledećoj realizaciji, R<8>predstavlja grupu odabranu od:

C1-C6-alkila, C3-C6-cikloalkila-,

4- do 7-članiog heterocikloalkila-;

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2.

[0100] U poželjnoj realizaciji, R<8>predstavlja grupu C1-C6-alkil, navedena grupa je opciono supstituisana, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od: -OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2.

[0101] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<8>predstavlja grupu C3-C6-cikloalkil-, navedena grupa je opciono supstituisana, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od:

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2.

[0102] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<8>predstavlja 4- do 7-članu heterocikloalkil- grupu, navedena grupa je opciono supstituisana, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od:

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2.

[0103] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<8>predstavlja grupu odabranu od:

C1-C6-alkila, supstituisanu jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od: -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>,

4- do 7-člani heterocikloalkil-, opciono supstituisan, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od:

- NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>.

[0104] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<8>predstavlja grupu C1-C6-alkil, supstituisanu jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od: -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>.

[0105] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<8>predstavlja 4- do 7-članu heterocikloalkil- grupu, opciono supstituisanu, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od: -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>.

[0106] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<8>predstavlja grupu odabranu od:

grupe C1-C6-alkil, supstituisane jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>,

heterocikloalkilne grupe odabrane od grupe pirolidinil-, piperidinil-, morfolinil-, i piperazinil-.

[0107] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<8>predstavlja grupu heterocikloalkil odabranu od grupe pirolidinil-, piperidinil-, morfolinil-, i piperazinil-.

[0108] U naročito poželjnoj realizaciji, R<8>predstavlja grupu heterocikloalkil odabranu od:

pri čemu "#" predstavlja tačku vezivanja za karbonilnu grupu na koju je pripojen R<8>.

[0109] U sledećoj naročito poželjnoj realizaciji, R<8>predstavlja grupu heterocikloalkil odabranu od:

[0110] U poželjnoj realizaciji, R<9>predstavlja

pri čemu "**" označava tačku vezivanja na karbonilnu grupu na koju je pripojen.

[0111] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<9>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "**" označava tačku vezivanja na karbonilnu grupu na koju je pripojen R<9>.

[0112] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<9>predstavlja grupu odabranu od:

[0113] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<9>predstavlja grupu:

[0114] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<9>predstavlja grupu odabranu od:

[0115] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<9>predstavlja grupu odabranu od:

[0116] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<9>predstavlja

[0117] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<9>predstavlja grupu odabranu od:

[0118] U naročito poželjnoj realizaciji, R<9>predstavlja

[0119] U sledećoj naročito poželjnoj realizaciji, R<9>predstavlja grupu odabranu od:

[0120] U sledećoj realizaciji, R<10>i R<11>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe C1-C3-alkil-, ili R<10>i R<11>, zajedno sa atomom azota za koji su oni vezani grade 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten.

[0121] U poželjnoj realizaciji, R<10>i R<11>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe C1-C3-alkil-.

[0122] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<10>i R<11>, zajedno sa atomom azota za koji su oni vezani grade 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten.

[0123] U poželjnoj realizaciji, R<10>i R<11>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe C1-C2-alkil-.

[0124] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<10>i R<11>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe metil-.

[0125] U sledećoj realizaciji, R<12>predstavlja grupu odabranu od atoma vodonika, -OH, -NR<10>R<11>, -NH-C(=NH)-NH2.

[0126] U sledećoj realizaciji, R<12>predstavlja grupu odabranu od atoma vodonika, grupe -OH.

[0127] U sledećoj realizaciji, R<12>predstavlja grupu -OH.

[0128] U sledećoj realizaciji, R<12>predstavlja atom vodonika.

[0129] U poželjnoj realizaciji, R<12>predstavlja grupu odabranu od -NR<10>R<11>, -NH-C(=NH)-NH2.

[0130] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<12>predstavlja grupu odabranu od -N(H)R<10>, -NH-C(=NH)-NH2.

[0131] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<12>predstavlja grupu odabranu od -NH2, -NH-C(=NH)-NH2.

[0132] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<12>predstavlja -NH-C(=NH)-NH2.

[0133] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<12>predstavlja -NR<10>R<11>.

[0134] U sledećoj poželjnoj realizaciji, R<12>predstavlja -N(H)R<10>.

[0135] U naročito poželjnoj realizaciji, R<12>predstavlja -NH2.

[0136] U daljem ostvarenju gore pomenutog aspekta, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), prema bilo kojoj od navedenih realizacija, u obliku tautomera, N-oksida, hidrata, solvata, ili njihove soli, ili njihove smeše.

[0137] Treba da se razume da se ovaj pronalazak takođe odnosi bilo na koju kombinaciju poželjnih gore opisanih realizacija.

[0138] Neki primeri kombinacija su dati u daljem tekstu. Međutim, pronalazak nije ograničen na ove kombinacije.

[0139] U poželjnoj realizaciji, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gore,

pri čemu

R<A>predstavlja grupu odabranu od:

-C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>,

-C(=O)-(CR<4>R<5>)-N(R<6>)R<7>,

-C(=O)-O-(CH2)2-N(H)R<3>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>;

R<1>predstavlja grupu odabranu od metoksi- i 2,2,2-trifluoretoksi-;

R<2>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "*" označava tačku vezivanja na fenilni prsten na koji je pripojen R<2>; R<3>predstavlja grupu C1-C3-alkil-;

R<4>i R<5>,

zajedno sa atomom ugljenika za koji su oni vezani, grade C3-C6-cikloalkilni prsten; R<6>predstavlja atom vodonika ili grupu C1-C3-alkil-;

R<7>predstavlja atom vodonika ili grupu -C(=O)R<9>;

R<8>predstavlja grupu odabranu od:

C1-C6-alkila, C3-C6-cikloalkila-,

4- do 7-članog heterocikloalkila-;

-OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2;

R<9>predstavlja grupu

R<10>i R<11>,

ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.

[0140] U sledećoj poželjnoj realizaciji,

R<A>predstavlja grupu odabranu od:

-C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>

-C(=O)-(CR<4>R<5>)-N(R<6>)R<7>,

-C(=O)-O-(CH2)2-N(H)R<3>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>;

R<1>predstavlja grupu odabranu od metoksi- i 2,2,2-trifluoretoksi-;

R<2>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "*" označava tačku vezivanja na fenilni prsten na koji je pripojen R<2>; R<3>predstavlja grupu metil-;

R<4>predstavlja atom vodonika ili grupu C1-C3-alkil-;

R<5>predstavlja atom vodonika;

R<6>predstavlja atom vodonika ili grupu metil-;

R<7>predstavlja atom vodonika ili grupu -C(=O)R<9>;

R<8>predstavlja grupu odabranu od:

C1-C6-alkila, supstituisanog jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od: -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>;

-NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>;

R<9>predstavlja grupu

nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe metil-;

ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.

[0141] U još jednoj sledećoj poželjnoj realizaciji,

R<A>predstavlja grupu odabranu od:

-C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>,

-C(=O)-(CR<4>R<5>)-N(R<6>)R<7>,

-C(=O)-O-(CH2)2-N(H)R<3>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>;

R<1>predstavlja metoksi-;

R<2>predstavlja grupu -S(=O)2CH3;

R<3>predstavlja grupu metil-;

R<4>predstavlja atom vodonika ili grupu metil-;

R<5>predstavlja atom vodonika;

R<6>predstavlja atom vodonika ili grupu metil-;

R<7>predstavlja atom vodonika ili grupu -C(=O)R<9>;

R<8>predstavlja grupu odabranu od:

C1-C6-alkila, supstituisanog jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>,

heterocikloalkilnu grupu odabranu od pirolidinil-, piperidinil-, morfolinil-, i piperazinil-;

R<9>predstavlja grupu odabranu od

pri čemu "**" označava tačku vezivanja na karbonilnu grupu na koju je pripojen R<9>; R<10>i R<11>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe metil-;

ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.

[0142] U naročito poželjnoj realizaciji,

R<A>predstavlja grupu odabranu od:

-C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>,

-C(=O)-(CR<4>R<5>)-N(R<6>)R<7>,

-C(=O)-O-(CH2)2-N(H)R<3>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>;

R<1>predstavlja metoksi-;

R<2>predstavlja grupu -S(=O)2CH3;

R<3>predstavlja grupu metil-;

R<4>predstavlja atom vodonika ili grupu metil-;

R<5>predstavlja atom vodonika;

R<6>predstavlja grupu metil-;

R<7>predstavlja atom vodonika ili grupu -C(=O)R<9>;

R<8>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "#" predstavlja tačku vezivanja za karbonilnu grupu na koju je pripojen R<8>; R<9>predstavlja grupu

pri čemu "**" označava tačku vezivanja na karbonilnu grupu na koju je pripojen R<9>; ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.

[0143] U sledećoj naročito poželjnoj realizaciji,

R<A>predstavlja grupu:

-C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>,

R<1>predstavlja metoksi-;

R<2>predstavlja grupu -S(=O)2CH3;

R<4>predstavlja atom vodonika ili grupu C1-C3-alkil-;

R<5>predstavlja atom vodonika;

R<8>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "#" predstavlja tačku vezivanja za karbonilnu grupu na koju je pripojen R<8>; ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.

[0144] Podrazumeva se da se predmetni pronalazak odnosi na bilo koju potkombinaciju u bilo kom otelotvorenju ili aspektu predmetnog pronalaska jedinjenja opšte formule (I), iznad.

[0145] Još konkretnije, predmetni pronalazak pokriva jedinjenja opšte formule (I), koja su objavljena u odeljku Primeri ovog teksta, dole.

[0146] Pronalazak takođe uključuje sve pogodne izotopske varijacije jedinjenja iz pronalaska. Izotopska varijacija jedinjenja iz pronalaska je definisana kao ona kod koje je najmanje jedan atom zamenjen atomom koji ima isti atomski broj ali atomsku masu različitu od atomske mase koja se obično pretežno nalazi u prirodi. Primeri izotopa koji mogu biti ugrađeni u jedinjenje iz pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, sumpora, fluora, hlora, broma i joda, kao što su<2>H (deuterijum),<3>H (tricijum),<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<17>O,<18>O,<32>P,<33>P,<33>S,<34>S,<35>S,<36>S,<18>F,<36>Cl,<82>Br,<123>I,<124>I,<129>I, odnosno<131>I. Pojedine izotopske varijacije jedinjenja iz pronalaska, na primer, one kod kojih je uključen jedan ili više radioaktivnih izotopa, kao što su<3>H ili<14>C, korisne su za studije raspodele leka i/ili supstrata u tkivu. Naročito poželjni izotopi su tricijum i ugljenik 14, tj.<14>C, zbog lakoće pripreme i detekcije. Nadalje, supstitucije izotopima kao što je deuterijum mogu imati izvesne terapeutske prednosti, dovodeći do veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećanog poluživota in vivo, ili smanjenih doznih zahteva, pa stoga mogu imati prioritet u nekim okolnostima. Izotopske varijacije jedinjenja iz pronalaska mogu se generalno dobiti klasičnim postupcima koji su poznati stručnjacima za ovu oblast, kao što su metode date ilustrativno ili pripreme nadalje opisane u primerima, pomoću pogodnih izotopskih varijacija prikladnih reagenasa.

[0147] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu postojati kao tautomeri. Na primer, svako jedinjenje iz predmetnog pronalaska koje sadrži pirazol grupu kao heteroaril grupu, na primer, može postojati kao 1 H tautomer, ili 2H tautomer, ili čak smeša u bilo kom odnosu dva tautomera, ili triazol grupa, na primer, može postojati kao 1 H tautomer, 2H tautomer ili 4H tautomer, ili čak smeša u bilo kom odnosu pomenutih 1 H, 2H i 4H tautomera, naime:

[0148] Predmetni pronalazak uključuje sve moguće tautomere jedinjenja iz predmetnog pronalaska kao pojedinačne tautomere, ili kao bilo koju smešu pomenutih tautomera, u bilo kom odnosu.

[0149] Nadalje, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu postojati kao N-oksidi, koji su definisani time da je najmanje jedan azot jedinjenja iz predmetnog pronalaska oksidisan. Predmetni pronalazak uključuje sve takve moguće N-okside.

[0150] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na korisne oblike jedinjenja koja su ovde objavljena, kao što su hidrati, solvati, soli, naročito farmaceutski prihvatljive soli i koprecipitati.

[0151] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu postojati kao hidrati, ili kao solvati, naznačeni time što jedinjenja iz predmetnog pronalaska sadrže polarne rastvarače, naročito vodu, metanol ili etanol, na primer, kao strukturni element kristalne rešetke jedinjenja. Količina polarnog rastvarača, naročito vode, može postojati u stehiometrijskom ili nestehiometrijskom odnosu. U slučaju stehiometrijskih solvata, npr. hidrata, mogući su hemi-, (semi-), mono-, seskvi-, di-, tri-, tetra-, penta- itd. solvati, odnosno hidrati. Predmetni pronalazak uključuje sve takve hidrate ili solvate.

[0152] Nadalje, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu postojati u slobodnom obliku, npr. kao slobodna baza ili slobodna kiselina, ili kao cviterjon, ili mogu postojati u obliku soli. Pomenuta so može biti bilo koja so, bilo organska ili neorganska adiciona so, naročito svaka farmaceutski prihvatljiva organska ili neorganska adiciona so, koja se uobičajeno koristi u farmaciji.

[0153] Termin „farmaceutski prihvatljiva so“ ukazuje na relativno netoksičnu, neorgansku ili organsku adicionu so jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Pogledajte, na primer, S. M. Berge, et al. "Pharmaceutical Salts" („Farmaceutske soli“), J. Pharm. Sci.1977, 66, 1-19.

[0154] Pogodna farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja iz predmetnog pronalaska može biti, na primer, kisela adiciona so jedinjenja iz predmetnog pronalaska koja ima atom azota, u lancu ili u prstenu, na primer, koji je dovoljno bazan, kao što je kisela adiciona so sa neorganskom kiselinom, kao što je hlorovodonična, bromovodonična, jodovodonična, sumporna, bisumporna, fosforna ili azotna kiselina, na primer, ili sa organskom kiselinom, kao što je mravlja, sirćetna, acetosirćetna, piruvinska, trifluorosirćetna, propionska, buterna, heksanska, heptanska, undekanska, laurinska, benzojeva, salicilna, 2-(4-hidroksibenzoil)-benzojeva, kamforna, cimetna, ciklopentanpropionska, diglukonska, 3-hidroksi-2-naftenska, nikotinska, pamoinska, pektinska, persumporna, 3-fenilpropionska, pikrinska, pivalinska, 2-hidroksietansulfonat, itakonska, sulfaminska, trifluorometansulfonska, dodecilsumporna, etansulfonska, benzensulfonska, para-toluensulfonska, metansulfonska, 2-naftalensulfonska, naftalindisulfonska, kamforsulfonska kiselina, limunska, vinska, stearinska, mlečna, oksalna, malonska, sukcinatna, jabučna, adipinska, alginatna, maleinska, fumarna, D-glukonska, bademova, askorbinska, glukoheptanska, glicerofosforna, asparaginska, sulfosalicilna, hemisumporna ili tiocijanska kiselina, na primer.

Nadalje, druga pogodna farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja iz predmetnog pronalaska koja je dovoljno kisela, jeste so alkalnog metala, na primer natrijumova ili kalijumova so, so zemnoalkalnog metala, na primer kalcijumova ili magnezijumova so, amonijumova so ili so sa organskom bazom koja daje fiziološki prihvatljiv katjon, na primer so sa N-metil glukaminom, dimetil glukaminom, etil glukaminom, lizinom, dicikloheksilaminom, 1,6-heksadiaminom, etanolaminom, glukozaminom, sarkozinom, serinolom, tris-hidroksimetil aminometanom, aminopropandiolom, sovak-bazom, 1-amino-2,3,4-butantriolom. Pored toga, jedinjenja prema pronalasku mogu da grade soli sa kvaternernim amonijumovim jonom koji može da se dobije npr. kvaternizovanjem baznog azota koji sadrži grupu sa agensima kao što su niži alkilhalidi, kao što su metil-, etil-, propil- i butilhloridi, -bromidi i -jodidi; dialkilsulfati, kao dimetil-, dietil-, dibutil- i diamilsulfati, halidi dugog niza, kao decil-, lauril-, miristil- i stearilhloridi, -bromidi i -jodidi, aralkilhalidi, kao benzil- i fenetilbromidi i drugi. Primeri za pogodne kvaternerne amonijumove jone su tetrametilamonijum, tetraetilamonijum, tetra(npropil)amonijum, tetra (n-butil)amonijum, ili N-benzil-N,N,N-trimetilamonijum.

[0155] Stručnjaci za ovu oblast dalje shvataju da kisele adicione soli jedinjenja iz patentnih zahteva mogu da se dobiju reakcijom jedinjenja sa odgovarajućom neorganskom ili organskom kiselinom, bilo kojom od brojnih poznatih metoda. Alternativno, soli alkalnih i zemnoalkalnih metala kiselih jedinjenja iz pronalaska dobijaju se reakcijom jedinjenja iz pronalaska sa odgovarajućom bazom, različitim poznatim metodama.

[0156] Predmetni pronalazak uključuje sve moguće soli jedinjenja iz predmetnog pronalaska kao pojedinačne soli, ili kao bilo koju smešu pomenutih soli, u bilo kom odnosu.

[0157] Nadalje, predmetni pronalazak uključuje sve moguće kristalne oblike, ili polimorfe, jedinjenja iz predmetnog pronalaska, ili kao pojedinačne polimorfe, ili kao smeše više od jednog polimorfa, u bilo kom odnosu.

[0158] Još specifičnije, predmetni pronalazak pokriva jedinjenja opšte formule (I), koja su objavljena u odeljku Primeri ovog teksta, dole.

[0159] U skladu sa drugim aspektom, predmetni pronalazak pokriva metode za pripremu jedinjenja iz predmetnog pronalaska, pri čemu pomenute metode obuhvataju korake koji su opisani ovde u Eksperimentalnom delu.

[0160] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske smeše koje sadrže jedno ili više jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Te smeše mogu da se koriste za postizanje željenog farmakološkog efekta primenom na pacijentu kome su potrebne. Pacijent je, u svrhu ovog pronalaska, sisar, uključujući čoveka, kome je potrebno lečenje za određeno stanje ili bolest. Stoga, predmetni pronalazak uključuje farmaceutske smeše koje obuhvataju farmaceutski prihvatljiv nosač i farmaceutski efikasnu količinu jedinjenja ili njegove soli iz predmetnog pronalaska. Farmaceutski prihvatljiv nosač je poželjno nosač koji je relativno netoksičan i neškodljiv za pacijenta u koncentracijama koje su u skladu sa efektivnom aktivnošću aktivnog sastojka, tako da bilo koje neželjeno dejstvo koje se može pripisati nosaču ne ugrožava korisna dejstva aktivnog sastojka. Farmaceutski efikasna količina jedinjenja je poželjno ona količina koja daje rezultat ili utiče na konkretno stanje koje se leči.

[0161] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu takođe biti primenjena parenteralno, to jest, subkutano, intravenski, intraokularno, intrasinovijalno, intramuskularno ili intraperitonealno, kao injektabilne doze jedinjenja u poželjno fiziološki prihvatljivom diluentu sa farmaceutskim nosačem koji može biti sterilna tečnost ili smeša tečnosti kao što je voda, fiziološki rastvor, vodeni rastvor dekstroze i srodni rastvori šećera, alkohol, kao što je etanol, izopropanol ili heksadecil alkohol, glikoli kao što je propilen glikol ili polietilen glikol, glicerol ketali kao 2,2-dimetil-1,1-dioksolan-4-metanol, etri, kao što je poli(etilen glikol) 400, ulje, masna kiselina, estar masne kiseline ili glicerid masne kiseline, ili acetilovani glicerid masne kiseline, sa dodatkom farmaceutski prihvatljivog surfaktanta, kao što je sapun ili deterdžent, ili bez njega, suspendujućeg agensa, kao što je pektin, karbomeri, metilceluloza, hidroksipropilmetilceluloza ili emulgator i drugi farmaceutski adjuvans.

[0162] Parenteralna smeša iz ovog pronalaska tipično sadrži od oko 0,5% do oko 25% težinski aktivnog sastojka u rastvoru. Povoljno mogu da se koriste i konzervansi i puferi. Da bi se svela na najmanju meru ili eliminisala iritacija na mestu injekcije, takve smeše mogu da sadrže nejonski surfaktant sa hidrofilno-liofilnom ravnotežom (HLB) poželjno od oko 12 do oko 17. Količina surfaktanta u takvoj formulaciji poželjno je u opsegu od oko 5% do oko 15% težinski. Surfaktant može biti jedna komponenta sa gore navedenom HLB, ili može biti smeša dve ili više komponenata sa željenom HLB.

[0163] Surfaktante koji se koriste u parenteralnim formulacijama ilustruje klasa polietilen sorbitan estara masnih kiselina, na primer, sorbitan monooleat i adukti visoke molekulske mase etilen oksida i hidrofobne baze, nastali kondenzacijom propilen oksida sa propilen glikolom.

