RS56568B1 - Upotreba melatonina za lečenje i/ili prevenciju mokozitisa - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na primenu kompozicije koja sadrži melatonin (N-acetil-5-metoksitriptamin) ili njegove derivate u koncentraciji od 2.5% do 5% masa/zapremina (w/v) za pripremanje farmaceutske kompozicije za lečenje i/ili prevenciju mukozitisa. Mukozitis je prvenstveno uzrokovan radioterapijom i/ili hemoterapijom. Pronalazak bi stoga mogao biti obuhvaćen oblašću medicine.

Stanje tehnike

[0002] Lečenje malignih tumora radioterapijom ili hemoterapijom, ili kombinacijom ove dve terapije je sve efikasnije ali je povezano sa kratkoročnim i dugoročnim neželjenim efektima. Među ovim neželjenim efektima su poremećaji funkcije i integriteta oralne mukoze. Posledice uključuju ozbiljne ulceracije (mukozitis) i gljivične superinfekcije usta (kandidijaza, thrush). Ove komplikacije izazvane bolešću i njenim lečenjem uključuju bol pri gutanju, disfagiju, neuhranjenost, odlaganja administracije hemoterapije, prekide u šemi radioterapije, gubitak efikasnosti onkoloških tretmana, produženi boravak u bolnici, povišene troškove i kod nekih pacijenata, potencijalno smrtonosne infekcije (sepsa).

[0003] Mukozitis je inflamatorna reakcija koja utiče na čitav gastrointestinalni trakt, od usta do anusa, i to je jedan od glavnih neželjenih efekata hemoterapije i/ili radioterapije i transplantacije koštane srži. Mukozitis može biti izazvan hemijskim agensima kao što su kortikoidi, imunosupresivni lekovi (azatioprin, ciklosporin A), lekovi koji izazivaju kserostomiju, anksiolitici, antidepresivi, anti-histaminici, simpatomimetički stimulansi, antiparkinsonici, antipsihotici, gingivalni tretmani, hidantoini ili antibiotici širokog spektra.

[0004] Oralni mukozitis (ili oromukozitis) indukovan jonizujućim zračenjem (takozvani zračenjem indukovani oralni mukozitis) i hemoterapijskim agensima je trenutno jedan od glavnih problema terapije kod pacijenata sa karcinomom. 40% pacijenata koji su primali hemoterapiju i/ili radioterapiju, i do 76% pacijenata sa transplantom koštane srži, razvija bukalne probleme, najčešći bukalni problemi su: mukozitis, lokalna infekcija, bol i krvarenje. 97% pacijenata se kancerom glave i vrata razvijaju neki stepen mukozitisa, a 100% pacijenata koji su duže vreme podvrgnuti frakcioniranoj radioterapiji ga takođe razvija (Trotti A et al. Radiotherapy and Oncology 2003, 66:253-262). Šteta prouzrokovana jonizujućim zračenjem nastaje usled direktnih i indirektnih mehanizama. Direktni efekti nastaju usled mutagenog dejstva zračenja u dezoksiribonukleinskoj kiselini (DNK), dok su indirektni mehanizmi (oko 70% ovih mehanizama) usled dejstva zračenja na molekule vode, koje dovodi do formiranja slobodnih radikala (Trotti A et al. Radiotherapy and Oncology 2003, 66:253-262).

[0005] Prema podacima Svetske zdravstvene organizacije (SZO), mukozitis se na osnovu simptoma klasifikuje u različite stepene. Stepen 0: normalno; stepen 1: generalizovani eritem, roze, bezbolna mukoza sa obilnom salivom, normalan glas; stepen 2: eritem, blage ulceracije, moguće uzimanje čvrste hrane; stepen 3: eritem, edem ili rasprostranjene ulceracije, moguće uzimanje tečne hrane, bolan i otežan govor; stepen 4: veoma rasprostranjene ulceracije, krvarenje desni, infekcije, bez salive, veoma jak bol, enteralna ili parenteralna podrška.

[0006] Mukozitis nastaje kao posledica niza bioloških događaja koji počinju u submukozi i napreduju ka epitelijumu i uobičajeni su kod mukozitisa različitih etiologija. Opisano je da se kod radioterapije i hemoterapije u prvoj fazi javlja porast reaktivnih kiseoničnih vrsta (ROS) i oštećenje DNK. Aktiviraju se transkripcioni faktori kao što je nuklearni faktor kapa-B (NF-kB). Postoji porast proizvodnje proinflamatornih citokina, uključujući interleukin-1 (IL-1) i faktor nekroze tumora alfa (TNF-α), koji izaziva apoptozu i oštećenje ćelija. Ova inflamatorna reakcija pruzrokuje oštećenje mukoze sa posledičnom pojavom ulcera. Ove ćelije će biti kolonizovane od strane bakterija, i aktiviraju se makrofagi koji proizvode više citokina koji su odgovorni za oštećenja svih tkiva. U celom ovom procesu postoji veliki porast slobodnih radikala koji doprinose povećanju inflamatornih procesa i oštećenja ćelija. U drugoj fazi, radioterapija i/ili hemoterapija inhibiraju replikaciju epitelnih ćelija, smanjujući obnavljanje ćelija. U trećoj fazi, bakterijska kolonizacija i ulcerisana površina se i dalje povećavaju, olakšavajući početak sistemske infekcije (Volpato LE et al. Mol Cancer Ther 2007, 6:3122-3130). Mukozitis je inflamatorna patologija koja ne reaguje na lečenje poznatim anti-inflamatornim lekovima. Mukozitis je proces u kojem bi mogao da interveniše biohemijski mehanizam koji se razlikuje od ostalih upalnih procesa, kao što je inflamazomski put, (Escames G, et al. Hum Genet, Jul 2011, DOI 10.1007/ s00439-011-1057). Trenutno ne postoji tretman koji vrši kompletnu reverziju mukozitisa ili koji potpuno sprečava njegovu pojavu.

[0007] Do sada je korišćen veliki broj terapija za lečenje i prevenciju mukozitisa koje nisu pokazale rezultate kompletne reverzije mukozitisa, na primer, opisano je lečenje pomoću aciklovira, benzidamina, beta-karotena, kalcijum fosfata, ispiranje alopurinolom, aloe vere, hlorheksidina, kamilice, etopozida, folne kiseline, glutamina, faktor stimulacije kolonija granulocita (GM-CSF), nistatina, misonidazola, povidona, pilokarpina, hematotoksifilina, prednizona ili sukralfata, (Worthington HV et al. Cochrane Database Syst Rev. October 2007, 17; (4), DOI: 10.1002/ 14651858.CD000978.pub3; Clarkson JE et al., Cochrane Database Syst Rev. August 2010, 4;(8)), DOI:10.1002/14651858.CD001973.pub4.

[0008] Prema tome postoji potreba za sredstvom koje omogućava kompletnu reverziju i prevenciju mukozitisa, posebno kod pacijenata podvrgnutih radioterapiji i/ili hemoterapiji.

Opis pronalaska

[0009] Predmetni pronalazak opisuje kompoziciju u obliku gela koja sadrži melatonin ili njegove derivate u koncentraciji od 2.5 do 5% w/v za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji mukozitisa, pri čemu pomenuta kompozicija u obliku gela treba da se administrira topikalno na površinu oralne sluznice.

[0010] Prikazani su in vivo rezultati zaštite oralne sluznice od oštećenja prouzrokovanog radioterapijom ili hemoterapijom. Kompozicija gela iz pronalaska je korisna za zaštitu sluzokože usta kao i gastrointestinalne sluzokože. Predmetni pronalazak pokazuje da niže koncentracije od onih opisanih u kompoziciji iz pronalaska nisu u stanju da ostvare potpunu reverziju mukozitisa, dok su koncentracije jednake ili veće od 3% w/v sposobne za lečenje i kompletnu reverziju mukozitisa prouzrokovanog jonizujućim zračenjem. Prikazani su uporedni rezultati različitih puteva administracije, a topikalni put je bio put koji nudi najbolju zaštitu protiv oralnog mukozitisa.

[0011] Na osnovu opisanog, predmetni pronalazak se odnosi na kompoziciju u obliku gela koja sadrži melatonin ili njegov derivat u koncentraciji od 2.5% do 5% w/v za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji mukozitisa, naznačen time što se pomenuta gel kompozicija administrira topikalno na površinu oralne sluznice. U daljem tekstu ona će biti označena sa "kompozicija iz pronalaska".

[0012] "Koncentracija od 2.5 do 5% w/v" podrazumeva kompoziciju koja sadrži između 2.5 do 5 grama melatonina ili njegovog derivata u 100 ml finalne kompozicije. Skrac?enica "w/v" se odnosi na masa/ zapremina ili masa/zapremina (m/v).

[0013] Poželjno izvođenje se odnosi na kompoziciju u obliku gela za upotrebu pri čemu je koncentracija melatonina ili njegovog derivata 3% w/v. Prema tome, pomenuti poželjni sastav se odnosi na kompoziciju koja sadrži 3 grama melatonina ili njegovog derivata u 100 ml ukupne zapremine kompozicije. U daljem tekstu će biti nazivan kao "poželjan sastav iz pronalaska".

[0014] Bilo koje jedinjenje sadržano u opštoj formuli I, kao i njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili prolekovi koji su korisni za lečenje i/ili sprečavanje mukozitisa, se smatra kao "melatonin ili njegov derivat".

