RS57859B1 - Jedinjenja i postupci za njihovu upotrebu - Google Patents

Description

Opis

PRIORITET

[0001] Ova prijava ima prioritet međunarodne prijave br. PCT/CN2012/085023, podnete 22.11.2012. i međunarodne prijave br. PCT/CN2013/000294, podnete 15.3.2013.

OSNOVA PRONALASKA

[0002] Ćelije kancera se primarno oslanjaju na glikolizu za stvaranje ćelijske energije i biohemijskih intermedijera za biosintezu lipida i nukleotida, dok većina "normalnih" ćelija u adultnim tkivima koristi aerobnu respiraciju. Ova fundamentalna razlika u ćelijskom metabolizmu između ćelija kancera i normalnih ćelija je označena terminom Varburgov efekat. Kao rezultat ove razlike, piruvat generisan preko glikolitičkog puta je preveden u mlečnu kiselinu, pre nego što je korišćen za stvaranje acetil-CoA i konačno, citrat je korišćen u normalnom ciklusu limunske kiseline. Da bi se kompenzovale ove energetske promene i da bi se održavao ciklus limunske kiseline, ćelije kancera se oslanjaju na metabolizam glutamina koji je postignut preko povećanja aktivnosti glutaminaze. Eksploatacija ovog fenomena se može postići inhibicijom ove povećane aktivnosti glutaminaze.

[0003] US 2002/0115698 A1 otkriva bis-tiadiazole koji inhibiraju glutaminazu.

REZIME PRONALASKA

[0004] Ovde su opisani heterociklusi koji sadrže, njihove farmaceutski prihvatljive soli, solvate i hidrate. Jedinjenja mogu biti korišćena za tretman poremaćaja opisanog ovde, na primer, inhibicijom glutaminaze kod pacijenta. Takođe su obezbeđene kompozicije (npr., farmaceutske kompozicije) koja sadrže jedinjenje koje je obezbeđeno ovde i takve kompozicije za upotrebu u postupcima za tretman bolesti i stanja, na primer, koja su povezana sa aberantnom funkcijom glutaminaze ili povećanom aktivnošću glutaminaze, uključujući, npr., kancer.

[0005] Predmetni pronalazak je usmeren na jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:

gde

X je C3-C7cikloalkilen

svaki R1 i R2 je nezavisno -NH2, -N(R3)-C(O)-R4 , -C(O)-N(R3)-R4 , -N(R3)-C(O)-O-R4 , -N(R3)-C(O)-N(R3)-R4 ili -N(R3)-C(O)-SR4;

svaki R3 je nezavisno vodonik, C1-6alkil ili aril;

svaki R4 je nezavisno C1-6alkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, heterociklilalkil ili heterociklil, od kojih je svaki supstituisan sa 0-3 R5;

svaki R5 je nezavisno C1-6alkil, C1-6alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6alkoksi, -O-heterociklil,C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, cijano, halo, okso, -OH, -OCF3, -OCHF2,-SO2-C1-

6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2-C1-6alkil, -S(O)2N(R7)2, -N(R7)2ili -C1-6alkilen-N(R7)2, pri čemu navedeni alkil, C1-0alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6alkoksi, -O-heterociklil, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, -SO2-C1-6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2-C1-6alkil, -S(O)2N(R7)2, -N(R7)2ili -C1-6alkilen-N(R7)2je izborno supstituisan sa 0-3 R8; ili dve susedne R5 grupe, uzete zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju cikloalkil ili heterociklil;

svaki R6 je nezavisno vodonik, fluoro, C1-6alkil, -OH, -NH2, -NH(CH3), -N(CH3)2ili C1-6alkoksi;

svaki R7 je nezavisno vodonik ili C1-6alkil;

svaki R8 je nezavisno halo, C1-6alkil, C1-6haloalkil, -OH, -N(R7)2ili C1-6alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6, alkoksi, CN, NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2C1-6alkil ili -S(O)2N(R7)2;

m je 0, 1 ili 2;

n je 0, 1 ili 2;

o je 1

p je 1 i gde

"alkil" označava zasićeni ugljovodonični lanac koji može biti prav lanac ili granati lanac, koji sadrži naznačeni broj atoma ugljenika;

"aril" označava fenil, naftil ili antracenil;

"heteroaril" označava 5-14 –člani aromatični sistem prstena koji ima 1-3 heteroatoma u prstenu ako je monocikličan, 1-6 heteroatoma u prstenu ako je bicikličan ili 1 -9 heteroatoma u prstenu ako je tricikličan, pri čemu su navedeni heteroatomi prstena nezavisno izabrani od O, N i S;

"aralkil" označava C1-C12alkil grupu u kojoj alkil atom vodonika je zamenjen aril grupom; "heteroaralkil", označava C1-C12alkil grupu u kojoj alkil atom vodonika je zamenjen heteroaril grupom;

"cikloalkil" označava ciklične, biciklične, triciklične ili policiklične nearomatične ugljovodonične grupe koje imaju 3 do 12 ugljenika.

"cikloalkilalkil" označava C1-C12alkil grupu u kojoj alkil atom vodonika je zamenjen cikloalkil grupom;

"heterociklilalkil", označava C1-C12alkil grupu u kojoj je alkil atom vodonika zamenjen heterocikličnom grupom; i

"heterociklil" označava 3 do 14-člane ne-aromatične strukture prstena, čije strukture prstena obuhvataju jedan do četiri heteroatoma nezavisno izabranih od O, N i S;

uz uslov da (1) kada je X nesupstituisani ciklopropil, R1 i R2 nisu oba -NH2ili -NH-C(O)-fenil; (2) kada je X nesupstituisani ciklopropil, i m i n su oba 1, tada R1 i R2 nisu oba -NH-C(O)-benzil.

[0006] Pored toga, predmetni pronalazak je usmeren na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (II) prema predmetnom pronalasku ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač i jedinjenje prema predmetnom pronalasku ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u tretmanu kancera kod subjekta kod koga postoji potreba za tim.

[0007] Opisano je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:

gde

X je izborno supstituisan C3-C7cikloalkilen;

svaki W, Y i Z je nezavisno -S-, -CH=, -O-, -N= ili -NH-, uz uslov da za svaki prsten najmanje jedan od W, Y i Z nije -CH=;

svaki R1 i R2 je nezavisno -NH2, -N(R3)-C(O)-R4 , -C(O)-N(R3)-R4 , -N(R3)-C(O)-O-R4 , -N(R3)-C(O)-N(R3)-R4 ili -N(R3)-C(O)-SR4;

svaki R3 je nezavisno vodonik, C1-6alkil ili aril;

svaki R4 je nezavisno C1-6alkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, heterociklilalkil ili heterociklil, od kojih je svaki supstituisan sa 0-3 R5;

svaki R5 je nezavisno C1-6alkil, C1-6alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6alkoksi, -O-heterociklil, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, cijano, halo, okso, -OH, -OCF3, -OCHF2, -SO2-C1-

6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil,-C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2-C1-6alkil, -S(O)2N(R7)2, -N(R7)2, -C1-6alkilen-N(R7)2, gde je navedeni alkil, C1-6alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6alkoksi, -O-heterociklil, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, -SO2-C1-6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2-C1-6alkil, -S(O)2N(R7)2, -N(R7)2ili -C1-6alkilen-N(R7)2izborno supstituisan sa 0-3 R8; ili dve susedne R5 grupe, uzete zajedno sa atomima za koje su vezane formiraju cikloalkil ili heterociklil;

svaki R6 je nezavisno vodonik, fluoro, C1-6alkil, -OH, -NH2, -NH(CH3),-N(CH3)2ili C1-6alkoksi;

svaki R7 je nezavisno vodonik ili C1-6alkil;

svaki R8 je nezavisno halo, C1-6alkil, C1-6haloalkil, -OH, -N(R7)2ili C1-6alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6alkoksi, CN, NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2C1-6alkil, ili -S(O)2N(R7)2;

m je 0, 1 ili 2;

n je 0, 1 ili 2;

o je 1, 2 ili 3; i

p je 1, 2 ili 3; uz uslov da (1) kada je X nesupstituisan ciklopropil, R1 i R2 su oba -NH2ili -NH-C(O)-fenil; (2) X se razlikuje od supstituisanog ciklobutila ili supstituisanog ciklopentila; i (3) kada je X nesupstituisani ciklopropil, i m i n su oba 1, tada su R1 i R2 oba -NH-C(O)-benzil.

[0008] Takođe je opisana kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Kompozicija može biti farmaceutska kompozicija.

[0009] Ovde je takođe opisano jedinjenje za upotrebu u postupku za lečenje ili prevenciju bolesti, stanja ili poremećaja kao što je opisano (npr., lečenje) ovde koji sadrži primenu jedinjenja koje je ovde opisano, njegove farmaceutski prihvatljive soli ili farmaceutske kompozicije koje sadrži jedinjenje koje je ovde opisano ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0010] Ovde je takođe opisano jedinjenje za upotrebu u postupku za inhibiciju glutaminaze, npr., kod pacijenta kod koga postoji potreba za tim. Ovde je takođe opisana redukcija nivoa proizvoda glutaminaze kod subjekta, npr., pacijenta kod koga postoji potreba za tim. Postupci obuhvataju primenu efikasne količine jedinjenja koje je ovde opisano ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na subjekta kod koga postoji potreba za tim, na taj način inhibirajući nivo glutaminaze kod subjekta.

[0011] Ovde je takođe opisano jedinjenje za upotrebu u postupku za lečenje subjekta koji pati od ili je podložan bolesti ili poremećaju povezanim sa aberantnom funkcijom glutaminaze ili povišenom aktivnošću glutaminaze kod subjekta kod koga postoji potreba za tim. Postupak sadrži korak primene efikasne količine jedinjenja koje je ovde opisano na subjekta kod koga postoji potreba za tim, na taj način lečeći, sprećavajući ili poboljšavajući bolest ili poremećaj kod subjekta. Jedinjenje može biti obezbeđeno u farmaceutskoj kompoziciji. Postupak može da obuhvata identifikaciju ili selekciju subjekta koji bi imao koristi od inhibicije glutaminaze ili smanjenja nivoa glitaminaze. Npr., subjekat može biti identifikovan na osnovu nivoa aktivnosti glutaminaze u na uzorku ćelije ili tkiva subjekta za lečenje kancera povezanog sa aberantnom funkcijom ili aktivnošću glutaminaze. Izabrani subjekat može biti pacijent koji pati od ili je podložan poremećaju ili bolesti koji su ovde identifikovani, npr., poremećaj okaraktrisan neželjenim ćelijskim rastom ili proliferacijom, npr., kancer ili drugi neoplastični poremećaji.

[0012] Ovde je takođe opisano jedinjenje za upotrebu u postupku za lečenje kancera kod subjekta, pri čemu postupak sadrži: izborno, dobijanje uzorka od subjekta; dobijanje procene ili procenu uzorka subjekta, pri čemu je uzorak subjekta okarakterisan i) niskim nivoom ekspresije E-kadherina u poređenju sa referentnim standardom, ii) visokim nivoom ekspresije vimentina u poređenju sa referentnim standardom, ili iii) niskim ili smanjenim nivoom ekspresije piruvat karboksilaze; i primenu na subjekta kod koga postoji potreba za tim terapeutski efikasne količine jedinjenja koje je tu opisano. Uzorak od subjekta može biti okarakterisan i) niskim nivoom ekspresije E-kadherina u poređenju sa referentnim standardom i ii) visokim nivoom ekspresije vimentina u poređenju sa referentnim standardom.

Uzorak od subjekta može biti okarakterisan ili dalje okarakterisan niskim ili smanjenim nivoima ekspresije piruvat karboksilaze u poređenju sa referentnim standardom.

[0013] Ovde je takođe opisano jedinjenje za upotrebu u postupku za lečenje kancera kod subjekta okarakterisanog i) niskim nivoom ekspresije E-kadherina u poređenju sa referentnim standardom, ii) visokim nivoom ekspresije vimentina u poređenju sa referentnim standardom ili iii) niskim ili smanjenim nivoom ekspresije piruvat karboksilaze; koji sadrži primenu na subjekta kod koga postoji potreba za tim terapeutski efikasne količine jedinjenja koje je ovde opisano. Subjekat može biti okarakterisan i) niskim nivoom ekspresije E-kadherina u poređenju sa referentnim standardom i ii) visokim nivoom ekspresije vimentina u poređenju sa referentnim standardom.

[0014] Subjekat može biti okarakterisan ili dalje okarakterisan niskim ili smanjenim nivoima ekspresije piruvat dekarboksilaze u poređenju sa referentnim standardom.

DETALJAN OPIS

[0015] Detalji konstrukcije i uređenja komponenti navedeni u sledećem opisu ili ilustrovani na crtežima nisu određeni kao ograničavajući. Primeri izvođenja mogu biti izvedeni ili sprovedeni na različite načine. Takođe, frazeologija i terminologija koja je ovde korišćena je za svrhu opisa i ne bi je trebalo tumačiti kao ograničavajuće. Upotreba "uključujući," "sadrži," ili "ima," "sadrži", "obuhvata", i njihove varijacije ovde, određena je tako da obuhvata stavke navedene ovde u daljem tekstu i njihove ekvivalente kao i dodatne stavke.

Jedinjenja

[0016] Ovde su opisana jedinjenja i kompozicije koje inhibiraju glutaminazu. Jedinjenja koja inhibiraju glutaminazu, mogu biti korišćena za lečenje poremećaja kao što su neoplastični poremećaji (npr., kancer).

[0017] Ovde je opisano jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:

gde

X je izborno supstituisani C3-C7cikloalkilen;

svaki W, Y i Z je nezavisno -S-, -CH=, -O-, -N= ili -NH-, uz uslov da za svaki prsten najmanje jedan od W, Y i Z nije -CH=;

svaki R1 i R2 je nezavisno -NH2, -N(R3)-C(O)-R4. -C(O)-N(R3)-R4 , -N(R3)-C(O)-O-R4 , -N(R3)-C(O)-N(R3)-R4 ili -N(R3)-C(O)-SR4;

svaki R3 je nezavisno vodonik, C1-6alkil ili aril;

svaki R4 je nezavisno C1-6alkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, heterociklilalkil ili heterociklil, od kojih je svaki supstituisan sa 0-3 R5;

svaki R5 je nezavisno C1-6alkil, C1-6alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6alkoksi,-O-heterociklil, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, cijano, halo, okso, -OH, -OCF3, -OCHF2, -SO2-C1-

6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2-C1-6alkil, -S(O)2N(R7)2, -N(R7)2, -C1-6alkilen-N(R7)2, gde je navedeni alkil, C1-6alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6alkoksi, -O-heterociklil, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, -SO2-C1-6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2-C1-6alkil, -S(O)2N(R7) 7

2, -N(R )2ili -C1-6alkilen-N(R7)2izborno supstituisan sa 0-3 R8; ili dve susedne R5 grupe, uzete zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju cikloalkil ili heterociklil;

svaki R6 je nezavisno vodonik, fluoro, C1-6alkil, -OH, -NH2, -NH(CH3),-N(CH3)2ili C1-6alkoksi;

svaki R7 je nezavisno vodonik ili C1-6alkil;

svaki R8 je nezavisno halo, C1-6alkil, C1-6haloalkil, -OH, -N(R7)2ili C1-6alkoksi, -O-C1-6alkileneC1-6alkoksi, CN, NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2C1-6alkil, ili -S(O)2N(R7)2;

m je 0, 1 ili 2;

n je 0, 1 ili 2;

o je 1, 2 ili 3; i

p je 1, 2 ili 3; uz uslov da (1) kada je X nesupstituisan ciklopropil, R1 i R2 nisu oba -NH2ili -NH-C(O)-fenil; (2) X se razlikuje od supstituisanog ciklobutila ili supstituisanog ciklopentila; i (3) kada je X nesupstituisani ciklopropil, i m i n su oba 1, tada R1 i R2 nisu oba -NH-C(O)-benzil.

[0018] Takođe je opisano jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:

gde

X je izborno supstituisani C3-C7cikloalkilen;

svaki W, Y i Z je nezavisno -S-, -CH=, -O-, -N= ili -NH-, uz uslov da za svaki prsten najmanje jedan od W, Y i Z nije -CH=;

svaki R1 i R2 je nezavisno -NH2, -N(R3)-C(O)-R4 , -C(O)-N(R3)-R4 , -N(R3)-C(O)-O-R4 , -N(R3)-C(O)-N(R3)-R4 ili -N(R3)-C(O)-SR4;

svaki R3 je nezavisno vodonik, C1-6alkil ili aril;

svaki R4 je nezavisno C1-6alkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, heterociklilalkil ili heterociklil, od kojih je svaki supstituisan sa 0-3 R5;

svaki R5 je nezavisno C1-6alkil, C1-6alkoksi, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-

7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, cijano, halo, okso, -OH, -OCF3, -OCHF2, -SO2-C1-6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -N(R7)2ili dve susedne R5 grupe, uzeti zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju heterociklil; svaki R6 je nezavisno vodonik, fluoro, C1-6alkil, -OH, -NH2, -NH(CH3),-N(CH3)2ili C1-6alkoksi;

svaki R7 je nezavisno vodonik ili C1-6alkil;

m je 0, 1 ili 2;

n je 0, 1 ili 2;

ο je 1, 2 ili 3; i

p je 1, 2 ili 3; uz uslov da (1) kada je X nesupstituisani ciklopropil, R1 i R2 nisu oba -NH2ili -NH-C(O)-fenil; (2) X se razlikuje od supstituisanog ciklobutila ili supstituisanog ciklopentila; i (3) kada je X nesupstituisani ciklopropil, i m i n su oba 1, tada R1 i R2 nisu oba -NH-C(O)-benzil.

[0019] Takođe je opisano jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:

gde

X je C3-C7cikloalkilen;

svaki W, Y i Z je nezavisno -S-, -CH=, -O-, -N= ili -NH-, uz uslov da najmanje jedan od W, Y i Z nije -CH=;

svaki R1 i R2 je nezavisno -NH2, -N(R3)-C(O)-R4 , -C(O)-N(R3)-R4 , -N(R3)-C(O)-O-R4 , -N(R3)-C(O)-N(R3)-R4 ili -N(R3)-C(O)-SR4;

svaki R3 je nezavisno vodonik, C1-6alkil ili aril;

svaki R4 je nezavisno C1-6alkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, heterociklilalkil ili heterociklil, od kojih je svaki supstituisan sa 0-3 R5;

svaki R5 je nezavisno C1-6alkil, C1-6alkoksi, -O-C1-6alkileneC1-6alkoksi, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, cijano, halo, okso, -OH, -OCF3, -OCHF2, -SO2-C1-6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2-C1-6alkil, -S(O)2N(R7)2, -N(R7)2, -C1-

6alkilen-N(R7)2, pri čemu je navedeni alkil, C1-6alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6alkoksi, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, -SO2-C1-6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2,-N(R7)S(O)1-2-C1-6alkil, -S(O)2N(R7)2, -N(R7)2ili -C1-6alkilen-N(R7)2izborno supstituisan sa 0-3 R8; ili dve susedne R5 grupe, uzete zajedno sa atomima za koje su vezane formiraju cikloalkil ili heterociklil;

svaki R6 je nezavisno vodonik, fluoro, C1-6alkil, -OH, -NH2, -NH(CH3),-N(CH3)2ili C1-6alkoksi;

svaki R7 je nezavisno vodonik ili C1-6alkil;

svaki R8 je nezavisno halo, C1-6alkil, C1-6haloalkil, -OH, -N(R7)2ili C1-6alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6alkoksi, CN, NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2C1-6alkil ili -S(O)2N(R7)2;

m je 0, 1 ili 2;

n je 0, 1 ili 2;

o je 1, 2 ili 3; i

p je 1, 2 ili 3; uz uslov da (1) kada je X nesupstituisani ciklopropil, R1 i R2 nisu oba NH-fenil; i (2) X se razlikuje od supstituisanog ciklobutila ili supstituisanog ciklopentila.

[0020] Takođe je opisano jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:

gde

X je C3-C7cikloalkilen;

svaki W, Y i Z je nezavisno -S-, -CH=, -O-, -N= ili -NH-, uz uslov da najmanje jedan od W, Y i Z nije -CH=;

svaki R1 i R2 je nezavisno -NH2, -N(R3)-C(O)-R4 , -C(O)-N(R3)-R4 , -N(R3)-C(O)-O-R4 , -N(R3)-C(O)-N(R3)-R4 ili -N(R3)-C(O)-SR4;

svaki R3 je nezavisno vodonik , C1-6alkil ili aril;

svaki R4 je nezavisno C1-6alkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, heterociklilalkil ili heterociklil, od kojih je svaki supstituisan sa 0-3 R5;

svaki R5 je nezavisno C1-6alkil, C1-6alkoksi, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-

7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, cijano, halo, okso, -OH, -OCF3, -OCHF2, -SO2-C1-6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -N(R7)2ili dve susedne R5 grupe, uzete zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju heterociklil; svaki R6 je nezavisno vodonik, fluoro, C1-6alkil, -OH, -NH2, -NH(CH3),-N(CH3)2ili C1-6alkoksi;

svaki R7 je nezavisno vodonik ili C1-6alkil;

m je 0, 1 ili 2;

n je 0, 1 ili 2;

o je 1, 2 ili 3; i

p je 1, 2 ili 3; uz uslov da (1) kada je X nesupstituisani ciklopropil, R1 i R2 nisu oba NH-fenil; i (2) X se razlikuje od supstituisanog ciklobutila ili supstituisanog ciklopentila.

[0021] U nekim primerima izvođenja, X je nesupstituisani ciklopropil. U nekim primerima izvođenja, X je nesupstituisani ciklobutil. U nekim primerima izvođenja, X je nesupstituisani ciklopentil. U nekim primerima izvođenja, X je cikloheksil. U nekim primerima izvođenja, X je cikloheptil.

[0022] U nekim primerima izvođenja, svaki Y je -N=. U nekim primerima izvođenja, svaki Z je -N-. U nekim primerima izvođenja, svaki W je -S-. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki W je -S-, svaki Y je -N= i svaki Z je -N=.

[0023] U nekim primerima izvođenja, o je 1. U nekim primerima izvođenja, p je 1. U nekim primerima izvođenja, o je 1 i p je 1.

[0024] U nekim primerima izvođenja, m je 0. U nekim primerima izvođenja, n je 0. U nekim primerima izvođenja, m je 0 i n je 0. U nekim primerima izvođenja, R<1>i R<2>su isti. U nekim primerima izvođenja, R<1>i R<2>su različiti.

[0025] U nekim primerima izvođenja, m je 1. U nekim primerima izvođenja, n je 1. U nekim primerima izvođenja, n je 1 i m je 1. U nekim primerima izvođenja nekih aspekata ovih primera izvođenja, svaki R<6>je vodonik. U nekim primerima izvođenja, R<1>i R<2>su isti. U nekim primerima izvođenja, R<1>i R<2>su različiti.

[0026] U nekim primerima izvođenja, R<1>i R<2>su svaki -N(R<3>)-C(O)-R<4>, pri čemu svaki R<3>je vodonik i svaki R4 je aralkil ili heteroaralkil, od kojih je svaki supstituisan sa 0-3 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, R<1>i R<2>su isti.

[0027] U nekim primerima izvođenja, R<1>i R<2>su svaki -N(R<3>)-C(O)-R<4>pri čemu je svaki R<3>vodonik. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je aralkil supstituisan sa 0-3 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, R<1>i R<2>su isti.

[0028] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je aralkil (npr., benzil) supstituisan sa 0 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je aralkil (npr., benzil) supstituisan sa jednim R5. U nekim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R5 je -N(CH3)2. U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R5 je C1-6alkoksi (npr., metoksi ili izopropoksi). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R5 je -O-heterociklil (npr., -O-oksetan). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je halo (npr., fluoro ili hloro). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je -NH2. U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R5 je -SO2-CH3. U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R5 je -NHC(O)CH3. U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R5 je -NO2. U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je cijano. U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je C1-6haloalkoksi (npr., trifluorometoksi). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je C1-6haloalkil (npr., trifluorometil). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je C1-6alkil (npr., metil). U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je aralkil (npr., benzil) supstituisan sa dva R5. U nekim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, dva R<5>su halo (npr., fluoro) i druga dva R5 su C1-6alkoksi (npr., metoksi). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je halo (npr., fluoro). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je C1-6alkoksi (npr., metoksi). U drugim dodatnim aspektima, ovih primera izvođenja, dve susedne R<5>grupe su uzete zajedno sa atomima za koje su vezane tako da formiraju heterociklil prsten koji rezultuje u grupi sledeće strukture:

[0029] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je heteroaralkil (npr., 2-piridinilmetil, 2-piridiniletil, 3-piridinilmetil, 4-piridinilmetil, 2-pirazinilmetil, 2-tiofenilmetil, 2-indolilmetil, 4-indolilmetil, 2-pirimidinilmetil ili 2-tiazolilmetil) supstituisan sa 0-3 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je heteroaralkil (npr., 2-piridinilmetil, 2-piridiniletil, 3-piridinilmetil, 4-piridinilmetil, 2-pirazinilmetil, 2-tiofenilmetil, 2-indolilmetil, 3-indolilmetil, 4-indolilmetil, 2-pirimidinilmetil ili 2-tiazolilmetil) supstituisan sa 0 R5. U drugim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je heteroaralkil (npr., 5-izoksazolil, 2-piridinilmetil ili 3-indolilmetil) supstituisan sa jednim R5. U nekim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je C1-6alkil (npr., metil). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je C1-6alkoksi (npr., metoksi). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je cijano. U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je -N(CH3)2. U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R5 je -NHC(O)CH3. U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R5 je halo (npr., bromo).

[0030] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je C1-6alkil (npr., metil, etil, npropil ili izopropil ) supstituisan sa 0-3 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R4 je C1-6alkil (npr., metil, etil, n-propil ili izopropil) supstituisan sa 0 R5. U drugim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je C1-6alkil (npr., metil, etil ili terc-butil) supstituisan sa jednim R5. U nekim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je C1-6tioalkoksi (npr., tiometoksi). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R5 je C1-6haloalkil (npr., trifluorometil). U drugim dodatnim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<5>je -OH.

[0031] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je aril (npr., fenil) supstituisan sa 0-3 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je aril (npr., fenil) supstituisan sa 0 R5.

[0032] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je aril (npr., fenil) supstituisan sa jednim R5, gde R5 je heterociklil (npr., azetidinil) i R5 je supstituisan sa dva halo (npr., fluoro).

[0033] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je heterociklil (npr., 3-tetrahidrofuranil) supstituisan sa 0-3 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je heterociklil (npr., 3-tetrahidrofuranil) supstituisan sa 0 R5.

[0034] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je heterociklilalkil (npr., 2-tetrahidrofuranilmetil) supstituisan sa 0-3 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R4 je heterociklilalkil (npr., 2-tetrahidrofuranilmetil) supstituisan sa 0 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je heterociklilalkil supstituisan sa 0 R<5>i predstavljen je sledećom strukturom:

[0035] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je cikloalkil (npr., ciklopentil) supstituisan sa 0-3 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je cikloalkil (npr., ciklopentil) supstituisan sa 0 R5.

[0036] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je cikloalkilalkil (npr., ciklopropilmetil) supstituisan sa 0-3 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je cikloalkilalkil (npr., ciklopropilmetil) supstituisan sa 0 R5.

[0037] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je C1-6alkenil (npr., etenil) supstituisan sa 0-3 R5. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je C1-6alkenil (npr., etenil) supstituisan sa jednim R5. U nekom dodatnom aspektu ovih primera izvođenja, svaki R5 je heteroaril (npr., 2-piridinil).

[0038] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, jedan R<4>je C1-6alkil (npr., metil) supstituisan sa 0 R5 i drugi R4 je heteroaralkil (npr., 3-indolilmetil) supstituisan sa jednim R5, pri čemu R<5>je C1-6alkil (npr., metil).

[0039] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, jedan R<4>je C1-6alkil (npr., metil) supstituisan sa 0 R5 i drugi R4 je heteroaralkil (npr., 2-piridil) supstituisan sa jednim R5, pri čemu R<5>je heterociklil (npr., azetidinil), i R<5>je supstituisan sa dva halo (npr., fluoro).

[0040] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, jedan R<4>je C1-6alkil (npr., metil) supstituisan sa 0 R5 i drugi R4 je heteroaralkil (npr., 3-indolilmetil) supstituisan sa jednim R5, gde R5 je C1-6alkil (npr., metil).

[0041] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, jedan R<4>je C1-6alkil (npr., metil) i drugi R4 je heteroaralkil (npr., 2-piridinilmetil), od kojih je svaki supstituisan sa 0 R5.

[0042] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, jedan R<4>je heteroaralkil (npr., 2-piridinilmetil) supstituisan sa 0 R5 i drugi R4 je aralkil (npr., benzil) supstituisan sa jednim R5, pri čemu R<5>je C1-6alkoksi (npr., metoksi).

[0043] U nekim aspektima ovih primera izvođenja, jedan R<4>je C1-6alkil (npr., metil) supstituisan sa 0 R5 i drugi R4 je aralkil (npr., benzil) supstituisan sa jednim R5, pri čemu R<5>je C1-6alkoksi (npr., metoksi).

[0044] U nekim primerima izvođenja, R<2>je -NH2i R1 je -N(R3)-C(O)-R4 , pri čemu R<3>je vodonik i R4 je heteroaralkil (npr., 2-piridinilmetil) supstituisan sa 0 R5.

[0045] U nekim primerima izvođenja, svaki R<6>je H.

[0046] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je predstavljeno jedinjenjem formule (II):

pri čemu R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, o, p, m, n i X su kao što su definisani u formuli (I).

[0047] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) ili (II) je predstavljeno jedinjenjem formule (IIa):

pri čemu R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, o, p i X su kao što su definisani u formuli (I).

[0048] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I), (II) ili (IIa) je predstavljeno jedinjenjem formule (III):

pri čemu R<4>, R<5>i X su kao što su definisani u formuli (I).

[0049] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je predstavljeno jedinjenjem formule (IV):

pri čemu R<1>, R<2>, R<3>, R<4>i R<5>su kao što su definisani u formuli (I) i q je 0, 1, 2, 3 ili 4.

[0050] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) ili (IV) je predstavljeno jedinjenjem formule (IVa):

pri čemu R<4>, R<5>i q su kao što su definisani u formuli (IV).

[0051] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) ili (IV) je predstavljeno jedinjenjem formule (IVb):

pri čemu R<4>, R<5>i q su kao što su definisani u formuli (IV).

[0052] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) ili (IV) je predstavljeno jedinjenjem formule (IVc):

pri čemu R<4>, R<5>i q su kao što su definisani u formuli (IV).

[0053] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je predstavljeno jedinjenjem formule (V):

pri čemu R<4>je C1-6alkil, aralkil ili heteroaralkil supstituisan sa 0, 1 ili 2 R5, pri čemu R<5>je izabran od metil, metoksi, -NH2, -N(CH3)2, -SO2-CH3,-NHC(O)CH3, NO2, CN, bromo ili fluoro. U nekim primerima izvođenja formule (V), svaki R<4>je isti. U nekim primerima izvođenja formule (V), svaki R<4>je različit.

[0054] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je predstavljeno jedinjenjem formule (Va):

pri čemu R<4>je C1-6alkil, aralkil ili heteroaralkil supstituisan sa 0, 1 ili 2 R5, pri čemu R<5>je izabran od metil, metoksi, -NH2, -N(CH3)2, -SO2-CH3,-NHC(O)CH3, NO2, CN, bromo ili fluoro. U nekim primerima izvođenja formule (Va), svaki R<4>je isti. U nekim primerima izvođenja formule (Va), svaki R<4>je različit.

[0055] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je predstavljeno jedinjenjem formule (Vb):

pri čemu R<4>je C1-6alkil, aralkil ili heteroaralkil supstituisan sa 0, 1 ili 2 R5, pri čemu R<5>je izabran od metil, metoksi, -NH2, -N(CH3)2, -SO2-CH3,-NHC(O)CH3, NO2, CN, bromo ili fluoro. U nekim primerima izvođenja formule (Vb), svaki R<4>je isti. U nekim primerima izvođenja formule (Vb), svaki R<4>je različit.

[0056] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je predstavljeno jedinjenjem formule (VI):

pri čemu R<4>je aralkil supstituisan sa 1 R<5>, pri čemu R<5>je metoksi. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je isti.

[0057] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je predstavljeno jedinjenjem formule (VIa):

pri čemu R<4>je aralkil supstituisan sa 1 R<5>, pri čemu R<5>je metoksi. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je isti.

[0058] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) je predstavljeno jedinjenjem formule (VIb):

pri čemu R<4>je aralkil supstituisan sa 1 R<5>, pri čemu R<5>je metoksi. U nekim aspektima ovih primera izvođenja, svaki R<4>je isti.

[0059] U određenim primerima izvođenja, primeri jedinjenja formule I obuhvataju jedinjenja opisana u Tabeli 1 i u Primerima. Jedinjenje koje je ovde opisano može biti testirano za njegovu sposobnost da inhibira glutaminazu, npr., pomoću analize kao što je opisana u Primerima. Radi jednostavnosti, inhibitorna aktivnost ovih jedinjenja je predstavljena kao IC50testirana u analizi Primera A ili Primera B u Tabeli 1. Primeri jedinjenja su prikazani u Tabeli 1 u daljem tekstu. Kao što je prikazano, "A" označava inhibitor glutaminaze sa IC50< 100 nM. "B" označava inhibitor glutaminaze sa IC50između 100 nM i 500 nM. "C" označava inhibitor glutaminaze sa IC50između 500 nM i 1000 nM. "D" označava inhibitor glutaminaze sa IC50između 1 µM i 2 µM. "E" označava inhibitor glutaminaze sa IC50između 2 µM i 10 µM. "N/A" označava jedinjenja koja je IC50nedostupan.

