RS56244B1

RS56244B1 - Novi makrociklusi kao inhibitori faktora xia

Info

Publication number: RS56244B1
Application number: RS20170852A
Authority: RS
Inventors: Donald J Pinto; James R Corte; Paul J Gilligan; Tianan Fang; Ii Leon M Smith; Yufeng Wang; Wu Yang; William R Ewing
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2011-08-05
Filing date: 2012-08-06
Publication date: 2017-11-30
Also published as: BR112014002202A2; WO2013022818A1; EA201490418A1; EP2739628B1; US9902742B2; EA024791B1; DK2739628T3; US9221818B2; US20160068544A1; CY1119281T1; SI2739628T1; US20170158712A1; HRP20171122T1; US9611274B2; MX2014000831A; US20180148461A1; CA2844254A1; LT2739628T; CN103857681B; ES2635088T3

Description

OBLAST TEHNIKE NA KOJU SE PREDMETNI PRONALAZAK ODNOSI

[0001] Predmetni pronalazak odnosi se generalno na nova makrociklična jedinjenja, i njihove analoge, koji su inhibitori faktora XIa i/ili kalikreina plazme, kompozicije koje ih sadrže, i takva jedinjenja za primenu u lečenju ili profilaksi tromboembolijskih poremećaja.

STANJE TEHNIKE PREDMETNOG PRONALASKA

[0002] Tromboemolijske bolesti ostaju vodeći uzrok smrti u razvijenim zemljama uprkos dostupnosti antikoagulasa kao što su varfarin (COUMADIN®), heparin, heparini male molekulske mase (LMWH), i sintetički pentasaharidi i antitrombocitni agensi kao što su aspirin i klopidogrel (PLAVIX®). Oralni antikoagulans varfarin, inhibira post-translaciono sazrevanje faktora koagulacije VII, IX, X i protrombina, i pokazan je kao efikasan i u venskoj i u arterijskoj trombozi. Međutim, njegova primena je ograničena usled njegovog suženog terapijskog indeksa, sporog početka terapijskog efekta, brojnih interakcija u ishrani i lekovima, kao i potrebe za praćenjem i prilagođavanjem doze. Otuda je otkrivanje i razvoj sigurnih i efikasnih oralnih antikoagulansa za prevenciju i lečenje širokog spektra tromboembolijskih poremećaja postao sve značajniji.

[0003] Jedan pristup je da se inhibira stvaranje trombina ciljanjem inhibicije faktora koagulacije XIa (FXIa). Faktor XIa je serin proteaza plazme uključena u regulaciju koagualcije krvi, koja je inicirana in vivo vezivanjem tkivnog faktora (TF) za faktor VII (FVII) da se generiše faktor VIIa (FVIIa). Rezultujući TF:FVIIa kompleks aktivira faktor IX (FIX) i faktor X (FX) koji vodi proizvodnji faktora Xa (FXa). Generisani FXa katalizuje transformaciju protrombina u male količine trombina pre nego što je ovaj put ugašen pomoću inhibitora puta tkivnog faktora (TFPI). Proces koagulacije je zatim dalje propagiran putem aktivacije povratne sprege Faktora V, VIII i XI pomoću katalitičkih količina trombina. (Gailani, D. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 27:2507-2513 (2007).) Rezutujući nalet trombina pretvara fibrinogen u fibrin koji polimerizuje da bi se formirao strukturni okvir krvnog ugruška, i aktivira trombocite, koji su ključna ćelijska komponenta koagulacije (Hoffinan, M., Blood Reviews, 17:S1-S5 (2003)). Stoga, faktor XIa igra ključnu ulogu u propagaciji amplifikacione petlje i prema tome je atraktivna meta za antitrombotičku terapiju.

[0004] WO 2007/076431 stavlja na uvid javnosti makrocikluse koji su selektivni inhibitori serin proteaznog faktora koagulacije VIIa, i koji mogu biti korišćeni kao lekovi.

[0005] WO 2011/100401 stavlja na uvid javnosti makrocikluse koji su selektivni inhibitori faktora Xia inhibitori ili dvojni inhbitori fXIa i kalikreina plazme.

REZIME PREDMETNOG PRONALASKA

[0006] Predmetni pronalazak obezbeđuje nova makrociklična jedinjenja, njihove analoge, uključujući stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli, ili solvate istih, koji su korisni kao selektivni inhibitori serin proteaznih enzima, naročito faktora XIa i/ili kalikreina plazme.

[0007] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje procese i intermedijere za pravljenje jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0008] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač i najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili njihove stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli, ili solvate.

[0009] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti korišćena u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskih poremećaja.

[0010] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti korišćena u lečenju.

[0011] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti korišćena za proizvodnju leka za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja.

[0012] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti korišćena sama, u kombinaciji sa drugim jedinjenjima jedinjenja predmetnog pronalaska, ili u kombinaciji sa jednim ili više, poželjno jednim do dva, druga agensa.

[0013] Ove i druge kaarkteristike predmetnog pronalaska će biti predstavljene u proširenom obliku kako se objava nastavlja.

DETALJAN OPIS PREDMETNOG PRONALASKA

I. JEDINJENJA PREDMETNOG PRONALASKA

[0014] U prvom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (I):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, gde: prsten A je odabran od arila i 5- do 6-članog heterociklusa koji sadrži: ugljenikove atome i 1-4 heteroatoma koji su odabrani od N, NH, N(C1-4alkil), S(O)p, i O, gde pomenuti aril i heterociklus su po izboru supstituisani sa jednim ili više R<1>kako valenca dopušta;

prsten B je 5- do 6-člani heterociklus koji sadrži: ugljenikove atome i 1-4 heteroatoma koji su odabrani od N, NH, S(O)p, i O, gde pomenuti heterociklus je po izboru supstituisan sa jednim ili više R<10>kako valenca dopušta;

prsten C je 4- do 5-člani heterociklus koji sadrži: ugljenikove atome i 1-4 heteroatoma koji su odabrani od N, NR<9>, S(O)p, i O, gde pomenuti heterociklus je po izboru supstituisan sa jednim ili više R<2>kako valenca dopušta;

X<1>je odabran od C1-4 alkilena i C2-4 alkenilena; po izboru jedan ili više ugljenikovih atoma pomenutog alkilena i alkenilena mogu biti zamenjeni sa O, S(O)p, NH, i N(C1-4 alkil);

R<1>je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od H, halogen, NO2, C1-6alkil, OH, OMe, i CN;

R<2>je odabran od H, =O, OH, NH2, CF3, halogen, i C1-4 alkil (po izboru supstituisan sa OH); R<3>je odabran od H i C1-4alkil;

alternativno, R<2>i R<3>, zajedno sa atomima za koje su direktno ili indirektno vezani, formiraju prsten pri čemu je pomenuti prsten po izboru supstituisan sa =O;

R<4>je odabran od H, C1-4 alkil, hidroksil, i C3-6 cikloalkil;

R<5>je odabran od H i C1-4alkil;

R<6>je odabran od H, halogen, C(O)OH, i C(O)O(C1-4 alkil);

R<7>je odabran od H, C1-4 alkil, i CF3;

alternativno, R<6>i R<7>zajedno su =O;

R<8>je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od H, halogen, NHC(O)O-C1-4alkil, CN, OH, O-C1-4 alkil; CF3, CO2H, CO2(C1-4 alkil), -CH2CO2H, -(CH2)2CO2H, -CH2CO2(C1-4 alkil), -(CH2)2CO2(C1-4 alkil), NH2, -CH2NH2, -NHCO(C1-4 alkil), -NHCO2(CH2)1-2O(C1-4 alkil), -NHCO2(CH2)1-3O(C1-4alkil), NHCO2CH2CH(C1-4alkil)O(C1-4alkil), -NHCO2(CH2)1-2OH, -NHCO2CH2CO2H, -CH2NHCO2(C1-4 alkil), -NHC(O)NH(C1-4 alkil), -NHC(O)N(C1-4 alkil)2, NHC(O)NH(C1-4 alkil)N[5- do 6-člani heterociklus)], -NHSO2(C1-4 alkil), -CONH2, -CONH(C1-4 alkil), -CON(C1-4alkil)2, i -CH2CONH2;

R<9>je odabran od H i C1-4alkil;

R<10>je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od H, halogen, CN, OH, =O, NH2, C3-6 cikloalkil, C1-4 alkoksi, CF3, CH2OH, CO2H, CO2(C1-4 alkil), i CONH; i

p je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od 0, 1, i 2;

pod uslovom da su isključena sledeća jedinjenja

[0015] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (II):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, unutar okvira prvog aspekta, gde:

prsten A je odabran od arila i 6-članog heterociklusa koji sadrži: ugljenikove atome i 1-3 heteroatoma koji su odabrani od N, NH, i N(C1-4alkil);

prsten B je odabran od imidazola, piridina, piridona, i piridazina;

X<1>je odabran od CH2 i CH=CH;

W i Q su svaki nezavisno odabrani od N, NR<9>, CR<2>, i CHR<2>; i

R<2a>je odabran od H, NH2, i C1-4 alkil.

[0016] U trećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (II), ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, unutar okvira drugog aspekta, gde:

prsten A je odabran od fenila i piperidina;

je nezavisno odabran od

R<10>je odabran od H, halogen, i CN.

[0017] U četvrtom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (III):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, unutar okvira trećeg aspekta, gde:

je nezavisno odabran od

W i Q su svaki nezavisno odabrani od N i CR<2>;

R<1a>i R<1b>su svaki nezavisno odabrani od H i halogen;

R<2>je nezavisno u svakom slučaju, odabran od H i C1-4 alkil po izboru supstituisan sa OH; R<2a>je odabran od H, NH2, i Me;

R<4>je odabran od H i C1-4alkil;

R<5>je odabran od H i C1-4 alkil;

R<6>je nezavisno odabran od H, C(O)OH, i C(O)O(C1-4 alkil);

R<7>je odabran od H, C1-4alkil, i CF3;

alternativno, R<6>i R<7>zajedno su =O; i

R<10>je odabran od H, halogen i CN.

[0018] U petom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (IV):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, unutar okvira četvrtog aspekta, gde:

W i Q su svaki nezavisno odabrani od N i CH;

R<1a>i R<1b>su svaki nezavisno odabrani od H, F, i Cl;

R<4>je odabran od H, metil, etil, propil, izopropil, i butil;

R<5>je H;

R<8>je NHC(O)O-C1-4alkil; i

R<10>je odabran od H i CN.

[0019] U šestom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (V):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, unutar okvira petog aspekta, gde:

R<1a>je odabran od H i F;

R<1b>je Cl; i

R<4>je odabran od H, metil, etil, i izopropil.

[0020] U sedmom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (VI):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, unutar okvira četvrtog aspekta, gde;

je nezavisno odabran od

W je odabran od N i CH;

Q je odabran od N i CH;

R<1a>i R<1b>su svaki nezavisno odabrani od F i Cl;

R<4>je odabran od H, metil, i etil; i

R<8>je NHC(O)OMe.

[0021] U jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (I) ili (II), ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, gde:

prsten A je odabran od piperidina i fenila po izboru supstituisanog sa R<1>;

R<1>je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od H, halogen, haloalkil, NO2, CO(C1-4 alkil), C1-6alkil, OH, OMe, i CN.

[0022] U drugom tehničkom rešenju, prsten A je odabran od

i

gde R<1>je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od H, halogen, i C1-6 alkil.

[0023] U drugom tehničkom rešenju, prsten A je

i je odabran od

[0024] U drugom tehničkom rešenju, prsten A je

[0025] U još jednom tehičkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (I), (II), ili (III), ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, gde prsten B je odabran od imidazol, oksadiazol, piridin, piridinon, piridazin, piridazinon, i fenil.

[0026] U drugom tehničkom rešenju,

je odabran od

[0027] U drugom tehničkom rešenju,

je odabran od

[0028] U drugom tehničkom rešenju,

je odabran od

[0029] U još jednom tehičkom rešenju,

je odabran od

[0030] U drugom tehničkom rešenju,

[0031] U drugom tehničkom rešenju,

[0032] U drugom tehničkom rešenju,

[0033] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je 4-člani heterociklus koji sadrži: ugljenikove atome i 1-4 heteroatoma koji su odabrani od N, NR<9>, S(O)p, i O.

[0034] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

gde je azot u azetidinskom prstenu zakačen za prsten A.

[0035] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je 5-člani heterociklus koji sadrži: ugljenikove atome i 1-4 heteroatoma koji su odabrani od N, NR<9>, S(O)p, i O.

[0036] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

gde W i Q su svaki nezavisno odabrani od C, N, O, i S, pri čemu je ugljenik tetravalentan, azot je trivalentan, i sumpor i kiseonik su divalentni; i ------ je jednostruka ili dvostruka veza.

[0037] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

gde W i Q su svaki nezavisno odabrani od N, NR<9>, CR<2>, i CHR<2>;

[0038] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je 5-člani heterociklus koji sadrži: ugljenikove atome i 1-4 heteroatoma koji su odabrani od N, NR<9>, S(O)p, i O.

[0039] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

gde U, V, W, i Q su svaki nezavisno odabrani od grupe koja se sastoji od C, N, O, i S, pri čemu je ugljenik tetravalentan, azot je trivalentan, i sumpor i kiseonik su divalentni; i ------ je jednostruka ili dvostruka veza.

[0040] U drugom gde U, V, W, i Q su svaki nezavisno odabrani od N, NR<9>, S, O, C, CR<2>, i CHR<2>.

[0041] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0042] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0043] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0044] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0045] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0046] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0047] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0048] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

gde W i Q su svaki nezavisno odabrani od N, NR<9>, CR<2>, i CHR<2>;

R<2a>je odabran od H, =O, OH, NH2, CF3, halogen, i C1-4 alkil po izboru supstituisan sa OH.

[0049] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

gde Q je odabran od N i CR<2>;

R<2>je odabran od H, NH2, i C1-4 alkil supstituisan sa OH.

[0050] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0051] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

W je odabran od N i CR<2>.

[0052] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0053] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0054] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0055] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je 6-člani heterociklus koji sadrži: ugljenikove atome i 1-4 heteroatoma koji su odabrani od N, NR<9>, S(O)p, i O.

[0056] U drugom tehničkom rešenju, prsten C je

[0057] U drugom tehničkom rešenju, X<1>je odabran od -CH2-, -CH=CH-, -C(Me)=CH-, i -CH2NH-.

[0058] U drugom tehničkom rešenju, X<1>je odabran od -CH2-, -CH=CH-, i -C(Me)=CH-.

[0059] U drugom tehničkom rešenju, X<1>je odabran od -CH2- i -CH=CH-.

[0060] U drugom tehničkom rešenju, X<1>je -CH2-.

[0061] U drugom tehničkom rešenju, R<1>je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od H i halogen.

[0062] U drugom tehničkom rešenju, prsten A je

gde R<1a>i R<1b>su svaki nezavisno odabrani od H i halogen.

[0063] U drugom tehničkom rešenju, R<1a>je odabran od H, F i Cl.

[0064] U drugom tehničkom rešenju, R<1a>je odabran od H i F.

[0065] U drugom tehničkom rešenju, R<1a>je F i R<1b>je Cl.

[0066] U drugom tehničkom rešenju, R<3>je odabran od H, i C1-4 alkil.

[0067] U drugom tehničkom rešenju, R<3>je H.

[0068] U drugom tehničkom rešenju, R<4>je odabran od H, C1-4 alkil, i hidroksil.

[0069] U drugom tehničkom rešenju, R<4>je odabran od H i C1-4 alkil.

[0070] U drugom tehničkom rešenju, R<4>je odabran od H i metil, etil, izopropil, i C3-6cikloalkil.

[0071] U drugom tehničkom rešenju, R<5>je odabran od H i C1-4 alkil.

[0072] U drugom tehničkom rešenju, R<5>je odabran od H i metil.

[0073] U drugom tehničkom rešenju, R<6>je odabran od H, halogen, C(O)OH, i C(O)O(C1-4alkil).

[0074] U drugom tehničkom rešenju, R<7>je odabran od H, C1-4alkil, i CF3.

[0075] U drugom tehničkom rešenju, R<6>i R<7>su uzeti zajedno da budu =O.

[0076] U drugom tehničkom rešenju, R<8>je odabran od H, halogen, NHC(O)O-C1-4alkil, CN, OH, O-C1-4alkil; CF3, CO2H, CO2(C1-4alkil), -CH2CO2H, -(CH2)2CO2H, -CH2CO2(C1-4alkil), -(CH2)2CO2(C1-4 alkil), NH2, -CH2NH2, -NHCO(C1-4 alkil), -NHCO2(CH2)1-2O(C1-4 alkil), -NHCO2(CH2)1-3O(C1-4 alkil), NHCO2CH2CH(C1-4 alkil)O(C1-4 alkil), -NHCO2(CH2)1-2OH, -NHCO2CH2CO2H, -CH2NHCO2(C1-4alkil), -NHC(O)NH(C1-4alkil), -NHC(O)N(C1-4alkil)2, NHC(O)NH(C1-4 alkil)N[5- do 6-člani heterociklus)], -NHSO2(C1-4 alkil), -CONH2, -CONH(C1-4 alkil), -CON(C1-4 alkil)2, i -CH2CONH2.

[0077] U drugom tehničkom rešenju, R<8>je odabran od H, halogen, NHC(O)O-C1-4alkil, NHC(O)(CH2)2OMe, CN, OH, i O-C1-4alkil.

[0078] U drugom tehničkom rešenju, R<8>je NHC(O)O-C1-4 alkil.

[0079] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (I), ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, gde:

prsten A je 6-člani aril ili piperidin, pomenuti delovi prstena su po izboru supstituisani sa R<1>;

prsten B je odabran od imidazol, oksadiazol, piridin, piridinon, piridazin, piridazinon i pirimidin, pomenuti delovi prstena su po izboru supstituisani sa R<10>: i

prsten C je odabran od imidazol, pirazol, pirol, i triazol, spomenuti delovi prstena su po izboru supstituisani sa R<2>.

[0080] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (VII)

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, gde:

je odabran od

prsten C je

R<2>je odabran od H i NH2; i

R<4>je odabran od H, metil, i etil; i

R<6>i R<7>zajedno su =O; i

R<8>je NHC(O)O-C1-4 alkil.

[0081] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (VIII):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli ili solvate istih, gde varijable imaju značenja kao što je definisano u Formuli (VII).

[0082] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (IX):

[0083] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (X):

[0084] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (XI):

[0085] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje odabrano od bilo koje liste podskupa jedinjenja prikazanih u predmetnoj prijavi.

[0086] U drugom tehničkom rešenju, jedinjenja predmetnog pronalaska imaju Ki vrednosti faktora XIa ≤ 10 µM.

[0087] U drugom tehničkom rešenju, jedinjenja predmetnog pronalaska imaju Ki vrednosti faktora XIa ≤ 1 µM.

[0088] U drugom tehničkom rešenju, jedinjenja predmetnog pronalaska imaju Ki vrednosti faktora XIa ≤ 0.5 µM.

[0089] U drugom tehničkom rešenju, jedinjenja predmetnog pronalaska imaju Ki vrednosti faktora XIa ≤ 0.1 µM.

II. DRUGA TEHIČKA REŠENJA PREDMETNOG PRONALASKA

[0090] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili njegov stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili solvat.

[0091] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili njegov stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili solvat.

[0092] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži: farmaceutski prihvatljiv nosač i terapijski efikasnu količinu najmanje jednog jedinjenja predmetnog pronalaska ili njegov stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili solvat.

[0093] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje proces za pravljenje jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0094] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje intermedijer za pravljenje jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0095] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e). U poželjnom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, gde dodatni terapijski agens(i) su antitrombocitni agens ili njihova kombinacija. Poželjno, antitrombocitni agens(i) su klopidogrel i/ili aspirin, ili njihova kombinacija.

[0096] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegov stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili solvat, za primenu u lečenju.

[0097] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska pronalaska ili njegov stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili solvat, za primenu u terapiji za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja.

[0098] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak takođe obezbeđuje primenu jedinjenja predmetnog pronalaska ili njegov steroizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili solvat, za proizvodnju leka za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja.

[0099] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje prvi i drugi terapijski agens, za primenu u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskog poremećaja, gde prvi terapijski agens je jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegov steroizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljiva so, ili solvat, i drugi terapijski agens je najmanje jedan agens odabran od drugog inhibitora faktora Xa, antikoagulantnog agensa, agensa koji inhibira trombin, trombolitičkog agensa, i fibrinolitičkog agensa. Poželjno, drugi terapijski agens je najmanje jedan agens koji je odabran od varfarin, nefrakcionisanog heparina, heparin male molekulske mase, sintetičkog pentasaharida, hirudina, argatrobaan, aspirina, ibuprofena, naproksena, sulindaka, indometacina, mefenamata, droksikama, diklofenaka, sulfinpirazona, piroksikama, tiklopidina, klopidogrela, tirofibana, eptifibatida, abciksimaba, melagatrana, desulfatohirudina, tkivnog aktivatora plazminogena, modifikovanog tkivnog aktivatora plazminogena, anistreplaze, urokinaze, i streptokinaze. Poželjno, drugi terapijski agens je barem jedan anti-trombocitni agens. Poželjno, anti-trombocitni agens(i) su klopidogrel i/ili aspirin, ili njihova kombinacija.

[0100] Tromboembolijski poremećaj obuhvata arterijske karidovaskularne tromboembolijske poremećaje, venske kardiovaskularne tromboembolijske poremećaje, arterijske cerebrovaskularne tromboembolijske poremećaje, i venske cerebrovaskularne tromboembolijske poremećaje. Primeri tromboembolijskog poremećaja obuhvataju, ali bez ograničenja na, nestabilnu anginu, akutni koronarni sindrom, atrijalnu fibrilaciju, prvi infarkt miokarda, rekurentni infarkt miokarda, ishemijsku iznenadnu smrt, prolazni ishemijski napad, infarkt, aterosklerozu, perifernu okluzivnu arterijsku bolest, vensku trombozu, trombozu dubokih vena, tromboflebitis, arterijsku emboliju, koronarnu arterijsku trombozu, cerebralnu arterijsku trombozu, cerebralnu emboliju, bubrežnu emboliju, plućnu emboliju, i trombozu koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja promoviše trombozu.

[0101] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegov steroizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili solvat, za primenu u lečenju i/ili profilaksi inflamatornog poremećaja. Primeri inflamatornog poremećaja uključuju, ali bez ograničenja na, sepsu, akutni respiratorni distres sindrom, i sistemski inflamatorni, i sindrom sistemskog inflamatornog odgovora.

[0102] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kombinovani preparat jedinjenja predmetnog pronalaska i dodatnog terapijskog agensa (agenasa) za simultanu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu u lečenju.

[0103] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kombinovani preparat jedinjenja predmetnog pronalaska i dodatnog terapijskog agensa (agenasa) za simultanu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskog poremećaja.

[0104] Predmetni pronalazak može biti predstavljen u drugim specifičnim oblicima bez udaljavanja od njegovih esencijalnih osobina. Ovaj pronalazak obuhvata sve kombinacije poželjnih aspekata predmetnog pronalaska zabeleženih ovde. Razume se da bilo koje i sva tehnička rešenja predmetnog pronalaska mogu biti uzeti u vezi sa bilo kojim drugim tehničkim rešenjem ili rešenjima da se opišu dodatna tehnička rešenja. Takođe treba razumeti da svaki pojedinačni element tehničkih rešenja je njegovo sopstveno tehničko rešenje. Pored toga, bilo koji element tehničkog rešenja treba da se kombinuje sa bilo kojim i svim drugim elementima iz bilo kog tehničkog rešenja da se opiše dodatno tehničko rešenje.

III. HEMIJA

[0105] Kroz specifikaciju i priložene slike, data hemijska formula ili naziv bi trebalo da obuhvate sve stereo i optičke izomere i njihove racemate gde takvi izomeri postoje. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svi hiralni (enantiomerni i diastereomerni) i racemski oblici su unutar obima predmetnog pronalaska. Mnogi geometrijski izomeri C=C dvostrukih veza, C=N dvostrukih veza, sistemi prstena, i slično mogu takođe biti prisutni u jedinjenjima, i svi takvi stabilni izomeri su opaženi u predmetnom pronalasku. Cis- i trans- (ili E- i Z-) geometrijski izomeri jedinjenja predmetnog pronalaska su opisani i mogu biti izolovani kao smeša izomera ili kao odvojeni izomerni oblici. Predmetna jedinjenja mogu biti izolovana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Optički aktivni oblici mogu biti pripremljeni razlaganjem racemskih oblika ili sintezom od optički aktivnih početnih materijala. Svi procesi korišćeni da se pripreme jedinjenja predmetnog pronalaska i intermedijeri napravljeni u njima se smatraju delom predmetnog pronalaska. Kada su pripremljeni enantiomerni ili diastereomerni proizvodi, oni mogu biti razdvojeni konvencionalnim metodama, na primer, hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom. U zavisnosti od uslova procesa krajni proizvodi predmetnog pronalaska su dobijeni ili u slobodnom (neutralnom) obliku ili obliku soli. I slobodni oblik i soli ovih krajnjih proizvoda su unutar obima predmetnog pronalaska. Ako je poželjno, jedan oblik jedinjenja može biti konvertovan u drugi oblik. Slobodna baza ili kiselina mogu biti konvertovani u so; so može biti konvertovana u slobodno jedinjenje ili drugu so; smeša izomernih jedinjenja predmetnog pronalaska može biti razdvojena u pojedinačne izomere. Jedinjenja predmetnog pronalaska, slobodni oblici i njihove soli, mogu postojati u višestrukim tautomernim oblicima, u kojima su vodonikovi atomi premešteni na druge delove molekula i hemijske veze između atoma molekula su posledično preuređene. Trebalo bi razumeti da su svi tautomerni oblici, u meri u kojoj mogu postojati, uključeni u pronalazak.

[0106] Termin "stereoizomer" odnosi se na izomere identične građe koji se razlikuju u uređenju njihovih atoma u prostoru. Enantiomeri i diastereomeri su primeri stereoizomera. Termin "enantiomer" odnosi se na jedan par molekularnih vrsta koje se odnose kao predmet i lik u ogledalu i ne mogu se mogu međusobno preklopiti. Termin "diastereomer" odnosi se na stereoizomere koji se ne odnose kao predmet i njegov lik u ogledalu. Termin "racemat" ili "racemska smeša" odnosi se na kompoziciju sastavljenu od ekvimolarnih količina dve enantiomerne vrste, gde je kompozicija lišena optičke aktivnosti.

[0107] Simboli "R" i "S" predstavljaju konfiguraciju supstituenata oko hiralnog(ih) atoma uglejnika. Izomerni deskriptori "R" i "S" su korišćeni kao što je opisano ovde za označavanje konfiguracije(a) atoma u odnosu na jezgro atoma i namera je da budu korišćeni kao što je definisano u literaturi (IUPAC preporuke - IUPAC Recommendations 1996, Pure and Applied Chemistry, 68:2193-2222 (1996)).

[0108] Termin "hiralni" odnosi se na strukturne karakterstike molekula koje čine nemogućim da se preklope predmet i njegov lik u ogledalu. Termin "homohiralni" odnosi se na stanje enantiomerne čistoće. Termin "optička aktivnost" odnosi se na stepen do kog homohiralni molekul ili neracemska smeša homohiralnih molekula rotira ravan polarizovane svetlosti.

[0109] Kao što je ovde korišćeno, termin "alkil" ili "alkilen" treba da obuhvati i razgranate i zasićene alifatične ugljovodonične grupe sa ravnim lancem koje imaju određen broj ugljenikovih atoma. Na primer, "C1 do C10 alkil" ili "C1-10 alkil" (ili alkilen), treba da obuhvati C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, i C10alkil groupe. Dodatno, na primer, "C1do C6alkil" ili "C1-C6alkil" označava alkil koji ima 1 do 6 ugljenikovih atoma. Akil grupa može biti nesupstituisana ili susptituisana sa najmanje jednim vodonikom koji je zamenjen drugom hemijskom grupom. Primeri alkil grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na, metil (Me), etil (Et), propil (npr., n-propil i izopropil), butil (npr., n-butil, izobutil, t-butil), i pentil (npr., n-pentil, izopentil, neopentil). Kada je korišćen "C0alkil" ili "C0 alkilen", trebalo bi da označi direktnu vezu.

[0110] "Alkenil" ili "alkenilen" bi trebalo da uključi ugljovodonične lance od ili ravne ili razgranate konfiguracije koja ima određen broj ugljenikovih atoma i jednu ili više, poželjno jednu do dve, ugljenik-ugljenik dvostruke veze koje mogu da se jave u bilo kojoj stabilnoj tački duž lanca. Na primer, "C2 do C6 alkenil" ili "C2-6 alkenil" (ili alkenilen), treba da obuhvate C2, C3, C4, C5, i C6alkenil grupe. Primeri alkenila obuhvataju, ali bez ograničenja na, etenil, 1-propenil, 2-propenil, 2-butenil, 3-butenil, 2-pentenil, 3, pentenil, 4-pentenil, 2-heksenil, 3-heksenil, 4-heksenil, 5-heksenil, 2-metil-2-propenil, i 4-metil-3-pentenil.

[0111] "Alkinil" ili "alkinilen" treba da obuhvati ugljovodonične lance ili ravne ili razgranate konfiguracije koji imaju jednu ili više, poželjno jednu do tri, ugljenik-ugljenik trostruke veze koje mogu da se jave na bilo kojoj stabilnoj tački duž lanca. Na primer, "C2 do C6 alkinil" ili "C2-6 alkinil" (ili alkinilen), treba da obuhvati C2, C3, C4, C5, i C6 alkinil grupe; kao što su etinil, propinil, butinil, pentinil, i heksinil.

[0112] Termin "alkoksi" ili "alkiloksi" odnosi se na -O-alkil grupu. "C1 do C6 alkoksi" ili "C1-6 alkoksi" (ili alkiloksi), treba da obuhvati C1, C2, C3, C4, C5, i C6 alkoksi grupe. Primeri alkoksi grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na, metoksi, etoksi, propoksi (npr., n-propoksi i izopropoksi), i t-butoksi. Slično, "alkiltio" ili "tioalkoksi" prestavlja alkil grupu kao što je definisano iznad sa označenim brojem ugljenikovih atoma prikačenih preko sumpornog mosta; na primer metil-S- i etil-S-.

[0113] "Halo" ili "halogen" obuhvataju fluoro (F), hloro (Cl), bromo (Br), i jodo (I). "Haloalkil" treba da obuhvati i razgranate i zasićene alifatične ugljovodonične grupe sa ravnim lancem koje imaju određen broj ugljenikovih atoma, supstituisane sa 1 ili više halogena. Primeri haloalkila obuhvataju, ali bez ograničenja na, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, trihlorometil, pentafluoroetil, pentahloroetil, 2,2,2-trifluoroetil, heptafluoropropil, i heptahloropropil. Primeri haloalkila takođe obuhvataju "fluoroalkil" koji treba da obuhvati i razgranate i zasićene alifatične ugljovodonične grupe sa ravnim lancem koje imaju određen broj ugljenikovih atoma, supstituisane sa 1 ili više atoma fluora.

[0114] "Haloalkoksi" ili "haloalkiloksi" predstavlja haloalil grupu kao što je definisano iznad sa naznačenim brojem ugljenikovih atoma koji su prikačeni preko kiseoničnog mosta. Na primer, "C1do C6haloalkoksi" ili "C1-6haloalkoksi", treba da obuhvati C1, C2, C3, C4, C5, i C6haloalkoksi grupe. Primeri haloalkoksi obuhvataju, ali bez ograničenja na, trifluorometoksi, 2,2,2-trifluoroetoksi, i pentafluorotoksi. Slično, "haloalkiltio" ili "tiohaloalkoksi" predstavlja haloalkil grupu kao što je definisano iznad sa naznačenim brojem ugljenikovih atoma prikačenih preko sumpornog mosta; na primer trifluorometil-S-, i pentafluoroetil-S-.

[0115] Termin "karboksi" odnosi se na grupu -C(=O)OH.

[0116] Termin "alkoksikarbonil" odnosi se na grupu -C(=O)OR<w>gde R<w>je alkil, supstituisani alkil, cikloalkil ili supstituisani cikloalkil.

[0117] Termin "cikloalkil" odnosi se na ciklizovane alkil grupe, uključujući mono-, bi- ili policiklične sisteme prstena. "C3 do C7 cikloalkil" ili "C3-7 cikloalkil" treba da obuhvati C3, C4, C5, C6, i C7cikloalkil grupe. Primeri cikloalkil grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, i norbornil. Razgranate cikloalkil grupe kao što su 1-metilciklopropil i 2-metilciklopropil su uključene u definiciju "cikloalkila".

[0118] Kao što je ovde korišćeno, "karbociklus" ili "karbociklični ostatak" treba da označi bilo koji stabilan 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, ili 8-člani monociklični ili biciklični ili 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-, ili 13-člani biciklični ili triciklični prsten, pri čemu bilo koji od njih može biti zasićen, delimično nezasićen, nezasićen ili aromatičan. Primeri takvih karbociklusa obuhvataju, ali bez ograničenja na, ciklopropil, ciklobutil, ciklobutenil, ciklopentil, ciklopentenil, cikloheksil, cikloheptenil, cikloheptil, cikloheptenil, adamantil, ciklooktil, ciklooktenil, ciklooctadienil, [3.3.0]biciklooktan, [4.3.0]biciklononan, [4.4.0]biciklodekan (dekalin), [2.2.2]biciklooktan, fluorenil, fenil, naftil, indanil, adamantil, antracenil, i tetrahidronaftil (tetralin). Kao što je prikazano iznad, premošteni prstenovi su takođe uključeni u definiciju karbociklusa (npr., [2.2.2]biciklooktan). Poželjni karbociklusi, ukoliko nije naznačeno drugačije, su ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, fenil, i indanil. Kada je korišćen termin "karbociklus", on treba da obuhvati "aril". Premošteni prsten se javlja kada jedan ili više ugljenikovih atoma vezuju dva ne-susedna ugljenikova atoma. Poželjni mostovi su jedan ili dva ugljenikova atoma. Primećeno je da most uvek konvertuje monociklični prsten u triciklični. Kada je prsten premošten, supstituenti navedeni za prsten mogu takođe biti prisutni na mostu.

[0119] Kao što je ovde korišćeno, termin "bicklični karbociklus" ili "biciklična karociklična grupa" treba da označi stabilni 9-ili 10-člani karbociklični prstenasti sistem koji obuhvata dva fuzionisana prstena i sastoji se od ugljenikovih atoma. Od dva fuzionisana prstena, jedan prsten je benzo prsten fuzionisan za drugi prsten; i drugi prsten je 5- ili 6-člani ugljenični prsten koji je zasićen, delimično nezasićen, ili nezasićen. Biciklična karbociklična grupa može biti prikačena za njegovu viseću grupu na bilo kom atomu ugljenika što rezultuje u stabilnoj strukturi. Biciklična karbociklična grupa opisana ovde može biti supstituisana na bilo kom ugljeniku ako je dobijeno jedinjenje stabilno. Primeri bicklične karbociklične grupe su, bez ograničenja na, naftil, 1,2-dihidronaftil, 1,2,3,4-tetrahidronaftil, i indanil.

[0120] "Aril" grupe odnose se na monociklične ili policiklične aromatične ugljovodonike, uključujući, na primer, fenil, naftil, i fenantranil. Arilni delovi su dobro poznati i opisani, na primer, u Lewis, R.J., ed., Hawley's Condensed Chemical Dictionary, 13. izdanje, John Wiley & Sons, New York (1997). "C6 ili C10 aril" ili "C6-10 aril" odnosi se na fenil i naftil. Ukoliko nije naznačeno drugačije, "aril", "C6ili C10aril" ili "C6-10aril" ili "aromatični ostatak" mogu biti nesupstituisani ili supstituisani sa 1 do 5 grupa, poželjno 1 do 3 grupe, OH, OCH3, Cl, F, Br, I, CN, NO2, NH2, N(CH3)H, N(CH3)2, CF3, OCF3, C(=O)CH3, SCH3, S(=O)CH3, S(=O)2CH3, CH3, CH2CH3, CO2H, i CO2CH3.

[0121] Termin "arilalkiloksi" odnosi se na arilalkil vezan preko kiseonične veze (-O-arilalkil).

[0122] Termin "benzil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na metil grupu na kojoj je jedan od vodonikovih atoma zamenjen fenil grupom, gde pomenuta fenil grupa može po izboru biti supstituisana sa 1 do 5 grupa, poželjno 1 do 3 grupe, OH, OCH3, Cl, F, Br, I, CN, NO2, NH2, N(CH3)H, N(CH3)2, CF3, OCF3, C(=O)CH3, SCH3, S(=O)CH3, S(=O)2CH3, CH3, CH2CH3, CO2H, i CO2CH3.

[0123] Kao što je ovde korišćeno, termin "heterociklus" ili "heterociklična grupa" treba da označi stabilni 3-, 4-, 5-, 6-, ili 7-člani monociklični ili biciklični ili 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-, 13-, ili 14-člani policiklični heterociklični prsten koji je zasićen, delimično nezasićen, ili potpuno nezasićen, i koji sadrži ugljenikove atome i 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma nezavisno odabranih od grupe koja se sastoji od N, O i S; i uključujući bilo koju policikličnu grupu u kojoj bilo koji od gore-definisanih prstenova je fuzionisan za benzenov prsten. Azotni i sumporni heteroatomi mogu biti po izboru oksidovani (tj., N→O i S(O)p, gde p je 0, 1 ili 2). Atom azota može biti supstituisan ili nesupstituisan (tj., N ili NR gde R je H ili drugi substituent, ako je definisan). Heterociklični prsten može biti prikačen za njegovu viseću grupu na bilo kom heteroatomu ili ugljenikovom atomu što rezultuje u stabilnoj strukturi. Heterociklični prstenovi opisani ovde mogu biti supstituisani na ugljeniku ili na azotovom atomu ako je dobijeno jedinjenje stabilno. Azot u heterociklusu može biti po izboru kvaternizovan. Poželjno je da kada ukupan broj S i O atoma u heterociklusu pređe 1, tada ovi heteroatomi nisu u blizini jedan drugom. To je poželjno kada ukupan broj S i O atoma u heterociklusu nije veći od 1. Kada je korišćen "heterociklus", on treba da obuhvati heteroaril.

[0124] Primeri heterociklusa uključuju, ali bez ograničenja na, akridinil, azetidinil, azocinil, benzimidazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benzotiofenil, benzoksazolil, benzoksazolinil, benztiazolil, benztriazolil, benztetrazolil, benzisoksazolil, benzizotiazolil, benzimidazolinil, karbazolil, 4aH-karbazolil, karbolinil, hromanil, hromenil, cinolinil, dekahidrohinolinil, 2H,6H-1,5,2-ditiazinil, dihidrofuro[2,3-b]tetrahidrofuran, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, imidazolopiridinil, indolenil, indolinil, indolizinil, indolil, 3H-indolil, izatinoil, izobenzofuranil, izohromanil, izoindazolil, izoindolinil, izoindolil, izohinolinil, izotiazolil, izotiazolopiridinil, izoksazolil, isoksazolopiridinil, metilendioksifenil, morfolinil, naftiridinil, oktahidroizohinolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, oksazolidinil, oksazolil, oksazolopiridinil, oksazolidinilperimidinil, oksindolil, pirimidinil, fenantridinil, fenantrolinil, fenazinil, fenotiazinil, fenoksatiinil, fenoksazinil, ftalazinil, piperazinil, piperidinil, piperidonil, 4-piperidonil, piperonil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolopiridinil, pirazolil, piridazinil, piridooksazolil, piridoimidazolil, piridotiazolil, piridinil, pirimidinil, pirolidinil, pirolinil, 2-pirolidonil, 2H-pirolil, pirolil, hinazolinil, hinolinil, 4H-hinolizinil, hinoksalinil, hinuklidinil, tetrazolil, tetrahidrofuranil, tetrahidroizohinolinil, tetrahidrohinolinil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, tiantrenil, tiazolil, tienil, tiazolopiridinil, tienotiazolil, tienooksazolil, tienoimidazolil, tiofenil, triazinil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil, 1,3,4-triazolil, i ksantenil. Takođe uključeni su fuzionisani prsten i spiro jedinjenja koji sadrže, na primer, gornje heterocikluse.

[0125] Primeri 5- do 10-članog heterociklusa uključuju, ali bez ograničenja na, piridinil, furanil, tienil, pirolil, pirazolil, pirazinil, piperazinil, piperidinil, imidazolil, imidazolidinil, indolil, tetrazolil, isoksazolil, morfolinil, oksazolil, oksadiazolil, oksazolidinil, tetrahidrofuranil, tiadiazinil, tiadiazolil, tiazolil, triazinil, triazolil, benzimidazolil, 1H-indazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benztetrazolil, benzotriazolil, benzisoksazolil, benzoksazolil, oksindolil, benzoksazolinil, benztiazolil, benzizotiazolil, izatinoil, izohinolinil, oktahidroizohinolinil, tetrahidroizohinolinil, tetrahidrohinolinil, izoksazolopiridinil, hinazolinil, hinolinil, izotiazolopiridinil, tiazolopiridinil, oksazolopiridinil, imidazolopiridinil, i pirazolopiridinil.

[0126] Primeri 5- do 6-članih heterociklusa obuhvataju, ali bez ograničenja na, piridinil, furanil, tienil, pirolil, pirazolil, pirazinil, piperazinil, piperidinil, imidazolil, imidazolidinil, indolil, tetrazolil, izoksazolil, morfolinil, oksazolil, oksadiazolil, oksazolidinil, tetrahidrofuranil, tiadiazinil, tiadiazolil, tiazolil, triazinil, i triazolil. Takođe uključeni su fuzionisani prsten i spiro jedinjenja koji sadrže, na primer, gornje heterocikluse.

[0127] Kao što je ovde korišćeno, termin "biciklični heterociklus" ili "biciklična heterociklilna grupa" treba da označi stabilni 9- ili 10-člani heterociklični prstenasti sistem koji sadrži dva fuzionisana prstena i sastoji se od ugljenikovih atoma i 1, 2, 3, ili 4 heteroatoma nezavisno odabranih od grupe koja se sastoji od N, O i S. Od dva fuzionisana prstena, jedan prsten je 5- ili 6-člani monociklični aromatični prsten koji sadrži 5-člani heteroarilni prsten, 6-člani heteroarilni prsten ili benzo prsten, svaki fuzionisan za drugi prsten. Drugi prsten je 5- ili 6-člani monociklični prsten koji je zasićen, delimično nezasićen, ili nezasićen, i sadrži 5-člani heterociklus, 6-člani heterocisklu ili karbociklus (pod uslovom da prvi prsten nije benzo kada je drugi prsten karbociklus).

[0128] Biciklična heterociklična grupa može biti zakačena za njenu viseću grupu na bilo kom heteroatomu ili ugljenikovom atomu što rezultuje u stabilnoj strukturi. Biciklična heterociklična grupa opisana ovde može biti supstituisana na ugljeniku ili na azotovom atomu ako je dobijeno jedinjenje stabilno. Poželjno je da kada ukupan broj S i O atoma u heterociklusu pređe 1, tada ovi heteroatomi nisu u blizini jedan drugog. Poželjno je da ukupan broj S i O atoma u heterociklusu nije veći od 1. Primeri biciklične heterociklične grupe su, bez ograničenja na, hinolinil, izohinolinil, ftalazinil, hinazolinil, indolil, izoindolil, indolinil, 1H-indazolil, benzimidazolil, 1,2,3,4-tetrahidrohinolinil, 1,2,3,4-tetrahidroizohinolinil, 5,6,7,8-tetrahidro-hinolinil, 2,3-dihidrobenzofuranil, hromanil, 1,2,3,4-tetrahidro-hinoksalinil, i 1,2,3,4-tetrahidro-hinazolinil.

[0129] Kao što je ovde korišćeno, termin "aromatična heterociklična grupa" ili "heteroaril" treba da označi stabilne monociklične i policiklične aromatične ugljovodonike koji obuhvataju najmanje jedan član prstena heteroatoma kao što je sumpor, kiseonik, ili azot. Heteroarilne groupe obuhvataju, bez ograničenja, piridil, pirimidinil, pirazinil, piridazinil, triazinil, furil, hinolil, izohinolil, tienil, imidazolil, tiazolil, indolil, piroil, oksazolil, benzofuril, benzotienil, benztiazolil, izoksazolil, pirazolil, triazolil, tetrazolil, indazolil, 1,2,4-tiadiazolil, izotiazolil, purinil, karbazolil, benzimidazolil, indolinil, benzodioksolanil, i benzodioksan. Heteroarilen grupe su supstituisane ili nesupstituisane. Azotov atom je supstituisan ili nesupstituisan (tj., N ili NR gde R je H ili drugi supstituent, ako je definisano). Azotovi i sumporni heteroatomi mogu po izboru biti oksidovani (tj., N→O u S(O)p, gde p je 0, 1 ili 2).

[0130] Premošteni prstenovi su takođe uključeni u definiciju heterociklusa. Premošteni prsten se javlja kada jedan ili više atoma (tj., C, O, N, ili S) vezuju dva ne-susedna ugljenikova ili azotova atoma. Primeri premoštenih prstenova obuhvataju, ali bez ograničenja na, jedan ugljenikov atom, dva ugljenikova atoma, jedan azotov atom, dva azotova atoma, i ugljenik-azot grupu. Primećeno je da most uvek konvertuje monociklični prsten u triciklični prsten. Kada je prsten premošten, supstituenti navedeni za ovaj prsten mogu takođe biti prisutni na mostu.

[0131] Termin "kontrajon" je korišćen da predstavi negativno naelektrisane vrste kao što su hlorid, bromid, hidroksid, acetat, i sulfat.

[0132] Kada je tačkasti prsten korišćen unutar strukture prstena, ovo označava da struktura prstena može biti zasićena, delimično zasićena ili nezasićena.

[0133] Kao što je ovde pomenuto, termin "supstituisan" znači da najmanje jedan vodonikov atom je zamenjen sa ne-vodoničnom grupom, pod uslovom da se održavaju normalne valence i da supstitucija rezultuje stabilnim jedinjenjem. Kada je supstituent keto (tj., =O), tada su zamenjena 2 vodonika na atomu. Keto supstituenti nisu prisutni na aromatičnim segmentima. Kada se kaže da je sistem prstena (npr., karbociklični ili heterociklični) supstituisan sa karbonilnom grupom ili dvostrukom vezom, trebalo bi da je karbonilna grupa ili dvostruka veza deo (tj., u okviru) prstena. Dvostruke veze prstena, kao što je ovde korišćeno, su dvostruke veze koje su formirane između dva susedna atoma prstena (npr., C=C, C=N, ili N=N).

[0134] U slučajevima u kojima su azotovi atomi (npr., amini) na jedinjenjima predmetnog pronalaska, oni mogu biti konvertovani do N-oksida tretmanom sa oksidirajućim agensom (npr., mCPBA i/ili vodonik peroksid) da se dobiju druga jedinjenja ovog pronalaska. Tako, smatra se da prikazani i azotovi atomi iz zahteva pokrivaju i prikazan azot i njegove derivate N-oksida (N→O).

[0135] Kada se neka promenljiva javlja više od jedan put u bilo kom sastavnom delu ili formuli za jedinjenje, njena definicija u svakom slučaju je nezavisna od njene definicije u svakom drugom slučaju. Tako, na primer, ako je pokazano da je grupa supstituisana sa 0-3 R grupe, onda navedena grupa može po izboru biti supstituisana sa do tri R grupe, i u svakom slučaju R je odabrano nezavisno od definicije za R. Takođe, kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ako takve kombinacije daju stabilna jedinjenja.

[0136] Kada je pokazano da veza sa supstituentom prelazi vezu koja povezuje dva atoma u prstenu, onda takav supstituent može biti vezan za bilo koji atom na prstenu. Kada je supstituent naveden bez označavanja atoma u kome je takav supstituent vezan za ostatak jedinjenja date formule, onda takav supstituent može biti vezan preko bilo kog atoma u takvom supstituentu. Kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ako takve kombinacije daju stabilna jedinjenja.

[0137] Fraza "farmaceutski prihvatljiv" je korišćena ovde da se odnosi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, u okviru ispravne medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudskih bića i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, i/ili drugog problema ili komplikacije, srazmerno sa razumnim odnosom korist/rizik.

[0138] Kao što je ovde korišćeno, "farmaceutski prihvatljive soli" odnose se na derivate jedinjenja koja su ovde stavljena na uvid javnosti gde je osnovno jedinjenje modifikovano pravljenjem njegovih kiselih ili baznih soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli obuhvataju, ali bez ograničenja na, mineralne ili organske kisele soli baznih grupa kao što su amini; i alkalne ili organske soli kiselih grupa kao što su karboksilne kiseline. Farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju konvencionalne netoksične soli ili kvaternarne amonijumske soli osnovnog jedinjenja koje je formirano, na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Na primer, takve konvencionalne netoksične soli obuhvataju one koje su izvedene iz neorganskih kiselina kao što su hlorovodonična, bromovodonična, sumporna, sulfaminska, fosforna, i azotna; i soli koje su pripremljene od organskih kiselina kao što su sirćetna, propionska, sukcinska, glikolna, stearinska, mlečna, jabučna, vinska, limunska, askorbinska, pamoična, maleinska, hidroksimaleinska, fenilsirćetna, glutaminska, benzoeva, salicilna, sulfanilinska, 2-acetoksibenzoeva, fumarna, toluensulfonska, metansulfonska, etan disulfonska, oksalna i izetionska.

[0139] Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska mogu biti sintetisane od osnovnog jedinjenja koje sadrži bazne ili kisele segmente pomoću konvencionalnih hemijskih metoda. Generalno, takve soli mogu biti pripremljene reagovanjem slobodnih kiselih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili organskom rastvaraču, ili u smeši ta dva; generalno, ne-vodeni medijumi kao etar, etil acetat, etanol, izopopanol, ili acetonitril su poželjni. Spiskovi pogodnih soli su nađeni u Remington's Farmaceutski Sciences, 18. izdanje, Mack Publishing Company, Easton, PA (1990).

[0140] Predmetni pronalazak treba da obuhvati sve izotope atoma koji se javljaju u predmetnim jedinjenjima. Izotopi obuhvataju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Kao opšti primer i bez ograničenja, izotopi vodonika uključuju deuterijum i tricijum. Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Izotopski-obeležena jedinjenja predmetnog pronalaska mogu generalno biti pripremljena konvencionalnim tehnikama poznatim prosečnim poznavaocima oblasti ili procesima analognim onima koji su opisani ovde, korišćenjem odgovarajućeg izotopskiobeleženog reagensa umesto ne-obeleženog reagensa koji je inače upotrebljen. Takva jedinjenja imaju različite potencijalne primene, npr., kao standardi i reagensi u određivanju sposobnosti potencijalnog farmaceutskog jedinjenja da se veže na ciljane proteine ili receptore, ili za imidžing jedinjenja ovog pronalaska vezana za biološke receptore in vivo ili in vitro.

[0141] "Stabilno jedinjenje" i "stabilna struktura" trebaju da označe jedinjenje koje je dovoljno snažno da preživi izolaciju do korisnog stepena čistoće iz reakcione smeše, i formulaciju u efikasni terapijski agens. Poželjno je da jedinjenja predmetnog pronalaska ne sadrže N-halo, S(O)2H, ili S(O)H grupu.

[0142] Termin "solvat" označava fizičku vezu jedinjenja ovog pronalaska sa jednim ili više molekula rastvarača, bilo organskih ili neorganskih. Ova fizička veza obuhvata vezivanje vodonika. U određenim slučajevima solvat će biti sposoban za izolaciju, na primer kada se jedan ili više molekula rastvarača inkorporiraju u kristalnu rešetku kristalne čvrste supstance. Molekuli rastvarača u solvatu mogu biti prisutni u regularnom aranžmanu ili neodređenom aranžmanu. Solvat može da sadrži ili stehiometrijsku ili nestehiometrijsku količinu molekula rastvarača. “Solvat” obuhvata i solvate u fazi rastvora i one koji se mogu izolovati. Solvati koji su navedeni kao primeri obuhvataju, ali bez ograničenja na, hidrate, etanolate, metanolate, i izopropanolate. Metode solvatacije su generalno poznate u oblasti.

[0143] Skraćenice kao što je ovde korišćeno, su definisane kao što sledi: "1 x" za jednom, "2 x" za dva puta, "3 x" za tri puta, "°C" za stepene Celzijusa, "ekv" za ekvivalent ili ekvivalente, "g" za gram ili grame, "mg" za miligram ili miligrame, "L" za litar ili litre, "mL" za mililitar ili mililitre, "µL" za mikrolitar ili mikrolitre, "N" za normalan, "M" za molaran, "mmol" za milimol ili milimole, "min" za minut ili minute, "h" za sat ili sate, "st" za sobnu temperaturu, "RV" retenciono vreme, "atm" za atmosferu, "psi" za funte po kvadratnom inču, "konc." za koncentrat, "zas" ili "zasićeni" za zasićene, "MW" za molekulsku masu, "mp" za tačku topljenja, "ee" za enantiomerni višak "MS" ili "Mas Spek" za masenu spektrometriju, "ESI" za masenu spektrometriju sa elektrosprej jonizacijom, "HR" za visoku rezoluciju, "HRMS" za masenu spektrometriju visoke rezolucije, "LCMS" za tečnu hromatografiju-masenu spektrometriju, "HPLC" za tečnu hromatografiju pod visokim pritiskom, "RP HPLC" za HPLC na reverznoj fazi, "TLC" ili "tlc" za tankoslojnu hromatografiju, "NMR" za nuklearnu magnetnu rezonantnu spektroskopiju, "nOe" spektroskopija nuklearnog Overhauserovog efekta, "<1>H" za proton, "δ" za delta, "s" za singlet, "d" za dublet, "t" za triplet, "q" za kvartet, "m"za multiplet, "br" za širok, "Hz" za herc, i "α", "β", "R", "S", "E", i "Z" su stereohemijske oznake poznate prosečnom poznavaocu oblasti.

Me Metil

Et Etil

Pr Propil

i-Pr Izopropil

Bu Butil

i-Bu Izobutil

t-Bu terc-butil

Ph Fenil

Bn Benzil

Boc terc-butiloksikarbonil

AcOH ili HOAc sirćetna kiselina

AlCl3 aluminijum hlorid

AIBN Azobisizobutironitril

BBr3bor tribromid

BCl3 bor trihlorid

BEMP 2-terc-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetilperhidro-1,3,2-diazafosforin BOP reagens benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat Burgesov reagens 1-metoksi-N-trietilamoniosulfonil-metanimidat

CBz karbobenziloksi

CH2Cl2Dihlorometan

CH3CN ili CAN Acetonitril

CDCl3 deutero-hloroform

CHCl3hloroform

mCPBA ili m-CPBA meta-hloroperbenzoeva kiselina

Cs2CO3 cezijum karbonat

Cu(OAc)2bakar (II) acetat

Cy2Nme N-cikloheksil-N-metilcikloheksanamin

DBU 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en

DCE 1,2 dihloroetan

DCM dihlorometan

DEA dietilamin

Dess-Martin 1,1,1-tris(acetiloksi)-1,1-dihidro-1,2-beniziodoksol-3-(1H)-on DIC ili DIPCDI diizopropilkarbodiimid

DIEA, DIPEA ili diizopropiletilamin

Hunig-ova baza DMAP 4-dimetilaminopiridin

DME 1,2-dimetoksietan

DMF dimetil formamid

DMSO dimetil sulfoksid

cDNA komplementarna DNK

Dppp (R)-(+)-1,2-bis(difenilfosfino)propan

DuPhos (+)-1,2-bis((2S,5S)-2,5-dietilfosfolano)benzen EDC N-(3-dimtilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid EDCI N-(3-dimtilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid EDTA etilendiamintetrasirćetna kiselina

(S,S)-EtDuPhosRh(I) (+)-1,2-bis((2S,5S)-2,5-dietilfosfolano)benzen(1,5-ciklooktadien)rodijum(I) trifluorometansulfonat Et3N ili TEA trietilamin

EtOAc etil acetat

Et2O dietil etar

EtOH etanol

GMF filter od staklenih mikrovlakana

Grubbs (II) (1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-2-imidazolidiniliden)dihloro (fenilmetilen)(triicikloheksilfosfin)rutenijum

HCl hlorovodonična kiselina

HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat

HEPES 4-(2-hidroksietil)piperaksin-1-etansulfonska kiselina Hex heksan

HOBt ili HOBT 1-hidroksibenzotriazol

H2SO4 sumporna kiselina

K2CO3kalijum karbonat

KOAc kalijum acetat

K3PO4 kalijum fosfat

LAH litijum aluminijum hidrid

LG odlazeća grupa

LiOH litijum hidroksid

MeOH metanol

MgSO4magnezijum sulfat

MsOH ili MSA metilsulfonska kiselina

NaCl natrijum hlorid

NaH natrijum hidrid

NaHCO3natrijum bikarbonat

Na2CO3 natrijum karbonat

NaOH natrijum hidroksid

Na2SO3natrijum sulfit

Na2SO4 natrijum sulfat

NBS N-bromosukcinimid

NCS N-hlorosukcinimid

NH3amonijak

NH4Cl amonijum hlorid

NH4OH amonijum hidroksid

Otf triflat ili trifluorometansulfonat

Pd2(dba)3 tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0)

Pd(OAc)2paladijum(II) acetat

Pd/C paladijum na ugljeniku

Pd(dppf)Cl2 [1,1'-bis(difenilfosfino)-ferocen]dihloropaladijum(II)

Ph3PCl2trifenilfosfin dihlorid

PG zaštitna grupa

POCl3 fosfor oksihlorid

i-PrOH ili IPA izopropanol

PS polistiren

SEM-Cl 2-(trimetisilil)etoksimetil hlorid

SiO2 silicijum dioksid

SnCl2kalaj(II) hlorid

TBAI tetra-n-butilamonijum jodid

TEA trietilamin

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF tetrahidrofuran

TMSCHN2 trimetilsilildiazometan

T3P anhidrid propan fosfonske kiseline

TRIS tris (hidroksimetil) aminometan

[0144] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti pripremljena na nekoliko načina poznatih prosečnim poznavaocima organske sinteze.

IV. BIOLOGIJA

[0145] Dok je koagualcija krvi esencijalna za regulaciju hemostaze organizma, takođe je uključena u mnoga patološka stanja. U trombozi, krvni ugrušak, ili tromb, može da formira i ometa cirkulaciju lokalno, uzrokujući ishemiju i oštećenje organa. Alternativno, u procesu poznatom kao embolija, ugrušak može da se pomeri i zatim postane zarobljen u distalnom sudu, gde opet uzrokuje ishemiju i oštećenje organa. Bolesti koje nastaju iz patološkog stvaranja tromba se kolektivno nazivaju kao tromboembolijski poremećaji i uključuju akutni koronarni sindrom, nestabilnu anginu, infarkt miokarda, trombozu u šupljini srca, ishemijski moždani udar, trombozu dubokih vena, perifernu okluzivnu arterijsku bolest, prolazni ishemijski napad, i plućnu emboliju. Dodatno, tromboza se javlja na veštačkim površinama u kontaktu sa krvlju, uključujući katetere, stentove, veštačke srčane zaliske, i membrane za hemodijalizu.

[0146] Neka stanja doprinose riziku za razvijanje tromboze. Na primer, promene zida krvnog suda, izmene u toku krvi, i promene u kompoziciji vaskularnog odeljka. Ovi faktori rizika su kolektivno poznati kao Virchow-ova trijada. (Colman, R.W. et al., izd., Hemostasis and Trombosis, Basic Principles and Clinical Practice, 5. Izdanje, str.853, Lippincott Williams & Wilkins (2006))

[0147] Antitromotički agensi se često daju pacijentima sa rizikom od razvoja tromboembolijske bolesti zbog prisustva jednog ili više faktora za predispoziciju rizika iz Virchow-ove trijade da bi se sprečilo stvaranje okluzivnog tromba (primarna prevencija). Na primer, u okruženju ortopedske hirurgije (npr., zamena kuka i kolena), antitrombotičko sredstvo se često primenjuje pre hirurške procedure. Antitrombotički agens izjednačava protrombotički stimulus izvršen od strane promena vaskularnog toka (staza), potencijalne hirurške povrede zida suda, kao i promena u sastavu krvi zbog odgovora u akutnoj fazi vezanog za operaciju. Drugi primer primene antitrombotičkog agensa za primarnu prevenciju je doziranje sa aspirinom, inhibitorom aktivacije trombocita, kod pacijenata kod kojih postoji rizik za razvoj trombotičke kardiovaskularne bolesti. Dobro prepoznati faktori rizika u ovakvom okruženju uključuju starost, muški pol, hipertenziju, dijabetes melitus, lipidne promene, i gojaznost.