[0015] Jedinjenja opšte formule I se odnose na:

gde:

"n" je ceo broj između 1 i 4;

R1i R3su identične ili različite, linearne ili razgranate (C1-C4) alkil grupe; i

R2je vodonik, linearna ili razgranata C1-C4alkil, -C(=O)O-Ra grupa ili -C(=O)-N(H)-Ra grupa, pri čemu Ra predstavlja linearnu ili razgranatu C1-C4alkil grupu.

[0016] U ovom pronalasku, termin "alkil" se odnosi na linearne ili razgranate alifatične lance sa 1 do 4 atoma ugljenika, na primer, metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, terc-butil, sek-butil, npentil, itd. Alkil grupa poželjno ima između 1 i 2 atoma ugljenika. Poželjnije je da bude metil grupa.

[0017] U poželjnoj realizaciji ovog pronalaska, R1i R3su metil grupa. Još poželjnije n je 1, a još poželjnije da R2predstavlja vodonik.

[0018] Izraz "melatonin" se odnosi na N-acetil-5-metoksitriptamin, u literaturi takođe poznat kao melatonin, melatol, melovin, cirkadin, regulin, acetamid, N-acetil-metoksitriptamin, 5-metoksi-N-acetiltriptamin,N-[2-(5-metoksi-1H-indol-3-il)etil]acetamid ili N-[2-(5-metoksiindol-3-il)etil] acetamid ili kada su R1i R3metil grupa u jedinjenju opšte formule (l), n je 1 a R2je vodonik. CAS Registarski broj melatonina je 73-31-4.

[0019] Melatonin je endogeni neurohormon koji fiziološki proizvode životinje, uključujući ljude, pomoću epifize (epiphysis cerebri) i drugih organa, poput gastrointestinalnog trakta, retine, limfocita i ćelija koštane srži, na primer.

[0020] Melatonin se proizvodi kod životinja, uključujući ljude, od serotonin (5-hidroksitriptamin, 5-HT), koji opet potiče iz aminokiseline triptofana. Prema tome, ovaj pronalazak se takođe odnosi na primenu kompozicije koja sadrži neki od prekursora melatonina (5-HT, triptofan ili posredne metabolite kao što je n-acetilserotonin ili NAS), u dovoljnoj koncentraciji tako da se pretvaraju u melatonin u ljudskom organizmu pri koncentracijama opisanim u predmetnom pronalasku, za pripremanje farmaceutske kompozicije za lečenje i/ili prevenciju mukozitisa.

[0021] Prema tome, predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutski prihvatljive soli melatonina ili njegovih derivata koje mogu biti generisane pomoću hemijskih metoda poznatih stručnjacima u ovoj oblasti, na primer, pomoću reakcije sa kiselinom u vodi ili u organskom rastvaraču ili u njihovoj smeši. Etar, etil acetat, etanol, izopropanol ili acetonitril se mogu koristiti kao organski rastvarači. Primeri kiselih adicionih soli obuhvataju adicione soli mineralnih kiselina kao što su, na primer, hidrohlorid, hidrobromid, hidrojodid, sulfat, nitrat, fosfat i adicione soli organskih kiselina, kao što su, na primer, acetat, maleat, fumarat, citrat, oksalat, sukcinat, tartrat, malat, mandelat, metansulfonat i p-toluensulfonat.

[0022] Kako se ovde koristi, izraz "prolek" se odnosi na hemijsko jedinjenje koje je prošlo hemijsku derivaciju, na primer supstituciju ili adiciju adicione hemijske grupe, za izmenu bilo koje njegove fizičko-hemijske osobine, kao što su rastvorljivost ili bioraspoloživost, ali bez modifikacije tehničkih karakteristika originalnog molekula. Prolek može biti na primer neki estarski, etarski ili amidni derivat. Bioraspoloživost se odnosi na njegovu dostupnost u određenom biološkom odeljku.

[0023] Prema ovom pronalasku, izraz "solvat" treba razumeti kao derivat melatonina koji ima drugi molekul na primer polarni rastvarač, vezan nekovalentnom vezom. Primeri takvih solvata uključuju hidrate i alkoholate, na primer metanolate.

[0024] Soli, solvati i prolekovi mogu biti pripremljeni pomoću postupaka koji su poznati u struci. Farmaceutski neprihvatljive soli, solvati ili prolekovi su takođe u okviru obima ovog pronalaska pošto mogu biti korisni za dobijanje farmaceutski prihvatljivih soli, solvata ili prolekova.

[0025] Kompozicija prema pronalasku ili poželjna kompozicija prema pronalasku se može odnositi na kompoziciju koja sadrži funkcionalni biološki ekvivalent melatonina u koncentraciji koja je ekvivalentna onoj opisanoj u kompozicijama iz pronalaska.

[0026] Kako se ovde koristi, termin "funkcionalni biološki ekvivalent" ili "bioekvivalentna varijabla" se odnosi na molekul sa istom funkcijom kao i opisani molekul koji može pokazivati neznatne varijacije u odnosu na opisani molekul bez navedenih varijacija, koji doprinosi bilo kakvom dodatnom tehničkom uticaju na pomenuti molekul. Ovaj pronalazak se stoga odnosi na varijante melatonina koje imaju istu funkciju pokazujući male varijacije bez da pomenute varijacije doprinose bilo kom dodatnom tehničkom delovanju melatonina.

[0027] "Koncentracija koja je ekvivalentna" podrazumeva koncentraciju neophodnu za funkcionalni biološki ekvivalent melatonina koja proizvodi isti efekat kao onaj opisan u predmetnom pronalasku za kompoziciju iz pronalaska.

[0028] Melatonin se proizvodi i u biljkama. Na primer, prisustvo melatonina je opisano u algama, jestivim biljkama, žitaricama, voću, semenju, korenju, stabljikama, lišću i lekovitom bilju (Paredes SD et al., J Exp Bot 20089, 60(1):57-69). Prisustvo melatonina je opisano u kakau, grožđu, paradajzu, čaju, zelenom čaju, algama, žitaricama i maslinama, na primer. Izvor melatonina kompozicije prema ovom pronalasku mogu biti biljke. Melatonin iz biljnog izvora (takođe poznat kao fitomelatonin) se za ovu svrhu može dobiti bilo kojom metodom poznatom stručnjaku u ovoj oblasti.

[0029] Izvor melatonina koji se koristi u kompoziciji iz ovog pronalaska takođe može biti sintetički. Melatonin se za ovu svrhu može hemijski sintetizovati pomoću tehnika koje su poznate stručnjaku u tehnici.

[0030] Termin "farmaceutska kompozicija", ili "medicinski proizvod", se odnosi na bilo koju supstancu koja se koristi za prevenciju, dijagnostiku, ublažavanje, tretiranje ili lečenje bolesti kod ljudi ili životinja. U kontekstu predmetnog pronalaska, odnosi se na preparat koji je sposoban za lečenje i/ili prevenciju mukozitisa.

[0031] U predmetnom pronalasku, "lečenje i/ili prevencija" se odnosi kako na terapeutsko i profilaktičko lečenje tako i na preventivne mere. Te situacije koje se mogu lečiti uključuju one koje su već povezane sa promenama kao i one u kojima su promene sprečene. "Promena" je bilo koje stanje koje bi imalo korist od tretmana sa kompozicijom iz ovog pronalaska, kako je ovde opisano.

[0032] Kako se ovde koristi, termin "mukozitis" se uglavnom odnosi na bolest koja se javlja kod upale sluzokože gastrointestinalnog trakta, tj. usta, ždrela, jednjaka, želuca i sluzokože crevna, koju karakteriše uticaj na integritet i funkciju sluznice, koja može dovesti do ulceracije i infekcije na njoj. Mukozitis može biti uzrokovan raznim etiologijama, među kojima su radioterapija, hemoterapija, transplantacija koštane srži ili tretmani sa lekovima.

[0033] Poželjna realizacija se odnosi na kompoziciju u obliku gela za primenu u slučaju kada je mukozitis izazvan radioterapijom i/ili hemoterapijom.

[0034] Pod radioterapijom se podrazumeva tretman zasnovan na upotrebi jonizujućeg zračenja koje može da jonizuje materiju, kao što su x-zraci ili radioaktivnost, na primer, koje uključuje gama zrake i alfa čestice. Predmetni pronalazak se odnosi na tretman jonizujućim zračenjem koji se koristi u lečenju kancera, uključujući bilo koji tretman za koji stručnjaci u ovoj oblasti znaju da generiše mukozitis.

[0035] Pod hemoterapijom se podrazumeva tretman zasnovan na administraciji agensa koja dovodi do inhibicije rasta tumora i uključuje bilo koji tretman za koji stručnjaci u ovoj oblasti znaju da generiše mukozitis. Na primer, hemijski agens se može odnositi na metotreksat, prokarbazin, tioguanin, merkaptopurin, citarabin, fluorouracil, floksuridin, vinblastin, vinkristin, daktinomicin, daunorubicin, doksorubicin, mitramicin, bleomicin, asparaginazu ili irinotekan.

[0036] Sledeća poželjna varijanta se odnosi na kompoziciju u obliku gela za primenu u slučaju kada mukozitis predstavlja oralni, faringealni, ezofagealni, želudačni ili intestinalni mukozitis. Sledeća poželjna varijanta se odnosi na kompoziciju u obliku gela za primenu u slučaju kada je mukozitis oralni mukozitis.

