RS57559B1

RS57559B1 - 1,3,4-oksadiazol i 1,3,4-tiadiazol derivativi kao imunomodulatori

Info

Publication number: RS57559B1
Application number: RS20180936A
Authority: RS
Inventors: Pottayil Govindan Nair Sasikumar; Muralidhara Ramachandra; Seetharamaiah Setty Sudarshan Naremaddepalli
Original assignee: Aurigene Discovery Tech Ltd
Priority date: 2013-09-06
Filing date: 2014-09-05
Publication date: 2018-10-31
Also published as: EP3385257A1; US9776978B2; US20160194295A1; KR20160081898A; MX2016002971A; CA2922655A1; CU24345B1; TR201811077T4; EP3041828A4; PT3041828T; SI3041828T1; WO2015033301A1; SG11201601679TA; EP3041828A1; EA201600234A1; HRP20181251T1; CN105849092A; LT3041828T; IL244313A0; EP3041828B1

Description

Opis

[0001] Ova prijava je sa prvenstvom iz indijske privremene prijave broj 4012/CHE/2013, podnete 6 septembra 2013; koja je ovde uključena kao referenca.

OBLAST TEHNIKE

[0002] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja 1,3,4-oksadiazola i 1,3,4-tiadiazola koji su terapeutski korisni kao imunomodulatori. Pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske preparate koji sadrže navedena jedinjenja 1,3,4-oksadiazole i 1,3,4-tiadiazol kao terapeutska sredstva.

POZADINA PRONALASKA

[0003] Programirana ćelijska smrt-1 (PD-1) je član CD28 superfamilije koja emituje negativne signale u interakciji sa svoja dva liganda, PD-L1 ili PD-L2. PD-1 i njegovi ligandi su široko izraženi i imaju veći spektar imunoregulatornih uloga u aktivaciji i toleranciji T-ćelija u poređenju sa drugim članovima CD28. PD-1 i njegovi ligandi su uključeni u ublažavanje infektivne imunosti i imunosti tumora, i ublažavanje hronične infekcije i tumorske progresije. Biološki značaj PD-1 i njegovog liganda sugeriše terapeutski potencijal manipulacije PD-1 u borbi protiv različitih ljudskih bolesti (Ariel Pedoeem et al., Curr Top Microbiol Immunol., 2011: 350: 17-37).

[0004] T-ćelijska aktivacija i disfunkcija se oslanjaju na direktne i modulirane receptore. Na osnovu njihovog funkcionalnog ishoda, ko-signalni molekuli se mogu se podeliti kao ko-stimulatori i ko-inhibitori, koji pozitivno i negativno kontrolišu praćenje, rast, diferencijaciju i funkcionalno sazrevanje T-ćelijske reakcije (Li Shi, et al., Journal of Hematologi & Oncologi 2013, 6:74).

[0005] Terapeutska antitela koja blokiraju programirani imuno-kontrolni punkt ćelijske smrti protein-1 (PD-1) sprečavaju regulaciju T-ćelija i promovišu imunološke reakcije protiv raka. Nekoliko inhibitora putanje PD-1 je pokazalo snažnu aktivnost u različitim fazama kliničkih ispitivanja (RD Harvei, Klinička farmakologija i terapija (2014), 96 2, 214-223).

[0006] Programirana ćelijska smrt-1 (PD-1) je ko-receptor koji je pretežno izražen T-ćelijama. Vezivanje PD-1 na njegove ligande, PD-L1 ili PD-L2, od vitalnog je značaja za fiziološku regulaciju imunološkog sistema. Glavna funkcionalna uloga signalizacionog puta PD-1 je inhibicija samoreaktivnih T-ćelija, koje služe za zaštitu od autoimunih bolesti. Eliminacija PD-1 puta stoga može rezultirati razgradnjom imunološke tolerancije koja može na kraju dovesti do razvoja patogene autoimunosti. Nasuprot tome, tumorske ćelije mogu ponekad ko-optirati PD-1 put kako bi se izbegao mehanizam imunološkog nadzora. Zbog toga je blokada PD-1 puta postala atraktivna meta u terapiji karcinoma. Trenutni pristupi obuhvataju šest agenasa koji su ili PD-1 i PD-L1, ciljana neutralizirajuća antitela ili fuzione proteine. U toku je više od četrdeset kliničkih ispitivanja kako bi se bolje definisala uloga PD-1 blokade u raznim tipovima tumora. (Hiun-Tak Jin et al., Klinička imunologija (Amsterdam, Holandija) (2014), 153 (1), 145-152).

[0007] Međunarodne prijave VO 01/14557, VO 02/079499, VO 2002/086083, VO 03/042402, VO 2004/004771, VO 2004/056875, VO2006121168, VO2008156712, VO2010077634, VO2011066389, VO2014055897, VO2014059173, VO2014100079 i US patent US08735553 PD-1 ili PD-L1 inhibiciona antitela ili fuzioni proteini.

[0008] Nadalje, međunarodne prijave, VO2011161699, VO2012 / 168944, VO2013144704 i VO2013132317, priport peptidi ili peptidomimetička jedinjenja koja su sposobna da suzbijaju i/ili inhibiraju programirani put signalizacije ćelijske smrti 1 (PD1).

[0009] Pored toga, međunarodna prijava VO 2015/033299 otkriva derivate 1,2,4-oksadizola koji su imunomodulatori PD-1 punkta. Jedinjenja inhibiraju imunosupresivni signal indukovan zbog PD-1, PD-L1 ili PD-L2. Štaviše, Ardestani i sar. (Eksperimentalna parazitologija, 132: 116-122, 2012) pokazala je da u uslovima stresa vrste Leishmania mogu prikazati osobine karakteristične za programiranu ćelijsku smrt ili nekrozu sisara. Nitroheteroaril-1,3,4-tiadiazol je indukovana ćelijska smrt u Leishmania major.

[0010] Još uvek postoji potreba za snažnijim, boljim i/ili selektivnim imunološkim modulatorom PD-1 punkta. Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja 1,3,4-oksadiazola i 1,3,4-tiadiazola koji su sposobni za suzbijanje i/ili inhibiranje programiranog puta za signalizaciju ćelijske smrti 1 (PD1).

SUŠTINA PRONALASKA

[0011] Prema ovom pronalasku, prikazana su jedinjenja 1,3,4-oksadiazola i 1,3,4-tiadiazola ili farmaceutski prihvatljive soli ili njihovi stereoizomeri, koja su u stanju da suzbijaju i/ili inhibiraju programiranu ćeliju smrt 1 (PD1) signalni put.

[0012] U jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja 1,3,4-oksadiazola i 1,3,4-tiadiazola formule (I):

gde je,

R<1>bočni lanac amino kiseline izabrane od Ser, Thr, Phe, Ala ili Asn;

X S ili O;

R<2>vodonik ili -CO-Aaa;

Aaa je amino kiselinski ostatak izabran iz Ser, Asn ili Thr; pri čemu je njegov C-završetak slobodan završetak, amidiran ili esterifikovan;

R<3>je bočni lanac amino kiseline izabrane od Ser, Ala, Glu, Gln, Asn ili Asp;

---- je opciona veza;

R<4>i R<5>su nezavisno vodonik ili su odsutni;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njen stereoizomer.

[0013] Sledeći aspekt ovog pronalaska, se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) ili farmaceutski prihvatljivu so ili njen stereoizomer i postupke za njihovu pripremu.

[0014] U još jednom aspektu ovog pronalaska, se obezbeđuje upotreba 1,3,4-oksadiazola i 1,3,4-tiadiazolnih sastojaka formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli ili njenog stereoizomera, koji su sposobni za suzbijanje i/ili inhibiranje programiranog puta za signalizaciju ćelijske smrti 1 (PD1).

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0015] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja 1,3,4-oksadiazola i 1,3,4-tiadiazola kao terapeutska sredstva koja su korisna za lečenje poremećaja putem imunopotentacije koja sadrži inhibiciju imunosupresivnog signala indukovanog zbog PD-1, PD-L1 ili PD-L2 i terapije koje ih koriste.

