RS57483B1 - Konjugati antitela i leka (adc) koji se vezuju za 191p4d12 proteine - Google Patents

Konjugati antitela i leka (adc) koji se vezuju za 191p4d12 proteine

Info

Publication number
RS57483B1
RS57483B1 RS20180854A RSP20180854A RS57483B1 RS 57483 B1 RS57483 B1 RS 57483B1 RS 20180854 A RS20180854 A RS 20180854A RS P20180854 A RSP20180854 A RS P20180854A RS 57483 B1 RS57483 B1 RS 57483B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
cancer
drug conjugate
amino acid
drug
Prior art date
Application number
RS20180854A
Other languages
English (en)
Inventor
Daulet Satpaev
Robert Kendall Morrison
Karen Jane Meyrick Morrison
Jean Gudas
Aya Jakobovits
Michael Torgov
Zili An
Original Assignee
Agensys Inc
Seattle Genetics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45871300&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS57483(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Agensys Inc, Seattle Genetics Inc filed Critical Agensys Inc
Publication of RS57483B1 publication Critical patent/RS57483B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6857—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from lung cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6859—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from liver or pancreas cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6861—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from kidney or bladder cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • A61N5/1001—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy using radiation sources introduced into or applied onto the body; brachytherapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3015—Breast
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3023—Lung
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3038—Kidney, bladder
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Pronalazak opisan ovde odnosi se na antitela, njihove vezujuće fragmente i konjugate antitela i leka (ADC), koji se vezuju za proteine, nazvane 191P4D12. Ovaj pronalazak dalje se odnosi na prognostičke, profilaktičke i terapeutske postupke i kombinacije korisne u lečenju kancera koji eksprimira 191P4D12.
POZADINA PRONALASKA
[0002] Kancer je drugi vodeći uzrok smrti ljudi posle koronarne bolesti. Širom sveta, milioni ljudi umiru od kancera svake godine. Samo u Sjedinjenim Državama, kako je prijavljeno od strane Američkog udruženja za borbu protiv kancera, kancer izaziva smrt dosta preko pola miliona ljudi svake godine, sa preko 1,2 miliona novih slučajeva dijagnostifikovanih po godini. Dok smrti od srčane bolesti značajno opadaju, one do kojih dolazi zbog kancera uopšteno su u usponu. Predviđa se da će u prvom periodu sledećeg veka kancer postati vodeći uzrok smrti.
[0003] Širom sveta, nekoliko kancers ističe se kao vodeće ubice. Naročito, karcinomi pluća, prostate, dojke, kolona, pankreasa, jajnika i bešike predstavljaju primarne uzroke smrti zbog kancera. Ovi i praktično svi ostali karcinomi dele zajedničku letalnu karakteristiku. Sa samo nekoliko izuzetaka, metastatska bolest od karcinoma je fatalna. Štaviše, čak i za one pacijente sa kancerom koji su inicijalno preživeli njihove primarne kancere, zajedničko iskustvo pokazalo je da su se njihovi životi drastično promenili. Mnogi pacijenti sa kancerom doživljavaju jake anksioznosti izazvane svesnošću od mogućnosti vraćanja ili neuspeha lečenja. Mnogi pacijenti sa kancerom doživljavaju fizička slabljenja nakon lečenja. Dalje, mnogi pacijenti sa kancerom doživljavaju vraćanje bolesti.
[0004] Širom sveta, kancer prostate je četvrti najčešći kancer kod muškaraca. U Severnoj Americi i Severnoj Evropi, to je do sada jačešći kancer kod muškaraca i drugi je vodeći uzrok smrti od kancera kod muškaraca. Samo u Sjedinjenim Državama, preko 30.000 muškaraca umre godišnje od ove bolesti – drugi samo od kancera pluća. Uprkos veličini ovih cifara, ne postoji još uvek efikasan tretman protiv metastatskog kancera prostate. Hirurška prostatektomija, terapija zračenjem, hormonska terapija ablacije, hirurška kastracija i hemoterapija i dalje su glavni modaliteti lečenja. Nažalost, ova lečenja su neefikasna za mnoge i često su povezana sa neželjenim posledicama.
[0005] Na polju dijagnostike, nedostatak tumor markera prostate koji može precizno da otkrije ranu fazu, lokalizovani tumori ostaju značajno ograničeni u dijagnozi i upravljanju ovom bolesti. Iako je ispitivanje prostatičnog specifičnog antigena (PSA) u serumu veoma koristan alat, njegova specifičnost i opšta upotreba široko se smatra nedostatkom u nekoliko važnih aspekata.
[0006] Napredak u identifikaciji dodatnih specifičnih markera za kancer prostate poboljšan je stvaranjem ksenografti kancera prostate koji mogu rekapitulisati različite faze bolesti kod miševa. LAPC (Los Anđeles kancer prostate) ksenografti su ksenografti kancera prostate koji su preživeli prolaz u miševe sa teškom kombinovanom imunodeficijencijom (SCID) i pokazali su sposobnost da imitiraju tranziciju od zavisnosti od androgena do nezavisnosti od androgena (Klein et al., 1997, Nat. Med.3:402). Nedavno identifikovani markeri za kancer prostate uključuju PCTA-1 (Su et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 7252), prostata-specifični membranski antigen (PSMA) (Pinto et al., Clin Kancer Res 1996 Sep 2 (9): 1445-51), STEAP (Hubert, et al., Proc Natl Acad Sci USA.1999 Dec 7; 96(25): 14523-8) i antigen matičnih ćelija prostate (PSCA) (Reiter et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 1735).
[0007] Dok su prethodno identifikovani markeri kao što je PSA olakšali napore za dijagnostifikovanje i lečenje kancera prostate, postoji potreba za identifikovanjem dodatnih markera i terapeutskih ciljeva za kancer prostate i povezane kancere da bi se dalje poboljšala dijagnoza i terapija. Procenjeno je 130.200 slučajeva kolorektalnog kancera koji u se javili 2000. u Sjedinjenim Državama, uključujući 93.800 slučajeva kancera kolona i 36.400 rektalnog kancera.
[0008] Kolorektalni kanceri su treći najčešći kanceri kod muškaraca i žena. Stope incidencije značajno su opale tokom 1992.-1996. (-2,1% po godini). Istraživanje ukazuje da su ova opadanja usled povećanja skrininga i uklanjanja polipa, prevencije progresije polipa u invazivne kancere. Bilo je procenjeno 56.300 smrti (47.700 od kancera kolona, 8.600 od rektalnog kancera) u 2000., računajući oko 11% svih smrti od kancera u U.S.
[0009] Sada, operacija je najčešći oblik terapije za kolorektalni kancer, i za kancere koji se ne šire, ona je često lekovita. Hemoterapija, ili hemoterapija plus zračenje, primenjuje se pre ili posle operacije na većinu pacijanata čiji je kancer duboko perforirao zid creva ili se raširio na limfne čvorove. Stalna kolostomija (stvaranje abdominalnog otvora za eliminisanje telesnih otpada) povremeno je potrebna za kancer kolona i retko je potrebna za rektalni kancer. I dalje postoji potreba za efikasnom dijagnozom i modalitetima lečenja za kolorektalni kancer.
[0010] Od svih novih slučajeva kancera u Sjedinjenim Državama, kancer bešike predstavlja približno 5 procenata kod muškaraca (peta najčešća neoplazma) i 3 procenata kod žena (osma najčešća neoplazma). Incidencija se poloako povećava, istovremeno sa povećanjem starije populacije. U 1998., procenjeno je 54.500 slučajeva, uključujući 39.500 muškaraca i 15.000 žena. Starosno podešena incidencija u Sjedinjenim Državama je 32 po 100.000 za muškarce i osam po 100.000 za žene. Istorijski muškarci/žene odnos od 3:1 može biti smanjen u odnosu na obrazce pušenja kod žena. Procenjeno je 11.000 smrti od kancera bešike u 1998. (7.800 muškaraca i 3.900 žena). Incidencija kancera bešike i mortalitet snažno se povećavaju sa godinama i biće rastući problem kako populacija postaje sve starija.
[0011] Najviše se kanceri bešike vraćaju u bešiki. Kancer bešike se upravlja kombinacijom transuretralne resekcije bešike (TUR) i intravezikalne hemoterapije ili imunoterapije. Multifokalna i rekurentna priroda kancera bešike ukazuje na ograničenja TUR. Najviše kancera mišićno-invazivnog tipa ne leče se samo sa TUR. Radikalna cistektomija i urinarna diverzija je najefikasnije sredstvo za eliminisanje kancera, ali nosi nepobitan uticaj na urinarnu i seksualnu funkciju. I dalje postoji značajna potreba za modalitetima lečenja koji su korisni za pacijente sa kancerom bešike.
[0012] Procenjeno je 164.100 novih slučajeva kancera pluća i bronhijalnog kancera u 2000., računajući 14% svih dijagnoza kancera u U.S. Stopa incidencije kancera pluća i bronhijalnog kancera značajno opada kod muškaraca, od visokih 86,5 po 100.000 u 1984. do 70,0 u 1996.1990.-ih, stopa rasta među ženama počela je da usporava. U 1996., stopa incidencije kod žena bila je 42,3 po 100.000.
[0013] Kancer pluća i bronhijalni kancer uzrokovali su procenjenih 156.900 smrti u 2000., računajući 28% svih smrti od kancera. Tokom 1992.-1996., mortalitet od kancera pluća značajno opada kod muškaraca (-1,7% po godini) dok su stope kod žena i dalje značajno rasle (0,9% po godini). Od 1987. više žena umiralo je svake godine od kancera pluća nego od kancera dojke, što je, tokom 40 godina, bio glavni uzrok smrti od kancera kod žena. Opadajuće stope incidencije kancera pluća i mortaliteta najverovatnije rezultuju iz smanjenja stopa pušenja tokom prethodnih 30 godina; međutim, opadanje obrazaca pušenja kod žena zaostaje za onima muškaraca. Zabrinutost, iako su opadanja u upotrebi duvana kod odraslih usporila, upotreba duvana kod omladine je opet u porastu.
[0014] Opcije lečenja kancera pluća i bronhijalnog kancera određuju se na osnovu tipa i faze kancera i uključuju operaciju, terapija zračenjem i hemoterapiju. Za mnoge lokalizovane kancere, operacija je obično tretman izbora. Zbog toga što se bolest obično širi vremenom otkriveno je da su terapija zračenjem i hemoterapija obično potrebni u kombinaciji sa operacijom. Hemoterapija sama ili u kombinaciji sa zračenjem je tretman izbora za kancer malih ćelija pluća; pri čemu na ovom režimu, veliki procenat pacijenata doživi remisiju koja je u nekim slučajevima dugotrajna. Međutim, postoji stalna potreba za efektivnim lečenjem i dijagnostičkim pristupima za kancere pluća i bronhijalne kancere.
[0015] Očekuje se da će se procenjenih 182.800 novih invazivnih slučajeva kancera dojke javiti među ženama u Sjedinjenim Državama tokom 2000. Dodatno, očekuje se da će se oko 1.400 novih slučajeva kancera dojke dijagnostifikovati kod muškaraca u 2000. Nakon povećanja od oko 4% godišnje 1980.-ih, stope incidencije kancera dojke kod žena izjednačile su se 1990.-ih sa oko 110,6 slučajeva po 100.000.
[0016] Samo u U.S., procenjeno je 41.200 smrti (40.800 žena, 400 muškaraca) u 2000. zbog kancera dojke. Kancer dojke je na drugom mestu među smrtima od kancer kod žena. Prema nedavnim podacima, stope mortaliteta značajno su opale tokom 1992.-1996. sa najvećim padom kod mlađih žena, i bele i crne rase. Ova opadanja verovatno su bila rezultat ranije detekcije i poboljšanog lečenja.
[0017] Uzimajući u obzir medicinske okolnosti i preferencije pacijenata, lečenje kancera dojke može da uključuje lumpektomiju (lokalno uklanjanje tumora) i uklanjanje limfnih čvorova ispod pazuha; mastektomiju (hirurško uklanjanje dojke) i uklanjanje limfnih čvorova ispod pazuha; terapija zračenjem; hemoterapiju; ili hormonsku terapiju. Često, dva ili više postupaka koriste se u kombinaciji. Brojne studije pokazale su da su, za bolest u ranoj fazi, dugoročne stope preživljavanja nakon lumpektomije plus radioterapije slične stopama preživljavanja nakon modifikovane radikalne mastektomije. Značajne prednosti u tehnikama rekonstrukcije obezbeđuju nekoliko opcija za reknstrukciju dojke nakon mastektomije. Nedavno, takva rekonstrukcija izvedena je u isto vreme kada i mastektomija.
[0018] Lokalna ekscizija duktalnog karcinoma in situ (DCIS) sa dovoljnim količinama okružujućeg normalnog tkiva dojke može da spreči lokačno vraćanje DCIS. Zračenje dojke i/ili tamoksifen može da smanji šansu da se DCIS javi u preostalom tkivu dojke. Ovo je važno jer DCIS, ako leva nije tretirana, može da se razvije u invazivni kancer dojke. Pored toga, postoje ozbiljni neželjeni efekti ili posledice ovih lečenja. Prema tome, postoji potreba za efikasnim lečenjima kancera dojke.
[0019] Procenjeno je 23.100 novih slučajeva kancera jajnika u Sjedinjenim Državama u 2000. To čini 4% svih kancera među ženama i drugi je među ginekološkim kancerima. Tokom 1992.-1996., stope incidencije kancera jajnika značajno su opale. Procenjeno je 14.000 slučajeva smrti u 2000. kao posledica kancera jajnika. Kancer jajnika izaziva više smrti nego bilo koji drugi kancer ženskog reproduktivnog sistema.
[0020] Operacija, terapija zračenjem i hemoterapija su opcije lečenja kancera jajnika. Operacija obično uključuje uklanjanje jednog ili oba jajnika, jajovoda (salpingo-ooforektomija), i materice (histerektomija). Kod nekih veoma ranih tumora, samo uključen jajnik biće uklonjen, naročito kod mladih žena koje žele decu. U uznapredovaloj bolesti, napravljen je pokušaj da se ukloni sva intra-abdominalna bolest da bi se poboljšao efekat hemoterapije. I dalje postoji značajna potreba za efikasnim opcijama lečenja kancera jajnika.
[0021] Procenjeno je 28.300 novih slučajeva kancera pankreasa u Sjedinjenim Državama u 2000. Tokom prethodnih 20 godina, stope kancera pankreasa opale su kod muškaraca. Stope među ženama ostaju približno konstantne ali možda počnu da opadaju. Kancer pankreasa izazvao je procenjenih 28.200 smrti 2000. u Sjedinjenim Državama. Tokom poslednjih 20 godina, postoji mali ali značajan pad u stopama mortaliteta među mučkarcima (oko – 0,9% godišnje) dok stope blago rastu među ženama.
[0022] Operacija, terapija zračenjem i hemoterapija su opcije lečenja kancera pankreasa. Ove opcije lečenja mogu da produže preživljavanje i/ili olakšaju simptome kod mnogih pacijenata ali ali verovatno neće proizvesti lekovito dejstvo za većinu. Postoji značajna potreba za dodatnim terapeutskim i dijagnostičkim opcijama kancera. Ovo uključuje upotrebu antitela, vakcina, i malih molekula kao modaliteta lečenja. Dodatno, takođe postoji potreba da se koriste ovi modaliteti kao alati istraživanja za dijagnozu, detektovanje, praćenje i dalje stanje tehnike u svim oblastima lečenja kancera i studijama.
[0023] Terapeutska korist monoklonalnih antitela (mAb) (G. Kohler and C. Milstein, Nature 256:495-497 (1975)) realizovana je. Monoklonalna antitela sada su odobrene kao terapije u transplantaciji, kod kancera, infektivne bolesti, kardiovaskularne bolesti i zapaljenja. Različiti izotipovi imaju različite efektorske funkcije. Takve razlike u funkciji reflektuju se u posebnim 3-dimenzionalnim strukturama za razne izotipove imunoglobulina (P.M. Alzari et al., Annual Rev. Immunol., 6:555-580 (1988)).
[0024] Zbog toga što su miševi pogodni za imunizaciju i prepoznavanje najviše humanih antigena kao stranih, mAb protiv humanih ciljnih mesta sa terapeutskim potencijalom obično su mišjeg porekla. Međutim, mišja mAb imaju inherentne nedostatke kao humani terapijski agensi. Oni zahtevaju češće doziranje jer mAb imaju kraći cirkulišući poluživot kod ljudi nego humana antitela. Kritičnije, ponovljeno davanje mišjih antitela humanom imunom sistemu izaziva da humani imuni sistem reaguje prepoznavanjem mišjeg proteina kao stranog i generisanje odgovora na humano anti-mišje antitelo (HAMA). Takav HAMA odgovor može da rezultuje alergijskom reakcijom i brzim čišćenjem mišjeg antitela iz sistema što čini lečenje mišjim antitelom bezkorisnim. Da bi se izbegli takvi efekti, načinjeni su pokušaji da se stvore humani imuni sistemi unutar miševa.
[0025] Nadalo se da će inicijalni pokušaji da stvore transgene miševe koji mogu da odgovore na antigene sa antitelima koji imaju humane sekvence (videti Bruggemann et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 86:6709-6713 (1989)), ali su bili ograničeni količinom DNK koja je mogla da se stabilno održi dostupnim nosačima za kloniranje. Upotreba vektora veštačkog hromozoma kvasca (YAC) za kloniranje vodi put ka uvođenju velikih fragmenata germinativne linije humanog Ig lokusa u transgenim sisarima. U suštini većina humanih gena V, D i J regiona, raspoređenih sa istim razmakom pronađenim u humanom genomu i humanim konstantnim regionima, uvedena je u miševe upotrebom YAC. Jedan takav transgeni mišji soj poznat je kao XenoMouse® miševi i komercijalno je dostupan od Amgen Fremont, Inc. (Fremont CA).
[0026] Prijava patenta AU 2008202217 A1 (Agensys In.), 5. jun 2008.) opisuje gen od 191P4D12(b) i njegov kodirani protein. Antitela ili T-ćelije reaktivne sa 191P4D12(b) mogu da se koriste u aktivnoj ili pasivnoj imunizaciji. Dalje se navodi da antitela mogu takođe da budu konjugovana sa prolekom protiv kancera koji aktivira enzim koji može da konvertuje prolek u njegov aktivan oblik. Međutim, antitela nisu okarakterisana svojim sekvencama i ne koriste se u kombinaciji sa monometil auristatinima kao citotoksičnim agensom kao jednim od glavnih jedinjenja.
SAŽETAK PRONALASKA
[0027] Ovaj pronalazak obezbeđuje antitela, njihove vezujuće fragmente i konjugate antitela i leka (ADC) koji se vezuju za 191P4D12 proteine i polipeptidne fragmente 191P4D12 proteina. U nekim primerima izvođenja, ovaj pronalazak obuhvata potpuno humana antitela konjugovana sa terapeutskim agensom. U određenim primerima izvođenja, postoji uslov da cela sekvenca nukleinske kiseline sa Fig.3 nije kodirana i/ili da cela aminokiselinska sekvenca sa Fig.2 nije pripremljena. U određenim primerima izvođenja, cela sekvenca nukleinske kiseline sa Fig.3 je kodirana i/ili cela aminokiselinska sekvenca sa Fig.2 je pripremljena, a bilo koja od njih je u odgovarajućim humanim jediničnim doznim oblicima.
[0028] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje razne imunogenske ili terapeutske kombinacije, kao što su konjugati antitela i leka, i strategije lečenja kancera koji eksprimira 191P4D12 kao što su kanceri tkiva dati u Tabeli I.
KRATAK OPIS SLIKA
[0029]
Fig.1. cDNK i aminokiselinska sekvenca od 191P4D12 prikazana je na Fig.1. Startni metionin je podvučen. Otvoreni okvir čitanja pruža se od nukleinske kiseline 264-1796 uključujući stop kodon.
Fig.s 2A-B. Nukleinska kiselina i aminokiselinske sekvence 191P4D12 antitela. Fig.2A. cDNK i aminokiselinska sekvenca Ha22-2(2,4)6.1 teškog lanca. Dvostruko je podvučena vodeća sekvenca, podvučen je varijabilni region teškog lanca, a podvučen isprekidanom linijom je humani IgG1 konstantni region. Fig.2B. cDNK i aminokiselinska sekvenca Ha22-2(2,4)6.1 lakog lanca. Dvostruko je podvučena vodeća sekvenca, podvučen je varijabilni region lakog lanca, a podvučen isprekidanom linijom je humani kapa konstantni region.
Fig.3A-B. Aminokiselinske sekvence 191P4D12 antitela. Fig.3A. Aminokiselinska sekvenca Ha22-2(2,4)6.1 teškog lanca. Dvostruko je podvučena vodeća sekvenca, podvučen je varijabilni region teškog lanca, a podvučen isprekidanom linijom je humani IgG1 konstantni region. Fig. 3B. Aminokiselinska sekvenca Ha22-2(2,4)6.1 lakog lanca. Dvostruko je podvučena vodeća sekvenca, podvučen je varijabilni region lakog lanca, a podvučen isprekidanom linijom je humani kapa konstantni region.
Fig.4A-B. Poravnanje Ha22-2(2,4)6.1 antitela sa germinativnom linijom humanog Ig. Fig. 4A. Poravnanje Ha22-2(2,4)6.1 teškog lanca sa germinativnom linijom humanog Ig. Fig. 4B. Poravnanje Ha22-2(2,4)6.1 lakog lanca sa germinativnom linijom humanog Ig.
Fig.5A-B. Testovi vezivanja Ha22-2(2,4)6.1 MAb. Fig.5A: PACOVSKE-kontrolne i PACOVSKE-191P4D12 ćelije obojene su sa Ha22-2(2,4)6.1 MAb iz ili hibridoma ili CHO ćelija. Vezivanje je detektovano protočnom citometrijom. Rezultati pokazuju da se Ha22-2(2,4)6.1 MAb rekombinantno eksprimirano u CHO ćelijama izlučuje i vezuje specifično za ćelijski površinski 191P4D12. Fig.5B: Ha22-2(2,4)6.1 MAb iz ili hibridoma ili CHO ćelija ispitivan je za vezivanje za rekombinantni 191P4D12 prečišćeni ekstracelularni protein pomoću ELISA. Rezultati pokazuju da je 191P4D12 protein koji se vezuje za Ha22-2(2,4)6.1 izveden iz CHO i hibridoma bio identičan.
Fig.6. Određivanje Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE afiniteta pomoću FACS upotrebom PC3-humanih-191P4D12 ćelija. Afinitet je 0,69 Kd.
Fig.7. Određivanje Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE afiniteta pomoću FACS upotrebom PC3-cinomolgusnih-191P4D12 ćelija. Afinitet je 0,34 Kd.
Fig.8. Određivanje Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE afiniteta pomoću FACS upotrebom PC3-pacovskih-191P4D12 ćelija. Afinitet je 1,6 Kd.
Fig.9A-D. Ćelijska citotoksičnost posredovana Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE. Fig.9A: Test ćelijske citotoksičnosti upotrebom PC3-humanih-191P4D12 ćelija. Fig.9B: Test ćelijske citotoksičnosti upotrebom PC3-cinomolgusnih-191P4D12 ćelija. Fig.9C: Test ćelijske citotoksičnosti upotrebom PC3-pacovskih-191P4D12 ćelija. Fig.9D: Test ćelijske citotoksičnosti upotrebom PC3-Neo ćelija.
Fig.10. Domensko mapiranje Ha22-(2,4)6.1 MAb pomoću FACS.
Fig.11. Ha22-2(2,4)6.1 MAb domensko mapiranje pomoću Western Blot analize.
Fig.12. Evaluacija Ha22-2(2,4)6.1 MAb u modelu formiranja subkutanog tumora humanog ksenografta kancera pluća AG-L4 u SCID miševima. Rezultati pokazuju da 191P4D12 MAb nisu značajno inhibirala rast tumora u humanom ksenograftu kancera pluća AG-L4 u SCID miševima.
Fig.13. Evaluacija Ha22-2(2,4)6.1 MAb u modelu formiranja subkutanog tumora humanog ksenografta kancera pankreasa HPAC u SCID miševima. Rezultati pokazuju da 191P4D12 MAb nisu inhibirala rast tumora u humanom ksenograftu pankreasa u SCID miševima kada se poredi sa kontrolnim antitelom.
Fig.14. Evaluacija Ha22-2(2,4)6.1 MAb u modelu formiranja subkutanog tumora humanog ksenografta kancera pankreasa AG-Panc3 u SCID miševima. Rezultati pokazuju da 191P4D12 MAb nisu inhibirala rast tumora u humanom ksenograftu pankreasa u SCID miševima kada se poredi sa kontrolnim antitelom.
Fig.15. Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera pluća AG-L4 u SCID miševima. Rezultati pokazuju da je tretiranje sa Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE značajno inhibiralo rast AG-L4 ksenografta kancera pluća implantiranih subkutano kod golih miševa u poređenju u sa tretiranom i netretiranom kontrolom.
Fig.16. Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera dojke BT-483 u SCID miševima. Rezultati pokazuju da je tretiranje sa Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE značajno inhibiralo rast BT-483 ksenografta tumora dojke implantiranih subkutano u SCID miševima u poređenju sa tretiranim i netretiranim kontrolnim ADC.
Fig.17. Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera bešike AG-B1 u SCID miševima. Rezultati pokazuju da je tretiranje sa Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE značajno inhibiralo rast AG-B1 ksenografta kancera bešike u poređenju sa kontrolnim ADC.
Fig.18. Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera pankreasa AG-Panc2 u SCID miševima. Rezultati pokazuju da je tretiranje sa Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE značajno inhibiralo rast AG-Panc2 ksenografta kancera pankreasa u poređenju sa kontrolnim ADC.
Fig.19. Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera pluća AG-Panc4 u SCID miševima. Rezultati pokazuju da je tretiranje sa Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE značajno inhibiralo rast AG-Panc4 ksenografta kancera pankreasa u poređenju sa kontrolnim ADC.
Fig.20. Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u komparativnoj dozi u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera bešike AG-B8 u SCID miševima. Rezultati pokazuju da je tretiranje sa Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE pri 10mg/kg značajno inhibiralo rast AG-B8 ksenografta kancera bešike u poređenju sa Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE pri 5mg/kg.
Fig.21A-N. Detektovanje 191P4D12 proteina u uzorcima kancera pacijenata pomoću IHC. Fig. 21A-B prikazuje uzorke kancera bešike. Fig.21C-D prikazuje uzorke kancera dojke. Fig.21E-F prikazuje uzorke kancera pankreasa. Fig.21G-H prikazuje uzorke kancera pluća. Fig.21I-J prikazuje uzorke kancera jajnika. Fig.21K-L prikazuje uzorke kancera jednjaka. Fig.21M-N prikazuje uzorke kancera jednjaka.
Fig.22A-B. Prikazuje krive vezivanja korišćene za odeđivanje afiniteta Ha22-2(2,4)6.1 Mab i Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE sa prečišćenim rekombinantnim 191P4D12 (ECD aminokiseline 1-348).
Fig.23A-D. Prikazuje vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 za PC3 ćelije koje eksprimiraju 191P4D12 (Fig. 23A) i ortologe iz cinomolgus majmuna (Fig.23B), pacova (Fig.23C) i miša (Fig.23D).
Fig.24A-D. Prikazuje da je vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 za dvostruki mutant A76I, S91N slično vezivanju mišjeg ortologa.
Fig.25. Prikazuje model V-domena od 191P4D12 na osnovu objavljenih podataka za kristalnu strukturu za članove porodice od 191P4D12 i proteina koji sadrže Ig-domen upotrebom PyMOL. Prikazani su položaji Ala-76 (istačkano) i Ser-91 (krstići).
Fig.26A-C. Prikazuje vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 koji se vezuje za ćelije koje eksprimiraju V-domen (Fig.26A) kao i za 191P4D12 divljeg tipa (Fig.26B), ali ne za ćelije koje eksprimiraju C1C2 domen generisane ranije (Fig.26C).
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Pregled odeljaka
1. I.) Definicije
2. II.) 191P4D12 Antitela
3. III.) Konjugati antitela i leka uopšteno
III(A). Majtanzinoidi
III(B). Auristatini i dolostatini
III(C). Kaliheamicin
III(D). Ostali citotoksični agensi
4. IV.) Konjugati antitela i leka koji vezuju 191P4D12
5. V.) Vezujuće jedinice
6. VI.) Noseća jedinica
7. VII.) Aminokiselinska jedinica
8. VIII.) Razdvajajuća jedinica
9. IX.) Lekovita jedinica
10. X.) Punjenje leka
11. XI.) Postupci određivanja citotoksičnog efekta ADC
12. XII.) Lečenje kancera(a) koji eksprimira 191P4D12
13. XIII.) 191P4D12 kao cilj za terapiju na bazi antitela
14. XIV.) 191P4D12 ADC kokteli
15. XV.) Kombinovana terapija
16. XVI.) Kompleti/proizvodi proizvodnje
I.) Definicije:
[0031] Osim ukoliko nije drugačije definisano, svi pojmovi u ovoj oblasti, obeležavanja i ostali naučni izrazi ili terminologija korišćeni ovde imaju značenja koja su obično jasna prosečnim stručnjacima u ovoj oblasti na koji se ovaj pronalazak odnosi. U nekim slučajevima, pojmovi sa obično shvaćenim značenjima definisani su ovde radi jasnoće i/ili za podesnu referencu, a uključivanje takvih definicija ovde ne treba nužno tumačiti da predstavljaju suštinsku razliku u odnosu na ono što uopšteno znače u ovoj oblasti. Mnoge tehnike i procedure opisane ili na koje se upućuje ovde dobro su poznate i obično se koriste upotrebom konvencionalne metodologije od strane prosečnih stručnjaka u ovoj oblasti, kao što su, na primer, veoma korišćene metodologije molekulskog kloniranja opisane u Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd. edition (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. Po potrebi, procedure koje uključuju upotrebu komercijalno dostupnih kompleta i reagenasa uopšteno se izvode u skladu sa protokolima i/ili parametrima definisanim od strane proizvođača osim ukoliko nije drugačije naznačeno.
[0032] Kada se koristi trgovačko ime ovde, referenca na trgovačko ime takođe se odnosi na formulaciju proizvoda, generički lek, i aktivni farmaceutski sastojak(e) proizvoda pod tim trgovačkim imenom, osim ukoliko nije drugačije naznačeno kontekstom.
[0033] Izrazi "uznapredovali kancer", "lokalno uznapredovali kancer", "uznapredovala bolest" i "lokalno uznapredovala bolest" predstavljaju kancere koji su se proširili kroz odgovarajuću kapsulu tkiva, a tako da uključuju bolest u stadijumu C prema sistemu Američke urološke asocijacije (AUA), bolest u stadijumu C1 - C2 prema Whitmore-Jewett sistemu, i bolest u stadijumu T3 - T4 i N+ prema TNM (tumor, čvor, metastaza) sistemu. Uopšteno, ne preporučuje se operacija kod pacijenata sa lokalno uznapredovalom bolešću, i ovi pacijenti suštinski imaju manje povoljne ishode u poređenju sa pacijentima koji imaju klinički lokalizovan (organ-ograničen) kancer.
[0034] Skraćenica "AFP" se odnosi na dimetilvalin-valin-dolaizoleuin-dolaproin-fenilalanin-pfenilendiamin (videti Formulu XVI infra).
[0035] Skraćenica "MMAE" se odnosi na monometil auristatin E (videti formulu XI infra).
[0036] Skraćenica "AEB" se odnosi na estar proizveden reagovanje auristatina E sa paraacetil benzojevom kiselinom (videti formulu XX infra).
[0037] Skraćenica "AEVB" se odnosi na estar proizveden reagovanje auristatina E sa benzoilvalerinskom kiselinom (videti formulu XXI infra).
[0038] Skraćenica "MMAF" se odnosi na dovalin-valin-dolaizoleuin-dolaproin-fenilalanin (videti formulu XVIV infra).
[0039] Osim ako nije drugačije naznačeno, pojam "alkil" odnosi se na zasićen ravan ili razgranat ugljovodonik koji ima od oko 1 do oko 20 atoma ugljenika (i sve kombinacije i podkombinacije opsega i specifičnih brojeva njegovih atoma ugljenika), pri čemu je poželjno od oko 1 do oko 8 atoma ugljenika. Primeri alkil grupa su metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sec-butil, tert-butil, n-pentil, 2pentil, 3-pentil, 2-metil-2-butil, n-heksil, n-heptil, n-oktil, n-nonil, n-decil, 3-metil-2-butil, 3-metil-1-butil, 2-metil-1-butil, 1-heksil, 2-heksil, 3-heksil, 2-metil-2-pentil, 3-metil-2-pentil, 4-metil-2-pentil, 3-metil-3-pentil, 2-metil-3-pentil, 2,3-dimetil-2-butil, i 3,3-dimetil-2-butil.
[0040] Alkil grupe, bilo same ili kao deo druge grupe, mogu opciono da budu supstituisane sa jednom ili više grupa, poželjno 1 do 3 grupe (i bilo kojim dodatnim supstituentima odabranim od halogena), uključujući, ali ne ograničavajući se na, -halogen, -O-(C1-C8alkil),-O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2,-C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, =O, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2i -CN, pri čemu je svako R' je nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili -arila, a gde pomenute -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, i -C2-C8alkinil grupe mogu opciono da budu dalje supstituisane sa jednom ili više grupa uključujući, ali ne ograničavajući se na, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, -halogen, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R", -OC(O)R", -C(O)OR", -C(O)NH2, -C(O)NHR", -C(O)N(R")2,-NHC(O)R", -SR", -SO3R", -S(O)2R", -S(O)R", -OH, -N3, -NH2, -NH(R"), -N(R")2i -CN, pri čemu je svako R" nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili -arila.
[0041] Osim ako nije drugačije naznačeno, pojmovi "alkenil" i "alkinil" odnose se na ravne i razgranate ugljenične lance koji imaju od oko 2 do oko 20 atoma ugljenika (i sve kombinacije i podkombinacije opsega i specifičnih brojeva njegovih atoma ugljenika), pri čemu je poželjno od oko 2 do oko 8 atoma ugljenika. Alkenilni lanac ima najmanje jednu dvostruku vezu u lancu, a alkinilni lanac ima najmanje jednu trostruku vezu u lancu. Primeri alkenil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, etilen ili vinil, alil, -1-butenil, - 2-butenil, -izobutilenil, -1-pentenil, -2-pentenil, -3-metil-1-butenil, -2-metil-2-butenil, i -2,3-dimetil-2- butenil. Primeri alkinil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, acetilensku grupu, propargil, acetilenil, propinil, -1-butinil, -2-butinil, -1-pentinil, -2-pentinil, i -3-metil-1 butinil.
[0042] Alkenil i alkinil grupe, bilo same ili kao deo druge grupe, mogu opciono da budu supstituisane sa jednom ili više grupa, poželjno 1 do 3 grupe (i bilo kojim dodatnim supstituentima odabranim od halogena), uključujući, ali bez ograničenja na, -halogen, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, =O, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2i -CN, pri čemu je svako R' nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili –arila, a gde pomenute -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, i -C2-C8alkinil grupe mogu opciono da budu dalje supstituisane jednim ili više supstituenata uključujući, ali ne ograničavajući se na, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, -halogen, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2C8alkinil), -aril, -C(O)R", OC(O)R", -C(O)OR", -C(O)NH2, -C(O)NHR", -C(O)N(R")2, -NHC(O)R", -SR", -SO3R", -S(O)2R", -S(O)R", -OH, -N3, -NH2, -NH(R"),-N(R")2i -CN, pri čemu je svako R" nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili -arila.
[0043] Osim ako nije drugačije naznačeno, pojam "alkilen" odnosi se na radikal sa zasićenim razgranatim ili ravnim ugljovodoničnim lancem koji ima od oko 1 do oko 20 atoma ugljenika (i sve kombinacije i podkombinacije opsega i specifičnih brojeva njegovih atoma ugljenika), pri čemu je poželjno od oko 1 do oko 8 atoma ugljenika, a koji ima dva monovalentna centra u radikalu dobijena uklanjanjem dva atoma vodonika sa istog ili dva različita atoma ugljenika sa matičnog alkana. Tipični alkileni uključuju, ali nisu ograničeni na, metilen, etilen, propilen, butilen, pentilen, heksilen, heptilen, ocitilen, nonilen, dekalen, 1,4-cikloheksilen, i slično. Alkilen grupe, bilo same ili kao deo druge grupe, mogu opciono da budu supstituisane jednom ili više grupa, poželjno 1 do 3 grupe (i bilo kojim dodatnim supstituentima odabranim od halogena), uključujući, ali ne ograničavajući se na, -halogen, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, =O, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2i -CN, pri čemu je svako R' nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili –arila, a gde pomenute -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, i -C2-C8alkinil grupe mogu dalje da budu opciono supstituisane jednim ili više supstituenata uključujući, ali ne ograničavajući se na, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, -halogen, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R", -OC(O)R", -C(O)OR", -C(O)NH2, -C(O)NHR", -C(O)N(R")2, -NHC(O)R", -SR", -SO3R", -S(O)2R", -S(O)R", -OH, -N3, -NH2, -NH(R"), -N(R")2i -CN, pri čemu jesvako R" nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili -arila.
[0044] Osim ako nije drugačije naznačeno, pojam "alkenilen" odnosi se na opciono supstituisanu alkilen grupu koja sadrži najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik. Primerne alkenilen grupe uključuju, na primer, etenilen (-CH=CH-) i propenilen (-CH=CHCH2-).
[0045] Osim ako nije drugačije naznačeno, pojam "alkinilen" odnosi se na opciono supstituisanu alkilen grupu koja sadrži najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik. Primerne alkinilen grupe uključuju, na primer, acetilen (-C=C-), propargil (-CH2C≡C-), i 4-pentinil (-CH2CH2CH2C≡CH-).
[0046] Osim ako nije drugačije naznačeno, pojam "aril" odnosi se na monovalentni aromatični ugljovodonični radikal sa 6-20 atoma ugljenika (i sve kombinacije i podkombinacije opsega i specifičnih brojeva njegovih atoma ugljenika) dobijen uklanjanjem jednog atoma vodonika sa jednog atoma ugljenika matičnog sistema aromatičnog prstena. Neke aril grupe prikazane su u primernim strukturama kao "Ar". Tipične aril grupe uključuju, ali nisu ograničene na, radikale dobijene iz benzena, supstituisanog benzena, fenila, naftalena, antracena, bifenila, i slično.
