RS57690B1 - Peptidi kao agonisti oksitocina - Google Patents

Peptidi kao agonisti oksitocina

Info

Publication number
RS57690B1
RS57690B1 RS20181124A RSP20181124A RS57690B1 RS 57690 B1 RS57690 B1 RS 57690B1 RS 20181124 A RS20181124 A RS 20181124A RS P20181124 A RSP20181124 A RS P20181124A RS 57690 B1 RS57690 B1 RS 57690B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
fmoc
trt
tbu
asn
glu
Prior art date
Application number
RS20181124A
Other languages
English (en)
Inventor
Caterina Bissantz
Konrad Bleicher
Christophe Grundschober
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of RS57690B1 publication Critical patent/RS57690B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A61K38/095—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/16—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

OPIS
Pronalazak se odnosi na jedinjenja
ili na farmaceutski prihvatljivu kiselu adicionu so, racemsku smešu ili njene odgovarajuće enantiomerne i/ili optičke izomere.
Utvrđeno je da su ova jedinjenja agonisti receptora oksitocina, koja su jedinjenja analoga oksitocina koji zadržavaju bioaktivnost oksitocina. Takvi analogni molekuli su sposobni da deluju na način sličan endogenom oksitocinu, uključujući vezivanje receptora oksitocina. Analozi oksitocina imaju potpuno nove molekularne strukture.
Oksitocin je ciklični peptidni hormon sa devet amino kiselina sa dva cisteinska ostatka koji formiraju disulfidni most između položaja 1 i 6. Ljudski oksitocin obuhvata sekvencu Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly.
Peptidi su se pojavili kao komercijalno relevantna klasa lekova koji nude prednost veće specifičnosti i potencijala i manjih profila toksičnosti u odnosu na tradicionalne farmaceutske proizvode malih molekula. Oni nude obećavajuće opcije lečenja za brojne bolesti, kao što su dijabetes, HIV, hepatitis, kancer i druge, dok se lekari i patenti sve više oslanjaju na lekove zasnovane na peptidima. Predmetni pronalazak se odnosi na agoniste peptidnih oksitocinskih receptora, koji takođe uključuju prirodni hormon oksitocin i karbetocin.
Oksitocin je snažan uterotonik za kontrolu atonije uterusa i prekomernog krvarenja, a koji se klinički koristi za indukciju porođaja i utvrđeno je da poboljšava početak i održavanje laktacije (Gimpl et al., Physiol. Rev., 81, (2001), 629–683, Ruis et al., BMJ, 283, (1981), 340–342). Karbetocin (1-deamino-1-karba-2-tirozin (O-metil)-oksitocin) takođe je snažan uterotonik koji se klinički koristi za kontrolu atonije uterusa i prekomernog krvarenja.
Peptidni agonisti oksitocina mogu se koristiti za lečenje Prader-Willi sindroma, što je retki genetski poremećaj koji pogađa jedno dete u 25.000 dece.
Dalja istraživanja pokazuju da su agonisti oksitocina korisni za lečenje upale i bolova, uključujući bol u stomaku i bol u leđima (Yang, Spine, 19, 1994, 867-71), seksualnu disfunkciju kod muškaraca (Lidberg et al., Pharmakopsychiat., 10 ,1977, 21-25) i žena (Anderson-Hunt i sar., BMJ, 309, 1994, 929), sindrom nervoznih creva (IBS, Louvel i ostali, Gut, 39, 1996, 741-47), zatvor i gastrointestinalne prepreke (Ohlsson et al., Neurogastroenterol Motil., 17, 2005, 697-704), autizam (Hollander et al., Neuropsychopharm., 28, 2008, 193–98), stres, uključujući posttraumatski stresni poremećaj (PTSD) (Pitman et al., Psychiatry Research, 48, 107-117), anksioznost, uključujući anksiozne poremećaje i depresiju (Kirsch et al., J. Neurosci., 25, 49,11489-93, Waldherr et al., PNAS, 104, 2007, 16681–84), hirurški gubitak krvi ili kontrolu postpartalnih krvarenja (Fujimoto i sar., Acta Obstet. Gynecol., 85, 2006, 1310-14), indukcija porođaja i održavanje (Flamm et al., Obstet. Gynecol., 70, 1987, 70-12), zarastanje rana i infekcija, mastitis i vađenje posteljice, kao i osteoporoza. Pored toga, agonisti oksitocina mogu biti korisni i za dijagnozu raka i placentne insuficijencije.