[0016] Svako izvođenje je omogućeno putem objašnjenja pronalaska, a ne i ograničavanjem pronalaska. Na primer, funkcije koje su ilustrovane ili opisane kao deo jednog izvođenja mogu se koristiti u drugom izvođenju da bi se dobilo još kasnije izvođenje. Prema tome, predviđeno je da predmetni pronalazak pokriva takve modifikacije i varijacije koje spadaju u opseg priloženih zahteva. Ostali objekti, karakteristike i aspekti predmetnog pronalaska su otkriveni ili su očigledni kod sledećeg detaljnog opisa. U struci se mora razumeti da je predmet sadašnje diskusije samo opis primera izvođenja i da se ne sme tumaciti kao limitirajuci na šire aspekte sadašnjeg pronalaska.

[0017] U jednoj realizaciji, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I)

gde je,

R<1>bočni lanac amino kiseline izabrane od Ser, Thr, Phe, Ala ili Asn;

X S ili O;

R<2>vodonik ili -CO-Aaa;

R<3>bočni lanac amino kiseline izabrane od Ser, Ala, Glu, Gln, Asn ili Asp;

---- je opciona veza;

R<4>i R<5>su nezavisno vodonik ili su odsutni;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njen stereoizomer.

[0018] U još jednom izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (IA)

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov stereoizomer;

gde je,

R<1>bočni lanac amino kiseline izabrane od Ser, Thr, Phe, Ala ili Asn;

X S ili O;

R<2>vodonik ili -CO-Aaa;

R<3>bočni lanac amino kiseline izabrane od Ser, Ala, Glu, Gln, Asn ili Asp;

Aaa amino kiselinski ostatak izabran iz Ser, Asn ili Thr; gde je njegov C-završetak slobodan završetak, amidiran ili esterifikovan.

[0019] U još jednom daljem izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (IB)

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov stereoizomer;

gde je,

R<1>bočni lanac amino kiseline izabrane od Ser, Thr, Phe, Ala ili Asn;

R<3>bočni lanac amino kiseline izabrane od Ser, Ala, Glu, Gln, Asn ili Asp;

[0020] U još jednom daljem izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (IC)

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov stereoizomer;

gde je,

R<1>bočni lanac amino kiseline izabrane od Ser, Thr, Phe, Ala ili Asn;

R<3>bočni lanac amino kiseline izabrane od Ser, Ala, Glu, Gln, Asn ili Asp;

[0021] U još jednom daljem rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (I), gde je,

R<1>bočni lanac Ser ili Thr;

R<2>-CO-Aaa;

Aaa amino kiselinski ostatak Ser ili Thr; gde je C-završetak slobodan;

R<3>bočni lanac Asn, Gln, Glu ili Asp.

[0022] Izvođenje u daljem tekstu ilustrira predmetni pronalazak i nije namenjeno ograničavanju tvrdnji prema konkretnim izvođenjima.

[0023] Prema jednom izvođenju, specifično su obezbeđena jedinjenja formule (I) i (IA), u kojima X jeste O.

[0024] U skladu sa još jednim izvođenjem, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (I) i (IA) u kojima X jeste S.

[0025] Prema još jednom izvođenju, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (I) i (IA) u kojima je R2 vodonik.

[0026] U skladu sa još jednim izvođenjem, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (I) u kojima su R4 i R5 vodonik.

[0027] U skladu sa još jednim izvođenjem, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (I) u kojima su R4 i R5 odsutni.

[0028] Prema još jednom izvođenju, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (I) u kojima je R2 -CO-Ser.

[0029] Prema još jednom izvođenju, konkretno su obezbeđena jedinjenja formule (I) u kojima je R2 -CO-Thr.

[0030] Prema još jednom izvođenju, specifično su obezbeđena jedinjenja formule (I), (IA), (IB) i (IC) u kojima je R1 bočni lanac Ser.

[0031] U skladu sa još jednim izvođenjem, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (I), (IA), (IB) i (IC) u kojima je R1 bočni lanac Thr.

[0032] Prema još jednom izvođenju, specifično su obezbeđena jedinjenja formule (I), (IA) i (IC) u kojima je R1 bočni lanac Phe, Ala ili Asn.

[0033] U skladu sa još jednim izvođenjem, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (I), (IA), (IB) i (IC) u kojima je R3 bočni lanac Asn.

[0034] Prema još jednom izvođenju, specifično su obezbeđena jedinjenja formule (I), (IA) i (IB) u kojima je R3 bočni lanac Ser.

[0035] Prema još jednom izvođenju, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (I), (IA) i (IC) u kojima je R3 bočni lanac Gln.

[0036] Prema još jednom izvođenju, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (I), (IA) i (IC) u kojima je R3 bočni lanac Glu.

[0037] Prema još jednom izvođenju, specifično su obezbeđena jedinjenja formule (I), (IA) i (IC) u kojima je R3 bočni lanac Ala ili Asp.

[0038] Prema još jednom izvođenju, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (IB) i (IC) u kojima je Aaa Ser.

[0039] Prema još jednom izvođenju, specifično su obezbeđena jedinjenja formule (IC) u kojima je Aaa Thr.

[0040] Prema još jednom izvođenju, posebno su obezbeđena jedinjenja formule (I), (IA) i (IB) u kojima jedna, više ili sve amino kiselina/ne je/su D aminokiselina/ne.

[0041] U jednom izvođenju, specifična jedinjenja formule (I) su bez ikakvog ograničenja nabrojana u tabeli (1):

Tabela 1

[0042] Jedinjenja koja su prikazana u predmetnom pronalasku formulisana su za farmaceutsku primenu.

[0043] U jednom izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje kao što je opisano, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.

[0044] U drugom izvođenju, navedeni farmaceutski preparat dalje sadrži najmanje jedano antikancerozno sredstvo, agens za hemoterapiju ili antiproliferativnoo jedinjenje.

[0045] U jednom izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja su prikazana u ovom pronalasku za upotrebu kao lek.

[0046] U drugom izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja su prikazana u ovom pronalasku za upotrebu kao lek za lečenje kancera ili zaraznih bolesti.

[0047] U još jednom izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja su prikazana u ovom pronalasku za upotrebu kao lek za lečenje kancera kostiju, kancera glave ili vrata, kancera pankreasa, kancera kože, kožnog ili intraokularnog malignog melanoma, karcinoma materice, raka jajnika, rektalnog karcinoma, kancera analnog regiona, kancera želuca, karcinoma testisa, karcinoma materice, karcinoma jajovoda, karcinoma endometrija, karcinoma grlića materice, karcinoma vagine, karcinoma vulve, Hodgkinove bolesti -Hodgkinov limfom, kancera ezofagusa, kancera tkiva, kancera endokrinog sistema, kancera štitne žlezde, kancera paratiroidne žlezde, kancera nadbubrežne žlezde, sarkoma mekog tkiva, kancera uretre, raka penisa, hroničnih ili akutnih leukemija uključujući akutnu mieloidnu leukemiju, hroničnu mieloidnu leukemiju, akutnu limfoblastu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, čvrste tumore iz detinjstva, l karcinom bubrega, neoplazmu centralnog nervnog sistema (CNS), primarni CNS limfom, angiogenezu tumora, tumor kičmene moždine, glioma moždanog stabla, adenom glikogena, Kaposi's sarkoma, epidermoidnog karcinoma, raka skvamoznih ćelija, T-ćelijskog limfoma, ekološki izazvanih kancera uključujući i one indukovane azbestom, i kombinacije pomenutih karcinoma.

[0048] U još jednom izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja su prikazana u ovom pronalasku za upotrebu u lečenju kancera.

[0049] U još jednom izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja su prikazana u ovom pronalasku za upotrebu u lečenju zaraznih bolesti.

[0050] U jednom izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja su prikazana u ovom pronalasku za upotrebu kao lek za lečenje bakterijskog zaraznog oboljenja, virusne infektivne bolesti ili infektivne bolesti gljivica.

[0051] Takođe je obelodanjen postupak lečenja kancera, pri čemu postupak obuhvata davanje efikasne količine jedinjenja iz ovog pronalaska subjektu kome je potreban.