[0047] Aril grupa, bilo sama ili kao deo druge grupe, može opciono da bude supstituisana sa jednom ili više, poželjno 1 do 5, ili čak 1 do 2 grupe uključujući, ali ne ograničavajući se na, -halogen, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2,-C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -NO2, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2i -CN, pri čemu je svako R' nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili –arila, a gde pomenute -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), i -aril grupe mogu dalje da budu opciono supstituisane jednim ili više supstituenata uključujući, ali ne ograničavajući se na, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, -halogen, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R", -OC(O)R", -C(O)OR", -C(O)NH2, -C(O)NHR", -C(O)N(R")2, -NHC(O)R", -SR", -SO3R", -S(O)2R", -S(O)R", -OH, -N3, -NH2, -NH(R"), -N(R")2i -CN, pri čemu je svako R" nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili -arila.
[0048] Osim ako nije drugačije naznačeno, pojam "arilen" odnosi se na opciono supstituisanu aril grupu koja je dvovalentna (tj., dobijena uklanjanjem dva atoma vodonika sa istog ili dva različita atoma ugljenika matičnog sistema aromatičnog prstena), a može da bude u orto, meta, ili para konfiguracijama kao što je prikazano u sledećim strukturama sa fenilom kao primernom aril grupom.
Tipične "-(C1-C8alkilen)aril," "-(C2-C8alkenilen)aril", "i -(C2-C8alkinilen)aril" grupe uključuju, ali nisu ograničene na, benzil, 2-feniletan-1-il, 2-fenileten-1-il, naftilmetil, 2-naftiletan-1-il, 2-naftileten-1-il, naftobenzil, 2-naftofeniletan-1-il i slično.
[0049] Osim ako nije drugačije naznačeno, pojam "heterocikl," odnosi se na monociklični, biciklični, ili policiklični sistem prstena koji ima od 3 do 14 atoma u prstenu (takođe se nazivaju članovi prstena) pri čemu je najmanje jedan atom u prstenu u najmanje jednom prstenu heteroatom odabran od N, O, P, ili S (i sve kombinacije i podkombinacije opsega i specifičnih brojeva njegovih atoma ugljenika i heteroatoma). Heterocikl može da ima od 1 do 4 heteroatoma u prstenu nezavisno odabranih od N, O, P ili S. Jedan ili više atoma N, C ili S u heterociklu mogu da bude okidovani. Monociklični heterocikl poželjno ima 3 do 7 članova prstena (npr., 2 do 6 atoma ugljenika i 1 do 3 heteroatoma nezavisno odabranih od N, O, P ili S), a biciklični heterocikl poželjno ima 5 do 10 članova prstena (npr., 4 do 9 atoma ugljenika i 1 do 3 heteroatoma nezavisno odabranih od N, O, P ili S). Prsten koji uključuje heteroatom može da bude aromatičan ili nearomatičan. Osim ako nije drugačije naznačeno, heterocikl je pričvršćen za svoju pandan grupu na bilo kom heteroatomu ili atomu ugljenika što rezultuje stabilnom strukturom.
[0050] Heterocikli opisani su u Paquette, "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A.
Benjamin, New York, 1968), naročito poglavlja 1, 3, 4, 6, 7 i 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950. do sada), naročito tomovi 13, 14, 16, 19 i 28; i J. Am. Chem. Soc.82:5566 (1960).
[0051] Primeri "heterocikl" grupa uključuju kao primer, a ne radi ograničenja, piridil, dihidropiridil, tetrahidropiridil (piperidil), tiazolil, pirimidinil, furanil, tienil, pirolil, pirazolil, imidazolil, tetrazolil, benzofuranil, tianaftalenil, indolil, indolnil, kvinolinil, izokvinolinil, benzimidazolil, piperidinil, 4-piperidonil, pirolidinil, 2-pirolidonil, pirolinil, tetrahidrofuranil, bis-tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil, bis-tetrahidropiranil, tetrahidrokvinolinil, tetrahidroizokvinolinil, dekahidrokvinolinil, oktahidroizokvinolinil, azocinil, triazinil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 2H,6H-1,5,2-ditiazinil, tienil, tiantrenil, piranil, izobenzofuranil, hromenil, ksantenil, fenoksatinil, 2H-pirolil, izotiazolil, izoksazolil, pirazinil, piridazinil, indolizinil, izoindolil, 3H-indolil, 1H-indazolil, purinil, 4H-kvinolizinil, ftalazinil, naftiridinil, kvinoksalinil, kvinazolinil, cinolinil, pteridinil, 4H-karbazolil, karbazolil, β-karbolinil, fenantridinil, akridinil, pirimidinil, fenantrolinil, fenazinil, fenotiazinil, furazanil, fenoksazinil, izohromanil, hromanil, imidazolidinil, imidazolinil, pirazolidinil, pirazolinil, piperazinil, indolinil, izoindolinil, kvinuklidinil, morfolinil, oksazolidinil, benzotriazolil, benzizoksazolil, oksindolil, benzoksazolinil, i izatinoil. Poželjne "heterocikl" grupe uključuju, ali nisu ograničene na, benzofuranil, benzotiofenil, indolil, benzopirazolil, coumarinil, izokvinolinil, pirolil, tiofenil, furanil, tiazolil, imidazolil, pirazolil, triazolil, kvinolinil, pirimidinil, piridinil, piridonil, pirazinil, piridazinil, izotiazolil, izoksazolil i tetrazolil.
[0052] Heterocikl grupa, bilo sama ili kao deo druge grupe, mogu opciono da budu supstituisane sa jednom ili više grupa, poželjno 1 do 2 grupe, uključujući, ali bez ograničenja na, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, -halogen, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil),-O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -N3, -NH2, -NH(R'),-N(R')2i -CN, pri čemu je svako R' nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, ili – aril, a gde pomenute -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, i -aril grupe mogu dalje da budu opciono supstituisane jednim ili više supstituenata uključujući, ali ne ograničavajući se na, -C1-C8alkil,-C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, -halogen, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R", -OC(O)R", -C(O)OR", -C(O)NH2, -C(O)NHR", -C(O)N(R")2, -NHC(O)R", -SR", -SO3R", -S(O)2R", -S(O)R", -OH, -N3, -NH2, -NH(R"), -N(R")2i -CN, gde je svako R" nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili arila.
[0053] Primera radi, a ne radi ograničenja, heterocikli vezani preko ugljenika mogu da budu vezani na sledećim položajima: položaj 2, 3, 4, 5 ili 6 piridina; položaj 3, 4, 5 ili 6 piridazina; položaj 2, 4, 5 ili 6 pirimidina; položaj 2, 3, 5 ili 6 pirazina; položaj 2, 3, 4 ili 5 furana, tetrahidrofurana, tiofurana, tiofena, pirola ili tetrahidropirola; položaj 2, 4 ili 5 oksazola, imidazola ili tiazola; položaj 3, 4 ili 5 izoksazola, pirazola, ili izotiazola; položaj 2 ili 3 aziridina; položaj 2, 3 ili 4 azetidina; položaj 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 kvinolina; ili položaj 1, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 izokvinolina. Još tipičnije, heterocikli vezani preko ugljenika uključuju 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, 5-piridil, 6-piridil, 3-piridazinil, 4-piridazinil, 5-piridazinil, 6-piridazinil, 2-pirimidinil, 4-pirimidinil, 5-pirimidinil, 6-pirimidinil, 2-pirazinil, 3-pirazinil, 5-pirazinil, 6-pirazinil, 2-tiazolil, 4-tiazolil, ili 5-tiazolil.
[0054] Primera radi, a ne radi ograničenja, heterocikli vezani preko azota mogu da budu vezani u položaju 1 aziridina, azetidina, pirola, pirolidina, 2-pirolina, 3-pirolina, imidazola, imidazolidina, 2-imidazolina, 3-imidazolina, pirazola, pirazolina, 2-pirazolina, 3-pirazolina, piperidina, piperazina, indola, indolina, ili 1H-indazola; položaju 2 izoindola ili izoindolina; položaju 4 morfolina; i položaju 9 karbazola, ili β-karbolina. Još tipičnije, heterocikli vezani preko azota uključuju 1-aziridil, 1-azetedil, 1-pirolil, 1-imidazolil, 1-pirazolil, i 1-piperidinil.
[0055] Osim ako nije drugačije naznačeno, pojam "karbocikl," odnosi se na zasićen ili nezasićen nearomatičan monociklični, biciklični, ili policiklični sistem prstena koji ima od 3 do 14 atoma u prstenu (i sve kombinacije i podkombinacije opsega i specifičnih brojeva njegovih atoma ugljenika), pri čemu su svi atomi u prstenu atomi ugljenika. Monociklični karbocikli poželjno imaju 3 do 6 atoma u prstenu, još poželjnije 5 ili 6 atoma u prstenu. Biciklični karbocikli poželjno imaju 7 do 12 atoma u prstenu, npr., uređenih kao biciklo [4,5], [5,5], [5,6] ili [6,6] sistem, ili 9 ili 10 atoma u prstenu uređenih kao biciklo [5,6] ili [6,6] sistem. Pojam "karbocikl" uključuje, na primer, monociklični karbociklični prsten spojen sa arilnim prstenom (npr., monociklični karbociklični ring spojen sa benzenovim prstenom). Karbocikli poželjno imaju 3 do 8 atoma ugljenika u prstenu.
[0056] Karbocikl grupe, bilo same ili kao deo druge grupe, mogu opciono da budu supstituisane sa, na primer, jednom ili više grupa, poželjno 1 ili 2 grupe (i bilo kojim dodatnim supstituentima odabranim od halogena), uključujući, ali ne ograničavajući se na, -halogen, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, =O, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2i -CN, pri čemu je svako R' nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili –arila, a gde pomenute -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), i -aril grupe mogu dalje da budu opciono supstituisane jednim ili više supstituenata uključujući, ali ne ograničavajući se na, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil,-halogen, -O-(C1-C8alkil), -O-(C2-C8alkenil), -O-(C2-C8alkinil), -aril, -C(O)R", -OC(O)R", -C(O)OR", -C(O)NH2, -C(O)NHR", -C(O)N(R")2, -NHC(O)R", -SR", -SO3R", -S(O)2R", -S(O)R", -OH, -N3, -NH2, -NH(R"), -N(R")2i -CN, pri čemu je svako R" nazavisno odabrano od -H, -C1-C8alkila, -C2-C8alkenila, -C2-C8alkinila, ili -arila.
[0057] Primeri monocikličnih karbocikličnih supstituenta uključuju -ciklopropil, -ciklobutil, -ciklopentil, -1-ciklopent-1-enil, -1-ciklopent-2-enil, -1-ciklopent-3-enil, cikloheksil, -1-cikloheks-1-enil, -1-cikloheks-2-enil, -1-cikloheks-3-enil, -cikloheptil, -ciklooktil. -1,3-cikloheksadienil, -1,4-cikloheksadienil, -1,3-cikloheptadienil, -1,3,5-cikloheptatrienil, i -ciklooktadienil.
[0058] "Karbociklo," bilo da se koristi sam ili kao deo druge grupe, odnosi se na opciono supstituisanu karbocikličnu grupu kako je definisana gore koja je dvovalentna (tj., dobijena uklanjanjem dva atoma vodonika sa istog ili dva različita atoma ugljenika matičnog karbocikličnog sistema prstena).
[0059] Osim ako nije drugačije naznačeno kontekstom, crtica (-) označava tačku spajanja sa pandan molekulom. Prema tome, izraz "-(C1-C8alkilen)aril" ili "-C1-C8alkilen(aril)" odnosi se na C1-C8alkilen radikal kako je ovde definisano, pri čemu je alkilen radikal spojen sa pandan molekulom na bilo kom od atoma ugljenika alkilen radikala i jedan od atoma vodonika vezan za atom ugljenika alkilen radikala je zamenjen aril radikalom kao što je ovde definisano.
[0060] Kada je određena grupa "supstituisana", ta grupa može da ima jedan ili više supstituenata, poželjno od jednog do pet supstituenata, poželjnije od jednog do tri supstituenata, a najpoželjnije od jednog do dva supstituenta, nezavisno odabranih iz liste supstituenata. Grupa može, međutim, uopšteno da ima bilo koji broj supstituenata odabranih od halogena. Grupe koje su supstituisane tako su naznačene.
[0061] Namera je da definicija bilo kog supstituenta ili varijable na određenom položaju i molekuli bude nezavisna od njegovih definicija bilo gde u tom molekulu. Podrazumeva se da se supstituenti i obrasci supstitucije na jedinjenjima ovog pronalaska mogu odabrati od strane prosečnog stručnjaka u ovoj oblasti kako bi se obezbedila jedinjenja koja su hemijski stabilna i koja se lako mogu sintetizovati postupcima poznatim u ovoj oblasti kao i onim postupcima datim ovde u nastavku.
[0062] Zaštitne grupe kako se ovde koriste odnose se na grupe koje selektivno blokiraju, ili privremeno ili trajno, jedno reaktivno mesto u multifunkcionalnom jedinjenju. Pogodne hidroksi-zaštitne grupe za upotrebu u ovom pronalasku su farmaceutski prihvatljive i mogu ili ne moraju da se odcepe od matičnog jedinjenja nakon davanja subjektu u cilju da jedinjenje bude aktivno. Cepanje je kroz uobičajene metaboličke procese unutar tela. Hidroksi zaštitne grupe dobro su poznate u ovoj oblasti,
videti, Protective Groups in Organic Synthesis by T. W. Greene i P. G. M. Wuts (John Wiley & sons, 3rd Edition) ovde inkorporiran referencom u svojoj celosti i za sve svrhe, a uključuju, na primer, etarske (npr., alkil etre i silil etre uključujući, na primer, dialkilsililetar, trialkilsililetar, dialkilalkoksisililetar), estarske, karbonatne, karbamatne, sulfonatne, i fosfatne zaštitne grupe. Primeri hidroksi zaštitnih grupa uključuju, ali nisu ograničene na, metil etar; metoksimetil etar, metiltiometil etar, (fenildimetilsilil)metoksimetil etar, benziloksimetil etar, p-metoksibenziloksimetil etar, pnitrobenziloksimetil etar, o-nitrobenziloksimetil etar, (4-metoksifenoksi)metil etar, gvajacolmetil etar, tbutoksimetil etar, 4-penteniloksimetil etar, siloksimetil etar, 2-metoksietoksimetil etar, 2,2,2-trihloroetoksimetil etar, bis(2-hloroetoksi)metil etar, 2-(trimetilsilil)etoksimetil etar, mentoksimetil etar, tetrahidropiranil etar, 1-metoksicilkoheksil etar, 4-metoksitetrahidrotiopiranil etar, 4-metoksitetrahidrotiopiranil etar S,S-dioksid, 1-[(2-horo-4-metil)fenil]-4-metoksipiperidin-4-il etar, 1-(2-fluorofenil)-4-metoksipiperidin-4-il etar, 1,4-dioksan-2-il etar, tetrahidrofuranil etar, tetrahidrotiofuranil etar; supstituisane etil etre kao što su 1-etoksietil etar, 1-(2-hloroetoksi)etil etar, 1-[2-(trimetilsilil)etoksi] etil etar, 1-metil-l-metoksietil etar, 1-metil-1-benziloksietil etar, 1-metil-1-benziloksi-2-fluoroetil etar, 1-metil-1fenoksietil etar, 2-trimetilsilil etar, t-butil etar, alil etar, propargil etri, phlorofenil etar, p-metoksifenil etar, benzil etar, p-metoksibenzil etar 3,4-dimetoksibenzil etar, trimetilsilil etar, trietilsilil etar, tripropilsililetar, dimetilizopropilsilil etar, dietilizopropilsilil etar, dimetilheksilsilil etar, t-butildimetilsilil etar, difenilmetilsilil etar, benzoilformat estar, acetat estar, hloroacetat estar, dihloroacetat estar, trihloroacetat estar, trifluoroacetat estar, metoksiacetat estar, trifenilmetoksiacetat estar, fenilacetat estar, benzoat estar, alkil metil karbonat, alkil 9-fluorenilmetil karbonat, alkil etil karbonat, alkil 2,2,2,-trihloroetil karbonat, 1,1,-dimetil-2,2,2-trihloroetil karbonat, alkilsulfonat, metansulfonat, benzilsulfonat, tozilat, metilen acetal, etiliden acetal, i t-butilmetiliden ketal. Poželjne zaštitne grupe predstavljene su formulama -R<a>, -Si(R<a>)(R<a>)(R<a>), -C(O)R<a>, -C(O)OR<a>, -C(O)NH(R<a>), -S(O)2R<a>, -S(O)2OH, P(O)(OH)2, i -P(O)(OH)OR<a>, gde R<a>predstavlja C1-C20alkil, C2-C20alkenil, C2-C20alkinil, -C1-C20alkilen(karbocikl), -C2-C20alkenilen(karbocikl), -C2-C20alkinilen(karbocikl), -C6-C10aril, -C1-C20alkilen(aril), -C2-C20alkenilen(aril), -C2-C20alkinilen(aril), -C1-C20alkilen(heterocikl), -C2-C20alkenilen(heterocikl), ili -C2-C20alkinilen(heterocikl), pri čemu su pomenuti alkil, alkenil, alkinil, alkilen, alkenilen, alkinilen, aril, karbocikl, i heterocikl radikali, bilo sami ili kao deo druge grupe, opciono supstituisani.
[0063] "Promena prirodnog modela glikozilacije" namenjena je za svrhe ovde sa značenjem brisanja jednog ili više ugljenohidratnih delova koji se nalaze u prirodnoj sekvenci 191P4D12 (ili uklanjanjem osnovnog mesta glikozilacije ili brisanjem glikozilacije hemijskim i/ili enzimskim sredstvom), i/ili dodavanja jednog ili više mesta glikozilacije koja nisu prisutna u prirodnoj sekvenci 191P4D12. Dodatno, fraza uključuje kvalitativne promene u glikozilaciji prirodnih proteina, uključujući promenu u prirodi i proporcije različitih prisutnih ugljenohidratnih delova.
[0064] Pojam "analog" odnosi se na molekul koji je strukturno sličan ili deli slične ili odgovarajuće osobine sa drugim molekulom (npr.191P4D12-srodni protein). Na primer, analog 191P4D12 proteina može specifično da bude vezan antitelom ili T ćelijom koja se specifično vezuje za 191P4D12.
[0065] Pojam "antitelo" koristi se u najširem smislu, ukoliko nije drugačije naznačeno. Prema tome, "antitelo" može da se prirodno javi ili veštački kao što su monoklonalna antitela proizvedena konvencionalnom tehnologijom hibridoma.191P4D12 antitela obuhvataju monoklonalna i poliklonalna antitela kao i fragmente koji sadrže antigen-vezujući domen i/ili jedan ili više regiona koji određuju komplementarnost ovih antitela. Kao što se ovde koristi, pojam "antitelo" odnosi se na bilo koji oblik antitela ili njegov fragment koji se specifično vezuje za 191P4D12 i/ili pokazuje željenu biološku aktivnost i specifično pokriva monoklonalna antitela (uključujući monoklonalna antitela cele dužine), poliklonalna antitela, multispecifična antitela (npr., bispecifična antitela), i fragmente antitela duge koliko se specifično vezuju za 191P4D12 i/ili pokazuju željenu biološku aktivnost. Bilo koje specifično antitelo može da se koristi u postupcima i kombinacijama obezbeđenim ovde. Tako, u jednom primeru izvođenja pojam "antitelo" obuhvata molekul koji obuhvata najmanje one varijabilni region iz molekula imunoglobulina lakog lanca i najmanje jedan varijabilni region iz molekula teškog lanca koji u kombinaciji formira specifično vezujuće mesto za ciljni antigen. U jednom primeru izvođenja, antitelo je IgG antitelo. Na primer, antitelo je IgG1, IgG2, IgG3, ili IgG4 antitelo. Antitela korisna u ovim postupcima i kombinacijama mogu da se generišu u ćelijskoj kulturi, u fagu, ili u raznim životinjama, uključujući, ali bez ograničenja na krave, zečeve, koze, miševe, pacove, hrčke, zamorce, ovce, pse, mačke, majmune, šimpanze, i čovekolike majmune. Prema tome, u jednom primeru izvođenja, antitelo ovog pronalaska je antitelo sisara. Tehnike sa fagama mogu da se koriste da bi se izolovalo inicijalno antitelo ili da se generišu varijante sa izmenjenom specifičnošću ili poželjnim karakteristikama. Takve tehnike su rutinske i dobro poznate u ovoj oblasti. U jednom primeru izvođenja, antitelo je proizvedeno rekombinantnim sredstvima poznatim u ovoj oblasti. Na primer, rekombinantno antitelo može da se proizvede transfektovanjem ćelije domaćina sa vektorom koji obuhvata DNK sekvencu koja kodira antitelo. Jedan ili više vektora može da se koristi da se transfektuje DNK sekvenca koja eksprimira najmanje jedan VL i jedan VH region u ćeliji domaćina. Primerne deskripcije rekombinantnih sredstava stvaranja i proizvodnje antitela uključuju Delves, ANTIBODY PRODUCTION: ESSENTIAL TECHNIQUES (Wiley, 1997); Shephard, et al., MONOCLONAL ANTIBODIES (Oxford University Press, 2000); Goding, MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND PRACTICE (Academic Press, 1993); i CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY (John Wiley & Sons, poslednje izdanje). Antitelo ovog pronalaska može da se modifikuje rekombinantnim sredstvima da bi se povećala efikasnost antitela u posredovanju željene funkcije. Tako, unutar obima ovog pronalaska je da antitela mogu da se modifikuju supstitucijama upotrebom rekombinantnih sredstava. Obično, supstitucije će biti konzervativne supstitucije. Na primer, najmanje jedna aminokiselina u konstantnom regionu antitela može da se zameni različitim ostatkom. Videti, npr., U.S. patent br.5,624,821, U.S. patent br.6,194,551, Prijavu br. WO 9958572; i Angal, et al., Mol. Immunol.30: 105-08 (1993). Modifikacija u aminokiselinama uključuje brisanja, dodavanja, i supstitucije aminokiselina. U nekim slučajevima, takve promene su učinjene da bi se smanjile neželjene aktivnosti, npr., komplement-zavisna citotoksičnost. Često, antitela su obeležena vezivanjem, ili kovalentno ili nekovalentno, supstance koja obezbeđuje detektabilni signal. Širok spektar obeleživača i tehnika konjugacije poznat je i obimno je prijavljen i u naučnoj i u patentnoj literaturi. Ova antitela mogu da se skeniraju za vezivanje za normalnim ili defektnim 191P4D12. Videti npr., Antibody Engineering: A Practical Approach (Oxford University Press, 1996). Pogodna antitela sa željenim biološkim aktivnostima mogu da se identifikuju upotrebom sledećih in vitro testova uključujući, ali bez ograničenja na: proliferaciju, migraciju, adheziju, rast na mekom agaru, angiogenezu, komunikaciju ćelija-ćelija, apoptozu, transport, transdukciju signala, i sledećih in vivo testova kao što su inhibicija rasta tumora. Antitela obezbeđena ovde takođe mogu da budu korisna u dijagnostičkim primenama. Kao zarobljena ili ne-neutrališuća antitela, mogu da se pregledaju za sposobnost da se vežu za specifičan antigen bez inhibiranja receptor-vezujuće ili biološke aktivnosti antigena. Kao neutrališuća antitela, antitela mogu da budu korisna u komparativnim testovima vezivanja. Takođe mogu da se koriste za kvantifikovanje 191P4D12 ili njegovog receptora.
[0066] Izraz "antigen-vezujući deo" ili "fragment antitela" nekog antitela (ili jednostavno "deo antitela"), kako se ovde koristi, odnosi se na jedan ili više fragmenata 191P4D12 antitela koji zadržavaju sposobnost da se specifično vezuju za antigen (npr., 191P4D12 i varijante; Fig.1). Pokazalo se da antigen-vezujuća funkcija antitela može da se izvede pomoću fragmenata antitela cele dužine. Primeri vezujućih fragmenata obuhvaćenih u izrazu "antigen-vezujući deo" antitela uključuju (i) Fab fragment, monovalentni fragment koji se sastoji od VL, VH, CLi CH1domena; (ii) F(ab')2fragment, dvovalentni fragment koji obuhvata dva Fab fragmenta vezana disulfidnim mostom u zglobnom regionu; (iii) Fd fragment koji se sastoji od VHi CH1domena; (iv) Fv fragment koji se sastoji od VLi VHdomena jednog kraka antitela, (v) dAb fragment (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), koji se sastoji od VHdomena; i (vi) izolovan region koji određuje komplementarnost (CDR). Dalje, iako su dva domena Fv fragmenta, VLi VH, kodirana zasebnim genima, mogu da se spoje, upotrebom rekombinantnih postupaka, sintetičkim linkerom koji im omogućava da se izrade kao jedan proteinski lanac u se kom VLi VHregioni uparuju da bi formirali monovalentne molekule (pounate kao jednolančani Fv (scFv); videti npr., Bird et al. (1988) Science 242:423-426; i Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Takva jednolančana antitela takođe treba da budu obuhvaćena unutar izraza "antigen-vezujući deo" antitela. Ovi fragmenti antitela dobijaju se upotrebom konvencionalnih tehnika poznatih prosečnim stručnjacima u ovoj oblasti, i fragmenti se pregledaju radi upotrebe na isti način kao i netaknuta antitela.
[0067] Kao što se ovde koristi, bilo koji oblik "antigena" može da se koristi da se generiše antitelo koje je specifično za 191P4D12. Tako, izazivajući antigen može da bude pojedinačan epitop, više epitopa, ili ceo protein sam ili u kombinaciji sa jednim ili više agenasa za poboljšanje imunogenosti poznatih u ovoj oblasti. Izazivajući antigen može da bude izolovani protein cele dužine, protein na površine ćelije (npr., imuniziranje sa ćelijama transfektovanih sa najmanje delom antigena), ili rastvorljiv protein (npr., imuniziranje sa samo ekstracelularnim domenskim delom proteina). Antigen može da se proizvede u genetski modifikovanoj ćeliji. DNK koja kodira antigen može da bude genomska ili ne-genomska (npr., cDNK) i kodira najmanje deo ekstracelularnog domena. Kako se ovde koristi, pojam "deo" odnosi se na najmanji broj aminokiselina ili nukleinskih kiselina, po potrebi, za konstituisanje imunogenskog epitopa antigena od interesa. Bilo koji genetski vektori pogodan za transformaciju ćelija od interesa može da bude korišćen, uključujući, ali bez ograničenja adenovirusne vektore, plazmide i ne-virusne vektore, kao što su katjonski lipidi. U jednom primeru izvođenja, antitelo postupaka i kombinacija ovde specifično vezuje najmanje deo ekstracelularnog domena 191P4D12 od interesa.
[0068] Antitela ili njegovi antigen vezujući fragmenti obezbeđeni ovde mogu da budu konjugovani sa "bioaktivnim agensom." Kako se ovde koristi, izraz "bioaktivni agens" odnosi se na bilo kojo sintetičko jedinjenje ili jedinjenje koje se javlja u prirodi a koje vezuje antigen i/ili poboljšava ili posreduje željeno biološko dejstvo za poboljšanje toksini koji ubijaju ćelije. U jednom primeru izvođenja, vezujući fragmenti korisni u ovom pronalasku su biološki aktivni fragmenti. Kako se ovde koristi, izraz "biološki aktivni" odnosi sena antitelo ili fragment antitela koji može da vezuje željeni antigenski epitop i da direktno ili indirektno vrši biološko dejstvo. Direktni efekti uključuju, ali nisu ograničeni na modulaciju, stimulaciju i/ili inhibiciju signala rasta, modulaciju, stimulaciju i/ili inhibiciju anti-apoptotičkog signala, modulaciju, stimulaciju i/ili inhibiciju apoptotičkog ili nekrotičnog signala, modulaciju, stimulaciju i/ili inhibiciju ADCC kaskade, i modulaciju, stimulaciju i/ili inhibiciju CDC kaskade.
[0069] "Bispecifična" antitela takođe su korisna u ovim postupcima i kombinacijama. Kako se ovde koristi, izraz "bispecifično antitelo" odnosi se na antitelo, obično monoklonalno antitelo, koje ima specifičnosti vezivanja za najmanje dva različita epitopa antigena. U jednom primeru izvođenja, epitopi su iz istog antigena. U drugom primeru izvođenja, epitopi su iz dva različita antigena. Postupci za izradu bispecifičnih antitela poznata su u ovoj oblasti. Na primer, bispecifična antitela mogu da se rekombinantno proizvedu upotrebom koekspresije dva imunoglobulinska teški lanac/laki lanac para. Videti, npr., Milstein et al., Nature 305:537-39 (1983). Alternativno, bispecifična antitela mogu da se pripreme upotrebom hemijske veze. Videti, npr., Brennan, et al., Science 229:81 (1985). Bispecifična antitela uključuju fragmente bispecifičnih antitela. Videti, npr., Hollinger, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.90:6444-48 (1993), Gruber, et al., J. Immunol.152:5368 (1994).
[0070] Monoklonalna antitela opisana ovde specifično uključuju "himerna" antitela u kojima je deo teškog i/ili lakog lanca identičan sa ili homologan sa odgovarajućim sekvencama u antitelima dobijenim iz posebnih vrsta ili koje pripadaju određenoj klasi ili podklasi antitela, dok je ostatak lanca(lanaca) identičan sa ili homologan odgovarajućim sekvencama u antitelima dobijenim iz drugih vrsta ili koje pripadaju nekoj drugoj klasi ili podklasi antitela, kao i fragmentima takvih antitela, sve dok specifično vezuju ciljni antigen i/ili pokazuju željenu biološku aktivnost (U.S. Pat. No.4,816,567; i Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855 (1984)).
[0071] Izraz "hemoterapeutski agens" odnosi se na sva hemijska jedinjenja koja su efikasna u inhibiranju rasta tumora. Neograničavajući primeri hemoterapeutskih agenasa uključuju alkilirajuće agense; na primer, azotne iperite, jedinjenja etilenimina i alkil sulfonate; antimetabolite, na primer, folna kiselina, antagoniste purina ili pirimidina; mitotične inhibitore, na primer, anti-tubulin agense kao što su vinka alkaloidi, auristatini i derivati podofilotoksina; citotoksične antibiotice; jedinjenja koja oštećuju ili ometaju DNK ekspresiju ili replikaciju, na primer, DNK manji žlebni spojevi; i antagoniste receptora faktora rasta. Dodatno, hemoterapeutski agensi uključuju citotoksične agense (kao što su ovde definisani), antitela, biološke molekule i male molekule.
[0072] Pojam "jedinjenje" odnosi se na i obuhvata samo hemijsko jedinjenje kao i, eksplicitno navedeno ili ne, i osim ako je kontekstom jasno da sledeće treba isključiti: amorfne i kristalne oblike jedinjenja, uključujući polimorfne oblike, gde ovi oblici mogu da budu deo mešavine ili izolovani; slobodne kisele i slobodne bazne oblike jedinjenja, koji su obično oblici prikazani u strukturama obezbeđenim ovde; izomere jedinjenja, koji se odnose na optičke izomere, i tautomerne izomere, gde optički izomeri uključuju enantiomere i dijastereomere, hiralne izomere i ne-hiralne izomere, i optički izomeri uključuju izolovane optičke izomere kao i mešavine optičkih izomera uključujući racemske i ne-racemske mešavine; gde neki izomer može da bude u izolovanom obliku ili u mešavini sa jednim ili više drugih izomera; izotope jedinjenja, uključujući jedinjenja koja sadrže deuterijum i tricijum, i uključujući jedinjenja koja sadrže radioizotope, uključujući terapeutski i dijagnostički efektivne radioizotope; multimerne oblike jedinjenja, uključujući dimerne, trimerne, itd. oblike; soli jedinjenja, poželjno farmaceutski prihvatljive soli, uključujući adicione soli sa kiselinom i adicione soli sa bazom, uključujući soli koje imaju organske kontra jone i neorganske kontra jone, i uključujući cviterjonske oblike, gde ako je jedinjenje povezano sa dva ili više kontra jona, ta dva ili više kontra jona mogu da budu ista ili različita; i solvate jedinjenja, uključujući hemisolvate, monosolvate, disolvate, itd., uključujući organske solvate i neorganske solvate, pri čemu pomenuti neorganski solvati uključuju hidrate; gde ako je jedinjenje povezano sa dva ili više molekula rastvarača, ta dva ili više molekula rastvarača mogu da budu ista ili različita. U nekim primerima, upućivanje na jedinjenje ovog pronalaska uključivaće eksplicitnu referencu na jedan ili više od gornjih oblika, npr., soli i/ili solvate; međutim, ova referenca je samo za isticanje, i ne treba je smatrati kao da isključuje druge gornje oblike kao što je identifikovano gore.
[0073] Kako se ovde koristi, izraz "konzervativne supstitucija" odnosi se na supstitucije aminokiselina koje su poznate prosečnim stručnjacima u ovoj oblasti a mogu se izvoditi uopšteno bez promene biološke aktivnosti dobijenog molekula. Prosečni stručnjaci u ovoj oblasti prepoznaće da, uopšteno, supstitucije jedne aminokiseline u ne-esencijalnim regionima polipeptida suštinski ne menjaju biološku aktivnost (videti, npr., Watson, et al., MOLECULAR BIOLOGY OF THE GENE, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p.224 (4. izdanje 1987)). Takve primerne supstitucije poželjno se izvode u skladu sa onima datim u nastavku u Tabeli II i Tabeli(ama) III(a-b). Na primer, takve promene uključuju supstituciju bilo kog od izoleucina (I), valina (V), i leucina (L) za bilo koju drugu od ovih hidrofobnih aminokiselina; asparaginska kiselina (D) za glutaminsku kiselinu (E) i obrnuto; glutamin (Q) za asparagin (N) i suprotno; i serin (S) za treonin (T) i suprotno. Ostale supstitucije takođe se mogu smatrati konzervativnim, u zavisnosti od okoline određene aminokiseline i njene uloge u trodimenzionalnoj strukturi proteina. Na primer, glicin (G) i alanin (A) mogu često da se zamenjuju, kao što mogu alanin (A) i valin (V). Metionin (M), koji je relativno hidrofoban, često se mogu zameniti leucinom i izoleucinom, a ponekad sa valinom. Lizin (K) i arginin (R) mogu često da se zamenjuju u položajima u kojima značajna karakteristika aminokiselinskog ostatka njegovo naelektrisanje i različiti pK ova dva aminokiselinska ostatka nisu značajna. Još neke druge promene mogu da se smatraju "konzervativnim" u određenim okruženjima (videti, npr. Tabela III(a) ovde; stranice 13-15 "Biochemistry" 2nd ED. Lubert Stryer ed (Stanford University); Henikoff et al., PNAS 1992 Vol 8910915-10919; Lei et al., J Biol Chem 1995 May 19;
270(20):11882-11886). Ostale supstitucije takođe su dozvoljene i mogu se odrediti empirijski ili u skladu sa poznatim konzervativnim supstitucijama.
[0074] Izraz "citotoksični agens" odnosi se na supstancu koja inhibira ili sprečava ekspresionu aktivnost ćelija, funkciju ćelija i/ili izaziva destrukciju ćelija. Taj izraz namenjen je da uključuje radioaktivne izotope, hemoterapeutske agense, i toksine kao što su toksini malog molekula ili enzimski aktivni toksini bakterijskog, gljivičnog, biljnog ili životinjskog porekla, uključujući njihove fragmente i/ili varijante. Primeri citotoksičnih agenasa uključuju, ali nisu ograničeni na auristatine (npr., auristatin E, auristatin F, MMAE i MMAF), auromicine, majtanzinoide, ricin, A-lanac ricina, kombrestatin, duokarmicine, dolastatine, doksorubicin, daunorubicin, taksole, cisplatin, cc1065, etidijum bromid, mitomicin, etopozid, tenopozid, vinkristin, vinblastin, kolhicin, dihidroksi antracin dion, aktinomicin, toksin difterije, Pseudomonas egzotoksin (PE) A, PE40, abrin, abrin A-lanac, modekcin A-lanac, alfa-sarcin, gelonin, mitogelin, retstrictocin, fenomicin, enomicin, curicin, crotin, kaliheamicin, Sapaonaria officinalis inhibitor, i glukokortikoid i ostale hemoterapeutske agense, kao i radioizotope kao što su At<211>, I<131>, I<125>, Y<90>, Re<186>, Re<188>, Sm<153>, Bi<212>ili<213>, P<32>i radioaktivne izotope od Lu uključujući Lu<177>. Antitela mogu takođe da budu konjugovana sa nekim prolekom protiv kancera koji aktivira enzim koji može da konvertuje prolek u njegov aktivan oblik.
[0075] Kako se ovde koristi, pojam "diatela" odnosi se na male fragmente antitela sa dva antigenvezujuća mesta, koji fragmenti obuhvataju varijabilni domen teškog lanca (VH) povezan sa varijabilnim domenom lakog lanca (VL) u istom polipeptidnom lancu (VH-VL). Korišćenjem linkera koji je previše kratak da omogući uparivanje između dva domena na istom lancu, domeni su prisiljeni da se upare sa komplementarnim domenima drugog lanca i stvore dva antigen-vezujuća mesta. Diatela su potpunije opisana u, npr., EP 404,097; WO 93/11161; i Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48 (1993).
[0076] Pojam "iscrpeti," u kontekstu efekta 191P4D12 vezujućeg agensa na 191P4D12-eksprimirajuće ćelije, odnosi se na smanjenje broja ili eliminaciju 191P4D12-eksprimirajućih ćelija.
[0077] Pojam "genski proizvod" ovde se koristi da naznači peptid/protein ili mRNK. Na primer, "genski proizvod ovog pronalaska" ponekad se ovde odnosi kao "aminokiselinska sekvenca kancera", "protein kancera", "protein kancera naveden u Tabeli I", "mRNK kancera", "mRNK kancera navedena u Tabeli I", itd. U jednom primeru izvođenja, protein kancera kodiran je nukleinskom kiselinom sa Fig.1. Protein kancera može da bude fragment, ili alternativno, da bude protein cele dužine kodiran nukleinskim kiselinama sa Fig.1. U jednom primeru izvođenja, aminokiselinska sekvenca kancera koristi se da odredi identitet ili sličnost sekvenci. U nekom drugom primeru izvođenja, sekvence su alelne varijante, koje se prirodno javljaju, proteina kodiranog nukleinskom kiselinom sa Fig.1. U drugom primeru izvođenja, sekvence su varijante sekvenci kao što je ovde dalje opisano.
[0078] "Heterokonjugat" antitela korisna su u ovim postupcima i kombinacijama. Kako se ovde koristi, izraz "heterokonjugat antitelo" odnosi se na dva kovalentno spojena antitela. Takva antitela mogu da se pripreme upotrebom poznatih postupaka u hemiji sintetičkih proteina, uključujući upotrebu agenata za umrežavanje. Videti, npr., U.S. Patent br.4,676,980.
[0079] Pojam "homolog" odnosi se na molekul koji pokazuje homologiju sa drugim molekulom, na primer, koji imaju sekvence hemijskih ostataka koje su iste ili slične na određenim položajima.
