RS57588B1 - Supstanca za stabilizaciju bioloških materijala za suvo skladištenje - Google Patents

Supstanca za stabilizaciju bioloških materijala za suvo skladištenje

Info

Publication number
RS57588B1
RS57588B1 RS20180853A RSP20180853A RS57588B1 RS 57588 B1 RS57588 B1 RS 57588B1 RS 20180853 A RS20180853 A RS 20180853A RS P20180853 A RSP20180853 A RS P20180853A RS 57588 B1 RS57588 B1 RS 57588B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
acid
substance
protein
drying
dry
Prior art date
Application number
RS20180853A
Other languages
English (en)
Inventor
Moti Harel
Qiong Tang
Original Assignee
Advanced Bionutrition Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45564983&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS57588(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Advanced Bionutrition Corp filed Critical Advanced Bionutrition Corp
Publication of RS57588B1 publication Critical patent/RS57588B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVATION OF FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES
    • A23B2/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general
    • A23B2/90—Preservation of foods or foodstuffs, in general by drying or kilning; Subsequent reconstitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/10—Preservation of living parts
    • A01N1/12—Chemical aspects of preservation
    • A01N1/122—Preservation or perfusion media
    • A01N1/125—Freeze protecting agents, e.g. cryoprotectants or osmolarity regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/10—Preservation of living parts
    • A01N1/16—Physical preservation processes
    • A01N1/162—Temperature processes, e.g. following predefined temperature changes over time
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/10—Preservation of living parts
    • A01N1/16—Physical preservation processes
    • A01N1/165—Pressure processes, e.g. following predefined pressure changes over time
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVATION OF FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES
    • A23B2/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general
    • A23B2/70—Preservation of foods or foodstuffs, in general by treatment with chemicals
    • A23B2/725—Preservation of foods or foodstuffs, in general by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23B2/729—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVATION OF FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES
    • A23B2/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general
    • A23B2/90—Preservation of foods or foodstuffs, in general by drying or kilning; Subsequent reconstitution
    • A23B2/92—Freeze drying
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/30—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
    • A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K40/00—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs
    • A23K40/30—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs by encapsulating; by coating
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23P—SHAPING OR WORKING OF FOODSTUFFS, NOT FULLY COVERED BY A SINGLE OTHER SUBCLASS
    • A23P10/00—Shaping or working of foodstuffs characterised by the products
    • A23P10/30—Encapsulation of particles, e.g. foodstuff additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj je pronalazak u oblasti stabilizacije bioloških materijala u staklastoj suvoj strukturi.
OBLAST TEHNIKE
[0002] Konzervisanje strukture i funkcije bioloških materijala tokom dugotrajnog skladištenja na visokoj temperaturi i vlažnosti je od fundamentalnog značaja za prehrambenu, nutraceutsku i farmaceutsku industriju. Osetljivi biološki materijali, kao što su proteini, enzimi, ćelije, bakterije i virusi moraju često biti kontervisani za dugotrajno skladištenje za kasniju upotrebu. Jednostavno zamrzavanje se često radi kada je sušenje bilo štetno ili nepogodno za krajnji proizvod. Za konzervisanje u suvom stanju
- sušenje zamrzavanjem je tradicionalno najčešći način. Drugi postupci, kao što je sušenje okolnog vazduha, sušenje pod vakuumom na temperaturama okoline (sušenje u vakumu), ili sušenje dovođenjem u kontakt fine magle kapljica sa toplim vazduhom (sušenje raspršivanjem) i sušenje dehidriranjem generalno nisu pogodni za osetljive bioaktive kao što su žive ili osetljive bakterije i virusi. Visoke temperature sušenja se koriste u ovim postupcima i kao razultat daju značajno oštećenje samog bioaktiva.
[0003] EP 0259739 A1 opisuje postupak za konzervisanje bakterija mlečne kiseline zamrzavanjemsušenjem dodavanjem kriozaštitne supstance i pojačavača koji obuhvataju limunsku kiselinu u kombinaciji sa glukozom ili karbohidrat koji sadrži glukozu kao što je Maltrin M100 (videti XP055120984), što povećava održivost ćelije tokom skladištenja.
[0004] WO 01/36590 A1 opisuje postupak za sušenje bakterija u postupku iz 2 koraka koji obuhvata sušenje na povišenim temperaturama i posle toga sušenje u vakuumu u prisustvu zaštitnih agenasa kao što su karbohidrati.
[0005] US 3897307 A opisuje da kombinacija askorbata sa bilo glutamatom ili aspartatom ima korisno dejstvo na održivost bakterija mlečne kiseline za postupak dubokog zamrzavanja ili postupak sušenja raspršivanjem.
[0006] US 2010/120014 A1 opisuje postupak sušenja bioloških uzoraka iz dva koraka tokom kojih se postiže vitrifikacija. Prvi korak obuhvata npr. sušenje zamrzavanjem ili PBV, drugi korak obuhvata sušenje na povišenim temperaturama.
[0007] WO 2008/076975 A1 opisuje kombinaciju od 10-60% šećera, 2-2 ß% proteina ili njegovog hidrolizata i 0,5-5% polisaharida za konzervisanje probiotskih bakterija tokom npr. zamrzavanja sušenjem.
[0008] Često postupak sušenja zamrzavanjem može kao rezultat da ima značajan gubitak aktivnosti i oštećenje za bioaktivni materijal usled formiranja ledenog kristala tokom procesa sporog sušenja. Zamrzavanje sušenjem kombinuje stresove usled i zamrzavanja i sušenja. Korak zamrzavanja ovog postupka može imati neželjena dejstva, kao što je denaturacija proteina i enzima, i probijanje ćelija. Oštećenje prouzrokovano zamrzavanjem može da bude izbegnuto, u izvesnoj meri, dodavanjem kriozaštitnih jedinjenja u rastvor. Takvi zaštitni agensi su generalno visoko rastvorljive hemikalije koje se dodaju u formulaciju da bi zaštitili membrane ćelija i proteina tokom zamrzavanja i povećale stabilnost tokom skladištenja. Uobičajeni stabilizatori obuhvataju šećere kao što je saharoza, trehaloza, glicerol, ili sorbitol, u visokim koncentracijama (Morgan et al., 2006; Capela et al., 2006). Disaharidi, kao što je saharoza i trehaloza, su prirodni krioprotektani sa dobrim zaštitnim svojstvima. Trehaloza je posebno privlačan krioprotektant jer je zapravo izolovana iz biljaka i živih organizama koji ostaju u stanju snižene (suspendovane) animacije tokom perioda suše. Trehaloza se pokazala kao delotvorni konzervans (protektant) za raznovrsne biološke materijale, (videti Crowe, J. H., Crowe., L. M., and Mouriadian, R., Cryobiology, 20, 346-356 (1983). Nekoliko patenata opisuje upotrebu trehaloze ili trehaloze u kombinaciji sa drugim krioprotektantima za zaštitu proteina i drugih biološkim makromolekula, kao što su enzimi, serum, komplement seruma, antitela, antigeni, fluorescentni proteini i komponente vakcine tokom zamrzavanja, sušenja i rehidracije (nekoliko primera su američki patenti: U.S. Pat. br.5,556,771; U.S. Pat. br.5,512,547 i U.S. Pat. br.4,891,319).
[0009] Međutim, postoje neki nedostaci povezani sa upotrebom trehaloze ili drugih disaharida ili monosaharida kao jedinog krioprotektanta. Trehaloza možda ne prodire odgovarajuće u ćeliju da bi štitila aktivne komponente unutar unutarćelijskog volumena, što može da dovede do nestabilnosti posle skladištenja supstanci koje su duboko zamrznute. Pored toga, koncentracije trehaloze su veće od 60% težine datog konzervansnog sredstva su ponekad neopodne. Još ozbiljniji problem povezan sa upotrebom trehaloze je da biološki materijali sačuvani tokom same trehaloze nisu stabilni za skladištenje tokom dužih perioda vremena, posebno oni koji su skladišteni na visokim temperaturama i/ili u vlažnim okruženjima. Samim tim, ostaje značajan izazov da se razvije optimalna formulacija i proces sušenja koji svodi na minimum gubitke tokom dostizanja odgovarajuće stabilnosti skladištenja osušenog materijala.
[0010] Razrešeni su neka sporna pitanja povezana sa trehalozom i procesom sušenja zamrzavanjem korišćenjem kombinacije izvesnih formulacija i vakuumskog sušenja u staklastom stanju, posebno šećernih staklastih formulacija (US. Pat.6.190.701). U tim formulacijama, bioaktivni materijal se štiti unutar staklene matrice od neprijateljskih okruženja kao što je visoka temperatura i vlažnost. U ovim slučajevima, prisustvo vode kao vlage u okruženju deluje kao agens plastifikacije i ima dejstvo spuštanja temperature (T g) staklastog prelaza staklaste matrice. Pri višim sadržajima vode, Tg je značajno spušten do nivoa da je suva formulacija u neželjenom gumenom ili plastičnom stanju na sobnoj temperaturi.
[0011] Prednosti zadržavanja staklastog oblika formulacije je povećana fizička stabilnost čvrste supstance i smanjenje štetnih intermolekularnih reakcija. Detaljno razmatranje fizičke hemije interakcija vodeno-prehrambenih polimera kao što referensiranje na staklasto stanje i njihove tranzicione temperature može da bude pronađeno u (M. Le Meste, D. Champion, G. Roudaut, G. Blond and D. Simatos, " Glass Transition and Food Technology: A Critical Appraisal ".2002. Journal of Food Science 67:2444-2458), koje su ovde ugrađene u vidu reference. Međutim, ograničenja amorfnih sistema kao što je fizička nestabilnost i viša hemijska reaktivnost, deluju kao prepreka za njihovu komerzijalizaciju za široku upotrebu.
[0012] Dakle, postoji potreba za stabilizovanjem supstance čiji opseg korisnosti obuhvata veliki broj biološkh materijala. Postoji i potreba za stabilizovanjem supstance koja može efikasno da se koristi i za postupke zamrzavanja i procese sušenja koji obuhvataju sušenje na temperaturi okoline.
Takođe postoji potreba za mešavinom supstance koja je jeftinija od one koja se za sada koristi.
Najzad, veoma važno, postoji potreba za mešavinom supstance koja obezbeđuje stabilnu podlogu za konzervisanje bioloških materijala u dužim vremenskim periodima na povišenim temperaturama i različitim stepenima vlažnosti, koji mogu biti prisutni tokom transportovanja i skladištenja materijala, a da se i dalje zadrži značajna količina posle rehidracije.
[0013] Sve ove potrebe su ispunjene postupcima sušenja i daju kao rezultat konzervisane supstance biološkog materijala iz ovog pronalaska.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0014] Ovaj pronalazak obuhvata supstance prema priloženim patentnim zahtevima i postupke sušenja prema patentnim zahtevima 7-10 za konzervisanje osetljivih bioaktivnih materijala, kao što su peptidi, proteini, hormoni, nukleinske kiseline, antitela, lekovi vakcine, kvasac, bakterije (probiotici ili drugo), virusi i/ili suspenzije ćelija, na skladištu. Supstanca iz ovog pronalaska prema priloženim patentnim zahtevima obuhvata mešavinu karbohidrata di-oligo i polisaharida i jona organske kiseline poželjno limunske kiseline ili askorbinske kiseline. Formulacija se dobija raspršivanjem svih čvrstih supstanci u rastvoru. Rastvor je brzo zamrznut pomoću u ovoj oblasti tehnike poznatog sličnog tečnog azota ili suvog leda da bi se formirale perlice, niske ili kapljice. Zamrznute perlice je moguće skladištiti u dubokom zamrzivaču (između -30°C i -80°C) za kasniju upotrebu u smrznutom stanju ili postaviti na tacne u zamrznutom stanju za sušenje u uobičajenom sušaču zamrzivaču. Poželjni postupak sušenja prema patentnim zahtevima 7 - 10 se opciono pokreće korakom kratkog ispiranja i stabilizacije strukture zamrznutih čestica pod vakuumskim pritiskom ili manjim od <2000 mTORR posle čega je usledio primarni korak sušenja pod vakuumskim pritiskom od više od >2000 mTORR i na željenoj temperaturi. Tokom sekundarnog i finalnog koraka sušenja materijal punog vakuumskog pritiska na povišenoj temperaturi se primenjuje, da bi se postigla željena aktivnost vode tog suvog materijala.
[0015] U jednom specifičnom izvođenju, biološki materijal obuhvata žive bakterije (npr., probiotske bakterije). Primeri pogodnih mikroorganizama obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, kvasce kao što su Saccharomyces, Debaromyces, Candida, Pichia i Torulopsis, plesni kao što je Aspergillus,Rhizopus,Mucor, Penicillium i Torulopsis i bakterije kao što su one iz vrste Bifidobacterium, Clostridium, Fusobacterium, Melissococcus, Propionibacterium, Streptococcus, Enterococcus, Lactococcus, Kocuriaw, Staphylococcus, Peptostrepococcus, Bacillus, Pediococcus, Micrococcus, Leuconostoc, Weissella, Aerococcus, Oenococcus i Lactobacillus. Specifični primeri pogodnih probiotskih organizama bi bili predstavljeni sledećim vrstama i obuhvataju sve biotipove kulture unutar tih vrsta: Aspergillus niger, A. oryzae, Bacillus coagulans, B. lentus, B. licheniformis, B. mesentericus, B. pumilus, B. subtilis, B. natto, Bacteroides amylophilus, Bac. capillosus, Bac. ruminocola, Bac. suis, Bifidobacterium adolescentis, B. animalis, B. breve, B. bifidum, B. infantis, B. lactis, B. longum, B. pseudolongum, B. thermophilum, Candida pintolepesii, Clostridium butyricum, Enterococcus cremoris, E. diacetylactis, E faecium, E. intermedius, E. lactis, E. muntdi, E. thermophilus, Escherichia coli, Kluyveromyces fragilis, Lactobacillus acidophilus, L. alimentarius, L. amylovorus, L. crispatus, L. brevis, L. case 4 L. curvatus, L. cellobiosus, L. delbrueckii ss. bulgaricus, L farciminis,L. fermentum, L. gasseri, L. helveticus, L. lactis, L. plantarum, L. johnsonii, L. reuteri, L. rhamnosus, L. sakei, L. salivarius, Leuconostoc mesenteroides, P. cereviseae (damnosus), Pediococcus acidilactici, P. pentosaceus, Propionibacterium freudenreichii, Prop. shermanii, Saccharomyces cereviseae, Staphylococcus carnosus, Staph. xylosus, Streptococcus infantarius, Strep. salivarius ss. thermophilus, Strep. Thermophilus i Strep. lactis. Formulacija obuhvata mešavinu karbohidrata di-oligo i polisaharida, u koje je umetnut bioaktivni materijal. Primeri pogodnih polisaharida su ftalat acetata celuloze (CAP), karboksi-metil-celuloza, pektin, natrijum alginat, soli algininske kiseline, hidroksil propil metil celuloza (HPMC), metil celuloza, karagenan, želatin guma, guar guma, arapska guma, ksantan gume, karuba guma, hitozan i derivati hitozana, kolagen, poliglikolna kiselina, skrobovi i modifikovani skrobovi. Primeri pogodnih oligosaharida su ciklodekstrin, insulin, FOS, maltodekstrin, dekstran, itd.; i njihove kombinacije. Primeri pogodnih disaharida, ali bez ograničenja na, su laktoza, trehaloza, saharoza, itd.). U jednom specifičnom izvođenju, preporučeni polisaharid je natrijum alginat ili gelan guma. Poželjno, mešavina karbohidrata obuhvata, u procentima težinski od ukupne suve materije, 0,1-10% polisaharida, 1-10% oligosaharida i 10-90% disaharida. U dodatnom izvođenju, mešavina karbohidrata obuhvata di-oligo i polisaharide u težinskom odnosu od 10:0,5-1:0,1-0,5. U još jednom izvođenju ovog pronalaska, polisaharidi u mešavini karbohidrata je unakrsno spojen sa dvovalentim jonima metala da bi se formirao čvrst hidrogel. Ova supstanca obuhvata značajne količine jedinjenja koja pospešuju staklastost uključujući soli organskih kiselina, mlečne kiseline, askorbinske kiseline, maleinske kiseline, oksalne kisleine, malonske kiseline, jabučne kiseline, sukcinske kiseline, limunske kiseline, glukonske kiseline i glutaminske kiseline. Soli mogu da obuhvate katjone kao što je natrijum, kalijum, kalcijum, magnezijum, i slično. Primeri obuhvataju natrijum citrat, natrijum laktat, natrijum maleat, magnezijum glukonat, natrijum askorbat, i slične. Soli koje imaju temperaturu (T g) staklastog prelaza i preporučuje se visoka rastvorljivost. Najpreporučenija organska kiselina je limunska kiselina i njene soli (npr., natrijum ili kalijum citrat, trinatrijum citrat dehidrat) i askorbinska kiselina i njene soli (npr., natrijum askorbat, kalijum askorbat, magnezijum askorbat). Preporučena ukupna količina jona citrata ili jona askorbata je u suvoj supstanci takva da molarni odnos jona prema molima jedinjenja karbohidrata jeste od oko 0,01 do oko 0,3 i najpreporučljivije od oko 0,1 do oko 0,2.
[0016] Drugi korisni pospešivači staklastosti obuhvataju proteine, hidrolizate proteina, polipeptide i amino kiseline. Ovi obuhvataju želatin, albumin, protein surtke, protein soje, kazein, kazeinat, imunoglobulini, protein soje, protein graška, protein semena pamuka ili druge prehrambene i mlečne ili biljne proteine i/ili njihove hidrolizate. Primeri poliamino kiselina obuhvataju polialanin, poliarganin, poliglicin, poliglutaminsku kisleinu i slično. Korisne amino kiseline obuhvataju lizin, glicin, alanin, arginin ili histidin, kao i hidrofobne amino kiseline (triptofan, tirozin, lecin, fenilalanin, itd.) i metilalamin kao što je betain. Preporučena ukupna količina proteina, hidrolizata proteina i amino kiselina u suvoj supstanci je od oko 1% do oko 30% ukupna masa mešavine karbohidrata i još poželjnije od oko 5% do oko 20% mase karbohidrata. Idealno, jedinjenja koja su GRAS jedinjenja su poželjnija od onih koja nisu GRAS.
[0017] Treba napomenuti da propisna količina pospešivača staklastosti u supstanci može zavisiti od željenih karakteristika suve supstance. Određivanje propisne količine pospešivača staklastosti treba da bude napravljeno u skladu sa željenim uslovima skladištenja. Na primer, supstanca koja sadrži mešavinu karbohidrata i protein ili hidrolizati proteina mogu biti korišćeni da pospeše hemijsku stabilnost bioloških materijala prilikom skladištenja pod srednjom temperaturom i relativnom vlažnošću, kao što je 25°C i 25% RH. Joni citrata mogu biti poželjni da sadrže pospešivač staklastosti da bi se dobila dodatna korist stabilizovanja na visokoj temperaturi i izloženost vazduhu. Altrenativno, može biti slučaj da kombinacija jona citrata i/ili jona askorbata sa još jednim pospešivačem staklastosti, kao što je protein ili hidrolizat proteina, je poželjnije da obuhvata tu supstancu.