[0164] Farmaceutske smeše mogu biti u obliku sterilnih injektabilnih vodenih suspenzija. Takve suspenzije mogu biti formulisane prema poznatim metodama koje koriste pogodna sredstva za dispergovanje ili kvašenje i sredstva za suspendovanje, kao što su, na primer, natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropilmetil-celuloza, natrijum alginat, polivinilpirolidon, tragakant guma i akacija guma; sredstva za dispergovanje ili kvašenje koja mogu biti prirodni fosfatidi, kao što je lecitin, kondenzacioni proizvod alkilen oksida sa masnom kiselinom, na primer, polioksietilen stearat, kondenzacioni proizvod etilen oksida sa alifatičnim alkoholom dugog niza, na primer, heptadeka-etilenoksicetanol, kondenzacioni proizvod etilen oksida sa parcijalnim estrom dobijenim od masne kiseline i heksitola, kao što je polioksietilen sorbitol monooleat, ili kondenzacioni proizvod etilen oksida sa parcijalnim estrom dobijenim od masne kiseline i heksitol anhidrida, na primer, polioksietilen sorbitan monooleat.

[0165] Sterilni injektabilni preparat može takođe biti sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom diluentu ili rastvaraču. Diluenti i rastvarači koji mogu da se koriste su, na primer, voda, Ringerov rastvor, izotonični rastvori natrijum hlorida i izotonični rastvori glukoze.

[0166] Farmaceutske smeše prema predmetnom pronalasku mogu biti ilustrovane na sledeći način:

Sterilni i.v. rastvor: Rastvor 5 mg/ml željenog jedinjenja iz ovog pronalaska može se pripremiti pomoću sterilne vode za injekcije, i pH podešen po potrebi. Rastvor je za primenu razblažen na 1 - 2 mg/ml sterilnom 5% dekstrozom, i primenjen je kao i.v. infuzija tokom otprilike 60 minuta.

[0167] Kao što je gore pomenuto, utvrđeno je da jedinjenje A efikasno inhibira Mps-1, i stoga može biti primenjeno za lečenje ili profilaksu bolesti nekontrolisanog rasta ćelija, proliferacije i/ili preživljavanja, neodgovarajućeg ćelijskog imunog odgovora, ili neodgovarajućeg ćelijskog inflamatornog odgovora, ili bolesti koje su praćene nekontrolisanim rastom ćelija, proliferacijom i/ili preživljavanjem, neodgovarajućim ćelijskim imunim odgovorom, ili neodgovarajućim ćelijskim inflamatornim odgovorom, naročito one kod kojih je nekontrolisani rast ćelija, proliferacija i/ili preživljavanje, neodgovarajući ćelijski imuni odgovor ili neodgovarajući ćelijski inflamatorni odgovor, posredstvom Mps-1, kao što su, na primer, hematološki tumori, solidni tumori, i/ili njihove metastaze, npr. leukemije i mijelodisplastični sindrom, maligni limfomi, tumori glave i vrata, uključujući tumore mozga i metastaze na mozgu, tumore toraksa, uključujući nemikrocelularni i mikrocelularni tumor pluća, gastrointestinalne tumore, endokrine tumore, tumor dojke i druge ginekološke tumore, urološke tumore, uključujući tumore bubrega, bešike i prostate, tumore kože i sarkome, i/ili njihove metastaze.

[0168] Stoga u skladu sa drugim aspektom predmetni pronalazak pokriva jedinjenje opšte formule (I), ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njegovu so, naročito njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili smešu istih, kao što je ovde opisano i definisano, za primenu u lečenju ili profilaksi bolesti, kao što je gore pomenuto.

[0169] Stoga je drugi aspekt predmetnog pronalaska primena jedinjenja opšte formule (I), opisanog gore, ili tautomera, N-oksida, hidrata, solvata, ili njegove soli, naročito njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili smeše istih, za profilaksu ili lečenje bolesti.

[0170] Stoga je drugi naročit aspekt predmetnog pronalaska primena jedinjenja opšte formule (I), opisanog gore, za proizvodnju farmaceutske smeše za lečenje ili profilaksu bolesti.

[0171] Termin „neodgovarajući“ u kontekstu predmetnog pronalaska, naročito u kontekstu „neodgovarajući ćelijski imuni odgovor ili neodgovarajući ćelijski inflamatorni odgovor“ kao što se ovde koristi, treba razumeti da poželjno znači odgovor koji je manji ili veći od normalnog, i koji je povezan sa patologijom pomenutih bolesti, odgovoran za nju ili dovodi do nje.

[0172] Predmetni pronalazak se odnosi na metodu za primenu jedinjenja iz predmetnog pronalaska i njihovih smeša, za lečenje hiperproliferativnih poremećaja sisara. Jedinjenja mogu da se primene za inhibiranje, blokiranje, redukovanje, smanjivanje, itd. ćelijske proliferacije i/ili ćelijske deobe, i/ili za izazivanje apoptoze. Ova metoda uključuje primenu na sisaru kome je to potrebno, uključujući čoveka, količine jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, izomera, polimorfa, metabolita, hidrata, solvata ili estra, itd. koja je efikasna za lečenje poremećaja. Hiperproliferativni poremećaji uključuju, ali nisu ograničeni na, npr. psorijaze, keloide i druge hiperplazije koje pogađaju kožu, benignu hiperplaziju prostate (BPH), solidne tumore, kao što su kanceri dojke, respiratornog trakta, mozga, reproduktivnih organa, digestivnog trakta, urinarnog trakta, oka, jetre, kože, glave i vrata, tiroide, paratiroide i njihovih dalekih metastaza. Ti poremećaji takođe uključuju limfome, sarkome i leukemije.

[0173] Primeri kancera dojke uključuju, ali nisu ograničeni na invazivni duktalni karcinom, invazivni lobularni karcinom, duktalni karcinom in situ i lobularni karcinom in situ.

[0174] Primeri kancera respiratornog trakta uključuju, ali nisu ograničeni na mikrocelularni i nemikrocelularni karcinom pluća, kao i bronhijalni adenom i pleuropulmonalni blastom.

[0175] Primeri kancera mozga uključuju, ali nisu ograničeni na gliom moždanog stabla i gliom hipotalamusa, cerebelarni i cerebralni astrocitom, meduloblastom, ependimom, kao i neuroektodermalni i pinealni tumor.

[0176] Tumori muških reproduktivnih organa uključuju, ali nisu ograničeni na kancere prostate i testisa. Tumori ženskih reproduktivnih organa uključuju, ali nisu ograničeni na kancere endometrijuma, cerviksa, ovarijuma, vagine i vulve, kao i sarkom uterusa.

[0177] Tumori digestivnog trakta uključuju, ali nisu ograničeni na kancere anusa, kolona, creva, jednjaka, žučne kese, želuca, pankreasa, rektuma, tankog creva i pljuvačnih žlezda.

[0178] Tumori urinarnog trakta uključuju, ali nisu ograničeni na kancere mokraćne bešike, penisa, bubrega, bubrežne karlice, mokraćovoda, uretre i humani papilarni karcinom bubrega.

[0179] Kanceri oka uključuju, ali se ne ograničavaju na intraokularni melanom i retinoblastom.

[0180] Primeri kancera jetre uključuju, ali nisu ograničeni na hepatocelularni karcinom (karcinom ćelija jetre sa fibrolamelarnom varijantom ili bez nje), holangiokarcinom (karcinom intrahepatičnih žučnih kanala) i mešani hepatocelularni holangiokarcinom.

[0181] Kanceri kože uključuju, ali nisu ograničeni na kancer skvamoznih ćelija, Kapošijev sarkom, maligni melanom, kancer Merkelovih ćelija kože i nemelanomski kancer kože.

[0182] Kanceri glave i vrata uključuju, ali nisu ograničeni na kancer grkljana, donjeg ždrela, gornjeg ždrela, grla, kancer usana i usne šupljine i skvamoznih ćelija. Limfomi uključuju, ali nisu ograničeni na limfome vezane za AIDS, ne-Hodžkinov limfom, limfom T-ćelija kože, Burkitov limfom, Hodžkinovu bolest i limfom centralnog nervnog sistema.

[0183] Sarkomi uključuju, ali nisu ograničeni na sarkome mekog tkiva, osteosarkom, maligni fibrozni histiocitom, limfosarkom i rabdomiosarkom.

[0184] Leukemije uključuju, ali nisu ograničene na akutnu mijeloidnu leukemiju, akutnu limfoblastnu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, hroničnu mijelogenu leukemiju i triholeukemiju.

[0185] Ovi poremećaji su dobro okarakterisani kod ljudi, ali takođe postoje sa sličnom etiologijom kod drugih sisara, i mogu se lečiti primenom farmaceutskih smeša iz predmetnog pronalaska.

[0186] Termin „lečenje“ ili „lečiti“ kao što se pojavljuje u ovom dokumentu koristi se u klasičnom smislu, npr. vođenje ili zbrinjavanje ispitanika u svrhu borbe protiv bolesti, ublažavanja, smanjenja, olakšavanja, poboljšanja stanja itd. bolesti ili poremećaja, kao što je karcinom.

[0187] Predmetni pronalazak takođe daje metode za lečenje poremećaja vezanih za aberantnu mitogenu aktivnost ekstracelularne kinaze, uključujući, ali se ne ograničavajući na moždani udar, srčanu insuficijenciju, hepatomegaliju, kardiomegaliju, dijabetes, Alchajmerovu bolest, cističnu fibrozu, simptome odbacivanja ksenografta, septički šok ili astmu.

[0188] Efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se primeniti za lečenje takvih poremećaja, uključujući one bolesti (npr. kancer) pomenute gore u odeljku Pozadina pronalaska. Pored toga, takvi kanceri i druge bolesti mogu se lečiti jedinjenjima iz predmetnog pronalaska, bez obzira na mehanizam dejstva i/ili odnos između kinaze i poremećaja.

[0189] Fraza „aberantna aktivnost kinaze“ ili „aberantna aktivnost serin-treonin kinaze“ uključuje svaku abnormalnu ekspresiju aktivnosti gena koji kodira kinazu ili polipeptida koji on kodira. Primeri takve aberantne aktivnosti uključuju, ali nisu ograničeni na preteranu ekspresiju gena ili polipeptida, umnožavanje gena, mutacije koje daju konstitutivno aktivnu ili hiperaktivnu aktivnost kinaze; mutacije gena, uklanjanja, supstitucije, adicije, itd.

[0190] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje metode za inhibiciju aktivnosti kinaze, naročito mitogene ekstracelularne kinaze, uključujući primenu efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska, uključujući njegove soli, polimorfe, metabolite, hidrate, solvate, prolekove (npr. estre), i njegove dijastereoizomerne oblike. Aktivnost kinaze može biti inhibirana u ćelijama (npr. in vitro), ili u ćelijama ispitanika sisara, naročito ljudskog pacijenta kome treba lečenje.

OPŠTA SINTEZA JEDINJENJA PROLEKOVA FORMULE (I)

[0191] Sledeći paragrafi u glavnim crtama daju različite sintetičke pristupe pogodne za pripremu jedinjenja formula (Ia), (Ib), (Ic), (Id) i (Ie), kao što je prikazano u narednim šemama, koja sva predstavljaju podgrupe formule (I) tako da prikazuju različita otelotvorenja grupe R<A>.

[0192] Pored dole opisanih puteva, i drugi putevi mogu da se koriste za sintezu ciljanih jedinjenja, u skladu sa opštim znanjem koju ima stručnjak u oblasti organske sinteze. Red transformacija pojednostavljenih u narednim šemama stoga nije ograničavajući, i mogu se kombinovati pogodni sintetski koraci sa različitih šema da bi se dobila dodatna sinteza. Pored toga, interkonverzija bilo kog prikazanog supstituenta može se postići pre i/ili posle pojednostavljenih transformacija. Te modifikacije mogu biti takve kao što je redukcija ili oksidacija funkcionalnih grupa, halogenovanje, metalacija, reakcije kuplovanja katalizovane metalom, supstitucija ili druge reakcije poznate stručnjacima za ovu oblast. Te transformacije uključuju one koje uvode funkcionalnu grupu koja omogućava dalju interkonverziju supstituenata. Konkretno, dole prikazani sintetički putevi obuhvataju uvođenje i cepanje zaštitnih grupa. Pogodne zaštitne grupe i njihovo uvođenje i cepanje dobro su poznati stručnjacima za ovu oblast (pogledajte, npr. T.W. Greene i P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3. izdanje, Wiley 1999); konkretnije, zaštitne grupe uključuju grupe kao što je PG<1>(zaštitna grupa za hidroksi grupu, kao što je gore definisano), i PG<2>(zaštitna grupa za amino grupu, kao što je gore definisano). Gde je pogodno, to je naznačeno ubacivanjem „ ' “ u odgovarajuće nazive odgovarajućih ostataka, npr. R<8>za zaštićeni ekvivalent R<8>, i obrnuto kod R<9'>odnosno R<9>, u dole prikazanim šemama.

[0193] Specifični primeri su opisani u narednim paragrafima. Nadalje, moguće je da se dva ili više uzastopnih koraka obave bez obrade između pomenutih koraka, npr. reakcija „u jednom loncu“, kao što je poznato stručnjacima za ovu oblast.

[0194] Kao što je ukratko dato na šemi 1, jedinjenja opšte formule (Ia), u kojoj su R<1>, R<2>i R<3>kao što je definisano za opštu formulu (I), mogu se dobiti reakcijom polaznih sirovina formule (II), u kojoj su R<1>i R<2>kao što je definisano za opštu formulu (I), sa anhidridima formule (III), u kojoj je R<3>kao što je definisano za opštu formulu (I), i u kojoj PG<2>predstavlja zaštitnu grupu za amino grupe, kao što je gore definisano, kao što je tert-butoksikarbonil (Boc), benziloksikarbonil (Z) ili p-metoksibenzil (PMB), u prisustvu pogodne baze, dajući intermedijere formule (IV). Pomenuti intermedijeri mogu se prevesti u jedinjenja formule (Ia) uklanjanjem PG<2>pomoću metoda deprotekcije koje su poznate stručnjacima za ovu oblast (pogledajte npr. T.W. Greene i P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3. izdanje, Wiley 1999). Zaštitne grupe PG<2>, ako se javljaju više od jednom u jednom molekulu, mogu biti identične ili različite. Jedinjenja prolekovi formule (Ia) su tipično izolovani kao soli, poželjno kao HCl soli ili TFA soli.

[0195] Priprema polaznih sirovina (II) opisana je u Eksperimentalnom delu u nekoliko slučajeva, i može alternativno da se izvede npr. prema WO2012/143329(A1). Anhidridi, kao što je (III), pristupačni su pomoću metoda poznatih stručnjacima za ovu oblast, i takođe su opisane u literaturi (pogledajte npr. Y. Armaki et al., Chem. Pharm. Bull.52, 258 (2004)).

Šema 1: Sinteza jedinjenja prolekova formule (Ia) od intermedijera (II)

[0196] Šema 2 prikazuje sintezu derivata prolekova (Ic), gde su R<1>, R<2>, R<4>, R<5>i R<8>kao što je definisano za jedinjenja opšte formule (I), iz intermedijera formule (V), u kojoj su R<1>i R<2>kao što je definisano za jedinjenja opšte formule (I). Priprema intermedijera (V) može se izvršiti kao što je opisano u Eksperimentalnom delu. Intermedijeri (V) su deprotonovani pogodnom bazom, kao što je natrijum hidrid, u pogodnom rastvaraču, kao što je etar, npr. tetrahidrofuran, i zatim podvrgnuti reakciji sa hloroformatom formule (VI), u kojoj su R<4>i R<5>kao što je definisano za jedinjenja opšte formule (I), a LG označava odlazeću grupu, kao što je gore definisana, poželjno je hloro, dajući karbamate (VII). Hloroformati formule (VI) su dobro poznati stručnjacima za ovu oblast, i u nekoliko slučajeva su dostupni na tržištu. Pomenuti karbamati (VII) su reagovali sa karboksilatnom solju formule (VIII), u kojoj je M<+>jednovalentni katjon, kao što je katjon alkalnog metala ili amonijumova so, poželjno cezijum, i u kojoj R<8>predstavlja ekvivalent R<8>koja ima dodatnu zaštitnu grupu po potrebi, kao što je gore opisano, u pogodnom rastvaraču, kao što je N,N-dimetilformamid, dajući intermedijere formule (IX). Supstitucija takođe može da se izvrši u prisustvu katalitičke količine jodidne soli, kao što je natrijum jodid ili kalijum jodid, pri čemu se odlazeća grupa LG in situ transformiše u jodid. Alternativno, odlazeća grupa LG može se transformisati u jodid pre reakcije supstitucije. Intermedijeri (IX) su onda podvrgnuti Suzukijevom kuplovanju, uključujući derivate boronske kiseline (X), gde R<E>označava vodonik ili nezavisno jedno od drugog označava C1-C6-alkil-, ili zajedno grade C2-C6-alkilen- grupu. Suzukijevo kuplovanje je dobro poznato stručnjacima za ovu oblast, a reakcija kuplovanja, kao što je prikazano na Šemi 2, koristi S-Phos kao ligand, Pd(OAc)2ili Pd2(dba)3kao izvor paladijuma, kalijum fosfat monohidrat ili kalijum fosfat kao bazu, i toluen ili N-metilpirolidin ili smeše toluena i N-metilpirolidina kao rastvarač. Proizvodi reakcije kuplovanja (XI) su zatim deprotektovani (po potrebi), npr. tretiranjem hlorovodoničnom kiselinom da sa ukloni Boc grupa, dajući jedinjenja prolekove formule (Ic). Jedinjenja prolekovi formule (Ic) su tipično izolovana kao soli, poželjno kao HCl soli ili TFA soli.

Šema 2: Sinteza jedinjenja prolekova formule (Ic) od intermedijera (V)

[0197] Jedinjenja prolekovi formule (Id), koji sadrže fosfatni deo, mogu se sintetisati iz karbamata formule (VII), u kojoj su R<1>, R<2>, R<4>i R<5>kao što je definisano za jedinjenja opšte formule (I), a LG označava odlazeću grupu, kao što je gore definisana, poželjno je hloro. Pomenuti karbamati mogu se dobiti kao što je opisano na Šemi 2. Karbamati (VII) su podvrgnuti reakciji sa alkalnom solju di-tert-butil fosfata, npr. komercijalno dostupnom solju kalijuma (XII), dajući fosfatne intermedijere (XIII). Supstitucija takođe može da se izvrši u prisustvu katalitičke količine jodidne soli, kao što je natrijum jodid ili kalijum jodid, pri čemu se odlazeća grupa LG in situ transformiše u jodid. Alternativno, odlazeća grupa LG može se transformisati u jodid pre reakcije supstitucije. Fosfatni intermedijeri (XIII) su onda podvrgnuti Suzukijevom kuplovanju sa derivatima boronske kiseline (X), gde R<E>označava vodonik ili nezavisno jedno od drugog označava C1-C6-alkil-, ili zajedno grade C2-C6-alkilen- grupu. Suzukijevo kuplovanje je dobro poznata stručnjacima za ovu oblast, a reakcija kuplovanja, kao što je prikazano na Šemi 3, koristi S-Phos kao ligand, Pd(OAc)2ili Pd2(dba)3kao izvor paladijuma, kalijum fosfat monohidrat ili kalijum fosfat kao bazu, i toluen ili N-metilpirolidin kao rastvarač. Proizvodi kuplovanja (XIV) su zatim podvrgnuti cepanju pod uticajem kiseline, npr. sa rastvorom hlorovodonika u dioksanu i dihlorometanu, tert-butil fosfat estarskih grupa, dajući prolekove u obliku fosfatnih jedinjenja, formule (Id).

Šema 3: Sinteza fosfatnih jedinjenja prolekova formule (Id) od karbamata (VII)

[0198] Jedinjenja prolekovi opšte formule (Ie), koja sadrže dipeptidnu grupu, ili grupu nalik na dipeptidnu, mogu se dobiti iz amina (XV), kod kojih su R<1>, R<2>, R<4>, R<5>, i R<6>kao što je definisano za jedinjenja opšte formule (I), kuplovanjem sa opciono zaštićenim aminokiselinama (XVI), kod kojih R<9>predstavlja ekvivalent R<9>koji po potrebi sadrži dodatnu zaštitnu grupu, kao što je gore opisano. Kuplovanje može biti izvršeno uz pomoć velikog broja standardnih reagenasa za kuplovanje peptida dobro poznatih stručnjacima za ovu oblast, kao što je HATU; opciono zaštićene aminokiseline formule (XVI) su u mnogim slučajevima komercijalno dostupne. Amini formule (XV) pristupačni su pomoću metoda opisanih na Šemi 2 (jedinjenja formule (XV) mogu se razumeti kao jedinjenja formule (Ic), gde R<8>označava -CH(R<6>)-NH2), i u Eksperimentalnom delu, dajući intermedijere formule (XVII), koji se zatim deprotektuju (po potrebi), npr. tretiranjem hlorovodoničnom kiselinom da se ukloni Boc grupa, dajući jedinjenja prolekove formule (Ie). Jedinjenja prolekovi formule (Ie) su tipično izolovana kao soli, poželjno kao HCl soli ili TFA soli.

Šema 4: Sinteza jedinjenja prolekova formule (Ie) od amina (XV)

EKSPERIMENTALNI DEO

[0199] U sledećoj Tabeli nabrojane su skraćenice korišćene u ovom paragrafu i u odeljku Primeri. Oblici NMR pikova su navedeni kako se pojavljuju u spektrima, mogući efekti višeg reda nisu razmatrani.