[0080] U jednom primeru izvođenja, ovde obezbeđeno antitelo je "humano antitelo." Kako se ovde koristi, izraz "humano antitelo" odnosi se na antitelo u kom su suštinski cele sekvence sekvenci lakog lanca i teškog lanca, uključujući regione koji određuju komplementarnost (CDR), iz humanih gena. U jednom primeru izvođenja, humana monoklonalna antitela pripremaju se tehnikom trioma, tehnika sa humanim B-ćelijama (videti, npr., Kozbor, et al., Immunol. Today 4: 72 (1983), tehnika EBV transformacije (videti, npr., Cole et al. Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy 77-96 (1985)), ili upotrebom fagnog prikaza (videti, npr., Marks et al., J. Mol. Biol.222:581 (1991)). U specifičnom primeru izvođenja, humano antitelo generiše se u transgenom mišu. Tehnike za proizvodnju takvih delimično do potpuno humanih antitela poznate su u ovoj oblasti i bilo koje takve tehnike mogu da se koriste. Prema jednom naročito poželjnom primeru izvođenja, sekvence potpuno humanog antitela izrađuju se u transgenom mišu konstruisanom da izrazi humane gene antitela teškog i lakog lanca. Primerni opis pripreme transgenih miševa koji proizvode humana antitela nalazi se u Prijavi br. WO 02/43478 i Patentu Sjedinjenih Država 6,657,103 (Abgenix) i njegovo potomstvo. B ćelije iz transgenih miševa koje proizvode željeno antitelo može zatim da se fuzira da bi se izradile hibridomske ćelijske linije za kontinuiranu proizvodnju antitela. Videti, npr., U.S. Patent br.5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016; i 5,545,806; i Jakobovits, Adv. Drug Del. Rev.31:33-42 (1998); Green, et al., J. Exp. Med. 188:483-95 (1998).
[0081] Kako se ovde koristi, izraz "humanizovano antitelo" odnosi se na oblike antitela koji sadrže sekvence iz ne-humanih (npr., mišjih) antitela kao i humana antitela. Takva antitela su himerna antitela koja sadrže minimalnu sekvencu dobijenu iz ne-humanog imunoglobulina. Uopšteno, humanizovano antitelo obuhvataće suštinski sve od najmanje jednog, a obično dva, varijabilna domena, u kojima sve ili suštinski sve hipervarijabilnih petlji odgovaraju onima ne-humanog imunoglobulina i svi ili suštinski svi FR regioni su oni humane imunoglobulinske sekvence. Humanizovano antitelo opciono će, takođe, obuhvatati najmanje deo konstantnog regiona imunoglobulina (Fc), obično onaj humanog imunoglobulina. Videti npr., Cabilly U.S. Patent br.4,816,567; Queen et al. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033; i Antibody Engineering: A Practical Approach (Oxford University Press 1996).
[0082] Pojmovi "inhibirati" ili "inhibicija od' kako se ovde koriste znače smanjenje za merljivu količinu, ili da se potpuno spreči.
[0083] Izrazi "izolovan" ili "biološki čist" odnose se na materijal koji je suštinski ili u osnovi slododan od komponenata koje obično prate materijal kao što se nalazi u njegovom prirodnom stanju. Tako, izolovani peptidi u skladu sa ovim pronalaskom poželjno ne sadrže materijale obično povezane sa peptidima u njihovom in situ okruženju. Na primer, za polinukleotid se kaže da je "izolovan" kada je suštinski odvojen od kontaminantnih polinukleotida koji odgovaraju ili su komplementarni genima različitim od 191P4D12 gena ili koji kodiraju polipeptide različite od 191P4D12 genskog proizvoda ili njegovih fragmenata. Prosečan stručnjak može lako da primeni postupke izolovanja nukleinski kiselina da bi se dobio izolovan 191P4D12 polinukleotid. Za protein se kaže da je "izolovan," na primer, kada se koriste fizički, mehanički ili hemijski postupci da bi se uklonili 191P4D12 proteini iz ćelijskih komponenata koje su obično povezane sa proteinom. Prosečan stručnjak može lako da primeni standardne postupke prečišćavanja da bi se dobio izolovan 191P4D12 protein. Alternativno, izolovan protein može da se pripremi hemijskim sredstvima.
[0084] Pogodni "obeleživači" uključuju radionuklide, enzime, supstrate, kofaktore, inhibitore, fluorescentne ostatke, hemiluminiscentne ostatke, magnetne čestice, i slično. Patenti koji opisuju upotrebu takvih obeleživača uključuju U.S. Patent br.3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345;
4,277,437; 4,275,149; 4,366,241. Dodatno, antitela obezbeđena ovde mogu da budu korisna kao antigen-vezujuća komponenta fluorotela. Videti npr., Zeytun et al., Nat. Biotechnol.21:1473-79 (2003).
[0085] Pojam "sisar" odnosi se na bilo koji organizam klasifikovan kao sisar, uključujući miševe, pacove, zečeve, pse, mačke, krave, konje i ljude. U jednom primeru izvođenja ovog pronalaska, sisar je miš. U drugom primeru izvođenja ovog pronalaska, sisar je čovek.
[0086] Izrazi "metastatski kancer" i "metastatska bolest" predstavljaju kancere koji se šire na regionalne limfne čvorove ili na udaljena mesta, i ima za cilj da uključi bolest u D stadijumu prema AUA sistemu i stadijum TxNxM+ prema TNM sistemu.
[0087] Pojam "modulator" ili "testirano jedinjenje" ili "kandidat za lek" ili gramatički ekvivalenti kako se ovde koriste opisuju bilo koji molekul, npr., protein, oligopeptid, mali organski molekul, polisaharid, polinukleotid, itd., koji će se testirati za kapacitet da direktno ili indirektno menja fenotip kancera ili ekspresiju sekvence kancera, npr., sekvence nukleinske kiseline ili proteina, ili efekte sekvenci kancera (npr., signalizacija, ekspresija gena, proteinska interakcija, itd.). U jednom aspektu, modulator će neutralisati efekat proteina kancera ovog pronalaska. "Neutralisati" znači da je aktivnost proteina inhibirana ili blokirana, zajedno sa posledičnim efektom na ćeliju. U drugom aspektu, modulator će neutralisati efekat gena, i njegovog odgovarajućeg proteina, ovog pronalaska normalizovanjem nivoa pomenutog protein. U poželjnim primerima izvođenja, modulatori menjaju ekspresione profile, ili ekspresioni profil nukleinskih kiselina ili proteina obezbeđenih ovde, ili nizvodne efektorske puteve. U jednom primeru izvođenja, modulator suzbija fenotip kancera, npr. na otisak prsta normalnog tkiva. U drugom primeru izvođenja, modulator indukuje fenotip kancera. Uopšteno, mnoštvo ispitivanih mešavina izvodi se paralelno sa različitim koncentracijama agenasa da bi se dobio diferencijalni odgovor na različite koncentracije. Obično, jedna od ovih koncentracija služi kao negativna kontrola, tj., pri nultoj koncentraciji ili ispod nivoa detekcije.
[0088] Modulatori, kandidati za lek, ili testirana jedinjenja obuhvataju brojne hemijske klase, s tim što su oni, obično, organski molekuli, poželjno mala organska jedinjenja koja imaju molekulsku masu veću od 100 a manju od oko 2.500 Daltona. Poželjni mali molekuli manji su od 2000, ili manji od 1500 ili manji od 1000 ili manji od 500 D. Kandidatni agensi obuhvataju funkcionalne grupe neophodne za strukturnu interakciju sa proteinima, naročito vodoničnu vezu, i obično uključuju najmanje amin, karbonil, hidroksil ili karboksil grupu, poželjno najmanje dve od funkcionalnih hemijskih grupa. Kandidatni agensi često obuhvataju ciklične ugljenične ili heterociklične strukture i/ili aromatične ili poliaromatične strukture supstituisane sa jednom ili više od gornjih funkcionalnih grupa. Modulatori takođe obuhvataju biomolekule kao što su peptidi, saharidi, masne kiseline, steroidi, purini, pirimidini, derivati, strukturne analoge ili njihove kombinacije. Naročito poželjni su peptidi. Jedna klasa modulatora su peptidi, na primer, od oko pet do oko 35 aminokiselina, pri čemu je poželjno od oko pet do oko 20 aminokiselina, a naročito je poželjno od oko 7 do oko 15. Poželjno, modulatorni protein kancera je rastvorljiv, uključuje ne-transmembranski region, i/ili, ima N-terminalni Cys da pomogne rastvorljivost. U jednom primeru izvođenja, C-terminus fragmenta se čuva kao slobodna kiselina, a N-terminus je slobodan amin koji pomaže spajanje, tj., za cistein. U jednom primeru izvođenja, protein kancera ovog pronalaska konjugovan je sa nekim imunogenskim agensom kao što je opisano ovde. U jednom primeru izvođenja, protein kancera konjugovan je sa BSA. Peptidi ovog pronalaska, npr., poželjnih dužina, mogu da se međusobno vezuju ili za druge aminokiseline da bi nastao duži peptid/protein. Modulatorni peptidi mogu biti proizvodi digestije proteina koji se prirodno javljaju kao što je naznačeno gore, slučajni peptidi, ili "naklonjeni" slučajni peptidi. U poželjnom primeru izvođenja, peptid/protein-bazirani modulatori su antitela, i njihovi fragmenti, kao što je naznačeno gore.
[0089] Izraz "monoklonalno antitelo", kako se ovde koristi, odnosi se na antitelo dobijeno iz populacije suštinski homogenih antitela, tj., pojedinačna antitela koja obuhvataju populaciju su identična osim za moguće prirodno javljajuće mutacije koje mogu da budu prisutne u malim količinama. Monoklonalna antitela su visoko specifična, pri čemu su usmerena protiv jednog epitopa antigena. Nasuprot tome, preparati konvencionalnih (poliklonalnih) antitela obično uključuju mnoštvo antitela usmerena protiv (ili specifičnih za) različitih epitopa. U jednom primeru izvođenja, poliklonalno antitelo sadrži mnoštvo monoklonalnih antitela sa različitim epitopnim specifičnostima, afinitetima, ili avidnostima unutar jednog antigena koje sadrži višestruke epitope antigena. Odrednica "monoklonalna" označava karakter antitela da je ono dobijeno iz suštinski homogene populacije antitela, a ne treba tumačiti kao da zahteva proizvodnju antitela bilo kojim posebnim postupkom. Na primer, monoklonalna antitela koja će se koristiti u skladu sa ovim pronalaskom mogu se proizvesti hibridom postupkom koji je prvo
opisao Kohler et al., Nature 256: 495 (1975), ili se mogu proizvesti postupcima rekombinantne DNK (videti, npr., U.S. Pat. br.4,816,567). "Monoklonalna antitela" mogu takođe da se izoluju iz biblioteke fagnih antitela upotrebom tehnika opisanih u Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991) i Marks et al., J. Mol. Biol.222: 581-597 (1991), na primer. Ova monoklonalna antitela obično će se vezati sa najmanje Kd od oko 1 µM, češće najmanje oko 300 nM, obično najmanje oko 30 nM, poželjno najmanje oko 10 nM, poželjnije najmanje oko 3 nM ili bolje, što se obično određuje pomoću ELISA.
[0090] "Farmaceutski ekscipijens" obuhvata materijal kao što je adjuvans, nosač, agensi za pH-podešavanje i puferovanje, agensi za podešavanje toničnosti, agensi za vlaženje, konzervans, i slično.
[0091] "Farmaceutski prihvatljiv" odnosi se na ne-toksičan, inertan, i/ili kombinaciju koja je fiziološki kompatabilna sa ljudima ili ostalim sisarima.
[0092] Pojam "polinukleotid" znači polimerni oblik nukleotida od najmanje 10 baza ili baznih parova u dužini, ili ribonukleotida ili deoksinukleotida ili modifikovanog oblika bilo koje vrste nukleotida, treba da uključuje jedno i dvolančane oblike DNK i/ili RNK. U ovoj oblasti, ovaj pojam često se koristi naizmenično sa "oligonukleotidom". Polinukleotid može da obuhvata nukleotidnu sekvencu opisanu ovde gde timidin (T), kao što je prikazano, na primer, na Fig.1, može takođe da bude uracil (U); ova definicija odnosi se na razlike između hemijskih struktura DNK i RNK, a naročito se opaža da je jedna od četiri glavne baze u RNK uracil (U) umesto timidina (T).
[0093] Pojam "polipeptid" znači polimer od najmanje oko 4, 5, 6, 7, ili 8 aminokiselina. U ovoj specifikaciji koriste se standardne oznake od tri slova ili jednog slova za aminokiseline. U ovoj oblasti, ovaj pojam često se koristi naizmenično sa "peptidom" ili "proteinom".
[0094] "Rekombinantni" DNK ili RNK molekul je DNK ili RNK molekul koji je podvrgnut molekularnoj manipulaciji in vitro.
[0095] Kako se ovde koristi, izraz "jednolančani Fv" ili "scFv" ili "jednolančano" antitelo odnosi se na fragmente antitela koji obuhvataju VHi VLdomene antitela, pri čemu su ovi domeni prisutni u jendom polipeptidnom lancu. Uopšteno, Fv polipeptid dalje obuhvata polipeptidni linker između VHi VLdomena koji omogućava da sFv formira željenu strukturu za vezivanje antigena. Za pregled sFv, videti Pluckthun, The Pharmacology Of Monoclonal Antibodies, vol.113, Rosenburg i Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp.269-315 (1994).
[0096] Kako se ovde koristi, izrazi "specifičan", "specifično vezuje" i "vezuje specifično" odnose se na selektivno vezivanje antitela za ciljni epitop antigena. Antitela mogu da se ispituju za specifičnost vezivanja upoređivanjem vezivanja sa odgovarajućim antigenom sa vezivanjem sa irelevantnim antigenom ili mešavinom antigena pod datim skupom uslova. Ako se antitelo vezuje za odgovarajući antigen najmanje 2, 5, 7, a poželjno 10 puta više nego za irelevantan antigen ili mešavinu antigena onda se smatra da je specifično. U jednom primeru izvođenja, specifično antitelo je ono koje samo vezuje 191P4D12 antigen, ali se ne vezuje za irelevantan antigen. U drugom primeru izvođenja, specifično antitelo je ono koje vezuje humani 191P4D12 antigen ali ne vezuje ne-humani 191P4D12 antigen sa 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili većom aminokiselinskom homologijom sa 191P4D12 antigenom. U drugom primeru izvođenja, specifično antitelo je ono koje vezuje humani 191P4D12 antigen i vezuje mišji 191P4D12 antigen, ali sa većim stepenom vezivanja humanog antigena. U drugom primeru izvođenja, specifično antitelo je ono koje vezuje humani 191P4D12 antigen i vezuje 191P4D12 antigen primata, ali sa većim stepenom vezivanja humanog antigena. U drugom primeru izvođenja, specifično antitelo vezuje se za humani 191P4D12 antigen i bilo koji ne-humani 191P4D12 antigen, ali sa većim stepenom vezivanja humanog antigena ili bilo koje njegove kombinacije.
[0097] Kako se ovde koristi "lečiti" ili "terapeutski" i gramatički srodni izrazi, odnose se na bilo kakvo poboljšanje bilo koje posledice bolesti, kao što je produženo preživljavanje, manji morbiditet, i/ili smanjenje neželjenih efekata koji su nusproizvodi alternativnog terapeutskog modaliteta; kako je u ovoj oblasti dobro poznato, potpuno iskorenjivanje bolesti je poželjno iako nije uslov za postupak lečenja.
[0098] Pojam "varijanta" odnosi se na molekul koji pokazuje odstupanje od opisanog tipa ili pravila, kao što je protein koji ima jedan ili više različitih aminokiselinskih ostataka u odgovarajućem položaju(ima) specifično opisanog proteina (npr.191P4D12 protein prikazan na Fig.1.) Analog je primer varijantnog proteina. Upleteni izooblici i jednonukleotidni polimorfizmi (SNP) su dalji primeri varijanti.
[0099] "191P4D12 proteini" i/ili "191P4D12 srodni proteini" ovog pronalaska uključuju one specifično identifikovane ovde (videti, Fig.1), kao i alelne varijante, konzervativne varijante supstitucije, analoge i homologe koji mogu biti izolovani/generisani i okarakterisani bez nepotrebnog eksperimentisanja nakon postupaka naznačenih ovde ili lako dostupnih u stanju tehnike. Fuzionisani proteini koji kombinuju delove različitih 191P4D12 proteina ili njihovih fragmenata, kao i fuzionisani proteini 191P4D12 proteina i heterolognog polipeptida takođe su uključeni. Takvi 191P4D12 proteini zajednički se nazivaju 191P4D12-srodni proteini, proteini ovog pronalaska, ili 191P4D12. Izraz "191P4D12-srodni protein" odnosi se na fragment polipeptida ili 191P4D12 proteinsku sekvencu od 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, ili više od 25 aminokiselina; ili, najmanje 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 330, 335, 339 ili više aminokiselina.
II.) 191P4D12 Antitela
[0100] Drugi aspekt ovog pronalaska obezbeđuje antitela koja se vezuju za 191P4D12-srodne proteine (videti Fig.1). U jednom primeru izvođenja, antitelo koje se vezuje za 191P4D12-srodne proteine predstavlja antitelo koje se specifično vezuje za 191P4D12 protein koji obuhvata aminokiselinsku sekvencu iz SEQ ID NO.: 2. Antitelo koje se specifično vezuje za 191P4D12 protein koji obuhvata aminokiselinsku sekvencu iz SEQ ID NO.: 2 uključuje antitela koja se vezuju za ostale 191P4D12-srodne proteine. Na primer, antitela koja vezuju 191P4D12 protein koji obuhvata aminokiselinsku sekvencu iz SEQ ID NO.:2 mogu da vezuju 191P4D12-srodne proteine kao što su 191P4D12 varijante i njihovi homolozi ili analozi.
[0101] 191P4D12 antitela ovog pronalaska naročito su korisna u prognostičkim testovima kancera(videti, npr., Tabelu I), imidžingu, i terapeutskim metodologijama. Slično tome, takva antitela korisna su u lečenju, i/ili prognozi kancera kolona i ostalih kancera, u meri u kojoj je 191P4D12 takođe eksprimiran ili prekomerno eksprimiran u ovim ostalim kancerima. Štaviše, intracelularno eksprimovana antitela (npr., jednolančana antitela) su terapeutski korisna u lečenju kancera u kojima je uključena ekspresija 191P4D12, kao što su uznapredovali ili metastatski kanceri kolona ili ostali uznapredovali ili metastatski kanceri.
[0102] Razni postupci za pripremu antitela, specifično monoklonalna antitela, dobro su poznata u ovoj oblasti. Na primer, antitela se mogu pripremiti imunizovanjem pogodnog domaćina sisara upotrebom 191P4D12-srodnog proteina, peptida, ili fragmenta, u izolovanom ili imunokonjugovanom obliku (Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press, Eds., Harlow, and Lane (1988); Harlow, Antibodies, Cold Spring Harbor Press, NY (1989)). Dodatno, fuzionisani proteini od 191P4D12 mogu takođe da se koriste, kao što je 191P4D12 GST-fuzionisani protein. U posebnom primeru izvođenja, proizvodi se GST fuzionisani protein koji obuhvata sve ili većinu aminokiselinske sekvence sa Fig.1, a zatim se koristi kao imunogen da bi se generisala odgovarajuća antitela. U drugom primeru izvođenja, 191P4D12-srodni protein sintetiše se i koristi kao imunogen.
[0103] Dodatno, koriste se tehnike gole DNK imunizacije poznate u ovoj oblasti (sa ili bez prečišćenog 191P4D12-srodnog proteina ili 191P4D12 eksprimirajućih ćelija) da bi se generisao imuni odgovor na kodirani imunogen (za pregled, videti Donnelly et al., 1997, Ann. Rev. Immunol.15: 617-648).
[0104] Aminokiselinska sekvenca 191P4D12 proteina kako je prikazana na Fig.1 može da se analizira za odabir specifičnih regiona 191P4D12 proteina za generisanje antitela. Na primer, ispitivanja hidrofobnosti i hidrofilnosti 191P4D12 aminokiselinske sekvence koriste se da bi se identifikovali regioni u 191P4D12 strukturi. Regioni 191P4D12 proteina koji pokazuju imunogensku strukturu, kao i ostali regioni i domeni, mogu se lako identifikovati upotrebom raznih drugih postupaka poznatih u ovoj oblasti, kao što su Chou-Fasman, Garnier-Robson, Kyte-Doolittle, Eisenberg, Karplus-Schultz ili Jameson-Wolf analiza. Profili hidrofilnosti mogu da se generišu upotrebom postupka Hopp, T.P. i Woods, K.R., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.78:3824-3828. Profili hidropatičnosti mogu da se generišu upotrebom postupka Kyte, J. i Doolittle, R.F., 1982, J. Mol. Biol.157:105-132. Profili pristupačnih ostataka u procentima (%) mogu da se generišu upotrebom postupka Janin J., 1979, Nature 277:491-492. Prosečni profili fleksibilnosti mogu da se generišu upotrebom postupka Bhaskaran R., Ponnuswamy P.K., 1988, Int. J. Pept. Protein Res.32:242-255. Pofili beta-zaokreta mogu da se generišu upotrebom postupka Deleage, G., Roux B., 1987, Protein Engineering 1:289-294. Tako, svaki region identifikovan bilo kojim od ovih programa ili postupaka je unutar obima ovog pronalaska. Poželjni postupci za generisanje 191P4D12 antitela dalje su ilustrovani putem primera obezbeđenih ovde. Postupci za pripremu proteina ili polipeptida za upotrebu kao imunogena dobro su poznati u ovoj oblasti. Takođe su, u ovoj oblasti, dobro poznati postupci za pripremu imunogenskih konjugata proteina sa nosačem, kao što je BSA, KLH ili drugi noseći protein. U nekim okolnostima, upotrebom direktne konjugacije, na primer, koriste se karbodiimidni reagensi; u drugim primerima efikasni su vezujući reagensi kao što su oni nabavljeni od Pierce Chemical Co., Rockford, IL. Davanje 191P4D12 imunogena često se izvodi injekcijom tokom odgovarajućeg vremenskog perioda i uz upotrebu pogodnih adjuvanasa, kao što se to podrazumeva u ovoj oblasti. Tokom rasporeda imunizacije, titri antitela mogu da se uzmu da bi se odredila adekvatnost formiranja antitela.
[0105] 191P4D12 monoklonalna antitela mogu da se proizvedu na razne načine koji su dobro poznati u ovoj oblasti. Na primer, obesmrćene ćelijske linije koje izlučuju željeno monoklonalno antitelo pripremaju se upotrebom standardne hibridom tehnologije od Kohler i Milstein ili modifikacija koje obesmrćuju B ćelije koje proizvode antitelo, kao što je opšte poznato. Obesmrćene ćelijske linije koje izlučuju željena antitela pregledaju se imunoogledom u kom antigen predstavlja 191P4D12-srodni protein. Kada se identifikuje odgovarajuća obesmrćena ćelijska kultura, ćelije mogu da se šire i antitela proizvode ili iz in vitro kultura ili iz ascites fluida.
[0106] Antitela ili fragmenti ovog pronalaska takođe mogu da se proizvedu rekombinantnim sredstvima. Regioni koji se vezuju specifično za željene regione 191P4D12 proteina takođe mogu da se proizvedu u kontekstu himernih antitela ili antitela graftovanih regionom koji određuje komplementarnost (CDR) od porekla od više vrsta. Humanizovana ili humana 191P4D12 antitela takođe mogu da se proizvedu, a poželjna su za upotrebu u terapeutskim kontekstima. Postupci za humanizovanje mišjih i ostalih ne-humanih antitela, supstitucijom jednog ili više CDR ne-humanog antitela odgovarajućim sekvencama humanog antitela, dobro su poznati (videti na primer, Jones et al., 1986, Nature 321: 522-525; Riechmann et al., 1988, Nature 332: 323-327; Verhoeyen et al., 1988, Science 239: 1534-1536). Videti, takođe, Carter et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 4285 i Sims et al., 1993, J. Immunol.151: 2296.
[0107] U poželjnom primeru izvođenja, antitela ovog pronalaska obuhvataju potpuno humana 191P4D12 antitela (191P4D12 MAb). Razni postupci u ovoj oblasti obezbeđuju sredstva za proizvodnju potpuno humanih 191P4D12 MAb. Na primer, poželjni primer izvođenja obezbeđuje za tehnike upotrebom transgenih miševa, inaktiviranih za proizvodnju antitela, konstruisanih sa humanim lokusima teških i lakih lanaca koji se nazivaju Xenomouse (Amgen Fremont, Inc.). Primerni opis pripreme transgenih miševa koji proizvode humana antitela može se pronaći u U.S.6,657,103. Videti, takođe, U.S. Patent br.5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016; i 5,545,806; i Mendez, et. al. Nature Genetics, 15: 146-156 (1998); Kellerman, S.A. & Green, L.L., Curr. Opin. Biotechnol 13, 593-597 (2002).
[0108] Dodatno, humana antitela ovog pronalaska mogu da se generišu upotrebom HuMAb miša (Medarex, Inc.) koji sadrži humane minilokuse imunoglobulinskog gena koji kodiraju nepreuređene humane imunoglobulinske sekvence teškog (mu i gama) i kapa lakog lanca, zajedno sa ciljanim mutacijama koje inaktiviraju endogene lokuse mi i kapa lanca (videti npr., Lonberg, et al. (1994) Nature 368(6474): 856-859).
[0109] U drugom primeru izvođenja, potpuno humana antitela ovog pronalaska mogu da se odgoje korišćenjem miša koji nosi humane imunoglobulinske sekvence na transgene i transhromozome, kao što je miš koji nosi humani transgen teškog lanca i humani transhromozom lakog lanca. Takvi miševi, ovde se nazivaju "KM miševi", takvi miševi opisani su u Tomizuka et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727 i PCT objavi WO 02/43478 od Tomizuka, et al.
[0110] Humana monoklonalna antitela ovog pronalaska takođe se mogu pripremiti upotrebom postupaka fagnog displeja za skrining biblioteka humanih imunoglobulinskih gena. Takvi postupci fagnog displeja za izolovanje humanih antitela uspostavljeni su u ovoj oblasti. Videti na primer: U.S. Pat. br. 5,223,409; 5,403,484; i 5,571,698 od Ladner et al.; U.S. Pat. br.5,427,908 i 5,580,717 od Dower et al.; U.S. Pat. br.5,969,108 i 6,172,197 od McCafferty et al.; i U.S. Pat. br.5,885,793; 6,521,404;
6,544,731; 6,555,313; 6,582,915 i 6,593,081 od Griffiths et al.
[0111] Humana monoklonalna antitela ovog pronalaska takođe se mogu pripremiti upotrebom SCID miševa u kojima su humane imune ćelije rekonstituisane tako da odgovor humanog antitela može da se generiše nakon imunizacije. Takvi miševi opisani su u, na primer, U.S. Pat. br.5,476,996 i 5,698,767 od Wilson et al.
[0112] U poželjnom primeru izvođenja, 191P4D12 MAb ovog pronalaska obuhvataju varijabilne regione teškog i lakog lanca antitela označenog Ha22-2(2,4)6.1 proizvedena od strane hibridoma deponovanog pod pristupnim br. Američke zbirke tipskih kultura (ATCC): PTA-11267 (videti, Fig.3), ili teške i lake varijabilne regione koji obuhvataju aminokiselinske sekvence koje su homologe aminokiselinskim sekvencama varijabilnih regiona teškog i lakog lanca od Ha22-2(2,4)6.1, a pri čemu antitela zadržavaju željene funkcionalne osobine 191P4D12 MAb ovog pronalaska. Varijabilni region teškog lanca od Ha22-2(2,4)6.1 sastoji se od aminokiselinske sekvence koja je u opsegu od 20. E ostatka do 136. S ostatka iz SEQ ID NO:7, a varijabilni region lakog lanca od Ha22-2(2,4)6.1 sastoji se od aminokiselinske sekvence koja je u opsegu od 23. D ostatka do 130. R ostatka iz SEQ ID NO:8. Kao konstantni region antitela ovog pronalaska, može da se odabere bilo koja podklasa konstantnog regiona. U jednom primeru izvođenja, mogu da se koriste humani IgG1 konstantni region kao konstantni region teškog lanca i humani Ig kapa konstantni region kao konstantni region lakog lanca.
[0113] Na primer, ovaj pronalazak obezbeđuje izolovano monoklonalno antitelo, ili njegov antigenvezujući deo, koje obuhvata varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca, kod kog:
(a) varijabilni region teškog lanca obuhvata aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 80% homologna aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog regiona teškog lanca navedenoj na Fig.3; i
(b) varijabilni region lakog lanca obuhvata aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 80% homologna aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog regiona lakog lanca navedenoj na Fig.3.
[0114] U ostalim primerima izvođenja, VHi/ili VLaminokiselinske sekvence mogu da budu 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ili 99% homologne VHi VLsekvencama navedenim na Fig.3.
[0115] U drugom primeru izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje izolovano monoklonalno antitelo, ili njegov antigen-vezujući deo, koje obuhvata humanizovani varijabilni region teškog lanca i humanizovani varijabilni region lakog lanca, kod kojeg:
(a) varijabilni region teškog lanca obuhvata regione koji određuju komplementarnost (CDR) koji imaju aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog lanca CDR navedene na Fig.3;
(b) varijabilni region lakog lanca obuhvata CDR koji imaju aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona lakog lanca CDR navedene na Fig.3.
[0116] Konstruisana antitela ovog pronalaska uključuju ona u kojima se modifikacije izvode na ostacima okvira čitanja unutar VHi/ili VL(npr. da bi se poboljšala svojstva antitela). Obično, takve modifikacije okvira čitanja izvode se da bi se smanjila imunogenost antitela. Na primer, jedan pristup je da se "unazad mutira" jedan ili više ostataka okvira čitanja do odgovarajuće sekvence germinativne linije. Preciznije, antitelo koje je podvrgnuto somatskoj mutaciji može da sadrži ostatke okvira čitanja koji se razlikuju od sekvence germinativne linije iz koje je antitelo dobijeno. Takvi ostaci mogu da se identifikuju upoređivanjem sekvenci okvira čitanja antitela do sekvenci germinativne linije iz koje je antitelo dobijeno. Da bi se vratile sekvence regiona okvira čitanja svojoj konfiguraciji geminativne linije, somatske mutacije mogu da budu "unazad mutirani" do sekvence germinativne linije pomoću, na primer, mutageneze usmerene na položaj ili PCR-posredovane mutageneze (npr., "unazad mutiran" od leucina do metionina). Takva "unazad mutirana" antitela takođe su obuhvaćena ovim pronalaskom.
[0117] Druga vrsta modifikacije okvira čitanja uključuje mutiranje jednog ili više ostataka unutar regiona okvira čitanja, ili čak unutar jednog ili više CDR regiona, da se uklone T-ćelijski epitopi kako bi se nataj način smanjila potencijalna imunogenost antitelo. Ovaj pristup takođe se naziva "deimunizacija" i detaljno je opisan u U.S. objavi patenta br.2003/0153043 od strane Carr et al.
[0118] Dodatno ili alternativno modifikacijama izvedenim unutar okvira čitanja ili CDR regiona, antitela ovog pronalaska mogu da budu konstriusana da uključuju modifikacije unutar Fc regiona, obično da bi se izmenile jedna ili više funkcionalnih osobina antitela, kao što su poluživot seruma, fiksacija komplementa, vezivanje Fc receptora, i/ili antigen-zavisna ćelijska citotoksičnost. Dalje, 191P4D12 MAb ovog pronalaska može da se hemijski modifikuje (npr., jedno ili više hemijskih ostataka može da se pričvrsti za antitelo) ili da se modifikuje da bi se izmenila njegova glikozilacija, ponovo da bi se izmenila jedna ili više funkcionalnih osobina MAb. Svaki od ovih primera izvođenja detaljno je opisan u nastavku.
[0119] U jednom primeru izvođenja, zglobni region CH1modifikovan je tako da je broj cisteinskih ostataka u zglobnom regionu izmenjen, npr., povećan ili smanjen. Ovaj pristup dalje je opisan u U.S. Pat. br.5,677,425 od Bodmer et al. Broj cisteinskih ostataka u zglobnom regionu CH1izmenjen je da bi se, na primer, olakšalo sklapanje lakih i teških lanaca ili da bi se povećala ili smanjila stabilnost 191P4D12 MAb.
[0120] U drugom primeru izvođenja, Fc zglobni region nekog antitela mutiran je da bi se smanjio biološki poluživot 191P4D12 MAb. Određenije, jedna ili više aminokiselinih mutacija uvodi se u CH2-CH3 domenski interfejsni region Fc-zglobnog fragmenta tako da antitelo poremeti vezivanje Staphylococcyl proteina A (SpA) u odnosu na prirodno SpA vezivanje Fc-zglobnog domena. Ovaj pristup detaljno je opisan u U.S. Pat. br.6,165,745 od Ward et al.
[0121] U drugom primeru izvođenja, 191P4D12 MAb modifikuje se da bi se povećao njegov biološki poluživot. Mogući su razni pristupi. Na primer, mutacije mogu da se uvedu kao što je opisano u U.S. Pat. br. 6,277,375 od Ward. Alternativno, da bi se povećao biološki poluživot, antitelo može da se izmeni unutar CH1 ili CL regiona kako bi sadržao receptor za spašavanje koji vezuje epitop uzet od dve petlje od CH2 domena Fc regiona od IgG, kao što je opisano u U.S. Pat. br.5,869,046 i 6,121,022 od Presta et al.
[0122] U još nekim primerima izvođenja, Fc region izmenjen je zamenom najmanje jednog aminokiselinskog ostatka sa drugačijim aminokiselinskim ostatkom da bi se izmenila efektorska funkcija(e) 191P4D12 MAb. Na primer, jedna ili više aminokiselina odabrana od aminokiselinskih specifičnih ostataka može da se zameni sa drugačijim aminokiselinskim ostatkom tako da antitelo ima izmenjen afinitet za efektorski ligand ali zadržava antigen-vezujuću sposobnost roditeljskog antitela. Efektorski ligand kome je afinitet izmenjen može da bude, na primer, Fc receptor ili C1 komponenta komplementa. Ovaj pristup detaljno je opisan u U.S. Pat. br.5,624,821 i 5,648,260, oba od Winter et al.
[0123] Reaktivnost 191P4D12 antitela sa 191P4D12-srodnim proteinom mogu se ustanoviti na osnovu mnogih poznatih sredstava, uključujući Western blot, imunoprecipitaciju, ELISA i FACS analize upotrebom, po potrebi, 191P4D12-srodnih proteina, 191P4D12-eksprimirajućih ćelija ili njihovih ekstrakta.191P4D12 antitelo ili njegov fragment može da bude obeležen detektabilnim markerom ili konjugovan sa drugim molekulom. Pogodni detektabilni markeri uključuju, ali nisu ograničeni na, radioizotop, fluorescentno jedinjenje, bioluminescentno jedinjenje, hemiluminiscentno jedinjenje, metalni helator ili enzim. Dalje, bispecifična antitela specifična za jedan ili više 191P4D12 epitopa generisana su upotrebom postupaka uopšteno poznatih u ovoj oblasti. Homodimerna antitela takođe mogu da se generišu tehnikama umrežavanja poznatim u ovoj oblasti (npr., Wolff et al., Cancer Res.53: 2560-2565).
[0124] U još jednom drugom poželjnom primeru izvođenja, 191P4D12 MAb ovog pronalaska je neko antitelo koje obuhvata teški i laki lanac antitela označenog Ha22-2(2,4)6.1. Teški lanac od Ha22-2(2,4)6.1 sastoji se od aminokiselinske sekvence koja je u opsegu od 20. E ostatka do 466. K ostatka iz SEQ ID NO:7, a laki lanac od Ha22-2(2,4)6.1 sastoji se od aminokiselinske sekvence koja je u opsegu od 23. D ostatka do 236. C ostatka iz SEQ ID NO:8 sekvence. Njegova sekvenca navedena je na Fig.2 i Fig.3. U poželjnom primeru izvođenja, Ha22-2(2,4)6.1 je konjugovan sa citotoksičnim agensom.
[0125] Hibridom koji proizvodi antitelo označeno Ha22-2(2,4)6.1 poslat je (putem Federal Express) u Američku zbirku tipskih kultura (ATCC), P.O. Box 1549, Manassas, VA 20108 na 18-Avgust-2010. i dodeljen je pristupni broj PTA-11267.
III.) Konjugati antitela i leka Uopšteno
[0126] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje konjugate antitela i leka (ADC), koji obuhvataju antitelo konjugovano sa nekim citotoksičnim agensom kao što je hemoterapeutski agens, lek, inhibitorni agens rasta, toksin (npr., enzimski aktivan toksin bakterijskog, gljivčnog, biljnog ili životinjskog porekla, ili njegovi fragmenti), ili radioaktivni izotop (tj., radiokonjugat). U drugom aspektu, ovaj pronalazak dalje obezbeđuje postupke upotrebe ADC. U jednom aspektu, ADC obuhvata bilo koje od ovde navedenih 191P4D12 MAb kovalentno pričvršćenih za citotoksični agens ili detektabilni agens.
[0127] Upotreba konjugata antitela i leka za lokalnu dostavu citotoksičnih ili citostatičkih agenasa, tj. lekova da bi se ubile ili inhibirale tumorske ćelije u lečenju kancera (Syrigos i Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614; Niculescu-Duvaz i Springer (1997) Adv. Drg Del. Rev.26:151-172; U.S. patent 4,975,278) omogućava ciljanu dostavu lekovitog dela do tumora, i intracelularnu akumulaciju tu, gde sistemsko davanje ovih nekonjugovanih lekovitih agenasa može da rezultuje neprihvatljivim nivoima toksičnosti na normalne ćelije kaoi tumorske ćelije koje treba da se eliminišu (Baldwin et al., (1986) Lancet pp. (Mar.15, 1986):603-05; Thorpe, (1985) "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies ’84: Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al. (ed.s), pp.475-506). Prema tome, traži se maksimalna efikasnost sa minimalnom toksičnošću. I poliklonalna antitela i monoklonalna antitela prijavljena su kao korisna u ovim strategijama (Rowland et al., (1986) Cancer Immunol. Immunother., 21:183-87). Lekovi korišćeni u ovim postupcima uključuju daunomicin, doksorubicin, metotreksat i vindesin (Rowland et al., (1986) supra). Toksini korišćeni u antitelo-toksin konjugatima uključuju bakterijske toksine kao što su toksin difterije, biljne toksine kao što su ricin, toksine malog molekula kao što su geldanamicin (Mandler et al (2000) Jour. od Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-1581; Mandler et al (2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028; Mandler et al (2002) Bioconjugate Chem.13:786-791), majtanzinoidi (EP 1391213; Liu et al., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623), i kaliheamicin (Lode et al (1998) Cancer Res.58:2928; Hinman et al (1993) Cancer Res.53:3336-3342). Toksini mogu da ispolje svoje citotoksične i citostatičke efekte mehanizmima koji uključuju vezivanje tubulina, DNK vezivanje, ili inhibiciju topoizomeraze. Neki citotoksični lekovi imaju tendenciju da budu neaktivni ili manje aktivni kada su konjugovana sa velikim antitelima ili ligandima proteinskih receptora.
