RS57227B1 - Tečna inhalaciona formulacija koja sadrži rpl554 - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na tečnu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži respiratorni lek.

OSNOVA PRONALASKA

[0002] Toksikokinetičke osobine tečnih farmaceutskih kompozicija su nepredvidive. Važno je da je aktivni farmaceutski sastojak (API) ispravno formulisan tako da je obezbeđena bezbedna, efikasna i kontrolisana doza kada je kompozicija isporučena pacijentu. Ovo je naročito slučaj za inhalirane kompozicije. Pored toga, tečne farmaceutske kompozicije moraju imati pouzdanu dugotrajnu stabilnost da bi se osiguralo da će profil doziranja kompozicije biti održavan posle čuvanja. Ovo izbegava primenu neispravnih doza. Farmaceutske kompozicije moraju takođe biti formulisane na takav način da primena nije neprijatna za pacijenta, na primer u vezi ukusa i kiselosti.

[0003] RPL554 (9,10-Dimetoksi-2-(2,4,6-trimetilfenilimino)-3-(N-karbamoil-2-aminoetil)-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirimido[6,1-a]izohinolin-4-on) je dvostruki PDE3/PDE4 inhibitor i opisan je u WO 00/58308 (i takođe je nekada označen kao RPL554). Kao kombinovani inhibitor PDE3/PDE4, RPL554 ima anti-inflamatornu i bronhodilatatornu aktivnost i koristan je u lečenju respiratornih poremećaja kao što su astma i hronična opstruktivna bolest pluća (COPD). Struktura RPL554 je prikazana u daljem tekstu.

[0004] Često je poželjno primenjiivati RPL554 inhalacijom zbog njegove efikasnosti u lečenju respiratornih poremećaja. Efikasan postupak primene je nebulizacija. Franciosi et al. opisuju rastvor RPL554 u citrat-fosfatnom puferu (Efikasnost i bezbednost RPL554, dvostruki inhibitor PDE3 i PDE4, kod zdravih dobrovoljaca i kod pacijenata sa astmom i hroničnom opstruktivnom bolešću pluća: nalazi iz četiri klinička ispitivanja, The Lancet: Respiratory Medicine 11/2013; 1(9):714-27. DOI: 10.1016/S2213-2600(13)70187-5).

[0005] Efekat RPL554 na tonus izolovanog humanog bronhijalnog glatkog mišića je opisan u Calzetta et al, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics (346, 3, stranice 414-423). Compton et al, Pulmonary Pharmacology & Therapeutics 26 (2013) 562-573, opisuju tretmane za COPD.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0006] Iznenađujuć je nalaz predmetnog pronalaska da je optimalna kompozicija za inhalaciju koja sadrži RPL554 – tečna farmaceutska kompozicija koja sadrži suspenziju čestica RPL554. Nađeno je da suspenzije od RPL554 imaju visoko poželjne osobine za kliničku postavku. Nađeno je da su određene koristi povezane sa tečnom farmaceutskom kompozicijom koja sadrži razblaživač i suspenziju od čestica RPL554 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0007] Tečna farmaceutska kompozicija prema pronalasku veoma je poboljšala osobine u odnosu na prethodne formulacije, na primer u poređenju sa formulacijom rastvora RPL554. Što se tiče toksikokinetičkih osobina, nađeno je da formulacija suspenzija ima karakteristike odloženog oslobađanja u poređenju sa onima od rastvora. Ovo može da smanji broj tretmana koji se moraju primeniti na pacijenta. Takođe je nađeno da suspenzija omogućava primenu mnogo veće doze RPL554, kao što se može videti iz vrednosti Cmax i AUC plazme. Ovo takođe može da smanji učestalost potrebnih primena.

[0008] Tečna farmaceutska kompozicija prema pronalasku takođe pokazuje odličnu stabilnost, sa kompozicijama koje ne pokazuju razgradnju posle 12 časova na uslovima sredine (25°C), niti posle 6 meseci na ubrzanim uslovima (40°C). Razgradnja je zabeležena u sličnoj kompoziciji rastvora pod istim uslovima. Kompozicije mogu da pokažu da nema razgradnje posle 12 meseci na uslovima sredine (25°C/60% relativne vlažnosti), niti posle 6 meseci na ubrzanim uslovima (40°C/75% relativne vlažnosti).

[0009] Prema tome, predmetni pronalazak daje tečnu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži razblaživač i suspenziju čestica od 9,10-dimetoksi-2-(2,4,6-trimetilfenilimino)-3-(N-karbamoil-2-aminoetil)-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirimido[6,1-a]izohinolin-4-ona (RPL554) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde čestice RPL554 imaju raspodelu veličine čestica sa Dv50 (srednjom veličinom čestica prema zapremini) vrednošću od 0.2 μm do 5 μm, i gde tečna farmaceutska kompozicija ne sadrži količinu veću od 0.1 tež.% ukupnog agonista β2-adrenergičnog receptora i antagonista muskarisnkog receptora.

[0010] Pronalazak takođe daje tečnu farmaceutsku kompoziciju prema pronalasku za upotrebu u lečenju ljudskog ili životinjskog tela. Tečna farmaceutska kompozicija prema pronalasku može biti korišćena u lečenju ili prevenciji bolesti ili stanja izabranog od astme, alergijske astme, polenske groznice, alergijskog rinitisa, bronhitisa, emfizema, bronhiektazisa, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), adultnog respiratornog distres sindroma (ARDS), astme rezistentne na steroide, teške astme, pedijatrijske astme, cistične fibroze, fibroze pluća, plućne fibroze, intersticijalne bolesti pluća, poremećaja kože, atopijskog dermatitisa, psorijaze, okularne inflamacije, cerebralne ishemije, inflamatornih bolesti i autoimunih bolesti.

[0011] Tipično, navedena bolest ili stanje je astma ili COPD, tipičnije COPD.

KRATAK OPIS SLIKA

[0012]

Slika 1 – Provokaciona koncentracija (PC) acetilholina koja je kumulativno proizvela 50% povećanje u ukupnoj rezistenciji disajnih puteva (acetilholin RL PC50) kod životinja tretiranih fiziološkim rastvorom ili formulacijom rastvora RPL554: vremenska tačka od 2 i 5 časova: acetilholin RL PC50 je log transformisan za svrhe statističke analize. Post hoc t-test netransformisanih podataka pokazao je razlike između grupa naspram fiziološkog rastvora. *Neparametrijska analiza je pokazala značajnu razliku između 2 časa (1 mg/mL rastvor RPL554, P = 0.0190 nepodešen) i 5 časova (2.5 mg/mL rastvor, P = 0.0095 nepodešen) naspram grupe koja je primala fiziološki rastvor. N vrednosti = 6, 4, 4; 4, 4 sa leva na desno. (Napomena: 5 časovna kontrola nije prikazana na grafikonu).

Slika 2 – acetilholin RL PC50 kod životinja tretiranih vehikulumom ili formulacijom suspenzije RPL554: vremenska tačka od 2 i 5 časova: acetilholin RL PC50 je log transformisan za svrhe statističke analize (gornji panel). Neparametrijska analiza je pokazala značajnu razliku između 2 časa (10 mg/mL suspenzija RPL554, P = 0.0268 nepodešen) naspram kontrolne grupe vehikuluma. Ponovna analiza podataka kombinovanjem podataka za vehikulum (2 5 časova), otkrila je ukupnu značajnu bronhoprotekciju (P=0.0016) koja je reflektovana značajnim stepenom bronhoprotekcije sa 2.5 mg/mL suspenzije RPL554 (2.52 struka (1-5.72), P < 0.05 i 10 mg/mL RPL554 suspenzija (4.67 struka (2-11), *P < 0.05) naspram vehikuluma. Na vremenskoj tački 5 časova, RPL554 10 mg/mL suspenzija je uzrokovala značajan stepen brohoprotekcije (2.77 –struka (1.3-6.0), *P < 0.05). (N=8,4,4,3, 6, sa leva na desno) (donji panel).

Slika 3 prikazuje srednje koncentracije RPL554 u plazmi od zdravih humanih dobrovoljaca posle primene (i) formulacije suspenzije ili (ii) formulacije rastvora nebulizatorom na nominalnom nivou doze od oko 1.5 mg.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0013] Tipično, čestice RPL554 su mikronizovane čestice.