[0148] Antitrombotički agensi su takođe naznačeni za sekundarnu prevenciju, nakon inicijalne trombotičke epizode. Na primer, pacijenti sa mutacijama u faktoru V (poznatiji i kao faktor V Leiden) i dodatnim faktorima rizika (npr. trudnoća), su dozirani sa antikoagulansima kako bi se sprečilo ponovno pojavljivanje venske tromboze. Drugi primer podrazumeva sekundarnu prevenciju kardiovaskularnih događaja kod pacijenata sa istorijom akutnog infarkta miokarda ili akutnog koronarnog sindroma. U kliničkom okruženju, kombinacija aspirina i klopidogrela (ili drugih tienopiridina) može biti upotrebljena da spreči drugi trombotički događaj.

[0149] Antitrombotički agensi se takođe daju da se leči stanje bolesti (tj., zaustavljanjem njenog razvoja) nakon što je već otpočela. Na primer, pacijenti koji pokazuju duboku vensku trombozu su lečeni sa antikoagulansima (tj., heparin, varfarin, ili LMWH) da se spreči dalji rast venske okluzije. Tokom vremena, ovi agensi takođe uzrokuju regresiju stanja bolesti jer je promenjen balans između protrombotičkih faktora i antikoagulansnih/profibrinolitičkih puteva u korist drugih. Primeri arterijskog vaskularnog korita uključuju lečenje pacijenata sa akutnim miokardijalnim infarktom ili akutni koronarni sindrom sa aspirinom i klopidogrelom da se spreči dalji rast vaskularnih okluzija i eventualno vodeći do regresije trombotičkih okluzija.

[0150] Tako, antitrombotički agensi su široko korišćeni za primarnu i sekundarnu prevenciju (tj., profilaksa ili redukcija rizika tromboembolijskih poremećaja, kao i lečenje već postojećeg trombotičkog procesa. Lekovi koji inhibiraju koagulaciju krvi, ili antikoagulansi, su "ključni agensi za prevenciju i lečenje tromboembolijskih poremećaja" (Hirsh, J. et al., Blood, 105:453-463 (2005)).

[0151] Alternativni put inicijacije koagulacije je operativan kada je krv izložena veštačkim površinama (npr., tokom hemodijalize, "on-pump" kardiovaskularne operacije, graftovi sudova, bakterijska sepsa), na ćelijskim površinama, ćelijskim receporima, ćelijskim ostacima (debris), DNK, RNK, i vanćelijskim matriksima. Ovaj proces se takođe naziva aktivacija kontakta. Površinska apsorpcija faktora XII dovodi do konformacijske promene u molekulu faktora XII, čime se olakšava aktivacija proteolitičkih aktivnih molekula faktora XII (faktor XIIa i faktor XIIf). Faktor XIIa (ili XIIf) ima nekoliko ciljnih proteina, uključujući prekalikrein plazme i faktor XI. Aktivni kalikrein plazme dalje aktivira faktor XII, što dovodi do pojačavanja kontaktne aktivacije. Alternativno, serinska proteazna prolikarboksilpeptidaza može aktivirati kalikrein plazme koji je u kompleksu sa kininogenom visoke molekulske mase u multiprotein kompleksu koji se formira na površini ćelija i matriksa (Shariat-Madar et al., Blood, 108:192-199 (2006)). Kontaktna aktivacija je proces posredovan površinom odgovoran delom za regulaciju tromboze i inflamaciju, i posredovan je, barem delom, pomoću fibrinolitičkih-, komplementarnih-, kininogen/kinin-, i drugim humoralnim i ćelijskim putevima (za pregled, Coleman, R., "Contact Activation Pathway", Hemostasis and Thrombosis, str.103-122, Lippincott Williams & Wilkins (2001); Schmaier, A.H., "Contact Activation", Thrombosis and Hemorrhage, str.105-128 (1998)). Biološki značaj sistema za kontaktnu aktivaciju za tromboembolijske bolesti je podržana fenotipom miševa deficijentnih za faktor XII. Preciznije, miševi deficijenti za faktor XII bili su zaštićeni od trombotične vaskularne okluzije u nekoliko modela za trombozu, kao i u modelu za moždani udar i fenotip miševa deficijentnih za XII je bio identičan miševima deficijentim za XI (Renne et al., J. Exp. Med., 202:271-281 (2005); Kleinschmitz et al., J. Exp. Med., 203:513-518 (2006)). Činjenica da je fakor XI nizvodno od faktora XIIa, kombinovan sa identičnim fenotipom miševa deficijentnih za XII i XI ukazuje na to da sistem kontaktne aktivacije može igrati ključnu ulogu u aktivaciji faktora XI in vivo.

[0152] Faktor XI je zimogen tripsinu-slične serin proteaze i prisutan je u plazmi u relativno niskoj koncentraciji. Proteolitička aktivacija na unutrašnjoj R369-1370 vezi dala je teški lanac (369 amino kiseline) i laki lanac (238 amino kiseline). Drugi sadrži tipičnu katalitičku trijadu nalik tripsinu (H413, D464, i S557). Veruje se da se aktivacija faktora XI pomoću trombina odigrava na negativno naelektrisanim površinama, najverovatnije na površini aktiviranih trombocita. Trombociti sadrže specifična mesta (130-500/trombocitu) sa visokim afinitetom (0.8 nM) za aktivirani faktor XI. Nakon aktivacije, faktor XIa ostaje vezan za površinu i prepoznaje faktor IX kao njegov makromolekularni supstrat. (Galiani, D., Trends Cardiovasc. Med., 10:198-204 (2000))

[0153] Kao dodatak mehanizimima aktivacije povratne sprege opisanim iznad, trombinom aktivirani inhibitor fibrinolize (TAFI), karboksipeptidaza plazme koja cepa C-terminalne lizinske i argininske ostatke na fibrinu, smanjujući sposobnost fibrina da poveća aktivaciju plazminogena zavisnu od aktivatora tkivnog plazminogena (tPA). U prisustvu antitela na FXIa, liza ugrušaka se dešava brže nezavisno od TAFI koncentracije u plazmi. (Bouma, B.N. et al., Thromb. Res., 101:329-354 (2001).) Tako, očekuje se da su inhibitori faktora XIa antikoagulantni i profibrinolitički.

[0154] Dodatni dokaz za anti-tromboembolisjke efekte ciljajućeg faktora XI je izveden iz miševa deficijentnih za faktor XI. Pokazano je da kompletno fXI deficijentni zaštićeni miševi od tromboze karotidne arterije indukovane pomoću feri hlorida (FeCl3) (Rosen et al., Thromb. Haemost., 87:774-777 (2002); Wang et al., J. Thromb. Haemost., 3:695-702 (2005)). Takođe, deficijentnost faktora XI spašava perinatalni letalni fenotip kompletne protein C deficijentnosti (Chan et al., Amer. J. Pathology, 158:469-479 (2001)). Pored toga, unakrsno-reaktivna, antitela babuna koja blokiraju funkciju za humani faktor XI štite protiv tromboze arterijsko-venskog šanta babuna (Gruber et al., Blood, 102:953-955 (2003)). Dokaz za antitrombotički efekat inhibitora malih molekula faktora Xia je takođe stavljen na uvid javnosti u objavljenoj Američkoj patentnoj prijavi br. 2004/0180855 A1. Uzete zajedno, ove studije ukazuju na to da će ciljajući faktor XI smanjiti sklonost ka trombotičkim i tromboembolijskim bolestima.

[0155] Genetski dokaz sugeriše da faktor XI nije potreban za normalnu homeostazu, što implicira superiorni bezbednosni profil mehanizma faktora XI u poređenju sa konkurentskim anttitrombotičnim mehanizmima. Za razliku od hemofilije A (deficijentnost faktora VIII) ili hemofilije B (deficijentnost faktora IX), mutacije gena za faktor XI koje uzrokuju deficijentnost faktora XI (hemofilija C) rezultiraju samo blagom do umerenom dijatezom krvarenja koja se prvenstveno karakteriše postoperativno ili posttraumatski, ali retko spontanim krvarenjem. Postoperativno krvarenje se javlja uglavnom u tkivu sa visokim koncentracijama endogene fibrinolitičke aktivnosti (npr., usna šupljina, i urogenitalni sistem). Većina slučajeva se slučajno identifikuju preoperativnim produžavanjem aPTT (unutrašnji sistem) bez prethodne istorije krvarenja.

[0156] Povećana sigurnost inhibicije XIa kao antikoagulansne terapije dodatno je podržana činjenicom da “knock-out” miševi za faktor XI, koji nemaju detektabilni protein faktora XI, podležu normalnom razvoju i imaju normalan životni vek. Nije evidentiran nikakav dokaz za spontano krvarenje. aPTT (unutrašnji sistem) se produžava na genski dozno-zavistan način. Interesantno, čak i nakon teške stimulacije koagulacionog sistema (transekcije repa), vreme krvarenja nije značajno produženo u poređenju sa divljim i heterozigotnim članovima istog legla. (Gailani, D., Frontiers in Bioscience, 6: 201-207 (2001), Gailani, D. i sar., Koagulacija krvi i fibrinoliza, 8: 134-144 (1997).) Uzeta zajedno, ova opažanja ukazuju na to da visoki nivoi inhibicije faktora XIa treba dobro da se tolerišu. Ovo je u suprotnosti sa eksperimentima koji ciljaju gen sa drugim faktorima koagulacije, isključujući faktor XII.

[0157] In vivo aktivacija faktora XI može biti određena formiranjem kompleksa sa ili C1 inhibitorom ili alfa 1 antitripsinom. U studiji od 50 pacijenata sa akutnim miokardijalnim infarktom (AMI), približno 25% pacijenata je imalo vrednosti iznad gornjeg normalnog opsega kompleksa ELISA. Ova studija može biti viđena kao dokaz da barem u podpopulaciji pacijenata sa AMI, aktivacija faktora XI doprinosi formiranju trombina (Minnema, M.C. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 20:2489-2493 (2000)). Druga studija uspostavlja pozitivnu korelaciju između stepena koronarne arterioskleroze i faktora XIa u kompleksu sa alfa 1 antitripsinom (Murakami, T. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 15:1107-1113 (1995)). U drugoj studiji, nivoi faktora XI iznad 90. percentila kod pacijenata koji su povezani sa 2.2-strukim rizikom za vensku trombozu (Meijers, J.C.M. et al., N. Engl. J. Med., 342:696-701 (2000)).

[0158] Kalikrein plazme je zimogen serin proteaze slične tripsinu i prisutan je u plazmi pri 35 do 50 µg/mL. Struktura gena je slična onoj za faktor XI. Uopšte, aminokiselinska sekvenca kalikrein plazma ima 58% homologije sa faktorom XI. Proteolitička aktivacija faktora XIIa na unutrašnjoj I 389-R390 vezi daje teški lanac (371 amino kiselina) i laki lanac (248 amino kiselina). Aktivno mesto kalikreina plazme nalazi se u lakom lancu. Laki lanac kalikrein plazme reaguje sa inhibitorima proteaza, uključujući alfa 2 makroglobulin i C1-inhibitor. Interesantno, heparin značajno ubrzava inhibiciju kalikreina plazme pomoću antitrombina III u prisustvu kininogena visoke molekulske mase (HMVK). U krvi, veći deo kalikreina plazme cirkuliše u kompleksu sa HMWK. Kalikrein plazme cepa HMWK da oslobodi bradikinin. Oslobađanje bradikinina rezultuje povećanjem vaskularne propustljivosti i vazodilatacije (za pregled, Coleman, R., "Contact Activation Pathway", Hemostasis and Thrombosis, str. 103-122, Lippincott Williams & Wilkins (2001); Schmaier A.H., "Contact Activation", Thrombosis and Hemorrhage, str.105-128 (1998)).

[0159] Takođe, poželjno je naći nova jedinjenja sa poboljšanom aktivnošću u in vitro testovima zgrušavanja, u poređenju sa poznatim inhibitorima serin proteaza, kao što su test za aktivirano parcijalno tromboplastinsko vreme (aPTT) ili protrombinsko vreme (PT). (za opis aPTT i PT testova videti, Goodnight, S.H. et al., "Screening Tests of Hemostasis", Disorders of Thrombosis and Hemostasis: A Clinical Guide, 2. izdanje, str.41-51, McGraw-Hill, New York (2001)).

[0160] Takođe je poželjno i bolje pronaći jedinjenja sa povoljnim i poboljšanim karakteristikama u poređenju sa poznatim inhibitorima serinske proteaze, u jednoj ili više od sledećih kategorija koje su date kao primeri i nisu namenjene da budu ograničavajuće: (a) farmakokinetičke osobine, uključujući oralnu biodostupnost, poluživot i klirens; (B) farmaceutske osobine; (C) zahtevi za doziranje; (D) faktori koji smanjuju karakteristike krvne koncentracije od najniže do najviše; (E) faktori koji povećavaju koncentraciju aktivnog leka na enzimu; (F) faktori koji smanjuju odgovornost za kliničku interakciju leka sa lekom; (G) faktori koji smanjuju potencijal za štetne neželjene efekte, uključujući selektivnost u odnosu na druge biološke ciljeve; i (h) faktori koji poboljšavaju troškove proizvodnje ili izvodljivost.

[0161] Prekliničke studije pokazuju značajne antitrombotičke efekte malih molekuslkih inhibitora fakora XIa u modelima zeca i pacova za arterijsku trombozu, pri dozama koje su očuvale hemostazu. (Wong P.C. et al., American Heart Association Scientific Sessions, Abstract No.6118, November 12-15, 2006; Schumacher, W. et al., Journal of Thrombosis and Haemostasis, 3(Suppl.

1):P1228 (2005); Schumacher, W.A. et al., European Journal of Pharmacology, str. 167-174 (2007)). Pored toga, opaženo je da je in vitro produžavanje aPTT pomoću specifičnih XIa inhibitora dobar predskazivač efiaksnosti u našim modelima za trombozu. Tako, in vitro aPTT test može biti korišćen kao surogat za efiaksnost in vivo.

[0162] Kao što je ovde korišćeno, termin "pacijent" obuhvata sve sisarske vrste.

[0163] Kao što je ovde korišćeno, "lečiti" ili "lečenje" pokrivaju lečenje stanja bolesti kod sisara, posebno kod čoveka, i uključuju: (a) inhibiranje stanja bolesti, tj., zaustavljanje njegovog razvoja; i/ili (b) ublažavanje stanja bolesti, tj., uzrokujući regresiju stanja bolesti.

[0164] Kao što je ovde korišćeno, "profilaksa" ili "prevencija" pokriva preventivno lečenje subkliničkog stanja bolesti kod sisara, naročito kod čoveka, usmereno na smanjivanje verovatnoće pojave kliničkog stanja bolesti. Pacijenti su odabrani za preventivnu terapiju na osnovu faktora koji su poznati da povećavaju rizik od oboljevanja od kliničkog stanja bolesti u poređenju sa opštom populacijom. Terapije "profilakse" mogu biti podeljene na (a) primarnu prevenciju i (b) sekundarnu prevenciju. Primarna prevencija je definisana kao lečenje subjekta koji još nije pokazao kliničko stanje bolesti, dok je sekundarna prevencija definisana kao prevencija sekundardnog pojavljivanja iste ili istog ili sličnog kliničkog stanja bolesti.

[0165] Kao što je ovde korišćeno, "redukcija rizika" pokriva terapije koje smanjuju incidencu razvoja kliničkog stanja bolesti. Kao takve, terapije primarne i sekundarne prevencije su primeri redukcije rizika.

[0166] "Terapijski efikasna količina" treba da obuhvati količinu jedinjenja predmetnog pronalaska koja je efikasna kada je administrirana sama ili u kombinaciji da inhibira faktor XIa i/ili kalikrein plazme i/ili da spreči ili leči poremećaje koji su ovde navedeni. Kada se primeni na kombinaciju, termin odnosi se na kombinovane količine aktivnih sastojaka koje rezultuju preventivnim ili terapijskim efektom, bilo da su adminsitrirane u kombinaciji, serijski, ili simultano.

[0167] Termin "tromboza", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na stvaranje ili prisustvo tromba (mn. trombova); zgrušavanje unutar krvnog suda što može uzrokovati ishemiju ili infarkt tkiva koje se snabdeva krvnim sudom. Termin "embolija", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na iznenadno blokiranje arterije ugruškom ili stranim materijalom koji je doveden do njegovog mesta boravišta pomoću strujannja krvi. Termin "tromboembolija", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na obstrukciju krvnog suda sa trombotičkim materijalom izvedenu pomoću strujanja krvi od mesta porekla da zapuše drugi krvni sud. Termin "tromboembolijski poremećaji" podrazumeva i "trombotičke" i "embolijske" poremećaje (definisani iznad).

[0168] Termin "tromboembolijski poremećaji" kao što je ovde korišćeno uključuje arterijske kardiovaskularne tromboembolijske poremećaje, venske kardiovaskularne ili cerebrovaskularne tromboembolijske poremećaje, i tromboembolijske poremećaje u komorama srca u perifernoj cirkulaciji. Termin "tromboembolijski poremećaji" kao što je ovde korišćeno takođe uključuje specifične poremećaje odabrane od, ali bez ograničenja na, nestabilnu anginu ili druge akutne koronarne sindrome, atrijalnu fibrilaciju, prvi ili rekurentni miokardijalni infarkt, ishemijsku iznenadnu smrt, prolazni ishemijski napad, moždani udar, aterosklerozu, perifernu okluzivnu arterijsku bolest, vensku trombozu, trombozu dubokih vena, tromboflebitis, arterijsku emboliju, koronarnu arterijsku trombozu, cerebralnu arterijsku trombozu, cerebralnu emboliju, bubrežnu emboliju, plućnu emboliju, i trombozu koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja pospešuje trombozu. Medicinski implanti ili uređaji obuhvataju, ali bez ograničenja na: prostetičke zaliske, veštačke zaliske, ugradne katetere, stentove, krvne oksigenatore, šantove, vaskularne pristupne portove, vaskularne pomoćne uređaje i veštačka srca ili srčane komore, i graftove krvnih sudova. Procedure obuhvataju, ali bez ograničenja na: kardio-pulmonarni bajpas, perkutanu koronarnu intervenciju, i hemodijalizu. U drugom tehničkom rešenju, termin "tromboembolijski poremećaji" uključuje akutni koronarni sindrom, moždani udar, trombozu dubokih vena, i plućnu emboliju.

[0169] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska za primenu u lečenju tromboembolijskog poremećaja, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, miokardijalnog infarkta, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, tromboze dubokih vena, tromboflebitisa, arterijske embolije, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralne embolije, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja pospešuje trombozu. U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska za primenu u lečenju tromboembolijskog poremećaja, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od akutnog koronarnog sindroma, moždanog udara, venske tromboze, atrijalne fibrilacije, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata i uređaja.

[0170] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska za primenu u primarnoj profilaksi tromboembolijskog poremećaja, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, miokardijalnog infarkta, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, tromboze dubokih vena, tromboflebitisa, arterijske embolije, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralne embolije, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja pospešuje trombozu. U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska za primenu u primarnoj profilaksi tromboembolijskog poremećaja, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od akutnog koronarnog sindroma, moždanog udara, venske tromboze, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata i uređaja.

[0171] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska za primenu u sekundarnoj profilaksi tromboembolijskog poremećaja, gde tromboembolijski poremećaj je odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, rekurentnog miokardijalnog infarkta, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, tromboze dubokih vena, tromboflebitisa, arterijske embolije, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralne embolije, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja pospešuje trombozu. U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska za primenu u sekundarnoj profilaksi tromboembolijskog poremećaja, gde tromboembolijski poremećaj je odabran od akutnog koronarnog sindroma, moždanog udara, atrijalne fibrikacije i venske tromboze.

[0172] Termin "moždani udar", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na embolijski moždani udar ili aterotrombotički moždani udar koji nastaje od okluzivne tromboze u arteriji karotis komunis i arteriji karotis intern, ili intracerebralnim arterijama.

[0173] Primećeno je da tromboza uključuje okluziju krvnih sudova (npr., nakon bajpasa) i ponovnu okluziju (npr., tokom ili posle perkutane transluminarne koronarne angioplastike). Tromboembolijski poremećaji mogu da nastanu iz stanja uključujući ali bez ograničenja na aterosklerozu, hirurgiju ili hirurške komplikacije, produženu imobilizaciju, arterijsku fibrilaciju, kongenitalnu trombofiliju, kancer, dijabetes, efekte lekova ili hormona, i komplikacije u trudnoći.

[0174] Tromboembolijski poremećaji su često povezani sa pacijentima koji imaju aterosklerozu. Faktori rizika za aterosklerozu uključuju ali bez ograničenja na muški pol, starost, hipertenziju, lipidne poremećaje, i dijabetes melitus. Faktori rizika za aterosklerozu su u isto vreme faktori rizika za komplikacije kod ateroskleroze, tj. tromboembolijskih poremećaja.

[0175] Slično, arterijska fibrilacija je često povezana sa tromboembolijskim poremećajima. Faktori rizika za arterijsku fibrilaciju i kasnije tromboembolijske poremećaje uključuju kardiovaskularnu bolest, reumatsku bolest srca, nereumatsku bolest mitralnih zalizaka, hipertenzivnu kardiovaskularnu bolest, hroničnu bolest pluća, i razne ostale srčane abnormalnosti i tirotoksikozu.

[0176] Dijabetes melitus je često povezan sa aterosklerozom i tromboembolijskim poremećajima. Faktori rizika za uobičajeniji tip 2 uključuju ali bez ograničenja na porodičnu istoriju, gojaznost, fizičku neaktivnost, rasu / etničku pripadnost, ranije poremećenu glikemiju našte ili test tolerancije glukoze, istoriju gestacionog dijabetes melitusa ili rađanje “krupne bebe”, hipertenziju, nizak HDL holesterol, i sindrom policističnih jajnika.

[0177] Faktori rizika za kongenitalnu trombofiliju uključuju dobijanje funkcionalnih mutacija u faktorima koagulacije ili gubitak funkcionalnih mutacija u antikoagulantnim ili fibrinolitičkim putevima.

[0178] Tromboza je bila povezana sa različitim tipovima tumora, npr. kancer pankreasa, kancer dojke, tumori mozga, kancer pluća, kancer ovarijuma, kancer prostate, gastrointestinalni maligniteti, i Hočkinov i ne-Hočkinov limfom. Nedavne studije ukazuju na to da učestalost kancera kod pacijenata sa trombozom odražava učestalost određenog tipa kancera u opštoj populaciji (Levitan, N. et al., Medicine (Baltimore), 78(5):285-291 (1999); Levine M. et al., N. Engl. J. Med., 334(11):677-681 (1996); Blom, J.W. et al., JAMA, 293(6):715-722 (2005)). Prema tome, najčešći tumori povezani sa trombozom kod muškaraca su kancer prostate, kolorektalni, moždani i kancer pluća, a kod žena su kancer dojke, jajnika i pluća. Opažena stopa venske tromboembolije (VTE) kod pacijenata sa kancerom je značajna. Različite stope VTE između različitih vrsta tumora su najverovatnije povezane sa selekcijom populacije pacijenata. Pacijenti sa kancerom u riziku od tromboze mogu imati bilo koji ili sve od sledećih faktora rizika: (i) stadijum kancera (tj. prisustvo metastaza), (ii) prisustvo centralnih venskih katetera, (iii) operacija i antikancerske terapije uključujući hemoterapiju i (iv) hormone i antiangiogene lekove. Tako, uobičajena klinička praksa je dozirati pacijente koji imaju uznapredovale tumore sa heparinom ili sa heparinom male molekulske mase kako bi se sprečili tromboembolijski poremećaji. FDA je za ove indikacije odobrila niz preparata heparina male molekulske mase.

[0179] Postoje tri glavne kliničke situacije uzimajući u obzir prevenciju VTE kod medicinskih pacijenata sa kancerom: (i) pacijent je prikovan za krevet tokom produženih perioda vremena; (ii) ambulantni pacijent dobija hemoterapiju ili zračenje; i (iii) pacijent ima ugradne centralne venske katetere. Nefrakcionisani heparin (UFH) i heparin male molekuske mase (LMWH) su efikasni antitrombotički agensi kod kancerskih pacijenata koji se podvrgavaju operaciji. (Mismetti, P. et al., Brutish Journal of Surgery, 88:913-930 (2001).)

A. In Vitro testovi

[0180] Efikasnost jedinjenja predmetnog pronalaska kao inhibitora faktora koagulacije XIa, VIIa, IXa, Xa, XIIa, kalikrein plazme ili trombin, može biti određena korišćenjem relevantne prečišćene serin proteaze, redom, i odgovarajućeg sintetičkog supstrata. Brzina hidrolize hromogenskog ili fluorogenskog supstrata pomoću relevantne serinproteaze je izmerena i u odsustvu i u prisustvu jedinjenja predmetnog pronalaska. Testovi su sprovedeni na sobnoj temperaturi ili na 37°C. Hidroliza supstrata rezultovala je oslobađanjem pNA (para nitroanilin), koje je praćeno spektrofotometrijski merenjem povećanja apsorbance na 405 nm, ili oslobađanjem AMC (amino metilkumarin), koje je praćeno spektrofluorometrijski merenjem povećanja emisije na 460 nm sa ekscitacijom na 380 nm. Smanjenje brzine promene apsorbance ili fluorescence u prisustvu inhibitora ukazuje na enzimsku inhibiciju. Takve metode su poznate prosečnim poznavaocima oblasti. Rezultati ovog testa su prikazani kao inhibitorna konstanta, Ki.

[0181] Određivanja Faktora XIa su načinjena u 50 mM HEPES puferu na pH 7.4 koji sadrži 145 mM NaCl, 5 mM KCl, i 0.1% PEG 8000 (polietilen glikol; JT Baker ili Fisher Scientific). Određivanja su izvršena korišćenjem prečišćenog humanog faktora XIa u finalnoj koncentraciji od 25-200 pM (Haematologic Technologies) i sintetičkog supstrata S-2366 (pyroGlu-Pro-ArgpNA; CHROMOGENIX® ili AnaSpec) u koncentraciji od 0.0002-0.001 M.

[0182] Određivanja Faktora VIIa su izvršena u 0.005 M kalcijum hloridu, 0.15 M natrijum hloridu, 0.05 M HEPES puferu koji sadrži 0.1% PEG 8000 na pH 7.5. Određivanja su izvršena korišćenjem prečišćenog humanog faktora VIIa (Haematologic Technologies) ili rekombinantnog humanog faktora VIIa (Novo Nordisk) a u finalnoj koncentraciji u testu 0.5-10 nM, rekombinantnog solubilnog tkivnog faktora u koncentraciji od 10-40 nM i sintetičkog supstrata H-D-Ile-Pro-ArgpNA (S-2288; CHROMOGENIX® ili BMPM-2; AnaSpec) u koncentraciji od 0.001-0.0075 M.

[0183] Određivanja Faktora IXa su izvršena u 0.005 M kalcijum hlorida, 0.1 M natrijum hlorida, 0.0000001 M Refludan (Berlex), 0.05 M TRIS baze i 0.5% PEG 8000 na pH 7.4. Refludan je dodat da inhibira male količine trombina u komercijalnim preparatima humanog faktora IXa. Određivanja su izvršena korišćenjem prečišćenog humanog faktora IXa (Haematologic Technologies) u finalnoj koncentraciji testa od 20-100 nM i sintetičkog supstrata PCIXA2100-B (CenterChem) ili Pefafluor IXa 3688 (H-D-Leu-Ph'Gly-Arg-AMC; CenterChem) u koncentraciji od 0.0004-0.0005 M.

[0184] Određivanja Faktora Xa su izvršena u 0.1 M natrijum fosfatnom puferu na pH 7.5 koji sadrži 0.2 M natrijum hloridA i 0.5% PEG 8000. Određivanja su izvršena korišćenjem prečišćenog humanog faktora Xa (Haematologic Technologies) u finalnoj koncentraciji testa od 150-1000 pM i sintetičkog supstrata S-2222 (Bz-Ile-Glu (gamma-OMe, 50%)-Gly-Arg-pNA; CHROMOGENIX®) u koncentraciji od 0.0002-0.00035 M.

[0185] Određivanja Faktora XIIa su izvršena u 50 mM HEPES puferu na pH 7.4 koji sadrži 145 mM NaCl, 5 mM KCl, i 0.1% PEG 8000. Određivanja su izvršena korišćenjem prečišćenog humanog faktora XIIa u finalnoj koncentraciji od 4 nM (American Diagnostica) i sintetičkog supstrata SPECTROZYME® #312 (H-D-CHT-Gly-L-Arg-pNA.2AcOH; American Diagnostica) u koncentraciji od 0.00015 M.

[0186] Određivanja kalikreina su izvršena u 0.1 M natrijum fosfatnom puferu pri pH 7.5 koji sadrži 0.1-0.2 M natrijum hloridA i 0.5% PEG 8000. Određivanja su izvršena korišćenjem prečišćenog humanog kalikreina (Enzyme Research Laboratories) u finalnoj koncentraciji testa od 200 pM i sintetičkog supstrata S-2302 (H-(D)-Pro-Phe-Arg-pNA; CHROMOGENIX®) u koncentraciji od 0.00008-0.0004 M.

[0187] Određivanja trombina su izvršena u 0.1 M natrijum fosfatnom puferu na pH 7.5 koji sadrži 0.2 M natrijum hloridA i 0.5% PEG 8000. Određivanja su izvršena korišćenjem prečišćenog humanog alfa trombina (Haematologic Technologies ili Enzyme Research Laboratories) u finalnoj koncentraciji testa od 200-250 pM i sintetičkog supstrata S-2366 (pyroGlu-Pro-Arg-pNA; CHROMOGENIX® ili AnaSpec) u koncentraciji od 0.0002-0.0004 M.

[0188] Mihaelisova konstanta, Km, za hidrolizu supstrata pomoću svake proteaze, je određena na 25 °C ili 37 °C. Vrednosti Kisu određene dopuštanjem proteazi da reaguje sa supstratom u prisustvu inhibitora. Reakcije su ostavljene da se odigravaju tokom perioda od 20-180 minuta (u zavisnosti od proteaze) i brzine (stope promene apsorbance ili fluorescence u odnosu na vreme) su izmerene. Sledeći odnosi su korišćeni da se izračunaju Ki vrednosti:

za kompetitivni inhibitor sa jednim vezujućim mestom; ili

za kompetitivni inhibitor,

gde:

voje brzina kontrole u odsustvu inhibitora;

vs je brzina u prisustvu inhibitora;

I je koncentracija inhibitora;

A je minimalna aktivnost koja preostaje (obično zaključana na nuli);

B je maksimalna aktivnost koja preostaje (obično zaključana na 1.0);

n je Hill-ov koeficijent, mera broja i kooperativnosti potencijalnih vezujućih mesta za inhibitor;

IC50 je koncentracija inhibitora koja proizvodi 50% inhibicije u uslovima testa;

Ki je konstanta disocijacije kompleksa enzim:inhibitor;

S je koncentracija supstrata; i

Kmje Mihaelisova konstanta za supstrat.

[0189] Selektivnost jedinjenja može biti procenjena uzimanjem odnosa Ki vrednosti za datu proteazu sa Kivrednošću za proteazu od interesa (tj., selektivnost za FXIa u odnosu na proteazu P = Kiza proteazu P/ Kiza FXIa). Jedinjenja sa odnosima selektivnosti >20 se smatraju selektivnim. Jedinjenja sa odnosima selektivnosti >100 su poželjna, i jedinjenja sa odnosima selektivnosti > 500 su poželjnija.

[0190] Efikasnost jedinjenja predmetnog pronalaska kao inhibitora koagulacije može biti određena korišćenjem standardnih ili modifikovanih testova zgrušavanja. Porast u vremenu zgrušavanja plazme u prisustvu inhibitora ukazuje na antikoagulaciju. Relativno vreme zgrušavanja je vreme zgrušavanja u prisustvu inhibitora podeljeno vremenom zgrušavanja u odsustvu inhibitora. Rezultati ovog testa mogu biti prikazani kao IC1.5x ili IC2x, koncentracija inhibitora potrebna da se poveća vreme zgrušavanja za 50 ili 100 procenata, redom. IC1.5x ili IC2x je nađena linearnom interpolacijom od relativnog vremena zgrušavanja u odnosu na grafičke podatke koncentracije inhibitora korišćenjem koncentracije inhibitora koja obuhvata IC1.5x ili IC2x.

[0191] Vremena zgrušavanja su određena korišćenjem citrirane normalne humane plazme kao i plazme dobijene od nekoliko animalnih vrsta (npr., pacov, ili zec). Jedinjenje je rezblaženo u plazmi počevši sa 10 mM DMSO osnovnim rastvorom. Finalna koncentracija DMSO je manja od 2%. Testovi zgrušavanja plazme su izvedeni u automatskom analizatoru koagulacije (Sysmex, Dade-Behring, Ilinois). Slično, vremena koagulacije mogu biti određena od laboratorijskih animalnih vrsta ili ljudi kojima su dozirana jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0192] Aktivirano parcijalno tromboplastinsko vreme (aPTT) je određeno korišćenjem ALEXIN® (Trinity Biotech, Ireland) ili ACTIN® (Dade-Behring, Ilinois) praćenjem uputstava u dodatku u pakovanju. Plazma (0.05 mL) je zagrejana do 37 °C tokom 1 minuta. ALEXIN® ili ACTIN® (0.05 mL) je dodat u plazmu i inkubiran tokom dodatnih 2 do 5 minuta. Kalcijum hlorid (25 mM, 0.05 mL) je dodat u reakciju da se započne koagulacija. Vreme zgrušavanja je vreme zgrušavanja u sekundama od momenta kada je kalcijum hlorid dodat dok ugrušak nije detektovan.

[0193] Protrombinsko vreme (PT) je određeno korišćenjem tromboplastina (Thromboplastin C Plus ili INNOVIN®, Dade-Behring, Ilinois) praćenjem uputstava u dodatku u pakovanju. Plazma (0.05 mL) je zagrejana do 37 °C tokom 1 minuta. Tromboplastin (0.1 mL) je dodat u plazmu da se započne koagulacija. Vreme zgrušavanja je vreme u sekundama od momenta kada je tromboplastin dodat dok ugrušak nije detektovan.

[0194] Predstavljeni primeri stavljeni na uvid javnosti ispod su testirani u testu za faktor XIa opisanom iznad i nađeno je da imaju inhibitornu aktivnost za faktor XIa. Opseg inhibitorne aktivnosti faktora XIa (Ki vrednosti) od ≤10 µM (10000 nM) je opažena. Tabela 1 ispod prikazuje vrednosti za faktor XIa Ki vrednosti izmerene za sledeće primere.

Tabela 1

B. In Vivo testovi

[0195] Efikasnost jedinjenja predmetnog pronalaska kao antitrombotičkih agenasa može biti određena korišćenjem relevantnih in vivo modela za trombozu, uključujući In Vivo modele za električno-indukovano trombozu karotidne arterije i In Vivo zečje modele za trombozu arteriovenskog šanta.

a. In Vivo model električno-indukovane tromboze karotidne arterije (ECAT)

[0196] Zečji ECAT model, opisan od strane Wong et al. (J. Pharmacol. Exp. Ther., 295:212-218 (2000)), može biti korišćen u ovoj studiji. Mužjaci novozelandskih belih zečeva su anestezirani ketaminom (50 mg/kg 50 mg/kg/h IM) i ksilazinom (10 mg/kg 10 mg/kg/h IM). Ovi anestetici su obogaćeni po potrebi. Proba za elektromagnetni protok je postavljena na segment izolovane karotidne arterije da se prati protok krvi. Testni agensi ili nosač će biti dati (intravenski, intraperitonealno, subkutano, ili oralno) pre ili posle inicijacije tromboze. Tretiranje lekom pre inicijacije tromboze je korišćeno da se podesi sposobnost testnih agenasa da se spreči i smanji rizik od stvaranja tromba, dok doziranje nakon inicijacije je korišćeno da se podesi sposobnost da se tretira postojeća trombotička bolest. Stvaranje tromba je indukovano električnom stimulacijom karotidne arterije tokom 3 minuta na 4 mA korišćenjem spoljašnje bipolarne elektrode od nerđajućeg čelika. Karotidni protok krvi je meren kontinualno tokom perioda od 90 minuta da se prati trombom-indukovana okluzija. Ukupni karotidni protok krvi tokom 90 minuta je izračunat trapezoidalnim pravilom. Prosečan karotidni protok tokom 90 minuta je određen konvertovanjem ukupnog karotidnog protoka krvi tokom 90 minuta do procenta ukupnog kontrolnog karotidnog protoka krvi, koji bi se dobio ako bi kontrolni protok krvi bio održavan neprekidno tokom 90 minuta. ED50 (doza koja je povećala prosečni karotidni protok krvi tokom 90 minuta za 50% kontrole) jedinjenja koja su procenjena pomoću programa za nelinearnu regresiju najmanjih kvadrata korišćenjem Hill-ove sigmoidne Emaksjednačine (DeltaGraph; SPSS Inc., Čikago, Ilinois).

b. In Vivo zečji model tromboze arterio-venskog (AV) šanta

[0197] Zečji model AV šanta, opisan od strane Wong et al. (Wong, P.C. et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 292:351-357 (2000)), može biti korišćen u ovoj studiji. Mužjaci novozelandskih zečeva su anestezirani sa ketaminom (50 mg/kg 50 mg/kg/h IM) i ksilazinom (10 mg/kg 10 mg/kg/h IM). Ovi anestetici su obogaćeni po potrebi. Femoralna arterija, jugularna vena i femoralna vena su izolovane i katetezirane. AV šant uređaj napunjen fiziološkim rastvorom je povezan između femoralne arterijske i femoralne venske kanile. AV šant uređaj se sastoji od spoljašnjeg dela tigon cevi (dužina = 2.5 cm; unutrašnji prečnik = 4.8 mm). AV šant takođe sadrži 8-cm-dugu 2-0 svilenu nit (Ethicon, Somerville, NJ). Krv teče od femoralne arterije kroz AV-šant u femoralnu venu. Izlaganje krvi koja teče ka svilenoj niti indukuje stvaranje značajnog tromba. Četrdeset minuta kasnije, šant je prekinut i svilena nit prekrivena trombom je izmerena. Test agensi ili nosač će biti dati (intravenski, intraperitonealno, subkutano, ili oralno) pre otvaranja AV šanta. Procenat inhibicije stvaranja tromba je određen za svaku grupu koja se tretira. ID50 vrednosti (doza koja proizvodi 50% inhibicije stvaranja tromba) su procenjene programom nelinearne regresije najmanjih kvadrata korišćenjem Hill-ove sigmoidne Emaksjednačine (DeltaGraph; SPSS Inc., Čikago, Ilinois).

[0198] Antiinflamatorni efekat ovih jedinjenja može biti pokazan u testu ektravazacije sa Evans plavom bojom korišćenjem miševa deficijentnih za C1-esterazni inhibitor. U ovom modelu, miševi su dozirani sa jedinjenje predmetnog pronalaska, Evans plava boja ubrizgana kroz repnu venu, i ekstravazacija plave boje je određena spektrofotometrijskim sredstvima iz tkivnih ekstrakata.

[0199] Sposobnost jedinjenja trenutnog pronalaska da se smanji ili spreči sindrom sistemskog inflamatornog odgovora, na primer, kako je primećeno tokom “on-pump” kardiovaskularnih procedura, može biti testirana in vitro perfuzionim sistemima, ili pomoću “on-pump” hirurških procedura kod većih sisara, uključujući pse i babune. Dobijeni podaci za procenu koristi jedinjenja predmetnog pronalaska uključuju na primer smanjeni gubitak trombocita, smanjene komplekse trombocita / belih krvnih zrnaca, smanjeni nivo neutrofilne elastaze u plazmi, smanjenu aktivaciju faktora komplementa i smanjenu aktivaciju i / ili konzumaciju kontaktnih aktivacionih proteina (kalikrein plazme, faktor XII, faktor XI, kininogen visoke molekulske mase, inhibitori C1-esteraze).

[0200] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe biti korisna kao inhibitori dodatnih serin proteaza, naročito humani trombin, humani kalikrein plazme i humani plazmin. Zbog svog inhibitornog dejstva, ova jedinjenja su naznačena za primenu u prevenciji ili lečenju fizioloških reakcija, uključujući koagulaciju krvi, fibrinolizu, regulaciju krvnog pritiska i inflamaciju, i zarastanje rana katalizovano navedenom klasom enzima. Naročito, jedinjenja imaju korisnost kao lekovi za lečenje bolesti koje proističu iz povećane aktivnosti trombina ranije pomenutih serinskih proteaza, kao što je infarkt miokarda, i kao reagensi koji se koriste kao antikoagulansi u obradi krvi u plazmu za dijagnostičke i druge komercijalne svrhe.

V. FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE, FORMULACIJE I KOMBINACIJE

[0201] Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti administrirana u takvim oralnim doznim oblicima kao tablete, kapsule (od kojih svaka uključuje formulacije sa produženim oslobađanjem ili vremenskim oslobađanjem), pilule, prahove, granule, eliksire, tinkture, suspenzije, sirupe i emulzije. Mogu se takođe administrirati u intravenskom (bolus ili infuzija), intraperitonealnom, subkutanom ili intramuskularnom obliku, svi koristeći dozne oblike poznate prosečnim poznavaocima oblasti. Oni mogu biti administrirani sami, ali će se generalno primenjivati sa farmaceutskim nosačem odabranim na osnovu izabranog načina administracije i standardne farmaceutske prakse.

[0202] Termin "farmaceutska kompozicija" označava kompoziciju koja sadrži jedinjenje predmetnog pronalaska u kombinaciji sa najmanje jednim dodatnim farmaceutski prihvatljivim nosačem. "Farmaceutski prihvatljiv nosač" odnosi se na medijume široko prihvaćene u oblasti za isporučivanje biološki aktivnih sredstava životinjama, posebno sisarima, uključujući, tj., adjuvans, ekscipijens ili nosač, kao što su razblaživači, sredstva za čuvanje, punila, sredstva za regulisanje protoka, sredstva za dezintegraciju, sredstva za vlaženje, sredstva za emulzifikaciju, sredstva za suspendovanje, sredstva za zaslađivanje, sredstva za aromatizaciju, sredstva za parfimiranje, antibakterijska sredstva, sredstva protiv gljivica, sredstva za podmazivanje i sredstva za doziranje, u zavisnosti od prirode načina adminsitracije i doznih oblika. Farmaceutski prihvatljivi nosači su formulisani prema velikom broju faktora koji su u okviru stručnosti prosečnih poznavaoca oblasti. Ovi obuhvataju, bez ograničenja: tip i prirodu aktivnog sastojka koji se formuliše; subjekat kom treba da se administrira kompozicija koja sadrži agens; planirani način administracije kompozicije; i terapijska indikacija koja se cilja. Farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju i vodene i ne-vodene tečne medijume, kao i razne čvrste i polu-čvrste dozne oblike. Takvi nosači mogu da uključe nekoliko različitih sastojaka i aditiva kao dodatak aktivnom agensu, pri čemu se takvi dodatni sastojci uključeni u formulaciju iz različitih razloga, npr., stabilizacija aktivnog agensa, veziva, itd., koji su dobro poznati prosečnim poznavaocima oblasti. Opisi pogodnih farmaceutski prihvatljivih nosača, i faktora koji su uključeni u njihov odabir, su nađeni u raznim odmah dostupnim izvorima kao što su, na primer, Remington's Farmaceutski Sciences, 18. izdanje (1990).

[0203] Dozni režim za jedinjenja predmetnog pronalaska će, naravno, varirati u zavisnosti od poznatih faktora, kao što su farmakodinamske karakteristike osebnog agensa i njegov način i put administracije; vrste, starost, pol, zdravlje, medicinsko stanje, i masa primaoca; priroda i obim simptoma; vrsta istovremenog tretmana; učestalost tretmana; način administracije, bubrežna i hepatična funkcija pacijenta i željeni efekat. Lekar ili veterinar može odrediti i propisati efikasnu količinu leka neophodnog za sprečavanje, odbijanje ili zaustavljanje napretka tromboembolijskog poremećaja.

[0204] Kao opšte uputstvo, dnevna oralna doza svakog aktivnog sastojka, kada se koristi za naznačene efekte, će se kretati između oko 0,001 do oko 1000 mg/kg telesne mase, poželjno između oko 0.01 do oko 100 mg/kg telesne mase dnevno, i najpoželjnije između oko 0.1 do oko 20 mg/kg/dan. Intravenski, najpoželjnije doze će se kretati od oko 0.001 do oko 10 mg/kg/minut tokom infuzije u konstantnoj brzini. Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti administrirana u jednoj dnevnoj dozi, ili se ukupna dnevna doza može administrirati u podeljenim dozama dva, tri ili četiri puta dnevno.

[0205] Jedinjenja ovog pronalaska mogu takođe biti administrirana pomoću parenteralne administracije (npr., intravenski, intraarterijski, intramuskularno ili subkutano. Kada se administrira intra-venski ili intra-arterijski, doza može biti data kontinualno ili naizmenično. Pored toga, formulacija može biti razvijena za intramuskularnu i subkutanu isporuku koja osigurava postepeno oslobađanje aktivnog farmaceutskog sastojka.

[0206] Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti administrirana u intranazalnom obliku preko topikalne primene pogodnih intranazalnih nosača, ili preko transdermalnih puteva, korišćenjem transdermalnih kožnih flastera. Kada je administrirana u obliku transdermalnih sistema isporuke, dozna adminsitracija će, naravno, biti kontinuirana pre nego naizmenična tokom doznom režima.

[0207] Jedinjenja se tipično administriraju u smeši sa odgovarajućim farmaceutskim razblaživačima, ekscipijensima, ili nosačima (koji se zajedno nazivaju farmaceutski nosači) pogodno izabrani u odnosu na planirani oblik administracije, npr. oralne tablete, kapsule, eliksiri i sirupi, i u skladu sa konvencionalnom farmaceutskom praksom.

[0208] Na primer, za oralnu administraciju u obliku tablete ili kapsule, aktivna komponenta leka može se kombinovati sa oralnim, netoksičnim, farmaceutski prihvatljivim, inertnim nosačem kao što su laktoza, skrob, sukroza, glukoza, metil celuloza, magnezijum stearat, dikalcijum fosfat, kalcijum sulfat, manitol, sorbitol i slično; za oralnu administraciju u tečnom obliku, komponente oralnih lekova mogu se kombinovati sa bilo kojim oralnim, netoksičnim, farmaceutski prihvatljivim inertnim nosačem kao što su etanol, glicerol, voda i slično. Pored toga, kada je poželjno ili neophodno, odgovarajuća veziva, lubrikanti, sredstva za dezintegraciju i sredstva za bojenje mogu se takođe uključiti u smešu. Pogodna veziva uključuju skrob, želatin, prirodne šećere kao što su glukoza ili beta-laktoza, kukuruzni zaslađivači, prirodne i sintetičke gume kao što su akacija, tragakant ili natrijum alginat, karboksimetilceluloza, polietilen glikol, voskovi i slično. Lubrikanti koja se koriste u ovim doznim oblicima uključuju natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid i slično. Dezintegratori obuhvataju, bez ograničenja, skrob, metil celulozu, agar, bentonit, ksantan gumu i slično.

[0209] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe biti administrirana u obliku lipozomskih sistema isporučivanja, kao što su male unilamelarne vezikule, velike unilamelarne vezikule, i multilamelarne vezikule. Lipozomi mogu biti takođe formirani od raznih fosfolipida, kao što su holesterol, stearilamin, ili fosfatidilholini.

[0210] Jedinjenja predmetnog pronalaska takođe mogu biti spojena sa rastvorljivim polimerima kao nosačima lekova koji se mogu ciljati. Takvi polimeri mogu uključivati polivinilpirolidon, piran kopolimer, polihidroksipropilmetakrilamid-fenol, polihidroksietilspartamidfenol, ili polietilenoksid-polilizin supstituisani sa palmitoil ostacima. Pored toga, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti spojena sa klasom biorazgradivih polimera korisnih za postizanje kontrolisanog oslobađanja leka, na primer, polimlečne kiseline, poliglikolne kiseline, kopolimera polilmlečne i poliglikolne kiseline, poliepsilon kaprolaktona, polihidroksi buterne kiseline, poliortoesteara, poliacetala, polidihidropirana, policijanoacilata i umreženih ili amfipatskih blok kopolimera hidrogelova.

[0211] Dozni oblici (farmaceutske kompozicije) pogodni za administraciju mogu da sadrže od oko 1 miligrama do oko 100 miligrama aktivnog sastojka po doznoj jedinici. U ovim farmaceutskim kompozicijama aktivni sastojak će obično biti prisutan u količini od oko 0.1-95% po masi na osnovu ukupne mase kompozicije.

[0212] Želatinske kapsule mogu sadržati aktivni sastojak i praškaste nosače, kao što su laktoza, skrob, derivati celuloze, magnezijum stearat, stearinska kiselina i slično. Slični razblaživači se mogu koristiti za proizvodnju kompresovane tableta. I tablete i kapsule se mogu proizvoditi kao proizvodi sa produženim oslobađanjem kako bi se obezbedilo kontinuirano oslobađanje leka tokom perioda od nekoliko sati. Kompresovane tablete mogu biti obložene šećerom ili filmom kako bi se maskirao neugodan ukus i zaštitila tableta i od atmosfere, ili enterično obložene za selektivnu dezintegraciju u gastrointestinalnom traktu.

[0213] Tečni dozni oblici za oralnu administraciju mogu sadržati boje i arome da bi postali prihvatljiviji za pacijenta.

[0214] Generalno, pogodni nosači za parenteralne rastvore su voda, pogodno ulje, fiziološki rastvor, vodena dekstroza (glukoza) i slični rastvori šećera i glikoli kao što su propilen glikol ili polietilen glikol. Rastvori za parenteralnu administraciju poželjno sadrže soli aktivne supstance rastvorne u vodi, pogodna sredstva za stabilizaciju i, ako je potrebno, puferske supstance. Antioksidacioni agensi kao što su natrijum bisulfit, natrijum sulfit ili askorbinska kiselina, bilo samostalno ili kombinovano, pogodni su agensi za stabilizaciju. Takođe se koriste limunska kiselina i njene soli i natrijum EDTA. Pored toga, parenteralni rastvori mogu sadržati konzervanse, kao što su benzalkonijum hlorid, metil ili propil-paraben i hlorobutanol.

[0215] Pogodni farmaceutski nosači su opisani u Remington's Farmaceutski Sciences, Mack Publishing Company, standardni tekst koji služi kao referenca u ovoj oblasti.

[0216] Kada su jedinjenja ovog pronalaska kombinovana sa drugim antikoagulantnim agensima, na primer, dnevna doza može biti od oko 0.1 do oko 100 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska i od oko 0.1 do oko 100 miligrama po kilogramu telesne mase pacijenta. Za tabletni dozni oblik, jedinjenja ovog pronalaska obično mogu biti prisutna u količini od oko 5 do oko 100 miligrama po doznoj jedinici, a drugi anti-koagulans u količini od oko 1 do oko 50 miligrama po doznoj jedinici.

[0217] Kada su jedinjenja predmetnog pronalaska administrirana u kombinaciji sa antitrombocitnim agensom, kao opšta smernica, tipično dnevna doza može biti oko 0.01 do oko 25 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska i oko 50 do oko 150 miligrama antitrombocitnog agensa, poželjno oko 0.1 do oko 1 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska i oko 1 do oko 3 miligrama antitrombocitnih agenasa, po kilogramu telesne mase pacijenta.

[0218] Kada su jedinjenja predmetnog pronalaska administrirana u kombinaciji sa trombolitičkim agesnom, tipično dnevna doza može biti oko 0.1 do oko 1 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska, po kilogramu telesne mase pacijenta i, u slučaju trombolitičkih agenasa, uobičajena doza trombolitičkog agensa kada je administriran sam može biti smanjena za oko 50-80% kada je administriran sa jedinjenjem predmetnog pronalaska.

[0219] Naročito kada se obezbedi pojedinačna dozna jedinica, potencijal postoji za hemijsku interakciju između kombinovanih aktivnih sastojaka. Iz tog razloga, kada su jedinjenje predmetnog pronalaska i drugi terapijski agens kombinovani u pojedinačnoj doznoj jedinici, oni se formulišu tako da iako su aktivni sastojci kombinovani u pojedinačnoj doznoj jedinici, fizički kontakt između aktivnih sastojaka je minimiziran (to jest, smanjen). Na primer, jedan aktivni sastojak može biti enterično obložen. Enteričnim oblaganjem jednog od aktivnih sastojaka, moguće je ne samo da se minimizira kontakt između kombinovanih aktivnih sastojaka, već je takođe moguće kontrolisati oslobađanje jedne od ovih komponenata u gastrointestinalnom traktu tako da jedna od ovih komponenti nije oslobođena u želucu, već je oslobođena u crevima. Jedan od aktivnih sastojaka takođe može biti obložen materijalom koji utiče na produženo oslobađanje kroz gastrointestinalni trakt i takođe služi da minimizira fizički kontakt između kombinovanih aktivnih sastojaka. Pored toga, komponenta sa produženim oslobađanjem može biti dodatno enterično obložena tako da se oslobađanje ove komponente javlja samo u crevima. Još jedan pristup bi uključivao formulaciju kombinovanog proizvoda u kojem je jedna komponenta obložena polimerom za produženo i/ili enterično oslobađanje, i druga komponenta je takođe obložena polimerom, kao što su hidroksipropil metilceluloza (HPMC) niskog stepene viskoznosti ili drugi odgovarajući materijali kao što je poznato u oblasti, kako bi se dalje razdvojile aktivne komponente. Polimerni premaz služi da stvori dodatnu prepreku za interakciju sa drugom komponentom.

[0220] Ovi, kao i drugi načini minimiziranja kontakta između komponenata kombinovanih proizvoda predmetnog pronalaska, bilo da se administriraju u pojedinačnom doznom obliku ili u razdvojenim oblicima istovremeno na isti način, biće lako razumljivo prosečnim poznavaocima oblasti, nakon što dobiju informacije iz predmetne objave.

[0221] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e) odabrane od otvarača kalijumskih kanala, blokatora kalijumskih kanala, blokatora kalcijumskih kanala, inhibitora natrijum vodonične razmene, antiaritmijskih agenasa, antiaterosklerotičnih agenasa, antikoagulanasa, antitrombotičkih agenasa, protrombolitičkih agenasa, antagonista fibrinogena, diuretika, antihipertenzivnih agenasa, ATPaznih inhibitora, antagonista mineralokortikoidnog receptora, fosfodiesteraznih inhibitora, antidijabetičnih agenasa, anti-inflamatornih agenasa, antioksidanasa, modulatora angiogeneze, antiosteoporoznih agenasa, terapija hormonske zamene, modulatore hormonskih receptora, oralnih kontraceptiva, agenasa protiv gojaznosti, antidepresiva, sredstava protiv anksioznosti, antipsihotika, antiproliferativnih agenasa, antitumorskih agenasa, antiulceoznih i agenasa protiv bolesti gastroezofagealnog refluksa, agenasa hormona rasta i/ili sekretagoga hormona rasta, mimetika štitne žlezde, antiinfektivnih agenasa, antibakterijskih agenasa, antivirusnih agenasa, antifungalnih agenasa, sredstva za snižavanje holesterola/ ipida i terapija lipidnog profila, i sredstva koja imitiraju ishemijsko predkondicioniranje i/ili reverzibilna redukcija srčane funkcije nakon reperfuzije (miocardial stunning) ili njihovu kombinaciju.

[0222] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e) odabrane od antiaritmijskog agensa, antihipertenzivnog agensa, antikoagulantnog agensa, antitrombocitnog agensa, agensa koji inhibira trombin, trombolitičkog agensa, fibrinolitičkog agensa, blokatora kalcijumovog kanala, blokatora kalijumovog kanala, agensa koji snižava holesterol/lipide, ili njihove kombinacije.

[0223] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e) odabrane od varfarina, nefrakcionisanog heparina, heparina male molekulske mase, sintetičkog pentasaharida, hirudina, argatrobana, aspirina, ibuprofena, naproksena, sulindaka, indometacina, mefenamata, dipiridamola, droksikama, diklofenaka, sulfinpirazona, piroksikama, tiklopidina, klopidogrela, tirofibana, eptifibatidea, abciksimaba, melagatrana, ksimelagatrana, disulfatohirudina, aktivatora tkivnog plazminogena, modifikovanog aktivatora tkivnog plazminogena, anistreplaze, urokinaze, i streptokinaze, ili njihove kombinacije.

[0224] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju u kojoj je dodatni terapijski agens antihipertenzivni agens koji je odabran od ACE inhibitora, antagonista AT-1 receptora, antagonista beta-adrenergičnih receptora, antagonista ETA receptora, antagonista dvostrukih dual ETA/AT-1 receptora, reninskih inhibitora (allskerin) i vasopepsidaznih inhibitora, antiartmijskog agensa odabranog od IKur inhibitora, antikoagulansa odabranog od trombinskih inhibitora, antitrombin-III aktivatora, heparin ko-faktor II aktivatora, drugih inhibitora faktora XIa, drugih inhibitora kalikreina, antagonista inhibitora plazminogenskog aktivatora (PAI-1), inhibitora trombin aktivirajućih inhibitora (TAFI), inhibitora faktora VIIa, inhibitora faktora Ixa, i inhibitora faktora Xa, ili antitrombocitnog agensa koji je odabran od GPIIb/IIIa blokatora, GP Ib/IX blokatora, antagonista proteazom aktiviranog receptora 1 (PAR-1), antagonista proteazom aktiviranog receptora 4 (PAR-4), EP3 antagonista prostaglandin E2 receptora, antagonista kolagenskog receptora, inhibitora fosfodiesteraze-III, antagonista P2Y1 receptora, P2Y12 antagonista, tantagonista receptora tromboksana, inhibitora cikloksigenaze-1, i aspirina, ili njihove kombinacije.

[0225] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompozicija, gde dodatni terapijski agens(i) su antitrombocitni agens ili njihova kombinacija.

[0226] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, gde dodatni terapijski agens je antitrombocitni agens klopidogrel.

[0227] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti administrirana sama ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapijskih agenasa. Pod "administriran u kombinaciji” ili “kombinovana terapija” misli se na to da su jedinjenje predmetnog pronalaska ili jedan ili više dodatnih terapijskih agenasa administrirani istovremeno sisaru koji se leči. Kada se administrira u kombinaciji, svaka komponenta može da se administrira istovremeno ili sekvencijalno po bilo kom redu u različitim vremenskim intervalima. Tako, svaka komponenta može da se administrira odvojeno, ali dovoljno blizu u vremenu, kako bi se postigao željeni terapijski efekat.

[0228] Jedinjenja koja mogu biti administrirana u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska obuhvataju, ali bez ograničenja na, antikoagulante, anti-trombinske agense, antitrombocitne agense, fibrinolitike, hipolipidemijska sredstva, antihipertenzivne agense i antiishemijske agense.

[0229] Drugi antikoagulantni agensi (ili agensi koji inhibiraju koagulaciju) koji mogu biti korišćeni u kombinaciji sa jedinjenjima ovog pronalaska uključuju varfarin, heparin (ili nefrakcionisani heparin ili bilo koji dostupan heparin male molekulske mase, na primer LOVENOX®), sintetički Pentasaharid, direktno delujuće trombinske inhibitore uključujući hirudin i argatroban, kaoi druge inhibitore faktora VIIa, inhibitore faktora IXa, inhibitore faktora Xa (npr., ARIXTRA®, apiksaban, rivaroksaban, LY-517717, DU-176b, DX-9065a, i one stavljene na uvid javnosti u WO 98/57951, WO 03/026652, WO 01/047919, i WO 00/076970), inhibitore faktora XIa, i inhibitore aktiviranog TAFI i PAI-1 poznate u oblasti.