[0128] Primeri konjugata antitela i leka su, ZEVALIN® (ibritumomab tiuksetan, Biogen/Idec) koji je antitelo-radioizotop konjugat sastavljen od mišjeg IgG1 kapa monoklonalnog antitela usmerenog protiv CD20 antigena koji se nalazi na površini normalnih i malignih B limfocita i<111>In ili<90>Y radioizotop vezan za tiourea linker-helator (Wiseman et al (2000) Eur. Jour. Nucl. Med.27(7):766-77; Wiseman et al (2002) Blood 99(12):4336-42; Witzig et al (2002) J. Clin. Oncol.20(10):2453-63; Witzig et al (2002) J. Clin. Oncol.
20(15):3262-69).
[0129] Dodatno, MYLOTARG™ (gemtuzumab ozogamicin, Wyeth Pharmaceuticals), konjugat antitela i leka sastavljen od hu CD33 antitela povezanog sa kaliheamicinom, odobren je 2000. za lečenje akutne mijeloidne leukemije injekcijom (Drugs of the Future (2000) 25(7):686; US Patent br.4970198; 5079233; 5585089; 5606040; 5693762; 5739116; 5767285; 5773001).
[0130] Dodatno, Cantuzumab mertanzin (Imunogen, Inc.), konjugat antitela i leka sastavljen od huC242 antitela povezanog preko disulfidnog linkera SPP sa lekovitim delom majtanzinoida, DM1, napredovao je u probama u Fazi II za lečenje kancera koji eksprimiraju CanAg, kao što su kolona, pankreasa, želuca, i ostali.
[0131] Dodatno, MLN-2704 (Millennium Pharm., BZL Biologics, Imunogen Inc.), konjugat antitela i leka sastavljen od monoklonalnog antitela protiv prostatata specifičnog membranskog antigena (PSMA) povezanog sa lekovitim delom majtanzinoida, DM1, u razvoju je za moguće lečenje tumora prostate.
[0132] Konačno, auristatin peptidi, auristatin E (AE) i monometilauristatin (MMAE), sintetički analogi dolastatina, konjugovani su sa himernim monoklonalnim antitelima cBR96 (specifični za Lewis Y na karcinomima) i cAC10 (specifični za CD30 na hematološkim malignostima) (Doronina et al (2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784) i pod terapeutskim razvojem su.
[0133] Dalje, ovde su opisani hemoterapeutski agensi korisni u generisanju ADC. Enzimski aktivni toksini i njihovi fragmenti koji mogu da se koriste uključuju A lanac difterije, nevezujuće aktivne fragmente toksina difterije, A lanac egzotoksina (iz Pseudomonas aeruginosa), A lanac ricina, A lanac abrina, A lanac modekcina, alfa-sarcin, proteine iz Aleurites fordii, diantin proteine, proteine iz Phytolaca americana (PAPI, PAPII, i PAP-S), inhibitor iz momordica charantia, curcin, crotin, inhibitor iz sapaonaria officinalis, gelonin, mitogelin, restrictocin, fenomicin, enomicin, i trikotecene. Videti, npr., WO 93/21232 objavljen 28. oktobra 1993. Razni radionuklidi dostupni su za proizvodnju radiokonjugovanih antitela. Primeri uključuju<212>Bi,<131>I,<131>In,<90>Y, i<186>Re. Konjugati antitela i citotoksičnih agenasa proizvode se upotrebom raznih bifunkcionalnih protein-vezujućih agenasa kao što su N-sukcinimidil-3-(2-piridilditiol) propionat (SPDP), iminotiolan (IT), bifunkcionalni derivati imidoestri (kao što je dimetil adipimidat HCl), aktivni estri (kao što je disukcinimidil suberat), aldehidi (kao što je glutaraldehid), bis-azido jedinjenja (kao što je bis (p-azidobenzoil) heksandiamin), bis-diazonijum derivati (kao što je bis-(pdiazonijumbenzoil)-etilendiamin), diizocijanati (kao što je toluen 2,6-diizocijanat), i bis-aktivna jedinjenja fluora (kao što je 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen). Na primer, ricin imunotoksin može da se pripremi kao što je opisano u Vitetta et al (1987) Science, 238:1098. Ugljenikom-14-obeležen 1-izotiocijanatobenzil-3-metildietilen triaminpentasirćetna kiselina(MX-DTPA) je primerni helatni agens za konjugaciju radionukleotida sa antitelom (WO94/11026).
[0134] Konjugati nekog antitela i jednog ili više toksina malog molekula, kao što su kaliheamicin, majtanzinoidi, dolastatini, auristatini, trikotecen, i CC1065, i derivati ovih toksina koji imaju aktivnost toksina, ovde su takođe razmatrani.
III(A). Majtanzinoidi
[0135] Jedinjenja majtanzina pogodna za upotrebu kao majtanzinoidni lekoviti delovi dobro su poznati u ovoj oblasti, a mogu da se izoluju iz prirodnih izvora prema poznatim postupcima, proizvedu upotrebom tehnika genetičkog inženjeringa (videti Yu et al (2002) PNAS 99:7968-7973), ili majtanzinol i majtanzinol analozi pripremljeni sintetički prema poznatim postupcima.
[0136] Primerni majtanzinoidni lekoviti delovi uključuju one koji imaju modifikovan aromatični prsten, kao što su: C-19-dehloro (US 4256746) (pripremljen litijum aluminijum hidridnom redukcijom ansamitocina P2); C-20-hidroksi (ili C-20-demetil) /-C-19-dehloro (US Pat. br.4,361,650 i 4,307,016) (pripremljen demetilacijom upotrebom Streptomyces ili Actinomyces ili dehlorinacijom upotrebom LAH); i C-20-demetoksi, C-20-aciloksi (-OCOR), /-dehloro (U.S. Pat. br.4,294,757) (pripremljen acilacijom upotrebom acil hlorida). i oni koji imaju modifikacije na ostalim položajima.
[0137] Primerni majtanzinoidni lekoviti delovi takođe uključuju one koji imaju modifikacije kao što su: C-9-SH (US 4,424,219) (pripremljeni reakcijom majtanzinola sa H2S ili P2S5); C-14-alkoksimetil(demetoksi/CH2OR)(US 4331598); C-14-hidroksimetil ili aciloksimetil (CH2OH ili CH2OAc) (US 4450254) (pripremljeni od Nocardia); C-15-hidroksi/aciloksi (US 4,364,866) (pripremljeni konverzijom majtanzinola od strane Streptomyces); C-15-metoksi (US Pat. br.4,313,946 i 4,315,929) (izolovan iz Trewia nudlflora); C-18-N-demetil (US Pat. br.4,362,663 i 4,322,348) (pripremljen demetilacijom majtanzinola od strane Streptomyces); i 4,5-deoksi (US 4,371,533) (pripremljen titanijum trihlorid/LAH redukcijom majtanzinola).
[0138] ADC koji sadrže majtanzinoide, postupci proizvodnje istih, i njihova terapeutska upotreba opisani su, na primer, u U.S. Patent br.5,208,020; 5,416,064; 6,441,163 i Evropskom patentnu EP 0425 235 B1, čiji su opisi ovde izričito inkorporirani referencom. Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623 (1996) opisao je ADC koji sadrže majtanzinoidni označeni DM1 povezan sa monoklonalnim antitelom C242 usmerenim protiv humanog kolorektalnog kancera. Otkriveno je da je konjugat visoko citotoksičan prema kultivisanim ćelijama kancera kolona, i da pokazuje antitumornu aktivnost u in vivo ogledu rasta tumora. Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992) opisuje ADC u kojima je majtanzinoid konjugovan preko disulfidnog linkera sa mišjim antitelom A7 koje se vezuje za antigen na ćelijskim linijama humanog kancera kolona, ili sa drugim mišjim monoklonalnim antitelom TA.1 koje vezuje HER-2/neu onkogen. Citotoksičnost TA.1-majtanzonoid konjugata ispitan je in vitro na ćelijskoj liniji humanog kancera dojke SK-BR-3, koja eksprimira 3 x 10<5>HER-2 površinskih antigena po ćeliji. Konjugat leka postigao je stepen citotoksičnosti sličan slobodnom majtanzinoidnom leku, koji se može povećati povećanjem broja molekula majtanzinoida po molekulu antitela. A7-majtanzinoidni konjugat pokazao je nisku sistemsku citotoksičnost kod miševa.
III(B). Auristatini i dolastatini
[0139] U nekim primerima izvođenja, ADC obuhvata antitelo ovog pronalaska konjugovano sa dolastatinima ili dolostatin peptidni analozima i derivatima, auristatinima (US Patent br.
5,635,483; 5,780,588). Za dolastatine i auristatine pokazalo se da ometaju dinamike mikrotubula, GTP hidroliza, i jedarnu i ćelijsku deobu (Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother.
45(12):3580-3584) i imaju antikancernu (US 5,663,149) i antifungalnu aktivnost (Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother.42:2961-2965). Lekoviti deo dolastatina ili auristatina može da bude vezan za antitelo preko N (amino) terminusa ili C (karboksil) terminusa peptidnog lekovitog dela (WO 02/088172).
[0140] Primerna ostvarenja auristatina uključuju N-terminusom vezane monometilauristatin lekovite delove DE i DF, opisane u "Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, dat 28. marta 2004. i opisane u Objavi patenta Sjedinjenih Država br. 2005/0238649, čiji je opis izričito inkorporiran referencom u svojoj celosti.
[0141] Primerno ostvarenje auristatina je MMAE (u kom talasasta linija označava kovalentno vezivanje za neki linker (L) konjugata antitela i leka).
[0142] Drugo primerno ostvarenje auristatina je MMAF, gde talasasta linija označava kovalentno vezivanje za neki linker (L) konjugata antitela i leka (US 2005/0238649) :
[0143] Dodatna primerna ostvarenja koja obuhvataju MMAE ili MMAF i razne vezujuće komponente (opisane ovde u nastavku) imaju sledeće strukture i skraćenice (gde Ab znači antitelo, S je sumpor antitela, i p je 1 do oko 8):
[0144] Obično, peptid-bazirani lekoviti delovi mogu da se pripreme formiranjem peptidne veze između dve ili više aminokiselina i/ili peptidnih fragmenata. Takve peptidne veze mogu da se pripreme, na primer, prema postupku sinteze u tečnoj fazi (videti E. Schroder i K. Lübke, "The Peptides", volume 1, pp 76-136, 1965, Academic Press) koji je dobro poznat u oblasti peptidne hemije. Auristatin/dolastatin lekoviti delovi mogu da se pripreme prema postupcima iz: US 5635483; US 5780588; Pettit et al (1989) J. Am. Chem. Soc.111:5463-5465; Pettit et al (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277; Pettit, G.R., et al. Synthesis, 1996, 719-725; Pettit et al (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans.15:859-863; i Doronina (2003) Nat Biotechnol 21(7):778-784.
III(C). Kaliheamicin
[0145] U ostalim primerima izvođenja, ADC obuhvata neko antitelo ovog pronalaska konjugovano sa jednim ili više molekula kaliheamicina. Kaliheamicin porodica antibiotika može da proizvodi prekidanja dvolančane DNK pri subpikomolarnim koncentracijama. Za pripremu konjugata kaliheamicin porodice, videti U.S. patente 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001, 5,877,296 (svi od American Cyanamid Company). Strukturni analozi kaliheamicina koji mogu da se koriste uključuju, ali nisu ograničeni na, γ1<I>, α<I>
2, α<I>
3, N-acetil-γ1<I>, PSAG i θ<I>
1(Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998) i gore navedene U.S. patente od American Cyanamid). Drugi anti-tumorni lek koji može da bude konjugovan sa antitelom je QFA koji je antifolat. I kaliheamicin i QFA imaju intracelularna mesta akcije i lako ne prolaze plazmatičnu membranu. Prema tome, ćelijski unos ovih agenasa putem antitelom posredovane internalizacije u velikoj meri poboljšava njihove citotoksične efekte.
III(D). Ostali citotoksični agensi
[0146] Ostali antitumorni agensi koji mogu da budu konjugovani sa antitelima ovog pronalaska uključuju BCNU, streptozoicin, vinkristin i 5-fluorouracil, porodica agenasa poznata pod zajedničkim imenom LL-E33288 kompleks opisan u U.S. patentima 5,053,394, 5,770,710, kao i esperamicine (U.S. patent 5,877,296).
[0147] Enzimski aktivni toksini i njihovi fragmenti koji mogu da se koriste uključuju A lanac difterije, nevezujuće aktivne fragmente toksina difterije, A lanac egzotoksina (iz Pseudomonas aeruginosa), A lanac ricina, A lanac abrina, A lanac modekcina, alfa-sarcin, proteine izAleurites fordii, diantin proteine, proteine iz Phytolaca americana (PAPI, PAPII, i PAP-S), inhibitor iz momordica charantia, curcin, crotin, inhibitor iz sapaonaria officinalis, gelonin, mitogelin, restrictocin, fenomicin, enomicin i trikotecene. Videti, na primer, WO 93/21232 objavljen 28. oktobra 1993.
[0148] Ovaj pronalazak dalje opisuje ADC formiran između nekog antitela i nekog jedinjenja sa nukleolitičkom aktivnošću (npr., ribonukleaza ili DNK endonukleaza kao što je dezoksiribonukleaza; DNaza).
[0149] Za selektivno uništenje tumora, antitelo može da obuhvata visoko radioaktivni atom. Razni radioaktivni izotopi dostupni su za proizvodnju radiokonjugovanih antitela. Primeri uključuju At<211>, I<131>, I<125>, Y<90>, Re<186>, Re<188>, Sm<153>, Bi<212>, P<32>, Pb<212>i radioaktivne izotope od Lu. Kada se koristi konjugat za detekciju, on može da obuhvata radioaktivni atom za scintigrafske studije, na primer tc<99m>ili I<123>, ili obeleživač spina za imidžing nuklearne magnetne rezonance (NMR) (takođe poznat kao imidžing magnetne rezonance, mri), kao što je jod-123 ponovo, jod-131, indijum-111, fluor-19, ugljenik-13, azot-15, kiseonik-17, gadolinijum, mangan ili železo.
[0150] Radio- ili ostali obeleživači mogu da se ugrade u konjugat na poznate načine. Na primer, peptid može da bude biosintetizovan ili može da bude sintetizovan hemijskom sintezom aminokiselina upotrebom pogodnih prekursora aminokiselina uključujući, na primer, fluor-19 umesto vodonika. Obeleživači kao što su tc<99m>ili I<123>, .Re<186>, Re<188>i In<111>mogu da se vežu preko cisteinskog ostatka u peptidu. Itrijum-90 može da se veže preko lizinskog ostatka. IODOGEN postupak (Fraker et al (1978) Biochem. Biophys. Res. Commun.80: 49-57 može da se koristi za ugradnju jod-123. "Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy" (Chatal,CRC Press 1989) detaljno opisuje ostale postupke.
IV.) Jedinjenja konjugata antitela i leka koja vezuju 191P4D12
[0151] Ovaj pronalazak obezbeđuje, inter alia, jedinjenja konjugata antitela i leka za ciljanu dostavu leka. Pronalazači su otkrili da jedinjenja konjugata antitela i leka imaju snažnu citotoksičnu i/ili citostatičku aktivnost protiv ćelija koje eksprimiraju 191P4D12. Jedinjenja konjugata antitela i leka obuhvataju jedinicu antitela kovalentno vezanu za najmanje jednu lekovitu jedinicu. Lekovitu jedinice mogu da budu kovalentno vezane direktno ili preko vezujuće jedinice (LU).
[0152] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje konjugata antitela i leka ima sledeću formulu:
L-(LU-D)p(I)
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat; gde:
L je jedinica antitela, npr., 191P4D12 MAb ovog pronalaska, i
(LU-D) je deo vezujuće jedinice-lekovite jedinice, u kom:
LU- je vezujuća jedinica, i
-D je lekovita jedinica koja ima citostatičku ili citotoksičnu aktivnost protiv ciljne ćelije; i p je ceo broj od 1 do 20.
[0153] U nekim primerima izvođenja, p je u opsegu od 1 do 10, 1 do 9, 1 do 8, 1 do 7, 1 do 6, 1 do 5, 1 do 4, 1 do 3, ili 1 do 2. U nekim primerima izvođenja, p je u opsegu od 2 do 10, 2 do 9, 2 do 8, 2 do 7, 2 do 6, 2 do 5, 2 do 4 ili 2 do 3. U ostalim primerima izvođenja, p je 1, 2, 3, 4, 5 ili 6. U nekim primerima izvođenja, p je 2 ili 4.
[0154] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje konjugata antitela i leka ima sledeću formulu:
L-(Aa-Ww-Yy-D)p(II)
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvate, gde:
L je jedinica antitela, npr., 191P4D12 MAb; i
-Aa-Ww-Yy- je vezujuća jedinica (LU), u kojoj:
-A- je noseća jedinica,
a je 0 ili 1,
svako -W- je nezavisno aminokiselinska jedinica,
w je ceo broj koji je u opsegu od 0 do 12,
-Y- je samožrtvujuća razdvajajuća jedinica,
y je 0, 1 ili 2;
-D je lekovite jedinice koje imaju citostatičku ili citotoksičnu aktivnost protiv ciljne ćelije; i p je ceo broj od 1 do 20.
[0155] U nekim primerima izvođenja, a je 0 ili 1, w je 0 ili 1, i y je 0, 1 ili 2. U nekim primerima izvođenja, a je 0 ili 1, w je 0 ili 1, i y je 0 ili 1. U nekim primerima izvođenja, p je u opsegu od 1 do 10, 1 do 9, 1 do 8, 1 do 7, 1 do 6, 1 do 5, 1 do 4, 1 do 3, ili 1 do 2. U nekim primerima izvođenja, p je u opsegu od 2 do 8, 2 do 7, 2 do 6, 2 do 5, 2 do 4 ili 2 do 3. U ostalim primerima izvođenja, p je 1, 2, 3, 4, 5 ili 6. U nekim primerima izvođenja, p je 2 ili 4. U nekim primerima izvođenja, kada w nije nula, y je 1 ili 2. U nekim primerima izvođenja, kada w je 1 do 12, y je 1 ili 2. U nekim primerima izvođenja, w je 2 do 12 i y je 1 ili 2. U nekim primerima izvođenja, a je 1, a w i y su 0.
[0156] Za kombinacije koje obuhvataju mnoštvo antitela, punjenje leka predstavljeno je sa p, prosečan broj molekula leka po antitelu. Punjenje leka može da bude u opsegu od 1 do 20 lekova (D) po antitelu. Prosečan broj lekova po antitelu u pripremi reakcija konjugacije može da se okarakteriše konvencionalnim sredstvima kao što su masena spektroskopija, ELISA ogled, i HPLC. Takođe može da se odredi kvantitativna distribucija antitelo-lek-konjugata u smislu p. U nekim primerima, separacija, prečišćavanje i karakterizacija homogenih antitelo-lek-konjugata gde je p određena vrednost od antitelo-leka-konjugata sa ostalim punjenjima leka, mogu se postići sredstvima kao što su reverzna fazna HPLC ili elektroforeza. U primernim ostvarenjima, p je od 2 do 8.
[0157] Generisanje jedinjenja konjugata antitela i leka može se postići bilo kojom tehnikom poznatom prosečnom stručnjaku. Ukratko, jedinjenja konjugata antitela i leka obuhvataju 191P4D12 MAb kao jedinicu antitela, lek, i opciono linker koji povezuje lek i vezujući agens. U poželjnom primeru izvođenja, antitelo je 191P4D12 MAb koji obuhvata varijabilne regione teškog i lakog lanca antitela označenog Ha22-2(2,4)6.1 opisanog gore. U poželjnijem primeru izvođenja, antitelo je 191P4D12 MAb koje obuhvata teški i laki lanac antitela označenog Ha22-2(2,4)6.1 opisanog gore. Brojne različite reakcije dostupne su za kovalentno vezivanje lekova i/ili linkera za vezujuće agense. Ovo se često postiže reakcijom aminokiselinskih ostataka vezujućeg agensa, npr., molekula antitela, uključujući aminske grupe lizina, grupe slobodnih karboksilnih kiselina glutaminske i asparaginske kiseline, sulfhidril grupe cisteina i razne delove aromatičnih aminokiselina. Jedan od najčešće korišćenih nespecifičnih postupaka kovalentnog vezivanja je karbodiimidna reakcija za vezivanje karboksi (ili amino) grupe jedinjenja za amino (ili karboksi) grupe antitela. Dodatno, bifunkcionalni agensi kao što su dialdehidi ili imidoestri koriste se za vezivanje amino grupe jedinjenja za amino grupe molekula antitela. Takođe dostupna za vezivanje lekova za vezujuće agense je reakcija Šifove baze. Ovaj postupak uključuje perjodatnu oksidaciju leka koji sadrži glikol ili hidroksi grupe, čime se formira aldehid koji potom reaguje sa vezujućim agensom. Vezivanje se javlja preko formiranja Šifove baze sa amino grupama vezujućeg agensa. Izotiocijanati takođe mogu da se koriste kao kuplujući agensi za kovalentno vezivanje lekova za vezujuće agense. Ostale tehnike poznate su prosečnom stručnjaku i unutar su obima ovog pronalaska.
[0158] U određenim primerima izvođenja, intermedijer, koji je prekursor linkera, reaguje sa lekom pod odgovarajućim uslovima. U određenim primerima izvođenja, reaktivne grupe koriste se na leku i/ili intermedijeru. Proizvod reakcije između leka i intermedijera, ili derivatizovani lek, zatim reaguje sa 191P4D12 MAb pod odgovarajućim uslovima.
[0159] Svaka od posebnih jedinica jedinjenja konjugata antitela i leka ovde je detaljnije opisana. Sinteza i struktura primernih vezujućih jedinica, nosećih jedinica, aminokiselinskih jedinica, samožrtvujuće razdvajajuće jedinice, i lekovitih jedinica takođe su opisane u U.S. objavi prijave patenta br.2003-0083263, 2005-0238649 i 2005-0009751.
V.) Vezujuće jedinice
[0160] Obično, jedinjenja konjugata antitela i leka obuhvataju vezujuću jedinicu između lekovite jedinice i jedinice antitela. U nekim primerima izvođenja, linker je cepljiv pod intracelularnim uslovima, tako da cepanje linkera oslobađa lekovitu jedinicu od antitela u intracelularnu sredinu. U još nekim primerima izvođenja, vezujuća jedinica nije cepljiva i lek se oslobađa, na primer, degradacijom antitela.
[0161] U nekim primerima izvođenja, linker je cepljiv pomoću agensa za cepanje koji je prisutan u intracelularnoj sredini (npr., unutar lizozoma ili endozoma ili kaveola). Linker može da
bude, npr., peptidil linker koji se cepa pomoću intracelularne enzima peptidaze ili proteaze, uključujući, ali ne ograničavajući se na, lizozomalnu ili endozomalnu proteazu. U nekim primerima izvođenja, peptidil linker je najmanje dugačak dve aminokiseline ili najmanje dugačak tri aminokiseline. Agensi za cepanje mogu da uključuju katepsine B i D i plazmin, za koje je poznato da hidrolizuju dipeptidne derivate leka što rezultuje u oslobađanju aktivnog leka unutar ciljnih ćelija (videti, npr., Dubowchik i Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123). Najtipičniji su peptidil linkeri koji su cepljivi pomoću enzima koji su prisutni u 191P4D12-eksprimirajućim ćelijama. Na primer, peptidil linker koji je cepljiv pomoću tiol-zavisne proteaze katepsin-B, koji se u velikoj meri eksprimira u kancernom tkivu, može da se koristi (npr., Phe-Leu ili Gly-Phe-Leu-Gly linker (SEQ ID NO:9)). Ostali primeri takvih linkera opisani su, npr., u U.S. patentu br.6,214,345, ovde inkorporiran referencom u svojoj celosti i za sve svrhe. U specifičnom primeru izvođenja, peptidil linker cepljiv pomoću intracelularne proteaze je Val-Cit linker ili Phe-Lys linker (videti, npr., U.S. Patent 6,214,345, koji opisuje sintezu doksorubicina sa Val-Cit linkerom).
Jedna prednost upotrebe intracelularnog proteolitičkkog oslobađanja terapeutskog agensa je taj da je agens obično atenuiran kada je konjugovan, a serumske stabilnosti konjugata su obično visoke.
[0162] U ostalim primerima izvođenja, cepljivi linker je pH-osetljiv, tj.,osetljiv na hidrolizu pri određenim pH vrednostima. Obično, pH-osetljivi linker može da hidrolizuje pod kiselim uslovima. Na primer, može da se koristi kiselo-labilan linker koji može da hidrolizuje u lizozomu (npr., hidrazon, semikarbazon, tiosemikarbazon, cis-akonitonski amid, ortoestar, acetal, ketal, ili slično). (Videti, npr., U.S. Patent br.5,122,368; 5,824,805; 5,622,929; Dubowchik i Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem.264:14653-14661.) Takvi linkeri relativno su stabilni u neutralnim pH uslovima, kao što su oni u krvi, ali su nestabilni ispod pH 5,5 ili 5,0, približna pH lizozoma. U određenim primerima izvođenja, linker koji može da hidrolizuje je tioetar linker (kao što
je, npr., tioetar povezan sa terapeutskim agenom preko acilhidrazonske veze (videti, npr.,U.S. Patent br.
5,622,929).
[0163] U još nekim primerima izvođenja, linker je cepljiv pod redukcionim uslovima (npr., disulfidni linker). Razni disulfidni linkeri poznati su u ovoj oblasti, uključujući, na primer, one koji mogu da se formiraju potrebom SATA (N-sukcinimidil-S-acetiltioacetat), SPDP (N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio)propionat), SPDB (N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio)butirat) i SMPT (N-sukcinimidil-oksikarbonilalfa-metil-alfa-(2-piridil-ditio)toluen), SPDB i SMPT. (Videti, npr.,Thorpe et al., 1987, Cancer Res.
47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987. Videti takođe U.S. Patent br.4,880,935.)
[0164] U još nekim drugim specifičnim primerima izvođenja, linker je malonat linker (Johnson et al., 1995, Anticancer Res.15:1387-93), maleimidobenzoil linker (Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem.
3(10):1299-1304), ili 3'-N-amid analog (Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem.3(10):1305-12).
[0165] U još nekim primerima izvođenja, vezujuća jedinica nije cepljiva i lek se oslobađa degradacijom antitela. (Videti U.S. objavu br.2005/0238649.
[0166] Obično, linker nije suštinski osetljiv na ekstracelularnu sredinu. Kako se ovde koristi, "nije suštinski osetljiv na ekstracelularnu sredinu," u kontekstu linkera, znači da se ne više od oko 20%, obično ne više od oko 15%, naročito ne više od oko 10%, a još više tipično ne više od oko 5%, ne više od oko 3%, ili ne više od oko 1% linkera, u uzorku jedinjenja konjugata antitela i leka, cepa kada je jedinjenje konjugata antitela i leka prisutno u ekstracelularnoj sredini (npr., u plazmi). Može da se odredi da linker nije suštinski osetljiv na ekstracelularnu sredinu, na primer, inkubacijom sa plazmom jedinjenja konjugata antitela i leka za unapred određeni vremenski period (npr., 2, 4, 8, 16, ili 24 sata), a zatim određivanjem količine slobodnog leka prisutnog u plazmi.
[0167] U ostalim, međusobno neisključujućim primerima izvođenja, linker promoviše ćelijsku internalizaciju. U određenim primerima izvođenja, linker promoviše ćelijsku internalizaciju kada je konjugovan sa terapeutskim agensom (tj., u sredini dela linker-terapeutski agens jedinjenja konjugata antitela i leka kao što je opisano ovde). U još nekim primerima izvođenja, linker promoviše ćelijsku internalizaciju kada je konjugovan i sa jedinjenjem auristatina i sa 191P4D12 MAb.
[0168] Razni primerni linkeri koji mogu da se koriste sa ovim kombinacijama i postupcima opisanim u WO 2004-010957, U.S. objavi br.2006/0074008, U.S. objavi br.20050238649, i U.S. objavi br.
2006/0024317.
[0169] "Vezujuća jedinica" (LU) je bifunkcionalno jedinjenje koje može da se koristi za povezivanje lekovite jedinice i jedinice antitela da bi se formiraolo jedinjenje konjugata antitela i leka. U nekim primerima izvođenja, vezujuća jedinica ima formulu:
-Aa-Ww-Yy-
u kojoj:-A- je noseća jedinica,
a je 0 ili 1,
svako -W- je nezavisno neka aminokiselinska jedinica,
w je ceo broj koji je u opsegu od 0 do 12,
-Y- je samožrtvujuća razdvajajuća jedinica, i
y je 0, 1 ili 2.
[0170] U nekim primerima izvođenja, a je 0 ili 1, w je 0 ili 1, i y je 0, 1 ili 2. U nekim primerima izvođenja, a je 0 ili 1, w je 0 ili 1, i y je 0 ili 1. U nekim primerima izvođenja, kada je w 1 do 12, y je 1 ili 2. U nekim primerima izvođenja, w je 2 do 12 a y je 1 ili 2. U nekim primerima izvođenja, a je 1, a w i y su 0.
VI.) Noseća jedinica
[0171] Noseća jedinica (A), kada je prisutna, može da povezuje jedinicu antitela sa aminokiselinskom jedinicom (-W-), ako je prisutna, sa razdvajajućom jedinicom (-Y-), ako je prisutna; ili sa lekovitom jedinicom (-D). Korisne funkcionalne grupe koje mogu da budu prisutne na 191P4D12 MAb (npr. Ha22-2(2,4)6.1), ili prirodno ili hemijskom manipulacijom uključuju, ali nisu ograničeni na, sulfhidril, amino, hidroksil, anomernu hidroksilnu grupu ugljeno-hidrata, i karboksil. Pogodne funkcionalne grupe su sulfhidril i amino. U jednom primeru, sulfhidril grupe mogu da se generišu redukcijom intramolekularnih disulfidnih veza u 191P4D12 MAb. U drugom primeru izvođenja, sulfhidril grupe mogu da se generišu reakcijom amino grupe lizinskog ostatka u 191P4D12 MAb sa 2-iminotiolanom (Traut-ov reagens) ili ostalim reagensima koji generišu sulfhidril. U određenim primerima izvođenja, 191P4D12 MAb je rekombinantno antitelo i konstruisano je da nosi jedan ili više lizina. U određenim ostalim primerima izvođenja, rekombinantno 191P4D12 MAb konstruisano je da nosi dodatne sulfhidril grupe, npr., dodatne cisteine.
[0172] U jednom primeru izvođenja, noseća jedinica formira vezu sa atomom sumpora jedinice antitela. Atom sumpora može da se izvede iz sulfhidril grupe antitela. Reprezentativne noseće jedinice ovog primera izvođenja prikazani su unutar uglastih zagrada u formulama IIIa i IIIb, u kojima su L-, -W-, -Y-, -D, w i y kao što su prethodno definisani, a R<17>je odabran od -C1-C10alkilen-, -C1-C10alkenilen-, -C1-C10alkinilen-, karbociklo-, -O-(C1-C8alkilen)-, O-(C1-C8alkenilen)-, -O-(C1-C8alkinilen)-, -arilen-, -C1-C10alkilen-arilen-, -C2-C10alkenilen-arilen, -C2-C10alkinilen-arilen, -arilen-C1-C10alkilen-,-arilen-C2-C10alkenilen-, -arilen-C2-C10alkinilen-, -C1-C10alkilen-(karbociklo)-, -C2-C10alkenilen-(karbociklo)-, -C2-C10alkinilen-(karbociklo)-, -(karbociklo)-C1-C10alkilen-, -(karbociklo)-C2-C10alkenilen-, -(karbociklo)-C2-C10alkinilen, -heterociklo-, -C1-C10alkilen-(heterociklo)-, -C2-C10alkenilen-(heterociklo)-, -C2-C10alkinilen-(heterociklo)-, -(heterociklo)-C1-C10alkilen-, -(heterociklo)-C2-C10alkenilen-, -(heterociklo)-C1-C10alkinilen-,-(CH2CH2O)r, ili -(CH2CH2O)r-CH2-, i r je ceo broj koji je u opsegu od 1-10, pri čemu su pomenuti alkil, alkenil, alkinil, alkilen, alkenilen, alkiniklen, aril, karbocikl, karbociklo, heterociklo i arilen radikali, bilo sami ili kao deo druge grupe, opciono supstituisani. U nekim primerima izvođenja, pomenuti alkil, alkenil, alkinil, alkilen, alkenilen, alkiniklen, aril, karbocil, karbociklo, heterociklo i arilen radikali, bilo sami ili kao deo druge grupe, su nesupstituisani. U nekim primerima izvođenja, R<17>je odabran od -C1-C10alkilen-, -karbociklo-, -O-(C1-C8alkilen)-, -arilen-, -C1-C10alkilen-arilen-, -arilen-C1-C10alkilen-, -C1-C10alkilen-(karbociklo)-, -(karbociklo)-C1-C10alkilen-, -C3-C8heterociklo-, -C1-C10alkilen-(heterociklo)-, -(heterociklo)-C1-C10alkilen-, -(CH2CH2O)r-, i -(CH2CH2O)r-CH2-; a r je ceo broj koji je u opsegu od 1-10, pri čemu su pomenute alkilen grupe nesupstituisane i ostaci grupa su opciono supstituisani.
[0173] Jasno je iz svih primernih ostvarenja da čak i tamo gde nije izričito naznačeno, od 1 do 20 lekovitih delova može da bude vezano za antitelo (p = 1-20).
L-[-CH2-CONH-R<17>-C(O)-]-Ww-Yy-D IIIb
[0174] Ilustrativna noseća jedinica je ona formule IIIa u kojoj R<17>predstavlja -(CH2)5-:
[0175] Druga ilustrativna noseća jedinica je ona formule IIIa u kojoj R<17>predstavlja -(CH2CH2O)r-CH2-; i r je 2:
[0176] Ilustrativna noseća jedinica je ona formule IIIa u kojoj R<17>predstavlja arilen- ili arilen-C1-C10alkilen-. U nekim primerima izvođenja, aril grupa je nesupstituisana fenil grupa.
[0177] Još jedna ilustrativna noseća jedinica je ona formule IIIb u kojoj R<17>predstavlja -(CH2)5-:
[0178] U određenim primerima izvođenja, noseća jedinica vezana je sa jedinicom antitela disulfidnom vezom između atoma sumpora jedinice antitela i atoma sumpora noseće jedinice. Reprezentativna noseća jedinica ovog primera izvođenja prikazana je unutar uglastih zagrada formule IV, u kojoj su R<17>, L, -W-, -Y-, -D, w i y kao što su prethodno definisani.
[0179] Treba naznačiti da se u ovoj prijavi S deo u formuli dole odnosi na atom sumpora jedinice antitela, osim ako nije drugačije naznačeno kontekstom.
[0180] U još nekim primerima izvođenja, nosač sadrži reaktivno mesto koje može da formira vezu sa primarnom ili sekundarnom amino grupom antitela. Primeri ovih reaktivnih mesta uključuju, ali nisu ograničeni na, aktivirane estre kao što su sukcinimidni estri, 4 nitrofenil estri, pentafluorofeni estri, tetrafluorofenil estri, anhidridi, kiseli hloridi, sulfonil hloridi, izocijanati i izotiocijanati. Reprezentativne noseće jedinice ovog primera izvođenja prikazane su unutar uglastih zagrada formula Va i Vb, u kojima su -R<17>-, L-, -W-, -Y-, -D, w i y kao što su prethodno definisani;
[0181] U nekim primerima izvođenja, nosač sadrži reaktivno mesto koje je reaktivno prema modifikovanom ugljenohidratnoj (-CHO) grupi koja može da bude prisutna na antitelu. Na primer, ugljeni hidrat može da se blago oksiduje upotrebom reagensa kao što je natrijum perjodat, a reziltujuća (-CHO) jedinica oksidovanog ugljeno-hidrata može da bude kondenzovana sa nosačem koji sadrži funkcionalnost kao što su hidrazid, oksim, primarni ili sekundarni amin, hidrazin, tiosemikarbazon, hidrazin karboksilat, i arilhidrazid kao što je onaj opisan od strane Kaneko et al., 1991, Bioconjugate Chem. 2:133-41. Reprezentativne noseće jedinice ovog primera izvođenja prikazane su unutar uglastih zagrada formula VIa, VIb i VIc, u kojima su - R<17>-, L-, -W-, -Y-, -D, w i y kao što su prethodno definisani.
VII.) Aminokiselinska jedinica
[0182] Aminokiselinska jedinica (-W-), kada je prisutna, povezuje noseću jedinicu sa razdvajajućom jedinicom ako je razdvajajuća jedinica prisutna, povezuje noseću jedinicu sa lekovitim delom ako je razdvajajuća jedinica odsutna, i povezuje jedinicu antitela sa lekovitom jedinicom ako su noseća jedinica i razdvajajuća jedinica odsutne.
[0183] Ww- može da bude, na primer, monopeptidna, dipeptidna, tripeptidna, tetrapeptidna, pentapeptidna, heksapeptidna, heptapeptidna, oktapeptidna, nonapeptidna, dekapeptidna, undekapeptidna ili dodekapeptidna jedinica. Svaka -W- jedinica nezavisno ima formulu prikazanu dole u uglastim zgradama, a w je ceo broj koji je u opsegu od 0 do 12:
u kojoj R<19>predstavlja vodonik, metil, izopropil, izobutil, sec-butil, benzil, p-hidroksibenzil, -CH2OH, -CH(OH)CH3, -CH2CH2SCH3, -CH2CONH2, -CH2COOH, -CH2CH2CONH2, -CH2CH2COOH, -(CH2)3NHC(=NH)NH2, -(CH2)3NH2, -(CH2)3NHCOCH3, -(CH2)3NHCHO, -(CH2)4NHC(=NH)NH2, -(CH2)4NH2, -(CH2)4NHCOCH3, -(CH2)4NHCHO, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4NHCONH2, -CH2CH2CH(OH)CH2NH2, 2-piridilmetil-, 3-piridilmetil-, 4-piridilmetil-, fenil, cikloheksil,
[0184] U nekim primerima izvođenja, aminokiselinska jedinica može da se enzimski odcepi pomoću jednog ili više enzima, uključujući proteazu povezanu sa kancerom ili tumorom, kako bi se oslobodila lekovita jedinica (-D), koja se u jednom primeru izvođenja protonuje in vivo usled oslobađanja da bi se obezbedio lek (D).