Tabela 1 (* označava referentni primer)

[0060] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu biti pripremljena upotrebom različitih sintetičkih tehnika kao što su one opisane u primerima koji su ovde dati. Kao što može biti jasno stručnjacima iz date oblasti tehnike, postupci za sintezu jedinjenja formula koje su ovde date biće očigledni stručnjacima iz date oblasti tehnike. Dodatno, različiti sintetički koraci mogu biti izvedeni u alternativnom redosledu ili takvom redosledu da se dobiju željena jedinjenja. Sintetičke hemijske transformacije i metodologije zaštitne grupe (zaštita i deprotekcija) korisne u sintezi jedinjenja koja su ovde opisana su poznate u stanju tehnike i obuhvataju, na primer, one kao što su opisane u R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, JohnWiley and Sons (1994); i L. Paquette, ed., Enciklopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995), i njihovim kasnijim izdanjima.

[0061] Jedinjenja koja su ovde obezbeđena mogu da sadrže jedan ili više asimetričnih centara i na taj način se javljaju kao racemati i racemske smeše, pojedinačni enantiomeri, pojedinačni diastereomeri i diastereomerne smeše. Svi takvi izomerni oblici ovih jedinjenja su izričito uključeni unutar obima. Osim ukoliko je drugačije naznačeno kada je jedinjenje imenovano ili prikazano preko strukture bez navođenja stereohemije i ima jedan ili više hiralnih centara, razume se da predstavlja sve moguće stereoizomere jedinjenja. Jedinjenja koja su ovim obezbeđena takođe mogu da sadrže veze (npr., ugljenik-ugljenik veze) ili supstituente koji mogu da ograniče rotaciju veze, npr. ograničenje koje je rezultat prisustva prstena ili dvogube veze. Prema tome, svi cis/trans i E/Z izomeri su izričito uključeni.

[0062] Jedinjenja koja su ovde obezbeđena (npr. formule I) mogu takođe da sadrže jednu ili više izotopskih supstitucija. Na primer, H može biti u bilo kom izotopskom obliku, uključujući<1>H,<2>H (D ili deuterijum) i<3>H (T ili tricijum); C može biti u bilo kom izotopskom obliku, uključujući<12>C,<13>C i<14>C; O može biti u bilo kom izotopskom obliku, uključujući<16>O i 18O; i slično. Jedinjenja koja su ovde data takođe mogu biti predstavljena u višestrukim tautomernim oblicima, u takvim slučajevima, izričito obuhvataju sve tautomerne oblike jedinjenja koja su ovde opisana, iako samo pojedinačan tautomerni oblik može biti predstavljen (npr., alkilacija sistema prstena može da rezultuje u alkilaciji na višestrukim mestima; svi takvi reakcioni proizvodi su izričito obuhvaćeni). Svi takvi izomerni oblici takvih jedinjenja su izričito uključeni. Svi kristalni oblici jedinjenja koja su ovde opisana su izričito uključeni.

[0063] Jedinjenja koja su ovde obezbeđena obuhvataju sama jedinjenja, kao i njihove soli, ako je primenljivo. So, na primer, može biti formirana između anjona i pozitivno naelektrisanog supstituenta (npr., amino) na jedinjenju koje je ovde opisano. Pogodni anjoni obuhvataju hlorid, bromid, jodid, sulfat, nitrat, fosfat, citrat, metansulfonat, trifluoroacetat i acetat. Slično, so takođe može biti formirana između katjona i negativno naelektrisanog supstituenta (npr., karboksilata) na jedinjenju koje je ovde opisano. Pogodni katjoni obuhvataju jon natrijuma, jon kalijuma, jon magnezijuma, jon kalcijuma i amonijum katjon kao što je tetrametilamonijum jon. Primeri prolekova koji su opisani ovde obuhvataju estre i druge farmaceutski prihvatljive derivate, koji, posle primene na subjekta, su sposobni da obezbede aktivna jedinjenja.

[0064] Jedinjenja koja su ovde obezbeđena mogu biti modifikovana dodavanjem odgovarajućih funkcionalnih grupa da bi se pojačale izabrane biološke osobine, npr., ciljno delovanje na određeno tkivo. Takve modifikacije su poznate u stanju tehnike i obuhvataju one koje povećavaju biološko prodiranje u dat biološki odeljak (npr., krv, limfni sistem, centralni nervni sistem), povećavaju oralnu biodostupnost, povećavaju rastvorljivost da bi se omogućila primena putem injekcije, menjaju metabolizam i menjaju stopu izlučivanja.

[0065] U alternativnom primeru izvođenja, jedinjenja koja su ovde opisana mogu biti korišćena kao platforme ili osnove koje se mogu koristiti u kombinatornim hemijskim tehnikama za pripremu derivata i/ili hemijskih biblioteka jedinjenja. Takvi derivati i biblioteke jedinjenja imaju biološku aktivost i korisni su za identifikaciju i dizajn jedinjenja koja poseduju određenu aktivnost. Kombinatorne tehnike pogodne za upotrebu jedinjenja koja su ovde opisana su poznate u stanju tehnike kao što su ilustrovali Obrecht, D. and Villalgrodo, J.M., Solid-Supported Combinatorial and Parallel Synthesis of Small-Molecular-Weight Compound Libraries, Pergamon-Elsevier Science Limited (1998), i obuhvataju one kao što su "podeliti i sakupiti" ili "paralelne" sintetičke tehnike, tehnike čvrste faze i faze rastvora i tehnike kodiranja (videti, na primer, Czarnik, A.W., Curr. Opin. Chem. Bio., (1997) 1,60. Na taj način, ovde je opisan postupak za upotrebu jedinjenja koja su ovde opisana za generisanje derivata ili hemijskih biblioteka koji sadrži; 1) obezbeđivanje tela koje sadrži množinu komorica; 2) obezbeđivanje jednog ili više jedinjenja identifikovanih pomoću postupaka opisanih ovde u svakoj komorici; 3) obezbeđivanje jedne ili više dodatnih hemikalija u svakoj komorici; 4) izolaciju rezultujućeg jednog ili više proizvoda iz svake komorice. Ovde je takođe opisan postupak za upotrebu jedinjenja koja su ovde opisana za generisanje derivata ili hemijskih biblioteka koji sadrži: 1) obezbeđivanje jednog ili više jedinjenja koja su ovde opisana vezanih za čvrstu podlogu; 2) tretman jednog ili više jedinjenja identifikovanih pomoću postupaka koji su ovde opisani vezanih za čvrstu podlogu sa jednom ili više dodatnih hemikalija; 3) izolaciju rezultujućih jednog ili više proizvoda sa čvrste podloge. U postupcima koji su opisani u prethodnom tekstu, "tagovi" ili identifikatorske ili obeleživačke grupe mogu biti vezane za i/ili odvojene od jedinjenja koja su ovde opisana ili njihove derivate, za olakšanje praćenja, identifikacije ili izolacije željenih proizvoda ili njihovih intermedijera. Takve grupe su poznate u stanju tehnike. Hemikalije korišćene u gore navedenim postupcima mogu da obuhvataju, na primer, rastvarače, reagense, katalizatore, reagense zaštitne grupe ili deprotekcione grupe i slično. Primeri takvih hemikalija su oni koji se javljaju u različitim tekstovima sintetičke hemije i hemije zaštitnih grupa i studijama čije su reference ovde navedene.

Definicije

[0066] Termin "halo" ili "halogen" označava bilo koji radikal fluora, hlora, broma ili joda.

[0067] Termin "alkil" označava zasićeni ili nezasićeni ugljovodonični lanac koji može biti prav lanac ili granati lanac, koji sadrži naznačeni broj atoma ugljenika. Na primer, C1-C12alkil označava da grupa može imati od 1 do 12 (uključujući navedene vrednosti) atoma ugljenika u njoj. Termin „alkil“ obuhvata alkenil grupe. Termin "haloalkil" označava alkil u kome su jedan ili više atoma vodonika zamenjeni sa halo, i obuhvata alkil grupe u kojima su svi vodonici zamenjeni sa halo (npr., perfluoroalkil). Termini "arilalkil" ili "aralkil" označava alkil grupu u kojoj je atom vodonika alkila zamenjen aril grupom. Aralkil obuhvata grupe u kojima su više od jednog atoma vodonika zamenjeni aril grupom. Primeri za "arilalkil" ili "aralkil" obuhvataju benzil, 2-feniletil, 3-fenilpropil, 9-fluorenil, benzhidril i tritil grupe.

[0068] Termin "alkilen" ili “cikloalkilen“ označava dvovalentni alkil ili cikloalkil, npr., -CH2-, -CH2CH2- i - CH2CH2CH2-.

[0069] Termin "alkenil" označava pravi ili granati ugljovodonični lanac koji sadrži 2-12 atoma ugljenika i koji ima jednu ili više dvogubih veza. Primeri alkenil grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na, alil, propenil, 2-butenil, 3-heksenil i 3-oktenil grupe. Jedan od ugljenika dvogube veze može izborno biti tačka vezivanja alkenil supstituenta. Termin "alkinil" označava prav ili granat ugljovodonični lanac koji sadrži 2-12 atoma ugljenika i okarakterisan time što ima jednu ili više trogubih veza. Primeri alkinil grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na, etinil, propargil i 3-heksinil. Jedan od ugljenika trogube veze može izborno biti tačka vezivanja alkinil supstituenta.

[0070] Termin "alkoksi" označava -O-alkil radikal. Termin "haloalkoksi" označava alkoksi u kome su jedan ili više atoma vodonika zamenjeni sa halo, i obuhvata alkoksi grupe u kojima su svi vodonici zamenjeni sa halo (npr., perfluoroalkoksi).

[0071] Termin "aril" označava monocikličan, bicikličan ili tricikličan aromatičan ugljovodonični sistem prstena, gde bilo koji atom prstena sposoban za supstituciju može biti supstituisan sa jednim ili više supstituenata.

[0072] Termin "cikloalkil" kao što je ovde korišćen obuhvata ciklične, biciklične, triciklične ili policiklične nearomatične ugljovodonične grupe koje imaju 3 do 12 ugljenika. Bilo koji atom prstena koji se može supstituisati može biti supstituisan (npr., sa jednim ili više supstituenata). Cikloalkil grupe mogu da sadrže fuzionisane ili spiro prstenove. Fuzionisani prstenovi su prstenovi koji dele zajednički atom ugljenika. Primeri cikloalkil grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na, ciklopropil, cikloheksil, metilcikloheksil, adamantil i norbornil.

[0073] Termin "cikloalkilalkil" kao što je ovde korišćen označava alkil grupu supstituisanu sa cikloalkil grupom.

[0074] Termini "heterociklil" ili "heterociklična grupa" označavaju 3- do 14-člane nearomatične prstenaste strukture (npr., 3- do 14-člane prstenove, poželjnije 3- do 7-člane prstenove), čije prstenaste strukture obuhvataju jedan do četiri heteroatoma nezavisno izabranih od O, N i S. Heterociklil ili heterociklične grupe mogu da sadrže fuzionisane ili spiro prstenove. Heterociklusi takođe mogu biti policiklusi, pri čemu svaka grupa ima, npr., 5-7 članova prstena. Termin "heterociklil" ili "heterociklična grupa" obuhvata zasićene i delimično zasićene heterociklil strukture. Heteroatom može izborno biti tačka vezivanja heterociklil supstituenta.

[0075] Termin "heteroaril" označava 5-14 –člani (tj., 5-8 –člani monociklični, 8-12 –člani biciklični ili 11-14 –člani triciklični) aromatični sistem prstena koji ima 1-3 heteroatoma u prstenu ako je monocikličan, 1-6 heteroatoma u prstenu ako je bicikličan ili 1-9 heteroatoma u prstenu ako je tricikličan, pri čemu su navedeni heteroatomi prstena nezavisno izabrani od O, N i S (npr., 1-3, 1-6 ili 1-9 heteroatoma prstena od N, O ili S ako je monocikličan, bicikličan ili tricikličan, respektivno). Bilo koji atom prstena koji se može supstituisati može biti supstituisan (npr., sa jednim ili više supstituenata).

[0076] Biciklični i triciklični sistemi prstena koji sadrže jedan ili više heteroatoma i oba aromatični i ne-aromatični prsten gde je tačka vezivanja od sistema prstena za ostatak molekula preko ne-aromatičnog prstena smatraju se heterociklil grupama. Biciklični ili triciklični sistemi prstena gde je aril ili heteroaril fuzionisan za cikloalkil ili heterociklil i tačka vezivanja od sistema prstena za ostatak molekula je preko aromatičnog prstena smatraju se aril ili heteroaril grupama.

[0077] Termin "heterociklilalkil", kao što je ovde korišćen, označava alkil grupu supstituisanu sa heterociklus grupom.

[0078] Termini "hetaralkil" i "heteroaralkil", kao što su ovde korišćeni, označavaju alkil grupu supstituisanu sa heteroaril grupom. Heteroatomi prstena jedinjenja koji su ovde obezbeđeni obuhvataju N-O, S(O) i S(O)2.

[0079] Aril, heteroaril, cikloalkil i heterociklil grupe, bilo pojedinačno ili kao deo grupe (npr., aril deo aralkil grupe), izborno su supstituisane na jednom ili više atoma koji se mogu supstituisati sa, osim ukoliko je drugačije naznačeno, supstituentima nezavisno izabranim od: halo, -C≡N, C1-C4alkil, =O, -ORb, -ORb’ , -SRb, -SRb’ , -(C1-C4alkil)-N(Rb)(Rb), -(C1-C4alkil)-N(Rb)(Rb’), -N(Rb)(Rb), -N(Rb)(Rb’), -O-(C1-C4alkil)-N(Rb)(Rb), -O-(C1-C4alkil)-N(Rb)(Rb’), -(C1-C4alkil)-O-(C1-C4alkil)-N(Rb)(Rb), -(C1-C4alkil)-O-(C1-C4alkil)-N(Rb)(Rb’), -C(O)-N(Rb)(Rb), -(C1-C4alkil)-C(O)-N(Rb)(Rb), -(C1-C4alkil)-C(O)-N(Rb)(Rb’), -ORb’ , Rb’ , -C(O)(C1-C4alkil), -C(O)Rb’ , -C(O)N(Rb’)(Rb), -N(Rb)C(O)(Rb), -N(Rb)C(O)(Rb’), -N(Rb)SO2(Rb), -SO2N(Rb)(Rb), -N(Rb)SO2(Rb’) i -SO2N(Rb)(Rb’), pri čemu je bilo koji alkil supstituent izborno dalje supstituisan sa jednim ili više od -OH, -O-(C1-C4alkil), halo, -NH2, -NH(C1-C4alkil) ili -N(C1-C4alkil)2;

svaki Rb je nezavisno izabran od vodonika i -C1-C4alkil; ili

dva Rb su uzeta zajedno sa atomom azota za koje su vezani tako da formiraju 4- do 8-člani heterociklil koji izborno sadrži jedan dodatni heteroatom izabran od N, S i O; i

svaki Rb’ je nezavisno izabran od C3-C7karbociklil, fenil, heteroaril i heterociklil, pri čemu su jedan ili više položaja koji se mogu supstituisati na navednom fenil, cikloalkil, heteroaril ili heterociklil supstituentu izborno dalje supstituisani sa jednim ili više od -(C1-C4alkil), -(C1-C4fluoroalkil), -OH, -O-(C1-C4alkil), -O-(C1-C4fluoroalkil), halo, -NH2, -NH(C1-C4alkil) ili -N(C1-C4alkil)2.

[0080] Heterociklil grupe, bilo pojedinačno ili kao deo grupe, su izborno supstituisane na jednom ili više od bilo kog supstituišućeg atoma azota sa okso (=O), -C1-C4alkil ili fluorosupstituisanim C1-C4alkil.

[0081] Termin "supstituisan" označava zamenu atoma vodonika drugom grupom.

[0082] Termin "selektivan" označava najmanje 2-struko, 3-struko, 4-struko, 5-struko, 6-struko ili 10-struko veću inhibiciju glutaminaze od drugih ciljnih mesta.

[0083] Termin "inhibitor" kao što je ovde korišćen označava sredstvo koje merljivo omogućava usporava, zaustavlja, smanjuje ili inaktivira enzimatsku aktivnost glutaminaze za smanjenje do nivoa koji je manji od normalnih nivoa aktivnosti glutaminaze. Inhibitori glutaminaze mogu biti peptidi ili nukleinske kiseline (npr., glutamat). Sredstvo može biti procenjeno tako da se odredi da li je to inhibitor merenjem bilo direktno ili indirektno aktivnosti glutaminaze kada je podvrgnuto sredstvu. Aktivnost sredstva može biti merena, na primer, protiv kontrolne supstance. U nekim slučajevima, merena aktivnost sredstva je za inhibiciju glutaminaze.

[0084] "Dobijati" ili "dobijanje" kao šti su termini ovde korišćeni, označavaju dobijanje fizičkog entiteta, ili vrednosti, npr., numeričke vrednosti, putem "direktnog dobijanja" ili "indirektnog dobijanja" fizičkog entiteta ili vrednost. "Direktno dobijanje" označava izvođenje postupka (npr., izvođenje sintetičkog ili anlitičkog postupka) za dobijanje fizičkog entiteta ili vrednosti. "Indirektno dobijanje" označava primanje fizičkog entiteta ili vrednosti od druge strane ili izvora (npr., laboratorija treće strane koja je direktno dobila fizički entitet ili vrednost). Direktno dobijanje fizičkog entiteta obuhvata izvođenje postupka koji obuhvata fizičku promenu u fizičkoj supstanci, npr., početnom materijalu. Primeri promena obuhvataju pripremu fizičkog entiteta od dva ili više početnih materijala, smicanje ili fragmentaciju supstance, odvajanje ili prečišćavanje supstance, kombinovanje dva ili više posebnih entiteta u smešu, izvođenje hemijske reakcije koja obuhvata raskidanje ili formiranje kovalentne ili nekovalentne veze. Direktno dobijanje vrednosti obuhvata izvođenje postupka koji obuhvata fizičku promenu u uzorku ili drugoj supstanci, npr., izvođenje analitičkog postupka koji obuhvata fizičku promenu u supstanci, npr., uzorku, analitu, ili reagensu (nekada ovde označena kao "fizička analiza"), izvođenje analitičkog postupka, npr., postupka koji obuhvata jedno ili više od sledećih: odvajanje ili prečišćavanje supstance, npr., analita, ili fragmenta ili drugog njenog derivata, od druge supstance; kombinovanje analita, ili fragmenta ili drugog njegovog derivata, sa drugom supstancom, npr., puferom, rastvaračem ili reaktantom; ili menjanje strukture analita ili fragmenta ili njegovog drugog derivata, npr., raskidanjem ili formiranje kovalentne ili nekovalentne veze, između prvog i drugog atoma analita; ili menjanje strukture reagensa, ili fragmenta ili drugog njegovog derivata, npr., raskidanjem ili formiranjem kovalentne ili nekovalentne veze, između prvog i drugog atoma reagensa.

[0085] "Dobijanje uzorka" kao što taj termin može biti korišćen ovde, označava dobijanje uzorka, npr., uzorka tkiva ili uzorka nukleinske kiseline, "direktnim dobijanjem" ili "indirektnim dobijanjem" uzorka. "Direktno dobijanje uzorka" označava izvođenje postupka (npr., izvođenje fizičkog postupka kao što su operacija ili ekstrakcija) za dobijanje uzorka. "Indirektno dobijanje uzorka" označava primanje uzorka od druge strane ili izvora (npr., laboratorije treće strane koja je direktno dobila uzorak). Direktno dobijanje uzorka obuhvata izvođenje postupka koji obuhvata fizičku promenu u fizičkoj supstanci, npr., početnom materijalu, kao što je tkivo, npr., tkivo u humanom pacijentu ili tkivu koje je prethodno izolovano iz pacijenta. Primeri promena obuhvataju pripremu fizičkog entiteta od početnog materijala, disekovanje ili struganje tkiva; odvajanje ili prečišćavanje supstance (npr., uzorka tkiva ili uzorka nukleinske kiseline); kombinovanje dva ili više posebnih entiteta u smešu; izvođenje hemijske reakcije koja obuhvata raskidanje ili formiranje kovalentne ili nekovalentne veze. Direktno dobijanje uzorka obuhvata izvođenje postupka koji obuhvata fizičku promenu u uzorku ili drugoj supstanci, npr., kao što je opisano u prethodnom tekstu.

[0086] Kao što je ovde korišćen "niska" ekspresija E-kadherina u poređenju sa referentnim standardom označava nizak, smanjen ili odsutan nivo ekspresije E-kadherina u poređenju sa nivoom ekspresije E-kadherina u epitelijalnoj ćeliji kao što je okarakterisan pomoću postupaka poznatih u stanju tehnike, npr., u bilo kojoj od sledećih referenci: (Yauch et al., (2005) Clin Cancer Res 11:24; Savagner et al., (2010) Ann Oncol. 21(suppl 7): vii89; Thiery et al., (2002) Nature Reviews Cancer 2(6):442).

[0087] Kao što je ovde korišćen, "visok" nivo vimentina u poređenju sa referentnim standardom označava visok ili povećan nivo ekspresije vimentina u poređenju sa nivoom ekspresije vimentina u epitelijalnoj ćeliji kao što je okarakterisano pomoću postupaka poznatih u stanju tehnike, npr., u bilo kojoj od sledećih referenci: (Yauch et al., (2005) Clin Cancer Res 11:24; Savagner et al., (2010) Ann Oncol. 21(suppl 7): vii89; Thiery et al., (2002) Nature Reviews Cancer 2(6):442).

[0088] Kao što je ovde korišćen, "nizak" ili "smanjen", nivo ekspresije piruvat karboksilaze u poređenju sa referentnim standardom označava nizak, smanjeni ili odsutni nivo ekspresije E-kadherina u poređenju sa nivoom ekspresije E-kadherina u epitelijalnoj ćeliji kao što je okarakterisano pomoću postupaka poznatih u stanju tehnike, npr., u bilo kojoj od sledećih referenci: (Yauch et al., (2005) Clin Cancer Res 11:24; Savagner et al., (2010) Ann Oncol.

21(suppl 7): vii89; Thiery et al., (2002) Nature Reviews Cancer 2(6):442).

[0089] Kao što je ovde korišćen, "kancer" i "tumor" su sinonimni termini. Termin "kancer" ili "tumor" označava prisustvo ćelija koje poseduju karakteristike tipične za ćelije koje izazivaju kancer, kao što su nekontrolisana proliferacija, besmrtnost, metastatski potencijal, brzi rast i stopa proliferacije i određene karakteristične morfološke karakteristike. Ćelije kancera su često u obliku tumora, ali takve ćelije mogu da postoje pojedinačno unutar životinje, ili mogu biti ne-tumorigena ćelija kancera, kao što je ćelija leukemije. Ćelije mogu da poseduju karakteristike tipične za mezenhimalnu ćeliju, kao što je okarakterisano u bilo kojoj od sledećih referenci: (Yauch et al., (2005) Clin Cancer Res 11:24; Savagner et al., (2010) Ann Oncol. 21(suppl 7): vii89; Thiery et al., (2002) Nature Reviews Cancer 2(6):442).

[0090] Skraćenice Me, Et, Ph, Tf, Nf, Ts, Ms predstavljaju metil, etil, fenil, trifluorometansulfonil, nonafluorobutansulfonil, p-toluensulfonil i metansulfonil, respektivno. Sveobuhvatniji spisak skraćenica korišćen od strane stručnjaka organskih hemičara javlja se u prvom izdanju svakog toma Journal of Organic Chemistry; ovaj spisak je tipično predstavljen u tabeli pod naslovom Standardan spisak skraćenica.

Postupci za procenu jedinjenja

[0091] Aktivnost glutaminaze može biti praćena detekcijom proizvodnje bilo proizvoda reakcije, glutamata ili amonijaka. U nekim primerima izvođenja, proizvodnja glutamata je merena zbog toga što je amonijak proizvod bilo kog broja bioloških reakcija.

[0092] Proizvodnja glutamata može biti merena pomoću bilo kog broja standardnih postupaka poznatih u stanju tehnike, npr., hemijskih i hromatografskih detekcionih postupaka i spojenih enzimskih analiza koje koriste NADH i glutamat dehidrogenazu. Ekstracelularne koncentracije glutamata takođe mogu biti merene in vivo, upotrebom postupaka mikrodijalize poznatih u stanju tehnike. Jedan pogodan postupak za merenje glutamata je analiza na bazi mikrotitra od dva koraka u kojoj je glutamat formiran u početnom koraku kvantitativno deaminovan pomoću glutamat dehidrogenaze da bi se proizvela ekvivalentna količina NADH (Godfrey et al., 1977; Kvamme et al., 1985), koja zatim može biti detektovana spektrofotometrijski.

Postupci lečenja

[0093] Ovde je opisano jedinjenje za upotrebu u postupku za lečenje ili prevenciju bolesti, stanja ili poremećaja kao što je ovde opisano (npr., lečenje) koji sadrži primenu jedinjenja, farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja ili farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje koje je ovde opisano (npr., jedinjenje formule (I) ili u Tabeli 1).

[0094] Jedinjenja i kompozicije koji su ovde opisani mogu se primenjivati na ćelije u kulturi, npr. in vitro ili ex vivo, ili na subjekta, npr., in vivo, za lečenje, prevenciju i/ili postavljanje dijagnoze različitih poremećaja, uključujući one opisane ovde u daljem tekstu.

[0095] Kao što je ovde korišćen, termin "lečiti" ili "tretman" je definisan kao primena jedinjenja, pojedinačno ili u kombinaciji sa, drugim jedinjenjem na subjekta, npr., pacijenta, ili primena jedinjenja na izolovano tkivo ili ćeliju, npr., ćelijsku liniju, od subjekta, npr., pacijenta, koji ima poremećaj (npr., poremećaj kao što je ovde opisan), simptom poremećaja ili predispoziciju ka poremećaju, sa svrhom da se leči, izleči, ublaži, olakša, promeni, popravi, poboljša, ili utiče na poremećaj, jedan ili više simptoma poremećaja ili predispoziciju ka poremećaju (npr., za sprečavanje najmanje jednog simptoma poremećaja ili odlaganje početka najmanje jednog simptoma poremećaja).

[0096] Kao što je ovde korišćena, količina jedinjenja koja je efikasna za lečenje poremećaja, ili "terapeutski efikasna količina" označava količinu jedinjenja koja je efikasna, posle primene jedne ili višestruke doze na subjekta, u lečenju ćelije, ili u lečenju, ublažavanju, olakšavanju ili poboljšanju subjekta sa poremećajem preko očekivanog u odsustvu takvog tretmana.

[0097] Kao što je ovde korišćena, količina jedinjenja koja je efikasna za sprečavanje poremećaja, ili "profilaktički efikasna količina" jedinjenja označava količinu efikasnu, posle primene jedne ili višestruke doze na subjekta, u prevenciji ili odlaganju pojave početka ili ponovne pojave poremećaja ili simptoma poremećaja.

[0098] Termin "pacijent" i "subjekat" su sinonimi, i kao što su ovde korišćeni, označavaju životinju, tipično čoveka (tj., muškog ili ženskog pola bilo koje starosne grupe, npr., pedijatrijskog pacijenta ili odraslog pacijenta ili durgog sisara, kao što su primati (npr., makaki majmuni, rezus majmuni); komercijalno relevantne sisare kao što su stoka, svinje, konji, ovce, koze, mačke i/ili psi; i/ili ptice, uključujući komercijalno relevantne ptice kao što su kokoške, patke, guske i/ili ćurke, koje će biti ili koje su bile predmet lečenja, posmatranja, i/ili eksperimenta. Kada je termin korišćen zajedno sa primenom jedinjenja ili leka, tada je pacijent bio predmet lečenja, posmatranja i/ili primene jedinjenja ili leka.

Kanceri

[0099] Postupci koji su ovde opisani mogu biti korišćeni sa bilo kojim kancerom, na primer onima opisanim od strane National Cancer Institute. Kancer može biti procenjivan da bi se odredilo da li koristi postupak koji je ovde opisan. Primeri kancera mogu da obuhvataju, ali bez ograničenja na, kancer pluća, npr., nesitnoćelijski kancer pluća; kancer dojke, npr., trostruko negativni kancer dojke; ili hepatoćelijski karcninom, osteosarkom, lipome, hondrosarkom ili mezoteliom. U nekim primerima izvođenja, kancer je izabran od kancera debelog creva, karcinoma bubrežnih ćelija, akutne mijeloidne leukemije (AML), melanoma i multiplog mijeloma.

[0100] Kancer može biti primarni tumor, tj., lociran na anatomskom mestu početka rasta tumora. Kancer takođe može biti metastatski, tj., javlja se na najmanje drugom anatomskom mestu osim anatomskog mesta početka rasta tumora. Kancer može biti rekurentni kancer, tj., kancer koji se vraća posle tretmana, i posle vremenskog perioda u kome je kancer nedetektabilan. Rekurentni kancer može biti anatomski lociran lokalno do originalnog tumora, npr., anatomski pored originalnog tumora; regionalno do originalnog tumora, npr., u limfnom čvoru lociranom pored originalnog tumora; ili na udaljenosti od orginalngo tumora, npr., anatomski u regionu udaljenom od originalnog tumora.

Kombinovane terapije kancera

[0101] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje koje je ovde opisano je primenjeno zajedno sa jednim ili više dodatnih tretmana za kancer. Primeri tretmana za kancer obuhvataju, na primer: hemoterapiju, ciljane terapije kao što su terapije antitelima, imunoterapija i hormonska terapija. Primeri svakog od ovih tretmana su obezbeđeni u daljem tekstu.

Hemoterapija

[0102] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje koje ovde opisano je primenjeno sa jednom ili više hemoterapija. Hemoterapija je tretman kancera sa lekovima koji mogu da unište ćelije kancera. "Hemoterapija" obično označava citotoksične lekove koji utiču na brzu deobu ćelija uopšteno, nasuprot ciljanoj terapiji. Lekovi za hemoterapiju ometaju ćelijsku deobu na različite moguće načine, npr., sa duplikacijom DNK ili odvajanjem novo formiranih hromozoma. Većina oblika hemoterapije ciljno deluju na sve ćelije koje se brzo dele i nisu specifične za ćelije kancera, iako izvestan stepen specifičnosti može da bude posledica nesposobnosti mnogih ćelija kancera da poprave oštećenje DNK, dok normalne ćelije generalno to mogu.

[0103] Primeri hemoterapeutskih sredstava korišćenih u terapiji kancera obuhvataju, na primer, antimetabolite (npr., folnu kiselinu, derivate purina i pirimidina) i alkilaciona sredstva (npr., azotne iperite, nitrozouree, platinu, alkil sulfonate, hidrazine, triazene, aziridine, otrov deobnog vretena, citotoksična sredstva, inhibitore topoizomeraze i ostale). Primeri sredstava obuhvataju aklarubicin, aktinomicin, alitretinon, altretamin, aminopterin, aminolevulinska kiselina, amrubicin, amsakrin, anagrelid, arsen trioksid, asparaginazu, atrasentan, belotekan, beksaroten, endamustin, bleomicin, bortezomib, busulfan, kamptotecin, kapecitabin, karboplatin, karbokvon, karmofur, karmustin, celecoksib, hlorambucil, hlormetin, cisplatin, kladribin, klofarabin, krisantaspazu, ciklofosfamid, citarabin, dakarbazin, daktinomicin, daunorubicin, decitabin, demekolcin, docetaksel, doksorubicin, efaproksiral, elesklomol, elsamitrucin, enocitabin, epirubicin, estramustin, etoglucid, etoposid, floksuridin, fludarabin, fluorouracil (5FU), fotemustin, gemcitabin, gliadel implante, hidroksikarbamid, hidroksiureu, idarubicin, ifosfamid, irinotekan, irofulven, iksabepilon, larotaksel, leukovorin, lipozomalni doksorubicin, lipozomalni daunorubicin, lonidamin, lomustin, lukanton, manosulfan, masoprokol, melfalan, merkaptopurin, mesna, metotreksat, metil aminolevulinat, mitobronitol, mitoguazon, mitotan, mitomicin, mitoksantron, nedaplatin, nimustin, oblimersen, omacetaksin, ortataksel, oksaliplatin, paklitaksel, pegaspargazu, pemetreksed, pentostatin, pirarubicin, piksantron, plikamicin, porfimer natrijum, prednimustin, prokarbazin, raltitreksed, ranimustin, rubitekan, sapacitabin, semustin, sitimagen ceradenovek, satraplatin, streptozocin, talaporfin, tegafur-uracil, temoporfin, temozolomid, teniposid, tesetaksel, testolakton, tetranitrat, tiotep, tiazofurin, tioguanin, tipifarnib, topotekan, trabektedin, triazikvon, trietilenmelamin, triplatin, tretinoin, treosulfan, trofosfamid, uramustin, valrubicin, verteporfin, vinblastin, vinkristin, vindezin, vinflunin, vinorelbin, vorinostat, zorubicin i ostala citostatička ili citotoksična sredstva koja su ovde opisana.

[0104] Kako neki lekovi bolje funkcionišu zajedno nego pojedinačno, dva ili više lekova se često daju istovremeno. Često, dva ili više hemoterapeutskih sredstava su korišćeni kao kombinovana terapija. U nekim primerima izvođenja, hemoterapeutska sredstva (uključujući kombinovanu hemoterapiju) mogu biti korišćena u kombinaciji sa jedinjenjem koje je ovde opisano.