[0018] Poželjni postupak mešanja biološkog materijala i supstance je dodavanjem ukupne suve mešavine supstance u koncentrovanu podlogu ili rastvor podloge sa biološkim materijalom. Masa težine biološkog materijala u hranljivoj podlozi je obično između oko 5% i 30% w/v, i još poželjnije između oko 10% i 20% w/v. dodate težinske mase mešavine supstance u hranljivoj podlozi je obično između oko 10% i oko 60%, i još poželjno između oko 20% i 40%. Krajnji sadržaj čvrste supstance u mešovitoj emulziji je od oko 20% do oko 60% i još specifičnije od oko 30% do oko 50%. Poželjno, rastvor je pomešan na sobnoj temperaturi ili blago zagrejan da bi se pomoglo rastvaranje materijala u viskoznom rastvoru (npr., od 20°C do 40°C). U varijantnom rešenju iz ovog pronalaska, ukupna količina mešavine karbohidrata u formulaciji se podešava da bi se postigla željena viskoznost formulacije i gustina kojoj je dozvoljeno efikasno sušenje uz izbegavanje gumenastog formiranja ili prekomernog penušanja koje može nastati tokom koraka sušenja. Poželjna viskoznost emulzije je od oko 1.000 cP do oko 500.000 cP, i još poželjniji opseg je od oko 10.000 cP do oko 300.000 cP. Željena viskoznost i gustina finalne emulzije može biti postignuta bilo kojim sredstvom poznatim u ovoj oblasti, na primer, blagim podešavanjem količine polisaharida u mešavini karbohidrata ili degaziranjem ili ubrizgavanjem gasa kao što je vazduh, azot, ugljen dioksid, argon itd.
[0019] Emulzija biološkog materijala iz ovog pronalaska je obično brzo smrznuta na oko -30°C do -180°C, još poželjnije, formulacija je trenutno smrznuta u tečnom azotu atomizovanjem, uranjanjem ili ubrizgavanjem u kupku tečnog azota. Prikupljanje čestica, perlica, niski ili kapljica iz kupke tečnog azota i sušenje u sušaču zamrzivaču ili vakuumskom sušaču, ili alternativno njihovo skladištenje u dubokom zamrzivaču (između -30°C i -80°C) za kasniju upotrebu u zamrznutom obliku ili do sušenja. Generalno, tehnike procesa sušenja koje su korisne obuhvataju sušenje raspršivanjem; liofilizaciju posle koje sledi mlevenje da se mikronizuje prah; atomizaciju na hladnoj površini, posle čega sledi podograničavanje i prikupljanje mikronizovanog praha; sušenje isparavanjem nezamrznutog rastvora u vakuumskoj peći ili centrifugalnom isparivaču na temperaturama iznad temperature zamrzavanja emulzije (-20 do 50° C.), posle čega sledi mlevenje do željene veličine čestica. Čestice praha dobijene kao rezultat su staklaste ili kristalne unutra sa većim delom obloge od staklastog materijala na površini. Prednosti obloge biološkog materijala sa staklastim materijalima je da se poveća fizička stabilnost proizvoda i smanje štetne međumolekularne reakcije sa tom česticom. U poželjnom izvođenju, zamrznute čestice su raspoređene na tacne i odmah prenete u komoru za vakuumsko sušenje gde se postupak sušenja odvija u tri glavna koraka; 1. Opciono, kratkotrajno prečišćavanje i struktura stabilizujućeg koraka staklenih čestica pod vakuumskim pritiskom manjim od <2000 mTORR, 2. Primarni korak sušenja pod vakuumskim pritiskom višim od >2000 mTORR i na temperaturi iznad tačke zamrzavanja te emulzije, 3. Sekundarni i finalni korak sušenja staklastog amorfnog materijala pod potpunim vakuumskim pritiskom i na povišenoj temperaturi tokom perioda dovoljnog da se smanji aktivnost vode osušene formulacije do 0,3 Aw ili manje.
[0020] Osušena i stabilna biološka supstanca može da bude korišćena direktno kao pahuljica, ili samlevena u prah i prosejana do srednje veličine čestica od oko 10 µm do oko 1.000 µm. Ova formulacija može direktno da bude isporučena životinji, uključujući čoveka kao koncentrovan prah, kao rekonstituisana tečnost, (npr., napitak), ili može biti ugrađena u pahuljicu ili prah u postojećem prehrambenom proizvodu ili proizvodu koji se koristi kao hrana za životinje.
DEFINICIJE
[0021] Kako se koristi u ovom spisu i priloženim patentnim zahtevima, oblici jednice ("a", "an") i ("the") obuhvataju odgovarajuću množinu osim ako nije jasno impliciran drugačiji smisao. Zato, na primer, upućivanje na ''protein'' obuhvata pojedinačni protein ili kombinaciju dva ili više proteina; upućivanje na "enzim", "bakteriju", itd., obuhvata pojedinačne oblike ili mešavine više tipova, i slično.
[0022] Prilikom opisivanja i formulisanja obima zaštite za ovaj pronalazak, biće korišćena sledeća terminologija u skladu sa dole iznetim definicijama.
[0023] "Biološki materijal", "biološka supstanca", ili "bioaktivna formulacija" se odnosi na preparate, koji su u takvom obliku da dozvoljavaju da biološka aktivnost bioaktivnih sastojaka bude nedvosmisleno učinkovita.
[0024] "Pospešivač staklastosti" je hemijsko jedinjenje sa mogućnošću da se formira amorfna ili staklasta struktura ispod kritične temperature, temperatura staklastog prelaza (Tg). Ako je staklasti pospešivač osušen ispod svog Tg, glazura (staklasta struktura) će se formirati. Međutim, ako je staklasti pospešivač osušen iznad svog Tg, onda se glazura ne formira. Tokom formiranja staklaste strukture, biološka supstanca može postati umetnuta unutar staklaste strukture. Pospešivači staklastosti za upotrebu sa ovim pronalaskom obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, soli, organske kiseline kao što je mlečna kiselina, askorbinska kiselina, maleinska kiselina, oksalna kiselina, malonska kiselina, jabučna kiselina, sukcinska kiselina, limunska kiselina, glukonska kiselina, glutaminska kiselina i slične. Soli mogu da obuhvate katjone kao što je natrijum, kalijum, kalcijum, magnezijum, fosfat i slične. Drugi korisni pospešivači staklastosti obuhvatraju proteine, hidrolizate proteina, polipeptide i amino kiseline. Kombinacija agenasa koji formiraju staklost (glazuru) se takođe razmatra unutar jedne supstance. Postupak korišćen da bi se dobila staklasta struktura u svrhe ovog pronalaska je generalno sublimacija rastvarača i/ili tehnike isparavanja. Idealno, jedinjenja koja su GRAS jedinjenjima su poželjnija od onih koja nisu GRAS.
[0025] "Karbohidrati" ili "polihidroksi jedinjenje" se odnosi na saharide koji su pretežno sačinjeni od ugljenika, vodonika, i kiseonika. Saharid je obično sastavljen od šećerne okosnice sa ponavljajućim strukturnim jedinicama povezanim na linearan ili ne-linearan način, od kojih su neke pozitivno ili negativno naelektrisane hemijske grupe. Ponavljajuće jedinice mogu da budu u opsegu od dva do nekoliko miliona. Korisni saharidi obuhvataju redukujuće i neredukujuće šećere, i šećerne alkohole, disaharide, oligosaharide, polisaharide rastvorljive u vodi i njihove derivate. Dva monosaharida povezana zajedno formiraju disaharid. Dva monosaharida korišćena da formiraju disaharid mogu da budu ista ili različita. Primeri disaharida koje je moguće koristiti u mešavini karbohidrata iz ovog pronalaska, obuhvataju, saharozu, trehalozu, laktozu, maltozu, izomaltozu. Sulfatni disaharidi mogu, takođe, biti korišćeni. Mali broj monosaharida povezanih zajedno (obično od tri do deset) formira oligosaharid.
Monosaharidi korišćeni da formiraju oligosaharid mogu da budu iste ili drugačije komponente šećera. Primeri oligosaharida pogodnih za upotrebu obuhvataju, inulin, maltodekstrine, dekstrane, fruktooligosaharide (FOS), galaktro-oligosaharude (GOS), manan-oligosaharide (MOS) i njihove kombinacije. Veliki broj monosaharida povezanih zajedno (obično više od deset) formira polisaharid. Monosaharidi korišćeni da formiraju polisaharid mogu da budu iste ili drugačije komponente šećera. Primeri polisaharida pogodnih za upotrebu obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, metilcelulozu, hidroksipropilcelulozu, hidroksietilcelulozu, i hipromelozu; pogodne rastvorljive skrobove ili frakcije skroba, ksantan gumu, guar gumu, pektini, karagen, galaktomanan, gelan gumu, uključujući i sve njihove derivate, celulozni acetat ftala (CAP), karboksi-metil-celulozu, natrijum alginat, soli alginske kiseline, hidroksi propil metli celulozu (HPMC), arapsku gumu, brašno semenki rogača (karuba guma), hitozan, i derivate hitozana, kolagen, poliglikolnu kiselinu, skrobove i modifikovane skrobove i ciklodekstrine.
[0026] "Stabilna" formulacija ili supstanca je ona u kojoj biološki aktivan materijal u suštini zadržava svoju fizičku stabilnost, hemijsku stabilnost, i/Ili biološku aktivnost posle skladišenja. Stabilnost je moguće izmeriti u uslovima na izabranoj temperaturi i vlažnosti za izabrani vremenski period. Trend analizu je moguće koristiti da se proceni očekivani vek upotrebe pre nego što se materijal pohrani za određeni vremenski period. Za žive bakterije, na primer, stabilnost se definiše kao vreme koje je potrebno da se izgubi 1 log (logaritamska vrednost) od CFU/g suve formulacije pod unapred definisanim uslovima temperature, vlažnosti i vremenskog perioda.
[0027] "Održivost " u pogledu bakterija, se odnosi na sposobnost da se formira kolonija (CFU ili jedinica koja formira koloniju) na hranljivom mediju pogodnom za rast bakterija. Održivost, u pogledu virusa, se odnosi na stabilnsot da se zarazi i reprodukuje pogodna ćelija domaćin, što kao rezultat daje formiranje plaka na travnjaku ćelija domaćina.
[0028] Temperature ili uslovi "okolne" sobe su oni koji su dati u bilo kom vremenskom terenutku u datom okruženju. Obično, temperatura okoline te sobe jeste 22-25°C, atmosferski pritisak, i vlažnost okoline se lako mere i razlikovaće se zavisno od doba godine, vremenskih prilika i klimatskih uslova, nadmorske visine, itd.
[0029] "Vodena aktivnost" ili "Aw" u kontekstu suvih supstanci formulacije, se odnosi na dostupnost, stabilnost vode i predstavlja status energije vode u sistemu. Definisano je kao pritisak isparavanja vode iznad uzorka podeljeno sa čistom vodom na istoj tempreraturi. Čista destilovana voda ima aktivnost vode od jednako jedan ili Aw=1,0.
[0030] "Relativna vlažnost" ili "RH" u kontekstu stabilnost skladištenja se odnosi na količinu isparenja vode u vazduhu na datoj tepereaturi. Relativna vlažnost je obično manja od one koja je neophodna da bi se zasićivao vazduh i izrazio procenat vlažnosti saturacije.
[0031] "Suv" i varijacije prideva koje se odnose na fizičko stanje koje je dehidratisano ili anhidrovano, t.j. pretežno mu nedostaje tečnost. Sušenje obuhvata na primer, sušenje raspršivanjem, sušenje u fluidizovanom sloju, liofilizacija, i sušenje vakuumom.
[0032] Sušenje "liofilizovanjem" ili zamrzavanjem se odnosi na dobijanje supstance u suvom obliku brzim zamrzavanjem i dehidracijom u zamrznutom stanju (ponekad se pominje kao sublimacija). Liofilizacija se odvija na temperaturi koja kao rezultat ima kristalizaciju polimera. Ovaj postupak se može odvijati pod vakuumom pod pritiskom dovoljnim da se zadrži zamrznuti proizvod, poželjno manjim od oko <2000 mTORR.
[0033] "Primarno sušenje" ili "tečno sušenje", u vezi sa ovde opisanim procesima, se odnosi na dehidraciju tokom koje se odvija povremeno otapanje zamrznutih čestica do tačke gde počinje sekundarno sušenje. Obično, veći deo primarnog sušenja se odvija sveobuhvatnom evaporacijom, pri čemu je temperatura proizvoda ostala znatno niža od temperatura izvora toplote. Ovaj postupak je moguće izvesti pod vakuumom na pritisku dovoljnom da se zadrži otopljeni proizvod, poželjno većem od oko >2000 mTORR.
[0034] "Sekundarno sušenje", u vezi sa postupcima opisanim ovde, se odnosi na korak sušenja koji se odvija na temperaturama iznad temperatura zamrzavanja formulacije i blizu temperature izvora toplote. Ovaj postupak je moguće izvesti pod vakuumom na pritisku dovoljnom da se smanji aktivnost vode neke formulacije, poželjno manjem od oko <1000 mTORR. U uobičajenom postupku sušenja formulacije, sekundarni korak sušenja smanjuje aktivnost vode te formulacije na Aw od 0,3 ili manje.
KRATAK OPIS SLIKA NACRTA
Slika 1. Stabilnost ubrzanja komercijalno dostupnih probiotskih bakterija i prbiotskih bakterija u suvoj supstanci iz ovog pronalaska.
Slika 2. Dejstvo različitih molarnih odnosa između pospešivača staklastosti i mešavine karbohidrata u toj supstanci na probiotsku stabilnost (L. paracasei) pod ubrzanim uslovima skladištenja (37°C i 33% RH).
Slika 3. Dejstvo supstance prema ovom pronalasku na stabilnost skladištenja probiotskih bakterija L. acidophilus. Stabilnost suvih probiotskih bakterija je testirana pri ubrzanim uslovima skladištenja od 24°C i 33%RH tokom 537 dana.
Slika 4. Dejstvo različitih jedinjenja pospešivača staklastosti na stabilnost skladištenja probiotskih bakterija L. acidophilus. Stabilnost suvih probiotskih bakterija je testirana pri ubrzanim uslovima skladištenja od 24°C i 43%RH tokom 180 dana.
Slika 5. Dejstvo različitih odnosa hidrolizata /šećera proteina na stabilnost skladištenja (35°C i 43%RH) probiotskih bakterija Bifidobacterium lactis.
Slika 6. pH optimizacija za maksimalnu stabilnost probiotskog L. rhamnosus (uslovi ubrzanog skladištenja na 40°C i 33%RH tokom 8 nedelja).
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0036] Supstance i postupci sušenja iz ovog pronalaska rešavaju problem obezbeđivanja suvih formulacija koje sadrže osetljive bioaktivne materijale, kao što su peptidi, proteini, hormoni, nukleinske kiseline, antitela, lekovi, vakcine, kvasac, bakterija, virusi i/ili ćelijske suspenzije i to ekonomično i srazmerno količinama za industrijske potrebe, uz značajno produžen vek upotrebe u suvom stanju. Ovaj pronalazak prema priloženim patentnim zahtevima obezbeđuje supstance koje obuhvataju biološki materijal okružen amorfnom staklastom strukturom visoko rastvorljivih jedinjenja. Postupak sušenja prema ovim patentnim zahtevima 7-10 obuhvata: mešanje biološkog materijala i stabilizujuće supstance u tečnoj emulziji, trenutno zamrzavanje pomenute emulzije supstance u tečnom azotu da bi se formirale kapi, niske ili perlice, ispiranje zamrznutih čestica pod visokim vakuumom posle čega sledi sušenje bioaktivnog materijala za formiranje šećerne glazure isparavanjem vlage pod režimom smanjenom pritiska uz napajanje toplote do supstance.
SUPSTANCE IZ OVOG PRONALASKA
[0037] Ovaj se pronalazak zasniva na značajnom otkriću da biološki materijali mogu da budu zaštićeni u staklastoj strukturi a da zadrže značajni deo svoje aktivnosti. Kada se taj biološki materijal kombinuje sa mešavinom supstance i osuši u vakuumu prema ovom pronalasku postiže se izuzetna stabilnost tokom produženog vremenskog perioda izlaganja otežanim uslovima temperature i vlažnosti. Ovaj pronalazak obuhvata supstance prema priloženim patentnim zahtevima koje sadrže biološki materijal, mešavinu rastvorljivih karbohidrata i soli karboksilne kiseline koji pospešuju staklastost. Supstance iz ovog pronalaska su u svojoj suštini drugačije u svojoj fizičkoj strukturi i funkciji od neviskoznih ili koncentrovanih šećernih supstanci koje su jednostavno osušene uobičajenim postupkom sušenja. Na primer, patenti Sjedinjenih Američkih Država 6919172 (Staklasto stanje Konzervisanje i skladištenje Supstance za biološke materijale) opisuju aerosolizovanu praškastu supstancu za isporuku u pluća, koja sadrži mešavinu različitih karbohidrata i natrijum citrata. Toj supstanci nedostaje dodatno proteinasto jedinjenje koje je ključno za dodatu stabilnost i za formiranje željene fizičke strukture tokom sušenja rastvora koji ima visoku koncentraciju šećera. Toj supstanci takođe nedostaje struktura viskoznosti ili hidrogela, što dozvoljava efikasno sušenje otopljenog ili nezamrznutog rastvora za pospešeno formiranje staklastosti. Ta supstanca i postupak sušenja iz ovog pronalaska su prevazišli sve ove probleme uz istovremeno postizanje izuzetne stabilnosti biološkog materijala. Pospešena staklasta struktura je obično dobijena u prethodnom stanju tehnike penušanjem ili u ključalom rastvoru pod vakuumom da bi se olakšalo delotvorno sušenje. Korak penušanja generalno je dao kao rezultat ekstenzivno ključanje i erupciju rastvora koja je neizbežna posledica sušenja nezamrznutog rastvora i kao rezutlat, moguće je postići samo veoma mali kapacitet punjenja (unosa) rastvora u bočicu ili posudu (videti na primer američki (US) ) Pat. br.6534087, u kom je debljina finalnog penastog prozvoda sa penastim omotačem manja od 2 mm). Supstance i postupci sušenja iz ovog pronalaska izbegavaju ključanje i penušanje formulacije čime se omogućava mnogo veće raspoređivanje (unos) materiala po području sušenja i, kao rezultat, moguće je lako razmeriti količine sve do proizvodnje velikih količina materijala bez upotrebe specifično projektovanih posuda ili tacni ili opreme.
[0038] Širok opseg bioloških materijala je moguće koristiti sa stabilizacionom supstancom da bi se formirala vodena podloga konzervansa, koja može zatim da bude podvrgnuta postupcima sušenja iz ovog pronalaska da bi se napravio stabilan suvi prah biološkog materijala. Ovi biološki materijali, obuhvataju, bez ograničenja: enzime, kao što su pankreasni enzimi, lipaze, amilaze, proteaze, fitaze, laktaze dehidrogenaze; proteine, kao što je insulin; vakcine; viruse, kao što je adenovirus; ćelije, uključujući prokariotske ćelije (uključujući bakterije) i eukariotske ćelije, druge biološke materijale, uključujući lekove, nukleinske kiseline, i lipidne vezikule.
[0039] Probiotske bakterije su pokazale da su posebno korisne iz supstanci i postupaka sušenja iz ovog pronalaska. Stabilni suv probiotski prah je dobijen prema postupcima iz ovog pronalaska prema patentnim zahtevima 7-10 uključujući mešanje svežih, zamrznutih ili suvih kultura probiotskih bakterija sa mešavinom karbohidrata i jedinjenja za pospešivanje staklastosti, trenutno zamrzavanje viskozne formulacije u tečnom azotu da bi se formirale zamrznute čvrste kapi, niske il perlice, i vakumsko sušenje tako što se prvo primenjuje dovoljan vakuumski pritisak za prečišćavanje i stabilizovanje strukture zamrznutih čestica, povećava temperaturu formulacije iznad temperature zamrzavanja i napajanje izvora toplote od 20°C i više olakšava primarno uklanjanje vode. Održavanje temperature formulacije iznad tačke zamrzavanja može biti izvedeno podešavanjem vakuumskog pritiska i sprovođenjem toplote do formulacije. Da bi se završio postupak sušenja i dodatno smanjila aktivnost vode formulacije ispod Aw od 0,3 ili niže, drugi korak sušenja se primenjuje pri maksimalnom vakuumskom pritisku i na povišenoj temperaturi i do 70°C. Takva supstanca može da ostane stabilna u oštrim uslovima skladištenja kao što je 40°C i 33%RH tokom 60 dana ili duže (videti Sliku 8).
Dobijanje supstanci
[0040] Supstanca za dobijanje stabilnog zamrznutog ili suvog praha bioloških materijala prema ovom pronalasku kako je izneto u priloženim patentnim zahtevima obuhvata mešavinu karbohidrata i pospešivač staklastosti. Takvi materijali, kada se umešaju sa poželjnim bioaktivnim materijalom formiraju niske perlica ili kapljica u tečnom azotu i mogu biti efikasno osušeni u amorfnoj staklastoj strukturi u skladu sa postupcima iz ovog pronalaska i da se obezbede velike količine stabilnih suvih supstanci za skladištenje i isporuku pomenutog bioaktivnog materijala (videti Sliku 1 - za fizička zapažanja i aktivnost vode (Aw) različite formulacije posle sušenja). Mešavina karbohidrata obezbeđuje strukturnu stbilnost za tu formulaciju i/ili fizička i hemijska zaštitna svojstva za bioaktivne materijale i sprečava ili smanjuje neželjena dejstva posle rekonstitucije ili rehidracije.