[0200] Jedinjenja i intermedijeri dobijeni prema metodama iz pronalaska mogu zahtevati prečišćavanje. Prečišćavanje organskih jedinjenja je dobro poznato stručnjacima za ovu oblast, i može postojati više načina za prečišćavanje istog jedinjenja. U nekim slučajevima ne mora biti potrebno prečišćavanje. U nekim slučajevima, jedinjenje može biti prečišćeno kristalizacijom. U nekim slučajevima, nečistoće mogu biti isprane pomoću pogodnog rastvarača. U nekim slučajevima, jedinjenja mogu da se prečiste hromatografski, naročito fleš hromatografijom, primenom, na primer, već pakovanih patrona sa silika gelom, npr. proizvođača Separtis, kao što je Isolute® Flash silika gel (hromatografija na silika gelu) ili Isolate® Flash NH2 silika gel (aminofazna silika-gel hromatografija) u kombinaciji sa pogodnim hromatografskim sistemom, kao što je Flashmaster II (Separtis) ili Isolera sistem (Biotage) i eluentima, kao što su, na primer, gradijenti heksan/etil acetat ili DCM/metanol. U nekim slučajevima, jedinjenja mogu da se prečiste preparativnom HPLC hromatografijom, primenom, na primer Waters autoprečistača opremljenog DAD detektorom i/ili onlajn masenim spektrometrom sa elektrosprej jonizacijom u kombinaciji sa pogodnom prethodno pakovanom reverzno faznom kolonom i eluentima kao što su, na primer, gradijenti vode i acetonitrila koji mogu da sadrže dodatke, kao što je trifluorsirćetna kiselina, mravlja kiselina ili vodeni rastvor amonijaka.

[0201] Optički izomeri mogu se dobiti rezolucijom racemskih smeša prema klasičnim postupcima, na primer, formiranjem dijastereoizomernih soli pomoću optički aktivne kiseline ili baze, ili formiranja kovalentnih dijastereomera. Primeri odgovarajućih kiselina su vinska, diacetilvinska, ditoluoilvinska i kamforsulfonska kiselina. Smeše dijastereoizomera mogu se razdvojiti na individualne dijastereomere na bazi njihovih fizičkih i/ili hemijskih razlika, metodama koje su poznate u struci, na primer, hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom. Optički aktivne baze ili kiseline se zatim oslobađaju iz razdvojenih dijastereomernih soli. Različiti postupci za razdvajanje optičkih izomera uključuju primenu hiralne hromatografije (npr. hiralne HPLC kolone), uz klasičnu derivatizaciju ili bez nje, koja je optimalno izabrana da razdvajanje enantiomera bude maksimalno. Pogodne hiralne HPLC kolone proizvodi Diacel, npr. Chiracel OD i Chiracel OJ između mnogih drugih, koje se sve rutinski biraju. Takođe su korisne enzimske separacije, sa derivatizacijom ili bez nje. Optički aktivna jedinjenja iz ovog pronalaska mogu slično da se dobiju hiralnim sintezama, iz optički aktivnih polaznih sirovina.

[0202] U predmetnom tekstu, a naročito u Eksperimentalnom delu, za sintezu intermedijera i primere predmetnog pronalaska, kada se jedinjenje pominje u obliku soli sa odgovarajućom bazom ili kiselinom, tačan stehiometrijski sastav pomenutog oblika soli, kao što je dobijena postupcima pripreme i/ili prečišćavanja, u većini slučajeva nije poznat.

[0203] Ukoliko nije drugačije naglašeno, podrazumeva se da sufiksi za hemijske nazive ili strukturne formule, kao što je „hidrohlorid“, „trifluoroacetat“, „natrijumova so“ ili „x HCl“ „x CF3COOH“, „x Na<+>“, na primer, nisu stehiometrijska specifikacija, nego samo oblik soli.

[0204] To se analogno odnosi i na slučajeve u kojima su intermedijeri u sintezi ili jedinjenja navedena kao primer ili njihove soli, postupcima pripreme i/ili prečišćavanja koji su opisani, dobijeni kao solvati, kao što su hidrati sa (ako je definisano) nepoznatim stehiometrijskim sastavom.

[0205] Analitička UPLC-MS je izvedena kao što sledi:

Metod A: Sistem: UPLC Acquity (Waters) sa PDA Detektorom i Waters ZQ masenim spektrometrom; Kolona: Acquity BEH C18 1.7µm 2.1x50mm; Temperatura: 60°C; Rastvarač A: voda 0.1% mravlja kiselina; Rastvarač B: Acetonitril; Gradijent: 99 % A → 1 % A (1.6 min) → 1 % A (0.4 min) ; Protok: 0.8 mL/min; Injekciona zapremina: 1.0 µl (0.1mg-1mg/mL koncentracija uzorka); Detekcija: PDA raspon skeniranja 210-400 nm - fiksan i ESI (+), raspon skeniranja 170-800 m/z

LC-MS metode:

Metoda 1:

[0206] Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC Sistem; Kolona: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 µ 50 x 1 mm; Eluent A: 1 l voda 0.25 ml 99% mravlja kiselina, Eluent B: 1 l Acetonitril 0.25 ml 99% mravlja kiselina; Gradijent: 0.0 min 90% A → 1.2 min 5% A → 2.0 min 5% A Temperatura: 50°C; Protok: 0.40 ml/min; UV-detekcija: 208 - 400 nm.

Priprema jedinjenja A1

Ruta

(2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(2-{[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]-amino}[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil]propanamid

[0207]

[0208] U mešanu suspenziju Int08.011 (6.0 g) u DMF (48 mL) i dihlormetanu (96 mL) dodat je natrijum bikarbonat (3.69 g), (2R)-2-(4-fluorfenil)propanska kiselina (2.71 g) i HATU (8.36 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Dodata je voda, i smeša je mešana tokom 30 minuta. Dodat je poluzasićen rastvor natrijum bikarbonata i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijena je čvrsta supstanca koja je razmućena s etil acetatom dajući 7.44 g naslovnog jedinjenja.

<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.40 (d, 3H), 3.16 (s, 3H), 3.84 (q, 1 H), 3.96 (s, 3H), 7.09 - 7.18 (m, 2H), 7.36 - 7.44 (m, 3H), 7.51 (dd, 1H), 7.63 - 7.76 (m, 5H), 7.92 (dd, 1H), 8.48 (d, 1H), 8.60 (s, 1H), 9.10 (d, 1H), 10.16 (s, 1H).

[α]D<20>: -77.0° (u DMSO).

Određivanje enantiomerne čistoće pomoću analitičke hiralne HPLC:

[0209] Kolona: Chiralcel OD-RH 150x4.6; Protok: 1.00 mL/min; Rastvarač: A: Voda sa 0.1 % mravljom kiselinom, B: Acetonitril; Smeša rastvarača: 40% A 60% B. Vreme trajanja: 30 min. Vreme retencije: 12.83 min; UV 254 nm; Enantiomerni odnos: <1% : > 99%.

Intermedijer Int08.011

6-(4-aminofenil)-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil][1,2,4]-triazolo[1,5-α]piridin-2-amin

[0211] U mešanu suspenziju Int08.010 (12.3 g) u dihlormetanu (40 mL) dodata je TFA (46 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Dodata je daljnja TFA (1 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Dodat je zasićen rastvor kalijum karbonata dok je postignut pH 9. Smeša je ekstrahovana sa dihlormetanom i metanolom (smeša 10:1). Rastvor je osušen (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak se triturira sa etanolom dajući 9.2 g naslovnog jedinjenja.

[0212]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 3.16 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 5.30 (s, 2H), 6.63 (d, 2H), 7.38 - 7.46 (m, 3H), 7.51 (dd, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.84 (dd, 1H), 8.48 (d, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 8.93 (d, 1 H).

Intermedijer Int08.010

tert-butil [4-(2-{[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]amino}[1,2,4]-triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil]karbamat

[0214] U mešanu suspenziju Int01.03 (4.0 g) u toluenu (250 mL) i NMP (25 mL) dodat je Int03.02 (8.31 g), adukt hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-tri-izopropil-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil] paladijum(II) metil-tert-butiletar (1.08 g), X-Phos (0.64 g) i kalijum fosfat u prahu (16.6 g). Balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 16 h.

[0215] Reakciona smeša je filtrirana kroz mikrofiltar i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak se triturira sa dihlormetanom dajući 12.3 g naslovnog jedinjenja.

[0216]<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.46 (s, 9H), 3.16 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 7.43 (d, 1 H), 7.48 - 7.59 (m, 3H), 7.63 - 7.72 (m, 3H), 7.92 (dd, 1 H), 8.48 (d, 1 H), 8.58 (s, 1 H), 9.06 - 9.12 (m, 1 H), 9.46 (s, 1 H).

Intermedijer Int01.03.

tert-butil [4-(2-amino[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil]karbamat

[0218] U mešani rastvor Int01.02 (5.82 g) u 1-propanolu (400 mL) dodat je rastvor 2M kalijum karbonata (41 mL), {4-[(tert-butoksikarbonil) amino] fenil} boronske kiseline (8.6 g), trifenilfosfin (150 mg) i PdCl2(PPh3)2(1.9 g). Smeša je zagrevana do refluksa tokom 4 h, rastvarač je uklonjen u vakuumu, dodata je voda (150 mL) i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (500 mL). Organska faza je osušena (natrijum sulfat), filtrirana kroz Celit i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak se triturira sa DCM dajući jedinjenje iz naslova u vidu bele čvrste supstance. Prinos: 7.2 g.<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.37 - 1.55 (m, 9H), 5.99 (s, 2H), 7.36 (dd, 1 H), 7.48 - 7.55 (m, 2H), 7.55 - 7.62 (m, 2H), 7.69 (dd, 1 H), 8.78 (dd, 1 H), 9.44 (s, 1 H).

Intermedijer Int01.02

6-Bromo[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-amin

[0220] Hidroksilamonijum hlorid (39.8 g) je suspendovan u metanolu (200 mL) i etanolu (190 mL) i dodata je Hünig-ova baza (59 mL) kod sobne temperature. Smeša je zagrevana do 60°C, u delovima je dodat Int01.01 (30 g), i smeša je mešana na 60°C tokom 2h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu i dodata je voda (150 mL). Čvrsta supstanca je sakupljena filtriranjem i isprana sa vodom, te osušena u vakuumu.

[0221] Prinos: 19.3 g naslovnog jedinjenja.

[0222]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 6.10 (s, 2H), 7.28 (dd, 1H), 7.51 (dd, 1 H), 8.88 (dd, 1 H).

Intermedijer Int01.01

Etil [(5-bromopiridin-2-il)karbamotioil]karbamat

[0224] Etoksikarbonilizotiocijanat (16.7 g) je dodat u mešani rastvor 2-amino-5-brompiridina (20 g) u dioksanu (200 mL). Smeša je mešana tokom 2h kod sobne temperature. Istaložen je beli talog. Dodat je heksan (20 mL) i beli talog je sakupljen filtracijom.

[0225] Prinos: 30.4 g naslovnog jedinjenja.

[0226]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.22 (t, 3H), 4.19 (q, 2H), 8.08 (dd, 1H), 8.49 (d, 1 H), 8.57 (br. d, 1 H), 11.37 - 12.35 (m, 2H).

Intermedijer Int03.02

1-bromo-2-metoksi-4-(metilsulfonil)benzen

[0228] U mešani rastvor Int03.01 (265 mg) u hloroformu (10 mL) dodata je 3-hloroperoksibenzoeva kiselina (mCPBA) (890 mg). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Dodat je polu-zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i smeša je ekstrahovana sa dihlormetanom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Hromatografijom na silikagelu dobijeno je 252 mg naslovnog jedinjenja.

[0229]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.22 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 7.39 (dd, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.84 (d, 1H).

Intermedijer Int03.01

1-bromo-2-metoksi-4-(metilsulfanil)benzen

[0231] U mešani rastvor 1-bromo-4-fluor-2-metoksibenzena (4.0 g) u DMF (40 mL) dodat je natrijum metantiolat (2.76 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta i na 85°C tokom 2 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Hromatografijom na silikagelu dobijeno je 280 mg naslovnog jedinjenja.

[0232]<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2.46 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 6.74 (dd, 1H), 6.91 (d, 1H), 7.44 (d, 1H).

Intermedijer Int03.00

1-bromo-2-metoksi-4-(metilsulfanil)benzen (alternativni postupak)

[0234] U mešani rastvor 1-bromo-4-fluor-2-metoksibenzena (10.0 g) u DMF (100 mL) dodat je natrijum metantiolat (4.44 g). Smeša je mešana na 65°C tokom 2 h. Smeša je ohlađena na 0°C i dodat je metil jodid (4.55 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i dodat je dodatni natrijum metantiolat (4.44 g). Smeša je mešana na 65°C tokom 1 h. Smeša je ohlađena na 0°C i dodat je metil jodid (4.55 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Hromatografijom na silikagelu dobijeno je 6.2 g naslovnog jedinjenja kao smeša 2:1 sa početnim materijalom. Smeša je korišćena u sledećem koraku bez prečišćavanja.

Ruta II

(2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(2-{[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]-amino}[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-6-il)fenil]propanamid

[0236] U mešanu suspenziju Int21.06 (550 mg) u toluenu (18 mL) dodat je kalijum fluorid (260 mg) i kalijum fosfat u prahu (842 mg) i balon je degasiran dva puta, te je ponovo napunjen sa argonom. Smeša je mešana tokom 15 minuta kod sobne temperature. Dodati su Int21.03 (350 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (81 mg) i paladijum acetat (22 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do 85 °C tokom 3 h. Dodata je voda i reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija amino faze dala je čvrstu supstancu koja se triturira sa smešom dihlormetana i heksana dajući 452 mg naslovnog jedinjenja.

[0237]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 1.39 (3H), 3.16 (3H), 3.83 (1 H), 3.95 (3H), 7.08-7.20 (2H), 7.34-7.45 (3H), 7.51 (1H), 7.63-7.77 (5H), 7.92 (1H), 8.48 (1 H), 8.64 (1 H), 9.11 (1 H), 10.19 (1 H).

[0238] [α]D<20>: -78.9° (u DMSO).

Određivanje enantiomerne čistoće pomoću analitičke hiralne HPLC:

[0239] Kolona: Chiralcel OD-RH 150x4.6; Protok: 1.00 mL/min; Rastvarač: A: voda sa 0.1 % mravljom kiselinom, B: Acetonitril; Smeša rastvarača: 40% A 60% B. Vreme trajanja: 30 min. Vreme retencije: 12.83 min; UV 254 nm; Enantiomerni odnos: <1% : > 99%.

Intermedijer Int21.06

(2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil]propanamid

[0241] U mešani rastvor 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilina (1.0 g) u DMF (45 mL) i dihlormetanu (90 mL) dodat je natrijum bikarbonat (766 mg), Int09.03 (844 mg) i HATU (2.6 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Dodata je voda, i smeša je mešana tokom 30 minuta. Dodat je polu-zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija dala je 1.53 g naslovnog jedinjenja.

[0242]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 1.23 (12H), 1.37 (3H), 3.74-3.87 (1 H), 7.06-7.16 (2H), 7.31-7.42 (2H), 7.51-7.61 (4H), 10.12 (1H).

Intermedijerni primer Int21.05

(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)boronska kiselina

[0244] U mešani rastvor (4-aminofenil)boronska kiselina hidrohlorid (2.00 g) u DMF (42 mL) je dodat natrijum bikarbonat (2.9 g), (2R)-2-(4-fluorfenil)propanska kiselina (2.04 g) i HATU (6.58 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 72 h. Dodata je voda (140 mL), i smeša je mešana tokom 2 h. Beli talog je sakupljen filtriranjem i ispran sa vodom, te osušen u vakuumu dajući 2.86 g naslovnog jedinjenja.

[0245]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 1.39 (3H), 3.84 (1 H), 7.08-7.21 (2H), 7.35-7.44 (2H), 7.52 (2H), 7.69 (2H), 7.88 (2H), 10.07 (1H).

Intermedijer Int09.03

(2R)-2-(4-fluorfenil)propanska kiselina

[0247] U mešani rastvor Int09.02 (23.6 g) u refluksujućem etil acetatu (250mL) dodat je rastvor (1S)-1-feniletanamina (17.35 g) u etil acetatu. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature unutar 1 h. Bela čvrsta materija je sakupljena filtracijom, isprana je sa etil acetatom i osušena u vakuumu dajući 27.5 g čvrste materije. Čvrsta supstanca se rekristališe iz 400 mL refluksujućeg etil acetata. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Bela čvrsta materija je sakupljena filtracijom, isprana je sa etil acetatom i osušena u vakuumu dajući 18.3 g čvrste materije. Čvrsta supstanca dvaput rekristalizovana iz refluksujućeg etil acetata (350 mL; 300 mL). Bela čvrsta materija je sakupljena filtracijom, te je isprana je sa etil acetatom i osušena u vakuumu dajući 10.51 g čvrste materije. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, dodata je hlorovodonična kiselina (c=2.0 M) dok je postignut pH 5 i reakciona smeša je ekstrahovana sa dihlormetanom. Organska faza je osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije 5.6 g naslovnog proizvoda. Sirovi proizvod je korišćen bez dodatnog prečišćavanja.

[0248]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.31 (d, 3H), 3.66 (q, 1H), 7.05 - 7.16 (m, 2H), 7.24 - 7.33 (m, 2H), 12.28 (br. s., 1 H).

[0249] [α]D<20>: -79.3° (u DMSO)

Određivanje enantiomerne čistoće pomoću analitičke hiralne HPLC:

[0250] Kolona: Chiralcel OJ-H 150x4.6; Protok: 1.00 mL/min; Rastvarač: A: Heksan , B: 2-propanol sa 0.1 % mravljom kiselinom; Smeša rastvarača: 80% A 20% B. Vreme trajanja: 30 min. Vreme retencije: 3.41 min; UV 254 nm; Enantiomerni odnos: 99.8% : 0.2%.

Intermedijer Int09.02

Rac-2-(4-fluorfenil)propanska kiselina

[0252] U mešani rastvor Int09.01 (18.9 g) u etanolu (200 mL) dodat je rastvor kalijum hidroksida (35 g), rastvoren u vodi (200 mL). Smeša je mešana na 0 °C tokom 4 h. Dodata je hlorovodonična kiselina (c=4.0 M) dok je postignut pH 5 i reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je odvojena i rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije 15.64 g naslovnog proizvoda. Sirovi proizvod je korišćen bez dodatnog prečišćavanja.

[0253]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.31 (d, 3H), 3.66 (q, 1H), 7.05 - 7.15 (m, 2H), 7.24 - 7.33 (m, 2H), 12.30 (s, 1 H).

Intermedijer Int09.01

Rac-metil 2-(4-fluorfenil)propanoat

[0255] U mešani rastvor diizopropilamina (13.0 g) u tetrahidrofuranu (160 mL) dodat je rastvor n-butilitijuma u heksanu (51.4 mL; c= 2.5 M) na -78 °C. Rastvor je mešan na 0 °C tokom 15 minuta. Rastvor je ohlađen na -78 °C i dodat je rastvor metil (4-fluorfenil)acetata (18.0 g), u tetrahidrofuranu (40 mL). Rastvor je mešan na -78 °C tokom 30 minuta. Dodat je metil jodid (10.0 mL) na -78 °C, i rastvor je ostavljen da se zagreje do 0 °C unutar 1 h. Dodata je voda i reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 18.9 g naslovnog jedinjenja.

[0256]<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.34 (d, 3H), 3.55 (s, 3H), 3.79 (q, 1H), 7.08 - 7.15 (m, 2H), 7.25 - 7.32 (m, 2H).

Intermedijer Int21.03

6-hlor-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil][1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-amin

[0258] U mešanu suspenziju Int21.02 (0.7 g) u toluenu (28 mL) dodat je Int03.02 (1.27 g), hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-tri-izopropil-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil] paladijum(II) metil-tert-butiletar adukt (343 mg), X-Phos (202 mg) i kalijum fosfat u prahu (3.09 g). Balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 3 h. Dodati su dodatni hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-tri-izopropil-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil] paladijum(II) metil-tert-butiletar adukt (30 mg) i X-Phos (19 mg) i smeša je zagrevana do refluksa tokom 15 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijena je čvrsta supstanca koja je razmućena u etil acetatu pri čemu se dobija 1.0 g naslovnog jedinjenja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.16 (3H), 3.95 (3H), 7.42 (1 H), 7.50 (1H), 7.62-7.69 (2H), 8.41 (1H), 8.70 (1H), 9.17 (1H).

Intermedijer Int21.02

6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-amin

[0260] Hidroksilamonijum hlorid (4.4 g) suspendovan je u metanolu (35 mL) i etanolu (35 mL) i Hünig-ova baza (10.2 mL) je dodata kod sobne temperature. Smeša je zagrevana do 60°C, Int21.01 (4.4 g) je dodat u delovima, i smeša je mešana na 60°C tokom 2h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu i dodata je voda (150 mL). Čvrsta supstanca je sakupljena filtriranjem i isprana sa vodom, te osušena u vakuumu.

[0261] Prinos: 2.0 g naslovnog jedinjenja.

[0262]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 6.09 (2H), 7.28-7.37 (1 H), 7.39-7.49 (1 H), 8.84 (1 H).