Ciljana terapija

[0105] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje koje je ovde opisano je primenjivano sa jednom ili više ciljanih terapija. Ciljana terapija predstavlja upotrebu sredstava specifičnih za deregulisane proteine ćelija kancera. Mali molekuli lekova ciljane terpije su generalno inhibitori enzimatskih domena na mutiranim, prekomerno eksprimiranim ili inače kritičnim proteinima unutar ćelije kancera. Istaknuti primeri su inhibitori tirozin kinaze kao što su aksitinib, bosutinib, cediranib, dasatinib, erlotinib, imatinib, gefitinib, lapatinib, lestaurtinib, nilotinib, semaksanib, sorafenib, sunitinib i vandetanib, i takođe ciklin-zavisni inhibitori kinaze kao što su alvocidib i seliciklib. Terapija monoklonskim antitelom je sledeća strategija u kojoj je terapeutsko sredstvo antitelo koje se specifično vezuje za protein na površini ćelija kancra. Primeri obuhvataju anti-HER2/neu antitelo trastuzumab (HERCEPTIN®) tipično korišćeno kod kancera dojke i anti-CD20 antitelo rituksimab i tositumomab tipično korišćeno kod različitih maligniteta B-ćelija. Ostali primeri antitela obuhvataju cetuksimab, panitumumab, trastuzumab, alemtuzumab, bevacizumab, edrecolomab i gemtuzumab. Primeri fuzionih proteina obuhvataju aflibercept i denileukin diftitoks. U nekim primerima izvođenja, ciljana terapija može biti korišćena u kombinaciji sa jedinjenjem koje je ovde opisano.

[0106] Primeri dodatnih terapeutskih sredstava takođe mogu da obuhvataju inhibitore receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), npr., cetuksimab, panitumumab, gefitinib, erlotinib, nimotuzamab, matuzamab, zalutumumab ili lapatinib. Otpornost na inhibitore EGFR mogu da se jave kao rezultat prelaza ćelije u mezenhimalni fenotip ili mezenhimalni fenotip, i tumore sa EGFR mutacijama i mezenhimalni fenotip može biti manje osetljiv na inhibitore EGFR (videti na primer, Sequist et al., (2011) Sci Transl Med. 3:75. Buck et al., (2007) Mol Cancer Ther.6: 532; Thomson et al., (2008) Clin Exp Metastasis 25: 843).

[0107] Primeri dodatnih terapeutskih sredstava takođe mogu da obuhvataju sredstva za depleciju glutationa, npr., L-butionin-(S,R)-sulfoksimin (BSO).

[0108] Primeri dodatnih terapeutskih sredstava takođe mogu da obuhvataju inhibitore fofoinozitid 3-kinaze (PI3K), npr., perifosin, idelalisib, BKM120, PX-866, IPI-145, NVP-BEZ235, GDC0941 i BAY 80-6946.

[0109] Primeri dodatnih terapeutskih sredstava takođe mogu da obuhvataju inhibitore proteina toplotnog šoka 90 (HSP90), npr., geldanamicin, radicikol, 17-N-alilamino-17-demetoksigeldanamicin (17AAG), ganetespib, 4-(4-(2,3-dihidro-1,4-benzodioksin-6-il)-5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-etilrezorcinol, AUY922 (NVP-AUY922), BIIB021, STA9090, AT13387, NVP-BEP800 i SNX-2112 (PF-04928473).

[0110] Ciljana terapija takođe može da obuhvata male peptide kao "kućne uređaje" koji mogu da se vežu za receptore na ćelijskoj površini ili pogođeni ekstracelularni matriks koji okružuje tumor. Radionuklidi koji su vezani za ove peptide (npr., RGD) konačno ubijaju ćeliju kancera ako se nuklid razlaže u blizini ćelije. Primer takve terapije obuhvata BEXXAR®.

Imunoterapija

[0111] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje koje je ovde opisano je primenjeno sa jednom ili više imunoterapija. Imunoterapija kancera označava raznovrsnu grupu terapeutskih strategija dizajniranih za indukovanje imunog sistema pacijenta za borbu protiv tumora. Savremeni postupci za generisanje imunog odgovora protiv tumora obuhvataju intravezikularnu BCG imunoterapiju za površinski kancer bešike i upotrebu interferona i ostalih citokina za indukovanje imunog odgovora kod pacijenata sa karcinomom ćelija bubrega i melanomom.

[0112] Alogena transplantacija hematopoetske matične ćelije može se smartrati oblikom imunoterapije, s obzirom na to da će imune ćelije davaoca često napadati tumor u efektu transplanta protiv tumora. U nekim primerima izvođenja, imunoterapeutska sredstva mogu biti korišćena u kombinaciji sa jedinjenjem koje je ovde opisano.

Hormonska terapija

[0113] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje koje ovde opisano je primenjivano sa jednom ili više hormonskih terapija. Rast nekih kancera može biti inhibiran obezbeđivanjem ili blokiranjem određenih hormona. Uobičajeni primeri tumora osetljivih na hormone obuhvataju određene tipove kancera dojke i prostate. Uklanjanje ili blokiranje estrogena ili testosterona je često važan dodatni tretman. Kod određenih kancera, primena hormonskih agonista, kao što su progestogeni može biti terapeutski korisna. U nekim primerima izvođenja, sredstva za hormonsku terapiju mogu biti korišćena u kombinaciji sa jedinjenjem koje je ovde opisano.

Ishrana sa ograničenim sadržajem hranljivih sastojaka

[0114] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje koje je ovde opisano primenjivano je zajedno sa jednom ili više ishrana sa ograničenim sadržajem hranljivih sastojaka. S obzirom na to da se ćelije kancera oslanjaju na glukozu za generisanje ćelijske energije, snižavanje nivoa glukoze u krvi preko ograničenja ugljenih hidrata i proteina može da inhibira rast nekih kancera. Kod određenih kancera, ishrane sa ograničanim sadržajem hranljivih sastojaka kao što su ograničenje kalorija, gladovanje i ketogene dijete mogu biti terapeutskiu korisne. U nekim primerima izvođenja, takve ishrane sa ograničenim sadržajem hranjivih sastojaka mogu biti korišćene u kombinaciji sa jedinjenjem koje je ovde opisano.

Neuronski poremećaji

[0115] Jedinjenje ili kompozicija koji su ovde opisani mogu biti korišćeni za lečenje ili prevenciju neuronske ćelijske smrti kao rezultat povrede neuronskog tkiva, npr., nervnog tkiva izloženog ishemičnom ili hipoksičnom događaju, traumi ili hroničnom neurodegenerativnom poremećaju. "Neuronski poremećaj" je neurološka bolest ili poremećaj koji je povezan sa ekscitotoksičnošću glutamata, npr., cerebralna ishemija ili hipoksija koja je rezultat neurološkog događaja kao što je šlog ili ishemični događaj. Tretman sa jedinjenjem može biti u količini efikasnoj da se obezbedi neuroprotektivni efekat, npr., za sprečavanje neuronske ćelijske smrti.

Kompozicije i putevi primene

[0116] Kompozicije koje su ovde opisane obuhvataju jedinjenja koja su ovde opisana (npr., jedinjenje opisano ovde), kao i dodatna terapeutska sredstva ako su prisutna, u količinama efikasnim za postizanje modulacije bolesti ili simptoma bolesti, uključujući one koje su ovde opisane.

[0117] Termin "farmaceutski prihvatljiv nosač ili ađuvans" označava nosač ili ađuvans koji se može primenjivati na pacijenta, zajedno sa jedinjenjem koje je ovde dato, i koji ne uništava njegovu farmakološku aktivnost i netoksično je kada je primenjeno u dozama dovoljnim da se isporuči terapeutska količina jedinjenja.

[0118] Farmaceutski prihvatljivi nosači, ađuvansi i vehikulumi koji se mogu koristiti u farmaceutskim kompozicijama koje su ovde date obuhvataju, ali bez ograničenja na, jonske izmenjivače, aluminu, aluminijum stearat, lecitin, auto-emulzifikujuće sisteme za isporuku leka (SEDDS) kao što je d-α-tokoferol polietileneglikol 1000 sukcinat, surfaktante korišćene u farmaceutskim oblicima doze kao što je Tweens ili druge slične polimerne matrice za isporuku, proteini seruma, kao što je humani serum albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbonska kiselina, kalijum sorbat, delimične gliceridne smeše zasićenih biljnih masnih kiselina, voda, soli ili elektroliti, kao što je protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, soli cinka, koloidni silika, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilceluloza, poliakrilati, voskovi, polietilen-polioksipropilen-blok polimeri, polietilen glikol i lanolin. Ciklodekstrini kao što su α-, β- i γ-ciklodekstrin, ili hemijski modifikovani derivati kao što su hidroksialkilciklodekstrini, uključujući 2- i 3-hidroksipropilβ-ciklodekstrine, ili drugi solubilizovani derivati takođe mogu biti povoljno korišćeni za pojačanje isporuke jedinjenja formula koje su ovde opisane.

[0119] Farmaceutske kompozicije koje su ovde obezbeđene mogu biti primenjivane oralno, parenteralno, putem spreja za inhalaciju, topikalno, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili preko implantiranog rezervoara, poželjno preko oralne primene ili primene putem injekcije. Farmaceutske kompozicije koje su ovde obezebđene mogu da sadrže bilo koje uobičajene netoksične farmaceutski prihvatljive nosače, ađuvanse ili vehikulume. U nekim slučajevima, pH formulacije može biti podešena sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama, bazama ili puferima da bi se pojačala stabilnost formulisanog jedinjenja ili njegovog oblika isporuke. Termin parenteralan kao što je ovde korišćen obuhvata subkutane, intrakutane, intravenske, intramuskularne, intraartikularne, intraarterijske, intrasinovijalne, intrasternalne, intratekalne, intralezione i intrakranijalne tehnike injekcije ili infuzije.

[0120] Farmaceutske kompozicije mogu biti u obliku sterilnog injektabilnog preparata, na primer, kao sterilna injektabilna vodena ili uljana suspenzija. Ova suspenzija može biti formulisana prema tehnikama poznatim u stanju tehnike upotrebom pogodnih dispergujućih ili sredstava za vlaženje (kao što je, na primer, Tween 80) i suspendujućih sredstava. Sterilni injektabilni preparat takođe može biti sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer, kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim vehikulumima i rastvaračima koji se mogu koristiti su manitol, voda, Ringerov rastvor i izotoničan rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterilna masna ulja su uobičajeno korišćena kao rastvarač ili suspendujući medijum. Za ovu svrhu, bilo koje blago masno ulje može biti korišćeno uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Masne kiseline, kao što je oleinska kiselčina i njeni derivati sa gliceridom su korisni u pripremi injektabilnih preparata, kao što su prirodna farmaceutski prihvatljiva ulja, kao što su maslinovo ulje ili ricinusovo ulje, naročito u njihovim polietoksilovanim verzijama. Ovi uljani rastvori ili suspenzije takođe mogu da sadrže dugolančani alkoholni razblaživač ili disperzant, ili karboksimetil celulozu ili slična dispergujuća sredstva koja se uobičajeno koriste u formulaciji farmaceutski prihvatljivih oblika doze kao što su emulzije i/ili suspenzije. Drugi uobičajeno korišćeni surfaktanti kao što su Tweens ili Spans i/ili druga slična emulgujuća sredstva ili pojačivači biodostupnosti koji se uobičajeno koriste u proizvodnji farmaceutski prihvatljivog čvrstog, tečnog ili drugih oblika doze takođe mogu biti korišćeni za svrhe formulacije.

[0121] Farmaceutske kompozicije koje su ovde obezbeđene mogu biti oralno primenjene u bilo kom oralno prihvatljivom obliku doze uključujući, ali bez ograničenja na, kapsule, tablete, emulzije i vodene suspenzije, disperzije i rastvore. U slučaju tableta za oralnu upotrebu, nosači koji se uobičajeno koriste obuhvataju laktozu i kukuruzni skrob. Lubrikaciona sredstva, kao što je magnezijum stearat, se takođe tipično dodaju. Za oralnu primenu u obliku kapsule, korisni razblaživači obuhvataju laktozu i suvi kukuruzni skrob. Kada se vodene suspenzije i/ili emulzije primenjuju oralno, aktivni sastojak koji može biti suspendovan ili rastvoren u uljanoj fazi je kombinovan sa emulgujućim i/ili suspendujućim sredstvima. Ako je poželjno, mogu se dodati određeni zaslađivači i/ili sredstva za poboljšanje ukusa i/ili boje.

[0122] Farmaceutske kompozicije koje su ovde obezbeđene takođe mogu biti primenjene u obliku supozitorija za rektalnu primenu. Ove kompozicije mogu biti pripremljene mešanjem jedinjenja koje je ovde obezbeđeno sa pogodnim neiritirajućim ekscipijensom koji je čvrst na sobnoj temperaturi, ali tečan na rektalnoj temperaturi i prema tome će se topiti u rektumu tako da oslobađa aktivne komponente. Takvi materijali obuhvataju, ali bez ograničenja na, kakao puter, pčelinji vosak i polietilen glikole.

[0123] Topikalna primena farmaceutskih kompozicija obezbeđenih ovde je korisna kada željeni tretman obuhvata regione ili organe koji su lako dostupni topikalnom primenom. Za primenu topikalno na kožu, farmaceutska kompozicija bi trebalo da je formulisana sa pogodnom masti koja sadrži aktivne komponente suspendovane ili rastvorene u nosaču. Nosači za topikalnu primenu jedinjenja koja su ovde obezbeđena obuhvataju, ali bez ograničenja na, mineralno ulje, tečni petroleum, beli petroleum, propilen glikol, polioksietilen polioksipropilen jedinjenje, emulgujući vosak i vodu. Alternativno, farmaceutska kompozicija može biti formulisana sa pogodnim losionom ili kremom koji/koja sadrži aktivno jedinjenje suspendovano ili rastvoreno u nosaču sa pogodnim emulgujućim sredstvima. Pogodni nosači obuhvataju, ali bez ograničenja na, mineralno ulje, sorbitan monostearat, polisorbat 60, cetil estar vosak, cetearil alkohol, 2-oktildodekanol, benzil alkohol i vodu. Farmaceutske kompozicije koje su ovde obezeđene takođe mogu biti topikalno primenjene na donji deo intestinalnog trakta pomoću formulacije rektalne supozitorije ili u pogodnoj formulaciji klistira. Topikalni transdermalni flasteri su takođe obuhvaćeni.

[0124] Farmaceutske kompozicije koje su ovde date mogu se primenjivati preko nazalnog aerosola ili inhalacije. Takve kompozicije su pripremljene prema tehnikama koje su poznate u stanju tehnike farmaceutske formulacije i mogu biti pripremljene kao rastvori u fiziološkom rastvoru, korišćenjem benzil alkohola ili drugih pogodnih konzervanasa, stimulatora apsorpcije da bi se povećala biodostupnost, fluorokarbona i/ili drugih solubilizujućih ili dispergujućih sredstava poznatih u stanju tehnike.

[0125] Kada kompozicije koje su ovde obezbeđene sadrže kombinaciju jedinjenja formula opisanih ovde i jedan ili više dodatnih terapeutskih ili profilaktičkih sredstava, i jedinjenje i dodatno sredstvo bi trebalo da su prisutni u nivoima doza od između oko 1 do 100%, i poželjnije između oko 5 do 95% doze normalno primenjene u režimu monoterapije. Dodatna sredstva mogu biti primenjivana posebno, kao deo višestrukog doznog režima, od jedinjenja koja su ovde data. Alternativno, ta sredstva mogu biti deo jednog oblika doze, mešana zajedno sa jedinjenjima koja su ovde obezbeđena u jednoj kompoziciji.

[0126] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu, na primer, biti primenjivana preko injekcije, intravenski, intraarterijski, subdermalno, intraperitonealno, intramuskularno ili subkutano; ili oralno, bukalno, nazalno, transmukozalno, topikalno, u oftalmičkom preparatu ili inhalacijom, sa dozom u opsegu od oko 0.5 do oko 100 mg/kg telesne težine, alternativno dozom između 1 mg i 1000 mg/dozi, svakih 4 do 120 časova, ili prema potrebama za određeni lek. Postupci koji su ovde dati razmatraju primenu efikasne količine jedinjenja ili kompozicije jedinjenja da bi se postigao željeni ili navedeni efekat. Tipično, farmaceutske kompozicije koje su ovde obezbeđene biće primenjivane od oko 1 do oko 6 puta na dan ili alternativno, kao kontinuirana infuzija. Takva primena se može koristiti kao hronična ili akutna terapija. Količina aktivnog sastojka koja se može kombinovati sa nosačkim materijalima za proizvodnju jednog oblika doze variraće u zavisnosti od tretiranog domaćina i određenog načina primene. Tipičan preparat će sadržati od oko 5% do oko 95% aktivnog jedinjenja (tež./tež.). Alternativno, takvi preparati sadrže od oko 20% do oko 80% aktivnog jedinjenja.

[0127] Mogu biti potrebne niže ili više doze od onih navedenih u prethodnom tekstu. Specifična doza i režimi tretmana za bilo kog određenog pacijenta zavisiće od različitih faktora, uključujući aktivnost specifičnog korišćenog jedinjenja, starost, telesnu težinu, opšti zdravstveni status, pol, ishranu, vreme primene, stopu izlučivanja, kombinaciju leka, težinu i tok bolesti, stanje ili simptome, stav pacijenta prema bolesti, stanju ili simptomima, i procenu nadležnog lekara.

[0128] Posle poboljšanja stanja pacijenta, ako je neophodno, može se primenjivati održavajuća doza jedinjenja, kompozicije ili kombinacije koji su ovde obezbeđeni. Zatim, doza ili učestalost primene, ili oba, mogu se smanjiti, kao funkcija simptoma, do nivoa na kome se poboljšano stanje održava kada su simptomi ublaženi do željenog nivoa. Pacijenti mogu, međutim, da zahtevaju isprekidani tretman na dugotrajnoj bazi posle bilo kakve ponovne pojave simptoma bolesti.

Izbor i praćenje pacijenata

[0129] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu da inhibiraju glutaminazu. Shodno tome, pacijent i/ili subjekat može biti izabran za lečenje upotrebom jedinjenja koje je ovde opisano prvo procenom pacijenta i/ili subjekta za određivanje da li kod subjekta postoji potreba za inhibicijom glutaminaze, i ako je određeno da kod subjekta postoji potreba za inhibicijom glutaminaze, tada primenu na subjekta jedinjenja koje je ovde opisano.

[0130] Subjekat može biti procenjen tako da kod njega postoji potreba za inhibicijom glutaminaze upotrebom postupaka poznatih u stanju tehnike, npr., merenjem prisustva i/ili aktivnosti glutaminaze kod pacijenta. U nekim primerima izvođenja, aktivnost i/ili nivo glutaminaze je procenjivana kod kancera.

[0131] Pacijent koji prima jedinjenje koje je ovde opisano može biti praćeno, na primer, za poboljšanje u stanju i/ili štetnim efektima. Poboljšanje stanja pacijenta može biti procenjivano, na primer, praćenjem rasta, odsustva rasta ili regresije kancera (npr., tumora). U nekim primerima izvođenja, pacijent je procenjivan upotrebom radiološke analize ili procene hemolitičkih parametara.

[0132] Pacijent i/ili subjekat može biti izabran za lečenje upotrebom jedinjenja koje je ovde opisano putem izborno, dobijanja uzorka pacijenta; procene uzorka da bi se odredilo da li je uzorak okarakterisan i) niskim nivoom ekspresije E-kadherina u poređenju sa referentnim standardom, ii) visokim nivoom ekspresije vimentina u poređenju sa referentnim standardom, i/ili iii) niskim ili smanjenim nivoom ekspresije piruvat karboksilaze u poređenju sa referentnim standardom; i ako je određeno da pacijent ima nizak nivo ekspresije E-kadherina u poređenju sa referentnim standardom ili visok nivo ekspresije vimentina u poređenju sa referentnim standardom, tada je na pacijenta primenjeno jedinjenje koje je ovde opisano.

[0133] U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije E-kadherina je upoređivan sa referentnim standardom, pri čemu je referentni standard nivo ekspresije E-kadherina u epitelijalnoj ćeliji kao što je okarakterisan u bilo kojoj od sledećih referenci: (Yauch et al., (2005) Clin Cancer Res 11:24; Savagner et al., (2010) Ann Oncol.21 (suppl 7): vii89; Thiery et al., (2002) Nature Reviews Cancer 2(6):442). U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije E-kadherina je nizak, smanjen ili odsutan u poređenju sa referentnim standardom. U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije E-kadherina je meren preko procene nivoa RNK koja kodira E-kadherin. U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije E-kadherina je procenjivan preko nivoa ekspresije E-kadherin proteina. U nekim primerima izvođenja nivo ekspresije E-kadherina je najmanje 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ili 90% manja od referentnog standarda. U nekim primerima izvođenja nivo ekspresije E-kadherina je najmanje 1.5, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100 puta smanjen u poređenju sa referentnim standardom.

[0134] U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije vimentina je upoređivan sa referentnim standardom, pri čemu je referentni standard nivo ekspresije vimentina u epitelijalnoj ćeliji kao što je okarakterisana u bilo kojoj od sledećih referenci: (Yauch et al., (2005) Clin Cancer Res 11:24; Savagner et al., (2010) Ann Oncol. 21(suppl 7): vii89; Thiery et al., (2002) Nature Reviews Cancer 2(6):442). U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije vimentina je meren preko procene nivoa RNK koja kodira vimentin. U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije vimentina je procenjivan preko nivoa ekspresije vimentin proteina. U nekim primerima izvođenja nivo ekspresije vimentina je najmanje 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ili 90% veći od referentnog standarda. U nekim primerima izvođenja nivo ekspresije vimentina je najmanje 1.5, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100 puta povećan u poređenju sa referentnim standardom.

[0135] U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije piruvat karboksilaze je nizak ili smanjen u poređenju sa referentnim standardom, pri čemu je referentni standard nivo ekspresije piruvat karboksilaze u epitelijalnoj ćeliji kao što je okarakterisan u bilo kojoj od sledećih referenci: (Yauch et al., (2005) Clin Cancer Res 11:24; Savagner et al., (2010) Ann Oncol. 21(suppl 7): vii89; Thiery et al., (2002) Nature Reviews Cancer 2(6):442). U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije piruvat karboksilaze je visok ili povećan u poređenju sa referentnim standardom. U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije piruvat karboksilaze je meren procenom nivoa RNK koja kodira piruvat karboksilazu. U nekim primerima izvođenja, nivo ekspresije vimentina je procenjivan preko nivoa ekspresije proteina piruvat karboksilaze. U nekim primerima izvođenja nivo ekspresije piruvat karboksilaze je najmanje 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ili 90% veći od referentnog standarda. U nekim primerima izvođenja nivo ekspresije piruvat karboksilaze je najmanje 1.5, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100 puta povećan u poređenju sa referentnim standardom.

Uzorak pacijenta

[0136] Termini "uzorak pacijenta", "uzorak subjekta", i "uzorak" su ovde korišćeni naizmenično. Uzorak pacijenta može biti tkivo ili telesna tečnost ili telesni proizvod. Uzorci tkiva mogu da obuhvataju fiksirane, ukalupljene u parafin, sveže ili zamrznute uzorke. Na primer, uzorak tkiva može da obuhvata biopsiju, bris obraza. Primeri tkiva obuhvataju pluća, dojku, mozak, nervno tkivo, bubreg, jajnik, tireoidea, pankreas, debelo crevo, prostate, limfni čvor, kožu, folikule dlaka i nokte. Primeri uzoraka obuhvataju uzorke poreklom od solidnih tumora. Primeri telesnih tečnosti obuhvataju krv, plazmu, urin, limfu, suze, znoj, pljuvačku, semenu tečnost i cerebrospinalnu tečnost. Primeri telesnih proizvoda obuhvataju izdah.

[0137] Tkivo, tečnost ili proizvod može biti uklonjen iz pacijenta i analiziran. Procena može da obuhvata jedno ili više od: izvođenja analize tkiva, tečnosti ili proizvoda; zahtevanje analize tkiva, tečnosti ili proizvoda; zahtevanje rezultata iz analize tkiva, tečnosti ili proizvoda; ili primanje rezultata iz analize tkiva, tečnosti ili proizvoda.

[0138] Uzorak tkiva, tečnosti ili proizvoda može biti analiziran za nivo ekspresije gena koji je ovde opisan, npr., E-kadherin, vimentin, piruvat karboksilaza. Uzorak tkiva, tečnosti ili prozvoda može biti analiziran za nivo ekspresije proteina koji je ovde opisan, npr., E-kadherin, vimentin, piruvat karboksilaza. Uzorak tkiva, tečnosti ili prozvoda može biti biti dalje analiziran za nivo ekspresije gena ili više gena prethodno izabranog puta prenosa signala ili fenotipskog puta, npr., puta prelaza epitelijuma u mezenhim, puta E-kadherina, puta vimentina ili puta piruvat karboksilaze. Uzorak tkiva, tečnosti ili proizvoda može biti dalje analiziran za nivo ekspresije proteina ili više proteina unapred izabranog puta prenosa signala ili fenotipskog puta, npr., puta prelaza iz epitelijuma u mezenhim, puta E-kadherina, puta vimentina ili puta piruvat karboksilaze.

Postupci za procenu uzoraka

[0139] Nivo ekspresije gena koji je ovde opisan, npr., E-kadherina, vimentina i piruvat karboksilaze, može biti procenjen upotrebom bilo kog od širokog niza različitih dobro poznatih postupaka za detekciju ekspresije transkribovanog molekula, gena, proteina, iRNK, genomske DNK ili cDNK. Ekspresija gena može biti merena ili praćena preko mere genskog transkripta, npr., iRNK, preko mere količine translatiranog proteina ili preko mere aktivnosti genskog proizvoda; od kojih bilo koji može biti meren upotrebom standardnih trehnika poznatih stručnjaku iz date oblasti tehnike. Neograničavajući primeri takvih postupaka obuhvataju postupke hibridizacije nukleinske kiseline, postupke reverzne transkripcije nukleinske kiseline, postupke amplifikacije nukleinske kiseline, imunološke postupke za detekciju proteina, postupke prečišćavanja proteina, analize proteinske funkcije ili aktivnosti.

E-kadherin

[0140] Gen za E-kadherin je lociran na humanom hromozomu 16. E-kadherin je klasični kadherin superfamilije kadherina. Kodirani protein E-kadherin je glikoprotein adhezije ćelijaćelija zavistan od kalcijuma koji se sastoji od pet ekstracelularnih ponovaka kadherina, transmembranskog regiona i visoko konzervativnog citoplazmatičnog repa. Mutacije u ovom genu su u korelaciji sa kancerom, uključujući kancere želudca, dojke, kolorektalne, tiroidne i jajnika. Gubitak funkcije E-kadherina smatra se da doprinosi napredovanju kancera putem povećanja proliferacije, invazije i/ili metastaze. Ektodomen ovog proteina posreduje u bakterijskoj adheziji za sisarske ćelije i citoplazmatični domen je potreban za internalizaciju. Identifikovane varijante transkripta E-kadherina nastaju iz mutacija na koncenzus spalajs mestima.

Vimentin

[0141] Gen za vimentin je lociran na humanom hromozomu 10 i kodira člana familije intermedijernih filamenata proteina. Intermedijerni filamenti, zajedno sa mikrotubulama i aktinskim mikrofilamentima, grade ćelijski citoskelet, koji pomaže u održanju ćelijskog oblika i celovitosti citoplazme, kao i u stabilizaciji citoskeletnih interakcija. Vimentin takođe funkcioniše u posredovanju imunih odgovora, kontroli transporta holesterola poreklom od lipoproteina niske gustine iz lizozoma do mesta esterifikacije i kao organizatora određenog broja kritičnih proteina uključenih u vezivanje, migraciju i ćelijski prenos signala.

Piruvat karboksilaza (PC)

[0142] PC gen je lociran na humanim hromozomima 11 i kodira protein piruvat karboksilazu, koji katalizuje karboksilaciju piruvata u oksaloacetat. Aktivni enzim je homotetramer uređen u tetraedar koji je lociran isključivo u mitohonbdrijalnom matriksu. Piruvat karboksilaza je uključena u višestruke ćelijske procese uključujući glukoneogenezu, lipogenezu, izlučivanje insulina i sintezu neurotransmitera glutamata. Mutacije u ovom genu su povezane sa deficijencijom piruvat karboksilaze. Alternativno identifikovane su spajsovane varijante transkripta sa različitim 5’ UTR, ali koje kodiraju isti protein.

Molekuli nukleinskih kiselina

[0143] Postupci koji su ovde opisani mogu da se odnose na procenu uzorka za ekspresiju gena opisanog ovde, npr., E-kadherin, vimentin, piruvat karboksilaza; na bazi izolovanih nukleinskih kiselina koje odgovaraju genu koji je ovde opisan, npr., nivo iRNK E-kadherina; nivo iRNK vimentina; nivo iRNK piruvat karboksilaze. Kao što je ovde korišćen, termin "nukleinska kiselina" ili "molekul nukeinske kiseline" je određen tako da obuhvata molekule DNK (npr., cDNK ili genomsku DNK) i molekule RNK (npr., iRNK) i analoge DNK ili RNK generisane upotrebom nukleotidnih analoga. Molekul nukleinske kiseline može biti jednolančani ili dvolančani.

[0144] "Izolovani" molekul nukleinske kiseline je onaj koji je odvojen od drugih molekula nukleinskih kiselina koji su prisutni u prirodnom izvoru molekula nukleinske kiseline. "Izolovani" molekul nukleinske kiseline može biti bez sekvenci (kao što su sekvence koje kodiraju protein) koje prirodno ograničavaju nukleinsku kiselinu (tj., sekvence locirane na 5’ i 3’ krajevima nukleinske kiseline) u genomskoj DNK organizma iz koga je poreklom nukleinska kiselina. "Izolovani" molekul nukleinske kiseline, kao što je iRNK, može biti značajno bez drugog ćelijskog materijala ili drugih kontaminirajućih proteina iz ćelijskog ili tkivnog izvora iz koga je poreklom nukleinska kiselina.

[0145] Molekul nukleinske kiseline koji je ovde opisan može biti izolovan upotrebom standardnih tehnika molekularne biologije i infromacije o sekvenci dostupne u bazama podataka poznatim stručnjacima iz date oblasti tehnike. Upotreba celih ili dela takvih sekvenci nukleinskih kiselina, molekuli nukleinskih kiselina koji su ovde opisani mogu biti izolovani upotrebom standardnih tehnika hibridizacije i kloniranja (npr., kao što je opisano u Sambrook et al., ed., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989).

[0146] Molekul nukleinske kiseline koji je ovde opisan može biti amplifikovan upotrebom cDNK, iRNK ili genomske DNK kao obrasca i odgovarajućih oligonukleotidnih prajmera prema standardnim tehnikama PCR amplifikacije. Molekuli nukleinskih kiselina koji su tako amplifikovaniu mogu biti klonirani u odgovarajući vektor i okarakterisani analizom DNK sekvence. Pored toga, oligonukleotidi koji odgovaraju celom ili delu molekula nukleinske kiseline mogu biti pripremljeni pomoću standardnih sintetičkih tehnika, npr., upotrebom automatskog uređaja za sintezu DNK.

[0147] Izolovani molekul nukleinske kiseline može da sadrži molekul nukleinske kiseline koji ima nukleotidnu sekvencu komplementarnu nukleotidnoj sekvenci nukleinske kiseline koja odgovara genu koji je ovde opisan, ili nukleotidnoj sekvenci nukleinske kiseline koja kodira protein koji odgovara genu koji je ovde opisan. Molekul nukleinske kiseline koji je komplementaran datoj nukleotidnoj sekvenci je onaj koji je dovoljno komplementaran datoj nukleotidnoj sekvenci da može da je hibridizuje za datu nukleotidnu sekvencu na taj način formirajući stabilni dupleks.

[0148] Molekul nukleinske kiseline koji je ovde opisan može da sadrži samo deo sekvence nukleinske kiseline. Takvi molekuli nukleinskih kiselina mogu se koristiti, na primer, kao proba ili prajmer. Proba/prajmer može biti jedan ili više značajno prečišćenih oligonukleotida. Probe na bazi sekvence molekula nukleinskih kiselina opisane ovde mogu biti korišćene za detekciju transkripata ili genomskih sekvenci koje odgovaraju genima koji su ovde opisani. Proba može da sadrži obeleživačku grupu, npr., radioizotop, fluorescentno jedinjenje, enzim ili enzimski kofaktor. Takve probe mogu biti korišćene kao deo dijagnostičkog test kompleta za identifikaciju ćelija ili tkiva koji eksprimiraju protein, kao što je putem merenja nivoa molekula nukleinske kiseline koji kodira protein u uzorku ćelija iz pacijenta, npr., detekciju nivoa iRNK.

Postupci za detekciju ekspresije gena

[0149] Postupci za detekciju i/ili kvantitativno određivanje genskog transkripta, npr., iRNK ili od nje pripremljene cDNK, mogu da obuhvataju, ali bez ograničenja na Southern Blot analizu, Northern Blot analizu, analize lančane reakcije polimeraze (PCR) i nizove proba. Postupci za detekciju i/ili kvantitativno određivanje genskog transkripta, npr., iRNK ili od nje pripremljene cDNK, mogu da obuhvataju, ali bez ograničenja na postupke na bazi hibridizacije, npr., hibridizacija sa probom koja je specifična za genski transkript, npr., iRNK ili od nje pripremljena cDNK. Nivo genskog transkripta, npr., iRNK ili od nje pripremljena cDNK, može biti analizirana nanošenjem uzorka, ili iRNK ili od nje pripremljene ili od nje amplifikovane cDNK; na mikroniz nukleinske kiseline ili niz čipa.