Osim toga, članci „Intranasal Oxytocin blocks alcohol withdrawal in human subjects” (Alcohol Clin Exp Res, Vol, br.2012) i „Breaking the loop: Oxytocin as a potential treatment for drug addiction” (Hormoni i ponašanje, 61, 2012, 331–339) predlažu lečenje odvikavanja od alkohola i zavisnost od droge agonistom oksitocina.
Oksitocin i njegovi receptori postoje u područjima mozga u kojima se manifestuju simptomi šizofrenije, kao što su nukleus akumbens i hipokampus. Agonisti receptora oksitocina mogu se koristiti za lečenje autizma, stresa, uključujući posttraumatski stresni poremećaj, anksioznost, uključujući anksiozne poremećaje i depresiju, šizofreniju, Alchajmerovu bolest, psihijatrijske poremećaje, gubitak pamćenja i metaboličke bolesti (WO2012/016229).
Objekti predmetnog pronalaska su nova jedinjenja kao što je gore opisano i upotreba ovih jedinjenja, njihovih farmaceutski prihvatljivih soli za lečenje bolesti CNS povezanih sa receptorom oksitocina, a to su bolesti autizam, stres, uključujući posttraumatski stresni poremećaj, anksioznost, uključujući anksiozne poremećaje i depresiju, šizofreniju, psihijatrijske poremećaje i gubitak pamćenja, apstinenciju od alkohola, zavisnost od droge i za lečenje Prader-Willi sindroma.
Sledeći objekti pronalaska su priprema ovih novih jedinjenja i lekova koji ih sadrže.
Predmetni pronalazak može pružiti selektivna, efikasna jedinjenja, pružajući alternative i/ili poboljšanja u lečenju određenih bolesti CNS-a uključujući autizam, stres, uključujući posttraumatski stresni poremećaj, anksioznost, uključujući anksiozne poremećaje i depresiju, šizofreniju, psihijatrijske poremećaje i gubitak pamćenja, apstinenciju od alkohola, narkomaniju i za lečenje Prader-Willi sindroma.
Pokazano je da postojeći peptidi imaju veoma dobru selektivnost prema vazopresinskimr V1a i V2 receptorima, kao što je prikazano u tabeli. Ovo može imati veliku prednost za upotrebu u obliku leka kako bi se izbegli neželjeni efekti. Ovi fiziološki efekti mogu se smatrati nepoželjnim nuspojavama u slučaju lekova namenjenih lečenju bolesti centralnog nervnog sistema. Stoga je poželjno dobiti lekove koji imaju selektivnost za oksitocinski receptor u poređenju sa vazopresinskim receptorom.
Termin „farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli” obuhvata soli sa neorganskim i organskim kiselinama, kao što su hlorovodonična kiselina, azotna kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, limunska kiselina, mravlja kiselina, fumarna kiselina, maleinska kiselina, sirćetna kiselina, sukcinska kiselina, vinska kiselina, metan-sulfonska kiselina, p-toluensulfonska kiselina i slično.
Priprema jedinjenja predmetnog pronalaska može se izvesti sekvencijalnom ili konvergentnom sintezom. Veštine potrebne za izvođenje reakcija i prečišćavanja dobijenih proizvoda poznate su stručnjacima za ovu oblast.
Jedinjenja su ovde sintetisana standardnim metodama u hemiji peptida čvrste faze koristeći Fmoc i Boc metodologiju. Reakcije koje su sprovedene ručno izvedene su na sobnoj temperaturi, dok je sinteza peptida pomoću mikrotalasa obavljena na povišenoj temperaturi.
Opis opšte sinteze:
Linearni peptidi su ili sintetizovani ručno ili koristeći mikrotalasnu tehnologiju primenom najsavremenijih protokola za sintezu čvrste faze (Fmoc-hemija) kao što je navedeno, na primer, u: Kates and Albericio, Eds., “Solid Phase Synthesis: A practical guide”, Marcel Decker, New York, Basel, 2000. Kao čvrsta podloga korišćena je smola TentaGel-S-RAM (0,24 meq/g). Sve Fmocaminokiseline su dodate u desetostruki višak nakon aktivacije sa HOBT/HBTU 1:1 (0,5 mol/L u DMF) i 4 eq DIPEA (2 mol/L u NMP). Fmoc-izdvajanje je postignuto sa 20% piperidina u DMF.