[0230] Termin antitrombocitni agensi (ili agensi koji inhibiraju trombocite), kao što je ovde korišćeno, označava agense koji inhibiraju funkciju trombocita, na primer, inhibiranjem agregacije, adhezije ili sekrecije granularnog sadržaja trombocita. Takvi agensi obuhvataju, ali bez ograničenja na, razne poznate nesteroidne lekove (NSAIDs) kao što su acetaminofen, aspirin, kodein, diklofenak, droksikam, fentainl, ibuprofen, indometacin, ketorolak, mefenamat, morfin, naproksen, fenacetin, piroksikam, sufentanil, sulfinpirazon, sulindak, i farmaceutski prihvatljive soli ili prolekovi istih. Od NSAID, aspirin (acetilsalicilna kiselina ili ASA) i piroksikam su poželjni. Drugi pogodni agensi koji inhibiraju trombocite uključuju antagoniste glikoproteina IIb/IIIa (npr., tirofiban, eptifibatid, abciksimab, i integrelin), antagoniste tromboksan-A2-receptora (npr., ifetroban), inhibitore tromboksan-A-sintetaze, inhibitore fosfodiesteraze-III (PDE-III) (npr., dipiridamol, cilostazol), i PDE-V inhibitori (kao što je sildenafil), antagoniste proteazom-aktiviranog receptora 1 (PAR-1) (npr., E-5555, SCH-530348, SCH-203099, SCH-529153 i SCH-205831), i farmaceutski prihvatljive soli ili prolekovi istih.

[0231] Drugi primeri pogodnih antitrombocitnih agenasa za primenu u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska, sa ili bez aspirina, su antagonisti ADP (adenozin difosfat) receptora, poželjno antagonisti purinergičnih receptora P2Y1i P2Y12,sa P2Y12koji su čak još poželjniji. Poželjni antagonisti P2Y12 receptora uključuju klopidogrel, tiklopidin, prasugrel, tikagrelor, i kangrelor, i farmaceutski prihvatljive soli ili prolekove istih. Tiklopidin i klopidogrel su takođe poželjna jedinjenja pošto su poznata da su blaža od aspirina na gastro-intestinalni trakt u upotrebi. Klopidogrel je još poželjniji agens.

[0232] Poželjni primer je trostruka kombinacija jedinjenja predmetnog pronalaska, aspirina, i drugog antitrombocitnog agensa. Poželjno, antitrombocitni agens je klopidogrel ili prasugrel, poželjnije klopidogrel.

[0233] Termin inhibitori trombina (ili anti-trombinski agensi), kao što je ovde korišćeno, označava inhibitore serin proteaznog trombina. Inhibiranjem trombina, razni procesi posredovani trombinom, kao što su aktivacija trombocita posredovana trombinom (to jest, na primer, agregacija trombocita, i/ili lučenje granularnog sadržaja trombocita uključujući serotonin) i/ili stvaranje fibrina su poremećeni. Nekoliko trombinskih inhibitora je poznato prosečnom poznavaocu oblasti i ovi inhibitori su predviđeni da se koriste u kombinaciji sa predmetnim jedinjenjima. Takvi inhibitori obuhvataju, ali bez ograničenja na, boroargininske derivative, boropeptide, heparine, hirudin, argatroban, dabigatran, AZD-0837, i one stavljene na uvid javnosti u WO 98/37075 i WO 02/044145, i farmaceutski prihvatljive soli i prolekove istih. Boroargininski derivati i boropeptidi uključuju N-acetil i peptidne derivate boronske kiseline kao što su C-terminalni derivati aaminoboronske kiseline lizina, ornitina, arginina, homoarginina i odgovarajućih izotiouronijumskih analoga istih. Termin hirudin, kao što je ovde korišćeno, uključuje pogodne derivate ili analoge hirudina, koji se ovde nazivaju hirulogi, kao što je disulfatohirudin.

[0234] Termin trombolitički (ili fibrinolitički) agensi (ili trombolitici ili fibrinolitici), kao što je ovde korišćeno, označavaju agense koji liziraju krvne ugruške (trombove). Takvi agensi uključuju aktivator tkivnog plazminogena (TPA, prirodni ili rekombinantni) i njegov modifikovani oblik, anistreplazu, urokinazu, streptokinazu, tenekteplazu (TNK), lanoteplazu (nPA), inhibitore faktora VIIa, inhibitore trombina, inhibitore faktora IXa, Xa, i XIa, PAI-I inhibitori (tj., inaktivatore inhibitora aktivatora tkivnog plazminogena), inhibitore aktiviranog TAFI, inhibitore alfa-2-antiplazmina, i anizoilovani plazminogenski streptokinazni aktivatorski kompleks, uključujući farmaceutski prihvatljive soli ili prolekove istih. Termin anistreplaza, kao što je ovde korišćeno, odnosi se na anizoilovani plazminogen streptokinaza aktivatorski kompleks, kako je opisano, na primer, u Evropskoj patentnoj prijavi 028,489. Termin urokinaza, kao što je ovde korišćeno, treba da označi i duplu i pojedinačno urokinazu, pri čemu je druga takođe označena ovde kao prourokinaza.

[0235] Primeri pogodnih agenasa za snižavanje holesterola/lipida i terapija lipidnog profila za primenu u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska uključuju HMG-CoA reduktazne inhibitore (npr., pravastatin, lovastatin, simvastatin, fluvastatin, atorvastatin, rosuvastatin, i druge statine), modulatori aktivnosti receptora za lipoprotein male gustine (LDL) (npr., HOE-402, PCSK9 inhibitori), sekvestranti žučne kiseline (npr., holestiramin i kolestipol), nikotinska kiselina ili njeni derivati (npr., NIASPAN®), modulatori GPR109B (receptor nikotinske kiseline), derivati fenofibrinske kiseline (npr., gemfibrozil, klofibrat, fenofibrat i benzafibrat) i drugi alfa modulatori peroksizomskih proliferatorom-aktiviranih receptora (PPAR), PPARdelta modulatori (npr., GW-501516), PPARgamma modulatori (npr., rosiglitazon), jedinjenja koja imaju višestruke funkcionalnosti za modulaciju aktivnosti raznih kombinacija PPARalfa, PPARgama i PPARdelta, probukol ili njegovi derivati (npr., AGI-1067), inhibitori apsorpcije holesterola i/ili inhibitori Niemann-Pick C1-sličnog transportera (npr., ezetimib), inhibitori transferskih proteina holesterol estra (npr., CP-529414), inhibitori skvalen sintaze i/ili inhibitori skvalen epoksidaze ili njihove smeše, acil koenzim A: inhibitori holesteril aciltransferaze (ACAT) 1 , ACAT2 inhibitori, dvostruki ACAT1/2 inhibitori, inhibitori transporta ilealne žučne kiseline (ili inhibitori transporta apikalne natrijum ko-zavisne žučne kiseline), inhibitori proteina za transfer mickrozomalnih triglicerida, alfa modulatori jetrinog-X-receptora (LXR), LXRbeta modulatori, LXR dvostruki alfa/beta modulatori, FXR modulatori, omega 3 masne kiseline (npr., 3-PUFA), biljni stanoli i/ili estri masnih ksielina biljnih stanola (npr., sitostanol estar korišćen u BENECOL® margarinu), endotelni lipazni inhibitori, i HDL funkcionalni mimetici koji kativiraju reverzni transport holesterolat (npr., apoAI derivativ ili apoAI peptidni mimetici).

[0236] Jedinjenja predmetnog pronalaska su takođe korisna kao standardna ili referentna jedinjenja, na primer kao standard za kvalitet ili kontrolu, u testovima ili esejima koji uključuju inhibiciju trombina, faktora VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili kalikreina plazme. Takva jedinjenja mogu biti obezbeđena u komercijalnom kitu, na primer, za primenu u farmaceutskom istraživanju koje uključuje trombin, faktor VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili kalikrein plazme. XIa. Na primer, jedinjenje predmetnog pronalaska može biti korišćeno kao referenca u eseju da se poredi njegova poznata aktivnost sa jedinjenjem sa nepoznatom aktivnošću. Ovo bi uverilo eksperimentatora da je esej pravilno izveden i obezbedilo osnovu za poređenje, naročito ako je test jedinjenje derivat referentnog jedinjenja. Kada se razvijaju novi eseji ili protokoli, jedinjenja u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu biti korišćena da se testira njhova efikasnost.

[0237] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe biti korišćena u dijagnostičkim testovima koji uključuju trombin, faktor VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili kalikrein plazme. Na primer, prisustvo trombina, faktora VIIa, IXa, Xa XIa, i/ili kalikreina plazme u nepoznatom uzorku može biti određeno dodavanjem relevatnog hromogenskog supstrata, na primer S2366 za faktor XIa, u seriju rastvora koji sadrže test uzorak i opciono jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska. Ako je primećena proizvodnja pNA u rastvorima koji sadrže test uzoraka ali je u prisustvu jedinjenja predmetnog pronalaska, tada bi moglo da se zaključi da je bio prisutan faktor XIa.

[0238] Veoma potentna i selektivna jedinjenja predmetnog pronalaska, ona koja imaju Kivrednosti manja od ili jednaka 0.001 µM u odnosu na ciljnu proteazu i veće od ili jednake 0.1 µM u odnosu na druge proteaze, mogu takođe biti korišćena u dijagnostičke svrhe uključujući kvantifikaciju trombina, faktora, faktor VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili kalikreina plazme u serumskim uzorcima. Na primer, količina faktora XIa u serumskim uzorcima može biti određena pažljivom titracijom proteazne aktivnosti u prisustvu relevantnog hromogenskog supstrata, S2366, sa potentnim i selektivnim inhibitorom faktora Xia predmetnog pronalaska.

[0239] Predmetni pronalazak takođe obuhvata predmet proizvodnje. Kao što je ovde korišćeno, predmet proizvodnje treba da obuhvati, ali da nije ograničen na, kitove i pakovanja. Predmet proizvodnje predmetnog pronalaska, sadrži: (a) prvu posudu; (b) farmaceutsku kompoziciju lociranu unutar prve posude, gde kompozicija, sadrži: prvi terapijski agens, kojis adrži: jedinjenje predmetnog pronalaska ili oblik njegove farmaceutski prihvatljive soli; i, (c) dodatak u pakovanju koji navodi da farmaceutska kompozicija može biti korišćena za lečenje tromboembolijskog i/ili inflamatornog poremećaja (kao što je prethodno definisano). U drugom tehničkom rešenju, dodatak u pakovanju navodi da farmaceutska kompozicija može biti korišćena u kombinaciji (kao što je prethodno definisano) sa drugim terapijskim agensom da se leči tromboembolijski i/ili inflamatorni poremećaj. Predmet proizvodnje može dalje sadrži: (d) drugu posudu, gde komponente (a) i (b) su locirane unutar druge posude i komponenta c) je locirana unutar ili na spoljašnjoj strani druge posude. Lociran unutar prve i druge posude znači da odgovarajući kontejner zadržava predmet unutar svojih granica.

[0240] Prva posuda je posuda koja se koristi za držanje farmaceutske kompozicije. Ova posuda može biti za proizvodnju, skladištenje, isporučivanje, i/ili individualnu/masovnu prodaju. Prva posuda treba da pokrije bocu, teglu, bočicu, flask, špric, epruvetu (npr., za pripremanje kreme) ili bilo koje druge posude koja se koristi za proizvodnju, držanje, čuvanje ili distribuciju farmaceutskog proizvoda.

[0241] Druga posuda je ona korišćena da sadrži prvu posudu i, opciono, dodatak u pakovanju. Primeri druge posude obuhvataju, ali bez ograničenja na, kutije (npr., kartonske ili plastične), sanduci, kartone, kese (npr., papirne ili plastične kese), torbe i vrećice. Dodatak u pakovanju mogu biti fizički prikačeni izvan prve posude preko trake, lepka, heftalice, ili drugom metodom kačenja, ili može biti u drugoj posudi bez ikakvih fizičkih sredstava za kačenje na prvu posudu. Alternativno, dodatak u pakovanju je lociran na spoljašnjoj strani druge posude. Kada je lociran na spoljašnjoj strani druge posude, poželjno je da je dodatak u pakovanju je fizički prikačen pomoću trake, lepka, heftalice, ili drugom metodom kačenja. Alternativno, može biti u blizini ili dodirivati spoljašnjost druge posude bez fizičkog povezivanja.

[0242] Dodatak u pakovanju je etiketa, oznaka, znak, itd. koji navodi informaciju koja se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja je locirana unutar prve posude. Navedena informacija će obično biti određena od strane regulatorne agencije koja upravlja oblašću u kojoj će predmet proizvodnje biti prodavan (npr., Američka administracija za hranu i lekove). Poželjno, dodatak u pakovanju specifično navodi indikacije za koje je odobrena farmaceutska kompozicija. Dodatak u pakovanju može biti napravljen od bilo kog materijala sa kog osoba može da pročita infomaciju sadržanu na njoj ili u njoj. Poželjno, dodatak u pakovanju je materijal koji može da se štampa (npr., papir, plastika, karton folija, lepljivi papirić ili plastika, itd.) na kome može biti formirana željena informacija (npr., štampa ili aplicira).

[0243] Druge osobine predmetnog pronalaska postaće očigledne tokom sledećih opisa izvođenja koja služe kao primer koji su dati za ilustraciju predmetnog pronalaska i nisu namenjeni da ih ograničavaju. Sledeći primeri su pripremljeni, izolovani i okarakterisani koristeći metode stavljene ovde na uvid javnosti.

VI. OPŠTA SINTEZA UKLJUČUJUĆI ŠEME

[0244] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti sintetisana pomoću više metoda dostupnih prosečnim poznavaocima organske hemije (Maffrand, J.P. et al., Heterocycles, 16(1):35-37 (1981)). Sheme opšte sinteze za pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska su opisane ispod. Ove sheme su ilustrativne i ne treba da ograniče moguće tehnike koje prosečan poznavalac oblasti može da koristi da bi pripremio jedinjenja stavljena ovde na uvid javnosti. Različite metode za pripremu jedinjenja predmetnog pronalaska će biti očigledne prosečnim poznavaocima oblasti. Dodatno, razni koraci u sintezi mogu biti izvedeni u alternativnoj sekvenci u cilju da se dobiju željeno jedinjenje ili jedinjenja.

[0245] Primeri jedinjenja predmetnog pronalaska pripremljeni metodama koje su opisane u opštim shemama su date u odeljcima sa intermedijerima i primerima koji su predstavljeni u daljem tekstu. Jedinjenja iz primera su tipično pripremljena kao racemske smeše. Priprema homohiralnih primera može biti izvedena pomoću tehnika koje su poznate prosečnom poznavaocu oblasti. Na primer, homohiralna jedinjenja mogu biti pripremljena razdvajanjem racemskih proizvoda pomoću preparativne HPLC na hiralnoj fazi. Alternativno, jedinjenja iz primera mogu biti pripremljena metodama koje su poznate da daju proizvode bogate enantiomerima. Ovi obuhvataju, ali bez ograničenja na, inkorporiranje hiralnih pomoćnih funkcionalnosti u racemske intermedijere koji služe za kontrolu diastereoselektivnosti transformacija, obezbeđujući enantio-obogaćene proizvode nakon cepanja hiralnog pomoćnog sredstva.

[0246] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti pripremljena na nekoliko načina poznatih prosečnom poznavaocu oblasti organske sinteze. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti sintetisana korišćenjem metoda opisanih ispod, zajedno sa sintteičkim metodama koje su poznate u oblasti hemije organskih sinteza, ili varijacijama posle toga kao što cene prosečni poznavaoci oblasti. Poželjni metode obuhvataju, ali bez ograničenja na, one opisane ispod. Reakcije se izvode u rastvaraču ili smeši rastvarača koji odgovaraju reagensima i materijalima koji su upotrebljeni i pogodni za izvršene transformacije. Prosečni poznavaoci oblasti će razumeti da funkcionalnost prisutna na molekulu treba da bude u skladu sa predloženim transformacijama. Ovo će ponekad zahtevati procenu da se modifikuje redosled koraka sinteze ili da se odabere jedna posebna shema procesa nad drugom, kako bi se dobilo željeno jedinjenje predmetnog pronalaska.

[0247] Takođe će biti prepoznato da još jedno veliko razmatranje u planiranju bilo kojeg puta sinteze u ovoj oblasti je razumni izbor zaštitne grupe koja se koristi za zaštitu reaktivnih funkcionalnih grupa prisutnih u jedinjenjima opisanim u ovom pronalasku. Merodavni izveštaj koji opisuje mnoge alternative za obučenog praktičara je Greene et al. (Protective Groups in Organic Synthesis, 4. Izdanje, Wiley-Interscience (2006)).

[0248] Određeni analozi 2-bromoacetofenona (1b) koji nisu komercijalno dostupni ali su korišćeni u predmetnom pronalasku mogu biti sintetisani od komercijalno dostupnih početnih materijala kako je opisano u Shemi 1. Derivati acetofenona 1a mogu biti tretirani sa reagensom za brominaciju kao što je brom u rastvaraču kao što je CHCl3da se dobije 1b. Alternativno, acetofenonski derivati 1a mogu biti tretirani ili sa bakar (II) bromidom u rastvaraču kao što je EtOAc na povišenoj temperaturi ili feniltrimetilamonijum tribromidom u rastvaraču kao što je THF na niskoj temperaturi da se obezbedi 1b. Derivati benzoeve kiseline 1c mogu biti tretirani sekvencijalno sa oksalil hloridom u pogodnom rastvaraču, kao što je DCM, koji sadrži par kapi DMF, i zatim tretirani sa trimetilsilildiazometanom u pogodnom rastvaraču ili kombinaciji rastvarača, kao što su ACN i heksan. Intermedijer diazoketon je izolovan i tretiran sa vodenim rastvorom bromovodonične kiseline i DCM da se obezbedi 1b. Alternativno derivati benzoeve kiseline 1c mogu biti konvertovani u acetofenonske derivate 1a i u tri koraka kao što je opisano u Shemi 1. Alternativno, Stille-ovo kuplovanje između pogodno supstituisanog aril halida ili triflata i tributil-(1-etoksivinil) stanana sa paladijumskim katalizatorom, kao što je bis-(trifenilfosfin)paladijum dihlorid, u pogodnom rastvaraču, kao što je toluen, na povišenoj temperaturi daje enol etar 1e, koji zatim može biti konvertovan u 1b sa N-bromosukcinimidom.

[0249] Triazolne kiseline ovog pronalaska kao što je 2c, 2d, 2e, 2f mogu lako biti pripremljene od odmah dostupnih anilina u procesu od tri koraka izloženom u Shemi 2. Formiranje arilazid (2b) intermedijera putem diazotizacije i zamena sa natrijum azidom praćeno sa kondenzacijom sa odgovarajućim acetilenskim jedinjenjima i uklanjanje zaštitnih grupa poznatih prosečnim poznavaocima oblasti će dati intermedijere kao što je 2c. Kondenzacija arilazida sa ili malonatima ili ketoestrima praćena hidrolizom bi trebala da da intermedijere kao što su 2d, 2e i 2f. U slučajevima gde anilini nisu dostupni, odgovarajuće arilkarboksilne kiseline mogu biti korišćene koje su zatim konvertovane do anilina pomoću Curtius preuređenja. Alternativno haloaril intermedijeri mogu biti tretirani sa litijumom putem BuLi i izreagovani sa CO2da se dobiju odgovarajuće karboksilne kiseline koje zatim mogu biti konvertovane u aniline kao što je izloženo ispod.

[0250] Supstituisani hidrazin (3a) ovog pronalaska može biti dobijen iz komercijalnih izvora ili može biti napravljen od odgovarajućih anilina putem diazotizacije praćeno sa redukcijom sa kalaj hloridom. Ovi mogu reagovati ili direktno ili nakon izolacije sa odgovarajućim malononitrilom da se dobije aminopirazol kao što je jedinjenje 3b. Tretman 3b sa izoamilnitritom u THF na povišenim temperaturama treba da obezbedi potrebni pirazol intermedijer koji je hidrolizovan da se dobiju pirazolski kiseli intermedijeri ovog pronalaska kao što je 3c. Pored toga amino pirazol intermedijeri ovog pronalaska mogu biti dobijeni hidrolizom estra što će dati 3d. Diazotizacija amino segmenta kao u 3b u fluorobornoj kiselini praćeno zagrevanjem na visokoj temperaturi bi trebalo zatim da obezbedi fluoropirazol intermedijere kao što je 3e. Odgovarajuće supstituisani hidrazini mogu biti kondenzovani sa (E)-etil 2-((dimetilamino)metilen)-3-oksobutanoatom da se dobiju, nakon hidrolize, metil pirazol derivati 3f.

[0251] Alternativni pristupi pirazolima mogu takođe biti dobijeni putem Chan-Lam kuplovanja kao što je prikazano na Shemi 4. Potrebni pirazol (4b) i odgovarajuće supstituisane borne kiseline (4a) su komercijalno dostupne. Alternativno ovi entiteti mogu biti kuplovani putem metodolgije Ullman kuplovanja sa CuI, K2CO3u DMSO na 130 °C. U ovim slučajevima derivati boronske kiseline bi bili suptituisani sa arilbromidima li jodidima.

[0252] Imidazol kiseline ovog pronalaska kao što je 4af i 4ag mogu biti pripremljene kao što je izloženo u Shemi 4a. Ullman kuplovanje između odgovarajuće supstituisanog imidazola 4aa i odgovarajuće supstituisanog arilhalida 4ab može da obezbedi imidazol derivate 4ad i 4ae u jednom koraku. Hidroliza estra će generisati imidazol kiseline 4af i 4ag. Alternativno, odgovarajuće supstituisani imidazol 4aa može biti kuplovan za odgovarajuće supstituisanu arilboronsku kiselinu 4ac korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Sreedhar (Synthesis, 5:795 (2008)). Alternativni pristupi imidazol derivatima 4ad i 4ae mogu biti postignuti korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Gomez-Sanchez (J. Heterocyclic Chem., 24:1757 (1987)). Kondenzacija etil nitroacetata, trietil ortoformata, i odgovarajuće supstituisanog anilina (4ah) može da obezbedi etil 3-arilamino-2-nitroakrilat 4ai. Derivati etil 3-arilamino-2-nitrokrotonata 4aj mogu biti pripremljeni reagovanjem etil 3-etoksi-2-nitrokrotonat sa odgovarajuće supstituisanim anilinom 4ah. Reagovanjem jedinjenja 4ai i 4aj sa trietil ortoformatom i platinom na ugljeniku u atmosferi vodonika na povišenoj temperaturi može da da imidazol derivat 4ad i 4ae. Hidroliza estra će dati imidazol kiseline 4af i 4ag.

[0253] Biciklični pirazol intermedijeri ovog pronalaska mogu biti konstruisani putem metodologije izložene u Shemi 5. Reakcija hidrazina (3a) sa odgovarajućim aldehidom treba da da hidrazon 5a koji na hlorinaciji sa NCS što je praćeno kondenzacijom sa odgovarajućim malonatom što treba da vodi ka pirazolu kao što je 5b. Kuplovanje potrebne kiseline sa makrocikličnim aminima ovog pronalaska treba da vodi karboksimid pirazolu 5c koji može biti konvertovan do jedinjenja ovog pronalaska putem metoda koje su prikazane ili poznate prosečnim poznavaocima oblasti.

[0254] Intermedijeri za pripremanje jedinjenja ovog pronalaska gde prsten B je imidazolski prsten, mogu biti pripremljeni od odgovarajućeg N-zaštićenog alilglicina (6a) u skladu sa opštom metodom izloženom u Shemi 6 (Contour-Galcera et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 11(5):741-745 (2001)). Kondenzacija 6a sa pogodno supstituisanim bromoacetofenonom (1b) u prisustvu pogodne baze kao što je kalijum bikarbonat, K2CO3 ili Cs2CO3 u pogodnom rastvaraču kao što je DMF obezbeđuje keto estarski intermedijer koji može biti ciklizovan da se dobije imidazol (6c) zagrevanjem u prisustvu viška amonijum acetata u rastvaraču kao što je toluen ili ksilen. Ova druga transformacija može pogodno da se izvede na maloj skali na 160 °C u mikrotalasnom reaktoru ili na velikoj skali refluksovanjem smeše dok se uklanja voda pomoću Dean-Stark aparata. Dobijeni imidazol intermedijer (6c) je zatim zaštićen tretmanom sa SEM-C1 u prisustvu baze kao što je natrijum hidrid ili dicikloheksilmetilamin u rastvaraču kao što je THF ili DCM. Aril bromid (6d) je zatim konvertovan do odgovarajućeg anilina (6e) zagrevanjem u zatvorenom sudu sa viškom amonijum hidroksida, u prisustvu bakar jodida, baze što je Cs2CO3 i katalitičke količine prolina u DMSO kao rastvarača. Acilacija 6e sa odgovarajućom alkenskom kiselinom i agens za kuplovanje kao što je T3P ili BOP reagens, ili alternativno, tretmanom sa hloridom alkenske kiseline u prisustvu baze kao što je TEA ili DIEA obezbeđuje dien 6f, koji podleže metatezi zatvaranja prstena zagrevanjem u razblaženom rastvoru u prisustvu p-toluen sulfonske kiseline i Grubbs II katalizatora u pogodnom rastvaraču kao što je DCM ili DCE da se obezbedi odgovarajući makrociklus (6g) (Tetrahedron Letters, 44:1379 (2003)). Alternativno, RCM može biti pušten u mikrotalasnu na povišenim temperaturama bez pTsOH. Hlorinacija na imidazolskom prstenu sa NCS, ili inicijalna redukcija dvostruke veze praćena sa hlorinacijom, i deprotekcija obezbeđuju intermedijeri 6h i 6i, redom. Alternativno, za jedinjenja gde R10 = CN, katalitička hidrogenizacija 6g praćena sa brominacijom sa NBS na sobnoj temperaturi i naknadna paladijum-katalizovana cijanacija i deprotekcija obezbeđuju intermedijer 6j. Intermedijeri 6h-j mogu biti konvertovani u jedinjenja ovog pronalaska praćenjem koraka opisanih u Shemi 15.

[0255] Reprezentativni imidazol koji sadrži amidne makrociklusne intermedijere korisne za sintezu jedinjenja ovog pronalaska su opisani na Shemi 7. Anilin 6e može biti kuplovan sa odgovarajuće supstituisanom karboksilnom kiselinom 7a koristeći anhidrid propan fosfonske kiseline (T3P) da se dobije amid 7b (n=0) i7c (n=1). Korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Lovely (Tetrahedron Letters, 44:1379 (2003)), 7b i 7c, nakon prethodnog tretmana sa pTsOH da se formira imidazolinijum jon, mogu biti ciklizovani preko metateze zatvaranja prstena korišćenjem katalizatora, kao što je Grubbs (II), u pogodnom rastvaraču, kao što je DCM, DCE, ili toluen na povišenoj temperaturi, da se dobiju makrociklusi koji sadrže imidazol 7d (n=0) i 7e (n=1). Alken može zatim biti redukovan sa vodonikom preko ili paladijuma na ugljeniku ili platina oksida i deprotekcija koja sledi sa TFA u DCM obezbeđuje amin 7f i 7g. Jedinjenja sa formulama 7f i 7g mogu biti konvertovana u jedinjenja u ovom pronalasku u skladu sa Shemom 15.

[0256] Reprezentativni regioizomerni imidazol koji sadrži amidne makrociklusne intermedijere korisne za sintezu jedinjenja ovog pronalaska su opisani u Shemi 7a. Odgovarajuće N-zaštićeni alilglicin 6a može biti konvertovan u bromoketon 7ab u dva koraka. Kondenzacija 7ab sa formamidinom na povišenoj temperaturi generiše imidazol 7ac. Imidazol 7ac može biti zaštićen sa SEM-C1 i zatim deprotonacija sa nBuLi i sledeće kvenčovanje sa NBS obezbeđuje bromo imidazol 7ae. Suzuki-Miyaura kuplovanje između bromo imidazola 7ae i odgovarajućeg supstituisanog arila ili heteroarila boronske kiseline ili estra 11e u prisustvu baze kao što je K3PO4 korišćenjem prekatalizatora kao što je Pd(dppf)Cl2•CH2Cl2 kompleks obezbeđuje, nakon razdvajanja enantiomera, anilin 7af. Anilin 7af može biti konvertovan u 7ag i 7ah u skladu sa Shemom 7. Jedinjenja sa formulama 7ag i 7ah mogu biti konvertovana u jedinjenja u ovom pronalasku u skladu sa Shemom 15.

[0257] Alternativno, imidazol koji sadrži makrocikluse ovog pronalaska može biti izveden iz intermedijera 8e u skladu sa Shemom 8. Reakcija Ullmann-ovog tipa kuplovanje jedinjenja 6d i alil glicina, praćena sa metilacijom kiseline bi obezbedila produženi anilinski analog 8b. Metateza zatvaranja prstena diena 8b korišćenjem Grubb II katalizatora bi obezbedila makrociklični olefin 8c. Zatim, makrociklični olefin 8c može biti konvertovan u ključni intermedijer 8e putem hidrogenizacije i selektivne deprotekcije aminske zaštitne grupe od jedinjenja 8d. Amin 8e može biti konvertovan u odgovarajući ciklični karbamat ili druge analoge praćenjem procedura koje su opisane u Shemi 15. Drugi diastereomer na poziciji na metil estru može takođe biti napravljen na isti način kao što je opisano iznad.

[0258] Cijano ili hloro imidazolski analog intermedijera 8e može biti dobijen pomoću blago modifikovane sekvence Sheme 9. Anilinski azot u jedinjenju 8b može biti zaštićen sa trifluoroacetil grupom(TFA) kako bi se suzbila brominacija/hlorinacija na fenil grupi tokom konverzije jedinjenja 9b u 9c. Praćenjem iste sekvence kao što je izloženo u Shemi 8, dobijeni zaštićeni anilin 9a može biti konvertovan u makrociklično jedinjenje 9b. Brominacija ili hlorinacija 9b sa NBS ili NCS redom obezbeđuje intermedijere 9c. Za jedinjenja gde R<10>je CN, bromid 9c je konvertovan u cijanoimidazol 9d pomoću paladijum-katalizovane cijanacije kao što je opisano u Shemi 6 iznad. Selektivno uklanjanje aminske zaštitne grupe od jedinjenja 9d obezbeđuje aminske intermedijere 9e. Na primer Boc zaštitna grupa može biti selektivno uklonjena ili u blago kiselim uslovima ili termalnim zagrevanjem u trifluoroetanolu u mikrotalasnoj na 150 °C. Intermedijer 9e može biti konvertovan u finalna jedinjenja opisana u ovom pronalasku u skladu sa Shemom 15.

[0259] Alternativno, imidazol jedinjenja ovog pronalaska mogu biti izvedena iz trifluorometil supstituisanih makrociklusnih intermedijera, 10c koji mogu biti pripremljeni od anilina 6e praćenjem sekvence opisane na Shemi 10. Reakcija kondenzacije anilina 6e sa trifluoroacetaldehid etil hemiacetalom obezbeđuje aminal 10a. Tretman 10a sa alil Grinjarovim reagensom, obezbeđuje anilin 10b, koji je zatim konvertovan u ciljno jedinjenje 10c preko sekvence opisane u Shemi 6.

[0260] Reprezentativna jedinjenja ovog pronalaska gde je prsten B šesti-člani heterociklus (primer - piridin) mogu biti izvedena iz intermedijera 111, sinteza koja je opisana u Shemi 11. Kondenzacija aldehida 11a (X = N) pripremljena u skladu sa modifikovanom procedurom opisanom od strane Negi (Synthesis, 991 (1996)), sa (S)-2-metilpropan-2-sulfinamidom u prisustvu anhidrovanog bakar sulfata u rastvaraču kao što je DCM dala je sulfinimin 11b (Ellman, J., J. Org. Chem., 64:1278 (1999)). Korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Kuduk (Tetrahedron Letters, 45:6641 (2004)), pogodno supstituisani Grinjarovi reagensi, na primer alilmagnezijum bromid, mogu biti dodati u sulfinimin 11b da se dobije sulfinamid 11c, kao smeša diastereomera koja može biti razdvojena na raznim fazama sekvence. Diastereoselektivnost za adiciju alilmagnezijum bromida u sulfinimin 11b može biti poboljšana upotrebljavanjem indijum(III) hlorida u skladu sa modifikovanom procedurom Xu (Xu, M-H, Organic Letters, 10(6):1259 (2008)). Suzuki-Miyaura kuplovanje između 4-hloropiridina 1c i odgovarajuće supstituisane aril ili heteroaril boronske kiseline ili estra 11e u prisustvu baze kao što je kalijum fosfat, u smeši rastvarača, kao što su DMSO i H2O, ili DMF, korišćenjem prekatalizatora kao što je Pd(dppf)Cl2•CH2Cl2 kompleks obezbeđuje 11g. Alternativno, Suzuki-Miyaura kuplovanje između boronske kiseline 11d i odgovarajuće supstituisanog aril ili heteroaril halida 11f može biti korišćeno da se pripremi 11g. Interkonverzija zaštitne grupe može biti postignuta u dva koraka da se dobije 11h. Alternativno, interkonverzija zaštitne grupe može inicijalno da se odigra na 11c praćeno sa Suzuki-Miyaura kuplovanjem. Anilin 11h može zatim biti kuplovan sa odgovarajuće supstituisanom karboksilnom kiselinom 11i korišćenjem T3P i baze, kao što je piridin, da se dobije amid 11j. Korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Lovely (Tetrahedron Letters, 44:1379 (2003)), 11j, nakon prethodnog tretiranja sa p-toluenesulfonskom kiselinom da se formira piridinijum jon, može biti ciklizovan putem metateze zatvaranja prstena korišćenjem katalizatora, kao što je Grubbs (II), u pogodnom rastvaraču, kao što je DCM, DCE, ili toluen na povišenoj temperaturi, da se dobije piridin-koji sadrži makrociklus 11k. Alken može biti redukovan sa vodonikom preko ili paladijuma na ugljeniku ili platina oksida, i sledeća deprotekcija sa TFA u DCM ili 4M HCl u dioksanu obezbeđuje amin 11l. Jedinjenja sa formulama 11l mogu biti konvertovana u jedinjenja u ovom pronalasku u skladu sa Shemom 15.

[0261] Dodatni piridin koji sadrži makrocikluse korisne za sintezu jedinjenja ovog pronalaska može takođe biti pripremljen u skladu sa Shemom 11. U slučajevima gde je piridin jezgro 4-piridin (Z = N) radije nego 2-piridin (X = N), konverzija 11h u 11j može biti lako postignuta korišćenjem kiselog hlorida 11i. Intermedijeri sa Formulom 11g gde R<8>= NO2 može biti dalje modifikovan da se dobiju intermedijeri gde R<8>= NH CO2-C1-4 alkil ili pre kuplovanja sa kiselinom 11i ili posle kuplovanja sa kiselinom. Redukcija azotne grupe može biti postignuta sa redukujućim agensom (npr., Zn-NH4Cl) u inertnom rastvaraču (npr., MeOH) da se dobije intermedijer sa Formulom 11g gde R<8>= NH2. Ovi anilino derivati mogu biti kuplovani sa hloroalkanoatima formule ClCO2-C1-4 alkil u prisustvu baze (npr., DIEA) u inertnom rastvaraču (npr., DCM) da se dobiju intermedijeri gde R<8>= NH CO2-C1-4 alkil.

[0262] Amino estarski analog 13e je dobijen od ključnog intermedijera 12j praćenjem sekvence opisane na Shemi 13. Stvaranje imina u koracima 12j sa etil 2,3-dioksopropanoatom praćeno sa dodavanjem aliltributiltina u prisustvu kalaj (IV) hlorida dalo je RCM prekursor 13a. Praćenjem iste sekvence u Shemi 12, 13a može biti konvertovan u kritični intermedijer 13e kroz nekoliko koraka. Drugi makrociklični intermedijeri kao što je 13e gde estar je zamenjen sa raznim supstituentima mogu takođe biti slično konstruisani praćenjem redosleda reakcija izloženih iznad mogu biti konvertovani u jedinjenja ovog pronalaska u skladu sa Shemom 15.

[0263] Metode za sintezu velikog broja supstituisanih piridinskih jedinjenja korisnih kao početni materijali za pripremu jedinjenja predmetnog pronalaska su dobro poznate u oblasti i veoma su dobro razmotrene. (Kao primere metoda korisnih za pripremanje piridinskih početnih materijala, videti: Kroehnke, F., Synthesis, 1 (1976); Abramovitch, R.A., ed., "Piridin and Its Derivatives", The Chemistry of Heterocyclic Compounds, 14(Suppl. 1-4), John Wiley & Sons, New York (1974); Boulton, A.J. et al., eds., Comprehensive Heterocyclic Chemistry, 2:165-524, Pergamon Press, New York (1984); McKillop, A., ed., Comprehensive Heterocyclic Chemistry, 5:1-300, Pergamon Press, New York (1996)).

[0264] U slučajevima gde pogodno supstituisane boronske kiseline nisu komercijalno dostupne, modifikacija ovog pristupa može biti usvojena u kojoj je arilhalid podvrgnut kuplovanju koje je posredovano paladijumom sa diboronsnom vrstom kao što je bis(pinakolato) diboron ili bis(neopentil glikolato)diboron da se obezbede odgovarajući 4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioksaborolan ili 5,5-dimetil-[1,3,2]dioksaborolan intermedijeri korišćenjem metode od Ishiyama, T. et al. (J. Org. Chem., 60(23):7508-7510 (1995)). Alternativno, ovaj isti intermedijer može biti pripremljen pomoću reakcije intermedijernog halida sa odgovarajućim dialkoksihidroboranom kao što je opisano od strane Murata et al. (J. Org. Chem., 62(19):6458-6459 (1997)). Bor pinakolatni intermedijeri mogu biti korišćeni umesto boronske kiseline za kuplovanje za aril/heteroaril halide ili triflate ili bor pinakolatni intermedijeri mogu biti konvertovani u boronske kiseline. Alternativno, odgovarajuće boronske kiseline mogu biti pripremljene razmenom metal-halogen aril/heteroaril halida, kvenčovanjem sa trialkoksiboratnim reagensom, i serijom manipulacija u vodenoj sredini da se obezbede boronske kiseline (Miyaura, N. et al., Chem. Rev., 95:2457 (1995)).

[0265] Razume se da se obim sinteze intermedijera može dalje biti proširen izvan upotrebe metodologije Suzuki-Miyaura kuplovanja, jer su prekursori aril halidi ili triflati koji su opisani iznad takođe prekursori za metodologije unakrsnog kuplovanja tipa Stille, Negishi, Hiyama i Kumada (Tsuji, J., Transition Metal Reagensi and Catalysts: Innovations in Organic Synthesis, John Wiley & Sons (2000); Tsuji, J., Paladijum Reagensi and Catalysts: Innovations in Organic Synthesis, John Wiley & Sons (1996)).

[0266] Dodatni piridazin i piridazinon koji sadrže makrocikluse mogu biti pripremljeni u skladu sa Shemom 14. Kondenzacija kalijumove soli 14a sa pogodno supstituisanim α-ketoestrom 14b, koji je ili komercijalno dostupan ili pripremljen korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Domagala (Tetrahedron Lett., 21:4997-5000), u rastvaraču kao što je THF generiše α,βnezasićeni ketonski derivat koji zatim može biti kondenzovan sa pogodno supstituisanim hidraziskim derivatom da se dobije piridazinon 14c. Nitro grupa može zatim biti redukovana do anilina 14f sa cinkom i NH4Cl u metanolu. Piridazinon 14c može biti konvertovan u hloropiridazin 14d deprotekcijom aminske zaštitne grupe, praćeno tretmanom sa POCl3, zatim ponovnom protekcijom. Nitro grupa može biti redukovana do anilina 14e sa gvožđem i AcOH. Anilini 14e i 14f mogu zatim biti kuplovani sa odgovarajuće supstituisanom karboksilnom kiselinom 7a korišćenjem T3P da se dobije amide 14g (R10 = Cl) i 14h (R10 = OH), redom.14g i 14h mogu zatim biti ciklizovani putem metateze zatvaranja prstena korišćenjem katalizatora, kao što je Grubbs (II), u pogodnom rastvaraču, kao što je DCM, DCE, ili toluen na povišenoj temperaturi, da se dobije makrociklus 14i (R10 = Cl) i 14j (R10 = OH), redom. Dobijeni alkeni mogu zatim biti redukovani sa vodonikom preko ili paladijuma na ugljeniku ili platina oksida da se dobije 14k i 14l.14k može biti redukovan sa amonijum acetatom i paladijumom na ugljeniku da se redukuje hlor da se dobije 14m. Deprotekcija koja sledi 14m i 14l obezbeđuje amin 14n (R10 = H) i 14o (R10 = OH). Jedinjenja sa formulama 14n i 14o mogu biti konvertovana u jedinjenja u ovom pronalasku u skladu sa Shemom 15.

[0267] Reprezentativni regioizomerni piridazin koji sadrži amidne makrociklusne intermedijere korisne za sintezu jedinjenja ovog pronalaska su opisani u Shemi 14a. Korišćenjem modifikacije Minisci reakcije opisane od strane Cowden (Org. Lett., 5:4497-4499 (2003)), odgovarajuće zaštićeni glicin 14aa i 3,6-dihloropiridazin mogu biti kuplovani na povišenoj temperaturi u prisustvu srebro nitrata, amonijum persulfata, kiseline, kao što je amonijum format, u rastvaraču, kao što je voda ili smeša voda/dimetilformamid, da se dobiju jedinjenja sa formulama 14ab. Jedinjenje 14ab može dalje biti funkcionalizovano deprotonacijom sa nBuLi i zatim alkilacijom sa odgovarajuće supstituisanim alkil halidom, na primer alil bromidom, da se dobije jedinjenje 14ac. Suzuki-Miyaura kuplovanje između hloropiridazina 14ac i odgovarajuće supstituisane aril ili heteroaril boronske kiseline ili estra 11e u prisustvu baze kao što je natrijum karbonat korišćenjem prekatalizatora kao što je (Ph3P)4Pd obezbeđuje, nakon razdvajanja enantiomera, anilin 14ad. Anilin 14ad može biti konvertovan u 14ae i 14af u skladu sa Shemom 7. Hidrogenoliza hloro uslovima transferske hidrogenizacije i Boc-deprotekcija će dati jedinjenja 14ag i 14ah. Jedinjenja sa formulama 14ag i 14ah mogu biti konvertovana u jedinjenja u ovom pronalasku u skladu sa Shemom 15.

[0268] Reprezentativna jedinjenja ovog pronalaska mogu zatim biti napravljena kao što je prikazano u Shemi 15 korišćenjem intermedijera napravljenih u Shemama 2 do 13. Razne supstituisane kiseline predstavljene formulom 15b mogu biti kuplovane i sa 6- i sa 5-članim makrociklusnim aminima koji su predstavljeni pomoću 15 korišćenjem ili reagensa za kuplovanje ili konvertovanjem njih u kiseli hlorid (kao Vilsmeier reagens) i zatim tretiranjem smeše sa bazom da se dobiju željeni makrociklusi ovog pronalaska.

[0269] Prečišćavanje intermedijera i krajnjih proizvoda je izvedeno putem hromatografije na normalnoj ili na reverznoj fazi. Hromatografija na normalnoj fazi je izvedeno korišćenjem unapred napunjenih SiO2kertridža euliranjem sa ili gradijentima heksana i EtOAc ili DCM i MeOH ukoliko nije drugačije naznačeno. Preparativna HPLC na reverznoj fazi je izvedena korišćenjem C18 kolona eluiranjem sa gradijentima rastvarača A (90% H2O, 10% MeOH, 0.1 % TFA) i rastvarača B (10% H2O, 90% MeOH, 0.1 % TFA, UV 220 nm) ili sa gradijentima rastvarača A (90% H2O, 10% ACN, 0.1% TFA) i rastvarača B (10% H2O, 90% ACN, 0.1% TFA, UV 220 nm) ili sa gradijentima rastvarača A (98% H2O, 2% ACN, 0.05% TFA) i rastvarača B (98% ACN, 2% H2O, 0.05% TFA, UV 220 nm) (ili) Sunfire Prep C18 OBD 5u 30x100mm, 25 min gradijent od 0-100% B. A = H2O/ACN/TFA 90:10:0.1. B = ACN/H20/TFA 90:10:0.1.

[0270] Ukoliko nije drugačije naznačeno, analiza krajnih proizvoda je izvedena analitičkom HPLC na reverznoj fazi.

Metod A: Većina izvođenja analitičke HPLC su bila: SunFire (3.0 x 150 mm) (15 min gradijent- 95:5 H2O / ACN-do 95:5ACN / H2O -0.05% TFA).

Metoda B: ZORBAX® (4.6 x 75 mm) (8 min gradijent -10:90 MeOH / H2O do 90:10 MeOH / H2O, 0.2% H3PO4)

Metoda C: PHENOMENEX® Luna 5 µ 4.6 x 50 mm (4 min gradijent - 10:90 ACN / H2O do 90:10 ACN / H2O - 0.1% TFA)

Metoda D: SunFire kolona (3.5 µm C18, 3.0 x 150 mm). Gradijent eluiranja (1.0 mL/min) od 10-100% rastvarača B tokom 10 min i zatim 100% rastvarača B tokom 5 min je korišćeno.

Rastvarač A je (95% voda, 5% acetonitril, 0.05% TFA) i Rastvarač B je (5% voda, 95% acetonitril, 0.05% TFA, UV 254 nm).

Metoda E: SunFire kolona (3.5 µm C18, 3.0 x 150 mm). Gradijent eluiranja (1.0 mL/min) od 10-100% Rastvarača B tokom 12 min i zatim 100% Rastvarača B tokom 3 min je korišćeno. Rastvarač A je (95% voda, 5% acetonitril, 0.05% TFA) i Rastvarač B je (5% voda, 95% acetonitril, 0.05% TFA, UV 254 nm).

[0271] Većina masenih spektra je bila: LCMS(ESI) m/z: [M+H]<+>PHENOMENEX® Luna C18 (2 x 30 mm) (2 min gradijent 90% H2O /10% MeOH / 0.1%TFA do 90% MeOH / 10% H2O /0.1% TFA) (ili) BEH C182.1x50mm - 2 min gradijent od 0-100% B. (A: 90/10/0.1 H2O/ACN/TFA; B: 90/10/0.1 ACN/H2O/TFA).

Intermedijer 1

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0272]

[0273] Intermedijer 1.1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: 3-hloro-2-fluoro anilin je rastvoren u TFA (4 mL) i H2O (2 mL) je dodat u gornji rastvor. Smeša je zatim ohlađena do 0 °C i u ovo je je dodat ponovo rastvoren vodeni rastvor (2 mL) NaNO2u kapima da se osigura da temperatura nije porasla iznad 5 °C. Reakciona smeša je mešana na ovoj temperaturi tokom 0.5 h što je praćeno dodavanjem čvrstog NaN3 u delovima. Reakciona smeša je mešana hladna i zatim ostavljena da se zagreje do sobne temperature preko noći. Reakciona smeša je kvenčovana sa H2O (100 mL) i ekstrahovan je azid sa EtOAc (2x50 mL), osušen i uparen do čvrste mase (1.1 g). Proizvod koji je dobijen je rastvoren u DMSO (5 mL) u sudu za mikrotalasnu i u ovo je dodat L-prolin (0.02 g), Cu(OAc)2 (0.1 g), K2CO3 (1.5 g) i natrijum askorbat (0.1 g) i višak tbutil propiolata (3 mL). Sud je zatvoren i zagrejan na 75 °C preko noći. Alikvot LCMS pokazao je da je reakcija završena. Reakciona smeša je kvenčovana sa H2O (100 mL) i esktrahovan je organski sloj sa EtOAc (2x100 mL), ispran sa fiziološkim rastvorom (50 mL) i osušen (MgSO4). Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije. Željeni estar je izolovan i koncentrovan, uparen braon čvrste supstance (0.98 g). Estar (0.2 g) je rastvoren u DCM (2 mL) i u ovo je dodat TFA (1 mL) i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Alikvot LCMS pokazao je da je reakcija završena. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa H2O (50 mL) i organski sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x100 mL), osušen i uparen do braon čvrste mase. MS(ESI) m/z: 342.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.20 (s, 1H), 7.60-7.55 (dt, 1H), 7.42-7.37 (dt, 1H), 7.28-7.23 (dt, 1H) ppm.

74]

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0275] Intermedijer 2A. Etil 5-amino-1-(3-hloro-2-ftuorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat: U smešu (3-hloro-2-fluorofenil)hidrazin hidrohlorida (0.67 g, 3.40 mmol), (E)-etil 2-cijano-3-etoksiakrilata (0.633 g, 3.72 mmol) i natrijum acetata (0.586 g, 7.12 mmol) na sobnoj temperaturi je dodat AcOH i H2O da se formira gusta kaša. Nastavljeno je mešanje reakcione smeše na sobnoj temperaturi tokom 0.25 h i zatim je zagrejana na 100 °C preko noći. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je kvenčovana sa H2O (200 mL) i žućkasto braon čvrsta supstanca je izdvojena. Čvrste supstance su filtrirane i isprane temeljno sa H2O. Ponovo je rastvoren ostatak u DCM, osušen i uparen do braon čvrste supstance kao željenog proizvoda (0.76 g, 78%). MS(ESI) m/z: 284.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.76 (s, 1H), 7.51 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.03 (m, 1H), 5.30 - 5.06 (m, 2H), 4.24 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.38 - 1.04 (m, 3H) ppm.

[0276] Intermedijer 2. 1-(3-Hloro-2-ftuorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: Smeša Intermedijera 2A (0.317 g, 1.117 mmol), izoamilnitrila (1.304 g, 11.14 mmol) u THF (20 mL) je zagrejana na 100 °C. Nakon 2 h, reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu da se dobije sirov proizvod. U sirov proizvod je dodat NaOH (0.610 g, 10 ekv), MeOH i H2O. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa H2O (100 mL) i esktrahovan je neizreagovani početni materijal sa EtOAc (2x100 mL). Vodeni sloj je zatim zakiseljen sa HCl (1 N) i zatim esktrahovani organski delovi sa EtOAc (2x100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtriran, i koncentrovani da se dobije Intermedijer 2 kao braon čvrsta masa. MS(ESI) m/z: 240.9 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.49 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.77 (ddd, J = 8.3, 6.9, 1.8 Hz, 1H), 7.41 - 7.28 (m, 1H), 7.23 - 7.10 (m, 1H) ppm.

Intermedijer 3

5-Amino-1-(3-hlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0277]

[0278] Intermedijer 3A. Etil-5-amino-1-(3-hlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat: (Ref: J. Heterocyclic Chem., 267 (1987)) U smešu (3-hlorofenil)hidrazin hidrohlorida (2.328 g, 13 mmol), (E)-etil 2-cijano-3-etoksiakrilata (2.199 g, 13.00 mmol) i K2CO3 (1.797 g, 13.00 mmol) je dodat EtOH (20 mL). Suspenzija je zatim zagrejana do refluksa i mešana na temperaturama refluksovanja preko noći. Nakon 20 h, reakciona smeša je sipana u ledenu H2O. Suspenzija je zatim filtrirana i čvrsta supstanca sakupljena filtracijom je osušena u vakuumu (50 °C) preko noći da se dobije braon čvrsta supstanca (2.93 g). MS(ESI) m/z: 266.1 (M+H)<+>.

[0279] Intermedijer 3.5-Amino-1-(3-hlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: (Referenca: J. Heterocyclic Chem., 773 (2003)) Rastvor Intermedijera 3A (0.652 g, 2.454 mmol) i NaOH (0.613 g, 15.34 mmol) u EtOH (1.534 mL) i H2O (13.80 mL) je refluksovan dok reakciona smeša nije postala homogena. Nakon 24 h, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je zakiseljen sa koncentrovanom HCl da se dobije suspenzija koja je podvrgnuta filtraciji. Čvrsta supstanca sakupljena filtracijom je isprana sa H2O i osušena u vakuumu (50 °C) tokom 4 h da se dobije žuta čvrsta supstanca (0.51 g) kao željeni proizvod. MS(ESI) m/z: 238.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.77 (s, 1H), 7.64 - 7.61 (m, 1H), 7.58 - 7.51 (m, 2H), 7.50 - 7.46 (m, 1H) ppm.

Intermedijer 4

5-Amino-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0280]

[0281] Intermedijer 4A. Etil 5-amino-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat: Braon suspenzija (3-hloro-2-fluorofenil)hidrazin hidrohlorida (0.500 g, 2.54 mmol) i (E)-etil 2-cijano-3-etoksiakrilata (0.472 g, 2.79 mmol) u EtOH (2.54 mL) i trietilamina (0.707 mL, 5.08 mmol) je zagrejana do 85 °C. Nakon 4.5 h, reakcija je zaustavljena i ohlađena do sobne temperature. Reakcija je koncentrovana da se dobije braon čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je Intermedijer 4A (0.185 g, 26%) kao prljavo belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z.284.0 (M+H)<+>.

[0282] Intermedijer 4. 5-Amino-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: Bistar tamno žuti rastvor Intermedijera 4A (0.184 g, 0.649 mmol) u MeOH (3.24 mL) i 1.0 N NaOH (1.946 mL, 1.946 mmol) je mešan na sobnoj temperaturi. Nakon 1 h, reakcija je zagrejana do 50 °C. Nakon 8 h, reakcija je zaustavljena i ohlađena do sobne temperature. Bistar, žuto narandžasti rastvor je koncentrovan da se dobije čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je podeljena između EtOAc, vode, i 1.0 N NaOH i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Vodeni sloj je zakiseljen sa 1.0 N HCl i zatim esktrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi, nakon acidifikacije, su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije Intermedijer 4 (0.153 g, 92%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z. 256.0 (M+H)<+>i 258.0 (M+2+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.02 (br. s., 1H), 7.74 (ddd, J = 8.1, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.50 (td, J = 7.4, 1.7 Hz, 1H), 7.37 (td, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 6.43 (s, 2H).

Intermedijer 5

1-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0283]

[0284] Intermedijer 5A: terc-Butil (3-hloro-2,6-difluorofenil)karbamat: 3-hloro-2,6-difluorobenzoeva kiselina (4.85 g, 25.2 mmol) je rastvoren u THF (50 mL) i ohlađena do 0 °C. U ovaj rastvor je zatim dodat etilhloroformat (3.01 g, 27.7 mmol) praćeno sa TEA (3.86 mL, 27.7 mmol) i mešan na istoj temperaturi tokom 1h. U kašu koja se stvorila je zatim dodat NaN3u H2O (5 mL) u kapima i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 1.25 sata. Čvrste supstance su izdvojene iz reakcione smeše i čvrste supstance su ostavljene da se procede što je praćeno izdvajanjem proceđene supstance. Ostatak je rastvoren u H2O (50 mL) i esktrahovan sa DCM (2x). Gornji organski sloj je zatim kombinovan sa dekantantom, osušen (MgSO4) i koncentrovan da se dobije ostatak. Ostatak je re-rastvoren u toluenu (50 mL) i zagrejan na 110 °C. U gornji rastvor je dodat t-BuOH (1.5 g) i refluksovan preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (2.86 g, 43%). MS(ESI) m/z: 286.0 (M+Na)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.28 (s, 1H), 7.03 - 6.72 (m, 1H), 6.10 - 5.83 (m, 1H), 1.57 - 1.37 (m, 9H) ppm.

[0285] Intermedijer 5B. terc-Butil 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat: U rastvor intermedijera 5A u DCM (5 mL) je dodat TFA (1 mL) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 1h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana da se dobije braon ulje koje je ponovo rastvoreno u TFA (5 mL) i ohlađeno do 0 °C. U ovaj ohlađeni rastvor je zatim dodat NaNO2(0.209 g, 3.03 mmol) u H2O (1 mL) u kapima. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na 0 °C tokom 0.5 h praćeno sa dodavanjem NaN3 (0.394 g, 6.07 mmol) u H2O (1 mL). Nastavljeno je mešanje reakcione smeše tokom 2 h na istoj temperaturi i zatim je kvenčovana sa H2O (100 mL) i esktrahovan je vodeni sloj sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni i upareni do braon ulja. Azid iz gornje reakcije je zatim rastvoren u DMSO (5 mL) i u ovaj rastvor je dodat tbutilpropiolat (1.5 mL, 1.517 mmol), Cu(OAc)2 (0.055g, 0.303 mmol) i K2CO3 (0.839 g, 6.07 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa H2O i čvrsta masa izdvojena. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2x). Organski sloj je osušen i uparen do tamno braonkasto-crnog ulja. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije. Željeni proizvod je izolovan kao crvenkasto ulje (0.3 g, 62%). MS(ESI) m/z: 316.0 (M+H)<+>.

[0286] Intermedijer 5. 1-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor Intermedijera 5B (0.3 g, 0.950 mmol) u DCM (5 mL) je dodat TFA (1 mL) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana da se dobije sirov proizvod koji je prečišćen korišćenjem HPLC na reverznoj fazi. MS(ESI) m/z: 260.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.94 (s, 1H), 7.85 (ddd, J = 9.3, 8.1, 5.3 Hz, 1H), 7.40 (td, J = 9.2, 2.0 Hz, 1H) ppm.

Intermedijer 6

1-(3-Hlorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0287]

[0288] Intermedijer 6A. etil 1-(3-hlorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat: Natrijum nitrit(1.947g, 28.2 mmol) rastvoren u H2O (5 mL) je dodat u hladan (<5 °C) TFA (20 mL) rastvor 3-hloro anilina (3.6 g, 28.2 mmol). Nakon 0.5 h, natrijum azid (1.835 g, 28.2 mmol) rastvoren u H2O (1 mL) je dodat u kapima u gornju reakcionu smešu. Reakciona smeša je zatim mešana hladna tokom 2 h i zatim kvenčovana sa H2O (100 mL) i esktrahovani su organski delovi sa EtOAc (2x100mL). Organski slojevi su zatim osušeni preko MgSO4 i koncentrovani do braon ulja (3.5g). Približno 1 g azida iz gornjeg sirovog proizvoda je stavljeno u sud za mikrotalasnu. U ovo je dodat etil propiolat (1.5 mL), DMSO (4 mL), natrijum karbonat (0.1 g) i L-prolin (0.1 g) i reakciona smeša je zagrejana na 75 °C preko noći. Reakcija je zatim kvenčovana sa H2O da se istalože čvrste supstance. Filtrirane su čvrste supstance i isprane sa viškom H2O što je praćeno sa sušenjem pod vakuumom da se dobije 1.3 g željenog triazol estra. MS(ESI) m/z: 252.1 (M+H)<+>.

[0289] Intermedijer 6. 1-(3-Hlorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor za Intermedijer 6A (0.3g, 1.192 mmol) u smeši od THF i H2O (1:1) je dodat LiOH i mešan je na sobnoj temperaturi tokom 1h. Nakon 1 h, reakciona smeša je kvenčovana sa H2O (50 mL) i esktrahovan je neizreagovani početni materijal sa EtOAc. Vodeni sloj je zatim zakiseljen i esktrahovana je kiselina sa EtOAc (2x100 mL). Organski slojevi su zatim osušeni preko MgSO4 i upareni do braon ulja koje očvršćava na sobnoj temperaturi. MS(ESI) m/z: 224.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.13 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 2.2 & 8.4Hz, 2H), 7.61-7.56 (m, 2H) ppm.

Intermedijer 7

1-(3-Hlorofenil)-1H-pirazol-4 karboksilna kiselina

[0291] Intermedijer 7. 1-(3-Hlorofenil)-1H-pirazol-4 karboksilna kiselina: 1-(1-(3-Hlorofenil)-1H-pirazol-4-il)etanon je rastvoren u rastvor MeOH i DMSO (5:1). U ovaj rastvor je zatim dodat rastvor NaOMe (2 N, 10 mL) praćeno sa izbeljivačem (20 mL) i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je kvenčovana sa H2O (200 mL) i zakiseljena sa koncentrovanom HCl. Esktrahovani su organski delovi sa EtOAc (2x100 mL) i koncentrovani da se dobije braon čvrsta supstanca kao željeni proizvod. MS(ESI) m/z: 223.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.36-7.38 (m, 1 H), 7.47-7.51 (m, 1 H), 7.74-7.77 (m, 1 H), 7.89-7.90 (m, 1 H), 8.04 (s, 1 H), 8.65 (s, 1 H) ppm.

Intermedijer 8

5-Amino-1-(3-hlorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0292]

[0293] Intermedijer 8. 5-Amino-1-(3-hlorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: Azid je napravljen kao što je prethodno opisano (Intermedijer 6) počevši sa 3-hloroanilinom. Azid je zatim tretiran sa terc-butil 2-cijanoacetatom u uslovima refluksovanja preko noći. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je kvenčovana sa H2O (100 mL) i esktrahovana sa EtOAc (2x100 mL). Organski slojevi su zatim osušeni (MgSO4) i upareni do braon čvrste supstance. Braon čvrsta supstanca je zatim ponovo rastvorena u DCM (2 mL) i u ovaj rastvor je dodat TFA (2 mL) i mešano je na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i kvenčovana sa H2O da se istaloži braon čvrsta supstanca. Čvrste supstance su filtrirane, ispran sa viškom MeOH i osušene da se dobije braonkasta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 238.9 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.75 (bs, 1H), 7.37-7.34 (dd, J = 1.7 & 8.3Hz, 1H), 7.25-7.21 (t, 1H), 6.91-6.89 (bd, 1H) ppm.