[0150] Nivo genskog transkripta, npr., iRNK ili od nje pripremljena cDNK, može biti analiziran pomoću postupka na bazi lančane reakcije polimeraze (PCR), npr., kvantitativna PCR, kvantitativna PCR u realnom vremenu, PCR u realnom vremenu, reverzna transkripciona PCR, reverzna transkripciona PCR u realnom vremenu. Nivo genskog transkripta, npr., iRNK ili od nje pripremljene cDNK, može biti analiziran pomoću postupka na bazi sekvenciranja, npr., kvantitativnog sekvenciranja RNK.

[0151] Nivo genskog transkripta, npr., iRNK, može biti određen pomoću in situ ili pomoću in vitro postupaka poznatih u stanju tehnike. Za in vitro postupke, bilo koja tehnika izolacije RNK koja ne vrši selekciju protiv izolacije iRNK može biti korišćena za prečišćavanje RNK iz uzorka, npr., iz ćelija uzorka (videti, npr., Ausubel et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York 1987-1999). Pored toga, veliki brojevi uzoraka tkiva mogu biti lako obrađeni upotrebom tehnika koje su dobro poznate stručnjacima iz date oblasti tehnike, kao što je, na primer, postupak izolacije iRNK od jednog koraka koji je dao Chomczynski (1989, SAD patent br. 4,843,155). Za in situ postupke, iRNK ne mora biti izolovan iz ćelija pre detekcije. U takvim postupcima, uzorak ćelije ili tkiva može biti pripremljen/obrađen upotrebom poznatih histoloških postupaka. Uzorak može zatim biti imobilizovan na podlozi, i zatim doveden u kontakt sa probom koja može da hibridizuje za iRNK koja kodira genski transkript od interesa.

[0152] Određivanja mogu biti zasnovana na apsolutnom nuvou ekspresije; normalizovanom nivou ekspresije ili relativnom nivou ekspresije; genskog transkripta, npr., iRNK. Nivoi ekspresije mogu biti normalizovani ispravkom apsolutnog nivoa ekspresije genskog transkripta upoređivanje njegovog ekspresionog nivoa sa ekspresionim nivoom drugog gena koji je stabilno eksprimiran, npr., domaćinskim genom koji je konstitutivno eksprimiran. Pogodni geni za normalizaciju obuhvataju domaćinske gene kao što je gen za histon H3 ili gen za aktin. Ova normalizacija omogućava poređenje nivoa ekspresije u jednom uzorku sa drugim uzorkom, npr., prvog uzorka uzetog od pacijenta sa drugim uzorkom uzetim od istog pacijenta, npr., iz drugog tkiva ili u različitoj vremenskoj tački; ili između uzoraka iz različitih izvora, npr., uzorak pacijenta iz jednog pacijenta sa uzorkom iz drugog pacijenta.

[0153] Nivo ekspresije može biti obezbeđen kao relativni nivo ekspresije. Relativni nivo ekspresije može biti određen upoređivanjem apsolutnog nivoa ekspresije genskog transkripta, npr., iRNK, sa referentnim standardom. Referentni standard može da obuhvata nivo ekspresije genskog transkripta od interesa u genotipski ili fenotipski definisanom uzorku. Referentni standard može biti nivo ekspresije genskog transkripta od interesa, npr., E-kadherina, vimentina, piruvat karboksilaze, u ćeliji genotipski ili fenotipski okarakterisanoj kao epitelijalna ćelija. Epitelijalna ćelija može biti okarakterisana kao u bilo kojoj od sledećih referenci: (Yauch et al., (2005) Clin Cancer Res 11:24; Savagner et al., (2010) Ann Oncol.

21(suppl 7): vii89; Thiery et al., (2002) Nature Reviews Cancer 2(6):442).

[0154] Nivo ekspresije genskog transkripta koji je ovde opisan, npr., E-kadherina, vimentina, piruvat karboksilaze, može biti meren najmanje u dve vremenske tačke da bi se odredilo da li se javila promena u nivou ekspresije. Na primer, nivo ekspresije može biti meren pre i posle tretmana jedinjenjem koje je ovde opisano, ili u jednoj ili više vremenskih tačaka dok teče tretman jedinjenjem koje je ovde opisano. Ako je nađeno da je nivo ekspresije smanjen, npr., smanjena ekspresija E-kadherina u poređenju sa referentnim standardom i/ili povećana ekspresija vimentina u poređenju sa referentnim standardom; na subjekta se može primenjivati tretman sa jedinjenjem koje je ovde opisano. Referentni standard može biti nivo ekspresije genskog transkripta od interesa u okarakterisanoj epitelijalnoj ćeliji. Epitelijalna ćelija može biti okarakterisana pomoću postupaka poznatih u stanju tehnike, npr., kao u bilo kojoj od sledećih referenci: (Yauch et al., (2005) Clin Cancer Res 11:24; Savagner et al., (2010) Ann Oncol.21(suppl 7): vii89; Thiery et al., (2002) Nature Reviews Cancer 2(6):442).

Proteini

[0155] Postupci koji su ovde opisani mogu da se odnose na procenu uzorka za ekspresiju gena koji je ovde opisan, npr., E-kadherina, vimentina, piruvat karboksilaze; na bazi izolovanih proteina koji odgovaraju genu koji je ovde opisan, npr., nivo proteina E-kadherina; nivo proteina vimentina; nivo proteina piruvat karboksilaze. Ovo takođe može da obuhvata procenu biološki aktivnih delova, varijanti, izoformi ili njihovih splajsnih varijanti. Nativni polipeptid koji odgovara proteinu od interesa može biti izolovan iz uzorka pomoću odgovarajuće šeme prečišćavanja upotrebom standardnih tehnika prečišćavanja proteina poznatih stručnjacima iz date oblasti tehnike.

[0156] "Izolovani" ili "prečišćeni" protein ili njegov biološki aktivni deo je značajno bez ćelijskog materijala ili drugih kontaminirajućih proteina iz ćelijskog ili tkivnog izvora iz koga je protein poreklom. Izraz "značajno bez ćelijskog materijala" obuhvata preparate proteina u kojima je protein odvojen od ćelijskih komponenti ćelija iz kojih je izolovan. Biološki aktivni delovi polipeptida mogu da obuhvataju polipeptide koji sadrže aminokiselinske sekvence dovoljno identične ili poreklom iz aminokiselinske sekvence proteina, koji obuhvataju manji broj aminokiselina od proteina pune dužine, i ispoljavaju najmanje jednu aktivnost odgovarajućeg proteina pune dužine. Tipično, biološki aktivni delovi sadrže domen ili motiv sa najmanje jednom aktivnošću odgovarajućeg proteina.

Postupci za detekciju ekspresije proteina

[0157] Nivo ekspresije proteina ili polipeptida može biti detektovan i kvantitativno određen pomoću bilo kog broja sredstava dobro poznatih stručnjacima iz date oblasti tehnike. Postupci za detekciju i/ili kvantitativno određivanje proteina ili polipeptida koji je ovde opisan, npr., E-kadherina, vimentina, piruvat karboksilaze; mogu da obuhvataju, ali bez ograničenja na biohemijske postupke kao što su elektroforeza, kapilarna elektroforeza, tečna hromatografija visokog učinka (HPLC), hromatografija na tankom sloju (TLC), hiperdifuziona hromatografija i slično, ili različite imunološke analize kao što su reakcije tečnog ili gel precipitina, imunodifuzija (jednostruka ili dvostruka), imunoelektroforeza, radioimunološka analiza (RIA), enzimski vezane imunosorbent analize (ELISAs), imunofluorescentne analize, Western bloting, imunohistohemija, in situ hibridizacija, fluorescencijom-aktivirano sortiranje ćelija (FACS) i slično. Stručnjak iz date oblasti tehnike može lako da prilagodi poznate postupke detekcije proteina/antitela za upotrebu u određivanju da li ćelije eksprimiraju protein ili polipeptid koji je ovde opisan.

[0158] Protein ili polipeptid može biti detektovan upotrebom imunološke analize. Kao što su ovde korišćene, imunološke analize obuhvataju analize koje koriste antitelo za specifično vezivanje za protein ili polipeptid. Imunološka analiza može biti okarakterisana detekcijom spceifičnog vezivanja proteina ili polipeptida za antitelo naspram upotrebe drugih fizičkih ili hemijskih osobina za izolaciju, ciljno delovanje i kvantitativno određivanje polipeptida. Polipeptid može biti detektovan i/ili kvantitativno određen upotrebom bilo kog broja dobro prepoznatih imunoloških analiza vezivanja (videti, npr., SAD patente br. 4,366,241; 4,376,110; 4,517,288; i 4,837,168). Za prikaz opštih imunoloških analiza, videti takođe Asai (1993) Methods in Cell Biology Volume 37: Antibodies in Cell Biology, Academic Press, Inc. New York; Stites & Terr (1991) Basic and Clinical Immunology 7th Edition. Imunološke analize za detekciju i/ili kvantitativno određivanje proteina ili polipeptida mogu imati široki niz različitih formata koji su dobro poznati stručnjacima iz date oblasti tehnike.

[0159] Antitelo sposobno da se vezuje za protein ili polipeptid, npr., antitelo sa detektabilnim obeleživačem (bilo direktno ili indirektno obeleženo), koje odgovara proteinu ili polipeptidu koji je ovde opisan, npr., E-kadherinu, vimentinu, privat karboksilazi, može se koristiti za detekciju proteina ili polipeptida. Antitela mogu biti poliklonska ili monoklonska. Može biti korišćeno intaktno antitelo ili njegov fragment, npr., Fab ili F(ab’)2. Termin "obeležen", u vezi sa probom ili antitelom, je određen tako da obuhvata direktno obeležavanje probe ili antitela putem spajanja, tj., fizičkog vezivanja detektabilne supstance za probu ili antitelo, kao i indirektno obeležavanje probe ili antitela preko reaktivnosti sa drugim reagensom koji je direktno obeležen. Primeri indirektnog obeležavanja obuhvataju detekciju primarnog antitela upotrebom fluorescentno obeleženog sekundarnog antitela i obeležavanja kraja DNK probe sa biotinom tako da može biti detektovana sa fluorescentno obeleženim streptavidinom. Antitelo takođe može biti obeleženo, npr., radioaktivno obeleženo, obeleženo hromoforom, obeleženo fluoroforom ili enzimski obeleženo antitelo. Korišćen je derivat antitela, npr., antitelo konjugovano sa supstratom ili sa proteinom ili ligandom para proteina-liganda, npr., biotinstreptavidin, ili fragment antitela, npr., jednolančano antitelo, izolovani hipervarijabilni domen antitela, itd., koji se vezuje specifično sa proteinom koji je ovde opisan, npr., E-kadherinom, vimentinom, piruvat karboksilazom, kao što je protein kodiran od strane otvorenog okvira čitanja koji odgovara genskom transkriptu proteina ili polipeptida koji je ovde opisan, npr., E-kadherina, vimentina, piruvat karboksilaze, ili takav protein ili polipeptid koji je prošao kroz celu ili deo njegove normalne post-translacione modifikacije.

[0160] Proteini iz ćelija mogu biti izolovani upotrebom tehnika koje su dobro poznate stručnjacima iz date oblasti tehnike. Korišćeni postupci izolacije proteina mogu, na primer, biti takvi kao što su oni opisani u Harlow and Lane (Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York).

[0161] Nivo ekspresije može biti obezbeđen kao relativni nivo ekspresije. Relativni nivo ekspresije može biti određen upoređivanjem apsolutnog nivoa ekspresije proteina, sa referentnim standardom. Referentni standard može da obuhvata nivo ekspresije proteina od interesa u genotipski ili fenotipski definisanom uzorku. Referentni standard može biti nivo ekspresije proteina od interesa, npr., E-kadherina, vimentina, piruvat karboksilaze, u ćeliji genotipski ili fenotipski okarakterisanoj kao epitelijalna ćelija. Epitelijalna ćelija može biti okarakterisana pomoću postupaka poznatih u stanju tehnike, npr., kao što su opisane u bilo kojoj od sledećih referenci: (Yauch et al., (2005) Clin Cancer Res 11:24; Savagner et al., (2010) Ann Oncol.21(suppl 7): vii89; Thiery et al., (2002) Nature Reviews Cancer 2(6):442).

[0162] Nivo ekspresije proteina ili polipeptida koji je ovde opisan, npr., E-kadherina, vimentina, piruvat karboksilaze, može biti meren najmanje u dve vremenske tačke za određivanje da li se javila promena u nivou ekspresija. Na primer, nivo ekspresije može biti meren pre i posle tretmana sa jedinjenjem koje je ovde opisano, ili u jednoj ili više vremenskih tačaka dok teče tretman sa jedinjenjem koje je ovde opisano. Ako je nađeno da je nivo ekspresije smanjen, npr., smanjena ekspresija E-kadherina u poređenju sa referentnim standardom i/ili povećana ekspresija vimentina u poređenju sa referentnim standardom; na subjekta može biti primenjen tretman sa jedinjenjem koje je ovde opisano.

Kompleti

[0163] Ovde su takođe opisani kompleti koji sadrže agense za analizu nivoa genske ekspresije gena opisanog ovde, npr., E-kadherina, vimentina, piruvat karboksilaze. Na primer, komplet može da obuhvata agens sposoban da interaguje sa proizvodom genske ekspresije gena koji je ovde opisan, npr., E-kadherina, vimentina, piruvat karboksilaze. Komplet može da obuhvata veći broj sredstava sposobnih da interaguju sa proizvodima genske ekspresije većeg broja gena opisanih ovde, npr., E-kadherina, vimentina, piruvat karboksilaze. Agens može da obuhvata, ali bez ograničenja na, antitelo, veći broj antitela, oligonukleotid, ili veći broj oligonukleotida. Proizvod genske ekspresije može da obuhvata, ali bez ograničenja na, transkribovani molekul, molekul RNK, polipeptid, protein, genomsku DNK ili cDNK.

[0164] Komplet može dalje izborno da obuhvata reagense za izvođenje analiza opisanih ovde. Na primer, komplet može da obuhvata pufere, rastvarače, stabilizatore, konzervanse, kolone za prečišćavanje, detekcione reagense i enzime, koji mogu biti neophodni za izolaciju nukleinskih kiselina iz zorka pacijenta, amplifikacijom uzoraka, npr., pomoću qRT-PCR, i nanošenjem uzoraka na agens opisan u prethodnom tekstu; ili za izolaciju proteina iz uzorka subjekta, i nanošenjem uzoraka na agens opisan u prethodnom tekstu; ili reagense za direktno nanošenje uzorka subjekta na agens opisan u prethodnom tekstu. Komplet takođe može da obuhvata pozitivne i negativne kontrolne uzorke, npr., kontrolni uzorci nukleinske kiseline (npr., uzorak nukleinske kiseline iz subjekta bez kancera, ili uzorak iz ne-tumorskog tkiva ili subjekta koji nije primio tretman za kancer, ili ostali test uzorci za testiranje u isto vreme kao uzorci subjekta. Komplet takođe može da obuhvata uputstvo, koje može da obezbedi vodič za sakupljanje i obradu uzoraka pacijenta, nanošenjem uzoraka na na nivou analize genske ekspresije, i za tumačenje rezultata analize.

[0165] Komponente kompleta mogu biti obezbeđene u bilo kom obliku, npr., tečnom, suvom, polu-suvom, ili u liofilizovanom obliku, ili u obliku za skladištenje u zamrznutom stanju. Tipično, komponente kompleta su obezbeđene u obliku koji je sterilan. Kada su reagensi obezbeđeni u tečnom rastvoru, tečni rastvor je generalno vodeni rastvor, npr., sterilni vodeni rastvor. Kada su reagensi obezbeđeni u suvom obliku, rekonstitucija je generalno postignuta dodavanjem pogodnog rastvarača. Rastvarač, npr., sterilni pufer, može izborno biti obezbeđen u kompletu.

[0166] Komplet može da obuhvata jedan ili više spremnika za komponente kompleta u koncentraciji pogodnoj za upotrebu u nivou analiza ekspresije gena ili sa uputstvima za razblaženje za upotrebu u analizi. Komplet može da sadrži posebne spremnike, razdvajače ili odeljke za komponente za analizu i informacioni materijal. Na primer, uzorci pozitivne i negativne kontrole mogu biti sadržani u boci ili bočici, klinički kompatibilni klasifikator može biti hermetički zatvoren u sterilnom plastičnom omotu, i informacioni materijal može biti sadržan u plastičnom rukavu ili paketu. Komplet može da obuhvata veći broj (npr., pakovanje) pojedinačnih spremnika, od kojih svaki sadrži jedan ili više jediničnih oblika (npr., za upotrebu sa jednom analizom) agensa. Spremnici kompleta mogu biti nepropustljivi za vazduh i/ili otporni na vodu. Spremnik može biti obeležen za upotrebu.

[0167] Komplet može da obuhvata informacioni materijal za izvođenje i interpretaciju analize. Komplet takođe može da obezbedi vodič gde prijaviti rezultate analize, npr., centru za lečenje ili zdravstvenom centru. Komplet može da obuhvata oblike za prijavljivanje rezultata analize genske aktivnosti koja je ovde opisana, i adresu i informacije o kontaktu u vezi toga gde poslati takve obrasce ili druge povezane informacije; ili URL (Uniform Resource Locator) adresu za prijavljivanje rezultata u „online“ bazi podataka ili „online“ aplikaciji (npr., aplikacija). U sledećem primeru izvođenja, informacioni materijal može da obuhvata vodič u vezi toga da li bi pacijent trebalo da primi tretman sa agensom matičnih ćelija protiv kancera, u zavisnosti od rezultata analize.

[0168] Informacioni materijal kompleta nije ograničen po svom obliku. U mnogim slučajevima, informacioni materijal, npr., uputstva, obezbeđen je u štampanom obliku, npr., štampani tekst, crtež i/ili fotografija, npr., etiketa ili štampani list. Međutim, informacioni materijal takođe može biti obezbeđen u drugim formatima, kao što je kompjuterski čitljiv materijal, video snimak ili audio snimak. Informacioni materijal kompleta može biti informacija o kontaktu, npr., fizička adresa, email adresa, veb stranica ili broj telefona, gde korisnik kompleta može da dobije značajnu informaciju o analizi aktivnosti gena i/ili njenoj upotrebi u postupcima koji su ovde opisani. Informacioni materijal takođe može biti obezbeđen u bilo kojoj kombinaciji formata.

[0169] Uzorak subjekta može biti obezbeđen osobi/ustanovi koja obezbeđuje analizu, npr., pružaocu usluga (kao što je objekat treće strane) ili zdravstveni centar koji procenjuje uzorak u analizi i obezbeđuje očitavanje. Na primer, osoba/ustanova koja obezbeđuje analizu može da primi uzorak od subjekta, kao što je uzorak tkiva, ili uzorak plazme, krvi ili seruma, i proceni uzorak upotrebom analize koja je ovde opisana, i određuje da je subjekat kandidat za primanje tretmana sa inhibitorom kao što je ovde opisan. Osoba/ustanova koja obezbeđuje analizu može da informiše zdravstveni centar da je subjekat kandidat za tretman sa inhibitorom kao što je ovde opisan, i na kandidata je primenjen inhibitor kao što je ovde opisan. Osoba/ustanova koja obezbeđuje analizu može da obezbedi rezultate procene, i izborno, zaključke u vezi jedne ili više dijagnoza, prognoze ili odgovarajućih opcija terapije, na primer, zdravstvenom centru ili pacijentu, ili osiguravajućoj kompaniji, u bilo kom pogodnom formatu, kao što je putem emaila ili elektronski, ili preko „online“ baze podataka. Informacija sakupljena i obezbeđena od strane osobe/ustanove koja obezbeđuje analizu može biti čuvana u bazi podataka.

PRIMERI

Primer A

[0170] U ovom primeru, enzimatska aktivnost glutaminaze je merena preko analize kuplovane krajnje tačke. Glutamin i fosfat su dopremljeni do GAC u koncentraciji jednakoj Km i AC50, respektivno, i koncentracija GAC je podešena tako da obezbedi linearnu reakciju u trajanju od 60 minuta. Proizveden glutamat je preveden u 2-OG pomoću kinetičkog viška glutamat dehidrogenaze. Ovaj drugi korak je konfigurisan za 2X Km za NAD, s obzirom na to da je višak NAD inhibitoran. Međutim, kinetički višak trećeg kuplujućeg enzima, diaforaze, reciklira NAD od NADH da bi se koncentracija NAD održavala konstantnom u toku trajanja analize. Diaforaza, takođe dopremljena u kinetičkom višku, oksiduje NADH proizveden pomoću GDH nazad do NAD sa istovremenom redukcijom rezasurina u visoko fluorescentan rezorufin. Rezorufin je meren pošto je analiza zaustavljena sa SDS pomoću Eks. 544/Em.

590. Redukcija u signalu ukazuje na inhibiciju neke komponente kuplovanog enzimskog sistema. Potencijalni pogoci su praćeni naspram GDH/diaforaze pojedinačno da bi se uklonili pogoci kuplujućeg enzimskog sistema u drugoj analizi.

1. Materijali

[0171]

BSA Sigma #3294 (bez proteaze)

diaforaza Worthington Enzyme LS004330. resuspendovan u 10 mg/ml u ddH2O i čuvati na -80C.

EDTA Sigma E6758 ili ekvivalent

glutamat Sigma G7882

dehidrogenaza

glutamin Sigma G3126 ili ekvivalent

HEPES (pH8.5) Sigma H3375 ili ekvivalent, do pH 8.5 sa

NaOH

NaCl Sigma S7653 ili ekvivalent

NAD Sigma N7004; napomena: prah će da se razloži do inhibitora ako je čuvan izvan desikatora.

Kupiti male serije i pripremiti stokove u rastvoru i čuvati na -80C. resazurin Sigma 199303

Natrijum dodecil Sigma L4390 ili ekvivalent

sulfat

Natrijum fosfat Pripremiti od Sigma monobaznih (S8282) i dvobaznih (S7907) (pH8.5) rastvora ili ekvivalenata;

1M stok krajnja koncentracija pripremljena od 1 M stokova svakog od dvobaznih i monobaznih rastvora.

2. Puferi

[0172]

2X Pufer (300 mM NaCl, 100 mM HEPES pH 8.5, 0.1% BSA, 0.5 mM EDTA, 100 mM natrijum fosfat pH 8.5)

5X supstratna mešavina (1X pufer krajnja koncentracija, sa 13 mM glutaminom, 100 µM resazurinom, 50 µg/ml diaforazom)

1.2X enzimska mešavina (1X pufer krajnja koncentracija, sa 0.875 µg/ml GAC, 1.56 mM NAD, 6.25 jedinica/ml GDH)

Stop mešavina (6% SDS u ddH20)

Reakcioni postupak

[0173]

1. Dodati 1µl jedinjenja u 100% DMSO

2. Dodati 40 µl enzimske mešavine i inkubirati 60 minuta na sobnoj temperaturi

3. Dodati 10 µl supstratne mešavine za početak reakcije

4. Zaustavljanje reakcije sa 25 µl 6% SDS i očitavati na Eksc.544 Em.590

Primer B:

[0174] U ovom primeru, potencijal za jedinjenje za inhibiciju sistema za analizu kuplovanog enzima postupka glutaminaze HTS, koji sadrži glutamat dehidrogenazu i diaforazu, je testiran preko analize kuplovane krajnje tačke. Glutamat je dopremljen u Km do GDH, koji zatim izvodi reduktivnu deamidaciju da bi se proizveo 2OG. NAD je dopremljen u 2X Km u sistem, i njegova konverzija u NADH je praćena pomoću aktivnosti diaforaze. Diaforaza, dopremljena u velikom kinetičkom višku u GDH, prevodi NADH nazad u NAD da bi se nivoi NAD održavali konstantnim u reakciji dok istovremeno redukuje rezasurin u visoko fluorescentan rezorufin. Rezorufin je meren pošto je analiza zaustavljena sa SDS pomoću Eksc. 544/Em. 590. Redukcija u signalu ukazuje na inhibiciju izvesne komponente kuplovanog enzimskog sistema.

3. Materijali

[0175]

BSA Sigma #3294 (bez proteaze)

diaforaza Worthington Enzyme LS004330. Resuspendovana u 10 mg/ml u ddH20 i čuvati na

-80C.

EDTA Sigma E6758 ili ekvivalent

Glutamat Sigma G7882

dehidrogenaza

Glutaminska kiselina Sigma G1251 ili ekvivalent

HEPES (pH8.5) Sigma H3375 ili ekvivalent, do pH 8.5 sa NaOH

NaCl Sigma S7653 ili ekvivalent

NAD Sigma N7004; napomena: prah će da se razloži do inhibitora ako je čuvan izvan

desikatora. Kupiti male serije i pripremiti stokove u rastvoru i čuvati na -80C.

resazurin Sigma 199303

Natrijum dodecil sulfat Sigma L4390 ili ekvivalent

4. Puferi

[0176]

2X pufer (300 mM NaCl, 100 mM HEPES pH 8.5, 0.1% BSA, 0.5 mM EDTA, 100 mM fosfat pH 8.5)

2X supstratna mešavina (1X pufer krajnja koncentracija, 40 µM resazurin, 1.8 mM glutamat, 20 µg/ml diaforaza)

10X NAD mešavina (1X pufer krajnja koncentracija, 12.5 mM NAD)

2.5X enzimska mešavina (1X pufer krajnja koncentracija, GDH enzim kao što je određen za odgovarajuću linearnost; na primer 0.05 jedinica/ml kao što je ovde opisano da bi se dobilo 0.02 jedinica/ml krajnje koncentracije)

Reakcioni postupak

[0177]

1. Dodati 1µl jedinjenja u 100% DMSO

2. Dodati 20 µl enzimske mešavine i inkubirati u trajanju od 60 minuta na sobnoj temperaturi 3. Dodati 5 µl NAD mešavine

4. Dodati 25 µl supstratne mešavine da bi se započela reakcija

5. Zaustaviti reakciju sa 25 µl 6% SDS i očitavati Eksc.544 Em.590

Primer 1

[0178]

trans-ciklopropan-1,2-diildimetanol (I-2):

[0179]

[0180] Jedinjenje I-2 je pripremljeno praćenjem objavljenog postupka iz literature (Org. Synth. 2008, 85, 15). U suspenziju LiAlH4(1.5 ekvivalenata) u THF lagano je dodavan (1S,2S)-dietil ciklopropan-1,2-dikarboksilat (1 ekvivalent) na 0°C. Reakciona smeša je zatim zagrevana do sobne temperature i refluksovana u trajanju od 2 časa. Posle hlađenja, heterogena smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 18 časova. Reakcija je ugašena pažljivim dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl, a zatim EtOAc. Mešanje reakcione mase sledećih 5 časova rezultovalo je u taloženju svetlo žute čvrste supstance koja je filtrirana kroz čep od celita. Celitni sloj je dalje ispran sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isparavani da bi se dobila testasta masa koja je prečišćena preko hromatografije na koloni (80% EtOAC/heksan kao eluent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova I-2.

trans-1,2-bis(bromometil)ciklopropan (I-3):

[0181]

[0182] Jedinjenje I-3 je pripremljeno pomoću sledećeg objavljenog postupka (Tetrahedron Lett. 1997, 53, 10459). U rastvor trifenilfosfina (2.1 ekvivalenata) u DCM dodat je brom (2.1 ekvivalenata) lagano na 0°C. Reakciona smeša je mešana 0.25 časova pre dodavanja transciklopropan-1,2-diildimetanola I-2 (1 ekvivalent) (kao rastvor u THF). Zatim je zagrevana do sobne temperature i mešana jedan čas. U obradi, sve isparljive materije su isparavane i sirova masa je prečišćena upotrebom hromatografije na koloni (30% EtOAc/heksan) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova I-3.

trans-2,2’-(ciklopropan-1,2-diil)diacetonitril (I-4):

[0183]

[0184] Jedinjenje I-4 je pripremljeno praćenjem objavljenog postupka (Tetrahedron Lett.

1997, 53, 10459). trans-1,2-bis(bromometil)ciklopropan I-3 (1 ekvivalent) je rastvoren u smešu EtOH/vode (2/1). Posle dodavanja NaCN (4 ekvivalenta) reakciona smeša je refluksovana preko noći. Svi isparljivi materijali su isparavani da bi se dobila testasta masa koja je rastvorena u vodi i ekstrahovana sa etrom. Vodeni sloj je dalje ekstrahovan sa etrom i kombinovani organski slojevi su isparavani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova I-4. Ovaj materijal je korišćen za sledeći korak bez bilo kakvog prečišćavanja.

trans-5,5’-(-ciklopropan-1,2-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin) (I-5):

[0185]

[0186] trans-2,2’-(ciklopropan-1,2-diil)diacetonitril I-4 (1 ekvivalent) je rastvoren u TFA (2.0 mL) i u to je dodat tiosemikarbazid (2 ekvivalenta). Reakciona smeša je refluksovana 3 časa na 100°C pre gašenja pažljivim dodavanjem zasićenog rastvora NaHCO3na 0°C da bi se pH dovela do oko 8-9. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana i dalje prečišćena da bi se dobio trans-5,5’-(-ciklopropan-1,2-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin) I-5.

Opšti postupak za sintezu jedinjenja 1, 3, 5 i 6:

[0187] U suspenziju trans-5,5’-(-ciklopropan-1,2-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina (I-5) (1 ekvivalent) i odgovarajuće kiseline (3 ekvivalenta) u DMF dodat je PYBOP (3 ekvivalenta) i DIPEA (6 ekvivalenata) i mešana je preko noći. Zatim je voda dodata u reakcionu smešu i rezultujući materijal je filtriran i prečišćen da bi se dobilo željeno jedinjenje.

N,N’-(5,5’-(trans-ciklopropan-1,2-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-fenil acetamid) (1) (referentni primer):

[0188]

[0189] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 0.5-0.7 (m, 2H), 1.0-1.2 (m, 2H), 2.8-3.0 (m, 4H), 3.7-3.9 (s, 4H), 7.2 (m, 10H), 12.60 (brs, 2H). Masa (M++1): 505.10.

N,N’-(5,5’-(trans-ciklopropan-1,2-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-2-il)acetamid) (3):

[0190]

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 0.62 (m, 2H), 1.10 (m, 2H), 2.82-3.02 (m, 4H), 4.0 (s, 4H), 7.30 (t, 2H), 7.40 (d, 2H), 7.80 (t, 2H), 8.50 (d, 2H), 12.68 (brs, 2H); Masa (M++1): 507.05.

N,N’-(5,5’-(trans-ciklopropan-1,2-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-3-il)acetamid) (5):

[0191]

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 0.58-0.65 (m, 2H), 1.02-1.16 (m, 2H), 2.80-3.13 (m, 4H), 3.84 (s, 4H), 7.34-7.41 (m, 2H), 7.72-7.80 (m, 2H), 8.41-8.58 (m, 4H), 12.63 (brs, 2H). Masa (M++1): 507.05.

N,N’-(5,5’-(trans-ciklopropan-1,2-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(tiofen-2-il)acetamid) (6):

[0192]

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 0.58-0.64 (m, 2H), 1.05-1.19 (m, 2H), 2.82-3.04 (m, 4H), 4.03 (s, 4H), 6.93-7.03 (m, 4H), 7.42 (s, 2H), 12.62 (brs, 2H). Masa (M++1): 516.90.

Primer 2

[0193]

(3-metileneciklobutil)metanol (I-11):

[0194]

[0195] Jedinjenje I-10 je kupljeno iz komercijalnog izvora i hidroliza I-10 je izvedena praćenjem postupka iz literature (J. Am. Chem. Soc. 1958, 80, 5507). U rastvor 3-metilenciklobutankarbonitrila I-10 (1 equivalent) u vodenom rastvoru EtOH (50%) dodat je KOH (4 ekvivalenta) i homogena smeša je zagrevana do refluksa u trajanju od 2 časa. Posle hlađenja, svi isparljivi materijali su isparavani i čvrsta supstanca je suspendovana u vodi. pH rastvora je podešena do 2 dodavanjem 1N HCl i željeno jedinjenje je ekstrahovano sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko anhidrovanog MgSO4i isparavani da bi se dobila 3-metilenciklobutankarboksilna kiselina u kvantitativnom prinosu. Ovaj materijal je korišćen dalje direktno za sledeći korak.

[0196] U suspenziju LiAlH4(1.5 ekvivalenata) u THF dodata je 3-metilenciklobutankarboksilna kiselina (u THF) (1 ekvivalent) lagano na 0°C. Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakciona smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana 3 časa. Praćenjem „Fischer“ obrade, dobijeno je željeno jedinjenje I-11. Ovaj materijal je korišćen za sledeći korak bez bilo kakvog prečišćavanja.

Ciklobutan-1,3-diildimetanol (I-12):

[0197]

[0198] (3-Metilenciklobutil)metanol I-11 (1 ekvivalent) je rastvoren u anhidrovanom THF i BH3.DMS (1 ekvivalent) dodat ukapavanjem na 0°C. Posle dodavanja, reakciona smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana preko noći. Reakcija je ugašena pažljivim dodavanjem NaOH (3M rastvor u vodi) na 0°C nakon čega je dodat H2O2. Mešanje je nastavljeno u trajanju od 3 časa na sobnoj temperaturi pre razblaženja sa vodom i ekstrakcije diola sa etil acetatom. Sirovi materijal je uzet direktno za sledeći korak bez bilo kakvog prečišćavanja.

Ciklobutan-1,3-diilbis(metilen) bis(4-metilbenzensulfonat) (I-13):

[0199]

[0200] Rastvor ciklobutan-1,3-diildimetanola I-12 (1 ekvivalent) i TEA (3 ekvivalenta) u dihlorometanu hlađen je do 0°C i tozilhlorid (2 ekvivalenta) je dodata u porciji. Reakciona smeša je ostavljena na 12 časova. U toku obrade, reakciona smeša je razblažena dihlorometanom i organski sloj je ispran vodom. Organski sloj je koncentrovan da bi se dobio željeni proizvod I-13.