Alil/Alok-izdvajanje i laktam-ciklizacija:
Smola se ručno obrađuje rastvorom od 20 eq fenilsilana u DCM i 0,05 eq tetrakistrifenilfosfin-paladijuma tokom 30 min na RT. Ovaj postupak je ponovljen. Smola je isprana rastvorom 0,5% natrijum-ditiokarbamata u DMF. Za formiranje laktamske strukture na kuglici, ponovo je dodat reagens za aktivaciju u smolu i mešan još 8 sati na RT. Završetak ciklizacije je proveren pomoću ninhidrinskog testa. Sirovi peptidi su tretirani standardnim peptidnim aktivacionim reagensima u DMF. Ciklizacija je nadgledana pomoću HPLC.
Izdvajanje:
Koktel izdvajanja trifluorosirćetne kiseline, triizopropilsilana i vode (95/2,5/2,5) dodat je u smolu i mešan 1 h na RT. Izdvojeni peptid je precipitiran u hladnom etru (-18° C). Peptid je centrifugiran i ostatak je dva puta ispran hladnim etrom. Ostatak je rastvoren u vodi/acetonitrilu i liofilizovan.
Prečišćavanje:
Peptidi su prečišćeni pomoću tečne hromatografije visokih performansi reverzne faze (RP-HPLC) koristeći Reprospher 100 C18-T Columm (100 x 4,6 mm, 5u veličina čestica) kao stacionarnu fazu i vodu/acetonitril kao eluent (Gradient 1%–50% MeCN preko 30 min). Frakcije su sakupljene i analizirane LC/MS. Uzorci čistog proizvoda su kombinovani i liofilizovani. Svi peptidi su dobijeni kao beli prah čistoće > 85%. Identifikacija proizvoda je dobijena putem masene spektrometrije.
Sve standardne aminokiseline su kupljene od kompanije CEM. Fmoc-Glu (Alil) -OH, Fmoc-Phe (4-NHBoc) -OH, Fmoc-DAP (Alok) -OH, Fmoc-DAB (Alok) -OH i Fmoc-SAR-OH su nabavljeni od kompanije Bachem. Fmoc-β-Homoprolin je kupljen od kompanije Chem-Impax. Fmoc-β-Ala-OH i Mono-tBu-sukcinat su kupljeni od kompanije Sigma-Aldrich
Detaljan opis za sintezu iz primera 6 dat je da dalje ilustruje uslove sinteze:
Sinteza peptida:
Peptid je sintetisan pomoću CEM mikrotalasne tehnologije sa vremenom kuplovanja od 5 minuta po aminokiselini na povišenoj temperaturi (78° C) i skali od 0,25 mmol. Sinteza se vrši pomoću smole TentalGel-S RAM kao čvrste podloge (0,24 meq/g). Sve upotrebljene aminokiseline su rastvorene u DMF na 0,2 mol koncentracije. Smeša HOBT/HBTU 1:1 (0,5 mol/L) 4 eq. i DIPEA 4eq. koristi se za aktiviranje aminokiselina. Fmoc-izdvajanje je postignuto pomoću piperidina u DMF (20%) tokom 3 min. Fmoc-izdvajanje je ponovljeno.
Alok i Alil izdvajanje:
Smola je tretirana ručno sa rastvorom od 20 ekv. fenilsilana i 0,05 ekv. tetrakis trifenilfosfin paladijuma u DCM (5 ml) tokom 30 min na RT. Ovaj postupak je ponovljen. Smola je isprana rastvorom 0,5% natrijum-ditiokarbamata u DMF dva puta. Korak pranja je ponovljen sa DCM.
Ciklizacija na kuglici:
U smolu je ponovo dodato reakciono sredstvo za kuplovanje (4 ml 0,5 mol/L rastvora HOBT/HBTU (1:1) i 1 ml DIPEA (4 ekv.) U DMF. Reakcija je mešana 8 h na RT. Smola je isprana sa DMF i DCM dva puta. Završetak ciklizacije je proveren pomoću ninhidrinskog testa.
Izdvajanje iz smole:
U smolu je dodato 10 ml koktela za izdvajanje (TFA; TIS; voda (95/2,5/2,5)) i mešano je 1 h na RT. Izdvojeni peptid je precipitiran u hladnom etru (-18° C). Peptid je centrifugiran i precipitati su dva puta isprani hladnim etrom. Precipitat je rastvoren u H2O/acetonitril i liofiliziran da daje prinos 210 mg belog praha.
Prečišćavanje:
Sirovi peptid je prečišćen preparativnom HPLC na Reprospher 100 C18-T Columm (100 mm x 4,6 mm, veličina 5um veličine čestica). Kao eluentni sistem, mešavina 0,1% TFA/voda/acetonitril korišćena je sa gradijentom od 0%–50% acetonitrila u roku 0-30 min. Frakcije su sakupljene i kontrolisane pomoću analitičke HPLC. Frakcije koje sadrže čist proizvod su kombinovane i liofilizovane. Dobijeno je 7,2 mg belog praha.