[0014] Čestice imaju raspodelu veličine čestica sa Dv50 vrednošću od oko 0.2 μm do oko 5 μm. Tipično, čestice RPL554 imaju raspodelu veličine čestica sa Dv50 vrednošću od oko 0.7 μm do oko 3.0 μm. Na primer, čestice RPL554 mogu imati raspodelu veličine čestica sa Dv50 vrednošću od 0.9 μm do 1.7 μm, ili alternativno od 1.7 μm do 2.7 μm. Često, čestice RPL554 imaju raspodelu veličine čestica sa Dv50 vrdnošću od oko 1.1 μm do oko 2.6 μm.

[0015] Dv50 vrednost je medijana veličine čestica za raspodelu zapremine. Na taj način, polovina zapremine čestica se sastoji od čestica koje imaju prečnike manje od Dv50 vrednosti i polovina zapremine čestica je sadržana u česticama koje imaju prečnike veće od Dv50 vrednosti. Ovo je dobro poznati način na koji se opisuju raspodele veličine čestica.

[0016] Čestice tipično imaju raspodelu veličine čestica sa Dv10 vrednošću od oko 0.4 μm do oko 1.0 μm. Čestice tipično imaju raspodelu veličine čestica sa Dv90 vrednošću od oko 2.0 μm do oko 4.0 μm. Dv10 vrednost reflektuje prečnik čestica gde je 10% od zapremine uzorka u česticama koje imaju prečnik čestica manji od Dv10 vrednosti. Dv90 vrednost reflektuje prečnik čestica gde je 90% od zapremine u česticama koje imaju prečnih čestica manji od Dv90 vrednosti.

[0017] Tehnika korišćena za merenje Dv50 vrednosti je tipično laserska difrakcija. Na primer, RPL554 čestice tipično imaju raspodelu veličine čestica sa Dv50 vrednošću od oko 0.2 μm do oko 5 μm kao što je mereno laserskom difrakcijom. Analiza raspodele veličine čestica može biti izvedena laserskom difrakcijom upotrebom Malvern Spraytec zajedno sa vlažnom disperzionom ćelijom. Tipično, parametri instrumenta za Malvern Spraytec su kao što sledi:

• čestica - standardna neprozirna čestica;

• refraktivni indeks čestice - 1.50;

• refraktivni indeks (imaginarni) - 0.50;

• gustina čestice - 1.00;

• refraktivni indeks disperzanta - 1.33;

• kontrolna jedinica - 1000RPM;

• tip merenja - podešen vremenski;

• početno vreme uzorkovanja - 30s;

• zamračenje - 20% - 30%;

• disperzant - 1% polisorbat 20 u dejonizovanoj vodi.

[0018] Čestice RPL554 mogu biti proizvedene pomoću bilo kog farmaceutski prihvatljivog postupka smanjenja veličine ili postupka proizvodnje sa kontrolisanom veličinom čestica. Na primer, čestice mogu biti proizvedene sušenjem putem raspršivanja rastvora RPL554, ili kontrolisanom kristalizacijom, ili smanjenjem veličine čvrstog oblika RPL554, na primer pomoću mlevenja u vazdušnom mlazu, mehaničke mikronizacije ili mlevenja medijuma.

[0019] Koncentrovanje čestica RPL554 u tečnoj farmaceutskoj kompoziciji je tipično od oko 0.01 mg/mL do oko 40 mg/mL. Tipičnije, koncentracija čestica RPL554 u tečnoj farmaceutskoj kompoziciji je od oko 0.1 mg/mL do oko 20 mg/mL. Na primer, koncentracija čestica RPL554 u tečnoj farmaceutskoj kompoziciji može biti od oko 0.01 mg/mL do oko 5 mg/mL, ili od 0.1 1 mg/mL do 5 mg/mL. Koncentracija čestica RPL554 u tečnoj farmaceutskoj kompoziciji može na primer biti od 0.1 mg/mL do 6 mg/mL.

[0020] Poželjno, pH suspenzije je od oko 6 do oko 8, poželjnije od oko 6.5 do oko 7.

[0021] Tečna farmaceutska kompozicija može dalje da sadrži jedan ili više surfaktanata. Surfaktanti su farmaceutski prihvatljivi surfaktanti. Surfaktanti mogu biti nejonski surfaktanti, anjonski surfaktanti, katjonski surfaktanti ili cviterjonski surfaktanti. Poželjno, jedan ili više surfaktanata su izabrani od jednog ili više nejonskih surfaktanata.

[0022] Jedan ili više surfaktanata su tipično izabrani od polioksietilen glikol alkil etara, polioksipropilen glikol alkil etara, glukozid alkil etara, polioksietilen glikol oktilfenol etara, polioksietilen glikol alkilfenol etara, glicerol alkil estara, polioksietilen glikol sorbitan alkil estara (polisorbata), sorbitan alkil estara, kocamid MEA, kocamid DEA, dodecildimetilamin oksida, blok kopolimera polietilen glikola i polipropilen glikola (poloksamera) i polietoksilovanog amina iz masti (POEA).

[0023] Poželjno, jedan ili više surfaktanata su izabrani od polioksietilen glikol sorbitan alkil estara, na primer polisorbata 20 (polioksietilen (20) sorbitan monolaurata), polisorbata 40 (polioksietilen (20) sorbitan monopalmitata), polisorbata 60 (polioksietilen (20) sorbitan monostearata) i polisorbata 80 (polioksietilen (20) sorbitan monooleata) i sorbitan alkil estara, na primer sorbitan monolaurata, sorbitan monopalmitata, sorbitan monostearata, sorbitan tristearata i sorbitan monooleata.

[0024] Ukupna koncentracija jednog ili više surfaktanata je tipično od oko 0.01 mg/mL do oko 2 mg/mL. Kompozicija često sadrži dva ili više surfaktanata, na primer polisorbat i Span surfaktant.

[0025] Tipično, tečna farmaceutska kompozicija dalje sadrži jedan ili više pufera. Puferi su farmaceutski prihvatljivi puferi. Puferi mogu biti bilo koji puferi pogodni za upotrebu u tečnoj farmaceutskoj kompoziciji pogodnoj za inhalaciju. Jedan ili više pufera su tipično izabrani od citratnih ili fosfatnih pufera. Citratni puferi obuhvataju limunsku kiselinu, natrijum citrat i njihove smeše. Fosfatni puferi obuhvataju fosfornu kiselinu, mononatrijum fosfat, dinatrijum fosfat i njihove smeše.

[0026] Ukupna koncentracija jednog ili više pufera je tipično od oko 5 mg/mL do oko 40 mg/mL. Kompozicija često sadrži dve ili više puferskih komponenti, na primer dve fosfatne soli, na primer natrijum fosfatne soli.

[0027] Tečna farmaceutska kompozicija prema pronalasku može da sadrži: (a) čestice RLP554 u koncentraciji od oko 0.01 mg/mL do oko 40 mg/mL; (b) jedan ili više surfaktanata u koncentraciji od oko 0.01 mg/mL do oko 5 mg/mL; i (c) pufer u koncentraciji od oko 5 mg/mL do oko 25 mg/mL.

[0028] Tečna farmaceutska kompozicija tipično dalje sadrži sredstvo za podešavanje toničnosti. Sredstvo za podešavanje toničnosti može biti bilo koje farmaceutski prihvatljivo sredstvo za podešavanje toničnosti. Primeri sredstava za podešavanje toničnosti obuhvataju proste netoksične soli kao što su halogenidi alkalnih metala, na primer natrijum hlorid i kalijum jodid. Tipično, sredstvo za podešavanje toničnosti je natrijum hlorid. Koncentracija sredstva za podešavanje toničnosti zavisiće od količine potrebne da se dostigne željena toničnost, na primer izotoničnost sa telom ili plućima. Koncentracija sredstva za podešavanje toničnosti je tipično od oko 2 mg/mL do oko 8 mg/mL, i tipičnije od oko 3.5 mg/mL do 6 mg/mL.

[0029] Tečna farmaceutska kompozicija može da sadrži druge komponente. Alternativno, druge komponente mogu biti isključene. U nekim slučajevima, tečna farmaceutska kompozicija ne sadrži agonist β2-adrenergičnog receptora ili antagonist muscarinskog receptora.

[0030] Razblaživač može biti bilo koji farmaceutski prihvatljiv razblaživač. Razblaživač je pogodan za primenu putem inhalacije. Primeri pogodnih razblaživača obuhvataju vodu, etanol i glicerol. Razblaživač je poželjno voda. Razblaživač je poželjno sterilan.