2,2’-(Ciklobutan-1,3-diil)diacetonitril (I-14):

[0201]

[0202] U rastvor ciklobutan-1,3-diilbis(metilen) bis(4-metilbenzensulfonata) I-13 (1 ekvivalent) u DMF dodat je NaCN (6 ekvivalenata) i refluksovan je 12 časova. U toku obrade, reakciona smeša je razblažena vodom i željeno jedinjenje je ekstrahovano sa etil acetatom. Isparavanje organskog rastvarača dalo je I-14.

5,5’-(ciklobutan-1,3-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin) (I-15):

[0203]

[0204] U rastvor 2,2’-(ciklobutan-1,3-diil)diacetonitrila I-14 (1 ekvivalent) u TFA dodat je tiosemikarbazid (2 ekvivalenta) i rastvor je mešan na 100°C u trajanju od 3 časa. Reakcija je hlađena do sobne temperature i ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3. Materijal je filtriran i ispiran redom vodom, etil acetatom i dietil etrom. Dobijen je diamin I-15.

Opšti postupak za sintezu jedinjenja 7 i 8:

[0205] U rastvor odgovarajuće kiseline (2 ekvivalenta) i DIPEA (6 ekvivalenata) u DMF (NMP za derivat piridila) dodat je PYBOP (3 ekvivalenta) na 0°C i mešan 10 min na sobnoj temperaturi. Jedinjenje I-15 je dodato u reakcionu smešu i mešanje je nastavljeno preko noći. Zatim je dodata voda i željeni proizvod je ekstrahovan sa etil acetatom. Organski sloj je sušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću standardnih postupaka da bi se dobilo čisti proizvodi.

N,N’-(5,5’-(ciklobutan-1,3-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-fenilacetamid) (8):

[0206]

[0207] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 0.9-1.2 (m, 1H), 1.42-1.60 (m, 1H), 1.84-1.95 (m, 2H), 2.10-2.22 (m, 1H), 2.6-2.7 (m, 1H), 3.0-3.16 (m, 4H), 3.80 (s, 4H), 7.10-7.40 (m, 10H), 12.62 (brs, 2H); Masa (M++1): 519.19, 541.25 (M++23).

N,N’-(5,5’-(ciklobutan-1,3-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-2-il) acetamid) (7):

[0208]

[0209] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1.19 -1.22 (m, 1H), 1.45 - 1.61 (m, 1H), 1.82 - 1.92 (m, 1H), 2.15 - 2.05 (m, 1H), 3.01 - 3.16 (m, 4H), 4.01 (s, 4H), 7.22 - 7.42 (m, 4H), 7.72 -7.80 (m, 2H), 8.44 (s, 2H), 12.6 (brs, 2H). Masa (M++23): 543.15.

Primer 3

[0210]

Ciklopentan-1,3-dikarbaldehid (I-19):

[0211]

[0212] KMnO4(3.2 ekvivalenta) i CuSO4·5H2O (2 ekvivalenta) sipani su u dihlorometan i u ovu suspenziju je dodata destilovana voda. Norbornen I-18 (1 ekvivalent) je rastvoren u dihlorometanu i lagano dodat u smešu oksidansa, a zatim t-butanol. Posle 3 časa reakciona smeša je filtrirana kroz celit i isprana zasićenim fiziološkim rastvorom. Fiziološki rastvor je zatim ponovo ispran dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, i rastvarač je uklonjen rotacionim isparavanjem pod temperaturom sredine da bi se dobio željeni proizvod I-19.

Ciklopentan-1,3-diildimetanol (I-20):

[0213]

[0214] U 1,3-ciklopentandikarbaldehid I-19 (1 ekvivalent) sipan u bočicu dodat je deoksigenisani metanol. Reakciona smeša je hlađena do 0°C i NaBH4(2 ekvivalenta) je dodat u malim alikvotama da bi se izbeglo povećanje reakcione temperature iznad 10°C. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana dodatna 3 časa pod atmosferom azota. Destilovana voda je dodata u reakcionu smešu da bi se ugasio sav preostao NaBH4i zatim je izvedeno rotaciono isparavanje da bi se uklonio metanol iz rastvora. Preostala smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (5 puta) i kombinovane organske frakcije su sušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i isparavane do sušenja da bi se dobilo jedinjenje iz naslova I-20.

Ciklopentan-1,3-diilbis(metilen)bis(4-metilbenzensulfonat) (I-21):

[0215]

[0216] Ciklopentan-1,3-diildimetanol I-20 (1 ekvivalent) sipan u piridin je hlađen do 0°C i u porcijama je dodavan p-toluen sulfonil hlorid (3 ekvivalenta) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noči. Napredovanje reakcije je praćeno pomoću TLC. Posle završetka reakcije, piridin je izdestilovan. Ostatak je razblažen sa dietil etrom, ispran sa 1N HCl, rastvorom NaHCO3, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod I-21.

2,2’-(ciklopentan-1,3-diil)diacetonitril (I-22):

[0217]

[0218] Ciklopentan-1,3-diilbis(metilen) bis(4-metilbenzensulfonat) I-21 (1 ekvivalent) je sipan u smešu DMF:H2O (3:1) i dodat je natrijum cijanid (6 ekvivalenata) i smeša je mešana na 150°C u trajanju od 15 časova. Napredovanje reakcije je praćeno pomoću TLC. Posle završetka reakcije, reakciona smeša je ugašena vodom, ekstrahovana sa dietil etrom. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen da bi se dobio željeni proizvod I-22.

5,5’-(ciklopentan-1,3-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin) (I-23):

[0219]

[0220] Jedinjenje iz naslova je sintetisano od 2,2’-(ciklopentan-1,3-diil)diacetonitrila I-22 pomoću sledećeg postupka opisanog za jedinjenja I-15.

N,N’-(5,5’-(ciklopentan-1,3-diilbis(metilene))bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-2-il) acetamid) (4):

[0221]

[0222] Jedinjenje iz naslova je sintetisano od 5,5’-(ciklopentan-1,3-diilbis-(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) I-15 pomoću sledećeg opšteg postupka kao što je opisan za jedinjenje 7 i 8.

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1.35-1.40 (m, 2H), 1.70-1.80 (m, 2H), 1.90-1.95 (m, 1H), 2.20-2.24 (m, 2H), 2.98(d, 4H), 4.00 (s, 4H), 7.26 (t, 2H), 7.39 (d, 2H), 7.78 (t, 2H), 8.50 (d, 2H), 12.70 (brs, 2H); Masa (M++1): 535.10.

Primer 4

[0223]

N,N’-(55’-((1R,3R)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-fenilacetamid) (19)

[0224]

[0225] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:1.92-1.95 (m,2H),2.26-2.29 (m,2H),2.34-2.37 (t,2H),3.70 (s,2H),3.72-3.76 (m,4H),7.24-7.34 (m,10H),11.8 (s,2H); Masa (M++1): 505.7.

N,N’-(5,5’-((1R,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-fenilacetamid) (18)

[0226]

[0227] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:1.94-1.97 (m,2H), 2.08-2.09 (t,1H), 2.19-2.23 (m,2H), 2.61-2.64 (t,1H), 3.63-3.66 (m,2H), 3.75 (s,4H), 7.23-7.26 (m,2H), 7.31-7.34 (t,8H), 11.7 (s,2H); Masa (M++1): 505.7.

Primer 5

N,N’-(5,5’-((1R,4R)-cikloheksan-1,4-diilbis(metilen)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-2-il) acetamid) (2):

[0228] Jedinjenje iz naslova je sintetisano od 5,5’-((1R,4R)-cikloheksan-1,4-diilbis(metilen))bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (trans) pomoću sledećeg opšteg postupka kao što je opisan za jedinjenje 7 i 8.

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1.0 (t, 2H), 1.60 - 1.80 (m, 8H), 2.85 (d, 4H), 4.0 (s, 4H), 7.30 (t, 2H), 7.40 (d, 2H), 7.80 (t, 2H), 8.50 (d, 2H), 12.65 (brs, 2H); Masa (M++1) 549.10.

Primer 6

[0229]

5,5’-(cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin) (I-31):

[0230]

[0231] Smeša cikloheksan-1,3-dikarboksilne kiseline (1.0 ekvivalent) i tiosemikarbazida (2.0 ekvivalenta) sipana je u POCl3(6.0 ekvivalenata) i mešana na 80°C u trajanju od 3 časa. Reakciona smeša je hlađena do sobne temperature i sipana na led. Dobijena smeša je filtrirana i zatim dovedena do pH 8 upotrebom KOH. Rezultujući materijal koji je formiran je ispran vodom i sušen da bi se dobio željeni proizvod (31). Ovaj materijal je korišćen kao takav za sledeći korak.

Opti postupak za sintezu jedinjenja (I-33 do I-35):

[0232]

[0233] Smeša jedinjenja (I-31) (1 ekvivalent), odgovarajućeg estra (2.5 ekvivalenta), t-BuOK (3.0 ekvivalenta) u DMF je mešana na 120-140°C u trajanju od 30-60 min u mikrotalasnoj peći. Rezultujuća smeša je prečišćena pomoću standardnih postupaka da bi se dobili željeni proizvodi.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(1H-indol-3-il)acetamid (22):

[0234]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 1.58(s, 2H), 1.60 (m, 4H), 2.27 (s, 2H), 3.44(s, 2H), 3.88 (s, 4H), 6.97-7.00(t, 4H), 7.28-7.36 (m, 4H), 7.56-7.57(d, 2H), 10.96(s, 2H); Masa (M++H): 596.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3R)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(1H-indol-3-il)acetamid) (23):

[0235]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 1.49-1.55(s, 3H), 1.75-1.77 (m, 1H), 1.88(m, 1H), 2.05-2.07 (m, 2H), 2.28-2.41(d, 1H),3.23-3.27(t, 2H), 3.88 (s, 4H), 6.97-7.00(t, 4H), 7.28-7.36 (m, 4H), 7.56-7.57(d, 2H), 10.95(s, 2H), 12.53(s, 2H); Masa (M++H): 596.7.

N,N’-(5,5’-(1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(1H-indol-4-il)acetamid) (24):

[0236]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 1.01(s, 2H),1.57-1.60(s, 4H), 2.2 (S, 2H), 3.45(S, 2H), 4.01 (s, 4H), 6.55(s, 2H),6.94-6.96(d, 2H), 7.02-7.05(d, 2H), 7.28-7.33 (m, 4H), 11.11(s, 2H); Masa (M++H): 596.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3R)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(1H-indol-4-il)acetamid) (25):

[0237]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 1.49-54(m, 3H), 1.74-1.76(s, 2H), 1.87-1.90(m, 3H), 2.37-2.45 (m, 2H), 3.99 (s, 4H), 6.54(s, 2H), 6.94-6.96(d, 2H), 7.03-7.04(d, 2H), 7.2-7.31 (m, 4H), 11.11(s, 2H); Masa (M++H): 597.3.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil)) bis(2-(pirimidin-2-il)acetamid) (27):

[0238]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 1.61-1.63(m, 2H), 1.83-1.92 (d, 4H), 2.29 (s, 2H), 3.46(s, 2H), 4.11 (s, 4H), 7.40-7.42(t, 2H), 8.75-8.77(d, 4H), 12.02(s, 2H); Masa (M++H): 522.8.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-3-il)acetamid) (28):

[0239]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 1.59-1.61(m, 2H), 1.81-1.94 (d, 4H), 2.26 (s, 2H), 3.44(s, 2H), 3.83 (s, 4H), 7.34-7.37(m, 2H), 7.72-7.74(d, 2H), 8.46-8.51(d, 4H), 12.75 (s, 2H); Masa (M++H): 521.3.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-4-il)acetamid) (29):

[0240]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 1.59-1.62(m, 2H), 1.82-1.93 (d, 4H), 2.27 (s, 2H), 3.45(s, 2H), 3.85 (s, 4H), 7.33-7.34(d, 4H), 8.51-8.52(d, 4H), 12.49 (s, 2H); Masa (M++H): 521.2.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-metilizoksazol-5-il)acetamid)(30):

[0241]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 1.61-1.64(t, 2H), 1.83-1.97 (m, 4H), 2.21 (s, 6H), 2.30-2.32(s, 2H), 3.49-3.51(t, 2H), 4.07(s, 4H), 6.30(s, 2H), 12.82 (s, 2H); Masa (M++H): 529.2.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(dimetilamino)fenil)acetamid)(31):

[0242]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 1.59(s, 2H), 1.80-1.84(m, 4H), 2.27-2.29(t, 2H), 2.85(s, 12H), 3.45-3.47(t, 2H), 3.63(4H), 6.67-6.69(d, 2H), 7.13-7.14(d, 2H), 12.55(s, 2H); Masa (M++H): 605.3.

N,N’-(5,5’-((1R,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-fenilacetamid) (10):

[0243]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 8:1.16-2.04 (m,2H),2.32-2.37 (d,1H),3.15-3.33 (d,2H),3.66 (s,4H),7.21-7.30 (m,10H); Masa (M++1): 519.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-fenilacetamid) (11):

[0244]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 8:1.5-1.61 (t,2H),1.91-1.93 (t,4H),2.29 (s,2H),3.46-3.47 (d,2H),3.80 (s,4H),7.25-7.35 (m,10H),12.7 (s,2H); Masa (M++1): 519.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))diacetamid (12):

[0245]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:1.61-1.63 (t,2H), 1.84-1.97 (m,4H),2.17 (s,6H),2.30-2.32 (d,2H),3.46-3.48 (t,2H),12.2 (s,2H); Masa (M++1): 367.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-2-il)acetamid) (14):

[0246]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:1.60-1.63 (t,2H), 1.83-1.85 (t,2H), 1.91-1.95 (m,2H),2.28-2.30 (t,2H),3.45-3.47 (t,2H),3.97 (s,4H),7.26-7.29 (m,2H),7.39-7.40 (d,2H),7.74-7.78 (m,2H),8.48-8.49 (t,2H),12.1 (s,2H); Masa (M++1): 521.7.

N,N’-(5,5’-((1R,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(1-metil-1H-indol-3-il)acetamid) (15):

[0247]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:1.49-1.57 (m,3H), 1.74-1.79 (t,1H),1.88-1.91 (d,1H),2.05-2.08 (t,2H),2.38-2.40 (d,1H),3.23-3.28 (t,2H),3.75 (s,6H),3.87 (s,4H),12.6 (s,2H); Masa (M++1): 625.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(1-metil-1H-indol-3-il)acetamid)(16):

[0248]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:1.57-1.59 (t,2H),1.81-1.92 (m,4H),2.26-2.27 (d,2H),3.44-3.46 (t,2H),3.76 (s,6H),3.88(s,4H),7.01-7.04 (t,2H),7.13-7.16 (t,2H),7.27 (s,2H),7.39-7.41 (d,2H),7.57-7.59 (d,2H),12.6 (s,2H); Masa (M++1): 625.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-2-il)acetamid) (21):

[0249]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:1.60-1.62 (t,2H),1.82-1.85 (m,2H),1.92-1.96 (m,2H),2.29-2.31 (t,2H),3.47-3.49 (t,2H),4.00 (s,4H),7.27-7.29 (m,2H),7.38-7.40 (d,2H),7.75-7.78 (m,2H),8.48-8.49 (d,2H),12.6 (t,2H); Masa (M++1): 521.7.

N,N’-(5,5’-((1R,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-2-il)acetamid) (20):

[0250]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:1.52-1.62 (m,3H), 1.78-1.80 (d,1H),1.90-1.93 (d,1H),2.07-2.10 (d,2H), 2.42-2.44 (d,1H), 3.26-3.34 (m,2H), 4.00 (s,4H), 7.27-7.30 (m,2H),7.39-7.40 (d,2H),7.75-7.79 (m,2H),8.48-8.49 (d,2H),12.6 (s,2H); Masa (M++1): 521.7.

N,N’-(5,5’-((1R,3R)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(piridin-2-il)acetamid) (17):

[0251]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:1.61-1.62 (d,2H), 1.80-1.85 (m,2H), 1.92-1.94 (t,2H),2.29-2.31 (t,2H), 3.47-3.49 (t,2H),4.00 (s,4H),7.27-7.29 (m,2H),7.38-7.40 (d,2H),7.75-7.78 (m,2H),8.48-8.49 (d,2H),12.6 (t,2H); Masa (M++1): 521.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-fenilacetamid) (9):

[0252]

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ:1.59 (s,2H),1.83 (s,2H),1.91 (s,2H),2.28 (s, 2H),3.46 (s,2H),3.79 (s,4H),7.26-7.32 (t,10H); Masa (M++1): 519.7.

Primer 7

5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin)

[0253]

Korak A: trans- cikloheksil 1,3-dikarboksilna kiselina

[0254]

[0255] Cis, trans- cikloheksil 1,3-dikarboksilna kiselina (4.00 g, 23.23 mmol) je rastvorena u koncentrovanom amonijum hidroksidu na 0°C. CaCl2(3.09 g, 27.88 mmol) u vodi (5 mL) je dodat na 0°C. Dobijeni materijal je otfiltriran, i filtrat je zakišeljen sa koncentrovanom HCl. Dobijeni materijal je sakupljen filtracijom i sušen in vacuo da bi se dobila trans- cikloheksil 1,3-dikarboksilna kiselina. 1H NMR (DMSO-d6) δ: 1.44 (m, 2H), 1.61 (m, 4H), 1.79 (m, 2H), 2.53 (m, 2H), 12.13 (brs, 2H). LC-MS : m/z 171.2 (M-H)-

Korak B: (S,S)- dibenzil cikloheksil 1,3-dikarboksilat

[0256]

[0257] U smešu trans- cikloheksil 1,3-dikarboksilne kiseline (1.46 g, 8.5 mmol), Cs2CO3(8.28 g, 25.5 mmol) u DMF (20 mL) dodat je BnBr (4.36 g, 25.5 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod azotom u trajanju od 3 časa. Ostatak je razblažen vodom i ekstrahovan sa etil acetatom. Kombinovani organski rastvor je ispran vodom, sušen preko Na2SO4i koncentrovan in vacuo. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću „flash“ hromatografije da bi se dobilo 3 g trans-dibenzil cikloheksil 1,3-dikarboksilat. 1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.51 -7.30 (m, 10H), 5.15 (s, 4H), 2.84 - 2.72 (m, 2H), 2.06 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.77 (m, 4H), 1.56 (p, J = 6.0 Hz, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=353.4

[0258] Hiralno SFC odvajanje: 3 g trans-dibenzil cikloheksil 1,3-dikarboksilata je odvojeno pomoću hiralne SFC da bi se dobilo 1.4 g (S,S)- dibenzil cikloheksil 1,3-dikarboksilata (93%).

Korak C: (S,S)- cikloheksil 1,3-dikarboksilna kiselina

[0259]

[0260] U rastvor 1 g (S,S)- dibenzil cikloheksil 1,3-dikarboksilata u 10 mL MeOH dodat je 10% Pd na uglju (0.1 g). Suspenzija je isprana vodonikom i mešana u trajanju od 20 min. Zatim je filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 1.44 (m, 2H), 1.61 (m, 4H), 1.79 (m, 2H), 2.53 (m, 2H), 12.13 (brs, 2H). LC-MS : m/z (M-H) = 171.2

Korak D: 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin)

[0261]

[0262] Smeša (S,S)- cikloheksil 1,3-dikarboksilne kiseline (500mg, 0.3 mmol) i tiosemikarbazida (550mg, 0.6 mmol) je apsorbovana u POCl3(10mL) i mešana na 40°C u trajanju od 30 min, 60°C u trajanju od 30 min i 80°C u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je hlađena do sobne temperature i sipana na led. Dobijena smeša je zatim bazifikovana do pH = 8 upotrebom NaOH i filtrirana da bi se dobilo sirovo željeno jedinjenje.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.05 (s, 4 H), 3.25 (m, 2H), 2.12 (t, 2H J = 5.6 Hz, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.70 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 283.3

[0263] Racemski-Trans-5,5’-(cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin) je sintetisan sa sličnim postupkom.

Korak E: (S,S)- cikloheksil 1,3-dikarboksil bis((2S)-bornan-10,2-sultamid)

[0264]

[0265] Rastvor (S,S)- cikloheksil 1,3-dikarboksilne kiseline (800 mg, 4.65 mmol) u SOCl2je mešan na 80°C u trajanju od 1.5 časa. Još SOCl2je uklonjeno pod sniženim pritiskom i ostatak je korišćen u sledećem koraku direktno. U rastvor (2S)-bornan-10,2-sultama (2 g, 9.3 mmol) u toluenu (20 mL) dodat je NaH (60% u ulju, 465 mg, 11.63 mmol) u porcijama na 0°C i reakciona smeša je mešana na ovoj temperaturi u trajanju od 30 min. Cikloheksan-1,3dikarbonil dihlorid (dobijen iz prethodnog) u toluenu (5 mL) je dodat ukapavanjem i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je razblažena sa EtOAc (50 mL) i vodom (10 mL), odvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (50 mLx2). Kombinovani organski slojevi su isprani fiziološkim rastvorom, sušeni preko Na2SO4, filtrirani i prečišćeni „flash“ hromatografijom da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ 3.93 (dd, J = 7.6, 4.8 Hz, 2H), 3.66 - 3.59 (m, 2H), 3.50 (d, J = 13.7 Hz, 2H), 3.45 (d, J = 13.8 Hz, 2H), 2.12 (dd, J = 13.8, 7.7 Hz, 2H), 1.82 - 2.03 (m, 12H), 1.57 - 1.70 (m, 4H), , 1.39 (dt, J = 16.8, 9.5 Hz, 4H), 1.16 (s, 6H), 0.98 (s, 6H). LC-MS : m/z (M+H) = 567.3.

[0266] Proizvod je rekristalizovan u EtOAc da bi se dobio uzorak za rentgensku difrakciju jednog kristala, čiji rezultat je potvrdio da je konfiguracija dikiseline početnog materijala bila (S,S).

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))dibutiramid (37) [0267]

[0268] Rastvor 5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (20 mg, 0.07 mmol), buterne kiseline (18.5 mg, 0.21 mmol), HATU (80.8 mg, 0.21 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (29.3 mg, 0.23 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je sipana u vodu (10 ml), talog je filtriran da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.41 (s, 2H), 3.43 - 3.55 (m, 2H), 2.44 (t, J = 7.3 Hz, 4H), 2.31 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 1.91 - 2.02 (m, 2H), 1.82 - 1.91 (m, 2H), 1.57 - 1.68 (m, 6H), 0.90 (t, J = 7.5 Hz, 6H). LC-MS : m/z (M+H) = 423.6.

[0269] Sledeća jedinjenja su pripremljena na analogan način:

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(tetrahidrofuran-3-karboksamid) (48)

[0270]

[0271] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.58 (br. s., 2H), 3.87 - 3.98 (m, 2H), 3.65 - 3.83 (m, 6H), 3.47 -3.55 (m, 2H), 3.27 - 3.34 (m, 2H), 2.31 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.02 - 2.18 (m, 4H), 1.92 - 2.01 (m, 2H), 1.82 - 1.90 (m, 2H), 1.60 - 1.68 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 479.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(4,4,4-trifluorobutanamid) (47)

[0272]

[0273] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.61 (br. s., 2H), 3.45 - 3.55 (m, 2H), 2.73 - 2.82 (q, 4H), 2.56 - 2.72 (m, 4H), 2.32 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.92 - 2.01 (m, 2H), 1.81 - 1.90 (m, 2H), 1.57 - 1.70 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 531.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-ciklopropilacetamid) (49)

[0274]

[0275] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.39 (s, 2H), 3.44 - 3.55 (m, 2H), 2.28 - 2.41 (m, 6H), 1.92 - 2.02 (m, 2H), 1.82 - 1.92 (m, 2H), 1.60 - 1.70 (m, 2H), 0.99 - 1.11 (m, 2H), 0.46 - 0.54 (m, 4H), 0.17 - 0.25 (m, 4H). LC-MS : m/z (M+H) = 447.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(metiltio)acetamid) (60)

[0276]

[0277] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.58 (br. s., 2H), 3.47 - 3.54 (m, 2H), 3.41 (s, 4H), 2.33 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.16 (s, 6H), 1.85 - 1.99 (m, 4H), 1.61 - 1.67 (m, 2H). LC-MS: m/z (M+H)= 459.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(3-(metiltio)propanamid) (46)

[0278]

[0279] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.51 (br. s., 2H), 3.50 (m, 2H), 2.77 (br. s, 8H), 2.32 (m, 2H), 2.08 (s, 6H), 1.96 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 1.64 (m, 2H). LC-MS: m/z (M+H)= 487.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(tetrahidrofuran-2-il)acetamid) (77)

[0280]

[0281] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 11.96 (br. s., 2H), 4.35 (quin, J = 6.6 Hz, 2H), 3.93 - 4.00 (m, 2H), 3.80 - 3.86 (m, 2H), 3.55 - 3.62 (m, 2H), 2.85 (d, J = 6.2 Hz, 4H), 2.48 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.12 - 2.18 (m, 2H), 1.95 - 2.00 (m, 4H), 1.76 - 1.82 (m, 4H), 1.61 - 1.68 (m, 4H). LC-MS : m/z (M+H)= 507.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-oksopirolidin-l-il)acetamid) (85)

[0282]

[0283] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 4.48 (s, 4H), 3.53 - 3.61 (m, 6H), 2.49 (t, J = 7.9 Hz, 4H), 2.43 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.08 - 2.16 (m, 4H), 2.03 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.67 - 1.77 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 533.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))dibenzamid (39)

[0284]

[0285] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.98 (br. s., 2H), 8.12 (d, J = 7.3 Hz, 4H), 7.63 - 7.72 (m, 2H), 7.53 -7.61 (m, 4H), 3.57 (m, 2H), 2.37 - 2.45 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.89 (m, 2H), 1.70 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=491.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))diacetamid (41)

[0286]

[0287] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.44 (s, 2H), 3.48 (m, 2H), 2.27 - 2.35 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.18 (s, 6H), 1.95 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 1.59 - 1.67 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 367.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))dipropionamid (40)

[0288]

[0289] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.40 (s, 2H), 3.37 - 3.54 (m, 2H), 2.47 (q, J = 7.6 Hz, 4H), 2.31 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.91 - 2.06 (m, 2H), 1.75 - 1.91 (m, 2H), 1.52 - 1.75 (m, 2H), 1.09 (t, J = 7.5 Hz, 6H). LC-MS : m/z (M+H)= 395.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-metilpropanamid) (98)

[0290]

[0291] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.42 (s, 2H), 3.43 - 3.53 (m, 2H), 2.77 (septet, J = 6.7 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 1.91 - 2.02 (m, 2H), 1.80 - 1.91 (m, 2H), 1.57 - 1.68 (m, 2H), 1.12 (d, J = 7.6Hz, 12H). LC-MS: m/z (M+H) = 423.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))diciklopentankarboksamid (62)

[0292]

1H NMR (DMSO-d6) δ 3.48 (m, 2H), 2.95 (m, 2H), 2.31 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.04 - 1.85 (m, 8H), 1.76 - 1.60 (m, 8H), 1.57 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 475.2

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(3-hidroksi-2,2-dimetilpropanamid) (63)

[0293]

1H NMR (DMSO-d6) δ 3.82 (s, 4H), 3.57 (m, 2H), 2.46 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.05 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.73 (m, 2H), 1.29 (s, 12H). LC-MS : m/z (M+H)= 483.2.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-fluoro-3-metoksifenil)acetamid) (78)

[0294]

[0295] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 7.13 - 7.18 (m, 4H), 6.88 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.83 (s, 6H), 3.78 (s, 4H), 2.29 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.60 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 615.8

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(benzo[d][1,3]dioksol-5-il)acetamid) (86)

[0296]

[0297] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.98 (s, 2H), 6.89 - 6.94 (m, J = 7.8 Hz, 2H), 6.69 - 6.73 (m, J = 8.0 Hz, 2H), 5.89 (s, 4H), 3.93 (s, 4H), 3.56 - 3.64 (m, 2H), 2.49 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.02 -2.10 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.76 - 1.82 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 607.8

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-fluorofenil)acetamid) (88)

[0298]

[0299] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.70 (s, 2H), 7.36 (dd, J = 8.6, 5.6 Hz, 4H), 7.16 (t, J = 8.9 Hz, 4H), 3.81 (s, 4H), 3.43 - 3.51 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.89 - 1.97 (m, 2H), 1.85 (m, 2H), 1.57 - 1.64 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 555.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2,6-difluorofenil)acetamid) (86)

[0300]

[0301] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.83 (br. s., 2H), 7.42 (m, 2H), 7.12 (t, J = 7.9 Hz, 4H), 3.93 (s, 4H), 3.47 - 3.54 (m, 2H), 2.31 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.89 - 1.99 (m, 2H), 1.80 - 1.89 (m, 2H), 1.58 -1.67 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 591.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-metoksifenil)acetamid) (42)

[0302]

[0303] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.59 (s, 2H), 7.24 - 7.30 (m, 2H), 7.21 (dd, J = 7.5, 1.6 Hz, 2H), 6.98 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.88 - 6.93 (m, 2H), 3.78 (s, 4H), 3.74 (s, 6H), 3.49 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 1.91 - 1.99 (m, 2H), 1.79 - 1.87 (m, 2H), 1.59 - 1.65 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=579.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-chlorofenil)acetamid) (43)

[0304]

[0305] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.73 (s, 2H), 7.42 (s, 2H), 7.34 - 7.38 (m, 4H), 7.27 - 7.31 (m, 2H), 3.84 (s, 4H), 3.43 - 3.52 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.89 - 1.98 (m, 2H), 1.77 - 1.88 (m, 2H), 1.57 - 1.65 (m, 2H). LC-MS: m/z (M+H)=587.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-metoksifenil)acetamid) (44)

[0306]

[0307] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.69 (s, 2H), 7.24 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 2.1 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.84 (dd, J = 8.2, 2.1 Hz, 2H), 3.77 (s, 4H), 3.74 (s, 6H), 3.47 (dt, J = 11.2, 5.7 Hz, 2H), 2.29 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 1.88 - 1.98 (m, 2H), 1.76 - 1.86 (m, 2H), 1.54 -1.65 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=579.7

N,N’-(5,5’-(((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-metoksifenil)acetamid) (52)

[0308]

[0309] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ:12.67 (s, 2H), 7.24 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 6.89 (d, J = 8.5 Hz, 4H), 3.73 (s, 6H), 3.72 (s, 4H), 3.43 - 3.50 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.89 - 2.00 (m, 2H), 1.78 -1.87 (m, 2H), 1.55 - 1.66 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=579.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-hlorofenil)acetamid) (51)

[0310]

[0311] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.77 (s, 2H), 7.41 - 7.48 (m, 4H), 7.29 - 7.37 (m, 4H), 4.00 (s, 4H), 3.45 - 3.54 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.91 - 1.99 (m, 2H), 1.78 - 1.88 (m, 2H), 1.56 -1.68 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=587.6.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-hlorofenil)acetamid) (50)

[0312]

[0313] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.73 (s, 2H), 7.40 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 7.35 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 3.82 (s, 4H), 3.42 - 3.51 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.89 - 1.99 (m, 2H), 1.77 - 1.87 (m, 2H), 1.55 - 1.66 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=587.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil)) bis(2-(benzo[d][1,3]dioksol-4-il)acetamid) (218)

[0314]

[0315] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.78 - 6.84 (m, 6H), 5.99 (s, 4H), 3.98 (s, 4H), 3.55 - 3.61 (m, 2H), 2.45 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.74 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 607.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil)) bis(2-(3-(metilsulfonil)fenil)acetamid) (54)

[0316]

[0317] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 2H), 7.92 (s, 2H), 7.83 - 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.57 - 7.73 (m, 4H), 3.97 (s, 4H), 3.43 - 3.51 (m, 2H), 3.22 (s, 6H), 2.30 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.90 - 1.98 (m, 2H), 1.76 - 1.88 (m, 2H), 1.55 - 1.65 (m, 2H). LCMS : m/z (M+H)=675.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(metilsulfonil)fenil)acetamid) (66)

[0318]

[0319] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.80 (s, 1H), 7.90 (d, J = 8.3 Hz, 4H), 7.60 (d, J = 8.3 Hz, 4H), 3.96 (s, 4H), 3.46 (m, 2H), 3.20 (s, 6H), 2.30 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=675.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-metoksifenil)acetamid) (70)

[0320]

[0321] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ:12.59 (s, 2H), 7.27 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.21 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.98 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.85 - 6.94 (m, 2H), 3.78 (s, 4H), 3.74 (s, 6H), 3.49 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.90 - 1.98 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.63 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=579.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-metoksifenil)acetamid) (71)

[0322]

[0323] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.68 (s, 2H), 7.25 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 6.8-6.91 (m, 4H), 6.84 (d, J = 7.5 Hz, 3H), 3.77 (s, 4H), 3.75 (s, 6H), 2.29(t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.91 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=579.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-cijanofenil)acetamid) (72)

[0324]

[0325] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.86 (s, 2H), 7.85 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.70 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.46 - 7.54 (m, 2H), 4.11 (s, 4H), 3.44 - 3.53 (m, 2H), 2.32 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 1.89 - 2.01 (m, 2H), 1.78 - 1.88 (m, 2H), 1.58 - 1.67 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=569.7.