Intermedijer 9

1-(3-Hlorofenil)-3-(2-hidroksietil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0294]

[0295] Intermedijer 9A: 3-((terc-Butildifenilsilil)oksi)propanal: U rastvor tercbutildifehenilsililhlorida (2.20 g, 8.0 mmol) u DCM/DMF (95:1) je dodat 1,3 propanediol (2.010 g, 26.4 mmol) praćeno sa TEA (1.053 g, 10.43 mmol) i katalitički DMAP (0.049 g, 0.4 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa H2O (200 mL) i esktrahovani su organski delovi sa EtOAc (3x). Sirov proizvod u rastvoru DCM (5 mL) je dodat polako u ohlađen rastvor (-78 °C) oksalil hlorida (5.75 mL, 11.59 mmol) u DCM (20 mL). Nastavljeno je mešanje reakcione smeše na -78 °C tokom 20 min i zatim je tretirana sa TEA (5.34 mL, 38.3 mmol) i zatim podignuta do sobne temperature polako. Reakciona smeša je zatim razblažena sa etrom, isprana sa 10% vodenog rastvora limunske kiseline praćeno sa fiziološkim rastvorom. Organski slojevi su zatim osušeni i koncentrovani da se dobije željeni proizvod.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.90 - 7.56 (m, 4H), 7.49 - 7.28 (m, 6H), 3.96 -3.61 (m, 2H), 2.27 (br. s., 1H), 1.88 - 1.72 (m, 2H),1.16 - 0.96 (m, 9H) ppm.

[0296] Intermedijer 9B: (E)-1-(3-((terc-Butildifenilsilil)oksi)propiliden)-2-(3-hlorofenil)hidrazin: Rastvor (3-hlorofenil)hidrazin hidrohlorida i TEA (3 mL, 21.5 mmol) i 3-(tercbutildifenilsililoksi)propanal (21.5 mmol) u toluenu je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa H2O (100 mL) i esktrahovana sa EtOAc (2x). Organski slojevi su osušeni (MgSO4) i upareni do crvenkastog ulja. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije. Željeni proizvod je izolovan kao crveno ulje. MS(ESI) m/z: 437.1 (M-Boc)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.84 - 7.59 (m, 4H), 7.50 - 7.29 (m, 6H), 7.18 -6.90 (m, 1H), 6.77 (dt, J = 8.1, 2.0 Hz, 1H), 3.98 - 3.68 (m, 2H), 2.63 - 2.38 (m, 2H),1.12 - 0.90 (m, 9H) ppm.

[0297] Intermedijer 9B. etil 5-amino-3-(2-((terc-butildifenilsilil)oksi)etil)-1-(3-hlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat: U rastvor intermedijera 9A (1.34 g, 3.1 mmol) u DMF (5 mL) je dodat NCS (0.455, 3.41 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi. Nakon 4 h, reakciona smeša je kvenčovana sa H2O (100 mL) i esktrahovan sa EtOAc (2x). Organski slojevi su osušeni (MgSO4) i upareni do crvenkastog ulja. Odvojeni etilcijanoacetat (0.351 g, 3.10 mmol) je rastvoren u EtOH (5 mL) i u ovaj rastvor je dodat NaOEt (21 %) (1.16 mL, 3.10 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 0.5 h praćeno sa uvođenjem iminohloridne sirove smeša. Gornja smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, reakcija je kvenčovana sa H2O i esktrahovana sa EtOAc (2x). Organski slojevi su osušeni (MgSO4) i upareni da bi dali narandžasto-crveno ulje. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije. Dva pika su izolovana - jedan je željeni proizvod i drugi je hlorisano pirazolinsko jedinjenje i dva proizvoda su uzeta za sledeći korak kao sirova smeša. MS(ESI) m/z: 548.1 (M+H)<+>.

[0298] Intermedijer 9C. etil 3-(2-((terc-butildifenilsilil)oksi)etil)-1-(3-hlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat: Izoamilnitrid (1 mL) je dodat u THF rastvor Intermedijera 9B (sirova smeša) i mešan na 70 °C preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana i preneta u sledeći korak kao sirova smeša. MS(ESI) m/z: 555.3 (M+Na)<+>.

[0299] Intermedijer 9. 1-(3-Hlorofenil)-3-(2-hidroksietil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U THF rastvor Intermedijera 9C (0.5 g, 0.938 mmol) koji se meša je dodat 1 M nBu4NF (2.81 mL, 2.81 mmol) u THF i reakciona smeša je mešana energično na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa H2O (100 mL) i esktrahovana sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni (MgSO4) i koncentrovani do ulja. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (0.045 g, 16%) kao ulje. MS(ESI) m/z: 295.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.35 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.59 - 7.42 (m, 2H), 7.31 - 7.18 (m, 1H), 5.42 (br. s., 1H), 4.80 - 4.65 (m, 1H), 4.42 - 4.26 (m, 2H), 4.14 - 3.93 (m, 2H), 3.51 - 3.38 (m, 1H), 3.26 (t, J = 5.8 Hz, 3H) ppm.

Intermedijer 10

1-(3-Hlorofenil)-5-oksopirolidin-3-karboksilna kiselina

[0300]

[0301] Intermedijer 10. 1-(3-Hlorofenil)-5-oksopirolidin-3-karboksilna kiselina: (Referenca: J. Med. Chem., 30:400-405 (1987)) Smeša 3-hloroanilina (2.55 g, 20 mmol) i 2-metilenćilibarne kiseline (2.60 g, 20.00 mmol) je zagrejana na 120 °C (otvoreni fleš flash). Nakon 20 min, reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim, voda je dodata i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C (zatvorena epruveta) da se dobije žuta suspenzija. Nakon hlađenja do sobne temperature, žuto ulje polako očvršćava i dodat je MeOH (20 mL) da se dobije žuti rastvor. Nakon 1 h, smeša je filtrirana i čvrsta supstanca isprana sa malom količinom MeOH i osušena na vazduhu da se dobije prljavo bela čvrsta supstanca kao Intermedijer 10 (2.5 g, 52%). MS(ESI) m/z: 240.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.80 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 7.49 - 7.46 (m, 1H), 7.36 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.18 (ddd, J = 8.0, 2.1, 1.0 Hz, 1H), 4.16 - 4.07 (m, 2H), 3.46 - 3.38 (m, 1H), 2.88 (dd, J = 8.3, 1.1 Hz, 2H).

Intermedijer 11

1-(3-Hlorofenil)pirolidin-3-karboksilna kiselina

[0302]

[0303] Intermedijer 11A. Metil 1-(3-hlorofenil)-5-oksopirolidin-3-karboksilat (Ref: Tetrahedron, 62:4011-4017 (2006)). U hladan rastvor MeOH (8.35 mL) (0 °C) je dodat tionil hlorid (0.335 mL, 4.59 mmol) u kapima. Nakon 30 min, Intermedijer 10 (1 g, 4.17 mmol) je dodat, i reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i ostatak je rastvoren u EtOAc, ispran sa zasićenim NaHCO3, H2O i fiziološkim rastvorom. Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije željeni proizvod (1.04 g, 98%) kao žuto ulje. MS(ESI) m/z: 254.0 (M+H)<+>.

[0304] Intermedijer 11B. Metil 1-(3-hlorofenil)pirolidin-3-karboksilat: U rastvor intermedijera 11A (0.27 g, 1.064 mmol) u THF (3 mL) je dodat BH3-THF kompleks (1.596 mL, 1.596 mmol) (1 M u THF). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 17 h, reakciona smeša je kvenčovana dodavanjem 1 mL MeOH, zatim H2O. Gornja smeša je zatim esktrahovana sa EtOAc i organski slojevi su isprani sa H2O, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije bezbojno ulje kao željeni proizvod (0.175 g, 68.6%). MS(ESI) m/z: 240.1 (M+H)<+>.

[0305] Intermedijer 11. 1-(3-Hlorofenil)pirolidin-3-karboksilna kiselina: U rastvor metil 1-(3-hlorofenil)pirolidin-3-karboksilata (0.175 g, 0.730 mmol) u MeOH (5 mL) je dodat 1N NaOH (1.460 mL, 1.460 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Nakon 2 h, reakciona smeša je zatim koncentrovana da se ukloni MeOH. Ostatak je zatim neutralisan sa 1 N HCl (2 mL) i esktrahovan sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Čvrsta supstanca je dobijena kao željeni proizvod (0.15 g, 91 %). MS(ESI) m/z: 226.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.34 (br. s., 1H), 7.16 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 6.72 - 6.68 (m, 1H), 6.57 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 6.49 - 6.43 (m, 1H), 3.64 - 3.52 (m, 2H), 3.48 - 3.25 (m, 3H), 2.43 - 2.29 (m, 2H) ppm.

Intermedijer 12

1-(3-Hlorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina, HCl

[0306]

[0307] Intermedijer 12A. etil 1-(3-hlorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilat, 1 TFA: Smeša 1-hloro-3-jodobenzena (0.170 g, 0.714 mmol), etil 1H-imidazol-4-karboksilata (0.1 g, 0.714 mmol), bakar(I) jodida (0.027 g, 0.143 mmol), i K2CO3(0.296 g, 2.141 mmol) u DMSO (1.427 mL) je vakuumirana i napunjena sa argonom tri puta, zatim poklopljena i zagrejana na 110 °C. Nakon 16 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature i zatim je razblažena sa EtOAc, isprana sa H2O pto je praćeno sa fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Sirov proizvod je prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije čvrsta supstanca kao željeni proizvod (0.118 g, 66%). MS(ESI) m/z: 251.0 (M+H)<+>.

[0308] Intermedijer 12. 1-(3-Hlorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor intermedijera 12A (0.118 g, 0.471 mmol) u MeOH (4.71 mL) je dodat 1 N NaOH (0.941 mL, 0.941 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je rastvoren u MeOH/H2O. U gornji rastvor je zatim dodat 1 N HCl (1.5 mL) da se dobije bela suspenzija koja je filtrirana da se izoluje čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je isprana sa H2O i zatim osušena u vakuumskoj rerni (50 °C) tokom 4 h da se dobije čvrsta supstanca kao Intermedijer 12 (0.09 g, 74%). MS(ESI) m/z: 223.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.44 - 8.23 (m, 2H), 7.77 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.63 - 7.45 (m, 3H) ppm.

Intermedijer 13

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina, 1 TFA

[0309]

[0310] Intermedijer 13A. etil 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilat, 1 TFA: Smeša 1-hloro-2-fluoro-3-jodobenzena (0.549 g, 2.141 mmol), etil 1H-imidazol-4-karboksilata (0.3 g, 2.141 mmol), bakar(I) jodida (0.082 g, 0.428 mmol), L-prolina (0.099 g, 0.856 mmol), i K2CO3(0.888 g, 6.42 mmol) u DMSO (4.28 mL) je vakuumirana i napunjena sa argonom tri puta, zatim poklopljena i zagrejana na 110 °C. Nakon 20 h, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažen sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa H2O, fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem HPLC hromatografije na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (0.01 g, 1.2%) kao bezbojno ulje. MS(ESI) m/z: 269.0 (M+H)<+>.

[0311] Intermedijer 13. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina: Intermedijer 13 je napravljen na isti način kao Intermedijer 12 zamenjivanjem Intermedijera 12A sa Intermedijerom 13A. MS(ESI) m/z: 241.0 (M+H)<+>.

Intermedijer 14

1-(1-(terc-Butoksikarbonil)piperidin-3-il)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0312]

[0313] Intermedijer 14A. terc-Butil 3-(4-(etoksikarbonil)-1H-pirazol-1-il)piperidin-1-karboksilat: U bistar, bezbojni rastvor 1-Boc-3-hidroksipiperidina (0.250 g, 1.242 mmol), 4-etoksikarbonilpirazola (0.174 g, 1.242 mmol), i trifenilfosfian (0.391 g, 1.491 mmol) u THF (4.97 mL) je dodat u delovima tokom 5 min di-terc-butilazodikarboksilat (0.372 g, 1.615 mmol). Dobijeni bledo žuti rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i prečišćena silika gel hromatografijom da se dobije Intermedijer 14A (0.0646 g, 16%) kao čist, bezbojan ostatak. MS(ESI) m/z: 268.1 (M-C4H8+H)<+>.

[0314] Intermedijer 14. 1-(1-(terc-Butoksikarbonil)piperidin-3-il)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U bistar, bezbojni rastvor Intermedijera 14A (0.0646 g, 0.200 mmol) u MeOH (0.666 ml) je dodat u kapima 1.0 M natrijum hidroksid (0.599 ml, 0.599 mmol). Dobijena blago zamućena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 6 h, reakcija je ohlađena do 0 °C i neutralisana sa 1.0 N HCl. Smeša je koncentrovana da se dobije čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je podeljena između EtOAc i 0.5 N HCl i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije Intermedijer 14 (0.0616 g, 104%) kao bela pena. MS(ESI) m/z: 240.1 (M-C4H8+H)<+>.

Intermedijer 15

1-(3-Hlorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0315]

[0316] Intermedijer 15 je pripremljen na isti način kao Intermedijer 14. MS(ESI) m/z: 210.1 (M+H)<+>.

Intermedijer 16

Metil 4-(2-bromoacetil)-3-nitrofenilkarbamat

[0317]

[0318] Intermedijer 16A. Metil 4-jodo-3-nitrofenilkarbamat: U ohlađenu (0 °C), žutu suspenziju 4-jodo-3-nitroanilina (8.46 g, 32.0 mmol) u DCM (320 mL) i piridin (2.85 mL, 35.2 mmol) je dodat u kapima metil hloroformata (2.61 mL, 33.6 mmol) i reakcija je mešana tokom 1.5 h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM i isprana sa zasićenim NaHCO3 rastvorom praćeno sa fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je rastvoren u minimalnom DCM (∼100 mL), zatim je heksan (600 mL) dodat da se dobije žuta suspenzija. Gornja suspenzija je zatim filtrirana i čvrsta supstanca je isprana sa heksanom i osušena na vazduhu da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (10.3 g, 100%). MS(ESI) m/z: 321.3 (M-H).

[0319] Intermedijer 16B. Metil 4-acetil-3-nitrofenilkarbamat: Rastvor Intermedijera 16A (1 g, 3.11 mmol), tributil(1-etoksivinil)stanana (2.098 mL, 6.21 mmol), i bis(trifenilfosfin) paladijum(II)hlorida (0.218 g, 0.311 mmol) u toluenu (6.21 mL) je zagrejan na 110 °C u zatvorenoj epruveti. Nakon 3 h, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana do suva. Ostatak je zatim rastvoren u THF (5 mL), dodat je 1 N HCl rastvor (15.53 mL, 15.53 mmol), i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirov proizvod je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod kao braon čvrsta supstanca (0.544 g, 74%). MS(ESI) m/z: 239.3 (M+H)<+>.

[0320] Intermedijer 16. Metil 4-(2-bromoacetil)-3-nitrofenilkarbamat: U žuti rastvor Intermedijera 16B (0.544 g, 2.284 mmol) u EtOAc (18.27 mL) je dodat bakar (II) bromid (1.020 g, 4.57 mmol). Sud je opremljen sa refluksnim kondenzatorom i zatim reakcija je zagrejana do 70 °C. Nakon 3 h, reakcija je zaustavljena i ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz sinterovani stakleni levak eluiranjem sa EtOAc. Zeleni filtrat je ispran sa H2O (3x), fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da se dobije željeni proizvod kao braon pena(0.724 g, 100%). MS(ESI) m/z: 317.4 (M+H)<+>, 319.4 (M+2+H)<+>. Sirov proizvod je prenešen dalje bez bilo kakvog daljeg prečišćavanja.

[0321] Alternativna procedura za Intermedijer 16 je istaknuta ovde.

[0322] Alternativni Intermedijer 16B. Metil 4-(1-etoksivinil)-3-nitrofenilkarbamat: Rastvor Intermedijera 16A (1 g, 3.11 mmol), tributil(1-etoksivinil)stanana (1.574 mL, 4.66 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (0.109 g, 0.155 mmol) u toluenu (6.21 mL) u sudu sa okruglim dnom koji je opremljen sa kondenzatorom je zagrejan na 110 °C. Nakon 2 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature, filtrirana kroz 0.45 µ GMF filter i isprana sa EtOAc. Filtrat je koncentrovan do suva i prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod kao braon čvrsta supstanca (0.56 g, 68%). MS(ESI) m/z: 267.3 (M+H)<+>.

[0323] Alternativni Intermedijer 16. (Referenca: J. Med. Chem., 45:2127-2130 (2002)) U rastvor Alternativni Intermedijer 16B (0.56 g, 2.103 mmol) u THF (3.12 mL) i H2O (1.091 mL) je dodat NBS (0.374 g, 2.103 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 20 min, reakciona smeša je podeljena između EtOAc i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan da se dobije željeni proizvod kao žuto ulje (0.667 g, 100%). MS(ESI) m/z: 317.2 (M+H)<+>, 319.2 (M+2+H)<+>.

Intermedijer 17

Benzil 2-metilbut-3-enoat

[0324]

[0325] Intermedijer 17. Benzil 2-metilbut-3-enoat: U rastvor 2-metilbut-3-enoinska kiselina (9.5 g, 95 mmol) u DCM (80 mL) je dodat fenilmetanol (10.26 g, 95 mmol), N,N'-metandiilidendicikloheksanamin (19.58 g, 95 mmol) i DMAP (1.159 g, 9.49 mmol) (egzotermna reakcija) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko vikenda. Reakciona smeša je filtrirana kroz uložak od CELITE® da se uklone čvrste supstance i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod kao bezbojno ulje.

Intermedijer 18

Metil estar [3-Bromo-4-(2-bromo-acetil)-fenil]-karbaminske kiseline

[0326]

[0327] Intermedijer 18A. 2-Bromo-4-nitro-benzoeva kiselina: U topao (80 °C) rastvor piridina (500 mL) i vode (1 L) je dodat 4-nitro-2-bromo toluen (100 g, 0.46 mol). Dobijena suspenzija je mešana dok nije postala bistar rastvor. U gornju reakcionu smešu je zatim dodat KMnO4 (600 g, 3.8 mol) u delovima tokom 1.5 h i mešanje je nastavljeno preko noći. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i zatim 10% vodeni NaOH (200 mL) je dodat. Nakon 15 min, reakcija je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana sa 10% vodenim NaOH (5x100 mL). Filtrat je ekstrahovan sa MTBE (3x250 mL). Bistar vodeni sloj je ohlađen do 10 °C i zatim je zakiseljen sa koncentrovanom HCl. Vodeni sloj je ponovo esktrahovan sa MTBE (4x500 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtriran, i koncentrovani da se dobije 72 g Intermedijera 18A.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.96 (d, J = 8 Hz, 1H), 8.28 - 8.48 (m, 1H), 8.49 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 14.1 (br. s, 1H) ppm.

[0328] Intermedijer 18B. Dietil estar 2-(2-Bromo-4-nitro-benzoil)-malonske kiseline: U rastvor intermedijera 18A (50 g, 0.2 mol) u toluenu (500 mL) je dodat TEA (24.6 g, 0.24 mol). Reakcija je ohlađena do 15 °C i etil hloroformat (24 g, 0.22 mol) je dodat. Nakon 45 min, izmešani anhidridni rastvor je ohlađen do 0 °C. U odvojenom sudu: U suspenziju Mg strugotina (5.4 g) u suvom etru (300 mL) je dodat EtOH (3.0 mL), CCl4 (2.0 mL), i dietil malonat (34 mL, 0.22 mol). Smeša je mešana na 40 °C tokom sata da se osigura da je magnezijum rastvoren potpuno. Nakon što je reakcija postala bistar rastvor, dodat je u ohlađen rastvor izmešanog anhidrida. Nakon 2 h, reakcija je kvenčovan sa 2 N sumporne kiseline (200 mL) i zatim esktrahovana sa EtOAc (4x100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, i koncentrovani da se dobije 80 g Intermedijera 18B. Ovo je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0329] Intermedijer 18C. 1-(2-Bromo-4-nitro-fenil)-etanon: Smeša Intermedijera 18B (80 g, 0.2 mol) u sirćetnoj kiselini (400 mL) i sumpornoj kiselini (400 mL) je mešana na 105 °C. Nakon 3 h, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i zatim esktrahovana sa etil acetatom (2x500 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 20% vodenim rastvorom NaOH, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije 43.0 g Intermedijera 18C.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.66 (s, 3H), 7.57 (d, J = 8 Hz, 1H), 8.21 - 8.24 (dd, 1H), 8.48 (d, J = 2.0 Hz, 1H) ppm.

[0330] Intermedijer 18D. 1-(4-Amino-2-bromofenil)etanon: U rastvor intermedijera 18C (19 g, 0.077 mol) u EtOH (400 mL) je dodat u delovima tin(II) hlorid (74 g, 0.39 mol). Nakon dodavanja, reakcija je zagrejana do temperature refluksa preko noći. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i ostatak je rastvoren u 10% vodenom NaOH (200 mL). Vodeni rastvor je ekstrahovan sa etil acetatom (2x200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom i koncentrovani da se dobije ulje. Petrol etar (25 mL) je dodat u ulje da se dobije suspenzija koja je proceđena i čvrsta supstanca je suspendovana u 20% etil acetat/petrol etar. Organski sloj je filtriran i čvrste supstance su sakupljene da se dobije 14 g Intermedijera 18D.

[0331] Intermedijer 18E. metil estar (4-Acetil-3-bromo-fenil)-karbaminske kiseline: U ohlađenu (10 °C) smešu Intermedijera 18D (14g, 0.065 mol) i Hunig-ove baze (12.7 g, 0.098 mol) u suvom dioksanu (140 mL) je dodat metil hloroformat (7.4 g, 0.078 m) u kapima. Nakon 3 h, reakciona smeša je kvenčovana sa vodom (100 mL) i zatim esktrahovana sa etil acetatom (2x150 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, i koncentrovani. Prečišćavanje trituracijom iz izopropanola obezbedilo je 14 g Intermedijera 18E. MS(ESI) m/z: 271.7 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.50 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 7.53 - 7.56 (m, 1H), 7.78 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 10.14 (s, 1H) ppm.

[0332] Intermedijer 18. metil estar [3-Bromo-4-(2-bromo-acetil)-fenil]-karbaminske kiseline: U ohlađen (10 °C) rastvor Intermedijera 18E (90 g, 0.33 mol) u suvom dioksanu (900 mL) je dodat rastvor broma (52.9 g, 0.33 mol) u dioksanu (430 mL) u kapima tokom 1 h. Nakon 2 h, ledeno hladna voda (500 mL) je dodata i reakcija je ekstrahovana sa etil acetatom (2x500 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtriran, i koncentrovan da se dobije 110 g sirovog proizvoda. Suspenzija sirovog proizvoda u EtOH (1 L) je zagrejana do 50 °C. Nakon što je formiran bistar rastvor, voda (1.0 L) je dodata u kapima i smeša je postepeno ohlađena do 35 °C. Istaložena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana sa EtOH (200 mL), osušena na vazduhu, i zatim osušena na 50 °C pod vakuumom tokom 30 min da se dobije 70 g Intermedijera 18.

Intermedijer 19

5-Amino-1-(2,3-dihlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0333]

[0334] Intermedijer 19A. etil 5-amino-1-(2,3-dihlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat: Smeša (2,3-dihlorofenil)hidrazina, HCl (1 g, 4.68 mmol), (E)-etil 2-cijano-3-etoksiakrilata (0.792 g, 4.68 mmol), i K2CO3 (0.647 g, 4.68 mmol) u EtOH (10 mL) je dodata u bočicu za mikrotalasnu i zagrejana je na 85 °C tokom 20 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i zatim sipana u ledenu voda. Suspenzija koja je formirana je zatim filtrirana i čvrsta supstanca je isprana sa vodom i osušena u vakuumskoj rerni (50 °C) tokom 4 h da se dobije braon čvrsta supstanca. Sirov proizvod je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije braon čvrsta supstanca kao etil 5-amino-1-(2,3-dihlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat (0.93 g, 66% prinos). MS(ESI) m/z: 300.0 (M+H)<+>.

[0335] Intermedijer 19. 5-Amino-1-(2,3-dihlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: Bistar žuti rastvor Intermedijera 19A (0.026 g, 0.087 mmol) u MeOH (2 mL) i 1.0 N NaOH (0.260 mL, 0.260 mmol) je mešan na sobnoj temperaturi praćeno zagrevanjem do 70 °C tokom 24 h. U smešu je dodat dodatni 1 N NaOH (0.260 ml, 0.260 mmol), i reakciona smeša je zagrejana do 90 °C tokom 7 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, i 1 N HCl (0.75 mL) je dodat i reakciona smeša je koncentrovana da se dobije žuta čvrsta supstanca kao 5-amino-1-(2,3-dihlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina (0.065 g, 99%). MS(ESI) m/z: 271.9 (M+H)<+>.

Intermedijer 20

1-(2,3-Dihlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0336]

[0337] Intermedijer 20A. etil 1-(2,3-dihlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat: U rastvor intermedijera 19A (0.23 g, 0.766 mmol) u THF (8 mL) je dodat izoamil nitrit (0.206 mL, 1.533 mmol) i reakcija je zagrejana u bočici za mikrotalasnu na 80 °C. Nakon 16 h, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Sirov proizvod je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije žuti lepljivo ulje kao etil 1-(2,3-dihlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat (0.187 g, 86%). MS(ESI) m/z: 285.0 (M+H)<+>.

[0338] Intermedijer 20. 1-(2,3-Dihlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U bistar žuti rastvor Intermedijera 20A (0.187 g, 0.656 mmol) u MeOH (8 mL) je dodat 1.0 N NaOH (1.968 mL, 1.968 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 18 h, reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni MeOH. U gornji sirov proizvod je zatim dodata voda da se dobije žuti rastvor. U ovaj rastvor je zatim dodat 1 N HCl (2.5 mL) da se dobije bela suspenzija koja je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana sa vodom, i zatim osušena u vakuumskoj rerni (50 °C) tokom 4 h. Žuta čvrsta supstanca je dobijena kao 1-(2,3-dihlorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina (0.16 g, 95%). MS(ESI) m/z: 257.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.51 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.75 (dd, J = 8.3, 1.7 Hz, 1H), 7.61 - 7.56 (m, 1H), 7.54 - 7.49 (m, 1H) ppm.

Intermedijer 21

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0339]

[0340] Intermedijer 21.1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor 3-hloro-2-fluoroanilina (1.7 g, 11.68 mmol) u TFA (10 mL) je dodata voda (2 mL) i reakciona smeša je ohlađena do 0 °C. U gornji rastvor je zatim dodat natrijum nitrit (0.806 g, 11.68 mmol) tokom 0.5 h. U gornju smešu je zatim dodat polako rastvor natrijum azida (1.928 g, 29.7 mmol) u vodi. Reakciona smeša je zatim mešana na 0 °C tokom 10 min, i zatim ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Nakon 2 h, reakciona smeša je kvenčovana dodavanjem vode (100 mL) i nerastvorne čvrste supstance iz reakcione smeše su filtrirane i osušene pod usisavanjem u prisustvu azota. U azid je zatim dodat metil acetoacetat (1.492 g, 12.85 mmol) u MeOH (12 mL) i metanol, natrijumski derivat (2.78 g, 12.85 mmol) i smeša je zagrejana na 65 °C u zatvorenoj epruveti preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i zatim do 0 °C praćeno sa dodavanjem THF (50 mL). U gornju smešu je zatim dodat NaOH (58.4 mL, 58.4 mmol), i reakcija je zagrejana do 50 °C. Nakon 2 h, organski delovi su koncentrovani i preostali vodeni sloj je zakiseljen sa 1.0 M HCl rastvorom. Dobijena suspenzija je filtrirana i čvrste supstance su isprane sa vodom praćeno sa malom količinom hladnog MeOH i osušene u rerni preko noći (50 °C) da se dobije 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina (1.86 g, 62%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 256.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 - 7.89 (m, 1H), 7.80 - 7.71 (m, 1H), 7.53 (td, J = 8.2, 1.3 Hz, 1H), 2.44 (s, 3H) ppm.

Intermedijer 22

2-(3-Hloro-2,6-diftuorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina

[0341]

[0342] Intermedijer 22A. 2-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-4-(trifluorometil)-1H-imidazol: (Referenca: WO 2008/050244) U rastvor kalijum acetata (0.872 g, 8.88 mmol) u H2O (3 mL) je dodat 3,3-dibromo-1,1,1-trifluoropropan-2-on (1.098 g, 4.07 mmol). Gornja reakciona smeša je zatim zagrejana na 100 °C tokom 0.5 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i u smešu je zatim dodat rastvor 3-hloro-2,6-difluorobenzaldehid (0.653 g, 3.7 mmol) u MeOH (4 mL) i THF (4 mL), praćeno sa koncentrovanom NH4OH (8 mL). Smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4 i koncentrovan u vakuumu da se dobije 2-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-4-(trifluorometil)-1H-imidazol (0.95 g, 91%). MS(ESI) m/z: 283.0 (M+H)<+>.

[0343] Intermedijer 22. 2-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina: Rastvor Intermedijera 22A (0.95 g, 3.36 mmol) u 5 N vodenom rastvoru NaOH (10 mL) rastvor je zagrejan na 90 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, neutralisana pažljivo sa pH = 6 -7 i esktrahovana sa 1-butanolom (3x30 mL) da se obezbedi 2-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina (0.57 g, 66%). MS(ESI) m/z: 259.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.66 - 7.55 (m, H), 7.60 (s, 1H), 7.16 (td, J = 9.2, 1.8 Hz, 1H) ppm.

Intermedijer 23

5-Amino-1-(5-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0344]

[0345] Intermedijer 23A. Etil 5-amino-1-(5-hloro-2-ftuorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat: Braon suspenzija (5-hloro-2-fluorofenil)hidrazin hidrohlorida (0.500 g, 2.54 mmol), (E)-etil 2-cijano-3-etoksiakrilat (0.472 g, 2.79 mmol) u EtOH (2.54 mL) i TEA (0.707 mL, 5.08 mmol) je zagrejana do 85 °C. Nakon 5 h, reakcija je zaustavljena, ohlađena do sobne temperature, i koncentrovana da se dobije braon čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi obezbedilo je Intermedijer 23A (0.244 g, 34%) kao gusto, viskozno narandžasto ulje. MS(ESI) m/z: 284.0 (M+H)<+>.

[0346] Intermedijer 23. 5-Amino-1-(5-hloro-2-ftuorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: Zamućena, žuta suspenzija Intermedijera 23A (0.125 g, 0.441 mmol) u MeOH (2.203 mL) i 1.0 N NaOH (1.763 mL, 1.763 mmol) je zagrejana do 50 °C. Nakon 8 h, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i bistar, žuto narandžasti rastvor je koncentrovan da se dobije žuta čvrsta supstanca. Žuta čvrsta supstanca je rastvorena u vodi i 1.0 N HCl je dodat da se dobije bela suspenzija (pH 3-4). Smeša je zatim esktrahovana sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani da se dobije Intermedijer 23 (0.096 g, 85%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 256.0 (M+H)<+>i 258.0 (M+2+H)<+>.

Intermedijer 24

1-(3-Hloro-2-ftuorofenil)-5-metil-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina, HCl

[0347]

[0348] Intermedijer 24A. Etil 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-imidazol-4-karboksilat: Korišćenjem modifikovane procedure Sreedhar-a. (Referenca: Sreedhar, B., Synthesis, 795 (2008)). U suspenziju etil 4-metil-1H-imidazol-5-karboksilata (0.530 g, 3.44 mmol) i (3-hloro-2-fluorofenil)boronske kiseline (0.500 g, 2.87 mmol) u MeOH (5.74 mL) je dodat bakar oksid (0.041 g, 0.287 mmol). Dobijena ljubičasta suspenzija je mešana energično na vazduhu (epruveta za sušenje je korišćena). Nakon 20 h, reakciona smeša je filtrirana da se uklone čvrste supstance i čist plavifiltrat je koncentrovan da se dobije plava čvrsta supstanca. Plava čvrsta supstanca je suspendovana u DCM i filtrirana da se uklone čvrste supstance i plavi filtrat je koncentrovan da se dobije bledo plava čvrsta supstanca koja teži 0.187 g. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je etil 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-4-metil-1H-imidazol-5-karboksilat (0.0187 g, 2%) kao čist, bezbojan ostatak i etil 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-imidazol-4-karboksilat (Intermedijer 24A) (0.0079 g, 1%) kao čist, bezbojan ostatak. MS(ESI) m/z: 283.1 (M+H)<+>.

[0349] Intermedijer 24A može takođe biti sintetisan u tri koraka u skladu sa sledećim redosledom:

Intermedijer 24A1. Etil 3-((3-hloro-2-fluorofenil)amino)-2-nitrobut-2-enoat: Korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Gomez-Sanchez. (Referenca: Gomez-Sanchez, A. et al., Anales De Quimica, 81 (2):139 (1985).) bistar blago žuti rastvor etil nitroacetata (4.17 ml, 37.6 mmol) i trietilortoacetata (6.93 mL, 37.6 mmol) u toluenu (9.39 mL) je zagrejan do 110 °C. Dean-Stark aparat je korišćen da se azeotropira etanol. Približno svakih 30 min, rastvarač je uklonjen iz Dean-Stark-a i dodatni toluen (6 mL) je dodat u reakcioni sud. Tokom odvijanja reakcije boja je postala čisto mononotono žuta boja. Nakon 7.5 h, reakcija je zaustavljena i ohlađena je do sobne temperature. Višak rastvarača i početnih materijala su uklonjeni destilacijom (5 mm Hg na 100 °C) ostavljajući etil 3-etoksi-2-nitrobut-2-enoat (5.46 g) kao narandžastu tečnost. Narandžasti rastvor 3-hloro-2-fluoroanilina (5.86 g, 40.2 mmol) i etil 3-etoksi-2-nitrobut-2-enoata (5.45 g, 26.8 mmol) u etanolu (13.41 mL) je mešan na sobnoj temperaturi. Nakon 7 h, reakcija je zaustavljena i koncentrovana da se dobije narandžasto ulje. Narandžasto ulje je razblaženo sa EtOAc i isprano sa 1.0 N HCl (2x), zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušeno preko natrijum sulfata, filtrirano i koncentrovano da se dobije narandžasto ulje. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je Intermedijer 24A1 (2.90 g, 36%) kao viskozno narandžasto-žuto ulje.<1>H NMR pokazalo je 1:1 E:Z smešu. MS(ESI) m/z: 325.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 11.54 (br. s., 1H), 10.77 (br. s., 1H), 7.50 - 7.45 (m, 1H), 7.44 - 7.38 (m, 1H), 7.24 - 7.12 (m, 4H), 4.39 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.34 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.15 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 2.12 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

[0350] Intermedijer 24A (Alternativa). Etil 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-imidazol-4-karboksilat: Korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Gomez-Sanchez. (Referenca: Gomez-Sanchez, A. et al., J. Heterocyclic Chem., 24:1757 (1987).) Čist, žuti rastvor Intermedijera 24A1 (2.90 g, 9.58 mmol) u trietilortoformatu (96 mL) je degasiran sa argonom tokom 20 min. Zatim, platina na ugljeniku (0.935 g, 0.479 mmol) je dodata. Sud je opremljen sa refluksnim kondenzatorom i reakcija je pročišćena vodonikom (balon) tokom nekoliko minuta. Reakcija je mešana u atmosferi vodonika i reakcija je zagrejana do 75 °C. Nakon ukupno 4 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature. Reakcija je postavljena pod vakuumom tokom nekoliko minuta i zatim povratno napunjena sa argonom. Proces je ponovljen ukupno 5 puta. Zatim, CELITE® je dodat i reakcija je filtrirana, isprana sa etanolom. Filtrat je koncentrovan da se dobije čisto, žutobraon ulje koje teži 3.17 g. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi obezbedilo je Intermedijer 24A (Alternativa) (1.64 g, 61 %) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 283.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, metanol-d4) δ 7.82 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.73 (ddd, J = 8.3, 6.7, 1.8 Hz, 1H), 7.48 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.7 Hz, 1H), 7.43 - 7.38 (m, 1H), 4.36 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.39 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

[0351] Intermedijer 24. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina, 1 HCl: U bistar, bezbojan rastvor Intermedijera 24A (Alternativa)(1.64 g, 5.80 mmol) u metanolu (29.0 ml) je dodat 1.0 M NaOH (17.40 mL, 17.40 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 20 h, reakcija je koncentrovana pod visokim vakuumom uz minimalno zagrevanje da se dobije čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je suspendovana u vodi i 1.0 N HCl je dodat dok je smeša na pH = 1-2. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana sa vodom, osušena na vazduhu, i osušena pod visokim vakuumom da se dobije Intermedijer 24 (1.44 g, 81%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.91 (d, J = 0.5 Hz, 1H), 7.83 (ddd, J = 8.3, 6.9, 1.7 Hz, 1H), 7.63 (td, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.46 (td, J = 8.1, 1.4 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H). MS(ESI) m/z: 255.0 (M+H)<+>i 257.0 (M+2+H)<+>.

Intermedijer 25

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0352]

[0353] Intermedijer 25A. Etil 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilat: (Referenca: Herold, P. et al., Tetrahedron, 56:6497-6499 (2000)) Rastvor etil 2-((dimetilamino)metilen)-3-oksobutanoat (0.517 g, 2.79 mmol), (3-hloro-2-fluorofenil)hidrazin hidrohlorid (0.500 g, 2.54 mmol) u EtOH (2.54 mL) i TEA (0.707 mL, 5.08 mmol) je mešan na sobnoj temperaturi. Nakon 10 min, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena silika gel hromatografijom. Željeni proizvod, etil 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilat (200 mg, 28%), je dobijen kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 283.1 (M+H)<+>.

[0354] Intermedijer 25. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor intermedijera 25A (50mg, 0.177 mmol) u MeOH (0.884 mL) je dodat 1 N NaOH (vodeni) (1.061 mL, 1.061 mmol) i reakcija je mešana na 50 °C u zatvorenoj bočici tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Ostatak je zatim podeljen između 1 N HCl (vodeni) i EtOAc. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojsevi su kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom, i koncentrovani da se dobije Intermedijer 25 kao prljavo bela čvrsta supstanca (48 mg, 107%). MS(ESI) m/z: 255.0 (M+H)<+>.

Intermedijer 26

1-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0355]

[0356] Intermedijer 26A. 2-Azido-4-hloro-1,3-difluorobenzen: U rastvor 3-hloro-2,6-difluoroanilina (1.7 g, 10.39 mmol) u TFA (10 mL) i vodi (2 mL) na 0 °C je dodat natrijum nitrit (0.717 g, 10.39 mmol) tokom perioda od 0.5 h. Nakon završetka dodavanja, natrijum azid (1.716 g, 26.4 mmol) u vodi (5 mL) je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min i zatim ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Reakcija je razblažena sa vodom (75 mL) i esktrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen i koncentrovan da se dobije željeni proizvod (1.16 g, 56%) kao braon čvrsta supstanca.

[0357] Intermedijer 26B. Metil 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat: Smeša Intermedijera 26A (1.16 g, 6.12 mmol), metil 3-oksobutanoaat (0.729 mL, 6.73 mmol), NaOMe (1.539 mL, 6.73 mmol), i MeOH (12 mL) u bočici za mikrotalasnu je mešana na 65 °C preko noći. Reakcija je koncentrovana i prečišćena silika gel hromatografijom da se izoluje željeni proizvod (46 mg, 2%) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 287.8 (M+H)<+>.

[0358] Intermedijer 26. 1-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor intermedijera 26B (46 mg, 0.160 mmol) je dodat LiOH (0.320 mL, 0.320 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zakiseljena sa 1 N HCl. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen i koncentrovan da se dobije željeni proizvod (40 mg, 82%). MS(ESI) m/z: 274.0 (M+H)<+>.

Intermedijer 27

5-Amino-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0359]

[0360] Intermedijer 27A. Etil 5-amino-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat: (PCT međunarodna prijava br. 2006/047516 (2006)) U rastvor NaOEt (4.99 g, 15.39 mmol) u EtOH (10 mL) na 0 °C je dodat etil 2-cijanoacetat (1.501 ml, 14.11 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 10 min i dodat je 1-azido-3-hloro-2-fluorobenzen (2.2 g, 12.82 mmol). Reakcija je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature i mešana je tokom 14 h. Smeša je tretirana sa vodom (3 mL) i esktrahovana sa EtOAc (3x30 mL). Kombinovan ekstrakti su koncentrovani i prečišćeni silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (2.1 g, 58%). MS(ESI) m/z: 285.1 (M+H)<+>.

[0361] Intermedijer 27. 5-Amino-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor intermedijera 27A (100 mg, 0.351 mmol) u THF (15 mL) i MeOH (15.0 mL) je dodat NaOH (70 mg, 1.756 mmol). Reakcija je mešana na 50 °C tokom 2 h i zatim koncentrovana. Smeša je zakiseljena do pH ~5 sa 1 N HCl. Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana i osušena da se dobije željeni proizvod (69 mg, 77%). MS(ESI) m/z: 257.0 (M+H)<+>.

Intermedijer 28

5-Hloro-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0362]

[0363] Intermedijer 28A. Etil 5-hloro-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat: (Can. J. Chem., 37:118-119 (1959)). U rastvor intermedijera 27A (1.1 g, 3.86 mmol) u EtOH (30 mL) na 0 °C je pušten HCl gas dok nije rastvorena sva čvrsta supstanca. U rastvor je dodat izoamil nitrit (0.520 mL, 3.86 mmol) u jednoj porciji i dobijeni rastvor je držan na 0-5 °C tokom 48 h. Reakciona smeša je razblažena u EtOAc i isprana sa vodenim rastvorom NaHCO3 i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je koncentrovan i prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod. MS(ESI) m/z: 304.0 (M+H)<+>.

[0364] Intermedijer 28. 1-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor intermedijera 28A (50 mg, 0.164 mmol) u THF (6 mL) i MeOH (3.00 mL) je dodat LiOH (39.4 mg, 1.644 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h i koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije Intermedijer 28 (23 mg, 51%). MS(ESI) m/z: 276.0 (M+H)<+>.

Intermedijer 29

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metoksi-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0365]

[0366] Intermedijer 29. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metoksi-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor intermedijera 28A (50 mg, 0.164 mmol) u THF (6 mL) i MeOH (3.00 mL) je dodat LiOH (39.4 mg, 1.644 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h i koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije Intermedijer 29 (12 mg, 27%). MS(ESI) m/z: 272.0 (M+H)<+>.

Intermedijer 30

1-(2-Fluoro-3-metoksifenil)-5-metoksi-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina [0367]

[0368] Intermedijer 30. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metoksi-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor 2-fluoro-3-metoksianilina (1 g, 7.09 mmol) u TFA (10 mL) i vodi (5 mL) na 0 °C je dodat vodeni rastvor NaNO2(0.733 g, 10.63 mmol) u kapima. Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 0.5 h i NaN3 (0.921 g, 14.17 mmol) je dodata u delovima. Reakciona smeša je postepeno zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 4 h. Reakcija je kvenčovana sa vodom (150 mL) i esktrahovana sa EtOAc (2x100 mL). Organski sloj je ispran sa natrijum fosfatnim rastvor (10%) i fiziološkim rastvorom (50 mL), osušen, i koncentrovan. Dobijeno braon ulje je ponovo rastvoreno u DMSO (20 mL) i dodat je t-butilpropiolat (1 mL) praćeno sa K2CO3 (1 g), Cu(OAc)2 (0.2 g), i natrijum askorbatom (100 mg). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je kvenčovana sa vodom (200 mL) i esktrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski sloj je osušen i koncentrovan. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod kao braon ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13.1 (br. s., 1H), 7.36 - 7.20 (m, 2H), 7.17 - 6.95 (m, 1H), 6.76 (td, J= 8.1, 1.3 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 1.74 - 1.49 (m, 10H). MS(ESI) m/z: 238.0 (M+H)<+>.

Intermedijer 31

1-(Tiazol-2-il)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0369]

[0370] Intermedijer 31.1-(Tiazol-2-il)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: U suspenziju metil 1-(tiazol-2-il)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilata (7.4 mg, 0.035 mmol) (pripremljen kao u J. Heterocyclic Chem., 42:1167 (2005)) u MeOH (352 µL) je dodat 1 N NaOH (141 µL, 0.141 mmol). Reakcija je postala bistra u roku od 5 min. Reakcija je koncentrovana. Dobijeni ostatak je podeljen između 1 N HCl i EtOAc. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x). Organski slojevi su kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije željeni proizvod (5 mg, 72%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 169.9 (M+H)<+>.

Intermedijer 32

3-Acetil-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0371]

[0372] Intermedijer 32A. (E)-N'-(3-Hloro-2-fluorofenil)-2-oksopropanhidrazonoil hlorid: U rastvor 3-hloro-2-fluoroanilina (1.511 mL, 13.74 mmol) u HCl (116 mL, 116 mmol) na 0 °C je dodat rastvor natrijum nitrita (1.896 g, 27.5 mmol) u vodi (12 mL) u kapima dok je održavana temperatura na 0 °C. Nakon završetka dodavanja, reakcija je mešana na istoj temperaturi tokom dodatnih 30 min. pH reakcione smeše je podešen do 4.5 korišćenjem čvrstog natrijum acetata. Dobijena smeša je zatim tretirana u kapima sa 3-hloropentan-2,4-dionom (2.129 mL, 17.86 mmol) u metanolu (12 mL). Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature i mešana je na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa vodom i zatim esktrahovana sa etrom. Sirov proizvod je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se izoluje željeni proizvod. MS(ESI) m/z: 249.0 (M+2H)<+>.

[0373] Intermedijer 32B. Etil 3-acetil-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilat: U rastvor (E)-etil 3-(pirolidin-1-il)but-2-enoata (36.8 mg, 0.201 mmol) u DCM (2 mL) je dodat DIEA (0.168 mL, 1.204 mmol) praćeno sa 32A (50 mg, 0.201 mmol) i reakcija je mešanA na temperaturama refluksovanja preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa vodom i esktrahovana sa etil acetatom. Organski sloj je osušen preko MgSO4 i koncentrovan da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem ISCO normalnog faznog sistema. MS(ESI) m/z: 325.0 (M+H)<+>.

[0374] Intermedijer 32. 3-Acetil-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor 32B (67 mg, 0.206 mmol) u THF (2 mL) je dodat LiOH (0.227 mL, 0.227 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zakiseljena sa 1 N HCl i esktrahovana sa EtOAc. Sirov proizvod je stavljen u sledeći korak bez daljeg prečićavanja. MS(ESI) m/z: 297.0 (M+H)<+>.

Intermedijer 33

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-3-hidroksi-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0375]

[0376] Intermedijer 33A. N'-(3-Hloro-2-fluorofenil)acetohidrazid: U rastvor (3-hloro-2-fluorofenil)hidrazina, HCl (450 mg, 2.284 mmol) u etru (10 mL) i THF (1 mL) na 0 °C je dodat natrijum hidroksid (0.228 mL, 2.284 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 1h. Reakciona smeša je koncentrovana, razblažena sa EtOAc i isprana sa fiziološkim rastvorom. Sirov proizvod je zatim osušen pod vakuumom i prenet u sledeći korak. U rastvor gornjeg dobijenog ulja u etru (10 mL) na 0 °C je dodat u kapima rastvor anhidrida sirćetne kiseline (0.215 mL, 2.284 mmol) u etru (5 mL) i mešan na 0 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana, razblažena sa etil acetatom i isprana sa fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen preko MgSO4i koncentrovan da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je zatim stavljen u sledeći korak bez daljeg prečićavanja. MS(ESI) m/z: 203.1 (M+H)<+>.

[0377] Intermedijer 33B. Etil 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-3-hidroksi-1H-pirazol-4-karboksilat: U intermedijer 33A (261 mg, 1.288 mmol) je dodat fosforil trihlorid (973 µL, 10.43 mmol) praćeno sa dietil 2-(etoksimetilen)malonatom (351 µL, 1.739 mmol) i dobijeni rastvor je zagrejan na 70 °C preko noći. U reakcionu smešu je dodata voda polako (Oprez: stvara se mnogo toplote) I ostavljena je da se meša dok reakciona smeša nije opet ohlađena do sobne temperature. Sirov proizvod je zatim razblažen sa etil acetatom i ispran sa fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen preko MgSO4 i koncentrovan da se dobije sirov proizvod koji je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije. MS(ESI) m/z: 285.0 (M+H)<+>.

[0378] Intermedijer 33.1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-3-hidroksi-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor intermedijera 33B (52 mg, 0.183 mmol) u THF (2 mL) je dodat LiOH (0.183 mL, 0.183 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zakiseljena korišćenjem 1 N HCl i zatim esktrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko MgSO4i koncentrovan da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je uzet dalje bez bilo kakvog daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 257.0 (M+H)<+>.

Intermedijer 34

1-(5-Hloro-2-cijanofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina

[0379]

[0380] Intermedijer 34A.2-Azido-4-hlorobenzonitril: U rastvor 2-amino-4-hlorobenzonitrila (2.0 g, 13.11 mmol) u TFA (12 mL) je dodata voda (2.4 mL). Nakon hlađenja do 0 °C, natrijum nitrit (0.904 g, 13.11 mmol) je dodat tokom perioda od 0.5 h. Nakon ovog dodavanja, natrijum azid (2.164 g, 33.3 mmol) u vodi (5 mL) je postepeno dodat u kapima. Reakcija je mešana na 0 °C tokom 10 min, i zatim ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Nakon 2 h, kvenčovan je reakcija sa vodom (100 mL) i nerastvorna čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakuumom i azotom. LCMS analiza alikvota pokazala je da je početni materijal nestao i da je formiran novi pik koji nije jonizujući.

[0381] Intermedijer 34.1-(5-Hloro-2-cijanofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina: U smešu Intermedijera 34A (400 mg, 2.035 mmol) i metil acetoacetata (0.241 mL, 2.238 mmol) u MeOH (12 mL) je dodat NaOMe (121 mg, 2.238 mmol). Smeša je zagrejana na 65 °C u zatvorenoj epruveti preko noći. Reakciona smeša je kvenčovana sa fiziološkim rastvorom i esktrahovana da se dobije estarski proizvod. Vodeni sloj je zakiseljen i zatim esktrahovan sa etil acetatom da se dobije željeni hidrolizovani proizvod koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 262.9 (M+H)<+>.

Intermedijer 35

1-(3-Hloro-2,6-diftuorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina

[0382]

[0383] Intermedijer 35A. Etil 3-((3-hloro-2,6-difluorofenil)amino)-2-nitroakrilat: Zatvorena bočica pod visokim pritiskom koja sadrži čist, bezbojan rastvor etil nitroacetata(0.170 ml, 1.529 mmol), trietilorthoformata (0.255 ml, 1.529 mmol), 3-hloro-2,6-difluoroanilina (0.250 g, 1.529 mmol), sirćetne kiseline (0.026 ml, 0.459 mmol), i EtOH (1.529 ml) je zagrejan do 70 °C. Nakon 92 h, bistar, tamno žuti rastvor je koncentrovan da se dobije narandžasto ulje. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je Intermedijer 35A (0.0721 g, 15%) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 307.0 (M+H)<+>.

[0384] Intermedijer 35B. etil 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilat: Intermedijer 35B (0.029 g, 43%) je pripremljen u skladu sa procedurom opisanom za Intermedijer 24A (Alternativa), zamenjivanjem Intermedijera 24A1 sa Intermedijerom 35A. MS(ESI) m/z: 287.1 (M+H)<+>.

[0385] Intermedijer 35. 1-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina: Intermedijer 35 (0.0246 g, 94%) je pripremljen u skladu sa procedurom opisanom za Intermedijer 24, zamenjivanjem Intermedijera 24A (Alternativa)sa Intermedijerom 35B. MS(ESI) m/z: 259.0 (M+H)<+>.

Intermedijer 36

3-(3-Hloro-2-fluorofenil)-4,5-dihidroizoksazol-5-karboksilna kiselina

[0386]

[0387]<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.72 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.7 Hz, 1H), 7.60 - 7.56 (m, 1H), 7.24 (td, J = 8.0, 1.1 Hz, 1H), 5.22 (dd, J = 11.8, 6.9 Hz, 1H), 3.84 - 3.76 (m, 1H), 3.71 - 3.64 (m, 1H).

Intermedijer 37

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina, HCl

[0388]

[0389] Intermedijer 37A. etil 3-((3-hloro-2-fluorofenil)amino)-2-nitroakrilat: Intermedijer 37A (0.563g, 52%) je pripremljen u skladu sa procedurom opisanom za Intermedijer 35A, zamenjivanjem 3-hloro-2,6-difluoroanilina sa 3-hloro-2-fluoroanilinom. MS(ESI) m/z: 289.0 (M+H)<+>.

[0390] Intermedijer 37B. Etil 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1H-imidazol-4-karboksilat, TFA: Intermedijer 37B je pripremljen u skladu sa procedurom opisanom za Intermedijer 24A (Alternativa), zamenjivanjem Intermedijera 24A1 sa Intermedijerom 37A, zamenjivanjem trietilortoformata sa trietilortoacetatom, i izvođenjem reakcije tokom 45 min. Prečišćavanje pomoću hromatografije na reverznoj fazi dalo je Intermedijer 37B (0.027 g, 17%). MS(ESI) m/z: 283.1 (M+H)<+>.

[0391] Intermedijer 37. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-2-metil-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina, HCl: Intermedijer 37 (0.0175 g, 88%) je pripremljen u skladu sa procedurom opisanom za Intermedijer 24, zamenjivanjem Intermedijera 24A (Alternativa) sa Intermedijerom 37B. MS(ESI) m/z: 254.9 (M+H)<+>.

Intermedijer 38 δ

1-(5-Hloro-2-metoksifenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0392]

[0393] Intermedijer 38A. Etil 1-(5-hloro-2-metoksifenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilat: Intermedijer 38A (0.472 g, 67%) je pripremljen u skladu sa procedurom opisanom za Intermedijer 25, zamenjivanjem (3-hloro-2-fluorofenil)hidrazin hidrohlorida sa (5-hloro-2-metoksifenil)hidrazin hidrohloridom. MS(ESI) m/z: 295.1 (M+H)<+>.

[0394] Intermedijer 38. 1-(5-Hloro-2-metoksifenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: Intermedijer 38 (0.075 g, 73%) je pripremljen u skladu sa procedurom opisanom za Intermedijer 24, zamenjivanjem Intermedijera 24A (Alternativa) sa Intermedijerom 38A. MS(ESI) m/z: 267.0 (M+H)<+>i 269.0 (M+2+H)<+>.

Intermedijer 39

1-(5-Hloro-2-hidroksifenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0395]

[0396] Intermedijer 39.1-(5-Hloro-2-hidroksifenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U ohlađeni (0 °C), bistar žuti rastvor Intermedijera 38A (0.100 g, 0.339 mmol) u DCM (3.39 mL) je dodat u kapima boron tribromid (0.321 ml, 3.39 mmol). Dobijeni bistar svetlo zeleni rastvor je mešan na 0 °C tokom 30 min i zatim reakcija je ostavljen da se ugreje do sobne temperature. Nakon 45 min, reakcija je dodata u kapima do energično mešane smeše hladnog EtOAc i NaHCO3. Nakon dodavanja, smeša je mešana energično tokom 10 min. Zatim, slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije fenol (0.105 g) kao narandžasti ostatak. MS(ESI) m/z: 281.0 (M+H)<+>i 283.0 (M+2H)<+>. U bistar, žuto narandžasti rastvor fenola u metanolu (2 mL) je dodat 1.0 M NaOH (2.036 mL, 2.036 mmol). Dobijeni čist bordo crveni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je zagrejana do 50 °C tokom 2.5 h. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Ostatak je podeljen između voda i EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Vodeni sloj je zakiseljen sa 1.0 M HCl i zatim je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Organski slojevi, nakon acidifikacije, su kombinovani i isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije Intermedijer 39 (0.0657 g, 77%) kao narandžasto-braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 253.0 (M+H)<+>i 254.9 (M+2H)<+>.

Intermedijer 40

3-Amino-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0397]

[0398] Intermedijer 40A. (E)-1-Benziliden-2-(3-hloro-2-ftuorofenil)hidrazin: Korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Deprez-Poulain. (Deprez-Poulain, R. et al., European Journal of Medicinal Chemistry, 46:3867 (2011).) U bistar, narandžasto braon rastvor (3-hloro-2-fluorofenil)hidrazina, HCl (3 g, 15.23 mmol) u metanolu (60.9 ml) je dodat benzaldehid (1.543 mL, 15.23 mmol) praćeno sa sporim dodavanjem 1.0 M NaOH (15.23 mL, 15.23 mmol). Dobijeni tamno braon rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Tokom vremena, formiran je talog. Nakon 2.5 h, reakcija je zaustavljena i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom. Čvrsta supstanca je isprana sa vodom, osušena na vazduhu, i osušena pod vakuumom preko noći da se dobije Intermedijer 40A (1.01 g, 27%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 249.0 (M+H)<+>.

[0399] Intermedijer 40B. Etil 3-amino-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat: tamno braon smeša Intermedijera 40A (1.10 g, 4.42 mmol) i etil estar 2-cijano-3-etoksi-2-propenske kiseline (0.786 g, 4.64 mmol) u ksilenu (5.90 ml) je zagrejana do 160 °C. Nakon 72 h, reakcija je zaustavljena i ohlađena do sobne temperature. Reakcija je koncentrovana da se dobije braon ostatak. Zatim, 30 mL rastvora 37% HCl/EtOH (1:2) je dodato da se dobije suspenzija. Suspenzija je zagrejana do 100 °C. Na povišenoj temperaturi braon rastvor je formiran. Nakon 20 min., reakcija je ohlađena do sobne temperature i rastvarač je uklonjen da se dobije braon ostatak. Ostatak je podeljen između zas. NaHCO3i EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije braon tečnost koja teži 1.3 g. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je prljavo belu čvrstu supstancu koja teži 0.269 g. Prečišćavanje pomoću hromatografije na reverznoj fazi dalo je Intermedijer 40B (0.080 g, 6%) kao paperjastu, čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 284.0 (M+H)<+>i 286.0 (M+2+H)<+>.

[0400] Intermedijer 40. 3-Amino-1-(3-hloro-2-ftuorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U belu suspenziju Intermedijera 40B (0.075 g, 0.264 mmol) u metanolu (2.64 mL) je dodat 1.0 M NaOH (1.058 mL, 1.058 mmol). Suspenzija je zagrejana do 50 °C. Nakon 3 h, dobijeni bistar, bezbojni rastvor je ohlađen do sobne temperature. Zatim, reakcija je koncentrovana da se dobije čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi i zakiseljena do pH 3-4 sa 1.0 N HCl da se dobije bela suspenzija. Suspenzija je ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije Intermedijer 40 (0.0708 g, 105%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 256.0 (M+H)<+>i 258.0 (M+2+H)<+>.

Intermedijer 41

1-(4-Hloro-3-fluoropiridin-2-il)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0401]

[0402] Intermedijer 101A.2-Bromo-4-hloro-3-fluoropiridin: U rastvor 2,2,6,6-tetrametilpiperidin (1.54 mL, 9.12 mmol) u THF (40 mL) je dodat 1.6 M n-BuLi u heksanima (5.23 mL, 8.36 mmol) u kapima na -78 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 0.5 h na 0 °C. On je zatim ohlađen do -78 °C i 4-hloro-3-fluoropiridin (0.769 mL, 7.60 mmol) u 5 mL THF je dodat u kapima preko 30 min. Dobijeni rastvor je mešan na -78 °C tokom 30 min. U rastvor je dodat NBS (1.624 g, 9.12 mmol) u THF (25 mL) u kapima i dobijeni rastvor je mešan tokom 1h na -78 °C, zatim na temperaturi okoline tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc i vodom. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, koncentrovan i prečišćen na silika gel hromatografiji da se dobije željeni proizvod (0.541 g, 34%) kao narandžasto ulje (volatile).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.35 (t, J = 5.1 Hz, 1H).