[0031] Tečna farmaceutska kompozicija prema pronalasku tipično sadrži:

(a) čestice RLP554 u koncentraciji od 0.01 mg/mL do 40 mg/mL;

(b) polioksietilen glikol sorbitan alkil estar u koncentraciji od 0.1 mg/mL do 2 mg/mL; (c) sorbitan alkil estar u koncentraciji od 0.01 mg/mL do 0.1 mg/mL;

(d) prvu komponentu fosfatnog pufera u koncentraciji od 5 mg/mL do 10 mg/mL;

(e) drugu komponentu fosfatnog pufera u koncentraciji od 5 mg/mL do 10 mg/mL; i

(f) sredstvo za podešavanje toničnosti u koncentraciji od 2 mg/mL do 8 mg/mL.

[0032] Na primer, tečna farmaceutska kompozicija može da sadrži:

(a) čestice RLP554 u koncentraciji od 0.05 mg/mL do 25 mg/mL;

(b) polioksietilen (20) sorbitan monolaurat (Polisorbat 20, Tween 20) u koncentraciji od 0.1 mg/mL do 2 mg/mL;

(c) sorbitan monolaurat (Span 20) u koncentraciji od 0.01 mg/mL do 0.1 mg/mL;

(d) mononatrijum fosfat monohidrat u koncentraciji od 5 mg/mL do 10 mg/mL;

(e) anhidrovani dinatrijum fosfat u koncentraciji od 5 mg/mL do 10 mg/mL; i

(f) natrijum hlorid u koncentraciji od 2 mg/mL do 8 mg/mL.

[0033] Tipično, tečna farmaceutska kompozicija je pogodna za primenu pomoću nebulizatora.

[0034] Pronalazak takođe obezbeđuje nebulizator koji sadrži tečnu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži razblaživač i suspenziju čestica 9,10-dimetoksi-2-(2,4,6-trimetilfenilimino)-3-(N-karbamoil-2-aminoetil)-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirimido [6,1-a]izohinolin-4-ona (RPL554) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde čestice RPL554 imaju raspodelu veličine čestica sa Dv50 (srednja veličina čestica prema zapremini) vrednost od 0.2 mm do 5 mm. Tečna farmaceutska kompozicija može biti kao što je opisana ovde prema pronalasku. Nebulizator je tipično napunjen tečnom farmaceutskom kompozicijom. Nebulizator tipično sadrži od oko 1 mL do oko 200 mL, tipičnije od 1 mL do 20 mL tečne farmaceutske kompozicije.

[0035] Nebulizatori koriste komprimovani vazduh za aerosolizaciju tečne farmaceutske kompozicije u aerosol koji je inhaliran u respiratorni trakt subjekta. Primeri nebulizatora obuhvataju nebulizator koji stvara finu maglu aerosola, vibracioni nebulizator, mlazni nebulizator i nebulizator sa ultrazvučnim talasima. Pogodni uređaji nebulizatori obuhvataju Philips I-neb™ (Philips), Pari LC Sprint (Pari GmbH), AERxRTM Pulmonary Delivery System (Aradigm Corp.) i Pari LC Plus Reusable Nebulizer(Pari GmbH).

[0036] Pronalazak takođe obezbeđuje tečnu farmaceutsku kompozicijui za upotrebu u lečenju ljudskog ili životinjskog tela. Kompozicija je kao što je ovde definisana. Tečna farmaceutska kompozicija je tipično za upotrebu u lečenju ljudskog ili životinjskog tela, pri čemu lečenje/tretman sadrži primenu putem inhalacije.

[0037] Kompozicije prema pronalasku omogućavaju odloženo oslobađanje RPL554 u krvotok. Koncentracija RPL554 u plazmi posle određenog vremena je prema tome povećana u odnosu na upotrebu poznatih kompozicija RPL554. Tipično, koncentracija RPL554 u krvnoj plazmi je veća od ili ista 1 ng/mL u vremenskom periodu većem ili jednakom četiri časa nakon što je primenjena nebulizirana doza kompozicije. Nebulizirana doza je tipično od 0.02 mg/kg do 0.6 mg/kg. Na primer, nebulizirana doza može biti od 0.2 mg/kg do 0.6 mg/kg. Na primer, pronalazak daje tečnu farmaceutsku kompoziciju kao što je ovde definisana za upotrebu u lečenju ljudskog ili životinjskog tela, pri čemu je koncentracija RPL554 u krvnoj plazmi veća ili ista 1 ng/mL u vremenskom periodu većem ili jednakom četiri časa pošto je nebulizirana doza od 0.2 mg/kg do 0.6 mg/kg primenjena preko inhalacije nebulizirane kompozicije prema pronalasku. Koncentracija RPL554 u krvnoj plazmi je tipično veća od ili ista 1 ng/mL u vremenskom periodu većem ili jednakom tri, četiri ili pet časova nakon što je nebulizirana doza kompozicije primenjena.

[0038] Pronalazak takođe obezbeđuje tečnu farmaceutsku kompoziciju kao što je ovde definisana za upotrebu u postupku za lečenje ili prevenciju bolesti ili stanja kao što je ovde definisano kod subjekta, pri čemu postupak sadrži primenu na navedenog subjekta efikasne količine tečne farmaceutske kompozicije kao što je ovde definisana. Tipično, postupak je za lečenje bolesti ili stanja. Bolest ili stanje je tipično izabrano od astme, alergijske astme, polenske groznice, alergijskog rinitisa, bronhitisa, emfizema, bronhiektazisa, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), adultnog respiratornog distres sindroma (ARDS), astme rezistentne na steroide, teške astme, pedijatrijske astme, cistične fibroze, plućne fibroze, pulmonarne fibroze, intersticijalne bolesti pluća, poremećaja kože, atopijskog dermatitisa, psorijaze, okularne inflamacije, cerebralne ishemije i auto-imunih bolesti. Poželjno tečna farmaceutska kompozicija je za upotrebu u lečenju astme ili hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), poželjnije COPD.

[0039] Efikasna količina RPL554 je tipično od oko 0.01 mg/kg do 50 mg/kg za jednu dozu. Efikasna količina RPL554 je često od oko 0.01 mg/kg do 1 mg/kg za jednu dozu. Na primer, efikasna količina može biti doza od oko 0.1 mg do oko 500 mg, ili od oko 0.1 mg do 100 mg, poželjno od oko 0.1 mg do oko 6 mg. Efikasna količina može biti od 0.1 mg do 12 mg. Jedna doza RPL554 može biti od 0.5 mg do 3 mg, na primer oko 1.5 mg. Doze mogu biti primenjivane dnevno. Na primer, doza RPL554 može biti od 0.01 mg/kg/dan do 50 mg/kg/dan, tipično od 0.01 mg/kg/dan do 10 mg/kg/dan ili od 0.01 mg/kg/dan do 1 mg/kg/dan. Ove doze su tipično nominalna doza koja se emituje iz inhalatora. Tečna farmaceutska kompozicija može biti primenjivana jednom, dva ili tri puta na dan, ili može biti primenjivana dva, tri puta, četiri puta ili pet puta nedeljno. Kompozicija može biti primenjivana onoliko često koliko je potrebno za pacijenta.

[0040] Efikasna količina može biti doza od oko 0.1 mg do oko 500 mg, ili od oko 0.1 mg do 100 mg, poželjno od oko 0.5 mg do oko 6 mg. Efikasna količina može biti od 0.1 mg do 12 mg. Jedna doza od RPL554 može biti od 0.5 mg do 24 mg, koja može biti primenjivana preko nebulizaotora. Jedna doza RPL554 može biti od 0.5 mg do 6 mg, na primer oko 1.5 mg. Doze mogu biti primenjivane jednom, dva puta ili tri puta na dan. Na primer, doza RPL554 može biti od 0.1 mg/dan do 50 mg/dan, tipično od 1.5 mg/dan do 18 mg/dan. Ove doze su tipično nominalna doza emitovana iz inhalatora. Tečna farmaceutska kompozicija može biti primenjivana jednom, dva puta ili tri puta na dan, ili može biti primenjivana dva puta, tri puta, četiri puta ili pet puta nedeljno. Kompozicija može biti primenjivana onoliko često koliko je potrebno za pacijenta.

[0041] Iznenađujući je nalaz predmetnog pronalaska da formulacija suspenzije RPL554 omogućava da se visoke doze RPL554 primenjuju na pacijenta bez istovremenog povećanja kardiovaskularnog rizika. Tečna farmaceutska kompozicija je prema tome pogodna za upotrebu u lečenju pacijenata koji pate od kardiovaskularnih poremećaja ili koji su u riziku od kardiovaskularnih poremećaja.