Svi ostali peptidi navedeni u nastavku sintetisani su u skladu s tim.
Skraćenice
Fmoc: 9-fluorenilmetoksikarbonil
Gly: glicin
His(Trt): histidin zaštićen tritilom
San Sarcosine
Glu: glutaminska kiselina
Asn(Trt): asparagin zaštićen tritilom Gln(Trt): glutamin zaštićen tritilom
Ile: izoleucin
Tyr: tirozin
Leu: leucin
Pro: prolin
Ala: alanin
Orn: ornitin
Thr: treonin
Val: valin
Dab: diaminobuterna kiselina
Dap: Diaminopropionska kiselina
D-Pro: D-prolin
MeLeu: α-metil-leucin
Cha: β-cikloheksil-alanin
Nle: norleucin
Chg: cikloheksilglicin
HoLeu: homoleucin
Tle: tert. Butil-glicin
Hyp: trans-4-hidroksi-L-prolin FluoroPro: trans-4-fluoro-L-prolin Hpr: homoprolin
Aib: aminizobutrijska kiselina
Aze: (S)-N-azetidin-2-karboksilna kiselina Ser: serin
2AOC-OH: L-aminooktanska kiselina 2ADC-OH: L-aminodekanoinska kiselina cyLeu: cikloleucin
Aloc: aliloksikarbonil
HOBT: N-hidroksibenzotriazol
HBTU: O-Benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametil-uronijum-heksafluorofosfat
DMF: N,N-dimetilformamid
NMP: N-metilpirolidon
DIPEA: N,N-diizopropilamin
DCM: dihlormetan
MeCN: acetonitril
Primer 1
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, FMOC-Phe(4-NHBoc)-OH, Fmoc-SAR-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, MS (M+H<+>): očekivano 994,1; primećeno 994,9
Primer 2
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-SAR-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, FMOC-Phe(4-NHBoc)-OH, MS (M+H<+>): očekivano 944,1; primećeno 944,4
Primer 3
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ala-OH, MS (M+H<+>): očekivano 985,1; primećeno 986,3
Primer 4
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-β-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 984,5; primećeno 984,9
Primer 5
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-SAR-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, MS (M+H<+>): očekivano 984,5; primećeno 984,9
Primer 6
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH
MS (M+H<+>): očekivano 931,0; primećeno 932,0
Primer 7
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH
MS (M+H<+>): očekivano 914,9; primećeno 915,9
Primer 8
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH
MS (M+H<+>): očekivano 971,1; primećeno 971,5
Primer 9
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 980,1; primećeno 981,5
Primer 10
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, FMOC-Phe(4-NHBoc)-OH, MS (M+H<+>): očekivano 970,1; primećeno 970,8
Primer 11
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, FMOC-Phe(4-NHBoc)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, MS (M+H<+>): očekivano 1020,0; primećeno 1021,0
Primer 12
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-SAR-OH, MS (M+H<+>): očekivano 985,1; primećeno 985,4
Primer 13
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-SAR-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 945,1; primećeno 945,4
Primer 14
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-D-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 971,1; primećeno 971,5
Primer 15
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-D-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 971,1; primećeno 971,3
Primer 16
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH
MS (M+H<+>): očekivano 902,9; primećeno 903,8
Primer 17
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 944,5; primećeno 945,0
Primer 18
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 928,9; primećeno 929,7
Primer 19
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 957,1; primećeno 957,8
Primer 20
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Om(Boc)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 957,1; primećeno 957,9
Primer 21
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, MS (M+H<+>): očekivano 986,1; primećeno 986,9
Primer 22
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-D-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 971,1; primećeno 971,5
Primer 23
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 971,1; primećeno 971,5
Primer 24
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 971,1; primećeno 971,8
Primer 25
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, MS (M+H<+>): očekivano 932,9; primećeno 933,6
Primer 26
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 931,0; primećeno 931,6.