[0037] Sledeća poželjna varijanta se odnosi na kompoziciju u obliku gela za primenu u slučaju mukozitisa kod ljudi.

[0038] Sledeća poželjna varijanta se odnosi na kompoziciju u obliku gela za primenu u slučaju kada kompozicija sadrži najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens ili adjuvans.

[0039] Termin "ekscipijens" se odnosi na supstancu koja pomaže apsorpciju farmaceutske kompozicije ili leka prema ovom pronalasku, stabilizuje pomenutu farmaceutsku kompoziciju ili pomaže u pripremi istog u smislu davanja konzistentnosti ili obezbeđivanja ukusa koji je čine prihvatljivijom. Tako, ekscipijensi mogu imati funkciju povezivanja sastojaka, kao što su skrob, šećeri ili celuloza, na primer; funkciju zaslađivanja; funkciju bojenja; funkciju zaštite leka tako što će ga izolovati od vazduha i/ili vlage, na primer; funkciju punila za pilule, kapsule ili bilo kojeg drugog pojavnog oblika, poput dvobaznog kalcijum fosfata, na primer; funkciju dezintegracije za lakše rastvaranje komponenata i njihovu apsorpciju u crevima, ne isključujući ekscipijense drugog tipa ne pomenute u ovom paragrafu. Esencija, kao što je na primer, cimet, limun, narandža, mandarina ili vanila može biti dodata kako bi kompozicija iz pronalaska imala prijatan ukus.

[0040] Izraz "adjuvans" se odnosi na bilo koju supstancu koja pojačava odgovor lekovite supstance. U ovom pronalasku, pomenuti termin se odnosi na bilo koju supstancu koja poboljšava delovanje kompozicije iz ovog pronalaska; može se odnositi na bilo koji adjuvans poznat stručnjaku u ovoj oblasti.

[0041] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" se odnosi na predmetno jedinjenje koje je dozvoljeno i za koje je procenjeno da ne oštećuje organizme u koje se administrira.

[0042] Sledeća poželjna varijanta se odnosi na kompoziciju u obliku gela za upotrebu u slučaju kada kompozicija sadrži i agens za želiranje. Poželjan agens za želiranje je izabran sa liste koja sadrži polietilen i polipropilen kopolimer, celulozu i guar gumu. Ovo se odnosi pre svega na polietilen i polipropilen kopolimer. Na osnovu onoga što je ovde opisano, jedna poželjna varijanta se odnosi na kompoziciju u obliku gela za upotrebu u slučaju kada je kompozicija gel (ili se označava kao "hidrogel").

[0043] Termin "agens za želiranje" se odnosi na supstancu koja formira gel, odnosno trodimenzionalnu mrežu formiranu pomoću agensa za želiranje i obično sadrži tečnu fazu. Agensi za želiranje koji mogu biti korišćeni za pripremanje farmaceutske kompozicije, mogu biti oni koji su poznati stručnjaku u ovoj oblasti. Na primer, osim polietilena i polipropilen kopolimera, mogu se koristiti poloksamer kopolimeri (ili poloksameri), npr. agensi zvani Pluronic?, uključujući Pluronic? F127 (CAS registarski broj 9003-11-6) ili Pluronic? F127NF.

[0044] Sledeća poželjna varijanta se odnosi na kompoziciju u obliku gela za primenu kada kompozicija sadrži bar jedan konzervans.

[0045] Pod konzervansom se podrazumeva supstanca koja održava svojstva medicinskog proizvoda inhibiranjem kontaminacije mikrobima; konzervans može biti jonski ili nejonski. Konzervans koji se koristi neće biti otrovan, biće hemijski stabilan i kompatibilan sa melatoninom. Kao konzervansi se mogu koristiti konzervansi poznati u stanju tehnike, na primer, konzervans se može odnositi na benzojevu kiselinu, natrijum benzoat, askorbinsku kiselinu, kalijum sorbat, metilparaben, etilparaben ili butilparaben. "Mikobi" se odnosi na bilo koju ćeliju koja može da raste i da se razmnožava u kompoziciji iz pronalaska, na primer bakterije, gljivice i kvasci.

[0046] Sledeća poželjna varijanta se odnosi na kompoziciju u obliku gela za primenu u slučaju kada preparat sadrži i antioksidant.

[0047] Izraz "antioksidant" se odnosi na supstancu koja je sposobna da odloži ili spreči oksidaciju. Antioksidantni agensi poznati u stanju tehnike se mogu koristiti kao antioksidantni agensi, na primer tokoferol, askorbinska kiselina, natrijum askorbat, vinska kiselina, butilhidroksianizol, limunska kiselina, vitamin A ili vitamin E.

[0048] Sledeća poželjna varijanta se odnosi na kompoziciju u obliku gela za primenu u slučaju kada preparat sadrži najmanje još jednu lekovitu supstancu.

[0049] Kako se ovde koriste, termini "lekovita supstanca", "aktivna supstanca", "farmaceutski aktivna supstanca", "aktivni sastojak" ili "farmaceutski aktivni sastojak" se odnosi na bilo koju komponentu koja potencijalno može da obezbedi farmakološku aktivnost ili drugi različit efekat na dijagnozu, ublažavanje, lečenje ili prevenciju bolesti ili koja može da utiče na strukturu ili funkciju tela ljudskih bića ili drugih životinja. Na primer, može se koristiti alopurinol.

[0050] Sledeća poželjna varijanta se odnosi na kompoziciju u obliku gela za upotrebu u slučaju kada kompozicija sadrži i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0051] "Farmaceutski prihvatljiv nosač" ili farmakološki prihvatljiv nosač se odnosi na supstance ili kombinaciju supstanci poznatih u farmaceutskom sektoru koje se koriste za pripremu farmaceutskih doznih oblika i uključuju, ali se ne ograničavaju na čvrste materije, tečnosti, rastvarače ili surfaktante. Nosač može biti inertna supstanca ili može imati dejstvo slično dejstvu bilo kojeg od jedinjenja iz ovog pronalaska. Funkcija nosača je da olakša inkorporaciju ekspresije proizvoda iz ovog pronalaska, kao i drugih jedinjenja, da omogući bolje doziranje i administraciju ili da konzistenciju i formu farmaceutskoj kompoziciji. Farmaceutski prihvatljivi nosači koji se mogu koristiti u ovom pronalasku mogu biti oni koji su poznati stručnjaku, na primer, lizozomi, milikapsule, mikrokapsule, nanokapsule, spužve, milisfere, mikrosfere, nanosfere, sitne čestice, mikročestice i nanočestice.

[0052] Farmaceutska kompozicija iz pronalaska se administrira životinji i poželjno sisaru, po mogućnosti čoveku, topikalnom administracijom na površinu oralne sluznice.

[0053] Na osnovu onoga što je ovde opisano, otkrivena je kompozicija u obliku gela za upotrebu pri čemu je kompozicija u doznom obliku, pogodnom za topikalnu administraciju na površinu oralne sluznice.

[0054] Izraz "topikalna administracija" u predmetnom pronalasku odnosi se na preparat koji se primenjuje na površinu sluznice, poželjno na površinu oralne sluznice.

[0055] Doza za administraciju terapeutski efikasne količine zavisi od niza faktora, kao što su starost, težina, rod ili tolerancija životinje, poželjno sisara, poželjno čoveka, na primer. U smislu u kome se ovde koristi, izraz "terapeutski efikasna količina" se odnosi na farmaceutski efikasnu količinu kompozicije koja proizvodi željeni efekat, a ona će generalno biti određena, između ostalog, u zavisnosti od tipičnih karakteristika pomenute farmaceutske kompozicije i očekivanog terapeutskog efekta.

[0056] Poželjna realizacija opisuje sastav gela za upotrebu pri čemu primenjena dnevna doza iznosi između 37.5 mg i 75 mg. Još poželjnija realizacija opisuje sastav gela za upotrebu u kojoj je primenjena dnevna doza oko 45 mg. Druga još poželjnija realizacija opisuje sastav gela za upotrebu u kojoj se doza primenjuje u režimu od 15 mg 3 puta dnevno.

[0057] U opisu i zahtevima reč "sadrži" i njene varijante ne zahtevaju da se isključe druge tehničke karakteristike, aditivi, komponente ili koraci. Osobe sa iskustvom u tehnici, će druge ciljeve, prednosti i karakteristike pronalaska prepoznati delom iz opisa a delom iz prakse pronalaska. Sledeći primeri i crteži su dati kao ilustracija i ne treba da ograniče ovaj pronalazak.

Kratak Opis Crte ž a

[0058] Slika 1. Nivoi oksidativnog stresa u homogenatu jezika pacova. Ona prikazuje rezultate indeksa lipidne peroksidacije (LPO) kod kontrolnih pacova, ozračenih pacova i ozračenih pacova tretiranih sa 1%, 3% ili 5% w/v melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji. Kontrolna grupa (C); ozračena grupa (IR); ozračene grupe tretirane sa 1%, 3% ili 5% melatonin gelom. (IR melatonin). MDA malonildialdehid; 4-HDA, hidroksialkenal; **p<0.01 i ***p<0.001 u odnosu na C;<###>p<0.001 u odnosu na IR.

