RS57079B1 - Derivati hidrobenzamida kao inhibitori proteina toplotnog šoka hsp90 - Google Patents

Derivati hidrobenzamida kao inhibitori proteina toplotnog šoka hsp90

Info

Publication number
RS57079B1
RS57079B1 RS20180350A RSP20180350A RS57079B1 RS 57079 B1 RS57079 B1 RS 57079B1 RS 20180350 A RS20180350 A RS 20180350A RS P20180350 A RSP20180350 A RS P20180350A RS 57079 B1 RS57079 B1 RS 57079B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
combination
hsp90
agents
compound
solution
Prior art date
Application number
RS20180350A
Other languages
English (en)
Inventor
Martyn Frederickson
John Francis Lyons
Neil Thomas Thompson
Mladen Vinkovic
Brian Williams
Andrew James Woodhead
Alison Jo-Anne Woolford
Original Assignee
Astex Therapeutics Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astex Therapeutics Ltd filed Critical Astex Therapeutics Ltd
Publication of RS57079B1 publication Critical patent/RS57079B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/30—Preparation of carboxylic acid esters by modifying the acid moiety of the ester, such modification not being an introduction of an ester group
    • C07C67/317—Preparation of carboxylic acid esters by modifying the acid moiety of the ester, such modification not being an introduction of an ester group by splitting-off hydrogen or functional groups; by hydrogenolysis of functional groups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/06—Antimigraine agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/42—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/44—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C235/58—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms, bound in ortho-position to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C235/60—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms, bound in ortho-position to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring having the nitrogen atoms of the carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/01—Saturated compounds having only one carboxyl group and containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C59/08—Lactic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C65/00—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C65/01—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C65/03—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing hydroxy or O-metal groups monocyclic and having all hydroxy or O-metal groups bound to the ring
    • C07C65/05—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing hydroxy or O-metal groups monocyclic and having all hydroxy or O-metal groups bound to the ring o-Hydroxy carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/30—Preparation of carboxylic acid esters by modifying the acid moiety of the ester, such modification not being an introduction of an ester group
    • C07C67/313—Preparation of carboxylic acid esters by modifying the acid moiety of the ester, such modification not being an introduction of an ester group by introduction of doubly bound oxygen containing functional groups, e.g. carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/02—Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/76—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C69/84—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of monocyclic hydroxy carboxylic acids, the hydroxy groups and the carboxyl groups of which are bound to carbon atoms of a six-membered aromatic ring
    • C07C69/92—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of monocyclic hydroxy carboxylic acids, the hydroxy groups and the carboxyl groups of which are bound to carbon atoms of a six-membered aromatic ring with etherified hydroxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Opis
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na nove oblike kristala i soli jedinjenja koja inhibiraju ili moduliraju aktivnost proteina toplotnog šoka Hsp90 i upotrebu ovih kombinacija u lečenju profilakse stanja ili uslova bolesti posredovanih proteinom toplotnog šoka Hsp90. Takođe su dati novi postupci za pravljenje jedinjenja i novih hemijskih intermedijara.
Stanje tehnike
[0002] Kao odgovor na pritiske na ćeliju uključujući toplotu, toksine, radijaciju, infekciju, upalu, i oksidante, i sve ćelije proizvode zajedničku grupu proteina toplotnog šoka (Hsps) (Macario & de Macario 2000). Većina proteina toplotnog šoka ima ulogu kao pratioca molekula. Pratioci vezuju i stabilizuju proteine u prelaznim fazama savijanja i omoguće proteinima da se saviju u njihova funkcionalna stanja. Protein toplotnog šoka Hsp90 je najobilniji citosolni protein toplotnog šoka (Hsp) pri normalnim uslovima. Postoje dve humane izoforme proteina toplotnog šoka Hsp90, osnovna ispoljena forma Hsp90α i drugostepena konstitutivno izražena forma Hsp90β i dva druga blisko povezana pratioca koja su ograničena u njihovoj intraćelijskoj lokaciji (endoplazmatični retikulum GP96/GRP94; mitohondrijalni TRAP1). Pojam protein toplotnog šoka HSP90 kako se ovde koristi obuhvata sve ove analoge osim kada je navedeno drugačije. Protein toplotnog šoka Hsp90 vezuje proteine u kasnoj fazi savijanja i razlikuje se od drugih proteina toplotnog šoka (Hsps) u većini svojih proteinskih supstrata su uključeni u prenos signala. Protein toplotnog šoka Hsp90 ima jasno ATP (adenozin trifosfat) mesto vezivanja, uključujući karakteristiku Bergerat nabora bakterijske giraze, topoizomeraze i kinaze histidina. Pokazalo se da je ATP vezan na N-terminus džepa proteina toplotnog šoka Hsp90 hidrolizovan. Aktivnost ATP-aze daje kao rezultat konformacionu promenu kod proteina toplotnog šoka Hsp90 koja je potrebna da omogući konformacione promene kod klijent proteina.
[0003] Domen dimerizacije i drugo mesto ATP vezivanja, koji mogu da regulišu aktivnost ATPaze, su pronađeni u blizini c-kraja proteina toplotnog šoka Hsp90. Dimerizacija proteina toplotnog šoka Hsp90 ima ključnu ulogu za ATP hidrolizu. Aktivacija Hsp90 se dalje reguliše kroz reakcije sa velikim brojem drugih proteina pratilaca i može da bude izolovana u kompleksu sa drugim pratiocima uključujući Hsp70, Hip, Hop, p23, i p50cdc37. Veliki broj drugih proteina supratilaca takođe je pokazalo sposobnost vezivanja proteina toplotnog šoka Hsp90. Pojavio se pojednostavljeni model u kom ATP vezivanje na amino kraj džepa menja konfromaciju proteina toplotnog šoka Hsp90 da omogući udruživanje sa kompleksom više pratilaca. Prvo klijent protein se vezuje na kompleks proteina toplotnog šoka Hsp70/Hsp40. Ovaj kompleks se zatim povezuje sa proteinom toplotnog šoka Hsp90 preko Hop. Kada se ADP zameni ATP-om, konformacija Hsp90 se menja, Hop i Hsp70 se otpuštaju i različit niz proteina supratilaca se privuče uključujući p50cdc37 i p23. ATP hidroliza daje kao rezultat otpuštanje ovih proteina supratilaca i klijenta proteina iz zrelog kompleksa. Herbimicin antibiotici ansamicina, geldanamicin (GA) i 17-alilamino-17-demetoksiglendamicin (17-AAG) su inhibitori ATP mesta vezivanja koji blokiraju vezivanje ATP i sprečavaju pretvaranje u zreli kompleks (Grenert et. al., 1997. J Biol Chem., 272:23834-23850).
[0004] Uprkos tome što je Hsp90 ubikvitinosno ispoljen, GA ima viši afinitet vezivanja za Hsp90 izveden iz tumora naspram normalnih ćelijskih linija (Kamal et. al., Nature 2003; 425: 407-410). GA takođe pokazuje jaču citotoksičnu aktivnost u čelijama tumora i razdvaja se na višim koncentracijama u tumorima na ksenograft modelima miša (Brazidec J. Med. Chem. 2004, 47, 3865-3873). Pored toga aktivnost ATP-aze Hsp90-a uznapredovala je u ćelije kancera i ukazuje na povišeni nivo stresa u ovim ćelijama. Prijavljeno je pojačavanje Hsp90 gena takođe u kasnijim fazama raka (Jolly and Morimoto JNCI Vol.92, No.19, 1564-1572, 2000).
[0005] Pojačana genetska nestabilnost povezana sa fenotipom karcinoma vodi većoj proizvodnji nenativnih proteina ili mutant proteina. Putanja ubikvitina takođe služe da zaštiti ćeliju od nenativnih ili pogrešno savijenih proteina, traženjem (ciljanjem) ovih proteina za proteazomsku razgradnju. Mutant proteini su po svojoj prirodi nenativni i samim tim imaju potencijal da pokazu strukturnu nestabilnost i veću potrebu za sistemom pratioca. (Giannini et al., Mol Cell Biol.2004; 24(13):5667-76).
[0006] Ima dokaza da se Hsp90 nalazi primarno u "aktiviranim" kompleksima višestrukih pratilaca u ćelijama tumora nasuprot "latentnim" kompleksima u normalnim ćelijama. Jedna komponenta kompleksa višestrukih pratilaca je cdc37 supratilac. Cdc37 vezuje Hsp90 na bazi ATP mesta vezivanja i može da utiče na smanjene vrednosti inhibitora vezanih na Hsp90 u "aktiviranom" stanju (Roe et. al., Cell 116, (2004), pp.87-98). Smatra se da je klijent protein vezan na Hsp90-Hsp70 oblik kompleksa pratioca podložniji ubikvitinaciji i traženju proteazoma radi razgradnje. E3 ligaze ubikvitina se identifikuju sa interaktivnim motivima pratioca i jedan od ovih (CHIP) je prikazan da promoviše ubikvitinaciju i razgradnju klijent proteina proteina toplotnog šoka Hsp90 (Connell et al., 2001. Xu et al., 2002).
Hsp90 klijent proteini
[0007] Do sada je prijavljeno više od 100 klijent proteina od proteina toplotnog šoka Hsp90. Kako je veliki broj klijent proteina uključeno u proliferaciju i opstanak ćelijskog signaliziranja, proteinu toplotnog šoka Hsp90 se posvećuje sve više pažnje kao cilju u onkologji. Dve grupe klijent proteina, ćelije signaliziranja kinaze proteina i faktore transkripcije, posebno ukazuju da regulacija Hsp90-a može imati potencijalno dobar učinak kao terapija protiv kancera.
[0008] Klijent proteini protein kinaze Hsp90 koji učestvuju u proliferaciji ćelije i opstanku ćelije obuhvataju sledeće:
c-Src
[0009] Ćelijski Src (c-Src) je receptor tirozin kinaze, neophodan za mitogenezu iniciranu brojnim receptorima faktora rasta, uključujući receptore za receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR), receptor faktora rasta izveden iz trombocita (PDGFR), faktor-1 za stimulaciju kolonije (CSF-1R), i osnovni faktor rasta fibroblasta (bFGFR). C-Src je takođe prekomerno ispoljen i aktiviran na velikom broju istih humanih karcinoma koji prekomerno ispoljavaju EGFR i ErbB2. Src je takođe neophodan za održavanje normalne homeostaze kostiju preko njegove regulacije funkcije osteoklasta.
p185erbB2
[0010] ErbB2 (Her2/neu) je receptor tirozin kinaze prekomerno ispoljen u velikom broju maligniteta uključujući kancere dojki, jajnika, prostate, i gastrični kancer. ErbB2 je originalno utvrđen kao onkogen i inhibicija proteina toplotnog šoka Hsp90 daje kao rezultat poliubikvitinaciju i razgradnju erbB2.
Polo mitotske kinaze
[0011] Polo mitotske kinaze (Plks) su važni regulatori napredovanja ćelijskog ciklusa tokom M faze. Polo mitotske kinaze (Plks) su uključene u sklop aparata mitotskog vretena i u aktivaciju CDK/ciklin kompleksa. Plk1 reguliše tirozin defosforilaciju CDKa (kinaze koje zavise od ciklinaciklinom uslovljene kinaze) putem fosforilacije i aktivacije Cdc25C. Aktivacija CDK1 zauzvrat vodi formiranju vretena i ulasku u M fazu
Akt (PKB).
Akt (PKB) - protein kinaza B
[0012] Akt (protein kinaza B) je uključena u putanje koje regulišu rast ćelije stimulisanjem proliferacije ćelije i suzbijanjem apoptoze. Inhibicija Hsp90 proteina pomoću ansamicina daje kao rezultat redukciju poluraspada Akt-a (protein kinaza B) putem ubikvitinacije i proteazomne razgradnje. Vezivanje cdc37 na Hsp90 je takođe neophodno za regulisano smanjenje Akt (protein kinaze B). Posle lečenja kancera ansamicinom, ćelije se zaustavljaju u G2/M fazi ciklusa ćelije 24 sata posle lečenja a 24-48 sati kasnije nastavljaju prema apoptozi. Normalne ćelije takođe se zaustavljaju 24 sata posle lečenja ansamicinom, ali ne nastavljaju dalje prema apoptozi.
c-Raf, B-RAF, Mek
[0013] Putanja RAS-RAF-MEK-ERK-MAP kinaze posreduje odgovore ćelije na signale rasta. RAS mutira u onkogenu formu kod približno 15% humanih kancera. Tri RAF gena su kinaze serina/treonina koje se regulišu vezivanjem RAS.
EGFR
[0014] Receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) učestvuje u rastu, diferencijaciji, proliferaciji, opstanaku, apoptozi i migraciji ćelije. Prekomerno ispoljavanje EGFR je utvrđeno kod velikog broja različitih kancera i aktiviranje mutacija njegovog domena kinaze je izgleda patogeno u podskupu adenokarcinoma pluća.
Flt3
[0015] FMS-u slična tirozin kinaza 3 (FLT3) je receptor tirozin kinaze uključen u proliferaciju, diferencijaciju i apoptozu ćelije. Aktivacija Flt3 takođe vodi i do aktivacije fosfatidilinozitol 3-kinaze (Pl3K) i RAS kaskadne putanje prenosa signala.
c-M et
[0016] c-met je receptor tirozin kinaze koji vezuje faktor rasta hepatocita (HGF) i reguliše i pokretljivost ćelije i rast ćelije. c-met je prekomerno ispoljen u tumorima, uključujući kncer tiroidee, želuca, pankreasa i kolona. HGF je takođe detektovan oko tumora koji obuhvataju metastaze jetre. Ovo nagoveštava da c-met i HGF igraju važnu ulogu u invaziji i metastazi.
Cdk1, Cdk2, Cdk4, Cdk6
[0017] Cdk1, Cdk2, Cdk4, i Cdk6 pogone ciklus ćelije. Aktivnost ovih CDK-a se reguliše njihovim vezivanjem na specifične podjedinice kao što su ciklini, faktori koji utiču na inhibitore i sklop. Specifičnost substrata i vreme CDK aktivnosti se diktira njihovom interakcijom sa specifičnim ciklinima. Cdk4/ciklin D i Cdk6/ciklin D su aktivni u G1 fazi, Cdk2/ciklin E i Cdk2/ciklin A u S fazi, i Cdc2/ciklin A i Cdc2/ciklin B u G2/M fazi.
[0018] Tip 4 kinaze zavisne od ciklina (CDK4), igra ključnu ulogu u omogućavanju ćelijama da pređu tranziciju iz G1 do S fazu ciklusa ćelije i konstitutivno je aktiviran kod velikog broja humanih kancera. CDK4 aktivator, ciklin D1, je prekomerno ispoljen i CDK4 inhibitor, p16, se briše kod velikog broja različitih humanih tumora.
[0019] Razvijeni su Cdk1/Cdk2 inhibitori koji reverzibilno blokiraju normalne ćelije bilo u G1/S fazi ili na G2/M granici. Ćelije generalno slabije podnose G2/M zaustavljanje i, samim tim, oni podležu apoptotskoj smrti ćelija. Kako je Hsp90 takođe poznat da utiče na putanje opstanka ćelije njihov efekat može dalje da se pojača sa inhibitorom Hsp90.
Wee-1
[0020] Wee-1 protein kinaza izvršava inhibitornu fosforilaciju CDC2 na tirozinu 15 (Tyr15). Ovo je neophodno za aktivaciju kontrolne tačke G2 faze kao odgovor na oštećenje DNK.
[0021] Faktori transkirpcije Hsp90 umešani u proliferaciju ćelije i opstanak ćelije obuhvataju sledeće:
Mutant p53
[0022] P53 je protein za suzbijanje tumora koji prouzrokuje zaustavljanje ciklusa ćelije i izaziva apoptozu. P53 je mutiran u oko polovini od svih kancera. Mutant p53 se povezuje sa Hsp90 i regulisano je smanjen u linijama ćelija kancera koje se leče inhibitorima Hsp90 proteina, dok su nivoi divljeg tipa p53 bili nepromenjeni.
Receptor progesterona/receptor estrogena/receptor androgena
[0023] Približno 70 % žena u postmenopauzi kod kojih se pojavi kancer dojke imaju tumore sa povećanom ekspresijom receptora estrogena. U prvoj liniji terapija ovih pacijenata je usmerena na sprečavanje signaliziranja putem ovih putanja i tako inhibira rast tumora. Ovo može da se uradi ablacijom jajnika, lečenjem gonadotropinom koji ispušta agoniste hormona, inhibicijom ili lečenjem aromataze specifičnim agonistima koji se vezuju na estrogenski receptor ali sprečavaju dalje signaliziranje. Konačno pacijenti steknu otpornost na ove intervencije često kao posledicu komunkacijske razmene estrogenskog receptora i receptora faktora rasta smeštenih na membrani ćelije. U neligandiranom stanju estrogenski receptori su u kompleksu sa Hsp90 koji olakšava vezivanje hormona. Posle vezivanja na zreli receptor proteina toplotnog šoka Hsp90 kompleks ligandirani receptor može da se veže na elemente hormonskog odgovora (HRE) unutar regulatornih regiona ciljnih gena koji učestvuju u održavanju proliferacije ćelije. Inhibicija proteina toplotnog šoka Hsp90 pokreće proteozomnu razgradnju estrogenskog receptora čime se sprečava dalje signaliziranje rasta preko ove putanje. Kanceri prostate su maligniteti koji zavise od hormona koji daju odgovor na terapijske intervencije koje smanjuju nivoe cirkulacije testosterona ili sprečavaju vezivanje testosterona na androgeni receptor. Iako pacijenti inicijalno odgovore na ova lečenja većina naknadno stekne otpornost putem obnavljanja signaliziranja preko androgenog receptora. Pre vezivanja liganda androgeni receptor postoji u kompleksu sa Hsp90 i drugim supratiocima uključujući p23 i imunofiline. Ova interakcija održava androgenski receptor u konfrontaciji vezivanja liganda visokog afiniteta. Inhibicija proteina toplotnog šoka Hsp90 vodi proteozomnoj razgradnji androgenskog receptora i drugih supratilaca koja može da učini tumor osetljivim na dalje hormonska terapije.
[0024] Mutirani receptori steroidnog hormona su povećani na primer tokom antihormonske terapije i koji mogu da budu otporni na takve terapije će verovatno da imaju veću zavisnost od HSP90 za njihovu stabilnost i funkciju vezivanja hormona.
Hif-1a
[0025] Hipoksijom podstaknut faktor-1a (HIF-1a) je faktor transkripcije koji kontroliše ekspresiju gena koji igraju ulogu u angiogenezi. HIF-1a se ispoljava u većini metastaza i poznat je da se povezuje sa Hsp90. Terapija ansamicina linija ćelije karcinoma bubrega vodi ubikvitinaciji i proteazomnoj razgradnji HIF-1a.
[0026] Hsp90 inhibitori su sposobni da utiču na veliki broj ciljeva značajnih za prenos signala u prolifieraciji ćelije tumora. Inhibitori prenosa signala koji regulišu aktivnosti jednog cilja, možda nisu jednako efikasni zbog redundancije putanje signaliziranja i brzog razvoja otpornosti.
[0027] Regulisanjem više ciljeva koji učestvuju u signaliziranju ćelije i prolifereaciji ćelije inhibitori HSP90 mogu da potvrde korisnost u lečenju širokog spektra poremećaja vezanih za proliferaciju.
ZAP70
[0028] ZAP-70, pripada porodici Syk-ZAP-70 protein tirozin kinaze, se normalno ispoljava u T ćelijama i prirodnim ćelijama ubicama i ima ključnu ulogu u pokretanju signaliziranja T ćelije. Međutim, takođe je ispoljen neprirodno u približno 50% slučajeva CLL-a, obično u onim slučajevima sa nemutiranim genima receptora B ćelije. Status mutacije gena imunoglobulina promenljivog regiona (lgVH) teškog lanca u leukemijom zahvaćenim ćelijama hronične limfocitne leukemije (CLL) je važan prognostički faktor. Ekspresija ZAP-70 u CLL ćelijama se dovodi u vezu sa lgVHstatusom mutacije, napredovanjem bolesti, i opstankom. ZAP-70 pozitivan CLL je agresivniji od ZAP-70 negativan CLL ukazuje da ZAP-70 može da bude ključni pokretač maligniteta u slučaju ove bolesti. ZAP-70 je fizički povezan sa HSP90 u B-CLL limfoblastima tako da inhibicija Hsp90-a ove ćelije može da senzitizuje na postojeću hemioterapiju ili terapiju monoklonskim antitelom.
Proteini toplotnog šoka i otpornost na lek protiv tumora
[0029] Davno je otkriveno da je prirodna tercijarna konformacija bilo kog datog polipeptida određena njegovom primarnom (aminokiselinskom) sekvencom. Međutim, kao što je gore objašnjeno, sada je jasno da odgovarajuće savijanje velikog broja proteina in vivo zahteva pomoć proteina toplotnog šoka (Hsps) koji imaju ulogu pratioca molekula. Dok ova funkcija pratioca jeste važna za normalnu funkciju ćelije u svim uslovima, ona postaje ključno značajna kod ćelija koje su pod stresom (na primer toplota, hipoksija ili acidoza).
[0030] Takvi uslovi najčešće preovladavaju u ćelijama tumora, koje postoje u okolini agresivnog domaćina. Regulisanje povećanjem Hsp proteina često viđeno u takvim ćelijama je dakle veoma verovatno da će predstavljati mehanizam putem kog maligne ćelije zadržavaju integritet njihovih proteoma u uslovima kompromisnim za savijanje proteina. Dakle, modulatori ili inhibitori proteina stresa uopšte (i Hsp90 posebno) predstavljaju klasu hemiolekova sa jedinstvenom sposobnošću da istovremeno inhibiraju višestruke neprirodne putanje signaliziranja. Oni mogu samim tim da izvrše antitumorske efekte tokom eliminacije (ili smanjenja incidence) otpornosti u vezi sa drugim paradigmama lečenja.
[0031] Osim toga, terapijske antikancerske intervencije svih vrsta neophodno povećavaju stresove nametnute ciljnim ćelijama tumora. U ublažavanju štetnih efekata takvih stresova, Hsp proteini direktno učestvuju u efektima otpornosti lekova protiv raka i režimima lečenja. Dakle, modulatori ili inhibitori funkcije proteina stresa generalno (i Hsp90 posebno) predstavljaju klasu hemiolekova koja ima potencijal za: (i) sticanje osetljivosti kada je reč o malignim ćelijama i lekovima i/ili terapijama protiv kancera; (ii) ublažavanju ili smanjenju pojave otpornosti na lekove i/ili terapije protiv kancera; (iii) preokretanje otpornosti na lekove i/ili terapije protiv kancera; (iv) pojačanje aktivnosti lekova i/ili terapije protiv kancera; (v) odlaganje ili sprečavanje pojave otpornosti na lekove i/ili terapije protiv kancera.
Inhibitori HSP90 kao agensi protiv glijvica, protozoa i parazita
[0032] Gljivične infekcije su postale sve češći uzrok za zabrinutost poslednjih godina zbog ograničenog broja dostupnih antigljivičnih agenasa, i povećanja pojave vrsta koje su otporne na ustpostavljene antigljivične agense kao što su azoli. Pored toga, sve brojnija populacija imunokompromitovanih pacijenata (npr. pacijenti kao što su pacijenti sa transplantacijom organa, pacijenti sa kancerom koji prolaze hemioterapiju, pacijenti sa opekotinama, pacijenti sa sidom ili pacijenti sa dijabetesnom ketoacidozom) su dali podsticaj povećanju pojave oportunističkih gljivičnih infekcija pomoću gljivičnih agenasa kao što su vrste Candida, Cryptoccocus i Aspergillus i, u nekim slučajevima, vrste Fusarium, Trichosporon i Drechlera.
[0033] S tim u vezi, postoji potreba za novim agensima protiv gljivica koji se mogu koristiti za lečenje sve većeg broja pacijenata sa gljivičnim infekcijama i posebno infekcijama zbog gljivica koje su postale otporne na postojeće lekove protiv gljivica.
[0034] Protein toplotnog šoka HSP90 se čuva kroz evoluciju a nalazi se u bakterijama (npr. HTPG u E.coli) i kvascu (npr.. HSC82 i HSP82). Iako su klijenti formalno utvrđeni za E.coli formu, u kvascu i svim drugim organizmima familija HSP90-a je pokazala da funkcioniše kao pratilac za veliki broj osnovnih proteina kao što je gore opisano.
[0035] Infekcija pomoću spektra patogena se povezuje sa odgovorom antitela na HSP90. Na primer kod pacijenata inficiranih sa Candida albiacns 47kDa C-terminalni fragment proteina toplotnog šoka HSP90 je imunodominantni epitop. Pored toga odgovor ovog antitela se povezuje sa dobrom prognozom koja predlaže zaštitno dejstvo protiv infekcije. Rekombinantna antitela na epitopu ovog polipeptida su takođe zaštićena od infekcije na modelima miša sa invazivnim kandidama. (See Mathews et al Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2003 vol 47, 2208 - 2216 and references therein). Slično tome površinski izražen protein HSP90 služi kao antigen u Šagasovoj bolesti, askariozi, lajšmaniozi, toksoplanozi i infekiji usled šistosoma mansoni (Schistosoma mansoni) i pretpostavlja se da antitela HSP90 nose zaštitu protiv infekcije usled parazitskih protista Plasmodium i Malaria.
[0036] Mycograb (NeuTec Pharma/Novartis) je humano rekombinantno monoklonsko antitelo protiv proteina toplotnog šoka 90 koje je razvijeno kao terapija za kandidu i pokazalo je značajno pozitivne odgovore u ranim ispitivanjima. Pored toga, inhibitori prirodnog proizvoda HSP90-a geldanamicina, herbimicina i radicikola (Geldanamycin, Herbimycin i Radicicol ) su prvobitno i identifikovani na osnovu svoje antigljivične aktivnosti. Proteini koji imaju ključnu ulogu su identifikovani kao HSP90 klijenti u nekoliko humanih patogena (see Cowen and Lindquist, Science.2005 Sep 30;309(5744):2175-6.) Tako, HSP90 može da igra važnu ulogu u razvoju patogena kao što su vrste Candida, i inhibitori HSP90-a mogu da budu korisni kao terapije za čitav opseg infektivnih bolesti uključujući kandidijaze.
[0037] Takođe je utrđeno da protein Hsp90 povećava kapacitet gljivica da razviju otpornost na lek protiv gljivica (see Cowen LE, Lindquist S. "Hsp90 potentiates the rapid evolution of new traits: drug resistance in diverse fungi". Science.2005 Sep 30;309 (5744):2185-9). Zbog toga, istovremena primena inhibitora Hsp90 proteina sa lekom protiv gljivica može da poveća efikasnost leka protiv gljivica i smanji otpornost sprečavanjem pojave rezistentnih fenotipova.
Inhibitori proteina toplotnog šoka HSP90 u lečenju bola, neuropatskih stanja i moždanog udara
[0038] Cdk5 pripada porodici Cdk serin/treonin kinaza, najveći broj ovih kinaza su ključni regulatori ciklusa ćelije. Cdk5 aktivnost se reguliše putem udruživanja sa svojim aktivatorima specifičnim za neuron, p35 i p39. Najnoviji dokaz navodi da CDK5 može da fosforiliše tau protein i jedan broj drugih neuronskih proteina kao što je NUDE-1, sinapsin1, DARPP32 i kompleks Munc18/Syntaxin1A. Ovaj dokaz takođe ukazuje da neprirodna aktivnost Cdk5 podstaknuta pretvaranjem p35 u p25 igra izvesnu ulogu u patogenezi neurodegenerativnih bolesti kao što je Alchajmerova bolest (AD), amiotropska lateralna skleroza (ALS) i u bolesti Nimana i Pika, tip C (NPD). Nenormalna hiperfosforilacija taua posle Aβ1-42lečenja destabilizuje mikrocevčice, doprinoseći degeneraciji neurita i formiranju uparenih spiralnih filamenata (PHF) koji sadrže neurofibrilarne čvorove (NFTs), jedna od osnovnih lezija Alchajmerove bolesti (AD). Dalje je utvrđeno da je cdk5 neophodan za ispravan razvoj neurona
[0039] Protein p35 koji deluje kao regulator CDK5 aktivnosti je nedavno prepoznat kao klijent protein za HSP90 i samim tim aktivnost CDK5 može da se reguliše promenama u nivou i aktivnosti proteina toplotnog šoka HSP90. Tako inhibicija HSP90 može da odvede da se p35 izgubi, inhibicija CDK5, smanjenje fosforilisanog tau proteina kod pojedinica podložnih tome i to će doneti poboljšanje obolelima od Alchajmerove bolesti.
[0040] Pored toga inhibicija HSP90 korišćenjem poznatih agenasa je pokazala da smanjuje nataložene agregate tau proteina u sistemima ćelija in vitro. (Dickey et al Curr Alzheimer Res.
2005 Apr;2(2):231-8).
[0041] Cdk5 takođe pokazuje svoju ulogu u posredovanju signaliziranja bola. I Cdk5 i p35 pokazuje da se ispoljava u nociceptivnim neuronima. Kod p35 genetskim inženjeringom dobijenih miševa, koji pokazuju značajno smanjenu Cdk5 aktivnost, odgovor na bolne krajnje stimulanse se odlaže (Pareek, T.K., et al., Proceedings of the National Academy of Sciences., 103:791-796 (2006). Dodatna primena roskovitina inhibitora od ciklina zavisne kinaze 5 (Cdk5) pokazuje slabljenje formalinom izazvanih nociceptivnih odgovora kod pacova (Wang, Chenghaung, et al., Acta Pharmacologica Sinica., 26:46-50 (2005). Aktiviranje kalpaina zavisi od kalcijuma i poznato je da utiče na aktiviranje NMDA receptorski kanal kalcijuma (Amadoro, G; Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,103, 2892-2897 (2006)). NMDA receptorski antagonisti su poznati kao klinički delotvnorni protiv neuropatskih bolnih stanja (Christoph, T; et al., Neuropharmacology, 51,12-17 (2006)). Ova efikasnost može da se poveže sa dejstvom NMDA receptorom povezanim sa dotokom kalcijuma na aktivnost kalpaina i njegov naknadni efekat na aktivnost Cdk5. Takva jedinjenja modulišu Cdk5 aktivnost biće korisna za lečenje ili sprečavanje bola i tako modulacija p35-a koji reguliše CDK5 putem inhibicije HSP90 može da vodi inhibiciji CDK5.
[0042] Poželjno je imati agens za ublažavanje terapije bola, tj. direktno otklanjanje bola pored oslobađanja od bola kao rezultat poboljšanja osnovne bolesti ili medicinskog stanja, koje je uzrok bola.
[0043] Pokazalo se da veliki broj različitih Cdk-a (posebno Cdk 4, 5 i 6) učestvuje kod ili posreduje u smrti neurona posle hipoksičnog ili ishemijskog napada (Rashidan, J.; et al.; Proceedings of the National Academy of Sciences., 102:14080-14085 (2005). Pored toga, Cdk inhibitor flavopiridol je pokazao da značajno smanjuje smrt neurona na modelu pacova sa žarišnim ishemičnim moždanim udarom (Osuga, H.; et al.; Proceedings of the National Academy of Sciences., 97:10254-10259 (2000). Inhibitori Cdk5-a pokazuju da imaju zaštitna dejstva na nekroznu i apoptotsku paradigmu neuronske smrti ćelije (Weishaupt, J.; et al.; Molecular and Cellular Neuroscience., 24:489-502 (2003).
[0044] Moždani udar je cerebrovaskularna pojava, koja nastaje kada se prekine normalan dotok krvi u mozak, i mozak primi previše ili premalo krvi. Moždani udar je jedan od vodećih uzroka smrti širom sveta, i takođe je jedan od najčešćih uzroka neurološkog invaliditeta [0045] Ishemijski moždani udar, koji je čest tip moždanog udara, nastaje usled nedovoljne cirkulacije krvi u mozgu usled prekida dotoka arterijske krvi. Normalno, odgovarajući dotok krvi u mozak obezbeđuje sistem arterija u mozgu. Međutim, različiti poremećaji, uključujući upalu i aterosklerozu, mogu da prouzrokuju nastanak tromba, tj. krvnog ugruška koji se formira u krvnom sudu. Tromb može da prekine dotok arterijske krvi, čime prouzrokuje moždanu ishemiju i neurološke simptome kao posledicu. Ishemijski moždani udar može takođe da bude prouzrokovan nastankom embolusa (vazdušni mehur) iz srca u intrakranijalnom krvnom sudu, što prouzrokuje smanjen perfuzioni pritisak ili povećan viskozitet krvi sa neodgovarajućim dotokom krvi u mozak. Embolus može biti prouzrokovan različitim poremećajima, uključujući atrijalnu fibrilaciju i aterosklerozu.
[0046] Drugi tip moždanog udara, hemoragični moždani udar, uključuje krvarenje ili pucanje arterije koja vodi do mozga. Hemoragični moždani udar daje kao rezultat krvarenje u moždanom tkivu, uključujući epiduralni, subduralni, ili subarahnoidni prostor u mozgu.
Hemoragični moždani udar najčešće nastaje od pucanja arteriosklerozom zahvaćenog krvnog suda koji je izložen arterijskoj hipertenziji ili je izložen trombozi.
[0047] Jedna mogućnost za intervenciju kod moždanog udara u sprečavanju ili smanjenju rizika moždanog udara kod pacijenata kod kojih postoji rizik od moždanog udara. Ima veliki broj poznatih rizičnih faktora za moždani udar, uključujući vaskularnu upalu, aterosklerozu, arterijsku hipertenziju, dijabetes, hiperlipidemiju i atrijalnu fibrilaciju. Rizični pacijenti se leče agensima za kontrolu krvnog pritiska ili upravljanje nivoa lipida u krvi, i leče se antitromboticima (kao što je klopidrogel) i antikoagulansi. Druga mogućnost je lečenje akutnog moždanog udara. Međutim, sadašnja farmakološka lečenja za lečenje akutnog moždanog udara su ograničena na ponovno uspostavljanje protoka krvi sa suženim prozorom u pogledu trajanja lečenja od manje od tri sata posle moždanog udara. Ostaje potreba za agensima koji su delotvorni u dužem vremenskom periodu kada je reč o trajanju lečenja. Druga mogućnost je oporavak ili obnavljanje posle perioda akutnog moždanog udara, tj. smanjenje ili prevenciju sekundarnog oštećenja ćelije u perifernom delu. Ostaje potreba za agensima koji su delotvorni u smanjenju ili sprečavanju sekundarnog oštećenja ćelije posle moždanog udara.
[0048] Bilo bi poželjno da se dobije jedan farmaceutski agens koji može da se koristi u više od jedne od gore pomenutih prilika za lečenje moždanog udara. Takav agens može da se primeni pacijentima u opasnosti od moždanog udara, i takođe može da se primeni pacijentima koji pate od akutnog moždanog udara, pacijentima koji prolaze terapiju za oporavak ili ponovno uspostavljanje posle perioda akutnog moždanog udara. Takav agens može takođe da cilja u pravcu više od jednog izraženog mehanizma u biohemijskoj kaskadi moždanog udara.
Inhibitori HSP90-a u terapiji hepatitisa C i drugih virusnih bolesti
[0049] Infekcija ćelije domaćina virusnom RNK/DNK daje kao rezultat značajno preusmeravanje ćelijske sinteze proteina u pravcu ključni virusnih proteina kodiranih virusnom nukleinskom kiselinom. Porast sintetičkog opterećenja proteina predstavlja stres na ćeliju kao posledica povećane potražnje za energijom i sintetičkim prekursionim činiocima. Regulisanje povećanjem proteina toplotnog šoka je često posledica virusne infekcije u najboljem slučaju samo dela zbog ovog stresa. Jedna funkcija smanjenja HSP-a može biti od pomoći u stabilizaciji i slaganju visokih nivoa 'stranog' proteina generisanog u pripremi za virusnu replikaciju. Posebno je nedavni rad nagovestio da je HSP90 potreban za stabilnu proizvodnju funkcionalne NS2/3 proteaze u slučaju inficiranja ćelija replikonom hepatitisa C (HCV).
Inhibitori HSP 90-a su takođe pokazali da replikaciju virusa blokiraju replikaciju virusa u in vitro sistemima. (Nagkagawa, S, Umehara T, Matsuda C, et al Biochem. Biophys. Res Commun.
353 (2007) 882-888; Waxman L, Witney, M et al PNAS 98 (2001) 13931 - 13935).
[0050] Naša ranija prijava PCT/GB2006/001382, koja je u potpunosti ovde sadržana u vidu reference, opisuje amide izoindolina 2,4-dihidroksibenzojevih kiselina kao inhibitore Hsp90. Jedno od jedinjenja specifično opisanih i primerima navedenih u PCT/GB2006/001382, je jedinjenje (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon koji ima dole prikazanu strukturu. Upućivanje na ovo jedinjenje može, po potrebi, u ovoj primeni da bude kao jedinjenje 1 ili jedinjenje prema formuli (1):
Kratak opis pronalaska
[0051] Ovaj pronalazak daje soli mlečne kiseline (posebno so L-laktata), kristalne forme i nove analoge jedinjenja prema formuli (1), koji imaju inhibirajuću ili modulacionu aktivnost na Hsp90 i koje će biti korisne u sprečavanju ili lečenju stanja ili uslova bolesti pposredovane proteinom toplotnog šoka Hsp90. U ovoj prijavi su takođe dati novi postupci za dobijanje jedinjenja prema formuli (1) i njegovih soli dobijenih dodatkom kiseline (posebno so L-laktata) i njihovih analoga, i novih hemijskih intermedijata. Takođe su obuhvaćene obimom ovog pronalaska i terapijske upotrebe soli.
Opšte preference i definicije
[0052] U ovom patentnom spisu, pojmovi "jedinjenja prema ovom pronalasku" ili "jedinjenje prema ovom pronalasku", osim ako kontekst ne kazuje drugačije, se odnose na (a) soli dobijene dodatkom kiselineod jedinjenja (1) koje je mlečna so (posebno so L-laktata), i (b) kristalne forme soli dobijene dodatkom kiseline od jedinjenja iz formule (1) koje je mlečna so (posebno so L-laktata).
[0053] U ovo spisu, pojmovi ’’kombinacije iz ovog pronalaska’’ ili ’’ kombinacija iz ovog pronalaska’’. osim ako kontekst ne kazuje drugačije, se odnose na (a) kombinacije soli dobijene dodatkom kiseline iz jedinjenja (1) koje je mlečna so (posebno so L-laktata), i jednog ili više drugih terapijskih agenasa, i (b) kombinacije kristalnih formi soli dobijene dodatkom kiseline od jedinjenja (1) koje je mlečna so (posebno so L-laktata), i jednog ili više drugih terapijskih agenasa.
[0054] Kako se ovde koristi, pojam "terapija" i s njim povezani pojmovi "lečiti" i "lečenje" se odnose i na profilaktičnu ili preventivnu terapiju kao i na kurativnu ili paliativnu terapiju bola. Tako, pojam obuhvata situacije kada je subjekat ili pacijent već iskusio bol, kao i situacije kada trenutno nema bola ali se bol očekuje. Pojam "terapija", "lečiti", "lečenje" i srodni pojmovi takođe obuhvataju i potpuno i delimično smanjenje ili sprečavanje bola. Tako, na primer, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da spreče pogoršanje postojećeg bola, ili da smanje ili čak eliminišu bol. Kada se koriste u profilaktičnom smislu, jedinjenja mogu da spreče pojavu bilo kakvog bola ili mogu da oslabe nivo bola koji može da nastane.
[0055] Kao što se ovde koristi, pojam "modulacija", se odnosi na aktivnost proteina toplotnog šoka Hsp90, treba da definiše promenu u nivou biološke aktivnosti proteina toplotnog šoka. Tako, modulacija obuhvata fiziološke promene koje utiču na povećanje ili smanjenje relevantne aktivnosti proteina toplotnog šoka. Nešto dalje, modulacija može da bude opisana kao ''inhibicija''. Modulacija može da nastane direktno ili indirektno, i može da bude posredovana bilo kojim mehanizmom i bilo kojim fiziološkim nivoom, uključujući na primer nivo ekspresije gena (uključujući na primer transkripciju, translaciju i/ili post-translacionu modifikaciju), na nivou ekspresije enkodiranog gena regulatornih elemenata koji deluju direktno ili indirektno na nivoima aktivnosti proteina toplotnog šoka. Tako, modulacija može da ukaže na povećanu/potisnutu ekspresiju ili prekomerno ispoljavanje ili nedovoljno ispoljavanje proteina toplotnog šoka, uključujući umnožavanje gena (tj. više primeraka gena) i/ili povećanu ili smanjenu ekspresiju pomoću transkripcionog efekta, kao i hiper (ili hipo-) aktivnost i (de)aktivaciju proteina toplotnog šoia (uključujući (de)aktivaciju) putem mutacije(a). Pojmove "modulisan", "modulacija" i "modulisati" treba tako i tumačiti.
[0056] Kako se ovde koristi, pojam "posredovan", kako se koristi npr. u vezi sa proteinom toplotnog šoka kao što je ovde opisano (i odnosi se na primer na veliki broj različitih fizioloških procesa, bolesti, stanja, uslova, terapija, lečenja ili intervencija) treba da deluje ograničeno tako da različiti procesi, bolesti, stanja, lečenja i intervencije na koje se ovaj pojam odnosi jesu ti kod kojih protein toplotnog šoka Hsp90 igra biološku ulogu. U slučajevima kada se pojam odnosi na bolest, stanje ili uslov, biološka uloga koju igra protein toplotnog šoka Hsp90 može da bude direktna ili indirektna i može da bude neophodna i/ili dovoljna za manifestovanje simptoma bolesti, stanja ili uslova (ili njihovu etiologiju ili napredovanje). Dakle, aktivnost proteina toplotnog šoka Hsp90 (a posebno neprirodnih nivoa aktivnosti proteina toplotnog šoka Hsp90, npr. prekomerna ekspresija proteina Hsp90) mora neophodno da bude najbliži uzrok bolesti, stanja ili uslova: već se pre posmatra da bolesti, stanja ili uslovi posredovani proteinom toplotnog šoka Hsp90 obuhvataju one sa etiologijama sastavljenim od više činilaca i napredovanja kompleksa u kojima Hsp90 samo delimično učestvuje. U slučajevima kada se pojam odnosi na lečenje, profilaksu ili intervenciju (npr. u "proteinom toplotnog šoka Hsp90 posredovanim terapijama" i "proteinom toplotnog šoka Hsp90 posredovanoj profilaksi" prema ovom pronalasku), uloga koju igra Hsp90 može da bude direktna ili indirektna i može biti neophodna i/ili dovoljna za delovanje lečenja, profilakse ili krajnjeg ishoda intervencije. Tako, stanje bolesti ili stanje posredovano Hsp90 uključuje sticanje otpornost na bilo koji određeni lek protiv kancera ili lečenje (uključujući posebno otpornost na jedan ili više ovde opisanih signalnih inhibitora).
[0057] Kao što se ovde koristi, pojam "modulacija", se odnosi na aktivnost od ciklina zavisne kinaze 5 (CDK5), treba da definiše promenu u nivou biološke aktivnosti kinaze(a). Ova modulacija prati fiziološke promene koje utiču na povećanje ili smanjenje aktivnosti relevantne kinaze. U kasnije objašnjenom slučaju, modulacija može da se opiše kao ''inhibicija''.
Modulacija može da nastane direktno ili indirektno, i može da bude posredovana bilo kojim mehanizmom i na bilo kom fiziološkom nivou, uključujući na primer na nivou ekspresije gena (uključujući na primer transkripciju, translaciju i/ili posttranslacionu modifikaciju), na nivou ekspresije enkodiranih gena regulatornih elemenata koji deluju direktno ili indirektno na nivoe od ciklina zavisne kinaze 5 (CDK5), ili na nivou enzima (npr. aktivnost od ciklina zavisne kinaze 5 (CDK5) (na primer, putem alosternih mehanizama, konkurentne inhibicije, neaktivnost aktivnog mesta, poremećaja inhibitorskih putanja povratne informacije itd.). Tako, modulacija može da ukaže na povećanu/potisnutu ekspresiju ili prekomerno ispoljavanje ili nedovoljno ispoljavanje od ciklina zavisne kinaze 5 (CDK5) uključujući umnožavanje gena (tj. više primeraka gena) i/ili povećanu ili smanjenu ekspresiju pomoću transkripcionog efekta, kao i hiper (ili hipo-) aktivnost i (de)aktivaciju od ciklina zavisne kinaze 5 (CDK5) uključujući (de)aktivaciju) pomoću mutacije(a). Pojmove "modulisano", " modulacija" i "modulisati" treba tako i tumačiti.
[0058] Kako se ovde koristi, pojam "posredovan", kako se koristi npr. u vezi od ciklina zavisne kinaze 5 (CDK5) kao što je ovde opisano (i važi na primer za veliki broj različitih fizioloških procesa, bolesti, stanja, uslova, terapija, lečenja ili intervencija) treba da deluje ograničeno tako da različiti procesi, bolesti, stanja, lečenja i intervencije na koje se ovaj pojam odnosi jesu oni kod kojih od ciklina zavisna kinaza 5 (CDK5) igra biološku ulogu. U slučajevima kada se pojam odnosi na bolest, stanje ili uslov, biološka uloga koju igra od ciklina zavisna kinaza 5 (CDK5) može da bude direktna ili indirektna i može da bude neophodna i/ili dovoljna za manifestovanje simptoma bolesti, stanja ili uslova (ili njihovu etiologiju ili napredovanje). Tako aktivnost od ciklina zavisne kinaze 5 (CDK5) (a posebno aktivnost neprirodnih nivoa od ciklina zavisne kinaze 5 (CDK5), npr. prokomerna ekspresija od ciklina zavisne kinaze 5 (CDK5)) ne moraju neophodno da budu i najbliži uzrok bolesti, stanja ili uslova: verovatnija je pretpostavka da CDK5 posredovane bolesti, stanja ili uslovi obuhvataju one kod kojih su etiologije sastavljene od nekoliko činilaca i složena napredovanja kod kojih CDK5 (igra biološku ulogu). U slučajevima kada se pojam odnosi na lečenje, profilaksu ili intervenciju (npr. u "CDK5 posredovanim lečenjima" prema ovom pronalasku), uloga koju je igrao CDK5 može da bude direktna ili indirektna i može da bude neophodna i/ili dovoljna za funkciju lečenja, profilakse ili krajnjeg ishoda intervencije.
[0059] Pojam "intervencija" je pojam iz tehnike koji se ovde koristi da definiše bilo kakvo sredstvo koje utiče na fiziološku promenu na bilo kom nivou. Tako, intervencija može da obuhvata indukciju ili represiju bilo kog fiziološkog procesa, događaja, biohemijske putanje ili ćelijskog/biohemijskog događaja. Intervencije iz ovog pronalaska najčešće utiču (ili doprinose) terapiji, lečenju ili profilaksi bolesti ili stanja.
[0060] Kako se ovde koristi, pojam "kombinacija", kao što se primenjuje na jedno ili više jedinjenja i/ili agenasa (takođe ovde pomenutih kao komponente), ima za cilj da definiše materijal u kom se pridružuju dva ili više jedinjenja/agenasa. Pojmove "kombinovano" i "kombinovanje" u ovom kontekstu treba tako i tumačiti.
[0061] Pridruživanje dva ili više jedinjenja /agenasa u nekoj kombinaciji može biti fizičko ili nefizičko. Primeri fizički pridruženih kombinovanih jedinjenja/agenasa obuhvataju:
● supstance (npr. jedinstvene formulacije) koje sadrže dva ili više jedinjenja/agensa u mešavini smesa (na primer u okviru iste jedinične doze);
● supstance koje sadrže materijal u kom su dva ili više jedinjenja/agensa povezana hemijski/fizikohemijski (na primer unakrsnim povezivanjem, molekularnom aglomeracijom ili vezivanjem za zajednički deo pomoćnog sredstva);
● supstance sadrže materijal u kom se dva ili više jedinjenja/agensa hemijski/fizikohemijski zajedno pakuju (na primer, odlažu na ili u lipidne vesikule, čestice (npr. mikročestice ili nanočestice) ili kapljice emulzije);
● farmaceutski kompleti, farmaceutska pakovanja ili pakovanja za pacijenta u kojima su dva ili više jedinjenja/agensa zajedno spakovana ili zajedno prezentovana (npr. kao deo niza jediničnih doza);
[0062] Primeri nefizički pridruženih kombinovanih jedinjenja/agenasa su:
● materijal (npr. neunitarna formulacija) koja obuhvata najmanje jedno od dva ili više jedinjenja/agenasa zajedno sa instrukcijama za improvizovano pridruživanje da se formira fizičko pridruživanje dva ili više jedinjenja/agenasa;
● materijal (npr. neunitarna formulacija) koja obuhvata najmanje jedno od dva ili više jedinjenja/agenasa zajedno sa instrukcijama za kombinovanu terapiju sa dva ili više jedinjenja/agenasa;
● materijal koji sadržii najmanje jedan od dva ili više jedinjenja/agenasa zajedno sa instrukcijama za primenu populaciji pacijenata u kojoj je primenjenn (ili se primenjuje) drugi od dva ili više jedinjenja/agenasa;
● materijal koji sadrži najmanje jedan od dva ili više jedinjenja/agenasa u količini ili formi koja je specifično prilagođena upotrebi sa druga dva ili više jedinjenja/agensa.
[0063] Kako se ovde koristi, pojam "u kombinaciji" može da se odnosi na jedinjenja/agense koji se administriraju kao deo istog ukupnog režima terapije. Kao takva, pozologija svakog od dva ili više jedinjenja /agenasa može da varira: jedinjenje/agens može da bude administrirano istovremeno ili u različitim vremenskim trenucima. Jasno je dakle da jedinjenja/agensi iz ove kombinacije mogu da se administriraju sekvencijalno (npr. pre ili posle) ili istovremeno, bilo u istoj farmaceutskoj formulaciji (tj. zajedno), ili u različitim farmaceutskim formulacijama (tj. posebno). Istovremeno u istoj formulaciji je kao unitarna formulacija dok je istovremeno u različtim farmaceutskim formulacijama neunitarna. Pozologije svakog od dva ili više jedinjenja/agenasa u terapiji kombinacije mogu takođe da se razlikuju u pogledu rute primene.