Primer 27
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 979,0; primećeno 979,5
Primer 28
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, MS (M+H<+>): očekivano 918,9; primećeno 919,7
Primer 29
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, MS (M+H<+>): očekivano 960,9; primećeno 962,1
Primer 30
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Dab(Boc)-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 932,0; primećeno 932,6
Primer 31
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH
MS (M+H<+>): očekivano 960,0; primećeno 960,9
Primer 32
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH
MS (M+H<+>): očekivano 995,0; primećeno 996,0
Primer 33
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH
MS (M+H<+>): očekivano 945,0; primećeno 945,0
Primer 34
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H+): očekivano 969,0; primećeno 969,7
Primer 35
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 995,0; primećeno 996,0
Primer 36
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-MeLeu-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 955,1; primećeno 985,1
Primer 37
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH
MS (M+H<+>): očekivano 888,0; primećeno 888,6
Primer 38
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Trp-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 1018,1; primećeno 1018,8
Primer 39
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Cha-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 985,1; primećeno 985,6
Primer 40
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 945,0; primećeno 945,5
Primer 41
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Chg-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 971,1; primećeno 971,9
Primer 42
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Dap-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 918,0; primećeno 918,7
Primer 43
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-HoLeu-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 959,1; primećeno 959,9
Primer 44
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Tle-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 945,0; primećeno 944,7
Primer 45
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Hyp-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 987,1; primećeno 988,0
Primer 46
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-FluoroPro-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 989,1; primećeno 989,3
Primer 47
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Hpr-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 985,1; primećeno 985,1
Primer 48
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-cyLeu-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 943,0; primećeno 943,1
Primer 49
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 917,0; primećeno 917,8
Primer 50
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Aze-OH, FmocGlu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 957,0; primećeno 957,1
Primer 51
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-MeLeu-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 959,1; primećeno 959,7
Primer 52
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-MeLeu-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH
MS (M+H<+>): očekivano 903,0; primećeno 903,2
Primer 53
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-2AOC-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 973,0; primećeno 973,5
Primer 54
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-2ADC-OH, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH MS (M+H<+>): očekivano 1001,1; primećeno 1000,5
Primer 55
Koriste se sledeće aminokiseline: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu, Fmoc-Sar-OH, Fmoc-Glu(Alil)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH
MS (M+H<+>): očekivano 916,0; primećeno 917,2
Materijali i postupci
Kultura ćelija i proizvodnja stabilnog klona
Jajne ćelije kineskog hrčka (CHO) transfektovane su ekspresijskim plazmidima koji kodiraju humanu V1a, humani oksitocin (OTR) ili humani V2 receptor, kasnije u kombinaciji sa himernim Gqs5 G proteinom da preusmeri signal na kalcijumski fluks. Stabilne ćelije su klonirane ograničavajućim razblaživanjem da bi se dobila monoklonska ćelijska linija koja izražava humane V1a, humane V2+Gqs5 ili humane OTR receptore i izabrane su na bazi funkcionalnih odgovora detektovanih na čitaču fluorimetrijske slike (FLIPR) koji otkriva kalcijumski fluks u ćeliji nakon aktivacije receptora. Stabilne ćelijske linije uzgajane su u F-12 K mešavini nutrijenata (Kaighns modifikacija), koja sadrži 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS), 1% penicilin-streptomicina, 1% L-glutamata, 200 ug/ml geneticina na 37° C u 10% CO2inkubatoru sa 95% vlage.
Ispitivanja kalcijumskog fluksa pomoću fluorescentnog snimanja (Fluorometric Imaging Plate Reader – FLIPR)
Tokom popodneva pre analize, ćelije su postavljene u gustini od 50.000 ćelija/udubljenju na ploči za uzorke sa 96 crnih udubljenja sa prozirnim dnom kako bi se omogućio pregled ćelija i merenje fluorescencije sa dna svakog udubljenja. Gustina ćelija bila je dovoljna da bi se narednog dana dobio konfluentni monolejer. Balansiran soni rastvor Hanks, bez fenol-crvene, sa 20 mM HEPES (pH 7,3) i 2,5 mM probenecida (pufer za testiranje) pripremljen je svež za svaki eksperiment. Razređivanje složenih sastojaka izvršeno je pomoću radne stanice za laboratorijsku automatizaciju Beckman Biomek 2000, u puferu za analizu koji sadrži 1% DMSO. Pufer za nanošenje boje sastoji se od konačne koncentracije 2 µM Fluo-4-AM (rastvoren u DMSO i pluronskoj kiselini) u puferu za testiranje. Postojeći medijumi za zasejavanje uklonjeni su iz bunara i 100 µl pufera za nanošenje boje je dodato u svaku bazu i inkubirano oko 60 minuta na 37° C u 5% CO2inkubatoru sa 95% vlage. Nakon nanošenja boje, ćelije su temeljno isprane na peletu Embla ćelije sa puferom za testiranje kako bi se uklonila bilo koja neinkorporirana boja. U svakom udubljenju je ostavljeno tačno 100 µl pufera za testiranje.