[0059] Slika 2. Nivoi oksidativnog stresa u mitohondrijama jezika pacova. Ona prikazuje rezultate za indeks lipidne peroksidacije (LPO) kod kontrolnih pacova, ozračenih pacova i ozračenih pacova tretiranih sa 1%, 3% ili 5% w/v melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji. Kontrolna grupa (C); ozračena grupa (IR); ozračene grupe tretirane sa 1%, 3% ili 5% melatonin gelom (IR melatonin). MDA malonildialdehid; 4-HDA, hidroksialkenal; **p < 0.01 i ***p < 0.001 u odnosu na C;<###>p <0.001 u odnosu na IR.

[0060] Slika 3. Nivoi glutationa u jeziku pacova. Ona prikazuje rezultate nivoa glutationa kod kontrolnih pacova, ozračenih pacova i ozračenih pacova tretiranih sa 1%, 3% ili 5% w/v melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji. A, smanjeni nivoi glutationa (GSH); B, oksidovan (GSSG);

C, ukupan glutation (GT); D, (GSSG/GSH) odnos u mitohondrijama jezika kod kontrolnih pacova (C) ozračenih pacova (IR), i pacova tretiranih sa 1%, 3% i 5% melatoninom (IR melatonin). ***p < 0.001 u odnosu na C;<###>p < 0.001 u odnosu na IR.

[0061] Slika 4. Aktivnost glutation peroksidaze i glutation reduktaze u mitohondrijama jezika pacova. Ona prikazuje rezultate aktivnosti: A, glutation peroksidaza (GPx); i B, glutation reduktaze (GRd), kod kontrolnih pacova, ozračenih pacova i ozračenih pacova tretiranih sa 1%, 3% ili 5% melatonin gelom. Kontrolni pacovi (C), ozračeni pacovi (IR) i ozračeni pacovi tretirani sa 1%, 3% i 5% w/v melatonin gelom topikalnim putem u usnoj šupljini (IR melatonin). **p < 0.01 i ***p < 0.001 u odnosu na C;<###>p < 0.001 u odnosu na IR.

[0062] Slika 5. Makroskopski izgled jezika pacova nakon tretmana sa kompozicijom iz pronalaska. Ona prikazuje makroskopske rezultate jezika kontrolnih pacova, ozračenih pacova i ozračenih pacova tretiranih sa 1%, 3% ili 5% w/v melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji. Kontrolni pacovi, ozračeni pacovi (IR) i ozračeni pacovi tretirani sa 1%, 3% i 5% melatonin gelom (IR 1% MT; IR 3% MT i IR 5% MT, respektivno).

[0063] Slika 6. Poređenje između topikalne administracije i intraperitonealne administracije u pogledu nivoa glutationa u jeziku pacova. Ona prikazuje rezultate za nivoe glutationa kontrolnih pacova, ozračenih pacova i ozračenih pacova tretiranih sa 3% w/v melatoninom topikalnim putem ili 3% w/v melatoninom intraperitonealnim (IP) putem. A, smanjeni nivoi glutationa (GSH); B, nivoi oksidovanog glutationa (GSSG); C, nivoi ukupnog glutationa (GT); D, i odnos GSSG/GSH u mitohondrijama jezika pacova. Kontrolni pacovi (C), ozračeni pacovi (IR), pacovi tretirani sa 3% melatonin gelom (IR 3%), i pacovi tretirani melatoninom i.p. putem (IR IP). ***p < 0.001 u odnosu na C;<##>p < 0.01 i<###>p < 0.001 u odnosu na IR.

[0064] Slika 7. Aktivnost i ekspresija GPx u jeziku pacova kod ozračenih pacova tretiranih melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji i melatoninom intraperitonealno. A, GPx aktivnost; B, Western blot denzitometrijska analiza GPx. C, Western blot slika GPx u mitohondrijama jezika kontrolnih pacova (C), ozračenih pacova (IR), pacova tretiranih 3% w/v melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji (IR 3%), i tretiranih 3% w/v melatoninom i.p. putem (IC IP). **p < 0.01 i ***p < 0.05 u odnosu na C;<##>p < 0.01 i<###>p < 0.001 u odnosu na IR.

[0065] Slika. 8. Komparativna aktivnost i ekspresija GRd u jeziku pacova kod ozračenih pacova tretiranih melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji i melatoninom intraperitonealno. A, GRd aktivnost; B, Western blot denzitometrijska analiza GRd i C, Western blot slika GRd u mitohondrijama jezika kontrolnih pacova (C), ozračenih pacova (IR), pacova tretiranih sa 3% w/v melatonin gelom topikalnim putem u usnoj šupljini (IR 3%), i tretiranih sa 3% w/v melatoninom i.p. putem (IR IP). *** p < 0.001 u odnosu na C;<#>p < 0.05 i<###>p < 0.001 u odnosu na IR.

[0066] Slika 9. Komparativna aktivnost kompleksa respiratornog lanca CI, CII, CIII i CIV u mitohondrijama jezika ozračenih pacova tretiranih melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji i melatoninom intraperitonealno. A, kompleks I; B, kompleks II; C, kompleks III; D, kompleks IV. Kontrolni pacovi (C), ozračeni pacovi (IR), pacovi tretirani sa 3% w/v melatonin gelom primenom topikalnog puta u usnoj duplji (IR 3%), i tretiran 3% w/v melatoninom i.p. putem (IR IP). *P < 0.05, ** p < 0.01, i *** p < 0.001 u odnosu na C;<#>p < 0.05, i<###>p <0.001 u odnosu na IR.

[0067] Slika 10. Uporedni rezultati ekspresije mitohondrijskih kompleksa respiratornog lanca CI, CIII, CIV i CV u jeziku pomoću Western blota kod ozračenih pacova tretiranih sa 3% melatonin gelom i melatoninom intraperitonealno. A, denzitometrija Western blot traka koja odgovara kompleksu I; B, kompleksu III; C kompleksu IV; D, kompleksu V. E. Western blot slika koja odgovara kompleksima I, III, IV i V. Kontrolni pacovi (C), ozračeni pacovi (IR), pacovi tretirani sa 3% w/v melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji (IR 3%), i tretirani sa 3% w/v melatoninom i.p. putem (IR IP). *P < 0.05, **p < 0.01, i ***p < 0.001 u odnosu na C;<#>p < 0.05 i<###>p < 0.001 u odnosu na IR.

[0068] Slika 11. Poređenje između nivoa melatonina u mitohondrijama jezika pacova kod ozračenih pacova tretiranih melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji i melatoninom intraperitonealno. Kontrolni pacovi (C), ozračeni pacovi (IR), ozračeni pacovi tretirani sa 3% w/v melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji (IR 3% Amt), i ozračeni pacovi tretirani sa 3% w/v melatoninom administriranim i.p. putem (IC IP). ***p < 0.001 u odnosu na C;<###>p < 0.001 u odnosu na IR.

[0069] Slika 12. Makroskopski izgled jezika pacova nakon tretmana sa kompozicijom iz pronalaska intraperitonealnim putem za ilustrativne svrhe. Prikazan je makroskopski rezultat jezika pacova kod ozračenog pacova tretiranog sa 3% w/v melatoninom intraperitonealno.

[0070] Slika 13. Poređenje između ekspresija za PGC-1α, NRF1 i TFAM pomoću Western blota u homogenatu jezika pacova kod ozračenih pacova tretiranih melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji i melatoninom intraperitonealno. A, denzitometrija Western blot traka koja odgovara PGC-1α; B, za NRF1; C, za TFAM; D, Western blot slika koja odgovara PGC-1α, NRF1 i TFAM. Kontrolni pacovi (C), ozračeni pacovi (IR), pacovi tretirani sa 3% melatonin gelom (+ 3% aMT) i tretirani melatoninom i.p. putem (+ IP aMT). *P < 0.05, **p < 0.01 i ***p < 0.001 u odnosu na C;<###>p < 0.001 u odnosu na IR.

[0071] Slika 14. Poređenje između ekspresije NFkB pomoću Western blota u jeziku pacova kod ozračenih pacova tretiranih melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji i melatoninom intraperitonealno. A, denzitometrija Western blot traka koja odgovara NFkB u citosolu; B, NFkB u jedru, C, Western blot slika koja odgovara NFkB u citosolu i NFkB u jezgru. Kontrolni pacovi (C), ozračeni pacovi (IR), pacovi tretirani sa 3% melatonin gelom (+ 3% aMT), i tretirani melatoninom i.p. putem (+ IP aMT). ***p < 0.001 i ** p < 0.01 u odnosu na C;<##>p < 0.01 u odnosu na IR.

[0072] Slika 15. Poređenje između ekspresije NLRP3, ASC i kaspaze 1 pomoću Western blota u homogenatu jezika pacova kod ozračenih pacova tretiranih melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji i melatoninom intraperitonealno. A, denzitometrija Western blot traka za NLRP3; B, za ASC; C, za kaspazu 1 (Casp 1.); D, Western blot slika koja odgovara za NLRP3, ASC i kaspazu 1. Kontrolni pacovi (C) ozračeni pacovi (IR), pacovi tretirani sa 3% melatonin gelom (+ 3% aMT), i tretirani melatoninom i.p. putem (+ IP aMT). ***p < 0.001 u odnosu na C;<#>p < 0.05 u odnosu na IR.