[0064] Kako se ovde koristi, pojam "farmaceutski kompleti" definiše niz jedne ili više jediničnih doza farmaceutske supstance zajedno sa sredstvima doziranja (npr. uređaj za merenje) i/ili sredstva za dostavu (npr. inhalator ili špric), opciono svi su sadržani u zajedničkom spoljnjem pakovanju. U farmaceutskim kompletima koji sadrže kombinaciju dva ili više jedinjenja/sredstva, pojedinačna jedinjenja/sredstva mogu da budu unitarne ili neunitarne formulacije. Jedinična doza(e) može da bude deo blister pakovanja. Farmaceutski komplet može opciono još da sadrži uputstva za upotrebu.
[0065] Kako se ovde koristi, pojam "farmaceutsko pakovanje" definiše niz od jedne ili više jediničnih doza farmaceutskih supstanci, opciono sadržanih u zajedničkom spoljnjem pakovanju. U farmaceutskim pakovanjima koja sadrže kombinaciju dva ili više jedinjenja/sredstva, pojedinačna jedinjenja/sredstva mogu da budu unitarne ili neunitarne formulacije. Jedinična doza(e) može da bude deo blister pakovanja. Farmaceutsko pakovanje može opciono još da sadrži uputstva za upotrebu.
[0066] Kako se ovde koristi, pojam "pakovanje za pacijenta" definiše pakovanje, prepisano pacijentu, koje sadrži farmaceutsku supstancu tokom čitavog toka lečenja. Pakovanja za pacijenta obično sadrže jedno ili više blister pakovanja. Pakovanja za pacijenta imaju prednost nad tradicionalnim receptima, gde farmaceut deli pacijentovu zalihu leka od ukupne zalihe, tako što pacijent uvek ima pristup umetnutom pakovanju koje je sastavni deo pakovanja za pacijenta, najčešće su izostavljeni u receptima za pacijenta. Dodavanje umetka-pakovanja je pokazalo da poboljšava pacijentovo pridržavanje lekarovih uputstava.
Soli sa dodatkom kiseline
[0067] U prvom aspektu, pronalazak obezbeđuje so sa dodatkom kiseline iz jedinjenja prema formuli (1)
koje ima hemijski naziv (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon, pri čemu je so sa dodatkom kiseline formirana sa kiselinom laktata.
[0068] Pojmovi "so" i "so dobijena dodatkom kiseline" mogu da se koriste naizmenično u ovoj prijavi kao što mogu pojmovi "soli" i "soli dobijene dodatkom kiseline". Pojmovi "so" i "soli" kako se ovde koriste se odnose na soli dobijene dodatkom kiseline osim ako kontekst ne ukazuje drugačije.
[0069] Reference na ovo jedinjenje (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon i njegove soli dobijene dodatkom kiseline obuhvataju u svom obimu sve njihove solvate, tautomere i izotope i, tamo gde kontekst dozvoljava, okside azota i druge jonske oblike.
[0070] So je so formirana sa kiselinom laktata, tj. natrijum laktat i posebno so L-laktata.
[0071] U čvrstom stanju, soli iz ovog pronalaska mogu da budu kristalne ili amorfne ili njihova mešavina.
[0072] U jednom izvođenju pronalaska, soli su amorfne.
[0073] U amorfno čvrstoj supstanci, trodimenzionalna struktura koja normalno postoji u kristalnoj formi ne postoji u pozicijama molekula u odnosu na drugi amorfni oblik su u suštini retke, videti na primer Hancock et al. J. Pharm. Sci. (1997), 86, 1).
[0074] U nekom drugom izvođenju pronalaska, ove soli su znatno kristalne.
[0075] Soli iz ovog pronalaska mogu da budu sintetizovane iz jedinjenja roditelja konvencionalnim postupcima kao što su postupci opisani u priručniku Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002. Generalno takve soli mogu da se pripreme dovođenjem u reakciju slobodne bazne forme jedinjenja prema formuli (1) sa odgovarajućom kiselinom u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u mešavini ova dva.
[0076] U drugom varijantnom rešenju, pronalazak obezbeđuje postupak dobijanja soli dobijene dodatkom kiseline od (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon, koji sadrži obrazovanje rastvora od (2,4-dihidroksi-5-izopropilfenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon slobodne baze u rastvaraču (najčešće u organskom rastvaraču) ili mešavini rastvarača, i tretiranjem rastvora kiselinom da se obrazuje talog soli dobijene dodatkom kiseline.
[0077] Kiselina može da se doda kao rastvor u rastvarač koji se može mešati sa rastvaračem u kom se rastvara slobodna baza. Rastvarač u kom se slobodna baza početno rastvara može da bude onaj u kom je njegova so dobijena dodatkom kiseline nerastvorljiva. Alternativno, rastvarač u kom slobodna baza počinje da se rastvara može da bude onaj u kom je so sa dodatkom kiseline barem delimično rastvorljiva, drugi rastvarač u kom je so sa dodatkom kiseline manje rastvorljiva se naknadno dodaje tako da se so taloženjem odvaja od rastvora.
[0078] U alternativnom postupku formiranja soli dobijene dodatkom kiseline, (2,4-dihidroksi-5-izopropilfenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon se rastvara u rastvaraču koji sadrži isparljivu kiselinu i opciono surastvaraču veće rastvorljivosti, čime se formira rastvor soli dobijene dodatkom kiseline sa isparljivom kiselinom, i rastvor koji se dobije se zatim koncentruje ili se podvrgava isparavanju da bi se izolovala so. Primer soli dobijene dodatkom kiseline koja može da se na ovaj način napravi je so acetata.
[0079] So se najčešće taloženjem izdvaja iz organskog rastvarača dok se formira i tako može da se izoluje separacijom čvrste supstance iz rastvora, npr. putem filtracije.
[0080] Jedan oblik soli iz ovog pronalaska može da se pretvori u slobodnu bazu i opciono u drugi oblik soli postupcima dobro poznatim stručnjaku u ovoj oblasti tehnike. Na primer, slobodna baza može da se formira provlačenjem rastvora soli kroz hromatografju sa stacionarnom fazom amina (npr. hromatografija naslaga NH2 (amidogena)). Alternativno, rastvor soli u vodi može da se tretira natrijum bikarbonatom da bi se rastavila so i izdvojio talog slobodne baze. Slobodna baza može zatim da se kombinuje sa drugom kiselinom jednim od gore, ili pomoću negde drugde, ovde, opisanim postupcima.
[0081] Soli kao što su soli dobijene dodatkom kiseline imaju izvestan broj prednosti u odnosu na odgovarajuću slobodnu bazu. Na primer, soli će uživati jednu ili više sledećih prednosti u odnosu na slobodnu bazu tako što će:
• biti rastvorljivije i time će biti bolje za i.v. primenu (npr. infuzijom)
• imaće bolju stabilnost (npr. bolji vek trajanja na polici);
• imaće bolju toplotnu stabilnost;
• biće manje bazne i samim time bolje za i.v. primenu;
• imaće prednosti za proizvodnju;
• imaće bolju rastvorljivost u nataloženom rastvoru;
• imaće bolja fizikohemijska svojstva;
• mogu imati bolju aktivnost protiv kancera; i
• mogu imati bolji terapeutski indeks.
[0082] Posebne prednosti soli L-laktata iz jedinjenja prema formuli (1) su da:
• ona nije hidratisana i samim tim se lakše formuliše;
• ima manje polimorfnih formi od slobodne baze i drugih formi soli koje su ispitivane (t.j. soli formirane hlorovodoničnom kiselinom i sumpornom kiselinom);
• jeste nehigroskopna; i
• ima bolju brzinu rastvorljivosti od slobodne baze i drugih ispitivanih soli.
[0083] Pojam 'stabilno' ili 'stabilnost' se ovde koristi da uključi hemijsku stabilnost i čvrsto stanje (fizičku) stabilnost. Pojam 'hemijska stabilnost' označava da jedinjenje može da se čuva u izolovanoj formi, ili u obliku formulacije u kojoj je dato u mešavini sa na primer, faramaceutski prihvaljivim nosačima, razblaživačima ili pomoćnim lekovitim sredstvima kao što je opisano ovde, pri normalnim uslovima skladištenja, sa malo ili bez ikakve hemijske razgradnje ili raspadanja na primer tokom šest meseci ili duže, obično dvanaest meseci ili duže, na primer osamnaest meseci ili duže. 'Stabilnost u čvrstom stanju' označava da jedinjenje može da se skladišti kao izolovana forma čvrste supstance u kojoj je dato u mešavini sa, na primer, farmaceutski prihvatljivim nosačima, razblaživačima ili pomoćnim lekovitim sredstvima kao što je ovde opisano, pri normalnim uslovima skladištenja, sa malo ili bez ikakve transformacije čvrstog stanja (npr. hidratacija, dehidratacija, solvatizacije, desolvatizacije, kristalizacije, rekristalizacije ili faze prelaska u stanje čvrste supstance).
[0084] Pojmovi "nehigroskopno" i "nehigroskopnost" i srodni pojmovi kako se ovde koristi se odnose na supstance koje apsorbuju manje od 5% vode po težini (u odnosu na njihovu sopstvenu težinu) kada su izložene stanju visoke relativne vlažnosti, na primer 90 % relativne vlažnosti, i/ili ne podležu promenama u pogledu forme kristala u uslovima velike vlažnosti i/ili ne apsorbuju vodu u telo kristala (interna voda) u uslovima velike relativne vlažnosti.
Kristalne forme
[0085] U drugom varijantnom rešenju, pronalazak daje kombinaciju koja obuhvata so sa dodatkom kiseline iz jedinjenja prema formuli (1)
koje je mlečna so u pretežno kristalnom obliku i jedan ili više drugih terapijskih agenasa [0086] U jednom izvođenju kristalna forma je izabrana iz:
FL1: karakteristične po modelu XRPD (rendgenska difrakcija praha) sa difrakcionim uglom (2θ/°), maksimum na 16,81, i
FL2: karakteristične po modelu XRPD sa difrakcionim uglom (2θ/°), maksimum na 22,34.
[0087] Pod "znatno kristalno" se podrazumeva da su mlečna so jedinjenja iz formule (1) jesu 50 % do 100% kristalni, a posebno mlečna so jedinjenja prema formuli (1) mogu da budu najmanje 50% kristalne, ili najmanje 60% kristalne, ili najmanje 70% kristalne, ili najmanje 80% kristalne, ili najmanje 90% kristalne, ili najmanje 95% kristalne, ili najmanje 98% kristalne, ili najmanje 99% kristalne, ili najmanje 99,5% kristalne, ili najmanje 99,9% kristalne, na primer 100% kristalne.
[0088] Preporučljivo je da mlečna so jedinjenja prema formuli (1) jesu (ili mogu da budu izabrani iz grupe koja se sastoji od tih) koji su 95% do 100 % kristalni, na primer, najmanje 98% kristalni, ili najmanje 99% kristalni, ili najmanje 99,5% kristalni, ili najmanje 99,6% kristalni ili najmanje 99,7% kristalni ili najmanje 99,8% kristalni ili najmanje 99,9% kristalni, na primer 100% kristalni.
[0089] Kristalne forme prema ovom pronalasku, u stanju čvrste supstance, mogu da budu rastvorene (npr. hidratisane) ili nerastvorene (npr. anhidrovane).
[0090] U jednom izvođenju pronalaska, kristalne forme su nesolvatizovane (npr. anhidrovane).
[0091] Pojam "anhidrovani" kako se ovde koristi ne isključuje mogućnost prisustva neke vode ili u soli (npr. kristal soli). Na primer, može da postoji prisustvo vode na površini soli (npr. slani kristal), ili manjih količina u telu soli (npr. kristal). Najčešće, anhidrovana forma sadrži manje od 0,4 molekula vode po molekulu jedinjenja, i preporučljivije sadrži manje od 0,1 molekula vode po molekulu jedinjenja, na primer 0 molekula vode.
[0092] U nekom drugom izvođenju pronalaska, kristalne forme su solvatizovane. Kada su kristalne forme hidratisane, one mogu da sadrže, na primer, maksimalno tri molekula vode kristalizacije, češće maksimalno dva molekula vode, npr. jedan molekul vode ili dva molekula vode. Nestehiometrijski hidrati mogu takođe da budu formirani u njima je broj prisutnih molekula vode manji od jedan ili je neka druga necelobrojna vrednost. Na primer, kada postoji manje od jednog molekula vode, može da bude na primer 0,4, ili 0,5 ili 0,6 ili 0,7 ili 0,8, ili 0,9 molekula vode prisutnih po molekulu jedinjenja.
[0093] Drugi solvati obuhvataju alkoholate kao što su etanoli i izopropanolati.
[0094] Ovde opisane kristalne forme, njihovi pojedinačni kristali i strukture njihovih kristala čine još neka varijantna rešenja ovog pronalaska.
[0095] Kristalne forme i strukture njihovog kristala mogu da se karakterišu upotrebom jednog broja tehnika koje obuhvate rendgensku kristalografiju jednog kristala, rendgensku difrakciju praha (XRPD), i diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC) i infracrvenu spektroskopiju, npr. infracrvenu spektroskopiju Furijeovom transfomacijom (FTIR). Ponašanje kristala u uslovima promenljive vlažnosti može da se analizira pomoću gravimetrijskih studija za adsorpciju isparenja i takođe pomoću XRPD (rendgenska difrakcija praha čvrstih supstanci - rendgenska strukturna analiza).
[0096] Određivanje strukture kristala jedinjenja može da se izvede pomoću rendgenske kristalografije koja može da se izvede uobičajenim postupcima, kao što su oni koje su opisane ovde i u Fundamentals of Crystallography, C. Giacovazzo, H. L. Monaco, D. Viterbo, F.
Scordari, G. Gilli, G. Zanotti and M. Catti, (International Union of Crystallography/Oxford University Press, 1992 ISBN 0-19-855578-4 (p/b), 0-19-85579-2 (h/b)). Ova tehnika obuhvata analizu i tumačenje rendgenske difrakcije jednog kristala.
[0097] Alternativno, kristalna struktura jedinjenja može da se analizira tehnikom rendgenske difrakcije praha čvrstih supstanci (XRPD). XRPD (rendgenska difrakcija praha čvrstih supstanci) može da se izvede uobičajenim postupcima kao što su oni koji se opisuju ovde i u Introduction to X-ray Powder Diffraction, Ron Jenkins and Robert L. Snyder (John Wiley & Sons, New York, 1996). Prisustvo maksimalnih vrednosti definisanih (nasuprot slučajnoj buci u pozadini) na difraktogramu rendgenske difrakcije praha ukazuje da jedinjenje ima izvestan stepen kristaliniteta.
[0098] Rendgenska struktura nekog jedinjenja se karakteriše difrakcionim uglom (2θ) i interplanarnim rastojanjem (d) parametara spektra rendgenske difrakcije. Ovi su povezani Bragovom jednačinom, nλ=2d Sin θ, (gde je n=1; λ=talasna dužina korišćene katode; d=interplanarno rastojanje; i θ=difrakcioni ugao). Ovde su interplanarna rastojanja, difrakcioni ugao i celokupan model difrakcije su važni za identifikaciju kristala u rendgenskoj difrakciji praha, zbog karakteristika ovih podataka. Relativni intenzitet ne treba striktno tumačiti jer može da varira zavisno od pravca rasta kristala, veličina čestice i uslova merenja. Pored toga, uglovi difrakcije obično znače one koji odgovaraju opsegu od 2θ±0.2°. Maksimalne vrednosti znače glavne maksimalne vrednosti i obuhvataju maksimalne vrednosti ne veće od srednje pri uglovima difrakcije koji su drugačiji od gore navedenih. Jedinjenje prema formuli (1) i njegove soli dobijene dodatkom kiseline mogu da postoje u jednom broju različitih kristalnih formi i ove se opisuju detaljnije i karakterišu u Primerima.
Kristalne forme slobodne baze (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil,-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon(uporedni primeri)
[0099] Utvrđeno je da slobodna baza jedinjenja prema formuli (1) postoji u najmanje šest različitih kristalnih formi od čega su tri forme (forme ovde označene kao FB1, FB2 i FB5) nestabilne na vazduhu, i tri (forme ovde označene kao FB3, FB4 i FB6) su stabilne na vazduhu. Karakteristike kristalnih formi slobodne baze su opisane u daljem tekstu u Primeru 6A.
Forma FB1
[0100] Dat je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon u kristalnoj formi koje karakteriše model XRPD (rendgenske difrakcije praha) sa maksimalnom vrednošću difrakcionog ugla (2θ/°) na 5,52.
[0101] Poželjno, model model XRPD takođe dostiže maksimalne vrednosti na difrakcionim uglovima (2θ/°) od 15,21, 16,11, 16,72, 18,21 i 20,29.
[0102] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže maksimume na difrakcionim uglovima (2θ/°) od 9,44, 11,05, 11,99, 17,09, 19,23, 19,73, 21,09 i 26,72.
[0103] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan na Slici 1 ovde.
[0104] U nekom drugom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak daje postupak za dobijanje kristalne forme FB1, koji sadrži rastvaranje (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanona u n-butanolu da se formira zasićeni rastvor i zatim dodavanjem di(izopropil) etra da se stvori talog kristalne forme FB1.
[0105] Kristalna forma FB1 je nestabilna u vazduhu i pretvara se u formu FB3 (videti dole) pošto se ostavi.
[0106] Prema tome, dat je postupak za dobijanje kristalne forme FB3 kao što je ovde definisano, čiji postupak obuhvata izlaganje forme FB1 vazduhu tokom vremenskog perioda dovoljnog da se omogući odvijanje transformacije u FB3.
Forma FB2
[0107] Dat je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon u kristalnoj formi koju karakteriše model XRPD koji ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 5,35.
[0108] Poželjno, model XRPD takođe dostiže difrakcione uglove (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 14,68, 17,00, 18,61, 19,86 i 20,15.
[0109] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni uglao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 6,73, 10,40, 10,67, 18,26, 18,87, 19,24, 21,13, 21,44 i 26,86.
[0110] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan na Slici 2 ovde.
Dat je postupak za dobijanje kristalne forme FB2, koji sadrži rastvaranje (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanona u THF (tetrahidrofuran) da se formira zasićeni rastvor i zatim dodavanjem izopropil acetata da se stvori talog kristalne forme FB2.
[0111] Kristalna forma FB2 je nestabilna na vazduhu i pretvara se u formu FB3 (videti dole) pošto se ostavi.
[0112] Prema tome, dat je postupak za dobijanje kristalne forme FB3 kao što je ovde definisano, koji obuhvata izlaganje forme FB2 vazduhu tokom vremenskog perioda dovoljnog da se omogući odvijanje transformacije u FB3.
Forma FB3
[0113] Dat je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon u kristalnoj formi koju karakteriše model XRPD koji ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 6,05.
[0114] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 12,15, 13,60, 15,77, 17,82, 18,89, 19,64, 20,20 i 20,93.
[0115] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni uglao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 7,87, 9,15, 10,22, 16,62, 17,16, 22,19, 23,33 i 24,53.
[0116] Najpoželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan na Slici 3 ovde.
[0117] Forma FB3 je stabilna na vazduhu na temperaturi od 40 °C i pri relativnoj vlažnosti od 75% najmanje jedan mesec i stoga je pogodna za upotrebu u čvrstim farmaceutskim supstancama. Prema tome, u nekom drugom varijantnom rešenju, data je čvrsta farmaceutska supstanca koja sadrži 2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon slobodnu bazu u kristalnoj formi FB3 kako je ovde definisana.
Forma FB4
[0118] Dat je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon u kristalnoj formi koju karakteriše model XRPD ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 6,29.
[0119] Poželjno, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 8,91, 9,96, 14,11, 16,11, 17,11, 18,48, 19,91, 21,57, 22,46, 23,59 i 24,88.
[0120] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 12,62, 17,40, 17,88, 19,33, 20,35 i 27,25.
[0121] Najpoželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan na Slici 4 ovde.
[0122] Utvrđeno je na osnovu studija rendgenske kristalografije da forma FB4 ima kristalnu strukturu koja pripada tetragonalnoj prostornoj grupi P42/n i ima parametre kristalne rešetke na 293 K a=b=28.2, c=6.0 Å, α = β = γ = 90°. Dijagram pakovanja kristala je prikazan na Slici 5.
[0123] S tim u skladu, dat je (2,4-dihidroksi-5-izopropilfenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon slobodna baza koja je kristalna i:
(a) ima kristalnu strukturu kao što je izneto na Slici 5; i/ili
(b) ima kristalnu strukturu kako je definisano koordinatama ovde u Tabeli 5; i/ili
(c) ima parametre kristalne rešetke na 293 K a=b=28.2, c=6.0 A, α = β = γ = 90°; i/ili
(d) ima kristalnu strukturu koja pripada tetragonalnoj prostornoj grupi kao što je P42/n.
[0124] Kristalna forma FB4 je stabilan dihidrat i može da se koristi za pripremu čvrstih farmaceutskih supstanci. Prema tome, data je čvrsta farmaceutska supstanca koja sadrži 2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon slobodna baza u kristalnoj formi FB4 kako je ovde definisano. Dat je postupak za dobijanje kristalne forme FB4, koji sadrži rastvaranje (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanona u etanolu da se formira zasićeni rastvor i zatim dodavanjem di(izopropil) etra da se stvori talog kristalne forme FB4.
Forma FB5
[0125] Dat je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon u kristalnoj formi koju karakteriše model XRPD ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 7,12.
[0126] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 9,71, 10,14, 13,73, 16,58, 18,71, 19,46, 20,15 i 22,35.
[0127] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 11,50, 14,60, 15,34, 16,94, 21,97, 23,43 i 26,36.
[0128] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan na Slici 6 ovde. Dat je postupak za dobijanje kristalne forme FB5, čiji način dobijanja obuhvata rastvaranje (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon u izopropanolu da se formira zasićeni rastvor i zatim dodavanjem izopropil acetata da bi se formirao talog kristalnog oblika FB5.
Forma FB6
[0129] Dat je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon u kristalnoj formi koji karakteriše model XRPD sa difrakcionim ugloma (2θ/°) maksimalno na 18,66.
[0130] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) maksimalno na 9,09, 9,68, 16,08, 16,46, 16,94, 18,13, 20,05 i 22,48.
[0131] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) maksimalno na 4,60 i 26,53.
[0132] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 7.
Kristalne forme soli formirane između (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-5-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanona i hlorovodonične kiseline (uporedni primeri)
[0133] Utvrđeno je da soli hlorovodonične kiseline jedinjenja prema formuli (1) postoje u najmanje šest različitih kristalnih formi od čega je jedna (forma ovde označena kao FH3) stabilna na vazduhu, a četiri (forme ovde označene kao FH1, FH2, FH4 i FH5) su nestabilne na vazduhu.
Forma FH1
[0134] Dat je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon hlorovodonična so u kristalnoj formi koju karakteriše model XRPD ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 7,34.
[0135] Poželjno, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 5,59, 7,99, 10,33, 14,32, 15,29, 18,59 i 25,32.
[0136] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) maksimalno na 11,70, 13,95, 14,72, 16,37, 16,82, 19,99, 20,40, 20,82, 21,26, 22,57, 23,01, 24,60, 25,82, 27,10, 28,27 i 28,78.
[0137] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 8.
Dat je postupak za dobijanje kristalne forme FH1, koji obuhvata dodavanje etil acetata/HCI i metanola slobodnoj bazi 2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanona da se dobije rastvor i zatim se uklanjaju rastvarači i ostavlja so dihidrohlorida.
Forma FH2
[0138] Data je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon hlorovodonična so u kristalnoj formi karakterisana modelom XRPD ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednoću na 3,40.
[0139] Poželjno, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 6,81, 9,03, 11,84, 15,70, 16,10, 18,13, 20,84, 23,19, 23,94, 24,78 i 25,65.
[0140] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 6,04, 13,01, 13,69, 16,59, 17,17, 21,39, 21,87, 24,78, 25,97, 26,94, 27,59, 28,06 i 29,53. Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 9.
[0141] Forma FH2 može da se dobije taloženjem iz zasićenog rastvora DMF (dimetilformamid) forma FH1 korišćenjem acetona kao anti-rastvarača. Prema tome, dat je postupak za dobijanje kristalne forme FH2, koji obuhvata formiranje zasićenog rastvora forme FH1 u DMF-u i zatim dodavanje acetona da se stvori talog forme FH2.
Forma FH3
[0142] Data je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon hlorovodonična so u kristalnoj formi koja se karakteriše modelom rendgenske difrakcije praha ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 9,35.
[0143] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 10,40, 10,78, 12,51, 14,78, 18,74, 19,09, 21,68, 22,32, 23,07, 24,86, 25,14 i 29,02.
[0144] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) maksimalno na 5,83, 10,78, 11,35, 11,71, 13,35, 13,81, 14,10, 17,18, 17,65, 19,46, 20,11, 21,18, 23,71, 26,49, 27,03, 28,09, 28,70 i 29,52.
[0145] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 10.
[0146] Forma FH3 može da se dobije dodavanjem hlorovodonične kiseline (HCI-a) u dioksanu rastvoru etanola (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanona slobodne baze. U skladu sa tim, dat je postupak za dobijanje soli hlorovodonika forme FH3, koji obuhvata (i) rastvaranje 2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon slobodne baze u etanolu, (ii) tome se dodaje rastvor vodonik hlorida u dioksanu; (iii) isparavanje dobijene mešavine do sušenja; (iv) rastvaranje ostatka u toplom etanolu : voda (9:1; 5 mL); (v) zasejavanja rastvora i mešanje rastvora tokom najmanje dva sata (npr. najmanje 4 ili 6 ili 8 ili 10 ili 12 ili 14 sati), i uklanjanje stvorenog taloga forme FH3.
Forma FH4
[0147] Data je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon hlorovodonična so u kristalnoj formi karakterisana modelom rendgenske difrakcije praha i ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 11,62.
[0148] Poželjno, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 7,04, 11,62, 15,54, 16,68, 18,54, 20,73, 22,26, 22,94, 23,77, i 25,07.
[0149] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 9,89, 12,30, 13,27, 14,14, 16,06, 17,99, 19,24, 23,36, 24,63, 25,72, 26,91 i 27,63.
[0150] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 11.
[0151] Forma FH4 može da se dobije pomoću taloga iz rastvora DMF korišćenjem 1,4-dioksana kao antirastvarača. Prema tome, u jednom drugom varijantnom rešenju, dat je postupak za dobijanje kristalne forme FH4, koji obuhvata formiranje zasićenog rastvora forme FH1 u DMF-u i zatim dodavanjem 1,4-dioksana da se stvori talog forme FH4.
Forma FH5
[0152] Data je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon hlorovodonična so u kristalnoj formi koja se karakteriše modelom XRPD koji ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 2,32.
[0153] Poželjno, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°), sa maksimalnim vrednostima na 6,15, 11,79, 15,79, 20,81, 22,76 i 23,76.
[0154] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 12.
[0155] Forma FH5 može da se dobije taloženjem iz zasićenog rastvora metanola korišćenjem acetona kao antirastvarača.
Kristalne forme soli formirane između (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanona i kiseline L-laktata
[0156] Soli mlečne kiseline jedinjenja prema formuli (1) postoje na jednoj nestabilnoj formi (FL3) i dve stabilne forme (FL1 i FL2).
Forma FL1
[0157] U jednom drugom izvođenju, ovaj pronalazak daje (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon so L-laktata u kristalnoj formi koja se karakteriše modelom XRPD koji ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 16,81.
[0158] Poželjno, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 6,53, 13,10, 14,13, 14,40, 17,22, 18,65, 19,52, 19,82, 22,33, 22,84 i 23,09.
[0159] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 6,18, 8,39, 11,08, 15,21, 16,21, 20,49, 20,76, 21,13, 22,02, 23,94, 25,19, 26,41, 26,95 i 27,81.
[0160] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 13.
[0161] Forma FL1 može da se dobije stavljanjem u suspenziju (2,4-dihidroksi-5-izopropilfenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon slobodne baze u mešavini etanola i EtOAc (etil acetat) (u zapreminskom odnosu od 3:5); dodavanje L-laktične kiseline mešavini (npr. pri čemu je L-laktična kiselina u formi rastvora u etanolu); izbistrivanjem mešavine (npr. zagrevanjem do bistrine i/ili filtracijom sve preostale čvrste supstance); mešanjem izbistrene mešavine za zasejavanje i uklanjanjem kristalne forme FL1, npr. filtracijom.
Forma FL2
[0162] U jednom drugom izvođenju, ovaj pronalazak daje (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon so L-laktata u kristalnoj formi koja se karakteriše modelom rendgenske difrakcije praha ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 22,34.
[0163] Poželjno, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) maksimalno na 8,03, 10,71, 11,98, 13,13, 15,39, 16,09, 16,61, 17,26, 18,17, 18,82, 20,40, 21,01, 21,53, 22,34, 22,56, 23,71 i 27,70.
[0164] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 24,30, 24,65, 26,56 i 28,29.
[0165] Najpoželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 14.
[0166] Utvrđeno je na osnovu studija rendgenske kristalografije zraka da forma FL2 ima kristalnu strukturu koja pripada prostornoj grupi monoklinične prostorne grupe P21i ima parametre kristalne rešetke na 293 K a=5.8 b=16.6, c=14.9 A, β = 98 α =γ = 90°. Dijagram pakovanja kristala za FL2 je prikazan ovde na Slici 15.
[0167] S tim u skladu, u jednom drugom izvođenju, pronalazak daje (2,4-dihidroksi-5-izopropilfenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon L-laktat koji je kristalni i:
(a) ima kristalnu strukturu kao što je izneto na Slici 15; i/ili
(b) ima kristalnu strukturu kako je definisano koordinatama ovde u Tabeli 16; i/ili
(c) ima parametre kristalne rešetke na 293 K a=5,8 b=16,6, c=14,9 Å, β = 98 α =γ = 90°; i/ili
(d) ima kristalnu strukturu koja pripada monokliničnoj prostornoj grupi kao što je P21.
[0168] Kristalna forma FL2 je stabilan hidrat koji je nominalno trihidrat jer ima tri kristal pozicije; pozicije vode u asimetričnoj jedinici ali one nisu 100% zauzete na sobnoj temperaturi i vlažnosti. Forma FL2 može da se koristi za dobijanje čvrstih farmaceutskih supstanci. Prema tome, u nekom drugom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak daje čvrstu farmaceutsku supstancu koja sadrži 2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon L-laktat u kristalnoj formi FL2 kako je ovde definisano.
[0169] Forma FL2 može da se dobije taloženjem iz zasićenog rastvora metanola korišćenjem acetona kao antirastvarača. Prema tome, u jednom drugom varijantnom rešenju, pronalazak daje postupak za dobijanje kristalne forme FL2, čiji postupak obuhvata formiranje zasićenog rastvora forme FL1 u metanolu: voda (poželjno u odnosu 9:1) i zatim dodavanje acetona da se stvori talog forme FL2.
Forma FL3
[0170] U jednom drugom izvođenju, ovaj pronalazak daje (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon so L-laktata u kristalnoj formi koja se karakteriše modelom rendgenske difrakcije praha (XRPD) ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 5,53.
[0171] Još poželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 11,07, 13,16, 16,69, 17,17, 18,00, 18,49, 19,28, 21,05, 22,47, i 22,84.
[0172] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 8,36, 13,85, 19,79, 20,34, 21,47, 21,93, 24,56, 26,28, 27,06, 27,47 i 29,11.
[0173] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 16.
[0174] Forma FL3 je nestabilna forma koja može da se dobije taloženjem iz zasićenog THF rastvora korišćenjem heptana kao antirastvarača. Prema tome, u jednom drugom varijantnom rešenju, pronalazak daje postupak za dobijanje kristalne forme FL3, čiji postupak obuhvata formiranje zasićenog rastvora forme FL1 u THF i onda dodavanje heptana da se stvori talog forme FL3.
Kristalne forme soli formirane između (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-di-hidro-izoindol-2-il]-metanona i sumporne kiseline (uporedni primeri)
[0175] Soli sumporne kiseline postoje u dve nestabilne forme (FS1 i FS2) i četiri stabilne forme (FS3, FS4, FS5 i FS6).
[0176] So 1:1 može da se dobije rastvaranjem (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon slobodne baze u sumpornoj kiselini i zatim isparavanjem do suvoće.
Forma FS1
[0177] U jednom drugom izvođenju, ovaj pronalazak daje (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon so sulfata u kristalnom obliku koja se karakteriše modelom XRPD koji ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 4,79.
[0178] Poželjno, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 10,02, 11,28, 14,38, 15,27, 16,91, 18,29, 20,12, 21,76 i 22,32.
[0179] Još poželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 10,68, 12,89, 17,64, 18,86, 19,28, 20,82, 21,21, 22,89, 23,83, 24,22, 24,42, 25,13 i 29,04. Najpoželjnije model rendgenske difrakcije praha (XRPD) je uglavnom kao što je prikazan na Slici 17 ovde.
[0180] Forma FS1 može da se dobije pripremom zasićenog rastvora u odnosu 1:1 soli (videti gore) u vodi na sobnoj temperaturi i zatim polako dodavanjem acetonitrila da se stvori talog forme FS1.
[0181] Prema tome, u jednom drugom varijantnom rešenju, pronalazak daje postupak za dobijanje kristalne forme FS1, koji sadrži formiranje zasićenog rastvora forme 1:1 soli u vodi i zatim dodavanje acetonitrila da se stvori talog forme FS1.
Forma FS2
[0182] Data je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon so sulfata u kristalnom obliku koja se karakteriše modelom rendgenske difrakcije praha (XRPD) koji ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 7,43.
[0183] Poželjno, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°), sa maksimalnim vrednostima na 7,03, 8,67, 11,76, 13,84, 17,50 i 23,20.
[0184] Još poželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) takođe ispoljava difrakcioni ugao (2θ/°) maksimalno na 4,17, 8,09, 9,27, 9,65, 10,41, 10,98, 12,53, 14,55, 15,39, 16,24, 16,89, 18,05, 18,93, 19,47, 24,21, 25,21, 25,75, 26,62 i 27,67.
[0185] Najpoželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) je u principu kao što je ovde prikazan na Slici 18. Dat je postupak za izradu forme FS2, koji obuhvata rastvaranje Jedinjenja (1) u koncentrovanoj H2SO4(sumporna kiselina) i dodavanje acetonitrila (npr.4 zapremine u odnosu na H2SO4) da se stvori talog forme FS2.
Forma FS3
[0186] Dat je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon so sulfata u kristalnom obliku koja se karakteriše modelom rendgenske difrakcije praha (XRPD) koji ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 5,43.
[0187] Još poželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 10,30, 11,24, 14,26, 14,91, 16,41, 17,53, 18,38, 18,61, 19,01, 19,92, 21,77, 22,67, 24,23 i 25,36.
[0188] Još poželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 4,81, 12,94, 13,98, 15,62, 19,38, 20,27, 20,71, 21,19, 23,79, 27,38 i 28,82.
[0189] Još poželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) je u principu kao što je prikazan na Slici 19 ovde.
[0190] Forma FS3 može da se dobije tako što se forma FS1 ostavi da se suši na vazduhu tokom 2 dana.
Forma FS4
[0191] Data je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon so sulfata u kristalnom obliku koja se karakteriše modelom XRPD koji ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 7,48.
[0192] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 7,16, 7,97, 8,82, 9,09, 9,37, 10,45, 11,77, 14,36, 16,21, 16,99, 17,28, 17,59, 18,90, 23,13, 23,68 i 23,96.
[0193] Još poželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 4,64, 8,42, 13,25, 13,54, 15,03, 17,96, 19,43, 19,83, 21,36, 24,77, 25,64, 26,19, 26,73, 27,20, 27,76 i 28,64.
[0194] Još poželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 20.
[0195] Forma FS4 može da se dobije inkubiranjem forme FS2 na nekoliko nedelja na 40°C i 75% relativne vlažnosti.
Forma FS5
[0196] Dat je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon so sulfata u kristalnoj formi koju karakteriše model rendgenske difrakcije praha (XRPD) koji ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 7,99.
[0197] Poželjno, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 7,11, 9,33, 9,57, 10,45, 11,64, 13,27, 14,28, 15,60, 16,98, 17,65, 18,01, 18,80, 23,21, 23,51, 23,92, 25,06 i 26,24.
[0198] Još poželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) takođe dostiže difrakcione uglove (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 4,70, 14,65, 15,12, 19,32, 19,83, 21,08, 24,30, 27,28 i 28,67.
[0199] Još poželjnije, model XRPD je u principu kao što je prikazan ovde na Slici 21.
[0200] Forma FS5 može da se dobije postupkom tako što se forma FS2 ostavi na vazduhu da se osuši.
Forma FS6
[0201] Data je (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon so sulfata u kristalnoj formi koja se karakteriše modelom XRPD koji ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 4,82.
[0202] Poželjno, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) takođe ispoljava difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 9,98, 14,45, 15,38, 16,97, 18,18, 20,23, 20,93 i 22,29.
[0203] Još poželjnije, model XRPD takođe dostiže difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnim vrednostima na 11,35, 12,92, 17,52, 19,42, 21,31, 21,66, 21,89, 22,84, 23,04, 23,94, 24,51, 25,26 i 29,18.
[0204] Još poželjnije, model rendgenske difrakcije praha (XRPD) je u principu kao što je prikazan na Slici 22 ovde.
[0205] Forma FS6 može da se dobije pripremom zasićenog rastvora u odnosu 1:1 soli (videti gore) u DMF-u i zatim dodavanjem toluena da se stvori talog FS6.
Farmaceutske upotrebe soli dobijene dodatkom kiseline i kristalnih formi Jedinjenja (1)
[0206] U nekim drugim varijantnim rešenjima, ovaj pronalazak daje kombinaciju za upotrebu:
● u medicini
● kao inhibitor proteina toplotnog šoka Hsp90; ili
● u lečenju bolesti ili stanja koje obuhvata ili nastaje iz nenormalnog rasta ćelije kod sisara; ili
● u postupku inhibiranja proteina toplotnog stresa Hsp90, koji obuhvata dovođenje u kontakt Hsp90 proteina sa ovom kombinacijom; ili
● za upotrebu u lečenju proliferativnih poremećaja izabranih iz karcinoma bešike, dojke, kolona, bubrega, epidermisa, jetre, pluća ezofagusa, žučne kese, jajnika, pankreasa, želuca, grlića materice, štitaste žlezde, prostate, gastrointestinalnog sistema, ili kože; hematopoeznog tumora limfoidnog porekla; hematopoeznog tumora mijeloidnog porekla; kancera tiroidnih folikula; tumora mezenhimnog porekla; tumora centralnog ili perifernog nervnog sistema; melanoma, seminoma, teratokarcinoma; osteokarcinoma; kseroderma pigmentozum; keratoakantom; kancera folikula štitaste žlezde; ili Kapošijevog sarkoma; ili
● u proizvodnji leka za profilaksu ili lečenje gljivičnih, protozomnih ili gljivičnih stanja ili uslova bolesti, drugačijih od stanja ili uslova bolesti izazvanih Plasmodium falciparum; ili
● u proizvodnji leka za istovremeno administriranje sa agensom protiv gljivica, agensom protiv protozoa ili agensom protiv parazita, poželjno agensom protiv gljivica, za sprečavanje, smanjenje ili reverziranje razvoja otpornosti na agens protiv gljivica, agens protiv protozoa ili agens protiv parazita; ili
● u postupku sprečavanja ili smanjenja razvoja otpornosti na agens protiv gljivice, koji obuhvata primenu pacijentu kombinacije agensa protiv gljivica, agensa protiv protozoa ili agensa protiv parazita i ove kombinacije; ili
● u proizvodnji leka za upotrebu u smanjenju ili eliminisanju bola kod pacijenta koji oseća bolove; ili
● u proizvodnji leka za lečenje jedne ili više nocicepcija, somatskog bola, organskog bola, akutnog bola, hroničnog bola, hiperalgesije, alodinije, postoperativnog bola, bola zbog preosetljivosti, glavobolje, bola usled upalnih procesa, neurološkog bola, mišićno skeletnog bola, bola povezanog sa kancerom ili vaskularnog bola; ili
● u postupku sprečavanja ili smanjenja oštećenja neurona kod pacijenta koji je pretrpeo moždani udar, koji obuhvata administriranje pacijentu delotvnorne neurozaštitne količine ove kombinacije; ili
● u proizvodnji leka za sprečavanje ili smanjenje rizika od moždanog udara kod pacijenata kod kojih postoji rizik od moždanog udara; ili
● za profilaksu ili lečenje virusne infekcije ili virusne bolesti; ili
● za upotrebu u blokiranju ili inhibiranju replikacije virusa u organizmu domaćinu; ili
● u postupku blokiranja ili inhibiranja virusne replikacije u organizmu domaćinu, koji obuhvata da se organizmu domaćinu primeni kombinacija; ili
● u postupku za: (i) senzitizaciju malignih ćelija na lek protiv kancera; (ii) ublažavanje ili smanjenje pojave otpornosti na lek protiv kancera; (iii) preokretanje otpornosti na lek protiv kancera; (iv) pojačanje aktivnosti leka protiv kancera; (v) odlaganje ili sprečavanje pojave otpornosti na lek protiv kancera, koji obuhvata administriranje subjektu kome je potrebna kombinacija; ili
● u postupku za lečenje kancera čiji postupak primenu subjektu kome je potrebna ova kombinacija, čiji postupak karakteriše odsustvo otpornosti na lek; ili
● u postupku za profilaksu ili lečenje ili ublažavanje ili smanjenje pojave stanja bolesti ili uslova bolesti posredovane Hsp90 proteinom kod subjekta koji dobija terapiju sa terapijskim agensom, koji obuhvata primenu subjektu ove kombinacije, pri čemu stanje ili uslov bolesti posredovani proteinom toplotnog šoka Hsp90 jeste razvoj otpornosti na pomenuti terapijski agens; ili
● u postupku za: (i) senzitizaciju malignih ćelija na agensu protiv kancera; (ii) ublažavanje ili smanjenje otpornosti na agens protiv kancera; (iii) preokretanje otpornosti na agens protiv kancera; (iv) pojačanje aktivnosti agensa protiv kancera; (v) odlaganje ili sprečavanje pojave otpornosti na agens protiv kancera, pri čemu postupakobuhvata primenu subjektu koji dobija terapiju sa pomenutim agensom protiv kancera, kombinacijom; ili
● u postupku za lečenje kancera kod subjekta koji prima terapiju sa agensom protiv kancera, pri čemu taj postupak obuhvata primenu subjektu kome je to potrebna kombiancija; čiji postupak karakteriše odsustvo otpornosti leka na agens protiv kancera.
Novi postupci
[0207] Primena takođe opisuje novi postupak za dobijanje jedinjenja prema formuli (1), njegovih analoga, i njihovih soli dobijenih dodatkom kiseline (npr. so L-laktata) i takođe nove postupke za dobijanje ključnih intermedijata u sintezi jedinjenja prema formuli (1).
[0208] U skladu sa tim, u nekom drugom varijantnom rešenju, pronalazak opisuje postupak za dobijanje jedinjenja prema formuli
gde R<1>jeste C1-4alkil; koji sadrži izlaganje katalitičkoj hidrogenaciji jedinjenja prema formuli (3):
pri čemu je PG zaštitna grupa koja se može ukloniti u uslovima hidrogneacije i A-B je CH-CH3ili C=CH2i, kada je proizvod ovog postupka slobodna baza, nakon čega opciono pretvara jedinjenje iz formule (2) u so sa dodatkom kiseline (npr. so L- laktata).
[0209] Zaštitna grupa PG je poželjno benzil grupa.
[0210] Deo A-B može da bude bilo CH-CH3ili C=CH2.
[0211] U jednom izvođenju, deo A-B je C=CH2.
[0212] U jednom drugom izvođenju, deo A-B je CH-CH3.
[0213] Katalitička hidrogenacija se najčešće izvodi korišćenjem paladijumskog katalizatora, na primer na ugljeniku (paladijum ili drveni ugalj).
[0214] Gore opisani postupak može da se koristi za dobijanje jedinjenja prema formuli (1) ili njegovih etil, propil i butil homologa. Poželjno postupak se koristi za dobijanje jedinjenja gde R<1>jeste metili ili etil.
[0215] U jednom izvođenju, R<1>je metil, tj. postupak se koristi za dobijanje jedinjenja prema formuli (1).
[0216] U jednom drugom izvođenju, R<1>je etil.
[0217] Jedinjenja prema formuli (3) mogu da se dobiju reakcijom jedinjenja prema formuli (3a):
sa Vitigovim (Wittig) reagensom pogodnim za pretvaranje grupe -C(=O)-CH3u grupu -C(=CH2)-CH3. Na primer, jedinjenje acetofenona (3a) može da reaguje sa Vitigovim reagensom MePPh3Br u prisustvu baze kao što je butil litijum ili kalijum tert-butoksid u THF-u (tetrahidrofuran) da se dobije jedinjenje iz formule (3) pri čemu A-B jeste C=CH2.
[0218] Tako, u nekom drugom varijantnom rešenju, pronalazak daje postupak za dobijanje jedinjenja prema formuli (3) kako je ovde definisano, čiji postupak obuhvata reakciju jedinjenja prema formuli (3a) kao što je ovde definisana sa Vitiigovim reagensom ili drugim reagensom pogodnim za pretvaranje grupe -C(=O)-CH3u grupu -C(=CH2)-CH3.
[0219] Alternativno, i poželjnije, jedinjenja prema formuli (3) mogu da se pripreme reakcijom supstituisane benzojeve kiseline prema formuli (4) dole, ili njegovom aktiviranom formom ili njegovim derivatom, sa izoindolinom prema formuli (5) dole.
[0220] S tim u skladu, još jedno varijantno rešenje, ovaj pronalazak opisuje postupak za dobijanje jedinjenja prema formuli (3) kako je ovde definisano, koji obuhvata:
(a-i) reakciju jedinjenja prema formuli (4), ili njegovu aktivnu formu ili njegov derivat sa jedinjenjem prema formuli (5):
pri uslovima formiranja amida.
[0221] Ovaj pronalazak još daje postupak za dobijanje jedinjenja prema formuli (2) kako je ovde definisano, koji obuhvata:
(a-i) reakciju jedinjenja prema formuli (4) kako je ovde definisano, ili njegovu aktivnu formu ili derivat sa jedinjenjem prema formuli (5) kako je ovde definisano, u uslovima formiranja amida da se dobije jedinjenje prema formuli (3); i
(b) izlaganje jedinjenja prema formuli (3) katalitičkoj hidrogenaciji da se uklone zaštitna grupe PG i, kada A-B jeste C=CH2, smanje grupu A-B na izopropil grupu i, kada proizvod postupka jeste slobodna baza, posle toga opciono da se pretvori jedinjenje prema formuli (2) u so dobijenu dodatkom kiseline (npr. so L-laktata).
[0222] Pre dovođenje u reakciju benzojeva kiseline (4) sa izoindolinom (5), benzojeva kiselina može prvo da bude pretvorena u hlorid kiseline tretiranjem sa tionil hloridom, ili putem reakcije sa oksalil hloridom u prisustvu katalitičke količine dimetil formamida, ili putem reakcije kalijumove soli ove kiseline sa oksalil hloridom. Kiseli hlorid može zatim da reaguje sa izoindolinom (5) u prisustvu nenametljive baze kao što je trietilamin. Reakcija može da se izvodi na otprilike sobnoj temperaturi u polarnom rastvaraču kao što je dioksan.