[0041] Frakcija polisaharida u mešavini karbohidrata može da obezbedi viskoznost zgušnjavanja za tu formulaciju i bolju kontrolu svojstava gustine formulacije pod vakuumskim pritiskom i povećanu strukturnu čvrstoću za osušene supstance formulacije iz ovog pronalaska. Poželjni polisaharidi, posebno za žive organizme, su gume rastvorljive u vodi, zbog njihove distinktivne karakteristike da formiraju viskozni gel na blagim temperaturama. Kod guma je pri izvesnoj koncentraciji utvrđeno da efikasno stabilizuju strukturu formulacije pod vakuumom, obezbeđivanjem odgovarajuće viskoznosti i gustine toj formulaciji i omogućavanje efikasnog sušenja formulacije tokom koraka sušenja primarne tečnosti pri određenoj viskoznosti. Izvesne gume mogu takođe da formiraju hidrogel ukrštanjem sa dvovalentnim ili viševalentnim katjoinima (npr., alginati, pektini, hitozan) ili promenama temperature i pH (npr., želatini, CMC, CAP, gelan guma). Hidrogelirani rastvori bi sprečili probleme povezane sa vakuumskim sušenjem nezamrznutih rastvora.
[0042] Frakcija disaharida u mešavini karbohidrata obuhvata različite šećere i šećerne alkohole. Preporučeni disaharid je onaj koji ne kristalizuje i/ili oštećuje ili destabilizuje biološki aktivan materijal u formulaciji na temperaturama zamrzavanja (npr., nižim od -20°C) i tokom uklanjanja vode. Na primer, bioaktivni materijal može da bude fizički umetnut u šećere koji formiraju staklasti sloj kao što su saharoza, laktoza ili trehaloza da bi se pospešilo zadržavanje molekularne strukture tokom celog postupka sušenja i dala strukturna čvrstoća amorfnoj matrici u suvom stanju. Pogodni disaharid bi efikasno zamenio vodu izgubljenu hidratacijom tokom sušenja, da bi se sprečilo oštećenje membrana ćelije i denaturacija enzima (videti pregled koji su dali Krouv i saradnici (Crowe et al., 1998). Druge funkcije disaharida u supstanci mogu da obuhvate zaštitu bioaktivnog materijala od izlaganja uticaju štetnog svetla, kiseonika, oksidativnih agenasa i vlage. Pogodni disaharid mora lako da se rastvori u rastvoru. Trehaloza je posebno atraktivni konzervans jer je neredukujući disaharid pronađen u biljkama i živim organizmima (npr., bakterija, gljive i beskičmenjaci kao što su insekti i valjkasti crvi) koji ostaju u stanju uspavanosti tokom perioda suše. Trehaloza se pokazala kao efikasan konzervansza raznorazne biološke materijale uključujući proteine i druge biološke makromolekule, kao što su enzimi, serum, antitela, antigeni i komponente vakcine Sančez i saradnici (Sanchez et al., 1999, Intl. J. Pharm.185, 255-266; Es- quisabel et al., 1997, J. Microencapsulation, 14, 627-638). U nekim slučajevima, može biti korisno obuhvatiti dva ili više različitih disaharida kao što je mešavina trehaloze i saharoze da bi se inhibiralo formiranje kristala, da bi se pospešila stabilnost osušene formulacije bioaktivnog materijala u uslovima skladištenja tokom produženih vremenskih perioda i da bi se smanjili troškovi.
[0043] Frakcija oligosaharida u mešavini karboksihidrata obuhvata inulin, maltodekstrine, dekstrane, frukto-oligosaharide (FOS), galakto-oligosaharide (GOS), manan-oligosaharide (MOS) i njihove kombinacije. Oligosaharidi ublažavaju nekoliko problema povezanih sa upotrebom same trehaloze kao konzervansa za raznovrsne konzervisane biološke materijale. Iako je veoma delotovorna za zaštitu biološkog materijala tokom dehidracije i rehidracije, Trehaloza sama kao stabilizator ne obezbeđuje poželjnu stabilnost skladištenja tokom produženih vremenskih perioda, posebno na visokim temperaturama i /ili u vlažnim okruženjima. Ovaj problem je rešen u ovom pronalasku dodavanjem oligosaharida poželjno inulina, u mešavinu karboksihidrata.
[0044] Poželjni odnos mase saharida u mešavini karbohidrata je 10:0,5-1:0,1-0,5 disaharida/oligosaharida/polisaharida. Preporučljivo mešavina karbohidrata obuhvata, u procentima težinu ukupne suve materije, 0,1-10% polisaharide, 1-10% oligosaharide i 10-90% disaharide.
[0045] Pospešivači staklastosti strukture iz ovog pronalaska obuhvataju soli organskih kiselina, mlečne kiseline, askorbinske kiseline, maleinske kiseline, oksalne kisleine, malonske kiseline, jabučne kiseline, sukcinske kiseline, limunske kiseline, glukonske kiseline i glutaminske kiseline. Soli mogu da obuhvate katjone kao što je natrijum, kalijum, kalcijum, magnezijum, puferske soli, fosfatni pufer i slično. Primeri obuhvataju natrijum citrat, natrijum laktat, natrijum maleat, magnezijum glukonat, natrijum askorbat, kalijum askorbat, fosfatne puferisane soli i slično. Generalno, viševalentni anjoni formiraju staklastost lakše sa višim T g nego monovalentni anjoni. Poželjni anjon će imati visok T g i dovoljnu rastvorljivost da se suzbije kristalizacija i time da se formira robusna staklasta struktura. U nekim slučajevima, mešavine organskih soli mogu biti korisne (npr. natrijum citrat i natrijum askorbat). Za natrijum citrat je utvrđeno da reaguje sa hidroksil grupama molekula šećera i formira spoj preko tih karboksilnih grupa što daje kao rezultat dramatično povećanje temperature staklastog prelaza te staklaste saharoze (Kets et al., 2004. Citrate increases glass transition temperature of vitrified sucrose preparations Cryobiology (Citrat povećava temperaturu staklastog prelaza preparata staklaste saharoze), 48:46-54). Natrijum citrat je čest aditiv hrani potvrđen kao GRAS (21 CFR 184.1751 - Natrijum citrat). Dodatne funkcije natrijum citrata u supstancama su povezane sa svojim puferskim kapacitetom i sprečavanjem drastičnih promena u pH tečne podloge tokom zamrzavanja, što vodi denaturaciji proteina koji se suši zamrzavanjem.
[0046] Drugi pogodni pospešivači staklastosti obuhvaćeni u supstanci dodatno povećavaju njegovu stabilnost obuhvataju proteine, hidrolizate proteina, polipeptide i amino kiseline. Poželjno, koriste se kazein ili grašak a još poželjnije, proteini hidrolizovanog kazeina ili hidrolizovanog graška. Pojam "hidrolizovani protein" se odnosi na protein koji je podvrgnut delimičnoj ili punoj kiselini ili enzimatskoj hidrolizi da bi se dao prinos hidrolizovanog proteina koji ima molekularnu težinu od oko 1 kDa do oko 50 kDa. Poželjno, barem 20% supstrata proteina je pretvoreno u peptide koji imaju molekularne mase od 200 do 2.000 daltona. Hidrolizovani protein je poželjno ista supstanca amino kiseline kao pun protein i može se dobiti iz velikog broja različitih komercijalnih izvora. Pošto je hipoalergenik, hidrolizovan protein može pogodno da bude korišćen u izvesnoj hrani za hiper osetljive potrošače kao što su deca i starije osobe.
[0047] Količina pospešivača staklastosti korišćena u supstanci može da bude različita zavisno od ukupne supstance i za nju predviđenih uslova skladištenja u suvom stanju. Generalno, molarni odnos pospešivača staklastosti prema ukupnim karbohidratima će biti od oko 0,01 do oko 0,3. Poželjna supstanca obuhvata molarni odnos od oko 0,1-0,2.
[0048] Rastvor koji sadrži biološki materijal i stabilizujuća supstanca korišćeni u ovom pronalasku mogu obuhvatiti značajnu količinu ukupnih čvrstih supstanci (konstituenti minus rastvarač, kao što je voda), od oko 20% do oko 60% poželjno oko 30-50% težinskih procenata. Ukupni deo ukupnih čvrstih supstanci može obuhvatiti bioaktivni materijal, mešavinu karbohidrata i pospešivače staklastosti. Na primer, bioaktivni materijal može biti prisutan u formulaciji u koncentraciji koja se kreće u opsegu od oko 5% i 30% w/v, poželjno oko 10- 20% w/v. Težinska masa te mešavine susptance u hranljivoj podlozi je obično između oko 10% i oko 60%, poželjno oko 20-40%. Viskoznost formulacija iz ovog pronalaska je obično veća od 1.000 centipoiza (cP); još poželjnije, veća od 5.000 cP; i najpoželjnije veća od 10.000 cP.
POSTUPCI PRIPREME STABILNIH SUVIH FORMULACIJA
[0049] Različite tehnike sušenja mogu efikasno da se koriste za sušenje supstance. Ovi postupci, iako su manje komplikovani i manje skupi od sušenja zamrzavanjem ili vakumskog sušenja, su generalno štetniji za biološke materijale. Brojni biološki materijali su skloniji ukupnim konformacionim promenama i neželjenim reakcijama kada se konzervišu korišćenjem postupaka koji se odvijaju na temperaturi okoline ili višoj temperaturi nego kada se koristu sušenje zamrzavanjem ili sušenje hlađenjem. Kao rezultat, čak i kada se koriste sada poznati konzervansni agensi, aktivnost velikog broja rehidratisanih bioloških materijala je i nezadovoljavajuća sama po sebi, i značajno manja nego kada se konzerviše korišćenjem sušenja na niskim temperaturama.
[0050] Poželjniji postupci pripreme stabilnih suvih formulacija koje sadrže bioaktivne materijale obuhvataju; (1) dobijanje viskozne formulacije emulzije mešanjem bioaktivnog materijala sa supstancom za stabilizaciju prema priloženim patentnim zahtevima u vodenom rastvoru, (2) trenutnim zamrzavanjem formulacije emulzije da bi se formirale čvrste zamrznute čestice, (3) opciono, podvrgavanje zamrznute čestice visokom vakuumskom pritisku tokom kratkog perioda da bi se isprale čestice i stabilizovala njihova struktura, (4) uklanjanje vode evaporacijom vlage na temperaturi iznad temeprature zamrzavanja te formulacije, (5) dalje redukovanje aktivnost vode u toj formulaciji do niže od 0,3 Aw pod punim vakuumom i na povišenoj temperaturi.
[0051] Na primer, suvi oblik bioaktivnog materijala moguće je formulisatii u rastvor ili suspenziju koja sadrži praškastu mešavinu ove supstance. Mešavina supstance može biti rastvorena u toplom vodenom rastvoru sa mešanjem sa malim smicanjem pre hlađenja i mešanja sa bioaktivnim materijalom. Bioaktivni materijal, kao što je kultivisani virus ili bakterija, moguće je koncentrovati i odvojiti od hranljive podlge centrifugiranjem ili filtracijom pre stavljanja resuspenzije u tu formulaciju. Alternativno, ukupna količina vode u formulaciji je data u tečnosti koncentrovanog biološkog materijala. Suspenzija se drži na temperaturi blago iznad sobne temperature i suva praškasta mešavina supstance se polako dodaje u blagu (25°C do 40°C) suspenziju koja sadrži biološki materijal. Suspenzija se blago meša u planetarnom mešaču sve dok se sve komponente ne rasprše ili rastvore u potpunosti i ne dobije se ravnomerna emulzija.
[0052] Viskozni rastvor može zatim da bude unakrsno spojen da se formira hidrogel (zavisno od svojstava polisaharida ) dodavanjem jona metala il promenom temperature ili pH vrednosti emulzije i zatim je osušen prema postupcima sušenja iz ovog pronalaska. Alternativno, emulzija može da bude trenutno zamrznuta atomizovanjem kroz mlaznicu, potapanjem ili ubrizgavanjem u kupku od suvog leda ili tečnog azota da bi se formirale male čestice li čvrste kapljice niski ili perlica. Zamrznute čvrste čestice je moguće čuvati u zamrzivaču za duboko zamrzavanje između -30°C i -80°C za kasniju upotrebu kao stabilan zamrznuti proizvod ili do sušenja. Postupak sušenja je vakumsko sušenje gde se temperatura proizvoda održava blago iznad svoje temperature zamrzavanja. Zamrznute kapoljice ili perlice se postave na tacne uz kapacitet napunjenosti (opterećenja) od oko 1,0763 kg/m<2>(0,1 kg/sq ft) do oko 16,1458 kg/m<2>(1,5 kg/sq ft) i osušen u skladu sa postupkom prema ovom pronalasku.
Poželjno, postupak sušenja se pokreće kratkim korakom prečišćavanja, koji dozvoljava prilagođavanje proizvoda početnoj temepraturi i strukturi zamrznutih čestica da bi se opustio i stabilizovao i degazirao višak vazduha. Obično, korak prečišćavanja se odvija između 0 i 60 minuta zavisno od viskoznosti proizvoda i napunjenosti tacne. Perlice ili čestice treba da ostanu u čvrstom zamrznutom obliku tokom celog koraka prečišćavanja. Temperatura proizvoda se zatim dovodi do iznad temperature zamrzavanja za taj proizvod i primarni korak sušenja sledi sve dok sva nevezana voda ne ispari iz proizvoda. Pošto temperatura formulacije dostigne željenu temperaturu, toplota se podešava da zadrži tu temperaturu i prelazi se na korak sušenja primarne tečnosti isparavanjem. U ovom koraku formulacija je već otopljena i ubrzano isparavanje vode se odvija bez ikakvog ključanja ili penušanja. Postupak sušenja je završen uz dodatnu sekundarnu fazu sušenja pri maksimalnom vakuumu i povišenoj temperaturi.
[0053] Uobičajeni postupci u prethodnom stanju tehnike obuhvataju obimno penušanje i/ili prskanje i žestoko ključanje koje može da bude štetno za osetljive biološke mateije i prouzrokuje teškoće za industrijsko dimenzioniranje proizvodnje pri visokom kapacitetu punjenja (videti na primer SAD (US) pat. br. 6534087, gde primenjeni vakuumski pritisak daje kao rezultat burno ključanje i penušanje), pri čemu trenutne supstance i postupci izbegavaju ključanje ili penušanje formulacije uz postizanje značajno brže stope sušenja i omogućava visok kapacitet punjenja te formulacije. Dodatno, kompletno i efikasno degaziranje viskoznih tečnih emulzija je teško i može da zahteva produženi period vremena. Ove prepreke su sve razrešene u ovom pronalasku korišćenjem pogodne supstance koja omogućava delotvorno sušenje primarne tečnosti koje formira staklastu strukturu bez ikakvog ključanja i prekomernog penušanja. Utovar čvrstih zamrznutih čestica na tacni nasuprot emulziji ili viskoznom sirupu omogućava mnogo viši kapacitet punjenja po području sušenja na tacnama koje su bile dostupne prema prethodnom stanju tehnike.
[0054] U jednom preporučenom primeru ovog pronalaska, biološki materijal je živa koncentrovana kultura probiotskih bakterija. Praškasta mešavina supstance sadrži 1-4% natrijum alginata ili gelan gume, 50-75% trehaloze, 1-10% inulina ili FOS, 10-20% protein hidrolizata, kao što su hidrolizati kazeina, surutke, graška, soje ili semena pamuka i dobije se 1-10% natrijum citrata ili natrijum askorbata. Probiotska kultura može da bude sveža, zamrznuta ili već osušena u obliku suvog praha. Mešavina supstance je dodata u koncentrovanu probiotsku hranljivu podlogu da bi se dobio sadržaj čvrste supstance ove mešavine rastvora do 40-60% (w/w) i pH vrednost podešena na 6,5-7,5 sa jonima fosfata ili citrata. Rastvor se meša na temperaturi blago iznad sobne temperature (obično između 25°C -37°C) sve dok se ne rastvore potpuno sve komponente. Viskozna emulzija se ukapava u tečni azot da bi se formirale male kapljice ili perlice koje su zatim uklonjene iz tečnog azota, spakovane u vreće i sačuvane u dubokom zamrzivaču na -80°C sve do sušenja.
[0055] Uobičajen postupak sušenja živih probiotskih bakterija obuhvata; raspoređivanje čvrstih zamrznutih perlica na tacne u ravnomernom sloju pri kapacitetu punjenja između 1.076,391 g/m<2>-16.145,8656 g/m<2>(100-1500 g/sq ft) i tacne se odmah postave u zamrzivač sušač. Zatim se primeni vakuumski pritisak na oko 1000 mTORR ili manje i zavisno od veličine zamrzivača sušača i tipa izvora toplote, temperatura na polici je podešena da zadrži čestice na oko -20-30°C. Čvrste zamrznute perlice se ostave da prečiste tokom oko 0-60 minuta i vakuum se podesi na između 2.000 i 10.000 mTORR i trasfer toplote se poveća da podigne temperaturu formulacije na između -10°C i 0°C. Ovi uslovi temperature i vakuumskog pritiska se održavaju tokom koraka sušenja primarne tečnosti koji može trajati od nekoliko sati i do 24 sata zavisno od napunjenosti tacne. U nekom trenutku tokom primarnog postupka sušenja brzina isparavanja rastvarača se usporava i temperatura formulacije počinje da se povećava usled dovođenja viška toplote u komoru za sušenje. Ova tačka ukazuje na kraj koraka primarnog sušenja kod ovog pronalaska. Kako se rastvarač izbacuje iz formulacije, jedinjenja koja formiraju staklasti sloj u rastvoru postanu koncentrovana i gušća sve dok se ne zaustavi protok u obliku tečnosti i ne formira amorfna i/ili stabilna staklasta struktura. Sekundarni korak sušenja sleti posle toga pri maksimalnoj temperaturi vakuuma i formulacije između 30°C i 50°C. Svrha sekundarnog koraka sušenja je da se ukloni preostala uhvaćena ili vezana vlaga i da se dobije supstanca koja je stabilna za skladištenje tokom dužeg vremenskog perioda na temperaturama okoline. Taj sekundarni korak sušenja može trajati nekoliko sati i njegova tačka završetka je kada je formulacija potpuno suva i njena aktivnost vode niža od 0,3 Aw.
[0056] Postupci sušenja iz ovog pronalaska daju kao rezultat biološki aktivan materijal koji je smešten unutar amorfne staklaste strukture, čime se sprečava odvijanje ili denaturacija proteina i značajno smanjenje molekularnih interakcija ili unakrsna reaktivnost, usled značajno smanjene mobilnosti jedinjenja i drugih molekula unutar amorfne staklaste supstance. Dokle god se održava amorfna struktura čvrste supstance na temperaturi ispod njene temeprature staklastog prelaza i njena zaostala vlaga ostaje relativno niska (t.j., ispod Aw od 0,5), probiotska bakterija može da ostane relativno stabilna (videti Sliku 8). Treba napomenuti da postizanje staklaste strukture nije preduslov za dugoročnu stabilnost jer neki biološki materijali mogu da napreduju bolje u kristalnijem stanju .
[0057] Osušena staklasta struktura može da se koristi en bloc, isečena u željene oblike i veličine, ili zdrobljena ili smlevena u prah sa slobodnim protokom koji obezbeđuje laku preradu u narednim koracima postupka kao vlažna ili suva aglomeracija, granulacija, tabletiranje, kompaktnost, peletizacija i bilo kojoj drugoj vrsti postupka isporuke. Postupci za drobljenje, mlevenje, mrvljenje ili pulverizaciju su svi dobro poznati u ovoj oblasti. Na primer, moguće je koristiti mlin čekićar, vazdušni mlin klasifikator, udarni mlin, mlazni mlin, vertikalni rotacioni mlin, Vajlijev mlin, ili slične uređaje za mlevenje. Poželjna veličina čestica je manja od oko 1000 µm i poželjno manja od 500 µm.
[0058] Supstance i postupci opisani ovde stabilizuju biološki materijal i konzervišu njegovu aktivnost tokom produženog vremenskog perioda za skladištenje na vrednostima koje su iznad temperature okoline i relativne vlažnosti. Na primer, supstance se testiraju za stabilnost izlaganjem povišenoj temperaturi (npr., 40°C) i visokoj vlažnosti (npr.33%RH) i merenje biološke aktivnosti tih formulacija. Kao u primeru za žive probiotske bakterije, rezultati ovih studija pokazuju da su bakterije formulisane u ovim supstancama stabilne tokom barem 60 dana (videti Sliku 8). Stabilnost je definisana kao vreme za gubitak jedne potencije log CFU/g. Takve formulacije su stabilne čak i kada se koriste visoke koncentracije biološki aktivnog materijala. Dakle, ove formulacije imaju kao prednosti to što mogu da budu isporučene i skladištene na temperaturama na ili iznad sobne temperature tokom dugih perioda vremena.