[0042] Na primer, kompozicija može biti korišćena za lečenje bolesti ili stanja kao što su definisani u prethodnom tekstu kod pacijenta koji pati od kardiovaskularne ranjivosti. Pacijenti koji pate od kardiovaskularne ranjivosti su tipično oni u povećanom riziku od štetnih efekata koji nastaju od tahikardije ili hipertenzije. Tipičnije, pacijenti koji pate od kardiovaskularne ranjivosti su oni koji pate od srčanog stanja koje je prethodno bilo prisutno, ili stanja koje bi se pogoršalo tahikardijom ili hipertenzijom. Takvi pacijenti obuhvataju one koji pate od koronarne arterijske bolesti, kardiomiopatije, hipertenzije, hipertenzivne bolesti srca, srčane insuficijencije, aritmije, srčanih disritmija, endokarditisa, miokarditisa, valvularne srčane bolesti i šloga. Takođe su uključeni pacijenti koji su patili od srčanog napada.

[0043] Pronalazak je detaljnije opisan sledećim Primerima.

PRIMERI

Primer 1 – formulacija i stabilnost formulacije suspenzije RPL554

[0044] Tečne farmaceutske kompozicije prema pronalasku su proizvedene sa formulacijama navedenim u Tabelama 1 i 2 u daljem tekstu.

Tabela 1 – formulacija varijante 1a (0.4 mg/mL)

Tabela 2 – formulacija varijante 1b (20.0 mg/mL)

[0045] Testiranje analize je izvedeno u dva ponavljanja. Ključni parametri postupka su kao što sledi:

• pokretna faza: acetonitril:voda:TFA (45:55:0.1);

• kolona: Waters X-Bridge fenil, 3.5 mm, 150 x 4.6 mm;

• stopa protoka: 1.5 ml/min;

• zapremina injekcije: 10 mL;

• detekcija: UV @ 254 nm;

• vreme testa: 6 minuta; i

• koncentracija uzorka i standarda: 0.1 mg/mL.

[0046] Varijanta 1a je čuvana pod uslovima (i) temperature od 25°C i relativne vlažnosti (RH) od 60% ili (ii) temperature od 40°C i relativne vlažnosti od 75%. Izgled, pH, analiza, nečistoće i raspodela veličine čestica (PSD) su mereni na početku, na 1 meseca, na 2 meseca i na 6 meseci (6 meseci samo za uslove 25°C i relativnu vlažnost od 60%). Količina nečistoća je merena pomoću HPLC sa relativnim vremenom zadržavanja (RRT) naznačene nečistoće.

[0047] Rezultati su prikazani u Tabelama 3 i 4 u daljem tekstu.

Tabela 3 – Stabilnost varijante 1a pod uslovima: 25°C/60% relativne vlažnosti

Tabela 4 – Stabilnost varijante la pod uslovima: 40°C/75% relativne vlažnosti

[0048] Varijanta 1b je čuvana pod uslovima (i) temperature od 25°C i relativne vlažnosti (RH) od 60% ili (ii) temperature od 40°C i relativne vlažnosti od 75%. Izgled, pH, nečistoće i raspodela veličine čestica (PSD) su mereni na početku, na 1 mesec i na 2 meseca. Količina nečistoća su mereni pomoću HPLC sa relativnim vremenom zadržavanja (RRT) naznačene nečistoće.

[0049] Rezultati su prikazani u Tabelama 5 i 6 u daljem tekstu.

Tabela 5 – Stabilnost varijante 1b pod uslovima: 25°C/60% relativne vlažnosti

Tabela 6 – Stabilnost varijante 1b pod uslovima: 40°C/75% relativne vlažnosti

[0050] Kao što se može videti iz Tabela 3 do 6, tečna farmaceutska kompozicija prema pronalasku pokazuje odličnu dugotrajnu stabilnost bez značajne varijacije u pH ili količini prisutnih nečistoća. Ova stabilnost je čak zabeležena posle 2 meseca na 40°C.

Komparativni primer 1 – formulacija i stabilnost formulacije rastvora RPL554

[0051] Sličan test stabilnosti je izveden za formulaciju rastvora RPL554. 1.0 mg/ml rastvor RPL554 u vodenom rastvoru citratnog/fosfatnog pufera na pH od približno 3.2 je držan pod uslovima temperature od 25°C i relativne vlažnosti (RH) od 60% tokom šest meseci. Izgled, pH, analiza i prisutne nečistoće su mereni na početku i na 6 meseci. Rezultati su prikazani u Tabeli 7 u daljem tekstu.

Tabela 7 – Stabilnost rastvora RPL554 pod uslovima: 25°C/60% relativne vlažnosti

[0052] Dok nema promena u izgledu rastvora, postoji značajno povećanje u količini nečistoće sa RRT vrednošću od 0.87. Ova nečistoća je identifikovana kao proizvod hidrolize RPL554. Rastvor RPL554 je manje stabilan od formulacije suspenzije prema pronalasku.

Primer 2 – raspodela veličine čestica

[0053] Raspodela veličine čestica uzorka mikronizovanog RPL554 pogodna za upotrebu u

nebuliziranim formulacijama je procenjena upotrebom laserske difrakcije. Analiza raspodele

veličine čestica je izvedena laserskom difrakcijom upotrebom Malvern Spraytec zajedno sa

vlažnom disperzionom ćelijom.

[0054] Rezultati su kao što sledi: Dv10 = 0.69 μm; Dv50 = 1.35 μm; Dv90 = 2.5 μm.

Primer 3 – formulacije

[0055] Formulacije suspenzije i rastvora RPL554 su pripremljene kao što sledi. Ove formulacije su korišćene u Primerima 4 do 6.

Sastojci 20 mg/ml RPL554 suspenzija

formulacije

(suspenzija)

Sastojak Količina Koncentracija (mg/ml) RPL554 2.12g<a>20 mg/mL (mikronizovan)

Rastvor za ovlaživanje 10.0 mL N/A

Rastvor pufera Do 100 mL N/A

<a>Sadrži 6% više za očekivani proizvodni gubitak

Vehikulum = kao prethodno, ali bez RPL554

Puferski rastvor RPL554

Sastojak Količina Koncentracija (mg/ml) Mononatrijum fosfat 32.9 6.58

monohidrat

Dinatrijum fosfat 34.0 6.80

Natrijum hlorid 24.0 4.80

Voda Do 5000 ml N/A

RPL554 rastvor za ovlaživanje

Sastojak Količina Koncentracija (mg/ml) Polisorbat 20 (Tween 10.0 5.00

20)

Sorbitan Monolaurat 1.0 0.50

(Span 20)

Puferski rastvor Do 2000 ml N/A

RPL554

Postupak Puferski rastvor RPL554: Potrebna količina ekscipijenasa vehikuluma je primene izmerena u pogodan spremnik i dopunjena do potrebne zapremine vodom za (suspenzija) injekciju. Ekscipijensi su magnetno mešani u trajanju od 10 minuta sve dok se puferske soli nisu potpuno rastvorile. Izmerena je pH, zabeležena i podešena ako je neophodno do pH 7.0 ± 0.3 upotrebom HCl/NaOH i filtrirana kroz 0.22 µm filter.

Rastvor za vlaženje RPL554: Potrebna količina polisorbata 20 je izmerena u pogodan spremnik i dodata je potrebna količina sorbitan monolaurata. Rastvor za vlaženje je magnetno mešan u trajanju od 10 minuta, zatim prebačen u veći spremnik sa puferskim rastvorom i dopunjen do krajnje zapremine sa puferskim rastvorom. Rastvor je magnetno mešan u trajanju od 10 minuta i filtriran kroz 0.22 µm filter.

Vehikulum: Potrebna zapremina rastvora za vlaženje RPL554 merena je u pogodan spremnik i dopunjena do krajnje zapremine sa puferskim rastvorom RPL554, mešana magnetnom mešalicom u trajanju od 10 minuta. Merena je pH, beležena i podešena ako je neophodno do pH 7.0 ± 0.3 upotrebom HCl/NaOH.

20 mg/mL suspenzija RPL554: Potrebna količina RPL554 je izmerena u malu čašu i dodata je potrebna količina rastvora za vlaženje. Suspenzija je mešana upotrebom Silverson miksera opremljenog sa 5/8" high sheer screen u trajanju od približno 1 minute na 8000 rpm. Smeša je prebačena u novu čistu, suvu čašu ispiranjem puferskim rastvorom. Potrebna težina je spremljena sa puferskim rastvorom i mešana upotrebom Silverson miksera opremljenog sa 1" high sheer screen približno 1 minut na 8000 rpm. pH je merena, beležena i podešena ako je neophodno do pH 7.0 ± 0.3 upotrebom HCl/NaOH. Rastvor je prebačen u krjanji spremnik. Za niže koncentracije suspenzija RPL554, potrebna količina od 20 mg/mL formulacije je izmerena i razblažena do potrebne zapremine sa vehikulumom upotrebom šprica opremljenog sa 0.22 µm filterom. Formulacija je pažljivo mešana na magnetnoj mešalici u trajanju od 5 minuta.