[0223] Kao alternativa korišćenju gore opisanog postupka sa hlorovodoničnom kiselinom, benzojeva kiselina (4) može da reaguje sa izoindolinom (5) u prisustvu tipa reagensa za združivanje amida koji se obično koristi u formiranju amidnih ili peptidnih veza. Primeri takvih reagenasa obuhvataju 1,1'-karbonildiimidazol (CDI), 1,3-dicikloheksilkarbodiimid (DCC) (Sheehan et al, J. Amer. Chem Soc.1955, 77, 1067), 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)-karbodiimid (ovde označen kao EDC ili EDAC ali u tehnici takođe poznat kao EDCI i WSCDI) (Sheehan et al, J. Org. Chem., 1961, 26, 2525), vezivna sredstva na bazi uronijuma kao što je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU) i vezivna sredstva na bazi fosfonijuma kao što su 1-benzo-triazoliloksitris-(pirolidino)fosfonijum heksafluorofosfat (PyBOP) (Castro et al, Tetrahedron Letters, 1990, 31, 205). Vezni agensi na bazi karbodimida se veoma povoljno koriste u kombinaciji sa 1-hidroksi-7-azabenzotriazolom (HOAt) (L. A. Carpino, J. Amer. Chem. Soc., 1993, 115, 4397) or 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (Konig et al, Chem. Ber., 103, 708, 2024-2034). Poželjni vezni agensi obuhvataju EDC (EDAC) i DCC u kombinaciji sa HOAt ili HOBt.
[0224] Jedan poseban vezni agens sadrži EDC u kombinaciji sa HOBt (hidroksibenzotriazolom).
[0225] Poželjni vezni agens je 1,1'-karbonildiimidazol (CDI).
[0226] Reakcija vezivanja se najčešće izvode u nevodenom, neprotonskom rastvaraču kao što je acetonitril, dioksan, dimetilsulfoksid, dihlorometan, dimetilformamid ili N-metilpirolidin, ili u vodenom rastvaraču opciono zajedno sa jednim ili više surastvarača. Reakcija može da se izvodi na sobnoj temperaturi. Reakcija može da se izvodi u prisustvu nenametljive baze, na primer tercijalni amin kao što je trietilamin ili N,N-diizopropiletilamina.
[0227] Jedinjenja prema formuli (4) kod kojih A-B jeste C=CH2mogu da se dobiju pomoću niza reakcija prikazanih na Šemi 1.
Šema 1
[0228] Početni materijal za šemu 1 je 2,4-dihidroksibenzojeva kiselina metil estar (11) koji je monoacetilisan pomoću reakcije sa anhidridom sirćetne kiseline u prisustvu N,N-dimetil-4-aminopiridina da se dobije di-estar (12). Pretvaranje di-estra (12) u substituisanom acetofenonu (13) se postiže dovođenjem u reakciju jedinjenja (12) sa trifluorometansulfonskom kiselinom i opciono acetil hlorid da se dobije acetofenon (13). Acetofenon (13) se tretira benzil bromidom u prisustvu baze kao što je kalijum karbonat da se dobije jedinjenje dibenzila (14) koja se zatim dovodi u reakciju sa Vitigovim reagensom MePPh3Br u prisustvu baze kao što je butil litijum ili kalijum tert-butoksid u tetrahidrofuranu (THF) da se dobije izopropenil jedinjenje (15). Hidroliza estra u karboksilnoj kiselini (16) se obično izvodi obradom sa vodenim alkalnim metal hidroksidom kao što je kalijum natrijum hidroksid. Hidrolizna reakcija može da se izvede korišćenjem organskog surastvarača kao što je alkohol (npr. metanol) i reakciona mešavine se obično zagreva na neekstremnoj temperaturi, na primer do maksimalno oko 50-90 °C.
[0229] Jedinjenja prema formuli (4) gde A-B jeste CH-CH3može da se dobije kako je opisano na Šemi 1 osim da se jedinjenje izopropenila (15) smanjuje na odgovarajuće jedinjenje izopropila katalitičkom hidrogenacijom, i dobijeno dihidroksi jedinjenje se zatim ponovo benzilira pomoću reakcije sa benzil bromidom u prisustvu baze kao što je gore opisano.
[0230] Reakciona sekvenca ilustrovana na Šemi 1 gore daje podsticaj prinosima koji su značajno bolji od prinosa u odgovarajućim koracima u Šemi 4 PCT/GB2006/001382 i koristi reagense i uslove koji bolje odgovaraju sintezi proizvodnih razmera. Pored toga, najvažnije sa aspekta sinteze velikih razmera, sekvenca reakcije prikazana na šemi 1 izbegava potrebu za hromatografskim prečišćavanjem.
[0231] U skladu sa tim, ovaj pronalazak opisuje postupak ("Posredni proces A") za dobijanje jedinjenja prema formuli (13):
čiji postupci obuhvataju:
(i) reakciju jedinjenja prema formuli (11):
sa (a) anhidridom sirćetne kiseline u prisustvu 4-dimetilaminopiridina (najčešće zagrevanjem, npr. na temperaturi do oko 60 °), posle čega sledi (b) trifluorometanesulfonska kiselina i opciono acetil hlorid (najčešće na sobnoj temperaturi); ili
(ii) reakciju jedinjenja iz formule (11) sa acetil hloridom u prisustvu katjonske smole sa jonsko izmenjivačkim učinkom kao što je Amberlyst™ 15 smola.
[0232] Posredni proces A daje prinose jedinjenja (13) koja su bolja od prinosa opisanih u odgovarajućem postupku u PCT/GB2006/001382.
[0233] Pronalazak takođe opisuje postupak ("Proces intermedijata B") za dobijanje jedinjenja prema formuli (15):
putem reakcije jedinjenja prema formuli (14) sa Vitigovim reagensom MePPh3Br u prisustvu kalijum tert-butoksida u THF.
[0234] Posredni proces B daje značajno bolji prinos proizvoda od prinosa opisanog za odgovarajući korak procesa u PCT/GB2006/001382 gde se n-butil litijum koristi kao baza u Vitigovoj reakciji. Pored toga, baza kalijum tert-butoksida je pogodnija za procese proizvodnih razmera nego n-butil litijum i reakcija može da se izvede na sobnoj temperaturi ili sa samo umerenim hlađenjem dok upotreba n-butil litijuma obično zahteva da se reakciona mešavina ohladi na temperature od 0 °C ili niže. Hromatografsko prečišćavanje nije neophodno.
[0235] U daljem varijantnom rešenju, ovaj pronalazak opisuje postupak za izradu jedinjenja prema formuli (16) kako je ovde definisan, koji sadrži posredni proces B posle kog sledi hidroliza metil estar grupe u jedinjenju (15) korišćenjem hidroksida alkalnog metala kao što je kalijum hidroksid da se dobije jedinjenje prema formuli (16).
[0236] Jedinjenja izoindolina (5) mogu da se dobiju sintetičkim putem prikazanim na Šemi 2.
Šema 2
[0237] Na šemi 2, dipropargilamin (17) reaguje sa N-(benziloksikarboniloksi) sukcinimidom (17a) u etil acetatu u prisustvu kalijum karbonata da se dobije Z-zaštićen dipropargilamin (18) (pojam "Z" se odnosi na benziloksikarbonil grupu). Kao alternativa N-(benziloksikarboniloksi) sukcinimidu, benzil hloroformat može da se koristi za uvođenje benziloksikarbonil zaštitne grupe. Jedinjenje (18) se zatim dovodi u reakciju sa propargil alkoholom (19) u prisustvu Vilkinsonovg katalizatora u 2+2+2 reakciji cikloadicije da se dobije Z-zaštićeni izoindolin (20).
Hidroksimetil grupa na izoindolinu (20) se zatim pretvara u meziloksi grupu pomoću reakcije sa metansulfonil hloridom u polarnom rastvaraču kao što je THF u prisustvu nenametljive baze kao što je trietilamin da se dobije jedinjenje mezila (21). Jedinjenje mezila (21) se dovodi u reakciju sa alkilpiperazinom (22) u rastvoru acetona da se dobije Z-zaštićeni izoindolin (23).
Uklanjanje grupe benziloksikarbonila da se dobije nezaštićeno jedinjenje izoindolina (5) se zatim izvodi hidrogenizacijom nad paladijumom na katalizatoru na drvenom uglju.
[0238] Varijacija u pogledu redosleda reakcije prikazana na Šemi 2 je ilustrovana na Šemi 2a.
Šema 2a
[0239] Na šemi 2a, pre nego konvertovanjem u mezilat (21), hidroksimetilindolin (20) oksidira do odgovarajućeg aldehida (21a) korišćenjem manganovog dioksida u dihlorometanu, i aldehid se zatim pretvara u jedinjenje prema formuli (23) pomoću reakcije jedinjenja prema formuli (22) u uslovima reduktivne aminacije, npr. u prisustvu natrijum triacetoksiborohidrida. Z-grupa se zatim uklanja pomoću hidrogenizacije kako je gore opisano u Šemi 2 da bi se dobio intermedijat (5).
[0240] S tim u skladu, još jedno varijantno rešenje, ovaj pronalazak opisuje postupak za dobijanje jedinjenja prema formuli (5) kako je ovde definisano, koji obuhvata:
(i) reakciju jedinjenja prema formuli (24):
pri čemu je PG zaštitna grupa (kao što je benziloksikarbonil) i LG<1>je izlazna grupa (kao što je meziloksi) sa jedinjenjem prema formuli (22) kako je ovde definisano; ili
(ii) reakciju jedinjenja prema formuli (25):
pri čemu je PG zaštitna grupa (kao što je benziloksikarbonil), sa jedinjenjem prema formuli (22) kao što je ovde definisano u uslovima reduktivne aminacije (npr. u prisustvu natrijum triacetoksiborohidrida; i posle toga uklanjanjem zaštitne grupe PG, npr. pomoću hidrogenacije kada je PG benziloksikarbonil grupa.
[0241] U Šemama 2 i 2a, intermedijat (20) se dobija pomoću 2+2+2 reakcije cikloadicije u prisustvu katalizatora na bazi prelaznog metala. Kao alternativa 2+2+2 reakciji cikloadicije, intermedijar (20) može da se dobije sekvencom reakcija prikazanih na Šemi 3.
Šema 3
[0243] Na Šemi 3, bis-bromometil estar (26) benzojeve kiseline se dovodi u reakciju sa benzilaminom u polarnom aprotonskom rastvaraču kao što je tetrahidrofuran (THF) u prisustvu nenametljive baze kao što je trietilamin da se dobije N-benzil dihidroizoindol intermedijat (27).
Ester grupa u intermedijatu (27) se zatim redukuje na odgovarajući alkohol korišćenjem hidrida litijum aluminijuma u THF da se dobije hidroksimetildihidroizoindol intermedijat (28).
Debenzilacija hidroksimetildihidroizoindol intermedijata (28) se zatim izvodi pomoću hidrogenacije nad paladijumom na katalizatoru na drvenom uglju u alkoholu (npr. etanol) rastvaraču na blago povišenoj temperaturi (npr. do oko 50 °) da se dobije intermedijat (29).
Intermedijat (29) se zatim pretvara u intermedijat (20) pomoću reakcije sa reagensom pogodnim za uvođenje benziloksikarbonil ("Z") grupe na atom azota dihidroizoindol prstena. Na primer, intermedijat (29) može da reaguje sa benzil hloroformatom u polarnom neprotonskom rastvaraču kao što je tetrahidrofuran (THF) u prisustvu nenametljive baze kao što je trietilamin da se dobije intermedijat (20).
[0243] Suštinska prednost sintetičkih puteva prikazanih na Šemama 2, 2a i 3 je da različiti proizvodi intermedijata formirani istovremeno sa sintetičkim putem imaju odlična fizikohemijska svojstva koja su visoko korisna u sintezi velikih razmera. Tako, kada se kombinuje sa redosledom koraka u Šemi 1, rezultat je sintetička ruta koja ima značajne prednosti nad odgovarajućim sintetičkim rutama u našoj ranijoj prijavi PCT/GB2006/001382. Preciznije, glavne prednosti obuhvataju:
■ više prinose
■ lakše prečišćavanje (hromatografsko prečišćavanje nije neophodno)
■ poboljšana fizikohemijska svojstva intermedijata koja vode lakšem rukovanju
■ lakše se povećava u razmeri prema procesu proizvodnje
[0244] U nekom drugom varijantnom rešenju, pronalazak opisuje postupak za dobijanje jedinjenja prema formuli (6):
gde su R<2>i R<3>isti ili različiti i svaki je C1-4alkil ili NR<2>R<3>formira 4 do 7-člani zasićeni heterociklični prsten koji opciono sadrži dodatni heteroatom izabran iz O, N i S i opciono se zamenjuje pomoću jedne ili dve C1-4alkil grupe; i R<4>se bira iz vodonika, halogena, C1-5alkil i C3-4cikloalkil grupa; koji obuhvata:
(a-ii) reakciju jedinjenja prema formuli (7):
gde je PG zaštitna grupa koja se može ukloniti u uslovima hidrogenacije i R<4'>se bira iz vodonika, halogena, C1-5alkil, C2-5alkenil i C3-4cikloalkil grupa;
sa jedinjenjem prema formuli (8):
u prisustvu katalizatora na bazi prelaznog metala da se dobije jedinjenje prema formuli (9);
i
(b) izlaganjem jedinjenja prema formuli (9) katalitičkoj hidrogenaciji da se uklone zaštitne grupe PG i, kada je R<4'>C2-5alkenil, da se redukuje grupa R<4'>na C2-5alkil;
i posle toga, kada je jedinjenje prema formuli (6) dobijeno u obliku slobodne baze, opciono pretvaranjem slobodne baze u so sa dodatkom kiseline.
[0245] Ovaj pronalazak još opisuje postupak za dobijanje jedinjenja prema formuli (9) kako je ovde definisano, koji obuhvata:
(a-ii) reakciju jedinjenja prema formuli (7) kako je ovde definisano, sa jedinjenjem prema formuli (8) kako je ovde definisano, u prisustvu katalizatora na bazi prelaznog metala.
[0246] Reakcija jedinjenja prema formuli (7) sa jedinjenjem prema formuli (8) je primer 2+2+2 cikloadicije (videti članak autora C. P. Dell, J. Chem. Soc., Perkin Trans. I, 1998, 3873-3905 i reference na kraju). Reakcija se obično izvodi u inertnom rastvaraču kao što je toluen, uz zagrevanje (npr. na temperaturi u opsegu sobne temperature na 100 °C) u prisustvu katalizatora na bazi prelaznog metala. Poželjni katalizator je Vilkinsonov katalizator - hlorotris (trifenil-fosfin) rodijum (RhCI(PPh3)3).
[0247] U jednom posebnom izvođenju, jedinjenje prema formuli (8) je jedinjenje prema formuli (8a):
gde je R<1>kako je ovde definisan, a poželjno metil ili etil.
[0248] Jedinjenje prema formuli (8a) može da se dobije pomoću reakcije propargil bromida sa jedinjenjem prema formuli (22) (videti Šemu 2) u polarnom rastvaraču kao što je aceton u prisustvu baze kao što je kalijum karbonat.
[0249] U jednom izvođenju, R<1>je metil, tj. postupak se koristi da bi se dobilo jedinjenje prema formuli (1).
[0250] U jednom drugom izvođenju, R<1>je etil.
[0251] U formulama (7) i (9), R<4'>se bira iz grupa vodonika, halogena, C1-5alkila, C2-5alkenila i C3-4cikloalkila. U jednom preporučenom izvođenju, R<4'>je izopropil ili izopropenil, a preciznije izopropenil.
Biološka aktivnost i upotrebe u terapji
[0252] So mlečne kiseline jedinjenja prema formuli (1) je inhibitor Hsp90 i s tim u vezi će biti korisni u lečenju širokog spektra proliferativnih poremećaja kada se koriste u kombinaciji sa jednim ili više drugih terapijskih agenasa. Primeri takvih proliferativnih poremećaja se ne ograničavaju ali se mogu izabrati iz karcinoma, na primer karcinoma bešike, dojke, kolona (npr. kolorektalni karcinomi kao što su adenokarcinomi kolona i adenomi kolona), bubreg, epidermis, jetra, pluća, na primer adenokarcinomi sitnoćelijskog kancera pluća i nesitnoćelijskih karcinoma pluća, ezofagusa, žučne kese, jajnika, pankreasa, npr. egzokrinog karcinoma pankreasa, želuca, grlića materice, štitaste žlezde, prostate, gastrointestinalnog sistema, npr. gastrointestinalni stromalni tumori, ili kože, na primer karcinom skvamoznih ćelija; hematopoietički tumor limfoidnog porekla, na primer leukemija, hronična limfocitna leukemija, limfom B ćelija (kao što su difuzni limfomi velike B ćelije), limfom T ćelije, Hodžkinsov limfom, ne- Hodžkinsov limfom, limfom dlakave ćelije, ili Burketovi limfomi; hematopoietički tumor mijeloidnog porekla, na primer akutne hronične mijelogne leukemije, na Imatinib osetljive i refraktorne hronične mijelogne leukemije, mijelodisplastični sindrom, na Bortezomib osetljivi i refraktorni višestruki mijelomi, mijeloproliferativna bolest ili promijelocistična leukemija; kancer folikula štitaste žlezde; tumor mezenhimnog porekla, na primer fibrosarkom ili rabdomiosarkom; tumor centralnog ili perifernog nervnog sistema, na primer astrocitom, neuroblastom, gliom ili švanom; melanom; seminom; teratokarcinom; osteosarkom; kseroderma pigmentozum, keratokantom; kancer tiroidnih folikula; ili Kapošijev sarkom. Još jedan primer tumora mezenhimalnog porekla je Evingov sarkom.
[0253] Kanceri mogu da budu kanceri koji su osetljivi na Hsp90 inhibiciju, i takvi kanceri mogu da se utvrde pomoću postupka kako je objašnjen u poglavlju pod naslovom "Metode dijagnostikovanja".
[0254] Jedna grupa kancera obuhvata kancere dojke kod ljudi (npr. primarni tumor dojke, kancer dojke bez čvorića, invazivni adenokarcinomi kanala dojke, neendometroidni karcinomi dojke); i limfomi omotača ćelije. Pored toga, drugi kanceri su kolorektalni i endometrijalni kanceri.
[0255] Još jedan podskup kancera obuhvata hematopoietične tumore limfoidnog porekla, na primer leukemiju, hroničnu limfoidnu leukemiju, limfom omotača ćelije i limfom B ćelije (kao što je difuzni limfom velike B ćelije) i opciono dalje obuhvata hronične mijelogne leukemije i višestruke mijelome.
[0256] Preporučeni podskup kancera se sastoji od ErbB2 pozitivnoog kancera dojke, prostate, pluća, i gastričnog kancera; hronične mileloidne leukemije, sa androgenim receptorom povezan kancer prostate; od Flt3 zavisma akutna mijeloidna leukemija, mijelom povezan sa Brafovom mutacijom; višestruki mijelom; i gastrointestinalni stromalni tumori (GIST).
[0257] Od ovih, posebno poželjni kanceri su tip sa više mijeloma i tip tumora otpornog na velcade kako je ovde definisano.
[0258] Drugi poželjni podskup kancera se sastoji od kancera prostate otpornog na hormon, metastatičnih melanoma, HER2 pozitivni kancer dojke, mutant na EGFR pozitivan nesitnoćelijski kancer pluća i na Gleevec otporne gastrointestinalne stromalne tumore.
[0259] Kombinacije uključujući jedinjenja inhibitore proteina Hsp90 koji su natrijum laktat jedinjenja prema formuli (1) (posebno L laktata) i njihove kristalne forme mogu takođe da se koriste za terapiju drugih uslova kao što su virusne infekcije, parazitska bolest, autoimune bolesti (npr. višestruka skleroza i lupus eritematoza), neurodegenerativni poremećaji (npr. Alchajmerova bolest), upala, dijabetes tipa I i II, ateroskleroza i kardijalna bolest.
[0260] Kombinacije koje obuhvataju jedinjenja inhibitore Hsp90 koji su natrijum4 laktat jedinjenja prema formuli (1) (posebno L-laktat) i njegove krisalne forme mogu takođe da budu klinički korisne u transplantaciji i imunosupresiji.
[0261] Kombinacije koje obuhvataju jedinjenja inhibitore Hsp90 koja su natrijum laktat od jedinjenja prema formuli (1) (posebno L-laktat) i njegove kristalne forme mogu da imaju klinički učinak u prethodno opisanim bolestima kada se koriste u kombinaciji sa postojećim ili novim terapijskim agensima.
[0262] Na osnovu aktivnosti klijent proteina proteina toplotnog šoka Hsp90 i eksperimentalnog dokaza, sledeći poremećaji mogu biti posebno osetljivi na lečenje pomoću kombinacija uključujući jedinjenja inhibitore proteina toplotnog šoka Hsp90 koji su natrijum laktat jedinjenja iz formule (1) (posebno L-laktat) i njegove kristalne forme.
ErbB2 pozitivan gen za kancer dojke, prostate, pluća i gastrični kancer
[0263] Prekomerna ekspresija ErbB2 gen (član familije receptora epidermalnog faktora rasta kod ljudi) (HER-2) se javlja u približno 30 % kancera dojke i regulisano smanjene ErbB2 receptora pomoću herceptinom senzitiziranih ćelija na Taxol. Prekomerna ekspresija ErbB2 se povezuje sa prethodnom prognozom i otpornošću na lek (Tsugawa et. al., 1993. Oncology 1993; 50: 418).
Mutant EGFR (receptora epidermalnog faktora rasta) kod raka pluća
[0264] Somatske mutacije u domenu kinaze receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), uključujući deleciju (gubitak) L858R i eksona 19, ističu odgovor na gefitinib i erlotinib slučaju nesitnoćelijskog kancera pluća (NSCLC). Sticanjem otpornosti na ove inhibitore tirozin kinaze je u nekim slučajevima posredovano drugom mutacijom, T790M. Antibiotici na bazi ansamicina, kao što je glendamicin, potencijalno inhibiraju protein toplotnog šoka 90 (Hsp90), promovišući ubikvitinom posredovanu razgradnju onkogenske kinaze koja zahteva pratioca za odgovarajuće konformaciono savijanje. Izlaganje ćelijskih linija EGFR mutanta i glendamicinom izazvana označena deplecija fosfo-Akt i ciklina D1 kao i apoptoza. Ovi podaci ukazuju da je mutaciono aktiviranje receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR) povezano sa zavisnošću od Hsp90 za stabilnost i da inhibicija Hsp90 može da prestavlja novu strategiju za terapiju EGFR mutanta NSCLC.
Hronična mijeloidna leukemija
[0265] Neprirodni BCR-Abl protein se stvara putem hromozomne translokacije i daje kao rezultat konstruktivno aktivan domen Abl kinaze. Ovaj događaj translokacije je prikazan kao uzrok za CML (hronična mijeloidna leukemija). P210BcrAbl je poznati klijent protein za Hsp90. Lečenje BCR-Abl ćelijske linije K562 sa inhibitorom proteina toplotnog šoka hsp90 izazvanom apoptozom. Bcr-Abl inhibitor Gleevec<®>takođe izaziva apoptozu u K562 ćelijama; međutim Gleevec<®>otporne K562 ćelije i dalje zadržavaju osetljivost prema inhibitorima proteina toplotnog šoka Hsp90 (Gorre et. al.2002, Blood 100: 3041-3044).
Od androgenog receptora zavisan kancer prostate
[0266] Kinaza androgenog receptora je klijent protein proteina toplotnog šoka Hsp90. Terapija zamene hormona se obično usvaja tamo gde hirurška operacija ne rešava problem kancera.
Kancer može da postane otporan na hormonsko manipulisanje putem mutacije receptora. Hsp90 regulacija ovog receptora će i dalje biti održiva postmutacija.
[0267] Isto bi se moglo primeniti na kancere dojke zavisne od estrogena.
Od Flt3 zavisna akutna mijeloidna leukemija
[0268] Interna duplikacija receptora tirozin kinaze Flt3 vodi konstruktivnoj aktivaciji i onkogenezi. Ove interne duplikacije su prijavljene u 20% od svih registrovanih slučajeva AME (akutne mijeloidne leukemije) i ukazuju na lošu prognozu. Sličnija aktivaciji kinaze ABL u CML, ovo predstavlja još jedan primer jedne genetičke lezije koja daje podsticaj malignitetu. Postoji predviđanje da će inhibitori proteina toplotnog šoka Hsp90 biti klinički korisni za pacijente s obzirom da Flt3 jeste klijent protein proteina toplotnog šoka Hsp90 (Bali et. al., 2004 Cancer Res.64(10):3645-52).
Melanomi povezani sa mutacijom Braf gena
[0269] Braf kodira kinazu serina/treonina koja se mutira u 70% svih melanoma.80% ovih predstavlja mutaciju jedne V599E tačke koja daje povišenu aktivnost kinaze BRAF genu. Ova mutacija takođe radi transformaciju u NIH3T3 ćelije (Bignell et. al., 2002 Nature.
417(6892):949-54).
Višestruki mijelomi
[0270] Inhibitor Hsp90 proteina 17-AAG potencijalno inhibira razmnožavanje na Bortezomib otporne ćelijske linije više mijeloma. Površinski nivoi ćelije IGF-1R i IL-6R su takođe bili smanjeni u 17-aag tretiranim MM-1 ćelijama (Mitsiades et. al., Blood 107:1092-1100, 2006). Autokrina stimulacija ćelija višestrukih mijeloma, kao i parakrinska stimulacija stromalnih ćelija koštane srži sa IL-6 se takođe smanjuje smanjenim regulisanjem IKK klijenta proteina toplotnog šoka Hsp90.
Višestruki mijelomi otporni na Velcade
[0271] Jedinjenja inhibitori Hsp90 koja su natrijum laktata jedinjenja prema formuli (1) (posebno L-laktat) i njegove kristalne forme mogu da se koriste u lečenju tipova tumora otpornih na velcade uključujući lečenje pacijenata sa drugom linijom omotača ćelije limfoma, indolentni ne-Hodžkinovi limfomi, stadijum IIIB i IV bronhioalveolarnih karcinoma, napredni nesitnoćelijski kancer pluća, dojke, kanceri prostate i jajnika i ne-Hodžkinovi limfomi.
Gastrointestinalni stromalni tumori (GIST)
[0272] GIST bolest posebno bolest koja zavisi od aktivacije faktora rasta ili prekomerne ekspresije (npr. c-komplet)
[0273] Drugi uslovi ili poremećaji za koje inhiitor proteina toplotnog šoka Hsp90 može da bude klinički koristan obuhvataju, ali se ne ograničavaju na:
Neurodegenerativne poremećaje
[0274] Hantingtonova bolest (HD) je progresivni neurodegenerativni poremećaj za koji ne postoji delotvorna terapija. Inhibicija proteina toplotnog šoka Hsp90 od strane GA i to rezultira regulisanim porastom proteina toplotnog šoka Hsps su delotvorni u sprečavanju agregacije hantington proteina u neuronskim ćelijama. (Sittler et. al., 2001, Human Molecular Genetics, Vol.10, No.121307-1315). Porast regulacije HSP može takođe da bude klinički upotrebljiv kod drugih bolesti pogrešnog slaganja npr. CID i Alchajmera.
Inflamatorna bolest, uključujući reumatoidni artritis, astmu, hroničnu opstruktivnu bolest pluća, i inflamatornu bolest creva
[0275] Glendamicin (GA) pokazuje da razdružuje HSF-1 (faktor toplotnog šoka 1) od proteina toplotnog šoka Hsp90 što vodi aktivaciji i nuklearnoj translokaciji HSF-1. HSF-1 naknadno deluje kao faktor transkripcije da se indukuje HSP90 i Hsp70. Uvod Hsp70 proteina se implicira u rezoluciji upale na indukovanom modelu edema kod miša (lanaro et al., 2004 Human Molecular Genetics, 2001, Vol.10, No.121307-1315). Dodatno, lečenje sa GA je inhibiralo aktiviranje IkapaB kinazu (IKK) pomoću TNF-a (faktor nekroze tumora) ili PMA (forbol miristat acetat). IkBa je regulator Nf-kB i Ap-1 (Broemer et. al.2004). Ap-1 i Nf-kB je glavni činilac transkripcije koji vodi do proizvodnje proinflamatornih citokina (Yeo et. al., 2004 Biochem Biophys Res Commun.30; 320(3):816-24). Stabilnost proinflamatornih transkripata citokina se takođe reguliše kroz inhibiciju p38 MapK (Wax et. al., 2003. Rheumatism Vol.48, No.2, pp 541-550).
Ateroskleroza
[0276] Poznato je da inflamatorne i imune ćelije igraju centralnu ulogu u pokretanju i progresiji ateroskleroze kod ljudi (Riganò et al., Ann. N. Y. Acad. Sci., 2007, 1107:1-10) i predloženo je da protein toplotnog šoka Hsp90 deluje kao autoantigen u aterosklerozi karotidne arterije. Riganò et al. su pronašli specifična antitela i ćelije protiv proteina toplotnog šoka Hsp90 u serumima 60% testiranih pacijenata koji su bolovali od karotidnih ateroskleroznih plakova ali nikakva specifična antitela i T ćelije protiv proteina toplotnog šoka Hsp90 u serumima zdravih pacijenata. Stoga, jedinjenja inhibitori proteina toplotnog šoka Hsp90 koji su natrijum laktata jedinjenja prema formuli (1) (posebno L-laktat) i njegove krisalne forme trebalo bi da budu korisni u lečenju ili sprečavanju ateroskleroze.
Bolest povezana sa angiogenezom, uključujući ali ne ograničavajuće se na: angiogenezu tumora, reumatoidni artritis, i dijabetesnu retinopatiju
[0277] Uvođenje angiogeneze se reguliše Hsp90 klijentskim proteinima eNOS i Akt u ćelijama endotela (Sun and Liao, 2004 Arterioscler Thromb Vasc Biol.24(12):2238-44). Potiskivanje faktora koji izaziva hipoksiju (HIF)-1a može takođe da poremeti rast, angiogenezu i sazrevanje krvnh sudova kod gastričnih tumora na modelu miša. (Stoeltzing et. al., 2004 J Natl Cancer Inst; 96:946-956.).
Dijabetes tipa I i tipa II
[0278] Inhibicija proteina toplotnog šoka Hsp90 ima duboko dejstvo na Akt signaliziranje kao i na e-nos. Postoje dva ključna regulatora u apoptozi ćelija endotela izazvanoj visokom glukozom u slučaju dijabetesa tipa I (Lin et. al., 2005 J Cell Biochem.1; 94(1):194-201) i razvoju hipertenzije u slučaju dijabetesa tipa II (Kobayashi et. al., 2004 Hypertension.
44(6):956-62.).
Imunosupresija i transplatacija
[0279] Inhibicija Hsp90 je pokazala da reguliše smanjenje Lck, tirozin kinaze specifične za T ćeliju potrebnu za aktiviranje T ćelije. (Yorgin et. al., 2000 J Immunol.15; 164(6):2915-23.)
Bolest srca
[0280] Ishemijska bolest srca je najčešći uzrok smrti u zapadnom svetu. Proteini toplotnog šoka (Hsps), i ponajpre protein toplotnog šoka Hsp70 (izazvan lečenjem radicicolom) pokazuju zaštitnu aktivnost za srce na miocitima srca kod pacova (Griffin et. al., 2004). Inhibicija proteina toplotnog šoka Hsp90 daje kao rezultat otpuštanje HSF-1 iz kompleksa pratioca i njegovu naknadnu aktivaciju Hsp gena. Inhibicija Hsp90 takođe vodi do regulisanja smanjenja HIF-1, koji obuhvata patogenezu ishemijske bolesti srca i moždani udar.
Infektivne bolesti
[0281] Hepatits C virusne NS2/3 proteaze u klijentskom proteinu proteina toplotnog šoka Hsp90 i aktivnosti proteina toplotnog šoka Hsp90 je neophodan za procesiranje i replikaciju virusa (Whitney et. al., 2001. Proc Natl Acad Sci U S A.20;98(24):13931-5.).
Parazitska bolest
[0282] Glendamicin (GA) pokazuje antimalarijsku aktivnost naspram Plasmodium falciparum koji je ortolog proteina toplotnog šoka Hsp90. Rast plazmodijuma je inhibiran glendamicinom sa GA na IC50slično onome što je primećeno kod hlorokina. GA je takođe delotvoran naspram sojeva Plasmodium falciparum otpornih na hlorokin (Kamar et. al., 2003. Malar J.15; 2(1):30).
Inhibicija, prevencija ili reverzni razvoj otpornosti na lek
[0283] Kao što je gore razmatrano, modulatori ili inhibitori funkcije proteina stresa generalno (a posebno Hsp90) predstavljaju klasu hemiolekova koja ima potencijal za: (i) sticanje osetljivosti kada je reč o malignim ćelijama i lekovima protiv kancera i/ili terapijama; (ii) ublažavanju ili smanjenju pojave otpornosti na lekove protiv kancera i/ili lečenja; (iii) preokretanje otpornosti na lekove protiv kancera i/ili lečenja; (iv) pojačanje aktivnosti lekova protiv kancera i/ili terapija; (v) odlaganje ili sprečavanje pojave otpornosti na lekove protiv kancera i/ili lečenja.
[0284] S tim u skladu, ovaj pronalazak još obezbeđuje kombinacije prema ovom pronalasku za upotrebu u:
● postupak za profilaksu ili lečenje (ili ublažavanje ili smanjenje pojave) stanja bolesti ili uslova bolesti posredovane proteinom toplotnog šoka Hsp90, koji obuhvata primenu subjektu kome je potrebno kombinacije prema ovom pronalasku, kod koga stanje ili uslov bolesti posredovani proteinom toplotnog šoka Hsp90 jeste razvoj otpornosti na lek protiv kancera.
● postupak za: (i) senzitizaciju malignih ćelija na lek protiv kancera; (ii) ublažavanje ili smanjenje pojave otpornosti na lek protiv kancera; (iii) preokretanje otpornosti na lek protiv kancera; (iv) pojačanje aktivnosti leka protiv kancera; (v) odlaganje ili sprečavanje pojave otpornosti na lek protiv kancera, koji obuhvata primenu leka subjektu kod kog postoji potreba za jedinjenjem iz ovog pronalaska.
● postupak za lečenje kancera koji obuhvata primenu leka subjektu kome je potrebno jedinjenje prema ovom pronalasku, koji karakteriše odsustvo otpornosti na lek.
● postupak za profilaksu ili lečenje (ili ublažavanje ili smanjenje pojave) stanja bolesti ili uslova bolesti posredovane proteinom toplotnog šoka Hsp90 kod subjekta koji dobija terapiju sa terapijskim agensom (kao što je lek protiv kancera), koji obuhvata primenu subjektu jedinjenja prema ovom pronalasku, gde stanje ili uslov za bolest posredovanu proteinom toplotnog šoka Hsp90 jeste razvoj otpornosti na pomenuti terapijski agens.
● postupak za: (i) senzitizaciju malignih ćelija na agens protiv kancera; (ii) ublažavanje ili smanjenje otpornosti na agens protiv kancera; (iii) preokretanje otpornosti na agens protiv cancera; (iv) pojačanje aktivnosti agensa protiv kancera; (v) odlaganje ili sprečavanje pojave otpornosti na agens protiv kancera, koji obuhvata primenu subjektu koji dobija terapiju sa pomenutim agensom protiv kancera jedinjenja prema ovom pronalasku.
● postupak za lečenje kancera kod subjekta koji prima terapiju sa agensom protiv kancera, koji obuhvata primenu subjektu kome je potrebna kombinacija prema ovom pronalasku, koji karakteriše odsustvo otpornosti leka na agens protiv kancera
Biološka aktivnost
[0285] Biološka aktivnost natrijum laktata jedinjenja prema formuli (1) (posebno L laktata) i njegovih kristalnih formi, npr. kao inhibitora proteina toplotnog šoka Hsp90, može da se izmeri korišćenjem ogleda opisanih u primerima u daljem tekstu, na primer eksperimenti sa izotermalnom kalorimetrijskom titracijom (ITC) opisani u Primeru 6 i ogledi sa antiproliferativnom aktivnošću opisani u Primeru 7. Nivo aktivnosti ispoljen pomoću datog jedinjenja u ITC ogledu može da se definiše u pojmovima Kdvrednosti i jedinjenja prema ovom pronalasku imaju vrednost Kdkoja je manja od 1 mikromolara. U ogledima sa antiproliferativnom aktivnošću, nivo aktivnosti ispoljen pomoću datog jedinjenja u ogledu može da se definiše u okviru IC50vrednosti, i svako od jedinjenja prema ovom pronalasku ima IC50vrednost manju od 0,1 mikromolara.
hERG
[0286] Krajem 1990-tih, izvesne lekove, koje je odobrila Agencija za hranu i lekove S.A.D. je bilo neophodno povući iz prodaje u S.A.D. kada je otkriveno da su umešani u smrtne ishode prouzrokovane poremećajima srca. Naknadno je utvrđeno da je neželjeno dejstvo ovih lekova bilo razvoj aritmija prouzrokovanih blokiranjem hERG kanala u ćelijama srca. Kanal hERG je jedna porodica kanala kalijum jona čiji je prvi član identifikovan krajem 1980-tih u mutiranoj voćnoj mušici Drosophila melanogaster (videti Jan, L.Y. and Jan, Y.N. (1990). A Superfamily of Ion Channels. Nature, 345(6277):672). Biološka svojstva hERG kanala kalijum jona su opisana u (The biophysical properties of the hERG potassium ion channel are described in Sanguinetti, M.C., Jiang, C., Curran, M.E., and Keating, M.T. (1995). Mehanistička veza između nasleđene i stečene aritmije srca (A Mechanistic Link Between an Inherited and an Acquired Cardiac Arrhythmia: HERG encodes the Ikr potassium channel. Cell, 81:299-307, and Trudeau, M.C., Warmke, J.W., Ganetzky, B., and Robertson, G.A. (1995). HERG, a Human Inward Rectifier in the Voltage-Gated Potassium Channel Family. Science, 269:92-95.
[0287] Eliminisanje hERG-ove aktivnosti blokiranja ostaje važna tema za razmatranje u razvoju svih novih lekova.
[0288] Jedinjenje prema formuli (1) ima nisku aktivnost hERG i dobru separaciju između inhibitorne aktivnosti proteina toplotnog šoka Hsp90 i aktivnosti hERG. Posebno jedinjenje prema formuli (1) ima srednju vrednost IC50u odnosu na hERG koja je veća od 30 puta izmerene vrednosti IC50jedinjenja u ogledima ćelijske proliferacije. Jedinjenje prema formuli (1) ima srednju IC50vrednost u odnosu na hERG koja je veća od 15 µM.
[0289] Jedinjenja prema ovom pronalasku imaju poželjna svojstva kada je reč o resorpciji, raspodeli, metabolizmu i eliminaciji (ADME) a naročito u pogledu bolje distribucije tumora.
Lečenje bola, neuropatije, moždanog udara i sličnih stanja
[0290] Kombinacije iz ovog pronalaska imaju inhibitornu ili modulišuću aktivnost prema proteinu toplotnog šoka Hsp90 i otuda su korisna za upotrebu u lečenju, ublažavanju ili sprečavanju nekih bolesti i stanja u kojima posreduje cdk5.
[0291] S tim u vezi, u prvom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za lečenje bola. U drugom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje moždanog udara.
[0292] U daljem varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za upotrebu kao agensa za zaštitu neurona.
[0293] U drugim varijantnim rešenjima, pronalazak obezbeđuje:
■ Kombinaciju prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u lečenju bola.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u smanjenju ili eliminaciji bola kod pacijenta (npr. sisara kao što je ljudsko biće) koje trpi bol.
■ Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za upotrebu u smanjenju ili eliminaciji bola kod pacijenta (npr. sisara kao što je ljudsko biće) koje trpi bol.
● Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako se ovde definiše za proizvodnju leka za lečenje bilo kog ili više bolova iz grupe kao što je nocicepcija, somatskog bola, organskog bola, visceralnog bola, akutnog bola, hroničnog bola, hiperalgesije, alodinije, postoperativnog bola, bola zbog preosetljivosti, glavobolje, bola usled upalnih procesa (reumatski, dentalni, dismenoreja ili infekcija), neurološkog bola, mišićno skeletnog bola, bola povezanog sa kancerom ili vaskularnog bola.
● Kombinacija prema ovom pronalasku kako se ovde definiše za upotrebu u lečenju jedne ili više nocicepcija, somatskog bola, organskog, akutnog bola, hroničnog bola, hiperalgesije, alodinije, postoperativnog bola, bola zbog preosetljivosti, glavobolje, bola usled upalnih procesa (reumatski, dentalni, dismenoreja ili infekcija), neurološkog bola, mišićno skeletnog bola, bola povezanog sa kancerom ili vaskularnog bola.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku, kako je definisano ovde za upotrebu u postupku lečenja bola kod pacijenta kao što je sisar (npr. ljudsko biće), čiji postupak obuhvata primenu pacijentu terapijski delotvorne količine ove kombinacije.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u postupku za smanjenje ili eliminaciju bola kod pacijenta (npr. sisara kao što je ljudsko biće) koje trpi bol, čiji postupak obuhvata primenu pacijentu ove kombinacije u količini delotvornoj za smanjenje ili eliminisanje bola.
● Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisana za upotrebu u postupku za lečenje jedne ili više nocicepcija, somatskog bola, visceralnog bola, akutnog bola, hroničnog bola, hiperalgesije, alodinije, postoperativnog bola, bola zbog preosetljivosti, glavobolje, bola usled upalnih procesa (reumatski, dentalni, dismenoreja ili infekcija), neurološkog bola, mišićno skeletnog bola, bola povezanog sa kancerom ili vaskularnog bola, čiji postupak obuhvata primenu pacijentu terapijski delotvorne količine ove kombinacije.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju moždanog udara.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u postupku za profilaksu ili lečenje moždanog udara kod pacijenta kao što je sisar (npr. ljudsko biće), čiji postupak obuhvata primenu pacijentu terapijski delotvorne količine ove kombinacije.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu kao agens za zaštitu neurona.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u postupku sprečavanja ili smanjenja oštećenja neurona kod pacijenta koji je pretrpeo moždani udar, čiji postupak obuhvata primenu pacijentu delotvorne neurozaštitne količine ove kombinacije.
■ Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za sprečavanje ili smanjenje rizika od moždanog udara kod pacijenata u opasnosti od moždanog udara, na primer pacijenta koji oseća bilo koji ili više faktora rizika izabranih iz vaskularne upale, ateroskleroze, arterijske hipertenzije, dijabetesa, hiperlipidemije i atrijalne fibrilacije.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za sprečavanje ili smanjenje rizika od moždanog udara kod pacijenata u opasnosti od moždanog udara, na primer pacijenta koji oseća bilo koji ili više faktora rizika izabranih iz vaskularne upale, ateroskleroze, arterijske hipertenzije, dijabetesa, hiperlipidemije i atrijalne fibrilacije.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u postupku za sprečavanje ili smanjenje rizika od moždanog udara kod pacijenata u opasnosti od moždanog udara, na primer pacijenta koji oseća bilo koji ili više faktora rizika izabranih iz vaskularne upale, ateroskleroze, arterijske hipertenzije, dijabetesa, hiperlipidemije i atrijalne fibrilacije, čiji postupak obuhvata primenu pacijentu delotvorne terapijske količine ove kombinacije.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju bolesti ili stanja ili uslova posredovanih od ciklina zavisnim tipom kinaze 5.
■ Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje stanja ili uslova bolesti posredovane od ciklina zavisnim tipom kinaze 5.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju bolesti ili stanja ili uslova posredovane od ciklina zavisnim tipom kinaze 5, čiji postupak obuhvata primenu ove kombinacije subjektu kom je potrebna.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u postupku za ublažavanje ili smanjenje pojave stanja ili uslova bolesti posredovane od ciklina zavisnim tipom kinaze 5, čiji postupak obuhvata primenu ove kombinacije subjektu kom je potrebna.
■ Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje stanja ili uslova bolesti posredovane od cdk5 ili p35.
■ Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje stanja ili uslova bolesti posredovane preko cdk5 ili p35, pomenuto stanje ili uslov bolesti nije Alchajmerova bolest, Hantingtonova bolest ili Krojcfeld-Jakobova bolest.
■ Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje stanja ili uslova bolesti posredovane preko cdk5 ili p35, pomenuto stanje ili uslov bolesti nije neurodgenerativna bolest.
■ Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje stanja ili uslova bolesti karakterišu povišeni nivoi cdk5 ili p35.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju stanja ili uslova bolesti posredovane preko cdk5 ili p35, pomenuto stanje ili uslov bolesti nije Alchajmerova bolest, Hantingtonova bolest ili Krojcfeld-Jakobova bolest.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju stanja ili uslova bolesti posredovane preko cdk5 ili p35, pomenuto stanje ili uslov bolesti nije neurodegenerativna bolest.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju stanja ili uslova bolesti koje karakterišu povišeni nivoi cdk5 ili p35.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u postupku za profilaksu ili lečenje stanja ili uslova bolesti posredovane preko cdk5 ili p35, pomenuto stanje ili uslov bolesti nije Alchajmerova bolest, Hantingtonova bolest ili Krojcfeld-Jakobova bolest, čiji postupak obuhvata primenu pacijentu kom je potrebno neke terapijski delotvorne količine ove kombinacije.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u postupku profilakse ili lečenju stanja ili uslova bolesti posredovane preko cdk5 ili p35, pomenuto stanje ili uslov bolesti nije neurodegenerativna bolest, čiji postupak obuhvata primenu pacijentu kom je potrebno neke terapijski delotvorne količine ove kombinacije.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u postupku profilakse ili lečenju stanja ili uslova bolesti koje karakterišu povišeni nivoi cdk5 ili p35, čiji postupak obuhvata primenu pacijentu kom je potrebna neke terapijski delotvorne količine ove kombinacije.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju neuropatije, kao što je periferna neuropatija, koja nije Alchajmerova bolest, Hantingtonova bolest ili Krojcfeld-Jakobova bolest.
■ Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje neuropatije, kao što je periferna neuropatija, koja nije Alchajmerova bolest, Hantingtonova bolest ili Krojcfeld-Jakobova bolest.
■ Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u postupku profilakse ili lečenju neuropatije, kao što je periferna neuropatija, koja nije Alchajmerova bolest, Hantingtonova bolest ili Krojcfeld-Jakobova bolest, čiji postupak obuhvata primenu pacijentu kom je potrebna terapijski delotvorne količine ove kombinacije.
Antigljivična, antiprotozomna, antivirusna i antiparazitska aktivnost
[0294] Kombinacije prema ovom pronalasku imaju antigljivičnu aktivnost, antiprotozomnu aktivnost i antiparazitsku aktivnost.
[0295] Posebno, kombinacija je korisna u lečenju infekcija patogenih gljivica, protozoa i parazita gde se infekcija patogenom normalno povezuje sa antitelom odgovornim za HSP90.
[0396] U jednom izvođenju, pronalazak daje kombinacije kako je ovde definisano za upotrebu kao antigljivične agense.
[0297] Primeri gljivica obuhvataju one koje su patogene kod ljudi i drugih životinja, na primer:
■ Kandida vrste kao što su Candida albicans i Candida tropicalis;
■ Kriptokokus vrste kao što je Cryptococcus neoformans i Cryptococcal meningitis;
■ Aspergilus vrste kao što je Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus i Aspergillus niger,
■ Mikrosporum vrste kao što su Microsporum canis i Microsporum gypseum;
■ Epidermofiton vrste;
■ Trihofiton vrste kao što je Trichophyton equinum, Trichophyton mentagrophytes i Trichophyton rubrum;
■ Epidermophyton floccosum;
■ Exophiala werneckii;
■ Fuzarijum vrste kao što je Fusarium solani;
■ Sporothrix schenckii;
■ Penicilinske vrste kao što je Penicillium rubrum;
■ Alternaria vrste;
■ Ceratocystis pilifera (patogeni biljaka);
■ Chrysosporium pruinosum;
■ Helminthosporium (srebrnasta kora) vrste;
■ Paecilomyces variotti;
■ kvasci, na primer Saccharomyces cerevisiae i Pityrosporum vrste kao što je Pityrosporum orbiculare i Pityrosporum ovale;
■ Histoplazma vrste kao što je Histoplasma capsulatum;
■ Kokcidija vrste;
■ Parakokcidija vrste; i
■ Blastomici vrste.
[0298] U nekom drugom izvođenju, pronalazak daje kombinacije kako je ovde definisano za upotrebu kao antiprotozomne agense.
[0299] Primeri protozoa obuhvataju:
■ Trypanosoma cruzi;
■ Leishmania species; na primer kompleks L. donovani (L. donovani, L. infantum, i L. chagasi); kompleks L. mexicana (3 glavne vrste - L. mexicana, L. amazonensis, i L. venezuelensis); L. tropica; L. major, L. aethiopica; i podvrsta Viannia parazita sa četiri glavne vrste (L. (V.) braziliensis, L. (V.) guyanensis, L. (V.) panamensis, i L. (V.) peruviana);
■ Toxoplasma gondii; i
■ Trichomonas vaginalis.
[0300] U nekom drugom izvođenju, pronalazak daje jedinjenja prema formuli (I) i njihove podgrupe kako su ovde definisani za upotrebu kao antiparazitske agense.
[0301] Primeri parazita obuhvataju parazitske crve kao što su:
■ parazitski okrugli crvi kao što je Ascaris lumbricoides;
■ parazitski ravni crvi kao parazitski metilji, npr. Schistosoma mansoni
[0311] Pronalazak takođe daje između ostalog:
● Kombinaciju prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju gljivičnog, protozomnog ili parazitskog stanja ili uslova bolesti (koje nije stanje ili uslov bolesti prouzrokovan Plasmodium falciparum), na primer stanje ili uslov bolesti karakterisano odgovorom antitela na protein toplotnog šoka Hsp90.
● Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje gljivičnog, protozomnog ili parazitskog stanja ili uslova bolesti (koje nije stanje ili uslov bolesti usled Plasmodium falciparum), na primer stanje ili uslov bolesti koje karakteriše odgovor antitela na protein toplotnog šoka Hsp90.
● Kombinacija prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku za profilaksu ili lečenje gljivičnog, protozomnog ili parazitskog stanja ili uslova bolesti (koje nije stanje ili uslov bolesti usled Plasmodium falciparum), na primer stanje ili uslov bolesti karakterisano odgovorom antitela na protein toplotnog šoka Hsp90, koji obuhvata administriranje subjektu kome je potrebna ove kombinacije.
● Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju gljivičnog stanja ili uslova bolesti, na primer stanje ili uslov bolesti koje se karakteriše odgovorom antitela na protein toplotnog šoka Hsp90.
● Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje gljivičnog stanja ili uslova bolesti, na primer stanje ili uslov bolesti karakterisano odgovorom antitela na protein toplotnog šoka Hsp90.
● Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju gljivičnog stanja ili uslova bolesti, na primer stanje ili uslov bolesti koje se karakteriše odgovorom antitela na protein toplotnog šoka Hsp90, čiji postupak obuhvata primenu ove kombinacije subjektu kom je potrebna.
● Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u sprečavanju, zaustavljanju ili preokretanju infekcije kod životinje (kao što je sisar, npr. ljudsko biće) patogenim gljivicama.
● Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za sprečavanje, zaustavljanje ili preokretanje infekcije kod životinje (kao što je sisar, npr. ljudsko biće) patogenim gljivicama.
● Kombinacija prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku za sprečavanje, zaustavljanje ili preokretanje infekcije kod životinje (kao što je sisar, npr. ljudsko biće) patogenim gljivicama, koji obuhvata primenu subjektu kome je potrebna ova kombinacija.
● Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za bilo koje gore navedene upotrebe ili postupke, a i kako je opisano na drugim mestima ovde.
● Upotreba kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje bilo kog stanja ili uslova bolesti koji su ovde opisani.
● Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano sa pomoćnim jedinjenjem koje je antigljivični agens (npr. antigljivični agens azola).
● Farmaceutska supstanca koja obuhvata kombinaciju iz ovog pronalaska uključujući dodatni terapiski agens koji je pomoćno jedinjenje koje je antigljivični aginsi (npr. antigljivični agens azola).
● Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano pri čemu pomoćni terapijski agens jeste antigljivični agens, antiprotozomni agens ili antiparazitski agens za upotrebu u sprečavanju, smanjenju ili preokretanju razvoja otpornosti na antigljivični agens, antiprotozomni agens ili antiparazitski agens (poželjno antigljivični agens).
● Kombinacija prema ovom pronalasku pri čemu pomoćni terapijski agens jeste antigljivični agens, antiprotozomni agens ili antiparazitski agens (poželjno antigljivični agens) za upotrebu u postupku sprečavanja ili smanjenja razvoja otpornosti na antigljivični agens, antiprotozomni agens ili antiparazitski agens kod pacijenta (npr. pacijent koji pripada ljudskoj vrsti), čiji postupak obuhvata primenu pacijentu kombinacije ove kombinacije .
● Kombinacija prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku za profilaksu ili lečenje (ili ublažavanje ili smanjenje pojave) stanja ili uslova bolesti posredovane proteinom toplotnog šoka Hsp90, čiji postupak obuhvata primenu subjektu kome je potrebno kombinacije jedinjenja prema ovom pronalasku kako je ovde definisano sa antigljivičnim, antiprotozomnim ili antiparazitskim lekom, kod koga je stanje ili uslov bolesti posredovane proteinom toplotnog šoka Hsp90 razvoj otpornosti na antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek.
● Kombinacija prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku za: (i) senzitizaciju gljivičnih, protozomnih ili parazitskih ćelija na antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek; (ii) ublažavanje ili smanjenje pojave otpornosti na antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek ; (iii) preokretanje otpornosti na antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek; (iv) pojačavanje aktivnosti antigljivičnog, antiprotozomnog ili antiparazitskog leka; (v) odlaganje ili sprečavanje pojave otpornosti na antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek, čiji postupak obuhvata primenu subjeku kome je potrebno kombinacije jedinjenja prema ovom pronalasku kako je ovde definisano pri čemu pomoćni terapijski agens jeste pomenuti antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek.
● Kombinacija prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku za lečenje gljivične, protozomne ili parazitske bolesti ili stanja, čiji postupak obuhvata primenu subjektu kome je potrebno ove kombinacije jedinjenja prema ovom pronalasku pri čemu pomoćni terapijski agens jeste antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitskim lek, čiji postupak karakteriše odsustvo otpornosti na lek.
● Kombinacija prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku za profilaksu ili lečenje (ili ublažavanje ili smanjenje pojave) stanja ili uslova bolesti posredovanog proteinom toplotnog šoka Hsp90 kod subjekta koji dobija terapiju sa antigljivičnim, antiprotozomnim ili antiparazitskim lekom, čiji postupak obuhvata primenu subjektu kombinacije prema ovom pronalasku pri čemu pomoćni terapijski agens jeste antigljvični, antiprotozomni ili antiparazitski lek, pri čemu stanje ili uslov bolesti posredovano proteinom toplotnog šoka Hsp90 jeste razvoj otpornosti na pomenuti antigljivični, antiprotozomni, ili antiparazitski lek.
● Kombinacija prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku za: (i) senzitizaciju gljivičnih, protozomnih ili parazitskih ćelija na antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek; (ii) ublažavanje ili smanjenje pojave otpornosti na antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek ; (iii) preokretanje otpornosti na anti-gljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek; (iv) pojačavanje aktivnosti antigljivičnog, antiprotozomnog ili antiparazitskog leka; (v) odlaganje ili sprečavanje pojave otpornosti na antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek, čiji postupak obuhvata primenu subjektu kombinacije prema ovom pronalasku pri čemu pomoćni terapijski agens jeste antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek.
● Kombinacija prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku za lečenje gljivične, protozomne ili parazitske bolesti kod subjekta koji polazi lečenje antigljivičnim, antiprotozomnim ili antiparazitskim lekom, čiji postupak obuhvata primenu subjektu kome je potrebno kombinacije prema ovom pronalasku pri čemu pomoćni terapijski agens jeste antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek, čiji postupak karakteriše odsustvo otpornosti leka npr. na pomenuti antigljivični, antiprotozomni ili antiparazitski lek).
[0303] Kao što je gore opisano u uvodnom delu ove prijave, utvrđeno je da jedinjenja koja imaju inhibitornu aktivnost na protein toplotnog šoka Hsp90 ispoljavaju snažnu antigljivičnu aktivnost i sprečavaju razvoj otpornosti na antigljivična i posebno na od proteina toplotnog šoka Hsp90 zavisna antigljivična jedinjenja. Pored toga, utvrđeno je da inhibitori aktivnosti proteina toplotnog šoka Hsp90 mogu da smanje razvoj otpornosti na često korišćene antigljvične lekove kao što su azoli. Kombinacije prema ovom pronalasku će dakle biti korisna u profilaksi ili lečenju jednog spektra gljivičnih bolesti i stanja i biće takođe korisna, kada se primene zajedno sa drugim antigljivičnim lekovima kao što su azoli, u pojačanju aktivnosti antigljivičnih lekova.
[0304] Antigljivična aktivnost kombinacije prema ovom pronalasku može da se proceni utvrđivanjem minimalne koncentracije (m.i.c) fungistatika (inhibicija). Ovaj test se obično izvodi pripremom serije ploča ili cevčica koje sadrže odgovarajuću hranljivu podlogu, svaka ploča ili cevčica takođe sadrži različitu koncentraciju testiranog jedinjenja i zatim inokuliše podlogu sa tim gljivičnim vrstama. Posle perioda inkubacije ploče su ispitane vizuelno na prisustvo ili odsustvo rasta gljivica. Ta m.i.c. je minimalna koncentracija potrebna da se spreči rast gljivica.
[0305] Kombinacije mogu da se koriste u veterinarskoj medicini (na primer za lečenje sisara kao što su ljudska bića).
[0306] Gljivične infekcije kod životinja protiv kojih jedinjenje prema ovom pronalasku kako je ovde definisano može da se koristi obuhvataju:
■ Površinske mikoze - tj. gljivične infekcije ograničene na najdalje slojeve kože i dlake;
■ Kožne mikoze - tj. gljivične infekcije koje se proširuju dublje u epidermis ali su obično ograničene na keratizirane slojeve kože, dlake, i noktiju;
■ Potkožne mikoze - tj. gljivične infekcije koje obuhvataju dermis, potkožna tkiva, mišić, i fasciju;
■ Sistemske mikoze zbog primarnih patogena (one obično nastaju prvenstveno u plućima i mogu da se rašire na druge sisteme organa); i
■ Sistemske mikoze usled oportunističkih patogena (infekcija pacijenata sa imunodeficijencijama koje u suprotnom ne bi bile inficirane).
[0307] Posebni primeri stanja gljivične bolesti za koja ovde definisane kombinacije prema ovom pronalasku mogu da se koriste obuhvataju:
■ Dermatofitne infekcije kao što su tinea versiColour (površinska gljivična infekcija kože), tinea pedis (atletsko stopalo), tinea capitis (površinska gljivična infekcija na glavi), tinea barbae (gljivična infekcija područja pod bradom), tinea corporis (gljivične infekcije područja glatke kože).
■ Kandidijaza sluzokože kao što su oralna kandidijaza, ezofagitis i vaginalne kandidijaze.
■ Invazivna kandidijaza ili duboka kandidijaza organa (npr. fungemija, endokarditis i endoftalmitis).
■ Infekcije kriptokokama kao što je kriptokokni meningitis.
■ Histoplazmoza.
■ Blastomukoza, gljivična infekcija pluća i povremeno kože.
■ Invazivne gljivične infekcije kod pacijenata sa oslabljenim imunim sistemima ili prolaze terapiju sa lekovima protiv kancera ili autoimunog poremećaja, na primer invazivna kandidijaza i invazivna aspergiloza
■ Aspergiloze kao što je alergijska bronhijalno-plućna aspergiloza.
■ Aspergilom.
■ Intertrigo infekcije (gljivične infekcije koje nastaju na prevojima kože npr. između nožnih prstiju ili prstiju ruku, ispod pazuha ili u preponama).
■ Maduramikoza (gljivična invazija tkiva stopala, takođe poznata kao madura stopalo). ■ Kociidioidomikoza.
■ Mukormikoza.
■ Blastomikoza
■ Geotrihoza.
■ Hromoblastomikoza.
■ Konidiosporoza.
■ Histoplazmoza.
■ Rinosporidoza.
■ Nocaidiosis.
■ Paraaktinomikoza.
■ Penicilioza.
■ Monolijaza
■ Kandidijaza.
■ Sporotrihoza.
[0308] Gljivične infekcije od posebnog interesa su kandidijaza i aspergiloza.
[0309] Jedinjenja prema ovom pronalasku takođe imaju anti-protozomnu aktivnost i antiparazitsku aktivnost. Antiprotozomna aktivnost kombinacija prema ovom pronalasku može da se proceni uobičajenim postupcima, na primer utvrđivanjem minimalne inhibitorne koncentracije (m.i.c.) ili 50% nivoa inhibicije (IC50).
[0310] Primeri protozomnih i parazitskih bolesti ili stanja u slučaju kojih se može pokazati korisnost kombinacija prema ovom pronalaskuobuhvataju:
■ Šagoasovu bolest ((tripanosomiaza) - infekcija prouzrokovana parazitom Trypanosoma cruzi.
■ Askarijaza - bolest kod ljudi prouzrokovana parazitskim valjkastim crvom Ascaris lumbricoides.
■ Lajšmanioza - bolest prouzrokovana parazitima iz roda lajšmanioza.
■ Toksoplazmoza - parazitska bolest prouzrokovana protozoama Toxoplasma gondii.
■ Šistozomijaza (Bilharzija) - bolest prouzrokovana parazitom Schistoma mansoni.
■ Trihomoniaza - seksualno prenosiva bolest prouzrokovana parazitskom protozoom Trichomonas vaginalis.
Antivirusna aktivnost
[0311] Kao što je gore razmatrano u uvodnim odeljcima ove prijave, infekcija ćelje domaćina virusnom RNK/DNK daje kao rezultat značajno preusmeravanje sinteze ćelijskog proteina prema ključnim virusnim proteinima kodiranim virusnom nukleinskom kiselinom, i ovo često daje podsticaj povećanom regulisanju proteina toplotnog šoka. Veruje se da jedna funkcija uvođenja HSP može biti da pomogne stabilizaciji i slaganju visokih nivoa 'stranog' proteina generisanog u preparatu za replikaciju virusa i pokazano je (Nagkagawa et al.) da inhibitori HSP90 mogu da blokiraju replikaciju virusa. S tim u skladu, kombinacije prema ovom pronalasku su korisna u borbi protiv virusnih infekcija, na primer blokiranjem ili inhibiranjem replikacije virusa.
[0312] S tim u skladu, u drugom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak daje kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u profilaksi ili lečenju virusne infekcije (ili virusne bolesti).
[0313] U drugim varijantnim rešenjima, ovaj pronalazak obezbeđuje:
● Upotrebu kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za profilaksu ili lečenje virusne infekcije (ili virusne bolesti).
● Kombinacija prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku za profilaksu ili lečenje virusne infekcije (ili virusne bolesti), čiji postupak obuhvata primenu ove kombinacije subjektu kom je potrebna.
● Kombinacija prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za upotrebu u blokiranju ili inhibiranju virusne replikacije u organizmu domaćinu (npr. životinja kao što je sisar (npr. ljudsko biće)).
● Upotrebu kombinacije prema ovom pronalasku kako je ovde definisano za proizvodnju leka za upotrebu u blokiranju ili inhibiranju virusne replikacije u organizmu domaćina (npr. životinja kao što je sisar (npr. ljudsko biće)).
● Kombinacija prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku blokiranja ili inhibiranja replikacije virusa u organizmu domaćina (npr. životinja kao što je sisar (npr. ljudsko biće)), čiji postupak obuhvata primenu organizmu domaćina ove kombinacije.
[0314] Primeri virusnih infekcija koji mogu da se leče jedinjenjima prema ovom pronalasku obuhvataju infekcije zbog bilo kog ili zbog više sledećih virusa:
● Pikorna virusi kao što su virusi respiratornog sistema (često virus prehlade), koksaki virus (npr. koksaki B virus); i virus slinavke i šapa;
● Virusi hepatitisa kao što je hepatitis A virus (HAV), hepatitis B virus (HBV), hepatitis C virus (HCV), hepatitis D virus (HDV) i hepatitis E virus (HEV),
● Koronavirusi (npr. obični virus prehlade i virus ozbiljnog akutnog respiratornog sindroma (SARS))
● Adenovirusi kao što su humani adenovirusi (uzrok infekcije respiratornih organa i konjuktivitisa);
● Astrovirusi (prouzrokuju simptome slične gripu);
● Flavivirusi kao što je virus žute groznice;
● Ortomiksovirusi kao što su virusi influence (npr. virusi influence A, B i C);
● Virusi parainfluence;
● Respiratorni sincitijalni virus;
● Enterovirusi kao što je pliovirus (Poliomyelitis virus);
● Paramiksovirusi kao što su morbili (rubeole) virus, virus zauški, respiratorni sincitijalni virus (RSV) i virus štenećaka canine distemper virus (CDV);
● Togavirusi kao što je rubeola (nemački morbili) virus i Sindbis virus;
● Virusi herpesa kao što je:
■ Virus herpesa simpleksa (HSV), na primer HSV-1 koji prouzrokuje herpes sa plihovima (groznica), gingivostomatitis, herpes keratitis, ekcem herpetikum i encefalitis virus herpes simpleks); i virus herpesa simpleksa (HSV) tip 2 koji prouzrokuje genitalne lezije, neonatalne infekcije, meningitisni virus herpeksa simpleksa, proktitida virus herpeks simpleksa;
■ Varičela zoster virus (VZV), koji prouzrokuje varičele, urođeni varičela sindrom i herpes zoster;
■ Epštajn-Barov virus (EBV), koji prouzrokuje infekcije mononukleoza, Burkitove limfome i nazofarigalni kancer;
■ Citomegalovirus (CMV), npr. citomegalovirus kod ljudi (HCMV);
■ Virus herpesa kod ljudi 6 (HHV-6), koji prouzrokuje trodnevnu groznicu (exanthum subitum) ili dečija rozeola
■ Virus herpesa kod ljudi 8 (HHV-8) ili Kapošijev sa sarkomom povezan virus herpesa (KSHV), koji se nalazi u pljuvački velikog broja pacijenata sa HIV virusom i povezan je sa Kapošijevim sarkomom;
● Papovaviridae kao što je poliom virus i humani papiloma virus (HPV);
● Parvovirusi;
● Poksvirusi kao što je variola virus (virus malih boginja kod ljudi);
● Rabdovirusi kao što su rabi virus i virus vezikularnog stomatitisa (VSV); i
● Retrovirusi kao što je virus autominuog poremećaja kod ljudi (HIV) koji je odgovoran za sindrom stečenog autoimunog poremećaja (AIDS); i virus T-limfocita kod ljudi (HTLV).
[0315] Posebne virusne infekcije protiv kojih mogu da se koriste kombinacije prema ovom pronalasku mogu da obuhvate virus herpesa, virus boginja, Epštajn-Barov virus, virus Sindbis, adenovirus, HIV (za sprečavanje razvoja sindroma stečenog autoimunog poremećaja (AIDS) kod pojedinaca inficiranih virusom autominuog poremećaja kod ljudi (HIV)), humani papiloma virus (HPV), hepatitis C virus (HCV) i citomegalovirusa kod ljudi (HCMV)
[0316] Virusna infekcija može biti drugačija od infekcije virusom hepatitisa C (HCV).
[0317] Aktivnost kombinacija prema ovom pronalasku kao agenasa za blokiranje ili sprečavanje replikacije virusa u organizmima domaćina ili ćelijama domaćina može da se utvrdi u skladu sa uobičajenim procedurama dobro poznatim stručnjaku u oblasti tehnike [0318] Kombinacije prema ovom pronalasku mogu da obuhvate antivirusne agense kao što je aciklovir, ganciklovir, oseltamavir (Tamiflu®) i zanamavir (Relenza®), amantidin, rimantadin, adefovir dipivoksil, interferoni (npr. interferon alfa-2b i pegilirani interferon alfa-2a), lamivudin, entekavir, ribavirin, famciklovir, valcicilovir, valaciklovir, azidotimidin (AZT - Retrovir®), atazanavir, fosamprenavir, lamivudin, lamivudin abakavir, tenofovir disoproksil fumarat, tenofovir dizoproksil fumarat emtricitabin, tipranavir, nelfinavir, indinavir, raltegravir, ritonavir, lopinavir ritonavir, darunavir, amprenavir, enfuvirtid, sakvinavir, hidroksiurea, VGV-1 i antivirusne vakcine.
[0319] S tim u skladu, ovaj pronalazak još omogućava:
● Kombinaciju prema ovom pronalasku kako je ovde definisano pri čemu je dodatni terapijski agens antivirusni agens.
● Farmaceutsku supstancu koja obuhvata kombinaciju prema ovom pronalasku kako je ovde definisano pri čemu je dodatni terapijski agens antivirusni agens.
Farmaceutske formulacije
[0320] Iako je moguće da aktivno jedinjenje bude primenjeno samostalno, poželjno je da se predstavi kao farmaceutska supstanca (npr. formulacija) koja sadrži najmanje jedno aktivno jedinjenje prema ovom pronalasku zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, pomoćnih lekovitih sredstava, vezivnih sredstava, razblaživača, sredstava za punjenje, pufera, stabilizatora, konzervanasa, sredstava za podmazivanje, ili drugih materijala dobro poznatih stručnjacima u ovoj oblasti i opciono drugih terapijskih ili profilaktičkih agenasa, na primer agenasa koji smanjuju ili ublažavaju neka neželjena dejstva povezana sa hemioterapijom. Posebni primeri takvih agenasa obuhvataju antiemetska sredstva i agense koji sprečavaju ili smanjuju trajanje hemioterapije povezane sa neutropenijom ili sprečavaju komplikacije koje nastaju usled smanjenih nivoa crvenih krvnih zrnaca ili belih krvnih zrnaca, na primer eritropoietina (EPO), faktor pospešivanja granulocitne makrofagne kolonije (GM-CSF), i faktor pospešivanja granulocitne kolonije (G-CSF).
[0321] Tako, ovaj pronalazak još obezbeđuje farmaceutske supstance, kako su gore definisane, i postupke za izradu farmaceutske supstance koji sadrže mešanje najmanje jednog aktivnog jedinjenja , kako je gore definisano, zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, vezivnih sredstava, pufera, pomoćnih lekovitih sredstava, stabilizatora, ili drugih materijala kako je ovde opisano.
[0322] Pojam "farmaceutski prihvatljiv" kako se ovde koristi se odnosi na jedinjenja, materijale, supstance, i/ili dozne forme koji su, u okviru jake medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima subjekta (npr. ljudskog bića) bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugih problema ili komplikacija, proporcionalno opravdanom odnosu korist/rizik. Svaki nosač, vezivno sredstvo, itd. mora takođe da bude "prihvatljiv" u smislu da je kompatibilno sa drugim sastojcima formulacije.
[0323] S tim u skladu, u daljem varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje prema ovom pronalasku kako je ovde definisano i posebno jedinjenja prema formulama (10) i (1) i njegove kristalne forme i oblike soli kako je ovde definisano u obliku farmaceutskih supstanci.
[0324] Farmaceutske supstance mogu da budu u bilo kom obliku pogodnom za oralnu, parenteralnu, topikalnu, intranazalnu, oftalmičku, otičku, rektalnu, intravaginalno, ili transdermalnu primenu. U slučajevima kada su supstance namenjene za parenteralnu primenu, one mogu da budu formulisane za intravensku, intramuskularnu, intraperitonealnu, potkožnu primenu ili za direktan unos u ciljni organ ili tkivo injekcijom, infuzijom ili drugim načinima isporuke. Isporuka može da bude bolusna injekcija, kratkotrajna infuzija ili infuzija na duži rok, može da bude preko pasivne isporuke ili putem korišćenja pogodne pumpe za infuziju.
[0325] Farmaceutske formulacije prilagođene za parenteralnu priemnu obuhvataju vodene i nevodene sterilne rastvore za ubrizgavanje koji mogu da sadrže antioksidanse, pufere, bakteriostate, surastvarače, mešavine organskog rastvarača, agense kompleksacije ciklodekstrina, agense emulzifikacije (za formiranje i stabilizaciju emulzionih formulacija), lipozomne komponente za formiranje lipozoma, gel-sposobne polimere za formiranje polimernih gelova, liofilizaciona zaštitna sredstva i kombinacije agenasa za, inter alia, stabilizovanje aktivnog sastojka u rastvorljivoj formi i izvođenje formulacije izotoničnom sa krvlju primaoca kome je formulacija namenjena. Farmaceutske formulacije za parenteralnu primenu mogu takođe da imaju oblik nataloženih i nenataloženih sterilnih suspenzija koje mogu da obuhvate suspenzione agense i agense za zgušnjavanje (R. G. Strickly, Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations, Pharmaceutical Research, Vol 21(2) 2004, p 201-230).
[0326] Molekul leka koji je moguće jonizovati može da bude rastvorljiv do željene koncentracije pomoću pH podešavanja ako je pKatog leka dovoljno daleko od vrednosti pH formulacije. Prihvatljivi opseg je pH 2-12 za intravensku i intramuskularnu primenu, ali potkožno opseg vrednosti je pH 2,7-9,0. Rastvor pH se kontroliše pomoću bilo forme soli ovog leka, jakih kiselina/baza kao što je hlorovodonična kiselina ili natrijum hidroksid, ili rastvori pufera koji obuhvataju ali se ne ograničavanju na puferske rastvore formirane iz glicina, citrata, acetata, maleata, sukcinata, histidina, fosfata, tris(hidroksimetil)-aminometana (TRIS), ili karbonata.
[0327] Kombinacija rastvora taloga i organskog rastvarača/površinskog sredstva (tj. surastvarača) rastvorljivog u vodi se često koristi u formulacijama za ubrizgavaje. Organski rastvarači i površinska sredstva rastvorljiva u vodi koji su korišćeni u formulacijama koje se ubrizgavaju obuhvataju ali se ne ograničavaju na propilen glikol, etanol, polietilen glikol 300. polietilen glikol 400, glicerin, dimetilacetamid (DMA), N-metil-2-pirolidon (NMP; Pharmasolve), dimetilsulfoksid (DMSO), Solutol HS 15, Cremophor EL, Cremophor RH 60, i polisorbat 80. Takve formulacije mogu obično da budu, ali nisu uvek, razređene vodom pre ubrizgavanja.
[0328] Propilen glikol, PEG 300, etanol, Cremophor EL, Cremophor RH 60, i polisorbat 80 su potpuno organski rastvarači koji se mešaju sa vodom i površinskim sredstvima korišćenim u komercijalno dostupnim formulacijama i mogu da se koriste u kombinacijama jedno sa drugim. Organske formulacije koje nastanu se obično rastvaraju najmanje 2-struko pre IV bolusa ili IV infuzije.
[0329] Alternativno povećana rastvorljivost u vodi može da se postigne putem molekularne kompleksacije sa ciklodekstrinima.
[0330] Lipozomi su zatvoreni sferni mehurići koji se sastoje od spoljnih lipidnih dvoslojnih membrana i unutrašnjeg nataloženog jezgra i sa ukupnim prečnikom od <100 µm. Zavisno od nivoa hidrofobičnosti, umereno hidrofobični lekovi mogu da se rastvore lipozomima ako se lek stavi u kapsule ili interpolira sa lipozomom. Hidrofobni lekovi mogu takođe da se rastvore lipozomima ako molekul leka postane integralni deo dvoslojne membrane lipida, i u ovom slučaju, hidrofobni lek se rastvori u lipidnom delu lipidnog dvosloja. Uobičajena formulacija lipozoma sadrži vodu sa fosfolipidom na 5-20 mg/ml, izotonicifikator, pH vrednost 5-8 pufera, i opciono holesterol.
[0331] Formulacije mogu da budu prikazane u posudi jedinične doze ili u posudi za više doza, na primer zaptivene ampule i bočice za lekove, i mogu da se čuvaju u stanju sušenja zamrzavanjem (liofilisano) zahteva samo dodatak sterilnog tečnog nosača, na primer vode za sredstva za ubrizgavanje neposredno pre upotrebe.
[0332] Farmaceutske formulacije mogu da se dobiju liofilizacijom jedinjenja prema ovom pronalasku ili njegove soli sa dodatom kiselinom. Liofilizacija se odnosi na postupke sušenja supstance zamrzavanjem. Sušenje zamrzavanjem i liofilizacija se dakle ovde koriste kao sinonimi. Najčešći postupak je da se rastvori jedinjenje i zatim da se dobijena formulacija prečisti, sterilno filtirira i aseptično prenese u posude pogodne za liofilizaciju (npr. bočice). U slučaju bočica, one se delimično zaustavljaju sredstvima za zaustavljanje liofilizacije.
Formulacija može da se ohladi do smrzavanja i podvrgne liofilizaciji u standardnim uslovima i zatim da se hermetički pokrije formiranjem stabilne, suve liofilisane formulacije. Supstanca će najčešće imati mali sadržaj zaostale vode, npr. manje od 5 % npr. manje od 1 % pomoću težine bazirane na težini liofila.
[0333] Formula liofilizacije može da sadrži bilo vezivna sredstva na primer, agense za zgušnjavanje, agense za izbacivanje, pufere, antioksidante, konzervanse, i sredstva za podešavanje toničnosti. Najčešći puferi obuhvataju fosfat, acetat, citrat i glicin. Primeri antioksidanasa obuhvataju askorbinsku kiselinu, natrijum bisulfit, natrijum metabisulfit, monotioglicerol, tioureu, butilisani hidroksitoluen, butilisani hidroksil anisol, i soli etilen-diamintetrasirćetne kiseline. Konzervansi mogu da obuhvate benzojevu kiselinu i njene soli, askorbinsku kiselinu i njene soli, estre alkila parahidroksibenzojeve kiseline, fenol, hlorobutanol, benzil alkohol, timerosal, benzalkonijum hlorid i cetilpiridinijum hlorid. Prethodno pomenuti puferi, kao i dekstroza i natrijum hlorid, mogu da se koriste za podešavanje toničnosti ako je potrebno.
[0334] Agensi na bazi skroba se generalno koriste u tehnologiji liofilizacije za olakšavanje postupka i za obezbeđivanje zapremine i/ili mehaničkog integriteta liofilisanoj bogači. Agens za povećanje volumena znači slobodno rastvorljiv u vodi, čvrsti rastvarač čestica koji kada se liofiliše zajedno sa jedinjenjem ili njegovom solju, daje fizički stabilnu liofilisanu pogaču, optimalniji postupak sušenja zamrzavanjem i brzu i potpunu rekonstrukciju. Agens za povećanje volumena može takođe da se koristi da se napravi izotonični rastvor.
[0335] Agens za povećanje volumena rastvorljiv u vodi može da bude bilo koji od farmaceutski prihvatljivih inertnih materijala čvrste supstance koji se najčešće koriste za liofilizaciju. Takvi agensi za povećanje volumena obuhvataju, na primer, šećere kao što je glukoza, maltoza, saharoza, i laktoza; polialkoholi kao što je sorbitol ili manitol; amino kiseline kao što je glicin; polimere kao što je polivinilpirolidin; i polisaharide kao što je dekstran.
[0336] Odnos težina skrobnog agensa prema težini aktivnog jedinjenja je obično u opsegu od oko 1 do oko 5, na primer od oko 1 do oko 3, npr. u opsegu od oko 1 do 2.
[0337] Alternativno, mogu se obezbediti u obliku rastvora koi može da bude koncentrovan i zaptiven u odgovarajućoj bočici. Sterilizacija doznih formi može da bude preko filtriranja ili sterilizovanja bočica i njihovog sadržaja u autoklavu u odgovarajućim fazama procesa formulacije. Isporučena formulacija može da zahteva dodatno rastvaranje ili pripremu pre isporuke na primer rastvora u odgovarajućim sterilnim infuzionim pakovanjima.
[0338] Improvizovano ubrizgavanje rastvora i suspenzija može da se pripremi iz sterilnih prahova, granula i tableta.
[0339] U jednom poželjnom izvođenju pronalaska farmaceutska supstanca je u obliku odgovarajućem za i.v. isporuku, na primer ubrizgavanjem ili infuzijom.
[0340] U drugom poželjnom izvođenju pronalaska, farmaceutska supstanca je u obliku pogodnom za potkožnu (s.c.) isporuku.
[0341] Farmaceutski dozni oblici pogodni za oralnu isporuku obuhvataju tablete, kapsule, kaplete, pilule, tablete za sisanje, sirupe, rastvore, praškove, granule, eliksire i suspenzije, tablete koje se stavljaju ispod jezika, tanke obloge, flastere i bukalne zavoje.
[0342] Farmaceutske supstance koje sadrže jedinjenja prema formuli (I) mogu da se formulišu u skladu sa poznatim tehnikama, videti na primer, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, USA.
[0343] Tako supstance tablete mogu da sadrže jediničnu dozu aktivnog jedinjenja zajedno sa inertnim rastvaračem ili nosačem kao što je šećerni alkohol, npr; laktoza, šećeroza, sorbitol ili manitol; i/ili rastvarač izveden iz nešećera kao što je natrijum karbonat, kalcijum fosfat, kalcijum karbonat, ili celuloza ili njen derivat kao što je metil celuloza, etil celuloza, hidropropil metil celuloza, i skrobovi kao što je kukuruzni skrob. Tablete mogu takođe da sadrže takve standardne sastojke kao vezivni agens i granulišući agens kao što je polivinilpirolidon, dezintegrišuća sredstva (npr. unakrsno povezani polimeri koji mogu nabubriti kao što je unakrsno povezana karboksimetilceluloza), agensi za podmazivanje (npr. stearati), konzervansi (npr. parabeni), antioksidansi (npr. BHT), puferski agensi (na primer fosfatni pufer ili citratni pufer), i penušave agense kao što su citratne /bikarbonatne mešavine. Takva vezivna sredstva su dobro poznata i ne treba ih ovde detaljno razmatrati.
[0344] Formulacije kapsula mogu da budu od različite vrste od tvrdog želatina ili mekog želatina i mogu da sadrže aktivnu komponentu u čvrstom, polučvrstom, ili tečnom obliku.
Kapsule želatina mogu da se dobiju od želatina životinja ili sintetičkog želatina ili od njegovih iz biljanka izvedenih ekvivalenata.
[0345] Čvrste dozne forme (kao što su tablete, kapsule, itd) mogu da budu obložene ili neobložene, ali najčešće imaju oblogu, na primer zaštitnu oblogu u vidu folije (npr. vosak ili lak) ili oblogu koja se kontrolisano otpušta. Obloga (npr. Eudragit ™ tip polimera) može da se projektuje da otpusti aktivni sastojak na željenom mestu unutar gastrointestinalnog trakta. Tako, obloga može da se izabere tako da se razgradi u uslovima određene pH vrednosti unutar gastrointestinalnog trakta, time se selektivno otpušta jedinjenje u želucu ili u ileumu (tanko crevo) ili u dvanaestopalačnom crevu. Alternativno ili dodatno, obloga može da se koristi kao agens za maskiranje ukusa da se maskiraju neprijatni ukusi kao što su lekovi gorkog ukusa. Obloga može da sadrži šećer ili druge agense koji pomažu u maskiranju neprijatnih ukusa.
[0346] Umesto i pored sloja obloge, lek može da se predstavi i u čvrstoj matrici koja sadrži agens sa kontrolisanim otpuštanjem, na primer agens sa odloženim otpušanjem koji može da se prilagodi jedinjenju sa selektivnim otpuštanjem u uslovima promenljive kiselosti ili alkalnosti u gastrointestinalnom traktu. Alternativno, materijal matriksa ili zadržanog otpuštanja može da ima oblik nagrizajućeg polimera (npr. maleinski polimer anhidrida kiseline) koji se značajno neprestano nagriza dok doza u tom obliku prolazi kroz gastrointestinalni trakt. Dalja alternativa, aktivno jedinjenje može da se formuliše u sistem isporuke koji daje osmotsku kontrolu otpuštanja jedinjenja. Formulacije sa osmotskim otpuštanjem i drugim odloženim otpuštanjem ili zadržanim otpuštanjem mogu da se pripreme u skladu sa postupcima dobro poznatim stučnjacima u oblasti tehnike.
[0347] Farmaceutske formulacije mogu da se predstave pacijentu u "pacijentskim pakovanjima" koja sadrže ceo tok lečenja u jednom pakovanju, obično blister pakovanju. Pakovanja za pacijenta imaju prednost nad tradicionalnim receptima, gde farmaceut deli pacijentovu zalihu leka iz ukupne zalihe, tako što pacijent uvek ima pristup umetnutom pakovanju koje je sastavni deo pakovanja za pacijenta, najčešće su izostavljeni u receptima za pacijenta. Uključivanje i umetnutog pakovanja u komplet je pokazalo da poboljšava pacijentovo pridržavanje pacijentovih uputstava.
[0348] Supstance za topikalnu upotrebu obuhvataju masti, kreme, sprejeve, flastere, gelove, tečne kapi i umetke (na primer intraokularne umetke). Takve supstance mogu da se formulišu u skladu sa poznatim postupcima.
[0349] Supstance za parenteralnu isporuku se obično predstavljaju kao sterilni nataloženi ili uljni rastvori ili fine suspenzije, ili mogu da se obezbede u fino podeljenoj formi sterilnog pudera za improvizovanu pripremu sa sterilnom vodom za ubrizgavanje.
[0350] Primeri formulacija za rektalnu ili intravaginalnu isporuku obuhvataju pesare i supozitorije koji mogu biti na primer, formulisani iz materijala koji se može staviti u kalupe različitih oblika ili voskast materijal koji sadrži aktivno jedinjenje. Tako, supozitorije jedinične doze ili pesari mogu da se dobiju mešanjem aktivnog sastojka sa jednim ili više uobičajenih čvrstih nosača, na primer kakao puter, i oblikovanjem dobijene mešavine. Dodatni primeri voskastog materijala koji se oblikuje kalupima obuhvataju polimere kao što su polialkilen glikoli velike molekularne težine, npr. polietilen glikoli velike molekualrne težine.
[0351] Alternativno, u slučaju vaginalne isporuke, formulacija može da se predstavi kao tampon impregniran sa aktivnim sastojcima i opciono jednim ili više aktivnih sredstava ili rastvarača. Druge formulacije pogodne za rektalnu ili vaginalnu isporuku obuhvataju kreme, gelove, pene, paste i sprejeve.
[0352] Dalji primeri topikalnih supstanci obuhvataju prekrivne materijale kao što su zavoji i lepljivi gips impregnirane aktivnim sastojcima i opciono jednim ili više vezivnih sredstava ili rastvarača. Nosači koji mogu da se koriste obuhvataju npr. polihidroksilne alkohole kao što su polietilen glikoli, propilen glikol ili glicerol. Odgovarajuća vezivna sredstva su ona koja su poznata u tehnici kao odgovarajuća.
[0353] Supstance za isporuku inhaliranjem mogu da uzmu oblik praškastih supstanci za udisanje ili tečnih sprejeva ili sprejeva u prahu, i mogu da budu isporučene u standardnom obliku koristeći uređaje za udisanje praha ili uređaje za raspršivanje aerosola. Takvi uređaji su dobro poznati. Za isporuku udisanjem, formulacije u prahu obično obuhvataju aktivno jedinjenje zajedno sa inertnom čvrstom supstancom rastvarača u prahu kao što je laktoza.
[0354] Jedinjenja prema ovom pronalasku će generalno biti opisana i predstavljenja u obliku jedinične doze i, kao takva, će obično sadržati dovoljnu količinu supstance da se dobije željeni nivo biološke aktivnosti. Na primer, formulacija može da sadrži od 1 nanograma do 2 grama aktivnog sastojka, npr. od 1 nanograma do 2 miligrama aktivnog sastjka. U ovom opsegu, posebni podopsezi jedinjenja su 0,1 miligrama do 2 grama aktivnog sastojka (obično od 10 primer 1 mikrogram do 10 miligrama, npr.0,1 miligram do 2 miligrama aktivnog sastojka).
[0355] Za supstance za oralnu upotrebu, oblik jedinične doze može da sadrži od 1 miligrama do 2 grama, obično 10 miligrama do 1 grama, na primer 50 miligrama do 1 grama, npr.100 miligrama do 1 grama aktivnog jedinjenja.
[0356] Aktivno jedinjenje će biti administrirano pacijentu kome je potrebno (na primer ljudsko biće ili životinja) u količini dovoljnoj da se postigne željeno terapijsko dejstvo.
Postupci lečenja
[0357] Jedinjenja prema ovom pronalasku će biti korisna u profilaksi ili lečenju jednog spektra stanja ili uslova bolesti posredovanih klijentskim proteinima proteina toplotnog šoka Hsp90. Primeri takvih stanja ili uslovi bolesti su gore izneti.
[0358] Ova jedinjenja se generalno isporučuju subjektu kom je potrebno takva isporuka, na primer ljudsko biće ili životinja, poželjno čovek.
[0359] Jedinjenja se obično isporučuju u količinama koje su terapijski ili profilaktički korisne i koje su generalno netoksične. Međutim, u izvesnim situacijama (na primer u slučaju bolesti opasnih po život), koristi od isporuke jedinjenja prema formuli (I) mogu da nadmaše nedostatke svakog toksičnog dejstva ili neželjenih dejstava, u takvom slučaju se može smatrati poželjnim da se isporučuju jedinjenja u količinama koje se povezuju sa stepenom toksičnosti.
[0360] Ova jedinjenja je moguće isporučiti i u dužem vremenskom periodu da bi se održala korisna dejstva lečenja ili ih je moguće isporučiti samo u kratkom vremenskom periodu.
Alternativno moguća je pulsirajuća ili neprekidna isporuka.
[0361] Uobičajena dnevna doza jedinjenja prema ovom pronalasku može da bude u opsegu od 100 pikograma do 100 miligrama po kilogramu telesne težine, češće 5 nanograma do 25 miligrama po kilogramu telesne težine, i još češće 10 nanograma do 15 miligrama po kilogramu (npr.10 nanograma do 10 miligrama, i uobičajenije 1 mikrogram po kilogramu do 20 miligrama po kilogramu, na primer 1 mikrogram do 10 miligrama po kilogramu) po kilogramu telesne težine iako jače ili slabije doze mogu da se isporučuju gde je potrebno. Jedinjenja mogu da se isporučuju na dnevnoj bazi ili ponovljenoj bazi, na primer svakih 2, ili 3, ili 4, ili 5, ili 6, ili 7, ili 10 ili 14, ili 21, ili 28 dana.
[0362] U jednom posebnom rasporedu doziranja, pacijent će dobiti infuziju jedinjenja na periode od jednog sata dnevno tokom maksimalno deset dana, posebno najduže pet dana jedne nedelje, i lečenje će se ponoviti u željenom intervalu kao što je dve ili četiri nedelje, posebno svake tri nedelje.
[0363] Preciznije, pacijent može da dobije infuziju jedinjenja u vremenskim intervalima od jednog sata dnevno tokom 5 dana i lečenje da se ponovi svake tri nedelje.
[0364] U jednom drugom režimu doziranja, pacijent dobija infuziju tokom 30 minuta do 1 sata posle čega sledi održavanje infuzije u promenljivom periodu trajanja, na primer 1 do 5 sati, npr.
3 sata.
[0365] U daljem preciznijem redosledu doziranja, pacijentu se daje kontinualna infuzija tokom perioda od 12 sati do 5 dana, i posebno kontinualna infuzija od 24 sata do 72 sata.
[0366] Najzad, međutim, količina isporučenog jedinjenja i tip korišćene supstance biće primereni prirodi bolesti ili fiziološkom stanju koje se leči i predstavljaju isključivo izbor za koji odluku donosi lekar.
[0367] Ovde definisana jedinjenja mogu se isporučiti u kombinovanoj terapiji sa jednim ili više drugih jedinjenja za lečenje određenog stanja bolesti, na primer neoplastične bolesti kao što je kancer kao što je prethodno definisano ovde.
[0368] Primeri drugih terapijskih agenasa ili terapija koje se mogu isporučiti zajedno (bilo istovremeno ili u različitim vremenskim intervalima) sa jedinjenjima prema ovom pronalasku obuhvataju ali se ne ograničavaju na:
● Inhibitore topoizomeraze I
● Antimetabolite
● Agense koji ciljaju tubulin
● DNK vezivno sredstvo i inhibitore topoizomeraze II
● Alkilirajuće agense
● Monoklonska antitela.
● Antihormonske agense
● Inhibitore prenosa signala
● Inhibitore proteazoma
● DNK metil transferaze
● Citokini i retinoidi
● Terapije koje ciljaju hromatin, npr. HDAC (modulatore histom deacetilaze) ili HAT (hipoksantin-aminopterin-timidin medijum)
● Radioterapija; i
● Druge terapijske i profilaktičke agense; na primer agense koji smanjuju ili ublažavaju neke od neželjenih dejstava povezanih sa hemioterapijom. Posebni primeri takvih agenasa obuhvataju antiemetska sredstva i agense koji sprečavaju ili smanjuju trajanje hemioterapije povezane sa neutropenijom ili sprečavaju komplikacije koje nastaju usled smanjenih nivoa crvenih krvnih zrnaca ili belih krvnih zrnaca, na primer eritropoietina (EPO), faktor pospešivanja granulocitne makrofagne kolonije (GM-CSF), i faktor pospešivanja granulocitne kolonije (G-CSF). Takođe su uključeni i agensi koji inhibiraju koštanu resorpciju kao što su biofosfatni agensi npr. zoledronat, pamidronat i ibandronat, agense koji potiskuju upalne odgovore (kao što je deksametazon, predmizon, i predmizolon) i agense korišćene da se smanje nivoi krvi hormona rasta i insulinu sličnog faktora rasta IGF-I kod pacijenata sa akromegalijom kao što su sintetičke forme somatostatina hormona mozga, koji obuhvataju oktreotid acetat koji je oktapeptid sa dugim delovanjem sa farmakološkim svojstvima koja oponašaju prirodni hormon somatostatin. Obuhvaćeni su još i agenski kao što je leukovorin, koji se koristi kao antidot za lekove koji smanjuju nivoe folne kiseline, ili samu folnu kiselinu i agense kao šo je megestrol acetat koji može da se koristi za lečenje neželjenih dejstava uključujući edeme i tromboembolijske epizode.
[0369] Dve ili više terapija može da se daje individualno što menja te rasporede i preko različitih putanja.
[0370] Ova kombinacija mora da obuhvati jedno, dva, tri, četiri ili više drugih terapijskih agenasa (poželjno jedno ili dva, poželjnije jedno) jedinjenja je moguće isporučiti istovremeno ili sekvencijalno. Kada se isporučuju u sledu, ona se mogu isporučiti u intervalima blisko povezanim (na primer tokom perioda od 5-10 minuta) ili u dužim vremenskim intervalima (u razmaku od na primer 1, 2, 3, 4 ili više sati, ili čak dužim periodima pauze kada je potrebno), precizan režim doziranja primeren svojstvima terapijskih agenasa.
[0371] Kombinacija prema ovom pronalasku može da obuhvati nehemioterapijske terapije kao što su radioterapija, fotodinamička terapija, genska terapija; hirurška dijeta i kontrolisana dijeta.
[0372] Kada je dodatni terapijski agens drugi hemioterapijski agens, jedinjenje i jedan, dva, tri, četiri ili više drugih terapijskih agenasa mogu, na primer, da se formulišu zajedno u obliku doze koja sadrži dva, tri, četiri ili više terapijskih agenasa. Alternativno, pojedinačni terapijski agensi mogu da se formulišu posebno i predstave zajedno u obliku kompleta, opciono sa uputstvima za njihovu upotrebu.
[0373] Stručnjak u oblasti tehnike će znati na osnovu sopstvenog opšteg poznavanja da upotrebi režime doziranja i kombinovane terapije.
Metode dijagnostikovanja
[0374] Pre isporuke jedinjenja, pacijent može da bude skeniran da bi se odredilo da li oblast ili stanje od kog pacijent boluje ili možda trpi bol jeste ono koje bi bilo podložno lečenju jedinjenjem koje ima aktivnost protiv proteina toplotnog šoka Hsp90.
[0375] Na primer, biološki uzorak može da se uzme od pacijenta može da se analizira da bi se odredilo da li stanje ili bolest, kao što je kancer, koje pacijent ima ili od kog možda boluje jeste ono koje karakteriše abnormalnost ili abnormalnu ekspresiju proteina koja vodi do mutacije ili prekomerne aktivacije klijentskog proteina proteina toplotnog šoka Hsp90. Primeri takvih abnormalnosti mogu da imaju kao rezultat aktiviranje klijentskih proteina proteina toplotnog šoka (Hsp90 ) uključujući; translokaciju Bcr-ABL, internu duplikaciju Flt-3, i mutaciju Braf, ili prekomernu ekspresiju ErbB2
[0376] Tako, pacijent može da bude izložen dijagnostičkom testu da se utvrdi svojstvo markera regulisanog povećanja. Pojam dijagnostikovanje obuhvata skrining. Pod markerom obuhvatamo genetičke markere uključujući, na primer, merenje DNK supstance da se utvrde mutacije Braf, BCR-abl, i Fit3 ili drugi klijentski proteini izloženi uticaju. Pojam marker takođe obuhvata proteine kao što je ErbB2, uključujući nivoe ili koncentracije proteina ili nekih fragmenata ili proizvod razgradnje a za enzime enzimsku aktivnost. Protein (npr. fosforilisan ili ne) i nivoi informacione RNK (mRNK) gore pomenutih proteina bi takođe mogli da budu procenjivani za karakterisanje promene u delovanju. Na primer nivo fosforilisane AKT može da bude indikator osetljivosti inhibitora HSP90.
[0377] Dijagnostička ispitivanja se obično izvode na biološkom uzorku izabranom iz na primer uzoraka biopsije tumora, uzoraka krvi (izolacija i obogaćivanje bačenih ćelija tumora), biopsije stolice, ispljuvka, analize hromozoma, pleuralnog fluida, peritonealnog fluida, brisa bukalne sluzokože, ili biopsije ili iz urina.
[0378] Postupak skrininga će obično obuhvatiti direktno sekvencioniranje, analizu oligonukleotida ili analizu mikrorasporeda proteina, proteoničnu analizu putem masovne spektrometrije, imunohistohemijske tehnike ili detekciju korišćenjem specifičnog antitela.
[0379] Postupci identifikovanja i analize mutacija i regulisanja povećanja proteina su dobro poznati stručnjaku u oblasti tehnike. Postupci skrininga takođe obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, standardne postupke kao što je reverzno transkriptazna polimerazna lančana reakcija (RT-PCR), in-situ hibridizacija ili imunobloting.
[0380] Pri skriningu reverzno transkriptazne polimerazne lančane reakcije (RT-PCR), nivo informacione RNK (iRNK) u tumoru je procenjen stvaranjem kopije komplementarne DNK (kDNK) sa informacione RNK (iRNK) posle čega sledi pojačavanje komplementarne DNK (kDNK) pomoću lančane polimerazne reakcije (PCR). Postupci pojačavanja lančane polimerazne reakcije (PCR), izborom prajmera (početnica), i uslova za pojačavanje, su poznati stručnjaku u oblasti tehnike. Manipulacije nukleinskom kiselinom i polimerazne lančane reakcije (PCR) se izvode pomoću standardnih postupaka, kao što je na primer opisano kod Ausubel, F.M. et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, 2004, John Wiley & Sons Inc., or Innis, M.A. et-al., eds. PCR Protocols: a guide to methods and applications, 1990, Academic Press, San Diego. Reakcije i manipulacije koje obuvhataju tehnike nukleinske kiseline su takođe opisali Sambrook et al., 2001, 3rd Ed, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Alternativno, komercijalno dostupan pribor za reverznu transkriptazu lančane polimerazne reakcije (RT-PCR) (na primer Roche Molecular Biochemicals) moguće je koristiti, ili metodologiju opisanu u američkim patentima 4,666,828; 4,683,202; 4,801,531; 5,192,659, 5,272,057, 5,882,864, i 6,218,529 i ovde inkorporiranu putem reference.