[0073] Slika 16. Poređenje između ekspresije IL-1 i TNF-a pomoću Western blota u homogenatu jezika pacova kod ozračenih pacova tretiranih melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji i melatoninom intraperitonealno. A, denzitometrija Western blot traka odgovara za IL-1; B, za TNF-a; C, Western blot slika koja odgovara IL-1 i TNF-a. Kontrolni pacovi (C), ozračeni pacovi (IR), pacovi tretirani sa 3% melatonin gelom (+ 3% aMT), i tretirani melatoninom i.p. putem (+ IP aMT). **p < 0.01 i *p < 0.05 u odnosu na C;<##>p < 0.01 i<#>p < 0.05 u odnosu na IR.

[0074] Slika 17. Poređenje između ekspresije p53, Bax i Bcl2 pomoću Western blota u homogenatu jezika pacova kod ozračenih pacova tretiranih melatonin gelom topikalnim putem u usnoj duplji i melatoninom intraperitonealno. A, denzitometrija Western blot traka za P53; B, za Bax; C, za Bcl2; D, odnos Bax/Bcl2; E, Western blot slika za P53, Bax i Bcl2. Kontrolni pacovi (C), ozračeni pacovi (IR), pacovi tretirani sa 3% melatonin gelom (+ 3% aMT), i tretirani melatoninom ip putem (+ IP aMT). ***p < 0.001, **p < 0.01 i *p < 0.05 u odnosu na C;<###>p < 0.001 i<##>p < 0.01 u odnosu na IR.

Primeri varijanti izvo đ enja pronalaska

[0075] Sledeći specifični primeri dati u ovom patentnom dokumentu služe da ilustruju prirodu predstavljenog pronalaska. Ovi primeri su uključeni samo u ilustrativne svrhe i ne smeju se tumačiti kao ograničenja prijavljenog pronalaska. Stoga, primeri opisani u daljem tekstu ilustruju pronalazak bez ograničavanja polja njegove primene.

[0076] Pronalazak će biti ilustrovan dalje u tekstu pomoću testova sprovedenih od strane pronalazača koji jasno pokazuju korisnost melatonin gela u mukozitisu, i prikazani su rezultati pri različitim koncentracijama.

A. Materijal i metode:

[0077] Poređenja radi, kompozicija iz pronalaska je administrirana životinjama korišćenim u eksperimentima, različitim putevima administracije, a takođe su sprovedeni eksperimenti sa humanim pacijentima.

[0078] Za topikalnu administraciju u usnoj duplji, kompozicija koja je korišćena je bio hidrogel (gel) sa 1%, 3% ili 5% melatonina (1, 3 ili 5 grama melatonina u 100 ml finalne zapremine kompozicije, respektivno) i u kojoj su korišćeni 20% polietilen i polipropilen kopolimer kao supstance za želiranje. Pluronic? F127 (Poloksamer) je korišćen kao polietilen i polipropilen kopolimer. 0.3% natrijum benzoat je korišćen kao konzervans. Korišćena je esencija 0.5% slatke narandže. Sve komponente koje su korišćene su dobijene od FAGRON IBERICA, SAU, referentni brojevi: melatonin, 33457-27; Pluronic? F127, 33353-SP; natrijum benzoat, 31360-12; esencija narandže, 30620-08. Hemijska struktura melatonina je prikazana ispod:

[0079] Životinje korišćene u eksperimentima su bili pacovi težine 280 g, i bili su izloženi jonizujućim zračenjima u kontrolisanim uslovima u eksperimentalnoj Radiološloj Jedinici u Biomedicinskom Istraživačkom Centru Univerziteta u Granadi. Životinje su podvrgnute punoj ekspoziciji od 50 greja (Gy). Doza zračenja koja je korišćena svaki dan je bila 10 Gy administrirana na 100.75 cGy/min, 210 kilovolti (kV) i 12 miliampera (mA), postavljanjem životinje na 40 cm od izvora zračenja.

[0080] Različite formulacije su primenjene na životinjama kako sledi. Topikalna aplikacija je primenjena u usnoj duplji pre zračenja, još jedna posle, a sukcesivne aplikacije su primenjivane na svakih 8 sati u trajanju od 21 dan. Životinje su žrtvovane 21 dan nakon početka zračenja, odnosno kada je primećen najviši stepen mukozitisa kod ozračenih životinja koje nisu tretirane sa melatoninom. Formulacije korišćene kod životinja koje se koriste u eksperimentima bile su sledeće: Pluronic F-127 gel sa 1%, 3% ili 5% melatonina (1, 3 ili 5 grama melatonina/100 ml gela, respektivno), primenjen tri puta dnevno lokalno u usnoj duplji u zapremini od 500 ?l/svaki put, dajući ukupno 1.5 ml/dan. Topikalna aplikacija u usnoj duplji znači da su životinje gutale gel primenjen u usnoj šupljini.

[0081] Poređenja radi, eksperimenti su takođe sprovedeni administracijom životinjama iste koncentracije melatonina kao ona korišćena sa 3% w/v hidrogelom, ali intraperitonealno, da se vidi dali melatonin u plazmi može smanjiti mukozitis ili je neophodno primeniti pomenuti molekul topikalnim putem. Za komparativni parenteralni put je korišćen izotonični rastvor koji sadrži 70 % v/v (zapremina/ zapremina) izotonični fiziološki rastvor i 30% v/v propilen glikol, mereno u odnosu na ukupnu zapreminu rastvora. Dnevna doza od 45 mg melatonina je injektirana 21 dan. Životinje su žrtvovane 21 dan nakon početka zračenja, kao i životinje tretirane melatonin gelom primenjenim topikalnim putem u usnoj duplji.

[0082] Takođe je procenjivana zaštitna uloga kompozicije 3% w/v melatonina kod pacijenata sa kancerom glave i vrata izloženih radioterapiji. Studija je bila dvostruko slepa studija (5 pacijenata lečenih sa 3% w/v melatonin gelom i 5 pacijenata tretiranih gelom bez melatonina). Bolesnici su podvrgnuti oralnom ispiranju sa prethodno opisanim gelom sa 500 mikrolitara tri puta dnevno, t.j. pacijenti su primili ukupno 45 mg/dan melatonina distribuiranog u režimu od 15 mg 3 puta dnevno. Pacijenti su zadržavali melatonin gel u usnoj duplji 2 minuta, a onda su ga gutali, tako da je gel mogao da impregnira celu gastrointestinalnu mukozu. Dve nedeljno evaluacije su izvedene u planiranom rasporedu poseta da se utvrdi objektivni stepen oromukozitisa (RTOG (Radiotherapy Oncology Group) Objektivna Skala Toksičnosti prema SZO): Stepen 0-4.

B. Evaluirani parametri

B.1. Markeri oksidativnog o š te ć enja

- Procena oksidacije ć elijske membrane i sub- ć elijsku membranu (LPO)

[0083] Vrlo važan mehanizam pomoću kojeg slobodni radikali kiseonika mogu da proizvedu oštećenje ćelija je pomoću lipidne peroksidacije ćelija i mitohondrijalnih membrana. Lipidna peroksidacija nastaje usled dejstva slobodnih radikala na polunezasićene masne kiseline. Ove modifikacije u strukturi ćelijske membrane izazivaju promene njihovih fizičko-hemijskih svojstava, sa povećanjem permeabilnosti i progresivni gubitak funkcije, što može dovesti do kasnije ćelijske smrti. Merenje stepena lipidne peroksidacije membrane je oduvek smatrano veoma važnim parametrom kao indikator oksidativnog stresa. Indeks lipidne peroksidacije (LPO) obezbeđuje kvantifikaciju malonildialdehida i 4-hidroksialkenala (MDA 4-HDA) prisutnih u uzorku, koji su važne produkti razgradnje peroksida dobijenih od polinezasićenih masnih kiselina i srodnih estara. Koncentracije malonildialdehida i 4-hidroksialkenala, kao i koncentracija hidroperoksida, obezbeđuju odgovarajući indeks lipidne peroksidacije.

B.2. Evaluacija antioksidativnih odbrana

[0084] U okviru ćelijskog antioksidativnog sistema, postoji grupa enzima odgovornih za detoksikaciju slobodnih radikala u ćeliji u fiziološkim uslovima, u suštini ovi enzimi su:

- Glutation peroksidaza (GPx): ovaj enzim koristi redukovani glutation kao kofaktor i uklanja vodonik peroksid (H2O2).

- Glutation reduktaza (GRd ): ovaj enzim rekonvertuje oksidovani glutation, proizveden aktivnošću glutation peroksidaze, u redukovani glutation.

[0085] Odnos dobijen kao količnik deljenja oksidovani glutation/redukovani glutation (GSSG/GSH) je takođe važan odnos u evaluaciji redoks stanja.

B. 3. Evaluacija markera mitohondrija aktivnosti

[0086] Mitohondrijalna disfunkcija povezana sa povećanjem proizvodnje slobodnih radikala je odgovorna za ćelijsku smrt. Dakle, merenje aktivnosti kompleksa transportnog respiratornog lanca (I, II, III i IV) i ekspresije kompleksa je fundamentalna za poznavanje stepena oštećenja mitohondrija.