Sastojci 1 mg/mL (pH 3.5) RPL554 rastvor

formulacije

(rastvor)

Sastojak Količina

RPL554 100 mg

0.1M rastvor 22.5 mL

limunske kiseline

0.2M rastvor 9.7 mL

dinatrijum fosfat

dodekahidrata

0.9% (tež/tež) 67.8 mL

fiziološki rastvor

1.5 mg/mL (pH 2.5) RPL554 rastvor

Sastojak Količina

RPL554 150 mg

0.1M rastvor 45 mL

limunske kiseline

0.2M rastvor 5 mL

dinatrijum fosfat

dodekahidrata

0.9% (tež/tež) 50 mL

fiziološki rastvor

Vehikulum: kao prethodno, ali bez RPL554

Postupak 0.1M rastvor RPL554 u limunskoj kiselini: Potrebna količina limunske primene kiseline je izmerena u pogodan spremnik, dopunjena do potrebne zapremine sa (rastvor) 0.9% fiziološkim rastvorom i magnetno mešana sve dok se nije potpuno rastvorio.

RPL554 0.2M Rastvor dinatrijum fosfata: Potrebna količina anhidrovanog dinatrijum fosfata je izmerena u pogodan spremnik, dopunjena do potrebne zapremine sa 0.9% fiziološkim rastvorom i magnetno mešana sve dok se nije potpuno rastvorila.

Vehikulum: Potrebna zapremina rastvora limunske kiseline, rastvora dinatrijujm fosfata i 0.9% fiziološkog rastora izmerena je u pogodan spremnik i temeljno mešana. pH je izmerena i podešena ako je neophodno (pH 3.5 (60.3) ili pH 2.5 (60.2)) ukapavanjem dodatne limunske kiseline ili rastvora natrijum fosfata prema potrebi.

Rastvor RPL554: Potrebna količina test materijala je izmerena u pogodan spremnik, dopunjena do krajnje zapremine sa vehikulumom i magnetno mešana sve dok se nije potpuno rastvorila. pH je meren i podešen ako je neophodno.

Primer 4 – toksikokinetički profil kod pacova

Rezime

[0056] Han Wistar pacovi (5/polu/grupi) su dozirani inhalacijom samo preko nosa jednom dnevno u ciljnim dozama od 2.4, 8.4 ili 21.6 mg/kg/dan suspenzije RPL554 prema pronalasku tokom 7 uzastopnih dana (grupe 2, 3 i 4). Dodatnih 5 pacova/polu/grupi primili su suspenziju vehikuluma i korišćeni su kao kontrole (grupa 1). Trajanje primene doze bilo je 240 minuta svakog dana. Na kraju perioda tretmana, sve preživele životinje su eutanazirane i na njima je izvršena autopsija. Prateće životinje (3/polu/grupi) su slično dozirane i uzimana im je krv na dan 7 za toksikokinetičku analizu. Dodatna grupa pratećih životinja (3/polu) su dozirane inhalacijom samno preko nosa jednom dnevno u ciljnoj dozi od 2.4 mg/kg/dan rastvora RPL554 za poređenje sa suspenzijom RPL554 i uzimana im je krv na dan 7 za toksikokinetičku analizu (grupa 5). Srednje koncentracije u aerosolu i postignute doze su predstavljene u Tabeli 8 u daljem tekstu.

Tabela 8 – Srednje koncentracije u aerosolu i postignute doze

Toksikokinetički rezultati

[0057] Toksikokinetički profil suspenzije RPL554 je meren u različitim dozama (grupe 2, 3 i 4). Ovo je upoređivano sa toksikokinetičkim profilom poznatog rastvora RPL554 (grupa 5). Doze primenjene na grupu 2 i grupu 5 su slične. Grupa 1 je kontrolna grupa.

[0058] Toksikokinetički parametri RPL554 u obliku suspenzije (pronalazak) ili rastvora (komparativni) procenjivani su na dan 7 nedelje 1 dnevnog inhalacionog izlaganja pacova kompozicijima RPL554. Rezultati su prikazani u Tabelama 10 i 11 u daljem tekstu. Mereni parametri su maksimalna koncentracija RPL554 u krvnoj plazmi pacova (Cmax), vreme potrebno da se dostigne Cmax (Tmax) i površina ispod krive doze posle 8 časova (AUC8h).

Tabela 10 - toksikokinetički rezultati za mužjake pacova

Tabela 11 - toksikokinetički rezultati za ženke pacova

[0059] Ovi rezultati pokazuju da je moguće dostići značajno više vrednosti Cmax upotrebom tečne farmaceutske kompozicije prema pronalasku (npr. grupe 3 i 4) u poređenju sa kompozicijom rastvora (grupa 5). Doza ograničena rastvorljivošću izvodljiva iz rastvora RPL554 sprečava da se takve Cmax vrednosti dostignu sa kompozicijom rastvora. Takođe je pokazano da kompozicije suspenzije imaju odloženo oslobađanje, sa većim Tmax vrednostima zabeleženim za grupe 2 do 4.

Primer 5 – toksikokinetički profil kod pasa

[0060] Toksikokinetički profili suspenzija RPL554 prema pronalasku su procenjivani za bigl pse. Dizajn studije je naveden u Tabeli 12 u daljem tekstu.

Tabela 12 – dizajn studije, doze i nominalne koncentracije

[0061] Životinje su primale test supstancu, RPL554, primenom putem inhalacije u trajanju od 3 dana u svakoj dozi u fazi varijabilne doze (faza 1), sa najmanje 2-dnevnim periodom ispiranja između doza. U fazi konstantne doze (faza 2), životinje su primile test supstrancu tokom 7 uzastopnih dana. U unakrsnoj fazi (faza 3), životinje su primile test supstancu kao jedno izlaganje formulaciji suspenzije 2 dana posle doze praćeno jednim izlaganjem komparativnoj formulaciji rastvora.

Toksikokinetički rezultati

[0062] 7 dana posle doziranja u 9.82 mg/kg/dan sa suspenzijom RPL554 (grupa 2), Cmaxvrednosti za mužjake i ženke su bile 116 ng/mL i 95.9 ng/mL, respektivno, i AUC6h vrednosti za mužjake i ženke bile su 389 ng.h/mL i 289 ng.h/mL, respektivno.

[0063] Posle jednog izlaganja suspenziji RPL554 u 0.395 mg/kg, Cmaxvrednosti za mužjake i ženke bile su 13.4 ng/mL i 12.7 ng/mL, respektivno, i AUC6h vrednosti za mužjake i ženke bile su 33.9 ng.h/mL i 31.5 ng.h/mL, respektivno.

[0064] Posle jednog izlaganja rastvoru RPL554 u 0.543 mg/kg, Cmaxvrednosti za mužjake i ženke bile su 40.9 ng/mL i 34.2 ng/mL, respektivno, i AUC6h vrednosti za mužjake i ženke bile su 74.6 ng.h/mL i 62.8 ng.h/mL, respektivno.

[0065] Ovde je zabeleženo da je moguće postići visoke Cmaxi AUC vrednosti upotrebom suspenzije RPL554 prema pronalasku (npr.116 ng/mL i 95.9 ng/mL).

[0066] Toksikokinetički rezultati takođe potvrđuju da formulacija suspenzije daje odloženo oslobađenje u poređenju sa formulacijom rastvora. Ovo se može videti iz podataka iz faze 3 eksperimenta (posebne pojedinačne doze formulacije suspenzije). Ovi podaci su predstavljeni u Tabeli 13 u daljem tekstu, gde je formulacija rastvora (ciljna doza 0.5 mg/kg/dan, stvarna 0.543 mg/kg/dan) upoređivana sa formulacijom suspenzije (ciljna doza 0.5 mg/kg/dan, stvarna 0.395 mg/mg/dan). Tabela 13 prikazuje koncentracije u plazmi (ng/mL) tokom vremena posle tretmana sa jednom dozom suspenzije ili jednom dozom rastvora. Dva tretmana su izvedena sa razmakom od dva dana. Podaci za sva tri psa su predstavljeni: jedan mužjak psa (61) i dve ženke psa (62 i 64). BLQ označava koncentracije u plazmi manje od 1.00 ng/mL.