[0381] Kao primer tehnike hibridizacije na licu mesta za procenu ekspresije informacione RNK (mRNK) biće fluorescentna in-situ hibridizacija (FISH) (videti Angerer, 1987 Meth. Enzymol., 152: 649).
[0382] Generalno, in situ hibridizacija obuhvata sledeće veće korake: (1) fiksacija tkiva koje treba analizirati; (2) terapija preliminarne hibridizacije uzorka da se poveća mogućnost procene ciljne nukleinske kiseline, i da se smanji nespecifično vezivanje; (3) hibridizacija mešavine nukleinske kiseline u biološkoj strukturi ili tkivu; (4) pranje posle hibridizacije da se uklone fragmenti nukleinske kisleine koji nisu vezani u hibridizaciji, i (5) detekcija hibridizovanih fragmenata nukleinske kiseline. Sonde korišćene u takvim primenama se obično označavaju, na primer, radioizotopima ili fluorescentnim reporterima. Poželjne sonde su dovoljno dugačke, na primer, od oko 50, 100 ili 200 nukleotida do oko 1000 ili više nukleotida, da se omogući specifična hibridizacija sa ciljnim nukleinskim kiselinama u ograničenim uslovima. Komercijalno dosupne FISH sonde takođe postoje za citogenetsku detekciju preraspodela hromozoma, koje se mogu koristiti da se detektuju Flt3 i Bcr-Abl translokacije u okviru populacija ćelije leukemije. Uobičajeni postupci za izvođenje FISH se opisuju u Ausubel, F.M. et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, 2004, John Wiley & Sons Inc and Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview by John M. S. Bartlett in Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2nd ed.; ISBN: 1-59259-760-2; March 2004, pps.077-088; Series: Methods in Molecular Medicine.
[0383] Postupke za profilisanje ekspresije gena su opisali (DePrimo et al., BMC Cancer 2003, 3:3). Ukratko, protokol je sledeći: dvolančana complementarna DNK (kDNK) se sintetiše iz ukupne RNK korišćenjem a (dT)24 oligomera za pripremu prajminga sinteze prvog lanca komplementarne DNK (kDNK), posle čega sledi sinteza drugog lanca komplementarne DNK (kDNK) sa slučajnim heksamer prajmerima. Dvolančana komplementarna DNK (kDNK) se koristi kao predložak za in vitro transkripciju komplementarne RNK (kRNK) se hemijski fragmentuje prema protokolima opisanim od strane Affymetrix (Santa Clara, CA, USA), a zatim se hibridizuje tokom noći na nizovima ljudskog genoma.
[0384] Alternativno, proizvodi proteina ispoljeni iz informacionih RNK (iRNK) mogu da se ispituju pomoću imunohistohemije uzoraka tumora, čvrste faze imuno ogleda sa mikrotitarskim pločama, Western blotting, 2-dimenzioni SDS-poliakrilamid gel elektroforeze, ELISA, protočne citometrije i drugih postupaka poznatih u stanju tehnike za detekciju specifičnih proteina. Postupci detekcije bi obuhvatili upotrebu antitela specifičnih za mesto. Stručnjak u oblasti tehnike će prepoznati sve takve poznate tehnike za detekciju ''filadelfija hromozoma'' indikativnim za translokaciju BCR-ABL.
[0385] Dakle, sve ove tehnike mogu da se koriste i da se identifikuju tumori posebno pogodni za lečenje sa jedinjenjima prema ovom pronalasku.
PRIMERI
[0386] Pronalazak će sada biti ilustrovan, ali bez ograničenja, uz upućivanje na specifična izvođenja opisana u sledećim primerima.
[0387] U primerima, mogu da se koriste sledeće skraćenice.
AcOH sirćetna kiselina
BOC tert-butiloksikarbonil
Bn benzil
CDI 1,1-karbonildiimidazol
DMAW90 Mešavina rastvarača: DCM: MeOH, AcOH, H2O (90:18:3:2) DMAW120 Mešavina rastvarača: DCM: MeOH, AcOH, H2O (120:18:3:2) DMAW240 Mešavina rastvarača: DCM: MeOH, AcOH, H2O (240:20:3:2) DCM dihlorometan
DMF dimetilformamid
DMSO dimetil sulfoksid
EDC 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)-karbodiimid
Et3N trietilamin
EtOAc etil acetat
Et2O dietil etar
h sat(i)
HOAt 1-hiidroksiazabenzotriazol
HOBt 1-hidroksibenzotriazol
MeCN acetonitril
MeOH metanol
min. minuta
Ms mezil
MsO mezilat
P.E. petrolej-etar
PG zaštitna grupa
r.t. sobna temperatura
SiO2silicijum
TBTU N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-il)uronijum tetrafluoroborat
THF tetrahidrofuran
[0388] Protonski spektri magnetne rezonance (<1>H NMR) su zabeleženi na Brukerovom instrumentu AV400 koji radi na 400.13 MHz, u DMSO-d6ili MeOH-d4(kako je označeno) na 27 °C, osim ako nije drugačije navedeno ili prikazano su sledeći: hemijski pomak δ/ppm (broj protona, mnoštvo gde s=singlet, d=dublet, t=triplet, q=kvartet, m=multiplet, br=širok). Zaostali protonski rastvarač je korišćen kao interna referenca.
[0389] U ovim primerima, dobijena jedinjenja su ispitivana tečnom hromatografijom i masenom spektroskopijom upotrebom sistema i radnih uslova koji su dole izneti. Kada su prisutni atomi sa različitim izotopima i kada je navedena pojedinačna masa, navedena masa za jedinjenje je monoizotopska masa (t.j.<35>Cl;<79>Br, itd.). Korišćeni su različiti sistemi, kako je dole opisano, i ovi su bili opremljeni sa, i bili su podešeni da rade pod veoma sličnim uslovima rada. Korišćeni uslovi rada su takođe opisani dole.
Opis sistema:
[0390]
Sistem 1 (analitički sistem):
HPLC sistem: Waters 2795
Detektor masene spektrometrije: Micromass Platform LC PDA detektor: Waters 2996 PDA
Sistem 2 (pripremni i analitički sistem):
HPLC sistem: Waters Fractionlynx sistem Detektor masene spektrometrije: Waters ZQ
PDA detektor: Waters 2996 PDA
Sistem 3 (pripremni i analitički sistem):
HPLC sistem: Agilent 1100 sistem Detektor masene spektrometrije: LC/MSD
UV detektor: Agilent MWD
Uslovi rada:
[0391]
Kiseli uslovi analize:
Eluent A: H2O (0,1 % mravlja kiselina)
Eluent B: CH3CN (0,1% mravlja kiselina)
Gradijent: 5-95% eluent B preko 3,5 minuta (preko 15 minuta w/ kolona 2)
Protok: 0,8 ml/min
Kolona 1: Phenomenex Synergi 4µ MAX-RP 80A, 2,0 x 50 mm Kolona 2: Phenomenex Synergi 4µ MAX-RP 80A, 2,0 x 150 mm
Bazni uslovi analize:
Eluent A: H2O (10mM NH4HCO3pufer podešen na pH=9,2 sa
NH4OH)
Eluent B: CH3CN
Gradijent: 5-95% eluent B preko 3,5 minuta
Protok: 0,8 ml/min
Kolona: Phenomenex Gemini 5µ 2,0 x 50 mm
MS uslovi (Waters sistemi):
Kapilarni napon: 3,6 kV (3,40 kV na ES negativno)
Napon izvora: 25 V
Temperatura izvora: 120°C
Opseg skeniranja: 125-800 amu
Režim jonizacije: ElectroSpray pozitivan, negativan ili pozitivan i negativan
MS uslovi (Agilent sistemi):
Kapilarni napon: 4000 V (3500 V na ES negativno)
Fragmentor/povećanje: 150/1
Temperatura gasa za 350 °C / 13,0 Lmin<-1>
sušenje/protok:
Pritisak nebulizatora: 50 psig
Opseg skeniranja: 125-800 amu
Režim jonizacije: ElectroSpray pozitivan ili negativan
[0392] Početni materijali za svaki od primera su komercijalno dostupni osim ako nije drugačije navedeno.
PRIMER 1
Korak 1
metil estar 4-acetoksi-2-hidroksi-benzojeve kiseline
[0393]
[0394] Resorcinol metil estar (50 g, 0,298 mol) i N,N-dimetil-4-aminopiridin (0,27 g, 0,0022 mol, 0,74 mol %) su dodati toluenu 0,2 L posle čega je dodat anhidrid sirćetne kiseline (30 mL, 0,318 mol). Rastvor je zagrejan na 50 °C tokom 2 sata. Rastvarač je uklonjen isparavanjem na 50 °C u maloj količini i ostatak je bio pretvoren u azeotrop kada je jednom došo u kontakt sa toluenom. Preostalom ulju je odmah dodat toluen (100 mL) dok je i dalje toplo i rastvor je korišćen za Korak 2 bez daljeg prečišćavanja.
Korak 2
Metil estar 5-acetil-2,4-dihidroksi-benzojeva kiselina
[0395]
[0396] Rastvor toluena iz Koraka 1 je ohlađen u ledenoj kupki pod N2i trifliuorometansulfonska kiselina (26 mL) dodavana je polako tokom 30 min. Tokom mešanja obrazovana je fina bela čvrsta supstanca koja je rastvorena tokom mešanja u trajanju od 16 sati na sobnoj temperaturi da bi se dobio žuti rastvor. U rastvor je dodat acetil hlorid (2 mL) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi još 1 sat. Ovaj rastvor je kanuliran u mešani ohlađeni (0°C) rastvor etil acetata (EtOAc) (600 mL) i NaOAc.3H2O (natrijum acetata) (40 g) rastvorenog u vodi (400 mL). Organska faza je isprana vodom (dvaput, 200 mL), zasićenim fiziološkim rastvorom i ispario je do male količine bez sušenja. Ostatak je bio azetropisan sa heptanom (dvaput, 100 mL) i heptan (100 mL) je dodat kristalnoj čvrstoj supstanci uklonjenoj filtracijom, dobro ispran na sinterovanom filtru heptanom i osušen da bi se dobilo 49,5 g (79%).
Konačno prečišćavanje kombinovanih šarži
[0397] Kombinovane šarže čvrste supstance (96,3g) su zagrajane do ključanja sa 10% IPA/heptana (250 mL) zatim su hlađene do sobne temperature i konačno do 0°C, filtrirane i ostatak je osušen 72 sata (pumpa za ulje) da se dobije (88,04 g, 91,5%), čisto pomoću hplc (tečna hromatografija visokih performansi), tlc (tankoslojna hromatografija) i NMR (nuklearna magnetna rezonanca).
<1>H NMR (DMSO-d6) 12,58 (1H, s), 11,22 (1H, s), 8,33 (1H, s), 6,45 (1H, s), 3,90 (3H, s), 2,62 (3H, s).
Korak 3
5-acetil-2,4-dihidroksi-metil estar benzojeve kiseline (alternativni postupak)
[0398]
[0399] Resorcinol metil estar (50 g, 0,298 mol) i smola Amberlyst 15 (40 g) su stavljeni u suspenziju toluena 150 mL (u atmosferi azota) i rastvor je zagrejan u uljnoj kupki na 70°C (interna temperatura 56°C). Acetil hlorid (22 mL, 308 mmol) je dodat u 5 mL delova tokom 30 minuta i dobijena je gasovita hlorovodonična kiselina (HCl) (koja je očišćena prolaskom strujanja azota kroz nataložen NaOH (natrijum hidroksid)). Rastvor je mešan na 70°C tokom 4,5 sata, zatim je zagrejan na temperaturi uljne kupke (interna temperatura 96°C) za 3,5 sata. Rastvor je ohlađen na 50°C i EtOAc (100 mL) je dodato i rastvor je filtriran dok je bio na ovoj temperaturi. Zaostala smola je isprana EtOAc (50 mL) i kombinovani filtrati su koncentrovani u talog kristalne čvrste supstance (ukupna težina 128g za čvrstu supstancu plus rastvarač).
Talogu je dodat heptan (100 mL) i posle 10 minuta na sobnoj temperaturi čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom. Ostatak je opran mešavinom heptana : toluena (2 : 1, 60 mL) zatim petrolej etrom tačka ključanja 40- 60°C i osušena in vacuo da se dobije prinos od 129 g (46,4%) (NMR (nuklearna magnetna rezonanca) je pokazala 3% materijala koji nastaje od saponifikacije metil estra).
[0400] Filtrat je ispario u maloj količini i dodato je 20% etil acetata (EtOAc) u heptanu (100 mL). Pošto je ostavljen na sobnoj temperaturi 16 sati drugi prinos od 4,75 g (7,6%) je dobijen (NMR identično prinosu 1).
Korak 4
Metil estar 5-acetil-2,4-bis-benziloksi-benzojeve kiseline
[0401]
[0402] Benzil bromid (70 ml, 0,59 mol) je dodat mešanoj mešavini metil 5-acetil-2,4-dihidroksibenzoata (60,7 g, 0,29 mol) i anhidrovanom kalijum karbonatu (87,8 g, 0,64 mol) u acetonitrilu (800 ml) i mešavina je mešana i držana na refluksu tokom 16 sati. Po hlađenju na sobnoj temperaturi mešavina je sipana u vodu (3 L) i mešana energično tokom 2 sata. Čvrste supstance su sakupljene filtracijom, isprane vodom (2 L), usisane suve pod redukovanim pritiskom i osušene do konstantne mase u vakumskoj rerni na 60°C tokom noći da se dobije metil 5-acetil-2,4-bis-benziloksibenzoat (112,1 g, 99%) kao kremasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (DMSO-d6) 8,21 (1H, s), 7,55 (4H, m), 7,43 (4H, m), 7,37 (2H, m), 7,04 (1H, s), 5,38 (4H, s), 3,79 (3H, s), 2,48 (3H, s). MS: [M+H]<+>391.
Korak 5
Metil estar 2,4-bis-benziloksi-5-izopropenil-benzojeve kiseline
[0403]
[0404] Kalijum tert-butoksid (29,1 g, 0,26 mol) je dodat mešanoj suspenziji metiltrifenilfosfonijum bromida (92,8 g, 0,26 mol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (1 L) i mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta u to je metil 5-acetil-2,4-bisbenziloksibenzoat (78,0 g, 0,2 mol) dodat i mešavina je mešana na sobnoj temperaturi još 30 minuta. Metanol (100 ml) je dodat da se suzbije pristup fosfornom ilidu i rastvarač je uklonjen in vacuo da se dobije narandžasto ulje koje je kristalizovalo tokom stajanja. Ostatak je ponovo kristalizovalo iz metanola (330 ml). Čvrste supstance su prikupljene sukcionom filtracijom, isprane metanolom (50 ml) a zatim usisane suve pod smanjenjim pritiskom da se dobije metil 2,4-bis-benziloksi-5-izopropenil-benzoat kao svetli žuti štapići. Matična tečnost je nataložila drugi prinos materijala pošto je ostavljena da prenoći (kombinovani prinos: 56,55 g, 73%)<1>H NMR (DMSO-d6) 7,59 (1H, s), 7,52 (2H, d), 7,64-7,32 (8H, m), 6,97 (1H, s), 5,28 (2H, s), 5,22 (2H, s), 5,09 (1H, s), 5,04 (1H, s), 3,76 (3H, s), 2,02 (3H, s). MS: [M+H]<+>389.
[0405] Još jedan prinos estra bi mogao da se dobije na sledeći način. Ostaci kristalizacije su isparili do sušenja in vacuo i uljna čvrsta supstanca je tretirana sa 5 % etil acetata u heptanu (250 ml). Etil acetat je dodat u malim porcijama energično mešanoj mešavini sve dok se ostatak nije odvojio u talog u velikoj količini čvrste supstance trifenilfosfin oksida. Čvrste supstance su uklonjene filtracijom i filtrat je ispario do suvoće in vacuo da bi se dobilo narandžasto ulje. Rekristalizacija iz metanola (kako je gore opisano) je dalje dala metil 2,4-bisbenziloksi-5-izopropenil-benzoat kao svetlo žutu kristalnu supstancu (ukupan prinos 85-90 %).
Korak 6
2,4-Bis-benziloksi-5-izopropenil-benzojeva kiselina
[0406]
[0407] Kalijum hidroksid (10,96 g, 0,19 mmol) je dodat mešanoj suspenziji metil 2,4-bisbenziloksi-5-izopropenil-benzoata (61,0 g, 0,16 mol) u metanolu (750 ml) i vodi (250 ml) i ta mešavina je mešana i držana u refluksu tokom 16 sati. Posle hlađenja organski rastvarač je uklonjen in vacuo i mešavina je acidifikovana na pH 2 vrednost kiseline ili manje dodavanjem 2M hlorodovodnične kiseline (200 ml). Mešavina je razređena vodom (2 L) i ekstrahovana etil acetatom (2 L), organski sloj je izdvojen i rastvarač je uklonjen in vacuo da se dobije 2,4-bisbenziloksi-5-izopropenil-benzojeva kiselina (58,8 g, 100%) kao bezbojna čvrsta supstanca.<1>H NMR (DMSO-d6) 7,52 (2H, d), 7,47-7,29 (9H, m), 6,82 (1H, s), 5,20 (2H, s), 5,17 (2H, s), 5,06 (1H, s), 5,04 (1H, s), 2,03 (3H, s). MS: [M+H]<+>375.
Korak 7
Benzil estar Di-prop-2-inil-karbaminska kiselina
[0408]
[0409] Ohlađenom (0°C) rastvoru dipropargilamina (46,7 g, 502 mmol) u EtOAc (etil acetat) (200 mL) i 10 % nataloženog K2CO3( kalijum karbonat) (700 mL, 507 mmol) je sporo dodat rastvor N-(benziloksikaroboniloksi)sukcinimida (125 g, 502 mmol) u EtOAc (500 mL) tokom 20 minuta. Rastvor je mešan na 0 °C tokom 2 sata zatim na sobnoj temperaturi 16 sati. Faze su razdvojene i organska faza je isprana sa 10% nataloženog K2CO3(700 mL, 507 mmol) i zatim sa zasićenim fiziološkim rastvorom (500 mL) i razređena je na 1000 mL EtOAc da se dobije 0,5M rastvora.
Korak 8
Benzil estar 5-hidroksimetil-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilna kiselina
[0410]
[0411] Rastvor propagil alkohola (26,4 mL, 424 mmol) u toluenu (120 mL) je degaziran. Rastvor 0,5M diina (engl. diyne) (organsko jedinjenje sa dve acetilenske grupe) (440 mL, 220 mmol) je isparilo i ostatak je rastvoren u toluenu (80 mL). Ovaj zaštićeni diin rastvor i Vilkinsonov katalizator (2,26 g, 2,44 mmol, 1,11% su dodati u 14 jednakih delova tokom perioda od 2 sata sa konstantnim nadzorom interne temperature tako što je temperatura zaostala 50- 100°C. Rastvor je ostavljen da se hladi na 50 °C tokom 30 minuta kada je rastvor ispario ( da bi se uklonio višak propagil alkohola). Ostatak je zagrejan sa toluenom (500 mL) i drvenim ugljem (Darco 4-12 sito, 20 g) na 100 °C tokom 30 min a zatim je filtriran vreo kroz Celite podlogu i smeđi rastvor je ispario. Ostatak je rastvoren u EtOAc (400 mL) na 80 °C kada je silicijumski gel (hromatografska klasa 65 g) dodat i zagrevanje je nastavljeno tokom 20 minuta. Rastvor je filtriran dok je bio vruć i zatim je ispario (za zasejavanje) da se dobije svetlobraon čvrsta supstanca.10 % EtOAc/heptana (v/v, 100 mL) je dodato i čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom. Čvrsta supstanca je isprana na sinterovanom filteru heptanom (100 mL) i sušena (50 °C, pumpa za ulje, 16 sati) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 59,0 g (95 %).
1H NMR (400 MHz, Me-d3-OD): 7,51-7,16 (m, 8H), 5,21 (s, 2H), 4,74 (s, 2H), 4,70 (s, 2H), 4,61 (s, 2H).
Korak 9
Benzil estar 5-metansulfoniloksimetil-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline
[0412]
[0413] Rastvoru 5-hidroksimetil-1,3-dihidro-izoindol-2-benzil acetata karboksilne kiseline (65,75 g, 0.232 mol) u THF (470 mL) i EtOAc (770 mL) je dodat Et3N (39 mL, 0,28 mol).
Rastvor je ohlađen u ledenoj kupki i rastvor metansulfonil hlorida (19 mL,0,245 mol) rastvoren u EtOAc (50 mL) je dodat (tako da je interna temperatura <12 °C). Posle mešanja u trajanju od 2 sata u ledenoj kupki dalja dodavanja metansulfonil hlorida (1,9 mL i 0,95 mL) i Et3N (3,9 mL) su napravljena (tako da pomoću tlc (tankoslojnom hromatografija) nije ostalo ništa od početnog materijala posle još 1 sat od mešanja). NaHCO3(550 mL) je dodat i rastvor je mešan tokom 20 minuta zatim je dodata zasićena slana voda (200 mL) i faze su razdvojene. Organska faza je osušena (MgSO4) (magnezijum sulfat) i isparila je kod zasejavanja tako da je dala vlažnu čvrstu supstancu koja je korišćena u sledećem koraku bez potpunog sušenja.
Korak 10
So benzil estar dihidrohlorid 5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilna kiselina
[0414]
[0415] Čvrsta supstanca iz koraka 9 (podrazumevano 0,232 mol) je rastvorena u acetonu (700 mL) i ovaj rastvor je dodat tokom duže od 45 minuta ohlađenoj (interna temperatura 15-17 °C) suspenziji K2CO3(48 g) i N-metilpiperazina (50 mL, 0,45 mol) u acetonu (330 mL). Suspenzija je mešana na 15 °C tokom 3 sata (potpuno uklanjanje početnog materijala pomoću tlc (takonslojna hromatografija)) kada je rastvor ispario u maloj količini i deo ostatka između etil acetata (EtOAc) (1000 mL) i mešavine vode (500 mL) i zasićenog fiziološkog rastvora (50 mL). Organska faza je isprana mešavinom vode (500 mL) i zasićenog fiziološkog rastvora (150 mL) i konačno isprana zasićenim fiziološkim rastvoromfiziološkim rastvorom (300 mL). Rastvor je osušen (MgSO4) i filtriran i ovom rastvoru je dodat 1M-HCl u MeOH (430 mL, 0,43 mol). Suspenzija je ohlađena (0°C tokom 30 minuta) i čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom koja je oprana EtOAc a zatim heptanom na sinterovanom filteru i čvrsto sušena (pumpa za ulje, RT 72 sata) da se dobije prinos 1 jedinjenja u ovom naslovu 66,34 g (65%) kao bezbojna čvrsta supstanca.1H NMR (400 MHz, Me-d3-OD): 7,64-7.51 (m, 2H), 7,51-7,29 (m, 6H), 5,23 (s, 2H), 4,79 (dd, J = 16,2, 6,1 Hz, 4H), 4,49 (s, 2H), 3,66 (s, 8H), 3,03 (s, 3H).
Alterntivni korak 10A
Benzil estar dihidrohlorid 5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilna kiselina
[0416]
[0417] Korak 10A može da se koristi kao alternativni put da se zamene gore pomenuti koraci 9 i 10.
[0418] Suspenziji mangan dioksida (15,5 g, 178 mmol) u DCM (100 mL) je dodat benzil estar 5-hidroksimetil-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (3,35g, 11,8 mmol) i posle 6 sati mešanja na sobnoj temperaturi još jednom je dodat manganov dioksid (5 g, 57 mmol). Posle još 1 sat mešanja na sobnoj temperaturi Celite (7g) je dodat i rastvor je filtriran kroz podlogu Celite™ što je dalo jasan bledo žuti rastvor. Celite™ je ispran DCM i zapremina kombinovanog organskog rastvarača je podešena na 100 mL isparavanjem. N-metilpiperazin (1,31 mL, 11,8 mmol) i sirćetna kiselina (0,68 mL) su dodati a posle njih natrijum triacetoksiborohidrid (4,98 g, 23,5 mmol). Žuti rastvor je mešan 16 sati da bi se dobio bezbojni rastvor. Ovom rastvoru je dodat 2M-HCl (10 mL, 20 mmol) što je dalo penušavost. Posle 30 min voda (10mL) i K2CO3(5,5g, 39,8 mmol) su dodati i organska faza je osušena (Na2SO4). Posle filtracije 4M-HCl u dioksanu (6 mL) je dodato uz mešanje i suspenzija je isparavana do suvoće. Ostatak je rastvoren u MeOH zagrevanjem i posle isparavanja čvrsta suptanca je isprana na sinterovanom filteru sa EtOAc zatim petrol (tačka ključanja 40-60°C) posle čega je usledilo sušenje in vacuo na 50°C da se dobije 3,61 g jedinjenja iz naslova (70%).1H NMR (400 MHz, Me-d3-OD): 7,65-7,51 (2H, m), 7,51-7,27 (6H, m), 5,23 (2H, s), 4,83-4,69 (4H, m), 4,49 (2H, s), 3,66 (8H, d), 3,03 (3H, s)
Korak 11
5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol
[0419]
[0420] U so benzil estar dihlorida 5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Korak 10, 59,8 g, 136,7 mmol) je dodat EtOAc (400 mL) i 10% nataloženog K2CO3(400 mL). Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (200 mL) i zatim osušena (MgSO4). Rastvor je filtriran i zatim je isparavan na ulju (koje je kristaliziralo usled stajanja sa benzenom (temperatura ključanja 40-60°C)). Rastvor je filtriran in vacuo da bi se dobila bezbojna čvrsta supstanca: 48,8g (133.5 mmol).
[0421] Deo čvrste supstance (24,4 g, 66,8 mmol) je rastvoren u MeOH (170 mL) i posle degaziranja rastvora i prečišćavanja azotom 10% Pd/C (1,22 g) je dodato i mešavina je hidrogenizovana na 1 atmosferi tokom 2,5 sata. Rastvor je filtriran i rastvor je ispario i ostatak je azeotropovan dvaput toluenom na 30-40°C. Ostatak je rastvoren u DMF (92 mL) i rastvor je neodložno degaziran i prečišćen N2. (NB proizvod je u ovom stadijumu osetljiv na vazduh i potamni pri dodiru sa kiseonikom. DMF rastvor je korišćen neodložno ali moguće je njegovo čuvanje putem degaziranja i skladištenje pod atmosferom N2.)
Korak 12
(2,4-bis-benziloksi-5-izopropenil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon
[0422]
[0423] Rastvor resorcinol kiseline (Korak 6, 23,7 g, 63,4 mmol) i 1-hidroksibenzotriazola (10,21 g, 66,7 mmol) su rastvoreni u DMF (92 mL) i ovom rastvoru je dodat N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid hidrohlorid (12,8 g, 66,8 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta i ovaj rastvor je dodat rastvoru amina iz Koraka 11 (66,8 mmol) zajedno sa DMF (5 mL) ispranim materijalima. Rastvor je odmašćen i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Rastvoru je dodato 10% K2CO3(500 mL) i EtOAc (500 mL) i organska faza je isprana sekvencijalno sa 10% K2CO3(500 mL), vode (4 x 100 mL) i zasićenog fiziološkog rastvora (200 mL). Rastvor je isparivan do male količine i 20% EtOAc u heptanu (250 mL) je dodato i čuvano na 0°C. Čvrsta supstanca koja je prethodno formirana je filtracijom uklonjena, isprana heptanom dvaput i osušena in vacuo da se dobije 35,05 g (94,4 %) iz naslova.1H NMR (400 MHz, Me-d3-OD): 7,49-7.10 (m, 14H), 6,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 2,5 Hz, 4H), 5,09 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 4,88 (s, 2H), 4,63 (s, 2H), 3,54 (d, J = 16,0 Hz, 2H), 2,50 (s, 7H), 2,28 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 2,11 (s, 3H).
Korak 13
(2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon
[0424]
[0425] Proizvod iz Koraka 12 (4,7 g) je rastvoren u 1:1 MeOH/vode (98 mL) i posle ispiranja sa N210% Pd/C i K2CO3(2,38g, 17,2 mmol) je dodato i suspenzija je hidrogenizovana tokom 16 sati u atmosferi H2. Rastvor je filtriran i rastvarač je ispario. U ostatak je dodat talog 2M-HCl (40 mL) i rastvor je ispran sa 1:1 EtOAc/petrol (40 mL x 2) a zatim je pH vrednost podešena na pH 8,5 dodavanjem NaOH i dodat je EtOAc (50 mL). Rastvor je zagrejan na 60 °C i uklonjena je faza taloga. Vruća organska faza je isprana vodom (30 mL) i zatim je isparila u maloj količini (oko 5 mL) i ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi 16 sati za zasejavanje. U kristalizirani materijal je dodato u odnosu 1:1 EtOAc/ petrol (10 mL) i mešavina je filtrirana i osušena da bi dala 1,76 g jedinjenja iz naslova kao slobodnu bazu 1H NMR (400 MHz, Me-d3-OD): 7,29 (s, 3H), 7,19 (s, 1H), 6,39 (s, 1H), 4,91 (s, 4H), 3,56 (s, 2H), 3,28-3,15 (m, 1H), 2,53 (s, 8H), 2,31 (s, 3H), 1,23 (d, J = 6,9 Hz, 7H).
Opcioni korak 14
Prečišćavanje za (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon
[0426] U nekim šaržama proizvoda, jedinjenje iz naslova (X = H u formuli) može da sadrži male količine nečistoće 2,4-dihidroksi-5-(2-hidroksiprop-2-il)-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon (X = OH u formuli). Nečistoće mogu da se uklone sledećim postupkom.
[0427] Anhidrid sirćetne kiseline (1,04 ml, 11,0 mmol) je dodat mešanoj suspenziji nečistog 2-(2,4-dihidroksi-5-izopropilbenzoil)-5-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindola (2,05 g, 5,0 mmol) u toluenu (20 ml) i dobijena mešavina je mešana i držana na temperaturi od 100 °C tokom 16 sati. Posle hlađenja na sobnoj temperaturi rastvarač je uklonjen in vacuo da se dobije smeđe ulje koje je rastvoreno u metanolu (20 ml). Koncentracija hlorovodonične kiseline (1 ml) je dodata u mešavinu i mešana i držana na refluksu tokom 5 sati. Posle hlađenja na sobnoj temperaturi, organski rastvarač i isparljivi materijal su uklonjeni in vacuo i nataloženi ostatak je rastvoren u vodi (25 ml) i baziran na pH 8 vrednosti uz energično mešanje pažljivim dodavanjem 10% taloga rastvora kalijum karbonata.50% Etil acetata u heptanu (50 ml) je dodato i mešavina je dinamično mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Materija čvrste supstance je prikupljena sukcionom filtracijom, isprana sa 50% etil acetata u heptanu (50 ml), usisana suva pri redukovanom pritiskom i osušena tokom noći u vakumskoj peći na 50 °C da se dobije 2-(2,4-dihidroksi-5-izopropilbenzoil)-5-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol (1,85 g, 90%) kao isprano bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (DMSO-d6) 10,07 (1H, br s), 9,60 (1H, br s), 7,24 (3H, m), 7,06 (1H, s), 6,40 (1H, s), 4,76 (4H, br s), 3,44 (2H, s), 3,10 (1H, m), 2,32 (8H, m), 2,14 (3H, s), 1,15 (6H, d). MS: [M+H]<+>410.
PRIMER 2
(2,4-Dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon so L-laktata (forma FL1)
[0428] Proizvod iz Primera 1 (1,24 g, 3,303 mmol) je stavljen u suspenziju etanola (3 mL) i EtOAc (5 mL) i dodat je rastvor kiseline L-laktata (0,285 g, 3,13 mmol) rastvoren u etanolu (3 mL). Rastvor je zagrejan sve dok nije postao bistar i zatim je filtriran. EtOAc (5 mL) je korišćen da se ispere filter i kombinovani filtrati su mešani na sobnoj temperaturi 2 sata za zasejavanje. Kristalna masa koja je formirana je uklonjena filtracijom, je isprana sa EtOAc i zatim osušena u vakumu na 50°C da se dobije jedinjenje iz naslova, 1,29 g.1H NMR (400 MHz, Me-d3-OD): 7,30 (s, 3H), 7,18 (s, 1H), 6,39 (s, 1H), 4,91 (s, 4H), 4,08 (q, J = 6,8 Hz, 1H), 3,70-3,63 (m, 2H), 3,28-3,15 (m, 1H), 3,01 (s, 4H), 2,68 (m, 7H), 1,36 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,23 (d, J = 6,9 Hz, 6H).
PRIMER 2A
(2,4-Dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon natrijum L-laktat
[0429] Primer 2A opisuje sintetičku rutu koja sadrži u suštini iste korake postupka kao i ruta opisana u Primerima 1 i 2 ali gde su uslovi postupka pogodniji za izvođenje reakcija velikih razmera.
Korak 1
Metil estar 4-acetoksi-2-hidroksi-benzojeva kiselina
[0430] Zagrejanom rastvoru (50°C) resorcinol meti estra (16,5 Kg, 98,1 mol) i N,N-dimetil-4-aminopiridina (89,1 g, 0,73 mol, 7,4 mol%) u toluenu (66 L) je polako dodata (tokom 2 sata) anhidrovana sirćetna kiselina (9,9 L, 104,9 mol). Rastvor je zagrevan do 50 °C još sledećih 1,5 sat i zatim je rastvarač uklonjen isparavanjem na 50 °C do male količine i ostatak je pretvoren u azeotrop jednom kada je doveden u kontakt sa toluenom. Preostalom ulju je odmah dodat toluen (33 L) dok je još uvek bio topao i rastvor je korišćen za Korak 2 bez daljeg prečišćavanja.
Korak 2
Metil estar 5-acetil-2,4-dihidi-benzojeva kiselina
[0431] Ratvor toluena iz Koraka 1 je ohlađen u ledenoj kupki u atmosferi N2i trifluorometansulfonska kiselina (9,44 L) je dodavana polako tokom 3 sata. Tokom mešanja obrazovana je fina bela čvrsta supstanca koja je rastvorena tokom zagrevanja na sobnoj temperaturi tokom 20 sati a zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 37 sati da bi se dobio žuti rastvor. U rastvor je dodat acetil hlorid (726 mL) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi još 1 sat. Ovaj rastvor je kanuliran u mešani ohlađeni (0°C) rastvor EtOAc (217,8 L) i NaOAc.3H2O (14,52 kg) rastvorenog u vodi (145 L). Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (dvostruko, 72,6 L) i isparavana je do 5,5 kg. Toluen: Izopropanol (2 : 3) je dodat i kristalisana čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom i osušena da se dobije 12,6 kg (61% tokom 2 koraka), tačka topljenja (mp) 124-126 °C.
Korak 3
Metil estar 5-acetil-2,4-bis-benziloksi-benzojeva kiselina
[0432] Mešanom rastvoru benzil bromida (16,14 L, 136 mol) i anhidrovanom kalijum karbonatu (20,25 Kg, 147,6 mol) u acetonitrilu (184.5 L) je dodat metil 5-acetil-2,4-dihidroksibenzoat (14 Kg, 66,6 mol, korak 2) u 6 delova tokom 5 sati. Ova mešavina je mešana i držana na refluksu tokom 20 sati, ohlađena do sobne temperature i sipana u vodu (682 L) i mešana energično tokom 2 sata. Čvrste supstance su sakupljene centrifugiranjem i osušene pod redukovanim pritiskom do konstante mase u vakumskoj peći na 60°C tokom noći da se dobije metil 5-acetil-2,4-bis-benziloksibenzoat (23,5 kg, 97,3%) kao kremasta čvrsta supstanca sa tačkom topljenja 114-115 °C.
Korak 4
Metil estar 2,4-bis-benziloksi-5-izopropenil-benzojeva kiselina
[0433] Rastvor kalijum tert-butoksida (6,72 kg, 60,1 mol) u anhidrovanom THF (60 L) je dodavan tokom 3 sata u mešanu suspenziju metiltrifenilfosfonijum bromida (21,43 kg, 60,1 mol) i metil 5-acetil-2,4-bis-benziloksibenzoata (21,3 kg, 54,6 mol, korak 3) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (213 L) na 15 °C. Mešavina je mešana na 15 °C tokom 70 minuta i zagrevana do 20 °C tokom 60 minuta. Metanol (27,3 L) je dodat da se suzbije višak fosfornog ilida i rastvarač je koncentrovan in vacuo a potom dodavanjem EtOAc i vode. Organska faza je tretirana aktiviranim drvenim ugljem, filtrirana i isparivana do male zapremine. Ostatak je kristalizirao od kipuće MeOH i čvrste supstance su prikupljene usisnom filtracijom, isprane metanolom i osušene pod redukovanim pritiskom da bi se dobio metil 2,4-bis-benziloksi-5-izopropenil-benzoat 18,1 kg (85%) kao bledo žuti štapići, tačka topljenja 92-94 °C (99,6% čistoće pomoću hplc (hromatografija visokih performansi).
Korak 5
2,4-Bis-benziloksi-5-izopropenil-benzojeva kiselina
[0434] Kalijum hidroksid (0,527 kg, 9,4 mol) je dodat mešanoj suspenziji metil 2,4-bisbenziloksi-5-izopropenil-benzoata (3,1 kg, 8 mol, korak 4) u metanolu (18,6 L) i vodi (12,4 L) i ta mešavina je mešana i držana u refluksu tokom 3 sata. Metanol je uklonjen pod delimičnim vakumom iz posude, i preostalom jedinjenju je dodat toluen (62 L). Rastvor je zagrejan na 40 °C i toj mešavini je dodat konc. HCl (1,36 L). Dvofazna mešavina se zagreva na 50 °C i ove faze se razdvajaju. Organska faza se ispere vodom (31 L) na 50 °C i organska faza je isparavala pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 2,4-bis-benziloksi-5-izopropenilbenzojeva kiselina 2,851 Kg (95 % prinos) kao bezbojna čvrsta supstanca.
Korak 6
Benzil estar di-prop-2-inil-karbaminske kiseline
[0435] Ohlađenom (5 °C) rastvoru K2CO3(4 Kg, 29,0 mol) u vodi (17,5 L) i toluenu (12.5 L) je dodat dipropargilamin (2,50 kg, 26,88 mol). Benziloksihloroformat (4,8 kg, 28,14 mol) je dodat brzinom kao što je T<10 °C. Rastvor je mešan na 5 °C tokom 10 minuta i zatim je ostavljen da se zagreva na sobnoj temperaturi. Faza taloga je odvojena i organska faza je isprana sa 0,2 M HCl sa (12,5 L), zas. NaHCO3(natrijum bikarbonat) (13,5 L) i slane vode (17 L) i dobijeni rastvor je korišćen u koraku 7 (ogledom je ispitano da sadrži 6,23 kg, 102 % na osnovu dela koji je ispario).
Korak 7
Benzil estar 5-hidroksimetil-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilna kiselina
[0436] Rastvor propagil alkohola (2,11 kg, 37,7 mol) u toluenu (32,48L) je odmašćen i zagrejan na 55 °C. Rastvor benzil estar di-prop-2-inil-karbaminske kiseline (4,06 kg, 17,86 mol, korak 6) u toluenu i Vilkinsonov katalizator (0,162 kg) su dodati u 10 jednakih delova tako da je temperatura <65 °C (eksoterm je ostavljen da opadne pre nego što je urađeno sledeće dodavanje). Rastvor je zatim mešan na 55 °C tokom 1 sat i zatim je hlađen na do 20 °C. DCM (8,12 L) je dodato i mešavina je koncentrovana u maloj količini. Toluen (8 L) je dodat i rastvor je ispario do konstante težine što je dalo jedinjenje u naslovu, ukupno 5,72 kg (113%).
Korak 8
Benzil estar 5-metanesulfoniloksimetil-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilna kiselina
[0437] Ohlađenom rastvoru (5 °C) benzil estra 5-hidroksimetil-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (11 kg, 38,8 mol, korak 7) i Et3N (7,04 L, 50,6 mol) u DCM (55 L) je dodat metansulfonil hlorid (2,97 L, 38,4 mol) tako da interna temperatura jeste <10 °C. Posle mešanja tokom 0,5 sati na 5 °C rastvor je korišćen u koraku 9 dole.
Korak 9
So benzil estar dihidrohlorida 5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilna kiselina
[0438]
[0439] Čvrsta supstanca iz koraka 8 (podrazumevano 0,232 mol) je rastvorena u acetonu (700 mL) i ovaj rastvor je dodat tokom duže od 45 minuta ohlađenoj (interna temperatura 15-17 °C) suspenziji K2CO3(48 g) i N-metilpiperazina (50 mL, 0,45 mol) u acetonu (330 mL). Suspenzija je mešana na 15 °C tokom 3 sata (potpuno uklanjanje početnog materijala pomoću tic (takonslojna hromatografija) kada je rastvor ispario do male zapremine i deo taloga između EtOAc (1000 mL) i mešavine vode (500 mL) i zasićenog fiziološkog razvora(50 mL). Organska faza je isprana mešavinom vode (500 mL) i zasićenog fiziološkog rastvora (150 mL) i konačno isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (300 mL). Rastvor je osušen (MgSO4) i filtriran i ovom rastvoru je dodat 1M-HCl u MeOH (430 mL, 0,43 mol). Suspenzija je ohlađena (0°C tokom 30 minuta) i čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom koja je oprana sa EtOAc a zatim heptanom na sinterovanom filteru i čvrsta supstanca je osušena (pumpa za ulje, sobna temperatura 72 sata) da se dobije prinos 1 jedinjenja u ovom naslovu 66,34 g (65%) u vidu bezbojne čvrste supstance.1H NMR (400 MHz, Me-d3-OD): 7,64-7,51 (m, 2H), 7,51-7,29 (m, 6H), 5,23 (s, 2H), 4,79 (dd, J = 16,2, 6,1 Hz, 4H), 4,49 (s, 2H), 3,66 (s, 8H), 3,03 (s, 3H).
Korak 9
Benzil estar 5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilna kiselina
[0440] DCM (33 L) i N-metilpiperazin (21,45 L, 193,4 mol) su mešani na 25 °C i rastvor iz koraka 8 je dodat tokom minimalno 30 minuta tako da je temperatura bila 20 - 30 °C. Posle mešanja rastvora još 30 minuta voda (55 L) je dodata i organska faza je isprana vodom (2 x 55 L). Proizvod je ekstrahovan u 0,8M HCl (66 L) i njegovi slojevi su odvojeni. Faza vodenog rastvora je isprana sa DCM (55 L) i zatim je bazifikovana sa 2M NaOH do pH vrednosti 10-11 i proizvod je ekstrahovan u EtOAc (2 x 55 L). Kombinovane organske faze su filtrirane da se uklone čvrste supstance i isparavane posle čega je usledilo pretvaranje u azeotrop u kontaktu sa toluenom i sušene do konstante težine da se dobije jedinjenje iz naslova, 6,63kg (47 % prinos, 98% čistoće pomoću hplc (hromatografijom visokih performansi)).
Korak 10
5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol
[0441] Degaziranom rastvoru benzil estar 5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline (Korak 9, 1,3 kg, 3,55 mol) rastvorenom u EtOH (13 L) je dodato 10 % Pd/C (0,065 kg). Vodonik je provučen kroz mešavinu na 30 °C tokom 4 sata ili sve do završetka nuklearnom magnetnom rezonancom (NMR). Rastvor je zatim mešan tokom 1 sat u atmosferi N2i zatim filtriran da se ukloni katalizator kroz GF/F filter posle čega je usledila filtracija kroz Cuno filter. Filtrat je ispario do male zapremine, azeotropovan toluenom (3,9 L) i osušen do konstantne težine dajući prinos u vidu jedinjenja iz naslova u vidu crvene/crne uljne čvrste supstance (0,78 Kg) koja je čuvana pod azotom sve dok je bilo potrebno.
Korak 11
(2,4-bis-benziloksi-5-izopropenil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanon
[0442] 1,1'-karbonildiimidazol (4,82 kg, 29,8 mol) je dodat rastvoru 2,4-bis-benziloksi-5-izopropenil-benzojeve kiseline (10,58 kg, 28,3 mol, korak 5) u DMF (21,2 L) na 25 °C. Posle 20 minuta na 25 °C rastvor od 5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol (7,2 kg, 31,1 mol, korak 10) u DMF (7,2 L) zadržavši temperaturu ispod 35 °C i rastvor je mešan na 25 °C tokom minimalno 12 sati. Čvrsta supstanca koja je već formirana je uklonjena filtracijom, isprana izopropil acetatom (2 x 21,6 L) i osušena na 35 °C do konstantne težine da se dobije jedinjenje iz naslova 8,7 kg (77 % prinos, čistoća pomoću hplc (hromatografije visokih performansi) 97,5 %).
Korak 12
(2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon
[0443] Proizvod iz Koraka 11 (0,9 kg, 1,53 mol) je rastvoren u izopropanolu (6,8 L) i vodi (1,04 L) i posle prečišćavanja sa N210% Pd/C (90g) i K2CO3(0,212 kg, 1,53 mol) su dodati i suspenzija je hidrogenizovana tokom 60 do 70 minuta pod pritiskom H2od 3 bar. Rastvor je razređen vodom (0,5 L) i filtriran. Filtratu je dodat vodeni rastvor HCl (30% hlorovodonične kisleine, 0,85 kg razređene vodom 5,42 kg) i rastvor je koncentrovan na 60 °C pod vakumom (uklanjanjem 10 L izopropanola). Voda (0,45 L) je dodata rastvoru i postupak koncentrovanja je nastavljen (sve dok još 10 L izopropanola nije uklonjeno). Faza vodenog rastvora je isprana sa EtOAc (4,61 L), razređema acetonitrilom (4,06 L) i neutralisana do pH vrednosti 7,5- 8,5 dodavanjem koncentrovanog rastvora amonijaka (0,35 kg). Suspenzija je mešana tokom 2,5 sata i zatim je čvrsta supstanca uklonjena filtracijom. Ostatak je ispran acetonitrilom (2 x 0,8 L) i osušen na 40 °C do konstantne težine da se dobije jedinjenje iz naslova 588 g (94 % prinos).
Korak 13
(2,4-Dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon so L-laktata (forma FL1)
[0444] Proizvod prema koraku 12 (646 g, 1,58 mol) je rastvoren u etanolu (5,17 L) i rastvor je filtriran. Rastvor kiseline L-laktata (142 g, 1,58 mol) rastvoren u etanolu (2,59 L) je filtriran i dodat rastvoru filtriranog rastvora (gore) i zatim je mešavini dodat EtOAc (7,75 L). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 sati i zatim je ohlađena na 5 °C još 2 sata. Čvrsta supstanca koja je formirana je uklonjena filtracijom, isprana etil acetatom (2 x 2,58 L) i heptanom (2 x 1,94 L) i osušena do konstantne težine na 35 °C dajući jedinjenje iz naslova (581 g, 74 % prinos).
PRIMER 3
(2,4-Dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon so dihidrohlorida (forma FH3)
[0445] Proizvod prema Primeru 1 (0,49 g, 1 mmol) je rastvoren u etanolu (10 mL) i 4M HCl u dioksanu (0,5 mL, 2 mmol) je rastvoren zagrevanjem i zatim je rastvor ispario do suvoće. Ostatak je rastvoren zagrevanjem etanola : vode (9:1; 5 mL). Rastvor je mešan tokom 16 sati za zasejavanje i čvrsta supstanca koja je formirana je uklonjena filtracijom i osušena je in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.1H NMR (400 MHz, Me-d3-OD): 7,63-7,52 (m, 2H), 7,47 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 6,40 (s, 1H), 4,96 (d, J = 7,0 Hz, 4H), 4,47 (s, 2H), 3,87-3,40 (m, 8H), 3,30-3,16 (m, 1H), 3,02 (s, 3H), 1,23 (d, J = 6,9 Hz, 6H).
PRIMER 4
Sinteza (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanona (uporedni primer)
4A. Sinteza 2,4-Bis-benziloksi-5-izopropenil-N,N-di-prop-2-inil-benzamida
[0446]
[0447] Mešani rastvor 2,4-bis-benziloksi-5-izopropenil-benzojeve kiseline (Primer 1 Korak 6) (1 ekvivalent) u dihlorometanu (10 ml) je tretiran sukcesivno sa N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidrohloridom (1,2 ekvivalenta), 1-hidroksibenzotriazol (1,2 ekvivalenata) i dipropargilaminom (1,5 ekvivalenata) i ova mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Mešavina je ispirana naizmenično sa 2M hlorovodonične kiseline i 2M natrijum hidroksida, organski sloj je odvojen i rastvarač je uklonjen in vacuo da se dobije proizvod koji je bio ili dobijen čist ili je prečišćen hromatografskim postupkom na silika koloni (ispiranjem sa mešavinama etil acetata u petrolej etru ili metanola u etil acetatu kako je prikladno). MS: [M+H]<+>450
4B. Sinteza 1-etil-4-prop-2-inil-piperazina
[0448]
[0449] U 1-etilpiperazin (2,33 g, 20,2 mmol) i K2CO3(2,79 g, 20.2 mmol) u acetonu (27 ml) je dodat propargil bromid (2,00 g, 13,5 mmol) ukapavanjem na 0 °C u atmosferi N2. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Reakcija je filtrirana i soli su isprane malom količinom acetona. Filtrati su kombinovani i isparavani lagano do koncentrovanosti. Ostatak je vezan u EtOAc i ispran vodom. Faza taloženja je ponovo ekstrahovana sa EtOAc.
Kombinovani organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom i osušeni iznad MgSO4. Proizvod je filtriran i isparavao je do suvoće da bi ostavio svetlo narandžasto ulje.
4C. Sinteza (2,4-Bis-benziloksi-5-izopropenil-fenil)-[5-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanona
[0450]
[0451] Jedinjenje iz naslova je dobijeno korišćenjem postupka iz Primera 5B izuzev što je prečišćavanje izvedeno korišćenjem hromatografije na koloni pre nego formiranjem soli. MS:
[M+H]<+>602.
4D. Sinteza (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidroizoindol-2-il]-metanona
[0452]
[0453] Hidrogenacija (2,4-bis-benziloksi-5-izopropenil-fenil)-[5-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanona korišćenjem postupka opisanog u Primeru 1 Korak 13 osim što su izrada i postupci prečišćavanja promenjeni. Tako, posle hidrogenacije, katalizator je filtriran i filtrat je ispario. Dodati su voda i EtOAc proizvodu i vodeni sloj je neutralisan. Proizvod je ekstrahovan sa EtOAc (x3). Kombinovani organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom i osušeni iznad MgSO4. Dobijeni rastvor je filtriran i isparavao je do suvoće da bi ostavio svetložuto ulje/čvrstu supstancu. Proizvod je prečišćen hromatografskim postupkom na koloni (gradijent eluacije 100% DCM do 10 % MeOH u DCM) da se dobije prinos proizvoda kao svetlo žuta čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>424.
PRIMER 5
Alternativna sinteza 5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol
5A. Sinteza 1-metil-4-prop-2-inil-piperazina
[0454]
[0455] U 1-metilpiperazin (37,7 ml, 337 mmol) i K2CO3(46,6 g, 337 mmol) u acetonu (380 ml) je dodat propargil bromid (25 ml, 225 mmol, 80% u toluenu) u acetonu (70 ml) ukapavanjem na 0 °C u atmosferi N2. Početna temperatura reakcije je držana <10 °C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Reakcija je filtrirana, soli su isprane malim delovima acetona (x2). Filtrati su kombinovani isparavanjem do koncentracije (pažljivo). U ostatak je dodata voda i proizvod je ekstrahovan sa DCM (x3). Kombinovani organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom i osušeni iznad MgSO4. Proizvod je filtriran i isparavao je do suvoće da bi dao prinos 1-metil-4-prop-2-inil-piperazin kao svetlo narandžasto ulje.
5B. Sinteza tert-butil estra 5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline
[0457] Rastvor N-boc-dipropargilamina (36,3 ml, 226 mmol, 86% čistoće) u EtOAc (30 ml) je napravljen i odmašćen stvaranjem mehurića kroz N2, u odvojenom levku.
Tris(trifenilfosfin)rodijum(l) hlorid (1,39 g, 1,50 mmol, 1 mol%) je dodat u prethodno odmašćen EtOAc (15 ml) u drugom levku za odvajanje. (NB CpRu(COD)Cl) može takođe da se koristi kao alternativni katalizator).
[0458] U boci glavnog reaktora, 1-propargil-4-metilpiperazin (32,3 ml, 150 mmol, 90% čistoće) je rastvoren sa EtOAc (75 ml) i odmašćen stvaranjem mehurića N2kroz mešavinu. Mešavina je ohlađena u kupki ledene vode i zatim je dodat tris(trifenilfosfin)rodijum(l) hlorid (1,39 g, 1 mol%) u EtOAc. Sporim dodavanje N-boc-dipropargilamin /EtOAc je započet da bi dao prinos blagog egzoterma. Interna temperatura je porasla na 25 °C i ostala je na ovoj temperaturi. Po zavšetku dodavanja jedne trećine (∼45 minuta), egzoterm je zaostao (uprkos kontinualno sporom dodavanju N-boc-dipropargilamin/EtOAc). Još jedan deo tris(trifenilfosfin) rodijum(l) hloridnog katalizatora (1,39 g, 1 mol%) u EtOAc (15 ml, prethodno odmašćen) je napravljen i dodavan polako u ovu reakciju. Posle nekoliko minuta novi egzoterm je započet i dostigao je do 30 °C. Temperatura reakcije je ohlađena lagano dodavanjem male količine leda u vodenu kupku. Jednom kada je egzoterm počeo da se sleže, sporo dodavanje N-boc-dipropargilamin /EtOAc-a je nastavljeno. Čitavo dodavanje je izvršeno tokom perioda od 2 sata. Reakciona mešavina je zatim ostavljena na sobnoj temperaturi tokom noći pre razređivanja EtOAc i ispiranja NH4Cl (x2) (vodeni rastvor, zasićena) da se ukloni višak 1-propargil-4-metilpiperazina. Mešavina je rastvorena malom količinom vode da se rastvore soli. Organski sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom i osušen nad MgSO4. Proizvod je filtriran i isparavao je do suvoće da bi ostavio braon ulje.