Intermedijer Int21.01

Etil [(5-hlorpiridin-2-il)karbamotioil]karbamat

[0264] Etoksikarbonilizotiocijanat (3.37 g) dodat je u mešani rastvor 2-amino-5-hloropiridina (3.0 g) u dioksanu (100 mL). Smeša je mešana kod sobne temperature tokom 14 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsta supstanca je rastvorena u dihlormetanu i metanolu (100 : 1), filtrirana i rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije čvrsta supstanca koja je rekristalizovana iz etil acetata dajući 4.4 g naslovnog jedinjenja.

[0265]<1>H-NMR (400 MHz, HLOROFORM-d): δ [ppm] = 1.35 (3H), 4.31 (2H), 7.71 (1 H), 8.03 (1H), 8.34 (1 H), 8.83 (1 H), 12.09 (1H).

Priprema jedinjenjaA2

(2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(2-{[4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]amino}[1,2,4]triazolo[ 1, 5-a]piridin-6-il)fenil]-propanamid

[0266]

[0267] U mešanu suspenziju Int08.021 (5.6 g) u DMF (45 mL) i dihlormetanu (90 mL) dodat je natrijum bikarbonat (1.97 g), (2R)-2-(4-fluorfenil)propanska kiselina (2.17 g) i HATU (6.69 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Dodata je voda, i smeša je mešana tokom 30 minuta. Dodat je polu-zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija amino faze dala je čvrstu supstancu koja je triturirana sa smešom etil acetata i cikloheksana dajući 6.60 g naslovnog jedinjenja.

[0268]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.39 (d, 3H), 3.17 (s, 3H), 3.83 (q, 1H), 5.00 (q, 2H), 7.08 - 7.19 (m, 2H), 7.35 - 7.45 (m, 2H), 7.58 - 7.76 (m, 7H), 7.93 (dd, 1H), 8.50 (d, 1H), 8.59 (s, 1H), 9.11 (d, 1H), 10.19 (s, 1H).

[0269] [α]D<20>: -69.3° (u DMSO).

Određivanje enantiomerne čistoće pomoću analitičke hiralne HPLC:

[0270] Kolona: Chiralcel OD-RH 150x4.6; Protok: 1.00 mL/min; Rastvarač: A: voda sa 0.1 % mravljom kiselinom, B: Acetonitril; Smeša rastvarača: 40% A 60% B. Vreme trajanja: 20 min. Vreme retencije: 12.28 min; UV 254 nm; Enantiomerni odnos: <1% : > 99%.

Intermedijerni primer Int08.021

6-(4-aminofenil)-N-[4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]-[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-amin

[0272] U mešanu suspenziju Int08.020 (11.9 g) u dihlormetanu (80 mL) dodata je TFA (40 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h.

[0273] Rastvarač je uklonjen u vakuumu, i ostatak je rastvoren u etil acetatu. Dodat je poluzasićeni rastvor natrijum bikarbonata dok je postignut pH 9. Preostala čvrsta supstanca je sakupljena filtriranjem da bi se dobilo 9.7 g naslovnog jedinjenja.

[0274]<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.16 (s, 3H), 5.00 (q, 2H), 5.34 (br. s., 2H), 6.60 - 6.68 (m, 2H), 7.39 - 7.48 (m, 2H), 7.57 - 7.66 (m, 3H), 7.85 (dd, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.89 - 8.96 (m, 1H).

Intermedijerni primer Int08.020

tert-butil [4-(2-{[4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]-amino}[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil]karbamat

[0276] U mešanu suspenziju Int01.03 (4.0 g) u toluenu (77 mL) i NMP (7.7 mL) dodat je Int05.03 (4.91 g), hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil] paladijum(II) metil-tert-butiletar adukt (254 mg) i X-Phos (150 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je mešana tokom 5 minuta na sobnoj temperaturi. Dodat je kalijum fosfat u prahu (9.13 g) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 1 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz kolonu amino faza-silikagel i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija amino faze dala je čvrstu supstancu koja je triturirana sa smešom heksana i dihlormetana da se dobije 6.05 g naslovnog jedinjenja.

[0277]<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.46 (s, 9H), 3.17 (s, 3H), 5.00 (q, 2H), 7.55 (d, 2H), 7.60 - 7.71 (m, 5H), 7.93 (dd, 1H), 8.50 (d, 1H), 8.54 (s, 1H), 9.09 (dd, 1 H), 9.46 (s, 1 H).

Intermedijerni primer Int05.03

1-bromo-4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)benzen

[0279] U mešani rastvor Int05.02 (3.8 g) u hloroformu (100 mL) dodata je 3-hlorkarboperoksibenzoeva kiselina (mCPBA) (8.48 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Uz hlađenje u ledenom kupatilu, dodati su polu-zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i 0.2 M rastvor natrijum tiosulfata, smeša je mešana tokom 30 minuta i smeša je ekstrahovana sa dihlormetanom. Organska faza je isprana sa 0.2 M rastvorom natrijum tiosulfata i zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Hromatografijom na silikagelu dobijena je čvrsta supstanca koja je triturirana sa etrom dajući 2.1 g naslovnog jedinjenja.<1>H-NMR (400MHz, HLOROFORM-d): δ [ppm] = 3.06 (s, 3H), 4.50 (q, 2H), 7.45 (d, 1 H), 7.52 (dd, 1 H), 7.81 (d, 1 H).

Intermedijerni primer Int05.02

1-bromo-4-(metilsulfanil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)benzen

[0281] U mešani rastvor Int05.01 (4.0 g) u DMF (15 mL) dodat je natrijum metantiolat (1.0 g). Smeša je mešana tokom 2 h na 60 °C. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije 3.8 g sirovog jedinjenja iz naslova, koje je korišćeno u sledećem koraku bez prečišćavanja.

[0282]<1>H-NMR (300MHz, HLOROFORM-d): δ [ppm] = 2.48 (s, 3H), 4.39 (q, 2H), 6.78 -6.88 (m, 2H), 7.46 (d, 1 H).

Intermedijerni primer Int05.01

1-bromo-4-fluor-2-(2,2,2-trifluoretoksi)benzen

[0284] U mešani rastvor 2-bromo-5-fluorfenol (1.5 g) u acetonitrilu (0.5 mL) i DMF (8.5 mL) u mikrotalasnoj epruveti dodat je kalijum karbonat (2.1 g) i 2,2,2-trifluoretil trifluormetansulfonat (2.37 g). Smeša je zagrevana do 150°C u mikrotalasnoj pećnici tokom 30 minuta. U drugoj mikrotalasnoj epruveti ponovljena je ista reakcija. Obe smeše su spojene. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, dodati su etil acetat i heksan (1:1) i smeša je isprana sa vodom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Hromatografijom na silikagelu dobijeno je 4.0 g naslovnog jedinjenja.

[0285]<1>H-NMR (300MHz, HLOROFORM-d): δ [ppm] = 4.39 (q, 2H), 6.62 - 6.78 (m, 2H), 7.53 (dd, 1 H).

Intermedijerni primer Int05.04.

6-hlor-N-[4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil][1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-amin

[0287] Počevši od Intermedijera Int21.02 (1.4 g) i Intermedijernog primera Int05.03 (3.18 g) Intermedijerni primer Int05.04 je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijera Int21.03.

[0288] Prinos: 3.49 g naslovnog jedinjenja.

Priprema jedinjenjaA3

(2R)-N-{4-[2-({4-[(3-fluorazetidin-1-il)karbonil]-2-metoksifenil}amino)-[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il]fenil}-2-(4-fluorfenil)propanamid

[0290] U mešanu suspenziju Int08.061 (1.10 g) u DMF (8.5 mL) i dihlormetanu (17 mL) dodat je natrijum bikarbonat (427 mg), (2R)-2-(4-fluorfenil)propanska kiselina (470 mg) i HATU (1.45 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Dodata je voda, i smeša je mešana tokom 30 minuta. Dodat je polu-zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija amino faze dala je 1.13 g naslovnog jedinjenja.

[0291]<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.42 (d, 3H), 3.86 (q, 1 H), 3.93 (s, 3H), 3.98 - 4.80 (m, 4H), 5.44 (m, 1H, J=57.5 Hz), 7.12 - 7.20 (m, 2H), 7.26 (d, 1H), 7.30 (dd, 1 H), 7.40 - 7.46 (m, 2H), 7.63 - 7.76 (m, 5H), 7.93 (dd, 1 H), 8.31 - 8.39 (m, 2H), 9.11 (d, 1 H), 10.19 (s, 1 H).

[0292] [α]D<20>: -70.0° (u DMSO).

Određivanje enantiomerne čistoće pomoću analitičke hiralne HPLC:

[0293] Kolona: Chiralcel OD-RH 150x4.6; Protok: 1.00 mL/min; Rastvarač: A: voda sa 0.1 % mravljom kiselinom, B: Acetonitril; Smeša rastvarača: 40% A 60% B. Vreme trajanja: 20 min. Vreme retencije: 13.88 min; UV 254 nm; Enantiomerni odnos: <1% : > 99%.

Intermedijerni primer Int08.061

(4-{[6-(4-aminofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il]amino}-3-metoksifenil)(3-fluorazetidin-1-il)metanon

[0295] U mešanu suspenziju Int08.060 (7.8 g) u dihlormetanu (55 mL) dodata je TFA (28 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu i Ostatak je rastvoren in etil acetat. Zasićeni rastvor natrijum bikarbonata je dodavan sve dok se ne postigne pH 9. Preostala čvrsta materija je sakupljena filtriranjem da bi se dobilo 5.2 g naslovnog jedinjenja. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0296]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.90 (s, 3H), 4.45 (br. s., 4H), 5.20 - 5.58 (m, 3H), 6.63 (d, 2H), 7.23 (d, 1 H), 7.27 (dd, 1 H), 7.42 (d, 2H), 7.52 - 7.61 (m, 1H), 7.81 (dd, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.34 (d, 1H), 8.86 - 8.94 (m, 1H).

Intermedijerni primer Int08.060

tert-butil {4-[2-({4-[(3-fluorazetidin-1-il)karbonil]-2-metoksifenil}-amino)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il]fenil}karbamat

[0298] U mešanu suspenziju Int01.03 (6.0 g) u toluenu (350 mL) i NMP (29 mL) dodat je Int02.05 (6.91 g), hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil] paladijum(II) metil-tert-butiletar adukt (610 mg) i X-Phos (359 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je mešana tokom 5 minuta na sobnoj temperaturi. Dodat je kalijum fosfat u prahu (13.7 g) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 1 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz kolonu amino faza-silikagel i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija amino faze dala je 7.9 g naslovnog jedinjenja.

[0299]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.46 (s, 9H), 3.90 (s, 3H), 4.04 - 4.80 (m, 4H), 5.27 - 5.57 (m, 1 H), 7.23 (d, 1 H), 7.27 (dd, 1 H), 7.54 (d, 2H), 7.59 - 7.71 (m, 3H), 7.89 (dd, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.34 (d, 1H), 9.06 (d, 1H), 9.45 (s, 1H).

Intermedijerni primer Int02.05

(4-Bromo-3-metoksifenil)(3-fluorazetidin-1-il)metanon

[0301] U mešani rastvor 4-bromo-3-metoksibenzoeve kiseline (1.4 g) u DMF (15 mL) dodat je kalijum karbonat (2.51 g), 3-fluorazetidin hidrohlorid (1.01 g) i HATU (3.69 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Dodata je voda, smeša je mešana tokom 15 minuta i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana sa vodom, zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu, da se dobije 1.25 g naslovnog jedinjenja.

[0302]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.90 (s, 3H), 3.99 - 4.16 (m, 1 H), 4.31 -4.65 (m, 3H), 5.36 (tt, 0.5H), 5.50 (tt, 0.5H), 7.14 (dd, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.66 (d, 1 H).

Priprema jedinjenjaA4

(2R)-N-[4-(2-{[4-(azetidin-1-ilkarbonil)-2-metoksifenil]amino}[1,2,4]-triazolo[1,5-a]piridin-6-il)fenil]-2-(4-fluorfenil)propanamid

[0304] U mešanu suspenziju Int08.071 (200 mg) u DMF (1.6 mL) i dihlormetanu (3.2 mL) dodat je natrijum bikarbonat (122 mg), (2R)-2-(4-fluorfenil)propanska kiselina (89 mg) i HATU (275 mg). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Dodata je voda, i smeša je mešana tokom 30 minuta. Dodat je polu-zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i smeša je ekstrahovana sa smešom dihlormetana i metanola (100:1). Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Hromatografijom amino-faza-silika-gel praćena hromatografijom na silikagelu dobijena je čvrsta supstanca koja je triturirana sa etrom da se dobije 250 mg naslovnog jedinjenja.

[0305]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.39 (d, 3H), 2.22 (quin, 2H), 3.78 - 3.92 (m, 4H), 4.00 (br. s., 2H), 4.32 (br. s, 2H), 7.09 - 7.17 (m, 2H), 7.20 - 7.26 (m, 2H), 7.36 - 7.44 (m, 2H), 7.59 - 7.75 (m, 5H), 7.89 (dd, 1 H), 8.24 - 8.36 (m, 2H), 9.08 (d, 1 H), 10.18 (s, 1 H).

[0306] [α]D<20>: -63.5° (u DMSO).

Određivanje enantiomerne čistoće pomoću analitičke hiralne HPLC:

[0307] Kolona: Chiralcel OD-RH 150x4.6; Protok: 1.00 mL/min; Rastvarač: A: voda sa 0.1 % mravljom kiselinom, B: Acetonitril; Smeša rastvarača: 40% A 60% B. Vreme trajanja: 30 min. Vreme retencije: 14.22 min; UV 254 nm; Enantiomerni odnos: <2% : > 98%.

Intermedijerni primer Int08.071

(4-{[6-(4-aminofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il]amino}-3-metoksifenil)(azetidin-1-il)metanon

[0309] U mešanu suspenziju Int08.070 (600 mg) u dihlormetanu (12 mL) dodata je TFA (2.2 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Dodat je zasićeni rastvor kalijum karbonata dok je postignut pH 9. Smeša je ekstrahovana sa dihlormetanom i metanolom (smeša 10:1). Reakciona smeša je filtrirana kroz kolonu amino faza-silikagel i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak se triturira sa etanolom dajući 475 mg naslovnog jedinjenja.

[0310]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2.23 (quin, 2H), 3.88 (s, 3H), 4.00 (br. s., 2H), 4.33 (br. s., 2H), 5.30 (s, 2H), 6.62 (d, 2H), 7.18 - 7.28 (m, 2H), 7.42 (d, 2H), 7.57 (d, 1 H), 7.81 (dd, 1 H), 8.23 (s, 1 H), 8.32 (d, 1 H), 8.90 (d, 1 H).

Intermedijerni primer Int08.070

tert-butil [4-(2-{[4-(azetidin-1-ilkarbonil)-2-metoksifenil]amino}-[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil]karbamat

[0312] U mešanu suspenziju Int01.03 (672 mg) u toluenu (13 mL) i NMP (1.3 mL) dodat je Int02.04 (670 mg), hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-tri-izopropil-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil] paladijum(II) metil-tert-butiletar adukt (85 g), X-Phos (50 mg) i kalijum fosfat u prahu (1.32 g). Balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 16 h. Hromatografijom amino faza-silikagel sirove smeše dobijeno je 600 mg naslovnog jedinjenja, koje sadrži malu količinu Int08.071. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijerni primer Int02.04

azetidin-1-il(4-bromo-3-metoksifenil)metanon

[0314] U mešani rastvor 4-bromo-3-metoksibenzoeve kiseline (400 mg) u DMF (4.0 mL) dodat je kalijum karbonat (720 mg), azetidin (148 mg) i TBTU (890 mg). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 60 h. Dodata je voda, smeša je mešana tokom 15 minuta i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Hromatografijom na silikagelu dobijeno je 370 mg naslovnog jedinjenja.

[0315]<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2.15 - 2.27 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 4.00 (t, 2H), 4.26 (t, 2H), 7.07 (dd, 1 H), 7.21 (d, 1 H), 7.61 (d, 1 H).

Priprema jedinjenja A5

(2R)-N-[4-[2-([4-[(3-fluorazetidin-1-il)karbonil]-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil}amino)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il]fenil}-2-(4-fluorfenil)propanamid

[0317] U mešanu suspenziju Int08.111 (300 mg) u DMF (6.0 mL) i dihlormetanu (12 mL) dodat je natrijum bikarbonat (151 mg), (2R)-2-(4-fluorfenil)propanska kiselina (111 mg) i HATU (296 mg). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Dodata je voda, i smeša je mešana tokom 30 minuta. Dodat je polu-zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i smeša je ekstrahovana sa smešom dihlormetana i metanola (100:1). Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Hromatografija amino faza-silikagel praćena sa silikagel hromatografijom dala je čvrstu supstancu koja se triturira etanolom dajući 240 mg naslovnog jedinjenja.

[0318]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.39 (d, 3H), 3.83 (q, 1H), 3.91 - 4.73 (m, 4H), 4.92 (d, 2H), 5.25 - 5.58 (m, 1 H), 7.13 (t, 2H), 7.33 - 7.46 (m, 4H), 7.59 - 7.76 (m, 5H), 7.91 (dd, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.32 - 8.40 (m, 1H), 9.10 (s, 1H), 10.18 (s, 1H).

Određivanje enantiomerne čistoće pomoću analitičke hiralne HPLC:

[0319] Kolona: Chiralcel OD-RH 150x4.6; Protok: 1.00 mL/min; Rastvarač: A: voda sa 0.1 % mravljom kiselinom, B: Acetonitril; Smeša rastvarača: 40% A 60% B. Vreme trajanja: 30 min. Vreme retencije: 12.44 min; UV 254 nm; Enantiomerni odnos: <2% : > 98%.

Intermedijerni primer Int08.111

[4-{[6-(4-aminofenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il]amino}-3-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil](3-fluorazetidin-1-il)metanon

[0321] Počevši od Int08.110, Int08.111 je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Int08.071.

Intermedijerni primer Int08.110

tert-butil {4-[2-({4-[(3-fluorazetidin-1-il)karbonil]-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil}amino)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il]fenil}karbamat

[0323] U mešanu suspenziju Int01.03 u toluenu (12 mL) i NMP (0.6 mL) dodat je Int06.04, hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil) [2-(2-aminoetil)fenil] paladijum (II) metil-tert-butiletar adukt, X-Phos i kalijum fosfat u prahu. Balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija amino faze dala je čvrstu supstancu koja je triturirana sa etrom.

Intermedijerni primer Int06.04

[4-bromo-3-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil](3-fluorazetidin-1-il)metanon

[0325] U mešani rastvor 4-bromo-3-(2,2,2-trifluoretoksi)benzoeve kiseline u DMF (15 mL) dodat je kalijum karbonat (2.51 g), 3-fluorazetidin hidrohlorid i HATU (3.69 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Dodata je voda, smeša je mešana tokom 15 minuta i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana sa vodom, zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu.

Intermedijerni primer Int06.05.

{4-[(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)amino]-3-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil}(3-fluorazetidin-1-il)metanon

[0327] Počevši od Intermedijera Int21.02 (280 g) i Intermedijernog primera Int06.04 (680 mg), Intermedijerni primer Int06.05 je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijera Int21.03.