Tabela 13 – Vrednosti koncentracije RPL554 u plazmi (ng/mL) za 3 psa posle doze sa suspenzijom RPL554 i rastvorom RPL554

[0067] Podaci u Tabeli 13 pokazuju da formulacije suspenzije RPL554 dovode do profila odloženijeg oslobađanja od formulacije rastvora RPL554. Na primer, koncentracija RPL554 u plazmi ispod detektabilne granice 4 časa posle inhalacije formulacije rastvora za sve pse, dok je najmanje 1.4 ng/mL RPL554 prisutno posle 4 časa u krvnoj plazmi za sve pse posle inhalacije suspenzije.

Primer 6 – funkcija pluća kod zamorčića

Uvod

[0068] RPL554 uzrokuje bronhoprotekciju protiv intravenski primenjenih spazmogenih sredstava kada su primenjena kao suvi prah ili kada su pripremljena kao rastvor u zaskišeljenom (pH 2.5) fiziološkom rastvoru.

[0069] Ovaj funkcionalni antagonizam (1.5 udvostručavajuće razblaženje tj.2.8-struko) protiv metaholina takođe je potvrđen kod humanih astmatičnih subjekata (Franciosi et al., 2013). U ovom primeru procenjivana je bronhoprotekcija obezbeđena preko RPL554 kada je predstavljen kao nova formulacija suspenzije za nebulizacije.

Metodologija

Izlaganje leku

[0070] Mužjaci Dunkin Hartley zamorčića (300-400 g) su postavljeni u aerosol komore izgrađene po narudžbini i izloženi vehikulumu (0.9% fiziološki rastvor pH 2.5), RPL554 (2.5 mg/mL rastvor) ili RPL554 (1 mg/mL rastvor) tokom perioda od 15 min. Aerosolovi su generisani upotrebom ultrazvučnog nebulizatora (Ultraneb 99) i stopa protoka od 1 L/min je korišćena za usmeravanje nebuliziranog rastvora u aerosol komoru koja je sadržala 4 grane koje omogućavaju da životinje budu zadržane sa njihovim gornjim respiratornim traktom (tj. nosom) koji je isturen u aerosol komoru.

[0071] Posle ovog perioda izlaganja od 15 min, žiovotinjama je omogućeno da se oporave i pre izlaganja leku posle 2 časa i 5 časa, životinje su anestezirane sa uretanom (1.5 g/kg) i rez srednje linije je napravljen da bi se izložila traheja. Izvedena je traheostomija, i trahealna kanila je postavljena na mesto i vezana za pneumotahograf koji je zatim vezan za Validyne pretvarač pritiska (+ 2 cmH2O) za detekciju protoka. Promene u protoku vazduha od daha do daha merene su upotrebom sistema za beleženje funkcije pluća (LFR, verzija 9, Mumed UK) i prikazane u realnom vremenu na kompjuteru. Signal protoka je integrisan da bi se dobila mera disajnog volumena.

[0072] Kanila je inserirana u torakalanu šupljinu između 3. i 5. interkostalnog prostora i vezana za negativnu stranu Validyne pretvarača pritiska (+ 20 cmH2O). Pozitivna strana pretvarača pritiska je vezana za stranu pneumotahografa proksimalno prema životinji, u cilju dobijanja mere transpulmonarnog pritiska (TPP: razlika između usta i torakalnog pritiska). Parametri funkcije pluća, ukupna rezistencija disajnih puteva (RL; cmH2O.s/L) i dinamični komplajans pluća (mL/cmH2O) izvedeni su iz svake mere protoka, disajnog volumena i TPP pomoću postupka integracije. Karotidna arterija je kanulirana za merenje krvnog pritiska, respektivno. Krive kumulativne koncentracije-efekta su ustanovljene i provokaciona koncentracija (PC) acetilholina koja je kumulativno proizvela 50% povećanje u RL (PC50).

Izlaganje acetilholinu

[0073] Bronhokonstrikcija na acetilholin (0.25 do 16 mg/mL, 4 sek. izlaganje) je praćena 2 časa i 5 časova posle primene rastvora RPL554 (1 i 2.5 mg/mL) ili vehikuluma (zakišeljeni fiziološki rastvor pH 3.5 ili pH 2.5). Aerosolovi acetilholina su generisani sa Aeroneb® Lab Nebulizer (Aerogen Inc). Priliv je usmeren preko pneumotahografa za merenje respiratorne mehanike pluća, ili je napravljen šant preko nebulizatora za svrhe isporuke leka direktno u pluća (respiratorna mehnika nije merena u toku perioda izlaganja od 4 sekunde).

[0074] U posebnim serijama eksperimenata, plućna funkcija je izvedena 2 i 5 časova posle inhalacije nove formulacije suspenzije RPL554 (2.5 mg/mL i 10 mg/mL) i vehikuluma.

Rezultati

Polazni parametri

[0075] Polazna ukupna rezistencija pluća (RL), dinamički komplajans pluća (Cdyn), srednji arterijski krvni pritisak (BP) i izlaz nebulizatora mereni su kod životinja prethodno izloženih kontroli vehikuluma (fiziološki rastvor pH 2.5), i formulacijama rastvora RPL554 (1 mg/mL ili 2.5 mg/mL, Slika 1) i novim formulacijama suspenzije RPL554 (2.5 mg/mL i 10 mg/mL, Slika 2). Polazni respiratorni i kardiovaskularni parametri su pripremljeni pre izlaganja acetilholinu i praćeni su 2 i 5 časova posle fiziološkog rastvora ili izlaganja RPL554 kod anesteziranih zamorčića.

Parametri plućne funkcije

[0076] Uopšteno, RL predstavljaju promene u prečniku disajnih puteva u centralnim disajnim putevima posle aktivacije muskarinskih receptora na glatke mišiće disajnih puteva u ovom regionu pluća. Acetilholin je izabran zbog njegovog kratkog dejstva.

1. Formulacija rastvora RPL554

[0077] Acetilholin primenjen na anestezirane zamorčiće inhalatornim putem uzrokovao je bronhokonstrikcioni odgovor zavisan od doze kao što je određeno preko promena u RL merenim 2 časa i 5 časova posle izlaganja fiziološkom rastvoru i RPL554 (1 mg/mL, 2.5 mg/mL rastvor).

1. 1 – Analiza acetilholin RL PC50

[0078] Post hoc analiza aritmetičke sredine pokazala je značajnu bronhoprotekciju na vremenskoj tački 2 časa za 1 mg/mL rastvor RPL554 (srednja razlika = 3.5 (0.11 - 8.83) mg/mL, P = 0.0445) i 2.5 mg/mL na 2 časa (4.7 (0.4 - 9) mg/mL, P = 0.0357) i 5 časova (3.4 (0.9 - 6) mg/mL, P = 0.0133). Stepen bronhoprotekcije je bio manje očigledan na 5 časova za 1 mg/mL rastvor RPL554 (2.5 (-0.17-5.2) mg/mL, P = 0.0628).

[0079] Zabeležena je značajna razlika između 2 časa (1 mg/mL RPL554, P = 0.0190 nepodešen) i 5 časova (2.5 mg/mL, P = 0.0095 nepodešen) RPL554 rastvora naspram grupe koja je izlagana fiziološkom rastvoru (Slika 1).

2. Nova formulacija suspenzije RPL554

[0080] Acetilholin primenjen na anestezirane zamorčiće preko inhalacionog puta uzrokovao je bronhokonstrikciju zavisnu od doze kao što je određeno preko promena u RL merenom 2 časa i 5 časova posle izlaganja fiziološkom rastvoru i suspenziji RPL554 (2.5 mg/mL i 10 mg/mL). Redukcija u polaznom komplajansu pluća (Cdyn) zavisna od doze takođe je istovremeno beležena posle povećanja koncentracija acetilholina 2 časa i 5 časova posle izlaganja fiziološkom rastvoru i suspenziji RPL554 (2.5 mg/mL i 10 mg/mL).

2.1 – Analiza acetilholina RL PC50

[0081] Analiza varijanse log2 transformisanih podataka za acetilholin RL PC50 otkrila je ukupan efekat leka na 2 časa (P = 0.0238). Za grupu za vreme 2 časa, ovo je reflektovano preko značajne razlike između 10 mg/mL suspenzije RPL554 i grupe koja je izlagana vehikulumu (srednja višestruka razlika = 2.67 (1.12 - 6.36), P < 0.05). Uprkos većoj srednjoj razlici, između RPL554 (10 mg/mL supenzija) naspram vehikuluma na vremenskoj tački od 5 časova 14-struko pomeranje (0.5-400), široki interval poverenja je razlog zašto statistička razlika nije postignuta (Slika 2, gornji panel).