[0459] U ostatak dobijenog ulja je dodat n-heptan. Ulje/heptan je ostavljeno da stoji (∼10 minuta) sve dok se nije formirao crveni talog. Talog je filtriran i ispran svežim n-heptanom (x2). Filtrati su osušeni da bi se dobio prinos proizvoda u vidu crvenog ulja.
[0460] Željeni proizvod je još prečišćavan formiranjem soli toluensulfonske kiseline (TsOH). Tako, sirovi proizvod je vezan u MeOH (20 ml) i TsOH.H2O (1 eq do procenjene čistoće pomoću NMR) je dodato. Rastvor je ispario do suvoće, zatim je rastvoren u toluenu (x1) i ponovo je isparavan. Dobijeni proizvod je vezan u etar. Posle nekoliko minuta, formirani su talog i rastvor. Talog je filtriran i ispran sa još etra (x2) sve dok filtrat nije postao bezbojan. Žuta čvrsta supstanca je osušena da bi se dobio prinos proizvoda kao što je so TsOH. MS: [M+H]<+>332.
5C. Sinteza 5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-2,3-dihidro-1H-izoindola
[0461]
[0462] So izoindol tosilata je vezana u DCM (0,3 M) i TFA (12 ek.) sporim dodavanjem na 0 °C. Reakcija je mešana tokom noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je isparila do suvoće i zatim sa toluenom/MeOH (X3) da se dobije prinos proizvoda kao mešavina soli dobijene dodatkom kiseline. MS: [M+H]<+>232.
[0463] Jedinjenje prema Primeru 5C može da se koristi u postupku iz Primera 1 Korak 12.
PRIMER 6
Alternativna sinteza benzil estar 5-hidroksimetil-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilne kiseline
6A. Metil 2-benzil-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-karboksilata
[0464]
[0465] Benzilamin (3,21 g, 30,0 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (25 ml) je dodat mešanoj mešavini metil 3,4-bis-(bromometil)benzoata (9,66 g, 30,0 mmol) (dobijena od Fluorochem) i trietilamina (9 ml, 64,7 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (50 ml) i mešavina koja se dobije je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Rastvarač je uklonjen in vacuo na 40 °C i ostatak je podeljen između etil acetata (100 ml) i vode (100 ml). Organski sloj je ispran još jednim delom vode (100 ml), odvojen i rastvarač je uklonjen in vacuo na 40 °C da se dobije metil 2-benzil-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-karboksilat kao svetlo narandžasta čvrsta supstanca koja je odmah korišćena bez daljeg prečišćavanja kako je dole opisano.<1>H NMR (DMSO-d6) 7,82 (2H, m), 7,40-7,25 (6H, m), 3,90 (3H, s), 3,88 (2H, s), 3,84 (4H, s). MS: [M+H]<+>268.
6B. (2-benzil-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il)-metanol
[0466]
[0467] Metil 2-benzil-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-karboksilat (gore naveden) je rastvoren u anhidrovanom tetrahidrofuranu (75 ml) i dodavan je ukapavanjem tokom 15 minuta brzo mešanoj suspenziji litijum aluminijum hibrida (1,71 g, 45,0 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (75 ml). Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata posle čega je višak litijum aluminijum hibrida uništen sporim dodavanjem ukapavanjem 1M rastvora natrijum sulfata (12 ml). Čvrste supstance su uklonjene filtracijom, isprane etil acetatom (2 x 50 ml) i usisane suve. Rastvarač je uklonjen in vacuo da se dobije (2-benzil-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il)-metanol (7,15 g, 99%) kao čvrsta supstanca zagasite boje.<1>H NMR (DMSO-d6) 7,40-7,30 (4H, m), 7,28 (1H, m), 7,17-7,10 (3H, m), 5,10 (1H, t), 4,47 (2H, d), 3,85 (2H, s), 3,82 (2H, s), 3,80 (2H, s). MS: [M+H]<+>240.
6C. (2,3-Dihidro-1H-izoindol-5-il)-metanol
[0468]
[0469] 10% Paladijum na aktiviranom ugljeniku (200 mg) je dodat rastvoru (2-benzil-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il)-metanola (2,39 g, 10,0 mmol) u etanolu (60 ml) i dobijena mešavina je postavljena u Parr aparat, zagrejana do 50 °C i mućkana u atmosferi vodonika na 60 psi tokom 30 sati. Posle hlađenja na sobnoj temperaturi mešavina je filtrirana pod gravitacijom, čvrste supstance su isprane etanolom (2 x 10 ml) i rastvarač je uklonjen in vacuo da se dobije (2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il)-metanol (1,49 g, 100%) kao isprano bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (DMSO-d6) 7,20 (1H, s), 7,18 (1H, d), 7,12 (1H, d), 5,10 (1H, br s), 4,46 (2H, s), 4,05 (4H, s). MS: [M+H]<+>150.
6D. Benzil estar 5-hidroksimetil-1,3-dihidro-izoindol-2-karboksilna kiselina
[0470]
[0471] Mešavina (2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il)-metanola (1,34 g, 9,0 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (50 ml) je zagrejana pažljivo da pomogne rastvaranje i omogući hlađenje na sobnoj temperaturi. Trietilamin (1,5 ml, 10,8 mmol) je dodat i mešana mešavina je tretirana ukapavanjem benzil hloroformata (1,35 ml, 9,5 mmol) i mešana je na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Rastvarač je uklonjen in vacuo i ostatak je podeljen između etil acetata (30 ml) i 2M hlorovodonične kiseline (30 ml). Organski sloj je ispran vodom (30 ml), odvojen i rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobilo ružičasto ulje koje se tokom stajanja stegne. Čvrste supstance su triturisane sa 10% etil acetata u heksanu (10 ml), filtrirane, isprane heptanom (10 ml) i usisane suve da se dobije jedinjenje iz naslova (2,5 g, 98%) kao svetlo ružičasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (DMSO-d6) 7,45-7,21 (8H, m), 5,20 (1H, t), 5,17 (2H, s), 4,71 (2H, br s), 4,64 (2H, br s), 4,50 (2H, d). MS: [M+H]<+>284.
[0472] Jedinjenje prema naslovu može da se koristi u Koraku 9 Primera 1.
BIOLOŠKA AKTIVNOST
PRIMER 7
Kalorimetrijska izotermalna titracija
[0473] Sposobnost jedinjenja prema ovom pronalasku da se vezuju na proteine toplotnog šoka Hsp90 kod ljudi je utvrđena korišćenjem izotermalne kalorimetrijske titracije.
[0474] Eksperimenti sa izotermalnom kalorimetrijskom titracijom (ITC) su izvedeni sa VP-ITC kalorimetrom titracije (Microcal Inc., Northampton, MA, USA). Kloniranje, ekspresija, i prečišćavanje N-terminalnog domena proteina toplotnog šoka Hsp90α kod ljudi su izvedeni prema objavljenim postupcima (Jez, J.M. et al, Chem Biol.2003 Apr;10(4):361-8.) Rastvori N-terminalnog domena proteina toplotnog šoka kod ljudi Hsp90α i jedinjenje su dobijeni u puferu koji obuhvata 25 mM Tris, 100 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 1mM TCEP, 5% DMSO, pH vrednost 7,4. Svi rastvori su filtrirani i odmašćeni pre nego što je izvedena titracija. Promena entalpije koja nastaje usled svakog ubrizgavanja liganda je dobijena kroz integraciju kalorimetarskog signala. Podaci su analizirani korišćenjem Origin 7.0 (Microcal Software Inc., Northampton, MA). Toplote rastvaranja su procenjene korišćenjem krajnjih ubrizgavanja svake pojedinačne titracije i oduzimanjem pre unosa podataka. Različiti ITC eksperimentalni formati su korišćeni kako bi se dobile konstante disocijacije jedinjenja (Kd) nad širokim spektrom afiniteta. Za jedinjenja koja se slabo vezuju korišćena je niska c-vrednost ITC postupka (Turnbull W.B. & Daranas A.H. J. Am. Chem. Soc.2003 Dec 3;125(48):14859-66) gde je protein bio prisutan u 10-20 µM u kalorimetarskoj ćeliji i koncentrovanost jedinjenja je bila 1-20 mM u špricu injekcije. U ovom tipu eksperimenta stehiometrijski parametar (N) je zaključan na 1 radi unosa podataka. Za Kd-e u opsegu od 20-0,004 µM eksperiment je konfigurisan tako da je mesto vezivanja koncentracije podeljeno pomoću Kd (c-vrednost) je bila između 5 i 1.000. Za veći broj ovih eksperimenata koncentrovanost proteina u kalorimetrijskoj ćeliji je bila u opsegu 4-100 µM i koncentracija liganda u špricu injekcije se kretala u opsegu od 50-1.500 µM. U retkim slučajevima kada je rastvorljivost jedinjenja bila ograničavajuća, rastvor jedinjenja je stavljen u kalorimetrijsku ćeliju i titrovan proteinom iz šprica injekcije, pri čemu je c-vrednost održavana između 5 i 1.000. Konkurentni ITC eksperimenti su korišćeni da se procene konstante disocijacije Kd < 4 nM izvođenjem titracije u prisustvu slabije vezujućeg konkurenta prema postupku opisanom u Sigurskjold B.W. Anal Biochem.2000 Jan 15; 277(2):260-6.
[0475] Jedinjenje (1) ima Kdvrednost manju od 0,1 mikromolara.
PRIMER 8
Antiproliferativna aktivnost
[0476] Antiproliferativne aktivnosti prema ovom pronalasku mogu da se odrede merenjem sposobnosti jedinjenja da inhibiraju rast ćelijskih linija kao što su ćelijske linije kancera kolona kod ljudi HCT116. Inhibicija rasta ćelije se meri korišćenjem ogleda Alamar Blue (Nociari, M. M, Shalev, A., Benias, P., Russo, C. Journal of Immunological Methods 1998, 213, 157-167). Postupak se zasniva na sposobnosti održivih ćelija da redukuju resazurin na njegov fluorescentni proizvod resorufin. Za svaku proliferaciju ogledne ćelije su postavljene na ploču od 96 pregrada i ostavljene da se oporave tokom 16 sati pre dodavanja inhibitornih jedinjenja tokom još 72 sata. Na kraju perioda inkubacije 10% (v/v) Alamar Blue se dodaje i inkubira još 6 sati pre određivanja fluorescentnog proizvoda na 535nM ex / 590nM em. U slučaju oglednih ćelija kod kojih nema proliferacije, ćelije se održavaju na izvoru tokom 96 sati pre dodavanja inhibitornih jedinjenja tokom još 72 sata. Broj održivih ćelija se utvrđuje Alamar Blue ogledom kao i prethodno. Ćelijske linije mogu da se dobiju iz ECACC (Evropske zbirke ćelijskih kultura).
[0477] Jedinjenje (1) ima IC50vrednost manju od 0,1 mikromolara naspram HCT116 ćelijske linije.
[0478] Antiproliferativna aktivnost (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon natrijum L-laktata je testirana u ogledima na stotinu ćelijskih linija od strane Oncodesign (Dijon, France). Vrednosti IC50naspram svake ćelijske linije su izneti u tabeli dole i brojke u tabeli se odnose na nanomolarne koncentracije.
Jedinjenja su testirana do koncentracije od 10.000 nanomolara.
[0479] Rezultati pokazuju da (2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon L-laktat ima jaku antiproliferativnu aktivnost protiv širokog spektra različitih ćelijskih linija.
FARMACEUTSKE FORMULACIJE
PRIMER 9
(i) Formulacija tablete
[0480] Supstanca tablete sadrži jedinjenje formule (1) se dobija mešanjem 50 mg jedinjenja sa 197 mg laktoze (BP) kao rastvarača, i 3 mg magnezijum stearata kao sredstva za podmazivanje i kompresovanja da se formira tableta na poznati način.
(ii) Formulacija kapsule
[0481] Formulacija kapsule se dobija mešanjem 100 mg jedinjenja prema formuli (1) ili sa 100 mg laktoze i punjenjem dobijene mešavine u uobičajene neprovidne tvrde želatinaste kapsule.
(iii) Formulacija I koja se ubrizgava
[0482] Parenteralna supstanca za isporuku injekcijom može da se dobije rastvaranjem jedinjenja prema formuli (1) u vodi koja sadrži 10% propilen glikola da se dobije koncentracija aktivnog jedinjenja od 1,5 % za težinu. Rastvor se zatim steriliše filtracijom, puni se u ampulu i zaptiva.
(iv) Formulacija II za ubrizgavanje
[0483] Parenteralna supstanca za ubrizgavanje se dobija rastvaranjem u vodi jedinjenja prema formuli (1) (2 mg/ml) i manitola (50 mg/ml), sterilno filtriranje rastvora i punjenje u 1 ml bočice za lekove koje se zaptivaju ili u ampule.
v) Formulacija III za ubrizgavanje
[0484] Formulacija za i.v. isporuku injekcijom ili infuzijom može da se dobije rastvaranjem jedinjenja prema formuli (1) u vodi na 20 mg/ml. Bočica se zatim zaptiva i steriliše postupkom u autoklavu.
vi) Formulacije IV koje se ubrizgavaju
[0485] Formulacija za i.v. isporuku injekcijom ili infuzijom može da se dobije rastvaranjem jedinjenja prema formuli (1) u vodi koja sadrži pufer (npr.0,2 M acetata pH vrednost 4,6) na 20 mg/ml. Bočica se zatim zaptiva i steriliše postupkom u autoklavu.
(vii) Formulacija za potkožno ubrizgavanje
[0486] Supstanca za potkožnu isporuku se dobija mešanjem jedinjenja prema formuli (1) sa farmaceutskom klasom kukuruznog ulja da se dobije koncentracija od 5 mg/ml. Supstanca se steriliše i puni u odgovarajuću posudu.
viii) Liofilisana formulacija
[0487] Alikvoti formulisanog jedinjenja prema formuli (1) se stavljaju u 50 ml bočice i liofilišu. Tokom liofilizacije, supstance su smrznute korišćenjem jednostepenog protokola smrzavanja na (-45 °C). Temperatura se podiže do -10 °C za žarenje, zatim se spusti do smrzavanja na -45 °C, posle čega sledi primarno sušenje na 25 °C za približno 3.400 minuta, posle čega sledi drugo sušenje sa pojačanim koracima na temperaturi do 50 °C. Pritisak tokom primarnog i sekundarnog sušenja se postavlja na 80 militora.
(ix) 2% formulacija topikalnog gela
% masene koncentracije (w/w) Jedinjenje 2,00
Hidroksipropil metil celuloza (Methocel F4M) 2,50
Polietilenoksid (Polyox WSR -205) 0,25
Propilen glikol 10,00
Metilparaben 0,15
Propilparaben 0,05
Prečišćena voda do 100,00
PRIMER 10
STUDIJE KRISTALNE STRUKTURE
[0488] Jedinjenje prema formuli (1) i njegove soli postoje u jednom broju različitih kristalnih formi. Ove su forme identifikovane i okarakterisane upotrebom postupaka koji su dole opisani.
OPŠTI POSTUPCI
Metodologija strukturne analize rendgenskom difrakcijom jednog kristala
[0489] Kristalografski podaci su prikupljeni na sobnoj temperaturi (20 °C) korišćenjem sinhrotrone radijacije (λ = 0,775 A) sa ESRF ID23.1 svetlosnog snopa opremljenog sa ϕ goniometrom i ADSC Quantum 315 CCD detektorom. Slike su prikupljene u dva ϕ očitavanja sa ϕ=0-180° i Δϕ=1°, jedan sa visokom dozom radijacije i jedan sa niskom dozom radijacije. Detektor na rastojanju kristala je bio 110 mm. Prikupljanje podataka je kontrolisao pomoću ProDC softvera i slike su obrađeme i uvećane u Dtrek softveru.
[0490] Kristalne strukture su rešene korišćenjem direktnih postupaka implementiranih u SHELXS-97 i poboljšane pomoću SHELXL-97. Atomi vodonika su stvoreni na geometijskoj osnovi dok je pozicija heteroatoma vezanog na atome vodonika potvrđena kontrolom Fo-Fc mapa gustine elektrona. Parametri pozicije i toplote atoma vodonika su ograničeni na spajanje na odgovarajuće nevodonične atome. Kretanje nevodoničnih atoma usled toplote je modelirano anizotropnim toplotnim faktorima
Metodologija difrakcije praha
[0491] Uzorci za prikupljanje podataka za rendgensku difrakciju praha (XRPD) su pažljivo brušeni pomoću mermernog maltera i napunjeni u kristalografski kapilar (od Hampton Research, od kvarca ili stakla, tip 10, 0,4 ili 0,7 mm prečnik). Difrakcioni modeli su prikupljeni na sobnoj temperaturi korišćenjem CuKα radijacije (λ = 1,5418 A) sa rotirajuće anode Rigaku RU3HR, Osmic blue konfokalna optika, 1⁄4 c goniometar i Rigaku HTC pločasti detektor sa prikazom slike.2D slike su prikupljene tokom obrtanja ϕ ose sa detektorom do rastojanja kristala od 250 mm. Prikupljanje podataka je bilo kontrolisano pomoću CrystalClear softvera i 2D slike su pretvorene u 1D grafikon (2θ naspram Intensity) pomoću Datasqueeze (srednja vrednost intenziteta izračunata u odnosu na ugao azimuta 0<χ<360° za 2θ opseg 3-30° u koracima od 0,02°). Interni program AstexXRPD je korišćen za manipulaciju i vizualizaciju 1D XRPD modela.
Određivanje stehiometrije soli eksperimentima sa titracijom
[0492] U sledećim primerima, gde se oni odnose na soli i daje se stehiometrija soli, stehiometrija je utvrđena korišćenjem sledećeg postupka titracije.
[0493] Rastvor (KCl/HCl rastvor) 150 mM KCI-a i 20 mM HCl-a je sveže pripremljen za svaku grupu eksperimenata titracije. Alikvot 1 ml ovog rastvora je titrovan i dobijena potenciometrijska krivulja titracije je korišćena kao kontrolna krivulja. Sve titracije su izvedene na 25°C i sa 300 mM KOH u 2 µl koraka korišćenjem Mettler Toledo MP220 merača pH vrednosti. Očitavanja potencijala elektrode za 4 standardna puferska sredstva su zabeležena pre i posle dnevnog merenja grupe. Uzorci soli Jedinjenja (1) od (1-3 mg) su rastvoreni u 1 ml of KCl/HCl rastvora i titrovani energičnim mešanjem korišćenjem malog magnetskog mešača. Izmereni potecijali elektrode su pretvoreni u pH vrednosti korišćenjem krivulje za kalibraciju sa 4 standardna pufera. Podaci o uzorku i kontrolnoj titraciji su obrađeni da bi se dobio Bjerumov grafikon u opsegu pH vrednosti 2-12. Postupak proračuna i analize Bjerumovog grafikona se opisuje u časopisu "Physicochemical Profiling (Solubility, Permeability and Charge State)", A. Avdeef (Current Topics in Medicinal Chemistry 2001, p277-351).
[0494] Stehiometrija soli Jedinjenja (1) je oduzeta od početne nH vrednosti (broj protona na pH=2), (t.j. slobodna baza počinje sa -2 protona, mono-so sa -1 protona (Jedinjenje (1)<+>kiselina-)), dok dvostruke soli (Jedinjenje (1)<2+>kiselina<2->ili Jedinjenje (1)<2+>2* kiselina-) počinje na nH=0.
10A. Slobodna baza, forme soli (uporedni primer)
(A-i) slobodna baza, kristalna forma FB1
[0495] Zasićeni rastvor Jedinjenja (1) u 1-butanolu je pripremljen na sobnoj temperaturi. Sporo taloženje sa oko 4x zapremine di(izopropil) etra je dalo kristalnu formu FB1. Analiza XRPD (rendgenskom difrakcijom praha) svežeg uzorka je dala model prikazan na Slici 1 i glavne maksimalne vrednosti prikazane u Tabeli 1 dole. Posle sušenja na vazduhu tokom tri dana, dobijen je novi model XRPD (rendgenska difrakcija praha) koji je pokazao da se kristalna forma FB1 potpuno konvertovala u kristalnu formu FB3.
Tabela 1 Glavne maksimalne vrednosti rendgenske difrakcije praha (XRPD) za Jedinjenje (1) forma FB1.
(A-ii) slobodna baza, kristalna forma FB2
[0496] Zasićeni rastvor Jedinjenja (1) u THF je pripremljen na sobnoj temperaturi. Sporo taloženje sa oko 4x zapremine izopropil acetata daje kristalnu formu FB2. model XRPD svežeg uzorka forme FB2 je prikazan na Slici 2 i glavne maksimalne vrednosti u modelu rendgenske difrakcije praha (XRPD) su navedene u Tabeli 2 dole. Uzorak je sušen na vazduhu tokom tri dana posle čega je novi model XRPD dobijen: ovo je pokazalo da se kristalna forma FB2 potpuno promenila u kristalnu formu FB3.
Tabela 2. Glavne maksimalne vrednosti rendgenske difrakcije praha (XRPD) za Jedinjenje (1) kristalna forma FB2.
(A-iii) slobodna baza, kristalna forma FB3
[0497] Kristalna forma FB3 je dobijena iz formi FB1 i FB2 kao što je gore opisano ili isparavanjem rastvora slobodne baze. Model XRPD za kristalnu formu FB3 je prikazan na Slici 3 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 3 dole. Kristalna forma FB3 se pokazala stabilnom na vazduhu i na 40°C i 75 % relativne vlažnosti tokom najmanje mesec dana.
Tabela 3. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) kristalna forma FB3
(A-iv) slobodna baza, kristalna forma FB4
[0498] Kristalna forma FB4 je posmatrana u eksperimentima sa taloženjem rastvora etanola Jedinjenja (1). Analiza rendgenske kristalografije jednog kristala je pokazala da je kristalna forma dihidrat. Zasićeni rastvor Jedinjenja (1) u etanolu je pripremljen na sobnoj temperaturi. Sporo taloženje sa približno 4x zapremine izopropil etra dalo je kristalnu formu FB4 koja se pokazala stabilnom na vazduhu. Model XRPD forme FB4 je prikazan na Slici 4 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 4 dole. Dijagram pakovanja kristala i koordinate atoma su na Slici 5 i Tabeli 5.
Tabela 4. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) kristalna forma FB4
Tabela 5. Parametri i koordinate jedinične ćelije u cif formatu za kristalnu strukturu Jedinjenja (1) kristalna forma FB4.
Prostorna grupa P42/n
jedinična ćelija na 293K sa a, b i c sa 5% s.u.:
a=b=28.2
c=6.0
alfa=beta=gama=90
Koordinate u cif formatu:
loop_
_atom_site_label
_atom_site_type_symbol
_atom_site_fract_x
_atom_site_fract_y
_atom_site_fract_z
_atom_site_U_iso_or_equiv
_atom_site_adp_type
_atom_site_occupancy
_atom_site_symmetry_multiplicity
_atom_site_calc_flag
_atom_site_refinement_flags
_atom_site_disorder_assembly
_atom_site_disorder_group
C1 C 0.60531(14) 0.59657(13) 0.3978(7) 0.0816(11) Uani 11 d ...
H1A H 0.63900.59590.36410.098 Uiso 11 calc ...
H1B H 0.60000.61750.52370.098 Uiso 11 calc ...
N2 N 0.58709(11) 0.54841(11) 0.4433(6) 0.0845(10) Uani 11 d ...
C3 C 0.55080(14) 0.53422(15) 0.2788(8) 0.0924(13) Uani 11 d ...
H3A H 0.52070.52750.35050.111 Uiso 11 calc ...
H3B H 0.56080.50650.19550.111 Uiso 11 calc ...
C4 C 0.54727(14) 0.57663(14) 0.1322(7) 0.0838(11) Uani 11 d ...
C5 C 0.57724(14) 0.61201(14) 0.2011(7) 0.0801(11) Uani 11 d ...
C6 C 0.51860 (15) 0.58333(16) -0.0535(8) 0.0921(13) Uani 11 d ...
H6 H 0.49850.5592 -0.10070.111 Uiso 11 calc ...
C7 C 0.52000(15) 0.62568(18) -0.1672(8) 0.0926(13) Uani 11 d ...
C8 C 0.54951(17) 0.66174(16) -0.0895(8) 0.0966(13) Uani 11 d ...
H8 H 0.54970.6908 -0.16250.116 Uiso 11 calc ...
C9 C 0.57843(16) 0.65525(16) 0.0930(8) 0.0935(13) Uani 11 d ...
(nastavak)
H9 H 0.59830.67940.14230.112 Uiso 11 calc ...
C10 C 0.49149(17) 0.63467(19) -0.3746(8) 0.1025(14) Uani 11 d ... H10A H 0.51200.6491 -0.48530.123 Uiso 11 calc ...
H10B H 0.48080.6045 -0.43360.123 Uiso 11 calc ...
N11 N 0.44995(12) 0.66545(12) -0.3408(6) 0.0847(10) Uani 11 d ... C12 C 0.41355(16) 0.64016(16) -0.2169(7) 0.0928(12) Uani 11 d ... H12A H 0.42570.6319 -0.07080.111 Uiso 11 calc ...
H12B H 0.40560.6110 -0.29410.111 Uiso 11 calc ...
C13 C 0.36951(16) 0.67000(18) -0.1912(8) 0.1005(14) Uani 11 d ... H13A H 0.34580.6524 -0.10810.121 Uiso 11 calc ...
H13B H 0.37710.6985 -0.10800.121 Uiso 11 calc ...
N14 N 0.35044(13) 0.68296(14) -0.4066(6) 0.0961(11) Uani 11 d ... C15 C 0.38701(19) 0.70846(17) -0.5299(7) 0.1001(14) Uani 11 d ... H15A H 0.39530.7373 -0.45090.120 Uiso 11 calc ...
H15B H 0.37490.7173 -0.67530.120 Uiso 11 calc ...
C16 C 0.43006(17) 0.67828(18) -0.5565(7) 0.0987(14) Uani 11 d ... H16A H 0.42180.6497 -0.63760.118 Uiso 11 calc ...
H16B H 0.45370.6954 -0.64250.118 Uiso 11 calc ...
C17 C 0.3076(2) 0.7126(2) -0.3808(11) 0.137(2) Uani 11d ...
H17A H 0.28360.6950 -0.30290.206 Uiso 11 calc ...
H17B H 0.29590.7215 -0.52500.206 Uiso 11 calc ...
H17C H 0.31540.7407 -0.29780.206 Uiso 11 calc ...
C18 C 0.59855(15) 0.51789(15) 0.6047(8) 0.0896(12) Uani 11 d ... 0190 0.57503(11) 0.47935(11) 0.6072(6) 0.1109(11) Uani 11 d ... C20 C 0.63596(13) 0.52545(13) 0.7750(7) 0.0818(11) Uani 11 d ... C21 C 0.64335(16) 0.48917(15) 0.9312(8) 0.0920(13) Uani 11 d ... C22 C 0.67703(18) 0.49413(16) 1.0959(8) 0.0986(14) Uani 11 d ... H22 H 0.68110.47011.20020.118 Uiso 11 calc ...
C23 C 0.70497(16) 0.53453(15) 1.1082(8) 0.0907(12) Uani 11 d ... C24 C 0.70021(15) 0.57066(15) 0.9542(8) 0.0877(12) Uani 11 d . B .. C25 C 0.66614(15) 0.56535(14) 0.7956(8) 0.0889(12) Uani 11 d ... H25 H 0.66240.58980.69290.107 Uiso 11 calc ...
0260 0.61807(14) 0.44835(11) 0.9277(7) 0.1192(12) Uani 11 d ... H26 H 0.59620.45080.83830.179 Uiso 11 calc R ..
027 O 0.73840(13) 0.53982(12) 1.2687(6) 0.1135(11) Uani 11 d ... H27 H 0.74030.51531.34180.170 Uiso 11 calc R ..
C28 C 0.73311(18) 0.61386(17) 0.9614(10) 0.1084(16) Uani 11 d ... H28 H 0.76460.60171.00090.130 Uiso 11 calc . A 1
C29 C 0.7389(2) 0.6388(2) 0.7301(12) 0.107(3) Uani 0.775 (12) 1 d P B 1 H29A H 0.76000.66540.74480.160 Uiso 0.781 calc P B 1
H29B H 0.70850.64970.67900.160 Uiso 0.781 calc P B 1
H29C H 0.75180.61670.62460.160 Uiso 0.781 calc P B 1
C30 C 0.7207(3) 0.6487(3) 1.1347(14) 0.120(3) Uani 0.775 (12) 1 d P B 1 H30A H 0.74340.67411.13320.180 Uiso 0.781 calc P B 1
H30B H 0.72110.63361.27780.180 Uiso 0.781 calc P B 1
H30C H 0.68960.66121.10600.180 Uiso 0.781 calc P B 1
(nastavak)
C29 C 0.6972(10) 0.6587(7) 0.927(11) 0.22(3) Uani 0.225(12) 1 d P B 2
C30 C 0.7740(7) 0.6111(12) 0.913(5) 0.147(13) Uani 0.225(12) 1 d P B 2
O1W O 0.75198(14) 0.46640(15) 1.5369(7) 0.1195(12) Uani 11 d D ...
H1W1 H 0.7317(14) 0.4461(18) 1.565(11) 0.16(3) Uiso 11 d D ..
H2W1 H 0.77500.46001.62000.220 Uiso 11 d D ..
O2W O 0.31342(14) 0.60501(17) 0.3540(9) 0.1423(15) Uani 11 d D ..
H1W2 H 0.337(2) 0.595(3) 0.285(14) 0.220 Uiso 11 d D ..
H2W2 H 0.324(3) 0.629(2) 0.424(13) 0.220 Uiso 11 d D ..
(A-v) slobodna baza, kristalna forma FB5
[0499] Forma FB5 je nestabilna forma koja je zapažena samo u eksperimentima kristalizacije koji obuhvataju rastvore izopropanola Jedinjenja (1). Forma FB5 transformiše FB6 na vazduhu. Bez namere da se vežemo za bilo koju teoriju, veruje se da je FB5 solvat izopropanola.
[0500] Forma FB5 je formirana pripremom zasićenog rastvora Jedinjenja (1) u izopropanolu na sobnoj temperaturi posle čega je usledilo sporo taloženje sa približno 4 zapremine izopropil acetata. Model XRPD svežeg uzorka je prikazan na Slici 6 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 6 dole. Uzorak FB5 je osušen na vazduhu tokom 2 dana posle čega je analiza rendgenskom difrakcijom praha (XRPD) pokazala pretvaranje u formu FB6.
Tabela 6. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1)
FB5
(A-vi) slobodna baza, kristalna forma FB6
[0501] Forma FB6 je zapažena samo kao proizvod starenja forme FB5. Forma FB6 je stabilna na vazduhu. Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) uzorka forme FB6 koji je napravljen tako što je ostavljena forma FB5 da se suši tokom 2 dana na vazduhu je prikazan na Slici 7. Spisak glavnih maksimalnih vrednosti je iznet u Tabeli 7 dole.
Tabela 7. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) forma FB6.
10B. Jedinjenje (1) hidrohlorid 1:2 so, kristalne forme (uporedni primer)
(B-i) Jedinjenje (1) hidrohlorid - forma FH1
[0502] EtOAc/HCl je dodato u 2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon i zatim MeOH sve dok nije formiran rastvor. Rastvarač je isparivan i ponovo isparivan sa toluenom a zatim sa MeOH sve do suvoće, da bi se dobio prinos 2,4-dihidroksi-5-izopropil-fenil)-[5-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-1,3-dihidro-izoindol-2-il]-metanon kao so dihidrohlorida (di-HCl). Ova forma je veoma higroskopska i rastvara se na vazdušnoj vlazi. Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) je prikazan na Slici 8 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 8 dole.
Tabela 8. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) hidrohlorid forma FH1.
(B-ii) jedinjenje (1) hidrohlorid - forma FH2
[0503] Forma FH2 je posmatrana u eksperimentima taloženja sa DMSO ili DMF rastvorima forme FH1. Ova se forma transformiše na vazduhu u formu FH3. Zasićeni rastvor forme FH1 (B-i) u DMF je pripremljen na sobnoj temperaturi. Sporo taloženje sa oko 4 zapremine acetona je dalo formu FH2. Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) svežeg uzorka forme FH2 je prikazan na Slici 9 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 9 dole. Uzorak forme FH2 je osušen na vazduhu tokom 2 dana posle čega je analiza sa XRPD (rendgenska difrakcija praha) pokazala da je došlo do pretvaranja u formu FH3.
Tabela 9. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) hidrohlorida, forma FH2
(B-iii) jedinjenje (1) hidrohlorid - forma FH3
[0504] Forma FH3 je posmatrana u eksperimentima taloženja sa etanolom ili izopropanol rastvorima forme FH1 kao i u razgradnji forme FH2. Forma FH3 je stabilna na vazduhu i na 40°C i 75 % na sobnoj temperaturi tokom najmanje mesec dana. Priprema forme FH3 se opisuje u Primeru 3 gore. Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) za formu FH3 je prikazan na Slici 10 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 10 dole.
Tabela 10. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) hidrohloridna forma FH3
(B-iv) jedinjenje (1) hidrohlorid - forma FH4
[0505] Forma FH4 je zapažena samo u jednom eksperimentu taloženja (DMF/dioksan). Ova forma je nestabilna i rastavlja se na vazduhu. Zasićeni rastvor forme FH1 u DMF je pripremljen na sobnoj temperaturi. Sporo taloženje sa oko 4 zapremine 1,4-dioksana je dalo formu FH4. Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) svežeg uzorka FH4 je prikazan na Slici 11 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 11 dole. Uzorak se rastavlja na vazduhu.
Tabela 11. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) hidrohlorid -forma FH4
(B-v) Jedinjenje (1) hidrohlorid - forma FH5
[0506] Forma Fh5 je zapažena samo u jednom eksperimentu taloženja (metanol/aceton). Ova forma je nestabilna i rastvara se na vlažnom vazduhu. Zasićeni rastvor forme FH1 u metanolu je pripremljen na sobnoj temperaturi. Sporo taloženje sa oko 4 zapremine acetona je dalo formu FH5. Model XRPD svežeg uzorka FH5 je prikazan na Slici 12 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 12 dole. Uzorak se rastavlja na vazduhu.
Tabela 12. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) hidrohlorid -forma FH5
10C. Jedinjenje (1) L-laktat 1:1 kristalne forme soli
(C-i) jedinjenje (1) L-laktat - forma FL1
[0507] Natrijum L-laktat, forma FL1, je pripremljen kako je opisano u Primeru 2 gore.
[0508] Forma FL1 je stabilna na vazduhu i na 40°C i 75 % relativne vlažnost tokom najmanje mesec dana. Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) za formu FL1 je prikazan na Slici 13 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 13 dole.
Tabela 13. Glavne maksimalne vrednosti rendgenske difrakcije praha (XRPD) za Jedinjenje (1)
Laktat -forma FL1
(C-ii) Jedinjenje (1) L-laktat - forma FL2
[0509] Kristalna forma FL2 je zapažena u eksperimentima sa taloženjem rastvora etanola forme FL1. Analiza rendgenske kristalografije jednog kristala je pokazala da je forma FL2 hidratisana. To je u načelu trihidrat zato što ima 3 pozicije kristalne vode u asimetričnoj jedinici, ali nisu 100 % zauzete na sobnoj temperaturi i laboratorijskoj vlažnosti. Zasićeni rastvor forme FL1 u metanolu : voda 9:1 je pripremljen na sobnoj temperaturi. Sporo taloženje sa približno 4 zapremine acetona je dalo formu FL2 koja je stabilna na vazduhu. Model XRPD (rendgenska difrakcija praha) za formu FL2 je prikazan na Slici 14 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 14 dole. Dijagram pakovanja kristala se prikazuje na Slici 15 i koordinate atoma su navedene u Tabeli 15 dole.
Tabela 14. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) natrijum laktata -forma FL2
Tabela 15. Parametri i koordinate jedinične ćelije u cif formatu za kristalnu strukturu Jedinjenja (1) natrijum laktata - forma FL2.
prostorna grupa: P2,
jedinična ćelija na 293K sa a, b , c i sa 5% s.u.:
a=5,8
b=16,6
c=14,9
beta=98
alfa=gama=90
Koordinate u cif formatu:
loop_
_atom_site_label
_atom_site_type_symbol
_atom_site_fract_x
_atom_site_fract_y
_atom_site_fract_z
_atom_site_U_iso_or_equiv
_atom_site_adp_type
_atom_site_occupancy
_atom_site_symmetry_multiplicity
_atom_site_calc_flag
_atom_site_refinement_flags
_atom_site_disorder_assembly
_atom_site_disorder_group
C1 C -0.643 (2) 1.1037 (6) 0.6763 (7) 0.097 (3) Uani 11 d ... H1A H -0.69951.05770.63950.117 Uiso 11 calc ...
H1B H -0.52311.13080.64840.117 Uiso 11 calc ...
N2 N -0.5563(16) 1.0791 (5) 0.7694(6) 0.096(2) Uani 11 d ... C3 C -0.692(3) 1.1148(8) 0.8352(8) 0.124(4) Uani 11 d ...
H3A H -0.77131.07340.86510.148 Uiso 11 calc ...
H3B H -0.59251.14540.88050.148 Uiso 11 calc ...
C4 C -0.8553 (19) 1.1667 (7) 0.7825 (7) 0.094 (3) Uani 11 d ... C5 C -0.8393(19) 1.1609(6) 0.6900(7) 0.092(3) Uani 11 d ... C6 C -1.036(3) 1.2141(8) 0.8083(8) 0.110(3) Uani 11 d ...
H6 H -1.06361.21390.86820.132 Uiso 11 calc ...
C7 C -1.172 (2) 1.2611 (8) 0.7456 (8) 0.105 (3) Uani 11 d ... C8 C -1.145 (2) 1.2560 (8) 0.6564 (9) 0.111 (3) Uani 11 d ... H8 H -1.23871.28670.61380.133 Uiso 11 calc ...
C9 C -0.979(2) 1.2053(9) 0.6287(7) 0.109(3) Uani 11 d ...
H9 H -0.96401.20170.56770.130 Uiso 11 calc ...
C10 C -1.3561(18) 1.3173(8) 0.7739 (9) 0.106(3) Uani 11 d ... H10A H -1.44551.34020.72020.127 Uiso 11 calc ...
H10B H -1.46171.28640.80550.127 Uiso 11 calc ...
N11 N -1.2550(14) 1.3836(6) 0.8332(6) 0.096(2) Uani 11 d ... C12 C -1.1136 (17) 1.4353 (6) 0.7839 (7) 0.091 (3) Uani 11 d ... H12A H -1.20981.45910.73240.109 Uiso 11 calc ...
H12B H -0.99351.40350.76150.109 Uiso 11 calc ...
C13 C -1.0015 (17) 1.5021 (7) 0.8462 (8) 0.100 (3) Uani 11 d ... H13A H -0.89911.47830.89610.121 Uiso 11 calc ...
H13B H -0.90921.53680.81280.121 Uiso 11 calc ...
N14 N -1.1853(15) 1.5509(5) 0.8822(6) 0.094(2) Uani 11 d ... H14 H -1.27411.57550.83520.113 Uiso 11 calc ...
C15 C -1.3350(18) 1.4966(7) 0.9279(7) 0.095(3) Uani 11 d ... H15A H -1.45991.52760.94790.114 Uiso 11 calc ...
H15B H -1.24411.47300.98080.114 Uiso 11 calc ...
C16 C -1.4358(17) 1.4308(7) 0.8658(8) 0.098(3) Uani 11 d ... H16A H -1.53101.39590.89770.117 Uiso 11 calc ...
H16B H -1.53461.45420.81480.117 Uiso 11 calc ...
C17 C -1.068(2) 1.6140(9) 0.9439(9) 0.119(4) Uani 11 d ...
H17A H -1.18351.64470.96940.178 Uiso 11 calc ...
H17B H -0.98071.64920.91030.178 Uiso 11 calc ...
H17C H -0.96581.58860.99160.178 Uiso 11 calc ...
C18 C -0.382(2) 1.0287(9) 0.7999(8) 0.113(4) Uani 11 d ...
0190 -0.345(2) 1.0216(8) 0.8837(6) 0.156(4) Uani 11 d ...
C20 C -0.228(2) 0.9847(6) 0.7418(7) 0.096(3) Uani 11 d ...
C21 C -0.069(3) 0.9286(9) 0.7863(9) 0.119(4) Uani 11 d ...
C22 C 0.064(2) 0.8867(9) 0.7367(9) 0.114(4) Uani 11 d ...
H22 H 0.18120.85470.76690.137 Uiso 11 calc ...
C23 C 0.038(2) 0.8879(7) 0.6447(8) 0.097(3) Uani 11 d ...
C24 C -0.1201(18) 0.9425(7) 0.5972(8) 0.096(3) Uani 11 d . B . C25 C -0.253(2) 0.9882(7) 0.6463(8) 0.100(3) Uani 11 d ...
H25 H -0.36321.02280.61600.120 Uiso 11 calc ...
0260 -0.036(2) 0.9229(9) 0.8775(6) 0.169(5) Uani 11 d ...
H26 H -0.14270.94560.89800.253 Uiso 11 calc R ..
O27 O 0.1658(15) 0.8404(5) 0.5948(6) 0.118(3) Uani 11 d ...
H27 H 0.20910.79990.62380.176 Uiso 11 calc R ..
C28 C -0.141(4) 0.9478(11) 0.4948(10) 0.138(6) Uani 11 d ... H28 H -0.08940.89530.47500.166 Uiso 11 calc . A 1
C29 C -0.029(11) 1.004(4) 0.449(3) 0.24(3) Uani 0.58(6) 1 d P B 1 H29A H -0.07410.99760.38470.363 Uiso 0.581 calc P B 1 H29B H 0.13610.99720.46280.363 Uiso 0.581 calc P B 1
H29C H -0.07031.05750.46620.363 Uiso 0.581 calc P B 1
C30 C -0.417(7) 0.950(3) 0.4621(19) 0.159(19) Uani 0.58(6) 1 d P B 1
H30A H -0.49110.90830.49180.239 Uiso 0.581 calc P B 1
H30B H -0.44620.94240.39780.239 Uiso 0.581 calc P B 1
H30C H -0.47731.00160.47720.239 Uiso 0.581 calc P B 1
C29 C -0.156(11) 1.040(2) 0.465(2) 0.14(2) Uani 0.42(6) 1 d P B 2
H29D H -0.00711.06550.48140.215 Uiso 0.421 calc P B 2
H29E H -0.27031.06750.49430.215 Uiso 0.421 calc P B 2
H29F H -0.19831.04380.40030.215 Uiso 0.421 calc P B 2
C30 C -0.295(12) 0.897(4) 0.446(2) 0.150(19) Uani 0.42(6) 1 d P B 2
H30D H -0.34030.91850.38700.224 Uiso 0.421 calc P B 2
H30E H -0.43000.89100.47660.224 Uiso 0.421 calc P B 2
H30F H -0.22340.84510.44180.224 Uiso 0.421 calc P B 2
O1L O -1.5549(12) 1.6174(6) 0.7786(6) 0.124(3) Uani 11 d ...
O2L O -1.7419(12) 1.7087(6) 0.6890(7) 0.125(3) Uani 11 d ...
C1L C -1.5569(17) 1.6742(7) 0.7238(8) 0.098(3) Uani 11 d ...
C2L C -1.3365(17) 1.6989(8) 0.6926(9) 0.108(4) Uani 11 d ...
H2L H -1.30651.75490.71170.129 Uiso 11 calc ...
C3L C -1.355(2) 1.6971(12) 0.5917(11) 0.143(5) Uani 11 d ...
H3L1 H -1.21301.71620.57340.214 Uiso 11 calc ...
H3L2 H -1.48131.73120.56620.214 Uiso 11 calc ...
H3L3 H -1.38421.64290.57060.214 Uiso 11 calc ...
O3L O -1.1538(13) 1.6538(7) 0.7316(8) 0.150(4) Uani 11 d ...
H3L H -1.02431.67110.71910.224 Uiso 11 d ...
O1W O -0.448(6) 1.237(6) 1.045(2) 0.45(5) Uani 0.78(6) 1 d P ..
O2W O 0.021(15) 0.8037(17) 0.9990(19) 0.74(7) Uani 11 d ...
O3W O -0.35(3) 0.773(9) 0.953(15) 0.77(8) Uani 0.22(6) 1 d P ..
(C-iii) jedinjenje (1) L-laktat - forma FL3
[0510] Forma FL3 je primećena u eksperimentima taloženja THF rastvora forme FL1. Forma FL3 se transformiše na vazduhu u formu FL1. Zasićeni rastvor forme FL1 u THF je pripremljen na sobnoj temperaturi. Sporo taloženje sa oko 4 zapremine heptana je dalo formu FL3. Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) svežeg uzorka forme FL3 je prikazan na Slici 16 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 16 dole. Uzorak FL3 je osušen na vazduhu tokom 2 dana posle čega je analiza XRPD (rendgenskom difrakcijom praha) pokazala da je došlo do pretvaranja u formu FL1.
Tabela 16. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) natrijum laktat -forma FL3
10D. Jedinjenje (1) sulfat 1:1 so, kristalne forme (uporedni primer)
(D-i) Jedinjenje (1) sulfat - forma FS1
[0511] Forma FS1 je primećena u eksperimentima kristalizacije uključujući acetonitril kao tečnost u taložniku. Nestabilna je na vazduhu i transformiše se u formu FS3. Zasićeni rastvor 1:1 soli Jedinjenja (1) (pripremljen rastvaranjem Jedinjenja (1) u H2SO4i isparavanjem do suvoće) u vodi je pripremljen na sobnoj temperaturi. Sporo taloženje sa oko 4 zapremine acetonitrila je dalo formu FS1. Model XRPD (rendgenska difrakcija praha) za formu FS1 je prikazan na Slici 17 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 17 dole.
Tabela 17. Glavne maksimalne vrednosti rendgenske difrakcije praha (XRPD) za Jedinjenje (1) sulfat - forma FS1
Jedinjenje (1) sulfat - forma FS2
[0512] Forma FS2 je nestabilna na vazduhu i transformiše se u formu FS5. Čuvana je na 40 °C i 75% relativne vlažnosti, forma FS2 se transformiše u formu FS4. Jedinjenje (1) je rastvoreno u 1 mol ekvivalenta koncentrovane H2SO4, talog je formiran sa oko 4 zapremine acetonitrila i kristalna masa koja je formirana je filtrirana. Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) za FS2 je prikazan na na Slici 18 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 18.
Tabela 18. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) sulfat - forma FS2
Jedinjenje (1) sulfat - forma FS3
[0513] Forma FS3 je stabilna forma koja je primećena kao proizvod forme FS1 posle starenja na vazduhu i transformacije forme FS6 u toploj i vlažnoj okolini (40°C, 75% relativna vlažnost). Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) uzorka forme FS3 koji je napravljen tako što je ostavljena forma FS1 da se suši tokom 2 dana na vazduhu kako je prikazano na Slici 19 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 19.
Tabela 19. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) sulfat - forma FS3
Jedinjenje (1) sulfat - forma FS4
[0514] Forma FS4 je stabilna forma koja je primećena kao proizvod transformacije forme FS2 u toploj i vlažnoj okolini (40°C, 75% relativna vlažnost). Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) uzorka forme FS4 koji je napravljen tako što je inkubirana forma FS2 na nekoliko nedelja na 40°C i 75% sobne temperature je prikazan na Slici 20 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 20.
Tabela 20. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) sulfat - forma FS4
Jedinjenje (1) sulfat - forma FS5
[0515] Forma FS5 je stabilna forma koja je primećena kao proizvod starenja forme FS2 na vazduhu i transformacije forme FS4 u suvoj okolini (20°C, 11% relativna vlažnost). Model XRPD uzorka forme FS5 koji je pripremljen tako što je ostavljena forma FS2 da se suši tokom 2 dana na vazduhu kako je prikazano na Slici 21 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 21.
Tabela 21. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za jedinjenje (1) sulfat - forma FS5
Jedinjenje (1) sulfat - forma FS6
[0516] Forma FS6 je identifikovana u jednom broju različitih eksperimenata kristalizacije tokom skeniranja forme. Stabilna je na vazduhu, i u toploj i vlažnoj okolini (40°C, 75% sobne temperature), transformiše se u formu FS3.
[0517] Zasićeni rastvor 1:1 soli sulfata Jedinjenja (1) (pripremljen rastvaranjem Jedinjenja (1) u H2SO4i isparavanjem do suvoće) u DMF-u je pripremljen na sobnoj temperaturi. Sporo taloženje sa oko 4 zapremine acetonitrila je dalo formu FS6. Model XRPD (rendgenske difrakcije praha) za FS6 je prikazan na Slici 22 i glavne maksimalne vrednosti su navedene u Tabeli 22.
Tabela 22. Glavne maksimalne vrednosti XRPD (rendgenske difrakcije praha) za Jedinjenje (1) sulfat - forma FS6
PRIMER 11
Određivanje antigljivične aktivnosti
[0518] Antigljivična aktivnost jedinjenja prema formuli (I) se određuje korišćenjem sledećeg protokola.
[0519] Jedinjenja su testirana protiv palete gljiva uključujući Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Candida albicans-ATCC 36082 i Cryptococcus neoformans. Testirani organizmi su održavani na kosom dekstroznom agaru Sabourahd (Saburad) na 4 °C. Singlet suspenzije svakog organizma se pripremaju rastom kvasca tokom noći na 27 °C na rotirajućem bubnju u podlozi kulture na kvasac-azot bazi (YNB) sa amino kiselinama (Difco, Detroit, Mich.), pH vrednost 7,0 sa 0,05 morfolin propansulfonskoj kiselini (MOPS). Suspenzija se zatim centrifugira i ispira dva puta sa 0,85% NaCl pre obrade zvukom isprane suspenzije ćelija na 4 sekunde (Branson Sonifier, model 350, Danbury, Conn.). Singlet blastopore se prebrojavaju u hemocitomerač i podešavaju na željenu koncentraciju u 0,85% NaCl-a.
[0520] Aktivnost testiranih jedinjenja se određuje korišćenjem modifikacije tehnike za mikrorazređivanje podloge kulture. Testirana jedinjenja su razređena u DMSO do 1,0 mg/ml odnosa zatim su razređena do 64 µg/ml u podlozi kulture na kvasac-azot bazi (YNB), pH vrednost 7,0 sa MOPS (Fluconazole je korišćen kao kontrola) da se dobije radni rastvor svakog jedinjenja. Korišćenjem ploče sa 96 pregrada, pregrade 1 i 3 do 12 se pripremaju sa podlogom kulture na kvasac-azot bazi (YNB), desetostruko razređivanje rastvora jedinjenja se radi u pregradama 2 do 11 (opsezi koncentracija su 64 do 0,125 µg/ml). Pregrada 1 služi kao kontrola sterilnosti i prazna za spektrofotometrijske oglede. Pregrada 12 služi kao kontrola rasta. Mikrotitrovane ploče se inokulišu sa 10 µl u svakoj pregradi 2 do 11 (krajnja veličina inokuluma je 10<4>organizama/ml). Inokulisane ploče se inkubiraju tokom 48 sati na 35 °C. MIC vrednosti se određuju spektrofotometrijski merenjem apsorpcije na 420 nm (Automatic Microplate Reader, DuPont Instruments, Wilmington, Del.) posle mućkanja ploča tokom 2 minuta vrtložnim mikserom (Vorte-Genie 2 Mixer, Scientific Industries, Inc., Bolemia, N.Y.). Krajnja tačka MIC se definiše kao najniža koncentracija leka koja ispoljava oko 50% (ili više) smanjenje rasta u poređenju sa kontrolnom pregradom. Kod ogleda zamućenosti ovo se definiše kao najniža koncentracija leka na kojoj zamućenost u pregradi jeste <50% od kontrolnog uzorka (IC50). Minimalne citolitičke koncentracije (MCC) se određuju pomoću subkultura svih pregrada iz ploče sa 96 pregrada na ploči dekstroznog agara Sabourahd (SDA), inkubiranjem tokom 1 do 2 dana na 35 °C zatim proverom održivosti.
EXAMPLE 12
Postupci testiranja aktivnosti za smanjenje bola ili sprečavanje bola
(I) Ispitivanje upalne hiperalgezije
[0521] Mehanička hiperalgezija može da se ispituje na modelu pacova sa upalnim bolom. Granice povlačenja šape na povećani stimulans pritiska su izmerene tehnikom Randal-Sellito korišćenjem analgesimetar (Ugo Basile, Milan), kod prirodnih životinja pre intraplantarnog ubrizgavanja potpunog Frojndovog kompletnog pomoćnog lekovitog sredstva (FCA) u levu šapu pozadi.24 sata kasnije granice povlačenja šape su izmerene ponovo pre (predoziranja) i zatim od 10 minuta do 6 sati posle administriranja leka ili pomoćnog sredstva. Reverzna hiperalgezija u ipsilateralnoj šapi se izračunava prema formuli:
% reversal - % reverzne Predose treshold – gran. vredn. pre doze; postdose treshold – gran. vredn. posle doze; naive treshold – gran. vredn. kod prirodn.
(ii) Ispitivanje neuropatske hiperalgezije
[0522] Mehanička hiperalgezija može da se ispita na modelu pacova sa neuropatskim bolom izazvanim delimičnom ligacijom levog išijadnog nerva. Približno 14 dana posle operacije pragovi mehaničkog povlačenja i ligovanog (ispilateralnog) i neligovane (kontralateralne) šape se mere pre (predoze) i zatim od 10 minuta do 6 sati posle isporuke leka ili pomoćnog sredstva. Reverzna hiperalgezija u svakoj vremenskoj tački se izračunava prema formuli: Ipsilatralne gran.vredn.pre doze - ipsilatralne gran. vredn. posle doze % reverzne
kontraletarne gan.vredn.kod prirodn.- Ipsilatralne gran. vredn. pre doze
[0523] Svi eksperimenti se izvode korišćenjem grupa od 6 životinja. Koncentracije zaliha lekova se rastvaraju u destilovanoj vodi i naknadna rastvaranja su urađena u 0,9 % slanog rastvora za potkožnu isporuku u zapremini od 4 mlkg<-1>. Svi lekovi se prave u plastičnim bočicama i čuvaju na mračnom mestu.
[0524] Statističke analize se rade po povlačenju graničnih očitavanja (g) korišćenjem ANOVA sa ponovljenim merama iza kojih sledi Tukijev test Zaista značajne različitosti (Tukey's HSD). Efikasnost se odnosi na maksimalni preokret hiperalgezije zapažen kod korišćenih doza.
(iii) Ispitivanje dejstava jedinjenja prema formuli (0) model pacova za bol kod kancera kostiju
[0525] Odrasle ženke su dobile intratibijalne injekcije MRMZ-1 ćelija karcinoma mlečne žlezde kod pacova (3 µl, 10<7>ćelija/ml). Životinje obično postepeno razvijaju mehaničku hiperalgeziju, mehaničku alodiniju (osetljivost kože na neškodljive stimulanse) i popuštanje zadnjeg esktremiteta, počinje od 12-14 dana posle ubrizgavanja ćelije. Jedinjenja prema formuli (0) (npr. u dozi od 10 i 30 µg/kg s.c.) se isporučuje 3 puta nedeljno od dana ubrizgavanja ćelije, i nivo inhibicije popuštanja zadnjeg ekstremiteta i mehanička alodinija se određuju u poređenju sa kontrolama tretiranim pomoćnim sredstvima.
Ekvivalenti
[0526] Gorepomenuti primeri se predstavljaju za potrebe ilustrovanja pronalaska i ne treba ih tumačiti kao ograničenje u pogledu obima pronalaska.