N,N’-(5,5’-(((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-cijanofenil)acetamid) (73)

[0326]

[0327] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.75 (s, 2H), 7.79 (s, 2H), 7.76 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.56 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.92 (s, 4H), 3.45 - 3.51 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.90 - 1.99 (m, 2H), 1.80 - 1.88 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=569.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-cijanofenil)acetamid) (74)

[0328]

[0329] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.77 (s, 2H), 7.81 (d, J = 8.3 Hz, 4H), 7.53 (d, J = 8.3 Hz, 4H), 3.94 (s, 4H), 3.46 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=569.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-(trifluorometoksi)fenil)acetamid) (75)

[0330]

[0331] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.77 (s, 2H), 7.50 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.41 - 7.47 (m, 2H), 7.27 -7.41 (m, 4H), 3.82 - 4.10 (s, 4H), 3.48 - 3.51 (m, 2H), 2.31 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.89 - 2.01 (m, 2H), 1.76 - 1.88 (m, 2H), 1.62 (m 2H). LC-MS : m/z (M+H)=687.7

N,N’-(5,5’((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(trifluorometoksi)fenil)acetamid) (219)

[0332]

[0333] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.40 - 7.44 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.38 (s, 2H), 7.32 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.09 - 7.12 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.08 (s, 4H), 3.61 (m, 2H), 2.51 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.07 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.78 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 687.9.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-o-tolilacetamid) (83)

[0334]

[0335] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.70 (s, 2H), 7.22 - 7.26 (m, 2H), 7.16 - 7.20 (m, 4H), 7.10 - 7.16 (m, 2H), 3.84 (s, 4H), 3.44 - 3.52 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.27 (s, 6H), 1.89 - 2.01 (m, 2H), 1.76 - 1.88 (m, 2H), 1.56 - 1.66 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=547.7 N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-(trifluorometil)fenil)acetamid) (82)

[0336]

[0337] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.75 (s, 2H), 7.72 (b.s., 2H), 7.55 - 7.67 (m, 6H), 3.95 (s, 4H), 3.45 -3.51 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.88 - 2.04 (m, 2H), 1.74 - 1.88 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=655.8.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(dimetilamino)fenil)acetamid) (35)

[0338]

[0339] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.66 (s, 2H), 7.12 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 6.71 (s, 2H), 6.57 - 6.65 (m, 4H), 3.70 (s, 4H), 3.43 - 3.50 (m, 2H), 2.88 (s, 12H), 2.30 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 1.88 - 1.97 (m, 2H), 1.77 - 1.88 (m, 2H), 1.56 - 1.63 (m, 2H). LC-MS: m/z (M+H) = 605.8.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-fluorofenil)acetamid) (87)

[0340]

[0341] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.75 (s, 2H), 7.32 - 7.42 (m, 4H), 7.15 - 7.22 (m, 4H), 3.90 (s, 4H), 3.44 - 3.54 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 1.89 - 1.98 (m, 2H), 1.80 - 1.89 (m, 2H), 1.59 -1.67 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 555.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-izopropoksifenil)acetamid) (92)

[0342]

[0343] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 10.35 (br. s., 2H), 7.26 - 7.28 (m, 4H), 7.22 - 7.28 (m, 4H), 6.91 - 6.94 (m, 4H), 4.73 (septet, J = 6.0 Hz, 2H), 3.85 (s, 4H), 3.49 - 3.56 (m, 2H), 2.44 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 1.92 - 2.03 (m, 4H), 1.72 - 1.76 (m, 2H), 1.43 (d, J = 5.9 Hz, 12H). LC-MS : m/z (M+H)= 635.8

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-izopropoksifenil)acetamid) (91)

[0344]

[0345] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.15 - 7.21 (m, 2H), 7.01 - 7.04 (m, 4H), 6.74 - 6.78 (m, 2H), 4.45 - 4.53 (m, 2H), 3.99 (s, 4H), 3.57 - 3.63 (m, 2H), 2.52 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.08 (m, 2H), 2.00 - 2.05 (m, 2H), 1.81 (m, 2H), 1.28 (d, J = 6.2 Hz, 12H). LC-MS : m/z (M+H)= 635.9

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-bromofenil)acetamid) (220)

[0346]

[0347] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.66 (s, 2H), 7.40 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.34 - 7.37 (m, 2H), 7.13 - 7.17 (m, 2H), 3.98 (s, 4H), 3.62 (m, 2H), 2.54 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.08 (m, 2H), 2.00 -2.05 (m, 2H), 1.80 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 674.9

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-mtolilacetamid) (111)

[0348]

[0349] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.72 (s, 2H), 7.23 - 7.25 (m, 2H), 7.14 - 7.17 (m, 6H), 3.84 (s, 4H), 3.45 - 3.50 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.26 (s, 6H), 1.88 - 1.96 (m, 2H), 1.81 - 1.88 (m, 2H), 1.58 - 1.64 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 547.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3)4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2,3-dimetoksifenil)acetamid) (112)

[0350]

[0351] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.00 - 7.05 (m, 2H), 6.88 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 3.99 (s, 4H), 3.86 (s, 12H), 3.48 - 3.55 (m, 2H), 2.41 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 1.87 - 2.01 (m, 4H), 1.68 - 1.76 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 639.8

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-metoksipiridin-3-il)acetamid) (221)

[0352]

[0353] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 8.21 (s, 2H), 7.70 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 2H), 6.70 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 3.97 (s, 4H), 3.88 (s, 6H), 3.56 - 3.62 (m, 2H), 2.50 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.78 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 581.8

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(tiofen-2-il)acetamid) (59)

[0354]

[0355] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.74 (br. s., 2H), 7.43 (d., 2H), 7.01 (br. s., 4H), 4.05 (s, 4H), 3.49 (m, 2H), 2.31 (br. s., 2H), 1.94 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 531.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(tiazol-4-il)acetamid) (222)

[0356]

[0357] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.88 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 7.37 - 7.42 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 4.22 (s, 4H), 3.55 - 3.61 (m, 2H), 2.47 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.03 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 1.93 - 1.98 (m, 2H), 1.71 - 1.77 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 533.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-metilizoksazol-5-il)acetamid) (30)

[0358]

[0359] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.24 (s, 2H), 4.26 (s, 4H), 3.60 (s, 2H), 2.49 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.28 (s, 6H), 2.07 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.78 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 529.7.

Korak A: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-nitrofenil)acetamid) (57)

[0360]

[0361] Postupak je bio analogan postupku za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 2H), 8.11 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.73 - 7.78 (m, 2H), 7.58 -7.63 (m, 4H), 4.27 (s, 4H), 3.44 - 3.53 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 1.88 - 1.98 (m, 2H), 1.76 - 1.88 (m, 2H), 1.55 - 1.67 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=609.7

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-aminofenil)acetamid) (56)

[0362]

[0363] Rastvor N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-nitrofenil)acetamida) (30 mg, 0.05 mmol) i Pd/C (3 mg) u metanolu je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 časa. Smeša je filtrirana i isparavana pod vakuumom do sušenja. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (DMSO-d6) δ:12.58 (s, 2H), 7.01 - 7.07 (m, 2H), 6.94 - 7.00 (m, 2H), 6.66 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 6.50 - 6.57 (m, 2H), 5.03 (b, 4H), 3.65 (s, 4H), 3.45 - 3.50 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 1.90 - 2.00 (m, 2H), 1.79 - 1.88 (m, 2H), 1.57 - 1.64 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=549.7

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-acetamidofenil)acetamid) (55)

[0364]

[0365] Rastvor sirćetne kiseline (11.5 mg, 0.19 mmol), HATU (72.6 mg, 0.19 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (26.5 mg, 0.20 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 15 min, zatim, dodat je N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-aminofenil)acetamid) (35 mg, 0.06 mmol) i nastavljeno je mešanje preko noći. Smeša je sipana u vodu (10 ml), talog je filtriran da bni se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.61 (s, 2H), 9.45 (s, 2H), 7.38 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.23 - 7.32 (m, 4H), 7.11 - 7.20 (m, 2H), 3.83 (s, 4H), 3.47 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.03 (s, 6H), 1.94 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=633.7

Korak A: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-nitrofenil)acetamid) (69)

[0366]

[0367] Postupak je bio analogan postupku za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 2H), 8.25 (s, 2H), 8.16 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.79 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.65 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 4.02 (s, 4H), 3.48 (m, 2H), 2.30 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 1.89 -2.00 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=609.7

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-aminofenil)acetamid) (53)

[0368]

[0369] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 56

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.64 (s, 2H), 6.95 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.51 (s, 2H), 6.40 - 6.47 (m, 4H), 5.07 (s, 4H), 3.61 (s, 4H), 3.48 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.75 -1.88 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=549.7

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-acetamidofenil)acetamid) (65)

[0370]

[0371] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 55

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.73 (s, 2H), 9.94 (s, 2H), 7.54 (s, 2H), 7.50 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.24 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.94 - 7.03 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 3.76 (s, 4H), 3.43 - 3.52 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.03 (s, 6H), 1.90 - 1.98 (m, 2H), 1.77 - 1.89 (m, 2H), 1.57 - 1.65 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=633.8

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-nitrofenil)acetamid) (64)

[0372]

[0373] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.81 (s, 2H), 8.20 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 7.61 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 4.01 (s, 4H), 3.40 - 3.55 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.89 - 1.99 (m, 2H), 1.77 - 1.88 (m, 2H), 1.55 - 1.66 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=609.7.

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-acetamidofenil)acetamid) (106)

[0374]

[0375] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 55

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.67 (s, 2H), 9.93 (s, 2H), 7.52 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 7.23 (d, J = 8.3 Hz, 4H), 3.74 (s, 4H), 3.44 - 3.49 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.03 (s, 6H), 1.90 - 1.97 (m, 2H), 1.76 - 1.86 (m, 2H), 1.51 - 1.65 (m, 2H). LCMS : m/z (M+H)=633.8.

Korak A: (2E,2’E)-N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(3-(piridin-2-il)akrilamid) (45)

[0376]

[0377] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.88 (s, 2H), 8.69 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 7.90 (td, J = 7.8, 1.8 Hz, 2H),7.79 (d, J = 15.4 Hz, 2H), 7.70 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.44 (dd, J = 7.1, 5.2 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 15.4 Hz, 2H), 3.52 - 3.59 (m, 2H), 2.37 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.96 - 2.05 (m, 2H), 1.88 - 1.96 (m, 2H), 1.64 - 1.71 (m, 2H); LC-MS: m/z (M+H)= 545.7.

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(3-(piridin-2-il)propanamid) (80)

[0378]

[0379] Rastvor od 50 mg jedinjenja 45 je rastvoren u 2 mL MeOH. Dodato je 5 mg Pd/C i suspenzija je degazirana i hidrogenizovana u trajanju od 30 min. Zatim je filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 80.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.59 (d, J = 4.6 Hz, 2H), 7.64 (td, J = 7.7, 1.4 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 7.7Hz 2H), 7.18 (dd, J = 7.3, 5.1 Hz, 2H), 3.55 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.27 - 3.32 (m, 4H), 3.11 - 3.17 (m, 4H), 2.43 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.94 - 2.03 (m, 4H), 1.74 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 549.7.

[0380] Jedinjenja 291, 292, 295, 370, 371, 380 i 352 su pripremljena na način analogan jedinjenju 37:

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-metoksifenil)acetamid) (291)

[0381]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 7.14 - 7.32 (m, 4H), 6.85 - 7.03 (m, 4H), 3.54 - 3.83 (m, 12H), 2.39 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.32 (m, 2H), 1.99 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 565.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(dimetilamino)fenil)acetamid) (292)

[0382]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.66 (br. s., 2H), 7.11 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.70 (s, 2H), 6.61 (t, J = 6.0 Hz, 4H), 3.72 - 3.82 (m, 6H), 2.88 (s, 12H), 2.38 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.29 (m, 2H), 1.93 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 591.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-metoksipiridin-3-il)acetamid) (295)

[0383]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.71 (s, 2H), 8.09 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 7.65 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 2H), 6.80 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.83 (s, 6H), 3.77 (s, 4H), 3.74 (m, 2H), 2.38 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.24 - 2.34 (m, 2H), 1.89 - 2.02 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=567.8

(2R,2’R)-N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-hidroksi-2-fenilacetamid) (370)

[0384]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.51 (d, J = 6.2 Hz, 4H), 7.19 - 7.34 (m, 6H), 5.55 (s, 2H), 3.51 (s, 2H), 2.32 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.95 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 1.63 (m, 2H) ; LC-MS : m/z (M+H)= 551.2

(2S,2’S)-N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-hidroksi-2-fenilacetamid) (371)

[0385]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ : 7.50 (d, J = 5.6 Hz, 4H), 7.24 - 7.33 (m, 6H), 5.55 (s, 2H), 3.53 (m, 2H), 2.36 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.95 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.65 (m, 2H); LC-MS : m/z (M+H)= 551.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(3-hidroksi-2-fenilpropanamid) (380)

[0386]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.39 (m, 4H), 7.20 (m, 6H), 4.39 (m, 2H), 4.31 (m, 2H), 3.91 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 2.50 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.08 (m, 2H), 1.96 (m, 2H), 1.78 (m, 2H) ; LC-MS : m/z (M+H)= 579.2

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-cijanofenil)acetamid) (352)

[0387]

1H NMR (DMSO-d6) δ:12.76 (s, 2H), 7.79 (s, 2H), 7.76 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.65 - 7.69 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.56 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.92 (s, 4H), 3.40 - 3.55 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.89 - 2.01 (m, 2H), 1.73 - 1.89 (m, 2H), 1.50 - 1.67 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=569.5

Korak A: metil 2-(6-metoksipiridin-2-il)acetat

[0388]

[0389] U rastvor LDA (18.3 mL, 36.5 mmol) u THF (120 mL) ohlađen do -78°C ukapavanjem je dodat 2-metoksi-6-metilpiridin (1.5 g, 12.2 mmol) u THF (15 mL), i zatim je smeša mešana na -78 stepeni u trajanju od 2 časa. Dimetil karbonat (1.2 mL, 14.6 mmol) je brzo dodat i mešanje je nastavljeno na -78°C u trajanju od 15 min. Reakcija je ugašena sa H2O na -78°C. Rastvor je ekstrahovan sa etil acetatom, sušen preko natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen sa standardnim postupkom da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.55 (dd, J = 8.3, 7.3 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.77 (s, 2H), 3.74 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H) = 182.6.

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-metoksipiridin-2-il)acetamid) (84)

[0390]

[0391] Smeša metil 2-(6-metoksipiridin-2-il)acetata (128.7 mg, 0.71 mmol), 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (50 mg, 0.18 mmol), cezijum karbonata (346.1 mg, 1.06 mmol) u DMF (3 mL) zagrevana je do 130°C pod atmosferom azota i mikrotalasima u trajanju od 45 min. Smeša je isparavana pod vakuumom do sušenja. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.70 (s, 2H), 7.60 - 7.76 (m, 2H), 6.98 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.72 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 3.92 (s, 4H), 3.79 (s, 6H), 3.49 (m, J = 6.2 Hz, 2H), 2.32 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.85 (m, 2H), 1.63 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 581.7.

[0392] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 84

Korak A: metil 2-(6-bromopiridin-2-il)acetat

[0393]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.55 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.86 (s, 2H), 3.75 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H) = 230.2

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-bromopiridin-2-il)acetamid) (118)

[0394]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 7.71 - 7.82 (m, 2H), 7.58 (s, 2H), 7.47 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 4.03 (s, 4H), 3.50 (m, 2H), 2.32 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.84 - 1.99 (m, 4H), 1.63 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 677.6.

Jedinjenje 223

[0395]

[0396] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 84

Korak A: Metil 2-(4-metoksipiridin-2-il)acetat

[0397]

1H NMR (HCLOROFORM-d) δ 8.38 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.73 (dd, J = 6.0 Hz, 2.4 Hz, 1H), 3.85 (s, 3 H), 3.81 (s, 2H), 3.73 (s, 3H). LC-MS : m/z 182.3 (M+H)

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil)) bis(2-(4-metoksipiridin-2-il)acetamid) (223)

[0398]

1H NMR (METANOL-d4) δ 8.50 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.83 (s, 2H), 6.81 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.99 (s, 4H), 3.88 (s, 6H), 3.57 (m, 2H), 2.47 (t, J = 5.6 Hz,, 2H), 2.03 - 1.96 (m, 4H), 1.77 (t, J = 5.6 Hz, 2H). LC-MS : m/z 581.9 (M+H)

Jedinjenje 224

[0399]

[0400] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 84

Korak B: 2-(2-metoksipiridin-4-il)-N-[5-[(1S,3S)-3-[5-[[2-(2-metoksipiridin-4-il)acetil]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]cikloheksil]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid (224)

[0401]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.11 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 4.6 Hz, 2H), 6.91 (s, 2H), 4.01 (s, 4H), 3.89 (s, 6H), 3.58 - 3.67 (m, 2H), 2.52 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.08 (m, 2H), 1.99 - 2.04 (m, 2H), 1.76 - 1.84 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=581.4

N,N’-(5,5’-trans-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-metoksipiridin-2-il)acetamid) (116)

[0402]

[0403] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (METANOL-d4) δ: 8.08 (dd, J = 4.8, 1.1 Hz, 2H), 7.46 (dd, J = 8.3, 1.1 Hz, 2H), 7.36 (dd, J = 8.6, 4.8 Hz, 2H), 3.94 (s, 4H), 3.49 - 3.60 (m, 2H), 2.43 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.01 - 2.11 (m, 2H), 1.89 - 1.98 (m, 2H), 1.67 - 1.80 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 581.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-metoksipiridin-2-il)acetamid) (225)

[0404]

[0405] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.27 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 7.24 - 7.40 (d, J=8.6Hz, 2H), 7.17 (dd, J = 8.6, 3.0 Hz, 2H), 4.09 (s, 4H), 3.83 (s, 6H), 3.55 (m, 2H), 2.48 (t, J=5.6Hz, 2H), 1.85 - 2.09 (m, 4H), 1.62 - 1.78 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 581.7

Jedinjenje 226

[0406]

[0407] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 84

Korak A: metil 2-(5-etoksipiridin-2-il)acetat

[0408]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.24 (m, 1H), 7.09 - 7.27 (m, 2H), 4.07 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 1.44 (t, J = 7.0 Hz, 4H). LC-MS : m/z (M+H)= 196.3

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-etoksipiridin-2-il)acetamid) (226)

[0409]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.28 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 7.23 - 7.33 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 7.09 -7.22 (dd, J = 2.7 Hz, 5.1Hz,2H), 3.96 - 4.19 (m, 8H), 3.51 - 3.61 (m, 2H), 2.45 (t, J = 5.4 Hz .2H), 1.90-2.07 (m, 4H), 1.74 (m, 2H), 1.33 - 1.49 (t, J=7.0Hz, 6H). LC-MS : m/z (M+H)=609.2

Jedinjenje 227

[0410]

Korak A: metil 2-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)piridin-2-il)acetat

[0411]

[0412] Postupak je bio isti kao za korak A jedinjenja 84

Korak B: metil 2-(5-hidroksipiridin-2-il)acetat

[0413]

[0414] U mešani rastvor metil 2-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)piridin-2-il)acetata (1g, 3.5mmol) u THF dodat je TBAF (1M, 3.5ml) na sobnoj temperaturi. Cela smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Isparavana je i ekstrahovana sa EtOAc, organski sloj je ispran vodom, isparavan i prečišćen pomoću standardnog postupka.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.18 (s, 1H), 7.23 - 7.32 (m, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.70 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H)=168.2

Korak C: metil 2-(5-(2-metoksietoksi)piridin-2-il)acetat

[0415]

[0416] U mešani rastvor metil 2-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)piridin-2-il)acetata (500mg, 3mmol) u MeCN dodat je Cs2CO3(1.4g, 4.5mmol), a zatim 1-bromo-2-metoksietan (621mg, 4.5mmol) na sobnoj temperaturi. Cela smeša je zagrevana do 80° preko noći. LC-MS je pokazala željeni proizvod. On je filtriran, isparavan i prečišćen pomoću standradnog postupka.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.28 (s, 1H), 7.22 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 4.16 (dd, J = 5.5, 3.9 Hz, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.74 - 3.78 (dd, J = 5.5, 3.9 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.46 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H)=226.2

Korak D: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-(2-metoksietoksi)piridin-2-il)acetamid) (227)

[0417]

[0418] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.40 (d, J = 2.4 Hz,2H), 7.21 - 7.25 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 4.17 - 4.23 (t, J=4.0Hz, 4H), 3.97 (s., 4H), 3.76 - 3.83 (t, J=4.0Hz, 4H), 3.54(m,2H), 3.48 (s, 6H), 2.48 (t, J=5.6Hz ,2H), 1.95 - 2.09 (m, 4H), 1.77 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 669.2

Jedinjenje 228

[0419]

Korak A: metil 2-(5-(difluorometoksi)piridin-2-il)acetat

[0420]

[0421] U mešani rastvor jedinjenja 7 (500mg, 3mmol) u MeCN dodat je Cs2CO3(1.4g, 4.5mmol), a zatim natrijum 2-hloro-2,2-difluoroacetat (685mg, 4.5mmol) na sobnoj temperaturi. Cela smeša je zagrevana do 80° preko noći. LC-MS je pokazala željeni proizvod. On je filtriran, isparavan i prečišćen pomoću standardnog postupka.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.44 (s, 1H), 7.48 (dd, J = 8.6, 2.7 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.55 (t, 1H,J=76Hz), 3.88 (s, 2H), 3.74 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H)=218.2

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-(difluorometoksi)piridin-2-il)acetamid) (228)

[0422]

[0423] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (METANOL-d4) δ: 8.46 (d, J = 2.4 Hz,2H), 7.65 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.83 (t, J=72Hz,2H), 3.86 (s, 4H), 3.50 (m, 2H), 2.40 (t, J=5.6Hz ,2H), 1.97 (m, 4H), 1.71 (tm, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 653.1

Jedinjenje 229

[0424]

Korak A: metil 2-(6-cijanopiridin-2-il) acetat.

[0425]

[0426] U rastvor 6-metilpikolinonitrila (2 g, 16.9 mmol) u THF (20 ml) lagano je dodat LiHMDS (17 ml, 1M u THF) na -78°C pod N2. Zatim je reakciona smeša mešana u trajanju od 1 časa na -78°C i zatim je dodat dimetil karbonat (1.52 g, 16.9 mmol) na -78°C. Smeša je mešana u trajanju od 30 min na -78°C i ostavljena da dostigne 0°C za 30 min. Zasićeni amonijum hlorid je dodat za neutralizaciju da bi se podesila pH do PH=7-8, smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (100 ml*3), organski sloj je sušen natrijum sulfatom, filtriran, koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (HLOROFORM-d): 7.84 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.93 (s, 2H), 3.76 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H)=177.3

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-cijanopiridin-2-il)acetamid) (229)

[0427]

[0428] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.84 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.71 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 4.35 (s, 4H), 3.55 - 3.63 (m, 2H), 2.45 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.93 -2.01 (m, 2H), 1.74 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 571.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(pirimidin-4-il)acetamid) (230)

[0429]

[0430] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 84

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 9.11 - 9.24 (s, 2H), 8.72 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 7.42 - 7.59 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 4.24 (s, 4H), 3.59 (m, 2H), 2.45 (t, J = 5.6 Hz .2H), 1.89 - 2.13 (m, 4H), 1.74 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=523.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil)) bis(2-(piridazin-3-il)acetamid) (231)

[0431]

[0432] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (DMSO-d6) δ: 9.16 (dd, J = 4.8, 1.9 Hz, 2H), 7.72 - 7.75 (dd, J = 4.8, 1.9 Hz, 2H), 7.67 - 7.71 (dd, J = 4.8, 1.9 Hz, 2H), 4.25 (s, 4H), 3.43 - 3.61 (m, 2H), 2.31 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.49 - 1.70 (m, 2H). LCMS : m/z (M+H)=523.7

N,N’-(5,5’-(trans)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(pirazin-2-il)acetamid) (76)

[0433]

[0434] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 8.73 (s, 2H), 8.57 (d, J= 17.2 Hz, 4H), 4.26 (s, 4H), 3.60-3.57 (m, 2H), 2.46 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.96 (m, 2H), 1.75-1.73 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 523.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis (2-(tiazol-2-il)acetamid) (100)

[0435]

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ: 7.76 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 3.53 (s, 4H), 3.40 (m, 2H), 2.42 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.72 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 533.6

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-aminopiridin-2-il)acetamid) (232)

[0436]

[0437] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.70 (s, 2H), 7.25 - 7.38 (dd, J = 7.3,8.3 Hz 2H), 6.47 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.33 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 5.88 (s, 4H), 3.72 (s, 4H), 3.45 - 3.52 (m, 2H),2.25 - 2.34 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.89 - 2.00 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=551.7

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-aminopiridin-2-il)acetamid) (233)

[0438]

[0439] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.61 (s, 2H), 7.84 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.89 (dd, J = 8.3, 2.7 Hz, 2H), 5.23 (s, 4H), 3.78 (s, 4H), 3.48 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.85 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=551.8

N,N’-(5,5’-(trans-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-cijanopiridin-2-il)acetamid) (113)

[0440]

[0441] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.90 (br. s., 2H), 8.78 (dd, J = 5.0, 1.7 Hz, 2H), 8.35 (dd, J = 7.9, 1.7 Hz, 2H), 7.56 (dd, J = 7.9, 5.0 Hz, 2H), 4.19 (s, 4H), 3.50 (dt, J = 11.1, 5.6 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.89 - 2.03 (m, 2H), 1.77 - 1.89 (m, 2H), 1.54 - 1.66 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 571.7

Jedinjenje 234

[0442]

Korak A: 6-(2-metoksi-2-oksoetil)nikotinska kiselina

[0443]

[0444] Postupak je isti kao korak A za jedinjenje 84

LC-MS : m/z (M-H)=194.1

Korak B: metil 2-(5-(dimetilkarbamoil)piridin-2-il)acetat

[0445]

[0446] Rastvor 6-(2-metoksi-2-oksoetil)nikotinske kiseline (37 mg, 0.19 mmol), HATU (72.6 mg, 0.19 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (26.5 mg, 0.20 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) je mešan na sobnoj temperaturi trajanju od 15 min, zatim je dodat dimetil amin (0.05 mL, 1 mol rastvor u THF) i mešanje je nastavljeno preko noći. Reakcija je ugašena vodom, ekstrahovana sa EtOAc i prečišćena pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.65 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 7.9, 2.3 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.92 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.15 (s, 3H), 3.04 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H)=223.1.

Korak C: 6-[[5-[3-[5-[[2-[5-(dimetilkarbamoil)piridin-2-il]acetil]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]cikloheksil]-1,3,4-tiadiazol-2-il]karbamoilmetil]-N,N-dimetil-piridin-3-karboksamid (234)

[0447]

[0448] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.75 (s, 2H), 7.88 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 4.20 (s, 4H), 3.55 - 3.62 (m, 2H), 3.16 (s, 6H), 3.06 (s, 6H), 2.47 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.01 - 2.07 (m, 2H), 1.92 - 1.99 (m, 2H), 1.72 - 1.79 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=663.3.

Jedinjenje 105

[0449]

Korak A: etil 2-(6-(dimetilamino)piridin-2-il)acetat

[0450]

[0451] U rastvor etil 2-(6-aminopiridin-2-il)acetata (150 mg, 0.83 mmol) i paraformaldehida (54.8 mg, 1.83 mmol) u metanolu (6 mL) dodat je NaBH3CN (130.3 mg, 2.08 mmol) i AcOH (1 kap, kat.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 12 časova. Zatim, reakcija je ugašena vodenim rastvorom amonijum hlorida i ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod (100 mg).

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.41 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.20 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.70 (s, 2H), 3.08 (s, 6H), 1.24 - 1.32 (t, J = 7.3 Hz, 3H). LC-MS : m/z (M+H)=208.6

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(dimetilamino)piridin-2-il)acetamid)

[0452]

[0453] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.67 (s, 2H), 7.46 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 6.52 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.55 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 3.81 (s, 4H), 3.49 (m, 2H), 2.98 (s, 12H), 2.32 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.78 - 1.89 (m, 2H), 1.63 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=607.8

Jedinjenje 115

[0454]

Korak A: metil 2-(3-aminopiridin-2-il)acetat

[0455]

[0456] Metil 2-(3-nitropiridin-2-il)acetat (1g, 5mmol) je rastvoren u MeOH i mešan pod atmosferom H2na sobnoj temperaturi preko noći. LC-MS je našla željeni proizvod. On je filtriran kroz čep od celita i isparavan da bi se dobio željeni proizvod. On je korišćen direktno za sledeći korak. LC-MS: m/z (M+H)= 167.1

Korak B: metil 2-(3-(dimetilamino)piridin-2-il)acetat

[0457]

[0458] U rastvor metil 2-(5-aminopiridin-2-il)acetata (600 mg, 3.6 mmol) i paraformaldehida (578.3 mg, 19.3 mmol) u metanolu (20 mL) dodat je NaBH3CN (1.2 g, 19.3 mmol) i AcOH (1 kap, kat.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 12 časova. Zatim, reakcija je ugašena vodenim rastvorom amonijum hlorida i ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod. LC-MS: m/z (M+H)= 195.1

Korak C: N,N’-(5,5’-(trans-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(dimetilamino)piridin-2-il)acetamid) (115)

[0459]

[0460] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (METANOL-d4) δ: 8.24 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 7.72 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.37 (dd, J = 8.1, 4.8 Hz, 2H), 4.61 (s, 4H), 3.57 (m, 2H), 2.71 (s, 12H), 2.45-2.52(t, J=5.4Hz, 2H), 1.93 -2.15 (m, 4H), 1.69 - 1.83 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 607.8

Jedinjenje 235 i jedinjenje 236

[0461]

[0462] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 105

Korak A: U rastvor metil 2-(3-aminofenil)acetata (150 mg, 0.83 mmol) i acetaldehida (80.5 mg, 1.83 mmol) u metanolu (6 mL) dodat je NaBH3CN (130.3 mg, 2.08 mmol) i AcOH (1 kap, kat.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 12 časova. Zatim, reakcija je ugašena vodenim rastvorom amonijum hlorida i ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio metil 2-(3-(dietilamino)fenil)acetat i metil 2-(3-(etilamino)fenil)acetat.

metil 2-(3-(dietilamino)fenil)acetat

[0463]

LC-MS : m/z (M+H)=222.4

metil 2-(3-(etilamino)fenil)acetat

[0464]

LC-MS : m/z (M+H)=194.4

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(dietilamino)fenil)acetamid) (235)

[0465]

[0466] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 105.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.60 (s, 2H), 7.07 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 6.65 (s, 2H), 6.46 - 6.57 (m, 4H), 3.65 (s, 4H), 3.47 (m, 2H), 3.31 (q, J = 7.0 Hz, 8H), 2.28 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.87 - 1.99 (m, 2H), 1.71 - 1.87 (m, 2H), 1.52 - 1.66 (m, 2H), 1.07 (t, J = 7.0 Hz, 12H). LC-MS : m/z (M+H)=661.9

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(etilamino)fenil)acetamid) (236)

[0467]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.65 (s, 2H), 7.01 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.51 (s, 2H), 6.43 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.47 (dd, J = 7.5, 8.1 Hz,2H), 5.55 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.64 (s, 4H), 3.41 - 3.52 (m, 2H), 2.94 - 3.07 (m, 4H), 2.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.92 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 1.80 - 1.89 (m, 2H), 1.61 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.14 (t, J = 7.1 Hz, 6H). LC-MS : m/z (M+H)=605.9

Jedinjenje 237

[0468]

[0469] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 105

Korak A: etil 2-(4-(dietilamino)fenil)acetat

[0470]

[0471] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 105.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.15 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.66 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 4.16 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.36 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 1.24 - 1.31 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 6H). LC-MS : m/z (M+H)=236.5

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(dietilamino)fenil)acetamid) (237)

[0472]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.60 (s, 2H), 7.10 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 6.54 - 6.65 (d, J = 8.5 Hz, 4H), 3.60 (s, 4H), 3.46 (m, 2H), 3.29 (q, J = 6.9 Hz, 8H), 2.28 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.87 - 1.98 (m, 2H), 1.77 - 1.87 (m, 2H), 1.55 - 1.64 (m, 2H), 1.02 - 1.08 (t, J = 7.0 Hz, 12H). LC-MS : m/z (M+H)=661.9

Jedinjenje 104

[0473]

Korak A: etil 2-(6-acetamidopiridin-2-il)acetat

[0474]

[0475] U rastvor etil 2-(6-aminopiridin-2-il)acetata (50 mg, 0.28 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (71.0 mg, 0.55 mmol) u DCM ukapavanjem je dodat acetil hlorid (43.2 mg, 0.55 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je nastavljena da se meša u trajanju od 1 časa, isprana fiziološkim rastvorom i isparavana pod vakuumom do sušenja. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje. LC-MS : m/z (M+H)=222.4

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-acetamidopiridin-2-il)acetamid) (104)

[0476]

[0477] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.71 (s, 2H), 10.42 (s, 2H), 7.97 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.74 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 3.94 (s, 4H), 3.49 (m, 2H), 2.31 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 2.07 (s, 6H), 1.94 (m, 2H), 1.85 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LCMS : m/z (M+H)=635.8

Jedinjenje 384

[0478]

Korak A: metil 2-(3-vinilfenil)acetat

[0479]

[0480] U rastvor metil 2-(3-bromofenil)acetata (3g, 13mmol) u dioksanu (40 ml) dodati su tributil(vinil)stanan (4.5g, 14.3mmol) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (300mg, 0.02 ekv.), CsF(2g, 2.0 ekv.) pod atmosferom azota i smeša je zagrevana 2 časa na 100°C. Posle hlađenja do temperature sredine, organski sloj je isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je apsorbovan u etil acetatu, zatim ispran sa 10 procentnim vodenim rastvorom kalijum karbonata i fiziološkim rastvorom i sušen preko natrijum sulfata. Posle koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.30 - 7.38 (m, 3H), 7.20 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.66 - 6.78 (m, 1H), 5.74 - 5.82 (m, 1H), 5.23 - 5.32 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.65 (s, 2H).

Korak B: metil 2-(3-(hidroksimetil)fenil)acetat

[0481]

[0482] U rastvor metil 2-(3-vinilfenil)acetata (1.8g, 10mmol) u CH2Cl2barbotiran je O3u trajanju od 20 min na -78C. Me2S je dodat u posudu, smeša je lagano zagrevana do sobne temperature. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je korišćen za sledeći korak bez dodatnog prečišćavanja.