[0403] Intermedijer 41B.4-Hloro-3-fluoro-2-hidrazinilpiridin, 2HCl: U bočicu za mikrotalasnu je dodat toluen (3 mL) i pročišćen je sa N2 tokom 5 min. terc-Butil karbazat (128 mg, 0.950 mmol), Intermedijer 101A (200 mg, 0.950 mmol), Cs2CO3(310 mg, 0.950 mmol), DPPF (20 mg, 0.036 mmol), i Pd2(dba)3(25 mg, 0.027 mmol) su dodati sekvencijalno u rastvor. Zatvorena epruveta je zagrejana na 100 °C tokom 12 h. Reakcija je razblažena sa fiziološkim rastvorom, i esktrahovana sa EtOAc (2x). Kombinovani organski sloj je koncentrovan u vakuumu, dajući uljani ostatak, koji je prečišćen silika gel hromatografijom da se obezbedi terc-butil 2-(4-hloro-3-fluoropiridin-2-il)hidrazinkarboksilat (41 mg, 16%) kao narandžasta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 262.1 (M+H)<+>. Čvrstoj supstanci je dodat EtOH (1 mL) i 4 N HCl u dioksanu (4 mL) i reakciona smeša je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana do suva do željenog proizvoda. MS(ESI) m/z: 162.1 (M+H)<+>.

[0404] Intermedijer 41. 1-(4-Hloro-3-fluoropiridin-2-il)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor terc-butil 2-((dimetilamino)metilen)-3-oksobutanoata (0.045 g, 0.211 mmol) u acetonitrilu (2mL) je dodat TEA (0.030 mL, 0.215 mmol) praćeno sa Intermedijerom 41B (0.038 g, 0.19 mmol). Tamno braon rastvor je mešan tokom 1h na 85 °C. Reakcija je koncentrovana, i voda (1 mL) i CH2Cl2 (1 mL) su dodati. Organski sloj je koncentrovan i prečišćen silika gel hromatografijom da se obezbedi terc-butil 1-(4-hloro-3-fluoro-piridin-2-il)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilat kao braon ulje. MS(ESI) m/z: 312.1 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39 - 8.25 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.51 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 2.57 (s, 3H), 1.48 (s, 9H). Ulje je mešano sa 4 N HCl u dioksanu (2 mL) tokom 12 h na sobnoj temperaturi. Rastvor je uparen do suva praćeno sa koevaporacijom sa toluenom (2x) da se dobije željeni proizvod (12 mg, 22%). MS(ESI) m/z: 256.1 (M+H)<+>.

Intermedijer 42

1-(4-Hloropiridin-2-il)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0405]

[0406] Intermedijer 42A. 4-Hloro-2-hidrazinilpiridin, 2HCl: U bočicu za mikrotalasnu je dodat toluen (4 mL) i pročišćena je sa N2 tokom 5 min. terc-Butil karbazat (66.6 mg, 0.494 mmol), 2-bromo-4-hloropiridin (95 mg, 0.494 mmol), Cs2CO3(161 mg, 0.494 mmol), i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukat (4.03 mg, 4.94 µmol) su dodati. Zatvorena epruveta je zagrejana na 100 °C tokom 5 h. U reakcionu smešu je dodata voda, fiziološki rastvor i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2x). Kombinovani organski sloj je koncentrovan i prečišćen silika gel hromatografijom da se obezbedi terc-butil 2-(4-hloropiridin-2-il)hidrazinkarboksilat (42 mg, 35%) kao crveno ulje. MS(ESI) m/z: 244.2 (M+H)<+>. U gornje ulje je dodat 4 N HCl u dioksanu (2 mL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je koncentrovana do suva da se dobije željeni (36 mg, 34%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 144.0 (M+H)<+>.

[0407] Intermedijer 42. 1-(4-Hloropiridin-2-il)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor terc-butil 2-((dimetilamino)metilen)-3-oksobutanoata (0.032 g, 0.148 mmol) u acetonitrilu (2 mL) je dodat TEA (0.021 mL, 0.148 mmol) i Intermedijer 42A (0.024 g, 0.133 mmol). Tamno braon rastvor je zagrejan do 85 °C tokom 1h. Reakciona smeša je koncentrovana, i voda (1 mL) i CH2Cl2 (1 mL) su dodati. Organski sloj je koncentrovan i prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije terc-butil 1-(4-hloropiridin-2-il)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilat (12 mg, 27%) kao žuto ulje. MS(ESI) m/z: 294.2 (M+H)<+>. U ulje je dodat 4 N HCl u dioksanu (2 mL). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h, bistar narandžasti rastvor je uparen do suva praćeno koevaporacijom sa toluenom (2x) da se dobije željeni proizvod kao lepljiva roza čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 238.2 (M+H)<+>.

Intermedijer 43

1-(3-Fluoro-4-metilpiridin-2-il)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina

[0408]

[0409] Intermedijer 43A. 3-Fluoro-2-hidrazinil-4-metilpiridin: U bočici za mikrotalasnu, rastvor hidrazin monohidrata (0.051 mL, 1.053 mmol), 2-bromo-3-fluoro-4-metilpiridina (200 mg, 1.053 mmol), DIEA (0.551 mL, 3.16 mmol) u izorpopanolu (2 mL) je zagrejan na 50 °C preko noći. Dodatni hidrazin monohidrat (0.100 mL) je dodat i reakcija je zagrejana na 100 °C tokom 30 min, zatim na 120 °C tokom 30 min u mikrotalasnom reaktoru. Dodatni hidrazin monohidrat (0.100 mL) je dodat i reakcija je zagrejana na 120 °C preko noći. Isparljive organske supstance su uklonjene u vakuumu i ostatak je ispran sa CH2Cl2. Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana da se obezbedi željeni proizvod. MS(ESI) m/z: 142.0 (M+H)<+>.

[0410] Intermedijer 43. 1-(3-Fluoro-4-metilpiridin-2-il)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor terc-butil 2-((dimetilamino)metilen)-3-oksobutanoat (0.123 g, 0.575 mmol) u acetonitrilu (2 mL) je dodat TEA (0.080 mL, 0.575 mmol) i Intermedijer 43A (0.073 g, 0.517 mmol). Narandžasti rastvor je zagrejan do 85 °C tokom 1h. Dodatni terc-butil 2-((dimetilamino)metilen)-3-oksobutanoat (0.160 mL) i Et3N (0.080 mL) su dodati u rastvor i reakcija je zagrejana na 85 °C tokom 1h. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije terc-butil 1-(3-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksilat kao žuto ulje. MS(ESI) m/z: 292.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.26 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.29 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.43 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.58 (s, 9H). U ulje je dodat 4 N HCl u dioksanu (2 mL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Bistar narandžasti rastvor je uparen do suva praćeno koevaporacijom sa toluenom (2x) da se dobije željeni proizvod (15 mg, 11%) kao lepljiva roza čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 236.1 (M+H)<+>.

Intermedijer 44

1-(3-Fluoro-4-metilpiridin-2-il)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina

[0411]

[0412] Intermedijer 44A. Metil 1-(3-fluoro-4-metilpiridin-2-il)-1H-imidazol-4-karboksilat: A suspenzija metil 1H-imidazol-4-karboksilata (83 mg, 0.658 mmol), 2-bromo-3-fluoro-4-metilpiridina (200 mg, 1.053 mmol), bakar (I) jodida (125 mg, 0.658 mmol) i kalijum karbonata (546 mg, 3.95 mmol) u DMSO (2 mL) je zagrejana na 120° tokom 90 min u uslovima kao u mikrotalasnoj. Reakciona smeša je kvenčovana sa H2O, i čvrsta supstanca je suspendovana u EtOAc i MeOH. Kombinovani organski sloj je koncentrovan u vakuumu, dajući uljani ostatak, koji je prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (5 mg, 3%). MS(ESI) m/z: 236.1 (M+H)<+>.

[0413] Intermedijer 44. 1-(3-Fluoro-4-metilpiridin-2-il)-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina: U rastvor intermedijera 44A (5 mg, 0.021 mmol) u THF (0.6 mL) i H2O (0.3 mL) je dodat LiOH (5 mg). Reakcija je mešana tokom 12 h na sobnoj temperaturi. THF je uklonjen u vakuumu i 1 N HCl vod. rastvor je dodat dok rastvor nije postao kiseo. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2x). Kombinovani organski sloj je koncentrovan do suva da se dobije željeni proizvod (4 mg, 3%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 222.1 (M+H)<+>.

Intermedijer 45

(R)-2-Metilbut-3-enoinska kiselina

[0414]

[0415] Intermedijer 45A. (R)-4-Benzil-3-((R)-2-metilbut-3-enoil)oksazolidin-2-on: U rastvor 2-metilbut-3-enoinske kiseline (5.59 g, 55.9 mmol) i N-metilmorfolina (6.14 ml, 55.9 mmol) u THF (62 mL) na 0 °C je dodat pivaloil hlorid (6.87 ml, 55.9 mmol) u kapima. Reakciona smeša je ohlađen do -78 °C, i mešana tokom ~2 h. U odvojenom sudu: U rastvor (R)-4-benziloksazolidin-2-on (8.25 g, 46.6 mmol) u THF (126 mL) na -78 °C je dodat u kapima N-butillitijum (2.5 M u heksanu) (20.49 mL, 51.2 mmol). Nakon 35 min, ova reakcija je prebačena pomoću kanile u prvu reakciju. Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h, zatim je hladno kupatilo uklonjeno, i reakcija je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl. Reakcija je razblažena sa vodom i esktrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani da se dobije žuto ulje (15 g). Prečišćavanje silika gel hromatografijom dalo je željeni proizvod (6.59 g, 55%) kao bezbojno ulje. MS(ESI) m/z: 282.1 (M+Na)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.36 - 7.19 (m, 5H), 6.03 - 5.93 (m, 1H), 5.23 - 5.10 (m, 2H), 4.69 - 4.63 (m, 1H), 4.51 - 4.43 (m, 1H), 4.23 - 4.15 (m, 2H), 3.29 (dd, J = 13.5, 3.3 Hz, 1H), 2.79 (dd, J = 13.5, 9.6 Hz, 1H), 1.35 (d, J = 6.9 Hz, 3H) ppm. Drugi diastereomer (R)-4-benzil-3((S)-2-metilbut-3-enoil)oksazolidin-2-on (4.6 g, 38%) takođe je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 260.1 (M+H)<+>.

[0416] Intermedijer 45. (R)-2-Metilbut-3-enoinska kiselina: U bistar bezbojni rastvor Intermedijera 45A (6.05 g, 23.33 mmol) u THF (146 mL) na 0 °C je dodat u kapima vodonik peroksid (9.53 mL, 93 mmol) (30% vodeni) praćeno sa 2 N litijum hidroksid (23.33 mL, 46.7 mmol). Nakon 30 min, reakcija je kvenčovana sa 25 mL zasićenog Na2SO3 i 25 mL zasićenog NaHCO3. Reakcija je zatim koncentrovana da se ukloni THF. Ostatak je razblažen sa vodom i esktrahovan sa CHCl3(3x). Vodeni sloj je zakiseljen sa konc. HCl do pH~3 i zatim je ekstrahovan sa EtOAc (3x). EtOAc slojevi su kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije željeni proizvod (2.15 g, 92%) kao bezbojno ulje.

<1>HNMR(500 MHz, CDCl3) δ 10.84 (br. s., 1H), 5.94 (ddd, J = 17.4, 10.1, 7.4 Hz, 1H), 5.22 - 5.13 (m, 2H), 3.23 - 3.15 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.2 Hz, 3H) ppm.

Intermedijer 46

3-(3-Hloro-2-fluorofenil)-4-metilizoksazol-5-karboksilna kiselina

[0417]

[0418] Intermedijer 46A. (E)-3-Hloro-2-fluorobenzaldehid oksim: U rastvor 3-hloro-2-fluorobenzaldehid (1.3 g, 8.20 mmol) i hidroksilamin hidrohlorid (0.695 g, 10.00 mmol) u EtOH (6.83 mL)/voda (6.83 mL) je dodat 1 N NaOH (10.00 mL, 10.00 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h, zatim je zakiseljen do pH 6 sa 1 N HCl što je dalo belu suspenziju. Reakciona smeša je filtrirana, i čvrsta supstanca je isprana sa vodom, i osušena na vazduhu da se dobije željeni proizvod (1.31 g, 92%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 174.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.36 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.66 (ddd, J = 7.8, 6.3, 1.7 Hz, 1H), 7.42 (ddd, J = 8.0, 7.2, 1.7 Hz, 1H), 7.13 - 7.07 (m, 1H) ppm.

[0419] Intermedijer 46B. Etil 3-(3-hloro-2-fluorofenil)-4-metilizoksazol-5-karboksilat: etil but-2-inoat (0.725 ml, 6.22 mmol) i Intermedijer 46A (0.36 g, 2.074 mmol) su rastvoreni u acetonitrilu (10.37 mL). Magtrieve (1.742 g, 20.74 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana u zatvorenoj epruveti na 80 °C. Nakon 2 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature i zatim je filtrirana kroz CELITE®, ispiranjem sa EtOAc. Filtrat je koncentrovan i prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (0.009 g, 2% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 284.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.70 (ddd, J = 8.0, 7.2, 1.7 Hz, 1H), 7.49 (ddd, J = 7.8, 6.3, 1.7 Hz, 1H), 7.35 (td, J = 7.8, 1.1 Hz, 1H), 4.46 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.25 (d, J = 1.9 Hz, 3H), 1.42 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. Drugi regioizomer, etil 3-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metilizoksazol-4-karboksilat (0.083 g, 14%) je takođe dobijen kao bezbojno ulje. MS(ESI) m/z: 284.0 (M+H)<+>.

[0420] Intermedijer 46. 3-(3-Hloro-2-fluorofenil)-4-metilizoksazol-5-karboksilna kiselina: U rastvor Intermedijera 46B (0.011 g, 0.039 mmol) u MeOH (1 mL) je dodat 1 N NaOH (0.078 mL, 0.078 mmol). Nakon 18 h, reakcija je kvenčovana sa 1 N HCl (0.1 mL) i zatim je koncentrovana da se dobije željeni proizvod (10 mg, 100% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 255.9 (M+H)<+>. Materijal je prenesen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer 47

5-(3-Hloro-2-fluorofenil)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina

[0421]

[0422] Intermedijer 47A. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)propan-1-ol: U rastvor 3-hloro-2-fluorobenzaldehid (2.8 g, 17.66 mmol) u THF (88 mL) na -78 °C je dodat u kapima etilmagnezijum bromid (1 M u THF) (21.19 mL, 21.19 mmol). Nakon 2 h, reakcija je zagrejana do 0 °C i pažljivo je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom. Reakciona smeša je razblažena sa vodom i esktrahovana sa EtOAc (3x). Organski slojevi su kombinovani i isprani sa vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovan. Prečišćavanje silika gel hromatografijom dalo je željeni proizvod (2.04 g, 61%) kao bezbojno ulje. MS(ESI) m/z: 211.0 (M+Na)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.37 (td, J = 7.0, 1.7 Hz, 1H), 7.33 - 7.28 (m, 1H), 7.09 (td, J = 7.8, 1.1 Hz, 1H), 4.99 - 4.94 (m, 1H), 1.92 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 1.85 - 1.77 (m, 2H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm.

[0423] Intermedijer 47B.1-(3-Hloro-2-fluorofenil)propan-1-on: U rastvor Intermedijera 47A (1.9 g, 10.07 mmol) u DCM (40.3 ml) je dodat PDC (11.37 g, 30.2 mmol) i 4Å MS (2 g) (u prahu).

Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h, zatim je filtrirana kroz CELITE® ispiranjem sa DCM. Filtrat je koncentrovan. Prečišćavanje silika gel hromatografijom dalo je željeni proizvod (1.6 g, 85%) kao bezbojno ulje. MS(ESI) m/z: 187.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.74 (ddd, J = 7.9, 6.3, 1.8 Hz, 1H), 7.58 - 7.53 (m, 1H), 7.17 (td, J = 7.8, 0.8 Hz, 1H), 3.00 (qd, J = 7.2, 3.3 Hz, 2H), 1.21 (td, J = 7.2, 0.7 Hz, 3H) ppm.

[0424] Intermedijer 47C. Etil 4-(3-hloro-2-fluorofenil)-3-metil-2,4-dioksobutanoat: U rastvor LiHMDS (1 M u THF) (3.19 mL, 3.19 mmol) u etru (12 mL) na -78 °C je dodat u kapima rastvor Intermedijera 47B (0.59 g, 3.16 mmol) u etru (2 mL). Nakon 45 min., dietil oksalat (0.492 mL, 3.60 mmol) je dodat u jednoj porciji, i reakcija je zagrejana do sobne temperature. Nakon 18 h, reakciona smeša je filtrirana, ispiranjem sa etrom. Filtrat je razblažen sa EtOAc, ispran sa 1 N HCl, fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Prečišćavanje silika gel hromatografijom dalo je željeni proizvod (0.057 g, 6%) kao žuto ulje. MS(ESI) m/z: 241.0 (M-OEt)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) 87.80 (ddd, J = 8.0, 6.3, 1.7 Hz, 1H), 7.65 (ddd, J = 7.8, 7.0, 1.9 Hz, 1H), 7.23 (td, J = 8.0, 0.8 Hz, 1H), 4.91 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 4.31 (qd, J = 7.2, 0.8 Hz, 2H), 1.46 (dd, J = 7.2, 0.8 Hz, 3H), 1.34 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm.

[0425] Intermedijer 47D. Etil 5-(3-hloro-2-fluorofenil)-4-metilizoksazol-3-karboksilat: Smeša Intermedijera 47C (0.057 g, 0.199 mmol) i hidroksilamin hidrohlorida (0.017 g, 0.239 mmol) u EtOH (1 mL) je zagrejana u zatvorenoj epruveti na 90 °C. Nakon 5 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature i zatim je koncentrovana. Prečišćavanje pomoću HPLC na reverznoj fazi dalo je željeni proizvod (0.022 g, 39%) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 284.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.73 - 7.68 (m, 1H), 7.56 (ddd, J = 7.8, 6.2, 1.7 Hz, 1H), 7.37 (td, J = 8.0, 1.1 Hz, 1H), 4.45 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.24 (d, J = 2.2 Hz, 3H), 1.42 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm.

[0426] Intermedijer 47. 5-(3-Hloro-2-fluorofenil)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina: U rastvor Intermedijera 47D (0.009 g, 0.032 mmol) u MeOH (1 mL) je dodat 1 N NaOH (0.063 mL, 0.063 mmol). Nakon 3 h, reakcija je kvenčovana sa 1 N HCl (0.1 mL) i zatim je koncentrovana da se dobije željeni proizvod (8.1mag, 100% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 255.9 (M+H)<+>. Materijal je prenesen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer 48

(R)-2-Metilbut-3-enoil hlorid

[0427]

[0428] Intermedijer 48. (R)-2-Metilbut-3-enoil hlorid: U ohlađen (0 °C) rastvor (R)-2-metilbut-3-enoinske kiseline (0.450 g, 4.49 mmol) u DCM je dodat u kapima oksalil hlorid (0.393 mL, 4.49 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min i zatim je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 80 min. Dobijeni rastvor (R)-2-metilbut-3-enoil hlorida je korišćen direktno.

Intermedijer 49

2-(5,5-Dimetil-1,3,2-dioksaborinan-2-il)-5-nitro-fenilamin

[0429]

[0430] U sud osušen na plamenu, opremljen sa refluksnim kondenzatorom, koji sadrži 2-bromo-5-nitroanilin (10.0 g, 46.1 mmol), bis(neopentil glikolato)diboron (13.01 g, 57.6 mmol), kalijum acetat (13.57 g, 138 mmol), i PdCb(dppf)-CH2Cl2adukat (0.941 g, 1.152 mmol) je dodat DMSO (132 mL). Dobijena tamno crveno-braon suspenzija je degasirana sa argonom tokom 30 min i zatim reakcija je zagrejana do 80 °C. Nakon 4 h, reakcija je zaustavljena i ohlađena do sobne temperature. Reakcija je sipana polako u energično mešanu ledeno-hladnu vodu (300 mL) da se dobije braon suspenzija. Nakon mešanja tokom 10 min, suspenzija je filtrirana da se sakupi čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je isprana sa vodom (3x125 mL), osušena na vazduhu, i zatim osušena pod vakuumom da se dobije braon čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 4.36 g Intermedijera 49 kao narandžastou čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 183.1 (M-C5H8+H)<+>.

Intermedijer 50

4-Hloro-5-(3-hloro-2-fluorofenil)izotiazol-3-karboksilna kiselina

[0431]

[0432] Intermedijer 50A. Metil 4,5-dihloroizotiazol-3-karboksilat: U rastvor 4,5-dihloroizotiazol-3-karboksilne kiseline (211 mg, 1.07 mmol) u toluenu (3 mL)) i MeOH (1 mL) je dodat trimetilsilildiazometan (2 M u heksanu) (0.7 mL, 1.400 mmol) rastvor u kapima. Bledo žuti rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 0.5 h. Rastvor je koncentrovan pod vakuumom da se dobije žuta čvrsta supstanca, koja je podvrgnuta sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 212.1 (M+H)<+>.

[0433] Intermedijer 50B. Metil 4-hloro-5-(3-hloro-2-fluorofenil)izotiazol-3-karboksilat: U rastvor intermedijera 50A (0.100 g, 0.472 mmol) i Cs2CO3 (0.461 g, 1.415 mmol) u DME (3.02 mL) i vode (0.605 mL) je dodat metil 4,5-dihloroizotiazol-3-karboksilat (0.100 g, 0.472 mmol). Rastvor je pročišćen sa argonom tokom 0.5 h. U rastvor je dodat Pd(PPh3)4(0.054 g, 0.047 mmol). Reakciona smeša je zatim zatvorena i zagrejana u mikrotalasnoj tokom 0.5 h na 100 °C. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc i vodeni sloj je dekantovan. Organski sloj je koncentrovan u vakuumu, dajući uljani ostatak koji je prečišćen pomoću silika gel hromatografije na koloni da se obezbedi željeni proizvod (53 mg, 37%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 360.0 (M+H)<+>.

[0434] Intermedijer 50. 4-Hloro-5-(3-hloro-2-fluorofenil)izotiazol-3-karboksilna kiselina: U rastvor intermedijera 50B (53 mg, 0.173 mmol) u THF (2 mL) i vode (1 mL) je dodat litijum hidroksid monohidrat (0.014 mL, 0.519 mmol). Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu. Vodeni rastvor je zakiseljen sa 1 N HCl (pH = 2 - 3) i esktrahovana sa EtOAc (2x). Organski rastvor je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu da se obezbedi željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (47 mg, 93%). MS(ESI) m/z: 291.1 (M+H)<+>.

Primer 1

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hlorofenil)-3-(2-hidroksietil)-1H-pirazol-4-amido]-16-fluoro-10-metil-9-okso-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0435]

1A. (R,E)-N-((5-Bromo-2-fluoropiridin-3-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamid: U rastvor 5-bromo-2-fluoronikotinaldehid (5 g, 24.51 mmol), titanijum (IV) etoksid (15.42 ml, 73.5 mmol) u DCM (49.0 ml) je dodat (R)-2-metilpropan-2-sulfinamid (3.12 g, 25.7 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 48 h, reakciona smeša je sipana u fiziološki rastvor dok je brzo mešana da se formira suspenzija. Dobijena suspenzija je filtrirana kroz čep od CELITE®, i materijal ostao na filteru je ispran nekoliko puta sa DCM. Filtratne faze su izdvojene, i organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom i osušena preko MgSO4. Organski slojevi su zatim koncentrovani da se dobije 7.6 g sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni proizvod (6.97 g, 93%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 330.8 (M+Na)<+>.

1B. (R)-N-((S)-1-(5-Bromo-2-fluoropiridin-3-il)but-3-en-1-il)-2-metilpropan-2-sulfinamid: U zasićen vodeni rastvor natrijum bromida (420 g, 4084 mmol) (otprilike 420 g u 450 ml H2O) je dodat 1A (6.97 g, 22.69 mmol) i indijum (10.42 g, 91 mmol). U ovu smešu je zatim dodat 3-bromoprop-1-en (7.85 ml, 91 mmol) u kapima, i dobijena zamućena bela suspenzija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 10 h. Reakcija je zatim kvenčovana sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 praćeno ekstrakcijom sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog MgSO4 i koncentrovan da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni proizvod (8.8 g, 98%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 350.8 (M+H)<+>.

1C. (S)-1-(5-Bromo-2-fluoropiridin-3-il)but-3-en-1-amin, 2 HCl: U rastvor 1B (8.8 g, 25.2 mmol) u MeOH (100 mL) je dodat HCl (31.5 mL, 126 mmol) (4 M u dioksanu). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h i zatim koncentrovana skoro do suva. Et2O je dodat da se dobije žuta suspenzija koji je zatim filtrirana i filtrirana čvrsta supstanca dalje isprana sa Et2O. Filtrat je koncentrovan i ponovo filtriran sa Et2O. Sakupljena čvrsta supstanca je zatim osušena na vakuum pumpi da se dobije 1C (6.45 g, 80%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 246.9 (M+H)<+>.

1D. (S)-terc-Butil (1-(5-bromo-2-ftuoropiridin-3-il)but-3-en-1-il)karbamat: U rastvor 1C (6.55 g, 20.60 mmol) u DCM (68.7 ml) na 0 °C je dodat TEA (11.48 ml, 82 mmol) i Boc2O (4.50 g, 20.60 mmol). Reakciona smeša je mešan na 0 °C tokom 2 h, i zatim ostavljen da se ugreje do sobne temperature. Nakon mešanja tokom 2 h, reakciona smeša je razblažena sa DCM i isprana sa zasićenim NaHCO3rastvorom. Vodeni sloj je re-esktrahovan sa DCM (2x). Kombinovani organski slojevi su zatim isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni proizvod (6.64 g, 87%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 368.9 (M+Na)<+>.

1E. (S)-terc-Butil (1-(5-(2-amino-4-nitrofenil)-2-fluoropiridin-3-il)but-3-en-1-il)karbamat: U RBF je dodat 1D (4.5 g, 13.04 mmol), 2-(5,5-dimetil-1,3,2-dioksaborinan-2-il)-5-nitroanilin (6.52 g, 26.1 mmol), PdCl2(dppf)-DCM adukat (1.065 g, 1.304 mmol), i kalijum fosfat, tribazični (5.53 g, 26.1 mmol). RBF je opremljen sa refluksnim kondenzatorom i aparat je vakuumiran i napunjen sa argonom. Degasiran DMSO (65.2 mL) je dodat što je praćeno sa degasiranim H2O (1.174 mL, 65.2 mmol). Tamno crvena reakciona smeša je zagrejana do 90 °C tokom 1h, i zatim ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim podeljena između EtOAc i fiziološkog rastvora, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ponovo esktrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtriran i koncentrovan da se dobije sirov proizvod kao gusto crno ulje koje je podvrgnuto silika gel hromatografiji da se dobije željeni proizvod (5.90 g, 100%) kao žuta pena. MS(ESI) m/z: 403.0 (M+H)<+>.

1F. Metil (3-amino-4-(5-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-6-fluoropiridin-3-il)fenil)karbamat: U bistar, narandžasti rastvor 1E (4.4 g, 9.95 mmol) u MeOH (100 mL) je dodat sekvencijalno cink (6.51 g, 99 mmol) i amonijum hlorid (5.32 g, 99 mmol). Dobijena žuto-narandžasta suspenzija je postala bistra nakon nekoliko minuta i mešana je na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, reakciona smeša je filtrirana da se ukloni čvrsta supstanca i koncentrovana da se dobije ostatak. Ostatak je razblažen sa EtOAc i ispran sa zasićenim NaHCO3rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko MgSO4 i prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni bis amin proizvod kao pena boje breskve. U bistar, narandžasti rastvor na -78 °C gornjeg bis aminskog proizvoda (5.08 g, 13.64 mmol) i piridina (1.103 ml, 13.64 mmol) u DCM (136 mL) je dodat u kapima metil hlorokarbonat (0.949 ml, 12.28 mmol) i reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 1.5 h. Reakcija je zatim kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom i ostavljena da se polako ugreje do sobne temperature. Reakciona smeša je razblažena sa DCM i vodeni sloj je ponovo esktrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim NaHCO3 rastvorom praćeno sa fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan da se dobije sirov proizvod kao pena boje breskve koja je zatim prečišćena korišćenjem silika gel hromatografije. COSY i NOE analiza potvrdile su mesto dodavanja. Željeni proizvod (4.77 g, 81 %) je izolovan kao pena bež boje. MS(ESI) m/z: 431.1 (M+H)<+>.

1G. Metil (4-(5-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-6-fluoropiridin-3-il)-3-((2-metilbut-3-enoil)amino)fenil)karbamat: U rastvor 2-metilbut-3-enoinske kiseline (0.216 mL, 2.091 mmol) i 1F (0.900 g, 2.091 mmol) u EtOAc (59.7 mL) je dodat DIEA (1.095 mL, 6.27 mmol) i reakcija je ostavljena da se ohladi -10 °C pod argonom. U ovu smešu je zatim dodat T3P (2.464 mL, 4.18 mmol) i reakcija je ostavljena da se meša tokom 5 min na istoj temperaturi i zatim ostavljena da se ugreje do 0 °C praćeno sa do sobne temperature polako mešajući pod argonom na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovan i prečišćena silika gel hromatografijom da se dobije 1G (887 mg, 83%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 513.1 (M+H)<+>.

1H. terc-Butil N-[(11E)-16-ftuoro-9-hidroksi-5-[(metoksikarbonil)amino]-10-metil-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadec-11-en-14-il]karbamat: Bistar, bezbojan rastvor 11G (887 mg, 1.730 mmol) u DCE (100 mL) je degasiran sa argonom, zatim raspodeljen u 5 bočica za mikrotalasnu. U gornju smešu je zatim dodat Grubbs II (588 mg, 0.692 mmol) (118 mg u svaku bočicu) i zagrejana je svaka bočica u mikrotalasnoj na 120 °C tokom 25 min. Reakciona smeša je zatim kombinovana i isprana sa zasićenim NaHCO3praćeno sa fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan da se dobije sirov proizvod koji je prečišćen silika gel hromatografijom. Željene frakcije su sakupljene i koncentrovan da se dobije 1H (568 mg, 68%) kao braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 485.1 (M+H)<+>.

1I. terc-Butil N-[(14S)-16-fluoro-5-[(metoksikarbonil)amino]-10-metil-9-okso-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-14-il]karbamat: U rastvor 1H (0.568 g, 1.172 mmol) u MeOH (39.1 mL) je dodat platina (IV) oksid (0.027 g, 0.117 mmol). Reakciona smeša je zatim napunjena sa H2gasom koišćenjem H2balona i vakuumirana sa H2nekoliko puta.

Reakcija je zatim mešana na sobnoj temperaturi pod H2tokom 40 h. Nakon mešanja tokom 40 h, reakciona smeša je filtrirana kroz uložak od CELITE® i filtrat je koncentrovan da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije Diastereomer A (1Ia) (178 mg, 25%) i Diastereomer-B (95 mg, 14%, 1Ib) kao bele čvrste supstance. Diastereomer A - MS(ESI) m/z: 487.1 (M+H)<+>.

1J. Metil N-[(14S)-14-amino-16-fluoro-10-metil-9-okso-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il]karbamat: Rastvor vodonik hlorida u dioksanu (5932 µL, 23.73 mmol) je dodat u 1Ia (95 mg, 0.158 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 1 h mešanja, reakciona smeša je koncentrovana da se dobije željeni proizvod (73 mg, 100%). MS(ESI) m/z: 387.1 (M+H)<+>.

[0436] Primer 1. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hlorofenil)-3-(2-hidroksietil)-1H-pirazol-4-amido]-16-fluoro-10-metil-9-okso-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Smeša Intermedijera 9 (0.030 g, 0.112 mmol), 1J (0.043 g, 0.112 mmol), DIEA (0.60 mL, 0.334 mmol) i T3P (0.115 mmol) u DMF (2 mL) je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena direktno pomoću HPLC na reverznoj fazi da se izoluje željeni proizvod kao homohiralno jedinjenje.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.59 (s, 1H), 8.01 - 7.99 (m, 1H), 7.96 - 7.95 (dd, J = 8.3 & 1.3 Hz, 1H), 7.67 - 7.49 (m, 3H), 7.48 -7.39 (m, 1H), 7.38 - 6.37 (m, 2H), 7.26-7.24 (m, 1H), 5.17 - 4.93 (m, 1H), 3.82 - 3.57 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 3.02 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 2.23 - 2.00 (m, 1H), 1.96(m, 1H), 1.82(m, 1H), 1.51-1.49 (m, 1H), 1.36 (m, 2H), 1.12 - 1.10 (d, 2H), 0.92 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 635.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 6.44 min (Metoda B).

Primer 2

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hlorofenil)pirolidin-3-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, 2TFA

[0437]

2A. (S,E)-N-((4-Hloropiridin-2-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamid: Liu, G. et al., J. Org. Chem., 64:1278 (1999). U rastvor S-(-)-t-butil-sulfinamida (0.856 g, 7.06 mmol) u dihlorometanu (14.13 mL) je dodat sekvencijalno bakar(II) sulfat(2.481 g, 15.54 mmol) i 4-hloropikolinaldehid [1.0 g, 7.06 mmol, pripremljen u skladu sa modifikovanim opisanim od strane Negi (Synthesis, 991 (1996))]. Bela suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 3 h, braon suspenzija je filtrirana kroz CELITE®, eluirana sa DCM, da se dobije čist braon filtrat. Koncetracija je dala braon ulje koje teži 1.85 g. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 1.31 g 2A kao čisto, žuto ulje. MS(ESI) m/z: 245.0 (M+H)<+>.

2B. (S)-N-((S)-1-(4-Hloropiridin-2-il)but-3-enil)-2-metilpropan-2-sulfinamid: U ohlađen rastvor (-78 °C) 2A (10 g, 40.9 mmol) u THF (204 mL) je dodat u kapima alil magnezijum bromid(44.9 mL, 44.9 mmol, 1M u Et2O). Reakciona smeša je mešana na -78 °C. Nakon 2 h, reakciona smeša je kvenčovana sa dodatkom zasićenog NH4Cl (25 mL) i zatim reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc i voda i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 2B (9.23 g, 79%) kao čisto, narandžasto ulje.<1>H NMR pokazalo je 4.7:1 smešu diastereomera pri čemu je glavni diastereomer odgovara jedinjenju iz naslova. MS(ESI) m/z: 287.1 (M+H)<+>.

2C. (S)-N-((S)-1-(4-(2-Amino-4-nitrofenil)piridin-2-il)but-3-enil)-2-metilpropan-2-sulfinamid, Diastereomer A i 2D. (S)-N-((R)-1-(4-(2-amino-4-nitrofenil)piridin-2-il)but-3-enil)-2-metilpropan-2-sulfinamid, Diastereomer B: U RBF je dodat 2B (9.23 g, 32.2 mmol), 2-(5,5-dimetil-1,3,2-dioksaborinan-2-il)-5-nitroanilin (16.09 g, 64.4 mmol), kalijum fosfat, tribazični (13.66 g, 64.4 mmol), DMSO (161 mL), i voda (2.90 mL, 161 mmol). RBF je opremljen sa refluksnim kondenzatorom i zatim je aparat pročišćen sa argonom tokom 30 minuta. Zatim, Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2adukat (2.63 g, 3.22 mmol) je dodat i reakciona smeša je zagrejana do 90 °C.

Nakon 4 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature i zatim je sipana u vodu (1000 mL) da se dobije suspenzija. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i zatim je rastvorena u EtOAc. Filtrat je ekstrahovan sa EtOAc (1x). Organski slojevi su kombinovani i isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, i koncentrovani. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 2C (3.9 g) kao narandžastu penu. Dodatnih 3.84 g materijala je dobijeno kao smeša diastereomera 2C i 2D. Diastereomeri su izdvojeni hiralnom SFC prep HPLC (CHIRALCEL® OD-H; 20% metanol/80% ugljenik dioksid) koja je dala 2C (2.0 g) kao narandžastu penu i 2D (0.90 g) kao narandžastu penu. Ukupna količina 2C izolovana je (5.9 g, 47%) kao narandžasta pena. MS(ESI) m/z: 389.2 (M+H)<+>.

2E. (S)-N-((S)-1-(4-(2,4-Diaminofenil)piridin-2-il)but-3-enil)-2-metilpropan-2-sulfinamid: U bistar narandžasti rastvor 2C (2 g, 5.15 mmol) u metanolu (51.5 mL) je dodat sekvencijalno cink (3.37 g, 51.5 mmol) i amonijum hlorid (2.75 g, 51.5 mmol). Dobijeni suspenzija je mešana energično. Nakon 3 h, reakcija je zaustavljena i filtrirana je kroz 0.45 mikronski GMF eluiranjem sa metanolom da se dobije žuti filtrat. Filtrat je koncentrovan, zatim je ostatak podeljen između EtOAc i vode, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim natrijum bikarbonatom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, i koncentrovani da se dobije 2E (1.86 g, 101%) kao žuta pena. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 359.1 (M+H)<+>.

2F. Metil 3-amino-4-(2-((S)-1-((S)-1,1-dimetiletilsulfinamido)but-3-enil)piridin-4-il)fenilkarbamat: U ohlađen (-78 °C) bistar, žuti rastvor 2E (1.86 g, 5.19 mmol) i piridina (0.420 mL, 5.19 mmol) u DCM (52 mL) je dodat u kapima metil hlorokarbonat (0.361 mL, 4.67 mmol). Reakciona smeša je mešana na -78 °C. Nakon 2 h, reakcija je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl i reakcija je ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim razblažena sa DCM i voda i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije 2F (2.3 g, 106%) kao žuta pena. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 417.1 (M+H)<+>.

2G. (S)-Metil3-amino-4-(2-(1-aminobut-3-enil)piridin-4-il)fenilkarbamat, 3 HCl: U bistar, žuti rastvor 2F (2.3 g, 5.52 mmol) u MeOH (55.2 mL) je dodat 4 M HCl u dioksanu (13.80 mL, 55.2 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, reakcija je koncentrovana da se dobije žuti ostatak. Ostatak je suspendovan u DCM i zatim je koncentrovan. Ovo je ponovljeno još jednom da se dobije 2G (2.329 g, 100%) kao žuta čvrsta supstanca. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 313.1 (M+H)<+>.

2H. Metil N-(3-amino-4-{2-[(1S)-1-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}but-3-en-1-il]piridin-4-il}fenil)karbamat: U žutu suspenziju 2G (2.328 g, 5.52 mmol) u DCM (18.40 mL) je dodat Boc2O (1.282 mL, 5.52 mmol) praćeno sa TEA (3.08 mL, 22.08 mmol). Dobijeni narandžastobraon rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Nakon 3 h, reakcija je razblažena sa DCM i zatim isprana sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušena preko MgSO4, filtrirana, i koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 2H (1.91 g, 84%) kao prljavo belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 413.0 (M+H)<+>.

2I. Metil N-(4-{2-[(1S)-1-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}but-3-en-1-il]piridin-4-il}-3-(2-metilbut-3-enamido)fenil)karbamat (Diastereomeri): U ohlađen rastvor (-10 °C) 2-metilbut-3-enoinske kiseline (0.456 mL, 4.41 mmol) i 2H (1.82 g, 4.41 mmol) u EtOAc (126 mL) i DIEA (2.312 mL, 13.24 mmol) je dodat u kapima rastvor cikličnog anhidrida 1-propanfosfonske kiseline u EtOAc (5.20 mL, 8.82 mmol). Nakon 5 min, reakcija je ostavljena da se ugreje do 0 °C. Nakon 7 h, reakcija je zaustavljena i koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 2I (1.57 g, 72%) kao smešu diastereomera i kao žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 495.1 (M+H)<+>.

2J. terc-butil estar ((E)-(10R,14S)-5-Metoksikarbonilamino-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,11,15,17-heptaen-14-il)-karbaminske kiseline, Diastereomer A i 2K. terc-butil estar ((E)-(10S,14S)-5-Metoksikarbonilamino-10-metil-9-okso-8,16-diaza-triciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,11,15,17-heptaen-14-il)-karbaminske kiseline, Diastereomer B: U RBF je dodat 2I (1.57 g, 3.17 mmol), pTsOH (0.664 g, 3.49 mmol), i DCM (794 mL). Sud je zatim opremljen sa refluksnim kondenzatorom i bistar žuti rastvor je degasiran sa argonom tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim zagrejana do 40 °C tokom 1h. Zatim rastvor Grubbs II (0.269 g, 0.317 mmol) u DCM (2 mL) je dodat u kapima u reakcionu smešu. Reakciona smeša je zatim mešana na 40 °C. Nakon 6 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature. Reakcija je isprana sa zasićenim natrijum karbonatom, fiziološkim rastvorom, osušena preko magnezijum sulfata, filtrirana, i koncentrovana da se dobije sirov proizvod kao tamno braon čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 2J, Diastereomer A (0.374 g, 25%) kao braon čvrstu supstancu i smešu 2J, Diastereomer A i 2K, Diastereomer B (0.44 g, 30%) kao braon čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 466.9 (M+H)<+>.

2L. Metil N-[(10R,14S)-14-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3. 1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat: Sud od 500-mL za hidrogenaciju je napunjen sa 10% paladijuma na ugljeniku (0.372 g, 0.349 mmol). Sud je pročišćen sa argonom i zatim degasiran sa metanolom (72 mL) je dodat polako u sud. Zatim, bistar, svetlo braon rastvor 2J (1.63 g, 3.49 mmol) u metanolu (5 mL) je dodat. Sud je stavljen pod pritisak do 50 psi vodonika i reakcija je mešana preko noći. Nakon 20 h, reakcija je zaustavljena, razblažena sa metanolom (100 mL) i zatim reakcija je filtrirana kroz CELITE®, isprana sa metanolom da se dobije čist, svetlo braon filtrat. Filtrat je koncentrovan da se dobije prljavo bela čvrsta supstanca koja teži 1.37 g. Prljavo bela čvrsta supstanca je suspendovana u metanolu (10 mL) i sonifikovana. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana sa metanolom (8 mL), osušena na vazduhu, i osušena pod vakuumom da se dobije 2L (1.13 g, 69.0%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 469.1 (M+H)<+>.

2M. Metil N-[(10R,14S)-14-amino-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, 2TFA so: U belu suspenziju 2L (0.45 g, 0.960 mmol) u DCM (5 mL) je dodat TFA (3 mL, 38.9 mmol). Dobijeni čist rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Nakon 1h, reakcija je koncentrovana da se dobije čvrsta supstanca. Liofilizacija je dala 2M (0.52 g, 91%) kao žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 369.0 (M+H)<+>.

2M (Alternativa, 2HCl): U sud koji sadrži 2L (0.880 g, 1.878 mmol) je dodat 4.0 M HCl u dioksanu (21.13 ml, 85 mmol). Dobijena suspenzija je sonifikovana da se dobije bistar, žuti rastvor. Nakon 5 do 10 min, formiran je talog. Nakon 1h, reakcija je zaustavljena i talog je sakupljen filtracijom. Čvrsta supstanca je isprana sa dioksanom i osušena na vazduhu da se dobije higroskopna, žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je rastvorena u metanolu, koncentrovana, i liofilizovana da se dobije 2M (Alternativa, 2HCl) (0.7171 g, 87%) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 369.3 (M+H)<+>.

[0438] Primer 2. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hlorofenil)pirolidin-3-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, 2TFA: Rastvor 2M (0.02 g, 0.034 mmol), Intermedijer 11 (0.011 g, 0.050 mmol), EDC (0.013 g, 0.067 mmol), HOBT (10.27 mg, 0.067 mmol) i TEA (0.023 mL, 0.168 mmol) u DMF (1 mL) je mešan na 50 °C. Nakon 2 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature i zatim koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na reverznoj fazi dalo je Primer 2 (0.012 g, 44%) kao smešu diastereomera i kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.80 - 8.72 (m, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.99 - 7.91 (m, 1H), 7.68 - 7.48 (m, 3H), 7.15 - 7.07 (m, 1H), 6.65 - 6.43 (m, 3H), 5.11 (dd, J = 10.6, 5.9 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.59 - 3.47 (m, 1H), 3.43 - 3.26 (m, 4H), 2.82 - 2.73 (m, 1H), 2.37 - 2.09 (m, 3H), 1.99 - 1.84 (m, 2H), 1.69 - 1.47 (m, 2H), 0.97 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.55 - 0.41 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 576.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 6.70 min.

[0439] Poželjni redosled za pripremu jedinjenja 2J je opisan ispod:

2B (Alternativa). (S)-N-((S)-1-(4-Hloropiridin-2-il)but-3-enil)-2-metilpropan-2-sulfinamid: U ohlađenu (0-5 °C) smešu indijum(III) hlorida (13.56 g, 61.3 mmol) u tetrahidrofuranu (170 mL) je dodat u kapima preko 30 min. Alilmagnezijum bromid (1 M u dietiletru) (62 mL, 61.3 mmol). Reakcija je ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Nakon 1 h na sobnoj temperaturi, rastvor 2A (10 g, 40.9 mmol) u etanolu (170 mL) je dodat. Nakon 2-3 h, reakcija je koncentrovana pod vakuumom na 50-55 °C. Sirov material je podeljen između etil acetata (200 mL) i vode (50 mL) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2x50 mL). Organski slojevi su kombinovani i isprani sa fiziološkim rastvorom (100mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije 2B (Alternativa) (13.5 g, 106%) kao žuto ulje. MS(ESI) m/z: 287.2 (M+H)<+>. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

2N. (S)-terc-Butil 1-(4-Hloropiridin-2-il)but-3-enilkarbamat: Jedinjenje 2B (Alternativa) je konvertovano u 2N u dva koraka uklanjanjem hiralne pomoćne grupe u skladu sa procedurom u koraku 2G i Boc-zaštitom u skladu sa procedurom u koraku 2H. MS(ESI) 227.3 (M-C4Hg+H)<+>i 305.4 (M+Na)<+>.

20. (S)-terc-Butil 1-(4-(2-amino-4-nitrofenil)piridin-2-il)but-3-enilkarbamat: Jedinjenje 20 je pripremljeno praćenjem procedure opisane u koraku 2C, zamenjivanjem 2B sa 2N. MS(ESI) 385.1 (M+H)<+>.

2P. (S)-terc-Butil 1-(4-(2,4-diaminofenil)piridin-2-il)but-3-enilkarbamat: U bistar, narandžasti rastvor 20 (2.9 g, 7.54 mmol) u metanolu (75 mL) je dodata sekvencijalno cinkova prašina (4.93 g, 75 mmol) i amonijum hlorid (4.04 g, 75 mmol). Dobijena suspenzija je mešana energično tokom 4 h. Reakcija je zaustavljena i filtrirana kroz 0.45 mikronski GMF eluiranjem sa metanolom da se dobije čist, žuti filtrat. Koncentracija filtrata dala je žuti-crni ostatak. Ostatak je podeljen između EtOAc i 0.25 M HCl (50 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ekstrahovan sa 0.25 M HCl (50 mL). Kombinovani vodeni slojevi su bazifikovani sa 1.5 M K2HPO4 i zatim esktrahovani sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije 2P (2.63 g, 98%) kao braon pena. MS(ESI) m/z: 355.2 (M+H)<+>.

2Q. Metil estar {3-Amino-4-[2-((S)-1-terc-butoksikarbonilamino-but-3-enil)-piridin-4-il]-fenil}-karbaminske kiseline: U ohlađen (-78 °C) čist, braon rastvor 2P (2.63 g, 7.42 mmol) i piridina (0.600 ml, 7.42 mmol) u dihlormetanu (74.2 ml) je dodat u kapima tokom 30 min metil hloroformat (0.516 ml, 6.68 mmol). Reakcija je mešana na -78 °C. Nakon 1.5 h, reakcija je kvenčovana sa zas. NH4Cl i ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Reakcija je razblažena sa DCM i vodom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je rastvoren u DCM (~10 mL) i zatim heksan (~300 mL) je dodat da se dobije braon suspenzija sa braon gumastom lepljivom supstancom na dnu. Smeša je sonifikovana da se dobije uglavnom bistar rastvor sa braon supstancom na dnu. Rastvor je dekantovan i supstanca na dnu je isprana sa heksanom, osušenA da se dobije 2Q (2.7 g, 88%) kao neznatno braon pena. MS(ESI) m/z: 413.2 (M+H)<+>.

2I (Alternativa). Metil N-(4-{2-[(1S)-1-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}but-3-en-1-il]piridin-4-il}-3-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]fenil)karbamat: Intermedijer 45 (1.201 g, 12.00 mmol), 2Q (3.3 g, 8.00 mmol), piridin (1.937 ml, 24.00 mmol) u EtOAc (40.0 mL) je ohlađen do -10 °C pod Ar, T3P (50 mas% u EtOAc) (9.52 mL, 16.00 mmol) je dodat u kapima i mešan na -10 °C, zatim postepeno zagrejana do sobne temperature preko noći. Reakciona smeša je isprana sa zasićenim NaHCO3 dva puta. Kombinovan vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovana EtOAc faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko MgSO4, filtrirana, koncentrovana. Sirov proizvod je zatim prečišćena korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni željeni proizvod (4.06 g, 97%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.46 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.47 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.29 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.25 (m, 1H), 5.87 - 5.73 (m, 2H), 5.16 - 5.02 (m, 4H), 4.79 - 4.71 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.14 -3.05 (m, 1H), 2.64 - 2.55 (m, 1H), 2.52 - 2.43 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.16 (d, J= 6.9 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 495.1 (M+H)<+>.

2J (Alternativa). Metil N-[(10R,11E,14S)-14-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,11,15,17-heptaen-5-il]karbamat: U RBF je dodat 2I (Alternativa)(0.5 g, 1.011 mmol), pTsOH monohidrat (0.212 g, 1.112 mmol), i dihlorometan (84 ml). Sud je opremljen sa refluksnim kondenzatorom i bistar žuti rastvor je degasiran sa argonom tokom 30 min. Reakcija je zatim zagrejana do refluksa tokom 1h. Zatim rastvor Grubbs II (0.172 g, 0.202 mmol) u DCM (2 mL) je dodat u kapima u reakcionu smešu. Nakon 4 h na refluksu, reakcija je ohlađena do sobne temperature, isprana sa zasićenim Na2CO3, fiziološkim rastvorom, osušena preko MgSO4, filtrirana, i koncentrovana da se dobije braon čvrsta supstanca. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni proizvod (0.336 g, 71%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.52 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.48 - 7.43 (m, 1H), 7.38 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 5.1, 1.5 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.75 - 5.65 (m, 1H), 4.60 (dd, J = 11.3, 3.6 Hz, 1H), 4.39 (dd, J= 15.1, 9.6 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.14 - 3.06 (m, 1H), 2.75 - 2.68 (m, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.30 (br. s., 1H), 1.04 (d, J= 6.6 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 467.2 (M+H)<+>.

[0440] Sledeći Primeri u Tabeli 2 su korišćenjem iste procedure kao što je prikazano u Primeru 2. Kiseline korišćene u finalnom koraku su označene u donjoj tabeli u odeljku Intermedijer. Razni agensi za kuplovanje mogu biti korišćeni umesto onih opisanih u Primeru 2 kao što je BOP, PyBop, EDC/HOBt ili HATU. Ako je potrebno, kuplovani proizvodi su podvrgnuti uslovima TFA deprotekcije da se ukloni terc-Butil zaštitna grupa.

Primer 21

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0441]

21A. Metil (3-(but-3-enoilamino)-4-(2-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)piridin-4-il)fenil)karbamat: U rastvor but-3-enoinske kiseline (0.412 mL, 4.85 mmol) u EtOAc (100 mL) je dodat DIEA (2.54 mL, 14.55 mmol) i 2G (2 g, 4.85 mmol) i reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do -78 °C pod argonom. U ovu smeša je zatim dodat T3P (5.71 mL, 9.70 mmol) i reakcija je ostavljena da se meša tokom 15 min na istoj temperaturi i temperatura reakcije je postepeno zagrejana do sobne temperature i mešana je na sobnoj temperaturi preko noći. Nakon mešanja preko noći na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je koncentrovana da se dobije tamno braon ulje koji je prečišćeno korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni proizvod (1.88 g, 81%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 481.2 (M+H)<+>.

21B. terc-Butil metil ((4E,7S)-2-okso-2,3,6,7-tetrahidro-1H-8,12-(meteno)-1,9-benzodiazaciklotetradecin-7,15-diil)biskarbamat: U RBF je dodat 21A (1.57 g, 3.27 mmol), pTsOH (0.684 g, 3.59 mmol) i DCM (817 mL). Sud je zatim opremljen sa refluksnim kondenzatorom i bistar žuti rastvor je degasiran sa argonom tokom 70 min. Reakcija je zatim zagrejana do 40 °C tokom 1h. U odvojeni RBF je dodat Grubbs II (1.109 g, 1.307 mmol) i sud je pročišćen sa argonom tokom nekoliko minuta. Degasiran DCM (2 mL) je dodat da se dobije bistar crveno bordo rastvor. Rastvor je zatim dodat u kapima tokom 15 min pomoću šprica u gornju reakciju. Reakciona smeša je mešana na 40-45 °C. Nakon mešanja tokom 3 h, reakcija je postepeno ostavljena da se ohladi do sobne temperature i mešana je na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim isprana sa zasićenim Na2CO3 rastvorom praćeno sa fiziološkim rastvorom. Organski slojevi su zatim osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani da se dobije tamno braon ulje. Sirov proizvod je prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni proizvod (395 mg, 26%) kao svetlo braon siva čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 453.1 (M+H)<+>.

21C. terc-Butil metil ((7S)-2-okso-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-8,12-(meteno)-1,9-benzodiazaciklotetradecin-7,15-diil)biskarbamat: Smeša 21B (395 mg, 0.873 mmol) i paladijum(II) ugljenik (93 mg, 0.087 mmol) u MeOH (5 mL) je mešan u atmosferi vodonika (50 -55 psi). Nakon mešanja tokom 8 h, reakciona smeša je filtrirana kroz mikro filter da se dobije željeni proizvod (350 mg, 88%) kao crveno braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 455.2 (M+H)<+>.

21D. Metil ((7S)-7-amino-2-okso-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-8,12-(meteno)-1,9-benzodiazaciklotetradecin-15-il)karbamat: Smeša 21C (20 mg, 0.044 mmol) i HCl (550 µL, 2.200 mmol) (4 N u dioksanu) je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja tokom 2 h, reakciona smeša je koncentrovana da se dobije mrko žuti prah kao željeni proizvod (18 mg, 99%). MS(ESI) m/z: 355.2 (M+H)<+>.

[0442] Primer 21. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido] -9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Smeša Intermedijera 2 (5.57 mg, 0.023 mmol), HOBT (6.45 mg, 0.042 mmol), EDC (8.07 mg, 0.042 mmol) i DIEA (0.037 mL, 0.211 mmol) u DMF (0.2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. U ovu smeša je zatim dodat 21D (9 mg, 0.021 mmol) i mešano je na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se izoluje željeni proizvod (7.2 mg, 48%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, CD3CN) δ 8.82 (d, J = 5.78 Hz, 1H), 8.55 (d, J = 6.05 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 2.20 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.05 (d, J = J = 16, 2H), 7.98 (s, 1H), 7.68 (t, J = 1.38 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 1.65, 6.05 Hz, 1H), 7.43 (m, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.22 (dt, J= 1.51, 8.18 Hz, 1H), 5.31 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.40 (m, 2H), 2.00 (m, 2H), 1.71 (m, 2H), 1.55 (m, 1H), 1.38 (dd, J= 3.85, 11.00 Hz, 1H), 0.43 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 577.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda E) RT = 5.79 min.

Primer 22

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16,17-triazatriciklo[13.3.1 .0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so [0443]

22A. (S)-terc-Butil 1-(dimetoksifosforil)-2-oksoheks-5-en-3-ilkarbamat: U rastvor dimetil metilfosfonata (15.85 ml, 148 mmol) u THF (99 mL) na -78 °C je dodat n-butillitijum (93 mL, 148 mmol) u kapima. Nakon završetka dodavanja, reakcija je mešana na istoj temperaturi tokom 30 min i zatim rastvor (S)-metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)pent-4-enoata (6.8 g, 29.7 mmol) u THF (15 mL) je dodat u kapima. Reakciona smeša je zatim mešana tokom još 40 min na -78 °C. Reakcija je zatim kvenčovana dodavanjem H2O i razblažena sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa 1 M HCl, zasićenim NaHCO3rastvorom i fiziološkim rastvorom. Organska faza je osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije čisto ulje. Sirov proizvod je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (9.3 g, 98%) kao bezbojno ulje. MS(ESI) m/z: 599.0 (M+Na)<+>.

22B. Metil 4-jodo-3-nitrofenilkarbamat: U ohlađenu (0 °C), žutu suspenziju 4-jodo-3-nitroanilina (1.320 g, 5 mmol) u DCM (50.0 mL) i piridina (0.445 mL, 5.50 mmol) je dodat u kapima metil hloroformat (0.407 mL, 5.25 mmol) i mešana je tokom 3 h. Reakcija je zatim razblažena sa DCM, isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana. Sirov proizvod je zatim rastvoren u minimalnom DCM (~20 mL) i zatim heksan (200 mL) je dodat da se dobije žuta suspenzija. Žuta suspenzija je zatim filtrirana i filtrirana čvrsta supstanca je isprana sa heksanom i osušena na vazduhu da se dobije žuta čvrsta supstanca kao željeni proizvod (1.51 g, 94%). MS(ESI) m/z: 322.9 (M+H)<+>.

22C. Metil 4-acetil-3-nitrofenilkarbamat: Rastvor 22B (0.5 g, 1.553 mmol), tributil(letoksivinil)stanana (1.049 mL, 3.11 mmol), i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (0.109 g, 0.155 mmol) u toluenu (3 mL) u zatvorenoj epruveti je zagrejan na 110 °C. Nakon 3 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana da se dobije ostatak. Ostatak je rastvoren u THF (3 mL), praćeno sa dodavanjem 1 N HCl rastvora (5 mmol). Gornja smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h i zatim razblažena sa EtOAc. EtOAc smeša je zatim isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije sirov proizvod koji je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (0.254 g, 69%) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 239.3 (M+H)<+>.

22D. 2-(4-((Metoksikarbonil)amino)-2-nitrofenil)-2-oksosirćetna kiselina: U rastvor 22C (11.5 g, 48.3 mmol) u piridinu (48.3 mL) je dodat selenijum dioksid (8.04 g, 72.4 mmol) u delovima. Reakciona smeša je zatim mešana pod argonom na 60 °C preko noći i koncentrovana. Ostatak je pumpan tokom nekoliko sati da se osigura da je veći deo piridina uklonjen. U čvrstu supstancu je zatim dodat 1.0 N HCl (80 mL) i filtrirana je da se dobije sivkasta čvrsta supstanca koja je osušena u vakuum rerni na 45 °C preko noći. Sivkasta čvrsta supstanca je zatim izmešana sa MeOH (200 mL) da se dobije suspenzija koja je zatim filtrirana i filtrat je koncentrovan da se dobije braonkast pena (11.8 g, 79%) sa još nešto zaostalog piridina u njoj. MS(ESI) m/z: 269.0 (M+H)<+>.

22E. Metil 2-(4-((metoksikarbonil)amino)-2-nitrofenil)-2-oksoacetat: U crveno ulje 22D (11.8 g, 38.3 mmol) u DCM (150 mL) na 0 °C je dodat TEA (7.47 mL, 53.6 mmol) i smeša je podvrgnuta sonifikaciji da se formira crveno obojen rastvor. U ovu smešu je zatim dodat metil hloroformat (karbonohloridat) (4.15 mL, 53.6 mmol) na 0 °C. Nakon 20 min, reakciona smeša je razblažena sa DCM (300 mL), isprana sa 1 M HCl, zasićenim NaHCO3 rastvorom i fiziološkim rastvorom. Organska faza je osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije crveno obojena čvrsta supstanca. Sirov proizvod je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (8.6 g, 80%) kao svetlo sivkasti prah. MS(ESI) m/z: 283.0 (M+H)<+>.

22F. Metil (4-(6-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-3-okso-2,3-dihidropiridazin-4-il)-3-nitrofenil)karbamat: U čist rastvor 22A (1.16 g, 3.61 mmol) u EtOH (38.4 mL) na sobnoj temperaturi je dodat K2CO3 (0.748 g, 5.42 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 2 h i zatim koncentrovana da se dobije ostatak koji je osušen pod vakuumom tokom 1h. U ostatak je zatim dodat THF (30 mL) praćeno sa dodavanjem suspenzije 22E (1.121 g, 3.97 mmol) u 8 mL THF u kapima pomoću levka za dodavanje. Nakon 3 h, hidrazin (0.567 mL, 18.05 mmol) je dodat i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 dana. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc, isprana sa 1 N HCl i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko MgSO4, filtriran, i koncentrovan da se dobije sirov proizvod koji je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (0.48 g, 29%) kao svetlo narandžasta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 460.0 (M+H)<+>.