[0328] Prinos: 548 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP01.01

hlormetil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat

[0330] U mešani rastvor 6-hlor-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil][1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-amina (Int21.03) (2.00 g) u THF (100 mL) dodat je natrijum hidrid (55% w/w u ulju; 1.24 g) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana na 0 °C tokom 15 minuta. Dodat je hlormetil hloroformat (1.29 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Dodat je poluzasićen rastvor natrijum hlorida i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 1.66 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP01.02

1-tert-butil 4-[({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil]piperidin-1,4-dikarboksilat

[0332] U mešani rastvor hlormetil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (200 mg) u DMF (10 mL) dodata je 1-(tertbutoksikarbonil)piperidin-4-karboksilna kiselina (257 mg) i cezijum karbonat (731 mg). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Dodata je voda, smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 250 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP01.03

(2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(2-{[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil]propanamid

[0334] U mešanu suspenziju 1-tert-butil 4-[({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil]piperidin-1,4-dikarboksilata (250 mg) u toluenu (10 mL) i NMP (0.5 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)boronska kiselina (167 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (329 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (31.8 mg) i paladijum acetat (8.7 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 30 minuta. Reakciona smeša je filtrirana i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija i zatim preparativna HPLC reverzne faze dala je 90 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP02.01

cezijum (2S)-2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-3-metilbutanoat

[0336] U mešani rastvor N-(tert-butoksikarbonil)-L-valina (400 mg) u metanolu (7.6 mL) dodat je rastvor cezijum karbonata u vodi do postizanja pH 7 (približno 300 mg cezijum karbonata u 1.52 mL vode) i rastvor je mešan tokom 30 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, dodat je toluen i rastvarač je ponovo uklonjen u vakuumu dajući 644 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP02.02

({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-L-valinat

[0338] U mešani rastvor hlormetil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (500 mg) u DMF (25 mL) dodat je cezijum (2S)-2-[(tertbutoksikarbonil)amino]-3-metilbutanoat (627 mg) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Dodata je voda, smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 568 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP02.03

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-L-valinat

[0340] U mešanu suspenziju ({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-L-valinata (580 mg) u toluenu (20.5 mL) i NMP (2.0 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)boronska kiselina (399 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (787 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (76 mg) i paladijum acetat (20.8 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 20 minuta. Reakciona smeša je filtrirana kroz silikagel kolonu i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 284 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP03.01

cezijum (2S)-2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-4-metilpentanoat

[0342] U mešani rastvor N-(tert-butoksikarbonil)-L-leucina (1.0 g) u metanolu (18.0 mL) dodat je rastvor cezijum karbonata u vodi do postizanja pH 7 (približno 704 mg cezijum karbonata u 3.6 mL vode) i rastvor je mešan tokom 30 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, dodat je toluen i rastvarač je ponovo uklonjen u vakuumu dajući 1.59 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP03.02

({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-L-leucinat

[0343]

[0344] U mešani rastvor hlormetil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (150 mg) u DMF (7.5 mL) dodat je cezijum (2S)-2-[(tertbutoksikarbonil)amino]-4-metilpentanoat (196 mg) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Dodata je voda, smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 179 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP03.03

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-L-leucinat

[0346] U mešanu suspenziju ({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-L-leucinata (170 mg) u toluenu (6.0 mL) i NMP (0.6 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)boronska kiselina (114 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (225 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (21.8 mg) i paladijum acetat (6.0 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 20 minuta. Reakciona smeša je filtrirana kroz silikagel kolonu i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 76 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP04.01

cezijum (2S)-2-[(tert-butoksikarbonil)(metil)amino]-3-metilbutanoat

[0348] U mešani rastvor N-(tert-butoksikarbonil)-N-metil-L-valina (1.0 g) u metanolu (18.0 mL) dodat je rastvor cezijum karbonata u vodi do postizanja pH 7 (približno 704 mg cezijum karbonata u 3.5 mL vode) i rastvor je mešan tokom 30 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, dodat je toluen i rastvarač je ponovo uklonjen u vakuumu dajući 1.55 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP04.02

({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-N-metil-L-valinat

[0350] U mešani rastvor hlormetil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (220 mg) u DMF (11 mL) dodat je cezijum (2S)-2-[(tertbutoksikarbonil)(metil)amino]-3-metilbutanoat (278 mg) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Dodata je voda, smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 298 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP04.03

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-N-metil-L-valinat

[0351]

[0352] U mešanu suspenziju ({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-N-metil-L-valinata (292 mg) u toluenu (10 mL) i NMP (1.0 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) boronska kiselina (196 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (387 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (37.5 mg) i paladijum acetat (10.2 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 20 minuta. Reakciona smeša je filtrirana kroz silikagel kolonu i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 110 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP05.01

cezijum (2S)-2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-3,3-dimetilbutanoat

[0354] U mešani rastvor N-(tert-butoksikarbonil)-N-metil-L-valina (4.08 g) u metanolu (36 mL) dodat je rastvor cezijum karbonata u vodi do postizanja pH 7 (približno 2.85 g cezijum karbonata u 36 mL vode) i rastvor je mešan tokom 30 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, dodat je toluen i rastvarač je ponovo uklonjen u vakuumu dajući 6.34 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP05.02

({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinat

[0356] U mešani rastvor hlormetil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (1.66 g) u DMF (83 mL) dodat je cezijum (2S)-2-[(tertbutoksikarbonil)amino]-3,3-dimetilbutanoat (2.17 g) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Dodata je voda, smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 2.30 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP05.03

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinat

[0358] U mešanu suspenziju ({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinata (404 mg) u toluenu (11.5 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) boronska kiselina (245 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (482 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (46.6 mg) i paladijum acetat (12.8 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do 100 °C tokom 20 minuta.

Reakciona smeša je filtrirana kroz silikagel kolonu i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijena je čvrsta supstanca koja je triturirana sa smešom heksana i dihlormetana da se dobije 223 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP06.01

[(di-tert-butoksifosforil)oksi]metil(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat

[0360] U mešani rastvor hlormetil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (200 mg) u DMF (6.0 mL) dodat je kalijum di-tert-butil fosfat (278 mg) i smeša je zagrevana do 75°C tokom 75 minuta u mikrotalasnoj pećnici. Dodata je voda, smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 80 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP06.02

[(di-tert-butoksifosforil)oksi]metil[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat

[0362] U mešanu suspenziju [(di-tert-butoksifosforil)oksi]metil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (77 mg) u toluenu (3.0 mL) i NMP (0.3 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) boronska kiselina (53.6 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (106 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (10.2 mg) i paladijum acetat (2.8 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do 100 °C tokom 20 minuta. Reakciona smeša je filtrirana kroz silikagel kolonu i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijena je čvrsta supstanca koja je triturirana sa smešom heksana i dihlormetan dajući 35 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP07.01

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N<2>,N<6>-bis(tert-butoksikarbonil)-L-lizil-L-valinat

[0364] U mešanu suspenziju ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)

[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil L-valinat hidrohlorida (122 mg) u DMF (2.6 mL) i dihlormetanu (1.3 mL) dodat je natrijum bikarbonat (37 mg), N<2>,N<6>-bis(tert-butoksikarbonil)-L-lizin (56 mg) i HATU (84 mg). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Dodata je voda, i smeša je mešana tokom 2 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije 61 mg naslovnog proizvoda kao sirovi proizvod koji je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja.

Intermedijerni primer IntP08.01

1-hloretil(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat

[0366] U mešani rastvor 6-hlor-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil][1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-amina (Int21.03) (1.00 g) u THF (100 mL) dodat je natrijum hidrid (55% w/w u ulju; 618 mg) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana na 0 °C tokom 15 minuta. Dodat je 1-hloretil hloroformat (0.78 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Dodat je poluzasićen rastvor natrijum hlorida i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 1.03 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP08.02

(1RS)-1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N-(tert-butoksikarbonil)-L-valinat (smeša 2 epimera)

[0368] U mešani rastvor 1-hloretil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (500 mg) u DMF (24 mL) dodat je cezijum (2S)-2-[(tertbutoksikarbonil)amino]-3-metilbutanoat (608 mg) i smeša je zagrevana do 50°C tokom 16 h. Dodata je voda, smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 626 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP08.03

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N-(tertbutoksikarbonil)-L-valinat (smeša 2 epimera)

[0370] U mešanu suspenziju 1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N-(tert-butoksikarbonil)-L-valinata (595 mg) u toluenu (20 mL) i NMP (2.0 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) boronska kiselina (400 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (789 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (76.3 mg) i paladijum acetat (20.9 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do 100 °C tokom 20 minuta. Reakciona smeša je filtrirana kroz silikagel kolonu i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 341 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP09.01

(1RS)-1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinat (smeša 2 epimera)

[0371]

[0372] U mešani rastvor 1-hloretil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (500 mg) u DMF (24 mL) dodat je cezijum (2S)-2-[(tertbutoksikarbonil)amino]-3,3-dimetilbutanoat (633 mg) i smeša je zagrevana do 50°C tokom 16 h. Dodata je voda, smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 548 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP09.02

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N-(tertbutoksikarbonil)-3-metil-L-valinat (smeša 2 epimera)

[0374] U mešanu suspenziju (1RS)-1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinata (smeša 2 epimera) (100 mg) u toluenu (3.4 mL) i NMP (0.34 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) boronska kiselina (65.8 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (130 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (12.6 mg) i paladijum acetat (3.4 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 20 minuta. Reakciona smeša je filtrirana kroz silikagel kolonu i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 42 mg naslovnog jedinjenja kao smeša 2 epimera.

Procedura na velikoj skali:

[0375] U mešanu suspenziju 1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinata (8830 mg) u toluenu (250 mL) i NMP (12 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) boronska kiselina (4558 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (9627 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (931 mg) i paladijum acetat (255 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 20 minuta. Reakciona smeša je dva puta filtrirana kroz silikagel kolonu i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 5035 mg naslovnog jedinjenja kao smeša 2 epimera.

Intermedijerni primer IntP09.03

(1R ili 1S)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil-N-(tertbutoksikarbonil)-3-metil-L-valinat (jedan stereoizomer A)

Intermedijerni primer IntP09.04

(1S ili 1R)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil-N-(tertbutoksikarbonil)-3-metil-L-valinat (jedan stereoizomer B)

[0377]

[0378] 7.96 g (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) [1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil] karbamoil}oksi)etil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinata (smeša 2 epimera) je razdvojeno u jedan stereoizomer (Intermedijerni primer IntP09.03 i Intermedijerni primer IntP09.04) putem preparativne, hiralne HPLC.

Intermedijerni primer IntP10.01

Cezijum (2S)-2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-2,3-dimetilbutanoat

[0379]

Hiralno

[0380] Intermedijerni primer IntP10.01. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP02.01.

Intermedijerni primer IntP10.02

({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-izovalinat

[0382] Počevši od hlormetil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata i cezijum (2S)-2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-2,3-dimetilbutanoata, Intermedijerni primer IntP10.02. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP02.02.

Intermedijerni primer IntP10.03

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-izovalinat

[0384] Počevši od Intermedijernog primera IntP10.02 i (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)boronske kiseline, Intermedijerni primer IntP10.03. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP02.03.

Intermedijerni primer IntP11.01

Cezijum 3-[(tert-butoksikarbonil)amino]-2,2-dimetilpropanoat

[0386] Intermedijerni primer IntP11.01. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP02.01.

Intermedijerni primer IntP11.02

({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil 3-[(tert-butoksikarbonil)amino]-2, 2-dimetilpropanoat

[0388] Intermedijerni primer IntP11.02. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP02.02.

Intermedijerni primer IntP11.03

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil 3-[(tert-butoksikarbonil)amino]-2,2-dimetilpropanoat

[0389]

[0390] Počevši od Intermedijernog primera IntP11.02 i (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)boronske kiseline, Intermedijerni primer IntP11.03. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP02.03.

Intermedijerni primer IntP12.01

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N<2>,N<6>-bis(tertbutoksikarbonil)-L-lizil-L-valinat (smeša 2 epimera)

[0392] U mešanu suspenziju (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)

[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil L-valinat hidrohlorida (smeša 2 epimera) (150 mg) u DMF (3.2 mL) i dihlormetanu (3.2 mL) dodat je N<2>,N<6>-bis(tert-butoksikarbonil)-L-lizin (93 mg) i HATU (115 mg). Zatim je u malim delovima dodat natrijum bikarbonat (75 mg) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Dodata je voda, i smeša je mešana tokom 2 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija i zatim preparativna HPLC reverzne faze dovela je do 76 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP13.01

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-L-valil-L-valinat

[0394] Intermedijerni primer IntP13.01. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP12.01.

Intermedijerni primer IntP14.01

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N-(tertbutoksikarbonil)-L-valil-L-valinat (smeša 2 epimera)

[0396] Intermedijerni primer IntP14.01. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP12.01.

Intermedijerni primer IntP15.01

Cezijum (2S,3S)-2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-3-metilpentanoat

[0398] Intermedijerni primer IntP15.01. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP02.01.

Intermedijerni primer IntP15.02

(1RS)-1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N-(tert-butoksikarbonil)-L-izoleucinat (smeša 2 epimera)

[0400] Intermedijerni primer IntP15.02. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP09.01.

Intermedijerni primer IntP15.03

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil N-(tertbutoksikarbonil)-L-izoleucinat (smeša 2 epimera)

[0401]

[0402] Počevši od Intermedijernog primera IntP15.02 (1.37 g) Intermedijerni primer IntP15.03. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP09.02. Prinos: 623 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP15.04

(1S ili 1R)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil-N-(tertbutoksikarbonil)-L-izoleucinat (jedan stereoizomer A)

Intermedijerni primer IntP15.05

(1R ili 1S)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil-N-(tertbutoksikarbonil)-L-izoleucinat (jedan stereoizomer B)

[0405] (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) [1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil] karbamoil}oksi)etil N-(tertbutoksikarbonil)-L-izoleucinat (smeša 2 epimera) (523 mg) je razdvojen u jedan stereoizomer (Intermedijerni primer IntP15.04 i Intermedijerni primer IntP15.05) putem preparativne, hiralne HPLC.

Intermedijerni primer IntP16.01

hlormetil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]karbamat

[0407] Počevši od Intermedijernog primera Int05.04., IntP16.01. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP01.01.

Intermedijerni primer IntP16.02

({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinat

[0409] U mešani rastvor hlormetil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)[4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]karbamata (220 mg) u DMF (8.3 mL) dodat je cezijum (2S)-2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-3,3-dimetilbutanoat (249 mg) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Dodata je voda, smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 260 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP16.03.

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tertbutoksikarbonil)-3-metil-L-valinat

[0411] Počevši od Intermedijernog primera IntP16.02 i (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)boronske kiseline, Intermedijerni primer IntP16.03. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP02.03.

Intermedijerni primer IntP17.01

({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tert-butoksikarbonil)-L-valinat

[0413] Počevši od Intermedijernog primera IntP16.01 (230 mg) i IntP02.01 (250 mg) Intermedijerni primer IntP17.01. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP16.02.

[0414] Prinos: 240 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP17.02

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]karbamoil}oksi)metil N-(tertbutoksikarbonil)-L-valinat

[0416] Počevši od Intermedijernog primera IntP17.01 i (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)boronske kiseline, Intermedijerni primer IntP17.02. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP02.03.

Intermedijerni primer IntP18.01

hlormetil(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il){4-[(3-fluorazetidin-1-il)karbonil]-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil}karbamat

[0418] U mešani rastvor Intermedijernog primera Int06.05. (200 mg) u THF (10 mL) i NMP (2.0 mL) dodat je natrijum hidrid (55% w/w u ulju; 98 mg) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Dodat je hlormetil hloroformat (0.12 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Dodat je poluzasićen rastvor amonijum hlorida i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 153 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP18.02

{[(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il){4-[(3-fluorazetidin-1-il)karbonil]-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil}karbamoil]oksi}metil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinat

[0420] Počevši od Intermedijernog primera IntP18.01 (150 mg) i cezijum (2S)-2-[(tertbutoksikarbonil)amino]-3,3-dimetilbutanoata (234 mg), Intermedijerni primer IntP18.02. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP16.02.

[0421] Prinos: 153 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP18.03

[({4-[(3-fluorazetidin-1-il)karbonil]-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil}[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il]karbamoil)oksi]metil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinat

[0423] Počevši od Intermedijernog primera IntP18.02 i (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)boronske kiseline, Intermedijerni primer IntP18.03. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Intermedijernog primera IntP02.03.

Intermedijerni primer IntP19.01

1-hlor-2-metilpropil(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat

[0425] U mešani rastvor 6-hlor-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil][1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-amina (Int21.03) (4.00 g) u THF (200 mL) dodat je natrijum hidrid (55% w/w u ulju; 2.47 g) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana na 0 °C tokom 15 minuta. Dodat je 1-hlor-2-metilpropil karbonohloridat (4.13 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 časa. Dodat je poluzasićen rastvor natrijum hlorida i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 3.00 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP19.02

(1RS)-1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinat

[0427] U mešani rastvor 1-hlor-2-metilpropil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (2500 mg) u DMF (125 mL) dodat je cezijum (2S)-2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-3,3-dimetilbutanoat (2981 mg) i smeša je zagrevana do 70°C tokom 16 h. Smeša je dodata u poluzasićen rastvor natrijum hlorida i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat), filtrirana i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 2240 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP19.03

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil N-(tertbutoksikarbonil)-3-metil-L-valinat (smeša 2 epimera)

[0429] U mešanu suspenziju (1RS)-1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil N-(tert-butoksikarbonil)-3-metil-L-valinata (2200 mg) u toluenu (64.6 mL) i NMP (10.8 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) boronska kiselina (1389 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (2738 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (265 mg) i paladijum acetat (72 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 30 minuta. Posle hlađenja, reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa etil acetatom (3x). Kombinovane organske faze su osušene (natrijum sulfat), filtrirane i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 2200 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP20.01

(1RS)-1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-N-(tert-butoksikarbonil)-L-valinat (smeša 2 epimera)

[0431] U mešani rastvor 1-hlor-2-metilpropil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (5000 mg) u DMF (150 mL) dodat je cezijum (2S)-2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-3-metilbutanoat (5373 mg) i smeša je zagrevana do 70°C tokom 16 h. Smeša je dodata vodi i ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana polu zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat), filtrirana i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Odvajanje sa preparativnom HPLC dovelo je do 4300 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP20.02

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-N-(tertbutoksikarbonil)-L-valinat (smeša 2 epimera) i jedan stereoizomer

Intermedijerni primer IntP20.03 i Intermedijerni primer IntP20.04.

[0433] U mešanu suspenziju (1RS)-1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-N-(tert-butoksikarbonil)-L-valinata (2000 mg) u toluenu (60.0 mL) i NMP (10.0 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) boronska kiselina (1289 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (2541 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (246 mg) i paladijum acetat (67 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 45 minuta. Posle hlađenja, reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa etil acetatom (3x). Kombinovane organske faze su osušene (natrijum sulfat), filtrirane i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 1500 mg naslovnog jedinjenja kao smeša 2 stereoizomera (IntP20.02).

[0434] Smeša je razdvojena u jedan stereoizomer (Intermedijerni primer IntP20.03 i Intermedijerni primer IntP20.04.) putem preparativne, hiralne HPLC.

Intermedijerni primer IntP21.01

cezijum 2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-2-metilpropanoat

[0436] U mešani rastvor N-(tert-butoksikarbonil)-2-metilalanina (4.00 g) u metanolu (76 mL) dodat je rastvor cezijum karbonata u vodi do postizanja pH 7 (približno 3.21 g cezijum karbonata u 15 mL vode) i rastvor je mešan tokom 30 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, dodat je toluen i rastvarač je ponovo uklonjen u vakuumu dajući 7.00 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP21.02

(rac)-1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil N-(tert-butoksikarbonil)-2-metilalaninat

[0438] U mešani rastvor 1-hlor-2-metilpropil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (2000 mg) u DMF (70 mL) dodat je cezijum 2-[(tert-butoksikarbonil)amino]-2-metilpropanoat (2063 mg) i smeša je zagrevana do 70°C tokom 16 h. Smeša je dodata vodi i ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana polu-zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat), filtrirana i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Razdvajanje sa preparativnom HPLC dalo je 1140 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP21.03

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-N-(tertbutoksikarbonil)-2-metilalaninat (smeša 2 epimera)

[0440] U mešanu suspenziju 1-({(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil N-(tert-butoksikarbonil)-2-metilalaninata (600 mg) u toluenu (18.4 mL) i NMP (3.1 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil) boronska kiselina (395 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (779 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (75 mg) i paladijum acetat (21 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 30 minuta. Posle hlađenja, reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa etil acetatom (3x). Kombinovane organske faze su osušene (natrijum sulfat), filtrirane i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 30 mg naslovnog jedinjenja kao smeša 2 epimera.

Intermedijerni primer IntP22.01

4-nitrofenil(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat

[0441]

[0442] U mešani rastvor 6-hlor-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil][1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-amina (Int21.03) (500 mg) u THF (50 mL) dodat je natrijum hidrid (55% w/w u ulju; 1.24 g) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Dodat je 4-nitrofenil hloroformat (0.29 mL) na 0 °C i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Dodat je vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (c = 2M) do postizanja kiselog pH i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 725 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP22.02

tert-butil (2-hidroksietil)metilkarbamat

[0444] U mešanu suspenziju 2-(metilamino)etanola (5.0 g) u vodi (75 mL) dodat je kalijum karbonat (15.3 g) i di-tert-butil dikarbonat (12.1 g) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 časova. Smeša je ekstrahovana sa dihlormetanom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija amino faze dovela je do 6.6 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP22.03

2-[(tert-butoksikarbonil)(metil)amino]etil(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat

[0445]

[0446] U mešani rastvor 4-nitrofenil (6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (720 mg) u DMF (40 mL) dodat je cezijum karbonat (4.53 g), i tert-butil(2-hidroksietil)metilkarbamat (487 mg). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Dodata je voda, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 425 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP22.04

2-[(tert-butoksikarbonil)(metil)amino]etil[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat

[0448] U mešanu suspenziju 2-[(tert-butoksikarbonil)(metil)amino]etil(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamata (100 mg) u toluenu (3.2 mL) dodat je kalijum fluorid (47.2 mg) i kalijum fosfat u prahu (153 mg) i balon je dvaput degasiran i ponovo napunjen sa argonom. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Dodati su (2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil]propanamid (100 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (14.8 mg) i paladijum acetat (4.1 mg) i balon je dvaput degasiran i ponovo napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do 85 °C tokom 5 h. Dodata je voda i reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija i zatim je preparativna HPLC reverzne faze (gradijent vode i acetonitrila koji sadrži konc. amonijum hidroksid kao aditiv) dovela do 28 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP23.01

2,5-dioksopirolidin-1-il N-(tert-butoksikarbonil)-N-metilglicinat

[0450] U mešani rastvor N,N'-dicikloheksilkarbodiimida (6.0 g) u THF (100 mL) kod -5 °C dodat je N-(tert-butoksikarbonil)-N-metilglicin (5.0 g) i 1-hidroksipirolidin-2,5-dion (4.7 g) i smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature tokom noći. Čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom i rastvor je koncentrisan u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 5.0 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP23.02

tert-butil(2-{(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]amino}-2-oksoetil)metilkarbamat

[0452] U mešani rastvor 6-hlor-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil][1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-amina (Int21.03) (1.0 g) u THF (140 mL) dodat je natrijum hidrid (55% w/w u ulju; 1.36 g) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Dodat je 2,5-dioksopirolidin-1-il N-(tert-butoksikarbonil)-N-metilglicinat (1.62 g) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Dodat je poluzasićen vodeni rastvor amonijum hlorida i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak je rastvoren u dihlormetanu i filtriran kroz silikagel, te eluiran sa smešom dihlormetana i metanola (95:5) dajući sirovi proizvod u vidu čvrste supstance. Čvrsta supstanca je triturirana sa zagrejanim etanolom, nerastvoreni materijal je uklonjen filtriranjem i rastvor je koncentrisan u vakuumu. Silikagel hromatografijom dobijeno je 1.2 g naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer IntP23.03

tert-butil (2-{[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]amino}-2-oksoetil)metilkarbamat

[0454] U mešanu suspenziju tert-butil (2-{(6-hlor[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il)[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]amino}-2-oksoetil)metilkarbamata (350 mg) u toluenu (11.7 mL) i NMP (0.58 mL) dodata je (4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)boronska kiselina (249 mg), kalijum fosfat monohidrat u prahu (567 mg), dicikloheksil(2',6'-dimetoksibifenil-2-il)fosfin (54.8 mg) i Pd2(dba)3(30.6 mg) i balon je degasiran dva puta i ponovo je napunjen sa argonom. Smeša je zagrevana do 90 °C tokom 60 minuta. Reakciona smeša je filtrirana, dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida, osušena (natrijum sulfat) i rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija praćena sa silikagel hromatografijom amino faze dovela je do 170 mg naslovnog jedinjenja.