[0483] U rastvor metil 2-(3-formilfenil)acetata u MeOH dodat je natrijum tetrahidroborat u porciji, i smeša je mešana 1 čas na sobnoj temperaturi. Smeša je sipana u vodeni rastvor NH4Cl, i ekstrahovana sa etil acetatom, kombinovana organska faza je sušena na anhidrovanom Na2SO4. Posle isparavanja, ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.30 - 7.37 (m, 3H), 7.23 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.66 (s, 2H)

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(hidroksimetil)fenil)acetamid)

[0484]

[0485] Rastvor 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (73mg, 0.26mmol), metil 2-(3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil)acetata (140mg, 0.78 mmol) i t-BuOK(87 mg, 0.78 mmol) u DMSO (5 ml) je zagrevan do 100ºC u trajanju od 40 min pod mikrotalasima. Zatim je reakciona smeša hlađena do sobne temperature i sipana u vodu. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (3X10 ml), kombinovani organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen natrijum sulfatom, filtriran, koncentrovan da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (DMSO-d6) h: 12.73 (s, 2H), 7.24 - 7.35 (m, 4H), 7.14 - 7.24 (m, 4H), 5.21 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 4H), 3.79 (s, 4H), 3.43 - 3.51 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.88 - 1.97 (m, 2H), 1.79 - 1.88 (m, 2H), 1.54 - 1.66 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 579.5.

Jedinjenje 385

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(N-metilacetamido)piridin-2-il)acetamid)

[0486]

[0487] Postupak je isti kao za jedinjenje 104

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.52 (m, 2H), 7.58 (m, 2H), 7.53 (m, 2H), 4.62 (s, 2H), 4.22 (s, 4H), 3.53 - 3.63 (m, 2H), 3.28 (s, 6H), 2.46 (t, J = 4.3 Hz, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.82 - 2.00 (m, 8H), 1.65 - 1.78 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=663.4

Jedinjenje 238

[0488]

Korak A: etil 2-(4-(metilsulfonamido)fenil)acetat

[0489]

[0490] U rastvor etil 2-(4-aminofenil)acetata (500 mg, 2.79 mmol) i trietilamina (0.58 mL, 4.18 mmol) u dihlorometanu (30 mL) ukapavanjem je dodat metansulfonil hlorid (0.24 mL, 3.07 mmol) na sobnoj temperaturi i mešana preko noći. Smeša je isprana fiziološkim rastvorom, sušena preko natrijum sulfata i isparavana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje. LC-MS : m/z (M+H) = 258.3

Korak B: 2-(4-(metilsulfonamido)fenil)sirćetna kiselina

[0491]

[0492] Rastvor etil 2-(4-(metilsulfonamido)fenil)acetata (200 mg, 0.77 mmol) i litijum hidroksid hidrata (130.4 mg, 3.11 mmol) u MeOH/H2O (10 mL, 1:1) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 12 časova. Reakciona smeša je isparavana pod sniženim pritiskom. Ostatak je korišćen za sledeći korak bez prečišćavanja. LC-MS : m/z (M+H) = 230.4

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(metilsulfonamido)fenil)acetamid) (238)

[0493]

[0494] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.70 (br. s., 2H), 9.71 (br. s., 2H), 7.29 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 7.17 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 3.76 (s, 4H), 3.43 - 3.52 (m, 2H), 2.94 - 3.00 (m, 6H), 2.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.78 - 1.98 (m, 4H), 1.56 - 1.67 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 705.7

Jedinjenje 239

[0495]

Korak A: etil 2-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)fenil)acetat

[0496]

[0497] Rastvor di-terc-butil dikarbonata (387 mg, 1.77 mmol) u toluenu (5 ml) je dodat u posudu koja sadrži etil 2-(4-aminofenil)acetat (288 mg, 1.61mmol), reakciona smeša je zagrevana na 85°C u trajanju od 4 časa. LCMS je pokazala da je detektovan željeni proizvod, smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod. LC-MS : m/z (M+H)=280.3

Korak B: di-terc-butil ((((5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azanediil))bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(4,1-fenilen))dikarbamat

[0498]

[0499] Rastvor 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin) (68 mg, 0.241mmol), etil 2-(4-(terc-butoksikarbonilamino)fenil)acetata (201 mg, 0.72 mmol) i cezijum karbonata (251 mg, 0.771 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) zagrevan je do 130°C u trajanju od 45 min pod mikrotalasima. Zatim je reakciona smeša hlađena do sobne temperature i sipana u vodu. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 ml*3), organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen natrijum sulfatom, filtriran, koncentrovan da bi se dobio ostatak; ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.36 (br, 8H), 3.96 (s, 4H), 3.53 - 3.57 (m, 2H), 2.40 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.97 - 2.06 (m, 4H), 1.77 (m, 2H), 1.52(s, 18H). LC-MS: m/z (M+H)= 750.0.

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-aminofenil)acetamid) (239)

[0500]

[0501] U rastvor terc-butil 4,4’-(2,2’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azanediil)bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(4,1-fenilen)dikarbamata (20mg) u DCM (2 ml) dodata je TFA (0.5mL). Reakciona smeša je koncentrovana posle 0.5 časova da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (METANOL-d4) δ: 7.09 (d, J = 8.3 Hz, 4H), 6.70 - 6.74 (d, J = 8.3 Hz, 4H), 3.68 (s, 4H), 3.53 - 3.57 (m, 2H), 2.43 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.97 - 2.06 (m, 4H), 1.72 - 1.77 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 549.7.

Jedinjenje 240

[0502]

[0503] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 241

Korak A: dimetil 2-(5-fluoropiridin-2-il)malonat

[0504]

[0505] Rastvor 2-bromo-5-fluoropiridina (1.0 g, 5.68 mmol), dimetil malonata (3.0 g, 22.7 mmol) pikolinske kiseline (559.6 mg, 4.54 mmol), CuI (431.8 mg, 2.27 mmol) i Cs2CO3(5.6 g, 17.05 mmol) u DMF (30 mL) je mešan na 100 stepeni u trajanju od 12 časova. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je filtrirana, razblažena sa H2O i ekstrahovana sa etil acetatom. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje. LC-MS : m/z (M+H) = 228.2

Korak B: metil 2-(5-fluoropiridin-2-il)acetat

[0506]

[0507] Rastvor dimetil 2-(5-fluoropiridin-2-il)malonata (400 mg 1.76 mmol), NaCl (109.2 mg, 1.87 mmol) i H2O (56.3 g, 3.13 mmol) u DMSO (3 mL) je mešan na 130 stepeni u trajanju od 6 časova. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je razblažena sa H2O i ekstrahovana sa etil acetatom. Organski sloj je sušen preko natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod. LCMS : m/z (M+H) = 170.1

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-fluoropiridin-2-il)acetamid) (240)

[0508]

[0509] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (DMSO-d6) δ:12.74 (br. s., 2H), 8.50 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 7.72 (td, J = 8.7, 3.0 Hz, 2H), 7.49 (dd, J = 8.7, 4.4 Hz, 2H), 4.03 (s, 4H), 3.43 - 3.55 (m, 2H), 2.31 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.90 - 2.00 (m, 2H), 1.79 - 1.89 (m, 2H), 1.56 - 1.67 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=557.6

Jedinjenje 101 i jedinjenje 242

[0510]

[0511] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 240 za korake A-C

Korak A: dimetil 2-(5-cijanopiridin-2-il)malonat

[0512]

LC-MS : m/z (M+H) = 235.4

Korak B: metil 2-(5-cijanopiridin-2-il)acetat

[0513]

LC-MS : m/z (M+H) = 177.3

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-cijanopiridin-2-il)acetamid) (101)

[0514]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.80 (br. s., 2H), 8.97 (s, 2H), 8.24 - 8.37 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.59 -7.73 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.15 (s, 4H), 3.49 (m, 2H), 2.32 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.85 (m., 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 571.7

Korak D: 6,6’-(((5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azanediil))bis(2-oksoetan-2,1-diil))dinikotinamid (242)

[0515]

[0516] U rastvor N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-cijanopiridin-2-il)acetamida) (30mg, 0.053mmol) u DMSO (1 ml) dodat je rastvor natrijum hidroksida (4 M, 0.1 mL) na 0°C. Zatim je reakciona smeša mešana 2 min. i zatim je dodat vodonik peroksid (30% u vodi, 1 ml). Smeša je mešana 10 min. TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Smeša je prečišćena pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (METANOL-d4) δ: 9.00 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 8.27 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.06 - 4.20 (s, 4H), 3.50 - 3.63 (m, 2H), 2.45 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 1.95 - 2.11 (m, 4H), 1.70 - 1.82 (m, 2H); LC-MS : m/z (M+H)= 607.5

Jedinjenje 243

[0517]

Korak A: (6-(2-metoksi-2-oksoetil)piridin-3-il)metanaminijum hlorid

[0518]

[0519] U rastvor metil 2-(5-cijanopiridin-2-il)acetata (1.2 g, 6.8 mmol) u metanolu (20 ml) dodat je hlorovodonik u metanolu (4 M, 20 ml) i zatim Pd/C (200 mg). Zatim je reakciona smeša hidrogenizovana pod atmosferom vodonika preko noći. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod i isprana etil acetatom da bi se dobio željeni proizvod. LC-MS : m/z (M+H)= 181.5

Korak B: metil 2-(5-((terc-butoksikarbonilamino)metil)piridin-2-il)acetat

[0520]

[0521] U rastvor (6-(2-metoksi-2-oksoetil)piridin-3-il)metanaminijum hlorida (400 mg, 2.22 mmol) u CH2Cl2(50 ml) dodat je trietilamin (561 mg, 5.55 mmol), i zatim je dodat (Boc)2O (726 g, 3.33 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći. LCMS je pokazala da je željeni proizvod detektovan, smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.49 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.74 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H)= 281.5

Korak C: terc-butil (6,6’-(2,2’-(5,5-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azandiil)bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(piridin-6,3-diil))bis(metilen)dikarbamat [0522]

[0523] Postupak je isti kao Korak B za jedinjenje 84

LC-MS : m/z (M+H)= 779.5

Korak D: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-(aminometil)piridin-2-il)acetamid) (243)

[0524] U rastvor terc-butil (6,6’-(2,2’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azandiil)bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(piridin-6,3-diil))bis(metilen)dikarbamata (20 mg, 0.026 mmol) dodat je rastvor hlorovodonika u metanolu (4M, 10 ml) i dobijeni rastvor je mešan 1 čas. LCMS je pokazala da je početni materijal potrošen i željeni proizvod je detektovan. Smeša je koncentrovana da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (METANOL-d4) δ: 9.10 (s, 2H), 8.68 - 8.82 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 8.12 - 8.28 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.48 (s, 4H), 3.60 - 3.64 (m, 6H), 2.45 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.05 - 2.12 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.75 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 579.5

Jedinjenje 244

[0525]

[0526] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 243

Korak A do Koraka B: metil 2-(6-((terc-butoksikarbonilamino)metil)piridin-2-il)acetat [0527]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.65 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.14 - 7.23 (m, 2H), 5.59 (br. s., 1H), 4.44 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 1.48 (s, 9H); LC-MS : m/z (M+H)= 281.5.

Korak C do Koraka D: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(aminometil)piridin-2-il)acetamid) (244)

[0528]

1H NMR (METANOL-d4) δ: 7.92 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.44 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 4.28 - 4.36 (m, 4H), 3.56 - 3.67 (m, 6H), 2.46 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.07 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.94 - 2.01 (m, 2H), 1.73 - 1.79 (m, 2H); LCMS : m/z (M+H)= 579.5

Jedinjenje 245

[0529]

Korak A: metil 2-(3-cijanofenil)acetat

[0530]

[0531] U rastvor 2-(3-cijanofenil)sirćetne kiseline (1, 6.2 mmol) u metanolu (20 ml) dodat je sumpor dihlorid (5 ml) i 0.1 ml N,N-dimetilformamida. Zatim je reakciona smeša zagrevana do 80°C u trajanju od 2 časa. Kada je TLC pokazala da je početni materijal potrošen, smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak. Ostatak je sipan u vodu (20 ml) i ekstrahovan sa etil acetatom (50ml*2). Organski sloj je sušen pomoću anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran, koncentrovan da bi se dobio željeni proizvod. LC-MS : m/z (M+H)= 176.5

Korak B: (3-(2-metoksi-2-oksoetil)fenil)metanaminijum hlorid

[0532]

[0533] Postupak je isti kao Korak A za jedinjenje 243

1H NMR (METANOL-d4) δ: 7.33 - 7.47 (m, 4H), 3.73 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.37 (s, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 180.5

Korak C: metil 2-(3-((terc-butoksikarbonilamino)metil)fenil)acetat

[0534]

[0535] Postupak je isti kao Korak B za jedinjenje 243

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.14 - 7.26 (m, 4H), 4.87 (br. s., 1H), 4.33 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.64 (s, 2H), 1.48 (s, 9H). LC-MS : m/z (M+H)= 280.5

Korak D do Koraka E: terc-butil (3,3’-(2,2’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azandiil)bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(3,1-fenilen))bis(metilen)dikarbamat

[0536]

[0537] Postupak je isti kao Korak B do Koraka C za jedinjenje 238

LC-MS : m/z (M+H)= 777.5

Korak F: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(aminometil)fenil)acetamid) (245)

[0538]

[0539] Postupak je isti kao Korak D za jedinjenje 243

1H NMR (METANOL-d4) δ: 7.34 - 7.52 (m, 8H), 4.09 - 4.18 (m, 4H), 3.93 (s, 4H), 3.62 (m, 2H), 2.45 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.04 - 2.13 (m, 4H), 1.70 - 1.81 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 577.5

Jedinjenje 27

[0540]

[0541] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 245

Korak A: dietil 2-(pirimidin-2-il)malonat

[0542]

LC-MS : m/z (M+H) = 239.5

Korak B: metil 2-(pirimidin-2-il)acetat

[0543]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.74 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.24 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.23 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 4.05 (s, 2H), 1.26 - 1.30 (m, 3H). LC-MS : m/z (M+H) = 167.2

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(pirimidin-2-il)acetamid)

[0544]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.13 (br. s., 2H), 9.25 (d, J = 4.8 Hz, 4H), 7.88 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 4.71 - 4.75 (m, 4H), 4.05 - 4.13 (m, 2H), 2.92 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.35 - 2.46 (m, 2H), 2.18 -2.26 (m, 2H), 2.04 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 523.6

Jedinjenje 241

[0545]

Korak A: dimetil 2-(5-nitropiridin-2-il)malonat

[0546]

[0547] Rastvor dimetil 2-(5-nitropiridin-2-il)malonata (6.0 g, 37.8 mmol), dimetil malonata (10.0 g, 75.7 mmol) i Cs2CO3(24.7 g, 75.7 mmol) u DMF (50 mL) je mešan na 100 stepeni u trajanju od 12 časova. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je filtrirana, razblažena sa H2O i ekstrahovana sa etil acetatom. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod. LC-MS : m/z (M+H) = 255.3

Korak B: metil 2-(5-nitropiridin-2-il)acetat

[0548]

[0549] Rastvor dimetil 2-(5-nitropiridin-2-il)malonata (10.0 g 41.7 mmol), NaCl (2.58 g, 44.20 mmol) i H2O (1.3 g, 74.23 mmol) u DMSO (50 mL) je mešan na 130 stepeni u trajanju od 6 časova. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je razblažena sa H2O i ekstrahovana sa etil acetatom. Organski sloj je sušen preko natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 9.40 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.48 (dd, J = 8.6, 2.7 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.77 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H) = 197.1

Korak C: metil 2-(5-aminopiridin-2-il)acetat

[0550]

[0551] Rastvor metil 2-(5-nitropiridin-2-il)acetata (500 mg, 2.5 mmol) i Pd/C (50 mg) u metanolu (20 mL) je mešan pod H2na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 časa. Zatim, reakciona smeša je filtrirana i isparavana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod za sledeći korak bez dodatnog prečišćavanja.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.05 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 8.2, 2.8 Hz, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.72 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H) = 167.3

Korak D: metil 2-(5-(dimetilamino)piridin-2-il)acetat

[0552]

[0553] U rastvor metil 2-(5-aminopiridin-2-il)acetata (800 mg, 4.8 mmol) i paraformaldehida (578.3 mg, 19.3 mmol) u metanolu (20 mL) dodat je NaBH3CN (1.2 g, 19.26 mmol) i AcOH (1 kap, kat.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 12 časova. Zatim, reakcija je ugašena vodenim rastvorom amonijum hlorida i ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.09 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.99 (dd, J = 8.6, 3.2 Hz, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.98 (s, 6H). LC-MS : m/z (M+H) = 195.2

Korak E:N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-(dimetilamino)piridin-2-il)acetamid) (241)

[0554]

[0555] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.02 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.98 (dd, J = 8.6, 3.2 Hz, 2H), 3.49 (dt, J = 11.4, 5.7 Hz, 2H), 3.04 - 3.34 (m, 4H), 2.95 (s, 12H), 2.39 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.87 - 2.05 (m, 4H), 1.65 - 1.77 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 607.7

Jedinjenje 246

[0556]

[0557] Postupak je isti kao Korak B do Koraka F jedinjenja 245

Korak A: (4-(2-metoksi-2-oksoetil)fenil)metanaminijum hlorid

[0558]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 8.47 (br. s., 2H), 7.45 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.30 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 3.98 (br. s., 2H), 3.71 (s, 2H), 3.71 (s, 3H).

Korak B do Koraka C: 2-(4-((terc-butoksikarbonilamino)metil)fenil)sirćetna kiselina [0559]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 7.34 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.11 - 7.20 (m, J = 7.8 Hz, 2H), 7.00 - 7.10 (m, J = 7.8 Hz, 2H), 4.05 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 3.20 (s, 2H), 1.38 (s, 9H)

Korak D do Koraka F: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(aminometil)fenil)acetamid) (246)

[0560]

1H NMR (METANOL-d4) δ: 7.42 - 7.50 (m, 8H), 4.09 - 4.15 (m, 4H), 3.90 (s, 4H), 3.57 -3.65 (m, 2H), 2.45 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.05 - 2.13 (m, 2H), 1.92 - 2.02 (m, 2H), 1.70 - 1.80 (m, 2H); LC-MS : m/z (M+H)= 577.5

Jedinjenje 247

[0561]

Korak A: etil 2-(4-etoksipiridin-2-il)acetat

[0562]

[0563] Rastvor 2-(4-etoksipiridin-2-il)acetonitrila (150 mg, 0.92 mmol) u EtOH/HCl (6 mL/2 mL) je mešan na 70 stepeni u trajanju od 2 časa. Smeša je isparavana pod vakuumom. Ostatak je korišćen za sledeći korak bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS : m/z (M+H) = 210.2

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-etoksipiridin-2-il)acetamid) (247)

[0564]

[0565] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.31 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 2.1 Hz, 2H), 6.80 (dd, J = 5.8, 2.0 Hz, 2H), 4.32 (br. s., 4H), 4.11 (q, J = 6.9 Hz, 4H), 3.46 - 3.56 (m, 2H), 2.35 - 2.45 (m, 2H), 1.85 - 2.03 (m, 4H), 1.67 - 1.76 (m, 2H), 1.42 (t, J = 7.0 Hz, 6H). LC-MS : m/z (M+H) = 609.8

[0566] Jedinjenja 356, 350 i 353 su pripremljena na analogan način jedinjenju 84:

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(difluorometoksi)piridin-2-il)acetamid) (356)

[0567]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.63 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.08 - 7.14 (m, 2H), 7.03 (dd, J = 5.6, 2.1 Hz, 2H), 6.69 (t, J = 72 Hz, 1H), 4.09 (s, 4H), 3.54 - 3.66 (m, 2H), 2.47 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.96 - 2.10 (m, 4H), 1.71 - 1.80 (m, 2H) ; LC-MS : m/z (M+H)= 653.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(difluorometoksi)piridin-2-il)acetamid) (350)

[0568]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.51 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.60 (dd, J = 5.8, 2.4 Hz, 1H), 5.29 (m, 2H), 5.02 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 4.77 (dd, J = 8.0, 5.1 Hz, 2H), 3.57 (m, 2H), 2.48 (t, J = 6.0 Hz,2H), 2.05 - 1.96 (m, 4H), 1.80 - 1.74 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 665.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(difluorometoksi)piridin-2-il)acetamid) (353)

[0569]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.40 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 7.33 - 7.29 (m, 2H), 7.23 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.24 - 4.19 (m, 4H), 3.98 (s, 4H), 3.82 - 3.78 (m, 4H), 3.57 (m, 2H), 2.47 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.06 - 1.94 (m, 4H), 1.80 - 1.74 (m, 2H).

LC-MS : m/z (M+H)= 669.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-metoksipiridin-2-il)acetamid) (347)

[0570]

1H NMR (HLOROFORM-d) d: 8.36 (t, J = 1.7 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 1.6 Hz, 4H), 4.00 (s, 4H), 3.90 (s, 6H), 3.83 (kvint., J = 7.4 Hz, 2H), 2.56 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.39 - 2.50 (m, 2H), 2.10 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=567.7

Jedinjenje 248

[0571]

Korak A: 2-(2-fluoro-5-metoksifenil)sirćetna kiselina

[0572]

[0573] Rastvor 2-(2-fluoro-5-metoksifenil)acetonitrila (200 mg, 1.0 mmol) i natrijum hidroksida (81.5 mg, 2.0 mmol) u vodi je mešan na 100 stepeni u trajanju od 8 časova. Reakciona smeša je isparavana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod za sledeći korak bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS : m/z (M-H)=183.2

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-fluoro-5-metoksifenil)acetamid) (248)

[0574]

[0575] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.74 (s, 2H), 7.07 - 7.16 (m, 2H), 6.97 (dd, J = 5.9, 3.2 Hz, 2H), 6.87 (dt, J = 8.9, 3.6 Hz, 2H), 3.86 (s, 4H), 3.68 - 3.77 (s, 8H), 3.44 - 3.53 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.89 - 2.02 (m, 2H), 1.76 - 1.89 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 615.7

Jedinjenje 249

[0576]

Korak A: metil 2-(6-(3-hidroksiazetidin-1-il)piridin-2-il)acetat

[0577]

[0578] Rastvor metil 2-(6-bromopiridin-2-il)acetata (500.0 mg, 2.17 mmol), azetidin-3-ol hidrohlorida (285.9 mg, 2.61 mmol), CuI (248.3 mg, 1.30 mmol), L-prolina (149.7 mg, 1.30 mmol) i Cs2CO3(24.7 g, 75.7 mmol) u DMSO (6 mL) je mešan na 90 stepeni u trajanju od 12 časova pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je filtrirana, razblažena sa H2O i ekstrahovana sa etil acetatom. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko natrijum sulfata i isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.43 (dd, J = 8.1, 7.5 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.21 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.75 (tt, J = 6.4, 4.6 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 9.4, 6.4 Hz, 2H), 3.86 (dd, J = 9.5, 4.4 Hz, 2H), 3.69 - 3.77 (m, 5H). LC-MS : m/z (M+H) = 223.4

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(3-hidroksiazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (249)

[0579]

[0580] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.32 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.43 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.14 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.56 - 4.70 (m, 2H), 4.23 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 3.77 - 3.88 (m, 4H), 3.64 - 3.74 (m, 2H), 3.36 - 3.47 (m, 2H), 2.31 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 1.75 - 1.98 (m, 4H), 1.55 - 1.68 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 663.9

Jedinjenje 383

[0581] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249

Korak A: metil 2-(3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil)acetat

[0582]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.18-7.24 (m, 1H), 6.74 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.48-6.38 (m, 2H), 5.44 (m, 1H), 4.27-4.16 (m, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.60 (s, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=224.2

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(3-fluoroazetidin-1-il)fenil)acetamid)

[0583]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.67 (s, 2H), 7.14 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.68 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.46 (s, 2H), 6.38 (dd, J = 7.9, 1.7 Hz, 2H), 5.55 (dtt, J = 56, 5.8, 2.8 Hz, 2H), 4.20-4.07 (m, 4H), 3.78-3.93 (m, 4H), 3.70 (s, 4H), 3.48 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.88 - 1.97 (m, 2H), 1.77 - 1.88 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 665.6

Jedinjenje 250

[0584]

[0585] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249.

Korak A: metil 2-(6-(3,3-difluorociklobutilamino)piridin-2-il)acetat

[0586]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.40 - 7.50 (m, 1H), 6.65 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.94 (br. s., 1H), 4.02 - 4.17 (m, 1H), 3.71 - 3.77 (m, 3H), 3.66 - 3.71 (m, 2H), 3.00 -3.15 (m, 2H), 2.39 - 2.60 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 257.6

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(3,3-difluorociklobutilamino)piridin-2-il)acetamid) (250)

[0587]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.41 - 7.49 (m, 2H), 6.57 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.29 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 5.86 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 4.07 - 4.23 (m, 2H), 3.84 (s, 4H), 3.52 - 3.58 (m, 2H), 3.08 - 3.25 (m, 4H), 2.51 - 2.63 (m, 4H), 2.46 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.88 - 2.11 (m, 4H), 1.70 - 1.82 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 731.5

Jedinjenje 251

[0588]

[0589] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249

Korak A: metil 2-(6-(3-fluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetat

[0590]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.46 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.46 - 5.55 (m, 0.5H), 5.33 - 5.40 (m, 0.5H), 4.26 - 4.39 (m, 2H), 4.05 - 4.20 (m, 2H), 3.71 - 3.77 (m, 5H). LC-MS : m/z (M+H) = 211.6

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(3-fluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (251)

[0591]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.70 (br. s., 2H), 7.55 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 6.70 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.38 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.52 - 5.63 (m, 1H), 5.35 - 5.47 (m, 1H), 4.18 - 4.42 (m, 4H), 3.91 -4.09 (m, 4H), 3.86 (br. s., 4H), 3.45 - 3.54 (m, 2H), 2.31 (br. s., 2H), 1.90 - 2.05 (m, 2H), 1.78 - 1.90 (m, 2H), 1.62 (d, J = 5.6 Hz, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 667.8

Jedinjenje 252 i jedinjenje 253

[0592]

Korak A: metil 2-(5-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetat

[0593]

[0594] Postupak je isti kao Korak B jedinjenja 254

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.88 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 8.5, 2.8 Hz, 1H), 4.31 (t, J = 11.6 Hz, 4H), 3.84 (s, 2H), 3.74 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H)=243.2

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (252) i N-(5-((1S,3S)-3-(5-acetamido-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(5-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid (253)

[0595] Smeša metil 2-(5-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetata (100 mg), 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (50 mg, 0.18 mmol), cezijum karbonata (346.1 mg, 1.06 mmol) u DMA (3 mL) je zagrevana do 130°C pod atmosferom azota i mikrotalasima u trajanju od 45 min. Smeša je isparavana u vakuumu do sušenja. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo jedinjenje 252 i jedinjenje 253.

Jedinjenje 252

[0596]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.81 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.87 (dd, J = 8.5, 2.8 Hz, 2H), 4.27 (t, J = 11.7 Hz, 9H), 3.44 - 3.54 (m, 2H), 2.29 - 2.49 (t, J=5.6Hz, 2H), 1.97 (m, 2H), 1.91 (m, 2H), 1.72 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 703.2

Jedinjenje 253

[0597]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.01 (s, 1H), 7.25 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.33 (t, J = 11.6 Hz, 4H), 4.04 (s, 2H), 3.59 (m, 2H), 2.20 (m, 5H), 2.05 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.77 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 535.7

Jedinjenje 254

[0598]

Korak A: metil 2-(4-bromopiridin-2-il)acetat

[0599]

[0600] U smešu 4-bromo-2-metilpiridina (1g, 5.8mmol) u 15mL anhidrovanog THF ukapavanjem je dodat LDA (9.2mL, 2M) na -70, mešana je 30 min. Dimetil karbonat (630mg, 7.0mmol) je dodavan ukapavanjem u gore navedeni rastvor. Posle mešanja od oko dodatan 1 čas, LC-MS je zabeležila da je reakcija završena. Ugašena je zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je odvojen i isparavan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod. LC-MS: m/z (M+H) 231.1.

Korak B: metil 2-(4-(azetidin-1-il)piridin-2-il)acetat

[0601]

[0602] U rastvor (500g, 2.2mmol) u smeši dioksana (10 ml) dodati su Pd2(dba)3(200mg, 0.22mmol) i Xantphos (185mg, 0.22mmol), Cs2CO3(1.4g, 4.3mmol), a zatim azetidin (135mg, 2.4mmol) pod atmosferom azota i smeša je zagrevana preko noći na 90 stepeni C. Posle hlađenja do temperature sredine, odvojeni organski sloj je isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je apsorbovan u etil acetat, ispran vodenim rastvorom kalijum karbonata i fiziološkim rastvorom i sušen preko natrijum sulfata. Posle isparavanja, ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio metil 2-(4-(azetidin-1-il)piridin-2-il)acetat. 1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.02 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.36 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.27 (dd, J = 6.7, 2.4 Hz, 1H), 4.81 (s, 2H), 4.25 (t, J = 7.7 Hz, 4H), 3.38 (s, 3H), 2.60 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) 207.3

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(azetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (254)

[0603]

[0604] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 249

1H NMR (DMSO-d6) δ: 8.06 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 6.41 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 6.30 (dd, J = 5.9, 2.1 Hz, 2H), 3.91 - 4.02 (t, 8H, J = 7.2Hz), 3.87 (s, 4H), 3.48 - 3.52 (m, 2H), 2.36 - 2.41 (m, 4H), 2.31(t,2H,J = 4Hz),1.94 (m, 2H), 1.85 (m, 2H), 1.63 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) 631.2

Jedinjenje 255

[0605]

[0606] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 254

Korak A: metil 2-(4-(3-hidroksiazetidin-1-il) piridin-2-il)acetat

[0607]

1H NMR (metanol-d4, 400 MHz) δ 8.03 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 6.8 Hz, 2.4 Hz, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.80 - 4.77 (m, 1H), 4.22 - 4.38 (m, 2H), 3.96 -3.92 (m, 2H), 3.75 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H) 223.4

Korak B: N,N’- (5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil) bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil)) bis(2-(4-(3- hidroksiazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (255)

[0608]

1H NMR (metanol-d4, 400 MHz) δ 8.04 (d, J = 6.80 Hz, 2H), 6.28 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 6.18 (dd, J = 6.0 Hz, 2.0 Hz, 2H), 4.72 - 4.69 (m, 2H), 4.20 - 4.17 (m, 4H), 4.06 (s, 4H), 3.81-3.75 (m, 4H), 3.50 - 3.47 (m, 2H), 2.39 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.99 - 1.90 (m, 4 H), 1.71 (t, J = 5.6 Hz, 2H). LC-MS : m/z (M+H) 664.1

Jedinjenje 256

[0609]

[0610] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 254

Korak A: Metil 2-(4-(3-fluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetat

[0611]

1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.21 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 6.33 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.26 (dd, J = 6.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.58 - 5.40 (m, 1H), 4.36 -4.27 (m, 2H), 4.19 - 4.09 (m, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.75 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H) 225.4.

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis (1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis (2-(4-(3- fluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (256)

[0612]

1H NMR (METANOL-d4) δ 8.07 (s, 2H), 6.32-6.23(m, 4H), 5.37 (d, J = 60 Hz, 2H), 4.26 (m, 4H), 4.10 (m, 4H), 3.87 (s, 4H), 3.40 (m, 2H), 2.28 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.87 (m, 4H), 1.60 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) 668.0.

Jedinjenje 257

[0613]

[0614] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249

Korak A: metil 2-(3-(azetidin-1-il)fenil)acetat

[0615]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.12 -7.22 (s, 1H), 6.66 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.31 - 6.42 (m, 2H), 3.90 (t, J = 7.3 Hz, 4H), 3.71 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 2.38 (kvin, J = 7.2 Hz, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 206.5

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(azetidin-1-il)fenil)acetamid) (257)

[0616]

[0617] 1H NMR (DMSO-d6) δ:12.66 (s, 2H), 7.10 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.62 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.38 (s, 2H), 6.30 (dd, J = 7.9, 1.7 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 7.3 Hz, 8H), 3.68 (s, 4H), 3.44 - 3.49 (m, 2H), 2.25 - 2.34 (m, 6H), 1.89 - 1.98 (m, 2H), 1.76 - 1.87 (m, 2H), 1.53 - 1.66 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 629.8

Jedinjenje 258

[0618]

[0619] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 254

Korak A: Metil 2-(4-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetat

[0620]

1H NMR (METANOL-d4) δ 8.29 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.73 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 6.66 (dd, J = 6.4 Hz, 2.4 Hz, 2H), 4.82 - 4.79 (m, 2H), 4.72-4.70 (m, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.74 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H)= 243.4.

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (258)

[0621]

1H NMR (METANOL-d4) δ 8.20 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.74 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 6.68 (dd, J = 6.4 Hz, 2.4 Hz, 2H), 4.62 - 4.56 (m, 8H), 3.57 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.44 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.09 -2.04 (m, 2H), 1.99 - 1.96 (m, 2H), 1.76 - 1.74 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 703.2.