22G. (S)-Metil (4-(6-(1-aminobut-3-en-1-il)-3-hloropiridazin-4-il)-3-nitrofenil)karbamat: U rastvor 22F (2.2 g, 4.79 mmol) u MeOH (23.94 mL) je dodat HCl (4 M u dioksanu) (5.186 mL, 20.74 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana da se dobije braonkasta čvrsta supstanca. U braonkastu čvrstu supstancu je dodat ACN (23.94 mL) i fosforil trihlorid (13.39 mL, 144 mmol), i reakciona smeša je zagrejana na 80 °C preko noći. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovana i osušena pod vakuumom preko noći. Sirova smeša je zatim ohlađena do 0 °C, praćeno sa dodavanjem 1 N HCl (20 mL) da se kvenčuje reakcija. Neutralisana je smeša sa 1 N NaOH i esktrahovana sa EtOAc (2x). Organski slojevi su zatim kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni i koncentrovani da se dobije braonkasta čvrsta supstanca kao željeni proizvod (1.03 g, 57%). MS(ESI) m/z: 377.9 (M+H)<+>.

22H. Metil (4-(6-(1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-3-hloropiridazin-4-il)-3-nitrofenil)karbamat: U rastvor 22G (1.03 g, 2.73 mmol) u DCM (27.3 mL) na 0 °C je dodat TEA (1.140 mL, 8.18 mmol) i Boc2O (0.760 mL, 3.27 mmol). Reakcija je zatim mešana na 0 °C tokom 10 min i zatim je polako ostavljena da se ugreje do sobne temperature i mešana je preko noći. Sirov proizvod je koncentrovan i prečišćen silika gel hromatografijom da se izoluje željeni proizvod (414 mg, 36%) kao narandžasto obojena pena. MS(ESI) m/z: 477.9 (M+H)<+>.

22I. Metil (3-amino-4-(6-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-3-hloropiridazin-4-il)fenil)karbamat: U smešu 22H (472 mg, 0.988 mmol) i praha gvožđa (276 mg, 4.94 mmol) u sirćetnoj kiselini (7.407 mL) je dodat H2O (2.469 mL) i zagrejan na 70 °C tokom 1h. Reakciona smeša je zatim ohlađena korišćenjem kupatila sa ledenom vodom, praćeno sa neutralizacijom sa 10 N NaOH (vod), i u finalnoj fazi koncentrovan NaHCO3rastvor je korišćen da se podesi pH do 7-8. Reakciona smeša je zatim esktrahovana sa EtOAc (3x) i kombinovani EtOAc slojevi su dalje isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani, koncentrovani i prečišćeni silika gel hromatografijom. Prečišćen proizvod je zatim podvrgnut separaciji hiralnom HPLC korišćenjem CHIRALPAK® AD kolone i 40% izopropanol/60% heptan) smeše kao mobilne faze. Opažena su dva pika eluiranjem i pik 1 je označen kao Diastereomer A (22Ia) i pik 2 je označen kao Diastereomer B (22IB) (144 mg, 32%). MS(ESI) m/z: 447.8 (M+H)<+>.

[0444] Primer 22. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16,17-triazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 22 je napravljen na isti način kao Primer 1 zamenjivanjem 1F sa 22I praćeno supstituisanjem Intermedijera 2 za Intermedijer 14 u poslednjem koraku kuplovanja. Reagens za kuplovanje korišćen u poslednjem koraku je EDC/HOBt i željeni proizvod je izolovan kao homohiralno jedinjenje.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.56 (br. s., 1H), 9.22 (br. s., 1H), 7.82 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 7.11 - 7.01 (m, 1H), 5.81 (dd, J = 11.9, 2.8 Hz, 1H), 5.40 (dd, J = 12.3, 5.4 Hz, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 1H), 3.85 - 3.74 (m, 4H), 2.90 - 2.48 (m, 2H), 2.39 - 2.21 (m, 2H), 2.12 - 1.99 (m, 1H), 1.94 - 1.78 (m, 1H), 1.56 - 1.20 (m, 2H), 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.67 (br. s., 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 592.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A) RT = 8.25 min.

Primer 23

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16,17-triazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so (Diastereomer A)

[0445]

[0446] Primer 23. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16,17-triazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 23 je napravljen na isti način kao Primer 22 zamenjivanjem 22IB sa 22IA.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 9.67 (s, 1H), 9.43 (br. s., 1H), 8.75 - 8.70 (m, 1H), 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.82 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.63 - 7.49 (m, 4H), 7.37 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 5.43 - 5.29 (m, 1H), 3.84 - 3.77 (m, 1H), 2.82 - 2.69 (m, 1H), 2.26 - 2.00 (m, 2H), 1.96 - 1.83 (m, 1H), 1.66 - 1.42 (m, 2H), 0.98 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.50 (d, J = 11.8 Hz, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 592.0 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A) RT = 8.27 min.

Primer 24

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-etil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so [0447]

24A. Metil (4-(2-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)piridin-4-il)-3-((2-etilbut-3-enoil)amino)fenil)karbamat: Jedinjenje 24A je pripremljeno praćenjem procedure opisane u 2I zamenjivanjem 2-metilbut-3-enoinske kiseline sa 2-etilbut-3-enoinskom kiselinom. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 24A (0.412g, 74%) kao žutu penu. MS(ESI) m/z: 509.3 (M+H)<+>.

24B. terc-Butil metil ((4E,7S)-3-etil-2-okso-2,3,6,7-tetrahidro-1H-8,12-(meteno)-1,9-benzodiazaciklotetradecin-7,15-diil)biskarbamat (Diastereomer A) i 24C. terc-Butil metil ((4E,7S)-3-etil-2-okso-2,3,6,7-tetrahidro-1H-8,12-(meteno)-1,9-benzodiazaciklotetradecin-7,15-diil)biskarbamat (Diastereomer B-): Jedinjenja 24B i 24C su pripremljena praćenjem procedure opisane u 1H, zamenjivanjem 1 G sa 24A. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 24C (pik 1, označen kao Diastereomer B) [0.05 g, 16%, MS(ESI) m/z: 481.2 (M+H)<+>] i 24B (pik 2, označen kao Diastereomer A) [0.03 g, 10%, MS(ESI) m/z: 481.2 (M+H)<+>].

24D. terc-Butil metil ((3R,7S)-3-etil-2-okso-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-8,12-(meteno)-1,9-benzodiazaciklotetradecin-7,15-diil)biskarbamat (Diastereomer B): U degasiran rastvor 24C (0.05 g, 0.104 mmol) u MeOH (5 mL) je dodat 10% paladijum na ugljeniku (0.011 g, 10.40 µmol). Reakciona smeša je zatim mešana pod H2-balonom tokom 72 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz uložak od CELITE® ispiranjem sa MeOH i DCM. Filtrat je koncentrovan da se dobije 24D (0.045 g, 90%) kao braon čvrsta supstanca. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 483.3 (M+H)<+>.

[0448] Primer 24. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-etil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 24 (0.006 g, 49%, žuta čvrsta supstanca) je pripremljen praćenjem procedura koje su opisane u koraku 2M, zamenjivanjem 2L sa 24D; praćeno sa korakom 2N, zamenjivanjem Intermedijera 11 sa Intermedijerom 1.<1>H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.91 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.93 (dd, J = 6.1, 1.7 Hz, 1H), 7.86 (ddd, J = 8.2, 6.7, 1.4 Hz, 1H), 7.75 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1.5 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.5 (dd, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 8.3, 1.4 Hz, 1H), 5.40 (dd, J = 11.4, 5.9 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.56 - 2.50 (m, 1H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.09 - 2.01 (m, 1H), 1.96 - 1.88 (m, 1H), 1.73 - 1.46 (m, 3H), 1.36 - 1.25 (m, 1H), 0.89 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.70 - 0.59 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 606.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A) RT = 6.32 min.

Primer 25

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-etil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0449]

[0450] Primer 25. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-etil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 25 (0.013 g, 60%, žuta čvrsta supstanca) je pripremljen praćenjem procedura koje su opisane u Primeru 24, zamenjivanjem 24C (Diastereomer B) sa 24B (Diastereomer A) u koraku 24D.<1>H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.87 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.69 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.87 (ddd, J = 8.1, 6.6, 1.5 Hz, 1H), 7.77 - 7.70 (m, 2H), 7.62 - 7.51 (m, 4H), 7.45 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 5.29 (dd, J = 11.0, 5.0 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 2.22 - 2.04 (m, 2H), 1.92 - 1.76 (m, 3H), 1.61 - 1.38 (m, 3H), 1.03 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.91 - 0.78 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 606.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A) RT = 7.09 min.

Primer 26

Etil (9R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-5-[(metoksikarbonil)amino]-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-9-karboksilate, 2 TFA so

[0451]

26A. Etil 2-((2-(2-((S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)piridin-4-il)-5-((metoksikarbonil)amino)fenil)amino)pent-4-enoat: Smeša 2G (954 mg, 2.313 mmol) i maleinske kiseline (537 mg, 4.63 mmol) u ACN (20 mL) je mešana na sobnoj temperaturi pod argonom. U ovu smešu je zatim dodat etil 2-oksoacetat (0.458 mL, 2.313 mmol) (50% u toluenu) i mešanje je nastavljeno tokom 5 min. Zatim, aliltributilstanan (0.860 mL, 2.78 mmol) je dodat u gornju smešu i mešanje je nastavljeno preko noći. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i razblažena sa EtOAc. Organski sloj je zatim ispran sa 1 N NaOH (2x) rastvorom i osušen preko MgSO4. Organski sloj je zatim koncentrovan u vakuumu da se dobije sirov proizvod koji je prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni proizvod (344 mg, 28%) kao bledo žuto ulje. MS(ESI) m/z: 539.0 (M+H)<+>.

26B. Etil (4E,7S)-7-((terc-butoksikarbonil)amino)-15-((metoksikarbonil)amino)-2,3,6,7-tetrahidro-1H-8,12-(meteno)-1,9-benzodiazaciklotetradecin-2-karboksilat: Grubbs hemija je izvedena kao što je opisano pre na 26A da se dobije željeni proizvod (0.315 g, 47%) kao braon ulje. MS(ESI) m/z: 510.9 (M+H)<+>.

26C. Etil (2R,7S)-7-((terc-butoksikarbonil)amino)-15-((metoksikarbonil)amino)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-8,12-(meteno)-1,9-benzodiazaciklotetradecin-2-karboksilat: Smeša 26B (315 mg, 0.617 mmol), paladijuma (II) na ugljeniku (131 mg, 0.123 mmol) (10% na ugljeniku), trifluorosirćetne kiseline (0.047 mL, 0.617 mmol) i EtOH (7 mL) je mešanA energično pod balonom vodonika tokom 4 h. Reakciona smeša je zatim filtriranA kroz uložak od CELITE® i rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije braon ulje. Ulje je razblaženo sa EtOAc i ispran sa zasićenim Na2CO3(2x) rastvor. Kombinovan organski slojevi su osušeni preko MgSO4i zatim koncentrovani da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije 26Ca (132 mg, 42%, Diastereomer A) kao bledo žuto ulje i 26Cb je označen kao Diastereomer B. MS(ESI) m/z: 513.1 (M+H)<+>.

26D. Etil (2R,7S)-7-amino-15-((metoksikarbonil)amino)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-8,12-(meteno)-1,9-benzodiazaciklotetradecin-2-karboksilat: Smeša 26Ca (132 mg, 0.258 mmol), HCl (1288 µL, 5.15 mmol) (4 M u dioksanu) i EtOAc (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja tokom 4.5 h, rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije svetlo mrka žuta čvrsta supstanca kao željeni proizvod (125 mg, 100%).

[0452] Primer 26. Etil (9R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-5-[(metoksikarbonil)amino]-8,16-diazatriciklo 13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-9-karboksilat, 2 TFA so (Diastereomer A): Smeša 1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-karboksilna kiselina (3.82 mg, 0.016 mmol), HOBT (4.42 mg, 0.029 mmol), EDC (5.53 mg, 0.029 mmol) i DIEA (0.025 mL, 0.144 mmol) u DMF (0.2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min. U gornju smešu je zatim dodat 26D (7 mg, 0.014 mmol) i mešanje je nastavljeno preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa MeOH i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se izoluje željeni proizvod (4.2 mg, 33%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3CN) δ 8.86 (br. s., 1H), 8.67 (s, 1H), 8.56 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 8.51 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.69 (td, 1H, J = 8, 2), 7.62 (dd, J = 6.0, 1.6 Hz, 1H), 7.44 (ddd, J = 8.1, 6.7, 1.6 Hz, 1H), 7.35 (d, 1H, J = 8), 7.30 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.22 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 8.2, 2.2 Hz, 1H), 5.35 (m, 1H), 3.85 (m, 2H), 3.62 (s, 3H), 2.93 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 2.08 (m, 4H), 1.63 (m, 2H), 1.29 (m, 4H), 0.97 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.20 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 635.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda E) RT = 7.39 min.

Primer 27

Metil N-[(14S)-14-[2-(3-hlorofenil)-4-okso-2H,4H,SH,6H,7H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-il]-16-fluoro-10-metil-9-okso-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0453]

27A. 2-(1-(3-Hlorofenil)-4-(((7S)-9-fluoro-15-((metoksikarbonil)amino)-3-metil-2-okso-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-8,12-(meteno)-1,10-benzodiazaciklotetradecin-7-il)karbamoil)-1H-pirazol-3-il)etil metansulfonat: U rastvor Primera 1 (0.01 g, 0.016 mmol) u piridinu (0.274 mL, 3.39 mmol) i DCM (0.5 mL) je dodat metan sulfonilhlorid (1.23 µL, 0.016 mmol) i reakciona smeša je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i preneta u sledeći korak bez daljih manipulacija ili prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 713.5 (M+H)<+>.

27B. Metil ((7S)-7-(((3-(2-hloroetil)-1-(3-hlorofenil)-1H-pirazol-4-il)karbonil)amino)-9-fluoro-3-metil-2-okso-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-8,12-(meteno)-1,10-benzodiazaciklotetradecin-15-il)karbamat: Sirov proizvod iz koraka 27A (0.014 g, 0.020 mmol) je rastvoren u DCM (1 mL) i prebačen u zatvorenu epruvetu gde je DCM evaporisao. U gornju čvrstu supstancu je zatim dodat DIEA (0.2 mL) i toluen (1 mL). Reakcioni sud je zatvoren i zagrejan do 110 °C tokom 18 h.

Alikvot LCMS nije pokazao proizvod zatvaranja prstena već je samo hloroetil proizvod opažen. MS(ESI) m/z: 653.4 (M+H)<+>.

[0454] Primer 27. Metil N-[(14S)-14-[2-(3-hlorofenil)-4-okso-2H,4H,5H,6H,7H-pirazolo[4,3-c]piridin-5-il]-16-fluoro-10-metil-9-okso-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: NaH (0.147 mg, 6.12 µmol) je dodat u THF rastvor 27B (4 mg, 6.12 µmol) i u ovo je dodat višak NaI i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je kvenčovana sa H2O (0.1 mL), koncentrovana i prečišćena direktno pomoću HPLC na reverznoj fazi.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.61 (s, 1H), 8.38 (dd, J = 9.3, 2.1 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.99 (m, 1H), 7.73 (dd, 1H), 7.72 (m, 1H), 7.55 (m, 3H), 7.35(dd, 1H), 5.75-5.71 (m, 1H), 3.77(m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.70 (m, 1H), 2.65(m, 1H), 2.29 (m, 1H), 2.28 (m, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.85 (m, 1H), 1.65 (m, 1H), 1.40 (m, 1H), (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.05(m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 617.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda B) RT = 11.7 min.

Primer 28

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-16-fluoro-10-metil-9-okso-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0455]

[0456] Primer 28. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-16-fluoro-10-metil-9-okso-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 28 je napravljen na isti način kao Primer 1 korišćenjem 1Ib i zamenjivanjem Intermedijera 9 sa Intermedijerom 2.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.47 (s, 1H), 8.75 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.05-8.18 (m, 2H), 7.81 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.58 (ddd, J = 8.2, 6.7, 1.4 Hz, 1H), 7.45-7.54 (m, 3H), 7.35 (td, J= 8.3, 1.7 Hz, 1H), 5.18-5.31 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 2.55-2.68 (m, 1H), 2.09-2.23 (m, 1H), 1.94-2.09 (m, 1H), 1.71-1.87 (m, 1H), 1.51-1.63 (m, 1H), 1.29-1.43 (m, 1H), 1.06 (d, J = 6.9 Hz, 4H) ppm. MS(ESI) m/z: 609.0 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 9.71 min (Metoda A).

Primer 29

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9,17-diokso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,15(19)-pentaen-5-il]karbamat [0457]

29A. Metil 4-(1,3-dioksolan-2-il)-3-nitrobenzoat: U rastvor metil 4-formil-3-nitrobenzoat (9.0 g, 43.0 mmol) u toluenu (150 mL) je dodat etilen glikol (7.20 mL, 129 mmol) praćeno sa p-TsOH (0.409 g, 2.152 mmol) i reakciona smeša je zagrejana na temperaturama refluksa sa azeotropnim uklanjanjem H2O korišćenjem aparata Dean-Stark tokom 4 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena i razblažena sa DCM. DCM slojevi su zatim isprani sa zasićenim NaHCO3rastvorom. Organski sloj je osušen (MgSO4), filtrirani, i koncentrovani da se dobije ostatak. Ostatak je rastvoren u minimalnoj količini DCM i prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (8.53 g, 78%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.39 (s, 1H), 8.27 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.00 (dt, J = 3.8, 1.9 Hz, 2H), 3.94 (dt, J = 3.8, 1.9 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H) ppm.

29B. 4-(1,3-Dioksolan-2-il)-3-nitrobenzoeva kiselina: Litijum hidroksid monohidrat (5.67 g, 135 mmol) je dodat u rastvor 29A (11.4 g, 45.0 mmol) u THF (120 mL), MeOH (120 mL) i H2O (40.0 mL). Gornja smeša je zatim zagrejana do 50 °C. Nakon 1 h grejanje je smanjeno do sobne temperature i mešanje je nastavljeno preko noći. U reakcionu smešu je zatim dodat H2O (50 mL) i organski delovi su koncentrovani. Preostali vodeni sloj je napravljen kiseo sa 1.0 N HCl rastvorom da se istalože čvrste supstance. Čvrste supstance su sakupljene filtracijom, isprane sa H2O i osušene pod vakuumom preko noći.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.68 (br. s., 1H), 8.36 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.25 (dd, J = 8.1, 1.3 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.05 - 3.89 (m, 4H) ppm.

29C. Metil (4-(1,3-dioksolan-2-il)-3-nitrofenil)karbamat: U rastvor 29B (6.77 g, 28.3 mmol) u THF (100 mL) je dodat TEA (7.89 mL, 56.6 mmol) u kapima u THF (25 mL) na -5 °C u ledenom slanom kupatilu. Temperatura je održavana na -5 °C, i rastvor etil hloroformata (3.25 mL, 34.0 mmol) u THF (30 mL) je dodat u kapima tokom 10 minuta. Nakon mešanja tokom dodatnih 30 minuta, hladan rastvor natrijum azida (3.68 g, 56.6 mmol) u H2O (12.5 mL) je dodat u kapima. Nakon mešanja tokom dodatnog 1 sata, reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu (bez zagrevanja). Uljani ostatak je rastvoren u Et2O (100 mL), ispran sa H2O, fiziološkim rastvorom, i osušen preko natrijum sulfata, filtriran, i koncentrovan (bez zagrevanja) da se dobije acil azid. Ovaj materijal je rastvoren u toluenu (100 mL) i zagrejan do 110 °C. Nakon 1 h, temperatura je smanjena do 80 °C, MeOH (60 mL) je dodat, i grejanje je nastavljeno preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (5.01 g, 66%) kao žuto smeđa čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.21 (s, 1H), 8.10 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.74 - 7.62 (m, 2H), 6.22 (s, 1H), 3.95 - 3.90 (m, 4H), 3.69 (s, 3H) ppm.

29D. Metil (4-formil-3-nitrofenil)karbamat: 29C (5.00 g, 18.64 mmol) je dodat u rastvor TFA (27 mL) i H2O (3 mL) i mešan na sobnoj temperaturi. Nakon 3 h, reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je podeljen između H2O i EtOAc. Organski sloj je zatim ispran sa zasićenim natrijum bikarbonatnim rastvorom, fiziološkim rastvorom, osušen preko natrijum sulfata, filtriran, i koncentrovan da se dobije svetlo žuta čvrsta supstanca kao željeni proizvod (3.83 g, 92%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.59 (s, 1H), 10.09 (s, 1H), 8.23 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.86 - 7.81 (m, 1H), 3.74 (s, 3H) ppm.

29E. (S)-terc-Butil 1-(dimetoksifosforil)-2-oksoheks-5-en-3-ilkarbamat: U rastvor dimetil metilfosfonata (13.98 mL, 131 mmol) u THF (87 mL) na -78 °C je dodat n-BuLi (82 mL, 131 mmol) polako. Nakon završetka dodavanja, reakcija je mešana tokom 40 min i zatim rastvor (S)-metil 2-(terc-butoksikarbonilamino)pent-4-enoata (6.0 g, 26.2 mmol) u THF (30 mL) je dodat polako. Mešanje je nastavljeno tokom drugih 40 min na -78 °C. Reakciona smeša je zatim kvenčovana dodavanjem H2O (2.357 mL, 131 mmol). Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (100 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran sa 1 M HCl, zasićenim NaHCO3 rastvorom, fiziološkim rastvorom, osušen preko MgSO4, filtriran, i koncentrovan da se dobije čisto ulje. Sirov proizvod je konačno prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni proizvod (7.46 g, 89%) kao bezbojno ulje. MS(ESI) m/z: 343.9 (M+Na)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 5.63 - 5.76 (1 H, m), 5.08 - 5.17 (2 H, m), 4.33 - 4.43 (1 H, m), 3.80 (3 H, d, J = 2.20 Hz), 3.77 (3 H, d, J = 2.20 Hz), 3.28 - 3.37 (1 H, m), 3.05 - 3.16 (1 H, m), 2.58 - 2.69 (1 H, m), 2.42 (1 H, dt, J = 14.58, 7.29 Hz), 1.43 (9 H, s) ppm.

29F. Metil (4-((1E,4S)-4-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-oksohepta-1,6-dien-1-il)-3-nitrofenil)karbamat: U energično mešan rastvor 29E (4.47 g, 13.92 mmol) i 29D (2.6 g, 11.60 mmol) u THF (anhidrovan) (115 mL) i EtOH (apsolutni) (1.148 mL) pod azotom je dodat u porcijama K2CO3 (anhidrovan) (2.56 g, 18.56 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature i zatim je smeša zagrejana na 55 °C. Reakciona smeša je zatim filtrirana uz pomoć EtOAc i filtrat je uparen do ostatka koji je rastvoren u maloj količini metilen hlorida i prečišćen pomoću hromatografije na normalnoj fazi da se dobije željeni proizvod (4.38 g, 90%) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 420.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.36 (s, 1H), 8.22 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.83 - 7.73 (m, 2H), 7.21 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 5.77 (ddt, J = 17.0, 10.2, 6.7 Hz, 1H), 5.16 - 5.01 (m, 2H), 4.32 (td, J = 8.5, 4.9 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 1.36 (s, 9H) ppm.

29G. Metil (4-(6-(1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-2-okso-1,2-dihidropiridin-4-il)-3-nitrofenil)karbamat: U rastvor 29F (3.0 g, 7.15 mmol) i 1-(2-etoksi-2-oksoetil)piridinium bromida (1.189 g, 7.15 mmol) u EtOH (130 mL), je dodat amonijum acetat (11.03 g, 143 mmol) u delovima. Nakon 15 min, smeša je mešana na 75 °C. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i rastvorena u EtOAc. Organski sloj je zatim ispran sa 1.0 N HCl, H2O, zasićen natrijum bikarbonatnim rastvorom i konačno fiziološkim rastvorom. Organska faza je osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana da se dobije ostatak koji je prečišćen pomoću hromatografije na normalnoj fazi da se izoluje željeni proizvod (2.2 g, 67%) kao braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 459.3 (M+H)<+>.

29H. Metil (3-amino-4-(6-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-2-okso-1,2-dihidropiridin-4-il)fenil)karbamat: U rastvor 29G (2.9 g, 6.33 mmol) u MeOH (120 mL) je dodat amonijum hlorid (0.677 g, 12.65 mmol) i cink (4.14 g, 63.3 mmol). Suspenzija je mešana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi i zatim na 65 °C preko noći. Suspenzija je filtrirana vrela kroz čep od CELITE® i materijal zaostao na filtru je ispran sa vrelim MeOH. Filtrat je koncentrovan i osušen pod vakuumom da se dobije žućkasta braon čvrsta supstanca. Ovaj ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc (sa 10% MeOH), ispran sa zasićenim natrijum bikarbonatnim rastvorom i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Sirov proizvod je zatim podvrgnut hiralnoj separaciji praćen hiralnom AD-H 21 x 250 mm, korišćenjem smeše 35% (50/50 EtOH, i-PrOH i 0.1% DEA) i 65% CO2sa stopom protoka od 70 mL/min i 150 bara na 40 °C. Svaki izdvojeni enantiomer je koncentrovan odvojeno i dobijena čvrsta supstanca je postavljena u vakuum preko noći. Analitički podaci odgovaraju željenom proizvodu (1.12 g, 41%, 29Ha). MS(ESI) m/z: 429.2 (M+H)<+>.<1>H NMR: (400 MHz, MeOD) δ 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.79 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 5.91 -5.74 (m, 1H), 5.22 - 5.09 (m, 2H), 4.58 - 4.48 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.55 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 2.53 - 2.43 (m, 1H), 1.45 (br. s., 9H) ppm. Drugi izomer (29Hb) je takođe odvojeno izolovan.

29I. Metil (4-(6-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-2-okso-1,2-dihidropiridin-4-il)-3-((2-metilbut-3-enoil)amino)fenil)karbamat: Izobutil hloroformat (0.956 g, 7.00 mmol) je dodat u 2-metilbut-3-enoinsku kiselinu (0.701 g, 7.00 mmol) i 4-metilmorfolin (0.770 mL, 7.00 mmol) u THF (33.3 mL) na 0 °C u atmosferi azota i mešano je tokom 3 h. Dobijene čvrste supstance su isfiltrirane i filtrat je korišćen direktno za sledeći korak. U sud sa okruglim dnom koji sadrži izmešan anhidrid, 29H (0.200 g, 0.467 mmol) i 4-metilmorfolin (0.770 ml, 7.00 mmol) u DMF (6 mL) je dodat u delovima (1 mL) svakih deset minuta tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 3 d, reakciona smeša je podeljena između EtOAc i 1.0 NaOH (20 mL). Organski sloj je ispran sa 1.0 N NaOH, H2O, 1.0 N HCl rastvorom, H2O, i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen, filtriran i koncentrovan. Sirov proizvod je ponovo rastvoren u THF (20 mL) i tretiran sa NaOH (10 mL, 10.00 mmol). Nakon mešanja tokom 1h, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena korišćenjem HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (0.09 g, 38%). MS(ESI) m/z: 511.4 (M+H)<+>.

29J. terc-Butil metil ((7S)-3-metil-2,10-diokso-2,3,4,5,6,7,9,10-oktahidro-1H-12,8-(meteno)-1,9-benzodiazaciklotetradecin-7,15-diil)biskarbamat: Rastvor 29I (90 mg, 0.176 mmol) u DCE (anhidrovan) (9793 µL) u bočici za mikrotalasnu je degasiran tokom 15 minuta. U ovaj rastvor je zatim dodat tricikloheksilfosfin[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-4,5-dihidroimidazol-2-iliden][benzilidin]rutenijum(IV)dihlorid (60.0 mg, 0.071 mmol) i smeša je zagrejana do 120 °C tokom 30 min u mikrotalasnim uslovima. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi. Frakcije za diastereomer 29J1 (manji; pik 1; više polaran RT (pomoću ACN PREP) = 3.776 minuta) i diastereomer 29J2 (veći; pik 2; manje polaran RT (pomoću ACN PREP) = 3.978 minuta) su koncentrovane. Povraćen 29J1 (8.2 mg, 19%) i 29J2 (14.8 mg, 35%) nakon Grubbs makrociklizacije. Svaki diastereomer je uzet za PtO2 redukciju pomoću rastvaranja sa EtOH (10 mL) u dva odvojena suda za hidrogenizaciju, tretiran svaki sa jednakom količinom platina(IV) oksida (12.01 mg, 0.053 mmol), i izložen gasu vodonika (55 psi) preko noći. Reakcije su filtrirane, koncentrovane, i prenesene dalje u sledeću reakciju bez daljeg prečišćavanja. Finalni zasićeni analozi 29J3 (8.4 mg, 20%) i 29J4 (13.8 mg, 32%) su oporavljeni kao braon filmovi. MS(ESI) m/z: 485.3 (M+H)<+>za oba diastereomera.

[0458] Primer 29. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9,17-diokso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,15(19)-pentaen-5-il]karbamat: Primer 21 je pripremljen na isti način kao Primer 1 podvrgavanjem 29J4 Boc deprotekciji praćeno sa T3P kuplovanjem korišćenjem slobodnog amina i Intermedijera 1. Sirova reakciona smeša je prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.88 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.86 (ddd, J = 8.1, 6.6, 1.5 Hz, 1H), 7.76 - 7.71 (m, 1H), 7.52 - 7.40 (m, 4H), 6.67 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 5.17 (dd, J = 10.7, 6.6 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 2.79 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 2.05 - 1.94 (m, 2H), 1.79 - 1.58 (m, 3H), 1.37 - 1.25 (m, 1H), 1.11 -1.05 (m, 3H), 1.04 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.96 - 0.88 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 608.4 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A) RT = 6.27 min.

Primer 30

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9,17-diokso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,15(19)-pentaen-5-il]karbamat [0459]

[0460] Metil N-[(14S)-14-[l-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9,17-diokso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,15(19)-pentaen-5-il]karbamat: Primer 30 je napravljen na isti način kao za Primer 29 zamenjivanjem 29J4 sa 29J3.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.90 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.88 (ddd, J = 8.3, 6.6, 1.7 Hz, 2H), 7.76 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1.5 Hz, 1H), 7.54 - 7.44 (m, 5H), 6.57 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 5.11 (dd, J = 10.6, 6.2 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.41 - 2.30 (m, 1H), 2.10 - 1.93 (m, 3H), 1.87 - 1.78 (m, 1H), 1.58 - 1.49 (m, 1H), 1.39 - 1.32 (m, 1H), 1.31 - 1.28 (m, 3H), 1.21 - 1.04 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 608.4 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A) RT = 6.23 min.

Primer 31

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so [0461]

[0462] Primer 31. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 31 je pripremljen na isti način kao Primer 2 zamenjivanjem 4-bromopikolinaldehida sa 2-bromoizonikotinaldehidom i supstituisanjem Intermedijera 11 sa Intermedijerom 2. Takođe, kiseli hlorid je korišćen u koraku 2H umesto kiseline u koraku kuplovanja. Nažalost sa Primerom 31, hiralno razlaganje nije postignuto kao sa Primerom 1 u koraku 11 i stoga je finalno jedinjenje smeša diastereomera.<1>H NMR (500 MHz, CD3CN) δ 8.60 (m, 1H), 8.42 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.02 (m, 1H), 7.91 (m, 1H), 7.70 (ddd, J = 8.4, 7.0, 1.7 Hz, 1H), 7.62 (m, 1H), 7.37 (m, 2H), 7.23 (td, J= 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.98 (m, 1H), 3.64, 3.66 (2s, 3H), 2.55 (m, 2H), 1.98 (m, 1H), 1.71 (m, 4H), 1.33 (m, 5H), 1.08 (d, J = 6.9 Hz, 0.3H), 0.81 (d, J = 6.9 Hz, 2.7H), 0.49 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 591.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda E) RT = 6.00 min.

Primer 32

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-16-fluoro-9-okso-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0463]

[0464] Primer 32. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-16-fluoro-9-okso-8,17-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 32 je napravljen na isti način kao Primer 21 korišćenjem 1F umesto počinjanja sa 21A.

<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.68 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.14 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.07 (dd, J= 9.4, 2.2 Hz, 1H), 7.81 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.58 (ddd, J = 8.2, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 7.45-7.55 (m, 3H), 7.36 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 5.23 (dd, J = 11.0, 5.5 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 2.39-2.55 (m, 1H), 2.08-2.23 (m, 1H), 1.94-2.08 (m, 2H), 1.60-1.84 (m, 2H), 1.35-1.50 (m, 1H), 0.99-1.21 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 594.9 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 9.18 min (Metoda A).

Primer 33

Metil N-[(12E,15S)-15-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9,18-diokso-8,17-diazatriciklo[14.3.1.0<2,7>]ikosa-1(19),2,4,6,12,16(20)-heksaen-5-il]karbamat, TFA so [0465]

33A. Metil (4-(6-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-2-okso-1,2-dihidropiridin-4-il)-3-(pent-4-enoilamino)fenil)karbamat: U rastvor 29H (115.4 mg, 0.269 mmol) u DCM (40 mL) je dodat piridin (0.109 mL, 1.347 mmol). Sud je postavljen pod azot i smeša je ohlađena do 0 °C. U ovu smešu je zatim dodat pent-4-enoil hlorid (0.104 mL, 0.943 mmol ) i smeša je mešana tokom 10 minuta na istoj temperaturi i reakciona smeša je polako ostavljena da se ugreje do sobne temperature i mešan na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom i dobijeni žuti ostatak je uzet u THF i 1 N NaOH (5:2, 7 mL) i mešan na 30 °C tokom 1.5 h da dovede do hidrolize o-acilovanog intermedijera do željenog proizvoda. Reakciona smeša je razblažena dalje esktrahovana sa EtOAc (2x) i kombinovane organske supstance su isprane sa fiziološkim rastvorom, osušene (Na2SO4), filtrirane i uparene do ostatka. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni proizvod (97 mg, 70%) kao tamna čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 511.1 (M+H)<+>.

33B. terc-Butil metil ((5E,8S)-2,11-diokso-1,2,3,4,7,8,10,11-oktahidro-13,9-(meteno)-1,10-benzodiazaciklopentadecin-8,16-diil)biskarbamat: Bočica za mikrotalasnu je napunjena sa 33A (96.6 mg, 0.189 mmol) i tricikloheksilfosfin [1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-4,5-dihidro imid poklopljena, pročišćena sa argonom i DCE (anhidrovan - degasiran) (10 mL) je dodat. Reakciona smeša je zatim zagrejana do 120 °C tokom 30 min u mikrotalasnoj. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i isprana sa zasićenim NaHCO3 praćeno sa fiziološkim rastvorom. Organski slojevi su zatim osušeni preko Na2SO4, filtrirani i upareni da se dobije tamno čvrsta supstanca. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (24 mg, 26%) kao braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 483.0 (M+H)<+>.

[0466] Primer 33. Metil N-[(12E,15S)-15-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9,18-diokso-8,17-diazatriciklo[14.3.1.0<2,7>]ikosa-1(19),2,4,6,12,16(20)-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: U RBF koji sadrži 33B (4.1 mg, 8.50 µmol) je dodat HCl (4 M u dioksanu) (2 mL, 8.00 mmol) i reakciona smeša je mešana pod azotom na temperaturi okoline. Nakon 1 h, reakciona smeša je koncentrovana i sirov proizvod je stavljen u sledeći korak bez daljeg prečićavanja. U rastvor Boc deprotektovanog proizvoda (3.59 mg, 8.57 µmol) i DIEA (0.015 mL, 0.086 mmol) u DMF (anhidrovan) (1.5 mL) pod azotom je dodat Intermedijer 1(2.485 mg, 10.28 µmol) praćeno sa T3P (7.65 µL, 0.013 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 20 min na temperaturi okoline. Nakon 20 min, reakciona smeša je razblažena sa MeOH do 2 mL i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije finalni željeni proizvod (2.4 mg, 43%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.85 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.85 - 7.80 (m, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 1H), 7.55 - 7.52 (m, 1H), 7.44 - 7.39 (m, 2H), 7.30 - 7.27 (m, 1H), 6.40 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 6.23 (d, J= 1.1 Hz, 1H), 5.56 - 5.49 (m, 2H), 5.03 - 4.97 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.69 - 2.60 (m, 3H), 2.51 - 2.38 (m, 5H). MS(ESI) m/z: 606.0 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 8.75 min.

Primer 34

Metil N-[(10R, 14S)-10-metil-9-okso-14-[1-(piperidin-4-il)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, bis TFA so [0467]

34A. (S)-2-(4-(Metoksikarbonilamino)-2-nitrofenil)-2-oksoetil 2-(tercbutoksikarbonilamino)pent-4-enoat: U bistar, bezbojni rastvor (S)-2-(tercbutoksikarbonilamino)pent-4-enoinske kiseline (2.91 g, 13.50 mmol) u DMF (33.7 mL) je dodat kalijum hidrogen karbonat (1.622 g, 16.20 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 20 min na sobnoj temperaturi i zatim ohlađena do 0 °C. U gornju reakcionu smešu je dodat rastvor Intermedijera 16 (4.28 g, 13.50 mmol) u DMF (33.7 mL) u kapima i reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature i zatim je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 18 h, reakcija je ohlađena do 0 °C i sipana u ledenu hladnu vodu. Vodeni sloj je zatim esktrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa H2O i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da se dobije žuta pena kao (S)-2-(4-(metoksikarbonilamino)-2-nitrofenil)-2-oksoetil 2-(terc-butoksikarbonilamino)pent-4-enoat (6.09 g, 100%). MS(ESI) m/z: 450.5 (M-H)<+>.

34B. Metil (4-(2-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-1H-imidazol-5-il)-3-nitrofenil)karbamat: U 1000-mL RBF koji sadrži 34A (6.09 g, 13.49 mmol) je dodat ksilen (135 mL) i gornja smeša je sonifikovana da se dobije bistar žuti rastvor. U ovaj rastvor je zatim dodat amonijum acetat (10.40 g, 135 mmol) i sud je opremljen sa dean-stark aparatom i refluksnim kondenzatorom. Reakcija je zagrejana do 110 °C tokom 2 h i zatim povišena do 140 °C tokom 2 h. Nakon ukupno 4 h mešanja, reakcija je zaustavljena i ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc i isprana sa zasićenim NaHCO3(2x) rastvorom i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da se dobije braon guma koja je prečišćena korišćenjem silika gel hromatografije da se izoluje braon pena kao željeni proizvod (0.91 g, 16%). MS(ESI) m/z: 432.5 (M+H)<+>.

34C. Metil (4-(2-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-3-nitrofenil)karbamat: Na plamenu osušen RBF od 25 mL je napunjen sa NaH (0.092 g, 2.295 mmol) i zatim THF (4.17 mL) je dodat da se dobije siva suspenzija. Gornja suspenzija je zatim ohlađena do 0 °C i zatim bistar, žuti rastvor 34B (0.9 g, 2.086 mmol) u THF (4.17 mL) je dodat u kapima. Reakciona smeša je zatim mešana na 0 °C tokom 30 min i zatim ostavljena da se ugreje do sobne temperature i mešana je tokom 0.5 h. Žuta suspenzija je ponovo ohlađena do 0 °C i zatim SEM-C1 (0.370 mL, 2.086 mmol) je dodat u kapima. Dobijena zamućena reakciona smeša je mešana na 0 °C. Nakon 1 h, reakcija je zaustavljena kvenčovanjem sa zasićenim NH4Cl praćeno sa razblaživanjem sa EtOAc. Slojevi su zatim izdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani da se dobije žuto ulje koje je prečišćeno silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod kao žuta pena (0.424 g, 36%). MS(ESI) m/z: 562.0 (M+H)<+>. 1D NOE potvrdilo je regioizomerni položaj SEM na imidazolskom prstenu.

34D. (S)-Metil4-(2-(1-Boc-aminobut-3-enil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-3-aminofenilkarbamat: U rastvor 34C (0.424 g, 0.755 mmol) u MeOH (5 mL) je dodat cink (0.494 g, 7.55 mmol) i amonijum hlorid (0.404 g, 7.55 mmol). Smeša je zatim mešana na 60 °C u zatvorenoj epruveti. Nakon 4 h, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i žuta suspenzija je razblažena sa DCM i isprana sa H2O. Vodeni sloj je ekstrahovan sa 15% IPA u CHCl3. Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije narandžasta čvrsta supstanca kao željeni proizvod (0.31 g, 77%). MS(ESI) m/z: 532.4 (M+H)<+>.

34E. Metil (4-(2-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-3-((trifluoroacetil)amino)fenil)karbamat: Rastvor 34D (10.2 g, 19.18 mmol) i TEA (3.19 mL, 23.02 mmol) u EtOAc (50 mL) je ohlađen do 0 °C pod argonom. U ovaj rastvor je dodat anhidrid 2,2,2-trifluorosirćetne kiseline (2.97 mL, 21.10 mmol) u kapima preko špric pumpe. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je mešana tokom još 30 min na 0 °C. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc, isprana sa H2O, fiziološkim rastvorom i osušen preko MgSO4. Sirov proizvod je zatim filtriran da se uklone čvrste supstance i organski sloj je koncentrovan i prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (10.69 g, 89%) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 627.9 (M+H)<+>.

34F. (6S,E)-Benzil 6-((terc-butoksikarbonil)amino)-6-(4-(4-((metoksikarbonil)amino)-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-il)-2-metilheks-3-enoat: U rastvor 34E (3.3 g, 5.26 mmol) i Intermedijer 17 (5.91 g, 31.1 mmol) u DCM (80 mL) je dodat pTsOH (0.905 g, 5.26 mmol). U gornji rastvor je zatim ubačen argonom u mehurićima tokom 30 min. Reakciona smeša je zatvorena, zagrejana do 40 °C pod argon tokom 10 min, i dodat je Grubbs II (1.5 g, 1.767 mmol) u 20 mL argona degasiranog DCM u kapima pomoću špric pumpe tokom 3 h dok je održavana temperatura reakcije na 40 °C. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je isprana sa koncentrovanom NaHCO3(vod.) i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Sirov proizvod je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (1.93 g, 46%) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 790.4 (M+H)<+>.

34G. (6S)-6-((terc-Butoksikarbonil)amino)-6-(4-(4-((metoksikarbonil)amino)-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-il)-2-metilheksanoinska kiselima: Rastvor 34F (1.76 g, 2.228 mmol) u MeOH (40 mL) je vakumiran i ponovo napunjen sa argonom. U ovaj rastvor pod argonom je dodat paladijum na ugljeniku (10%) (500 mg, 0.470 mmol), vakumiran je i ponovo napunjen H2gasom (3x). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi pod H2 balonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je filtrirana kroz CELITE®. Filtrat je koncentrovan i prečišćen silika gel hromatografijom da se izoluje željeni proizvod (1.23 g, 79%) kao bež čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 702.1 (M+H)<+>.

34H. (6S)-6-(4-(2-Amino-4-((metoksikarbonil)amino)fenil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)-1H-imidazol-2-il)-6-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-metilheksanoinska kiselina: U rastvor 34G (1.656 g, 2.360 mmol) u MeOH (14 mL) je dodat LiOH (2 N vod) (7 mL, 14.00 mmol). Reakciona smeša je zatvorena i zagrejana na 60 °C. Nakon 1 h, reakciona smeša je ohlađena u ledenom vodenom kupatilu, 1 N HCl (vod) je dodat da se podesi pH do 6. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x60 mL). Kombinovani EtOAc slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani da se dobije željeni proizvod (1.43 g, 100%) kao sivkasta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 606.3 (M+H)<+>.

34I. terc-Butil metil ((3R,7S)-3-metil-2-okso-9-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,2,3,4,5,6,7,9-oktahidro-11,8-(azeno)-1,9-benzodiazaciklotridecin-7,14-diil)biskarbamat: U smešu BOP (1141 mg, 2.58 mmol), DMAP (529 mg, 4.33 mmol) i DIEA (1.261 mL, 7.22 mmol) u DCM (300 mL) je dodat 34H (625 mg, 1.032 mmol) u DMF (5 mL) u kapima pomoću špric pumpe. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 dana pre nego što je prebačena u zatvoreni sud. Reakcija je zagrejana na 50 °C tokom 48 h pre hlađenja do sobne temperature. Reakciona smeša je koncentrovana do male zapremine i u ostatak je dodat EtOAc. EtOAc sloj je ispran sa 10% LiCl rastvorom da se ukloni DMF i organski slojevi su osušeni preko MgSO4. Organski sloj je zatim koncentrovan i prečišćen silika gel hromatografijom praćeno sa HPLC na reverznoj fazi. Dva glavna pika su opažena na HPLC i prvi pik je identifikovan kao željeni proizvod (drugi pik je drugi izomer) na osnovu ranijih rendgenskih studija i stereohemija je određena na osnovu prethodnih jedinjenja. Izolovano je 132 mg (22%) željenog proizvoda kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 588.1 (M+H)<+>.

34J. Metil ((3R,7S)-7-amino-3-metil-2-okso-9-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,2,3,4,5,6,7,9-oktahidro-11,8-(azeno)-1,9-benzodiazaciklotridecin-14-il)karbamat: U rastvor 34I (120 mg, 0.204 mmol) u DCM (4 mL) je dodat TFA (0.8 mL, 10.38 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 1h. Reakcija je kvenčovana sa koncentrovanim Na2CO3 vodenim ratsvorom praćeno ekstrakcijom sa DCM i EtOAc. Organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4i koncentrovani pod vakuumom da se dobije željeni proizvod (71 mg, 71 %) kao žuta guma. MS(ESI) m/z: 488.3 (M+H)<+>.

[0468] Primer 34. Metil N-[(10R,14S)-10-metil-9-okso-14-[1-(piperidin-4-il)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, bis TFA so: U rastvor 34J (23 mg, 0.047 mmol) u DMF (1 mL) je dodata 1-[1-(tercbutoksikarbonil)piperidin-4-il]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina (15.37 mg, 0.052 mmol), EDC (18.08 mg, 0.094 mmol), HOBT (14.45 mg, 0.094 mmol) i TEA (0.066 mL, 0.472 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena HPLC na reverznoj fazi da se dobije Boc zaštićeni proizvod (29 mg, 70%) kao bela čvrsta supstanca. U gornju čvrstu supstancu (29.2 mg, 0.033 mmol) u bočici je dodat HCl (4 N u dioksanu) (0.8 mL, 3.20 mmol) i reakciona smeša je zagrejana na 75 °C tokom 1h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Sirov proizvod je zatim podvrgnut HPLC prečišćavanju na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (22 mg, 81 %) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.57 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.57 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.52 - 7.38 (m, 2H), 5.38 (dd, J = 10.4, 6.8 Hz, 1H), 4.99 - 4.89 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.63 - 3.55 (m, 2H), 3.28 - 3.21 (m, 1H), 2.77 (br. s., 1H), 2.51 - 2.19 (m, 4H), 2.17 - 2.02 (m, 1H), 1.84 - 1.51 (m, 3H), 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.70 (d, J = 12.1 Hz, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 536.4 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.02 min (Metoda A).

[0469] Sledeći Primeri u Tabeli 3 su napravljeni korišćenjem iste procedure kao što je prikazano u Primeru 34. Kiseline korišćene u finalnom koraku su kao što je naznačeno u tabeli ispod u odeljku Intermedijer. Razni reagensi za kuplovanje mogu biti korišćeni osim onih koji su opisani u Primeru 34 kao BOP, PyBop, EDC/HOBt, HATU ili T3P. Boc i SEM deprotekcija je postignuta pre finalnog kuplovanja za razliku od Primera 34 u kome je Boc grupa sama uklonjena u koraku 34J.

[0470] Sledeći Primeri u Tabeli 4 su napravljeni korišćenjem iste procedure kao što je prikazano u Primeru 34 korišćenjem drugog izomera u koraku 34I. Kiseline korišćene u finalnom koraku su kao što je naznačeno u tabeli ispod u odeljku Intermedijer. Razni reagensi za kuplovanje mogu niti korišćeni osim onih koji su opisani u Primeru 34 kao što je BOP, PyBop, EDC/HOBt, HATU ili T3P. Boc i SEM deprotekcija je postignuta pre finalnog kuplovanja za razliku od Primera 34 u kome je Boc grupa sama uklonjena u koraku 34J.

Tabela 4

Primer 45

Metil (9R,14S)-14-[5-amino-1-(3-hlorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-5-[(metoksikarbonil)amino]-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-9-karboksilat, TFA so

[0471]

45A. Metil (3-bromo-4-(2-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)fenil)karbamat: 45A je pripremljen praćenjem procedura koje su opisane u koraku 34A, zamenjivanjem Intermedijera 16 sa Intermedijerom 18; praćeno sa korakom 34B i 34C. MS(ESI) m/z: 597.1 (M+2+H)<+>.

45B: (R)-2-(2-(2-((S)-1-(terc-Butoksikarbonilamino)but-3-enil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-5-(metoksikarbonilamino)fenilamino)pent-4-enoinska kiselina: U smešu 45A (2 g, 3.36 mmol), bakar(I) jodida (0.064 g, 0.336 mmol) i K2CO3 (1.160 g, 8.39 mmol) u zaptivenoj epruveti su dodati (R)-2-aminopent-4-enoinska kiselina (0.464 g, 4.03 mmol) i DMSO (6.72 mL). Reakciona smeša je vakuumirana i napunjena sa argonom tri puta, zatim poklopljena i zagrejana na 90 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i zatim razblažena sa EtOAc i H2O. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani da se dobije sirov ostatak. Mala količina DCM (~5 mL) je dodata da se dobije braon rastvor praćeno sa dodavanjem heksana (~300 mL) da se dobije žuta suspenzija koja je filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana sa heksanom i osušena na vazduhu da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (1.8 g, 85%). MS(ESI) m/z: 630.4 (M+H)<+>.

45C. (R)-Metil2-(2-(2-((S)-1-(terc-butoksikarbonilamino)but-3-enil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-5-(metoksikarbonilamino)fenilamino)pent-4-enoat: U rastvor 45B (1.8 g, 2.86 mmol) u DMF (25 mL) je dodat K2CO3 (0.395 g, 2.86 mmol) i MeI (0.179 mL, 2.86 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 20 h, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i H2O. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc i kombinovani organski slojevi su isprani sa H2O i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirov proizvod je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije braon pena kao željeni proizvod (0.58 g, 32%). MS(ESI) m/z: 644.3 (M+H)<+>.

45D. Metil (2R,7S)-7-((terc-butoksikarbonil)amino)-14-((metoksikarbonil)amino)-9-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,2,3,4,5,6,7,9-oktahidro-11,8-(azeno)-1,9-benzodiazaciklotridecin-2-karboksilat: Rastvor 45C (0.58 g, 0.901 mmol) i Grubbs (II) (0.306 g, 0.360 mmol) u DCE (22.52 mL) je zagrejan na 120 °C u mirkotalasnim uslovima tokom 20 min i zatim ohlađen do sobne temperature. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i zatim isprana sa zasićenim NaHCO3rastvorom i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko MgSO4, filtriran, i koncentrovan. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije žuta čvrsta supstanca kao željeni proizvod (0.128 g, 23%). MS(ESI) m/z: 616.4 (M+H)<+>.

45E. Metil (2R,7S)-7-((terc-butoksikarbonil)amino)-14-((metoksikarbonil)amino)-9-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,2,3,4,5,6,7,9-oktahidro-11,8-(azeno)-1,9-benzodiazaciklotridecin-2-karboksilat: U rastvor 45D (0.128 g, 0.208 mmol) u EtOAc (5 mL) je dodat TFA (0.032 mL, 0.416 mmol) i 10% paladijum na ugljeniku (0.022 g, 0.021 mmol). Vodokin je u mehurićima ubačen kroz reakcionu smešu tokom 5 min, i reakcija je mešana pod H2-balonom. Nakon 17 h, EtOH (1 mL) je dodat u reakcionu smešu, i reakcija je filtrirana kroz 0.45µM GMF ispiranjem sa MeOH (filtriran dva puta) i koncentrovana. Sirov proizvod je zatim prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi i izolovan je željeni proizvod kao čvrsta supstanca (0.113 g, 64%). MS(ESI) m/z: 618.4 (M+H)<+>.

[0472] Primer 45. Metil (9R,14S)-14-[5-amino-1-(3-hlorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-5-[(metoksikarbonil)amino]-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-9-karboksilat, TFA so: U RBF napunjen 45E (0.01 g, 0.016 mmol) praćeno sa dodavanjem HCl (4 N u dioksanu) (2 mL) i reakciona smeša je zagrejana na 50 °C sa malom količinom cisteina preko noći. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do čvrste mase. U odvojenom sudu, u Intermedijer 8 (3.86 mg, 0.016 mmol) u DCM (1 mL) je dodat Vilsmeier reagens (0.1 mL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Gornji osušen deprotektovan makrolid je mešan u DCM (1 mL) i u ovo je kanulom dodat sirov triazol kiseli hlorid praćeno sa dodavanjem piridina (0.4 mL) i mešanje je nastavljeno tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena putem HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (3 mg, 27%).<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.57 - 7.46(m, 4H), 7.45-7.32(m, 2H), 7.13(m, 2H), 5.405.37 (dd, J = 10.9, 7.1 Hz, 1H), 3.66(s, 3H), 3.49(s, 3H), 3.03 - 2.94 (m, 2H), 2.28 (m, J = 6.8 Hz, 1H), 1.75 - 1.66(m, 4H), 1.23-1.14(m, 2H), 0.32 (d, J = 11.9 Hz, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 608.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.96 min.

[0473] Sledeći Primeri u Tabeli 5 su napravljeni korišćenjem iste procedure kao što je prikazano u Primeru 5. Kiseline korišćene u finalnom koraku su kao što je naznačeno u tabeli ispod u odeljku Intermedijer. Razni reagensi za kuplovanje mogu biti korišćeni osim onih koji su opisani u Primeru 45 poput BOP, PyBop, EDC/HOBt, HATU ili T3P.

Primer 51

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so

[0474]

51A. (S)-2-(4-(Metoksikarbonilamino)-2-nitrofenil)-2-oksoetil 2-(tercbutoksikarbonilamino)pent-4-enoat: U bistar, bezbojni rastvor (S)-2-(tercbutoksikarbonilamino)pent-4-enoinska kiselina (2.91 g, 13.50 mmol) u DMF (33.7 mL) je dodat kalijum hidrogen karbonat (1.622 g, 16.20 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana tokom 20 min na sobnoj temperaturi i zatim ohlađena do 0 °C. U gornji ohlađen rastvor je zatim dodat rastvor Intermedijera 16 (4.28 g, 13.50 mmol) u DMF (33.7 mL) u kapima i reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature i nastavljena je da se meša na sobnoj temperaturi. Nakon 18 h, reakcija je ohlađena do 0 °C i sipana u ledeno hladnu H2O. Vodeni sloj je zatim esktrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa H2O, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani da se dobije željeni proizvod kao žuta pena (6.09 g, 100%). MS(ESI) m/z: 450.5 (M-H)-.

51B. Metil (4-(2-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-1H-imidazol-5-il)-3-nitrofenil)karbamat: U 1000-mL RBF koji sadrži 51A (6.09 g, 13.49 mmol) je dodat ksilen (135 mL) i reakciona smeša je sonifikovana da se dobije bistar žuti rastvor. U bistar rastvor je zatim dodat amonijum acetat (10.40 g, 135 mmol) i sud je opremljen sa dean-stark aparatom i refluksnim kondenzatorom. Reakciona smeša je zatim zagrejana na 110 °C tokom 2 h i zatim na 140 °C tokom dodatna 2 h. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i razblažena sa EtOAc. Smeša je zatim isprana sa zasićenim NaHCO3 (2x) rastvorom praćeno sa fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod kao braon pena (0.91 g, 16%). MS(ESI) m/z: 432.5 (M+H)<+>.

51C. Metil (4-(2-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-3-nitrofenil)karbamat: Na plamenu osušen RFB od 25 mL je napunjen sa NaH (0.092 g, 2.295 mmol) i zatim THF (4.17 mL) je dodat da se dobije siva suspenzija. Suspenzija je ohlađena do 0 °C i zatim bistar, žuti rastvor 51B (0.9 g, 2.086 mmol) u THF (4.17 mL) je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min i zatim ostavljena da se ugreje do sobne temperature i mešana tokom 0.5 h. Žuta suspenzija je ohlađena do 0 °C i zatim SEM-C1 (0.370 mL, 2.086 mmol) je dodat u kapima. Dobijena zamućena reakciona smeša je mešana na 0 °C. Nakon 1 h, reakcija je zaustavljena i kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom praćeno razblaživanjem sa EtOAc. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani. Ostatak je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod kao žuta pena (0.424 g, 36%). MS(ESI) m/z: 562.0 (M+H)<+>.1D NOE je potvrdila regioizomerni položaj SEM na imidazolskom prstenu.

51D. (S)-Metil4-(2-(1-Boc-aminobut-3-enil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-3-aminofenilkarbamat: U rastvor 51C (0.424 g, 0.755 mmol) u MeOH (5 mL) je dodat cink (0.494 g, 7.55 mmol) i amonijum hlorid (0.404 g, 7.55 mmol). Kombinovana reakciona smeša je mešana na 60 °C u zatvorenoj epruveti tokom 4 h i zatim ohlađena do sobne temperature. Žuta suspenzija je razblažena sa DCM i isprana sa H2O. Vodeni sloj je ekstrahovan sa 15% IPA/CHCl3 i kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije narandžasta čvrsta supstanca kao željeni proizvod (0.31 g, 77%). MS(ESI) m/z: 532.4 (M+H)<+>.

51E. (S)-Metil4-(2-(1-Boc-aminobut-3-enil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-3-(but-4-enamido)-fenilkarbamat: U rastvor but-3-enoinske kiseline (0.024 g, 0.282 mmol) i 51D (0.15 g, 0.282 mmol) u EtOAc (8.06 mL) je dodat DIEA (0.148 mL, 0.846 mmol). Reakciona smeša je osatavljena da se ohladi do -10 °C pod argonom. Zatim, T3P (0.332 mL, 0.564 mmol) je dodat i reakcija je ostavljena da se meša tokom 5 min. Reakciona smeša je zatim zagrejana do sobne temperature dok je mešana pod argonom tokom 1h. Sirov proizvod je zatim prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije žuta čvrsta supstanca (0.130 g, 77%). MS(ESI) m/z: 600.4 (M+H)<+>.

51F. terc-Butil metil ((7S)-2-okso-9-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,2,3,4,5,6,7,9-oktahidro-11,8-(azeno)-1,9-benzodiazaciklotridecin-7,14-diil)biskarbamat: 51E je podvrgnut protokolu za makrociklizaciju kao što je opisano prethodno da se dobije nezasićeni makrociklizovani proizvod. Prečišćen proizvod je zatim podvrgnut hidrogenizaciji korišćenjem paladijuma na ugljeniku (10%) (83 mg, 0.042 mmol). Sud je pročišćen sa azotom i u sud je dodat EtOH (apsolutni) (10 mL) i EtOAc (10 mL). Sud je ponovo pročišćen sa azotom (3x), ispražnjen i atmosfera vodonika (približno 55 psi) je uvedena i reakcija je mešana na temperaturi okoline. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz uložak od CELITE® uz pomoć dodatnog EtOAc i rastvarač je uparen. Željeni proizvod je dobijen kao bezbojna čvrsta supstanca (113 mg, 93%) koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 574.5 (M+H)<+>.

[0475] Primer 51. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so: U RBF napunjen sa 51F (0.02 g, 0.035 mmol) je dodat 4 N HCl u dioksanu (2 mL) i mešan na 70 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i osušena pod vakuumom. Sirov proizvod je zatim rastvoren u DMF (2 mL) i u gornji rastvor je dodat Intermedijer 1 (8.42 mg, 0.035 mmol) i T3P (0.040 mmol). Reakciona smeša je ponovo mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, reakciona smeša je zatim koncentrovana i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se izoluje željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (1.4 mg, 5%).<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.84 (dd, J = 17.0, 2.2 Hz, 1H), 7.75 (td, J = 7.3, 1.4 Hz, 1H), 7.68 - 7.55 (m, 1H), 7.50 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.44 - 7.23 (m, 5H), 5.27 (dd, J = 10.7, 6.3 Hz, 3H), 4.49 - 4.29 (m, 3H), 3.72 - 3.59 (m, 3H), 2.47 - 2.34 (m, 2H), 2.32 - 2.12 (m, 3H), 2.09 - 1.89 (m, 4H), 1.69 - 1.08 (m, 13H), 1.31 - 1.08 (m, 4H), 0.93 (s, 3H) ppm. MS(ESI) m/z: 567.0 (M+H)<+>. Analitička HPLC: RT = 4.76 min (Metoda B).