[0052] Takođe je obelodanjen postupak modulacije imunološkog odgovora posredovanog putem PD-1 signalnog puta u subjektu, koji obuhvata davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz ovog pronalaska tako da se imunološki odgovor u subjektu modulira.

[0053] Takođe je obelodanjen postupak inhibicije rasta tumorskih ćelija i/ili metastaza kod subjekta, koji obuhvata davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz ovog pronalaska sposobnog za inhibiranje programiranog puta za signalizaciju ćelijske smrti 1 (PD1).

[0054] Ove tumorske ćelije uključuju rak kao što su, ali bez ograničenja, kancer kostiju, kancer glave ili vrata, kancer pankreasa, kancer karcinoma kože, kožni ili intraokularni maligni melanom, karcinom materice, kancer jajnika, rak rektuma, kancer analnog regiona, rak želuca, rak testisa, karcinom materice, karcinom jajovodnih tubusa, karcinom endometrija, karcinom grlića materice, karcinom vagine, karcinom vulve, Hodgkinova bolest, ne-Hodgkinov limfom, kancer ezofagusa, kancer tankog creva, kancer endokrinog sistema, kancer štitne žlezde, kancer paratiroidne žlezde, kancer nadbubrežne žlezde, sarkom mekog tkiva, kancer uretre, kancer penisa, hronična ili akutna leukemija uključujući akutnu mieloidnu leukemiju, hroničnu mieloičnu leukemiju, akutnu limfoblastnu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, čvrste tumore detinjstva, limfocitne limfome, kancer bešike, kancer bubrega ili uretera, karcinom bubrežne karlice, neoplazma centralnog nervnog sistema (CNS), primarni CNS limfom, tumornu angiogeneza, tumor kičmene moždine, gliom mozga, adenom glikemije, Kaposiov sarkom, epidermoidni rak, kancer skvamoznih ćelija, limfom T-ćelija, rak ekološki izazvan uključujući i one izazvane azbestom, i kombinacije pomenutih karcinoma.

[0055] Takođe je otkriven postupak lečenja zarazne bolesti kod subjekta koji obuhvata davanje subjektu terapeutski efektivne količine jedinjenja iz ovog pronalaska koja može da se inhibira programiranom putnom signalizacijom ćelijske smrti 1 (PD1) tako da se subjekt tretira protiv zarazne bolesti.

[0056] Takođe je otkriven postupak lečenja bakterijskih, virusnih i gljivičnih infekcija kod subjekta koji obuhvata davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz ovog pronalaska sposobne da inhibira programirani put signalizacije ćelijske smrti 1 (PD1) tako da se subjekt protiv bakterijskih, virusnih i gljivičnih infekcija.

[0057] Infektivna bolest uključuje, ali nije ograničena na virus HIV, gripa, herpesa, gardije, malarije, Leishmania, patogene infekcije virusom Hepatitis (A, B, & C), virus herpesa (npr. VZV, HSV-I, HAV-6, HSV-II i CMV, Epstein Barr virus), adenovirus, virus gripa, flavivirus, ehovirus, rinovirus, koksaki virus, kornovirus, respiratorni sindikalni virus, virus mumpsa, rotavirus, virus malih boginja, virus rubeole, parvovirus, virus vakcine, HTLV virus, virus dengue, papiloma virus, molluscum virus, poliovirus, virus besnila, virus JC i arbovirusnog encefalitisa, patogena infekcija bakterijom hlamidija, mikobakterije, stafilokoke, streptokoke, pneumonokoke, meningokoke i konokoke, klebsiella, proteus, serratia, pseudomonas, E. coli, legionela, difterija, salmonela, bacili, kolera, tetanus, botulizam, antraks, kuga, leptospiroza i bakterije Lajmove bolesti, patogena infekcija gljivama Candida (albikans, krusei, glabrata, tropikalije i sl.), Criptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, itd.), Mucorale (mucor, absidia, rhizophus), Sporothrik schenkii, Blastomices dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis i Histoplasma capsulatum i patogena infekcija parazita Entamoeba histolitica, Baladidium coli, Naegleriafovleri, Acanthamoeba sp., Giardia lambia, Criptosporidium sp., Pneumocistis carinii, Plasmodium vivak, Babesia microti, Tripanosoma brucei, Tripanosoma cruzi, Leishmania donovani, Tokoplasma gondi, Nip - postrongilus brasiliensis.

[0058] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se koristiti kao pojedinačni lekovi ili kao farmaceutski preparati u kojima se jedinjenje pomeša sa različitim farmakološki prihvatljivim materijalima.

[0059] Farmaceutska kompozicija se obično primenjuje putem oralnih ili inhalacionih puteva, ali se može davati putem parenteralnog davanja. U praksi ovog pronalaska, kompozicije se mogu primenjivati, na primer, oralno, intravenoznom infuzijom, topično, intraperitonealno, intravesički ili intratekalno. Primeri parenteralne administracije obuhvataju ali nisu ograničeni na intraartikularne (u zglobovima), intravenozne, intramuskularne, intradermalne, intraperitonealne i subkutane puteve, uključuju vodene i ne-vodene, izotonične sterilne injekcije, koje mogu sadržati antioksidante, bakteriostatime i rastvorime koji čine formulaciju izotoničnom sa krvi nameravanog primaoca i vodenim i ne-vodenim sterilnim suspenzijama koje mogu uključivati sredstva za suspendovanje, solubilizatore, sredstva za zgušnjavanje, stabilizatore i konzervanse. Oralna primena, parenteralna primena, subkutana primena i intravenozna primena su poželjne metode primene.

[0060] Doziranje jedinjenja iz ovog pronalaska varira u zavisnosti od starosti, težine, simptoma, terapeutske efikasnosti, režima doziranja i/ili vremena tretmana. Generalno, ona se mogu davati oralno ili inhalacionim putem, u količini od 1 mg do 100 mg po jedinici vremena, jednom u par dana, jednom u 3 dana, jednom u 2 dana, jednom dnevno do par puta dnevno, u slučaju odrasle osobe, ili se neprekidno primenjuje putem oralnih ili inhalacionih ruta od 1 do 24 časova dnevno. Pošto na dozu utiču različiti uslovi, količina koja je manja od napred navedene doze ponekad može biti dovoljna, ili u nekim slučajevima može biti potrebna veća doza.

[0061] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se primenjivati u kombinaciji sa drugim lekovima za (1) komplementiranje i/ili poboljšanje preventivne i/ili terapeutske efikasnosti preventivnog i/ili terapijskog leka iz ovog pronalaska, (2) dinamika, poboljšanje apsorpcije, smanjenje doze preventivnog i/ili terapijskog leka iz ovog pronalaska i/ili (3) smanjenje neželjenih efekata preventivnog i/ili terapijskog leka iz ovog pronalaska.

[0062] Prateći lek koji sadrži jedinjenja iz ovog pronalaska i drugi lek mogu se davati kao kombinovani preparat u kome su obe komponente sadržane u jednoj formulaciji ili se primenjuju kao zasebne formulacije. Administracija pomoću odvojenih formulacija uključuje istovremenu primenu i administraciju u nekim vremenskim intervalima. U slučaju primene u nekim vremenskim intervalima, jedinjenje prema predmetnom pronalasku može prvo da se primeni, a zatim se daje drugi lek ili se drugi lek može prvo primeniti, a zatim se dati jedinjenje iz ovog pronalaska. Način administriranja odgovarajućih lekova može biti isti ili različit.

[0063] Doziranje drugog leka može se pravilno odrediti na osnovu doziranja koje je klinički korišćeno. Jedinjenje jedinjenja iz ovog pronalaska i drugog leka može se pravilno odrediti prema starosti i težini subjekta prema kome se primenjuje, metodu administracije, vremenu administracije, poremećaju koji treba tretirati, simptomima i njihovim kombinacijama. Na primer, drugi lek može biti korišćen u količini od 0.01 do 100 masenih delova, na bazi 1 dela po masi jedinjenja iz ovog pronalaska. Drugi lek može biti kombinacija dve ili više vrsta proizvoljnih lekova u odgovarajućoj proporciji. Drugi lek koji dopunjuje i/ili poboljšava preventivnu i/ili terapeutsku efikasnost jedinjenja iz ovog pronalaska uključuje ne samo one koji su već otkriveni, već oni koji će biti otkriveni u budućnosti, na osnovu navedenog mehanizma.