PRIMERI
[0059] Sledeći primeri se nude da bi ilustrovali, ali ne i kao ograničenje pronalaska za koji se traži zaštita patentom.
PRIMER 1
Priprema suve i stabilne supstance
Osnovna mešavina karbohidrata
[0060] Oko 70 g trehaloze (Cargill Minneapolis, MN), oko 5 g instant inulina (Cargill Minneapolis, MN) i oko 3 g natrijum alginata (ISP Corp., Wayne, NJ) su ravnomerno mešani u suvom obliku.
Osnovna mešavina pospešivača staklastosti
[0061] Oko 17 g hidrolizata kazeina ili hidrolizata graška (ultra filtrirani hidrolizati, Marcor, Carlstadt, NJ) i 5 g natrijum citrata ili natrijum askorbata (Sigma, St. Louis, MO) su ujednačeno mešani u suvom obliku.
Stabilizacija probiotskih bakterija
[0062] Svež koncentrat Lactobacillus rhamnosus. (100 ml na 10% čvrstih supstanci, direktno iz fermentacione žetve) je dodato u blender i zadržano na 35°C. Oko 78 g osnovne mešavine karbohidrata i oko 22 g osnovne mešavine pospešivača staklastosti su lagano dodati u probiotsku kulturu i mešanje je izvedeno na 35°C tokom 10 minuta. Viskozna emulzija je zatim preneta u posudu koja ima perforirano dno i ostavljena je da kaplje u kupku koja sadrži tečni azot. Perlice su zatim uklonjene iz tečnog azota i odmah su prenete na sušenje.
Sušenje zamrznutih perlica koje sadrže probiotske bakterije
[0063] Zamrznute perlice su razastrte na tacnu sa kapacitetom punjenja od 2.152,782 g/m<2>(200 g/sq ft) i odmah su postavljeni na policu u zamrzivaču sušaču (Model 25 SRC, Virtis, Gardiner, NY). Vakuum je zatim podešen na između 2000-2700 mTORR i temperatura police je podignuta do 30°C. Ove postavke temperature i vakuumskog pritiska su zadržane tokom 5 sati. Opciono, temperatura zamrznutih perlica je aklimatizovana na oko -20°C pre pokretanja sušenja primarne tečnosti primenom vakuumskog pritiska na oko 1.000 mTORR i dozvoljavanja perlicama zamrznutih čvrstih supstanci da se isperu tokom 10 minuta. Korak primarnog sušenja je zatim usledio podešavanjem vakuumskog pritiska na između 2000-2700 mTORR i temperatura police je podignuta do 30°C. Ove postavke temperature i pritiska vakuuma su zadržane tokom 5 sati. Korak sekundarnog sušenja je zatim usledio pri punom vakuumu (150-200 mTORR) i temperatura police je zadržana na između 30°C i 50°C tokom dodatna 3 sata. Ova formulacija je potpuno osušena i njena vodena aktivnost je izmerena u instrumentu Hygropalm Aw1 (Rotonic Instrument Corp., Huntington, NY.) na Aw = 0,23.
PRIMER 2
Stabilnost skladištenja suvih probiotskih bakterija
[0064] Slika 1 pokazuje stabilnost skladištenja pod dva različita uslova ubrzanog skladištenja od 40°C i 33%RH i 30°C i 43%RH suvih stabilnih probiotskih bakterija iz Primera 1 i komercilano dostupnih suvih probiotskih bakterija (Culturelle, Amerifit, Inc., Cromwell, CT). Komercijalne probiotske bakterije su potpuno izgubile svoju održivost u roku od prvih nekoliko nedelja pod ubrzanim uslovima skladištenja, dok je suva supstanca probiotskih bakterija iz ovog pronalaska izgubila samo 1,18 log posle 60 dana na 30°C i 43%RH i samo 1,09 log na 40°C i 33%RH.
PRIMER 3
Srazmero uvećana proizvodnja stabilne suve supstance koja sadrži probiotske bakterije Lactobacillus rhamnosus.
[0065] Lactobacillus rhamnosus (400 g zamrznuitog koncentata iz komercijalnog izvora) je otopljen na 37°C u planetarnm mešaču sa dvostrukim omotačem (DPM, 1qt, Ross Engineering, Inc. Savannah, GA,) i čvrsti sadržaj je podešen na 10% čvrstih supstanci wt sa destilovanom vodom) Oko 212 g trehaloze (Cargill Minneapolis, MN), oko 20 g instant inulina (Cargill Minneapolis, MN), oko 12 g natrijum alginata (ISP Corp., Wayne, NJ), oko 136 g kazein hidrolizata (ultra filtrirani hidrolizati, Marcor, Carlstadt, NJ) i oko 20 g natrijum askorbata (Sigma, St. Louis, MO) su ravnomerno mešani u suvom obliku. Ove mešavine prahova su lagano dodate u probiotsku kulturu i mešanje je izvedeno na 400 RPM i 37°C tokom 10 minuta. Emulzija je zatim preneta na posudu koja ima perforirano dno i ostavljena da uroni u kupku koja sadrži tečni azot. Perlice su zatim uklonjene iz tečnog azota, postavljene u zaptivenu vreću od aluminijumske folije i stavljene u duboki zamrzivač na -80°C tokom nekoliko nedelja.
[0066] Za sušenje, zamrznute perlice su ravnomerno raspoređene na tacne sa kapacitetom punjenja koji se kreće u opsegu od 5.381,9552 g/m<2>pa do 16.145,8656 g/m<2>(500 do 1500 g/sq ft) i tacne su postavljene na police u zamrzivaču sušaču (Model 25 SRC, Virtis, Gardiner, NY). Korak sušenja primarne tečnosti je pokrenut podešavanjem vakuumskog pritiska do između 2.000-2.700 mTORR i temperatura proizvoda je podignuta i stabilizovana između -10 -5°C. Vremenom (oko 10-16 sati) temperatura proizvoda je povećana do oko 20-25°C u toj tački je pokrenut korak sekundarnog sušenja pri maksimalnim vrednostima vakuma (150-200 mTORR) i temperature proizvoda održavanim na između 30-40°C još dodatnih 14 sati. Ova formulacija je potpuno osušena i njena aktivnost vode je izmerena na 0,23 Aw.
PRIMER 4
Srazmerno povećanje proizvodnje stabilne suve supstance koja sadrži probiotske bakterije Bifidobacterium lactis.
[0067] Bifidobacterium lactis (400 g zamrznutog koncentrata iz komercijalnog izvora) je otopljeno na 37°C u planetarnm mešaču sa dvostrukim omotačem (DPM, 1qt, Ross Engineering, Inc. Savannah, GA,). Oko 212 g trehaloze (Cargill Minneapolis, MN), oko 20 g instant inulina (Cargill Minneapolis, MN), oko 12 g natrijum alginata (ISP Corp., Wayne, NJ) i oko 20 g natrijum askorbata (Sigma, St. Louis, MO) su ujednačeno mešani u suvom obliku. Mešavina praškastih materija je lagano dodata u probiotsku kulturu. Oko 136 g hidrolizata graška (ultra filtrirani hidrolizati, Marcor, Carlstadt, NJ) je rastvoreno u 80 g destilovane vode i mešavina je kratko mikrotalasnim zracima zagrejana ili je zagrejana u vodenoj kupki do 60°C sve potpunog rastvaranja i zatim je ohlađena do oko 35°C. Suv prah mešavine i rastvor koji sadrži hidrolizat proteina graška su dodati u probiotski koncentrat i mešanje je sprovedeno na oko 40 RPM i 37°C tokom 20 minuta. Emulzija je zatim preneta na posudu koja ima perforirano dno i ostavljena je da kaplje u kupku koja sadrži tečni azot. Perlice su zatim uklonjene iz tečnog azota, postavljene u zaptivenu vreću od aluminijumske folije i uskladištene u dubokom zamrzivanču na -80°C tokom nekoliko nedelja.
[0068] Za sušenje, zamrznute perlice su ravnomereno razastrte na tacne sa kapacitetom punjenja od 8.611,12833 g/m<2>(800 g/sq ft) i tacne su postavljene na police u sušaču zamrzivaču (Model 25 SRC, Virtis, Gardiner, NY). Korak primarnog sušenja tečnosti je pokrenut podešavanjem vakuumskog pritiska na između 2.000-2.700 mTORR i temperatura proizvoda je podignuta i stabilizovana između -10 -5°C. Vremenom (oko 10-16 sati) temperatura proizvoda je povećana na oko 20-25°C u toj tački je pokrenut korak sekundarnog sušenja na maksimalnom vakuumu (150-200 mTORR) i temperaturi proizvoda održavanoj na između 30-40°C tokom dodatnih 14 sati. Formulacija je potpuno osušena i njena vodena aktivnost je izmerena na 0,23 Aw.
PRIMER 5
Dobijanje formulacije hidrogela koja sadrži probiotske bakterije Bifidobacterium lactis:
[0069] Koncentrovana probiotska emulzija Bifidobacterium lactis je dobijena prema Primeru 1. U osnovnu formulaciju, dodato je 0,5 g dvobaznog kalcijum fosfata, posle čega je usledilo 0,5 g glukonolaktona. Emulzija je ostavljena da se stegne na sobnoj temperaturi tokom sledeća 2 sata da bi se formirao čvrsti hidrogel. Čvrsti hidrogel je isečen na do tankih i dugih niti, korišćenjem komcercijalno dostupnog rezača ili sekača. Tanke niti su direktno učitane na tacne u vlažnom obliku ili su trenutno zamrznute u tečnom azotu i utovarene na tacnu sa kapacitetom punjenja od 5.381,9552 g/m<2>(500g/sq ft) postavljene u zamrzivač sušač za sušenje kako je opisano u Primeru 3. Aktivnost vode (Aw) formulacije je 0,05 (Izmereno na HygroPalm Aw1, Rotonic Huntington, NY). Suva formulacija je dodatno melevena do finog praha korišćenjem standardne opreme za mlevenje čekićem i prosejana kroz mrežice od 50-250 mikrona.
PRIMER 6
Optimizacija molarnog odnosa između pospešivača staklastosti i mešavine karbohidrata [0070] Nekoliko supstanci koje sadrže različite molarne odnose pospešivača staklastosti i mešavine karbohidrata su pripremljene prema primeru 1. Koncentrovana kultura probiotskih bakterija L. paracasei je dobijena iz komercijalnog izvora i pripremljena u suvoj supstanci kako je opisano u Primeru 1 izuzev što je emulzija odmah napunjena na tacne u vlažnom obliku bez koraka trenutnog zamrzavanja i prečišćavanja. Emulzija je osušena u primarnom i sekundarnom stadijumu kako je opisano u Primerima 1 i 3 izuzev što je temperatura police bila podignuta do 40°C tokom primarnog i sekundarnog drugog stadijuma. Stabilni prah je podvrgnut uslovima ubrzanog skladištenja na 37°C i 33%RH tokom 84 dana. Slika 2 pokazuje dejstvo različitih molarnih odnosa na stabilnost osušenih bakterija. Rezultati nagoveštavaju da je optimalni molarni odnos između pospešivača staklastosti i mešavine karbohidrata oko 0,12-0,15.
PRIMER 7
Dejstvo supstance iz ovog pronalaska na stabilnost skladištenja probiotskih bakterija L. acidophilus
[0071] Pripremljena je supstanca koja sadrži mešavinu karbohidrata i mešavinu pospešivača staklastog sloja kako je opisano u Primeru 1. Koncentrovana kultura probiotskih bakterija L. acidophilus je dobijena da bi se formirao komercijalni izvor i pripremio u suvoj supstanci kako je opisano u Primeru 1 i 3 i stabilni prah je podvrgnut uslovima ubrzanog skladištenja na 24°C i 33%RH tokom 537 dana. Slika 3 pokazuje izuzetnu stabilnost probiotika formulisanih sa supstancom iz ovog pronalaska. Rezultati pokazuju da je probiotska održivost smanjena za samo 0,18 log tokom 537 dana skladištenja na polici pri preciziranim uslovima.
PRIMER 8
Dejstvo različitih jedinjenja pospešivača staklastosti na stabilnost skladištenja probiotskih bakterija L. acidophilus.
[0072] Pripremljeno je nekoliko supstanci koje sadrže mešavinu karbohidrata kako je opisano u Primeru 1 i mešavina pospešivača staklastosti koja sadrži hidrolizat kazeina i natrijum citrat ili natrijum askorbat ili kombinaciju ova dva. Koncentrovana kultura probiotskih bakterija L. acidophilus je dobijena iz komercijalnog izvora i pripremljena u suvoj supstanci kako je opisano u Primeru 1 izuzev što je ta emuzlija odmah raspoređena na tacne u vlažnom obliku bez koraka trenutnog zamrzavanja i prečišćavanja. Ta emulzija je osušena u primarnom stadijumu i sekundarnom stadijumu kako je opisano u Primerima 1 i 3 stabilni prah je podvrgnut uslovima ubrzanog skladitšenja na 24°C i 43%RH tokom 180 dana. Slika 4 pokazuje dejstvo različitih jedinjenja pospešivača staklastosti na stabilnost osušenih bakterija. Rezultati su nagovestili da je značajno bolja stabilnost dobijena uključivanjem dodatnog pospešivača staklastosti preko hidrolizata proteina. Specifično, uključivanje jednakih količina natrijum acetata i natrijum askorbata je obezbedilo najstabilniju supstancu. Rezultati iz oba primera 5 i 6 su takođe nagovestili da različiti pospešivači staklastosti mogu da budu delotvorniji ili čak mogu da deluju kao destabilizator zavisno od bakterijskog soja.
PRIMER 9
Dejstvo različitih odnosa hidrolizata proteina/šećera na stabilnost skladištenja probiotskih bakterija Bifidobacterium lactis.
[0073] Pripremljeno je nekoliko supstanci koje su sadržale mešavinu karbohidrata i pospešivača staklastosti kako je opisano u Primeru 1 i supstanci koje su sadržale jednake količine ali pri različitim odnosima hidrolizata graška/trehaloze sa ili bez natrijum askorbata. Koncentrovana kultura probiotskih bakterija Bifidobacterium lactis je dobijena iz komercijalnog izvora i pripremljena u suvoj supstanci kako je oisano u Primeru 1 i 3 i stabilan prah je podvrgnut uslovima ubrzanog skladištenja na 35°C i 43%RH tokom 7 nedelja. Slika 5 pokazuje dejstvo 1:4, 1:2,5 i 1:1,5 odnosa hidrolizata/trehaloze graška sa ili bez natrijum askorbata na stabilnost osušenih bakterija. Rezultati su nagovestili da je značajno bolja stabilnost dobijena pri povećanim odnosima hidrolizata/trehaloze graška. Specifično, odnos 1:1,5 hidrolizata/trehaloze graška je obezbedio stabilniju supstancu. Uključivanje natrijum askorbata pri višem odnosu hidrolizata/trehaloze graška je dalo kao rezultat izvanrednu stabilnost u poređenju sa formulacijama koje su isključile natrijum askorbat.
PRIMER 10
Optimizacija pH za maksimalnu stabilnost probiotskog L. rhamnosus.
[0074] Pripremljeno je nekoliko supstanci koje su sadržale mešavinu karbohidrata i pospešivača staklastosti kako je opisano u Primeru 1 na različitm pH vrednostima. Koncentrovana kultura probiotskih bakterija L. rhamnosus je dobijena iz komercijalnog izvora i pripremljena u suvoj supstanci kako je opisano u Primeru 1 i 3. Stabilni prah je podvrgnut uslovima ubrzanog skladitšenja na 40°C i 33%RH tokom 8 nedelja. Slika 6 pokazuje dejstvo pH vrednosti te emulzije na stabilnost osušenih bakterija. Rezultati su pokazali da je postignuta optimalna stabilnost na neutralnoj pH ( ß7).
PRIMER 11
Stabilni suvi prah koji je sadržao enzim:
[0075] Hidrogel formula koja je sadržala 40 težinskih procenata fitaze (BASF, GmBH) je pripremeljna mešanjem 400 g mešavine karbohidrata i 200 g mešavine pospešivača staklastosti kao što je opisano u Primeru 1 i 4 i 400 g faze u 1.000 ml vode. Isečena formulacija hidrogela je trenutno zamrznuta u tečnom azotu i osušena u vakuumskoj peći na primarnoj i sekundarnoj temperaturi sušenja od 50°C. Za određivanje punjenja i stabilnost skladištenja osušene formule: suvi uzorak je precizno izmeren (<100 mg) u cevi mikrocentrifuge. Dodato je 200 µl dimetil sulfoksida (DMSO). Formulacija je rastvorena u DMSO puferskom sredstvu vrtloženjem. U ovaj uzorak je dodato 0,8 ml rastvora koji sadrži 0,05 N NaOH, 0,5% SDS i 0,075 M limunske kiseline (trinatrijumova so). Cevi se sonikuju tokom 10 min na 45°C, posle čega sledi kratko centrifugiranje na 5.000 ob/min tokom 10 min. Alikvoti bistrog rastvora DMSO/NaOH/SDS/citrata se prenesu u pregrade mirkoploče i analiziraju za sadržaj proteina korišćenjem postupka Bradfordovog (Bradford) ogleda. Stabilnost suve supstance stabilnog enzima posle izlaganja temperaturi do 95°C tokom 20 min je značajno viša nego suvi enzim bez supstance iz ovog pronalaska.
PRIMER 12
Stabilni suvi prah koji sadrži ISAV vakcinu:
[0076] Koncentrovana emulzija ISAV vakcine (Novozyme, Denmark) se dobija u skladu sa Primerom 4 izuzev što 20 ml rastvora 4% histozana u 0,5% sirćetne kiseline je dodato u emulziju koja sadrži koncentrat ISAV vakcine, mešavina karbohidrata i pospešivača staklastosti. Dodato je 0,5 g dibaznog kalcijum fosfata, posle čega je usledilo 0,5 g glukonolaktona. Emulzija je ostavljena da se stvrdne na sobnoj temperaturi tokom sledeća 2 sata da bi se formirao čvrst hidrogel. Čvrsti gel se reže na tanke i duge niti, korišćenjem komercijalno dostupnog rezača/sekača. Tanke niti su direktno učitane na tacne u vlažnom obliku ili su trenutno zamrznute u tečnom azotu i raspoređene na tacnu sa kapacitetom punjenja od 5.381,9552 g/m<2>(1.500g/sq ft) postavljene u zamrzivač sušač za sušenje kako je opisano u Primeru 3. Aktivnost vode (Aw) formulacije je 0,25. Suva formulacija je dodatno mlevena do finog praha korišćenjem standardne opreme za mlevenje čekićem i prosejana kroz mrežice od 50-150 mikrona. Stabilna suva ISAV supstanca se koristi za oralnu vakcinaciju oblaganjem sa gornje strane komercijalne hrane za životinje pomenutom suvom supstancom i davanjem te smese Atlanskom lososu.
PRIMER 13
Priprema mamca invazivnih vrsta
[0077] Peletirani mamac za specifično ciljane invazivne vrste prema ovom pronalasku se dobija tako što sadrži pesticid. Pripremi se 200 g formulacije kako je opisano u Primeru 9 i doda u 200 gm vode. U ovaj rastvor se doda 90 gm Rotenona i 0,5 gm kalcijum fosfata dvobaznog, posle čega sledi 0,5 gm glukonolaktona. Ta emulzija se odmah suši raspršivanjem u standardnom industrijskom sušaču, i ta suva formulacija se koristi za ciljanje specifičnih invazivnih vrsta bez štetnog dejstva toksina na okolinu ili blizu ekosistema.
PRIMER 14
Priprema zaštićene biljne probiotske formulacije:
[0078] Biološki kontrolni agens kao što je Rhizobacteria se pripremi u suvoj supstanci prema Primeru 4. Delotvornost suve supstance Rhizobacteria se procenjuje na rastu salate pri gnotobiotskim uslovima. Doze od 100 mg od Rhizobacteria suve supstance po biljci su inokulirane u tegle sa peskom i zasađene sa prethodno klijalim (24 sata) zasadima salate. Doza nutrijenta od 5 ml sterilisanog Hoagland rastvora se primenjuje na biljke u tegli. Tegle se raspoređuju nasumično u komorama za rast održanim na 28°C sa fotoperiodom od 12 sati. Tokom intervala na svakih 7 dana posle inokulacije, biljke i pesak na biljkama su pažljivo uklonjeni iz tegli.
[0079] Koreni su orpani u sterilnom fosfatnom puferskom rastvoru (pH 7,0), i merenje dužine korena je zapisano.
Referentni SAD (US) patenti:
[0080]
6,190,701 Composition and method for stable inject- able liquids March 1999. Roser et al.
6,964,771 Method for stably incorporating substanc- es within dry, foamed glass matrices. September 1997. Roser et al.
5,766,520 Preservation by formulation formation June 1998. Bronshtein 6,534,087
Process for preparing a pharmaceutical composition. June 2001. Busson and Schroeder.
6,884,866 Bulk drying and the effects of inducing bubble nucleation. April 2005. Bronshtein. 7,153,472 Preservation and formulation of bioactive materials for storage and delivery in hydrophobic carriers December, 2006 Bronshtein
20080229609 Preservation by Vaporization. June 2005. Bronshtein
6,306,345 Industrial scale barrier technology for preservation of sensitive biological materials at am- bient temperatures October 2001. Bronshtein et al.
7381425 Preservation of bioactive materials by freeze dried foam. September 2006. Truong-le, Vu.
Druge reference:
[0081]
Morgan, C.A., Herman, N., White, P.A., Vesey, G.2006. Preservation of micro-organisms by drying; a review. J. Microbiol. Methods.66(2):183-93.
Capela, P., Hay, T. K. C., & Shah, N. P. 2006. Effect of cryoprotectants, prebiotics and microencapsula- tion on survival of probiotic organisms in yoghurt and freeze-dried yoghurt. Food Research International, 39(3) 203-211).
Annear, 1962. The Preservation of Leptospires by Drying From the Liquid State, J. Gen. Microbiol., 27:341-343.
Crowe, J.F., Carpenter, J.F. and Crowe, L.M.1998. THE ROLE OF VITRIFICATION IN ANHYDROBIO- SIS. Annu. Rev. Physiol.60:73-103.