Primer 52

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hlorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so

[0476]

[0477] Primer 52. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hlorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 52 je napravljen na isti način kao Primer 51 osim finalnog koraka kuplovanja gde je korišćen Vilsmeier protokol kao što je opisano sa Primerom 45.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.96(s, 1H), 7.91(t, 1H), 7.78(dd, 1H), 7.51-7.45(m, 3H), 7.42-7.403(m, 2H), 7.34(dd, 1H), 5.26(m, 1H), 3.66(s, 3H), 2.40(m, 1H), 2.24(m, 1H), 2.04-1.98(m, 2H), 1.65-1.53(m, 2H), 1.38(m, 1H), 0.98(bm, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 549.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC: RT = 4.90 min (Metoda B).

Primer 53

Metil N-[(10S,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-etil-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2(7),3,5,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so

[0478]

[0479] Primer 53. Metil N-[(10S,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-etil-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2(7),3,5,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 53 je pripremljen na isti način kao Primer 24 supstituisanjem 24A sa 51D i korišćenjem 4 N HCl u dioksanu da se deprotektuje Boci SEM grupa u isto vreme pre finalnog koraka kuplovanja. Primer 53 je izolovan kao jedan od ranije eluirajućih diastereomera tokom redukcije makrociklusa na prep HPLC.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.86 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.93 (dd, J= 8.2, 1.6 Hz, 1H), 7.78-7.90 (m, 1H), 7.68-7.76 (m, 1H), 7.52 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.28-7.48 (m, 3H), 7.09 (s, 1H), 5.40-5.51 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.34-2.47 (m, 1H), 2.08-2.24 (m, 1H), 1.86-2.02 (m, 2H), 1.50-1.79 (m, 2H), 1.33-1.50 (m, 2H), 1.23-1.32 (m, 1H), 0.93 (t, J = 7.5 Hz, 3H) ppm. MS(ESI) m/z: 595.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC: RT = 5.55 min (Metoda A).

Primer 54

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-etil-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2(7),3,5,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so

[0480]

[0481] Primer 54. Metil N-[(10R,14S)-14-[l-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-etil-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2(7),3,5,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 54 je napravljen na isti način kao Primer 53 i izolovan kao kasnije eluirajući diastereomer tokom redukcije makrociklusa na prep HPLC.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.62 (s, 1H), 8.93 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.80-7.94 (m, 1H), 7.76 (ddd, J = 8.3, 6.7, 1.5 Hz, 1H), 7.41-7.64 (m, 5H), 5.31 (dd, J = 10.3, 5.9 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 2.25-2.45 (m, 2H), 1.99-2.16 (m, 1H), 1.71-1.85 (m, 1H), 1.58-1.71 (m, 1H), 1.45-1.58 (m, 1H), 1.18-1.41 (m, 3H), 1.02 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. MS(ESI) m/z: 595.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC: RT = 5.91 min (Metoda A).

Primer 55

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9-okso-10-(propan-2-il)-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so

[0482]

55A. terc-Butil N-[(1S)-1-(4-{4-[(metoksikarbonil)amino]-2-[2-(propan-2-il)but-3-enamido]fenil}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-2-il)but-3-en-1-il]karbamat, TFA so: 55A je pripremljen na isti način kao 21B supstituisanjem but-3-enoinske kiseline sa 2-izopropilbut-3-enoinskom kiselinom i 21A sa 51D. Željeni proizvod je izolovan kao zelenkasto ulje. MS(ESI) m/z: 642.6 (M+H)<+>.

[0483] Primer 55. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9-okso-10-(propan-2-il)-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 55 je pripremljen na isti način kao Primer 24 supstituisanjem 24A sa 55A i korišćenjem 4 N HCl u dioksanu da se deprotektuju Boc i SEM grupa u isto vreme pre finalnog koraka kuplovanja. Primer 55 je izolovan kao smeša diastereomera i tako je finalno jedinjenje smeša diastereomera.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.90 (m, 1H), 7.85 - 7.84 (m, 1H), 7.71-7.69(m, 1H), 7.60(s, 1H), 7.55-7.41(m, 4H), 5.39 (dd, J = 10.8, 6.9 Hz, 1H), 3.76 (s, 2H), 2.42 (m, 1H), 2.24-2.10(m, 2H), 1.81 - 1.47 (m, 4H), 0.98(d, 3H), 0.90(d, 3H) ppm. MS(ESI) m/z: 609.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC: RT = 5.51 min (Metoda B).

Primer 56

[0484]

[0485] Primer 56. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9-okso-10-(propan-2-il)-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 56 je napravljen na isti način kao Primer 55 i izolovan je kao pojedinačni diastereomer tokom protokola Grubbs makrociklizacije. Izolovan je kao drugi pik nakon makrociklizacije i finalno jedinjenje je homohiralno. MS(ESI) m/z: 609.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A) RT = 7.34 min.

Primer 57

Metil N-[(12E,15S)-15-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-18-cijano-9-okso-8,17,19-triazatriciklo[14.2.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,12,16(19)-heksaen-5-il]karbamat, TFA so [0486]

57A. (S)-2-(4-(Metoksikarbonilamino)-2-nitrofenil)-2-oksoetil 2-(tercbutoksikarbonilamino)pent-4-enoat: U bistar, bezbojni rastvor (S)-2-(terc-butoksikarbonil amino)pent-4-enoinska kiselina (2.91 g, 13.50 mmol) u DMF (33.7 mL) je dodat kalijum hidrogen karbonat (1.622 g, 16.20 mmol) i reakciona smeša je mešana tokom 20 min na sobnoj temperaturi i zatim ohlađena do 0 °C. U gornju smešu je zatim dodat rastvor Intermedijera 16 (4.28 g, 13.50 mmol) u DMF (33.7 mL) u kapima i reakcija je ostavljena da se ugreje do sobne temperature i mešanje je nastavljeno. Nakon 18 h, reakcija je zaustavljena, ohlađena do 0 °C i sipana u ledeno hladnu H2O. Vodeni sloj je zatim esktrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa H2O i fiziološkim rastvorom. Organski slojevi su zatim osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovain da se dobije željeni proizvod kao žuta pena (6.09 g, 100%). MS(ESI) m/z: 450.5 (M-H)-.

57B. Metil (4-(2-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-1H-imidazol-5-il)-3-nitrofenil)karbamat: U 1000-mL RBF koji sadrži 57A (6.09 g, 13.49 mmol) je dodat ksilen (135 mL) i sonifikovan je da se dobije bistar žuti rastvor. U gornji bistar rastvor je zatim dodat amonijum acetat (10.40 g, 135 mmol) i sud je opremljen sa dean-stark aparatom i refluksnim kondenzatorom. Reakciona smeša je zatim zagrejana do 110 °C tokom 2 h, zatim 140 °C tokom dodatna 2 h. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i razblažena sa EtOAc. Smeša je zatim isprana sa zasićenim NaHCO3(2x) i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Sirov proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije braon pena kao željeni proizvod (0.91 g, 16%). MS(ESI) m/z: 432.5 (M+H)<+>.

57C. Metil (4-(2-((1S)-1-((terc-butoksikarbonil)amino)but-3-en-1-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-3-nitrofenil)karbamat: Na plamenu osušen RFB od 25 mL je nepunjen sa NaH (0.092 g, 2.295 mmol) i zatim THF (4.17 mL) je dodat da se dobije siva suspenzija. Suspenzija je ohlađena do 0 °C i zatim bistar, žuti rastvor 57B (0.9 g, 2.086 mmol) u THF (4.17 mL) je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min i zatim ostavljena da se ugreje do sobne temperature i mešana tokom 0.5 h. Žuta suspenzija je ohlađena do 0 °C i zatim SEM-C1 (0.370 mL, 2.086 mmol) je dodat u kapima. Dobijena zamućena reakciona smeša je zatim mešana na 0 °C. Nakon 1 h, reakciona smeša je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom praćeno razblaživanjem sa EtOAc. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani. Sirov proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod kao žuta pena (0.424 g, 36%). MS(ESI) m/z: 562.0 (M+H)<+>.1D NOE potvrdila je regioizomerni položaj SEM na imidazolskom prstenu.

57D. (S)-Metil 4-(2-(1-Boc-aminobut-3-enil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-3-aminofenilkarbamat: U rastvor 57C (0.424 g, 0.755 mmol) u MeOH (5 mL) je dodat cink (0.494 g, 7.55 mmol) i amonijum hlorid (0.404 g, 7.55 mmol). Smeša je mešana na 60 °C u zatvorenoj epruveti tokom 4 h i zatim ohlađena do sobne temperature. Žuta suspenzija je razblažena sa DCM i zatim isprana sa H2O. Vodeni sloj je ekstrahovan sa 15% IPA/CHCl3. Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirov proizvod je prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije narandžasta čvrsta supstanca kao željeni proizvod (0.31 g, 77%). MS(ESI) m/z: 532.4 (M+H)<+>.

57E. (S)-Metil4-(2-(1-Boc-aminobut-3-enil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)-3-(pent-4-enamido)-fenilkarbamat: U rastvor pent-4-enoinske kiseline (0.028 g, 0.282 mmol) i 57D (0.15 g, 0.282 mmol) u EtOAc (8.06 mL) je dodat DIEA (0.148 mL, 0.846 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do -10 °C pod argonom. U gornju smešu je zatim dodat ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline u EtOAc (0.332 mL, 0.564 mmol) i reakcija je ostavljena da se meša tokom 5 min. Reakciona smeša je zatim zagrejana do sobne temperature dok je mešana pod argonom tokom dodatnog 1 h i zatim je koncentrovana. Sirov proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije žuta čvrsta supstanca (0.092 g, 53%). MS(ESI) m/z: 614.1 (M+H)<+>.

57F. terc-Butil metil ((5E,8S)-2-okso-10-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,3,4,7,8,10-heksahidro-2H-12,9-(azeno)-1,10-benzodiazaciklotetradecin-8,15-diil)biskarbamat: U sud sa okruglim dnom opremljen sa argonskim aparatom koji proizvodi mehuriće je napunjen sa fino praškastim 57E (1.0165 g, 1.656 mmol) i p-TsOH monohidratom (0.299 g, 1.739 mmol). Sud je zatim pročišćen sa argonom i DCM (anhidrovan - degasiran) (78 mL) je dodat nakon zagrevanja bezbojne smeše na 40 °C. Smeša je brzo mešana na ovoj temperaturi dok reaktanti nisu ušli u ratsvor (~5 min) nakon čega je rastvor tricikloheksilfosfin[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-4,5-dihidroimidazol-2-iliden][benzilidin]rutenijum(IV)dihlorida (0.070 g, 0.083 mmol) u DCM (anhidrovan - degasiran) (5.0 mL) dodat pri brzini od ~1 kapi po sekundi. Mešanje je nastavljeno na 40 °C tokom 90 minuta u koje vreme je alikvot uklonjen. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i isprana sa zasićenim NaHCO3 rastvorom i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan da se dobije tamna čvrsta supstanca. Ostatak je prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije željeni proizvod, kao smeša cis- i trans-olefin izomera. Sirov proizvod je prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobiju dve frakcije, frakcija 1 (trans-olefin izomer) i frakcija 2 (cis-olefin izomer). Odgovarajuće trans frakcije su uparene da se dobije željeni proizvod kao bezbojna čvrsta supstanca (404 mg, 42%). MS(ESI) m/z: 586.5 (M+H)<+>.

57G. (5E,8S)-11-Bromo-10,15-dimetil-8-(metilamino)-1,3,4,7,8,10-heksahidro-2H-12,9-(azeno)-1,10-benzodiazaciklotetradecin-2-on: U rastvor 57F (0.225 g, 0.384 mmol) u CHCl3(5 mL) i ACN (5 mL) je dodat NBS (0.082 g, 0.461 mmol) u porciji i dobijeni rastvor je mešan tokom 0.5 h na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana i prečišćena korišćenjem silika gel hromatografije da se izoluje željeni proizvod (0.178 g, 70%). MS(ESI) m/z: 666.3 (M+H)<+>.

57H. terc-Butil metil ((5E,8S)-11-cijano-2-okso-10-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,3,4,7,8,10-heksahidro-2H-12,9-(azeno)-1,10-benzodiazaciklotetradecin-8,15-diil)biskarbamat: Rastvor 57G (0.18 g, 0.271 mmol), cink cijanid (0.019 g, 0.162 mmol), DPPF (0.018 g, 0.032 mmol) i Pd2(dba)3- CHCl3(0.012 g, 0.014 mmol) u DMF (2 mL) je degasiran tokom 0.5 h pod mehurićima argona. Rastvor je zatim mešan na 130 °C tokom 0.5 h u mikrotalasnim uslovima. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc i isprana sa NaHCO3 rastvorom praćeno sa fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko MgSO4i koncentrovan da se dobije sirov proizvod koji je prečišćen korišćenjem HPLC na reverznoj fazi da se izoluje željeni proizvod (0.145 g, 88%). MS(ESI) m/z: 611.3 (M+H)<+>.

57I. Metil ((SE,BS)-8-amino-11-cijano-2-okso-1,3,4,7,8,10-heksahidro-2H-12,9-(azeno)-1,10-benzodiazaciklotetradecin-15-il)karbamat: U rastvor 57H (145 mg, 0.237 mmol) u DCM (3 mL) je dodat TFA (0.500 mL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, reakciona smeša je koncentrovana do suva. U čvrstu supstancu je dodat EtOAc i dovoljno zasićenog NaHCO3(da se načini baznim). Vodeni sloj je zatim esktrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani, i koncentrovani da se dobije 42I (90 mg, 100%) kao crvenkasta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 381.1 (M+H)<+>.

[0487] Primer 57. Metil N-[(12E,15S)-15-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-pirazol-4-amido]-18-cijano-9-okso-8,17,19-triazatriciklo[14.2.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,12,16(19)-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: 57I (0.017 g, 0.045 mmol) je kuplovan sa Intermedijerom 2 (10.75 mg, 0.045 mmol) pod T3P (0.034 g, 0.045 mmol)/DIEA (7.81 µL, 0.045 mmol) i DMF uslovima kao što je prethodno opisano. Nakon 2 h reakcija je koncentrovana i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (6 mg, 22%). MS(ESI) m/z: 603.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC: RT = 6.16 min (Metoda B).

Primer 58

Metil ((12E,15S)-15-(((2-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-1H-imidazol-4-il)karbonil)amino)-9-okso-8,17,19-triazatriciklo[14.2.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,12,16(19)-heksaen-5-il)karbamat, 2 TFA so

[0488]

[0489] Primer 58. Metil ((12E,15S)-15-(((2-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-1H-imidazol-4-il)karbonil)amino)-9-okso-8,17,19-triazatriciklo[14.2.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,12,16(19)-heksaen-5-il)karbamat, 2 TFA so: Primer 58 je napravljen na isti način kao Primer 57 zamenjivanjem Intermedijera 2 sa Intermedijerom 22.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.95 (s, 1H), 7.73 (td, J = 8.7, 5.5 Hz, 1H), 7.46 (s, 3H), 7.34 - 7.21 (m, 1H), 5.73 - 5.58 (m, 1H), 5.51 (br. s., 1H), 5.31 (dd, J = 10.3, 4.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.31 - 3.24 (m, 1H), 2.94 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.76 - 2.64 (m, 1H), 2. 61 - 2.38 (m, 3H) ppm. MS(ESI) m/z: 596.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC: RT = 4.24 min.

Primer 59

Metil ((10R,14S)-14-(((1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)karbonil)amino)-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il)karbamat, TFA so

[0490]

[0491] Primer 59. Metil ((10R,14S)-14-(((1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)karbonil)amino)-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il)karbamat, TFA so: Primer 59 je napravljen na isti način kao Primer 31 zamenjivanjem Intermedijera 2 sa Intermedijerom 1.<1>H NMR (500 MHz, acetonitril-d3) δ 8.63 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.87 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.70 (ddd, J= 8.2, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.60 (ddd, J= 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.42 - 7.38 (m, 2H), 7.34 - 7.27 (m, 2H), 5.11 - 5.02 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.55 (td, J = 6.4, 2.6 Hz, 2H), 1.99 (td, J = 4.7, 2.3 Hz, 1H), 1.72 - 1.69 (m, 1H), 1.47 - 1.39 (m, 2H), 1.36 -1.30 (m, 2H), 0.83 (d, J = 6.9 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 592.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda E) RT = 5.97 min.

Primer 60

Metil ((10S,14S)-14-(((1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)karbonil)amino)-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il)karbamat, TFA so

[0492]

[0493] Primer 60. Metil ((10S,14S)-14-(((1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)karbonil)amino)-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il)karbamat, TFA so: Primer 60 je pripremljen na isti način kao Primer 59 koristeći drugi izomer.<1>H NMR (500 MHz, CD3CN) δ 8.46-8.52 (m, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.80 (br. s., 2H), 7.69 (d, J = 8.25 Hz, 2H), 7.60 (ddd, J = 1.51, 6.81, 8.18 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.26-7.38 (m, 4H), 7.14 (dd, J = 1.65, 5.23 Hz, 1H), 4.92-5.00 (m, 1H), 3.97 (q, J = 7.15 Hz, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.11-2.18 (m, 1H), 1.91-1.96 (m, 1H), 1.62-1.76 (m, 2H), 1.07-1.13 (m, 3H), 0.91-0.97 (m, 1H), 0.76-0.81 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 592.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda E) RT = 6.00 min.

Primer 61

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0494]

[0495] Primer 61. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: U bočicu koja sadrži Intermedijer 25 (0.085 g, 0.335 mmol), 2M (0.2 g, 0.335 mmol), EDC (0.096 g, 0.503 mmol), HOBT (0.077 g, 0.503 mmol), i DMF (4 mL) je dodata Hunig-ova baza (0.293 mL, 1.677 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (0.073 g, 30%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.69 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.11 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 5.9, 1.8 Hz, 1H), 7.71 (ddd, J = 8.1, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 7.46 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.7 Hz, 1H), 7.40 - 7.36 (m, 1H), 5.24 (dd, J = 11.4, 5.9 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 2.80 - 2.73 (m, 1H), 2.35 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 2.02 - 1.90 (m, 2H), 1.65 - 1.46 (m, 2H), 0.97 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.55 - 0.44 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 605.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.96 min (Metoda A).

Primer 62

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-imidazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, 2 TFA so

[0496]

[0497] Primer 62. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-imidazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5il]karbamat, 2 TFA so: Bistar, bezbojno rastvor Intermedijera 24 (0.012 g, 0.045 mmol), 2M (Alternativa, 2 HCl) (0.020 g, 0.045 mmol), EDC (0.013 g, 0.068 mmol), HOBT (10.41 mg, 0.068 mmol), i Hunig-ove baze (0.040 ml, 0.227 mmol) u DMF (0.453 mL) je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je razblažena sa MeOH i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (0.0172 g, 44%) kao prljavo bela granularna čvrsta supstanca.

<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.71 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 5.9, 1.8 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.72 (ddd, J = 8.2, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 8.4,2.1 Hz, 1H), 7.47 - 7.43 (m, 1H), 7.41 - 7.37 (m, 1H), 5.29 (dd, J = 11.3, 6.1 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 2.81 - 2.73 (m, 1H), 2.32 (d, J = 0.6 Hz, 3H), 2.25 - 2.17 (m, 1H), 2.01 - 1.90 (m, 2H), 1.66 - 1.48 (m, 2H), 0.96 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.53 - 0.42 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 605.4 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.20 min (Metoda D).

Primer 63

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0498]

[0499] Primer 63. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: U bočicu koja sadrži Intermedijer 21 (10.7 mg, 0.042 mmol), 2M (0.025 g, 0.042 mmol), EDC (0.012 g, 0.063 mmol), i HOBT (9.6 mg, 0.063 mmol) u DMF (0.5 mL) je dodata Hunig-ova baza (0.037 mL, 0.210 mmol). Reakcija je zagrejana na 55 °C tokom 2 h i zatim ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je razblažena sa MeOH i filtrirana. Filtrat je koncentrovan i prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (0.014 g, 46%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.70 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.92 (ddd, J = 8.3, 6.9, 1.7 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.70 (td, J = 7.4, 1.7 Hz, 1H), 7.58 - 7.45 (m, 4H), 7.39 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.25 (dd, J = 10.7, 5.8 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.71 - 2.63 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.05 - 1.96 (m, 1H), 1.90 - 1.77 (m, 2H), 1.46 - 1.24 (m, 2H), 0.83 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.31 - 0.19 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 606.3 (M+H). Analitička HPLC RT = 6.46 min (Metoda A).

[0500] Sledeći Primeri u Tabeli 6 su napravljeni korišćenjem iste procedure kao što je prikazano u Primeru 63. Kiseline korišćene u finalnom koraku su kao što je naznačeno u tabeli ispod u odeljku Intermedijer. Razni reagensi za kuplovanje mogu niti korišćeni osim onih koji su opisani u Primeru 63 kao što je BOP, PyBop, EDC/HOBt ili HATU.

Primer 77 Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(2-fluoro-3-metoksifenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so

[0501]

[0502] Primer 77. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(2-fluoro-3-metoksifenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 77 je napravljen na isti način kao Primer 63 korišćenjem Intermedijera 30.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.85 (s, 1H), 7.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.52 (m, 2H), 7.47-7.36(m, 4H), 5.55 - 5.39 (m, 1H), 4.06 - 3.92 (m, 3H), 3.99 (s, 3H), 3.79(s, 3H), 2.79-2.77 (bm, J = 10.6 Hz, 2H), 2.69-2.64(bm, 1H), 2.32(m, 1H), 1.75(m, 1H), 1.66(bm, 2H), 1.08(d, 3H), 0.99 (bm, 1H). MS(ESI) m/z: 577.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.74 min (Metoda A).

[0503] Sledeći Primeri u Tabeli 7 su napravljeni korišćenjem iste procedure kao što je prikazano u Primeru 31. Kiseline korišćene u finalnom koraku su kao što je naznačeno u tabeli ispod u odeljku Intermedijer. Razni reagensi za kuplovanje mogu niti korišćeni osim onih koji su opisani u Primeru 2 poput BOP, PyBop, EDC/HOBt ili HATU. U koraku 2F metil hloroformat može btii zamenjen sa 3-metoksipropanoil hloridom.

Tabela 7

Primer 86

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-16-fluoro-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0504]

[0505] Primer 86. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-16-fluoro-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 86 je pripremljen na isti način kao Primer 2 zamenjivanjem 4-bromopikolinaldehida sa 2-bromo-5-fluoroizonikotinaldehidom i supstituisanjem Intermedijera 11 sa Intermedijerom 21.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.65 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 7.82 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1.5 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.61 - 7.52 (m, 2H), 7.50 -7.43 (m, 2H), 5.35 (dd, J = 11.3, 5.8 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.32 (m, 3H), 2.71 (td, J = 6.7, 2.5 Hz, 1H), 2.45 (d, J = 0.6 Hz, 3H), 2.24 - 2.16 (m, 1H), 2.14 - 2.05 (m, 1H), 1.97 - 1.86 (m, 1H), 1.74 -1.62 (m, 1H), 1.55 - 1.43 (m, 1H), 1.01 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.97 - 0.86 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 623.9 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 8.73 min (Metoda A).

Primer 87

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-6-fluoro-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0506]

87A. Metil N-{3-amino-4-[2-(1-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}but-3-en-1-il)piridin-4-il]-2-fluorofenil}karbamat: U rastvor 2H (50 mg, 0.121 mmol) u DMF (0.5 mL) je dodat Na2CO3 (22 mg, 0.208 mmol), praćeno sa Accufluor (50% u aluminijum oksidu (alumina)) (143 mg, 0.222 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 min i koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se izoluje željeni proizvod (10 mg, 19%). MS(ESI) m/z: 431.1 (M+H)<+>.

87B. Metil N-[(10R,11E,14S)-14-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-6-fluoro-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1 (19),2(7),3,5,11,15,17-heptaen-5-il]karbamat (smeša diastereomera): 87B je napravljen na isti način kao 2J zamenjivanjem 2H sa 87A. MS(ESI) m/z: 485.1 (M+H)<+>.

87C. Metil N-[(10R,14S)-14-amino-6-fluoro-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, HCl so: U rastvor 87B (3.5 mg, 7.22 µmol) u etil acetatu (5 mL) je dodat platinum(IV) oksid (1.8 mg, 7.93 µmol). Reakcija je degasirana, pročišćena sa argonom (3x), i napunjena sa H2balonom preko noći. Smeša je filtrirana i isprana sa MeOH. Filtrat je koncentrovan. Ostatak je tretiran 1 mL HCl (4 N u dioksanu) tokom 1h i zatim koncentrovana da se dobije željeni proizvod (3.5 mg, 100%) kao braon čvrsta supstanca (smeša diastereomera). MS(ESI) m/z: 387.2 (M+H)<+>.

[0507] Primer 87. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-6-fluoro-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so (smeša diastereomera): Primer 87 je napravljen na isti način kao Primer 2 zamenjivanjem 2M sa 87C.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.75 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.28 - 8.00 (m, 2H), 7.93 - 7.74 (m, 2H), 7.67 - 7.41 (m, 3H), 5.35 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.83 (br. s., 1H), 2.44 (d, J= 1.0 Hz, 3H), 2.23 (br. s., 1H), 2.09 - 1.85 (m, 1H), 1.81 - 1.42 (m, 3H), 1.26 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 0.99 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.62 - 0.42 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 624.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.79 min (Metoda A).

Primer 89

N-[(10R,14S)-5-Amino-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, 2 TFA so

[0508]

89A. terc-Butil N-[(10R,14S)-5-amino-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]karbamat: U suspenziju 2L (0.9 g, 1.921 mmol) u MeOH (29.6 ml) je dodat 1 N NaOH (11.53 ml, 11.53 mmol). Reakcija je mešana u zatvorenoj epruveti na 75 °C preko noći. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Ostatak je podeljen između 15% IPA/CHCl3i vode. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan da se dobije željeni proizvod (0.79 g, 100%) kao braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 411.1 (M+H)<+>.

89B. (10R,14S)-5,14-Diamino-10-metil-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-9-on: 89A (0.75 g, 1.827 mmol) je tretiran sa HCl (4 M u 1,4-dioksanu) (10 mL, 40.0 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h. Žuta suspenzija je filtrirana, isprana sa heksanom i osušena da se dobije željeni proizvod (0.87 g, 100%). MS(ESI) m/z: 311.1 (M+H)<+>.

Primer 89. N-[(10R,14S)-5-Amino-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, 2 TFA so: žuti rastvor Intermedijera 21 (0.229 g, 0.896 mmol), 89B (0.45 g, 0.943 mmol), EDC (0.362 g, 1.887 mmol), HOBT (0.289 g, 1.887 mmol), i Hunig-ove baze (0.824 mL, 4.72 mmol) u DMF (6.29 mL) je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je kvenčovana sa vodom. Dobijena žuta suspenzija je filtrirana, osušena i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se izoluje željeni proizvod (0.454 g, 62%) kao žuta pena.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.62 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 6.2, 1.8 Hz, 1H), 7.82 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.56 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.7 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.48 - 7.44 (m, 1H), 6.80 (dd, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.35 (dd, J = 11.3, 6.1 Hz, 1H), 2.83 - 2.75 (m, 1H), 2.43 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.29 - 2.19 (m, 1H), 2.09 -1.96 (m, 2H), 1.73 - 1.52 (m, 2H), 0.98 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.60 - 0.49 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 548.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 3.99 min (Metoda A).

[0509] Primer 89 (Alternativa, 2 HCl so): Primer 89 (0.067 g, 0.086 mmol) je rastvoren u 1.25 M HCl u MeOH (1 mL, 1.250 mmol) i zatim koncentrovan. Proces je ponovljen još jedanput da se dobije željeni proizvod (55 mg, 100%) kao žuta čvrsta supstanca.

Primer 90

N-[(10R,14S)-5-Amino-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksamid, 2 TFA so

[0510]

[0511] Primer 90. N-[(10R,14S)-5-Aamino-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksamid, 2 TFA so: Primer 90 je napravljen na isti način kao Primer 89 zamenjivanjem Intermedijera 21 sa Intermedijerom 25.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.58 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.19 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 6.2, 1.8 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.46 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.7 Hz, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 1H), 6.77 (dd, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.22 (dd, J = 11.4, 5.9 Hz, 1H), 2.81 - 2.74 (m, 1H), 2.35 (d, J= 1.1 Hz, 3H), 2.25 - 2.16 (m, 1H), 2.04 - 1.95 (m, 2H), 1.71 - 1.61 (m, 1H), 1.61 - 1.50 (m, 1H), 0.98 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.61 - 0.51 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 547.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 4.57 min (Metoda D).

Primer 91

N-[(10S,14S)-5-Amino-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksamid, 2 TFA

[0512]

[0513] Primer 91. N-[(10S,14S)-5-Amino-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksamid, 2 TFA: Primer 91 je napravljen na isti način kao Primer 90 korišćenjem drugog izomera.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.58 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.83 (dd, J = 6.2, 1.8 Hz, 1H), 7.71 (ddd, J = 8.2, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.45 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.7 Hz, 1H), 7.40 - 7.35 (m, 1H), 6.79 (dd, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.13 (dd, J = 11.3, 5.2 Hz, 1H), 2.46 - 2.38 (m, 1H), 2.36 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 2.07 - 1.98 (m, 1H), 1.80 - 1.70 (m, 1H), 1.66 - 1.56 (m, 1H), 1.31 - 1.22 (m, 4H), 1.06 - 0.95 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 547.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 4.45 min (Metoda D).

Primer 92

N-[(10R,14S)-5-Amino-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksamid, TFA so

[0514]

[0515] Primer 92. N-[(10R,14S)-5-Amino-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-karboksamid, TFA so: Primer 92 je napravljen na isti način kao Primer 89 zamenjivanjem 4-hloropikolinaldehid sa 2-bromoizonikotinaldehidom u koraku 2A i zamenjivanjem Intermedijera 21 sa Intermedijerom 25.<1>H NMR (500 MHz, acetonitril-d3) δ 8.68 (d, J = 6.33 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.12 (d, J = 1.65 Hz, 1H), 7.65-7.73 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.45 (ddd, J = 1.79, 6.60, 8.12 Hz, 1H), 7.34-7.40 (m, 1H), 7.31 (d, J = 5.78 Hz, 1H), 6.72 (dd, J = 2.20, 8.53 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 2.20 Hz, 1H), 5.16 (td, J = 5.95, 11.49 Hz, 1H), 2.61-2.72 (m, 1H), 2.35 (d, J = 1.10 Hz, 3H), 2.07-2.15 (m, 1H), 1.93-1.98 (m, 2H), 1.88-1.93 (m, 1H), 1.42-1.62 (m, 2H), 0.93 (d, J = 6.88 Hz, 3H), 0.55-0.65 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 547.5 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.43 min (Metoda A).

Primer 93

N-[(10R,14S)-5-Amino-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo [13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-imidazol-4-karboksamid, TFA so

[0517] Primer 93. N-[(10R,14S)-5-Amino-10-metil-9-okso-8,18-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-imidazol-4-karboksamid, TFA so: Primer 93 je napravljen na isti način kao Primer 92 zamenjivanjem Intermedijera 25 sa Intermedijerom 24.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.61 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 6.3, 1.9 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.73 (ddd, J = 8.3, 6.7, 1.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.47 - 7.43 (m, 1H), 7.42 - 7.37 (m, 1H), 6.78 (dd, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.28 (dd, J = 11.3, 6.1 Hz, 1H), 2.82 - 2.75 (m, 1H), 2.32 (br. s, 3H), 2.27 - 2.17 (m, 1H), 2.04 - 1.95 (m, 2H), 1.73 - 1.63 (m, 1H), 1.63 - 1.52 (m, 1H), 0.98 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.58 - 0.48 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 547.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 4.66 min (Metoda D).

Primer 94

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-N-[(10R,14S)-10-metil-5-[(metilkarbamoil)amino]-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, TFA so

[0518]

[0519] Primer 94. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-N-[(10R,14S)-10-metil-5-[(metilkarbamoil)amino]-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, TFA so: U rastvor Primera 89 (0.02 g, 0.026 mmol) u DCM (1 mL) i acetonitrilu (1 mL) je dodat natrijum bikarbonat (6.49 mg, 0.077 mmol).

Smeša je ohlađena do 0 °C pod argonom, i zatim dodat fosgen rastvor (20% u toluenu) (0.041 mL, 0.077 mmol). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min i koncentrovana. Ostatak je rastvoren u acetonitrilu (1 mL) i DCM (1 mL) pod argonom i ohlađen do 0 °C. Metanamin, HCl so (5.22 mg, 0.077 mmol) i TEA (7.18 µL, 0.052 mmol) su dodati. Dobijena zamućena smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min, i zatim na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (8 mg, 43%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.73 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 6.2, 1.8 Hz, 1H), 7.82 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.58 - 7.53 (m, 2H), 7.49 - 7.41 (m, 2H), 5.37 (dd, J = 11.3, 6.1 Hz, 1H), 2.83 - 2.75 (m, 4H), 2.43 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.30 - 2.21 (m, 1H), 2.08 - 1.92 (m, 2H), 1.70 - 1.50 (m, 2H), 0.97 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 0.57 - 0.45 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 605.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.50 min (Metoda A).

Primer 95

Propan-2-il N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0520]

[0521] Primer 95. Propan-2-i1N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: U rastvor Primera 89 (0.025 g, 0.032 mmol), piridina (0.013 mL, 0.161 mmol) u DCM (1 mL) na 0 °C je dodat izopropil hloroformat (karbonohloridat) (1 M u toluenu) (0.097 mL, 0.097 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h i kvenčovana sa MeOH. Smeša je koncentrovana i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (0.015 g, 61%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.75 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 6.1, 1.9 Hz, 1H), 7.81 (ddd, J = 8.2, 6.8, 1.5 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.59 - 7.50 (m, 3H), 7.48 - 7.43 (m, 1H), 5.37 (dd, J = 11.3, 6.1 Hz, 1H), 4.99 (spt, J = 6.2 Hz, 1H), 2.82 - 2.75 (m, 1H), 2.42 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.31 - 2.21 (m, 1H), 2.10 - 1.92 (m, 2H), 1.70 - 1.51 (m, 2H), 1.32 (d, J = 6.3 Hz, 6H), 0.97 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.57 - 0.45 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 634.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 6.86 min (Metoda A).

[0522] Sledeći Primeri u Tabeli 8 su napravljeni na isti način kao što je prikazano u Primeru 95. Hloroformati mogu biti ili iz komercijalnog izvora ili generisani pomoću odgovarajućeg alkohola sa raznim reagensima kao što su fosgen, trifosgen. Hloroformati mogu takođe btii zamenjeni sa aktiviranim alkoholima tretiranjem alkohola sa 4-nitrofenil hloroformatom.

Primer 135

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-N-[(10R,14S)-5-[(dimetilkarbamoil)amino]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, TFA so

[0523]

[0524] Primer 135. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-N-[(10R,14S)-5-[(dimetilkarbamoil)amino]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, TFA so: Primer 135 je napravljen na isti način kao za Primer 94 zamenjivanjem metanamina, HCl soli sa dimetilaminom, HCl solju.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.74 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 6.2, 1.8 Hz, 1H), 7.82 (ddd, J = 8.1, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.58 - 7.51 (m, 3H), 7.48 - 7.44 (m, 1H), 5.37 (dd, J = 11.4, 6.2 Hz, 1H), 3.06 (s, 6H), 2.83 - 2.75 (m, 1H), 2.43 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 2.26 (m, 1H), 2.10 - 1.92 (m, 2H), 1.70 - 1.51 (m, 2H), 0.97 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.58 - 0.46 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 619.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.64 min (Metoda A).

Primer 136

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-N-[(10R,14S)-5-metansulfonamido-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, TFA so

[0525]

[0526] Primer 136. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-N-[(10R,14S)-5-metansulfonamido-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, TFA so: U rastvor Primera 89 (Alternativa, HCl so) (0.012 g, 0.019 mmol) u piridinu (0.5 mL, 6.18 mmol) i DCM (1 mL) na 0 °C je dodat metansulfonil hlorid (2.3 µL, 0.029 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 1h i koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (10 mg, 69% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.74 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.84 - 7.76 (m, 2H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.56 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.7 Hz, 1H), 7.48 - 7.43 (m, 1H), 7.32 (dd, J = 8.4, 2.3 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.34 (dd, J = 11.1, 5.9 Hz, 1H), 3.08 (s, 3H), 2.79 - 2.72 (m, 1H), 2.44 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.27 - 2.17 (m, 1H), 2.02 - 1.89 (m, 2H), 1.64 -1.47 (m, 2H), 0.96 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.54 - 0.43 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 626.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 6.02 min (Metoda A).

Primer 138

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-N-[(10R,14S)-5-acetamido-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, TFA so

[0527]

[0528] Primer 138. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-N-[(10R,14S)-5-acetamido-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, TFA so: Primer 138 je napravljen na isti način kao Primer 136 zamenjivanjem metansulfonil hlorida sa acetil hloridom.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.75 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 6.1, 1.7 Hz, 1H), 7.82 (ddd, J = 8.3, 6.8,1.7 Hz, 1H), 7.76 (d, J =1.9 Hz, 1H), 7.69 - 7.65 (m, 1H), 7.60 (dd, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 7.56 (ddd, J = 8.1, 6.5, 1.7 Hz, 1H), 7.46 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 5.36 (dd, J = 11.3, 6.1 Hz, 1H), 2.81 - 2.74 (m, 1H), 2.43 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 2.31 - 2.20 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 2.07 - 1.90 (m, 2H), 1.67 - 1.50 (m, 2H), 0.97 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.56 - 0.45 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 590.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.63 min (Metoda A).

Primer 157

Metil (10R, 14S)-5-amino-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilat, 2 TFA so

[0529]

157A. terc-Butil N-[(10R,14S)-5-amino-4-jodo-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]karbamat: U rastvor Primer 89A (0.05 g, 0.122 mmol) u MeOH (2.5 mL) na 0 °C je dodat jod monohlorid (0.030 g, 0.183 mmol) u DCM (1.0 mL). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h i koncentrovana. Ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc, ispran sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (0.061 g, 93%) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 537.2 (M+H)<+>.

157B. Metil (10R,14S)-5-amino-14-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilat: Smeša Pd(OAc)2 (0.8 mg, 3.73 µmol), DPPF (2 mg, 3.73 µmol), K2CO3 (0.015 g, 0.112 mmol), TEA (5.2 µL, 0.037 mmol), i 157A (0.02 g, 0.037 mmol) u acetonitrilu (2 mL) i MeOH (1 mL) je vakuumirana i povratno napunjena sa argonom tri puta. CO je u mehurićima ubačen kroz iglu u rastvor tokom 3 min, i smeša je zagrejana pod CO balonom na 70 °C tokom 3 h. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa EtOAc, isprana sa vodom, fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije željeni proizvod (0.012 g, 69%) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 469.3 (M+H)<+>.

[0530] Primer 157. Metil (10R,14S)-5-amino-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilat, 2 TFA so: Primer 157 je napravljen na isti način kao Primer 89 zamenjivanjem Primera 89A sa 157B.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.68 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 6.2, 1.8 Hz, 1H), 7.81 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.56 (ddd, J = 8.1, 6.5, 1.4 Hz, 1H), 7.46 (td, J = 8.1, 1.4 Hz, 1H), 6.67 (s, 1H), 5.37 (dd, J = 11.6, 6.1 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.84 - 2.75 (m, 1H), 2.43 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.30 - 2.20 (m, 1H), 2.10 - 1.94 (m, 2H), 1.74 - 1.53 (m, 2H), 0.96 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.55 - 0.43 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 606.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 6.19 min (Metoda A).

Primer 158

(10R,14S)-5-Amino-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilna kiselina, 2 TFA so

[0531]

[0532] Primer 158. (10R,14S)-5-Amino-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilna kiselina, 2 TFA so: U rastvor Primera 157 (0.009 g, 10.79 µmol) u MeOH (1 mL) je dodat 1 N NaOH (0.108 mL, 0.108 mmol). Reakcija je mešana na 50 °C tokom 24 h. Reakcija je kvenčovana sa TFA i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se izoluje željeni proizvod (6 mg, 65% prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.65 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.85 - 7.79 (m, 2H), 7.59 - 7.53 (m, 1H), 7.49 - 7.43 (m, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.35 (dd, J = 11.3, 6.1 Hz, 1H), 2.82 - 2.74 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.27 - 2.17 (m, 1H), 2.05 - 1.94 (m, 2H), 1.71 - 1.49 (m, 2H), 0.96 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.55 - 0.44 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 592.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.59 min (Metoda A).

Primer 163

N-[(10R,14S)-5-Bromo-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<217>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2 fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4 karboksamid, TFA so

[0533]

[0534] Primer 163. N-[(10R,14S)-5-Bromo-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1-(3-hloro-2 fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4 karboksamid, TFA so: U smešu bakar (II) bromida (58.3 mg, 0.261 mmol) i terc-butil nitrita (0.034 mL, 0.290 mmol) u acetonitrilu (1 mL) na 0 °C je dodat u rastvor Primer 89 (alternativni, izvorni) (159 mg, 0.290 mmol) u acetonitrilu (1 mL). Reakcija je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature i mešana je preko noći. Reakcija je kvenčovana sa 1 N HCL (2.0 mL) i esktrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko MgSO4, filtriran, i koncentrovan. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (90 mg, 41%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.78 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.85 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.73 -7.66 (m, 2H), 7.64 - 7.57 (m, 2H), 7.54 - 7.44 (m, 2H), 5.35 (dd, J = 11.0, 5.8 Hz, 1H), 3.31 (m, 2 H), 2.80 - 2.69 (m, 1H), 2.49 (d, J= 1.1 Hz, 3H), 2.22 (br. s., 1H), 2.04 - 1.84 (m, 2H), 1.65 - 1.45 (m, 2H), 0.99 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.51 (d, J= 12.1 Hz, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 612.8 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 7.73 min (Metoda A).

Primer 164 (Referenca)

1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-N-[(10R,14S)-10-metil-9-okso-5-(1H-pirazol-5-il)-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, TFA so

[0535]

[0536] Primer 164. 1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-N-[(10R,14S)-10-metil-9-okso-5-(1H-pirazol-5-il)-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-14-il]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksamid, TFA so: Smeša Primera 163 (10 mg, 0.016 mmol), (1H-pirazol-5-il)boronske kiseline (3.66 mg, 0.033 mmol) i Cs2CO3(16 mg, 0.049 mmol) u 1,2-dimetoksietanu (1 mL) i vodi (0.2 mL) je degasirana tokom 15 min. U ovu smešu je zatim dodat paladijum tetrakis (2 mg, 1.63 µmol). Reakcija je zagrejana na 120 °C u mikrotalasnim uslovima tokom 20 min. Smeša je koncentrovana i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (2.3 mg, 19%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.76 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.91 (dd, J= 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.85 - 7.78 (m, 3H), 7.76 - 7.69 (m, 3H), 7.61 - 7.53 (m, 1H), 7.46 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.36 (dd, J = 11.0, 6.1 Hz, 1H), 3.21 (m, 2H), 2.83 - 2.70 (m, 1H), 2.48 - 2.44 (m, 3H), 2.29 - 2.14 (m, 1H), 2.05 - 1.89 (m, 2H), 1.66 - 1.43 (m, 2H), 1.03 - 0.96 (m, 3H), 0.53 (d, J = 12.1 Hz, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 598.9 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 1.37 min (Metoda C).

[0537] Primer 171 je bio uobičajeni sporedni proizvod reakcije kuplovanja prikazan u Primeru 164.

Tabela 10

Primer 180

Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-18-fluoro-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0538]

[0539] Primer 180. Metil N-[(14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-18-fluoro-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 180 je napravljen na isti način kao Primer 2 korišćenjem 4-bromo-5-fluoropicolinaldehida kao početnog materijala i zamenjivanjem Intermedijera 11 sa Intermedijerom 21. Intermedijeri su sprovedeni kao diastereomeri da se dobije Primer 180 kao smeša diastereomera.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.90 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.88 - 7.76 (m, 1H), 7.71 - 7.60 (m, 2H), 7.59 - 7.52 (m, 1H), 7.52 - 7.40 (m, 2H), 5.32 (dd, J = 11.3, 6.0 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.66 (s, 2H), 2.70 (br. s., 1H), 2.44 (s, 3H), 2.26 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 2.05 - 1.88 (m, 1H), 1.87 - 1.70 (m, 1H), 1.50 (br. s., 2H), 0.96 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.66 (br. s., 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 624.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 8.07 min (Metoda A).

Primer 181

Metil N-[(10S,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-18-fluoro-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0540]

[0541] Primer 181. Metil N-[(10S,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-18-fluoro-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 180 je podvrgnut hiralnoj HPLC separaciji korišćenjem CHIRALCEL® OJ-H kolone i 15% Metanola / 85% CO2kao mobilne faze. Pik 1 je dobijen kao Primer 181.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.86 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 7.85 - 7.75 (m, 1H), 7.67 - 7.58 (m, 2H), 7.58 - 7.40 (m, 3H), 5.23 (dd, J = 10.2, 5.1 Hz, 1H), 3.77 (s, 4H), 3.66 (s, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.26 - 2.08 (m, 1H), 1.98 (br. s., 1H), 1.67 - 1.39 (m, 2H), 1.29 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 1.19 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.13 - 0.98 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 624.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 8.07 min (Metoda A).

Primer 182

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-18-fluoro-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0543] Primer 182. Metil N-[(10S,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-18-fluoro-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 180 je podvrgnut hiralnoj HPLC separaciji korišćenjem CHIRALCEL® OJ-H kolone i 15% Metanola / 85% CO2kao mobilne faze. Pik 2 je dobijen kao Primer 182.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.90 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.88 - 7.76 (m, 1H), 7.71 - 7.60 (m, 2H), 7.59 - 7.52 (m, 1H), 7.52 - 7.40 (m, 2H), 5.32 (dd, J = 11.3, 6.0 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.66 (s, 2H), 2.70 (br. s., 1H), 2.44 (s, 3H), 2.26 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 2.05 - 1.88 (m, 1H), 1.87 - 1.70 (m, 1H), 1.50 (br. s., 2H), 0.96 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.66 (br. s., 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 624.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 8.07 min (Metoda A).

Primer 184

Metil (10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilat, TFA so [0544]

[0545] Primer 184. Metil (10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilat, TFA so: Primer 184 je napravljen na isti način kao Primer 2 zamenjivanjem 2-amino-4-nitrofenilboronske kiseline sa (2-amino-4-(metoksikarbonil)fenil)boronskom kiselinom u koraku 2C i zamenjivanjem Intermedijera 11 sa Intermedijerom 25. Smeša diastereomera je izdvojena tokom koraka 2J. Diastereomer A, ranije eluirajući izomer na silika gel hromatografiji, je korišćen da se generiše homohiralni finalni proizvod.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.84 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.40 - 8.30 (m, 2H), 8.27 - 8.12 (m, 2H), 7.99 (dd, J = 5.9, 1.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.53 - 7.30 (m, 3H), 5.28 (dd, J = 11.4, 6.2 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 2.84 - 2.73 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.28 - 2.17 (m, 1H), 2.08 - 1.97 (m, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 1H), 1.68 - 1.49 (m, 2H), 0.98 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.62 - 0.46 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 590.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.53 min (Metoda A).

Primer 185

(10R,14S)-14-[1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilna kiselina, TFA so

[0546]

[0547] Primer 185. (10R,14S)-14-[1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilna kiselina: U rastvor Primera 184 (12.15 mg, 0.017 mmol) u THF (173 µL) je dodat LiOH (34.5 µL, 0.069 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. 0.1 mL 1 N HCl je dodat i smeša je koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (8.8 mg, 73%) kao providno staklo.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.82 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.36 - 8.29 (m, 2H), 8.27 - 8.17 (m, 2H), 8.01 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.50 - 7.33 (m, 3H), 5.27 (dd, J = 11.1,6.1 Hz, 1H), 2.82 - 2.72 (m, J = 6.6 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.28 - 2.16 (m, 1 H), 2.09 - 1.96 (m, 1H), 1.90 (t, J = 12.1 Hz, 1H), 1.68 - 1.46 (m, 2H), 0.96 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.53 (d, J = 11.4 Hz, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 576.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.84 min (Metoda A).

Primer 186

(10S,14S)-14-[1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilna kiselina, TFA so

[0548]

[0549] Primer 186. (10S,14S)-14-[1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilna kiselina, TFA so: Primer 186 je napravljena na isti način kao Primer 185 korišćenjem drugog izomera.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.82 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.24 (dd, J = 8.3, 1.9 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.91 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.74 (ddd, J = 8.3, 6.7, 1.8 Hz, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 2H), 7.41 (dd, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 5.20 (dd, J = 10.5, 5.5 Hz, 1H), 2.47 - 2.34 (m, 4H), 2.26 - 2.14 (m, 1H), 2.07 - 1.96 (m, 1H), 1.76 - 1.63 (m, 1H), 1.57 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 1.35 - 1.21 (m, 4H), 1.10 - 0.96 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 576.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.44 min (Metoda A).

Primer 187

(10R,14S)-14-[1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-karboksilna kiselina, TFA so

[0550]

[0551] Primer 187. (10R,14S)-14-[1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-karboksilna kiselina, TFA so: Primer 187 je napravljen na isti način kao Primer 185 zamenjivanjem (2-amino-4-(metoksikarbonil)fenil)boronske kiseline sa 2-amino-5-(metoksikarbonil)fenilboronskom kiselinom u koraku 2C.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.81 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.12 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.95 - 7.87 (m, 2H), 7.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.75 - 7.67 (m, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 1H), 7.41 - 7.34 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 11.1, 5.9 Hz, 1H), 2.81 - 2.70 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.26 - 2.14 (m, 1H), 2.06 - 1.94 (m, 1H), 1.93 - 1.83 (m, 1H), 1.63 - 1.44 (m, 2H), 0.97 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.53 (d, J = 10.5 Hz, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 576.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.84 min (Metoda A).

Primer 188

(14S)-14-[1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilna kiselina, TFA so [0552]

[0553] Primer 188. (14S)-14-[1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4-karboksilna kiselina, TFA so: Primer 188 je napravljen na isti način kao Primer 21 zamenjivanjem 2-amino-4nitrofenilboronske kiseline sa 2-amino-5-(metoksikarbonil)fenilboronskom kiselinom. Hidroliza metil estra do kiseline je izvedena u poslednjem koraku.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.82 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.34 - 8.28 (m, 2H), 8.21 (dd, J = 8.2,1.9 Hz, 1H), 8.17 (d, J =1.3 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 6.1,1.8 Hz, 1H), 7.71 (ddd, J = 8.2, 6.7, 1.8 Hz, 1H), 7.49 - 7.33 (m, 3H), 5.26 (dd, J = 11.1, 5.8 Hz, 1H), 2.60 - 2.50 (m, 1H), 2.35 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.29 - 2.17 (m, 1H), 2.08 - 1.93 (m, 2H), 1.89 - 1.63 (m, 2H), 1.52 - 1.37 (m, 1H), 0.87 - 0.71 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 562.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 6.05 min (Metoda A).

Primer 189

(10R,14S)-14-C-1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-N,10-dimetil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4,14-diamido, TFA so [0554]

[0555] Primer 189. (10R,14S)-14-C-1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-N, 10-dimetil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-4,14-diamido, TFA so: Primer 185 (5.76 mg, 8.35 µmol), metanamin (29.2 µL, 0.058 mmol) (2 M u THF), EDC (3.20 mg, 0.017 mmol), i HOBT (2.56 mg, 0.017 mmol) su izmereni u bočici od 2 drama. DMF (167 ilL) praćeno sa Hunig-vom bazom (7.29 µL, 0.042 mmol) su dodati. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa MeOH i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (1.6 mg, 27%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.82 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.19 - 8.12 (m, 2H), 8.03 (dd, J = 8.3, 2.2 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 5.9, 1.8 Hz, 1H), 7.74 (td, J = 7.5, 1.8 Hz, 1H), 7.52 - 7.45 (m, 1H), 7.44 - 7.37 (m, 2H), 5.27 (dd, J = 11.1, 5.9 Hz, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.82 - 2.74 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.27 - 2.16 (m, 1H), 2.06 - 1.86 (m, 2H), 1.66 - 1.48 (m, 2H), 0.98 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.54 (d, J = 11.8 Hz, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 589.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.25 min (Metoda A).

Primer 190

(10R,14S)-14-C-1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5,14-diamido, TFA so [0556]

[0557] Primer 190. (10R,14S)-14-C-1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5,14-diamido, TFA so: Primer 187 (12 mg, 0.021 mmol), NH4Cl (7.80 mg, 0.146 mmol), EDC (7.99 mg, 0.042 mmol), i HOBT (6.38 mg, 0.042 mmol) su izmereni u bočici od 1 drama. DMF (208 µL) je dodat praćeno sa Hunig-ovom bazom (18.19 µL, 0.104 mmol). Dobijeni bistar bledo žuti rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa MeOH i prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (11.3 mg, 77%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.82 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.04 - 7.90 (m, 2H), 7.87 - 7.76 (m, 2H), 7.71 (ddd, J = 8.2, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 7.51 - 7.42 (m, 1H), 7.40 - 7.28 (m, 1H), 5.27 (dd, J = 11.1, 5.9 Hz, 1H), 2.76 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 2.35 (d, J = 0.6 Hz, 3H), 2.27 - 2.12 (m, 1H), 2.10 - 1.96 (m, 1H), 1.97 - 1.81 (m, 1H), 1.68 - 1.44 (m, 2H), 0.97 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.55 (d, J = 10.7 Hz, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 575.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.32 min (Metoda A).

Primer 191

(10S,14S)-14-C-1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5,14-diamido, TFA so

[0558]

[0559] Primer 191. (10S,14S)-14-C-1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5,14-diamido, TFA so: Primer 191 je napravljen na isti način kao Primer 190 korišćenjem drugog izomera.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.82 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.02 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.87 - 7.80 (m, 2H), 7.71 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.45 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.7 Hz, 1H), 7.41 - 7.34 (m, 1H), 5.19 (dd, J = 10.7,5.2 Hz, 1H), 2.45 - 2.37 (m, 1H), 2.35 (d, J = 0.6 Hz, 3H), 2.24 - 2.13 (m, 1H), 2.07 - 1.96 (m, 1H), 1.68 (q, J = 10.8 Hz, 1H), 1.60 - 1.50 (m, 1H), 1.30 (dd, J = 8.4, 4.3 Hz, 1H), 1.24 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.06 - 0.93 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 575.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.25 min (Metoda A).

Primer 192

(14S)-14-C-1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5,14-diamido, TFA so [0560]

[0561] Primer 192. (14S)-14-C-1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5,14-diamido, TFA so: Primer 192 je napravljen na isti način kao Primer 190 zamenjivanjem Primera 187 sa Primerom 188.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.85 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.22 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 8.2, 2.2 Hz, 1H), 8.03 (dd, J = 6.0, 1.6 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J = 8.2, 6.6, 1.6 Hz, 1H), 7.48 - 7.35 (m, 3H), 5.27 (dd, J = 11.0, 6.0 Hz, 1H), 2.60 - 2.52 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.31 - 2.20 (m, 1H), 2.09 - 1.94 (m, 2H), 1.89 - 1.67 (m, 2H), 1.45 (dd, J = 7.1, 3.8 Hz, 1H), 0.86 - 0.71 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 561.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.56 min (Metoda A).

Primer 193

(14S)-14-C-1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-5-N,5-N-dimetil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5,14-diamido, TFA so [0562]

[0563] Primer 193. (14S)-14-C-1-(3-Hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-5-N,5-N-dimetil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5,14-diamido, TFA so: Primer 193 je napravljen na isti način kao Primer 192 zamenjivanjem NH4Cl sa dimetilaminom.

<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.80 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.17 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 6.0, 1.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.75 - 7.63 (m, 2H), 7.49 - 7.35 (m, 3H), 5.24 (dd, J = 11.0, 5.5 Hz, 1H), 3.13 (s, 3H), 3.08 (s, 3H), 2.60 - 2.49 (m, 1H), 2.38 - 2.31 (s, 3H), 2.29 - 2.16 (m, 1H), 2.07 - 1.92 (m, 2H), 1.89 - 1.63 (m, 2H), 1.52 - 1.37 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 589.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.90 min (Metoda A).

Primer 199

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-17-metoksi-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,15(19),16-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0564]

199A. Metil N-(4-{2-[(1S)-1-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}but-3-en-1-il]-6-metoksipiridin-4-il}-3-nitrofenil)karbamat: U izmešan rastvor 29G (3.0 g, 6.54 mmol; obogaćen metodom hiralne SFC separacije slične onima koji su korišćeni za 29H) u hloroformu (131 mL) u atmosferi argona je dodat srebro (I) karbonat (50% on CELITE®) (3.61 g, 6.54 mmol) i jodometan (1.22 mL, 19.63 mmol), redom. Reakciona smeša je zagrejana na 65 °C. Nakon mešanja tokom 14 sati, reakcija je filtrirana, koncentrovana, i prečišćena pomoću hromatografije na normalnoj fazi da se dobije 199A (2.69 grama, 87%) kao žuto-mrka čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 473 (M+H)<+>.

199B. Metil N-(3-amino-4-{2-[(1S)-1-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}but-3-en-1-il]-6-metoksi-piridin-4-il}fenil)karbamat: 199A (2.69 g, 5.69 mmol) u MeOH (60 ml) je tretiran sa cinkovim prahom (3.86 g, 59.0 mmol) i amonijum hloridom (0.632 g, 11.81 mmol) i zagrejan na 65 °C preko noći. Suspenzija je filtrirana vruća kroz čep od CELITE® i koncentrovana. Ovaj ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc (sa 10% MeOH), ispran sa zasićenim natrijum bikarbonatnim rastvorom, fiziološkim rastvorom, osušen preko natrijum sulfata, filtriran, i koncentrovan da se dobije 199B. MS(ESI) m/z: 443 (M+H)<+>.

199C. Metil N-(4-{2-[(1S)-1-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}but-3-en-1-il]-6-metoksipiridin-4-il}-3-(2-metilbut-3-enamido)fenil)karbamat: DIPEA (3.02 mL, 17.29 mmol) je dodat u rastvor 2-metilbut-3-enoinske kiselinae (0.865 g, 8.64 mmol) i 199B (2.55 g, 5.76 mmol) u EtOAc (57.6 ml) na -10 °C pod argonom. Zatim, ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (6.79 ml, 11.53 mmol; 50% rastvor u EtOAc) je dodat u kapima i reakcija je mešana tokom 1h u postavljenim uslovima i zatim ostavljena da dođe do sobne temperature. Nakon 48 sati, reakcija je razblažena sa EtOAc, isprana sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 199C (2.52 g, 83%) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 525.1 (M+H)<+>.

199D. terc-Butil N-[(14S)-17-metoksi-5-[(metoksikarbonil)amino]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-14-il]karbamat: Rastvor 199C (1.50 g, 2.86 mmol) i Ts-OH (0.598 g, 3.15 mmol) u DCM (337 mL) je zagrejan tokom 0.5 h. Rastvor je ohlađen do sobne temperature i argon je ubačen u mehurićima tokom 0.5 h. U rastvor je dodat tricikloheksilfosfin[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-4,5-dihidroimidazol-2-iliden][benzilidin]rutenijum(IV)dihlorid (0.728 g, 0.858 mmol) i u dobijeni rastvor je ubačen argon u mehurićima tokom dodatnih 0.5 h pre zagrevanja na 45 °C tokom 12 sati. Reakciona smeša je isprana sa vodenim zasićenim NaHCO3 rastvorom. Vodeni sloj je dalje esktrahovan sa DCM (2x30 mL). Kombinovan organski ekstrakt je osušen preko Na2SO4, koncentrovan, i prečišćen pomoću hromatografije na normalnoj fazi. Olefinska dvostruka veza je redukovana rastvaranjem u EtOH (50 mL), tretmanom sa platina oksidom (0.065 gram, 0.286 mmol), i podvrgnuta je atmosferi vodonika (55 psi) preko noći. Katalizator je izfiltriran kroz čep od CELITE® i filtrat je koncentrovan da se dobije 199D (720 mg, 51 %) kao smeša diastereomera.