[0064] Bolesti na kojima ova istovremena upotreba vrši preventivni i/ili terapeutski efekat nisu posebno ograničene. Istovremeni lekovi mogu se koristiti za bilo koju bolest, sve dok to dopunjuje i/ili poboljšava preventivnu i/ili terapijsku efikasnost jedinjenja iz ovog pronalaska.

[0065] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se koristiti istovremeno sa postojećom hemoterapijom ili u obliku smeše. Primeri hemoterapeutike uključuju sredstvo alkilacije, sredstvo nitrozouree, antimetabolite, anti-kancer antibiotike, alkaloid biljnog porekla, inhibitor topoizomeraze, hormonski lek, hormonski antagonist, inhibitor aromataze, inhibitor P-glikoproteina, derivat platinskog kompleksa, druge imunoterapijske lekove i druge lekove protiv raka. Dalje, mogu se koristiti, istovremeno ili u obliku smeše, sa dodatkom za lečenje karcinoma, kao što je lek za lečenje leukopenija (neutropenija), trombocitopenijski lek za lečenje, antiemetičko lečenje i lek za lečenje bolova uzrokovanih kancerom.

[0066] U jednom izvođenju jedinjenje (nja) ovog pronalaska se može koristiti, istovremeno ili u obliku smeše, sa drugim imunomodulatorima i/ili potencirajućim agensom. Primeri imunomodulatora uključuju različite citokine, vakcine i adjuvante. Primeri ovih citokina, vakcina i adjuvansa koji stimulišu imunski odgovor uključuju, ali nisu ograničeni na GM-CSF, M-CSF, G-CSF, interferon-a, b ili g, IL-1, IL-2, IL- IL-12, Poli (I: C) i CpG.

[0067] U drugom izvođenju, potentujuća sredstva uključuju ciklofosfamid i analoge ciklofosfamida, anti-TGFa i Imatiniba (Gleevac), inhibitora mitoza, kao što su paklitaksel, Sunitinib (Sutent) ili drugi antiangiogeni agensi, inhibitor aromataze, kao što je letrozol, A2a antagonist A2a, inhibitor angiogeneze, antraciklin, oksaliplatin, doksorubicin, TLR4 antagonisti i IL-18 antagonisti.

[0068] Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni izrazi koji se ovde koriste imaju isto značenje kao što se uobičajno koriste u struci čijoj oblasti pripadaju. Kako se ovde koriste, prikazuju se sledeće definicije kako bi se olakšalo razumevanje ovog pronalaska.

[0069] Kako se ovde koristi, pojam 'jedinjenje (nja)' se odnosi na jedinjenja koja su prikazana u ovom pronalasku.

[0070] Kako se ovde koristi, termin "sadrži" se upopšteno koristi u smislu uključivanja, tj. dozvoljavajući prisustvo jedne ili više karakteristika ili komponenti.

[0071] Kako se ovde koristi, termin "uključujući" kao i druge forme, kao što su "uključi", "uključuje" i "uključen" nije ograničavajući.

[0072] Kako se ovde koristi, termin "amino" se odnosi na -NH<2>grupu. Ukoliko nisu izložene ili navedene suprotno, sve amino grupe koje su ovde opisane mogu biti supstituisane ili nesupstituirane.

[0073] Kako se ovde koristi, termin "aminokiselina" se odnosi na aminokiseline koji imaju L ili D stereohemiju na alfa ugljeniku.

[0074] "Farmaceutski prihvatljiva so" podrazumeva aktivni sastojak koji sadrži jedinjenje formule (I) u obliku jedne od njegovih soli, naročito ako ovaj oblik soli daje poboljšane farmakokinetičke karakteristike aktivnog sastojka u poređenju sa slobodnim oblikom aktivnog sastojka ili bilo kojim drugim oblikom soli aktivnog sastojka koji je prethodno korišćen. Oblik farmaceutski prihvatljive soli aktivnog sastojka, takođe, može prvi put da obezbedi ovaj aktivni sastojak sa željenim farmakokinetičkim svojstvima koje ranije nije imao i čak može imati pozitivan uticaj na farmakodinamiku ovog aktivnog sastojka s obzirom na njegovu terapeutsku efikasnost u telu.

[0075] "Farmaceutski prihvatljiv" označava ono što je korisno za pripremu farmaceutske kompozicije koja je uopšte sigurna, netoksična i nije ni biološki ni na neki drugi način nepoželjna i obuhvata ono što je prihvatljivo za veterinarsku i humanu farmaceutsku upotrebu.

[0076] Izraz "stereoizomer" se odnosi na bilo koji enantiomer, dijastereoizomer ili geometrijski izomer jedinjenja formule (I), gde god da su hiralna ili kada imaju jednu ili više dvostrukih veza. Kada su jedinjenja formule (I) i srodne formule hiralne, one mogu postojati u racemskom ili optički aktivnom obliku. Kako farmaceutska aktivnost racemata ili stereoizomera jedinjenja prema pronalasku može da se razlikuje, može biti poželjno korišćenje enantiomera. U ovim slučajevima krajnji proizvod ili čak i intermedijari mogu biti razdvojeni u enantiomerne sastojke hemijskim ili fizičkim merama koje su poznate naučniku ili su čak i sintezno upotrebljene. U slučaju racemnih amina, dijastereomeri se formiraju iz smeše reakcijom sa optički aktivnim rastvornim agensom. Primeri pogodnih rastvornih sredstava su optički aktivne kiseline kao što su R i S oblici vinske kiseline, diacetil tartarne kiseline, dibenzoildehidne kiseline, mandelne kiseline, jabučne kiseline, mlečne kiseline, pogodnih N-zaštićenih amino kiselina (na primer N-benzoilproline ili N- benzensulfonilproline) ili različite optički aktivne kamforsulfonske kiseline. Takođe je povoljna rezolucija hromatografskog enantiomera pomoću optički aktivnog rastvornog sredstva (na primer, dinitrobenzoilfenilglicina, celuloznog triacetata ili drugih derivata ugljenih hidrata ili hiralno derivatizovanih metakrilatnih polimera imobilisanih na silik gelu).

[0077] Termin "subjekt" obuhvata sisare (naročito ljude) i druge životinje, kao što su domaće životinje (npr. kućni ljubimci uključujući mačke i pse) i ne-domaće životinje (kao što je divlje životinje).

[0078] "Terapeutski efikasna količina" ili "efikasna količina" odnosi se na dovoljnu količinu jedinjenja iz ovog pronalaska da (i) tretira ili sprečava određenu bolest, poremećaj ili sindrom (ii) umanjuje, poboljšava ili eliminiše više simptoma određene bolesti, poremećaja ili sindroma ili (iii) sprečava ili odloži početak jednog ili više simptoma određene bolesti, poremećaja ili sindroma koji su ovde opisani. U slučaju kancera, terapeutski efikasna količina leka može smanjiti broj ćelija karcinoma; smanjiti veličinu kancera; inhibirati (tj., u određenoj meri sporo i alternativno zaustaviti) infiltracije ćelija karcinoma u periferne organe; suzbijati (tj. sporo do neke mere i alternativno zaustaviti) tumorske metastaze; u određenoj meri inhibirati rast tumora; i/ili u određenoj meri osloboditi jedan ili više simptoma povezanih sa rakom. U slučaju stanja zaraznih bolesti, terapeutska efikasna količina je količina koja je dovoljna da smanji ili ublaži zarazna bolest, simptomi infekcije uzrokovane bakterijama, virusima i gljivicama.

[0079] Prirodne aminokiseline su identifikovane u celini konvencionalnim skraćenicama sa tri slova koja su navedena u donjoj tabeli 2.

Tabela 2 (Skraćenice amino kiselina)

[0080] Skraćenice koje se koriste u celoj specifikaciji mogu se ovde rezimirati s njihovim posebnim značenjem.