[0082] Podaci za vehikulum na vremenskim tačkama 2 i 5 časova su kombinovani i ponovo analizirani (Slika 2 donji panel). Postojao je ukupan značajni efekat tretmana (P=0.0016) koji je reflektovan preko značajnog stepena bronhoprotekcije sa 2.5 mg/mL suspenzijom RPL554 (2.52-struka (1-5.72), P < 0.05 i 10 mg/mL RPL554 (4.67-struka (2-11), P < 0.05). Na vremenskoj tački od 5 časova, 10 mg/mL suspenzija RPL554 uzrokovala je značajan stepen bronhoprotekcije (2.77-struka (1.3-6.0) (slika 2, donji panel).

Rezime

[0083] RPL554 je inhibirao bronhokonstrikciju indukovanu primenjenim aerosolom acetilholina kada je merena 2 i 5 časova posle izlaganja leku. I formulacije rastvora RPL554 (1 mg/mL, 2.5 mg/mL) i nove formulacije suspenzije RPL554 (2.5 mg/mL, 10 mg/mL) su proizvele statistički značajnu bronhoprotekciju.

Primer 7 – farmakokinetička studija kod ljudi

[0084] Randomizovana, dvostruko-slepa, placebo-kontrolisana studija faze I je izvedena da bi se procenila bezbednost, tolerabilnost i farmakokinetika pojedinačnih inhaliranih doza formulacije suspenzije RPL554 prema pronalasku, primenjena nebulizatorom na zdrave muške subjekte starosti 18 do 50 uključujući granične vrednosti.

[0085] Nominalna doza formulacije suspenzije bila je približno 1.5 mg, koja je uglavnom ekvivalentna 0.018 mg/kg dozi za koju je prethodno pokazano da je dobro tolerisana u kliničkim studijama sa formulacijom rastvora.

[0086] Korišćena formulacija suspenzije bila je sterilna suspenzija za nebulizaciju koja sadrži 1.5 mg mikronizovane supstance leka RPL554 u 5 mL fosfatno puferisanog fiziološkog rastvora na pH 7, sa surfaktantima (Tween 20 i Span 20) (kao što je opisan u Primeru 1 u prethodnom tekstu, ali sa različitom koncentracijom RPL554). Doziranje suspenzije je izvedeno upotrebom standardnog mlaznog nebulizatora (PARI LC Sprint).

[0087] Uzorci krvi (4mL u svakoj vremenskoj tački) su sakupljeni u odgovarajućim vremenskim intervalima posle primene. Uzorci su sakupljeni venipunkturom ili preko postavljene kanile u podlakticu u litijumske heparinske epruvete i odmah su ohlađeni (ledeno kupatilo). Krv je centrifugirana u roku od 15 minuta od sakupljanja. Plazma je odvojena u rashlađenoj centrifugi (oko 4°C) na 1100g u trajanju od 15 minuta i prebačena u polipropilenske epruvete. Zatim je merena koncentracija aktivne supstance.

[0088] Srednje vrednosti rezultata su predstavljene na slici 3, koje prikazuju krive srednje koncentracije za subjekte posle primene formulacija rastvora ili suspenzije. Rezultati za formulaciju rastvora su izvedeni iz prethodne kliničke studije (The Lancet Respiratory Medicine Volume 1, No.9, p.714-727, November 2013) koja je koristila sterilan rastvor za nebulizaciju koji sadrži RPL554 rastvoren u citratno-fosfatno puferisanom fiziološkom rastvoru na pH 3.2. Količina primenjena preko nebulizatora bila je takva da je nominalna doza RPL554 bila 0.018 mg/kg (-1.26 mg za osobu od 70kg).

[0089] Srednji farmakokinetički parametri mereni u toku studije su predstavljeni u Tabeli 14 u daljem tekstu.

Tabela 14

[0090] Vrednosti u Tabeli 14 pokazuju da je formulacija suspenzije prema pronalasku značajno poboljšala farmakokinetički profil u poređenju sa komparativnom formulacijom rastvora. Naročito, i površina ispod krive (AUC) i polu-život su značajno povećani. Ovo pokazuje da formulacija suspenzije obezbeđuje neočekivano poboljšani način pomoću koga RPL554 može biti primenjivan putem inhalacije.

Primer 8 – studija stabilnosti od dvanaest meseci

[0091] Tri serije formulacije suspenzije prema pronalasku su pripremljene sa kompozicijama navedenim u Tabeli 15 u daljem tekstu.

Tabela 15

Analitičko testiranje

[0092] Analitičko testiranje je izvedeno posle 1, 3, 6 i 12 meseci čuvanja formulacija na 25°C i 60% relativne vlažnosti. Rezultati od 12 meseci su opisani u daljem tekstu.

Izgled

[0093] Testiranje izgleda je izvedeno vizuelno na jednom uzorku. Nađeno je da je placebo uzorak bistar, bezbojni rastvor. Uzorci jačine 0.5mg/mL bili su svetlo žuta suspenzija bez vidljivih aglomerata, dok su uzorci jačine 2.5mg/mL i 10mg/mL izgledali kao žute suspenzije bez vidljivih aglomerata.

pH

[0094] Određivanje pH je izvedeno na jednom uzorku. Rezultati su prikazani u Tabeli 16.

Tabela 16

[0095] Nađeno je da sve tri aktivne formulacije i placebo imaju pH od 6.7 na vremenskoj tački od dvanaest meseci. Nije zabeležena promena od početne vremenske tačke.

Analiza

[0096] Testiranje analize je izvedeno u dva ponavljanja. Ključni parameteri postupka su rezimirani kao što sledi:

[0097] Rezultati analize su prikazani u Tabeli 17.

[0098] Rezultati analize za aktivne suspenzije svake jačine na vremenskoj tački od dvanaest meseci nisu pokazali nikakvu promenu od početne vremenske tačke.

Srodne supstance

[0099] Određivanje srodnih supstanci izvedeno je u duplikatu. Ključni parametri postupka su rezimirani kao što sledi.

[0100] Rezultati srodnih supstanci iz određivanja suspenzija su predstavljeni u Tabeli 18. Tabela 18 – Rezultati analize srodnih supstanci za suspenziju RPL554 (kao %LC) serija BN011/14 - (0.5mg/mL) - 25°C/60% relativne vlažnosti

Batch BN010/14- (2.5mg/mL) - 25°C/60%RH

Batch BN009/14 - (10mg/mL) - 25°C/60%RH

[0101] Rezultati srodnih supstanci za aktivne suspenzije svake jačine na vremenskoj tački od dvanaest meseci bili su slični početnoj vremenskoj tački.

Raspodela veličine čestica (PSD)

[0102] Postupak raspodele veličine čestica je izveden upotrebom Spraytec sa podešavanjima detaljno navedenim u daljem tekstu.

Optičke osobine: čestica: RI (stvarno): 1.50 (standardna neprovidna čestica); RI (imaginarna): 0.50; Gustina: 1.00; Disperzant (voda); Disperzant RI: 1.33

Disperzant korišćen za analizu uzorka: 1% polisorbat 20 u dejonizovanoj vodi Podešavanje kontrolne jedinice: Brzina mešalice 1000rpm

Vreme merenja: Vreme uzorkovanja: 30s; Kontrolno vreme: 10s

[0103] Rezultati su prikazani u Tabeli 19.

Tabela 19 – Rezultati iz određivanja veličine čestica putem laserske difrakcije suspenzija RPL554 (u µm)

[0104] Profili raspodele veličine čestica bili su slični za sve 3 jačine na vremenskoj tački od dvanaest meseci i nisu prikazali nikakvu promenu u poređenju sa početnom vremenskom tačkom.

Mikroskopska procena

[0105] Mikroskopska procena je izvedena vizuelnom procenom formulacije upotrebom G3 mikroskopa. Nisu zabeleženi agregati ni u jednoj od testiranih serija, iako su neki veliki rastresiti aglomerati povremeno zabeleženi za 2.5 mg/mL i 10 mg/mL suspenzije. Procena je odredila da nije bilo promene u poređenju sa početnom vremenskom tačkom.

Stopa isporuke i ukupna isporučena doza

[0106] Stopa isporuke i ukupna isporučena doza je izvedena na 3 bočice po seriji. Suspenzije su sipane i isporučene upotrebom kombinacije PARI LC PLUS® nebulizatora / PARI TurboBOY S® kompresora. Rezultati od stopa isporuke i ukupne isporučene doze prikazani su u Tabeli 20.

Tabela 20 – Rezultati iz određivanja stope isporuke i ukupne isporučene doze upotrebom PARI LC PLUS nebulizatora

[0107] Ukupna isporučena doza i stopa isporuke za sve jačine bile su slične početnoj vremenskoj tački. Efikasnost isporuke svih suspenzija bila je u skaldu sa prethodnim vremenskim tačkama.