B.4. Mitohondrije i oksidativni stres: aktivacija inflamazoma:

[0087] Proizvodnja reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) porast mitohondrija oštećenih zračenjem, što izaziva oksidativne promene mitohondrijskih komponenata i otvaranje mitohondrijskih tranzicionih pora (eng. mitochondrial transition pore MTP). Permeacija mitohondrijske membrane predstavlja ireverzibilnu tačku u aktivaciji programiranih puteva ćelijske smrti koja se završava apoptozom ili nekrozom (Schroder K, et al. Cell 2010; 140:821-832; Latz E, Curr. Opin. Immunol 2010; 22:28-33. Epub 2010).

[0088] Nedavne studije pokazuju da mitohondrija takođe reguliše prirodnu imuni odgovor (Kastner DL, et al. Eur J Immunol. 2010; 40:611-615). Uočeno je da su slobodni radikali poreklom iz mitohondrija odgovorni za aktiviranje ćelijskih inflamatornih mehanizama, konkretno, tzv. inflamazomi kao što je NLRP3 (familija NOD-sličnih receptora, pyrin domain containing 3) (Zhou R, et al. Nature 2011; 469:221-226). NLRP3 je proteinski kompleks koji posreduje u produkciji imunskog glasnika IL-1beta i kod inflamacije.

[0089] Raznovrsni faktori mogu da aktiviraju urođeni imuni odgovor, uključujući patogene agense ili molekule koji izazivaju oštećenje ćelija kao rezultat povećanja stresa. Kada se aktivira NLRP3, on formira multi-proteinski kompleks koji se sastoji od NLRP3, adapternog molekula ASC (eng. „apoptosis-associated speck-like protein“ koji sadrži domen za regrutaciju kaspaze), kao i prokaspaze-1. U uslovima ćelijskog stresa, NLRP3 regrutuje ASC proteine i prokaspazu 1, što aktivira kaspazu-1, uzrokujući niz unutarćelijskih reakcija uključujući aktiviranje proinflamatornih citokina.

B.5. Inflamatorni odgovor i NF-kB

[0090] Put koji uključuje nuklearni faktor kapa B (NF-kB) takođe učestvuje u inflamatornom odgovoru. Razlika u odnosu na inflamazom je što se NF-kB put aktivira preko Toll-u sličnih receptora (TLR) na membrani dok se inflamazom aktivira preko citosolnih NOD-u sličnih receptora (eng. Nucleotide Oligomerization Domain-like receptors) (NLR),

[0091] NLR, NF-kB i NLRP3 rade zajedno na aktiviranju pro-inflamatornih citokina kao što je IL-1β. Paralelno, ovaj citokin može izazvati oštećenja mitohondrija i povećanje proizvodnje ROS, a ROS indukuju oštećenja u mitohondrijskoj DNK (mtDNK) i otvaranje MTP, izazivajući apoptozu.

[0092] Osim toga, NF-kB aktivira ekspresiju širokog spektra gena uključenih u inflamatorni odgovor poput ciklooksigenaze 2 (COX-2), inducibilne azot oksid sintaze (iNOS) i vaskularnih adhezionih molekula (VCAM- 1). Zbog toga, zračenje izaziva povećanje proinflamatornih molekula koji doprinose apoptozi, pa tako i pojavi mukozitisa.

B.6. Mehanizmi apoptoze:

[0093] Proteini koji regulišu apoptozu su grupisani u antiapoptotične proteine poput Bcl2 (B-ćelijski limfom 2) i proapoptotične proteine poput Bax. Prema tome, odnos Bax/Bcl2 je veoma važan odnos jer direktno odražava nivo apoptoze. Protein p53 aktivira enzime za popravljanje DNK da koriguju detektovano oštećenje. Ulazak u apoptozu je konačni mehanizam zaštite, ako je oštećenje DNK nepopravljivo, u cilju sprečavanja proliferacije ćelija koje sadrže abnormalnu DNK. p53 aktivira ekspresiju proapoptotičnih gena kao što je BAX.

[0094] Prema tome, posledice povećane proizvodnje mitohondrijske ROS, oštećenja u mtDNK i otvaranja MTP uključuju održavanje inflamatornog procesa, tako da tretman koji za cilj ima inflamazome može biti put za upotrebu novih terapija kod inflamatornih bolesti koje ne odgovraju na anti-inflamatorne lekove što se dešava kod mukozitisa indukovanog radioterapijom.

C. PRIMER 1: Rezultati dobijeni u jeziku pacova

C.1- Upotreba melatonina u 1%, 3% i 5% w/v gelu topikallnim putem u usnoj duplji

[0095] Oksidativni stres izazvan zračenjem izaziva oštećenje ćelijske membrane, koje se ogleda u porastu oksidacije membranskih lipida većem za 50% u odnosu na kontrolu (Slika 1, p < 0.001). Ovo oštećenje ukazuje na to da zračenje povređuje ova tkiva izazivajući mukozitis. 3% melatonin u potpunosti vrši reverziju efekata radioterapije, dok 1% melatonin vrši samo delimičnu reverziju nivoa LPO. Korišćenje koncentracije melatonina veće od 3%, kao što je 5%, ima iste efekte kao koncentracija 3% u suzbijanju oksidativnog stresa (Slika 1).

[0096] Zračenje takođe prouzrokuje intenzivno oštećenje mitohondrija koje se ogleda u povećanju LPO u membranama mitohondrija (Slika 2). Ovo oštećenje mitohondrija dovodi do ćelijske smrti (Acuna-Castroviejo et al. Curr Top Med Chem 2010, 11 (2):221-240). Kada se ozračeni pacovi tretiraju melatoninom, uočava se snažan antioksidativni efekat melatonina kada se primeni sa 3%, on vrši reverziju efekata radioterapije na mitohondrije, u potpunosti (p < 0.001).

Trenutno ne postoji ni jedan molekul koji ispoljava ovakvo delovanje. Međutim, kada se primenjuje 1% melatonin, on praktično ne deluje na suzbijanje oksidativnih oštećenja mitohondrija uzrokovanih zračenjem. Kada se koristi koncentracija melatonina od 5%, ona ima iste efekte kao koncentracija od 3% u suzbijanju oksidativnog stresa mitohondrija.

[0097] Zračenje prouzrokuje i veoma značajno smanjenje nivoa GSH (p < 0.001) (Slika 3A), dok se istovremeno nivoi GSSG (p < 0.001) povećavaju (Slika 3B) u mitohondrijama jezika, izazivajući povećanje ukupnog glutationa (GSH GSSG) (Slika 3C). Ove promene odražavaju značajno povećanje oksidativnog stresa u mitohondrijama, koji je odraz neželjenih efekata izazvanih zračenjem. Porast odnosa GSS/GSH (p < 0.001) (Slika 3D), što je najbolji pokazatelj intracelularnog, a u ovom slučaju oksidativnog stresa u mitohondrijama, podržava takvo štetno dejstvo zračenja. Zauzvrat, administracija 1% melatonina ne može da poveća nivoe GSH (Slika 3a) i smanji nivoe GSSG (Slika 3B), i ne može da normalizuje odnos GSSG/GSH (Slika 3D) i tako neutrališe oksidativni stres. Kada se koristi koncentracija melatonina od 5%, primećeno je da ona ima iste efekte u suzbijanju oksidativnog stresa mitohondrija kao koncentracija od 3%, u oba slučaja je potpuna reverzija efekata radioterapije.

[0098] Prilikom merenja aktivnosti glutation peroksidaze (GPx) (Slika 4A), uočen je porast aktivnosti prouzrokovan zračenjem kao odgovor na porast proizvedenih peroksida. Primena 3% melatonin gela delimično neutrališe efekte zračenja. 5% melatonin ima iste efekte kao koncentracija od 3%, dok koncentracija 1% nema efekta.

[0099] Prilikom merenja aktivnosti glutation reduktaze (GRd) (Slika 4B), je takođe primećeno da 5% melatonin ima isti efekat kao koncentracija od 3%, dok koncentracija od 1% nema efekta. Mitohondrijski GRd je enzim koji se lako inhibira oksidativnim stresom, a kao rezultat toga njegova aktivnost značajno opada sa zračenjem (Slika 4B, p<0.001), efekat koji neutrališe administracija oba, i 3% i 5% melatonina (p < 0.001).

[0100] Značaj ovakvog delovanja melatonina se zasniva na činjenici da se pored navedenih biohemijskih promena, smanjenje oksidativnog stresa u mitohondrijama prevodi u kompletnu prevenciju mukozitisa, bez da je ijedna druga vrsta lezije primećena kod tretiranih pacova (Slika 5). Slike životinja tretiranih sa 1% melatonin gelom nisu uključene pošto pomenuta koncentracija nije imala efekta.

[0101] Prema tome, minimalna efikasna doza za lečenje mukozitisa odgovara koncentraciji melatonina od 3% u gelu primenjenom tri puta dnevno (500 ?l u svakoj aplikaciji), što čini ukupnu dnevnu dozu od 45 mg melatonina.

C 2-Pore đ enje izme đ u primene 3% w/v melatonin gela i administracije iste koncentracije melatonina parenteralnim putem

[0102] Da bi se utvrdio najpogodniji put administracije za reverziju mukozitisa, poređene su administracija 3% melatonin gela topikalnim putem u usnu duplju i administracija melatonina intraperitonealno (i.p.) pri istoj dozi (45 mg dnevno).