[0081] °C (stepen Celzijusa),��(delta); % (procenat); rastvora soli (rastvor NaCl); CH<2>CI<2>/ DCM (dihlorometan); br s (širok "singlet"); Cs<2>CO<3>(cezijum karbonat); d (dublet); DMF (dimetil formamid); DMSO (dimetilsulfoksid); DMSO-d<6>(deuterirani DMSO); EDC.HCl/EDCI (1- (3-dimetil aminopropil) -3-karbodiimid hidrohlorid); Et<2>NH (dietilamin); Fmoc (fluorenilmetiloksikarbonil hlorid); g ili gr (gram); H ili H<2>(vodonik); H<2>O (voda); HOBt / HOBT (1-hidroksi benzotriazol); HCl (hlorovodonična kiselina); h ili hr (časovi); Hz (Hertz); HPLC (tečna hromatografija visokih performansi); I<2>(jod); K<2>CO<3>(kalijum karbonat); LCMS (masna spektroskopija tečne hromatografije); MeOH (metanol); mmol (milimol); M (molar); ml (mikrolitar); mL (mililitar); mg (miligram); m (višestruki); MHz (Megahertz); MS (ES) (masena spektroskopija-elektro sprej); min. (minut); Na (natrijum); NaHC0<3>(natrijum bikarbonat); NH<2>NH<2>H<2>O (hidrazin hidrat); NMM (N-metil morfolin); Na<2>S0<4>(natrijum sulfat); N<2>(azot); NMR (nuklearna magnetna rezonantna spektroskopija); PD-L1 (programirani smrtni ligand 1); PD-L2 (programirana ćelijska smrt 1 ligand 2); prep HPLC / preparativna HPLC (preparativna tečna hromatografija visokih performansi); S (Singlet); tBu (tercijarni butil); TEA / Et3N (trietil amin); TLC (tanka niska hromatografija; THF (tetrahidrofuran); TIPOVI (triizopropilisilan); TFA / CF<3>COOH (trifluorosirćetna kiselina); t (triplet); tR = (vreme zadržavanja); TE (trifenilfosfin); itd.

EKSPERIMENTALNI DEO

[0082] Izvođenje predmetnog pronalaska obezbeđuje pripremu jedinjenja formule (I) prema postupcima sledećih primera koristeći odgovarajuće materijale. Naučnici u tehnici će razumjeti da se za pripremu ovih sastojaka mogu koristiti poznate varijacije stanja i procesa sledećih preparativnih postupaka. Osim toga, korišćenjem detaljno opisanih postupaka, naučnici u stanju tehnike mogu da pripreme dodatna jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0083] Početni materijali su generalno dostupni iz komercijalnih izvora kao što su Sigma-Aldrich, SAD ili Nemačka; Chem-Impek USA; G. L. Biochem, Kina i Spectrochem, Indija.

Prečišćavanje i karakterizacija jedinjenja

[0084] Analitička HPLC metoda: Analitička HPLC je izvedena korišćenjem kolone ZIC HILIC 200 A ° (4,6 mm x 250 mm, 5 mm), protok: 1.0 ml / min. Uslovi korišćenja elucije su: pufer A: 5 mmol amonijum acetat, pufer B: acetonitril, ravnoteža kolone sa 90% pufera B i elucija sa gradijentom od 90% do 40% pufera B tokom 30 min.

[0085] Priprema HPLC metoda: preparativna HPLC je izvedena korišćenjem kolone SeKuant ZIC HILIC 200 A ° (10 mm 3x250 mm, 5 mm), protok: 5,0 ml / min. Uslovi korišćenja elucije su: pufer A: 5 mmol amonijum acetat (prilagođava se pH 4 sa sirćetnom kiselinom), pufer B: acetonitril, ravnoteža kolone sa 90% puferom B i eluiranje gradijentom od 90% do 40% puferom B tokom 20 min.

[0086] LCMS je izveden na API2000LC/MS/MS trostrukom kvadrant (primenjeni biosistemi) sa HPLC serijom Agilent 1100 sa G1315 B DAD, koristeći Mercuri MS kolonu ili pomoću Agilent LC/MSD VL jednostruki kvadrant sa HPLC serijom Agilent 1100 sa G1315 B DAD, koristeći Mercuri MS kolonu ili koristeći Shimadzu LCMS 2020 jednostruki kvadrant sa Prominence UFLC sistemom sa SPD-20 A DAD.

Primer 1: Sinteza jedinjenja 1

Korak 1a:

[0087]

[0088] U rastvor jedinjenja 1a (5,0 g, 19,13 mmol) u DMF (35 mL) dodat je kalijum karbonat (7,9 g, 57,39 mmol) i metil jodid (1,3 mL, 21,04 mmol) i mešano na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Kompletnost reakcije potvrđena je TLC analizom. Reakciona smeša je podeljena između vode i etil acetata. Organski sloj je ispran vodom, rastvorom soli, osušen preko Na<2>S0<4>i uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 5,0 g jedinjenja 1b (prinos: 96,1%). LCMS: 176,1 (M-Boc) .

Korak 1b:

[0089]

[0090] U rastvor jedinjenja 1b (5,0 g, 18,16 mmol) u metanolu (30 mL) doda se hidrazin hidrat (7,2 mL) i meša 2 h na sobnoj temperaturi. Kompletnost reakcije potvrđena je TLC analizom. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, dobijeni ostatak je podeljen između vode i etil acetata. Organski sloj je ispran vodom, rastvorom soli, osušen preko Na<2>S0<4>i uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 4.0 g jedinjenja 1c (prinos: 80.0%). LCMS: 276,3 (M H) .

Korak 1c:

[0091]

dodato u mešani rastvor 1c (1.2 g, 4.35 mmol), 1d (1.43 g, 4.35 mmol), HOBt (0.7 g, 5.22 mmol) i EDC.HCl (0.99 g, 5.22 mmol) u DMF (15 mL) na 0 ° C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 12 h. Kompletnost reakcije potvrđena je TLC analizom. Reakcija je ugašena ledom i čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakumom da bi se dobilo 2.0 g čistog proizvoda 1e (prinos: 83.3%). LCMS: 591,5 (M Na) .

Korak 1d:

[0093]

suvom THF

(15.0 mL) i DMF (5.0 mL) trifenilfosfina (1.38 g, 5.27 mmol) i joda (1.33 g, 5.27 mmol) su dodati na 0 ° C. Nakon što je jod potpuno potpuno rastvoren, u ovu reakcionu smešu je dodato Et<3>N (1.52 mL, 10.54 mmol) na ledenoj hladnoći. Reakciona smeša je ostavljena da dostigne sobnu temperaturu i mešana 4 h. Kompletnost reakcije potvrđena je TLC analizom. Reakcija je ugašena ledenom vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran zasićenim natrijum-tosulfatom i rastvorom soli. Odvojeni organski sloj je osušen iznad Na<2>S0<4>i uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je dalje prečišćen hromatografijom na koloni silik gela (prinos: 30% etil acetata u heksanu) da bi se dobilo 0.8 g jedinjenja If (prinos: 55%). LCMS: 551.3 (M H) .

Korak 1e:

[0095]

[0096] Fmoc

jedinjenja If (0.8 g, 1.45 mmol) u CH<2>CI<2>(20.0 mL) na 0 ° C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Dobijeni rastvor je koncentrovan u vakumu da bi se dobio debeo gumeni ostatak. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na neutralnoj aluminijumskoj koloni (prinos: 2% metanol u hloroformu) da bi se dobilo 0,38 g jedinjenja 1 g (prinos: 80,0%): LCMS: 329,4 (M H) .

Korak 1f:

[0097]

mL, 2,32 mmol) rastvoreno u DMF (10 mL) dodavano je rastvoru 1h (0,55 g, 1,39 mmol) na 0 ° C za formiranje veze ureje smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Kompletnost reakcije potvrđena je TLC analizom. Reakcija je ugašena ledenom vodom, čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakumom da bi se dobilo sirovo jedinjenje, koje je dalje prečišćeno hromatografijom na koloni silik gela (prinos: 0-35% etil acetat u heksanu) da bi se dobilo 0,4 g proizvoda 1i (prinos: 59,7%). LCMS: 586,4 (M H) .