Claims (1)

  1. Patentni zahtevi 1. Kombinacija koja obuhvata so dobijenu dodatkom kiseline jedinjenja koje ima formulu (1)
    koje je natrijum laktata, i jednog ili više terapijskih agenasa. 2.Kombinacija prema patentnom zahtevu 1, pri čemu so dobijena dodatkom kiseline jeste natrijum L laktat. 3. Kombinacija prema patentnom zahtevu 1, pri čemu so dobijena dodatkom kiseline je kristalna forma izabrana iz formi: FL1: naznačena time što model rendgenske difrakcije zraka (XRPD) ima difrakcioni ugao (2θ/°), maksimalne vrednosti na 16,81, i FL2: naznačen time što model rendgenske difrakcije zraka (XRPD) ima difrakcioni ugao (2θ/°) sa maksimalnom vrednošću na 22,34. 4. Kombinacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu je jedan ili više terapijskih agenasa izabran iz grupe koja obuhvata: a. Inhibitore topoizomeraze I b. Antimetabolite c. Agense koji ciljaju tubulin d. Inhibitore DNK vezivnog sredstva i topoizomeraze II e. Alkilirajuće agense f. Monoklonalna antitela. g. Antihormonske agense h. Inhibitore prenosa signala i. Inhibitore proteazoma j. DNK metil transferaze k. Citokini i retinoidi l. Terapije koje ciljaju hromatin, npr. modulatore HDAC (modulatore histom deacetilaze) ili HAT (histon acetintransferaze) m. Radioterapija; i n. Druge terapijske i profilaktičke agense. 5. Kombinacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 pri čemu se natrijum laktat i jedan ili više terapijskih agenasa ili terapija primenjuju istovremeno, odvojeno ili jedan za drugim. 6. Kombinacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 pri čemu su natrijum laktat i jedan ili više drugih terapijskih agenasa fizički povezani. 7. Kombinacija prema patentnom zahtevu 6 pri čemu je ta kombinacija fizički povezana kombinacija u obliku: ● supstance (npr. jedinstvene formulacije) koje sadrže natrijum laktat i jedan ili više drugih terapijskih agenasa u mešavini (na primer u okviru iste jedinične doze); ili ● supstanca koja obuhvata materijal u kom su natrijum laktat i jedan ili više drugih terapijskih agenasa hemijski/fizikohemijski povezani (na primer unakrsnim povezivanjem, molekularnom aglomeracijom ili vezivanjem za zajednički deo pomoćnog sredstva); ili ● supstanca koja sadrži materijal u kom se natrijum laktat i jedan ili više drugih terapijskih agenasa hemijski/fizikohemijski zajedno pakuju (na primer, odlažu na ili u lipidne vesikule, čestice (npr. mikročestice ili nanočestice) ili kapljice emulzije); ili ● farmaceutski komplet, farmaceutska pakovanja ili pakovanja za pacijenta u kojima su natrijum laktat i jedan ili više drugih terapijskih agenasa zajedno spakovani ili zajedno prezentovani (npr. kao deo niza jediničnih doza); 8. Kombinacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 pri čemu su natrijum laktat i jedan ili više drugih terapijskih agenasa nefizički pridruženi. 9. Kombinacija prema patentnom zahtevu 8 pri čemu je ta kombinacija nefizički povezana kombinacija u formi: ● materijala (npr. neunitarna formulacija) koja obuhvata natrijum laktat i jedno ili više terapijskih agenasa zajedno sa instrukcijama za improvizovano pridruživanje barem jednog jedinjenja da se formira fizičko pridruživanje dva ili više jedinjenja/agenasa; ili ● materijal (npr. neunitarna formulacija) koja obuhvata natrijum laktat i jedan ili više terapijskih agenasa zajedno sa instrukcijama za kombinovanu terapiju sa dva ili više jedinjenja/agenasa; ili ● materijal koji sadrži najmanje jedan natrijum laktat i jedan ili više drugih terapijskih agenasa zajedno sa instrukcijama za primenu populaciji pacijenata kod koje je drugi od natrijum laktata i jedan ili više drugih terapijskih agenasa primenjen (ili se primenjuje); ili ● materijal koji sadrži barem jedan natrijum laktat i jedan ili više drugih terapijskih agenasa u količini ili formi koja je specifično prilagođena za upotrebu u kombinaciji sa drugim od dva ili više jedinjenja/agensa. 10. Farmaceutska supstanca koja obuhvata kombinaciju prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7 i farmaceutski prihvatljiv nosač. 11. Kombinacija kako je definisana u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9 ili supstanca prema patentnom zahtevu 10 za lečenje kancera. 12. Upotreba kombinacije kako je definisana u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9 ili supstance prema patentnom zahtevu 10 za proizvodnju leka za lečenje kancera. 13. Kombinacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, ili supstance prema patentnom zahtevu 9 za lečenje bola, moždanog udara, upotreba kao neurozaštitni agens, upotreba kao antigljivični agens, upotreba kao antiprotozomni agens, ili za upotrebu kao antiparazitski agens. 14. Farmaceutska supstanca koja obuhvata so dobijenu dodatom kiselinom jedinjenja iz formule (1) kako je definisano u patentnom zahtevu 1 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
RS20180350A 2006-10-12 2007-10-12 Derivati hidrobenzamida kao inhibitori proteina toplotnog šoka hsp90 RS57079B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US82924306P 2006-10-12 2006-10-12
GBGB0620259.2A GB0620259D0 (en) 2006-10-12 2006-10-12 Pharmaceutical compounds
EP12187611.4A EP2546233B1 (en) 2006-10-12 2007-10-12 Hydrobenzamide derivatives as inhibitors of hsp90