199E1. terc-Butil N-[(10S,14S)-17-metoksi-5-[(metoksikarbonil)amino]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-14-il]karbamat i 199E2. tercbutil N-[(10R,14S)-17-metoksi-5-[(metoksikarbonil)amino]-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo-[13.3. 1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-14-il]karbamat: Diastereomerna smeša 199D (720 mg, 1.44 mmol) je podvrgnuta hiralnoj SFC separaciji korišćenjem hiralne AD-H 30 x 250 mm kolone, sa smešom od 30% EtOH i 70% CO2sa stopom protoka od 85 mL/min i 100 bara na 40 °C. Pik 1 je označen kao enantiomer A (199E1; 280 mg, 74%) i pik 2 je označen kao enantiomer B (199E2; 360 mg, 100%). MS(ESI) m/z: 499.1 (M+H)<+>za oba enantiomera.

[0565] Primer 199. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-17-metoksi-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,15(19),16-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: 199E2 (0.020 g, 0.040 mmol) u MeOH (0.20 mL) je tretiran sa HCl (0.501 mL, 2.006 mmol) tokom 1 sata i zatim je koncentrovan do suva. Sirov ostatak je prečišćen preparativnom HPLC na reverznoj fazi. Aminska TFA so je rastvorena u DMF (1 mL) zatim Intermedijer 21 (0.012 g, 0.048 mmol), EDC (0.015 g, 0.080 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrat (0.012 g, 0.080 mmol), i DIPEA (0.070 mL, 0.401 mmol), dodati su redom. Nakon 3 sata, reakciona smeša je prečišćena pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije željeni proizvod (11 mg, 35%) kao bela čvrsta supstanca. Hiralnost je određena na osnovu prethodnih jedinjenja.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.87 - 7.84 (m, 1H), 7.64 - 7.60 (m, 1H), 7.52 - 7.46 (m, 4H), 7.19 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 5.25 (dd, J = 10.5, 5.5 Hz, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.75 - 2.72 (m, 1H), 2.54 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.17 - 2.12 (m, 1H), 1.98 - 1.93 (m, 1H), 1.85 - 1.79 (m, 1H), 1.51 - 1.45 (m, 2H), 1.01 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.64 (m, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 636 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 7.32 min (Metoda B).

Primer 200

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-17-etoksi-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,15(19),16-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0566]

[0567] Primer 200. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-17-etoksi-10-metil-9-okso-8,16-diazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,15(19),16-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 200 je pripremljen na sličan način kao Primer 199 zamenjivanjem jodometana sa jodoetanom u koraku o-alkilacije. Hiralnost je određena na osnovu prethodnih jedinjenja.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.89 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 8.43 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.95 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.75 (ddd, J = 8.1, 6.6, 1.5 Hz, 1H), 7.53 (td, J = 8.3, 1.4 Hz, 1H), 7.51 - 7.47 (m, 1H), 7.46 - 7.42 (m, 1H), 7.35 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 5.19 - 5.05 (m, 1H), 4.40 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.70 (s, 3H), 2.69 -2.63 (m, 1H), 2.49 - 2.43 (m, 3H), 2.00 - 1.83 (m, 2H), 1.77 - 1.65 (m, 1H), 1.43 - 1.35 (m, 4H), 1.33 - 1.23 (m, 1H), 0.85 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.37 (d, J = 11.0 Hz, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 650 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 7.58 min (Metoda B).

Primer 202

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16,17-triazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0568]

[0569] Primer 202. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16,17-triazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 202 je napravljen na isti način kao Primer 22 korišćenjem 22IA i zamenjivanjem Intermedijera 2 sa Intermedijerom 21.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.63 (br. s., 1H), 8.74 - 8.11 (m, 2H), 8.04 - 7.31 (m, 4H), 7.21 - 6.97 (m, 1H), 5.53 (br. s., 1H), 3.64 -3.32 (m, 3H), 2.76 (br. s., 1H), 2.57 - 2.37 (s, 3H), 2.27 (br. s., 1H), 2.09 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 1.99 - 1.48 (m, 3H), 0.94 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.43 (br. s., 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 607.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 9.17 min (Metoda A).

Primer 205

Metil N-[(12E,15S)-15-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-9-okso-8,17,19-triazatriciklo[14.2.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,12,16(19)-heksaen-5-il]karbamat, TFA so [0570]

[0571] Primer 205. Metil N-[(12E,15S)-15-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-9-okso-8,17,19-triazatriciklo[14.2.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,12,16(19)-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 205 je napravljen na isti način kao Primer 58 zamenjivanjem Intermedijera 22 sa Intermedijerom 25.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.30 (s, 1H), 7.72 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.50 - 7.37 (m, 6H), 5.60 (ddd, J = 15.2, 9.1, 5.6 Hz, 1H), 5.48 - 5.40 (m, 1H), 5.20 (dd, J = 10.5, 4.7 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.91 - 2.85 (m, 1H), 2.67 - 2.60 (m, 1H), 2.55 - 2.36 (m, 7H) ppm. MS(ESI) m/z: 592.3 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 5.84 min (Metoda A).

[0572] Sledeći Primeri u Tabeli 11 su napravljeni korišćenjem iste procedure kao što je prikazano u Primeru 34. Kiseline korišćene u finalnom koraku su kao što je naznačeno u tabeli ispod u odeljku Intermedijer. Razni reagensi za kuplovanje mogu biti korišćeni osim onih koji su opisani u Primeru 34 kao BOP, PyBop, EDC/HOBt, HATU ili T3P. Boc i SEM deprotekcija je postignuta pre finalnog kuplovanja za razliku od Primera 34 u kome je Boc grupa sama uklonjena u koraku 34J.

Tabela 11

Primer 215

2-Metoksietil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0.<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so

[0573]

215A. metil estar {3-Bromo-4-[2-((S)-1-terc-butoksikarbonilamino-but-3-enil)-3H-imidazol-4-il]-fenil}-karbaminske kiseline: Ovo jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure opisane u koraku 34A, zamenjivanjem Intermedijera 16 sa Intermedijerom 18; praćeno sa korakom 34B. MS(ESI) m/z: 467.1 (M+2+H)<+>.

215B. metil estar {3-Bromo-4-[2-((S)-1-terc-butoksikarbonilamino-but-3-enil)-1-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-1H-imidazol-4-il]-fenil}-karbaminske kiseline: U ohlađen (0 °C) rastvor 215A (15 g, 32.2 mmol) u THF (77 mL) je dodat N,N-dicikloheksilmetilamin (7.52 mL, 35.5 mmol) praćeno dodavanjem u kapima SEM-C1 (6.29 mL, 35.5 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 2 h i zatim je ostavljena da se ugreje polako do sobne temperature. Nakon 18 h, žuta suspenzija je razblažena sa EtOAc, isprana sa zasićenim natrijum bikarbonatom, fiziološkim rastvorom, osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 12.24 g (64%) 215B kao prljavo belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 595.1 (M+H)<+>i 597.2 (M+2+H)<+>.

215C. metil estar {3-Amino-4-[2-((S)-1-terc-butoksikarbonilamino-but-3-enil)-1-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-1H-imidazol-4-il]-fenil}-karbaminske kiseline: Bočica sa debelim zidom koja sadrži 215B (2 g, 3.36 mmol), bakar(I) jodid (0.128 g, 0.672 mmol), L-prolin (0.155 g, 1.343 mmol) i kalijum karbonat (1.392 g, 10.07 mmol) u DMSO (6.72 mL) je vakuumirana i napunjena sa argonom tri puta. Zatim je 28% vod. amonijum hidroksid (0.607 mL, 4.37 mmol) dodat. Bočica je zatvorena sa zatvaračem koji je presvučen teflonom i reakcija je zagrejana do 85 °C. Nakon 20 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa EtOAc, isprana sa vodom, fiziološkim rastvorom, osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 1.05 g (58.8%) 215C kao žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 532.5 (M+H)<+>.

215D. terc-Butil N-[(1S)-1-(4-{4-[(metoksikarbonil)amino]-2-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]fenil}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-2-il)but-3-en-1-il]karbamat: U ohlađen (0 °C), bistar žuto narandžasti rastvor 215C (4.83 g, 9.08 mmol) u etil acetatu (91 mL) je dodat Intermedijer 45 (1.0 g, 9.99 mmol) i Hunig-ova baza (6.34 mL, 36.3 mmol). Zatim, ciklični anhidrid 1-propanfosfonske kiseline (T3P) (50% u EtOAc) (13.38 mL, 22.70 mmol) je dodat u kapima tokom 20 min. i reakcija je mešana na 0 °C. Nakon 3 h, reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana sa zas. NaHCO3. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Organski slojevi su kombinovani i isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije narandžasta pena. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 215D (4.53 g, 81 %) kao belu penu. Protonski NMR pokazao je 3:1 smešu diastereomera. MS(ESI) m/z: 614.4 (M+H)<+>.

215E. terc-Butil N-[(10R,11E,14S)-5-[(metoksikarbonil)amino]-10-metil-9-okso-16-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-(17),2,4,6,11,15(18)-heksaen-14-il]karbamat (Diastereomer A) i 215F. terc-butil N-[(10S,11E,14S)-5-[(metoksikarbonil)amino]-10-metil-9-okso-16-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,11,15(18)-heksaen-14-il]karbamat (Diastereomer B): U rastvor 215D (4.40 g, 7.17 mmol) u dihlormetanu (717 mL) je dodat pTsOH monohidrat (1.523 g, 7.89 mmol) i smeša je degasirana sa argonom tokom 30 min. Zatim, sud je opremljen sa refluksnim kondenzatorom i reakcija je zagrejana do 40 °C tokom 1h. Zatim, crveno bordo rastvor Grubbs katalizatora 2. generacije (2.440 g, 2.87 mmol) u 20 mL DCM (degasiran sa argonom) je dodat u kapima preko šprica tokom 35 do 40 min. Nakon 21.5 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je isprana sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije braon pena. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 215E, Diastereomer A (1.71 g, 41 %) kao prljavo belu čvrstu supstancu i smešu 215E, Diastereomera A i 215F, Diastereomera B (1.4 g). MS(ESI) m/z: 586.3 (M+H)<+>.

215G. terc-Butil N-[(10R,14S)-5-[(metoksikarbonil)amino]-10-metil-9-okso-16-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-14-il]karbamat: Tamno braon rastvor 215E (1.71 g, 2.92 mmol) u EtOAc (97 mL) je degasiran sa argonom tokom 30 minuta. Zatim, platina(IV) oksid (0.066 g, 0.292 mmol) je dodat i vodonični gas iz balona je u mehurićima pušten kroz reakcionu smešu tokom nekoliko minuta. Reakcija je mešana u atmosferi vodonika. Nakon 24 h, dodatna količina platina(IV) oksida (0.192 g, 0.876 mmol) je dodata i reakcija je mešana u atmosferi vodonika. Nakon 21 h, reakcija je zaustavljena. Sud je pročišćen sa vakuumom/argonom tri puta, zatim je dodat CELITE®, i reakcija je filtrirana ispiranjem sa EtOAc. Dobijeni čist, žuto braon filtrat je koncentrovan da se dobije prljavo bela čvrsta supstanca koja teži 1.66 g. Ponovna kristalizacija iz metanola (30 mL) dala je 215G (0.575 g, 34%) kao belu čvrstau supstancu. MS(ESI) m/z: 588.4 (M+H)<+>.

215H. terc-Butil N-[(10R,14S)-5-amino-10-metil-9-okso-16-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-14-il]karbamat (Diastereomer A), 2 TFA i 215I. terc-butil N-[(10S,14S)-5-amino-10-metil-9-okso-16-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil} - 8,16,18 triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-14-il]karbamat (Diastereomer B), 2 TFA: Zatvorena epruveta koja sadrži belu suspenziju 215G (0.100 g, 0.170 mmol) u MeOH (2.84 mL) i 1.0 M NaOH (1.021 mL, 1.021 mmol) je zagrejana do 75 °C. Nakon 2.5 h, dodatni MeOH (5.6 mL) i 1.0 M NaOH (1.021 mL, 1.021 mmol) su dodai i reakcija je zagrejana na 75 °C. Nakon 16.5 h, dodatni 1.0 M NaOH (2 mL) je dodat i reakcija je zagrejana na 75 °C. Nakon 21 h, reakcija je zaustavljena i ohlađena do sobne temperature. Reakcija je neutralisana sa 1.0 N HCl i koncentrovana. Čvrsta supstanca je podeljena između EtOAc i zasićenog NaHCO3i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da se dobije čvrsta supstanca koja teži 0.107 g. Prečišćavanje pomoću hromatografije na reverznoj fazi dalo je 215H (Diastereomer A) (0.082 g, 63.6% prinos) i 215I (Diastereomer B) (0.025 g, 19%). MS(ESI) m/z: 530.4 (M+H)<+>.

215J. terc-Butil N-[(10R,14S)-5-{[(2-metoksietoksi)karbonil]amino}-10-metil-9-okso-16- {[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-14-il]karbamat: U ohlađen (0 °C), bistar, blago žuti rastvor 215H (0.082 g, 0.108 mmol) u dihlormetanu (1.082 mL) i piridinu (0.026 mL, 0.325 mmol) je dodat 2-metoksietil hloroformat (0.013 mL, 0.114 mmol). Nakon 1.5 h, reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana sa zas. NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušena preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovana da se dobije 215J (0.062 g, 91% prinos) kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 632.4 (M+H)<+>. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

215K. 2-Metoksietil N-[(10R,14S)-14-amino-10-metil-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.10<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, 2 HCl: zatvorena epruveta koja sadrži bistar, blago žuti rastvor 215J (0.062 g, 0.098 mmol) u 4.0 M HCl u dioksanu (2.453 mL, 9.81 mmol) je zagrejan na 75 °C. Nakon 1 h, dobijena suspenzija je koncentrovana da se dobije 215K (0.057 g, 122%) kao tamna, žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 402.1 (M+H)<+>. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0574] Primer 215.2-Metoksietil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 215 je pripremljen u skladu sa procedurom koja je opisana u Primeru 2, zamenjivanjem 2M sa 215K i zamenjivanjem Intermedijera 11 sa Intermedijerom 1.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.91 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.84 (ddd, J = 8.1, 6.6, 1.5 Hz, 1H), 7.73 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.47 - 7.40 (m, 2H), 5.41 (dd, J = 10.3, 6.7 Hz, 1H), 4.32 - 4.27 (m, 2H), 3.68 - 3.63 (m, 2H), 3.39 (s, 3H), 2.82 - 2.73 (m, 1H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.18 - 2.08 (m, 1H), 1.82 - 1.73 (m, 1H), 1.67 -1.56 (m, 2H), 1.04 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.78 - 0.65 (m, 1H). MS(ESI) m/z: 625.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 4.92 min (Metoda D).

Primer 216

Metil N-[(12E,15S)-18-hloro-15-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9-okso-8,17,19-triazatriciklo[14.2.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,12,16(19)-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0575]

216A. terc-Butil N-[(12E,15S)-18-hloro-5-[(metoksikarbonil)amino]-9-okso-17-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-8,17,19-triazatriciklo[14.2.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,12,16(19)-heksaen-15-il]karbamat: Bela suspenzija 57F (2.56 g, 4.37 mmol) i NCS (0.700 g, 5.24 mmol) u CHCl3 (18.36 mL) i ACN (18.36 mL) je zagrejana do 65 °C. Nakon 10 h, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i podeljena između DCM i vode i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2 x). Organski slojevi su kombinovani, isprani sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije braon pena. E- i Z-alkenski izomeri su razdvojeni pomoću hromatografije na reverznoj fazi. Frakcije koje sadrže E-alkenski izomer su kombinovane, neutralisane sa zasićenim rastvorom NaHCO3, i zatim koncentrovane da se dobije čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je podeljena između EtOAc i vode i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da se dobije željeni proizvod (1.15 g, 42%) kao žuta pena. MS(ESI) m/z: 620.1 (M+H)<+>.

216B. Metil N-[(12E,15S)-15-amino-18-hloro-9-okso-17-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-8,17,19-triazatriciklo[14.2.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,12,16(19)-heksaen-5-il]karbamat: U rastvor 216A (0.24 g, 0.387 mmol) u DCM (5 mL) je dodat TFA (1 mL, 12.98 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h i koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na reverznoj fazi dalo je, nakon neutralizacije frakcija sa zasićenim NaHCO3i koncentracije, čvrstu supstancu. Čvrsta supstanca je podeljena između EtOAc i vode i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da se dobije željeni proizvod (0.095 g, 47%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 520.1 (M+H)<+>.

[0576] Primer 216. Metil N-[(12E,15S)-18-hloro-15-[1-(3-hloro-2-ftuorofenil)-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-9-okso-8,17,19-triazatriciklo[14.2.1.0<2,7>]nonadeka-1(18),2,4,6,12,16(19)-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 216 je napravljen na isti način kao Primer 57 korišćenjem 216B i Intermedijear 1.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.52 (br. s., 1H), 8.84 (dd, J = 17.0, 2.2 Hz, 2H), 7.75 (td, J = 7.3, 1.4 Hz, 1H), 7.68 (m, 1H), 7.41(m, 1H), 7.35-7.31(m, 2H), 5.27 (dd, J = 10.7, 6.3 Hz, 1H), 4.51 - 4.20 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 2.51 - 2.33 (m, 1H), 2.30 - 1.92 (m, 2H), 1.67 - 1.42 (m, 2H), 1.45 - 1.07 (m, 2H), 0.93 (s, 1H) ppm. MS(ESI) m/z: 613.0 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 8.53 min (Metoda A).

Primer 218

Metil N-[(14R)-14-[1-(3-hloro-2-ftuorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-9-okso-12-oxa-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so [0577]

218A. terc-Butil N-[(1R)-1-(4-{2-amino-4-[(metoksikarbonil)amino]fenil}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil} -1H-imidazol-2-il)-2-(benziloksi)etil]karbamat: Ovo jedinjenje je pripremljeno praćenjem procedure iz literature (WO 11/100401, Primer 10, zamenjivanjem (S)-2-(terc-butoksikarbonilamino)pent-4-enoinske kiseline sa (S)-3-(benziloksi)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)propionskom kiselinom. Žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 612.5 (M+H)<+>.

218B. terc-Butil N-[(1R)-2-(benziloksi)-10-(4-{4-[(metoksikarbonil)amino]-2-(trifluoroacetamido)fenil}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-2-il)etil]karbamat: U rastvor 218A (2.035 g, 3.33 mmol) u DCM (107 mL) na 0 °C je dodat piridin (0.404 mL, 4.99 mmol), praćeno sa TFAA (0.611 mL, 4.32 mmol). Nakon 30 min, reakcija je zaustavljena i isprana je sa zasićenim NaHCO3, 1 N HCl, fiziološkim rastvorom, osušena preko magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana da se dobije željeni proizvod (2.3 g, 98% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. Materijal je prenesen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

218C. terc-Butil N-[(1R)-2-hidroksi-1-(4-{4-[(metoksikarbonil)amino]-2-(trifluoroacetamido)fenil}-1- {[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-2-il)etil]karbamat: U rastvor 218B (2.07 g, 2.92 mmol) u EtOH (58.5 mL) je dodat TFA (0.338 mL, 4.39 mmol).

Reakcija je mešan na sobnoj temperaturi tokom 5 min, zatim 10% paladijum na ugljeniku (0.311 g, 0.292 mmol) je dodat. Vodonik je u mehurićima ubačen unutra tokom nekoliko minuta, i rekcija je zatim mešana pod vodoničnim balonom tokom 24 h. Reakcija je filtrirana kroz 45 µm GMF filter, ispiranjem sa MeOH. Filtrat je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u EtOAc, ispran sa zasićenim NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Prečišćavanje silika gel hromatografijom dalo je željeni proizvod (1.61 g, 89%) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 618.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.58 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.68 - 7.62 (m, 2H), 7.43 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 5.46 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.04 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 3.92 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.65 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.04 - 0.92 (m, 2H), 0.02 (s, 9H) ppm.

218D. Benzil 3-[(2R)-2-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-2-(4-{4-[(metoksikarbonil)amino]-2-(trifluoroacetamido)fenil}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-2-il)etoksi]propanoat, TFA so: U rastvor 218C (0.054 g, 0.074 mmol), benzil akrilat (0.575 mL, 3.69 mmol) u THF (0.922 mL) na sobnoj temperaturi je dodat benziltrimetilamonijum hidroksid (0.087 mL, 0.221 mmol) (40 mas% u vodi). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 dana, zatim je koncentrovana. Prečišćavanje pomoću HPLC na reverznoj fazi dalo je željeni proizvod (0.013 g, 20%) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 780.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) d 8.26 (br. s., 1H), 7.61 - 7.55 (m, 3H), 7.47 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.34 - 7.23 (m, 4H), 5.57-5.44 (m, 2H), 5.20 - 5.15 (m, 1H), 5.08 - 4.98 (m, 2H), 3.88 - 3.73 (m, 7H), 3.64 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 2.61 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.04 - 0.90 (m, 2H), 0.01 (s, 9H) ppm.

218E. 3-[(2R)-2-(4-{2-Amino-4-[(metoksikarbonil)amino]fenil}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-2-il)-2-{[(tercbutoksi)karbonil]amino}etoksi]propionska kiselina, 2 TFA so: U rastvor 218D (0.013 g, 0.015 mmol) u MeOH (1 mL) je dodat 1 N NaOH (0.1 mL, 0.100 mmol). Reakcija je mešana na 75 °C u zatvorenoj epruveti. Nakon 7 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature i zatim je koncentrovana. Prečišćavanje pomoću HPLC na reverznoj fazi dalo je željeni proizvod (0.008 g, 67%) kao žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 594.4 (M+H)<+>.

218F. terc-Butil N-[(14R)-5-[(metoksikarbonil)amino]-9-okso-16-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-12-oxa-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-14-il]karbamat, TFA so: U rastvor 218E (0.008 g, 9.73 µmol) u DMF (9.73 mL) je dodat BOP (0.015 g, 0.034 mmol), DMAP (4.16 mg, 0.034 mmol), i DIPEA (8.50 µL, 0.049 mmol).

Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h i zatim je koncentrovana. Prečišćavanje pomoću HPLC na reverznoj fazi dalo je željeni proizvod (0.005 g, 75%) kao žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 576.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 7.67 (s, 1H), 7.61 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.19 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 4.15 (dd, J = 10.5, 2.5 Hz, 1H), 3.99 (dt, J = 8.7, 3.5 Hz, 1H), 3.81 - 3.69 (m, 5H), 3.56 - 3.48 (m, 1H), 3.42 (dd, J = 10.2, 3.0 Hz, 1H), 2.71 (ddd, J = 14.5, 11.2, 3.7 Hz, 1H), 2.35 (dt, J = 14.3, 2.8 Hz, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.13 - 0.96 (m, 2H), 0.06 (s, 9H) ppm.

218G. Metil N-[(14R)-14-amino-9-okso-12-oxa-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, 2 HCl so: Rastvor 218F (0.005 g, 7.25 µmol) u 4 M HCl u 1,4-dioksanu (0.5 mL, 2.000 mmol) u zatvorenoj bočici je zagrejan na 65 °C. Nakon 1 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature i zatim je koncentrovana da se dobije željeni proizvod (3 mg, 100% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 346.2 (M+H)<+>. Materijal je prenesen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

[0578] Primer 218. Metil N-[(14R)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-pirazol-4-amido]-9-okso-12-oksa-8,16,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(17),2,4,6,15(18)-pentaen-5-il]karbamat, TFA so: Primer 218 (0.0021 g, 41% prinos, čvrsta supstanca) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 2 zamenjivanjem 2M sa 218G i zamenjivanjem Intermedijera 11 sa Intermedijerom 25. MS(ESI) m/z: 582.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.30 (s, 1H), 7.75 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.7 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.51 -7.47 (m, 2H), 7.44 - 7.39 (m, 2H), 5.34 (dd, J = 7.2, 4.4 Hz, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 2H), 3.84 - 3.77 (m, 5H), 2.67 - 2.61 (m, 1H), 2.55 (ddd, J = 14.4, 6.3, 3.2 Hz, 1H), 2.42 (d, J = 0.8 Hz, 3H) ppm. Analitička HPLC RT = 5.54 min (Metoda A).

Primer 223

Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,17,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(18),2,4,6,15-pentaen-5-il]karbamat, TFA so

[0579]

223A. terc-Butil N-(1-diazo-2-oksoheks-5-en-3-il)karbamat: U ohlađen (-40 °C) rastvor 2-((t-butoksikarbonil)amino)pent-4-enoinske kiseline (15 g, 69.7 mmol) u THF (250 mL) je dodat N-metilmorfolin (9.19 mL, 84 mmol) praćeno sa dodavanjem u kapima izobutil hloroformata (10.98 mL, 84 mmol). Reakcija je mešana na -40 °C tokom 20 min, nakon toga je filtrirana da se uklone soli. Filtrat je dodat u rastvor diazometana (4.39 g, 105 mmol) u Et2O (500 mL) [Generisan od 1-metil-3-nitro-1-nitrozoguanidina]. Reakciona smeša je mešana na -40 °C tokom 3 h i zatim reakcija je ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Nakon 1 h, reakcija je pročišćena sa azotom tokom 30 min da se ukloni višak diazometana. Reakciona smeša je isprana sa zasićenim rastvorom NaHCO3(2 x 100 mL), voda (2 x 50 mL), fiziološkim rastvorom (1 x 80 mL), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije žuta čvrsta supstanca (16 g). Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je željeni proizvod (12.5 g, 75%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.66 - 5.83 (m, 1H), 5.48 (br. s., 1H), 5.19 (dd, J = 3.21, 1.79 Hz, 1H), 5.03 - 5.16 (m, 2H), 4.24 (br. s., 1H), 2.35 - 2.62 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).

223B. terc-Butil N-(1-bromo-2-oksoheks-5-en-3-il)karbamat: U ohlađenu (-15 °C) suspenziju 223A (15 g, 62.7 mmol) u dietil etru (500 mL) je dodat u kapima HBr (∼47% u vodi) (18.11 mL, 157 mmol). Nakon 15 min., reakcija je ostavljena da se ugreje polako do 0 °C tokom 2.5 h. Reakcija je razblažen sa dietil etrom (100 mL) i reakcija je isprana sa vodom (2 x 100 mL), zasićenim rastvorom NaHCO3 (1 x 80 mL), fiziološkim rastvorom (1 x 80 mL), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije željeni proizvod (17 g, 93%) kao viskozno žuta tečnost koja je očvrsnula u frižideru.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.62 - 5.76 (m, 1H), 5.12 -5.21 (m, 2H), 5.08 (br. s., 1H), 4.57 (d, J = 6.00 Hz, 1H), 3.99 - 4.12 (m, 2H), 2.38 - 2.67 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).

223C. terc-Butil N-[1-(1H-imidazol-4-il)but-3-en-1-il]karbamat: Epruveta pod pritiskom koja sadrži rastvor 223B (28 g, 96 mmol), formamidin acetata (19.95 g, 192 mmol) i K2CO3(53.0 g, 383 mmol) u DMF (200 mL) je zagrejanana 100 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Ostatak je podeljen između vode (200 mL) i etil acetata (500 mL) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2x200 mL). Organski slojevi su kombinovani i isprani sa fiziološkim rastvorom (1x100 mL), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije željeni proizvod (25.5 g, 84%) kao gumasta braon čvrsta supstanca. Ovo je korišćeno u sledećem koraku bez prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 238.2 (M+H)<+>.

223D. terc-Butil N-[1-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-4-il)but-3-en-1-il]karbamat: U ohlađen (0 °C) rastvor 223C (25.5 g, 107 mmol) u THF (260 mL) je dodat natrijum hidrid (4.73 g, 118 mmol). Nakon dodavanja, reakcija je ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Nakon 30 min., reakcija je ohlađena do 0 °C i SEM-C1 (19.06 mL, 107 mmol) je dodat u kapima. Reakcija je ostavljean da se ugreje do sobne temperature i mešana je preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana da se dobije braon gumasta čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je željeni proizvod (11.5 g, 70%) kao gumastu, braon čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 368.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.51 (d, J = 1.25 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 5.71 (dd, J = 17.13, 10.13 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.99 - 5.10 (m, 3H), 4.73 (dd, J = 13.88, 6.38 Hz, 1H), 3.43 - 3.48 (m, 2H), 2.55 - 2.63 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 0.86 -0.91 (m, 2H), 0.02 - 0.03 (m, 9H).

223E. terc-Butil N-[1-(2-bromo-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-4-il)but-3-en-1-il]karbamat: U ohlađen (-78 °C) rastvor 223D (5.0 g, 13.60 mmol) u THF (100 mL) je dodat u kapima nBuLi (1.6 M u heksanima) (25.5 mL, 40.8 mmol). Nakon 2 h, N-bromosukcinimid (2.421 g, 13.60 mmol) je dodat. Nakon 2 h, reakciona smeša je kvenčovana sa rastvorom zasićenog NH4Cl (30 mL). Reakciona smeša esktrahovana je sa etil acetatom (3 x 50 mL). Organski slojevi su kombinovani i isprani sa fiziološkim rastvorom (1 x 50 mL), osušeni pomoću Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije gumasta žuta čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je željeni proizvod (2.0 g, 26.5%) kao gumasta, braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 446.0(M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.95 (s, 1H), 5.63 - 5.78 (m, 1H), 5.22 (s, 2H), 5.02 - 5.14 (m, 3H), 4.64 - 4.74 (m, 1H), 3.50 - 3.57 (m, 2H), 2.58 (t, J = 6.61 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H), 0.89 - 0.96 (m, 2H), 0.01 (s, 9H).

223F. terc-Butil N-[(1S)-1-[2-(2-amino-4-nitrofenil)-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-4-il]but-3-en-1-il]karbamat (Enantiomer I) i 223G. terc-Butil N-[(1R)-1-[2-(2-amino-4-nitrofenil)-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-4-il]but-3-en-1-il]karbamat (Enantiomer II): U rastvor 223E (3 g, 6.72 mmol) i (2-(2-amino-4-nitrofenil)-5-metil-1,3,2-dioksaborinan-5-il)metilium (5.02 g, 20.16 mmol) u toluenu (40mL) je dodata fosforna kiselina, kalijumova so (4.28 g, 20.16 mmol) i voda (10 mL). Reakciona smeša je pročišćena sa azotom tokom 15 min. Zatim, PdCl2(dppf)-CH2Cl2 adukat (0.274 g, 0.336 mmol) je dodat i reakcija je zagrejana na 110 °C. Nakon 3 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (80 mL) i zatim je isprana sa zasićenim NaHCO3(50 mL), vodom (50 mL), fiziološkim rastvorom (50 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije gumasta braon čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je gumastu braon čvrstu supstancu. Enantiomeri su izdvojeni hiralnom HPLC korišćenjem CHIRALPAK® AD-H 250 x 21 mm kolone (mobilna faza: CO2:80%, rastvarač:20% (0.5% DEA u metanolu)) da se dobije 223F (Enantiomer I, 0.42 g, 13%) i 223G (Enantiomer II, 0.545 g, 16%).

223F (Enantiomer I): MS(ESI) m/z: 503.9 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6sa dve kapi D2O) δ 7.56 - 7.62 (m, 2H), 7.39 (dd, J = 8.53, 2.51 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 5.65 - 5.75 (m, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.95 - 5.08 (m, 2H), 4.55 (d, J = 8.53 Hz, 1H), 3.40 (t, J = 8.03 Hz, 2H), 2.32 - 2.49 (m, 2H), 1.33 (s, 9H), 0.69 - 0.77 (m, 2H), -0.14 (s, 9H). 223G (Enantiomer II): MS(ESI) m/z: 503.9 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6sa dve kapi D2O) δ 7.60 - 7.64 (m, 2H), 7.38 (dd, J = 8.78, 2.26 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 5.66 - 5.77 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.95 - 5.09 (m, 2H), 4.57 (d, J = 8.53 Hz, 1H), 3.44 (t, J = 8.03 Hz, 2H), 2.32 - 2.48 (m, 2H), 1.35 (s, 9H), 0.73 - 0.80 (m, 2H), -0.11 (s, 9H).

223H. terc-Butil N-[(1S)-1-(2-{2-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-4-nitrofenil}-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-imidazol-4-il)but-3-en-1-il]karbamat: U ohlađen (0 °C) rastvor 223F (0.650 g, 1.291 mmol) u DCM (10 mL) je dodat piridin (0.313 mL, 3.87 mmol) praćeno sa DMAP (0.015 g, 0.129 mmol). Zatim, sveže pripremljen Intermedijer 48 (0.383 g, 3.23 mmol) u DCM (0.5 mL) je dodat u kapima. Nakon 20 min, reakcija je koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi obezbedilo je željeni proizvod (0.740 g, 98%) kao žuto ulje. MS(ESI) m/z: 586.5 (M-H).<1>H NMR (300 MHz, MeOD) δ 9.34 (t, J = 1.37 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 1.32 Hz, 2H), 7.35 (s, 1H), 6.98 (d, J = 8.12 Hz, 1H), 5.76 - 6.04 (m, 2H), 5.36 (m, 2H), 5.04 - 5.26 (m, 4H), 4.80 (d, J = 6.66 Hz, 1H), 3.65 (t, J = 7.8Hz, 2H), 3.25-3.30 (m, 1H), 2.64 - 2.79 (m, 1H), 2.50 - 2.61 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.32 (d, J = 6.9, 3H), 0.93 (t, J = 8.1Hz, 3H), 0.01 (s, 9H).

223I. terc-Butil N-[(10R,11E,14S)-10-metil-5-nitro-9-okso-17-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-8,17,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(18),2,4,6,11,15-heksaen-14-il]karbamat: Na plamenu osušen RFB od 1 L sa tri vrata koji sadrži rastvor 223H (0.42 g, 0.717 mmol) i monohidrat p-toluenesulfonske kiseline (0.15 g, 0.789 mmol) u DCM (700 mL) je pročišćen sa argonom tokom 1h. Zatim, reakcija je zagrejana do refluksa. Nakon 1 h, rastvor tricikloheksilfosfin[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-4,5-dihidroimidazol-2-ilidene][benzilidin]rutenijum(IV)dihlorida (0.244 g, 0.287 mmol) u DCM (6 mL) je dodat u kapima. Reakcija je ostavljena da se meša do refluksa preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, isprana sa zasićenim NaHCO3 (2 x 80 mL), fiziološkim rastvorom (80 mL), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije gumasta braon čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je jedinjenje iz naslova (0.225 gm, 56%) kao gumastu, žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 558.5(M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.80 (br. s., 1H), 9.33 (br. s., 1H), 7.94 - 8.04 (m, 2H), 6.99 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 6.01-5.25 (m, 1H), 5.19 - 5.27 (m, 4H), 5.14 (d, J = 7.50 Hz, 2H), 3.64 - 3.73 (m, 2H), 3.60 (m, 2H), 1.54 (s, 9H), 0.94 - 1.01 (m, 3H), 0.00 (s, 9H).

223J. terc-Butil N-[(10R,14S)-5-amino-10-metil-9-okso-17-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-8,17,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(18),2(7),3,5,15-pentaen-14-il]karbamat: Rastvor 223I (0.210 g, 0.377 mmol) u EtOAc (20 mL) je pročišćen sa azotom i vakuumom. Ovo je ponovljeno tri puta. Zatim, platina(IV) oksid (0.043 g, 0.188 mmol) je dodat i reakcija je pročišćena sa H2gasom tokom nekoliko minuta (H2napunjen u balonu). Reakcija je mešana energično u atmosferi vodonika. Nakon 16 h, reakcija je razblažena sa metanolom (5 mL) i zatim je filtrirana kroz CELITE®, isprana sa metanolom (2x 5mL). Filtrat je koncentrovan da se dobije 223J (0.200 g, 95%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 530.2(M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.15 (br. s., 1H), 7.56 (d, J = 8.51 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 2.25 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.46 (dd, J = 8.50, 2.50 Hz, 1H), 5.09 - 5.18 (m, 3H), 5.29-5.12 (m, 1H), 3.90-3.60 (m, 2H), 3.55 - 3.62 (m, 2H), 2.45-1.90 (m, 1H), 1.86 - 1.97 (m, 2H), 1.66 - 1.78 (m, 3H), 1.47 (s, 9H), 1.26 (s, 2H), 0.92 - 0.98 (m, 3H), 0.01 (s, 9H).

223K. terc-Butil N-[(10R,14S)-5-[(metoksikarbonil)amino]-10-metil-9-okso-17-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-8,17,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(18),2(7),3,5,15-pentaen-14-il]karbamat: U ohlađen (0 °C) rastvor 223J (0.195 g, 0.368 mmol) u DCM (5 mL) je dodat piridin (0.045 mL, 0.552 mmol) praćeno dodavanjem u kapima metil hloroformata (0.043 mL, 0.552 mmol). Nakon 10 min., reakcija je ostavljean da se ugreje do sobne temperature. Nakon 1 h, reakcija je razblažena sa DCM (30 mL) i zatim je isprana sa zasićenim NaHCO3(2 x 20 mL), fiziološkim rastvorom (20 mL), osušena pomoću Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije gumasta braon čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi obezbedilo je jedinjenje iz naslova (0.145 g, 67%) kao žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 588.2(M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.71 (d, J = 8.53 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.44 (dd, J = 8.28, 2.26 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 5.19 - 5.27 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.64 - 3.73 (m, 2H), 2.58 (t, J = 6.27 Hz, 1H), 2.01 - 2.11 (m, 1H), 1.76 (dt, J = 6.40, 3.58 Hz, 2H), 1.52 - 1.62 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.35 - 1.41 (m, 2H), 1.07 (d, J = 7.03 Hz, 3H), 0.99 (dt, J = 8.91, 6.59 Hz, 2H), 0.05 (s, 9H).

223L. Metil N-[(10R,14S)-14-amino-10-metil-9-okso-8,17,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(18),2(7),3,5,15-pentaen-5-il]karbamat: U rastvor 223K (0.030 g, 0.051 mmol) u DCM (1 mL) je dodat TFA (1 mL, 12.98 mmol). Nakon 1 h, dodatni TFA (0.4 mL) je dodat. Nakon 1 h, reakcija je koncentrovana da se dobije čvrsta supstanca. Petrol etar (5 mL) je dodat i smeša je mešana. Rastvarač je uklonjen sa pipetom. Ovo je ponovljeno sa dietil etrom (2x7 mL) i čvrsta supstanca je osušena pod visokim vakuumom da se dobije željeni proizvod (0.040 g, 93%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 358.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.68 (d, J = 2.01 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.53 Hz, 1H), 7.50 - 7.55 (m, 1H), 7.39 (s, 1H), 4.63 (dd, J = 8.78, 5.77 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 2.17 - 2.30 (m, 1H), 1.81 - 1.95 (m, 2H), 1.65 - 1.80 (m, 2H), 1.34 - 1.55 (m, 2H), 1.12 (d, J = 7.03 Hz, 3H).

[0580] Primer 223. Metil N-[(10R,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,17,18-triazatriciklo[13.2.1.0<2,7>]oktadeka-1(18),2,4,6,15-pentaen-5-il]karbamat, TFA so: U rastvor 223L (0.010 g, 0.028 mmol) u DMF (1.0 mL) je dodat Intermedijer 21 (0.0071 g, 0.028 mmol), EDC (0.0085 mg, 0.042 mmol), HOBT (0.0064 mg, 0.042 mmol) i Hunig-ova baza (0.024 mL, 0.140 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je koncentrovana da se dobije gumasta čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću HPLC na reverznoj fazi dalo je jedinjenje iz naslova (2.8 mg, 13%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.79 - 7.79 (m, 2H), 7.58 - 7.66 (m, 2H), 7.46 - 7.53 (m, 2H), 7.13 (s, 1H), 5.37 (t, J = 4.52 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 2.68 (m, 1H), 2.54 (d, J = 1.00 Hz, 3H), 2.18 - 2.25 (m, 2H), 2.00 - 2.09 (m, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.23 (d, J = 7.03 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 593.0 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 6.38 min.

Primer 224

Metil N-[(10S,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,17,18-triazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so

[0581]

224A. terc-Butil N-[(3,6-dihloropiridazin-4-il)metil]karbamat: Smeša 3,6-dihloropiridazin (0.765 g, 5.14 mmol) u vodi (25 mL) je zagrejana do 75 °C. 2-((terc-Butoksikarbonil)amino)sirćetna kiselina (1 g, 5.71 mmol) i amonijum format (0.072 g, 1.142 mmol) su dodati. Zatim, rastvor srebro nitrata (0.194 g, 1.142 mmol) u vodi (1 mL) je dodat u kapima tokom 2 min. U dobijeni tamno braon rastvor je dodat u kapima rastvor amonijum persulfata (5.21 g, 22.83 mmol) u vodi (30 mL) tokom 25 min. Formiran je ljubičasti talog. Reakciona smeša je mešan tokom dodatnih 40 min, i zatim ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je sipana na led, bazifikovana sa vod. amonijakom, održavajući temperaturu ispod 5 °C. Reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom i organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je željeni proizvod (0.3 g, 18%) kao prljavo belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 278.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.51 (s, 1H), 5.15 (br. s., 1H), 4.40 (s, 2H), 1.49 (s, 9H).

224B. terc-Butil N-[1-(3,6-dihloropiridazin-4-il)but-3-en-1-il]karbamat: U ohlađen (-78 °C) rastvor 224A (2 g, 7.19 mmol) u tetrahidrofuranu (25 mL) je dodat TMEDA (3.2 mL, 21.20 mmol). U dobijeni ratsvor svetlo zelene boje je dodat u kapima n-butillitijum (1.6 M u heksanu) (25.2 mL, 40.3 mmol). Nakon dodavanja, reakcija je ostavljen da se ugreje do -40 °C tokom 30 min. Reakcija je ohlađena do -78 °C i zatim alil bromid (2.7 mL, 31.2 mmol) je dodat u kapima. Nakon 1 h, reakcija je kvenčovana dodavanjem zasićenog amonijum hlorida (25 mL) i reakcija je zagrejana do sobne temperature. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom, isprana sa 1 N HCl (15 mL), zasićen natrijum bikarbonat (15 mL), fiziološkim rastvorom (15 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je željeni proizvod (0.93 g, 41%) kao svetlo žuto-braon obojenu čvrstu supstanca. MS(ESI) m/z: 318.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.76 - 7.76 (m, 1H), 5.85 - 5.86 (m, 1H), 5.17 (d, J = 1.00 Hz, 2H), 4.88 - 4.88 (m, 1H), 2.55 - 2.57 (m, 1H), 2.41 - 2.43 (m, 1H), 1.42 - 1.44 (m, 9H).

224C. terc-Butil N-[(1S)-1-[6-(2-amino-4-nitrofenil)-3-hloropiridazin-4-il]but-3-en-1-il]karbamat (Enantiomer I) i 224D. terc-Butil N-[(1R)-1-[6-(2-amino-4-nitrofenil)-3-hloropiridazin-4-il]but-3-en-1-il]karbamat (Enantiomer II): Smeša 224B (0.5 g, 1.571 mmol) u toluenu (10 mL) i etanola (1 mL) je degasirana korišćenjem gasa azota. Zatim, 2-(5,5-dimetil-1,3,2-dioksaborinan-2-il)-5-nitroanilin (0.452 g, 1.807 mmol) i natrijum karbonat (0.500 g, 4.71 mmol) su dodat. Reakciona smeša je degasirana sa azotom tokom 10 min. Zatim, tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0.082 g, 0.071 mmol) je dodat i reakcija je zagrejana do 100 °C. Nakon 16 h, reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana kroz čep od CELITE®. Filtrat je ispran sa vodom, fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je željeni proizvod (0.2 g, 30%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. Enantiomeri su izdvojeni hiralnom HPLC korišćenjem CHIRALCEL® OJ-H da se dobije 224C (Enantiomer I) kao bledo žuta čvrsta supstanca i 224D (Enantiomer II) kao bledo žuta čvrsta supstanca. 224C (Enantiomer I): (ESI) m/z: 420.2(M+H)<+>.

<1>H NMR (300 MHz, MeOD) δ 8.11 (s, 1H), 7.72 - 7.79 (m, 2H), 7.54 (dd, J = 8.73, 2.31 Hz, 1H), 5.83 - 5.95 (m, 1H), 5.14 - 5.20 (m, 2H), 5.01 (br. s, 1H), 2.41 - 2.71 (m, 2H), 1.39 - 1.49 (m, 9H).

[α]<20>D= - 62 (c 0.1, MeOH).224D (Enantiomer II): MS(ESI) m/z: 420.2(M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, MeOD) δ 8.11 (s, 1H), 7.74 - 7.76 (m, 2H), 7.54 (dd, J = 8.69, 2.36 Hz, 1H), 5.81 - 5.95 (m, 1H), 5.14 - 5.20 (m, 2H), 4.96 - 5.06 (m, 1H), 2.14 - 2.43 (m, 2H), 1.39 - 1.50 (m, 9H). [a]<20>D = 78.4 (c 0.1, MeOH).

224E. terc-Butil N-[(1S)-1-{3-hloro-6-[2-(2-metilbut-3-enamido)-4-nitrofenil]piridazin-4-il}but-3-en-1-il]karbamat: U ohlađen (0 °C) rastvor 224C (0.1 g, 0.238 mmol) u dihlormetanu (1 mL) i piridinu (0.058 mL, 0.715 mmol) je dodat Intermedijer 48 (0.031 g, 0.262 mmol). Reakcija je ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Nakon 35 min., reakcija je koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je željeni proizvod (0.1g, 84%) kao bledo žutu polu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 502.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.63-10.64 (d, J = 6.03 Hz, 1H), 8.93-8.95 (m, 1H), 8.17 - 8.19 (m, 2H), 7.92 - 7.93 (m, 1H), 7.70 - 7.71 (m, 1H), 5.87 - 5.91 (m, 2H), 5.13 - 5.20 (m, 4H), 4.99 - 5.11 (m, 1H), 3.19 - 3.22 (m, 1H), 2.51 - 2.53 (m, 1H), 2.45 - 2.49 (m, 1H), 1.72-1.79 (m, 1H), 1.36 - 1.51 (m, 9H), 1.27 (d, J = 6.73 Hz, 3 H).

224F. terc-Butil N-[(1S)-1-{6-[4-amino-2-(2-metilbut-3-enamido)fenil]-3-hloropiridazin-4-il}but-3-en-1-il]karbamat: Smeša 224E (0.24 g, 0.478 mmol) u sirćetnoj kiselini (5 mL) i vodi (1.667 mL) je zagrejana do 70 °C pod N2. Zatim, fino praškasto gvožđe (0.134 g, 2.391 mmol) je dodato. Nakon 30 min, reakcija je ohlađen do sobne temperature i filtrirana kroz CELITE®. Filtrat je neutralisan sa 10% NaOH rastvorom. Smeša je ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Sirov proizvod je ispran sa dietil etrom (2 x 5mL) i osušen da se dobije željeni proizvod (0.19g, 84%) kao bledo roza čvrsta supstanca. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 502.2 (M+H)<+>. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.61-11.63 (d, J = 7.21 Hz, 1H), 8.07-8.32 (m,1H), 7.65 - 7.69 (m, 2H), 7.46 - 7.48 (m, 1H), 6.46 - 6.48 (m, 1H), 5.80 - 5.88 (m, 4H), 5.20 -5.24 (m, 1H), 5.12 - 5.14 (m, 3H), 4.99 - 5.10 (m, 1H), 3.19 - 3.22 (m, 1H), 2.51 - 2.53 (m, 1H), 2.45 - 2.49 (m, 1H), 1.72-1.79 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.27 (m, 3H).

224G. terc-Butil N-[(1S)-1-(3-hloro-6-{4-[(metoksikarbonil)amino]-2-(2-metilbut-3-enamido)fenil}piridazin-4-il)but-3-en-1-il]karbamat: U ohlađen (-60 °C) rastvor 224F (0.06 g, 0.127 mmol) u DCM (4 mL) je dodat piridin (0.011 mL, 0.140 mmol). Zatim, rastvor metil hloroformata (9.85 µL, 0.127 mmol) u DCM je dodat u kapima. Nakon 30 min, reakcija je razblažena sa DCM i isprana sa zasićenim natrijum bikarbonatom, fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je željeni proizvod (0.021g, 31 %) kao bledo rozu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 530.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.83-10.84 (d, J = 7.21 Hz, 1H), 9.96 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.70 - 7.71 (m, 1H), 7.61 - 7.63 (dd, J = 8.28, 6.90 Hz, 1H), 7.48 - 7.51 (m, 1H), 5.77 - 5.92 (m, 2H), 5.12 - 5.20 (m, 4H), 4.92 - 5.10 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.14 - 3.18 (m, 1H), 2.45 - 2.50 (m, 2H), 1.72-1.79 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.27(d, J = 7.03 Hz, 3 H).

224H. Metil N-[(11E,14S)-14-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-16-hloro-10-metil-9-okso-8,17,18-triazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2(7),3,5,11,15,17-heptaen-5-il]karbamat:

Rastvor 224G (0.1 g, 0.189 mmol) u 1,2-dihloroetan (40 mL) je degasiran sa argonom tokom 25 minuta. Zatim, Grubbs II (0.064 g, 0.075 mmol) je dodat i reakcija je zagrejana na 120 °C u mikrotalasnim uslovima tokom 30 min. Reakciona smeša je filtrirana kroz CELITE®, i filtrat je ispran sa zasićenim natrijum bikarbonatom, fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Prečišćavanje pomoću hromatografije na normalnoj fazi dalo je 224H (0.02g, 22%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z : 501.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.98 (s, 1 H), 7.9 - 8.01 (m, 2 H), 7.79 - 7.85 (m, 1 H), 7.74 (s, 1 H), 7.34 - 7.4 (m, 2 H), 5.82-5.93 (m, 1 H), 5.68 - 5.79 (m, 1 H), 4.94-5.06 (m, 1 H), 3.71 (s, 3 H), 3.20 - 3.29 (m, 1 H), 2.38-0.63 (m, 2 H), 1.30 (s, 9 H), 0.90-0.97 (m, 3H).

224I. Metil N-[(10S,14S)-14-{[(terc-butoksi)karbonil]amino}-10-metil-9-okso-8,17,18-triazatriciklo[13.3.1.02,7]nonadeka-1(19),2(7),3,5,15,17-heksaen-5-il]karbamat: Smeša 224H (0.025 g, 0.050 mmol) i amonijum formata (0.001 mg, 0.025 mmol) u metanolu (10 mL) je pročišćena sa N2tokom 10 min. Zatim, Pd/C (0.042 g, 0.398 mmol) je dodat u reakciju. Nakon 16 h, reakcija je filtrirana kroz CELITE® i filtrat je koncentrovan. Sirov materijal je ispran sa dietil etrom (2x5mL) i osušen da se dobije željeni proizvod (0.019 g, 81%) kao crna čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z : 470.2 (M+H)<+>.

224J. Metil N-[(10S,14S)-14-amino-10-metil-9-okso-8,17,18-triazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il]karbamat: U ohlađen (0 °C) rastvor 224I (0.027 g, 0.058 mmol) u DCM (3 mL) je dodat TFA (0.250 mL, 3.24 mmol). Reakcija je ostavljena da se ugreje do sobne temperature. Nakon 2 h, reakcija je koncentrovana. Sirov materijal je ispran sa dietil etrom (2x3 mL), etil acetatom (2x5 mL), DCM (5x15 mL) i osušen da se dobije željeni proizvod (0.018 g, 52%) kao crvenkasto braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 370.6 (M+H)<+>.

[0582] Primer 224. Metil N-[(10S,14S)-14-[1-(3-hloro-2-fluorofenil)-5-metil-1H-1,2,3-triazol-4-amido]-10-metil-9-okso-8,17,18-triazatriciklo[13.3.1.0<2,7>]nonadeka-1(19),2,4,6,15,17-heksaen-5-il]karbamat, TFA so: U rastvor 224J (0.018 g, 0.049 mmol) u DMF (1 mL) je dodat Intermedijer 21 (0.012 g, 0.049 mmol), HOBT (0.011 g, 0.073 mmol), EDC (0.014 g, 0.073 mmol), i DIPEA (0.043 mL, 0.244 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je koncentrovana da se dobije gumasta čvrsta supstanca. Prečišćavanje pomoću HPLC na reverznoj fazi obezbedilo je željeni proizvod (3.5 mg, 12%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.96 (s, 1 H), 9.59 (s, 1 H), 9.35 (d, J = 7.53 Hz, 1 H), 9.23 (d, J = 1.76 Hz, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 7.95 (ddd, J = 8.28, 6.90, 1.63 Hz, 1H), 7.69 - 7.78 (m, 1H), 7.86 (d, J = 8.53 Hz, 1 H), 7.49 - 7.60 (m, 2 H), 7.44 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 4.99 - 5.11 (m, 1 H), 3.71 (s, 3 H), 2.40 (s, 3 H), 2.26 (dd, J = 15.56, 7.53 Hz, 1 H), 1.89 - 2.04 (m, 2 H), 1.63 - 1.75 (m, 1 H), 1.46 - 1.57 (m, 1H), 1.30 - 1.43 (m, 2 H), 1.13 (d, J = 7.03 Hz, 3 H). MS(ESI) m/z: 607.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC RT = 8.40 min (Metoda A).

[0583] Sledeći Primeri u Tabeli 12 su made korišćenjem kuplovanje kiselina sa aminima. Kiseline koje su korišćene su označene u donjoj tabeli u odeljku Intermedijer. Razni reagensi za kuplovanje mogu biti korišćeni osim onih koji su opisani u Primeru 34 kao BOP, PyBop, EDC/HOBt, HATU ili T3P. Boc i SEM deprotekcija je postignuta kada je neophodno.

Tabela 12

Claims

PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje sa formulom (I):

ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljiva so, ili solvat tog jedinjenja, gde: prsten A je odabran od arila i 5- do 6-članog heterociklusa koji sadrži: ugljenikove atome i 1-4 heteroatoma koji su odabrani od N, NH, N(C1-4alkil), S(O)p, i O, gde pomenuti aril i heterociklus su po izboru supstituisani sa R<1>; prsten B je 5- do 6-člani heterociklus koji sadrži: ugljenikove atome i 1-4 heteroatoma koji su odabrani od N, NH, S(O)p, i O, gde pomenuti heterociklus je po izboru supstituisan sa R<10>; prsten C je 4- do 5-člani heterociklus koji sadrži: ugljenikove atome i 1-4 heteroatoma koji su odabrani od N, NR<9>, S(O)p, i O, gde pomenuti heterociklus je po izboru supstituisan sa R<2>; X<1>je odabran od C1-4alkilena, i C2-4alkenilena; po izboru jedan ili više ugljenikovih atoma pomenutog alkilena i alkenilena može biti zamenjeno sa O, S(O)p, NH, i N(C1-4alkil); R<1>je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od H, halogen, NO2, C1-6 alkil, OH, OMe, i CN; R<2>je odabran od H, =O, OH, NH2, CF3, halogena, i C1-4alkila po izboru supstituisanog sa OH; R<3>je odabran od H i C1-4 alkila; alternativno, R<2>i R<3>, zajedno sa atomima za koje su direktno ili indirektno vezani, formiraju prsten pri čemu je pomenuti prsten po izboru supstituisan sa =O; R<4>je odabran od H, C1-4 alkila, hidroksila, i C3-6 cikloalkila; R<5>je odabran od H i C1-4alkila; R<6>je odabran od H, halogena, C(O)OH, i C(O)O(C1-4 alkil); R<7>je odabran od H, C1-4 alkila, i CF3; alternativno, R<6>i R<7>zajedno su =O; R<8>je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od H, halogena, NHC(O)O-C1-4 alkila, CN, OH, O-C1-4 alkila; CF3, CO2H, CO2(C1-4 alkil), -CH2CO2H, -(CH2)2CO2H, -CH2CO2(C1-4 alkil), -(CH2)2CO2(C1-4alkil), NH2, -CH2NH2, -NHCO(C1-4alkil), -NHCO2(CH2)1-2O(C1-4alkil), -NHCO2(CH2)1-30(C1-4alkil), NHCO2CH2CH(C1-4alkil)O(C1-4alkil), -NHCO2(CH2)1-2OH, -NHCO2CH2CO2H, -CH2NHCO2(C1-4 alkil), -NHC(O)NH(C1-4 alkil), -NHC(O)N(C1-4 alkil)2, NHC(O)NH(C1-4alkil)N[5- do 6-člani heterociklus)], -NHSO2(C1-4alkil), -CONH2, -CONH(C1-4alkil), -CON(C1-4alkil)2, i -CH2CONH2; R<9>je odabran od H i C1-4 alkila; R<10>je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od H, halogena, CN, =O, OH, NH2, C3-6 cikloalkila, C1-4alkoksi, CF3, CH2OH, CO2H, CO2(C1-4alkil), i CONH;i p je, nezavisno u svakom slučaju, odabran od 0, 1, i 2; pod uslovom da su isključena sledeća jedinjenja
2. Jedinjenje patentnog zahteva 1 koje ima Formulu (II):

ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljiva so, ili solvat tog jedinjenja, gde: prsten A je odabran od arila i 6-članog heterociklusa koji sadrži: ugljenikove atome i 1-3 heteroatoma koji su odabrani od N, NH, i N(C1-4alkil); prsten B je odabran od imidazola, piridina, piridona, i piridazina; X<1>je odabran od CH2 i CH=CH; W i Q su svaki nezavisno odabrani od N, NR<9>, CR<2>, i CHR<2>; i R<2a>je odabran od H, NH2, i C1-4alkila.
3. Jedinjenje patentnog zahteva 2, ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljiva so, ili solvat tog jedinjenja, gde: prsten A je odabran od fenila i piperidina;

je nezavisno odabran od

R<10>je odabran od H, halogena, i CN.
4. Jedinjenje patentnog zahteva 3 koje ima Formulu (III):

ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljiva so, ili solvat tog jedinjenja, gde:

je nezavisno odabran od

W i Q su svaki nezavisno odabrani od N i CR<2>; R<1a>i R<1b>su svaki nezavisno odabrani od H i halogena; R<2>je nezavisno u svakom slučaju, odabran od H i C1-4alkila po izboru supstituisanog sa OH; R<2a>je odabran od H, NH2, i Me; R<4>je odabran od H i C1-4alkila; R<5>je odabran od H i C1-4 alkila; R<6>je nezavisno odabran od H, C(O)OH, i C(O)O(C1-4 alkil); R<7>je odabran od H, C1-4alkila, i CF3; alternativno, R<6>i R<7>zajedno su =O; i R<10>je odabran od H, halogen i CN.
5. Jedinjenje patentnog zahteva 4 koje ima Formulu (IV):

ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljiva so, ili solvat tog jedinjenja, gde: W i Q su svaki nezavisno odabrani od N i CH; R<1a>i R<1b>su svaki nezavisno odabrani od H, F, i Cl; R<4>je odabran od H, metil, etil, propil, izopropil, i butil; R<5>je H; R<8>je NHC(O)O-C1-4alkil; i R<10>je odabran od H i CN.
6. Jedinjenje patentnog zahteva 5 koje ima Formulu (V):

ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljiva so, ili solvat tog jedinjenja, gde: R<1a>je odabran od H i F; R<1b>je Cl; i R<4>je odabran od H, metil, etil, i izopropil.
7. Jedinjenje patentnog zahteva 4 koje ima Formulu (VI):

ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljiva so, ili solvat tog jedinjenja, gde:

je nezavisno odabran od

W je odabran od N i CH; Q je odabran od N i CH; R<1a>i R<1b>su svaki nezavisno odabrani od F i Cl; R<4>je odabran od H, metil, i etil; i R<8>je NHC(O)OMe.
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, odabrano iz grupe koja se sastoji od:

gde R je Ċ

ili

gde R je

ili

gde R je Ċ

gde R je
9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedno ili više jedinjenja u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-8 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
10. Jedinjenje iz bilo kog od patentnih zahteva 1-8, ili stereoizomer, tautomer, ili farmaceutski prihvatljiva so tog jedinjenja, za primenu u lečenju.
11. Terapijski efikasna količina jedinjenja iz bilo kog od patentnih zahteva 1-8, ili stereoizomera, tautomera, ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja, za primenu u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskog poremećaja.
12. Terapijski efikasna količina jedinjenja bilo kog od patentnih zahteva 1-8, ili stereoizomera, tautomera, ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja, za primenu prema patentnom zahtevu 11, gde tromboembolijski poremećaj je odabran iz grupe koja se sastoji od arterijskih kardiovaskularnih tromboembolijskih poremećaja, venskih kardiovaskularnih tromboembolijskih poremećaja i tromboembolijskih poremećaja u komorama srca ili u perifernoj cirkulaciji.
13. Terapijski efikasna količina jedinjenja bilo kog od patentnih zahteva 1-8, ili stereoizomera, tautomera, ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja, za primenu prema patentnom zahtevu 12, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, infarkta miokarda, prolaznog ishemijskog napada, infarkta, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, duboke venske tromboze, tromboflebitisa, arterijske embolije, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralne embolije, embolije bubrega, plućne embolije i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja pospešuje trombozu.