Claims (13)

Patentni zahtevi
1. Supstanca za stabilizaciju pri suvom skladištenju u staklastom stanju pripremljena prema postupku pripreme iz bilo kog od patentnih zahteva 7 do 10 obuhvata biološki materijal, pri čemu ta supstanca za stabilizaciju obuhvata (a) 0,5-90% komponente karbohidrata, pri čemu komponenta karbohidrata obuhvata disaharid, oligosaharid i polisaharid, (b) 0,5-40% komponente proteina koja obuhvata hidrolizovani protein, i (c) so organske kiseline koja obuhvata između 0,5-20% karboksilne kiseline, pri čemu biološki materijal obuhvata živu, mrtvu ili atenuiranu ćeliju, mikrob, virus, bakteriju, probiotsku bakteriju, bakteriju biljke ili bakteriju zemljišta, kvasac, kulturu ćelije, protein, rekombinantni protein, enzim, peptid, hormon, vakcinu, antibiotik, lek, ili njihovu mešavinu;
pri čemu se taj polisaharid bira iz grupe koja obuhvata celulozni acetat ftalat (CAP), karboksi-metilcelulozu, pektin, natrijum alginat, soli algininske kiseline, hidroksil propil metil celulozu (HPMC), metil celulozu, karagenan, gelan gumu, guar gumu, arapsku gumu, ksantan gumu, karuba gumu, hitozan i derivate hitozana, poliglikolnu kiselinu, skrobove i modifikovane skrobove, i njihove mešavine; pri čemu je taj oligosaharid izabran iz grupe koja obuhvata ciklodekstrine, inulin, maltodekstrine, dekstrane, frukto-oligosaharide (FOS), galaktooligosaharide (GOS), manan-oligosaharide (MOS), i mešavinu navedenih;
pri čemu se karboksilna kiselina bira iz grupe koja obuhvata mlečnu kiselinu, askorbinsku kiselinu, maleinsku kiselinu, oksalnu kiselinu, malonsku kiselinu, jabučnu kiselinu, sukcinsku kiselinu, limunsku kiselinu, glukonsku kiselinu, glutaminsku kiselinu, i njihove mešavine.
2. Supstanca za stabilizaciju pri suvom skladištenju iz patentnog zahteva 1, pri čemu je disaharid prisutan u 40-80%, oligosaharid je prisutan u 5-10%, i polisaharid je prisutan u 5-10%, svaki procenat je zasnovan na ukupnoj težini komponente karbohidrata.
3. Supstanca za stabilizaciju pri suvom skladištenju iz patentnog zahteva 1, pri čemu se hidrolizovani protein bira iz grupe koja obuhvata hidrolizovani kazein, hidrolizovani protein surutke, hidrolizovani protein graška, hidrlizovani protein soje i njihove mešavine.
4. Supstanca za stabilizaciju pri suvom skladištenju iz patentnog zahteva 1, pri čemu je disaharid izabran iz grupe koja obuhvata trehalozu, saharozu, laktozu, i njihovu mešavinu.
5. Supstanca za stabilizaciju pri suvom skladištenju iz patentnog zahteva 1, pri čemu je težinski odnos disaharida/oligosaharida/polisaharida od oko 10:0,2:0,1 do oko 10:2:1.
6. Supstanca za stabilizaciju pri suvom skladištenju iz patentnog zahteva 1, pri čemu je disaharid prisutan sa 10-90%, oligosaharid je prisutan sa 1-10% i polisaharid je prisutan sa 0,1-10%, svaki procenat zasnovan na ukupnoj težini komponente karbohidrata.
7. Postupak pripreme za konzervisanje biološkog materijala, obuhvata:
(a) dodavanje mešavine suve supstance u biološki materijal u hranljivu podlogu da se formira viskozna emulzija, pri čemu je težinska masa biološkog materijala u hranljivoj podlozi između 5% i 30% w/v, i pri čemu je dodata mešavina supstance u hranljivoj podlozi između 10% i 60%, pri čemu je konačni sadržaj čvrste supstance u emulziji od 20% do 60%, pri čemu mešavina suve supstance obuhvata disaharid, oligosaharid, polisaharid, hidrolizovani protein, i so karboksilne kiseline;
(b) trenutno zamrzavanje emulzije u tečnom azotu da se formiraju čvrste zamrznute čestice u obliku perlica, kapi ili niski;
(c) primarno sušenje zamrznutih čestica isparavanjem, pod vakuumom, na temperaturi iznad temperature zamrzavanja zamrznutih čestica da bi se formirala primarno osušena formulacija; i
(d) sekundarno sušenje primarno osušene formulacije na maksimalnom vakuumu i temperaturi od 20°C ili višoj tokom vremenskog perioda dovoljnog da se smanji aktivnost vode primarno osušene formulacije, pri čemu je dobijen konzervisan biološki materijal u staklastom stanju,
pri čemu konzervisani biološki materijal obuhvata (a) 0,5-90% komponente karbohidrata, pri čemu komponenta karbohidrata obuhvata disaharid, oligosaharid i polisaharid, (b) 0,5-40% od komponente proteina koja obuhvata hidrolizovani protein, i (c) so organske kiseline koja obuhvata između 0,5-20% karboksilne kiseline, pri čemu biološki materijal obuhvata živu, mrtvu ili atenuiranu ćeliju, mikrob, virus, bakteriju, probiotsku bakteriju, bakteriju biljke ili zemljišta, kvasac, ćelijsku kulturu, protein, rekombinantni protein, enzim, peptid, hormon, vakcinu, antibiotik, lek, ili mešavinu pomenutih; pri čemu je polisaharid izabran iz grupe koja obuhvata celulozni acetat ftalat (CAP), karboksi-metilcelulozu, pektin, natrijum alginat, soli algininske kiseline, hidrokil propil metil celuloznu (HPMC), metil celulozu, karagenan, gelan gumu, guar gumu, arapsku gumu, ksantan gumu, karuba gumu, hitozan i derivate hitozana, poliglikolnu kiselinu, skrobove i modifikovane skrobove, i mešavinu pomenutih; pri čemu je oligosaharid izabran iz grupe koja obuhvata ciklodekstrine, inulin, maltodekstrine, dekstrane, frukto-oligosaharide (FOS), galaktooligosaharide (GOS), manan-oligosaharide (MOS), i mešavinu pomenutih;
pri čemu je karboksilna kiselina izabrana iz grupe koja obuhvata mlečnu kiselinu, askorbinsku kiselinu, maleinsku kiselinu, oksalnu kiselinu, malonsku kiselinu, jabučnu kiselinu, sukcinsku kiselinu, limunsku kiselinu, glukonsku kiselinu, glutaminsku kiselinu i mešavinu pomenutih.
8. Postupak pripreme iz patentnog zahteva 7, još obuhvata korak aklimatizacije čvrste zamrznute čestice pre pokretanja primarnog koraka sušenja, pri čemu se korak aklimatizacije izvodi pod vakuumom i temperaturom ispod temperature zamrzavanja zamrznutih čestica.
9. Postupak pripreme iz patentnog zahteva 7, pri čemu se emulzija stegne u čvrst hidrogel promenom pH ili temperature ili unakrsnim povezivanjem polimernih lanaca pre trenutnog zamrzavanja.
10. Postupak pripreme iz patentnog zahteva 7, pri čemu aktivnost vode (Aw) suve supstance za stabilizaciju pri suvom skladištenju jeste Aw<0,3 ili niža.
11. Proizvod za oralnu potršnju obuhvata suvu supstancu za stabilizovanje iz patentnog zahteva 1.
12. Proizvod iz patentnog zahteva 11, pri čemu je taj proizvod nutraceutski proizvod, farmaceutski proizvod ili proizvod vakcina.
13. Proizvod iz patentnog zahteva 11, pri čemu je taj proizvod prehrambeni proizvod ili proizvod za prehranu životinja.
RS20180853A 2010-08-13 2011-08-12 Supstanca za stabilizaciju bioloških materijala za suvo skladištenje RS57588B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US37371110P 2010-08-13 2010-08-13
EP11817090.1A EP2603100B1 (en) 2010-08-13 2011-08-12 Dry storage stabilizing composition for biological materials
PCT/US2011/047547 WO2012021783A2 (en) 2010-08-13 2011-08-12 Dry storage stabilizing composition for biological materials