Korak 1g:

[0099]

nja g, 0,68 mmol) u CH2CI2 (5 mL), dodati trifluorosirćetnu kiselinu (5 mL) i katalitičku količinu triizopropilsilana i mešati na sobnoj temperaturi 3 h da bi se uklonile zaštitne grupe osetljive na kiselinu. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod azotom i čvrsti materijal je prečišćen preparativnim HPLC metodom, kako je opisano pod eksperimentalnim uslovima (Prinos: 0,05 g). LCMS: 318,0 (M H) ; HPLC: tR = 10,96 min.

Sinteza jedinjenja 1h (NO<2>-C<6>H<4>-OCO-Thr (tBu) -OtBu):

[0101]

[0102] U rastvor 4-nitrofenilhloroformata (4.79 g, 23.77 mmol) u DCM (25.0 mL) se polako doda rastvor H-Thr (tBu) -OtBu (5.0 g, 21.61 mmol) TEA (6.2 mL, 43.22 mmol) u CH<2>CI<2>(25 mL) na 0 ° C i ostavi da se meša 30 minuta. Završetak reakcije potvrđen je TLC analizom. Posle završetka reakcije rastvor je razblažen sa DCM i ispran sa 1,0 M limunske kiseline praćenom 1,0 M rastvorom natrijum karbonata. Organski sloj je osušen iznad Na2S04 i uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo sirovo jedinjenje 1h, koje je dalje prečišćeno hromatografijom na koloni silik gela (protokt: 0-5% etil acetat u heksanu) da bi se dobilo 3,0 g proizvoda 1h. 1H NMR (CDC<13>, 400 MHz): 8,17 (s, 9H), 1,28 (d, 3H), 1,50 (s, 9H), 4,11 (m, 1H), 7,37 (d, 2H), 8,26 (d, 2H).

Primer 2: Sinteza jedinjenja 2

Korak 2a:

[0103]

[0104] NMM (1,8 mL, 18,15 mmol) je polako je dodat u mešani rastvor 1c (2,0 g, 7,26 mmol), 2d (4,3 g, 7,26 mmol), HOBt (1,17 g, 8,7 mmol) i EDC.HCl (1,66 g, 8,7 mmol) u DMF (15 mL) na 0 ° C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 12 h. Kompletnost reakcije potvrđena je TLC analizom. Reakcija je ugašena ledom, čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakumom, dajući 3.7 g čistog proizvoda 2e (prinos: 59.6%). LCMS: 854,4 (M H) .

Korak 2b:

[0105]

[0106] U mešani rastvor 2e (3.7 g, 4.33 mmol) rastvoren u suvom THF (25.0 mL) i DMF (10.0 mL) dodato je trifenilfosfin (2.28 g, 8.66 mmol) i jod (2.2 g, 8.66 mmol) 0 ° C. Nakon što je jod potpuno potpuno rastvoren, Et<3>N (2.5 mL, 17.32 mmol) je dodat na istoj temperaturi. Reakciona smeša je 4 h mešana na sobnoj temperaturi. Kompletnost reakcije potvrđena je TLC analizom. Reakcija je ugašena ledenom vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran zasićenim natrijum-tiosulfatom i rastvorom soli. Odvojeni organski sloj je osušen iznad Na<2>S0<4>i uparen pod sniženim pritiskom, koji je dalje prečišćen hromatografijom na koloni silik gela (protokt: 30% etil acetat u heksanu) da bi se dobilo 2,0 g jedinjenja 2f (prinos: 55%). LCMS: 858,4 (M Na) .

Korak 2c:

[0107]

[0108] Dietilamin (30.0 mL) je dodat u rastvor jedinjenja 2f (2.0 g, 1.17 mmol) u CH<2>CI<2>(30.0 mL) na 0 ° C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Dobijeni rastvor je koncentrovan u vakumu da bi se dobio debeo gumeni ostatak. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni glatkog aluminijuma (protok: 2% metanol u hloroformu) da bi se dobilo 1.0 g jedinjenja 2 g (prinos: 71.4%). LCMS: 614,5 (M H) .

Korak 2d:

[0109]

jedinjenje 2 g (1,0 g, 1,63 mmol) i TEA (0,47 mL, 3,2 mmol) je rastvoreno u DMF (10 mL) i dodato rastvoru 1h (0,7 g, 1,79 mmol) na 0 ° C. Reakciona smeša je zatim ostavljena da dostigne sobnu temperaturu uz nastavak mešanja tokom 2 h. Kompletnost reakcije potvrđena je TLC analizom. Reakcija je ugašena ledenom vodom, čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakumom. Dobijeno sirovo jedinjenje dodatno je prečišćeno hromatografijom na koloni silik gela (protok: 0-30% etil acetat u heksanu) da bi se dobilo 0,8 g proizvoda 2i (prinos: 57,1%). LCMS: 871,6 (M H) .

Korak 2e:

[0110]

[0111] Dodati rastvor jedinjenja 2i (0,8 g, 0,92 mmol) u CH<2>CI<2>(6 mL), trifluorosirćetne kiseline (6 mL) i katalitičke količine triizopropilsilana i mešati na sobnoj temperaturi 3 h. Dobijeni rastvor se koncentriše pod azotom i čvrsti materijal je prečišćen preparativnom metodom HPLC opisanom pod eksperimentalnim uslovima (prinos: 0,065 g).

HPLC: tR = 12,01 min .; LCMS: 361,34 (M H) .

Primer 3: Sinteza jedinjenja 3

Korak 3a:

[0112]

[0113] U rastvor jedinjenja 2e (4 g, 4.68 mmol) u THF (40 mL) dodat je Lavesonov reagens (2.85 g, 7.03 mmol) i mešan na 75 ° C tokom 4 h. Kompletnost reakcije potvrđena je TLC analizom. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je podeljen između ledene vode i etil acetata. Organski sloj je ispran sa rastvorom NaHC0<3>rastvorenog rastvora soli. Organski sloj je osušen iznad Na<2>S0<4>, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom kako bi se dobio ostatak koji je dalje prečišćen hromatografijom kolone silik gela (protok: 0-5% etil acetat u heksanu) da bi se dobilo 2.7 g jedinjenja 3a (prinos: 67,66%). LCMS: 852,3 (M H) .

Korak 3b:

[0114]

[0115] Fmoc grupa na jedinjenju 3a je uklonjena dodavanjem dietilamina (3.8 mL) u rastvor jedinjenja 3a (1 g, 1.17 mmol) u CH<2>CI<2>(3.8 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Dobijeni rastvor je koncentrovan u vakumu da bi se dobio debeo gumeni ostatak. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni glatkog aluminijuma (protok: 0-50% etil acetat u heksanu, zatim 0-5% metanola u hloroformu) da bi se postigao 0.62 g jedinjenja 3b. LCMS: 630,5 (M H) .

Korak 3c:

[0116]

[0117] U rastvor jedinjenja 3b (0,6 g) u CH<2>CI<2>(7,5 mL) se dodaju trifluorosirćetna kiselina (2,5 mL) i katalitička količina triizopropilsilana i mešaju se 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan u vakumu da bi se dobilo 0.13 g jedinjenja 3 koji je prečišćeno preparativnom metodom HPLC opisanom u eksperimentalnim uslovima. LCMS: 232,3 (M H) .

Primer 4: Sinteza jedinjenja 4

Korak 4a:

[0118]

[0119] Povezivanje uree vršeno je spajanjem jedinjenja 3b (0.5 g, 7.9 mmol) u THF (10 mL) na sobnoj temperaturi sa jedinjenjem 4e (0.34 g, 7.9 mmol). Spajanje je započeto dodavanjem TEA (0,16 g, 15,8 mmol) u THF (10 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 12 h, THF iz reakcione mase je uparen i podeljen između vode i etil acetata. Organski sloj je ispran vodom, rastvorom soli, osušen iznad Na<2>S0<4>i uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobila 4a, koja je dalje prečišćena hromatografijom kolone silik gela (protok: 0-50% etil acetat u heksanu) da bi se dobilo 0.45 g proizvoda 4a (prinos: 61,64%). LCMS: 921,8 (M H) .