Svaka ploča za uzorke sa 96 udubljenja sa sadržajem ćelija sa bojama postavljena je u FLIPR mašinu, a intenzitet lasera postavljen je na odgovarajući nivo za detekciju niske bazalne fluorescencije. Za testiranje jedinjenja kao agonista, 25 µl razblaženog jedinjenja je dodato na ploču 10 sekundi nakon početka fluorescentna merenja i fluorescentni odgovor je beležen tokom 5 minuta. Podaci o fluorescenciji su normalizovani do endogenog punog agonističkog dozaodgovora postavljenog na 100% za maksimalni odgovor i 0% na minimum. Svaka krivulja koncentracije-odgovora agonista konstruisana je pomoću četiri parametarske logističke jednačine pomoću programa Microsoft Excel XLFitom na sledeći način: Y = minimum ((maksimum – minimum)/(1 10<(LogEC50-X) nH>)), gde je y % normalizirane fluorescencije, minimum je minimalna vrednost y, maksimum je maksimalna vrednost y, logEC50je log10koncentracija koja proizvodi 50% maksimalno indukovane fluorescencije, x je log10koncentracije agonističkog jedinjenja, a H je nagib krive (Hilov koeficijent). Maksimalna vrednost daje efikasnost agonist test jedinjenja u procentima. Koncentracija agonista koja je proizvela polumaksimalni odgovor je predstavljena vrednošću EC50, čiji logaritam je davao vrednost pEC50.
Sledeći EC50(nM) i efikasnost (%) za specifične peptide mogu se obezbediti zajedno sa uporednim podacima za hV1a i hV2:
Jedinjenja i farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja mogu da se koriste kao medikamenti, npr. u obliku farmaceutskih preparata. Farmaceutski preparati se poželjno mogu davati transdermalno, intranazalno, supkutano ili intravenozno (iv).
Transdermalni način je način primene pri kom se aktivne supstance isporučuju preko kože za sistematsku distribuciju. Primeri uključuju transdermalne zakrpe koji se koriste za isporuku lekova i transdermalni implantati koji se koriste u medicinske ili estetske svrhe.
Nazalna administracija se može koristiti za isporučivanje lekova za lokalne ili sistemske efekte, nazalni sprejevi za lokalni efekat su prilično česti. Lekovi peptida mogu se primjenjivati kao nazalni sprejevi kako bi se izbegla degradacija leka nakon oralne primene.
Supkutane injekcije su takođe uobičajene za davanje peptidnih lekova. Intramuskularna injekcija je ubrizgavanje supstance direktno u mišić. To je jedna od nekoliko alternativnih metoda za primenu lekova. Često se koristi za određene oblike lekova koji se primenjuju u malim količinama. Injekcije treba davati ispod kože.
Intravenozni put je infuzija tečnih supstanci direktno u venu. U poređenju sa drugim pravcima administracije, intravenski put je najbrži način za isporuku tečnosti i lekova u telo.
Pored toga, farmaceutski preparati mogu da sadrže konzervanse, solubilizatore, stabilizatore, sredstva za kvašenje, emulgatore, zaslađivače, boje, arome, soli za izmenu osmotskog pritiska, pufere, agense za maskiranje ili antioksidanse. Mogu da sadrže i druge terapeutski korisne supstance.
Lekovi koji sadrže jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i terapeutski inertni nosač takođe su predmet ovog pronalaska, kao i postupak za njihovu proizvodnju, koji obuhvata dovođenje jednog ili više jedinjenja i/ili farmaceutski prihvatljivih kiselih adicionih soli i, ako je poželjno, jednu ili više drugih terapeutski vrednih supstanci u galenski oblik davanja zajedno sa jednim ili više terapeutski inertnih nosača.
Najpoželjnije indikacije u skladu sa ovim pronalaskom su one koje uključuju poremećaje centralnog nervnog sistema, na primer lečenje ili prevenciju autizma, stres, uključujući posttraumatski stresni poremećaj, anksioznost, uključujući anksiozne poremećaje i depresiju, šizofreniju, psihijatrijske poremećaje i gubitak pamćenja, apstinenciju od alkohola, zavisnost od droga i za lečenje Prader-Willi sindroma.
Doza može da varira u širokim granicama, te se svakako prilagođava individualnim potrebama u svakom pojedinačnom slučaju. Doza za odrasle može da varira od približno 0,01 mg do približno 1000 mg po danu jedinjenja ili odgovarajuće količine njegove farmaceutski prihvatljive soli. Dnevna doza može da se daje u jednoj dozi ili podeljenim dozama i, takođe, gornja granica može da se premaši ako se utvrdi da za to postoje indikacije.