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS57588B1 true RS57588B1 (sr) 2018-11-30

Family

ID=45564983

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180853A RS57588B1 (sr) 2010-08-13 2011-08-12 Supstanca za stabilizaciju bioloških materijala za suvo skladištenje

Country Status (26)

Country Link
US (1) US9504275B2 (sr)
EP (1) EP2603100B1 (sr)
JP (1) JP5727611B2 (sr)
KR (1) KR101863920B1 (sr)
CN (2) CN104147605A (sr)
AR (2) AR082682A1 (sr)
AU (1) AU2011289272B2 (sr)
BR (1) BR112013003244B1 (sr)
CA (1) CA2807997C (sr)
CL (1) CL2011001984A1 (sr)
DK (1) DK2603100T3 (sr)
ES (1) ES2676656T3 (sr)
HR (1) HRP20181121T1 (sr)
HU (1) HUE039058T2 (sr)
LT (1) LT2603100T (sr)
MX (1) MX350047B (sr)
MY (1) MY166979A (sr)
NZ (1) NZ607226A (sr)
PH (1) PH12013500272B1 (sr)
PL (1) PL2603100T3 (sr)
PT (1) PT2603100T (sr)
RS (1) RS57588B1 (sr)
RU (1) RU2573324C2 (sr)
SG (1) SG187250A1 (sr)
SI (1) SI2603100T1 (sr)
WO (1) WO2012021783A2 (sr)

Families Citing this family (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8968721B2 (en) 2005-12-28 2015-03-03 Advanced Bionutrition Corporation Delivery vehicle for probiotic bacteria comprising a dry matrix of polysaccharides, saccharides and polyols in a glass form and methods of making same
WO2007079147A2 (en) 2005-12-28 2007-07-12 Advanced Bionutrition Corporation A delivery vehicle for probiotic bacteria comprising a dry matrix of polysaccharides, saccharides and polyols in a glass form and methods of making same
EP2117354B1 (en) 2006-12-18 2018-08-08 Advanced BioNutrition Corp. A dry food product containing live probiotic
US8778384B2 (en) 2008-03-24 2014-07-15 Advanced Bionutrition Corporation Compositions and methods for encapsulating vaccines for the oral vaccination and boostering of fish and other animals
EP2105129B1 (en) * 2008-03-24 2018-01-17 Intervet International B.V. Encapsulated Vaccines for the Oral Vaccination and Boostering of Fish and Other Animals
WO2010111565A2 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Advanced Bionutrition Corporation Microparticulated vaccines for the oral or nasal vaccination and boostering of animals including fish
EP2435554B1 (en) 2009-05-26 2017-07-26 Advanced Bionutrition Corporation Stable dry powder composition comprising biologically active microorganisms and/or bioactive materials and methods of making
US9504750B2 (en) 2010-01-28 2016-11-29 Advanced Bionutrition Corporation Stabilizing composition for biological materials
PL2529004T3 (pl) 2010-01-28 2017-12-29 Advanced Bionutrition Corporation Sucha szklista kompozycja zawierająca bioaktywny materiał
AR082682A1 (es) 2010-08-13 2012-12-26 Advanced Bionutrition Corp Composicion estabilizadora de almacenamiento en seco para materiales biologicos
AR086993A1 (es) 2011-06-20 2014-02-05 Gen Biscuit Masa de galletita
US20130089638A1 (en) * 2011-10-11 2013-04-11 Mead Johnson Nutrition Company Compositions Comprising Maltotriose And Methods Of Using Same To Inhibit Damage Caused By Dehydration Processes
GB201121992D0 (en) 2011-12-21 2012-02-01 Danisco Process
MX356072B (es) * 2012-03-23 2018-05-14 Advanced Bionutrition Corp Composicion estabilizante para materiales biologicos.
BR112015000041B1 (pt) * 2012-07-05 2020-11-03 Centro Nacional De Tecnología Y Seguridad Alimentaria, Laboratorio Del Ebro micropartícula, método para a obtenção da mesma, composição, produto alimentar, farmacêutico, cosmecêutico ou nutracêutico e uso de uma micropartícula, composição ou produto
DK3287518T3 (da) 2012-08-20 2022-02-21 Chr Hansen As Fremgangsmåde til frysetørring af et bakterieholdigt koncentrat
US20140193456A1 (en) * 2013-01-09 2014-07-10 Hristem Mitkov Dyanov Method for Drying-Conservation of Natural Substances
JP6230796B2 (ja) * 2013-03-08 2017-11-15 日清食品ホールディングス株式会社 凍結乾燥菌試料およびその製造方法
WO2014159051A1 (en) * 2013-03-13 2014-10-02 Advanced Bionutrition Corp. Stable bioactive substances and methods of making
WO2014203838A1 (ja) * 2013-06-17 2014-12-24 株式会社カネカ 液状食品組成物
CN104413334A (zh) * 2013-08-30 2015-03-18 深圳华大基因科技有限公司 可食用组合物及其制备方法和用途
PL225613B1 (pl) 2013-10-08 2017-04-28 Zachodniopomorski Univ Tech W Szczecinie Sposób wytwarzania prozdrowotnego produktu spożywczego
PL225614B1 (pl) 2013-10-08 2017-04-28 Zachodniopomorski Univ Tech W Szczecinie Prozdrowotny produkt spożywczy
RU2543353C1 (ru) * 2014-01-09 2015-02-27 Марк Абович Малков Способ профилактики токсикозов у сельскохозяйственных животных и птицы
NZ726315A (en) * 2014-05-14 2018-04-27 Merial Inc Methods for freeze-drying and rehydrating biologics
CA2964480A1 (en) 2014-10-31 2016-05-06 Whole Biome Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
RU2722036C2 (ru) * 2015-02-11 2020-05-26 Превтек Майкробиа Инк. Усовершенствованная сухая матрица для встраивания жизнеспособных escherichia coli, способ ее получения и ее использования
WO2016171741A1 (en) * 2015-04-23 2016-10-27 Bridwell Randolph Earl Methods and compositions for lowering ice temperature and freezing point of water
WO2017001590A1 (en) 2015-06-30 2017-01-05 Nestec S.A. Composition suitable for protecting microorganisms
US12558395B2 (en) 2015-07-29 2026-02-24 Advanced Bionutrition Corp. Stable dry probiotic compositions for special dietary uses
MY194231A (en) * 2015-07-29 2022-11-23 Advanced Bionutrition Corp Stable dry probiotic compositions for special dietary uses
JP2017046666A (ja) * 2015-09-04 2017-03-09 高砂香料工業株式会社 粉末状風味付与剤の製造方法
WO2017044473A1 (en) 2015-09-11 2017-03-16 Novozymes Bioag A/S Stable inoculant compositions and methods for producing same
EA039591B1 (ru) * 2015-10-30 2022-02-15 Кабусики Кайся Якулт Хонса Способ получения осушенных микробных клеток
AU2016365214B2 (en) * 2015-12-04 2021-02-25 Advanced Bionutrition Corp. Stable dry compositions having no or little sugars
SG11201805944YA (en) * 2015-12-22 2018-08-30 Mccormick & Co Inc High integrity encapsulation product
WO2017143460A1 (en) * 2016-02-25 2017-08-31 Avivagen Inc. Plant or microorganism-derived carotenoid-oxygen copolymer compositions, methods of identifying, quantifying and producing same and uses thereof
BR112018017342B1 (pt) * 2016-02-26 2022-11-29 Dsm Ip Assets B.V. Composição revestida, processo para produção da referida composição revestida e uso da mesma, produtos alimentícios, produtos de ração, suplementos dietéticos e/ou produtos farmacêuticos
WO2017160835A1 (en) 2016-03-14 2017-09-21 The Regents Of The University Of Michigan A surface tension mediated lyo-processing technique for preservation of biologics
WO2017209823A2 (en) 2016-03-14 2017-12-07 The University Of Chicago Injectable pastes based on oppositely charged polymer/calcium phosphate hybrid nanoparticles
RU2619898C1 (ru) * 2016-03-24 2017-05-19 Общество с ограниченной ответственностью "Биологическая среда" Способ консервации биологических материалов
CN105602875B (zh) * 2016-03-30 2018-06-19 广州科盛生物科技有限公司 一种适于常温存放的乳酸菌冻干粉的制备方法
WO2017219106A1 (pt) 2016-06-24 2017-12-28 Yessinergy Holding S/A Composição imunomoduladora e promotora de crescimento e de controle da população de bactérias indesejáveis da microbiota intestinal e seu uso
EP3500177A1 (en) * 2016-08-18 2019-06-26 Mitchell Lawrence Jones Systems for obtaining samples using ingestible devices
WO2018141791A1 (en) * 2017-02-03 2018-08-09 Dsm Ip Assets B.V. Improved process
EP3600366A4 (en) * 2017-03-27 2020-12-23 Praj Industries Limited PROCESS FOR THE PREPARATION OF PROBIOTIC POWDER FORMULATIONS FOR MONOGASTRIC ANIMALS
DE112017007639T5 (de) * 2017-06-13 2020-06-04 Chung Chin SUN Neues verfahren zum blutplasmaprotein-aktivitätserhalt
US20200171107A1 (en) * 2017-07-07 2020-06-04 Osel, Inc. High potency stable formulations of vaginal lactobacillus
WO2019014338A1 (en) * 2017-07-11 2019-01-17 Universal Stabilization Technologies, Inc. METHOD FOR PRESERVING BIOPHARMACEUTICAL PRODUCTS
WO2019014576A1 (en) 2017-07-14 2019-01-17 The University Of Chicago LYOPHILIZED FORMULATIONS COMPRISING NANOPARTICLES AND METHODS OF LYOPHILIZATION
JP2020532515A (ja) 2017-08-30 2020-11-12 ペンデュラム セラピューティクス， インコーポレイテッド マイクロバイオーム関連障害の処置のための方法および組成物
JP2019176753A (ja) * 2018-03-30 2019-10-17 有限会社 三陸とれたて市場 魚介類の凍結包装体の製造方法
JP7677793B2 (ja) 2018-05-04 2025-05-15 セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ 硝酸レダクターゼ活性の回復改善
EP3794017A4 (en) * 2018-05-17 2022-03-09 Lumen Bioscience, Inc. ARTHROSPIRA PLATENSIS ORAL VACCINE DELIVERY PLATFORM
WO2020004933A1 (ko) * 2018-06-26 2020-01-02 씨제이제일제당 (주) 구연산염을 포함하는 유산균 동결 보호용 조성물
CN108888762A (zh) * 2018-08-15 2018-11-27 福建傲农生物科技集团股份有限公司 一种含益生菌代谢产物的组合物
JP2022509793A (ja) * 2018-11-21 2022-01-24 エボニック オペレーションズ ゲーエムベーハー 乾燥した生物学的組成物およびその方法
EP3698644A1 (en) 2019-02-20 2020-08-26 Kl-Teho Oy A fishing bait, a mouldable composition for manufacturing the fishing bait, a method for manufacturing the fishing bait and a use of the mouldable composition
WO2020219442A1 (en) * 2019-04-22 2020-10-29 Pendulum Therapeutics, Inc. Microbial compositions and methods for greater tolerability and prolonged shelf life
CA3143735A1 (en) 2019-07-03 2021-01-07 Lumen Bioscience, Inc. Arthrospira platensis non-parenteral therapeutic delivery platform
RU2726637C1 (ru) * 2019-07-26 2020-07-15 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-внедренческий центр Агроветзащита" (ООО "НВЦ Агроветзащита") Фармацевтическая композиция и способ ее получения
JP2022549133A (ja) * 2019-09-16 2022-11-24 ヴェダンタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド 細菌を保存するための方法および組成物
CN110810399B (zh) * 2019-11-21 2021-07-09 康妍葆(北京)干细胞科技有限公司 细胞运输保护液及制备方法和应用
KR20220146614A (ko) * 2020-02-28 2022-11-01 업카라 인코포레이티드 모세관 보조 유리화 방법 및 생물학적 시료의 보존을 위한 물질
TWI758750B (zh) 2020-06-17 2022-03-21 財團法人食品工業發展研究所 製備水包油包水型多重乳液之方法
EP4178621A4 (en) * 2020-07-13 2024-07-24 University of Cincinnati ENHANCED STORAGE OF PACKED RED BLOOD CELLS USING HIGH VISCOSITY BUFFERED STORAGE SOLUTION
US20230333044A1 (en) * 2020-09-24 2023-10-19 University Of Cincinnati Solute-phase electrochemical aptamer sensors with rapid time-to-measurement
US20240026281A1 (en) * 2020-11-30 2024-01-25 Chr. Hansen A/S Stabilised lactic acid bacteria compositions
WO2022165420A1 (en) * 2021-02-01 2022-08-04 Azitra Inc Methods and compositions for increasing protein expression in genetically engineered bacteria
WO2022231347A1 (ko) * 2021-04-28 2022-11-03 인천대학교 산학협력단 세포외소포 동결건조 보호제
CN113652359B (zh) * 2021-07-05 2023-07-07 上海商学院 一种乳酸菌冻干粉、制备方法及其冻干保护剂
CN114190366B (zh) * 2021-12-29 2023-04-07 松山湖材料实验室 冻存液及其制备方法与在人正常肝细胞的应用
US20250188438A1 (en) 2022-03-08 2025-06-12 CONNEXT Co.,Ltd Composition comprising collagenase, calcium, histidine, and glycine, and method for stabilizing collagenase
CN119031906A (zh) * 2022-04-13 2024-11-26 法尼娅·伊尔沙托夫娜·马加诺娃 用于制备含有胰岛素的物质的口服形式的方法
KR102831764B1 (ko) * 2022-04-29 2025-07-09 창원시 단감 착즙 캡슐의 제조방법 및 이 방법으로 제조된 단감 착즙 캡슐
KR102831765B1 (ko) * 2022-04-29 2025-07-09 창원시 고추 착즙 캡슐의 제조방법 및 이 방법으로 제조된 고추 착즙 캡슐
CN114672446B (zh) * 2022-05-31 2022-08-12 广东海洋大学 一种丁酸梭菌制剂的制备方法及应用
KR102773839B1 (ko) * 2022-08-31 2025-02-27 주식회사 래디안 프로바이오틱스 세포외소포를 함유하는 피부 개선용 조성물 및 이의 제조 방법
WO2024064199A1 (en) * 2022-09-20 2024-03-28 Dry Harvest, LLC Systems and methods for acclimatizing food
KR102833691B1 (ko) * 2023-03-14 2025-07-17 주식회사 미트트리 염용성 단백질 추출을 이용한 단백질 캡슐화 공정 및 그에 따라 제조된 단백질 캡슐
CN120058269A (zh) * 2025-03-25 2025-05-30 淮安市德亨砂粉科技有限公司 一种高耐久型混凝土防冻添加剂的制备方法