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS57079B1 true RS57079B1 (sr) 2018-06-29

Family

ID=37491396

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180350A RS57079B1 (sr) 2006-10-12 2007-10-12 Derivati hidrobenzamida kao inhibitori proteina toplotnog šoka hsp90
RS20130118A RS52716B (sr) 2006-10-12 2007-10-12 Derivati hidrobenzamida kao inhibitori proteina toplotnog šoka hsp90

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20130118A RS52716B (sr) 2006-10-12 2007-10-12 Derivati hidrobenzamida kao inhibitori proteina toplotnog šoka hsp90

Country Status (28)

Country Link
US (2) US8653084B2 (sr)
EP (2) EP2081895B1 (sr)
JP (1) JP5726416B2 (sr)
KR (1) KR101571568B1 (sr)
CN (1) CN101848892B (sr)
AU (1) AU2007306104B2 (sr)
BR (1) BRPI0719879A8 (sr)
CA (1) CA2665931C (sr)
CY (2) CY1113873T1 (sr)
DK (2) DK2546233T3 (sr)
ES (2) ES2662359T3 (sr)
GB (1) GB0620259D0 (sr)
HR (2) HRP20130255T1 (sr)
HU (1) HUE037268T2 (sr)
IL (1) IL197934A (sr)
LT (1) LT2546233T (sr)
ME (1) ME01874B (sr)
MX (1) MX2009003739A (sr)
NO (1) NO342242B1 (sr)
NZ (1) NZ576110A (sr)
PL (2) PL2081895T3 (sr)
PT (2) PT2546233T (sr)
RS (2) RS57079B1 (sr)
RU (1) RU2490258C2 (sr)
SI (2) SI2081895T1 (sr)
TW (1) TWI429638B (sr)
WO (1) WO2008044034A1 (sr)
ZA (1) ZA200902270B (sr)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5154406B2 (ja) 2005-04-13 2013-02-27 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
US7754725B2 (en) 2006-03-01 2010-07-13 Astex Therapeutics Ltd. Dihydroxyphenyl isoindolymethanones
JP5410285B2 (ja) * 2006-10-12 2014-02-05 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
EP2073807A1 (en) * 2006-10-12 2009-07-01 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
WO2008044041A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
JP5518478B2 (ja) 2006-10-12 2014-06-11 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
GB0620259D0 (en) 2006-10-12 2006-11-22 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
GB0806527D0 (en) 2008-04-11 2008-05-14 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
CA2765678A1 (en) 2009-06-22 2010-12-29 Christopher Blackburn Substituted hydroxamic acids and uses thereof
AR077405A1 (es) 2009-07-10 2011-08-24 Sanofi Aventis Derivados del indol inhibidores de hsp90, composiciones que los contienen y utilizacion de los mismos para el tratamiento del cancer
FR2949467B1 (fr) 2009-09-03 2011-11-25 Sanofi Aventis Nouveaux derives de 5,6,7,8-tetrahydroindolizine inhibiteurs d'hsp90, compositions les contenant et utilisation
GB201009853D0 (en) 2010-06-11 2010-07-21 Chroma Therapeutics Ltd HSP90 inhibitors
WO2013119985A1 (en) * 2012-02-09 2013-08-15 University Of Kansas C-terminal hsp90 inhibitors
JP6478908B2 (ja) * 2012-05-25 2019-03-06 バーグ エルエルシー 熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０−βを調節することによる代謝症候群の治療方法
JP2017512831A (ja) 2014-03-20 2017-05-25 大塚製薬株式会社 置換フェニル−（１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−メタノンを含んでなる医薬処方物
WO2015188198A2 (en) 2014-06-06 2015-12-10 Berg Llc Methods of treating a metabolic syndrome by modulating heat shock protein (hsp) 90-beta
AU2021211925A1 (en) * 2020-01-20 2022-08-25 Neophore Limited Isoindoline derivatives which bind to an ATP binding site
GB202008201D0 (en) 2020-06-01 2020-07-15 Neophore Ltd Inhibitor compounds
CN114767683A (zh) * 2022-04-29 2022-07-22 暨南大学 Onalespib在制备预防和/或治疗腺病毒感染的药物中的应用
CN117700350A (zh) * 2023-03-31 2024-03-15 福建医科大学 一种靶向降解hsp90蛋白的化合物及其制备方法与应用

Family Cites Families (103)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5540563Y2 (sr) 1972-04-26 1980-09-22
JPS4910506A (sr) 1972-05-31 1974-01-30
US4582909A (en) 1984-02-02 1986-04-15 Warner-Lambert Company Benzobicyclic lactam acids and derivatives as cognition activators
US4666828A (en) 1984-08-15 1987-05-19 The General Hospital Corporation Test for Huntington's disease
US4760064A (en) 1984-12-18 1988-07-26 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Carbostyril compounds, compositions containing same and processes for preparing same
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4801531A (en) 1985-04-17 1989-01-31 Biotechnology Research Partners, Ltd. Apo AI/CIII genomic polymorphisms predictive of atherosclerosis
KR0143565B1 (ko) 1988-06-13 1998-07-15 사노 가즈오 피발산의 p-치환된 페닐 에스테르 유도체, 그의 제조 방법 및 이를 포함하는 조성물.
US4990511A (en) 1988-08-03 1991-02-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Amide compounds, their production and use
US5272057A (en) 1988-10-14 1993-12-21 Georgetown University Method of detecting a predisposition to cancer by the use of restriction fragment length polymorphism of the gene for human poly (ADP-ribose) polymerase
US5192659A (en) 1989-08-25 1993-03-09 Genetype Ag Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes
GB8926560D0 (en) 1989-11-24 1990-01-17 Zambeletti Spa L Pharmaceuticals
US5124350A (en) 1990-06-28 1992-06-23 G. D. Searle & Co. Leukotriene b4 antagonists
ZA916555B (en) 1990-08-27 1993-04-28 Lilly Co Eli Method of treating inflammatory bowel disease
FR2669029B1 (fr) 1990-11-14 1994-09-02 Adir Nouveaux derives de la n-benzoyl proline, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5280046A (en) 1991-02-22 1994-01-18 The University Of Colorado Foundation, Inc. Method of treating type I diabetes
WO1992017467A1 (en) 1991-04-06 1992-10-15 Dr Lo. Zambeletti S.P.A. Substituted azacyclic compounds, process for their preparation and their use as analgesics
US5619092A (en) * 1993-02-01 1997-04-08 Motorola Enhanced electron emitter
US5633283A (en) 1995-01-23 1997-05-27 Eli Lilly And Company Method for treating multiple sclerosis
JPH0910506A (ja) 1995-06-30 1997-01-14 Toshiba Corp 脱気器
EP0951541B1 (en) 1995-07-31 2005-11-30 Urocor, Inc. Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate disease
US6218529B1 (en) 1995-07-31 2001-04-17 Urocor, Inc. Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate, breast and bladder cancer
JP3855026B2 (ja) 1996-01-16 2006-12-06 富士レビオ株式会社 アミド誘導体の製造方法
AU709113B2 (en) 1996-01-29 1999-08-19 Regents Of The University Of California, The Method for treating sexual dysfunctions
GB9606187D0 (en) 1996-03-23 1996-05-29 Inst Of Food Research Production of vanillin
WO1997036876A1 (en) 1996-04-03 1997-10-09 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
AU714477B2 (en) 1996-04-19 2000-01-06 Regents Of The University Of California, The Treatment of mood/affective disorders by glutamatergic upmodulators
IL118657A0 (en) 1996-06-14 1996-10-16 Arad Dorit Inhibitors for picornavirus proteases
EP0973778A1 (en) 1997-03-07 2000-01-26 Novo Nordisk A/S 4,5,6,7-TETRAHYDRO-THIENO 3,2-c]PYRIDINE DERIVATIVES, THEIR PREPARATION AND USE
UY24949A1 (es) 1997-04-08 2001-04-30 Smithkline Beecham Corp Compuestos calcilíticos
EP0975614A1 (en) 1997-04-18 2000-02-02 Smithkline Beecham Plc A bicyclic aryl or a bicyclic heterocyclic ring containing compounds having a combined 5ht1a, 5ht1b and 5ht1d receptor antagonistic activity
US6329368B1 (en) 1997-05-09 2001-12-11 The Regents Of The University Of California Endocrine modulation with positive modulators of AMPA type glutamate receptors
DK1026950T3 (da) 1997-10-27 2006-06-26 Univ California Behandling af skizofreni med ampakiner og neuroleptika
AU1804299A (en) 1997-12-08 1999-06-28 Glycomed Incorporated Sialyl lewis x and sialyl lewis a glycomimetics
EP1165492A1 (en) 1999-03-30 2002-01-02 Pharmacor Inc. Hydroxyphenyl derivatives with hiv integrase inhibitory properties
DE19955283A1 (de) 1999-11-17 2001-05-23 Aventis Res & Tech Gmbh & Co Verfahren zur enantioselektiven Gewinnung von Aminosäuren und Aminosäurederivaten unter Verwendung von Racemisierungskatalysatoren
US6677473B1 (en) 1999-11-19 2004-01-13 Corvas International Inc Plasminogen activator inhibitor antagonists
AU2001243158A1 (en) 2000-02-18 2001-08-27 Merck And Co., Inc. Inhibitors of prenyl-protein transferase
GB0008305D0 (en) * 2000-04-06 2000-05-24 Neutec Pharma Plc Treatment of fungal infections
ATE310728T1 (de) 2000-05-11 2005-12-15 Bristol Myers Squibb Co Tetrahydroisochinolin-analoga als wachstumshormon-sekretagoga
US7229986B2 (en) 2000-05-16 2007-06-12 Takeda Pharmaceutical Company Ltd. Melanin-concentrating hormone antagonist
DE10024939A1 (de) 2000-05-19 2001-11-29 Bayer Ag Neue Diphenylmethanderivate für Arzneimittel
CA2308994A1 (en) 2000-05-19 2001-11-19 Aegera Therapeutics Inc. Neuroprotective compounds
FR2812876B1 (fr) 2000-08-08 2002-09-27 Galderma Res & Dev Nouveaux composes bi-aromatiques activateurs des recepteurs de type ppar-gamma et leur utilisation dans des compositions cosmetiques ou pharmaceutiques
SK2072003A3 (en) 2000-08-25 2004-01-08 Warner Lambert Co Process for making N-aryl-anthranilic acids and their derivatives
JP4224566B2 (ja) 2000-12-18 2009-02-18 株式会社医薬分子設計研究所 炎症性サイトカイン産生遊離抑制剤
WO2003051877A1 (en) 2001-12-18 2003-06-26 Bayer Corporation 2-substituted pyrrolo[2.1-a]isoquinolines against cancer
CN1620294A (zh) 2001-12-20 2005-05-25 Osi药物公司 嘧啶a2b选择性拮抗剂化合物,它们的合成及用途
ATE374753T1 (de) 2001-12-21 2007-10-15 Vernalis Cambridge Ltd 3-(2,4)dihydroxyphenyl-4-phenylpyrazole und deren medizinische verwendung
AU2003223491A1 (en) 2002-04-05 2003-10-27 Nitromed, Inc. Nitric oxide donors, compositions and methods of use
CN1658854A (zh) 2002-06-05 2005-08-24 株式会社医药分子设计研究所 免疫关联蛋白激酶抑制剂
CN101103977A (zh) 2002-06-05 2008-01-16 株式会社医药分子设计研究所 糖尿病治疗药
EP1512396A4 (en) 2002-06-05 2008-12-31 Inst Med Molecular Design Inc HEMMER AGAINST ACTIVATION OF AP-1 AND NFAT
EA009701B1 (ru) 2002-06-06 2008-02-28 Инститьют Оф Медисинал Молекьюлар Дизайн. Инк. Противоаллергические средства
SE0202133D0 (sv) 2002-07-08 2002-07-08 Astrazeneca Ab Novel compounds
WO2004007501A1 (en) 2002-07-16 2004-01-22 Amura Therapeutics Limited Biologically active compounds
WO2004035571A1 (en) 2002-10-15 2004-04-29 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoles and their use as hcv inhibitors
TWI228885B (en) 2003-01-23 2005-03-01 Mediatek Inc Method for controlling a mobile communication device to enter a power-saving mode and to recover timing after the mobile communication device leaves the power-saving mode
SI1611112T1 (sl) 2003-02-11 2012-12-31 Vernalis (R&D) Limited Izoksazolne spojine kot inhibitorji vroäśinskih ĺ ok proteinov
CA2514500A1 (en) 2003-02-20 2004-09-10 University Of Connecticut Health Center Methods for using compositions comprising heat shock proteins or alpha-2-macroglobulin in the treatment of cancer and infectious disease
MXPA05008878A (es) 2003-02-21 2005-10-05 Pfizer Derivados de aminotiazol sustituidos con cicloalquilo que contiene n y composiciones farmaceuticas para inhibir la proliferacion celular, y metodos para su uso.
EP2295433A3 (en) 2003-03-06 2011-07-06 Eisai R&D Management Co., Ltd. JNK inhibitors
MXPA05011597A (es) 2003-04-30 2005-12-15 Novartis Ag Derivados de aminopropanol como moduladores del receptor 1-fosfato de esfingosina.
AU2004251949B2 (en) 2003-06-27 2009-05-07 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Hsp90 family protein inhibitors
GB0315111D0 (en) 2003-06-27 2003-07-30 Cancer Rec Tech Ltd Substituted 5-membered ring compounds and their use
TWI312345B (en) 2003-06-30 2009-07-21 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Process of preparating 3-acylaminobenzofuran-2-carboxylic acid derivatives
JPWO2005007151A1 (ja) 2003-07-16 2006-08-31 株式会社医薬分子設計研究所 皮膚色素沈着の治療剤
CA2532965C (en) 2003-07-22 2013-05-14 Astex Therapeutics Limited 3, 4-disubstituted 1h-pyrazole compounds and their use as cyclin dependent kinases (cdk) and glycogen synthase kinase-3 (gsk-3) modulators
DE602004027504D1 (de) 2003-07-24 2010-07-15 Leo Pharma As Aminobenzophenonverbindungen
ATE403654T1 (de) 2003-07-28 2008-08-15 Janssen Pharmaceutica Nv Benzimidazol-, benzothiazol- und benzoxazolderivate und deren verwendung als lta4h-modulatoren
DE10335584B4 (de) 2003-07-31 2006-06-29 Philipps-Universität Marburg Verfahren zur Herstellung zyklischer Moleküle
DE10335726A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Bayer Cropscience Gmbh Verwendung von Hydroxyaromaten als Safener
WO2005016889A1 (en) 2003-08-08 2005-02-24 Virginia Commonwealth University Compounds having antiestrogenic and tissue selective estrogenic properties
WO2005023818A2 (en) 2003-09-10 2005-03-17 Gpc Biotech Ag Heterobicyclic compounds as pharmaceutically active agents
WO2005037214A2 (en) 2003-10-14 2005-04-28 Intermune, Inc. Macrocyclic carboxylic acids and acylsulfonamides as inhibitors of hcv replication
KR20060123292A (ko) 2003-11-10 2006-12-01 쉐링 악티엔게젤샤프트 Ｃｃｒ-5 길항제로서 유용한 벤질에테르 아민 화합물
JPWO2005063222A1 (ja) 2003-12-26 2007-07-19 協和醗酵工業株式会社 Ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤
US7351709B2 (en) 2004-06-09 2008-04-01 Wyeth Estrogen receptor ligands
WO2006015123A1 (en) 2004-07-27 2006-02-09 Sgx Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolo-pyridine kinase modulators
AU2005277223C1 (en) 2004-08-20 2009-05-21 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule inhibitors of anti-apoptotic Bcl-2 family members and the uses thereof
DE102004049078A1 (de) 2004-10-08 2006-04-13 Merck Patent Gmbh Phenylpyrazole
US7208630B2 (en) 2004-10-27 2007-04-24 University Of Kansas Heat shock protein 90 inhibitors
WO2006051808A1 (ja) * 2004-11-09 2006-05-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Hsp90ファミリー蛋白質阻害剤
EP1817295B1 (en) * 2004-11-18 2012-11-07 Synta Pharmaceuticals Corp. Triazole compounds that modulate hsp90 activity
MX2007008008A (es) 2004-12-30 2007-11-12 Astex Therapeutics Ltd Compuestos de pirazol que modulan la actividad de las cinasas cdk, gsk y aurora.
AR054425A1 (es) 2005-01-21 2007-06-27 Astex Therapeutics Ltd Sales de adicion de piperidin 4-il- amida de acido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino) 1h-pirazol-3-carboxilico.
DE602006010665D1 (en) 2005-02-07 2010-01-07 Hoffmann La Roche Heterocyclsche substituierte phenylmethanone als inhibitoren des glycintransporters 1
US20060183902A1 (en) 2005-02-15 2006-08-17 Baxter Ellen W Dihydroindolyl methanones as alpha 1a/1d adrenoreceptor modulators for the treatment of benign prostatic hypertrophy and lower urinary tract symptoms
US20090042883A1 (en) 2005-02-21 2009-02-12 Kyowa Hakkokogyo Co. Antitumor agent
JP5154406B2 (ja) 2005-04-13 2013-02-27 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
JP2008540395A (ja) 2005-05-03 2008-11-20 ファイザー・インク アミドレソルシノール化合物
DK2444079T3 (en) 2005-05-17 2017-01-30 Sarcode Bioscience Inc Compositions and Methods for the Treatment of Eye Diseases
WO2007050124A1 (en) 2005-05-19 2007-05-03 Xenon Pharmaceuticals Inc. Fused piperidine derivatives and their uses as therapeutic agents
US7425633B2 (en) 2005-08-26 2008-09-16 National Health Research Institutes Pyrrolidine compounds
DE602006003403D1 (de) * 2006-01-12 2008-12-11 Ondal Holding Gmbh Haltevorrichtung zur Montage eines Gerätes
US7754725B2 (en) * 2006-03-01 2010-07-13 Astex Therapeutics Ltd. Dihydroxyphenyl isoindolymethanones
JP5410285B2 (ja) 2006-10-12 2014-02-05 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
WO2008044041A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
EP2073802A1 (en) 2006-10-12 2009-07-01 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
EP2073807A1 (en) 2006-10-12 2009-07-01 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
GB0620259D0 (en) * 2006-10-12 2006-11-22 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
JP5518478B2 (ja) 2006-10-12 2014-06-11 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
WO2008053319A1 (en) 2006-10-30 2008-05-08 Pfizer Products Inc. Amide resorcinol compounds

Also Published As

Publication number Publication date
EP2546233B1 (en) 2018-02-21
KR20090078825A (ko) 2009-07-20
PL2546233T3 (pl) 2018-06-29
ES2662359T3 (es) 2018-04-06
HRP20180375T1 (hr) 2018-04-20
DK2546233T3 (en) 2018-03-19
BRPI0719879A2 (pt) 2014-06-10
LT2546233T (lt) 2018-03-26
IL197934A (en) 2014-01-30
PT2081895E (pt) 2013-04-10
CY1113873T1 (el) 2016-07-27
AU2007306104A1 (en) 2008-04-17
US20110046155A1 (en) 2011-02-24
KR101571568B1 (ko) 2015-11-24
SI2081895T1 (sl) 2013-06-28
PL2081895T3 (pl) 2013-07-31
RU2009117589A (ru) 2010-11-20
BRPI0719879A8 (pt) 2018-03-13
ME01874B (me) 2014-12-20
CA2665931C (en) 2014-12-23
EP2546233A1 (en) 2013-01-16
CN101848892B (zh) 2013-08-21
ZA200902270B (en) 2013-06-26
HRP20130255T1 (hr) 2013-04-30
NO20091858L (no) 2009-07-08
MX2009003739A (es) 2009-09-04
CA2665931A1 (en) 2008-04-17
RS52716B (sr) 2013-08-30
CN101848892A (zh) 2010-09-29
JP5726416B2 (ja) 2015-06-03
US20140221394A1 (en) 2014-08-07
US9428439B2 (en) 2016-08-30
DK2081895T3 (da) 2013-04-22
EP2081895B1 (en) 2013-01-23
ES2402903T3 (es) 2013-05-10
PT2546233T (pt) 2018-03-13
CY1120081T1 (el) 2018-12-12
SI2546233T1 (en) 2018-04-30
IL197934A0 (en) 2009-12-24
HUE037268T2 (hu) 2018-08-28
GB0620259D0 (en) 2006-11-22
WO2008044034A1 (en) 2008-04-17
AU2007306104B2 (en) 2014-11-06
TWI429638B (zh) 2014-03-11
RU2490258C2 (ru) 2013-08-20
TW200833682A (en) 2008-08-16
NO342242B1 (no) 2018-04-30
US8653084B2 (en) 2014-02-18
HK1128026A1 (en) 2009-10-16
NZ576110A (en) 2012-02-24
JP2010505930A (ja) 2010-02-25
EP2081895A1 (en) 2009-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS57079B1 (sr) Derivati hidrobenzamida kao inhibitori proteina toplotnog šoka hsp90
JP7383652B2 (ja) Ｂ－ｒａｆキナーゼのマレイン酸塩、結晶形、調整方法、及びその使用
CN110423212B (zh) Shp2的基于羟基吲哚羧酸的抑制剂
ES2469797T3 (es) Compuestos farmacéuticos
CN107759600A (zh) 作为jak抑制剂的吡咯并嘧啶化合物的结晶
HK1128026B (en) Hydrobenzamide derivatives as inhibitors of hsp90
JP2002201127A (ja) ウレア誘導体