[0185] U određenim primerima izvođenja, aminokiselinska jedinica može da obuhvata prirodne aminokiseline. U ostalim primerima izvođenja, aminokiselinska jedinica može da obuhvata neprirodne aminokiseline. Ilustrativne Ww jedinice predstavljene su formulama (VII)-(IX):
u kojoj su R<20>i R<21>kao što sledi:
u kojoj su R<20>, R<21>i R<22>kao što sledi:
u kojoj su R<20>, R<21>, R<22>i R<23>kao što sledi:
[0186] Primerne aminokiselinske jedinice uključuju, ali nisu ograničene na, jedinice formule VII gde: R<20>je benzil i R<21>je -(CH2)4NH2; R<20>je izopropil i R<21>je -(CH2)4NH2; ili R<20>je izopropil i R<21>je (CH2)3NHCONH2. Druga primerna aminokiselinska jedinica je jedinica formule VIII u kojoj R<20>je benzil, R<21>je benzil, a R<22>je -(CH2)4NH2.
[0187] Korisne -Ww- jedinice mogu da se izrade i optimizuju u njihovoj selektivnosti za enzimsko cepanje pomoću određenog enzima, na primer, proteaze povezane sa tumorom. U jednom primeru izvođenja, -Ww- jedinica je ona čije se cepanje katalizuje pomoću katepsina B, C i D, ili plazmin proteaze.
[0188] U jednom primeru izvođenja, -Ww- je dipeptid, tripeptid, tetrapeptid ili pentapeptid. Kada R<19>, R<21>, R<21>, R<22>ili R<23>nije vodonik, atom ugljenika za koji se R<19>, R<20>, R<21>, R<22>ili R<23>vezuje je hiralni.
[0189] Svaki atom ugljenika za koji se R<19>, R<20>, R<21>, R<22>ili R<23>vezuje je nezavisan u (S) ili (R) konfiguraciji.
[0190] U jednom aspektu aminokiselinske jedinice, aminokiselinska jedinica je valin-citrulin (vc ili Val-Cit). U drugom aspektu, aminokiselinska jedinica je fenilalanin-lizin (tj., fk). U još nekom drugom aspektu aminokiselinske jedinice, aminokiselinska jedinica je N-metilvalin-citrulin. U još nekom drugom aspektu, aminokiselinska jedinica je 5-aminovalerinska kiselina, homo fenilalanin lizin, tetraizokvinolinkarboksilat lizin, cikloheksilalanin lizin, izonepekotinska kiselina lizin, beta-alanin lizin, glicin serin valin glutamin i izonepekotinska kiselina.
VIII.) Razdvajajuća jedinica
[0191] Razdvajajuća jedinica (-Y-), kada je prisutna, povezuje aminokiselinsku jedinicu sa lekovitom jedinicom kada je aminokiselinska jedinica prisutna. Alternativno, razdvajajuća jedinica povezuje noseću jedinicu sa lekovitom jedinicom kada je aminokiselinska jedinica odsutna. Razdvajajuća jedinica takođe povezuje lekovitu jedinicu sa jedinicom antitela kada su i aminokiselinska jedinica i noseća jedinica odsutne.
[0192] Razdvajajuće jedinice su od dva opšta tipa: ne-samožrtvujuća ili samožrtvujuća. Nesamožrtvujuća razdvajajuća jedinica je ona u kojoj deo ili cela razdvajajuća jedinica ostaje vezana za lekoviti deo nakon cepanja, naročito enzimskog, neke aminokiselinske jedinice iz konjugata antitela i leka. Primeri ne-samožrtvujuće razdvajajuće jedinice uključuju, ali nisu ograničeni na (glicin-glicin) razdvajajuću jedinicu i glicin razdvajajuću jedinicu (obe prikazane u Šemi 1) (infra). Kada se konjugat koji sadrži glicin-glicin razdvajajuću jedinicu ili glicin razdvajajuću jedinicu podvrgne enzimskom cepanju pomoću nekog enzima (npr., proteaza povezana sa tumorskim ćelijama, proteaza povezana sa kancernim ćelijama ili proteaza povezana sa limfocitima), glicin-glicin-lekoviti deo ili glicin-lekoviti deo se odcepljuje od L-Aa-Ww-. U jednom primeru izvođenja, nezavisna reakcija hidrolize odvija se unutar ciljne ćelije, pri čemu se cepa veza glicin-lekoviti deo i oslobađa lek.
[0193] U nekim primerima izvođenja, ne-samožrtvujuća razdvajajuća jedinica (-Y-) je -Gly-. U nekim primerima izvođenja, ne-samožrtvujuća razdvajajuća jedinica (-Y-) je -Gly-Gly-.
[0194] U jednom primeru izvođenja, obezbeđen je lek-linker konjugat u kom je razdvajajuća jedinica odsutna (-Yy– gde je y=0), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat.
[0195] Alternativno, konjugat koji sadrži samožrtvujuću razdvajajuću jedinicu može da oslobodi -D. Kako se ovde koristi, izraz "samožrtvujući razdvajač" odnosi se na bifunkcionalni hemijski deo koji može da kovalentno vezuje međusobno dva razmaknuta hemijska dela u stabilan trojni molekul. Spontano će se odvojiti od drugog hemijskog dela ako se njegova veza sa prvim delom cepa.
[0196] U nekim primerima izvođenja, -Yy- je p-aminobenzil alkoholna (PAB) jedinica (videti Šeme 2 i 3) čiji je fenilenski deo supstituisan sa Qmgde Q predstavlja -C1-C8alkil, -C1-C8alkenil, -C1-C8alkinil, -O-(C1-C8alkil), -O-(C1-C8alkenil), -O-(C1-C8alkinil), -halogen, - nitro ili -cijano; a m je ceo broj koji je u opsegu od 0-4. Alkil, alkenil i alkinil grupe, bilo same ili kao deo druge grupe, mogu da budu opciono supstituisane.
[0197] U nekim primerima izvođenja, -Y- je PAB grupa koja je vezana za -Ww- preko amino atom azota PAB grupe, i povezana direktno sa -D karbonatnom, karbamatnom ili etarskom grupom. Bez vezivanja za bilo koju određenu teoriju ili mehanizam, Šema 2 prikazuje mogući mehanizam oslobađanja leka od PAB grupe koja je direktno vezan sa -D karbamatnom ili karbonatnom grupom kao što je opisano od strane Toki et al., 2002, J. Org. Chem.67:1866-1872.
[0198] U Šemi 2, Q je -C1-C8alkil, -C1-C8alkenil, -C1-C8alkinil, -O-(C1-C8alkil),-O-(C1-C8alkenil), -O-(C1-C8alkinil), -halogen, -nitro ili -cijano; m je ceo broj koji je u opsegu od 0-4; a p je u opsegu od 1 do oko 20. Alkil, alkenil i alkinil grupe, bilo same ili kao deo druge grupe, mogu opciono da budu supstituisane.
[0199] Bez vezivanja za bilo koju određenu teoriju ili mehanizam, Šema 3 prikazuje mogući mehanizam oslobađanja leka od PAB grupe koja je povezana direktno sa -D etarskom ili aminskom vezom, pri čemu D uključuje kiseonik ili azotnu grupu koja je deo lekovite jedinice.
[0200] U Šemi 3, Q je -C1-C8alkil, -C1-C8alkenil, -C1-C8alkinil, -O-(C1-C8alkil),-O-(C1-C8alkenil), -O-(C1-C8alkinil), -halogen, -nitro ili -cijano; m je ceo broj koji je u opsegu od 0-4; a p je u opsegu od 1 do oko 20. Alkil, alkenil i alkinil grupe, bilo same ili kao deo druge grupe, mogu opciono da budu supstituisane.
[0201] Ostali primeri samožrtvujućih razdvajača uključuju, ali nisu ograničeni na, aromatična jedinjenja koja su elektronski slična sa PAB grupom kao što su 2-aminoimidazol-5-metanol derivati (Hay et al., 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett.9:2237) i orto ili para-aminobenzilacetali. Razdvajači mogu da se koriste da se podvrgnu ciklizaciji usled hidrolize amidne veze, kao što su supstituisani i nesupstituisani amidi 4-aminobutirne kiseline (Rodrigues et al., 1995, Chemistry Biology 2:223), odgovarajuće supstituisani biciklo[2.2.1] i biciklo[2.2.2] sistemi prstena (Storm et al., 1972, J. Amer. Chem. Soc.94:5815) i amidi 2-aminofenilpropionske kiseline (Amsberry et al., 1990, J. Org. Chem.55:5867). Eliminacija aminsadržavajućih lekova koji su supstituisani na α-položaju glicina (Kingsbury et al., 1984, J. Med. Chem.
27:1447) takođe su primeri samožrtvujućih razdvajača.
[0202] U jednom primeru izvođenja, razdvajajuća jedinica je razgranata bis(hidroksimetil)-stirenska (BHMS) jedinica kao što je prikazano u Šemi 4, koja može da se koristi da bi se inkorporiralo i oslobodilo više lekova.
[0203] U Šemi 4, Q je -C1-C8alkil, -C1-C8alkenil, -C1-C8alkinil, -O-(C1-C8alkil),-O-(C1-C8alkenil), -O-(C1-C8alkinil), -halogen, -nitro ili -cijano; m je ceo broj koji je u opsegu od 0-4; n je 0 ili 1; a p je u opsegu od 1 do oko 20. Alkil, alkenil i alkinil grupe, bilo same ili kao deo druge grupe, mogu opciono da budu supstituisane.
[0204] U nekim primerima izvođenja, -D delovi su isti. U još jednom drugom primeru izvođenja, -D delovi su različiti.
[0205] U jednom aspektu, razdvajajuće jedinice (-Yy-) predstavljene su formulama (X)-(XII):
u kojoj Q predstavlja -C1-C8alkil, -C1-C8alkenil, -C1-C8alkinil, -O-(C1-C8alkil), -O-(C1-C8alkenil), -O-(C1-C8alkinil), -halogen, -nitro ili -cijano; a m je ceo broj koji je u opsegu od 0-4. Alkil, alkenil i alkinil grupe, bilo same ili kao deo druge grupe, mogu opciono da budu supstituisane.
[0206] Primeri izvođenja formule I i II koji obuhvataju konjugat antitela i leka jedinjenja mogu da uključuju:
gde su w i y svako 0,
IX.) Lekovita jedinica
[0207] Lekoviti deo (D) može da bude bilo koji citotoksični, citostatički ili imunomodulatorni (npr., imunosupresiv) lek. D je Lekovita jedinica (deo) koja ima atom koji može da formira vezu sa razdvajajućom jedinicom, sa aminokiselinskom jedinicom, sa nosećom jedinicom ili sa jedinicom antitela. U nekim primerima izvođenja, lekovita jedinica D ima atom azota koji može da formira vezu sa razdvajajućom jedinicom. Kako se ovde koristi, izrazi "lekovita jedinica" i "lekoviti deo" su sinonimi i koriste se naizmenično.
[0208] Korisne klase citotoksičnih, citostatičkih, ili imunomodulatornih agenasa uključuju, na primer, antitubulinske agense, DNK manje žlebne spojeve, inhibitore DNK replikacije, i alkilirajuće agense.
[0209] U nekim primerima izvođenja, lek je auristatin, kao što je auristatin E (takođe poznat u ovoj oblasti kao derivat dolastatina-10) ili njegov derivat. Auristatin može da bude, na primer, estar formiran između auristatina E i keto kiseline. Na primer, auristatin E može da reaguje sa paraacetil benzojevom kiselinom ili benzoilvalerinskom kiselinom da bi se proizveo AEB i AEVB, respektivno. Ostali tipični auristatini uključuju AFP, MMAF i MMAE. Sinteza i struktura primernih auristatina opisane su u U.S. objavi prijave patenta br.2003-0083263; Međunarodnoj objavi patenta br. WO 04/010957, Međunarodnoj objavi patenta br. WO 02/088172, i U.S. Patent br.7,498,298, 6,884,869, 6,323,315; 6,239,104; 6,034,065; 5,780,588; 5,665,860; 5,663,149; 5,635,483; 5,599,902; 5,554,725; 5,530,097; 5,521,284; 5,504,191; 5,410,024; 5,138,036; 5,076,973; 4,986,988; 4,978,744; 4,879,278; 4,816,444; i 4,486,414, od kojih je svaka inkorporirana ovde referencom u svojoj celosti i za sve svrhe.
[0210] Pokazalo se da auristatini ometaju dinamike mikrotubula i jedarnu i ćelijsku deobu i imaju antikancernu aktivnost. Auristatini vezuju tubulin i mogu da ispoljavaju citotoksični ili citostatički efekat na 191P4D12-eksprimirajuću ćeliju. Postoje brojni različiti testovi, poznati u ovoj oblasti, koji mogu da se koriste za određivanje da li auristatin ili rezultujući konjugat antitela i leka ispoljava citostatički ili citotoksični efekat na željenu ćelijsku liniju.
[0211] Postupci za određivanje da li jedinjenje vezuje tubulin poznati su u ovoj oblasti. Videti, na primer, Muller et al., Anal. Chem 2006, 78, 4390-4397; Hamel et al., Molecular Pharmacology, 199547: 965-976; i Hamel et al., The Journal of Biological Chemistry, 1990265:28, 17141-17149. Za svrhe ovog pronalaska, relativan afinitet jedinjenja prema tubulinu može da se odredi. Neki poželjni auristatini ovog pronalaska vezuju tubulin sa afinitetom koji je u opsegu od 10 puta niži (slabiji afinitet) nego vezujući afinitet od MMAE prema tubulinu do 10 puta, 20 puta ili čak 100 puta viši (viši afinitet) nego vezujući afinitet od MMAE prema tublinu.
[0212] U nekim primerima izvođenja, -D je auristatin formule DEili DF:
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvatni oblik;
u kojoj, nezavisno na svakoj poziciji:
talasasta linija označava vezu;
R<2>je -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil ili -C2-C20alkinil;
R<3>je -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil, -karbocikl, -C1-C20alkilen (karbocikl), -C2-C20alkenilen(karbocikl), -C2-C20alkinilen(karbocikl), -aril, -C1-C20alkilen(aril), -C2-C20alkenilen(aril), -C2-C20alkinilen(aril), heterocikl, -C1-C20alkilen(heterocikl), -C2-C20alkenilen(heterocikl), ili -C2-C20alkinilen(heterocikl);
R<4>je -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil, karbocikl, -C1-C20alkilen (karbocikl), -C2-C20alkenilen(karbocikl), -C2-C20alkinilen(karbocikl), aril, -C1-C20alkilen(aril), -C2-C20alkenilen(aril), -C2-C20alkinilen(aril), -heterocikl, -C1-C20alkilen(heterocikl), -C2-C20alkenilen(heterocikl), ili -C2-C20alkinilen(heterocikl);
R<5>je -H ili -C1-C8alkil;
ili R<4>i R<5>zajednički formiraju karbociklični prsten i imaju formulu -(CR<a>R<b>)s- u kojoj su R<a>i R<b>nezavisno -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil, ili –karbocikl, a s je 2, 3, 4, 5 ili 6, R<6>je -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, ili -C2-C20alkinil;
R<7>je -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil, karbocikl, -C1-C20alkilen (karbocikl), -C2-C20alkenilen(karbocikl), -C2-C20alkinilen(karbocikl), -aril, -C1-C20alkilen(aril), -C2-C20alkenilen(aril), -C2-C20alkinilen(aril), heterocikl, -C1-C20alkilen(heterocikl), -C2-C20alkenilen(heterocikl), ili -C2-C20alkinilen(heterocikl);
svako R<8>je nezavisno -H, -OH, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil, -O-(C1-C20alkil), -O-(C2-C20alkenil), -O-(C1-C20alkinil), ili -karbocikl;
R<9>je -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, ili -C2-C20alkinil;
R<24>je -aril, -heterocikl, ili -karbocikl;
R<25>je -H, C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil, -karbocikl, -O-(C1-C20alkil), -O-(C2-C20alkenil), -O-(C2-C20alkinil), ili OR<18>, pri čemu R<18>predstavlja -H, hidroksil zaštitnnu grupa, ili direktnu vezu gde OR<18>predstavlja =O;
R<26>je -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, ili -C2-C20alkinil, -aril, -heterocikl, ili -karbocikl;
R<10>je -aril ili -heterocikl;
Z je -O, -S, -NH, ili -NR<12>, gde R<12>predstavlja -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, ili -C2-C20alkinil;
R<11>je -H, -C1-C20alkil, --C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil, -aril, -heterocikl, -(R<13>O)m-R<14>, ili -(R<13>O)m-CH(R<15>)2;
m je ceo broj koji je u opsegu od 1-1000 ili m=0-1000;
R<13>je -C2-C20alkilen, -C2-C20alkenilen, ili -C2-C20alkinilen;
R<14>je -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, ili -C2-C20alkinil;
svaki slučaj R<15>je nezavisno -H, -COOH, -(CH2)n-N(R<16>)2, -(CH2)n-SO3H, -(CH2)n-SO3-C1-C20alkil, -(CH2)n-SO3-C2-C20alkenil, ili -(CH2)n-SO3-C2-C20alkinil;
svaki slučaj R<16>je nezavisno -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil ili -(CH2)n-COOH; i n je ceo broj koji je u opsegu od 0 do 6;
pri čemu su pomenuti alkil, alkenil, alkinil, alkilen, alkenilen, alkiniklen, aril, karbocil i heterocikl radikali, bilo sami ili kao deo druge grupe, opciono supstituisani.
[0213] Auristatini formule DEuključuju one kod kojih su alkil, alkenil, alkinil, alkilen, alkenilen, alkiniklen, aril, karbocil i heterocikl radikali nesupstituisani.
[0214] Auristatini formule DEuključuju one kod kojih su grupe R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>i R<9>nesupstituisane, a grupe R<19>, R<20>i R<21>su opciono supstituisane kao što je ovde opisano.
[0215] Auristatini formule DEuključuju one kod kojih
R<2>je C1-C8alkil;
R<3>, R<4>i R<7>su nezavisno odabrani od -H, -C1-C20alkila, -C2-C20alkenila, -C2-C20alkinila, monocikličnog C3-C6karbocikla, -C1-C20alkilen(monociklični C3-C6karbocikla),-C2-C20alkenilen(monocikličnog C3-C6karbocikla), -C2-C20alkinilen(monocikličnog C3-C6karbocikla), C6-C10arila, -C1-C20alkilen(C6-C10arila), -C2-C20alkenilen(C6-C10arila), -C2-C20alkinilen(C6-C10arila), heterocikla, -C1-C20alkilen(heterocikla), -C2-C20alkenilen(heterocikla), ili -C2-C20alkinilen(heterocikla); pri čemu su pomenuti alkil, alkenil, alkinil, alkilen, alkenilen, alkinilen, karbocikl, aril i heterocikl radikali opciono supstituisani;
R<5>je -H;
R<6>je -C1-C8alkil;
svako R<8>je nazavisno odabrano od -OH, -O-(C1-C20alkila), -O-(C2-C20alkenila) ili -O-(C2-C20alkinila) pri čemu su pomenuti alkil, alkenil i alkinil radikali opciono supstituisani;
R<9>je -H ili -C1-C8alkil;
R<24>je opciono supstituisan -fenil;
R<25>je -OR<18>; gde R<18>predstavlja H, hidroksil zaštitnu grupu, ili direktnu vezu gde OR<18>predstavlja =O; R<26>je odabran od -H, -C1-C20alkila, -C2-C20alkenila, -C2-C20alkinila ili -karbocikla; pri čemu su pomenuti alkil, alkenil, alkinil i karbocikl radikali opciono supstituisani; ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili solvatni oblik.
[0216] Auristatini formule DEuključuju one kod kojih
R<2>je metil;
R<3>je -H, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, ili C2-C8alkinil, pri čemu su pomenuti alkil, alkenil i alkinil radikali opciono supstituisani;
R<4>je -H, -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil, -C2-C8alkinil, monociklični C3-C6karbocikl, -C6-C10aril, -C1-C8alkilen(C6-C10aril), -C2-C8alkenilen(C6-C10aril), -C2-C8alkinilen(C6-C10aril), -C1-C8alkilen (monociklični C3-C6karbocikl), -C2-C8alkenilen (monociklični C3-C6karbocikl), -C2-C8alkinilen(monociklični C3-C6karbocikl); pri čemu su pomenuti alkil, alkenil, alkinil, alkilen, alkenilen, alkinilen, aril i karbocikl radikali, bilo sami ili kao deo druge grupe, opciono supstituisani;
R<5>je -H;
R<6>je metil;
R<7>je -C1-C8alkil, -C2-C8alkenil ili -C2-C8alkinil;
svako R<8>predstavlja metoksi;
R<9>je -H ili -C1-C8alkil;
R<24>je -fenil;
R<25>je -OR<18>; gde R<18>predstavlja H, hidroksil zaštitnu grupu, ili direktnu vezu gde OR<18>predstavlja =O; R<26>je metil;
ili njihov farmaceutski prihvatljivi oblik soli.
[0217] Auristatini formule DEuključuju one kod kojih:
R<2>je metil; R<3>je -H ili -C1-C3alkil; R<4>je -C1-C5alkil; R<5>je -H; R<6>je metil; R<7>je izopropil ili sec-butil; R<8>je metoksi; R<9>je -H ili -C1-C8alkil; R<24>je fenil; R<25>je -OR<18>; pri čemu R<18>predstavlja -H, hidroksil zaštitnu grupu, ili direktnu vezu gde OR<18>predstavlja =O; a R<26>je metil; ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili solvatni oblik.
[0218] Auristatini formule DEuključuju one kod kojih:
R<2>je metil ili C1-C3alkil,
R<3>je -H ili -C1-C3alkil;
R<4>je -C1-C5alkil;
R<5>je H;
R<6>je C1-C3 alkil;
R<7>je -C1-C5alkil;
R<8>je -C1-C3alkoksi;
R<9>je -H ili -C1-C8alkil;
R<24>je fenil;
R<25>je -OR<18>; gde R<18>predstavlja -H, hidroksil zaštitnu grupu, ili direktnu vezu gde
OR<18>predstavlja =O; i
R<26>je -C1-C3alkil;
Ili njihov farmaceutski prihvatljivi oblik soli.
[0219] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih
R<2>je metil;
R<3>, R<4>, i R<7>su nezavisno odabran od -H, -C1-C20alkila, -C2-C20alkenila, -C2-C20alkinila, monocikličnog C3-C6karbocikla, -C1-C20alkilen(monocikličnog C3-C6karbocikla),-C2-C20alkenilen(monocikličnog C3-C6karbocikla), -C2-C20alkinilen(monocikličnog C3-C6karbocikla), -C6-C10arila, -C1-C20alkilen(C6-C10arila), -C2-C20alkenilen(C6-C10arila), -C2-C20alkinilen(C6-C10arila), heterocikla, -C1-C20alkilen(heterocikla), -C2-C20alkenilen(heterocikla), ili -C2-C20alkinilen(heterocikla); pri čemu su pomenuti alkil, alkenil, alkinil, alkilen, alkenilen, alkinilen, karbocikl, aril i heterocikl radikali, bilo sami ili kao deo druge grupe, opciono supstituisani;
R<5>je -H;
R<6>je metil;
svako R<8>predstavlja metoksi;
R<9>je -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, ili -C2-C20alkinil; pri čemu su pomenuti alkil, alkenil i alkinil radikali opciono supstituisani;
R<10>je opciono supstituisan aril ili opciono supstituisan heterocikl;
Z je -O-, -S-, -NH-, ili -NR<12>, pri čemu R<12>predstavlja -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, ili -C2-C20alkinil, od kojih je svaki opciono supstituisan;
R<11>je -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil, -aril, -heterocikl, -(R<13>O)m-R<14>, ili -(R<13>O)m-CH(R<15>)2, pri čemu su pomenuti alkil, alkenil, alkinil, aril i heterocikl radikali opciono supstituisani;
m je ceo broj koji je u opsegu od 1-1000 ili m = 0;
R<13>je -C2-C20alkilen, -C2-C20alkenilen, ili -C2-C20alkinilen, od kojih je svaki opciono supstituisan;
R<14>je -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, ili -C2-C20alkinil, pri čemu su pomenuti alkil, alkenil i alkinil radikali opciono supstituisani;
svaki slučaj R<15>je nezavisno -H, -COOH, -(CH2)n-N(R<16>)2, -(CH2)n-SO3H, -(CH2)n-SO3-C1-C20alkil, -(CH2)n-SO3-C2-C20alkenil, ili -(CH2)n-SO3-C2-C20alkinil, pri čemu su pomenuti alkil, alkenil i alkinil radikali opciono supstituisani;
svaki slučaj R<16>je nezavisno -H, -C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil ili -(CH2)n-COOH, pri čemu su pomenuti alkil, alkenil i alkinil radikali opciono supstituisani;
n je ceo broj koji je u opsegu od 0 do 6;
ili njihova farmaceutski prihvatljiva so.
[0220] U nekom od ovih primera izvođenja, R<10>je opciono supstituisan fenil.
[0221] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih su grupe R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, i R<9>nesupstituisane, a grupe R<10>i R<11>su kao što je ovde opisano.
[0222] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih su pomenuti alkil, alkenil, alkinil, alkilen, alkenilen, alkiniklen, aril, karbocil, i heterocikl radikali nesupstituisani.
[0223] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih
R<2>je -C1-C3alkil; R<3>je -H ili -C1-C3alkil; R<4>je -C1-C5alkil; R<5>je -H; R<6>je -C1-C3alkil; R<7>je -C1-C5alkil; R<8>je -C1-C3alkoksi; R<9>je -H ili -C1-C8alkil; R<10>je opciono supstituisan fenil; Z je -O-, -S-, ili -NH-; R<11>je kao što je definisano ovde; ili njihova farmaceutski prihvatljiva so.
[0224] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih
R<2>je metil; R<3>je -H ili -C1-C3alkil; R<4>je -C1-C5alkil; R<5>je -H; R<6>je metil; R<7>je izopropil ili sec-butil; R<8>je metoksi; R<9>je -H ili -C1-C8alkil; R<10>je opciono supstituisan fenil; Z je -O-, -S-, ili -NH-; i R<11>je kao što je definisano ovde; ili njihova farmaceutski prihvatljiva so.
[0225] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih
R<2>je metil; R<3>je -H ili -C1-C3alkil; R<4>je -C1-C5alkil; R<5>je -H; R<6>je metil; R<7>je izopropil ili sec-butil; R<8>je metoksi; R<9>je -H ili C1-C8alkil; R<10>je fenil; a Z je -O- ili -NH- i R<11>je kao što je definisano ovde, poželjno vodonik; ili njihov farmaceutski prihvatljivi oblik soli.
[0226] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih
R<2>je -C1-C3alkil; R<3>je -H ili -C1-C3alkil; R<4>je -C1-C5alkil; R<5>je -H; R<6>je -C1-C3alkil; R<7>je -C1-C5alkil; R<8>je -C1-C3alkoksi; R<9>je -H ili -C1-C8alkil; R<10>je fenil; a Z je -O- ili -NH- i R<11>je kao što je definisano ovde, poželjno vodonik; ili njihov farmaceutski prihvatljivi oblik soli.
[0227] Auristatini formule DEili DFuključuju one kod kojih su R<3>, R<4>i R<7>nezavisno izopropil ili sec-butil, a R<5>je -H. U nekom primernom ostvarenju, R<3>i R<4>su svaki izopropil, R<5>je H, a R<7>je sec-butil. Ostatak supstituenata je kao što je ovde definisano.
[0228] Auristatini formule DEili DFuključuju one kod kojih su R<2>i R<6>svaki metil, a R<9>je H. Ostatak supstituenata je kao što je ovde definisano.
[0229] Auristatini formule DEili DFuključuju one kod kojih svaki slučaj R<8>predstavlja -OCH3. Ostatak supstituenata je kao što je ovde definisano.
[0230] Auristatini formule DEili DFuključuju one kod kojih su R<3>i R<4>svaki izopropil, R<2>i R<6>su svaki metil, R<5>je H, R<7>je sec-butil, svaki slučaj R<8>predstavlja -OCH3, a R<9>je H. Ostatak supstituenata je kao što je ovde definisano.
[0231] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih Z predstavlja -O- ili -NH-. Ostatak supstituenata je kao što je ovde definisano.
[0232] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih R<10>predstavlja aril. Ostatak supstituenata je kao što je ovde definisano.
[0233] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih R<10>predstavlja -fenil. Ostatak supstituenata je kao što je ovde definisano.
[0234] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih Z predstavlja -O-, a R<11>je H, metil ili t-butil.
Ostatak supstituenata je kao što je ovde definisano.
[0235] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih, kada Z predstavlja -NH-, R<11>je -(R<13>O)m-CH(R<15>)2, R<15>predstavlja -(CH2)n-N(R<16>)2, a R<16>je -C1-C8alkil ili -(CH2)n-COOH. Ostatak supstituenata je kao što je ovde definisano.
[0236] Auristatini formule DFuključuju one kod kojih kada Z predstavlja -NH-, R<11>je -(R<13>O)m-CH(R<15>)2, R<15>predstavlja -(CH2)n-SO3H. Ostatak supstituenata je kao što je ovde definisano.
[0237] U poželjnim primerima izvođenja, kada D predstavlja auristatin formule DE, w je ceo broj koji je u opsegu od 1 do 12, poželjno 2 do 12, y je 1 ili 2, i a je poželjno 1.
[0238] U nekim primerima izvođenja, kada D predstavlja auristatin formule DF, a je 1, a w i y su 0.
[0239] Ilustrativne lekovite jedinice (-D) uključuju lekovite jedinice koje imaju sledeće strukture:
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili solvate.
[0240] U jednom aspektu, hidrofilne grupe, kao što su, ali bez ograničenja na, trietilen glikol estri (TEG) mogu da budu povezani sa lekovitom jedinicom na R<11>. Bez vezivanja za teoriju, hidrofilne grupe pomažu u internalizaciji i ne-aglomeraciji lekovite jedinice.
[0241] U nekim primerima izvođenja, lekovita jedinica nije TZT-1027. U nekim primerima izvođenja, lekovita jedinica nije auristatin E, dolastatin 10 ili auristatin PE.
[0242] Primerna jedinjenja konjugata antitela i leka imaju sledeće strukture u kojima "L" ili "mAb-s-" predstavlja 191P4D12 MAb označen Ha22-2(2,4)6.1 ovde naveden:
ili
ili njihova farmaceutski prihvatljiva so.
[0243] U nekim primerima izvođenja, lekovita jedinica je kaliheamicin, kamptotecin, majtanzinoid, ili antraciklin. U nekim primerima izvođenja lek je taksan, inhibitor topoizomeraze, vinka alkaloid, ili slično.
[0244] U nekim tipičnim primerima izvođenja, pogodni citotoksični agensi uključuju, na primer, DNK manje žlebne spojeve (npr., enedijni i leksitropsini, CBI jedinjenje; videti takođe U.S. Patent br.
6,130,237), duokarmicine, taksane (npr., paklitaksel i docetaksel), puromicine, i vinka alkaloide. Ostali citotoksični agensi uključuju, na primer, CC-1065, SN-38, topotekan, morfolino-doksorubicin, rizoksin, cijanomorfolino-doksorubicin, ehinomicin, kombretastatin, netropsin, epotilon A i B, estramustin, criptofizine, cemadotin, majtanzinoide, diskodermolid, eleuterobin, i mitoksantron.
[0245] U nekim primerima izvođenja, lek je anti-tubulin agens. Primeri anti-tubulin agenasa uključuju, auristatine, taksane (npr.,Taxol® (paklitaksel), Taxotere® (docetaksel)), T67 (Tularik) i vinka alkiloide (npr., vinkristin, vinblastin, vindesin i vinorelbin). Ostali antitubulin agensi uključuju, na primer, derivate bakatina, analoge taksana (npr., epotilon A i B), nokodazol, kolhicin i kolcimid, estramustin, kriptoficine, cemadotin, majtanzinoide, kombretastatine, diskodermolid, i eleuterobin.
[0246] U određenim primerima izvođenja, citotoksični agens je majtanzinoid, druga grupa anti-tubulin agenasa. Na primer, u specifičnim primerima izvođenja, majtanzinoid je majtanzin ili DM-1 (Imunogen, Inc.; videti takođe Chari et al., 1992, Cancer Res.52:127-131).
[0247] U određenim primerima izvođenja, citotoksični ili citostatički agens je dolastatin. U određenim primerima izvođenja, citotoksični ili citostatički agens je iz klase auristatina. Prema tome, u specifičnom primeru izvođenja, citotoksični ili citostatički agens je MMAE (formula XI). U nekom drugom specifičnom primeru izvođenja, citotoksični ili citostatički agens je AFP (formula XVI).
[0248] U određenim primerima izvođenja, citotoksični ili citostatički agens je jedinjenje formula XII-XXI ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
X.) Punjenje leka
[0249] Punjenje leka predstavljeno je sa p i to je prosečan broj lekovitih delova po antitelu u molekulu. Punjenje leka može da bude u opsegu od 1 do 20 lekovitih delova (D) po antitelu. ADC ovog pronalaska uključuje kolekcije antitela konjugovanih sa opsegom lekovitih delova, od 1 do 20. Prosečan broj lekovitih delova po antitelu u preparatima od ADC iz reakcije konjugacije može da se okarakteriše konvencionalnim sredstvima kao što su masena spektroskopija i ELISA ogled. Kvantitativna distribucija ADC u smislu p može takođe da se odredi. U nekim primerima, separacija, prečišćavanje i karakterizacija homogenog ADC gde je p određena vrednost iz ADC sa ostalim punjenjima leka može da se postigne sredstvom kao što je elektroforeza.
[0250] Za neke konjugate antitela i leka, p može da se ograniči brojem mesta vezivanja na antitelu. Na primer, gde je veza cistein tiol, kao u primernim ostvarenjima gore, antitelo može da ima samo jednu ili nekoliko cistein tiol grupa, ili može da ima samo jednu ili nekoliko dovoljno reaktivnih tiol grupa preko kojih linker može da se veže. U određenim primerima izvođenja, više punjenje leka, npr. p >5, može da izazove agregaciju, nerastvorljivost, toksičnost, ili gubitak ćelijske permeabilnosti određenih konjugata antitela i leka. U određenim primerima izvođenja, punjenje leka za neki ADC ovog pronalaska je u opsegu od 1 do oko 8; od oko 2 do oko 6; od oko 3 do oko 5; od oko 3 do oko 4; od oko 3,1 do oko 3,9; od oko 3,2 do oko 3,8; od oko 3,2 do oko 3,7; od oko 3,2 do oko 3,6; od oko 3,3 do oko 3,8; ili od oko 3,3 do oko 3,7. Zaista, Poakazalo se da za određene ADC, optimalni odnos lekovitih delova po antitelu može da bude manji od 8, i može da bude oko 2 do oko 5. Videti US Patent br.7,498,298 (ovde inkorporiran referencom u svojoj celosti).
[0251] U određenim primerima izvođenja, manji broj od teorijskog maksimuma lekovitih delova su konjugovani sa antitelom tokom reakcije konjugacije. Antitelo može da sadrži, na primer, lizinske ostatke koji ne reaguju sa lek-linker intermedijerom ili reagensom linkera, kao što je opisano dole.
Uopšteno, antitela ne sadrže mnogo slobodnih i reaktivnih cistein tiol grupa koje mogu da se povežu sa lekovitim delom; zaista, najveći broj cistein tiol ostataka u antitelima postoji kao disulfidni mostovi. U određenim primerima izvođenja, antitelo može da se redukuje redukcionim agensom kao što je ditiotreitol (DTT) ili trikarboniletilfosfin (TCEP), u delimično ili potpuno redukcionim uslovima, da bi se generisale reaktivne cistein tiol grupe. U određenim primerima izvođenja, antitelo je podvrgnuto denaturišućim uslovima da bi se otkrile reaktivne nukleofilne grupe kao što su lizin ili cistein.
[0252] Punjenje (lek/antitelo odnos) nekog ADC može da se kontroliše na različite načine, npr.,: (i) ograničenjem molarnog viška lek-linker intermedijera ili reagensa linkera u odnosu na antitelo, (ii) ograničenjem vremena ili temperature reakcije konjugacije, (iii) delimičnim ili ograničavajućim redukcionim uslovima za cistein tiol modifikaciju, (iv) konstruisanjem rekombinantnim tehnikama aminokiselinske sekvence antitela tako da se broj i položaj cisteinskih ostataka modifikuje za kontrolu broja i/ili položaja linker-lek veza (kao što je tioMab ili tioFab pripremljen kao što je opisano ovde i u WO2006/034488 (ovde inkorporiran referencom u svojoj celosti)).
[0253] Podrazumeva se da gde više od jedne nukleofilne grupe reaguje sa lek-linker intermedijerom ili reagensom linkera praćeno reagensom lekovitog dela, onda je dobijeni proizvod mešavina ADC jedinjenja sa raspodelom jednog ili više lekovitih delova vezanih za antitelo. Prosečan broj lekova po antitelu može da se izračuna iz mešavine dvostrukim ELISA ogledom za antitela, koji je specifičan za antitelo i specifičan za lek. Pojedinačni ADC molekuli mogu da se identifikuju u mešavini masenom spektroskopijom i razdvoje pomoću HPLC, npr. hromatografijom po principu hidrofobnih interakcija (videti, npr., Hamblett, K.J., et al. " Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No.624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., et al. " Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No.627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004). U određenim primerima izvođenja, homogeni ADC sa jednom vrednošću punjenja može da se izoluje iz mešavine konjugacije elektroforezom ili hromatografijom.
XI.) Postupci određivanja citotoksičnog efekta ADC
[0254] Poznati su postupci određivanja da li lek ili konjugat antitela i leka ispoljava citostatički i/ili citotoksični efekat na ćeliju. Uopšteno, citotoksična ili citostatička aktivnost konjugata antitela i leka može da se izmeri: izlaganjem ćelija sisara koje eksprimiraju ciljni protein konjugata antitela i leka u medijumu ćelijske kulture; kultivisanjem ćelija tokom perioda od oko 6 sati do oko 5 dana; i merenjem ćelijske vijabilnosti. Ćelijski bazirani in vitro testovi mogu da se koriste za merenje vijabilnosti (proliferacija), citotoksičnosti i apoptozne indukcije (aktivacija kaspaze) konjugata antitela i leka.
[0255] Za određivanje da li konjugat antitela i leka ispoljava citostatički efekat, može da se koristi test inkorporacije timidina. Na primer, kancerne ćelije koje eksprimiraju ciljni antigen pri gustini 5.000 ćelija/bazenčić ploče sa 96 bazenčića mogu da se kultivišu tokom 72-časovnog perioda i izlože sa 0,5 µCi<3>H-timidina tokom krajnjih 8 sati 72- časovnog perioda. Inkorporiranje<3>H-timidina u ćelije kulture meri se u prisustvu i odsustvu konjugata antitela i leka.