Family Cites Families (183)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3241977A (en) 1962-01-02 1966-03-22 Gen Foods Corp Effervescent beverage powders
GB1232057A (sr) * 1968-10-07 1971-05-19
US3897307A (en) 1974-10-23 1975-07-29 Hansens Lab Inc Stabilized dry cultures of lactic acid-producing bacteria
JPS57114527A (en) * 1979-10-29 1982-07-16 Merck & Co Inc Vaccine stabilizer
PT71926B (en) 1979-10-29 1982-03-31 Merck & Co Inc Process for preparing a liquid vaccine comprising a stabilizer
US4337242A (en) 1980-02-05 1982-06-29 Merck & Co., Inc. Vaccine stabilizer containing L-glutamic acid and L-arginine
JPS57114527U (sr) 1981-01-08 1982-07-15
JPH0779694B2 (ja) 1985-07-09 1995-08-30 カドラント バイオリソ−シズ リミテツド 蛋白質および同類品の保護
US4656767A (en) 1986-02-18 1987-04-14 Tarrant Thomas G Cable tag
EP0259739A1 (en) 1986-09-10 1988-03-16 Rhone-Poulenc Inc. Improved stability of freeze-dried cultures
JPH0622746Y2 (ja) 1987-08-04 1994-06-15 不二サッシ株式会社 壁板で覆われた壁面角部の覆板
US6451567B1 (en) 1988-09-07 2002-09-17 Omegatech, Inc. Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms
US5340742A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
GB9002003D0 (en) * 1990-01-29 1990-03-28 Ici Plc Stabilized cultures of microorganisms
US5407957A (en) 1990-02-13 1995-04-18 Martek Corporation Production of docosahexaenoic acid by dinoflagellates
EP0471904A1 (en) 1990-05-09 1992-02-26 Milpak, Inc. Instant yogurt composition and process
US5262187A (en) 1990-06-28 1993-11-16 The Pillsbury Company Low-fat cereal-grain food composition
CA2051092C (en) 1990-09-12 2002-07-23 Stephen A. Livesey Method and apparatus for cryopreparation, dry stabilization and rehydration of biological suspensions
US5658767A (en) 1991-01-24 1997-08-19 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
TW209174B (sr) 1991-04-19 1993-07-11 Takeda Pharm Industry Co Ltd
US5227373A (en) 1991-10-23 1993-07-13 Bristol-Myers Squibb Co. Lyophilized ifosfamide compositions
JP2558203B2 (ja) * 1992-06-18 1996-11-27 ラウエル エックハルト 微生物含有培地の凍結乾燥物とその製造方法
US5981719A (en) 1993-03-09 1999-11-09 Epic Therapeutics, Inc. Macromolecular microparticles and methods of production and use
AU2215995A (en) 1994-04-07 1995-10-30 Akzo Nobel N.V. Freeze-dried compositions comprising rna
US6586006B2 (en) 1994-08-04 2003-07-01 Elan Drug Delivery Limited Solid delivery systems for controlled release of molecules incorporated therein and methods of making same
US6290991B1 (en) 1994-12-02 2001-09-18 Quandrant Holdings Cambridge Limited Solid dose delivery vehicle and methods of making same
AUPM823094A0 (en) 1994-09-16 1994-10-13 Goodman Fielder Limited Probiotic compositions
US5512547A (en) 1994-10-13 1996-04-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Pharmaceutical composition of botulinum neurotoxin and method of preparation
US5556771A (en) 1995-02-10 1996-09-17 Gen-Probe Incorporated Stabilized compositions of reverse transcriptase and RNA polymerase for nucleic acid amplification
US6309671B1 (en) * 1995-04-14 2001-10-30 Inhale Therapeutic Systems Stable glassy state powder formulations
AU5346296A (en) 1995-04-17 1996-11-07 Japan As Represented By Director-General Of Agency Of Industrial Science And Technology Novel microorganisms capable of producing highly unsaturated fatty acids and process for producing highly unsaturated fa tty acids by using the microorganisms
GB9508691D0 (en) 1995-04-28 1995-06-14 Pafra Ltd Stable compositions
DE69628007T2 (de) 1995-06-07 2003-11-27 Elan Drug Delivery Ltd., Ruddington Verfahren zur stabilen einarbeitung von substanzen in trockene geschäumte glasmatrizen und auf diese weise hergestellte zusammensetzungen
US5976580A (en) 1995-06-07 1999-11-02 Novus International, Inc. Nutrient formulation and process for enhancing the health, livability, cumulative weight gain or feed efficiency in poultry and other animals
US6964771B1 (en) 1995-06-07 2005-11-15 Elan Drug Delivery Limited Method for stably incorporating substances within dry, foamed glass matrices
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
DE19539574A1 (de) 1995-10-25 1997-04-30 Boehringer Mannheim Gmbh Zubereitungen und Verfahren zur Stabilisierung biologischer Materialien mittels Trocknungsverfahren ohne Einfrieren
US5958455A (en) 1996-02-09 1999-09-28 Quadrant Holdings Cambridge Ltd Oral solid dosage forms, methods of making same and compositions thereof
EP1015826A2 (en) 1996-05-29 2000-07-05 Universal Preservation Technologies, Inc. Long-term shelf preservation by vitrification
US5766520A (en) * 1996-07-15 1998-06-16 Universal Preservation Technologies, Inc. Preservation by foam formation
US6509146B1 (en) 1996-05-29 2003-01-21 Universal Preservation Technologies, Inc. Scalable long-term shelf preservation of sensitive biological solutions and suspensions
DE69737063T2 (de) 1996-07-23 2007-07-19 Nagase Chemtex Corp. Verfahren zur herstellung von decosahexaensäure und decosapentsäure
US5715774A (en) 1996-10-31 1998-02-10 Aquatic Bioenhancement Systems Animal feedstocks comprising harvested algal turf and a method of preparing and using the same
US6468782B1 (en) 1996-12-05 2002-10-22 Quadrant Healthcare (Uk) Limited Methods of preserving prokaryotic cells and compositions obtained thereby
DK0862863T4 (da) 1997-01-09 2008-12-01 Nestle Sa Kornprodukt indeholdende probiotika
US6726934B1 (en) 1997-10-09 2004-04-27 Vanderbilt University Micro-particulate and nano-particulate polymeric delivery system
CN1286725A (zh) * 1997-11-26 2001-03-07 环球保藏技术股份有限公司 敏感性生物样品的玻化保质法
JP4549529B2 (ja) 1998-01-30 2010-09-22 サイオス，インコーポレーテッド ペプチドまたはタンパク質の制御放出送達
US6338856B1 (en) 1998-02-27 2002-01-15 Texas Tech University Seaweed supplement diet for enhancing immune response in mammals and poultry
GB9808922D0 (en) 1998-04-24 1998-06-24 Cantab Pharmaceuticals Res Ltd Virus preparations
US6423345B2 (en) 1998-04-30 2002-07-23 Acusphere, Inc. Matrices formed of polymer and hydrophobic compounds for use in drug delivery
US6306345B1 (en) 1998-05-06 2001-10-23 Universal Preservation Technologies, Inc. Industrial scale barrier technology for preservation of sensitive biological materials at ambient temperatures
IL143197A0 (en) 1998-11-20 2002-04-21 Rtp Pharma Inc Dispersible phospholipid stabilized microparticles
AU1908500A (en) 1998-11-30 2000-06-19 Hercules Incorporated Controlled release carbohydrate embedded in a crosslinked polysaccharide
US6190701B1 (en) 1999-03-17 2001-02-20 Peter M. Ronai Composition and method for stable injectable liquids
ES2290028T3 (es) 1999-05-04 2008-02-16 Anhydro Limited Metodo para la conservacion de virus y micoplasma.
GB9914412D0 (en) * 1999-06-22 1999-08-18 Worrall Eric E Method for the preservation of viruses,bacteria and biomolecules
CA2382061A1 (en) 1999-08-19 2001-02-22 Victor Bronshtein Preservation of bacterial cells at ambient temperatures
FR2801316B1 (fr) 1999-11-18 2005-03-25 Rhodia Food Procede de sechage des bacteries
DE19962427A1 (de) 1999-12-22 2001-07-12 Nutrinova Gmbh Verkapselte multifunktionelle, biologisch aktive Nahrungsmittelkomponente, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Anwendung
US6338866B1 (en) 2000-02-15 2002-01-15 Applied Food Biotechnology, Inc. Pet foods using algal or fungal waste containing fatty acids
GB0005839D0 (en) * 2000-03-10 2000-05-03 Provita Eurotech Ltd Storage and delivery of micro-organisms
US6368602B1 (en) 2000-06-16 2002-04-09 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd Mucosal immunization against hepatitis A virus (HAV) through rectal administration of HAV vaccine
PL203804B1 (pl) 2000-06-27 2009-11-30 Hoffmann La Roche Sposób wytwarzania kompozycji farmaceutycznej w postaci spoistej, płytkowej, piankowej, gąbczastej lub ciastowatej struktury i kompozycja farmaceutyczna otrzymana tym sposobem
US6653062B1 (en) 2000-07-26 2003-11-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Preservation and storage medium for biological materials
US6592863B2 (en) * 2000-08-22 2003-07-15 Nestec S.A. Nutritional composition
US6537666B1 (en) 2000-10-23 2003-03-25 Universal Preservation Technologies, Inc. Methods of forming a humidity barrier for the ambient temperature preservation of sensitive biologicals
US6872357B1 (en) 2000-11-22 2005-03-29 Quadrant Drug Delivery Limited Formulation of preservation mixtures containing sensitive biologicals to be stabilized for ambient temperature storage by drying
US7153472B1 (en) 2000-11-22 2006-12-26 Quadrant Drug Delivery Limited Preservation and formulation of bioactive materials for storage and delivery in hydrophobic carriers
AU2002248192A1 (en) 2000-12-15 2002-08-12 Stratagene Room temperature stable competent cells
KR20040018319A (ko) 2000-12-18 2004-03-03 프로비오헬쓰 엘엘씨 락토바실러스 카제이 균주 κε01에서 유래된 정장제 화합물
AUPR272901A0 (en) 2001-01-25 2001-02-22 Gainful Plan Limited Method of preparing biological materials and preparations produced using same
DE10107659B4 (de) 2001-02-19 2008-03-13 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Mucoadhäsive zerfallsfähige Arzneizubereitung zur Wirkstoffverabreichung in der Veterinär- und Humanmedizin
US6790453B2 (en) 2001-03-14 2004-09-14 Mccormick & Company, Inc. Encapsulation compositions and process for preparing the same
EP1541036A1 (en) 2001-03-23 2005-06-15 Advanced Bionutrition Corporation Algae feeds for aquaculture and agriculture
AU2002303744B2 (en) 2001-05-14 2008-04-17 Dsm Ip Assets B.V. A method of improving the flavor, tenderness and overall consumer acceptability of poultry meat
US20030017192A1 (en) 2001-06-19 2003-01-23 Hanny Kanafani Process for producing extended shelf-life ready-to-use milk compositions containing probiotics
US20040038825A1 (en) 2001-08-10 2004-02-26 Leland Jarrod Ethan Water soluble uv-protective coatings for biological pesticides and process for making same
CA2459141A1 (en) 2001-08-27 2003-03-06 Advanced Bionutrition Corporation Delivery of disease control in aquaculture and agriculture using nutritional feeds containing bioactive proteins produced by viruses
AUPR750501A0 (en) 2001-09-05 2001-09-27 Gauci, Mark Products comprising quantum of bioparticles and method for production thereof
US7550647B2 (en) 2001-09-14 2009-06-23 Advanced Bionutrition Transfected shrimp as production systems for therapeutic proteins
US6884866B2 (en) 2001-10-19 2005-04-26 Avant Immunotherapeutics, Inc. Bulk drying and the effects of inducing bubble nucleation
EP1446023B1 (en) 2001-11-12 2009-02-25 Mars, Incorporated Foodstuff for cats and dogs
AU2002346424A1 (en) 2001-11-19 2003-06-10 Becton, Dickinson And Company Pharmaceutical compositions in particulate form
EP1344458A1 (en) 2002-03-12 2003-09-17 Société des Produits Nestlé S.A. Probiotic delivery system
US7396548B2 (en) 2002-03-19 2008-07-08 Advanced Bionutrition Corporation Microalgal feeds containing arachidonic acid and their production and use
US20050241011A1 (en) 2002-04-09 2005-10-27 Allnut F C T Enclosed aquacultural systems for production of purified recombinant proteins
WO2003087327A2 (en) 2002-04-11 2003-10-23 Medimmune Vaccines, Inc. Preservation of bioactive materials by freeze dried foam
WO2003087335A2 (en) 2002-04-11 2003-10-23 Medimmune Vaccines, Inc. Preservation of bioactive materials by spray drying
AU2003224952A1 (en) 2002-04-15 2003-11-03 Thomas F. C. Allnutt Incorporation of anaerobic bacteria in feed formulation
EP1496751A1 (en) 2002-04-16 2005-01-19 Vitalstate Canada Ltd. Delivery systems for functional ingredients
WO2003086454A1 (en) 2002-04-18 2003-10-23 Akzo Nobel N.V. Antigen-loaded chitosan microparticles for oral vaccination
GB0212975D0 (en) 2002-06-06 2002-07-17 Mars Uk Ltd Mammalian animal composition
AU2003239484A1 (en) 2002-06-11 2003-12-22 Advanced Bionutrition Corporation Zooplankton enrichment with probionts and prebionts and uses thereof
US20100120014A1 (en) 2002-06-18 2010-05-13 Victor Bronshtein Stability Drying
CA2490866A1 (en) 2002-06-26 2004-01-08 Advanced Bionutrition Corporation Viruses and virus-like particles for multiple antigen and target display
GB2399084B (en) 2002-07-30 2007-01-31 Univ Liverpool Porous beads and method of production thereof
AU2003261866A1 (en) 2002-09-05 2004-03-29 Kowa Co., Ltd. Heavy metal adsorbent composition
US20050266069A1 (en) 2002-09-06 2005-12-01 Simmons Donald L Stable probiotic microsphere compositions and their methods of preparation
US6900173B2 (en) 2002-09-11 2005-05-31 Kenneth A. Martin Perioperative multivitamin protein bar for use in preparing an individual for fast surgical recovery
EP1562623A1 (en) 2002-09-16 2005-08-17 Kerry Group Services Ltd Method of treating or preventing obeisity and lipid metabolism disorders and compositions for use therein
US20060120999A1 (en) 2002-09-16 2006-06-08 Dhar Arun K Protein and peptide expression for passive immunity
AU2002951692A0 (en) * 2002-09-23 2002-10-17 Vital Biotech (Hong Kong) Limited Improvements in or relating to vaccines
EP1569508A4 (en) 2002-10-24 2007-06-27 Advanced Bionutrition Corp SHRIMP AND THE MANUFACTURE THEREOF
CA2503946C (en) 2002-11-01 2016-08-16 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Drying process
NZ539900A (en) 2002-11-07 2008-03-28 Advanced Bionutrition Corp Nutraceuticals and method of feeding aquatic animals
AU2003291713A1 (en) 2002-11-14 2004-06-03 Advanced Bionutrition Corp. Feed suitable for culturing rotifers, larval shrimp, and marine filter feeders
US7122370B2 (en) 2003-01-14 2006-10-17 Randolph Stanley Porubcan Formulations to increase in vivo survival of probiotic bacteria and extend their shelf-life
EP1441027A1 (en) 2003-01-22 2004-07-28 Chr. Hansen A/S Storage stable frozen lactic acid bacteria
US20070082008A1 (en) 2003-03-07 2007-04-12 Advanced Bionutrition Corporation Feed formulation for terrestrial and aquatic animals
US20060265766A1 (en) 2003-03-19 2006-11-23 Advanced Bionutrition Corporation Fish and the production thereof
WO2004091307A2 (en) 2003-04-08 2004-10-28 Advanced Bionutriton Corporation Feed additives against diseasse infection in terrestrial and aquatic animals
US20040241313A1 (en) * 2003-05-27 2004-12-02 Ravi Nana Food composition and food bars
DE10328180A1 (de) 2003-06-16 2005-01-13 Südzucker AG Mannheim/Ochsenfurt Verwendung von Isomalt als Präbiotikum
CA2529055C (en) 2003-06-19 2013-10-15 Advanced Bionutrition Corp. Improved absorption of fat-soluble nutrients
GB0314624D0 (en) 2003-06-23 2003-07-30 Advanced Bionutrition Europ Lt Inflammatory disease treatment
JP2007522085A (ja) 2003-06-27 2007-08-09 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 安定化されたトポテカンリポソーム組成物および方法
US8871266B2 (en) 2003-10-01 2014-10-28 Commonwealth Scientific & Industrial Research Organisation Probiotic storage and delivery
US7754223B2 (en) 2003-10-07 2010-07-13 Eurogentec Sa Piscirickettsia salmonis antigens and use thereof
US20050100559A1 (en) 2003-11-07 2005-05-12 The Procter & Gamble Company Stabilized compositions comprising a probiotic
EP1701738B1 (en) * 2003-12-17 2015-03-11 Wyeth LLC Method for producing storage stable RSV compositions
ES2235642B2 (es) 2003-12-18 2006-03-01 Gat Formulation Gmbh Proceso de multi-microencapsulacion continuo para la mejora de la estabilidad y almacenamiento de ingredientes biologicamente activos.
WO2005060937A1 (en) 2003-12-23 2005-07-07 Chr. Hansen A/S Compressed tablets comprising viable probiotic microorganisms
US7544720B2 (en) 2004-01-28 2009-06-09 Conopco, Inc. Porous polymeric materials and method of production thereof
US20080194504A1 (en) 2004-02-06 2008-08-14 Advanced Bionutrition Corporation Rna-Mediated Interference to Control Disease in Terrestrial and Aquaculture Animals
US20070031534A1 (en) 2004-02-27 2007-02-08 Hajime Tsujimoto Pet food for reducing food allergy reactions
GB0404586D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Britannia Pharmaceuticals Ltd Improvements in or relating to organic materials
WO2005113147A2 (en) * 2004-04-08 2005-12-01 Biomatrica, Inc. Integration of sample storage and sample management for life science
US7973148B2 (en) 2004-04-15 2011-07-05 Advanced Bionutrition Corporation Crustacean expression vector
GB0409795D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Glaxosmithkline Biolog Sa Drying method
KR20050105669A (ko) 2004-05-03 2005-11-08 전정욱 유산균 조성물
KR20050106559A (ko) 2004-05-04 2005-11-10 삼성전자주식회사 문서 양식지 출력 방법
WO2005115341A2 (en) 2004-05-27 2005-12-08 Advanced Bionutrition Corporation Microparticles for oral delivery
EP1750760B1 (en) 2004-06-02 2017-06-28 Universal Stabilization Technologies, Inc. Preservation by vaporization
US7282194B2 (en) 2004-10-05 2007-10-16 Gp Medical, Inc. Nanoparticles for protein drug delivery
GB0502661D0 (en) 2005-02-09 2005-03-16 Stabilitech Ltd A desiccated product
CN101227900A (zh) 2005-05-11 2008-07-23 高级生物营养公司 稳定形式的鱼油
HUP0500582A1 (hu) 2005-06-13 2007-08-28 Csaba Jozsef Dr Jaszberenyi Szinergetikus élettani hatású élelmiszerek, élelmiszer-adalékok és táplálék-kiegészítõk vagy takarmányadalékok
CN101212911B (zh) 2005-07-01 2012-12-05 努特里希亚公司 含水解的蛋白质的婴儿营养品
CN100361709C (zh) * 2005-08-30 2008-01-16 山东省生物药物研究院 一种对生命活性物质有保护作用的糖类组合
GB0517688D0 (en) 2005-08-31 2005-10-05 Cambridge Biostability Ltd Improvements in the stabilisation of biological materials
EP1954308B1 (en) 2005-09-16 2011-09-07 Merial Ltd. Stabilizers for freeze-dried vaccines
AU2006299310A1 (en) 2005-10-04 2007-04-12 Alk-Abello A/S Solid vaccine formulation
CA2638900A1 (en) 2005-12-21 2007-07-05 Advanced Bionutrition Corporation Non-invasive detection of fish viruses by real-time pcr
US8968721B2 (en) 2005-12-28 2015-03-03 Advanced Bionutrition Corporation Delivery vehicle for probiotic bacteria comprising a dry matrix of polysaccharides, saccharides and polyols in a glass form and methods of making same
WO2007079147A2 (en) 2005-12-28 2007-07-12 Advanced Bionutrition Corporation A delivery vehicle for probiotic bacteria comprising a dry matrix of polysaccharides, saccharides and polyols in a glass form and methods of making same
EP1981338A2 (en) 2006-01-13 2008-10-22 Advanced Bionutrition Corporation Continuous spray-capture production system
WO2007084059A1 (en) 2006-01-20 2007-07-26 Bjoerk Inger A food composition comprising amino acids
AU2007235419A1 (en) 2006-04-03 2007-10-18 Advanced Bionutrition Corporation Feed formulations containing docosahexaenoic acid
JP2009537138A (ja) 2006-05-18 2009-10-29 バイオバランス エルエルシー 細菌株、この細菌株を含む組成物およびそのプロバイオティック使用
CN1887273A (zh) * 2006-07-20 2007-01-03 上海交通大学 制备多糖玻璃体微粒的方法
BRPI0714097A2 (pt) * 2006-08-02 2013-04-02 Solae Llc composiÇço alimenticia, composiÇço de bebida Ácida e processo de preparaÇço de uma suspensço estÁvel de um material de proteÍna
US8309076B2 (en) 2006-08-04 2012-11-13 Bioneer Corporation Lactic acid bacteria isolated from mother's milk with probiotic activity and inhibitory activity against body weight augmentation
US20080044081A1 (en) 2006-08-21 2008-02-21 Adam Lieb Color indexing for images
US20100189767A1 (en) 2006-09-19 2010-07-29 Eyal Shimoni Probiotic compositions and methods of making same
EP1911457A1 (en) 2006-10-12 2008-04-16 N.V. Nutricia Composition to treat or prevent gastrointestinal infection
NL1032840C2 (nl) 2006-11-09 2008-05-13 Friesland Brands Bv Probiotische hydrolysaatvoeding voor kinderen.
EP2117354B1 (en) 2006-12-18 2018-08-08 Advanced BioNutrition Corp. A dry food product containing live probiotic
US8221767B2 (en) 2006-12-20 2012-07-17 Advanced Bionutrition Corporation Antigenicity of infectious pancreatic necrosis virus VP2 sub-viral particles expressed in yeast
US8240065B2 (en) 2007-02-05 2012-08-14 Praxair Technology, Inc. Freeze-dryer and method of controlling the same
GB0705245D0 (en) 2007-03-19 2007-04-25 Stabilitech Ltd Stable biological products
CN101755044B (zh) 2007-05-18 2014-06-11 米迪缪尼有限公司 通过冻干泡沫保存生物活性材料
CA2692053A1 (en) 2007-06-26 2008-12-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Lyophilized anti-fungal composition
CA2701719A1 (en) * 2007-10-05 2009-04-09 President And Fellows Of Harvard College Dry powders of cellular material
US8361534B2 (en) 2007-12-20 2013-01-29 Abbott Laboratories Stable nutritional powder
JP2011507518A (ja) 2007-12-20 2011-03-10 アボット・ラボラトリーズ 安定な栄養粉末
CN101959527B (zh) 2008-03-05 2016-04-20 赛诺菲巴斯德有限公司 一种使含佐剂的疫苗组合物稳定的方法
EP2105129B1 (en) 2008-03-24 2018-01-17 Intervet International B.V. Encapsulated Vaccines for the Oral Vaccination and Boostering of Fish and Other Animals
EP2293688A4 (en) 2008-05-13 2011-05-25 Advanced Bionutrition Corp BALANCED ARA / EPA RANGE IN SALMON KNEES AND KIDNEY FABRICS FOR IMPROVING SALTWATER AVAILABILITY
US7792897B2 (en) * 2008-06-02 2010-09-07 International Business Machines Corporation Distributed transaction processing system
US20110305768A1 (en) 2008-07-01 2011-12-15 The Johns Hopkins University Quick-dissolving oral thin film for targeted delivery of therapeutic agents
CA2740855A1 (en) 2008-10-20 2010-04-29 Nestec S.A. Nutritional composition with anti-regurgitation properties
BRPI1011830A2 (pt) 2009-03-26 2016-09-13 Advanced Bionutrition Corp microencapsulação de substância bioativas e métodos de preparação da mesma
WO2010111565A2 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Advanced Bionutrition Corporation Microparticulated vaccines for the oral or nasal vaccination and boostering of animals including fish
US20120202249A1 (en) 2009-04-08 2012-08-09 Dhar Arun K Production of an intact virus in a mammalian (non-host) cell system using a secondary non-host viral construct
WO2010118188A2 (en) 2009-04-08 2010-10-14 Advanced Bionutrition Corporation Production of an intact virus in a non-host cell system using a secondary host viral construct
ES2661215T3 (es) 2009-05-20 2018-03-28 Aeras Composiciones víricas; inmunógenas; secadas por pulverización; estables
EP2435554B1 (en) 2009-05-26 2017-07-26 Advanced Bionutrition Corporation Stable dry powder composition comprising biologically active microorganisms and/or bioactive materials and methods of making
US20110070334A1 (en) 2009-09-20 2011-03-24 Nagendra Rangavajla Probiotic Stabilization
CN102573494B (zh) * 2009-09-28 2016-10-26 陶氏环球技术有限责任公司 二溴丙二酰胺组合物和它们作为杀生物剂的用途
PL2529004T3 (pl) * 2010-01-28 2017-12-29 Advanced Bionutrition Corporation Sucha szklista kompozycja zawierająca bioaktywny materiał
US9504750B2 (en) 2010-01-28 2016-11-29 Advanced Bionutrition Corporation Stabilizing composition for biological materials
AR082682A1 (es) 2010-08-13 2012-12-26 Advanced Bionutrition Corp Composicion estabilizadora de almacenamiento en seco para materiales biologicos