Claims (5)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje, pri čemu je jedinjenje
  2. 2. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema zahtevu 1 i farmaceutski prihvatljivi nosač i/ili adjuvant.
  3. 3. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 2, koja sadrži jedinjenje prema zahtevu 1 i farmaceutski prihvatljiv nosač i/ili adjuvant za upotrebu u lečenju autizma, stresa, uključujući posttraumatski stresni poremećaj, anksioznost, uključujući anksiozne poremećaje i depresiju, šizofreniju, psihijatrijske poremećaje i gubitak pamćenja, apstinenciju od alkohola, zavisnost od droge i za lečenje Prader-Willi sindroma.
  4. 4. Jedinjenje prema zahtevu 1 za primenu kao terapeutski aktivna supstanca.
  5. 5. Jedinjenje prema zahtevu 1 za upotrebu kao terapeutska aktivna supstanca u lečenju autizma, stresa, uključujući posttraumatski stresni poremećaj, anksioznost, uključujući anksiozne poremećaje i depresiju, šizofreniju, psihijatrijske poremećaje i gubitak pamćenja, apstinenciju od alkohola, zavisnost od droga i za tretman Prader-Willi sindroma. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20181124A 2012-12-21 2013-12-17 Peptidi kao agonisti oksitocina RS57690B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP12199012 2012-12-21
PCT/EP2013/076783 WO2014095773A1 (en) 2012-12-21 2013-12-17 Peptides as oxytocin agonists
EP13814079.3A EP2935312B1 (en) 2012-12-21 2013-12-17 Peptides as oxytocin agonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS57690B1 true RS57690B1 (sr) 2018-11-30

Family

ID=47471593

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20181124A RS57690B1 (sr) 2012-12-21 2013-12-17 Peptidi kao agonisti oksitocina

Country Status (33)

Country Link
US (1) US9868766B2 (sr)
EP (1) EP2935312B1 (sr)
JP (1) JP6067878B2 (sr)
KR (1) KR101819804B1 (sr)
CN (1) CN104870466B (sr)
AR (1) AR094225A1 (sr)
AU (1) AU2013363768B2 (sr)
BR (1) BR112015014010A2 (sr)
CA (1) CA2895150C (sr)
CL (1) CL2015001724A1 (sr)
CR (1) CR20150271A (sr)
DK (1) DK2935312T3 (sr)
EA (1) EA026687B1 (sr)
ES (1) ES2690317T3 (sr)
HR (1) HRP20181569T1 (sr)
HU (1) HUE039848T2 (sr)
IL (1) IL239519A (sr)
LT (1) LT2935312T (sr)
MA (1) MA38272A1 (sr)
MX (1) MX358684B (sr)
MY (1) MY176398A (sr)
NZ (1) NZ708175A (sr)
PE (1) PE20151446A1 (sr)
PH (1) PH12015501145A1 (sr)
PL (1) PL2935312T3 (sr)
PT (1) PT2935312T (sr)
RS (1) RS57690B1 (sr)
SG (1) SG11201504883PA (sr)
SI (1) SI2935312T1 (sr)
TW (1) TWI558726B (sr)
UA (1) UA119034C2 (sr)
WO (1) WO2014095773A1 (sr)
ZA (1) ZA201504186B (sr)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10039777B2 (en) 2012-03-20 2018-08-07 Neuro-Lm Sas Methods and pharmaceutical compositions of the treatment of autistic syndrome disorders
UA111305C2 (uk) 2012-12-21 2016-04-11 Пфайзер Інк. Конденсовані лактами арилу та гетероарилу
GEP201706757B (en) 2012-12-21 2017-10-25 Alios Biopharma Inc Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
EP2935312B1 (en) 2012-12-21 2018-08-08 F.Hoffmann-La Roche Ag Peptides as oxytocin agonists
KR102116107B1 (ko) 2013-12-30 2020-05-28 삼성디스플레이 주식회사 표시 장치
ES2748434T3 (es) 2014-01-10 2020-03-16 Univ Cornell Dipéptidos como inhibidores de inmunoproteasomas humanos
AU2015270723A1 (en) 2014-06-03 2016-11-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Peptides as oxytocin agonists