[0256] Za određivanje citotoksičnosti, nekroza ili apoptoza (programirana ćelijska smrt) mogu da se mere. Nekroza je obično praćena povećanom permeabilnošću plazmatične membrane; bubrenjem ćelije, i pucanjem plazmatične membrane. Apoptoza se obično karakteriše izbočenjem membrane, kondenzovanjem citoplazme, i aktivacijom endogenih endonukleaza. Određivanje bilo kog od ovih efekata na kancernim ćelijama ukazuje da je konjugat antitela i leka koristan u lečenju kancera.
[0257] Ćelijska vijabilnost može da se izmeri određivanjem u ćeliji unosa boje kao što je neutralnocrveno, tripan plavo, ili ALAMAR™ plavo (videti, npr.,Page et al., 1993, Intl. J. Oncology 3:473-476). U takvom nekom ogledu, ćelije se inkubiraju u podlogama koje sadrže boju, ćelije se ispiraju, i preostala boja, reflektujući ćelijski unos boje, se meri spectrofotometrijski. Protein-vezujuća boja sulforhodamin B (SRB) može takođe da se koristi za merenje citoksičnosti (Skehan et al., 1990, J. Natl. Cancer Inst.
82:1107-12).
[0258] Alternativno, tetrazolijumova so, kao što je MTT, koristi se u kvantitativnom kolorimetrijskom testu za preživljavanje i proliferaciju ćelije sisara detektovanjem živih, a ne mrtvih, ćelija (videti, npr., Mosmann, 1983, J. Immunol. Methods 65:55-63).
[0259] Apoptoza može da se izmeri merenjem, na primer, DNK fragmentacije. Dostupni su komercijalni fotometrijski postupci za kvantitativno in vitro određivanje DNK fragmentacije. Primeri takvih testova, uključujući TUNEL (koji detektuje inkorporiranje obeleženih nukleotida u fragmentiranu DNK) i ELISA-bazirane testove, opisani su u Biochemica, 1999, no.2, pp.34-37 (Roche Molecular Biochemicals).
[0260] Apoptoza takođe može da se odredi merenjem morfoloških promena u ćeliji. Na primer, kao sa nekrozom, gubitak integriteta plazmatične membrane može da se odredi merenjem unosa određenih boja (npr., fluorescentna boja kao što je, na primer, akridin oranž ili etidijum bromid). Postupak za merenje broja apoptotičnih ćelija opisan je od strane Duke i Cohen, Current Protocols in Immunology (Coligan et al. eds., 1992, pp.3.17.1-3.17.16). Ćelije takođe mogu da budu obeležene sa DNK bojom (npr., akridin oranž, etidijum bromid, ili propidijum jodid) i ćelije posmatrane za hromatinsku kondenzaciju i migraciju duž unutrašnje jedarne membrane. Ostale morfološke promene koje mogu da se mere kako bi se odredila apoptoza uključuju, npr.,citoplazmatično kondenzovanje, povećano izbočenje membrane, i ćelijsko skupljanje.
[0261] Prisustvo apoptotičnih ćelija može da se izmeri i u pričvršćenim i u "plutajućim" delovima kultura. Na primer, oba dela mogu da se prikupe uklanjanjem supernatanta, tripsinizacijom pričvršćenih ćelija, kombinovanjem preparata nakon faze centrifugalnog ispiranja (npr., 10 minuta pri 2000 o/min), i detektovanjem apoptoze (npr.,merenjem DNK fragmentacije). (Videti, npr., Piazza et al., 1995, Cancer Research 55:3110-16).
[0262] In vivo, efekat 191P4D12 terapeutskih kombinacija može da se proceni u odgovarajućem životinjskom modelu. Na primer, ksenogeni modeli kancera mogu da se koriste, pri čemu se eksplanti kancer ili pasažirana ksenograft tkiva uvode u životinje sa ugroženim imunitetom, kao što su goli ili SCID miševi (Klein et al., 1997, Nature Medicine 3: 402-408). Na primer, PCT prijava patenta WO98/16628 i U.S. Patent 6,107,540 opisuju razne modele humanog ksenografta kancera prostate koji mogu rekapituliraju razvoj primarnih tumora, mikrometastaza, i formiranja osteoblastnih metastaza karakterističnih za bolest u kasnijem stadijumu. Efikasnost može da se predvidi upotrebom testova koji mere inhibiciju formiranja tumora, regresiju ili metastazu tumora, i slično.
[0263] In vivo testovi koji ocenjuju napredovanje apoptoze korisni su u ocenjivanju terapeutskih kombinacija. U jednom primeru izvođenja, ksenografti iz miševa sa tumorom tretiranih terapeutskim kombinacijama može da se ispita za prisustvo apoptotičnih fokusa i uporedi sa netretiranim kontrolnim ksenograft-nosećim miševima. Stepen do kog će se apoptotični fokusi naći u tumorima tretiranih miševa obezbeđuje indikaciju terapeutske efikasnosti kombinacije.
[0264] Terapeutske kombinacije korišćene u praksi gore navedenih postupaka mogu da se formulišu u farmaceutske kombinacije koje obuhvataju nosač pogodan za željeni postupak dostave. Pogodni nosači uključuju bilo koji materijal koji kada se kombinuje sa terapeutskom kombinacijom zadržava antitumornu funkciju terapeutske kombinacije i uopšteno je nereaktivan sa imunim sistemom pacijenta. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, bilo koji broj standardnih farmaceutskih nosača kao što su sterilni fosfatni puferni slani rastvori, bakteriostatična voda, i slično (videti, uopšteno, Remington's Pharmaceutical Sciences 16th Edition, A. Osal., Ed., 1980).
[0265] Terapeutske formulacije mogu da se rastvore i daju bilo kojim putem kojim može da se dostavi terapeutska kombinacija do tumornog mesta. Potencijalno efikasni putevi davanja uključuju, ali nisu ograničeni na, intravenozni, parenteralni, intraperitonealni, intramuskularni, intratumorni, intradermalni, intraorganski, ortotopski, i slično. Poželjna formulacija za intravenoznu injekciju obuhvata terapeutsku kombinaciju u rastvoru konzervirane bakteriostatične vode, sterilne nekonzervirane vode, i/ili razblaženu u polivinilhloridnim ili polietilenskim vrećicama koje sadrže 0,9% sterilnog natrijum hlorida za injekciju, USP. Terapeutski proteinski preparati mogu da budu liofilizovani i čuvani kao sterilni praškovi, poželjno pod vakuumom, a zatim rekonstruisani u bakteriostatičnoj vodi (koja sadrži, na primer, benzil alkoholni konzervans) ili u sterilnoj vodi pre injekcije.
[0266] Doze i protokoli davanja za lečenje kancera upotrebom gore navedenih postupaka variraće sa postupkom i ciljnim kancerom, a uopšteno zavisiće od broja ostalih faktora koji su prepoznati u ovoj oblasti.
XII.) Lečenje kancera(a) koji eksprimira 191P4D12
[0267] Identifikacija 191P4D12 kao proteina koji se normalno eksprimira u ograničenom skupu tkiva, ali koji se takođe eksprimira u kancerima kao što su oni navedeni u Tabeli I, otvara brojne terapeutske pristupe lečenju takvih kancera.
[0268] Napomena, ciljane antitumorne terapije korisne su čak i kada je ciljani protein eksprimiran na normalnim tkivima, čak tkivima vitalnih normalnih organa. Vitalni organ je onaj koji je neophodno da se održi u životu, kao što je srce ili kolon. Nevitalni organ je onaj koji može da se ukloni a pri čemu pojedinac i dalje živi. Primeri nevitalnih organa su jajnik, dojka i prostata.
[0269] Ekspresija ciljnog proteina u normalnom tkivu, čak vitalnom normalnom tkivu, ne umanjuje korisnost ciljajućeg agensa za protein kao terapeutik za određene tumore u kojima se protein takođe prekomerno eksprimira. Na primer, ekspresija u vitalnim organima nije samo po sebi štetna. Dodatno, organi smatrani nepogodnim, kao što su prostata i jajnik, mogu da se uklone bez izazivanja mortaliteta. Konačno, neki vitalni organi nisu pogođeni normalnom ekspresijom organa zbog imunoprivilegije.
Imunoprivilegovani organi su organi koji su zaštićeni od krvi barijerom izmežu krvi i organa a, prema tome, nisu dostupni imunoterapiji. Primeri imunoprivilegovanih organa su mozak i testis.
[0270] Prema tome, terapeutski pristupi koji inhibiraju aktivnost 191P4D12 proteina korisni su za pacijente koji boluju od kancera koji eksprimira 191P4D12. Ovi terapeutski pristupi uopšteno ubrajaju se u tri klase. Prva klasa modulira 191P4D12 funkciju kao što se odnosi na rast tumorskih ćelija dovodeći do inhibicije ili usporavanja rasta tumorskih ćelija ili indukovanja njihovog ubistva. Druga klasa obuhvata razne postupke za inhibiranje vezivanja ili povezivanja 191P4D12 proteina sa njegovim partnerom vezivanja ili sa ostalim proteinima. Treća klasa obuhvata razne postupke za inhibiranje transkripcije 191P4D12 gena ili translacije 191P4D12 mRNK.
[0271] Prema tome, pacijenti sa kancerom mogu da se ocene za prisustvo i nivo 191P4D12 ekspresije, poželjno upotrebom imunohistohemijskih određivanja tumornog tkiva, kvantitivnog 191P4D12 imidžinga, ili ostalih tehnika koje pouzdano ukazuju na prisustvo i stepen 191P4D12 ekspresije.
Imunohistohemijska analiza biopsija tumora ili hirurških uzoraka poželjna je za ovu svrhu. Postupci za imunohistohemijsku analizu tumornih tkiva dobro su poznati u ovoj oblasti.
XIII.) 191P4D12 kao cilj za terapiju na bazi antitela
[0272] 191P4D12 je atraktivan cilj za terapeutske strategije na bazi antitela. Brojne strategije na bazi antitela poznate su u ovoj oblasti za ciljanje i ekstracelularnih i intracelularnih molekula
(videti, npr.,komplement i ADCC posredovano ubijanje kao i upotreba intratela). Zato što se 191P4D12 eksprimira eksprimira od strane ćelija kancera raznih linija u odnosu na odgovarajuće normalne ćelije, sistemsko davanje 191P4D12-imunoreaktivnih kombinacija priprema se da pokazuje odličnu osetljivost bez toksičnih, nespecifičnih i/ili ne-ciljnih efekata izazvanih vezivanjem imunoreaktivne kombinacije za ne-ciljne organe i tkiva. Antitela specifično reaktivna sa domenima iz 191P4D12 korisna su za lečenje 191P4D12-eksprimirajućih kancera sistemski, poželjno kao konjugata antitela i leka (tj. ADC), pri čemu je konjugat sa toksinom ili terapeutskim agensom.
[0273] Prosečni stručnjaci u ovoj oblasti razumeće sa se antitela mogu koristiti za specifično ciljanje i vezivanje imunogenskih molekula kao što je imunogenski region iz 191P4D12 sekvence prikazane na Fig. 1. Dodatno, prosečni praktikanti razumeju da je rutina da se konjuguju antitela sa citotoksičnim agensima (videti, npr., Slevers et al. Blood 93:113678-3684 (1. jun 1999.)). Kada se citotoksični i/ili terapeutski agensi dostave direktno do ćelija, kao što je njihovim konjugovanjem sa antitelima specifičnim za molekul eksprimiran od strane te ćelije (npr.191P4D12), citotoksični agens ispoljiće svoje poznato biološko dejstvo (tj. citotoksičnost) na ove ćelije.
[0274] Širok spektar kombinacija i postupaka za upotrebu konjugata antitela i citotoksičnog agensa za ubijanje ćelija poznat je u ovoj oblasti. U kontekstu kancera, tipični postupci podrazumevaju davanje sisaru koji ima tumor biološki efektivne količine konjugata koji obuhvata odabrani citotoksični i/ili terapeutski agens povezan sa ciljajućim agensom (npr.191P4D12 MAb, poželjno Ha22-2(2,4)6.1) koji se vezuje za antigen (npr.191P4D12) eksprimiran, dostupan za vezivanje ili lokalizovan na ćelijskim površinama. Tipičan primer izvođenja je postupak dostave citotoksičnog i/ili terapeutskog agensa do ćelije koja eksprimira 191P4D12, koji obuhvata konjugovanje citotoksičnog agensa sa antitelom koje se imunospecifično vezuje za 191P4D12 epitop, i, izlaganje ćelije konjugatu antitela i leka (ADC). Drugi ilustrativni primer izvođenja je postupak tretiranja pojedinca za koga se smatra da boluje od metastaze kancera, koji obuhvata fazu davanja parenteralno pomenutom pojedincu farmaceutske kombinacije koja obuhvata terapeutski efektivnu količinu antitela konjugovanog sa citotoksičnim i/ili terapeutskim agensom.
[0275] Imunoterapija kancera upotrebom 191P4D12 antitela može da se izvede u skladu sa raznim pristupima koji se uspešno koriste u lečenju ostalih vrsta kancera, uključujući, ali bez ograničenja na, kancer kolona (Arlen et al., 1998, Crit. Rev. Immunol.18:133-138), multipla mijelom (Ozaki et al., 1997, Blood 90:3179-3186, Tsunenari et al., 1997, Blood 90:2437-2444), gastrični kancer (Kasprzyk et al., 1992, Cancer Res.52:2771-2776), limfom B-ćelija (Funakoshi et al., 1996, J. Immunother. Emphasis Tumor Immunol.19:93-101), leukemiju (Zhong et al., 1996, Leuk. Res.20:581-589), kolorektalni kancer (Moun et al., 1994, Cancer Res.54:6160-6166; Velders et al., 1995, Cancer Res.55:4398-4403), i kancer dojke (Shepard et al., 1991, J. Clin. Immunol.11:117-127). Neki terapeutski pristupi uključuju konjugaciju golog antitela sa toksinom ili radioizotopom, kao što je konjugacija Y<91>ili I<131>sa anti-CD20 antitelima (npr., ZevalinTM, IDEC Pharmaceuticals Corp. ili Bexxar™, Coulter Pharmaceuticals) respektivno, dok ostali uključuju kodavanje antitela i ostalih terapeutskih agenasa, kao što su Herceptin™ (trastuzu MAb) sa paklitakselom (Genentech, Inc.). U poželjnom primeru izvođenja, antitela će se konjugovati sa citotoksičnim agensom, supra, poželjno nekim derivatom aurastatina označenim MMAE (Seattle Genetics, Inc).
[0276] Iako je terapija sa 191P4D12 antitelom korisna za sve stadijume kancera, terapija sa antitelom može da bude naročito pogodna u uznapredovalim ili metastatskim kancerima. Lečenje terapijom sa antitelom ovog pronalaska naznačena je za pacijente koji su primili jednu ili više rundi hemoterapije. Alternativno, terapija sa antitelom ovog pronalaska kombinuje se sa hemoterapeutskim režimom ili režimom zračenja za pacijente koji nisu primili hemoterapeutsko lečenje. Dodatno, terapija sa antitelom može da omogući upotrebu smanjenih doza istovremene hemoterapije, naročito za pacijente koji ne tolerišu toksičnost hemoterapeutskog agensa baš dobro. Fan et al. (Cancer Res.53:4637-4642, 1993), Prewett et al. (International J. of Onco.9:217-224, 1996), i Hancock et al. (Cancer Res.51:4575-4580, 1991) opisuju upotrebu raznih antitela zajedno sa hemoterapeutskim agensima.
[0277] 191P4D12 monoklonalna antitela koja leče kancere navedene u Tabeli I uključuju one koji izazivaju snažan imuni odgovor protiv tumora ili one koji su direktno citotoksični. U vezi sa ovim, 191P4D12 monoklonalna antitela (MAb) mogu da izazovu lizu tumorskih ćelija ili komplementposredovanim mehanizmima ili mehanizmima ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC), od kojih oba zahtevaju netaknuti Fc deo molekula imunoglobulina za interakciju sa Fc receptorskim mestima efektorskih ćelija na komplementnim proteinima. Dodatno, 191P4D12 MAb koja ispoljavaju direktno biološko dejstvo na rast tumora korisna su za lečenje kancera koji eksprimiraju 191P4D12. Mehanizmi kojima direktno deluju citotoksična MAb uključuju: inhibiciju ćelijskog rasta, modulaciju ćelijske diferencijacije, modulaciju profila faktora angiogeneza tumora, i indukciju apoptoze.
Mehanizam(i) kojim posebno 191P4D12 MAb ispoljava anti-tumorni efekat ocenjuje se upotrebom bilo kog broja in vitro testova koji ocenjuju ćelijsku smrt kao što su ADCC, komplement-posredovana liza ćelija, i tako dalje, kao što je opšte poznato u ovoj oblasti.
[0278] Prema tome, poželjna monoklonalna antitela korišćena u terapeutskim postupcima prema ovom pronalasku su ona koja ili potpuno humana i koja se specifično vezuju za ciljni 191P4D12 antigen sa visokim afinitetom.
XIV.) 191P4D12 ADC kokteli
[0279] Konjugati antitela i leka i farmaceutske kombinacije ovog pronalaska za upotrebu u terapeutskim postupcima odnose se na davanje pojedinačnih 191P4D12 ADC kao i kombinacija, ili koktela, različitih MAb (tj.191P4D12 MAb ili Mab koji vezuju drugi protein). Takvi MAb kokteli mogu da imaju određene prednosti uostalom jer sadrže MAb koji ciljaju različite epitope, koriste različite efektorske mehanizme ili kombinuju direktno citotoksične MAb sa MAb koji se oslanjaju na imunsku efektorsku funkcionalnost. Takvi MAb u kombinaciji mogu da ispoljavaju sinergističke terapeutske efekte. Dodatno, 191P4D12 MAb mogu da se daju istovremeno sa ostalim terapeutskim modalitetima, uključujući, ali bez ograničenja na, razne hemoterapeutske i biološke agense, androgen-blokere, imunske modulatore (npr., IL-2, GM-CSF), operaciju ili zračenje. U poželjnom primeru izvođenja, 191P4D12 MAb daju se u konjugovanom obliku.
[0280] 191P4D12 ADC formulacije daju se bilo kojim putem kojim mogu da se dostave antitela do tumorske ćelije. Putevi davanja uključuju, ali nisu ograničeni na, intravenozno, intraperitonealno, intramuskularno, intratumorno, intradermalno, i slično. Lečenje uopšteno uključuje ponovljeno davanje 191P4D12 ADC preparata, nekim prihvatljivim putem davanja kao što je intravenozna injekcija (IV), obično u dozi u opsegu, uključujući, ali bez ograničenja na, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 ili 25 mg/kg telesne mase. Uopšteno, doze u opsegu od 10-1000 mg MAb po nedelji efikasne su i dobro se podnose.
[0281] Na osnovu kliničkog iskustva sa Herceptin® (Trastuzumab) u lečenju metastatskog kancera dojke, inicijalna doza punjenja od približno 4 mg/kg telesne mase pacijenta IV, praćena nedeljnim dozama od oko 2 mg/kg IV MAb preparata predstavlja prihvatljiv dozni režim. Poželjno, inicijalna doza punjenja daje se kao 90-minutna ili duža infuzija. Periodična doza održavanja daje se kao 30-minutna ili duža infuzija, čime se obezbedilo da se inicijalna doza dobro podnela. Kao što podrazumevaju prosečni stručnjaci u ovoj oblasti, razni faktori mogu da utiču na idealni dozni režim u posebnom slučaju. Takvi faktori uključuju, na primer, afinitet vezivanja i poluživot korišćenih MAb, stepen 191P4D12 ekspresije kod pacijenta, stepen cirkulacije prolivenog 191P4D12 antigena, željeni nivo koncentracije antitela u stabilnom stanju, učestalost lečenja, i uticaj hemoterapeutskih ili ostalih agensa korišćenih u kombinaciji sa postupkom lečenja ovog pronalaska, kao i zdravstveni status određenog pacijenta.
[0282] Opciono, pacijenti treba da se procenjuju za nivoe 191P4D12 u datom uzorku (npr. nivoe cirkulišućeg 191P4D12 antigena i/ili ćelija koje eksprimiraju 191P4D12) kako bi se pomoglo u određivanju najefikasnijeg doznog režima, itd. Takva procenjivanja takođe se koriste za potrebe praćenja tokom terapije, i korisna su za ocenu terapeutskog uspeha u kombinaciji sa evaluacijom drugih parametara (na primer, citologija urina i/ili ImmunoCyt nivoi u terapiji kancera bešike, ili po analogiji, nivoi PSA userumu kod terapije kancera prostate).
[0283] Cilj ovog pronalaska je da obezbedi 191P4D12 ADC, koji inhibiraju ili usporavaju rast tumorskih ćelija koje eksprimiraju 191P4D12. Dalji cilj ovog pronalaska je da obezbedi postupke za inhibiranje angiogeneze i drugih bioloških funkcija i time smanji rast tumora kod sisara, poželjno ljudi, upotrebom takvih 191P4D12 ADC, a naročito upotrebom tih 191P4D12 ADC u kombinaciji sa ostalim lekovima ili imunološki aktivnih tretmana.
XV.) Kombinovana terapija
[0284] U jednom primeru izvođenja, postoji sinergija kada se tumori, uključujući human tumore, leče sa 191P4D12 ADC u spoju sa hemoterapeutskim agensima ili zračenjem ili njihovim kombinacijama. Drugim rečima, inhibicija rasta tumora pomoću 191P4D12 ADC poboljšana je više od očekivanog kada je kombinovan sa hemoterapeutskim agensima ili zračenjem ili njihovim kombinacijama. Sinergija može da se prikaže, na primer, većom inhibicijom rasta tumora kombinovanim lečenjem nego što se očekuje od lečenja samo 191P4D12 ADC ili aditivnog efekta lečenja sa 191P4D12 ADC i hemoterapeutskim agensom ili zračenjem. Poželjno, sinergija se demonstrira remisijom kancera tamo gde se ne očekuje remisija iz lečenja ili od 191P4D12 ADC ili lečenjem upotrebom aditivne kombinacije 191P4D12 ADC i hemoterapeutskog agensa ili zračenja.
[0285] Postupak za inhibiranje rasta tumorskih ćelija upotrebom 191P4D12 ADC i kombinacije hemoterapije ili zračenja ili oba obuhvata davanje 191P4D12 ADC pre, tokom, ili nakon započete hemoterapije ili terapije zračenjem, kao i bilo koje njihove kombinacije (tj. pre i tokom, pre i posle, tokom i posle, ili pre, tokom, i posle započinjanja hemoterapije i/ili terapije zračenjem). Na primer, 191P4D12 ADC obično se daje između 1 i 60 dana, poželjno između 3 i 40 dana, poželjnije između 5 i 12 dana pre započinjanja terapije zračenjem i/ili hemoterapije. Međutim, u zavisnosti od protokola lečenja i posebnih potreba pacijenta, postupak se izvodi na način koji će obezbediti najefikasnije lečenje i konačno produžiti život pacijenta.
[0286] Davanje hemoterapeutskih agenasa može da se postigne na razne načine koji uključuju sistemske parenteralnim i enteralnim putevima. U jednom primeru izvođenja, 191P4D12 ADC i hemoterapeutski agens daju se kao odvojeni molekuli. Posebni primeri hemoterapeutskih agenasa ili hemoterapije uključuju cisplatin, dakarbazin (DTIC), daktinomicin, mehloretamin (azotni iperit), streptozocin, ciklofosfamid, karmustin (BCNU), lomustin (CCNU), doksorubicin (adriamicin), daunorubicin, prokarbazin, mitomicin, citarabin, etopozid, metotreksat, 5-fluorouracil, vinblastin, vinkristin, bleomicin, paklitaksel (taksol), docetaksel (taksoter), aldesleukin, asparaginazu, busulfan, karboplatin, kladribin, dakarbazin, floksuridin, fludarabin, hidroksiureu, ifosfamid, interferon alfa, leuprolid, megestrol, melfalan, merkaptopurin, plicamicin, mitotan, pegaspargazu, pentostatin, pipobroman, plicamicin, streptozocin, tamoksifen, tenipozid, testolakton, tioguanin, tiotepa, uracil iperit, vinorelbin, gemcitabin, hlorambucil, taksol i njegove kombinacije.
[0287] Izvor zračenja, korišćen u kombinaciji sa 191P4D12 ADC, može da bude ili spoljni ili unutrašnji prema pacijentu koji se leči. Kada je izvor spoljašnji prema pacijentu, terapije je poznata kao spoljna terapija zračenja zracima (EBRT). Kada je izvor zračenje unutrašnji prema pacijentu, lečenje se naziva brahiterapija (BT).
[0288] Gore opisani terapeutski režimi mogu dalje da se kombinuju sa dodatnim agensima za lečenje kancera i/ili režimima, na primer dodatna hemoterapija, vakcine protiv kancera, inhibitori transdukcije signala, agensi korisni u lečenju abnormalnog ćelijskog rasta ili kancera, antitela (npr. Anti-CTLA-4 antitela kao što su opisana u WO/2005/092380 (Pfizer)) ili ostali ligandi koji inhibiraju rast tumora vezivanje za IGF-1R, i citokini.
[0289] Dada se sisar podvrgne dodatnoj hemoterapiji, mogu da se koriste hemoterapeutski agensi prethodno opisani. Dodatno, mogu da se koriste inhibitori faktora rasta, modifikatori biološkog odgovora, anti-hormonska terapija, selektivni modulatori estrogenih receptora (SERM), inhibitori angiogeneze i anti-androgeni. Na primer, anti-hormoni, na primer anti-estrogeni kao što je Nolvadex (tamoksifen) ili, anti-androgeni kao što je Casodex (4'-cijano-3-(4-fluorofenilsulfonil)-2-hidroksi-2-metil-3- '-(trifluorometil)propionanilid) mogu da se koriste.
[0290] Gornji terapeutski pristupi mogu da se kombinuju sa bilo kojim iz širokog spektra hirurških režima, režima hemoterapije ili režima terapije zračenjem. Terapeutski pristupi ovog pronalaska mogu da omoguće upotrebu smanjenih doza hemoterapije (ili ostalih terapija) i/ili ređeg davanja, što je prednost za sve pacijente, a naročito za one koji ne podnose toksičnost hemoterapeutskog agensa dobro.
XVI.) Kompleti/proizvodi proizvodnje
[0291] Za upotrebu u laboratoriji, prognostičke, profilaktičke, dijagnostičke i terapeutske primene opisane ovde, kompleti su unutar obima ovog pronalaska. Takvi kompleti mogu da obuhvataju nosač, pakovanje, ili kontejner koji je podeljen na odeljke za primanje jednog ili više kontejnera kao što su fiolice, epruvete, i slično, pri čemu svaki od kontejnera obuhvata jedan od odvojenih elemenata koji će se koristiti u postupku, zajedno sa obeleživačem ili umetkom koji obuhvata instrukcije za upotrebu, kao što je upotreba opisana ovde. Na primer, kontejner(i) mogu da obuhvataju neko antitelo koje je ili može da bude detektabilno obeleženo. Kompleti mogu da obuhvataju kontejner koji obuhvata lekovitu jedinicu. Komplet može da uključuje sve ili deo aminokiselinskih sekvenci na Fig.2, ili Fig.3 ili njihove analoge, ili molekul nukleinske kiseline koji kodira takve aminokiselinske sekvence.
[0292] Komplet ovog pronalaska obično će obuhvatati kontejner prethodno opisan i jedan ili više drugih kontejnera povezanih sa njim koji obuhvataju materijale poželjne sa komercijalnog i korisničkog stanovišta, uključujući pufere, razblaživače, filtere, igle, špriceve; nosač, pakovanje, kontejner, fiolicu i/ili epruvetu, nalepnice na kojima su sadržaji i/ili instrukcije za upotrebu, i upakovane umetke sa instrukcijama za upotrebu.
[0293] Etiketa može da bude prisutna na ili sa kontejnerom da naznači da se kombinacija koristi za specifičnu terapiju ili ne-terapeutsku primenu, kao što je prognostička, profilaktička, dijagnostička ili laboratorijska primena, a takođe može da naznači pravce za ili in vivo ili in vitro upotrebu, kao što su one opisane ovde. Pravci i ili druga informacija takođe mogu da budu uključeni na umetak(e) ili etiketu(e) koja je uključena sa ili na kompletu. Etiketa može da bude na ili povezana sa kontejnerom. Etiketa može da bude na kontejneru kada slova, brojevi ili ostali karakteri koji formiraju etiketu oblikovani ili ugravirani u sami kontejner; etiketa može da bude povezana sa kontejnerom kada je prisutna unutar posude ili nosača koji takođe drži kontejner, npr., kao umetak pakovanja. Etiketa može da naznači da se kombinacija koristi za dijagnozu, lečenje, profilakciju ili prognozu stanja, kao što je kancer tkiva naveden u Tabeli I.
[0294] Izrazi "komplet" i "proizvod proizvodnje" mogu da se koriste kao sinonimi.
[0295] U drugom primeru izvođenja ovog pronalaska, obezbeđen je proizvod(i) proizvodnje koji sadrži kombinacije, kao što su antitelo(a), ili konjugati antitela i leka (ADC) npr., materijali korisni za dijagnozu, prognozu, profilaksu i/ili lečenje kancera tkiva kao što su oni navedeni u Tabeli I. Proizvod proizvodnje obično obuhvata najmanje jedan kontejner i najmanje jednu etiketu. Pogodni kontejneri obuhvataju, na primer, flašice, fiolice, špriceve, i testne epruvete. Kontejneri mogu da budu formirani od raznih materijala kao što su staklo, metal ili plastika. Kontejner može da sadrži aminokiselinsku sekvencau(e), mali molekul(e), sekvencu(e)nukleinske kiseline, ćelijsku populaciju(e) i/ili antitelo(a). U drugom primeru izvođenja kontejner obuhvata antitelo, njegov vezujući fragment ili specifičan vezujući protein za upotrebu u evaluaciji proteinske ekspresije 191P4D12 u ćelijama i tkivima, ili za odgovarajuće laboratorijske, prognostičke, dijagnostičke, profilaktičke i terapeutske svrhe; indikacije i/ili pravci za takve upotrebe mogu da budu uključeni na ili sa takvim kontejnerom, kao što mogu reagensi i ostale kombinacije ili alati da se koriste za ove svrhe.
[0296] Kontejner može alternativno da drži kombinaciju koja je efikasna za lečenje, dijagnozu, prognoziranje ili profilakciju stanja i može da ima sterilni pristupni port (na primer kontejner može da bude neki intravenozna vrećica sa rastvorom ili fiolica koja ima čep koji može da se probuši hipodermičnom injekcionom iglom). Aktivni agensi u kombinaciji mogu da budu antitelo koje može da specifično vezuje 191P4D12 ili konjugat antitela i leka koji se specifično vezuje za 191P4D12.
[0297] Proizvod proizvodnje može dalje da obuhvata drugi kontejner koji obuhvata farmaceutski prihvatljivi pufer, kao što je fosfat-puferisani slani rastvor, Ringerov rastvor i/ili rastvor dekstroze. Može dalje da uključuje ostale materijale poželjne sa komercijalnog i korisničkog stanovišta, uključujući ostale pufere, razblaživače, filtere, mešalice, igle, špriceve, i/ili umetke pakovanja sa indikacijama i/ili instrukcijama za upotrebu.
PRIMERI:
[0298] Razni aspekti ovog pronalaska dalje su opisani i ilustrovani putem nekoliko primera koji slede, a nijedan nije namenjen da ograniči obim ovog pronalaska.
Primer 1
191P4D12 antigen
[0299] 191P4D12 genska sekvenca otkrivena je upotrebom postupaka supresione subtraktivne hibridizacije (SSH) poznatih u ovoj oblasti.191P4D12 SSH sekvenca od 223 bp identifikovana je iz minus cDNK tumora bešike izvedenih iz bazenčića devet (9) normalnim tkiva upotrebom standardnih postupaka. cDNK klon cele dužine za 191P4D12 izolovan je iz biblioteke cDNK kancera bešike. cDNK je 3464 bp dužine i kodira 510 ORF aminokiselina (videti, Fig.1).191P4D12 gen pokazuje homologiju sa Nektin-4 genom. Za dalju referencu videti, US2004/0083497 (Agensys, Inc., Santa Monica, CA) i PCT objavu WO2004/016799 (Agensys, Inc., Santa Monica, CA). Za primerna ostvarenja 191P4D12 antigena, videti Fig.1.
Primer 2
Generisanje 191P4D12 monoklonalnih antitela (MAb)
[0300] U jednom primeru izvođenja, terapeutska monoklonalna antitela ("MAb") za 191P4D12 i 191P4D12 varijante obuhvataju ona koji reaguju sa epitopima specifičnim za svaki protein ili specifičnim za sekvence zajednički između varijanti koje mogu da vezuju, internalizuju, poremete ili moduliraju biološku funkciju 191P4D12 ili 191P4D12 varijanti, na primer, oni koji mogu da poremete interakciju sa ligandima, supstratima, i vezujućim partnerima. Imunogeni za generisanje takvih MAb uključuju ona konstruisana da kodiraju ili sadrže ekstracelularne domene ili celu 191P4D12 proteinsku sekvencu, regione predviđene da sadrže funkcionalne motive, i regione 191P4D12 proteinskih varijanti predviđene da su antigenski kompjuterskom analizom aminokiselinske sekvence. Imunogeni uključuju peptide i rekombinantne proteine kao što je tag5-191P4D12, prečišćen His obeležen protein izveden iz ćelija sisara. Dodatno, ćelije konstruisane da eksprimiraju visoke nivoe 191P4D12, kao što su RAT1-191P4D12 ili 300.19-191P4D12, korišćene su za imunizovanje miševa.
[0301] MAb za 191P4D12 generisana su upotrebom XenoMouse technology® (Amgem Fremont) pri čemu su mišji lokusi teškog i kapa lakog lanca inaktivirani i umetnut je veći deo humanih imunoglobulinskih lokusa teškog i kapa lakog lanca. MAb označeni Ha22-2(2,4)6.1 generisan je iz imunizacije humanog γ1 koji proizvodi XenoMice sa pTag5/mychis-191P4D12 (aminokiseline 23-351).
[0302] 191P4D12 MAb Ha22-2(2,4)6.1 specifično se vezuje za pTag5/mychis-191P4D12 protein pomoću ELISA kao i ćelije koje eksprimiraju rekombinantni 191P4D12 i višestruke ćelijske linije kancera koje eksprimiraju 191P4D12.
[0303] Hibridom koji proizvodi antitelo označeno Ha22-2(2,4)6.1 poslat je (putem Federal Express) u Američku zbirku tipskih kultura (ATCC), P.O. Box 1549, Manassas, VA 2010818. augusta 2010. i dodeljen mu je pristupni broj PTA-11267.
[0304] DNK kodirajuće sekvence za 191P4D12 MAb Ha22-2(2,4)6.1 određene su nakon izolovanja mRNK iz odgovarajućih hibridomskih ćelija sa Trizol reagensom (Life Technologies, Gibco BRL).
[0305] Anti-191P4D12 Ha22-2(2,4)6.1 varijabilne sekvence nukleinske kiseline teških i lakih lanaca sekvencirane su iz hibridomskih ćelija upotrebom sledećeg protokola. Hibridomske ćelije koje izlučuju Ha22-2(2,4)6.1 lizirane su sa Trizol reagensom (Life Technologies, Gibco BRL). Ukupna RNK je prečišćena i kvantifikovana. Prvi lanac cDNK generisan je iz ukupne RNK sa oligo (dT)12-18 začetnikom upotrebom sistema Gibco-BRL Superscript preamplifikacije. Prvi lanac cDNK amplifikovan je upotrebom prajmera varijabilnog teškog lanca humanog imunoglobulina, i prajmera varijabilnog lakog lanca humanog imunoglobulina. PCR proizvodi sekvencirani su i varijabilni regioni teških i lakih lanaca su određeni.
[0306] Nukleinska kiselina i aminokiselinske sekvence varijabilnih regiona teških i lakih lanaca su navedeni na Fig.2 i Fig.3. Poravnanje Ha22-2(2,4)6.1 MAb sa germinativnom linijom humanog Ig navedeno je na Fig.4A-4B.
Primer 3
Ekspresija Ha22-2(2,4)6.1 upotrebom postupaka rekombinantne DNK
[0307] Da bi se eksprimirao Ha22-2(2,4)6.1 MAb rekombinantno u transfektovanim ćelijama, Ha22-2(2,4)6.1 MAb varijabilne sekvence teških i lakih lanaca klonirane su uzvodno od konstantnih regiona teškog lanca humanog IgG1 i lakog lanca humanog Igκ, respektivno. Kasete humanog teškog lanca i lakog lanca potpunog Ha22-2(2,4)6.1 MAb klonirane su nizvodno od CMV promotera/pojačavača u vektoru za kloniranje. Mesto poliadenilacije uključeno je nizvodno od MAb kodirajuće sekvence.
Rekombinantni konstrukti koji eksprimiraju Ha22-2(2,4)6.1 MAb transfektovani su u CHO ćelije. Ha22-2(2,4)6.1 MAb izlučen iz rekombinantnih ćelija ocenjen je za vezivanje 191P4D12 ćelijske površine protočnom citometrijom (Fig.5A). Pacov-kontrola i pacovske-191P4D12 ćelije obojene su sa Ha22-2(2,4)6.1 MAb ili iz hibridoma ili iz CHO ćelija transfektovanih sa vektorskim konstruktima teškog i lakog lanca Ha22-2(2,4)6.1. Vezivanje je detektovano protočnom citometrijom.
[0308] Rezultati pokazuju da rekombinantno eksprimirano Ha22-2(2,4)6.1 eksprimirano u CHO ćelijama vezuje 191P4D12 slično Ha22-2(2,4)6.1 prečišćenom iz hibridoma. Ha22-2(2,4)6.1 MAb izlučen iz rekombinantnih ćelija takođe je ocenjen za vezivanje za 191P4D12 rekombinantnim proteinom pomoću ELISA. Kao što je prikazano na Fig.5B, vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 za 191P4D12 protein bilo je identično između MAb materijala dobijenog iz CHO i iz hibridomskih ćelija.
Primer 4
Konjugacija antitela i leka od Ha22-2(2,4)6.1 MAb
[0309] Ha22-2(2,4)6.1 Mab (Fig.2) konjugovan je sa nekim derivatom auristatina označenim MMAE (formula XI) upotrebom vc (Val-Cit) linkera opisanog ovde da bi se proizveo konjugat antitela i leka (ADC) ovog pronalaska označen Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE upotrebom sledećih protokola. Konjugacija vc (Val-Cit) linkera sa MMAE (Seattle Genetics, Inc., Seattle, WA) završena je upotrebom opšteg postupka datog u Tabeli IV da bi se proizveo citotoksični vcMMAE (videti, US Patent br.7,659,241).