Korak 4b:

[0120]

[0121] Rastvoru jedinjenja 4a (0.55 g) u metanolu (20 mL) je dodato 10% Pd-C (0.15 g) pod inertnom atmosferom. Smeša je mešana 1 sat u atmosferi H2. Završetak reakcije potvrđen je TLC analizom. Katalizator Pd-C je zatim uklonjen filtracijom kroz Celite® podlogu i ispran sa 20 mL metanola. Kombinovani organski filtrat na isparavanju pod sniženim pritiskom rezultirao je izolacijom proizvoda 4b (prinos: 0,42 g, 85,71%). LCMS: 831.5 (M H) .

Korak 4b:

[0122]

[0123] Dodati rastvor jedinjenja 4b (0.2 g, 0.3 mmol) u CH<2>CI<2>(5 mL), trifluoroocetne kiseline (5 mL) i katalitičke količine triizopropilsilana i mešati 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan u vakumu i čvrsti materijal je prečišćen preparativnom metodom HPLC opisanom pod eksperimentalnim uslovima (prinos: 0.065 g). HPLC: tR = 14,1 min .; LCMS: 377,3 (M H) .

Sinteza jedinjenja 4e, (NO<2>-C<6>H<4>-OCO-Thr (OtBu) -Bzl,):

[0124]

[0125] U rastvor jedinjenja Fmoc-Thr (tBu) -OH (15 g, 37.73 mmol) u 100 mL DMF dodat je Cs<2>CO<3>(14.75 g, 45.2 mmol) i mešavina za preopterećenje je ohlađena do 0 ° C. U ohlađenu reakcionu smešu dodat je benzil bromid (7,74 g, 45,2 mmol) i rastvor je mešan na ledenoj hladnoj temperaturi tokom 30 min, a zatim na sobnoj temperaturi 12 h. Reakciona smeša se koncentriše pod sniženim pritiskom i razblaži sa etil acetatom. Organski sloj je ispran vodom, zatim slanim rastvorom i osušen preko Na<2>S0<4>. Filtrirani rastvor se koncentriše i prečisti hromatografijom kolone silik gela (protok: 0-30% etil acetat u heksanu) da se dobije 18 g 4c bela čvrsta supstanca. LCMS: 433.1 (M-OtBu) , 397.2 (M-OBzl) .

[0126] Fmoc grupa na jedinjenju 4c (25 g, 51,3 mmol) je uklonjena dodavanjem dietilamina (100 mL) u jedinjenje 4d (25 g, 51,3 mmol) u CH<2>CI<2>(100 mL) tokom 1 h uz mešanje na sobnoj temperaturi. Nastali rastvor je koncentrovan u vakumu, a debeo ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni glatkog aluminijuma (protok: 0-50% etil acetat u heksanu, zatim 0-5% metanola u hloroformu), kako bi se dobilo 10.6 g jedinjenja 4d. LCMS: 266,5 (M H) .

[0127] U rastvor jedinjenja 4d (1,5 g, 5,65 mmol) u CH<2>CI<2>(25 mL) dodat je TEA (1,14 g, 11,3 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 5-10 min. U ovu smešu dodat je rastvor 4-nitrofenil hloroformata (1.4 g, 6.78 mmol) u CH<2>CI<2>(10 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 12 h. Završetak reakcije potvrđen je TLC analizom. Posle završetka reakcije rastvor je razblažen sa DCM i ispran sa 1,0 M rastvora natrijum bisulfata, praćen sa 1,0 M rastvora natrijum karbonata. Organski sloj je osušen iznad Na<2>S0<4,>filtriran i uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovo jedinjenje 4e, koji je dalje prečišćeno hromatografijom na koloni silik gela (protok: 0-20% etil acetat u heksanu), dajući 0,7 g proizvoda 4e. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz): 81,04 (s, 9H), 1,16 (d, 3H), 4,11 (m, IH), 5,11 (m, 3H) , 5H), 8,10 (d, 2H), 8,26 (br s, IH).

[0128] Jedinjenja iz donje tabele 3 su pripremljena na osnovu eksperimentalnih procedura opisanih gore.

Tabela 3

[0129] Jedinjenja prikazana u donjoj tabeli 4, koja se mogu pripremiti sličnim postupkom kao što je prethodno opisano sa odgovarajućom modifikacijom koja je poznata naučniku u struci, i koja su, takođe, obuhvaćena predmetom ove prijave.

Tabela 4

Spasavanje proliferacije splenocita miša u prisustvu rekombinantnog PD-L1 / PD-L2:

[0130] Kao izvor PD-L1 korišćeni su rekombinantni miš PD-L1 (rm-PDL-1, mačka br: 1019-B7-100 i R & D sistemi).

Zahtev:

[0131] Splenociti miševa prikupljani su od miševa C57 BL6 6-8 nedelja; RPMI 1640 (GIBCO, Cat # 11875); DMEM sa visokom glukozom (GIBCO, Cat # D6429); fetalni goveđi serum [Hiclone, Cat # SH30071.03]; Penicilin (10000unit/ml) -streptomicin (10,000mg/ml) likvid (GIBCO, Cat # 15140-122); MEM rastvor natrijum-piravata 100mM (100k), tečnost (GIBCO, Cat # 11360); nesencijalna amino kiselina (GIBCO, Cat # 11140); L-Glutamin (GIBCO, Cat # 25030); Anti-CD3 antitelo (eBiosciences - 16-0032); Anti-CD28 antitelo (eBiosciences - 16-0281); ACK lizi pufer (1mL) (GIBCO, Cat # -A10492); histopak (gustina-1,083 g/mL) (SIGMA 10831); tripan plavi rastvor (SIGMA-T8154); 2 ml špriceva Norm Ject Luer Lock- (Sigma 2014-12); 40 mM sita za najlonske ćelije (BD FALCON 35230); Hema- citometar (svetla linija-SIGMA Z359629); FACS Buffer (PBS / 0,1% BSA): pH 7,2 (HiMe-dia TS1006) sa fosfatnim pufranim salaminom (PBS) sa 0,1% bornog serumskog albumina (BSA) (SIGMA A7050) i natrijum acida (SIGMA 08591); 5 mM osnovnog rastvora CFSE: CFSE tzv. stock rastvor je pripremljen razređivanjem liofilizovanog CFSE sa 180 mL dimetil sulfoksida (DMSO C2H6SO, SIGMA-D-5879) i alokvotiran u cevi za dalju upotrebu. Radne koncentracije su tretirane sa 10 mM do 1 mM. (eBioscience-650850-85); 0,05% tripsina i 0,02% EDTA (SIGMA 59417C); 96 ELISA pločom (Corning CLS3390); BD FACS kalibara (E6016); rekombinantni miš B7-H1 / PDL1 Fc Chimera, (rm-PD-L1 cat broj: 1019-B7-100).

Protokol

Priprema i kultivisanje splenocita:

[0132] Splenociti koji su sakupljeni u epruveti od 50 ml mlevene slezine mišića u cevovodu ćelije 40 mm dalje su tretirani sa 1 mL ACK lizinskim puferom tokom 5 min na sobnoj temperaturi. Posle ispiranja sa 9 mL RPMI kompletnog medija, ćelije su ponovo suspendovane u 3 mL 1kPBS u 15 ml cevi.3 mL Histopakue je pažljivo dodato na dno cevi bez uznemiravanja sprečavanja suspenzije splenocita. Posle centrifugiranja na 800kg tokom 20 min na sobnoj temperaturi, neprozirni sloj splenocita je prikupljen pažljivo bez ometanja/mešanja slojeva. Splenociti su dva puta isprani hladnim 1kPBS, nakon čega je izvršeno ukupno brojanje ćelija korišćenjem Tripan Blue izlučivanja i te je korišćeno dalje za ćelijske testove.