EP3157915B1 (en) 2014-06-17 2019-02-27 Pfizer Inc Substituted dihydroisoquinolinone compounds
US10588980B2 (en) 2014-06-23 2020-03-17 Novartis Ag Fatty acids and their use in conjugation to biomolecules
HRP20181916T1 (hr) * 2014-08-07 2019-01-11 F. Hoffmann - La Roche Ag Postupci pripreme oksitocinskih analoga
EP3193904B1 (en) * 2014-08-18 2025-10-01 Cornell University Dipeptidomimetics as inhibitors of human immunoproteasomes
ES2970059T3 (es) * 2014-09-19 2024-05-24 Ferring Bv Método de tratamiento del síndrome de Prader-Willi
KR102764027B1 (ko) 2015-10-15 2025-02-07 코넬 유니버시티 프로테아좀 억제제 및 이의 용도
EP3694605A4 (en) 2017-10-11 2021-10-27 Cornell University PEPTIDOMIMETIC PROTEASOME INHIBITORS
EP3852724A4 (en) 2018-09-20 2022-07-06 Levo Therapeutics, Inc. CARBETOCIN DRUG PRODUCT AND PROCESS FOR ITS MANUFACTURE
TW202031283A (zh) 2018-09-20 2020-09-01 馬克 Ｃ 曼寧 穩定卡貝縮宮素鼻內製劑
WO2021126990A1 (en) * 2019-12-16 2021-06-24 The Scripps Research Institute Oxytocin derivatives with improved properties

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2260053B1 (en) 2008-03-31 2014-05-14 Ferring BV Oxytocin analogues
TWI463990B (zh) * 2009-09-21 2014-12-11 Ferring Bv 催產素受體促進劑
EP2482835B1 (en) * 2009-10-01 2014-07-02 The University Of Sydney Therapy and prevention of problem drinking
EP2935312B1 (en) 2012-12-21 2018-08-08 F.Hoffmann-La Roche Ag Peptides as oxytocin agonists

Also Published As

Publication number Publication date
CA2895150A1 (en) 2014-06-26
EA201591078A1 (ru) 2015-10-30
PH12015501145B1 (en) 2015-08-10
PH12015501145A1 (en) 2015-08-10
NZ708175A (en) 2020-06-26
MA38272A1 (fr) 2017-07-31
TWI558726B (zh) 2016-11-21
AU2013363768B2 (en) 2016-02-04
CL2015001724A1 (es) 2015-10-16
BR112015014010A2 (pt) 2017-07-11
KR101819804B1 (ko) 2018-01-17
CN104870466B (zh) 2018-05-18
UA119034C2 (uk) 2019-04-25
CA2895150C (en) 2019-11-26
PE20151446A1 (es) 2015-09-28
LT2935312T (lt) 2018-10-25
SI2935312T1 (sl) 2018-11-30
KR20150085845A (ko) 2015-07-24
EP2935312A1 (en) 2015-10-28
JP2016503044A (ja) 2016-02-01
EP2935312B1 (en) 2018-08-08
WO2014095773A1 (en) 2014-06-26
ES2690317T3 (es) 2018-11-20
AU2013363768A1 (en) 2015-06-04
AR094225A1 (es) 2015-07-22
ZA201504186B (en) 2016-04-28
IL239519A (en) 2017-06-29
PL2935312T3 (pl) 2018-12-31
IL239519A0 (en) 2015-08-31
JP6067878B2 (ja) 2017-01-25
US20150284434A1 (en) 2015-10-08
DK2935312T3 (en) 2018-10-22
MX358684B (es) 2018-08-31
CN104870466A (zh) 2015-08-26
MX2015007365A (es) 2015-10-14
EA026687B1 (ru) 2017-05-31
MY176398A (en) 2020-08-05
PT2935312T (pt) 2018-10-26
HUE039848T2 (hu) 2019-02-28
US9868766B2 (en) 2018-01-16
TW201429994A (zh) 2014-08-01
HK1208477A1 (en) 2016-03-04
SG11201504883PA (en) 2015-07-30
HRP20181569T1 (hr) 2018-11-30
CR20150271A (es) 2015-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK2935312T3 (en) Peptides as oxytocin agonists
EP3152225B1 (en) Peptides as oxytocin agonists
US9957298B2 (en) Peptides as oxytocin agonists
Bovy et al. Identification of structural requirements for analogs of atrial natriuretic peptide (ANP) to discriminate between ANP receptor subtypes
CN120623273A (zh) 蛙皮素类多肽化合物及其用途
HK1208477B (en) Peptides as oxytocin agonists
HK1230210A1 (en) Peptides as oxytocin agonists
HK1230211A1 (en) Peptides as oxytocin agonists