[0310] Dalje, konjugat antitela i leka (ADC) ovog pronalaska označen Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE proizveden je upotrebom sledećih protokola.
[0311] Ukratko, 15 mg/mL rastvor Ha22-2(2,4)6.1MAb u 10 mM acetata pri pH 5,0, 1% sorbitola, 3% L-agrinina je dodat sa 20% zapremine 0,1 M TrisCl pri pH 8,4, 25mM EDTA i 750 mM NaCl da bi se podesio pH rastvora na 7,5, 5mM EDTA i 150 mM natrijum hlorid. MAb je zatim delimično redukovan dodavanjem 2,3 molarna ekvivalenta TCEP (u odnosu na molove MAb) i zatim mešano na 37°C tokom 2 sata. Delimično redukovan MAb rastvor zatim je ohlađen do 5°C i dodati du 4,4 molarni ekvivalenti vcMMAE (u odnosu na molove antitelo) kao 6 zap.% rastvor DMSO. Mešavina je mešana tokom 60 minuta na 5°C, a zatim dodatnih 15 minuta nakon čega je usledilo dodavanje 1 molarnih ekvivalenata N-acetilcisteina u odnosu na vcMMAE. Višak ugašenog vcMMAE i ostalih reakcionih komponenata uklonjen je ultrafiltracijom/diafiltracijom konjugata antitela i leka (ADC) sa 10 zapremina 20 mM histidina, pH 6,0.
[0312] Dobijeni konjugat antitela i leka (ADC) označen je sa Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE i ima sledeću formulu:
u kojoj MAb predstavlja Ha22-2(2,4)6.1 (Fig.2 i Fig.3), a p je od 1 do 8. p vrednost konjugata antitela i leka data u ovom primeru bila je oko 3,8.
Primer 5
Karakterizacija Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE
[0313] Konjugati antitela i leka koji vezuju 191P4D12 generisani su upotrebom postupaka datih u primeru pod nazivom "Konjugacija antitela i leka Ha22-2(2,4)6.1 MAb" i skenirani su, identifikovani, i okarakterisani upotrebom kombinacije testova poznatih u ovoj oblasti.
A. Određivanje afiniteta pomoću FACS
[0314] Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE testiran je za svoj afinitet vezivanja za 191P4D12 eksprimiran na površini PC3-humanih-191P4D12, PC3-cinomolgusnih-191P4D12, i PC3-pacovskih-191P4D12 ćelija, respektivno. Ukratko, jedanaest (11) razblaženja Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE inkubirano je sa svakim od tipova ćelija (50.000 ćelija po bazenčiću) preko noći na 4°C u krajnjoj koncentraciji od 160 nM do 0,011 nM. Na kraju inkubacije, ćelije su isprane i inkubirane sa anti-hlgG-PE detekvionim antitelom tokom 45 min na 4°C. Nakon ispiranja nevezanih detekcionih antitela, ćelije su ispitivane pomoću FACS. Vrednosti srednjeg intenziteta fluorescencije (MFI) dobijene su kao što je dato na Fig.6-8. MFI vrednosti unete su u Graphpad Prisim softver i analizirane upotrebom jednačine vezivanja za jedno mesto (hiperbola) Y=Bmax*X/(Kd+X) da bi de generisale krive Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE zasićenosti prikazane takođe na Fig. 6-8, respektivno. Bmax je MFI vrednost za maksimalno vezivanje Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE za 191P4D12; Kd je Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE afinitet vezivanja koji predstavlja koncentraciju Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE potrebnu za dostizanje polovine maksimalnog vezivanja.
[0315] Izračunati afinitet (Kd) Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE za 191P4D12 eksprimovanog na površini PC3-humanih-191P4D12, PC3-cinomolgusnih-191P4D12, i PC3-pacovskih-191P4D12 ćelija respektivno je 0,69 nM (Fig.6), 0,34 nM (Fig.7), i 1,6 nM (Fig.8).
B. Određivanje afiniteta pomoću SPR
[0316] Afinitet Ha22-2(2,4)6.1 MAb i Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE prema prečišćenom rekombinantnom 191P4D12 (ECD aminokiseline 1-348) izveden je rezonancijom površinskog plazmona (SPR) (BIAcore). Ukratko, kozja-anti-human Fcγ poliklonalna Ab (Jackson Immuno Research Labs, Inc.) kovalentno su imobilizovana na površini CM5 senzorskog čipa (Biacore). Prečišćeni Ha22-2(2,4)6.1 MAb ili Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE zatim su zarobljeni na površini pomenutog čipa. Prosečno, približno 300 RU ispitivanih Ha22-2(2,4)6.1 MAb ili Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE zarobljeno je u svakom ciklusu. Naknadno, serije od pet (5) do šest (6) razblaženja rekombinantnog 191P4D12 (ECD aminokiseline 1-348) koja su u opsegu od 1 nM do 100 nM je injektirano preko takve površine da bi se generisale krive vezivanja (senzogrami) koje su obrađene i globalno uklopljene u model interakcije 1:1 upotrebom BIAevaluation 3.2 i CLAMP softvera (Myszka i Morton, 1998) (Fig.22). Tabela V sumira konstante brzina asocijacije i disocijacije kao i afinitete Ha22-2(2,4)6.1 MAb i Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE za rekombinantni 191P4D12 (ECD aminokiseline 1-348).
C. Domensko mapiranje Ha22-2(2,4)6.1 MAb
[0317] Da bi se mapiralo vezujuće mesto na Ha22-2(2,4)6.1 MAb za specifični domen u 191P4D12 proteinu, nekoliko Pacov1(E) rekombinantnih ćelijskih linija koje eksprimiraju takve domene (ili njihova kombinacija) su generisane (Tabela VI). Vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 za ćelijsku površinu ocenjeno je pomoću FACS upotrebom standardnih protokola. Kao što je prikazano na Fig.10, Ha22-2(2,4)6.1 MAb vezuje se za eksprimirajuće ćelije VC1 domenom kao i 191P4D12 divljeg tipa, ali ne za eksprimirajuće ćelije sa C1C2 domenom. Dodatno, drugo 191P4D12 MAb pod nazivom Ha22-8e6.1 prepoznaje C1C2 domen od 191P4D12 na ćelijskoj površini, ali ne i VC1 domen. Ovo ukazuje da je vezujuće mesto za Ha22-2(2,4)6.1 MAb locirano u 1-147 aa domenu od 191P4D12, ali da svako MAb koje se vezuje za 191P4D12 ne prepoznaje ovaj domen.
[0318] Dabi se dodatno potvrdili rezultati prikazani na Fig.10, Western Blot analiza je izvedena.
Ukratko, ceo ekstracelularni deo od 191P4D12 (cela dužina), kao i specifični domeni dati u Tabeli VI eksprimirani su u 293T ćelijama kao mišji Fc fuzionisani proteini i prečišćeni. Kozji anti-mišji-HRP korišćenin su kao kontrola. Kao što je prikazano na Fig.11, kada je razrešeno na SDS-PAGE (neredukovan) i ispitano sa Ha22-2(2,4)6.1-biotinom praćeno streptavidinom-HRP, prepoznate su grupe koje odgovaraju konstruktorima fuzije 191P4D12 cele dužine (staza 1), V (staza 2) i VC1 (staza 3), ali ne konstruktu C1C2 fuzije (staza 4). Ovo dalje ukazuje da je vezujući epitop za Ha22-2(2,4)6.1 MAb smešten unutar 1-147 aa domena iz 191P4D12.
Primer 6
Ćelijska citotoksičnost posredovana sa Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE
[0319] Sposobnost Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE da posreduje 191P4D12-zavisnu citotoksičnost ocenjena je u PC3 ćelijama konstruisanim da eksprimiraju humani 191P4D12, cinomolgusni 191P4D12 i pacovski 191P4D12. Ukratko, PC3-Neo, PC3-humane-191P4D12 ćelije, PC3-cinomolgusne-191P4D12 ili PC3-pacovske-191P4D12 ćelije (1500 ćelija/bazenčić) zasejane su u ploči sa 96 bazenčića dana 1. Sledećeg dana jednaka zapremina podloge koja sadrži naznačenu koncentraciju Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE ili kontrolnog MAb konjugovanog sa vcMMAE (tj. kontrolni-vcMMAE) dodata je svakom bazenčiću. Ćelije su ostavljene da se inkubiraju tokom 4 dana na 37 stepeni C. Na kraju perioda inkubacije, Alamar plavo je dodato svakom bazenčiću i inkubacija je nastavljena tokom dodatna 4 sata. Rezultujuća fluorescencija detektovana je upotrebom Biotek čitača ploča sa talasnom dužinom ekscitacije od 620 nM i talasnom dužinom emisije od 540 nM.
[0320] Rezultati na Fig.9A-9D pokazuju da je Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE posredovao citotoksičnost u PC3-humanim-191P4D12 (Fig.9A), PC3-cinomolgusnim-191P4D12 (Fig.9B), i PC3-pacovskim-191P4D12 ćelijama (Fig.9C) dok kontrolni humani IgG konjugovan sa vcMMAE nije imao efekta. Specifičnost Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE dalje je prikazana nedostatkom toksičnosti za PC3-Neo ćelije koje ne eksprimiraju 191P4D12 (Fig.9D). Prema tome, ovi rezultati ukazuju da Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE može selektivno da dostavi citotoksični lek do 191P4D12 eksprimirajućih ćelija što dovodi do njihovog ubijanja.
Primer 7
Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE inhibira rast tumora In Vivo
[0321] Značajna ekspresija 191P4D12 na ćelijskoj površini tkiva tumora, zajedno sa njegovom restriktivnom ekspresijom u normalnim tkivima čini 191P4D12 dobrim ciljem za terapiju antitelom i slično, terapiju sa ADC. Prema tome, terapeutska efikasnost Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE u mišjim modelima humanih ksenografta kancera bešike, pluća, dojki i pankreasa je ocenjena.
[0322] Efikasnost konjugat antitela i leka na rast tumora i formiranje metastaza ispitivana je u mišjim modelima ksenografta kancera (npr. subkutani i ortotopski).
[0323] Subkutani (s.c.) tumori generisani su injekcijom od 5 x 10<4>- 10<6>ćelija kancera umešanih pri 1:1 razblaženju sa Matrigel (Collaborative Research) u desni bok muških SCID miševa. Da bi se testirala ADC efikasnost na formiranje tumora, ADC injekcije započete su istog dana kao injekcije tumorskih ćelija. Kao kontrola, miševima su ubrizgani ili prečišćen human IgG ili PBS; ili prečišćeno MAb koje prepoznaje irelevantan antigen ne eksprimiran u humanim ćelijama. U preliminarnim studijama, nije pronađena nikakva razlika između kontrolnog IgG ili PBS na rast tumora. Veličine tumora određene su merenjima šestarom, a zapremina tumora izračunata je kao širina<2>x dužina/2, gde je širina najmanja dimenzija a dužina je najveća dimenzija. Miševi sa subkutanim tumorima većim od 1,5 cm u prečniku su žrtvovani.
[0324] Tumori jajnika često metastaziraju i rastu unutar peritonealne šupljine. Prema tome, intraperitonealni rast tumora jajnika kod miševa izvedn je injekcijom sa 2 miliona ćelija direktno u trbušnu maramicu ženki miševa. Miševi su kontrolisani za opšte zdravlje, fizičku aktivnost, i izgled dok nisu došli do samrti. U vreme žrtvovanja, peritonealna šupljina može da se ispita da bi se odredilo opterećenje tumora i uzeta su pluća da bi se ocenila metastaza na udaljena mesta. Alternativno, smrt može da se koristi kao krajnja tačka. Miševi su potom odvojeni u grupe za odgovarajuće tretmane, pri čemu su injektirani 191P4D12 ili kontrolni MAb i.p.
[0325] Prednost modela ksenografta kancer je mogućnost da se ispita neovaskularizacija i angiogeneza. Rast tumora delimično zavisi od razvoja novih krvnih sudova. Iako je kapilarni sistem i razvoj krvne mreže poreklom od domaćina, inicijacija i konstrukcija neovaskularizacije regulisana je pomoću ksenografta tumora (Davidoff et al., Clin Cancer Res. (2001) 7:2870; Solesvik et al., Eur J Cancer Clin Oncol. (1984) 20:1295). Efekat antitela i malog molekula na neovaskularizaciju ispitivana je u skladu sa postupcima poznatim u ovoj oblasti, kao što je pomoću IHC analize tkiva tumora i njihove mikrosredine koja ih okružuje.
[0326] Ha22-2(2,4)6.1ADC inhibira formiranje ksenografta kancera pluća, bešike, dojke i pankreasa.
Rezultati ukazuju na korisnost Ha22-2(2,4)6.1ADC u lečenju lokalnog i kancera u uznapredovalim stadijumima, a poželjno onih kancera navedenih u Tabeli I.
191P4D12 ADC:
[0327] Monoklonalna antitela uzgajana su protiv 191P4D12 kao što je opisano u primeru pod nazivom "Generisanje 191P4D12 monoklonalnih antitela (MAb)." Dalje, MAb su konjugovana sa nekim toksinom kao što je opisano u primeru pod nazivom "Konjugacija antitela i leka Ha22-2(2,4)6.1 MAb" da bi se formirao Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE. Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE je okarakterisan pomoću FACS, i ostali postupci poznati u ovoj oblasti da bi se odredio njegov kapacitet da vezuje 191P4D12.
Ćelijske linije i ksenografti:
[0328] BT-483 i HPAC ćelije održavanje su u DMEM, dopunjenom sa L-glutaminom i 10% FBS, kao što je poznato u ovoj oblasti. AG-B8, AG-Panc4, AG-Panc2, AG-B1, AG-L4, i AG-Panc3 ksenografti održavani su serijskom propagacijom u SCID miševima.
Evaluacija Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE MAb u modelu formiranja subkutanog tumora humanog ksenografta kancera pluća AG-L4 u SCID miševima
[0329] U ovom eksperimentu, ksenograft kancera pluća izveden iz pacijenta AG-L4 održavan je serijskim pasažama u SCID miševima. Štok tumori uzeti su sterilno i enzimski razgrađeni u suspenziji jedne ćelije. Dva (2) miliona ćelija implantirano je u bok pojedinačnih SCID miševa. Životinje su zatim nasumično dodeljene u sedam grupa: šest (6) grupa tretiranih 191P4D12 antitelom i kontrolna grupa sa antitelom H3-1.10.1.2 (n=10). Sva antitela dozirana su intraperitonealno sa 750 µg/životinja dvaput nedeljno do kraja studije. Rast tumora kontrolisan je merenjima upotrebom šestarom svakih 3 do 4 dana. Zapremina tumora izračunata je kao širina<2>x dužina/2, u kojoj je širina najmanja dimenzija a dužina je najveća dimenzija.
[0330] Rezultati pokazuju da 191P4D12 MAb značajno nije inhibirao rast tumora u humanom ksenograftu kancera pluća AG-L4 u SCID miševima. Dodatno, ostala 191P4D12 MAb korišćena su u ovoj studiji. Rezultati nisu prikazani. (Fig.12).
Evaluacija Ha22-2(2,4)6.1 MAb u modelu formiranja subkutanog tumora humanog ksenografta kancera pankreasa HPAC u SCID miševima
[0331] U drugom eksperimentu, humane HPAC ćelije kancera pankreasa (2,0 miliona/miš) injektirane su u bok pojedinačnih SCID miševa. Životinje su potom nasumično dodeljene u osam grupa: sedam (7) grupa tretiranih 191P4D12 antitelom i kontrolna grupa sa antitelo, H3-1.4.1.2 (n=10). Sva antitela su dozirana intraperitonealno sa 500 µg/životinja dvaput nedeljno do kraja studije. Rast tumora kontrolisan je merenjima upotrebom šestara svaka 3 do 4 dana. Zapremina tumora izračunata je kao širina<2>x dužina/2, u kojoj je širina najmanja dimenzija a dužina je najveća dimenzija.
[0332] Rezultati pokazuju da 191P4D12 MAb nije inhibirao rast tumora u humanom ksenograftu pankreasa u SCID miševima kada se poredi sa kontrolnim antitelom. Dodatno, ostala 191P4D12 MAb korišćena su u ovoj studiji. Rezultati nisu prikazani. (Fig.13).
[0333] Evaluacija Ha22-2(2,4)6.1 MAb u modelu formiranja subkutanog tumora humanog ksenografta kancera pankreasa AG-Panc3 u SCID miševima.
[0334] U drugom eksperimentu, ksenograft kancera pankreasa izveden iz pacijenta AG-Panc3 održavan je serijskim pasažama u SCID miševima. Štok tumori su prikupljeni sterilno i samleveni u komade od 1 mm<3>. Šest komada implantirano je u bok pojedinačnih SCID miševa. Životinje su potom nasumično dodeljene u sledeće kohorte (n=10): dve (2) grupe tretirane sa 191P4D12 MAb i kontrolna grupa sa antitelom H3-1.4.1.2. Sva antitela dozirana su intraperitonealno sa 500 µg/životinja dvaput nedeljno do kraja studije. Rast tumora kontrolisan je merenjima upotrebom šestara svaka 3 do 4 dana. Zapremina tumora izračunata je kao širina<2>x dužina/2, u kojoj je širina najmanja dimenzija a dužina je najveća dimenzija.
[0335] Rezultati pokazuju da 191P4D12 MAb nije inhibirao rast tumora u humanom ksenograftu pankreasa u SCID miševima kada se poredi sa kontrolnim antitelom. Dodatno, ostala 191P4D12 MAb korišćena su u ovoj studiji. Rezultati nisu prikazani. (Fig.14).
Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera pluća AG-L4 u SCID miševima
[0336] U drugom eksperimentu, ksenograft kancer pluća izveden iz pacijenta AG-L13 održavan je serijskim pasažama u SCID miševima. Štok tumori su prikupljeni sterilno i samleveni u komadima od 1 mm<3>. Šest (6) komada je implantirano u bok pojedinačnih SCID miševa. Tumori su ostavljeni da rastu netretirani dok nisu dostigli prbližnu zapreminu od 200 mm<3>. Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE i kontrolni ADC dozirani su sa 10 mg/kg svakih sedam (7) dana za dve doze intravenoznom bolusnom injekcijom.
Količina datog ADC bila je računata po individualnoj telesnoj masi svake životinje dobijenoj neposredno pre doziranja. Rast tumora kontrolisan je merenjima upotrebom šestara svaka 3 do 4 dana. Zapremina tumora izračunata je kao širina<2>x dužina/2, u kojoj je širina najmanja dimenzija a dužina je najveća dimenzija.
[0337] Rezultati pokazuju da je tretman sa Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE značajno inhibirao rast AG-L4 ksenografta kancera pluća implantiranih subkutano u gole miševe u poređenju sa kontrolnim ADC. Dodatno, ostala 191P4D12 MAb korišćena su u ovoj studiji. Rezultati nisu prikazani. (Fig.15).
Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera dojke BT-483 u SCID miševima
[0338] U ovom eksperimentu, humane ćelije kancera dojke BT-483 korišćene su da bi se generisali štok ksenografti, koji su održavani serijskim pasažama u SCID miševima. Štok tumori su prikupljeni sterilno i samleveni u komadima od 1 mm<3>. Šest (6) komada su implantirana u bok pojedinačnih SCID miševa. Tumori su ostavljeni da rastu netretirani dok nisu dostigli prbližnu zapreminu od 100 mm<3>. Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE i kontrolni ADC dozirani su sa 5 mg/kg svaka četiri (4) dana za četiri (4) doze intravenoznom bolusnom injekcijom. Količina datog ADC bila je računata po individualnoj telesnoj masi svake životinje dobijenoj neposredno pre doziranja. Rast tumora kontrolisan je merenjima upotrebom šestara svaka 3 do 4 dana. Zapremina tumora izračunata je kao širina<2>x dužina/2, u kojoj je širina najmanja dimenzija a dužina je najveća dimenzija.
[0339] Rezultati pokazuju da je tretman sa Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE značajno inhibirao rast BT-483 ksenografta tumora dojke implantiranih subkutano u SCID miševe u poređenju sa kontrolnim ADC. Dodatno, ostala 191P4D12 MAb korišćena su u ovoj studiji. Rezultati nisu prikazani. (Fig.16).
Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera bešike AG-B1 u SCID miševima
[0340] U drugom eksperimentu, ksenograft kancera bešike izveden iz pacijenta AG-B1 održavan je serijskim pasažama u SCID miševima. Štok tumori su prikupljeni sterilno i samleveni u komade od 1 mm<3>. Šest (6) komada implantirani su u bok pojedinačnih SCID miševa. Tumori su ostavljeni da rastu netretirani dok nisu dostigli prbližnu zapreminu od 230 mm<3>. Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE i kontrolni ADC dozirani su sa 4 mg/kg jedanput intravenoznom bolusnom injekcijom. Količina datog ADC bila je računata po individualnoj telesnoj masi svake životinje dobijenoj neposredno pre doziranja. Rast tumora kontrolisan je merenjima upotrebom šestara svaka 3 do 4 dana. Zapremina tumora izračunata je kao širina<2>x dužina/2, u kojoj je širina najmanja dimenzija a dužina je najveća dimenzija.
[0341] Rezultati pokazuju da je tretman sa Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE značajno inhibirao rast AG-B1 ksenografta kancera bešike u poređenju sa kontrolnim ADC. Dodatno, ostala 191P4D12 MAb korišćena su u ovoj studiji. Rezultati nisu prikazani. (Fig.17).
Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera pankreasa AG-Panc2 u SCID miševima
[0342] U drugom eksperimentu, ksenograft kancera pankreasa izveden iz pacijenta AG-Panc2 održavan je serijskim pasažama u SCID miševima. Štok tumori su prikupljeni sterilno i samleveni u komade od 1 mm<3>. Pet (5) komada je implantirano u bok pojedinačnih SCID miševa. Tumori su ostavljeni da rastu netretirani dok nisu dostigli prbližnu zapreminu od 100 mm<3>. Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE i kontrolni ADC dozirani su sa 5 mg/kg svaka četiri (4) dana za četiri (4) doze intravenoznom bolusnom injekcijom. Količina datog ADC bila je računata po individualnoj telesnoj masi svake životinje dobijenoj neposredno pre doziranja. Rast tumora kontrolisan je merenjima upotrebom šestara svaka 3 do 4 dana. Zapremina tumora izračunata je kao širina<2>x dužina/2, u kojoj je širina najmanja dimenzija a dužina je najveća dimenzija.
[0343] Rezultati pokazuju da je tretman sa Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE značajno inhibirao rast AG-Panc2 ksenografta kancera pankreasa u poređenju sa kontrolnim ADC. Dodatno, ostala 191P4D12 MAb korišćena su u ovoj studiji. Rezultati nisu prikazani. (Fig.18).
Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera pankreasa AG-Panc4 u SCID miševima
[0344] U drugom eksperimentu, ksenograft kancera pankreasa izveden iz pacijenta AG-Panc4 održavan je serijskim pasažama u SCID miševima. Štok tumori su prikupljeni sterilno i samleveni u komade od 1 mm<3>. Šest (6) komada implantirana su u bok pojedinačnih SCID miševa. Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE i kontrolni ADC dozirani su sa 5 mg/kg svakih sedam (7) dana za tri doze intravenoznom bolusnom injekcijom. Količina datog ADC bila je računata po individualnoj telesnoj masi svake životinje dobijenoj neposredno pre doziranja. Rast tumora kontrolisan je merenjima upotrebom šestara svaka 3 do 4 dana. Zapremina tumora izračunata je kao širina<2>x dužina/2, u kojoj je širina najmanja dimenzija a dužina je najveća dimenzija.
[0345] Rezultati pokazuju da je tretman sa Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE značajno inhibirao rast AG-Panc4 ksenografta kancera pankreasa u poređenju sa kontrolnim ADC. Dodatno, ostala 191P4D12 MAb korišćena su u ovoj studiji. Rezultati nisu prikazani. (Fig.19).
Efikasnost Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE u komparativnoj dozi u subkutano postavljenom humanom ksenograftu kancera bešike AG-B8 u SCID miševima
[0346] U ovom eksperimentu, ksenograft kancera bešike izveden iz pacijenta AG-B8 održavan je serijskim pasažama u SCID miševima. Štok tumori su prikupljeni sterilno i samleveni u komade od 1 mm<3>. Šest (6) komada je implantirano u bok pojedinačnih SCID miševa. Tumori su ostavljeni da rastu netretirani dok nisu dostigli prbližnu zapreminu od 200 mm<3>. Životinje su potom nasumično dodeljene u sledeće tri kohorte (n=6): dve (2) grupe tretirane sa Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE i kontrolna ADC VCD37-5ce5p-vcMMAE grupa. Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE doziran je sa 5 mg/kg ili 10 mg/kg, a kontrolni ADC dat je sa 5 mg/kg. Svi ADC dozirani su jedanput intravenoznom bolusnom injekcijom. Količina datog ADC bila je računata po individualnoj telesnoj masi svake životinje dobijenoj neposredno pre doziranja. Rast tumora kontrolisan je merenjima upotrebom šestara svaka 3 do 4 dana. Zapremina tumora izračunata je kao širina<2>x dužina/2, u kojoj je širina najmanja dimenzija a dužina je najveća dimenzija.
[0347] Rezultati pokazuju da je tretman sa Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE sa 10mg/kg inhibirao rast AG-B8 ksenografta kancera bešike u poređenju sa Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE sa 5mg/kg. (Fig.20).
Zaključak
[0348] Sažeto, Fig.12-20, prikazuju da je 191P4D12 ADC pod nazivom Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE značajno inhibirao rast ćelija tumora koje eksprimiraju 191P4D12 u poređenju sa kontrolnim ADC. Prema tome, Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE može da se koristi za terapeutske svrhe za lečenje i kontrolisanje kancera datih u Tabeli I.
Primer 8
Humana klinička ispitivanja za lečenje i dijagnozu humanih karcinoma upotrebom 191P4D12 ADC
[0349] 191P4D12 ADC korišćeni su u skladu sa ovim pronalaskom, i koji se specifično vezuju za 191P4D12, a korišćeni su u lečenju određenih tumora, poželjno onih naveden u Tabeli I. U vezi sa svakom od ovih naznaka, dva klinička pristupa uspešno se sprovode.
I.) Adjunktivna terapija: U adjunktivnoj terapiji, pacijenti se tretiraju sa 191P4D12 ADC u kombinaciji sa hemoterapeutskim ili anti-neoplastičnim agensom i/ili terapijom zračenja ili njihovom kombinacijom. Primarni ciljevi kancera, kao što su oni naveden u Tabeli I, tretiraju se pod standardnim protokolima dodavanjem 191P4D12 ADC standardnoj prvoj i drugoj linijskoj terapiji. Dizajni protokola daju efektivnost kao što je ocijenjeno sledećim primerimama, uključujući, ali bez ograničenja na, smanjenje mase tumora primarnih ili metastatskih lezija, povećano preživljavanje bez progresije, sveukupno preživljavanje, poboljšanje zdravlja pacijenata, stabilizovanje bolesti, kao i mogućnost da se redukuju uobičajene doze standardne hemoterapije i ostalih bioloških agenasa. Ova smanjenja doza omogućuju dodatnu i/ili produženu terapiju smanjenjem dozno povezane toksičnosti hemoterapeutskog ili biološkog agensa. 191P4D12 ADC koriste se u nekoliko adjunktivnih kliničkih ispitivanja u kombinaciji sa hemoterapeutskim ili anti-neoplastičnim agensima.
II.) Monoterapija: U vezi sa upotrebom 191P4D12 ADC u monoterapiji tumora, 191P4D12 ADC se daju pacijentima bez hemoterapeutskog ili anti-neoplastičnog agensa. U jednom primeru izvođenja, monoterapija izvodi se klinički kod pacijenata sa kancerom u poslednjem stadijumu sa ekstenzivnom metastatskom bolešću. Dizajni protokola daju efektivnost kao što je ocijenjeno sledećim primerima, uključujući, ali bez ograničenja na, smanjenje mase tumora primarnih ili metastatskih lezija, povećano preživljavanje bez progresije, sveukupno preživljavanje, poboljšanje zdravlja pacijenata, stabilizovanje bolesti, kao i mogućnost da se redukuju uobičajene doze standardne hemoterapije i ostalih bioloških agenasa.
Doziranje
[0350] Režimi doziranja mogu da se podese da obezbede optimalni željeni odgovor. Na primer, jedan bolus može da se daje, nekoliko podeljenih doza može da se daje tokom vremena ili doza može da bude proporcionalno smanjena ili povećana kako pokazuju potrebe terapeutske situacije. Naročito je povoljno da se formulišu parenteralne kombinacije u doznom jediničnom obliku za lakoću davanja i uniformnost doziranja. Dozni jedinični oblik kako se ovde koristi odnosi se na fizički diskretne jedinice snabdevene kao jedinstvene doze za subjekte sisare koji se leče; svaka jedinica koja sadrži unapred određenu količinu aktivnog jedinjenja izračunata je da proizvede željeni terapeutski efekat u vezi sa potrebnim farmaceutskim nosačem. Specifikacija za dozne jedinične oblike ovog pronalaska diktira se pomoću i direktno zavisi od (a) jedinstvenih karakteristika antitela i/ili ADC, a naročito terapeutskog ili profilaktičkog efekta koji se postiže, i (b) ograničenja inherentnih u oblasti dobijanja jedinjenja kao što je aktivno jedinjenje za tretiranje osetljivosti kod pojedinaca.
[0351] Primerni, neograničavajući opseg za terapeutski efikasnu količinu nekog 191P4D12 ADC datog u kombinaciji prema ovom pronalasku je oko 0,5 do oko 10 mg/kg, oko 1 do oko 5 mg/kg, najmanje 1 mg/kg, najmanje 2 mg/kg, najmanje 3 mg/kg, ili najmanje 4 mg/kg. Ostali primerni neograničavajući opsezi su, na primer, oko 0,5 do oko 5 mg/kg, ili na primer oko 0,8 do oko 5 mg/kg, ili na primer oko 1 do oko 7,5mg/kg. Primer izvođenja ovog pronalaska sa visokim dozama odnosi se na dozu veću od 10 mg/kg. Treba istaći to da vrednosti doza mogu da variraju sa vrstom i ozbiljnošću stanja koje se ublažava, i mogu da uključuju jednu ili više doza. Dalje se podrazumeva da za bilo kog posebnog subjekta, specifični dozni režimi treba da se podešavaju tokom vremena prema potrebi pojedinca i profesionalnom mišljenju osobe koja daje ili nadgleda davanje kombinacija, i da su dozni opsezi dati ovde samo primera radi a ne da ograniče obim ili praksu zahtevane kombinacije.
Klinički razvojni plan (CDP)
[0352] CDP sledi i razvija lečenja sa 191P4D12 ADC u vezi sa adjunktivnom terapijom ili monoterapijom. Ispitivanja inicijalno pokazuju bezbednost a, posle toga, potvrđuju efikasnost u ponavljanju doza.
Ispitivanja su otvorena oznaka koja upoređuje standardnu hemoterapiju sa standardnom terapijom plus 191P4D12 ADC. Kao što će biti jasno, jedan neograničavajući kriterijum koji može da se koristi u vezi sa upisom pacijenata je nivoi ekspresije 191P4D12 u njihovim tumorima kao što se određuje biopsijom.
[0353] Kao sa bilo kojom terapijom na bazi infuzije proteina ili antitela, problemi vezani za bezbednost povezani su primarno sa (i) sindromom oslobađanja citokina, tj.,hipotenzijom, groznicom, drhtanjem, drhtavicom; (ii) razvojem nekog imunogenskog odgovora na materijal (tj., razvoj humanih antitela od strane pacijenta na terapiju sa antitelom, ili HAMA odgovor); i, (iii) toksičnošću na normalne ćelije koje eksprimiraju 191P4D12. Standardni testovi i praćenje koriste se za kontrolu svakog od ovih problema vezanih za bezbednost. Otkriveno je da su 191P4D12 ADC bezbedni za humano davanje.
Primer 9
Detektovanje 191P4D12 proteina u uzorcima kancera pacijenata pomoću IHC
[0354] Ekspresija 191P4D12 proteina imunohistohemijom ispitana je kod tumorskih uzoraka iz pacijenata iz pacijenata sa kancerom (i) bešike, (ii) dojke, (iii) pankreasa, (iv) pluća, (v) jajnika, (vi) jednjaka, i (vii) glave i vrata. Ukratko, formalinom fiksirana tkiva ugrađenja u parafinski vosak isečena su u četiri (4) mikronske sekcije i stavljeno na staklene slajdove. Sekcije su de-voskirane, rehidrirane i tretirane sa EDTA rastvor povraćaja antigena (Biogenex, San Ramon, CA) u EZ-Retriever mikrotalasnoj (Biogenex, San Ramon, CA) tokom 30 minuta na 95°C. Sekcije su zatim tretirane 3% rastvorom vodonik peroksida da bi se inaktivirala aktivnost endogene peroksidaze. Proteinski blok bez seruma (Dako, Carpenteria, CA) korišćen je da bi se inhibiralo nespecifično vezivanje pre inkubacije sa monoklonalnim mišjim anti-191P4D12 antitelom ili nekom izotipskom kontrolom. Nakon toga, sekcije su tretirane sa detekcionim sistemom Super Sensitive™ polimer-peroksidaza rena (HRP) koji se sastoji od inkubacije u Super Enhancer™ reagensu praćeno inkubacijom sa polimer-HRP sekundarno antitelo konjugatom (BioGenex, San Ramon, CA). Sekcije su zatim razvijene upotrebom DAB kompleta (BioGenex, San Ramon, CA). Nukleusi su zatim obojeni upotrebom hematoksilina, i analizirani pomoću mikroskopa sa svetlim poljem. Specifično bojenje je detektovano u uzorcima pacijeata upotrebom 191P4D12 imunoreaktivnog antitela, kao što je naznačeno braon bojenjem. (Videti, Fig.21(A), 21(C), 21(E), 21(G), 21(I), 21(K), i 21(M)). Nasuprot tome, kontrolno antitelo nije obojilo nijedan uzorak pacijenta.
(Videti, Fig.21(B), 21(D), 21(F), 21(H), 21(J), 21(L), i 21(N)).
[0355] Rezultati pokazuju ekspresiju 191P4D12 u tumorskim ćelijama tkiva kancera bešike, dojke, pankreasa, pluća, jajnika, jednjaka, i glave i vrata pacijenata. Ovi rezultati ukazuju da se 191P4D12 eksprimira u humanim kancerima i da su antitela usmerena na ovaj antigen i konjugat antitela i leka označen Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE) korisna za dijagnostičke i terapeutske svrhe. (Fig.21).
Primer 10
Određivanje epitopa vezivanja Ha22-2(2,4)6.1 MAb
[0356] 191P4D12 protein humanog, cinomolgusnog, pacovskog i mišjeg porekla prekomerno je eksprimiran rekombinantno u PC3 ćelijskoj liniji da bi se odredila unakrsna-reaktivnost Ha22-2(2,4)6.1 sa ovim ortolozima. Pokazalo se da Ha22-2(2,4)6.1 snažno unakrsno-reaguje sa cinomolgusnim i pacovskim ortolozima 191P4D12 (Fig.23). EC50 vrednosti vezivanja prikazane su u Tabeli VII. Vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 za mišji ortolog pokazuju značajno smanjenje u EC50 vrednosti vezivanja, što pokazuje značajne aminokiselinske supstitucije u V domenu (u poređenju sa humanim i pacovskim sekvencama) pod uticajem afiniteta Ha22-2(2,4)6.1 prema 191P4D12.
[0357] Tabela VIII prikazuje poravnanje aa 1-180 proteinske sekvence 191P4D12 ortologa koji sadrže V-domen. Samo dve aminokiseline u pacovskoj sekvenci ortologa, Thr-75 i Ser-90, su supstituisane u mišjoj sekvenci ortologa za Ile i Asn, respektivno (označeno podebljanim tekstom). Treba istaći da su odgovarajuće aminokiseline u humanoj sekvenci Ala-76 i Ser-91. Da bi se odredilo da li ove aminokiseline obuhvataju vezujući epitop Ha22-2(2,4)6.1, nekoliko mutantnih konstrukata 191P4D12 i njegov mišji ortolog generisani su i eksprimirani u PC3 ćelijama (Tabela IX). "Mišje" aminokiseline su ugrađene umesto standardne mutageneze supstitucije alanina u humanu sekvencu i obrnuto u mišju sekvencu.
[0358] Pokazalo se da mutacija Ser-91 do Asn u 191P4D12 ozbiljno narušava vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 potvrđujući da je ova aminokiselina, Ser-91, esencijalna za vezivanje i mora da obuhvata epitop prepoznat od strane Ha22-2(2,4)6.1 MAb. Dodatna mutacija Ala u položaju 76 (A76I, S91N dvostruki mutant) takođe je uvedena u 191P4D12. Pokazalo se da je vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 za dvostruki mutant A76I, S91N veoma slično vezivanju mišjeg ortologa (Fig.24). Nasuprot tome, mutacija Asn-90 u mišjoj sekvenci do Ser dramatično poboljšava vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 za mišji mutantni ortolog što dodatno potvrđuje značaj te aminokiseline u ovom položaju za vezivanje Ha22-2(2,4)6.1. Vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 za mišji dvostruki mutant ortologa A90S, I75A izgleda veoma slično za humani ortolog 191P4D12.
[0359] Uzeti zajedno, ovi podaci dokazuju da Ser-91 i Ala-76 imaju ključnu ulogu u vezivanju Ha22-2(2,4)6.1 za 191P4D12 protein na ćelijskoj površini i čine deo epitopa prepoznatog od strane Ha22-2(2,4)6.1 na površini 191P4D12.
[0360] Da bi se vizuelizovao ovaj koncept, generisan je kompjuterski model V-domena 191P4D12 baziran na objavljenim podacima o kristalnoj strukturi za članove porodice 191P4D12 i proteina koji sadrže Ig-domen upotrebom PyMOL (Fig.25). Prikazani su položaji Ala-76 (istačkan) i Ser-91 (krstići).
[0361] Dodatno, da bi se dalje prečistilo vezujuće mesto Ha22-2(2,4)6.1 na 191P4D12 molekulu, konstruisan je i eksprimovan fragment 191P4D12 koji odgovara V-domenu na površini pacovskih(1)E ćelija. Sledeći konstrukt generisan je u retroviralnom vektoru:
191P4D12 (aa1-150,347-510)
[0362] Vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 MAb ocenjeno je pomoću FACS. Kao što je prikazano na Fig.26, Ha22-2(2,4)6.1 se vezuje za ćelije koje eksprimiraju V-domen (A) kao i 191P4D12 divljeg tipa (B), ali ne za ćelije koje eksprimiraju C1C2 domen generisane ranije (C). Ovo dokazuje da je vezujuće mesto za ovo antitelo smešteno u V-domenu 191P4D12 unutar prvih 150 aminokiselina.