Aerodinamična raspodela veličine čestica (APSD)

[0108] Određivanje aerodinamične raspodele veličine čestica (APSD) je izvedeno na 3 bočice po seriji po uslovima upotrebom Next Generation Impactor (NGI). Suspenzije su sipane i isporučene upotrebom kombinacije PARI LC PLUS® nebulizatora / PARI TurboBOY S® kompresora. Rezultati iz određivanja APSD predstavljeni su u Tabeli 21. Rezultati su uneti u CITDAS program (verzija 3.10) da bi se izračunala doza finih čestica upotrebom granične vrednosti od 5 µm i rezultati dobijeni iz izračunavanja su takođe predstavljeni u Tabeli 21.

Tabela 21 – Rezultati iz aerodinamične raspodele veličine čestica pomoću NGI (kao mg RPL554) upotrebom PARI LC PLUS nebulizatora

Stabilnost u roku od 12 meseci

[0109] Tabele 22 (za 0.5 mg/mL), 23 (za 2.5 mg/mL) i 24 (za 10 mg/mL) u daljem tekstu kombinuju podatke za 12 meseci opisane u prethodnom tekstu sa odgovarajućim podacima za vremenske tačke od 1, 3 i 6 meseci za formulacije suspenzije RPL554 prema pronalasku.

[0110] (Napomena: Pikovi nečistoća označeni sa * u Tabelama 22, 23 i 24 zabeleženi su kao dvostruki, ali su zabeleženi kao jedan pik na početnoj vremenskoj tački. Ovo je verovatno posledica upotrebe nove kolone koja je dala bolje odvajanje i ne veruje se da je znak razlaganja.)

Rezime

[0111] Suspenzije RPL554 za nebulizaciju 0.5 mg/mL (BN011/14), 2.5 mg/mL (BN010/14) i 10 mg/mL (BN009/14) i srodnog placeba (BN008/14) proizvedene su i postavljene na stabilnost na 25°C/60% relativne vlažnosti i testirane su na vremenskoj tački od 12 meseci.

[0112] Rezultati su pokazali da uglavnom nije bilo promene u bilo kojoj od serija testiranih na vremenskoj tački od 12 meseci i potvrđeno je da su suspenzije RPL554 za nebulizaciju bile stabilne u trajanju od 12 meseci na 25°C/60% relativne vlažnosti.

Primer 9 – analiza na šest meseci na ubrzanim uslovima (40°C/75% relativne vlažnosti)

[0113] Studije ubrzane stabilnosti na 40°C/75% relativne vlažnosti takođe su nastavljene do šest meseci. Rezultati ovih studija su prikazani u Tabeli 25 (za 0.5 mg/mL), Tabeli 26 (za 2.5 mg/mL) i Tabeli 27 (za 10 mg/mL).

[0114] (Kao što je navedeno u Primeru 8, pikovi nečistoće označeni sa * zabeleženi su kao dvostruki, ali su zabeleženi kao jedan pik na početnoj vremenskoj tački. Ovo je verovatno posledica upotrebe nove kolone koja je dala bolje odvajanje i ne veruje se da je znak razlaganja.)

[0115] Rezultati su pokazali da uglavnom nije bilo promene u bilo kojoj od testiranih serija na vremenskoj tački od 6 meseci i potvrđeno je da suspenzije RPL554 za nebulizaciju imaju odličnu stabilnost, stabilne su tokom 6 meseci na 40°C/75% relativne vlažnosti.

Claims (15)

Patentni zahtevi

1. Tečna farmaceutska kompozicija pogodna za primenu putem inhalacije koja sadrži razblaživač i suspenziju čestica 9,10-dimetoksi-2-(2,4,6-trimetilfenilimino)-3-(N-karbamoil-2-aminoetil)-3,4,6,7-tetrahidro-2Hpirimido[6,1-a]izohinolin-4-ona (RPL554) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu čestice RPL554 imaju raspodelu veličine čestica sa Dv50 (srednja veličina čestica prema zapremini) vrednost od 0.2 µm do 5 µm i pri čemu tečna farmaceutska kompozicija ne sadrži količinu veću od 0.1 tež.% ukupno od agonista β2-adrenergičnog receptora i antagonista muskarinskog receptora.

2. Tečna farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što kompozicija ne sadrži agonist β2-adrenergičnog receptora ili antagonist muskarinskog receptora.

3. Tečna farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, naznačena time što čestice RPL554 imaju raspodelu veličine čestica sa Dv50 vrednošću od 0.7 µm do 2.5 µm.

4. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što koncentracija čestica RPL554 u tečnoj farmaceutskoj kompoziciji je od 0.01 mg/mL do 40 mg/mL.

5. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što kompozicija ima pH od 6 do 8.

6. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što dodatno sadrži jedan ili više surfaktanata, poželjno time što su jedan ili više surfaktanata izabrani od jednog ili više nejonskih surfaktanata, poželjnije time što su jedan ili više surfaktanata izabrani od polioksietilen glikol sorbitan alkil estara i sorbitan alkil estara.

7. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što dodatno sadrži jedan ili više pufera, poželjno time što su jedan ili više pufera izabrani od citratnih ili fosfatnih pufera.

8. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što kompozicija sadrži:

(a) čestice RLP554 u koncentraciji od 0.01 mg/mL do 40 mg/mL;

(b) jedan ili više surfaktanata u koncentraciji od 0.01 mg/mL do 5 mg/mL; i

(c) pufer u koncentraciji od 5 mg/mL do 20 mg/mL.

9. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što kompozicija dalje sadrži sredstvo za podešavanje toničnosti, izborno time što je sredstvo za podešavanje toničnosti natrijum hlorid.

10. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što razblaživač je voda.

11. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što kompozicija sadrži:

(a) čestice RLP554 u koncentraciji od 0.01 mg/mL do 30 mg/mL;

(b) polioksietilen glikol sorbitan alkil estar u koncentraciji od 0.1 mg/mL do 2 mg/mL;

(c) sorbitan alkil estar u koncentraciji od 0.01 mg/mL do 0.1 mg/mL;

(d) prvu komponentu fosfatnog pufera u koncentraciji od 5 mg/mL do 10 mg/mL;

(e) drugu komponentu fosfatnog pufera u koncentraciji od 5 mg/mL do 10 mg/mL; i

(f) sredstvo za podešavanje toničnosti u koncentraciji od 2 mg/mL do 8 mg/mL, poželjno time što kompozicija sadrži:

(a) čestice RLP554 u koncentraciji od 0.05 mg/mL do 25 mg/mL;

(b) polioksietilen (20) sorbitan monolaurat (Polisorbat 20, Tween 20) u koncentraciji od 0.1 mg/mL do 2 mg/mL;

(c) sorbitan monolaurat (Span 20) u koncentraciji od 0.01 mg/mL do 0.1 mg/mL;

(d) mononatrijum fosfat monohidrat u koncentraciji od 5 mg/mL do 10 mg/mL;

(e) anhidrovani dinatrijum fosfat u koncentraciji od 5 mg/mL do 10 mg/mL; i

(f) natrijum hlorid u koncentraciji od 2 mg/mL do 8 mg/mL.

12. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što je pogodna za primenu pomoću nebulizatora.

13. Nebulizator koji sadrži tečnu farmaceutsku kompoziciju pogodnu za primenu putem inhalacije koja sadrži razblaživač i suspenziju čestica 9,10-dimetoksi-2-(2,4,6-trimetilfenilimino)-3-(N-karbamoil-2-aminoetil)-3,4,6,7-tetrahidro-2H-pirimido[6,1-a]izohinolin-4-ona (RPL554) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu čestice RPL554 imaju raspodelu veličine čestica sa Dv50 (srednja veličina čestica prema zapremini) vrednošću od 0.2 µm do 5 µm.

14. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12 za upotrebu u lečenju ljudskog ili životinjskog tela.

15. Tečna farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12 za upotrebu u lečenju ili prevenciji bolesti ili stanja izabranog od astme, alergijske astme, polenske groznice, alergijskog rinitisa, bronhitisa, emfizema, bronhiektazisa, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), adultnog respiratornog distres sindroma (ARDS), astme rezistentne na steroide, teške astme, pedijatrijske astme, cistične fibroze, fibroze pluća, plućne fibroze, intersticijalne bolesti pluća, poremećaja kože, atopijskog dermatitisa, psorijaze, okularne inflamacije, cerebralne ishemije, inflamatornih bolesti i autoimunih bolesti, poželjno pri čemu je bolest ili stanje hronična opstruktivna bolest pluća (COPD).