Intermedijerni primer 4.01A

Benzil (4-hlor-4-oksobutil)metilkarbamat

[0456] Početni materijal, 4-[[(benziloksi)karbonil](metil)amino]buterna kiselina, je pripremljen postupkom poznatim iz literature [Y. Aramaki et al., Chem. Pharm. 8ull. 52, 258 (2004)] iz komercijalno dostupne 4-{[(benziloksi)karbonil]amino}buterne kiseline. Alternativno dobijanje se vrši uvođenjem benziloksikarbonil zaštitne grupe u ω-N-metilaminoalkilkarboksilne kiseline koje se mogu dobiti prema P. Quitt et al. [Helv. Chim. Acta 46, 327 (1963)].

[0457] 1.74 g (6.92 mmol) 4-[[(benziloksi)karbonil](metil)amino]buterne kiseline rastvoreno je u 35 ml dihlormetana i dodato je 3.5 ml (48 mmol) tionil hlorida. Smeša je zagrevana pod refluksom tokom 1 h. Ona je tada koncentrisana u vakuumu, i ostatak je ponovo pomešan sa dihlormetanom i ponovno je koncentrisana. Preostalo je viskozno ulje i osušeno je pod visokim vakuumom. Dobijeno je 1.8 g (96% teorijskog) ciljnog jedinjenja, koje je dalje reagovalo bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.

Intermedijerni primer 4.02A

anhidrid 4-{[(benziloksi)karbonil](metil)amino}butanske kiseline

[0459] Početni materijal, 4-[[(benziloksi)karbonil](metil)amino]buterna kiselina, je pripremljen postupkom poznatim iz literature [Y. Aramaki et al., Chem. Pharm. Bull.52, 258 (2004)] iz komercijalno dostupne 4-{[(benziloksi)karbonil]amino}buterne kiseline. Alternativno dobijanje se vrši uvođenjem benziloksikarbonil zaštitne grupe u ω-Nmetilaminoalkilkarboksilne kiseline koje se mogu dobiti prema P. Quitt et al. [Helv. Chim. Acta 46, 327 (1963)].

[0460] 2.36 g (9.39 mmol) 4-[[(benziloksi)karbonil](metil)amino]buterne kiseline rastvoreno je u 30 ml dihlormetana i dodato je 0.969 g (4.7 mmol) dicikloheksil karbodiimida. Smeša je tretirana sa ultrazvučnom opremom tokom 2 h. Ona je zatim koncentrisana u vakuumu do oko polovine prvobitne zapremine i talog je isfiltriran. Preostali rastvor je koncentrisan u vakuumu do suvog i ostatak je osušen pod visokim vakuumom. Dobijeno je 2.33 g (84% teorijskog) ciljnog jedinjenja koje je dalje reagovalo bez daljeg prečišćavanja.

LC-MS (metod 1): Rt = 1.2 min; m/z = 485 (M+H)<+>.

Intermedijerni primer 4.03A

anhidrid 5-{[(benziloksi)karbonil](4-metoksibenzil)amino}butanske kiseline

Korak a): 4-[(4-metoksibenzil)amino]butanska kiselina:

[0462] 20 g (194 mmol) 4-aminobutanske kiseline, 39.6 g (291 mmol) p-anisaldehida i 14 g (116 mmol) magnezijum sulfata prebačeni su u 300 ml etanola i zagrevani pod refluksom preko noći. Čvrsta supstanca je isfiltrirana i isprana etanolom. Zatim je dodato ukupno 4.4 g (116 mmol) natrijum borohidrida u porcijama u filtrat tokom 15 min. Smeša je koncentrisana u vakuumu i zatim je dodato 582 ml 2 M rastvora natrijum hidroksida. Posle 5 min smeša je ekstrahovana sa 500 ml dihlormetana i dva puta svaki puta sa 200 ml etil acetata. Vodena faza je koncentrisana u vakuumu. Ostatak je osušen pod visokim vakuumom i reaguje u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

Korak b): 4-{[(benziloksi)karbonil](4-metoksibenzil)amino}butanska kiselina:

[0463] 43 g sirove supstance p-metoksibenzil zaštićenog derivata 4-aminobutanske kiseline dobijen na ovaj način je stavljen u dioksan/2M NaOH (1:1). Dodato je 49 g (288 mmol) benzil hlorokarbonata u kapima i pH je zadržan na 11-12 uz dodavanje 2M NaOH. Posle mešanja na RT tokom 30 min, dioksan je uklonjen u vakuumu i preostali rastvor je podešen do pH 2 sa 2 M hlorovodonične kiseline. Rastvor je ekstrahovan dva puta sa 500 ml etil acetatom. Organska faza je isprana zasićenim rastvorom amonijum hlorida i zatim koncentrisana u vakuumu. Ostatak je osušen pod visokim vakuumom i reaguje u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

Korak c): Anhidrid 5-{[(benziloksi)karbonil](4-metoksibenzil)amino}butanske kiseline [0464] 1920 mg (5.372 mmol) sirove 4-[[(benziloksi)karbonil](4-metoksibenzil)amino] butanske kiseline je rastvoreno u 20 ml dihlorometana i dodato je 554 mg (2.69 mmol) dicikloheksil karbodiimida. Smeša je mešana na RT tokom 1 h. Ona je zatim koncentrisana u vakuumu do polovine prvobitne zapremine i talog je isfiltriran. Preostali rastvor je koncentrisan u vakuumu do suva i ostatak je osušen pod visokim vakuumom. Dobijeno je 1900 mg (97% teorijskog) ciljnog jedinjenja koje je dalje reagovalo bez daljeg prečišćavanja.

[0465] LC-MS (metod 1): Rt= 1.43 min; m/z = 697 (M+H)<+>.

Jedinjenja prema predstavljenom pronalasku

Primer 1.1

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil piperidin-4-karboksilat trifluoracetat

[0467] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP01.03 (90 mg) u dihlormetanu (5 mL) i metanolu (0.5 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (2.66 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Preparativna HPLC reverzne faze praćena sa liofilizacijom dala je 14 mg naslovnog jedinjenja.

[0468]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6, otkriveni signali), δ [ppm] = 1.41 (3H), 1.61-1.78 (2H), 1.94-2.06 (2H), 2.74-2.85 (1 H), 2.88-3.03 (2H), 3.19-3.29 (2H), 3.80-3.90 (4H), 5.72-5.83 (2H), 7.12-7.20 (2H), 7.42 (2H), 7.55 (2H), 7.64 (1H), 7.66-7.75 (4H), 7.79 (1H), 8.01 (1H), 8.24 (1H), 8.49 (1 H), 9.19 (1 H), 10.23 (1H).

Primer 1.2

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil L-valinat hidrohlorid

[0470] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP02.03 (284 mg) u dihlormetanu (3.5 mL) i metanolu (0.35 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (1.1 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 255 mg naslovnog jedinjenja.

[0471]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.92 (3H), 0.96 (3H), 1.41 (3H), 2.18 (1H), 3.32 (3H), 3.84-3.96 (4H), 4.03 (1H), 5.85 (1H), 5.97 (1H), 7.10-7.20 (2H), 7.44 (2H), 7.52-7.61 (2H), 7.65 (1H), 7.72 (4H), 7.79 (1H), 8.01 (1H), 8.52 (3H), 9.20 (1 H), 10.38 (1 H).

Primer 1.3

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil L-leucinat hidrohlorid

[0472]

[0473] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP03.03 (69 mg) u dihlormetanu (0.8 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (0.41 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta. Istaložena je čvrsta supstanca. Rastvarač je uklonjen dekantiranjem. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 56 mg naslovnog jedinjenja.

[0474]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.89 (6H), 1.41 (3H), 1.59-1.68 (2H), 1.74 (1H), 3.32 (3H), 3.81-3.97 (4H), 4.03-4.14 (1H), 5.86 (1H), 5.93 (1H), 7.15 (2H), 7.44 (2H), 7.53-7.61 (2H), 7.65 (1H), 7.72 (4H), 7.79 (1H), 8.02 (1H), 8.54 (3H), 9.20 (1 H), 10.39 (1 H).

Primer 1.4

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-metil-L-valinat hidrohlorid

[0476] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP04.03 (108 mg) u dihlormetanu (2.5 mL) i metanolu (0.76 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (1.28 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući jedinjenje iz naslova sa malo preostalog polaznog materijala. Dodati su dihlormetan (0.5 mL) i rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (0.25 mL; c = 4.0 M) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 58 mg naslovnog jedinjenja.

[0477]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6, otkriveni signali), δ [ppm] = 0.88 (3H), 1.01 (3H), 1.41 (3H), 2.21-2.34 (1H), 2.54-2.60 (3H), 3.32 (3H), 3.91 (3H), 4.11 (1H), 5.86 (1H), 6.00 (1H), 7.15 (2H), 7.43 (2H), 7.52-7.61 (2H), 7.65 (1H), 7.72 (4H), 7.79 (1H), 8.02 (1H), 9.14-9.44 (3H), 10.34 (1H).

Primer 1.5

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil 3-metil-L-valinat hidrohlorid

[0479] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP05.03 (218 mg) u dihlormetanu (4.0 mL) i metanolu (0.4 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (1.3 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 170 mg naslovnog jedinjenja.

[0480]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, otkriveni signali), δ [ppm] = 0.98 (9H), 1.41 (3H), 3.31 (3H), 3.84-3.94 (4H), 5.85 (1 H), 5.97 (1 H), 7.10-7.20 (2H), 7.40-7.46 (2H), 7.53-7.61 (2H), 7.64 (1H), 7.72 (4H), 7.78 (1H), 8.01 (1H), 8.44 (3H), 9.18 (1H), 10.33 (1 H).

Primer 1.6

(fosfonooksi)metil [6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat

[0482] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP06.02 (33 mg) u dihlormetanu (250 µL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (30 µL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta. Istaložena je čvrsta supstanca. Rastvarač je uklonjen dekantiranjem. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom dva puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 22 mg naslovnog jedinjenja.

[0483]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6, otkriveni signali), δ [ppm] = 1.41 (3H), 3.31 (3H), 3.82-3.91 (4H), 5.52 (1H), 5.55 (1H), 7.11-7.19 (2H), 7.39-7.46 (2H), 7.52-7.64 (3H), 7.66-7.74 (4H), 7.78 (1H), 8.00 (1H), 9.20 (1H), 10.24 (1H).

Primer 1.7

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil 3-metil-L-izovalinat hidrohlorid

[0485] Počevši od Intermedijernog primera IntP10.03, Primer 1.7. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 1.5.

[0486]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.90 (6H), 1.35-1.51 (6H), 2.01-2.17 (1H), 3.32 (3H), 3.81-3.97 (4H), 5.83-5.97 (2H), 7.15 (2H), 7.44 (2H), 7.53-7.61 (2H), 7.65 (1 H), 7.72 (4H), 7.79 (1 H), 8.01 (1 H), 8.59 (3H), 9.20 (1 H), 10.38 (1 H).

Primer 1.8

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil 3-amino-2,2-dimetilpropanoat trifluoracetat

[0488] Počevši od Intermedijernog primera IntP11.03, Primer 1.8. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 1.5. Konačno prečišćavanje sa preparativnom HPLC reverzne faze (gradijent vode i acetonitrila koji sadrži trifluorosirćetnu kiselinu kao aditiv) dovelo je posle liofilizacije do jedinjenja iz naslova.

[0489]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 1.22 (6H), 1.41 (3H), 3.00 (2H), 3.32 (3H), 3.78-3.91 (4H), 5.80 (2H), 7.16 (2H), 7.42 (2H), 7.56 (2H), 7.62-7.92 (9H), 8.01 (1 H), 9.20 (1H), 10.23 (1 H).

Primer 2.1

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil L-lizil-L-valinat dihidrohlorid

[0490]

[0491] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP07.01 (57 mg) u dihlormetanu (1.1 mL) i metanolu (0.3 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (0.36 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 27 mg naslovnog jedinjenja.

[0492]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6, otkriveni signali), δ [ppm] = 0.90 (6H), 1.41 (5H), 1.48-1.63 (2H), 1.73 (2H), 2.11 (1 H), 2.72 (2H), 3.32 (3H), 3.84-3.95 (4H), 4.27 (1H), 5.72-5.79 (1H), 5.86 (1H), 7.15 (2H), 7.43 (2H), 7.56 (2H), 7.64 (1H), 7.72 (4H), 7.79 (1 H), 7.91 (3H), 8.02 (1 H), 8.27 (3H), 8.84 (1 H), 9.20 (1 H), 10.37 (1 H).

Primer 2.2.

(1 RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil L-lizil-L-valinat dihidrohlorid (smeša 2 epimera)

[0494] Počevši od Intermedijernog primera IntP12.01, Primer 2.2. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 2.1.

[0495]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.77-0.91 (6H), 1.32-1.47 (8H), 1.57 (2H), 1.67-1.79 (2H), 1.97-2.14 (1H), 2.73 (2H), 3.31 (3H), 3.88 (3H), 3.90-3.96 (2H), 4.18-4.27 (1 H), 6.81 (1 H), 7.09-7.19 (2H), 7.44 (2H), 7.49-7.59 (2H), 7.63 (1H), 7.72 (4H), 7.78 (1H), 7.88-8.05 (4H), 8.28 (3H), 8.80 (1H), 9.18 (1H), 10.38 (1 H).

Primer 2.3.

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil L-valil-L-valinat hidrohlorid

[0497] Počevši od Intermedijernog primera IntP13.01, Primer 2.3. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 2.1.

[0498]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.85-0.98 (12H), 1.41 (3H), 2.02-2.16 (2H), 3.31 (3H), 3.70-3.75 (1 H), 3.86 (3H), 3.89-3.93 (1 H), 4.27 (1 H), 5.76 (1 H), 5.86 (1H), 7.15 (2H), 7.38-7.47 (2H), 7.55 (2H), 7.63 (1H), 7.72 (4H), 7.75-7.80 (1H), 8.00 (1H), 8.14 (3H), 8.66 (1 H), 9.15-9.22 (1H), 10.32 (1H).

Primer 2.4.

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil L-valil-L-valinat hidrohlorid (smeša 2 epimera)

[0499]

[0500] Počevši od Intermedijernog primera IntP14.01, Primer 2.4. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 2.1.

[0501]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.78-0.98 (12H), 1.33-1.45 (6H), 2.06 (2H), 3.30 (3H), 3.68-3.78 (1H), 3.83-3.95 (4H), 4.15-4.26 (1H), 6.81 (1H), 7.10-7.20 (2H), 7.40-7.47 (2H), 7.49-7.57 (2H), 7.62 (1H), 7.68-7.74 (4H), 7.77 (1H), 8.00 (1 H), 8.16 (3H), 8.65 (1 H), 9.18 (1 H), 10.37 (1 H).

Primer 3.1

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil L-valinat hidrohlorid (smeša 2 epimera)

[0503] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP08.03 (337 mg) u dihlormetanu (4.0 mL) i metanolu (0.4 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (1.3 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 309 mg naslovnog jedinjenja.

[0504]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.77-1.01 (6H), 1.41 (3H), 1.43-1.51 (3H), 2.03-2.24 (1 H), 3.31 (3H), 3.84-4.03 (5H), 6.81-7.00 (1 H), 7.10-7.20 (2H), 7.39-7.48 (2H), 7.55 (2H), 7.63 (1 H), 7.68-7.82 (5H), 8.01 (1 H), 8.54 (3H), 9.19 (1H), 10.42 (1H).

Primer 3.2

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil 3-metil-L-valinat hidrohlorid (smeša 2 epimera)

[0506] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP09.02 (39 mg) u dihlormetanu (0.45 mL) i metanolu (0.045 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (0.15 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 36 mg naslovnog jedinjenja.

[0507]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.86-1.01 (9H), 1.41 (3H), 1.45-1.51 (3H), 3.27-3.34 (3H), 3.74-3.93 (5H), 6.82-6.98 (1H), 7.15 (2H), 7.43 (2H), 7.52-7.58 (2H), 7.63 (1 H), 7.72 (4H), 7.78 (1 H), 8.01 (1 H), 8.42 (3H), 9.18 (1 H), 10.32 (1 H).

Primer 3.3.

(1 R ili 1 S)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil -3-metil-L-valinat hidrohlorid (jedan stereoizomer A)

[0508]

[0509] Počevši od Intermedijernog primera IntP09.03 (2.99 g) Primer 3.3. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 3.2. Prinos: 2.76 g naslovnog jedinjenja.

[0510]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.91 (9H), 1.41 (3H), 1.48 (3H), 3.30 (3H), 3.76 (1H), 3.88 (3H), 3.93 (1H), 6.81-6.91 (1H), 7.11-7.19 (2H), 7.39-7.48 (2H), 7.55 (2H), 7.63 (1H), 7.68-7.81 (5H), 8.00 (1H), 8.49 (3H), 9.18 (1H), 10.41 (1 H).

Primer 3.4.

(1S ili 1R)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil -3-metil-L-valinat hidrohlorid (jedan stereoizomer B)

[0512] Počevši od Intermedijernog primera IntP09.04 (3.38 g) Primer 3.4. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 3.2. Prinos: 3.13 g naslovnog jedinjenja.

[0513]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.96 (9H), 1.41 (3H), 1.48 (3H), 3.31 (3H), 3.80 (1 H), 3.85-3.98 (4H), 6.87-6.96 (1 H), 7.09-7.19 (2H), 7.40-7.48 (2H), 7.52-7.60 (2H), 7.63 (1 H), 7.67-7.81 (5H), 8.00 (1 H), 8.53 (3H), 9.14-9.23 (1 H), 10.42 (1 H).

Primer 3.5.

(1 RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil-L-izoleucinat hidrohlorid (smeša 2 epimera)

[0515] Počevši od Intermedijernog primera IntP15.03 (100 mg) Primer 3.5. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 3.2. Prinos: 55 mg naslovnog jedinjenja.

[0516]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.79 (3H), 0.85-0.93 (3H), 1.08-1.31 (2H), 1.39-1.51 (6H), 1.77-1.94 (1H), 3.33 (3H), 3.85-3.96 (4H), 3.98-4.10 (1H), 6.85-7.00 (1 H), 7.12-7.21 (2H), 7.40-7.49 (2H), 7.53-7.60 (2H), 7.65 (1 H), 7.74 (4H), 7.77-7.83 (1H), 8.03 (1H), 8.39-8.59 (3H), 9.20 (1H), 10.37 (1H).

Primer 3.6.

(1S ili 1R)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil-L-izoleucinat hidrohlorid (jedan stereoizomer B)

[0518] Počevši od Intermedijernog primera IntP15.04 (205 mg) Primer 3.6. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 3.2. Prinos: 145 mg naslovnog jedinjenja.

[0519]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6, otkriveni signali), δ [ppm] = 0.77 (6H), 1.01-1.53 (8H), 1.83 (1H), 3.31 (3H), 3.86-3.94 (4H), 6.82-6.92 (1H), 7.10-7.21 (2H), 7.38-7.48 (2H), 7.51-7.59 (2H), 7.63 (1 H), 7.68-7.82 (5H), 8.01 (1 H), 8.50 (3H), 9.19 (1 H), 10.39 (1 H).

Primer 3.7.

(1 R ili 1 S)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil-L-izoleucinat hidrohlorid (jedan stereoizomer A)

[0521] Počevši od Intermedijernog primera IntP15.05 (230 mg) Primer 3.7. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 3.2. Prinos: 155 mg naslovnog jedinjenja.

[0522]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.80-0.93 (6H), 1.17-1.50 (8H), 1.90 (1 H), 3.32 (3H), 3.85-3.95 (4H), 4.05 (1 H), 6.94 (1 H), 7.15 (2H), 7.38-7.47 (2H), 7.56 (2H), 7.64 (1 H), 7.72 (4H), 7.79 (1 H), 8.01 (1 H), 8.50 (3H), 9.19 (1 H), 10.36 (1 H).