Claims

[0133] Splenociti su kultivisani u RPMI kompletnim medijima (RPMI 10% fetalnog goveđeg seruma 1 mM natrijum piruvat 10.000 jedinjenja/ml penicilina i 10.000 mg/ml streptomicina) i održavaju se u CO<2>inkubatoru sa 5% CO<2>na 37 ° C . CFSE proliferacijski test: [0134] CFSE je boja koja se pasivno difundira u ćelije i veže za intracelularne proteine. 1k106 ćelija/mL sečenih splenocita tretirane su sa 5 mM CFSE u prethodno zagrejanom 1kPBS/0.1% BSA rastvoru tokom 10 min na 37 ° C. Prečišćeni CFSE je ugašen pomoću 5 zapremina medija za hladno đubrenje u ćelijama i inkubiran na ledu 5 minuta. CFSE označenim splenocitima su dali još tri ispiranja sa potpuno hladnim RPMI medijumom. CFSE je označio 1k105 splenocite koji su dodati u posude koje sadrže ili MDA-MB231 ćelije (1k105 ćelije kultivisane u DMEM medijumu sa visokim sadržajem glukoze) ili rekombinantne humane PDL-1 (100 ng/mL) i test jedinjenja. Splenociti su stimulisani anti-mišjim CD3 i anti-mišjim CD28 antitelom (1 mg/mL svaki), a kultura je dalje inkubirana 72 h na 37 ° C sa 5% CO<2>. Ćelije su sakupljene i isprane tri puta sa ledenim hladnim FACS puferom i % proliferacije je analiziran sa protočnom citometrijom sa 488 nm ekscitacije i 521 nm emisivnih filtera. Prikupljanje podataka, obrada i zaključivanje: [0135] Procenat proliferacije splenocita je analiziran pomoću FACS programa ćelijske pretrage i spasavanje proliferacije splenocita pomoću jedinjenja je procenjeno posle odbitka vrednosti % proliferacije pozadine i normalizacije na % stimulisane proliferacije splenocita (pozitivna kontrola) kao 100%. [0136] Stimulirani splenociti: Splenociti anti-CD3 / CD28 stimulacija [0137] Proliferacija pozadine: Splenociti anti-CD3 / CD28 PD-L1 [0138] Proliferacija jedinjenja: ispitan je efekat slenocita anti-CD3 / CD28 PD-L1 jedinjenja dodavanjem potrebne koncentracije jedinjenja u anti-CD3/CD28 stimulisane splenocite u prisustvu liganda (PDL-1). Tabela 5
Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I) gde, R<1>predstavlja bočni lanac amino kiseline izabrane iz Ser, Thr, Phe, Ala i Asn; X je S ili O; R<2>je vodonik ili -CO-Aaa; Aaa je amino kiselinski ostatak izabran iz Ser, Asn i Thr; pri čemu je njegov C-završetak slobodan završetak, amidiran ili esterifikovan; R<3>predstavlja bočni lanac amino kiseline izabrane iz Ser, Ala, Glu, Gin, Asn i Asp; ---- je slobodna veza; i R<4>i R<5>nezavisno su vodonik ili odsutni; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje ima strukturu formule (IA):
3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što X jeste S.
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što X jeste O.
5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što R<2>je vodonik.
6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje ima strukturu formule (IB):
7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje ima strukturu formule (IC):
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što R<2>je -CO-Aaa.
9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što je Aaa amino kiselinski ostatak izabran između Ser i Thr; gde je C-završetak slobodan završetak.
10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što R<1>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Ser ili Thr.
11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što R<3>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka odabranog od Glu, Gin, Asn i Asp.
12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što: R<1>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Ser i Thr; R<2>je -CO-Aaa; Aaa je amino kiselinski ostatak izabran između Ser i Thr; gde je C-završetak slobodan završetak; i R<3>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka odabranog od Glu, Gin, Asn i Asp.
13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što R<1>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Ser.
14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što R<1>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Thr.
15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što R<1>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Phe.
16. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što R<1>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Ala.
17. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što R<1>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Asn.
18. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što Aaa jeste Thr.
19. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što Aaa jeste Ser.
20. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što Aaa jeste Asn.
21. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što R<3>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Glu.
22. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što R<3>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Gin.
23. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što R<3>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Asn.
24. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što R<3>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Asp.
25. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što R<3>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Ser.
26. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što R<3>predstavlja bočni lanac amino kiselinskog ostatka Ala.
27. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
28. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
29. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
30. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
31. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
32. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
33. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
34. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
35. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
36. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
37. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
38. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
39. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
40. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
41. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
42. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
43. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
44. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
45. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
46. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
47. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
48. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
49. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
50. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
51. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
52. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
53. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
54. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
55. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima sledeću strukturu:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
56. Farmaceutska kompozicija koja sadrži najmanje jedno jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 55 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijent.
57. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 56, koja dalje uključuje lekove iz farmaceutskih preparata izabranih od antikancerogenog agensa, hemoterapijskog agensa i antiproliferativnog jedinjenja.
58. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 55 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u modulaciji imunološkog odgovora posredovanog signalizacijskim putem PD-1.
59. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva od od 1 do 55 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju kancera.
60. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 59, naznačeno time, što je kancer izabran od karcinoma kostiju, kancera glave ili vrata, kancera pankreasa, kancera kože, kožnog ili intraokularnog malignog melanoma, karcinoma endometrija, karcinoma grlića materice, karcinoma vagine, karcinoma vulve, Hodžkinove bolesti, ne-Hodžinovog limfoma, kancera ezofagusa, kancera tankog creva, kancera endokrinog sistema, kancera štitne žlezde, kancera paratiroidne žlezde, raka nadbubrežne žlezde, sarkoma mekog tkiva, kancera uretre, kancera penisa, hronične ili akutne leukemije, uključujući akutnu mieloidnu leukemiju, hroničnu mieloidnu leukemiju, akutnu limfoblastnu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, čvrste tumore iz detinjstva, limfocitni limfom, karcinom bešike, kanceara bubrega ili uretera, karcinoma renalne karlice, neoplazmu centralnog nervnog sistema (CNS), primarni CNS limfom, angiogenezu tumora, tumor kičmene moždine, gliom moždanog stabla, hipofizni adenom, Kapošijev sarkom, epidermoidni karcinom, kancer skvamoznih ćelija, limfom T-ćelija, karcinom indukovan okolinom uključujući i one indukovane azbestom, i kombinacija pomenutih karcinoma.
61. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 55 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju neke infektivnih boleste.
62. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 61, naznačeno time što je infektivna bolest bakterijska infektivna bolest, invektivna virusna bolest ili infektivna gljivična bolest.
63. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 62, gde su zarazne bolesti odabrane iz HIV-a, gripa, herpesa, gardije, malarije, Leishmania, patogene infekcije izazvane virusom hepatitisa (A, B, i C), herpes virusa (npr. VZV, HSV-I, HAV-6, HSV-II i CMV, Epstein Barr virus), adenovirusom, virusom gripa, flavivirusom, ehovirusom, rinovirusom, koksaki virusom, kornovirusom, respiratornim sincicijskim virusom, virusom mumpsa, rotavirusom, virusom malih boginja, virusom rubeole, parvo-virusom, vakcinija virusom, HTLV virusom, virusom tropske groznice, papiloma virusom, moluskum virusom, poliovirusom, virusom besnila, virusom JC virusa i arbovirusnim encefalitisom, patogene infekcije izazvane bakterijom klamidija, bakterijom rickettsia, mikobakterijom, stafilokokom, streptokokom, pneumonokokom, meningokokom i konokokom, bakterijama klebsiella, proteus, serratia, pseudomonas, E. coli, legionella, difterija, salmonela, bacili, kolera, tetanus, botulizam, antraks, kuga, leptospiroza i bakterijama Lajmove bolesti, patogene infekcije izazvane gljivicama Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, itd.), Criptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, itd.), Genus Mucorales (mucor, absidia, rhizophus), Sporthrik schenkii, Blastomices dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis i Histoplasma capsulatum i patogene infekcije izazvane parazitima Entamoeba histolitica, Balantidium coli, Naegleria fovleri, Acanthamoeba sp., Giardia lambia, Criptosporidium sp., Pneumocistis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Tripanosoma brucei, Tripanosoma cruzi, Leishmania donovani, Tokoplasma gondi , ili Nippostrongilus brasiliensis. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5