Also Published As

Publication number Publication date
SI2603100T1 (en) 2018-08-31
EP2603100A4 (en) 2014-07-16
ES2676656T3 (es) 2018-07-23
LT2603100T (lt) 2018-07-25
JP2013535222A (ja) 2013-09-12
RU2013110833A (ru) 2014-09-20
CA2807997A1 (en) 2012-02-16
PH12013500272A1 (en) 2013-04-01
AR125151A2 (es) 2023-06-14
DK2603100T3 (en) 2018-08-06
WO2012021783A2 (en) 2012-02-16
WO2012021783A3 (en) 2012-05-31
SG187250A1 (en) 2013-03-28
HUE039058T2 (hu) 2018-12-28
EP2603100B1 (en) 2018-04-25
KR20140019766A (ko) 2014-02-17
US9504275B2 (en) 2016-11-29
AR082682A1 (es) 2012-12-26
BR112013003244A2 (pt) 2016-05-17
MY166979A (en) 2018-07-27
JP5727611B2 (ja) 2015-06-03
CN103140145B (zh) 2014-08-20
AU2011289272A1 (en) 2013-02-21
CL2011001984A1 (es) 2012-06-29
KR101863920B1 (ko) 2018-06-01
NZ607226A (en) 2015-03-27
US20120039956A1 (en) 2012-02-16
PH12013500272B1 (en) 2019-07-03
MX350047B (es) 2017-08-24
RU2573324C2 (ru) 2016-01-20
EP2603100A2 (en) 2013-06-19
PT2603100T (pt) 2018-07-16
PL2603100T3 (pl) 2019-06-28
CA2807997C (en) 2015-11-17
BR112013003244B1 (pt) 2018-07-17
HRP20181121T1 (hr) 2018-09-21
MX2013001535A (es) 2013-06-03
AU2011289272B2 (en) 2015-02-05
CN103140145A (zh) 2013-06-05
CN104147605A (zh) 2014-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2573324C2 (ru) Стабилизирующая композиция для сухого хранения биологических материалов (варианты)
US12559524B2 (en) Stable dry powder composition comprising biologically active microorganisms and/or bioactive materials and methods of making
DK2529004T3 (en) DRY GLASSY COMPOSITION INCLUDING A BIOACTIVE MATERIAL
AU2011289272A2 (en) Dry storage stabilizing composition for biological materials