Primer 4.1

N-[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4] triazolo[1,5-α]piridin-2-il]-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]-4-(metilamino)butanamid trifluoracetat

[0523]

[0524] 400 mg (0.715 mmol) (2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(2-{[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil] propanamida (videti jedinjenje A1) i 4156 mg (8.58 mmol) anhidrida 4-{[(benziloksi)karbonil](metil) amino} butanske kiseline rastvoreno je u 35 ml piridina i dodato je 12 mg (0.071 mmol) DMAP. Smeša je u 2 dela zagrevana u mikrotalasnoj na 85°C tokom 18 h. Oba dela su spojena i dodato je narednih 20 mg DMAP i smeša je mešana tokom daljnih 20 h na 90°C. Smeša je koncentrisana u vakuumu i preostali ostatak je rastvoren u 300 ml dihlormetana. Ona je dva puta isprana svaki puta sa 50 ml 5% limunske kiseline, osušena preko magnezijum sulfata i koncentrisana u vakuumu. Preostali ostatak je ispran dva puta sa 100 ml dietil etrom i osušen u vakuumu. Dodato je50 ml trifluorosirćetne kiseline i smeša je tretirana sa ultrazvučnom opremom tokom 18 h. Trifluorosirćetna kiselina je uklonjena u vakuumu i preostali ostatak je ispran dva puta sa 100 ml dietil etrom i zatim prečišćen sa HPLC (Reprosil C18-10/ 250-30 (Protok 16ml/min; rastvarač A: voda (0, 1% TFA); rastvarač B: Acetonitril). Relevantne frakcije su sakupljene, dodato je 10 ml DMF i zatim su rastvarači uklonjeni u vakuumu. Preostali ostatak je ispran dva puta sa 100 ml dietil etrom i osušen u vakuumu.

[0525] Prinos: 273 mg (49%)

[0526] LC-MS (metoda 1): Rt= 0.82 min; m/z = 659 (M+H)<+>.

[0527]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 1.45 (3H), 1.95 (2H), 2.6 (3H), 2.95 (4H), 3.3 (3H), 3.85 (3H), 3.9 (1 H), 7.15 (2H), 7.43 (2H), 7.58 (2H), 7.62 (1 H), 7.72 (4H), 7.81 (1 H), 8.02 (1 H), 8.35 (2H), 9.2 (1 H), 10.25 (1 H).

Primer 4.1.1

N-[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4] triazolo[1,5-α]piridin-2-il]-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]-4-(metilamino)butanamid hidrohlorid

[0528]

[0529] 273 mg (0.353 mmol) N-[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil] amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il]-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]-4-(metilamino)butanamid trifluoracetata rastvoreno je u 100 ml 0.1 M vodenog rastvora HCl i rastvor je liofilizovan. Postupak je ponovljen sa još 100 ml 0.1 M vodenog rastvora HCl. Preostali ostatak je rastvoren u 100 ml smeše acetonitrila i vode i opet liofilizovan. Dobijeno je 192 mg (78%) ciljnog jedinjenja u vidu belog praha.

LC-MS (metod 1): Rt= 0.8 min; m/z = 659 (M+H)<+>.

[0530]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 1.43 (3H), 1.95 (2H), 2.95 (4H), 3.3 (3H), 3.85 (3H), 3.9 (1 H), 7.15 (2H), 7.43 (2H), 7.55 (2H), 7.62 (1 H), 7.72 (4H), 7.81 (1H), 8.02 (1H), 8.5 (2H), 9.2 (1H), 10.3 (1H).

Referentni primer R4.2

4-amino-N-[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4] triazolo[1,5-α]piridin-2-il]-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]butanamid trifluoracetat

Korak a) Benzil (4-{[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il] [2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]amino}-4-oksobutil)(4-metoksibenzil)karbamat:

[0532] 210 mg (0.38 mmol) (2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(2-{[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil] propanamida i 2615 mg (3.75 mmol) anhidrida 5-{[(benziloksi)karbonil](4-metoksibenzil)amino} butanske kiseline rastvoreno je u 13 ml piridina i dodato je 6.4 mg (0.04 mmol) DMAP. Smeša je zagrevana u mikrotalasnoj na 80°C tokom 5 h. Dodato je još 60 mg (2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(2-{[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]amino}[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil] propanamida, 1922 mg anhidrida 5-{[(benziloksi)karbonil](4-metoksibenzil) amino}butanske kiseline i 5 mg DMAP i smeša je zagrevana u mikrotalasnoj na 85°C tokom 12 h. Smeša je koncentrisana u vakuumu i preostali ostatak je rastvoren u 300 ml dihlormetana. Ona je dva puta isprana sa 50 ml 5% limunske kiseline, osušena preko magnezijum sulfata i koncentrisana u vakuumu. Preostali ostatak je ispran dva puta sa 50 ml dietil etra i osušen u vakuumu. Nakon prečišćavanja sa HPLC (Chromatorex C18-10/ 125-40 (Protok 16 ml/min; rastvarač A: voda (0, 1% TFA); rastvarač B: Acetonitril) i sušenja pod visokim vakuumom dobijeno je 61 mg (10%) zaštićenog intermedijera ciljnog jedinjenja.

[0533] LC-MS (metod 1): Rt= 1.31 min; m/z = 899 (M+H)<+>.

Korak b) 4-amino-N-[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4] triazolo[1,5-α]piridin-2-il]-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]butanamid trifluoracetat:

[0534] 35 mg (0.039 mmol) proizvoda dobivenog u koraku a) rastvoreno je u 7 ml trifluorosirćetne kiseline i smeša je tretirana u ultrazvučnoj opremi tokom 6 h. Trifluorosirćetna kiselina je uklonjena u vakuumu i preostali ostatak je prečišćen pomoću HPLC (Chromatorex C18-10/ 125-40 (Protok 16ml/min; rastvarač A: voda (0.1% TFA); rastvarač B: Acetonitril). Relevantne frakcije su sakupljene i rastvarači su uklonjeni u vakuumu. Preostali ostatak je liofilizovan iz 1:1 smeše acetonitrila i vode i dobijeno je 23 mg (77%) belog praha.

[0535] LC-MS (metod 1): Rt= 0.81 min; m/z = 645 (M+H)<+>.

Referentni primer R4.2.1

4-amino-N-[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4] triazolo[1,5-α]piridin-2-il]-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]butanamid hidrohlorid

[0536]

[0537] 22 mg (0.024 mmol) 4-amino-N-[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil) propanoil]amino}fenil)[1,2,4] triazolo[1,5-α]piridin-2-il]-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil] butanamid trifluoracetata rastvoreno je u 2 ml 0.1 M vodenog rastvora HCl i rastvor je liofilizovan. Postupak je ponovljen sa još 2 ml 0.1 M vodenog rastvora HCl. Preostali ostatak je rastvoren u 5 ml smeše acetonitrila i vode i opet liofilizovan. Dobijeno je 17 mg (99%) ciljnog jedinjenja u vidu belog praha.

[0538] LC-MS (metod 1): Rt= 0.81 min; m/z = 645 (M+H)<+>.

[0539]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 1.42 (3H), 1.92 (2H), 2.87 (2H), 2.95 (2H), 3.3 (3H), 3.85 (3H), 3.9 (1 H), 7.15 (2H), 7.45 (2H), 7.58 (2H), 7.62 (1 H), 7.72 (4H), 7.81 (4H), 8.02 (1H), 9.2 (1H), 10.25 (1H).

Primer 5.1

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil 3-metil-L-valinat hidrohlorid (smeša 2 epimera)

[0541] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP19.03 (250 mg) u dihlormetanu (2.80 mL) i metanolu (0.28 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (0.94 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 230 mg naslovnog jedinjenja.

[0542]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.80-1.00 (15H), 1.41 (3H), 2.02 (1 H), 3.30 (3H), 3.74-3.98 (5H), 6.63-6.72 (1 H), 7.15 (2H), 7.43 (2H), 7.55 (1 H), 7.57 (1 H), 7.64 (1 H), 7.72 (4H), 7.78 (1 H), 8.01 (1 H), 8.49 (3H), 9.18 (1 H), 10.38 (1 H).

Primer 5.2

(1 R ili S)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-L-valinat hidrohlorid (jedan stereoizomer A)

[0544] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP20.03 (100 mg) u dihlormetanu (2.00 mL) i metanolu (0.17 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (0.38 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 90 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 90 mg naslovnog jedinjenja.

[0545]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.75-1.00 (12H), 1.41 (3H), 1.99 (1 H), 2.13 (1H), 3.30 (3H), 3.84-3.94 (4H), 4.01 (1H), 6.66 (1H), 7.15 (2H), 7.43 (2H), 7.55 (2H), 7.64 (1H), 7.72 (4H), 7.77 (1H), 8.00 (1H), 8.48 (3H), 9.18 (1H), 10.36 (1 H).

Primer 5.3

(1S ili R)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-L-valinat hidrohlorid (jedan stereoizomer B)

[0547] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP20.04. (100 mg) u dihlormetanu (2.00 mL) i metanolu (0.17 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (0.38 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 90 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 93 mg naslovnog jedinjenja.

[0548]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.75-1.00 (12H), 1.41 (3H), 1.99 (1 H), 2.22 (1H), 3.31 (3H), 3.84-3.94 (4H), 4.05 (1H), 6.71 (1H), 7.15 (2H), 7.43 (2H), 7.58 (2H), 7.65 (1 H), 7.72 (4H), 7.77 (1 H), 8.00 (1 H), 8.50 (3H), 9.18 (1 H), 10.37 (1 H).

Primer 5.4

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-L-valinat hidrohlorid (smeša 2 epimera)

[0550] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP20.02 (25 mg) u dihlormetanu (0.28 mL) i metanolu (0.03 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (0.10 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 22 mg naslovnog jedinjenja.

[0551]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.75-1.00 (12H), 1.41 (3H), 1.99 (1 H), 2.06-2.25 (1H), 3.30 (3H), 3.84-3.94 (4H), 3.99-4.07 (1H), 6.65-6.73 (1H), 7.15 (2H), 7.42 (2H), 7.55 (1 H), 7.57 (1 H), 7.64 (1 H), 7.71 (4H), 7.77 (1 H), 8.01 (1 H), 8.40 (3H), 9.17 (1 H), 10.28 (1 H).

Primer 5.5

(1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-2-metilalaninat hidrohlorid (smeša 2 epimera)

[0553] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP21.03 (30 mg) u dihlormetanu (1.00 mL) i metanolu (0.05 mL) dodat je rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (0.13 mL; c = 4.0 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Čvrsti ostatak je triturisan sa dihlormetanom tri puta, rastvarač je uklonjen svaki put i čvrsta supstanca je osušena u vakuumu dajući 14 mg naslovnog jedinjenja.

[0554]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.82 (6H), 1.40 (3H), 1.49 (6H), 1.95 (1H), 3.31 (3H), 3.82-3.96 (4H), 6.60 (1H), 7.15 (2H), 7.43 (2H), 7.57 (2H), 7.65 (1H), 7.72 (4H), 7.77 (1H), 8.00 (1H), 8.70 (3H), 9.18 (1H), 10.38 (1H).

Primer 6.1.

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]karbamoil}oksi)metil 3-metil-L-valinat hidrohlorid

[0556] Počevši od Intermedijernog primera IntP16.03. (80 mg) Primer 6.1. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 1.5. Prinos: 25 mg naslovnog jedinjenja.

[0557]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.97 (9H), 1.41 (3H), 3.83-3.94 (2H), 4.92 (2H), 5.87 (1H), 5.96 (1H), 7.10-7.19 (2H), 7.39-7.46 (2H), 7.64-7.83 (8H), 8.01 (1 H), 8.41 (3H), 9.18 (1 H), 10.29 (1 H).

Primer 6.2.

({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]karbamoil}oksi)metil L-valinat hidrohlorid

[0559] Počevši od Intermedijernog primera IntP17.02. (140 mg) Primer 6.2. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 1.5. Prinos: 50 mg naslovnog jedinjenja.

[0560]<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.93 (6H), 1.41 (3H), 2.18 (1 H), 3.32 (3H), 3.91 (1H), 3.98-4.05 (1H), 4.93 (2H), 5.86 (1H), 5.96 (1H), 7.10-7.20 (2H), 7.39-7.47 (2H), 7.66-7.68 (2H), 7.70-7.74 (4H), 7.77 (1H), 7.81 (1H), 8.01 (1H), 8.52 (3H), 9.19 (1 H), 10.36 (1 H).

Primer 6.3.

[({4-[(3-fluorazetidin-1-il)karbonil]-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil}[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il]karbamoil)oksi]metil 3-metil-L-valinat hidrohlorid

[0562] Počevši od Intermedijernog primera IntP18.03 (160 mg) Primer 6.3. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 1.5. Prinos: 130 mg naslovnog jedinjenja.

[0563]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 0.92-1.03 (9H), 1.37-1.44 (3H), 3.81-3.96 (2H), 3.97-4.24 (1H), 4.25-4.70 (3H), 4.83 (2H), 5.28-5.62 (1H), 5.85 (1H), 5.95 (1H), 7.08-7.22 (2H), 7.33-7.51 (5H), 7.67-7.82 (5H), 8.01 (1H), 8.47 (3H), 9.18 (1H), 10.38 (1 H).

Primer 7.1.

2-(metilamino)etil [6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat hidrohlorid

[0564]

[0565] Počevši od Intermedijernog primera IntP22.04. (25 mg) Primer 7.1. je pripremljen analogno proceduri za dobijanje Primera 1.5. Prinos: 25 mg naslovnog jedinjenja.

[0566]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6, otkriveni signali), δ [ppm] = 1.41 (3H), 3.13-3.26 (2H), 3.32 (3H), 3.86 (3H), 3.89-3.98 (1 H), 4.46 (2H), 7.15 (2H), 7.44 (2H), 7.53-7.67 (3H), 7.68-7.83 (5H), 8.01 (1H), 8.99 (2H), 9.19 (1H), 10.44 (1H).

Primer 8.1.

(2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(2-{[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil](N-metilglicil)amino}[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil]propanamid trifluoracetat

[0568] U mešani rastvor Intermedijernog primera IntP23.03 (500 mg) u dihlormetanu (20 mL) dodata je trifluorsirćetna kiselina (2.6 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu. Silikagel hromatografija i zatim preparativna HPLC reverzne faze (gradijent vode i acetonitrila koji sadrži trifluorosirćetnu kiselinu kao aditiv) dala je posle liofilizacije 110 mg naslovnog jedinjenja.

[0569]<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6), δ [ppm] = 1.41 (3H), 2.64 (3H), 3.35 (3H), 3.79-3.91 (4H), 4.64 (2H), 7.11-7.20 (2H), 7.42 (3H), 7.61-7.76 (7H), 7.85 (1H), 8.07 (1H), 8.93 (2H), 9.22 (1H), 10.24 (1H).

Rastvorljivost

[0570] Rastvorljivost jedinjenja A1 na 25°C u različitim rastvaračima prikazana je u Tabeli 1:

Tabela 1: Rastvorljivost jedinjenja A1 na 25°C

Biološki testovi: Test proliferacije

[0571] Uzgajene ćelije tumora (MCF7, hormonski zavisne ćelije humanog karcinoma dojke, ATCC HTB22; NCI-H460, ćelije humanog nemikrocelularnog karcinoma pluća, ATCC HTB-177; DU 145, hormonski-nezavisne ćelije humanog karcinoma prostate, ATCC HTB-81; HeLa-MaTu, ćelije humanog karcinoma cerviksa, EPO-GmbH, Berlin; HeLa-MaTu-ADR, ćelije humanog karcinoma cerviksa višestruko otporne na lekove, EPO-GmbH, Berlin; HeLa ćelije humanog tumora cerviksa, ATCC CCL-2; B16F10 ćelije mišjeg melanoma, ATCC CRL-6475) nanete su sa gustinom od 5000 ćelija/bunaru (MCF7, DU145, HeLa-MaTu-ADR), 3000 ćelija/bunaru (NCI-H460, HeLa-MaTu, HeLa), ili 1000 ćelija/bunaru (B16F10) na multititer ploču sa 96 bunara, u 200 µl njihovog odgovarajućeg kultivacionog medijuma kome je dodato 10% fetalnog telećeg seruma. Nakon 24 sata, ćelije na jednoj ploči (nulta ploča) obojene su kristal violetom (pogledajte dole), dok je medijum u drugim pločama zamenjen svežim kultivacionim medijumom (200 µl), u koji su dodate ispitivane supstance u različitim koncentracijama (0 µM, kao i u opsegu od 0,01-30 µM; finalna koncentracija rastvarača dimetil sulfoksida bila je 0,5%). Ćelije su inkubirane 4 dana u prisustvu ispitivanih supstanci. Ćelijska proliferacija je određena bojenjem ćelija kristal violetom: ćelije su fiksirane dodatkom 20 µl/mernom mestu 11% rastvora glutaraldehida tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon tri ciklusa ispiranja fiksiranih ćelija vodom, ploče su osušene na sobnoj temperaturi. Ćelije su obojene dodatkom 100 µl/mernom mestu 0,1% rastvora kristal violeta (pH 3,0). Nakon tri ciklusa ispiranja obojenih ćelija vodom, ploče su osušene na sobnoj temperaturi. Boja je rastvorena dodatkom 100 µl/mernom mestu 10% rastvora sirćetne kiseline. Ekstinkcija je određena fotometrijski na talasnoj dužini od 595 nm.

Test Mps-1 kinaze

[0573] Humana kinaza Mps-1 fosforiluje biotinilovani supstrat peptid. Detekcija fosforilovanog proizvoda je postignuta vremenski razdvojenim prenosom fluorescentne rezonantne energije (TR-FRET) iz evropijumom obeleženih anti-fosfo-serin/treonin antitela kao donora za streptavidin obeležen umreženim alofikocijaninom (SA-XLent) kao akceptorom. Jedinjenja su ispitana na inhibiciju aktivnosti kinaze.

[0574] Upotrebljena je N-terminalno GST-markirana humana rekombinantna Mps-1 kinaza pune dužine (nabavljena od kompanije Invitrogen, Karslruhe, Nemačka, kat. br PV4071). Kao supstrat za reakciju kinaze, korišćen je biotinilovani peptid sa aminokiselinskom sekvencom PWDPDDADITEILG (C-kraj u amidnom obliku, nabavljena od kompanije Biosynthan GmbH, Berlin).

[0575] Za test, 50 nl 100-struko koncentrisanog rastvora ispitivanog jedinjenja u DMSO pipetirano je na crnu mikrotitar ploču sa 384 bunara male zapremine (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Nemačka), dodato je 2 µl rastvora Mps-1 u test puferu [0,1 mM natrijum-ortovanadat, 10 mM MgCl2, 2 mM DTT, 25 mM Hepes pH 7,7, 0,05% BSA, 0,001% Pluronic F-127] i smeša je inkubirana 15 min na 22°C da bi se omogućilo prethodno vezivanje ispitivanih jedinjenja za Mps-1, pre početka kinazne reakcije. Zatim je kinazna reakcija započeta dodatkom 3 µl rastvora 16,7 µM adenozin-trifosfata (ATP, 16,7 µM => finalna konc. u test zapremini od 5 µl je 10 µM) i peptidnog supstrata (1,67 µM => finalna konc. u test zapremini od 5 µl je 1 µM) u test puferu, i dobijena smeša je inkubirana u reakcionom vremenu od 60 min na 22°C. Koncentracija Mps-1 u testu je podešena prema aktivnosti šarže enzima, i izabrana je odgovarajuća da bi test bio u linearnom opsegu, tipične koncentracije enzima su bile oko 1 nM (finalna konc. u test zapremini od 5 µl). Reakcija je prekinuta dodavanjem 3 µl rastvora HTRF detekcionog reagensa (100 mM Hepes pH 7,4, 0,1% BSA, 40 mM EDTA, 140 nM Streptavidin-XLent [br.61 GSTXLB, Fa. Cis Biointernational, Marcoule, Francuska], 1,5 nM anti-fosfo(Ser/Thr)-evropijum-antitela [br. AD0180, PerkinElmer LAS, Rodgau-Jügesheim, Nemačka].

[0576] Rezultujuća smeša je inkubirana 1 h na 22°C da bi se omogućilo vezivanje fosforilovanog peptida za anti-fosfo(Ser/Thr)-evropijum-antitelo. Zatim je količina fosforilovanog supstrata određena merenjem prenosa rezonantne energije sa evropijumom markiranog anti-fosfo(Ser/Thr) antitela na Streptavidin-XLent. Stoga su fluorescentne emisije na 620 nm i 665 nm nakon ekscitacije na 350 nm merene na Viewlux TR-FRET čitaču (PerkinElmer LAS, Rodgau-Jügesheim, Nemačka). „Normalizovani odnos korigovan prema slepoj probi“ (specifično očitavanje Viewlux, slično tradicionalnom odnosu emisija na 665 nm i 622 nm, gde se slepa proba i šumovi od Eu-donora oduzimaju od signala na 665 nm pre izračunavanja odnosa) uzet je za meru količine fosforilovanog supstrata. Podaci su normalizovani (enzimska reakcija bez inhibitora = 0% inhibicije, sve ostale komponente testa bez enzima = 100% inhibicije). Ispitivana jedinjenja su testirana na istoj mikrotitar ploči u 10 različitih koncentracija, u opsegu od 20 µM do 1 nM (20 µM, 6,7 µM, 2,2 µM, 0,74 µM, 0,25 µM, 82 nM, 27 nM, 9,2 nM, 3,1 nM i 1 nM, serije razblaženja su pripremljene pre testa na nivou 100-strukih konc. stok rastvora, serijskim razblaženjima 1:3) u duplikatu za svaku koncentraciju, i IC50vrednosti su izračunate usklađivanjem 4 parametra.