[0103] Primećeno je da se efekti melatonina administriranog sa gelom i administracija melatonina parenteralnim putem razlikuju u nekoliko ključnih aspekata, kao što je manja efikasnost i.p. administracije u obnavljanju GSH i smanjenju GSSG, čime se održava veći odnos GSSG/ GSH, što ukazuje na veći oksidativni stres u mitohondrijama nego nakon nanošenja gela (Slika 6). Slika 6 upoređuje nivoe glutationa u jeziku pacova tretiranih sa 3% gelom i pacova tretiranih melatoninom intraperitonealno.

[0104] U pogledu mitohondrijske glutation peroksidaze (GPx) (Slika 7) rezultati ukazuju na porast aktivnosti (Slika 7A) i ekspresije enzima (Slike 7B i 7C) usled zračenja, kao odgovor na povećanje proizvedenih peroksida. Studije ekspresije proteina su izvedene pomoću Western blota (7c), i primećeno je povećanje količine proteina u denzitometrijskoj analizi ovih Western blotova (Slika 7B), što ukazuje na povećanje ekspresije pomenutog enzima sa zračenjem. I topikalna i intraperitonealna administracija melatonina delimično neutrališu dejstvo zračenja.

[0105] Mitohondrijska glutation reduktaza (GRd) (Slika 8) sledi potpuno različit put. To je enzim koji se lako inhibira oksidativnim stresom, a kao rezultat toga njegova aktivnost (Slika 8A) i ekspresija (Slike 8B i 8C) se značajno smanjuju usled zračenja. Studije ekspresije proteina su izvedene pomoću Western blota (8c), i uočeno je smanjenje količine proteina sa zračenjem u denzitometrijskoj analizi ovih Western blotova (Slika 8B), što ukazuje na inhibiciju ekspresije pomenutog enzima. Uočen je značajan efekat melatonin gela u obnavljanju aktivnosti i ekspresije GRd, dok intraperitonealna administracija melatonina nije u mogućnosti da obnovi ovaj enzim. Ako GRd ostane inhibiran, mitohondrija nije u stanju da se suprotstavi oksidativnom oštećenju i favorizuje ćelijsku smrt.

[0106] Zračenje uzrokuje inhibiciju kompleksa transportnih lanaca elektrona u mitohondriji, u suštini kompleksa I, II i IV (Slike 9A, 9B i 9D). Nisu uočene značajne promene u kompleksu III (Slika 9C). Kada su oštećeni kompleksi respiratornog lanca, stvara se više slobodnih radikala, smanjuje se efikasnost respiratornog lanca, proizvodi se manje ATP-a, aktiviraju se faktori apoptoze i povećava se apoptoza. Melatonin gel je efikasniji u obnavljanju aktivnosti kompleksa nego parenteralna administracija, a čak i povećava aktivnost iznad kontrolnih vrednosti (Slika 9).

[0107] Isto kao aktivnost, zračenje inhibira i ekspresiju kompleksa respiratornih lanaca, inhibicija ekspresije kompleksa I, III, IV i V (Slike 10A, 10B, 10C, 10D i 10E) je bila vrlo značajna. Western blot studije pokazuju smanjenje količine proteina u kompleksima I, III, IV i V, što ukazuje na smanjenje sinteze ovih kompleksa sa zračenjem. Melatonin gel je mnogo efikasniji u obnavljanju ekspresije kompleksa od parenteralne administracije. Dalje se može primetiti da parenteralna primena uopšte nije u stanju da obnovi ekspresiju kompleksa V ili ATP sintaze, enzima odgovornog za sintezu ATP (Slika 10D). Ovaj podatak je vrlo relevantan, jer ako je inhibiran kompleks V, nema sinteze ATP-a, i ćelija umire usled apoptoze ili nekroze (Escames G, et al. Hum Genet, July 2011, DOI 10.1007/s00439-011-1057). Prema prikazanim rezultatima, 3% kompozicija u obliku gela je znatno bolja nego parenteralna, za reaktiviranje ekspresije kompleksa respiratornog lanca.

[0108] Utvrđeno je da zračenje suzbija endogene nivoe melatonina u jeziku. Pomenuti nivoi su obnovljeni administracijom kompozicije iz pronalaska topikalnim putem u usnu duplju, favorizujući lokalno antioksidativno delovanje. Međutim, takvi nivoi u jeziku nisu obnovljeni parenteralnom administracijom melatonina (Slika 11). Ovi rezultati objašnjavaju zašto je topikalna administracija mnogo efikasnija od parenteralne administracije melatonina.

[0109] Ove razlike u efikasnosti u pogledu delovanja melatonina u zavisnosti od načina administracije se jasno uočavaju nakon makroskopske analize lezija (Slike 5 i 12). U stvari, parenteralna primena melatonina nije u mogućnosti da obnovi lezije na jeziku nastale posle zračenja, dok topikalna primena u usnoj duplji u potpunosti normalizuje morfološki izgled jezika.

C.3-Podaci o aktivaciji inflamazoma, inflamatornom odgovoru i mehanizmima apoptoze [0110] Prilikom merenja biogeneze mitohondrija pomoću merenja PGC1α (Peroksizom proliferator-aktivirani receptor gama koaktivator 1-alfa), NRF1 (Nuklearni respiratorni faktor 1) i TFAM (mitohondrijski transkripcioni faktor A), uočeno je da je zračenje inhibiralo PGC1α, međutim došlo je do povećanja NRF1 i TFAM da se nadoknadi oštećenje mitohondrija (Slika 13).

[0111] Nađeno je da zračenje povećava aktivaciju NFkB, povećavajući nivoe i u jezgru i u citosolu (Slika 14A i Slika 14B), i da se aktivira inflamazomski put, povećavajući NLRP3, ASC i kaspazu-1 (Slika 15). Kao rezultat aktivacije NFkB puta i inflamazomskog puta, javlja se povećanje proinflamatornih citokina IL-1 i TNF-α (Slike 16A i 16B)

[0112] Oštećenje mitohondrija uključuje i povećanje apoptoze, uz povećanje proapoptotičnih proteina p53 (Slika 17A) i Bax (Slika 17B), kao i smanjenje antiapoptotičnih proteinima poput Bcl2 (Slika 17C). Prema tome, dolazi do povećanja odnosa Bax/Bcl2 i količine p53 (Slika 17D), što ukazuje na značajan porast apoptoze.

[0113] Ovo je prvi put da je pokazana direktna povezanost između oštećenja mitohondrija, aktivacije inflamazoma i radijacijom indukovanog mukozitisa.

[0114] Sa druge strane, administracija 3% melatonin gela neutrališe oksidativni stres, povećava aktivnost i ekspresiju antioksidativnih enzima, povećava funkciju mitohondrija, smanjuje proizvodnju slobodnih radikala koji smanjuju aktivnost NFkB (Slike 14a i 14b) i inflamazoma (Slika 15).

[0115] Prema tome, 3% melatonin gel značajno inhibira apoptozu (Slika 17D), snižavanjem proteina koji indukuju apoptozu poput p53 i Bax (Slike 17A i 17B), i povećavanjem ekspresije antiapoptotičnih proteina kao što je Bcl2 (Slika 17C).

[0116] Osim toga, 3% melatonin gel povećava biogenezu mitohondrija, povećavanjem PGC1α, koji je inhibiran zračenjem.

[0117] Sve ovo dovodi do povećanog preživljavanja ćelija. Osim toga, nivoi melatonina su obnovljeni administracijom gela topikalnim putem u usnoj duplji, favorizujuc?i lokalno antioksidativno delovanje.

[0118] Međutim, takvi nivoi u jeziku nisu obnovljeni parenteralnom administracijom melatonina. Ovi rezultati objašnjavaju zašto je topikalna administracija mnogo efikasnija nego parenteralna administracija melatonina.

[0119] Histologija pokazuje makroskopske lezije. Bojenje hematoksilin-eozinom je korišćeno za određivanje prisustva histoloških lezija u ispitivanim tkivima. Masson Goldner trihrom bojenje (TRI) je omogućilo diferenciranje mišićnog tkiva, koje se boji u crveno, od vezivnog tkiva, koja se boji u zeleno.

[0120] Kod netretirane kontrolne životinje, histološka struktura jezika nema promene. Polistratifikovani keratinizovani epitel mukoze je održavan sa prisustvom filiform papila u dorzalnoj zoni i njihovim odsustvom u ventralnoj zoni. Ispod sluzokože su lamina propria i submukoza formirana od malog sloja vezivnog tkiva i malo krvnih sudova. Zatim su nađeni slojevi mišića, orijentisani u različitim pravcima sa malom količinom vezivnog tkiva između snopova. Ovaj nedostatak vezivnog tkiva je jasno prikazan pomoću TRI bojenja, gde je malo prisustvo zelene boje između mišića jezika.

[0121] Kod ozračenih životinja, postoji povećanje vezivnog tkiva (fibroza) između mišićnih vlakana, koje ih razdvaja. Postoji vaskularna kongestija i značajan porast broja krvnih sudova (angiogeneza). Za razliku od onoga što je primećeno kod kontrolne životinje, u ovom slučaju zeleno-obojena fibroza je mnogo obilnija. Ovo je naročito primećeno u mišićnom sloju gde su vlakna sečena poprečno.