[0363] Rezultati pokazuju da se Ha22-2(2,4)6.1 MAb vezuje za v-domen 191P4D12 proteina iz položaja aa 1-150 i dodatno pokazuju da specifični epitop koji obuhvata aa Ser-91 i aa Ala-76 je kritičan za vezivanje Ha22-2(2,4)6.1 MAb.
[0364] U ovoj prijavi poziva se na sadržaj raznih podataka vebsajtova, objave, prijave patenata i patente. (Vebsajtovi su navedeni svojom jedinstvenom lokacijom resursa, ili URL, adresama na svetskoj mreži.)
[0365] Ovaj pronalazak ne treba da ograniči obim primerima izvođenja opisanim ovde, koji su namenjeni kao pojedinačne ilustracije pojedinačnih aspekata ovog pronalaska, i svi koji su funkcionalno ekvivalentni su unutar obima ovog pronalaska. Razne modifikacije modela i postupaka ovog pronalaska, pored onih opisanih ovde, biće očigledne prosečnim stručnjacima u ovoj oblasti iz prethodnog opisa i učenja, i na sličan način imaju za cilj da potpadaju unutar obima ovog pronalaska. Takve modifikacije ili ostali primeri izvođenja mogu da se praktikuju bez odstupanja od pravog obima i duha ovog pronalaska.
TABELE
[0366]
TABELA I: Tkiva koja eksprimiraju 191P4D12 kada su maligna.
TABELA II: Skraćenice aminokiselina
TABELA IV: Opšti postupak za sintezu vcMMAE
TABELA IX
LISTA SEKVENCI
[0367]

Claims (28)

  1. Patentni zahtevi 1. Konjugat antitela i leka koji obuhvata anti-191P4D12 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, kod kog antitelo ili njegov fragment obuhvata varijabilni region teškog lanca koji se sastoji od aminokiselinskog ostatka 20 do aminokiselinskog ostatka 136 iz SEQ ID NO: 7 i varijabilni region lakog lanca koji se sastoji od aminokiselinskog ostatka 23 do aminokiselinskog ostatka 130 iz SEQ ID NO: 8, a kod kog je antitelo ili njegov fragment konjugovan sa monometil auristatinom E (MMAE).
  2. 2. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 1, kod kog antitelo obuhvata teški lanac koji se sastoji od aminokiselinskog ostatka 20 do aminokiselinskog ostatka 466 iz SEQ ID NO: 7 i laki lanac koji se sastoji od aminokiselinskog ostatka 23 do aminokiselinskog ostatka 236 iz SEQ ID NO: 8.
  3. 3. Konjugat antitela i leka koji obuhvata anti-191P4D12 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji obuhvata varijabilni region teškog lanca koji se sastoji od aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog lanca antitela proizvedenog od strane hibridoma deponovanog pod pristupnim br. PTA-11267 Američke zbirke tipskih kultura (ATCC), i varijabilni region lakog lanca koji se sastoji od aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona lakog lanca antitela proizvedenog od strane hibridoma deponovanog pod ATCC pristupnim br. PTA-11267, a kod kog je antitelo ili njegov fragment konjugovan sa monometil auristatinom E (MMAE).
  4. 4. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 3, kod kog antitelo obuhvata teški lanac koji se sastoji od aminokiselinske sekvence teškog lanca antitela proizvedenog od strane hibridoma deponovanog pod ATCC pristupnim br. PTA-11267, i laki lanac koji se sastoji od aminokiselinske sekvence lakog lanca antitela proizvedenog od strane hibridoma deponovanog pod ATCC pristupnim br. PTA-11267.
  5. 5. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 1 ili 3, kod kog fragment predstavlja Fab, F(ab')2, Fv, Fd, dAb, ili scFv fragment.
  6. 6. Konjugat antitela i leka prema bilo kom od zahteva 1 do 5, kod kog je antitelo potpuno humano antitelo.
  7. 7. Konjugat antitela i leka prema bilo kom od zahteva 1 do 6, kod kog je antitelo proizvedeno rekombinantno.
  8. 8. Konjugat antitela i leka prema bilo kom od zahteva 1 do 7, kod kog je antitelo ili njegov fragment konjugovan sa MMAE preko vezujuće jedinice.
  9. 9. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 8, kod kog je vezujuća jedinica enzimski cepljiva.
  10. 10. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 8 ili 9, kod kog vezujuća jedinica formira vezu sa atomom sumpora antitela ili njegovog fragmenta.
  11. 11. Konjugat antitela i leka prema bilo kom od zahteva 1 do 10, kod kog konjugat antitela i leka ima sledeću formulu: L - (LU - D)p, u kojoj: L je anti-191P4D12 antitelo ili njegov fragment, (LU - D) je deo vezujuće jedinice-lekovite jedinice, u kom je: LU je vezujuća jedinica, a D je MMAE; i p je ceo broj od 1 do 20.
  12. 12. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 11, kod kog je p u opsegu od 1 do 10, ili kod kog je p u opsegu od 2 do 5.
  13. 13. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 11 ili 12, kod kog vezujuća jedinica ima formulu: -Aa-Ww-Yy-, u kojoj: -A- je noseća jedinica, a je 0 ili 1; -W- je aminokiselinska jedinica, w je ceo broj koji je u opsegu od 0 do 12; -Y- je razdvajajuća jedinica, i y je 0, 1 ili 2.
  14. 14. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 13, kod kog aminokiselinska jedinica obuhvata valin-citrulin (Val-Cit).
  15. 15. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 13 ili 14, kod kog: noseća jedinica ima strukturu formule IIIa:
    aminokiselinska jedinica je valin-citrulin (Val-Cit); i razdvajajuća jedinica ima strukturu formule Xa:
  16. 16. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 15, kod kog noseća jedinica formira vezu sa atomom sumpora antitela ili njegovog fragmenta; i kod kog je razdvajajuća jedinica vezana za MMAE preko karbamatne grupe.
  17. 17. Konjugat antitela i leka prema bilo kom od zahteva 11 do 16, kod kog konjugat antitela i leka ima sledeću strukturu:
    gde je p u opsegu od 1 do 10.
  18. 18. Konjugat antitela i leka prema zahtevu 17, kod kog je p u opsegu od 2 do 5.
  19. 19. Konjugat antitela i leka kao što je definisano u nekom od zahteva 1 do 18, za upotrebu u lečenju kancera kod subjekta.
  20. 20. Konjugat antitela i leka za upotrebu prema zahtevu 19, pri čemu kancer predstavlja kancer pankreasa, kancer pluća, kancer bešike, kancer kolona, kancer jajnika, kancer jednjaka, kancer glave i vrata ili kancer dojke.
  21. 21. Konjugat antitela i leka za upotrebu prema zahtevu 20, pri čemu kancer predstavlja kancer bešike.
  22. 22. Konjugat antitela i leka za upotrebu prema zahtevu 21, pri čemu kancer bešike predstavlja uznapredovali kancer bešike.
  23. 23. Konjugat antitela i leka za upotrebu prema bilo kom od zahteva 19 do 22, pri čemu postupak dalje obuhvata primenu zračenja ili hemoterapeutskog agensa na subjekat.
  24. 24. Konjugat antitela i leka za upotrebu prema bilo kom od zahteva 19 do 23, pri čemu subjekat predstavlja humani subjekat.
  25. 25. Konjugat antitela i leka za upotrebu prema bilo kom od zahteva 19 do 24, pri čemu postupak obuhvata davanje subjektu konjugata antitela i leka u količini od 0,5 mg/kg do 10 mg/kg.
  26. 26. Farmaceutska kombinacija koja obuhvata konjugat antitela i leka prema bilo kom od zahteva 1 do 19 u humanom jediničnom doznom obliku.
  27. 27. Farmaceutska kombinacija prema zahtevu 26, pri čemu ta farmaceutska kombinacija dalje obuhvata hemoterapeutski agens.
  28. 28. Farmaceutska kombinacija prema zahtevu 26, koja obuhvata 0,5 mg/kg do 10 mg/kg konjugata antitela i leka.
RS20180854A 2010-09-29 2011-09-29 Konjugati antitela i leka (adc) koji se vezuju za 191p4d12 proteine RS57483B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US38793310P 2010-09-29 2010-09-29
PCT/US2011/054054 WO2012047724A1 (en) 2010-09-29 2011-09-29 Antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
EP11831345.1A EP2621526B1 (en) 2010-09-29 2011-09-29 Antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS57483B1 true RS57483B1 (sr) 2018-10-31

Family

ID=45871300

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180854A RS57483B1 (sr) 2010-09-29 2011-09-29 Konjugati antitela i leka (adc) koji se vezuju za 191p4d12 proteine

Country Status (30)

Country Link
US (9) US8637642B2 (sr)
EP (3) EP3903812A1 (sr)
JP (9) JP6083871B2 (sr)
KR (10) KR102595129B1 (sr)
CN (2) CN105567717B (sr)
AU (1) AU2011312417B2 (sr)
BR (1) BR112013007309B1 (sr)
CA (1) CA2811644C (sr)
CY (3) CY1121023T1 (sr)
DK (2) DK2621526T3 (sr)
EA (2) EA027887B1 (sr)
ES (2) ES2680624T3 (sr)
FR (1) FR22C1050I2 (sr)
HR (1) HRP20181154T8 (sr)
HU (3) HUE054855T2 (sr)
IL (6) IL311145B2 (sr)
LT (2) LT2621526T (sr)
LU (1) LUC00280I2 (sr)
MX (4) MX347954B (sr)
NL (1) NL301198I2 (sr)
NO (1) NO2022039I1 (sr)
PH (2) PH12017501461B1 (sr)
PL (2) PL2621526T3 (sr)
PT (2) PT3409287T (sr)
RS (1) RS57483B1 (sr)
SI (2) SI2621526T1 (sr)
SM (1) SMT201800365T1 (sr)
TW (8) TWI814373B (sr)
UA (1) UA110495C2 (sr)
WO (1) WO2012047724A1 (sr)

Families Citing this family (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX347954B (es) 2010-09-29 2017-05-19 Agensys Inc Conjugados de anticuerpo farmaco (adc) que enlazan a proteinas 191p4d12.
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
US20130116404A1 (en) 2011-11-08 2013-05-09 Case Western Reserve University Targeted non-invasive imaging probes of egfr expressing cells
EP3539985A1 (en) 2012-02-24 2019-09-18 AbbVie Stemcentrx LLC Anti sez6 antibodies and methods of use
BR112014020826A8 (pt) 2012-02-24 2017-09-19 Stem Centrx Inc Anticorpo que se liga especificamente a um epítopo, ácido nucleico, vetor ou célula hospedeira, conjugado de fármaco – anticorpo, composição farmacêutica compreendendo o referido anticorpo, uso do mesmo, kit e método de preparação do conjugado
TWI606063B (zh) * 2012-08-23 2017-11-21 艾澤西公司 結合至１５８ｐ１ｄ７蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ）
WO2014089177A2 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines
US10047163B2 (en) 2013-02-08 2018-08-14 Abbvie Stemcentrx Llc Multispecific constructs
ES2731681T3 (es) 2013-02-22 2019-11-18 Abbvie Stemcentrx Llc Conjugados de anticuerpo anti-DLL3 y PBD y usos de los mismos
KR20160047567A (ko) * 2013-08-28 2016-05-02 스템센트알엑스 인코포레이티드 조작된 항-dll3 접합체 및 사용 방법
CN105792836A (zh) 2013-08-28 2016-07-20 施特姆森特克斯股份有限公司 新型sez6调节剂以及应用方法
SG11201601424PA (en) 2013-08-28 2016-03-30 Stemcentrx Inc Site-specific antibody conjugation methods and compositions
CA2939941A1 (en) 2014-02-21 2015-08-27 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-dll3 antibodies and drug conjugates for use in melanoma
AR099812A1 (es) * 2014-03-21 2016-08-17 Abbvie Inc Anticuerpos y conjugados de anticuerpo y fármaco anti-egfr
CN104212698A (zh) * 2014-10-01 2014-12-17 南京飞马食品有限公司 一种发芽糙米醋的制作方法
EP3268038B1 (en) 2015-03-09 2021-05-05 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to flt3 proteins
CN116059395A (zh) * 2015-06-29 2023-05-05 第一三共株式会社 用于选择性制造抗体-药物缀合物的方法
EP3347048B1 (en) * 2015-09-09 2020-04-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to nectin-4 and uses thereof
WO2017197045A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Movassaghi Mohammad Convergent and enantioselective total synthesis of communesin analogs
WO2018047154A1 (en) 2016-09-07 2018-03-15 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Anti-nkp46 antibodies and therapeutic use of same
EP3554544A4 (en) 2016-12-16 2020-07-29 Bluefin Biomedicine, Inc. ANTI-PROTEIN 1 ANTIBODY CONTAINING AN ANTI-CUB DOMAIN (CDCP1), ANTIBODY-DRUG CONJUGATES AND THEIR METHODS OF USE
CN110392697A (zh) * 2017-03-02 2019-10-29 国家医疗保健研究所 对nectin-4具有特异性的抗体及其用途
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
WO2018226578A1 (en) * 2017-06-05 2018-12-13 Agensys, Inc. Nectin-4-binding proteins and methods of use thereof
SG11202001930QA (en) * 2017-09-07 2020-04-29 Dragonfly Therapeutics Inc Proteins binding nkg2d, cd16 and a tumor-associated antigen
NZ762376A (en) 2017-09-19 2022-08-26 Scherrer Inst Paul Transglutaminase conjugation method and linker
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
TW202003047A (zh) 2018-03-23 2020-01-16 美商西雅圖遺傳學公司 包括微管蛋白破壞劑之抗體藥物結合物治療實體腫瘤之用途
WO2019183633A1 (en) 2018-03-23 2019-09-26 Case Western Reserve Univeristy Psma targeted conjugate compounds and uses thereof
TWI851577B (zh) 2018-06-07 2024-08-11 美商思進公司 喜樹鹼結合物
IL279489B2 (en) * 2018-06-22 2025-10-01 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4, a drug conjugate containing the peptide ligands and a pharmaceutical composition containing the drug conjugate
AU2019392090A1 (en) 2018-12-03 2021-06-17 Agensys, Inc. Pharmaceutical compositions comprising anti-191P4D12 antibody drug conjugates and methods of use thereof
US11535634B2 (en) 2019-06-05 2022-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
TW202540197A (zh) * 2019-08-13 2025-10-16 美商艾澤西公司 以結合191p4d12蛋白質之抗體藥物結合物(adc)治療癌症
KR20220106779A (ko) * 2019-11-25 2022-07-29 어젠시스 인코포레이티드 191p4d12 단백질에 결합하는 항체 약물 접합체(adc)를 사용한 암의 치료
EP4096717B1 (en) 2020-01-31 2024-12-11 Innate Pharma Treatment of cancer
JP7735291B2 (ja) 2020-02-21 2025-09-08 エーアールエス ファーマシューティカルズ、インコーポレイテッド ネクチン－４抗体コンジュゲートおよびその使用
BR112022019073A2 (pt) * 2020-03-25 2022-11-08 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co Ltd Composição farmacêutica que compreende conjugado anticorpo-fármaco e uso da mesma
AU2021251875A1 (en) 2020-04-10 2022-11-03 Seagen Inc. Charge variant linkers
CN115768798A (zh) * 2020-06-18 2023-03-07 生物蛋白有限公司 条件活性抗粘附分子-4(nectin-4)抗体
MX2022016232A (es) * 2020-06-19 2023-03-14 Agensys Inc Marcadores para uso en metodos para tratar canceres con conjugados de anticuerpo y farmaco (adc).
EP4208259A2 (en) 2020-09-04 2023-07-12 NovaRock Biotherapeutics, Ltd. Nectin-4 antibodies and uses thereof
EP4215546A4 (en) 2020-09-16 2025-02-05 Sichuan Kelun-Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd. ANTI-NECTIN-4 ANTIBODY, CONJUGATE THEREOF AND USE THEREOF
KR20230091885A (ko) * 2020-09-17 2023-06-23 어젠시스 인코포레이티드 191p4d12 단백질에 결합하는 항체 약물 접합체(adc)로 암을 치료하는 방법
IL302006A (en) * 2020-10-11 2023-06-01 Agensys Inc Methods for treating cancer with antibody-drug conjugates (ADC) that bind to proteins 191P4D12
KR20230096052A (ko) 2020-10-25 2023-06-29 아라리스 바이오테크 아게 항체-링커 접합체를 생성하기 위한 수단 및 방법
WO2022098972A1 (en) 2020-11-08 2022-05-12 Seagen Inc. Combination-therapy antibody drug conjugate with immune cell inhibitor
KR102408221B1 (ko) * 2020-11-10 2022-06-13 삼성메카닉스 (주) 그리드 커플링 성형장치
MX2023005873A (es) 2020-11-25 2023-06-05 Innate Pharma Tratamiento del cancer.
WO2022182415A1 (en) 2021-02-24 2022-09-01 Massachusetts Institute Of Technology Himastatin derivatives, and processes of preparation thereof, and uses thereof
BR112023018676A2 (pt) 2021-03-18 2023-10-10 Seagen Inc Conjugado anticorpo-fármaco, composição farmacêutica, métodos de tratamento de uma doença ou condição e de um câncer, e, composição de conjugado ligante-fármaco
KR20240035378A (ko) 2021-03-31 2024-03-15 이머전스 세라퓨틱스 아게 항-넥틴-4 항체 엑사테칸 접합체
EP4086284A1 (en) 2021-05-07 2022-11-09 Emergence Therapeutics AG Anti-nectin-4 antibody exatecan conjugates
US20240209080A1 (en) 2021-04-10 2024-06-27 Profoundbio Us Co. Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
CA3216459A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
TW202302649A (zh) 2021-04-26 2023-01-16 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 抗ｎｅｃｔｉｎ－４抗體和抗ｎｅｃｔｉｎ－４抗體－藥物偶聯物及其醫藥用途
AU2022283467A1 (en) 2021-05-28 2023-12-07 Seagen Inc. Anthracycline antibody conjugates
MX2024001834A (es) * 2021-08-13 2024-05-15 Agensys Inc Metodos para tratar el cancer de vejiga no muscular invasivo (nmibc) con conjugados de anticuerpos y farmacos (adc) que se unen a las proteinas 191p4d12.
US20250332265A1 (en) 2021-11-09 2025-10-30 Case Western Reserve University Psma targeted conjugate compounds and uses thereof
WO2023092099A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2023178289A2 (en) 2022-03-17 2023-09-21 Seagen Inc. Camptothecin conjugates
US20250205353A1 (en) 2022-03-23 2025-06-26 Synaffix B.V. Antibody-conjugates for targeting of tumours expressing nectin-4
JP7740118B2 (ja) * 2022-05-02 2025-09-17 株式会社三洋物産 遊技機
JP7690922B2 (ja) * 2022-05-02 2025-06-11 株式会社三洋物産 遊技機
AU2023273063A1 (en) 2022-05-16 2024-11-14 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Pharmaceutical composition containing anti-nectin-4 antibody drug conjugate and use thereof
JP2025517476A (ja) 2022-05-25 2025-06-05 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニム ネクチン－４結合剤
US20240010701A1 (en) 2022-06-01 2024-01-11 ALX Oncology Inc. Combination therapies for treating urothelial carcinoma
EP4285935A1 (en) 2022-06-03 2023-12-06 Emergence Therapeutics AG Novel anti-nectin-4 antibody camptothecin derivative conjugates
EP4310101A1 (en) * 2022-07-22 2024-01-24 Emergence Therapeutics AG Novel anti-nectin-4 antibodies and antibody-drug conjugates
EP4309676A1 (en) 2022-07-22 2024-01-24 Emergence Therapeutics AG Novel anti-nectin-4 antibody camptothecin derivative conjugates
EP4324849A1 (en) 2022-08-18 2024-02-21 Emergence Therapeutics AG Humanized anti-nectin-4 antibodies
WO2024052503A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
EP4344707A1 (en) 2022-09-29 2024-04-03 Emergence Therapeutics AG New anti-nectin-4 antibody drug conjugates
WO2024067841A1 (zh) 2022-09-30 2024-04-04 上海迪诺医药科技有限公司 苯并氮杂卓衍生物、含其的偶联物及其应用
WO2024129756A1 (en) 2022-12-13 2024-06-20 Seagen Inc. Site-specific engineered cysteine antibody drug conjugates
EP4461317A1 (en) 2023-05-12 2024-11-13 Emergence Therapeutics GmbH Antibody-drug conjugates comprising an anti-nectin-4 antibody and belotecan or a derivative thereof
AU2024304180A1 (en) 2023-06-13 2026-01-08 Adcentrx Therapeutics, Inc. Methods and compositions related to antibodies and antibody drug conjugates (adcs) that bind nectin-4 proteins
EP4534102A1 (en) 2023-10-02 2025-04-09 Eli Lilly and Company Antibody drug conjugate (adc) targeting nectin 4 and comprising an exatecan payload
EP4534101A1 (en) 2023-10-02 2025-04-09 Eli Lilly and Company Antibody drug conjugate (adc) targeting nectin 4 and comprising an exatecan payload
WO2025149947A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Seagen Inc. Antibody-drug conjugates
WO2025149667A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Pheon Therapeutics Ltd Antibody drug conjugates and uses thereof
WO2025162493A1 (zh) * 2024-01-29 2025-08-07 甘李药业股份有限公司 抗Nectin-4抗体、配体药物偶联物及其应用
WO2025195487A1 (zh) * 2024-03-21 2025-09-25 石药集团巨石生物制药有限公司 靶向Nectin-4的抗体药物缀合物的用途
WO2025224297A1 (en) 2024-04-26 2025-10-30 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to tgfbi and uses thereof
WO2025264533A1 (en) 2024-06-17 2025-12-26 Adcentrx Therapeutics Inc. Methods and compositions related to antibody drug conjugates (adcs) that bind steap-1 proteins
US20260048137A1 (en) 2024-08-16 2026-02-19 Ardeagen Corporation Anti-mesothelin antibody conjugates and methods of use thereof

Family Cites Families (150)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3939350A (en) 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4277437A (en) 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4486414A (en) 1983-03-21 1984-12-04 Arizona Board Of Reagents Dolastatins A and B cell growth inhibitory substances
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
US5079233A (en) 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5053394A (en) 1988-09-21 1991-10-01 American Cyanamid Company Targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
IL106992A (en) 1988-02-11 1994-06-24 Bristol Myers Squibb Co Acylhydrazone derivatives of anthracycline and methods for their preparation
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5076973A (en) 1988-10-24 1991-12-31 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 3
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US4978744A (en) 1989-01-27 1990-12-18 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 10
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
US4986988A (en) 1989-05-18 1991-01-22 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptides dolastatin 13 and dehydrodolastatin 13
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5138036A (en) 1989-11-13 1992-08-11 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Isolation and structural elucidation of the cytostatic cyclodepsipeptide dolastatin 14
US6657103B1 (en) 1990-01-12 2003-12-02 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE207080T1 (de) 1991-11-25 2001-11-15 Enzon Inc Multivalente antigen-bindende proteine
PT1024191E (pt) 1991-12-02 2008-12-22 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
CA2118508A1 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Elizabeth S. Ward Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
DK0752248T3 (da) 1992-11-13 2000-11-13 Idec Pharma Corp Terapeutisk anvendelse af kimæriske og radioaktivt mærkede antistoffer mod humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantig
US6034065A (en) 1992-12-03 2000-03-07 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide phenethylamides of dolastatin 10
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5410024A (en) 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US7625697B2 (en) 1994-06-17 2009-12-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for constructing subarrays and subarrays made thereby
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5554725A (en) 1994-09-14 1996-09-10 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Synthesis of dolastatin 15
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
DK0871490T3 (da) 1995-12-22 2003-07-07 Bristol Myers Squibb Co Forgrenede hydrazonlinkere
US6130237A (en) 1996-09-12 2000-10-10 Cancer Research Campaign Technology Limited Condensed N-aclyindoles as antitumor agents
JP2001502537A (ja) 1996-10-15 2001-02-27 ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・カリフォルニア ヒト前立腺ガンの進行の動物モデル
EP0972022A2 (en) 1997-01-21 2000-01-19 Human Genome Sciences, Inc. Polynucleotides and polypeptides encoding receptors
WO1998036765A1 (en) 1997-02-25 1998-08-27 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear and cyclo-depsipeptides dolastatin 16, dolastatin 17, and dolastatin 18
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
EP0983303B1 (en) 1997-05-21 2006-03-08 Biovation Limited Method for the production of non-immunogenic proteins
US20030065156A1 (en) 1997-12-23 2003-04-03 Williams Lewis T. Novel human genes and gene expression products I
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6531279B1 (en) 1998-04-15 2003-03-11 Genset S.A. Genomic sequence of the 5-lipoxygenase-activating protein (FLAP), polymorphic markers thereof and methods for detection of asthma
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6264949B1 (en) 1998-09-29 2001-07-24 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Noninvasive agents for diagnosis and prognosis of the progression of fibrosis
US20020137160A1 (en) 1998-12-17 2002-09-26 Byatt John C Nucleic acid and other molecules associated with lactation and muscle and fat deposition
US7160694B2 (en) 1999-06-14 2007-01-09 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acids encoding TANGO405 and functional fragments and uses thereof
EP1194549A2 (en) 1999-07-02 2002-04-10 Chiron Corporation Human genes and gene expression products
EP1074617A3 (en) 1999-07-29 2004-04-21 Research Association for Biotechnology Primers for synthesising full-length cDNA and their use
AU7084500A (en) 1999-09-03 2001-04-10 Human Genome Sciences, Inc. Immunoglobulin superfamily polynucleotides, polypeptides, and antibodies
AU6063900A (en) 1999-09-10 2001-04-10 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes encoding proteins having prognostic, diagnostic, preventive, therapeutic, and other uses
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
CA2384713A1 (en) 1999-09-29 2001-04-05 Human Genome Sciences, Inc. Colon and colon cancer associated polynucleotides and polypeptides
AU2001229340A1 (en) 2000-01-14 2001-07-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Genes compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
US20020132753A1 (en) 2000-01-31 2002-09-19 Rosen Craig A. Nucleic acids, proteins, and antibodies
US20030013649A1 (en) 2000-01-31 2003-01-16 Rosen Craig A. Nucleic acids, proteins, and antibodies
WO2001055301A2 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
AU2001243142A1 (en) 2000-02-03 2001-08-14 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
WO2001060860A2 (en) 2000-02-17 2001-08-23 Millennium Predictive Medicine, Inc. Genes differentially expressed in human prostate cancer and their use
CN1169954C (zh) 2000-03-09 2004-10-06 上海市肿瘤研究所 编码具有抑制癌细胞生长功能的人蛋白的多核苷酸
WO2001070979A2 (en) 2000-03-21 2001-09-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Genes, compositions, kits, and method for identification, assessment, prevention and therapy of ovarian cancer
US6436703B1 (en) 2000-03-31 2002-08-20 Hyseq, Inc. Nucleic acids and polypeptides
AU2001274888A1 (en) 2000-05-19 2001-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
CA2411601A1 (en) 2000-06-05 2001-12-13 Avalon Pharmaceuticals Cancer gene determination and therapeutic screening using signature gene sets
IL154129A0 (en) 2000-07-28 2003-07-31 Compugen Inc Oligonucleotide library for detecting rna transcripts and splice variants that populate a transcriptome
AU1305302A (en) 2000-10-05 2002-04-15 Immunex Corp Nectin polypeptides, polynucleotides, methods of making and use thereof
CA2430013C (en) 2000-11-30 2011-11-22 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
KR100770188B1 (ko) * 2000-12-20 2007-10-25 데이진 가부시키가이샤 폴리에스테르 혼섬사의 제조 방법
JP2005503760A (ja) 2001-01-24 2005-02-10 プロテイン デザイン ラブス， インコーポレイテッド 乳癌の診断方法、組成物および乳癌のモジュレーターのスクリーニング方法
US20040029114A1 (en) 2001-01-24 2004-02-12 Eos Technology, Inc. Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
WO2002060317A2 (en) 2001-01-30 2002-08-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
US7271240B2 (en) 2001-03-14 2007-09-18 Agensys, Inc. 125P5C8: a tissue specific protein highly expressed in various cancers
AU2002338431A1 (en) 2001-04-04 2002-11-05 Quark Biotech, Inc. Sequence characteristics of bladder cancer
AU2002309583A1 (en) 2001-04-18 2002-11-05 Protein Desing Labs, Inc. Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6794501B2 (en) 2001-05-04 2004-09-21 Ludwig Institute For Cancer Research Colon cancer antigen panel
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
EP1402053A4 (en) 2001-06-05 2005-05-11 Exelixis Inc CHDS AS MODULATORS OF THE P53 PATH AND METHOD OF USE
US7171311B2 (en) 2001-06-18 2007-01-30 Rosetta Inpharmatics Llc Methods of assigning treatment to breast cancer patients
WO2002102235A2 (en) 2001-06-18 2002-12-27 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
US20030099974A1 (en) 2001-07-18 2003-05-29 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
WO2003008444A2 (en) 2001-07-19 2003-01-30 Nymox Corporation Peptides effective in the treatment of tumors and other conditions requiring the removal or destruction of cells
DE60238143D1 (de) 2001-09-18 2010-12-09 Genentech Inc Zusammensetzungen und verfahren für die diagnose von tumoren
JP4200100B2 (ja) 2001-11-07 2008-12-24 アジェンシス，インコーポレイテッド 癌の処置および検出において有用な１６１ｐ２ｆ１０ｂと称される、核酸および対応タンパク質
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
AU2003245488A1 (en) 2002-06-13 2003-12-31 Regulome Corporation Functional sites
DK1545613T3 (da) 2002-07-31 2011-11-14 Seattle Genetics Inc Auristatinkonjugater og deres anvendelse til behandling af cancer, en autoimmun sygdom eller en infektiøs sygdom
AU2003243151A1 (en) * 2002-08-16 2004-03-03 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled 251p5g2 useful in treatment and detection of cancer
AU2008202217B2 (en) * 2002-08-16 2012-07-26 Agensys, Inc. Nucleic acids and corresponding proteins entitled 191PAD12(b) useful in treatment and detection of cancer
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US8017170B2 (en) 2002-08-29 2011-09-13 University Of Massachusetts Utilization of emulsion interface engineering to produce oxidatively stable lipid delivery systems
AR045563A1 (es) * 2003-09-10 2005-11-02 Warner Lambert Co Anticuerpos dirigidos a m-csf
EP2478912B1 (en) 2003-11-06 2016-08-31 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates with anti-HER2 or anti-CD22 antibodies and their use in therapy
BRPI0509274A (pt) 2004-03-26 2007-09-04 Pfizer Prod Inc usos de anticorpos anti-ctla-4
US20080268476A1 (en) 2004-05-12 2008-10-30 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Nectin 4 (N4) as a Marker for Cancer Prognosis
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
DK1791565T3 (en) 2004-09-23 2016-08-01 Genentech Inc Cysteingensplejsede antibodies and conjugates
CN101500590A (zh) * 2005-03-31 2009-08-05 阿根西斯公司 与161p2f10b蛋白结合的抗体和相关分子
RU2413735C2 (ru) 2005-03-31 2011-03-10 Эдженсис, Инк. Антитела и родственные молекулы, связывающиеся с белками 161p2f10b
JP5382692B2 (ja) * 2006-07-10 2014-01-08 学校法人藤田学園 抗体の分類法、抗原の同定法、抗体又は抗体セットの取得法、抗体パネルの作成法、並びに抗体又は抗体セット及びその用途
BRPI0717638A2 (pt) 2006-10-27 2013-11-12 Genentech Inc Anticorpors e imunoconjugados e usos para os mesmos
JP5394246B2 (ja) 2007-03-30 2014-01-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体及びイムノコンジュゲートとこれらの使用方法
MX347954B (es) * 2010-09-29 2017-05-19 Agensys Inc Conjugados de anticuerpo farmaco (adc) que enlazan a proteinas 191p4d12.

Also Published As

Publication number Publication date
EP3409287B9 (en) 2021-07-21
BR112013007309B1 (pt) 2021-07-06
TW201818968A (zh) 2018-06-01
PL2621526T3 (pl) 2018-11-30
US20230346968A1 (en) 2023-11-02
EP2621526A4 (en) 2014-06-04
TWI651096B (zh) 2019-02-21
KR20220012413A (ko) 2022-02-03
JP7688088B6 (ja) 2025-06-23
US9078931B2 (en) 2015-07-14
US20180296693A1 (en) 2018-10-18
PL3409287T3 (pl) 2021-09-27
JP7688088B2 (ja) 2025-06-03
US20160263243A1 (en) 2016-09-15
JP6083871B2 (ja) 2017-02-22
BR112013007309A2 (pt) 2016-07-05
JP7370405B2 (ja) 2023-10-27
US9962454B2 (en) 2018-05-08
TWI674112B (zh) 2019-10-11
MX2013003419A (es) 2014-04-14
PT2621526T (pt) 2018-08-02
IL290591B2 (en) 2024-08-01
FR22C1050I2 (fr) 2024-04-05
KR102801509B1 (ko) 2025-04-29
KR20230031999A (ko) 2023-03-07
LTC2621526I2 (sr) 2023-12-11
AU2011312417A1 (en) 2013-05-02
US20260034234A1 (en) 2026-02-05
NL301198I2 (nl) 2022-11-17
TWI720377B (zh) 2021-03-01
KR101851746B1 (ko) 2018-04-24
EP3409287A1 (en) 2018-12-05
PH12017501461A1 (en) 2019-10-28
JP6726258B2 (ja) 2020-07-22
IL311145B1 (en) 2025-04-01
LT2621526T (lt) 2018-09-25
EP3903812A1 (en) 2021-11-03
CA2811644A1 (en) 2012-04-12
LUC00280I2 (sr) 2025-05-12
US20150306245A1 (en) 2015-10-29
WO2012047724A1 (en) 2012-04-12
TW202543678A (zh) 2025-11-16
EA201790850A1 (ru) 2017-11-30
TW201216987A (en) 2012-05-01
JP7042872B2 (ja) 2022-03-28
FR22C1050I1 (fr) 2022-12-09
TWI764324B (zh) 2022-05-11
JP2019031563A (ja) 2019-02-28
CY1121023T1 (el) 2019-12-11
DK3409287T3 (da) 2021-07-05
DK3409287T5 (da) 2021-08-23
EP2621526A1 (en) 2013-08-07
AU2011312417B2 (en) 2015-08-20
EP3409287B1 (en) 2021-04-07
KR20130130709A (ko) 2013-12-02
MX347954B (es) 2017-05-19
KR20170124617A (ko) 2017-11-10
CN103402538A (zh) 2013-11-20
KR20250058780A (ko) 2025-04-30
US20210283268A1 (en) 2021-09-16
SI3409287T1 (sl) 2021-08-31
JP2022075818A (ja) 2022-05-18
HUE038908T2 (hu) 2018-12-28
NL301198I1 (sr) 2022-10-05
SMT201800365T1 (it) 2018-09-13
LTPA2022012I1 (sr) 2022-10-25
JP2020152735A (ja) 2020-09-24
UA110495C2 (ru) 2016-01-12
TW201934144A (zh) 2019-09-01
EP2621526B1 (en) 2018-06-06
PT3409287T (pt) 2021-05-27
TWI882308B (zh) 2025-05-01
JP2025113404A (ja) 2025-08-01
TWI524901B (zh) 2016-03-11
MX369679B (es) 2019-11-15
NO2022039I1 (no) 2022-09-29
US10894090B2 (en) 2021-01-19
WO2012047724A4 (en) 2012-07-05
IL319612A (en) 2025-05-01
JP2023179713A (ja) 2023-12-19
KR20200119895A (ko) 2020-10-20
IL290591A (sr) 2024-04-01
IL311145B2 (en) 2025-08-01
MX337873B (es) 2016-03-23
MX2019013655A (es) 2020-01-21
KR20210109656A (ko) 2021-09-06
KR102166408B1 (ko) 2020-10-16
KR20230128131A (ko) 2023-09-01
CA2811644C (en) 2022-07-12
EA027887B1 (ru) 2017-09-29
IL290591B1 (en) 2024-04-01
KR102295534B1 (ko) 2021-08-30
USRE48389E1 (en) 2021-01-12
TW202106337A (zh) 2021-02-16
US20120078028A1 (en) 2012-03-29
IL225460B (en) 2018-10-31
EA201300411A1 (ru) 2013-11-29
SI2621526T1 (sl) 2018-11-30
CN105567717B (zh) 2019-10-29
HRP20181154T8 (hr) 2018-12-14
TWI814373B (zh) 2023-09-01
JP2019031565A (ja) 2019-02-28
JP2013543498A (ja) 2013-12-05
HUS2200043I1 (hu) 2022-10-28
HK1256964A1 (en) 2019-10-04
CN103402538B (zh) 2015-10-07
US8637642B2 (en) 2014-01-28
ES2680624T3 (es) 2018-09-10
DK2621526T3 (en) 2018-08-06
IL225460A0 (en) 2013-06-27
KR102353283B1 (ko) 2022-01-19
KR102595129B1 (ko) 2023-10-31
IL262073B (en) 2020-11-30
JP2017110002A (ja) 2017-06-22
IL311145A (en) 2024-04-01
HRP20181154T1 (hr) 2018-11-02
KR102504750B1 (ko) 2023-03-02
US20130189286A1 (en) 2013-07-25
HUE054855T2 (hu) 2021-10-28
ES2874306T3 (es) 2021-11-04
PH12017501461B1 (en) 2024-04-12
US11559582B2 (en) 2023-01-24
CY2022029I2 (el) 2023-01-27
IL278696B (en) 2022-03-01
CY2022029I1 (el) 2023-01-05
TW202300174A (zh) 2023-01-01
TW202344270A (zh) 2023-11-16
US9314538B2 (en) 2016-04-19
KR102627947B1 (ko) 2024-01-23
KR20190019211A (ko) 2019-02-26
IL262073A (en) 2019-02-28
CY1124166T1 (el) 2022-05-27
JP2019055958A (ja) 2019-04-11
PH12013500542A1 (en) 2013-05-06
CN105567717A (zh) 2016-05-11
KR20240013851A (ko) 2024-01-30
TW201642908A (zh) 2016-12-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7688088B6 (ja) １９１ｐ４ｄ１２タンパク質に結合する抗体薬物結合体（ａｄｃ）
US20130136756A1 (en) Antibody drug conjugates (adc) that bind to 24p4c12 proteins
AU2023206231B2 (en) Antibody drug conjugates (ADC) that bind to 191P4D12 proteins
AU2015234335B2 (en) Antibody drug conjugates (ADC) that bind to 191P4D12 proteins
HK40063369A (en) Antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
HK1187820B (en) Antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
HK1187820A (en) Antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
EA040277B1 (ru) Конъюгаты антитело-лекарственное средство (adc), связывающиеся с белками 191p4d12