[0577] Jedinjenja A1, A2, A3, A4 i A5 okarakterisana su sledećim IC50vrednostima, određenim testom Mps-1 kinaze (kao što je gore opisano):

Test kontrolne tačke vretena

[0578] Kontrolna tačka vretena obezbeđuje odgovarajuću segregaciju hromozoma tokom mitoze. Po ulasku u mitozu, hromozomi počinju da se kondenzuju, što je praćeno fosforilacijom histona H3 na serinu 10. Defosforilacija histona H3 na serinu 10 počinje u anafazi, i završava se u ranoj telofazi. U skladu sa tim, fosforilacija histona H3 na serinu 10 može da se koristi kao marker ćelija u mitozi. Nokodazol je supstanca koja destabilizuje mikrotubule. Tako, nokodazol ometa dinamiku mikrotubula i mobiliše kontrolnu tačku vretena. Ćelije se zaustavljaju u mitozi u G2/M prelazu i pokazuju fosforilovani histon H3 na serinu 10. Inhibicija kontrolne tačke vretena od strane Mps-1 inhibitora nadvladava mitotičku blokadu u prisustvu nokodazola, i ćelije prerano završavaju mitozu. Ova promena se detektuje putem smanjenja broja ćelija sa fosforilacijom histona H3 na serinu 10. Ovo opadanje je upotrebljeno kao marker za određivanje sposobnosti jedinjenja iz predmetnog pronalaska da indukuju mitotički proboj.

[0579] Kultivisane ćelije ćelijske linije humanog tumora cerviksa HeLa (ATCC CCL-2) nanete su u gustini od 2500 ćelija/bunaru na mikrotitar ploču sa 384 bunara u 20 µl Dulbekovog medijuma (bez fenol crvenog, bez natrijum piruvata, sa 1000 mg/ml glukoze, sa piridoksinom) uz dodatak 1% (v/v) glutamina, 1% (v/v) penicilina, 1% (v/v) streptomicina i 10% (v/v) fetalnog telećeg seruma. Nakon inkubacije preko noći na 37°C, ćelijama je dodato 10 µl/bunaru nokodazola u finalnoj koncentraciji od 0,1 µg/ml. Nakon 24 h inkubacije, ćelije su zaustavljene u G2/M fazi progresije ćelijskog ciklusa. Ispitivana jedinjenja rastvorena u dimetilsulfoksidu (DMSO) dodata su u različitim koncentracijama (0 µM, kao i opseg 0,005 µM - 10 µM; finalna koncentracija rastvarača DMSO bila je 0,5% (v/v)). Ćelije su inkubirane 4 h na 37°C u prisustvu ispitivanih jedinjenja. Nakon toga, ćelije su fiksirane u 4% (v/v) paraformaldehidu u fiziološkom rastvoru puferizovanom fosfatnim puferom (PBS) na 4°C preko noći, a zatim su permeabilizovane u 0,1% (v/v) Triton X™ 100 u PBS-u na sobnoj temperaturi tokom 20 min i blokirane u 0,5% (v/v) albuminu goveđeg seruma (BSA) u PBS-u na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Nakon ispiranja PBS-om, ćelijama je dodato 20 µl/bunaru rastvora antitela (anti-fosfo-histon H3 klon 3H10, FITC; Upstate, kat. br.16-222; razblaženje 1:200), i onda su inkubirane 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon toga, ćelije su isprane PBS-om, i ćelijama je dodato 20 µl/bunaru HOECHST 33342 rastvora boje (5 µg/ml), i ćelije su inkubirane 12 min na sobnoj temperaturi u mraku. Ćelije su dva puta isprane PBS-om, zatim su prekrivene PBS-om i čuvane na 4°C do analize. Slike su dobijene pomoću čitača za ispitivanje velikog sadržaja (HCA) Perkin Elmer OPERA™. Slike su analizirane pomoću softvera za analizu slika MetaXpress™ kompanije Molecular devices, pomoću aplikacionog modula Cell Cycle. U ovom testu, merena su oba markera, HOECHST 33342 i fosforilovani histon H3 na serinu 10. HOECHST 33342 obeležava DNK, i koristi se za određivanje broja ćelija. Bojenjem fosforilovanog histona H3 na serinu 10 određuje se broj mitotičkih ćelija. Inhibicija Mps-1 snižava broj mitotičkih ćelija u prisustvu nokodazola i ukazuje na neodgovarajuću mitotičku progresiju. Sirovi podaci testa su dalje analizirani pomoću logističke regresije sa četiri parametra da bi se odredila vrednost IC50za svako ispitivano jedinjenje.

Rastvorljivost u puferu na pH 7,4

[0580] 0,3 mg ispitivanog jedinjenja je rastvoreno u 0,1 ml dimetilsulfoksida i 0,4 ml acetonitrila. Za potpuno rastvaranje, HPLC bočica sa uzorkom je držana u ultrazvučnom kupatilu oko 20 sekundi. Zatim je dodat 1,0 ml pufera, i uzorak je opet tretiran u ultrazvučnom kupatilu.

Priprema pufera:

[0581] 90 g natrijum hlorida, 13,61 g kalijum dihidrogen fosfata i 83,35 g 1 M rastvora natrijum hidroksida dopunjeno je do 1 litra Millipore vodom, a zatim razblaženo 1:10.

[0582] Deo od 10 µl rastvora uzorka analizirane su HPLC metodom da se odredi količina ispitivanog jedinjenja u periodu od 24 sata na 37°C. Površine pikova u procentima korišćene su za kvantifikaciju.

HPLC metoda:

[0583] Agilent 1100 sa DAD (G1315B), binarnom pumpom (G1312A), autosamplerom (G1329A), grejačem za kolonu (G1316A), termostatom (G1330B); kolona: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4 mm, 5 µm; temperatura kolone: 37°C; eluent A: voda 5 ml perhlorne kiseline/litru, eluent B: acetonitril.

Gradijent:

[0584] 0 min 98% A, 2% B → 0-3,0 min 85% A, 15% B → 3,0-8,0 min 50% A, 50% B → 8,0-16,0 min 50% A, 50% B → 16,0-20,0 min 10% A, 90% B → 20,0-21,010% A, 90% B → 21,0-24,0 min 98% A, 2% B → 24,0-25,0 min 98% A, 2% B; protok: 1,5 ml/min; UV detekcija: 210 nm.

[0585] Odnos površina pikova (F) u različitim vremenima u odnosu na površinu pikova na početku prikazan je u Tabeli 2 za reprezentativne primere:

Tabela 2: Stabilnost u puferu kod pH 7.4

In vitro stabilnost u plazmi pacova i čoveka (HPLC detekcija)

[0586] 1 mg ispitivanog jedinjenja je rastvoren u 1,25 ml dimetilsulfoksida. Onda je dodato 1,25 ml vode. 0,5 ml ovog rastvora uzorka je pomešano sa 0,5 ml heparinizovane plazme zagrejane na 37°C (plazma Vistar pacova ili humana plazma). Prvi uzorak (10 µl) je odmah uzet za HPLC analizu. U periodu do 4 h nakon početka inkubacije uzimani su dalji alikvoti od 10 µl, nakon 30, 60, 90, 120 i 240 minuta, i određena je količina ispitivanog jedinjenja.

HPLC metoda:

[0587] Agilent 1100 sa DAD (G1315A), binarnom pumpom (G1312A), autosamplerom (G1329A), grejačem za kolonu (G1316A), termostatom (G1330B); kolona: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4 mm, 5 µm; temperatura kolone: 45°C; eluent A: voda 5 ml perhlorne kiseline/litru, eluent B: acetonitril.

Gradijent:

[0588] 0 min 98% A, 2% B → 0-3,0 min 85% A, 15% B → 3,0-8,0 min 55% A, 45% B → 8,0-16,0 min 55% A, 45% B → 16,0-20,0 min 10% A, 90% B → 20,0-21,010% A, 90% B → 21,0-24,0 min 98% A, 2% B → 24,0-25,0 min 98% A, 2% B; protok: 1,5 ml/min; UV detekcija: 222 nm.

[0589] Odnos površina ispod pikova (F) u odgovarajućim terminima u odnosu na površine ispod pikova na početku ukazuje na preostalo matično jedinjenje, pa ukazuje na stabilnost pod opisanim eksperimentalnim uslovima.

Tabela 3: In vitro stabilnost u plazmi pacova

Određivanje metaboličke stabilnosti in vitro

[0590] (uključujući izračunavanje hepatičnog in vivo klirensa u krvi (CL) i maksimalne oralne bioraspoloživosti (Fmax))

[0591] Metabolička stabilnost ispitivanih jedinjenja in vitro određena je njihovim inkubiranjem u koncentraciji od 1 µM sa suspenzijom mikrozoma jetre u 100 mM fosfatnom puferu, pH 7,4 (NaH2PO4x H2O Na2HPO4x 2H2O) pri koncentraciji proteina od 0,5 mg/ml i na 37°C. Reakcija je aktivirana dodatkom smeše kofaktora koja sadrži 1,2 mg NADP, 3 IJ glukoza-6-fosfat dehidrogenaze, 14,6 mg glukoza-6-fosfata i 4,9 mg MgCl2u fosfatnom puferu, pH 7,4. Organski rastvarač u inkubacijama je ograničen na <0,2% dimetilsulfoksida (DMSO) i <1% metanola. Tokom inkubacije, suspenzije mikrozoma su neprekidno mešane trešenjem, i uzimani su alikvoti u terminima 2, 8, 16, 30, 45 i 60 min, kojima je odmah dodavana jednaka zapremina hladnog metanola. Uzorci su zamrzavani na -20° C preko noći, zatim centrifugirani tokom 15 minuta na 3000 o/min, i supernatant je analiziran pomoću HPLC sistema Agilent 1200 sa LCMS/MS detekcijom.

[0592] Poluživot ispitivanog jedinjenja je određen iz zavisnosti koncentracije od vremena. Iz poluživota je izračunat intrinzični klirens. Uz dodatne parametre: protok krvi kroz jetru, specifična težina jetre i sadržaj mikrozomskih proteina, izračunat je hepatični in vivo klirens u krvi (CL) i maksimalna oralna bioraspoloživost (Fmax) za različite vrste. Korišćene su sledeće vrednosti parametara: Protok krvi kroz jetru - 1,3 l/h/kg (čovek), 2,1 l/h/kg (pas), 4,2 l/h/kg (pacov); specifična težina jetre - 21 g/kg (čovek), 39 g/kg (pas), 32 g/kg (pacov); sadržaj mikrozomskih proteina - 40 mg/g.

[0593] Opisani test odražava samo fazu I metabolizma mikrozoma, npr. tipično oksidoreduktivne reakcije putem enzima citohroma P450 i flavin-monooksigenaza (FMO) i hidrolitičke reakcije pod uticajem esteraza (estri i amidi).

[0594] Jedinjenja A1, A2, A3 i A4 se odlikuju sa vrednostima maksimalne oralne bioraspoloživosti (Fmax) kod pacova, psa i čoveka (određenu pomoću mikrozoma jetre kako je gore opisano) kako je prikazano u tabeli:

[0595] Neočekivano je nađeno da jedinjenja A1, A2, A3, A4 i A5 pokazuju superiorne karakteristike u odnosu na jedinjenja iz stanja tehnike.

[0596] Jedinjenja A1, A2, A3, A4 i A5 su karakterizovana sa sledećim atributima:

IC50određena u testu Mps-1 kinaze sa koncentracijom od 10 µM ATP (kako je gore opisano) je niža od ili jednaka 1 nM.

IC50određena u testu Mps-1 kinaze sa koncentracijom od 2 mM ATP (kako je gore opisano) je niža od 2 nM.

Maksimalna oralna biodostupnost (Fmax) kod pacova (određena pomoću mikrozoma jetre pacova kako je gore opisano) je veća od 70 %.

Maksimalna oralna biodostupnost (Fmax) kod psa (određena pomoću mikrozoma jetre psa kako je gore opisano) je veća od 50 %.

Maksimalna oralna biodostupnost (Fmax) kod čoveka (određena pomoću mikrozoma jetre čoveka kako je gore opisano) je veća od 60 %.

IC50određena u testu proliferacije HeLa ćelije (kako je gore opisano) je niža od 400 nM.

[0597] Naredna tabela pokazuje superiornost jedinjenja A1, A2, A3, A4 i A5 putem poređenja sa jedinjenjima iz stanja tehnike, kao i sa jedinjenjima koja su strukturno slična navedenim jedinjenjima.

LISTA SEKVENCI

[0598]

<110> Bayer Pharma Aktiengesellschaft

<120> DERIVATI PROLEKOVA SUPSTITUISANIH TRIAZOLOPIRIDINA

<160> 1

<170> BiSSAP 1.2

<210> 1

<211> 14

<212> PRT

<213> Nepoznato

<220>

<223> biotinilovani peptid sekvence amino kiseline PWDPDDADITEILG

<400> 1

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje opšte formule (I) :

naznačeno time da: R<A>predstavlja grupu odabranu od: - C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>, - C(=O)-(CR<4>R<5>)-N(R<6>)R<7>, - C(=O)-O-(CH2)2-N(H)R<3>, - C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-P(=O)(OH)2, - C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>, - C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>; R<1>predstavlja grupu odabranu od metoksi- i 2,2,2-trifluoretoksi-; R<2>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "*" označava tačku vezivanja na fenilni prsten na koji je pripojen R<2>; R<3>predstavlja grupu odabranu od: C1-C6-alkil, C3-C6-cikloalkil-, 4- do 7-člani heterocikloalkil-; navedena grupa je opciono supstituisana, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od: - OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, -O-P(=O)(OH)2; R<4>i R<5>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupu C1-C3-alkil-, ili R<4>i R<5>, zajedno sa atomom ugljenika za koji su oni vezani, grade C3-C6-cikloalkilni prsten; R<6>predstavlja atom vodonika ili grupu C1-C3-alkil-; R<7>predstavlja atom vodonika ili grupu -C(=O)R<9>; R<8>predstavlja grupu odabranu od: C1-C6-alkil, C3-C6-cikloalkil-, 4- do 7-člani heterocikloalkil-; navedena grupa je opciono supstituisana, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od: -OH, -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>-O-P(=O)(OH)2; R<9>predstavlja grupu

ili R<9>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "**" označava tačku vezivanja na karbonilnu grupu na koju je pripojen R<9>; R<10>i R<11>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe C1-C3-alkil-, ili R<10>i R<11>, zajedno sa atomom azota za koji su oni vezani grade 4- do 7-člani heterocikloalkilni prsten; R<12>predstavlja grupu odabranu od atoma vodonika, -OH, -NR<10>R<11>, -NH-C(=NH)-NH2; n je ceo broj od 0, 1, 2, 3 ili 4; ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
2. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time da: R<A>predstavlja grupu odabranu od: - C(=O)-(CH2)3-N(H)R<3>, - C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>, - C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-CH(R<6>)-NH-C(=O)-R<9>. ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
3. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time da: R<A>predstavlja grupu: - C(=O)-O-(CR<4>R<5>)-O-C(=O)-R<8>, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
4. Jedinjenje prema zahtevu 1, 2 ili 3, naznačeno time da: R<1>predstavlja grupu metoksi-, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
5. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 4, naznačeno time da: R<2>predstavlja grupu -S(=O)2CH3, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
6. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 5, naznačeno time da: R<3>predstavlja grupu C1-C3-alkil-, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
7. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 6, naznačeno time da: R<4>predstavlja atom vodonika ili grupu C1-C3-alkil-, i R<5>predstavlja atom vodonika, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
8. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 7, naznačeno time da: R<6>predstavlja atom vodonika ili grupu metil-, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
9. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 8, naznačeno time da: R<8>predstavlja grupu odabranu od: C1-C6-alkila, supstituisanog jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od: -NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, 4- do 7-članog heterocikloalkila-, opciono supstituisanog, jednom ili više puta, identično ili različito, sa grupom odabranom od: - NH2, -N(H)R<10>, -N(R<10>)R<11>, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
10. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 9, naznačeno time da: R<9>predstavlja grupu odabranu od:

pri čemu "**" označava tačku vezivanja na karbonilnu grupu na koju je pripojen R<9>, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
11. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 10, naznačeno time da: R<10>i R<11>, nezavisno jedan od drugog, predstavljaju grupu odabranu od atoma vodonika i grupe C1-C3-alkil-, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
12. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 11, naznačeno time da: R<12>predstavlja grupu -NR<10>R<11>, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
13. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time da je odabrano iz grupe koju čine: ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil piperidin-4-karboksilat trifluoracetat, ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil L-valinat hidrohlorid, ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil L-leucinat hidrohlorid, ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil N-metil-L-valinat hidrohlorid, ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil 3-metil-L-valinat hidrohlorid, (fosfonooksi)metil [6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat, ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil 3-metil-L-izovalinat hidrohlorid, ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil 3-amino-2,2-dimetilpropanoat trifluoracetat, ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil L-lizil-L-valinat dihidrohlorid, (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil L-lizil-L-valinat dihidrohlorid (smeša 2 epimera), ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)metil L-valil-L-valinat hidrohlorid, (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil L-valil-L-valinat hidrohlorid (smeša 2 epimera), (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil L-valinat hidrohlorid (smeša 2 epimera), (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil 3-metil-L-valinat hidrohlorid (smeša 2 epimera), (1 R ili 1S)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil -3-metil-L-valinat hidrohlorid (jedan stereoizomer A), (1 S ili 1R)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil -3-metil-L-valinat hidrohlorid (jedan stereoizomer B), (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil-L-izoleucinat hidrohlorid (smeša 2 epimera), (1S ili 1R)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil-L-izoleucinat hidrohlorid (jedan stereoizomer B), (1R ili 1S)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)etil-L-izoleucinat hidrohlorid (jedan stereoizomer A), N-[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4] triazolo[1,5-α]piridin-2-il]-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]-4-(metilamino)butanamid trifluoracetat, N-[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4] triazolo[1,5-α]piridin-2-il]-N-[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]-4-(metilamino)butanamid hidrohlorid, (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil 3-metil-L-valinat hidrohlorid (smeša 2 epimera), (1R ili S)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-L-valinat hidrohlorid (jedan stereoizomer A), (1S ili R)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-L-valinat hidrohlorid (jedan stereoizomer B), (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-L-valinat hidrohlorid (smeša 2 epimera), (1RS)-1-({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamoil}oksi)-2-metilpropil-2-metilalaninat hidrohlorid (smeša 2 epimera), ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]karbamoil}oksi)metil 3-metil-L-valinat hidrohlorid, ({[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][4-(metilsulfonil)-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil]karbamoil}oksi)metil L-valinat hidrohlorid, [({4-[(3-fluorazetidin-1-il)karbonil]-2-(2,2,2-trifluoretoksi)fenil}[6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il]karbamoil)oksi]metil 3-metil-L-valinat hidrohlorid, 2-(metilamino)etil [6-(4-{[(2R)-2-(4-fluorfenil)propanoil]amino}fenil)[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-2-il][2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil]karbamat hidrohlorid, (2R)-2-(4-fluorfenil)-N-[4-(2-{[2-metoksi-4-(metilsulfonil)fenil](N-metilglicil)amino}[1,2,4]triazolo[1,5-α]piridin-6-il)fenil]propanamid trifluoracetat; ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, ili njihova smeša.
14. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 13, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, naročito njihova farmaceutski prihvatljiva so, ili njihova smeša, naznačeno time da je za upotrebu za lečenje ili profilaksu bolesti.
15. Farmaceutska kompozicija naznačena time da sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 13, ili tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili njihova so, naročito njihova farmaceutski prihvatljiva so, ili njihova smeša, te farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač.
16. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 14, naznačeno time da navedena bolest je bolest nekontrolisanog ćelijskog rasta, proliferacija i/ili preživljavanje, neodgovarajući ćelijski imuni odgovor, ili neprikladan ćelijski inflamatorni odgovor, naročito u kojoj je nekontrolisani ćelijski rast, proliferacija i/ili preživljavanje neprikladan neodgovarajući ćelijski imuni odgovor, ili neprikladan ćelijski inflamatorni odgovor posredovan sa Mps-1, naročito u kojima bolest nekontrolisanog ćelijskog rasta, proliferacija i/ili preživljavanje, neodgovarajući ćelijski imuni odgovor, ili neprikladan ćelijski inflamatorni odgovor je hematološki tumor, solidni tumor i/ili njihove metastaze, npr. leukemije i mijelodisplastični sindrom, maligni limfomi, tumori glave i vrata, uključujući tumore mozga i metastaze na mozgu, tumore toraksa, uključujući tumore pluća ne-malih ćelija i tumore pluća malih ćelija, gastrointestinalne tumore, endokrine tumore, tumore dojke i druge ginekološke tumore, urološke tumore uključujući tumore bubrega, bešike i prostate, tumore kože, te sarkome, i/ili njihove metastaze. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5