[0122] Kod životinja tretiranih melatoninom je uočeno smanjenje fibroze i angiogeneze između mišićnih vlakana jezika u odnosu na stanje uočeno u jeziku ozračenih životinja. Ovo smanjenje fibroznog vezivnog tkiva je najbolje pokazano pomoću TRI tehnike jer se boji u zeleno, što se savršeno razlikuje od mišićnih vlakana koja se boje u crveno. Što se tiče razlika između oba tretmana, 3% melatonin gel se pokazao bolje nego parenteralna administracija pošto je fibroza mnogo manja.

[0123] Svi ovi efekti zračenja dovode do oštećenja mitohondrija koja se mogu posmatrati pomoću elektronske mikroskopije. Kod ozračenih životinja se može uočiti vakuolizacija mitohondrija kao i uništene mitohondrije uz gubitak njihovog sadržaja, dovodeći do porasta slobodnih radikala i inflamatornog odgovora.

[0124] Kod životinja tretiranih gelom, se ne uočavaju uništene mitohondrije, a vakuole nestaju. Međutim, uništene mitohondrije su uočene kod pacova tretiranih melatoninom parenteralnim putem, kao i kod netretiranih životinja.

[0125] Prema tome, prvi put je pokazano da melatonin omogućava zaštitu gastrointestinalne mukoze podvrgnute radioterapiji, sprečavajući lezije izazvane pomenutim zračenjem, poput mukozitisa i očvršćavanje pomenutih lezija, administracijom topikalnim putem koja je mnogo efikasnija nego parenteralna administracija. Značaj ovakvog delovanja melatonina se zasniva na smanjenju oštećenja mitohondrija, što dovodi do kompletne prevencije mukozitisa, bez uočavanja bilo kakvih lezija kod tretiranih pacova na makroskopskom ili na mikroskopskom nivou.

D- PRIMER 2: Rezultati dobijeni kod ljudi:

[0126] Pacijenti tretirani sa 3% melatonin gelom mnogo bolje podnose radioterapiju, bez potrebe za tretmanom opijatima. Nijednom od ovih bolesnika nije trebala nazogastrična cev, nijedan nije hospitalizovan i nijedan nije morao da prekida terapiju. Svim pacijentima koji nisu tretirani melatoninom su bili potrebni jaki opijati i svi su razvili maksimalni stepen dermatitisa od zračenja. Neki su morali da budu hospitalizovani, prekidajući tretman.

E- Zaklju č ak iz primera pronalaska:

[0127] Farmaceutska kompozicija koja sadrži 1% melatonina ne vrši reverziju mukozitisa prouzrokovanog radioterapijom. Međutim, farmaceutska kompozicija koja sadrži 3% melatonina vrši potpunu reverziju mukozitisa prouzrokovanog radioterapijom, što se dešava i sa kompozicijom koja sadrži 5% melatonina. Ovi rezultati pokazuju korisnost kompozicije koja sadrži između 3% i 5% melatonina u lečenju neželjenih efekata mukozitisa izazvanog radioterapijom.

[0128] Rezultati koji su ovde prikazani pokazuju da postoji oštećenje mitohondrija kod mukozitisa, a samim tim uspeh ovog tretmana se zasniva na oralnoj primeni melatonin gela koji impregnira mukozu i vrši reverziju oštećenja mitohondrija. Bilo koji drugi tip primene melatonina nema jasan uticaj na mukozitis, verovatno zbog činjenice da se melatonin brzo apsorbuje, ima veoma kratko vreme poluraspada (30 minuta), i ne postiže dovoljne terapeutske nivoe u mukozi usne duplje i gastrointestinalnog trakta. Međutim, kompozicija iz pronalaska koja sadrži Pluronic F-127 i melatonin gel u koncentraciji od 3% ili više impregnira sluzokožu, dostižući delotvorne lokalne koncentracije, omogućavajući melatoninu da uđe u mitohondrije i ispolji svoje efekte na ceo gastrointestinalni trakt.

[0129] Prema tome, ove farmaceutske formulacije za topikalnu primenu u usnoj duplji koje sadrže melatonin u dozama pogodnim za zaštitu kože i sluzokože od velikih oštećenja uzrokovanih zračenjem tokom perioda radioterapije imaju veliki klinički značaj. Utvrđeno je da parenteralna administracija melatonina ne obezbeđuje bilo kakvu korist u odnosu na topikalnu primenu u usnoj duplji za lečenje i/ili prevenciju mukozitisa sa dodatnom vrednošću, s bzirom da je hronična parenteralna administracija traumatična za ove pacijente, dok je topikalna primena gela mnogo komfornija.

[0130] Mitohondrije igraju važnu ulogu u kontroli preživljavanja ćelija, i ovde je prvi put pokazano da disfunkcija mitohondrija u velikoj meri učestvuje u fiziopatologiji mukozitisa (vidi rezultate). Disfunkcija mitohondrija je u korelaciji sa pogoršanjem mukozitisa. Po prvi put, je utvrđeno da u mitohondrijama jezika pacova sa mukozitisom, pored bioenergetskog kolapsa, postoji porast glutation peroksidaze (GPKS), smanjenje glutation reduktaze (GRD) i porast oksidovanog glutationa (GSSG)/ redukovanog glutationa (GSH), odnos (GSSG/GSH). Ovo poslednje je pouzdan marker intracelularnog i intramitohondrijskog oksidativnog stresa.

[0131] Predstavljeni pronalazak pokazuje da melatonin u koncentraciji sadržanoj u kompoziciji iz pronalaska u potpunosti smanjuje oksidativni stres u mitohondrijama kod mukozitisa povećanjem aktivnosti mitohondrijskih antioksidativnih enzima, uglavnom GRd. Istovremeno, postoji povećanje aktivnosti i ekspresije kompleksa respiratornog lanca, koji su inhibirani u mukozitisu. Kompozicija iz pronalaska ima antioksidativna i antiinflamatorna dejstva koja kompozicije sa nižim koncentracijama nemaju. Topikalna i oralna primena između 3 i 5% melatonina (3 i 5 grama melatonina u 100 ml finalnog preparata) sprečava pogoršanje funkcije ćelija sluzokože oštećene jonizujućim zračenjem.

[0132] Dalje, aktuelna primena u usnoj duplji pomoću melatonin gela je efikasnija u mukozitisu nego parenteralna administracija, što može biti posledica činjenice da primena u usnoj duplji u pogodnoj formulaciji održava viši nivo melatonina tokom dužeg vremenskog perioda u usnoj duplji (i šire, u gastrointestinalnom traktu), što olakšava lokalno antioksidativno i anti-inflamatorno delovanje, a u suštini delovanje u mitohondrijama, sprečavanjem oštećenja tkiva, a time i početka mukozitisa. Stoga, topikalna primena između 3% i 5% melatonina u usnoj duplji obezbeđuje snažan odbrambeni sistem u ovim patologijama. Pokazano je da kompozicija prema ovom pronalasku omogućava zaštitu gastrointestinalne sluzokože podvrgnute radioterapiji, sprečavanjem lezija izazvanih pomenutim zračenjem, poput mukozitisa i očvršćavanja pomenutih lezija. Dobijeni rezultati mogu biti ekstrapolirani na hemoterapiju.

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Kompozicija u obliku gela koja sadrži jedinjenje opšte formule (I):

   u kojoj: "n" predstavlja ceo broj između 1 i 4; R1i R3su identične ili različite, linearne ili razgranate (C1-C4) alkil grupe; i R2je vodonik, linearna ili razgranata (C1-C4) alkil grupa, -C(=O)O-Ra grupa ili -C(=O)-N(H)-Ra grupa; gde je Ra linearna ili razgranata (C1-C4) alkil grupa, ili njegovu so, prolek i solvat, gde je navedeno jedinjenje u koncentraciji od 2.5 do 5% w/v, za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji mukozitisa, pri čemu pomenuta kompozicija u obliku gela treba da bude administrirana topikalno na površinu oralne sluznice.
2. 2. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, gde su R1i R3, identične ili različite, (C1-C2) alkil grupe.
3. 3. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema patentnom zahtevu 2, gde R1i R3predstavljaju metil grupu.
4. 4. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 3, gde R2predstavlja vodonik.
5. 5. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 4, gde jedinjenje predstavlja melatonin.
6. 6. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 5, gde koncentracija jedinjenja iznosi 3% w/v.
7. 7. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 6, gde je mukozitis prouzrokovan radioterapijom i/ili hemoterapijom.
8. 8. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 7, gde je mukozitis oralni, faringealni, ezofagealni, želudačni ili intestinalni mukozitis.
9. 9. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 8, gde mukozitis predstavlja oralni mukozitis.
10. 10. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 9, gde mukozitis, predstavlja mukozitis kod ljudi.
11. 11. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 10, gde preparat dalje sadrži najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent ili adjuvant ili farmaceutski prihvatljiv nosač.
12. 12. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 11, gde kompozicija sadrži agens za želiranje.
13. 13. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema patentnom zahtevu 12, gde je agens za želiranje odabran sa liste koja sadrži polietilen i polipropilen kopolimere, celulozu i guar gumu.
14. 14. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 13, gde preparat dalje sadrži i najmanje jedan konzervans.
15. 15. Kompozicija u obliku gela za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 14, gde kompozicija dodatno sadrži i antioksidans.