Jedinjenje 259

[0622]

Korak A: metil 2-(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)acetat

[0623]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.21 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.81 - 6.86 (m, 2H), 6.77 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 3.19 - 3.27 (m, 4H), 2.55 - 2.61 (m, 4H), 2.37 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H) = 249.2

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil)) bis(2-(3-4-metilpiperazin-1-il)fenil)acetamid) (259)

[0624]

[0625] U rastvor 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (50mg, 0.19mmol) u 3 mL DMSO dodati su metil 2-(3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)acetat (140mg, 0.57mmol) i kalijum 2-metilpropan-2-olat (63mg, 0.57mmol) pod atmosferom azota, i smeša je mešana 40 min na 100 stepeni C pod mikrotalasnim zračenjem. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa etil acetatom. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i fiziološkim rastvorom i sušen preko natrijum sulfata. Rastvarač je isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (METANOL-d4) δ: 7.18 -7.25 (m, 2H), 6.98 (br. s., 2H), 6.91 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.77 (d, J = 2.4 Hz, 4H), 3.42 - 3.52 (m, 2H), 3.18 - 3.26 (m, 8H), 2.61 - 2.69 (m, 8H), 2.37 (s, 6H), 2.30 (t, 2H, J = 4.0Hz), 1.88 - 1.97 (m, 2H), 1.78 - 1.88 (m, 2H), 1.53 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) 715.3

Jedinjenje 260

[0626]

[0627] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 259

Korak A: metil 2-(3-(pirolidin-1-il)fenil)acetat

[0628]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.20 (dd, J = 8.7, 7.4 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.51 (br. s., 2H), 3.71 (s, 3H), 3.60 (s, 2H), 3.3 (m, 4H), 1.98 - 2.06 (m, 4H). LC-MS : (M+H) m/z 220.3

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(pirolidin-1-il)fenil)acetamid) (260)

[0629]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.65 (s, 2H), 7.09 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.49 - 6.57 (m, 4H), 6.42 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 3.68 (s, 4H), 3.47 (m, 2H), 3.15 - 3.23 (t, 8H,J = 8 Hz), 2.29 (t, 2H, J = 4Hz), 1.94 (m, 10H), 1.84 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LC-MS : (M+H) m/z 657.3

Jedinjenje 261

[0630]

[0631] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 259.

Korak A: metil 2-(3-(ciklopropilamino)fenil)acetat

[0632]

1H NMR (HLOROFORM-d): 7.17 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.74 - 6.79 (m, 2H), 6.69 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 2.46 (dt, J = 6.6, 3.3 Hz, 1H), 0.72 - 0.78 (m, 2H), 0.51 -0.59 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) 206.3

Korak B: NN’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(ciklopropil)amino)fenil)acetamid) (261)

[0633]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.73 (br. s., 2H), 7.04 (t., J = 4.0Hz, 2H), 6.61-6.53 (m, 6H), 6.10 (s ,2H), 3.65 (s, 4H), 3.48 (m, 2H), 2.29 (m, 4H), 1.92 (m,2H), 1.84 (m, 2H), 1.60 (m, 2H), 0.67 (m, 4H), 0.34 (m, 4H). LC-MS : m/z (M+H) 628.3

Jedinjenje 262

[0634]

[0635] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 259

Korak A: metil 2-(3-morfolinofenil)acetat

[0636]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.21 (t, J = 7.9 Hz,1H), 6.82 - 6.86 (m, 2H), 6.77 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.74 (t, J = 8Hz, 4H), 3.58 (s, 2H), 3.10 (t, J = 8Hz, 4H). LC-MS : m/z (M+H) 235.3

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-morfolinofenil)acetamid) (262)

[0637]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.67 (br. s, 2H), 7.17 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 6.92 (s, 2H), 6.84 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 2H), 6.76 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 3.67 - 3.80 (m, 12H), 3.43 - 3.50 (m, 2H), 3.05 -3.14 (m, 8H), 2.29 (t.2H,J= 4Hz), 1.87 - 1.98 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LC-MS : m/z 689.3 (M+H).

Jedinjenje 263

[0638]

Korak A do Koraka B: diterc-butil 4,4’-(3,3’-(2,2’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azandiil)bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(3,1-fenilen))dipiperazin-1-karboksilat

[0639]

[0640] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 259

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.67(s,2H),7.17 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 6.94 (s, 2H), 6.82 - 6.90 (m, 2H), 6.77 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 3.72 (s, 4H), 3.41 - 3.51 (m, 10H), 3.00 - 3.14 (t, 8H,J=5.2Hz), 2.30 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.89 - 1.99 (m, 4H), 1.80 - 1.88 (m, 2H), 1.42(s, 18H). LC-MS : m/z (M+H) 888.1

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(piperazin-1-il)fenil)acetamid) (263)

[0641] Postupak je bio isti kao Korak C jedinjenja 239.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 7.15 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.91 (s, 2H), 6.79 - 6.85 (m, 2H), 6.73 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 4.15(br, 2H), 3.68 (s,4H), 3.47 (m, 2H), 3.01 - 3.11 (t, 8H, J=4.8Hz), 2.80 - 2.93 (t, 8H,J=4.8Hz), 2.29 (t, 2H, J = 9.6Hz), 1.92 (m, 2H), 1.95 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LC-MS : 687.3 (M+H) m/z

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil)bis(2-(3-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)acetamid) (362)

[0642]

[0643] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 259

1H NMR (METANOL-d4) δ: 7.18 -7.31 (m, 6H), 7.15 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 3.81 (s, 4H), 3.47 -3.57 (m, 2H), 3.23 - 3.36 (m, 4H), 2.56 - 2.73 (m, 12H), 2.40 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.85 - 2.08 (m, 12H), 1.68 - 1.77 (m, 2H); LC-MS : m/z (M+H)= 713.3

Jedinjenje 264

[0644]

[0645] Postupak je isti kao reakcija za pripremu jedinjenja 263.

Korak B: di-terc-butil ((((5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azandiil))bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(3,1-fenilen))bis(metilkarbamat)

[0646]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.73 (br. s., 1H), 7.27 - 7.33 (m, 2H), 7.24 (s, 2H), 7.18 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 3.79 (s, 4H), 3.47 (m, 2H), 3.17 (s, 6H), 2.28 (t, 2H, J = 8Hz), 1.93 - 1.83 (m, 4H), 1.61 (m, 2H), 1.36 (s, 18H). LCMS : m/z 778.2 (M+H)

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(metilamino)fenil)acetamid) (264)

[0647]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.65 (s, 2H), 7.02 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 6.47 - 6.54 (m, 4H), 6.42 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 4.16 (br, 2H), 3.64 (s, 4H), 3.46 (m, 2H), 2.65 (s, 6H), 2.29 (t, 2H,J = 4Hz), 1.88 - 1.98 (m, 2H), 1.78 - 1.88 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) 577.9

Jedinjenje 265

[0648]

[0649] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249

Korak A: etil 2-(4-morfolinofenil)acetat

[0650]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.193 (d, 2H); 6.872 (d, 2H); 4.272 (q, J= 7.14 Hz, 2H); 3.853 (m, 2H); 3.533 (s, 2H); 3.140 (m, 2H); 1.247 (t, J= 7.14, 3H). LC-MS m/z 250.1 (M+H).

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-morfolinofenil)acetamid) (265)

[0651]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.45 (d, J = 6.4 Hz, 4H), 7.20 (m,4H), 4.03 (m, 8H), 3.98 (m, 4H), 3.54 - 3.60 (m, 2H), 3.30 (m, 8H), 2.49 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.05 (m, 2H), 1.96 (m, 2H), 1.76 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 689.9

Jedinjenje 266

[0652]

[0653] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil)acetamid) (266)

[0654]

1H NMR (DMSO-d6) δ:12.63 (s, 2H), 7.20 (d, J = 8.3 Hz, 4H), 6.54 (d, J = 8.3 Hz, 4H), 4.23 (t, J = 12.2 Hz, 8H), 3.68 (s, 4H), 3.46 (m, 2H), 2.28 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.60 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=701.9

Jedinjenje 267

[0655]

[0656] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249

Korak A: metil 2-(6-(azetidin-1-il)piridin-2-il)acetat

[0657]

LC-MS : m/z (M+H)=207.2

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(azetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (267)

[0658]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.70 (s, 2H), 7.47 (dd, J = 8.2, 7.4 Hz, 2H), 6.61 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.24 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 3.90 (t, J = 7.4 Hz, 8H), 3.81 (s, 4H), 3.44 - 3.55 (m, 2H), 2.24 - 2.37 (m, 6H), 1.90 - 2.02 (m, 2H), 1.77 - 1.90 (m, 2H), 1.55 - 1.69 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=631.8.

Jedinjenje 268

[0659]

Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249

Korak A: metil 2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetat

[0660]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.50 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.35 (t, J = 12.1 Hz, 4H), 3.73 (s, 2H), 3.75 (s, 3H). LC-MS : m/z (M+H)=243.4

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (268)

[0661]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.70 (s, 2H), 7.59 (dd, J = 7.3,8.3 Hz, 2H), 6.79 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.48 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.34 (t, J = 12.5 Hz, 8H), 3.87 (s, 4H), 3.45 - 3.52 (m, 2H), 2.32 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.95 (m, 2H), 1.78 - 1.89 (m, 2H), 1.62 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=703.9

Jedinjenje 269

[0662]

[0663] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249

Korak A: metil 2-(3-(3,3-difluoroazetidin-1-il)fenil)acetat

[0664]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.19 - 7.28 (m, 1H), 6.80 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.48 (m, 2H), 4.26 (t, J = 11.8 Hz, 4H), 3.72(s, 3H), 3.61 (s, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=242.4

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(3,3-difluorociklobutil)fenil)acetamid) (269)

[0665]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.68 (s, 2H), 7.18 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.76 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.54 (s, 2H), 6.48 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 4.25 (t, J = 12.2 Hz, 8H), 3.73 (s, 4H), 3.48 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.88 - 1.99 (m, 2H), 1.77 - 1.87 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=701.9

Jedinjenje 270

[0666]

[0667] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249

Korak A: metil 2-(6-(3-metoksiazetidin-1-il)piridin-2-il)acetat

[0668]

LC-MS : m/z (M+H)=237.2

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(3-metoksiazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (270)

[0669]

1H NMR (DMSO-d6) δ:12.69 (s, 2H), 7.49 (dd, J = 7.3,8.3 Hz 2H), 6.64 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.30 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.26 - 4.33 (m, 2H), 4.04 - 4.16 (m, 4H), 3.81 (s, 4H), 3.71 (dd, J = 8.9, 4.0 Hz, 4H), 3.44 - 3.54 (m, 2H), 3.34 (s, 6H), 2.32 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 1.91 - 2.00 (m, 2H), 1.78 - 1.90 (m, 2H), 1.63 (d, J = 5.4 Hz, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=691.8

Jedinjenje 271

[0670]

Korak A: metil 2-(6-hloropiridin-3-il)acetat

[0671]

[0672] U rastvor 2-(6-hloropiridin-3-il)sirćetne kiseline (2g, 117 mmol) u metanolu (40ml) dodat je SOCl2(1.38g, 117 mmol). Reakciona smeša je koncentrovana posle dva časa da bi se dobio željeni proizvod. LC-MS : m/z (M+H)= 186.6

Korak B: metil 2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-3-il)acetat

[0673]

[0674] U zaptivenu reakcionu posudu koja sadrži metil 2-(6-hloropiridin-3-il)acetat (200 mg, 1.08 mmol), 3,3-difluoroazetidin hidrohlorid (154 mg, 1.19 mmol), Xantphos (93 mg, 0.162 mmol), Cs2CO3(1.054 g, 3.23 mmol) i Pd2(dba)3(99.0 mg, 0.11 mmol) dodato je 3.0 ml dioksana. Reakciona smeša je zračena mikrotalasima na 90C u trajanju od 60.0 min. Hlađena je do sobne temperature i razblažena sa CH2Cl2(20.0 ml). Suspenzija je filtrirana, isprana sa CH2Cl2(3 x 10.0 ml) i filtrat je ispran vodom i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je sušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran. Filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.09 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 8.3, 2.1 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 12.0 Hz, 4H), 3.72 (s, 3H), 3.55 (s, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 243.3

Korak C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-3-il)acetamid) (271)

[0675]

[0676] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 13.72 (br. s., 2H), 8.24 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 7.65 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 2H), 6.34 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.30 (t, J = 12.1 Hz, 8H), 3.94 (s, 4H), 3.55 - 3.63 (m, 2H), 2.50 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.07 (m, 2H), 1.96 - 2.01 (m, 2H), 1.73 - 1.82 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 703.8

Jedinjenje 272

[0677]

Korak A: terc-butil 4-(3-(2-metoksi-2-oksoetil)fenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat

[0678]

[0679] Rastvor metil 2-(3-bromofenil)acetata (288.9 mg, 1.26 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (300 mg, 0.97 mmol), PdCl2(dppf) (35.5 mg, 4.8% mmol) i K2CO3(268.1 mg, 1.94 mmol) u DMF (20 mL) je mešan na 90 stepeni pod N2preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je filtrirana sa celitom, razblažena sa EtOAc, isprana vodom, sušena preko Na2SO4i isparavana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod. LC-MS : m/z (M+H)=332.4

Korak B: terc-butil 4-(3-(2-metoksi-2-oksoetil)fenil)piperidin-1-karboksilat

[0680]

[0681] Rastvor terc-butil 4-(3-(2-metoksi-2-oksoetil)fenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (330 mg, 1.0 mmol) i Pd/C (30 mg) u metanolu (10 mL) je mešan pod H2na sobnoj temperaturi u trajanju od 12 časova. Zatim, reakciona smeša je filtrirana i isparavana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod za sledeći korak bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS : m/z (M+H)=334.4

Korak C: terc-butil 4,4’-(3,3’-(2,2’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azandiil)bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(3,1-fenilen))dipiperidin-1-karboksilat

[0682]

[0683] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

LC-MS : m/z (M+H)=886.1

Korak D: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(piperidin-4-il)fenil)acetamid) (272)

[0684]

[0685] Rastvor terc-butil 4,4’-(3,3’-(2,2’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azanediil)bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(3,1-fenilen))dipiperidin-1-karboksilata (15 mg, 0.01 mmol) u HCl/MeOH (6 mL, 3 N) je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 6 časova. Smeša je isparavana pod sniženim pritiskom da bi se izvršilo prečišćavanje pomoću standardnog postupka.

1H NMR (METANOL-d4) δ: 12.66 (s, 2H), 8.46 (br. s., 2H), 7.27 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.19 (s, 2H), 7.13 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 3.72 (s, 4H), 3.41 - 3.45 (m, 2H), 3.39 (d, J = 12.6 Hz, 4H), 3.02 (td, J = 13.0, 2.6 Hz, 4H), 2.75 - 2.84 (m, 2H), 2.19 - 2.35 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.90 - 2.00 (m, 6H), 1.73 - 1.85 (m, 6H), 1.54- 1.67 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=686.0

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(4-(piperidin-4-il)fenil)acetamid) (290)

[0686]

[0687] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 272

1H NMR (METANOL-d4) δ: 12.68 (s, 2H),8.44 (br. s., 2H), 7.22 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 7.15 (d, J = 8.5 Hz, 4H), 3.70 (s, 4H), 3.41 - 3.46 (m, 2H), 3.39 (d, J = 12.6 Hz, 4H), 3.02 (td, J = 13.0, 2.6 Hz, 4H), 2.75 - 2.84 (m, 2H), 2.19 - 2.36 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.90 - 2.00 (m, 6H), 1.73 -1.85 (m, 6H), 1.55 - 1.68 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=686.0

Jedinjenje 273

[0688]

Korak A: metil 2-(1H-imidazol-4-il)acetat hidrohlorid

[0689]

[0690] U rastvor hidrohlorida 2-(1H-imidazol-4-il)sirćetne kiseline (200 mg, 1.23 mmol) u metanolu (5 ml) dodat je SOCl2(145 mg, 1.23 mmol). Reakciona smeša je koncentrovana posle dva časa da bi se dobio željeni proizvod. LC-MS : m/z (M+H)= 141.1

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(1H-imidazol-4-il)acetamid) (273)

[0691]

[0692] Rastvor 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (33 mg, 0.119 mmol), metil 2-(1H-imidazol-4-il)acetat hidrohlorida (50 mg, 0.357 mmol) i cezijum karbonata (300 mg, 1.19 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 ml) je zagrevan do 130°C u trajanju od 45 min. pod mikrotalasima. Zatim je reakciona smeša hlađena do sobne temperature i sipana u vodu. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 ml*3), organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen natrijum sulfatom, filtriran, koncentrovan da bi se dobio ostatak; ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (METANOL-d4) δ: 8.20 (br. s., 2H), 7.27 (br. s., 2H), 3.97 (s, 4H), 3.56 - 3.60 (m, 2H), 2.45 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.05 (m, 2H), 2.00 (m, 2H), 1.74 -1.78 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 499.5

Jedinjenje 274

[0693]

Korak A: metil 2-(2-aminotiazol-4-il)acetat

[0694]

[0695] Postupak je isti kao Korak A jedinjenja 273.

LC-MS : m/z (M+H)= 173.2.

Korak B: metil 2-(2-(terc-butoksikarbonilamino)tiazol-4-il)acetat

[0696]

[0697] Rastvor di-terc-butil dikarbonata (279 mg, 1.28 mmol) u toluenu (3 ml) dodat je u posudu koja sadrži metil 2-(2-aminotiazol-4-il)acetat (200 mg, 1.16 mmol), reakciona smeša je zagrevana na 85°C u trajanju od 24 časa. LCMS je pokazala da je željeni proizvod detektovan, smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

LC-MS : m/z (M+H)= 273.3

Korak C: 2-(2-(terc-butoksikarbonil(metil)amino)tiazol-4-il)sirćetna kiselina

[0698]

[0699] Rastvor metil 2-(2-(terc-butoksikarbonil(metil)amino)tiazol-4-il)acetata (360 mg, 1.258 mmol) i Li-OH.H2O (106 mg, 2.52 mmol) u THF:H2O=6 ml:3 ml je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim je reakciona smeša koncentrovana da bi se dobio željeni proizvod. LC-MS : m/z (M+H)= 259.3

Korak D: terc-butil 4,4’-(2,2’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azanediil)bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(tiazol-4,2-diil)bis(metilkarbamat)

[0700]

[0701] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.78 (s, 2H), 3.92 (s, 4H), 3.54 (m, 2H), 2.41 (t, J= 5.5 Hz, 2H), 2.01 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.73 - 1.75 (m, 2H), 1.55 (s, 18H).LC-MS : m/z (M+H)= 591.8. LC-MS : m/z (M+H)= 791.0

Korak E: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-aminotiazol-4-il)acetamid) (274)

[0702]

[0703] Postupak je bio isti kao Korak C jedinjenja 239

1H NMR (METANOL-d4) δ: 6.42 (s, 2H), 3.73 (s, 4H), 3.54 - 3.60 (m, 2H), 2.44 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.03 - 2.07 (m, 2H), 1.96 - 2.01 (m, 2H), 1.74 - 1.78 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 563.8

Jedinjenje 275

[0704]

Korak A: metil 2-(2-(metilamino)tiazol-4-il)acetat

[0705]

[0706] Smeša metil 4-hloro-3-oksobutanoata (1 g, 11.1 mmol) i 1-metiltiouree (1.72 g, 11.43 mmol) u MeOH (5 mL) zagrevana je do 80°C u trajanju od 3 časa. Smeša je hlađena, etanol je isparavan i razblažen zasićenim natrijum bikarbonatom i ekstrahovan sa etil acetatom. Organski slojevi su sušeni preko magenzijum sulfata i reakciona smeša je prečišćena pomoću standardnog postupka da bi se dobio metil 2-(2-(metilamino)tiazol-4-il)acetat. LC-MS : m/z (M+H)= 187.2

Korak B do Koraka D: terc-butil 4,4’-(2,2’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(azandiil)bis(2-oksoetan-2,1-diil))bis(tiazol-4,2-diil)bis(metilkarbamat)

[0707]

[0708] Postupak je bio isti kao Korak B do Koraka D jedinjenja 274

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.75 (s, 2H), 3.85 (s, 4H), 3.65 (s, 6H), 3.53 - 3.55 (m, 2H), 2.45 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.01 (m, 2H), 1.97 (m, 2H), 1.73 (m, 2H), 1.58 (s, 18H). LC-MS : m/z (M+H)= 791.0

Korak E: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-(metilamino)tiazol-4-il)acetamid) (275)

[0709]

[0710] Postupak je bio isti kao Korak E jedinjenja 274

1H NMR (METANOL-d4) δ: 6.46 (s, 2H), 3.78 (s, 4H), 3.54 - 3.60 (m, 2H), 2.94 (s, 6H), 2.44 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.05 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.73 - 1.78 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 591.8

Jedinjenje 276

[0711]

Korak A: metil 2-(2-bromotiazol-4-il)acetat

[0712]

[0713] Metil 2-(2-aminotiazol-4-il)acetat (5 g, 26.8 mmol) je dodat pod azotom u rastvor bakar (11) bromida (6.77 g, 30 mmol) i f-butil nitrita (4.79 ml, 40 mmol) u acetonitrilu (20 ml) na -20°C. Reakciona smeša je lagano zagrevana do sobne temperature i mešana dva časa. Rastvor je zatim razblažen sa dietil etrom i ispran sa 25 ml 10 procentnog rastvora hlorovodonične kiseline; vodena faza je ekstrahovana sa 20 ml dietil etra. Kombinovane organske faze su sušene i isparavane do sušenja. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova. LC-MS : m/z (M+H) = = 235.9

Korak B: metil 2-(2-morfolinotiazol-4-il)acetat

[0714]

[0715] Postupak je bio isti kao za korak A jedinjenja 249

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.47 (s, 1H), 3.80 - 3.85 (m, 4H), 3.75 (s, 3H), 3.67 (s, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 243.3.

Korak C do Koraka D: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-morfolinotiazol-4-il)acetamid)

[0716]

[0717] Postupak je bio isti kao Korak C do Koraka D jedinjenja 274

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.50 (s, 2H), 3.85 - 3.93 (m, 12H), 3.64 (m, 8H), 3.53 - 3.59 (m, 2H), 2.47 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.97 - 2.06 (m, 4H), 1.73 - 1.80 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=703.9

N,N’-(5,5’-((1R,3R)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)pirimidin-4-il)acetamid) (346)

[0718]

[0719] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 249

1H NMR (HLOROFORM-d) d: 8.38 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 6.73 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.61 (t, J = 12.0 Hz, 8H), 3.96 (s, 4H), 3.58 (m, 2H), 2.49 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.94-2.11 (m,4H), 1.72 -1.82 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=705.7

Jedinjenje 277

[0720]

[0721] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 276

Korak A: metil 2-(2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)tiazol-4-il)acetat

[0722]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.53 (s, 1H), 4.42 (t, J = 11.8 Hz, 4H), 3.73 (s, 3H), 3.65 (s, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 249.3

Korak B do Koraka C: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-(3,3-difluoroazetidin-1-il)tiazol-4-il)acetamid) (277)

[0723]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.57 (s, 2H), 4.50 (t, J = 11.7 Hz, 8H), 3.84 (s, 4H), 3.54 -3.61 (m, 2H), 2.47 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.01 - 2.05 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.74 - 1.80 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 715.5.

Jedinjenje 278

[0724]

Korak A: metil 3-okso-4-tiocijanatobutanoat

[0725]

[0726] Rastvor metil 4-hloro-3-oksobutanoata (10 g, 66 mmol) u toluenu (100 ml) dodat je u posudu koja sadrži KSCN (9.6 g, 99 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 24 časa. LCMS je pokazala da je detektovan željeni proizvod, smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod. LC-MS : m/z (M+H)= 174.3

Korak B: metil 2-(2-(dimetilamino)tiazol-4-il)acetat

[0727]

[0728] Rastvor metil 3-okso-4-tiocijanatobutanoata (350 mg, 2.02 mmol) u THF (4 ml) dodat je u posudu koja sadrži dimetilamin u THF (2M; 1.01 ml, 2.02 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 časa. LCMS je pokazala da je željeni proizvod detektovan, smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.36 (s, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.68 (s, 2H), 3.13 (s, 6H). LC-MS : m/z (M+H)= 201.3

Korak C do Koraka D: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-(dimetilamino)tiazol-4-il)acetamid) (278)

[0729]

[0730] Postupak je bio isti kao Korak C do Koraka D jedinjenja 268

1H NMR (METANOL-d4) δ: 6.51 (s, 2H), 3.79 (s, 4H), 3.54 - 3.61 (m, 2H), 3.11 (s, 12H), 2.44 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.04 - 2.07 (m, 2H), 2.00 (m, 2H), 1.74 - 1.79 (m, 2H). LC-MS: m/z (M+H)= 619.9

Jedinjenje 279

[0731]

Korak A: natrijum 2-(2-metoksitiazol-4-il)acetat

[0732]

[0733] Rastvor metil 2-(2-bromotiazol-4-il)acetata (80 mg, 0.34 mmol) i natrijum metanolata (300 mg) u MeOH je mešan na 85°C preko noći. Zatim je reakciona smeša koncentrovana da bi se dobio željeni proizvod.<1>H NMR (METANOL-d4) δ: 4.04 (s, 3H), 3.47 (d, J = 1.1 Hz, 2H), 3.37 (s, 1H). LC-MS : m/z (M+H)=174.2

Korak B: N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-metoksitiazol-4-il)acetamid) (279)

[0734]

[0735] Rastvor 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (10 mg, 0.04 mmol), natrijum 2-(2-metoksitiazol-4-il)acetata (28 mg, 0.14 mmol), HATU (83 mg, 0.22 mmol) i DIPEA (30 mg, 0.234 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) zagrevan je do 50°C preko noći. Smeša je sipana u vodu (20 ml), talog je filtriran da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 6.95 - 7.19 (s, 2H), 6.59 (s, 2H), 4.16 - 4.20 (m, 6H), 3.84 (s, 4H), 3.55 - 3.62 (m, 2H), 2.48 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.04 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 1.96 - 2.00 (m, 2H), 1.74 - 1.80 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 593.6

Jedinjenje 79

[0736]

Korak A: N-(5-((1S,3S)-3-(5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(piridin-2-il)acetamid

[0737]

[0738] Smeša metil 2-(piridin-2-il)acetata (107.0 mg, 0.71 mmol), 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (200 mg, 0.71 mmol), cezijum karbonata (762.7 mg, 1.42 mmol) u DMF (6 mL) zagrevana je do 130°C pod atmosferom azota i mikrotalasima u trajanju od 45 min. Smeša je isparavana pod vakuumom do sušenja. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.72 (s, 1H), 8.52 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.85 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 6.9, 5.7, 1.1 Hz, 1H), 7.06 (s, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.64 (m, 2H), 2.22 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 1.76 - 1.91 (m, 4H), 1.60 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 402.2

Korak B: 2-(2-metoksifenil)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(piridin-2-il)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (79)

[0739]

[0740] Rastvor N-(5-((1S,3S)-3-(5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(piridin-2-il)acetamida (50 mg, 0.12 mmol), 2-(2-metoksifenil)sirćetne kiseline (31.0 mg, 0.19 mmol), HATU (71.0 mg, 0.19 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (29.0 mg, 0.22 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) je mešan na 50 stepeni preko noći. Smeša je sipana u vodu (10 ml), talog je filtriran da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (METANOL-d4) δ: 8.52 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.85 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 6.9, 5.7, 1.1 Hz, 1H), 7.27 -7.33 (m, 1H), 7.25 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.86 - 7.05 (m, 2H), 4.62 (s, 4H), 3.83 (s, 3H), 3.53 - 3.64 (m, 2H), 2.44 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 1.91 - 2.11 (m,4H), 1.72 - 1.81 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H) = 550.7 2-(3-metoksifenil)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(piridin-2-il)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (81)

[0741]

[0742] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 279

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.74 (s, 1H), 12.70 (s, 1H), 8.50 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.67 - 7.87 (m, 1H), 7.40 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.27 - 7.32 (m, 1H), 7.24 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.87 - 6.93 (m, 2H), 6.84 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.48 (m, 2H), 2.31 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.85 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=550.7

Jedinjenje 280

[0743]

[0744] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 79

Korak B: 2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(5-(2-metoksietoksi)piridin-2-il)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (280)

[0745]

1H NMR (METANOL-d4) δ: 8.23 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.54 - 7.70 (m, 1H), 7.30 -7.54 (m, 2H), 6.81 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.38 (t, J = 12.2 Hz, 4H), 4.20 - 4.25 (m, 2H), 3.94 (s, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.73 - 3.82 (m, 2H), 3.52 - 3.61 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 2.45 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.03 - 2.13 (m, 2H), 1.91 - 2.03 (m, 2H), 1.70 - 1.82 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=687.0

[0746] Jedinjenja 364, 376, 366, 367, 365, 372 i 374 su pripremljena na analogan način jedinjenju 81:

2-(piridin-2-il)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(3-(trifluorometoksi)fenil)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (364)

[0747]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 13.74 (br. s., 1H), 8.62 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.20 -7.48 (m, 5H), 7.10 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.13 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 3.52 - 3.68 (m, 2H), 2.40 -2.57 (m, 2H), 1.93 - 2.15 (m, 4H), 1.72 - 1.84 (m, 2H) ; LC-MS : m/z (M+H)= 604.5

(S)-2-hidroksi-2-fenil-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(piridin-2-il)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (376)

[0748]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.63 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.21 -7.39 (m, 5H), 5.56 (s, 1H), 4.08 (s, 2H), 3.51 - 3.65 (m, 2H), 2.40 (m, 2H), 1.95 - 2.11 (m, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.65 - 1.76 (m, 2H); LC-MS : m/z (M+H)= 536.3 2-(6-(3-aminoazetidin-1-il)piridin-2-il)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(3-cijanofenil)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (366)

[0749]

1H NMR (CHCl3-d) δ: 7.68 (s, 1H), 7.60 (m, 2H), 7.48 (m, 2H), 6.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.40 (m, 2H), 4.15-4.09 (m, 5H), 3.86 (s, 2H), 3.50 (m, 2H), 2.40 (s, 2H), 2.00-1.95 (m, 4H), 1.74 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=615.7

2-(3-cijanofenil)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(3-(piperidin-3-il)fenil)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (367)

[0750]

1H NMR (METANOL-d4) δ: 7.68 (s, 1H), 7.62 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.21 - 7.30 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 3.88 (s, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.52 (m, 2H), 3.26 (m, 2H), 2.67 - 2.93 (m, 3H), 2.28 - 2.51 (m, 2H), 2.02-1.98 (m, 6H), 1.86 (m, 2H), 1.69 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=627.2

(R)-2-hidroksi-2-fenil-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(3-(trifluorometoksi)fenil)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (365)

[0751]

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.62 (b, 2H), 7.55-7.45 (m, 3H), 7.36 (t, J = 7.1 Hz, 4H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 5.32 (s, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.47 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.88 - 1.75 (m, 2H), 1.66-1.53 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=619.2

(S)-2-hidroksi-2-fenil-N-(5-((IS,3S)-3-(5-(2-(3-(trifluorometoksi)fenil)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (372)

[0752]

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.62 (b, 2H), 7.54-7.46 (m, 3H), 7.36 - 7.24 (m, 6H), 5.32 (s, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.47 (m, 2H), 2.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.88 - 1.75 (m, 2H), 1.66-1.53 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=619.2

(S)-2-hidroksi-2-fenil-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(3-(trifluorometoksi)fenil)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)ciklopentil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (374)

[0753]

1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.53 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.44 -7.39 (m, 2H), 7.37 -7.32 (m, 4H), 7.14 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.52 (s, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.78 (m, 2H), 2.55 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.42 (m, 2H), 2.03-2.10 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 605.2

Jedinjenje 281

[0754]

Korak A: N-(5-((1S,3S)-3-(5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid

[0755]

[0756] Rastvor 5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (200 mg, 0.71 mmol), sirćetne kiseline (42.5 mg, 0.71 mmol), HATU (260.0 mg, 0.71 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (110.0 mg, 0.85 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je isparavana pod vakuumom do sušenja. Ostatak je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobilo željeno jedinjenje. LC-MS : m/z (M+H)=325.4

Korak B: N-(5-((1S,3S)-3-(5-acetamido-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid (281)

[0757]

[0758] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (HLOROFORM-d) δ:12.61 (br. s., 1H), 7.59 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.59 (t, J = 11.6 Hz, 4H), 3.98 (s, 2H), 3.60 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.17 - 2.36 (m, 2H), 1.96 (m, 2H), 1.66 (m, 2H), 1.34 (m, 2H. LC-MS : m/z (M+H)=535.7

Jedinjenje 282

[0759]

[0760] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 281

Korak A: N-(5-((1S,3S)-3-(5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)propionamid

[0761]

LC-MS : m/z (M+H)=339.5

Korak B: N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)propionamid (282)

[0762]

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.69 (s, 1H), 12.40 (s, 1H), 7.59 (dd, J = 7.3,8.1 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.34 (t, J = 12.5 Hz, 4H), 3.86 (s, 2H), 3.49 (m, 2H), 2.44 - 2.49 (q, J = 7.5 Hz ,2H), 2.31 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.90 - 2.01 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.57 - 1.66 (m, 2H), 1.05 - 1.14 (t, 3H). LC-MS : m/z (M+H)=549.7

Jedinjenje 283

[0763]

[0764] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 281

Korak A: N-(5-((1S,3S)-3-(5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)ciklopropankarboksamid

[0765]

LC-MS : m/z (M+H)=351.4

Korak B: N-(5-((1S,3S)-3-(5-acetamido-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid (283)

[0766]

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.58 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.57 (t, J = 11.7 Hz, 4H), 3.99 (br. s., 2H), 3.49 - 3.69 (m, 2H), 2.38 - 2.55 (m, 2H), 2.29 - 2.38 (m, 1H), 1.90 - 2.12 (m, 4H), 1.64 - 1.84 (m, 2H), 1.17 - 1.23 (m, 2H), 1.05 -1.13 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=561.6

N-(5-((1S,3S)-3-(5-acetamido-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(3-metoksifenil)acetamid (90)

[0767]

[0768] Rastvor 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (50 mg, 0.18 mmol), sirćetne kiseline (1 ekv.), HATU (202 mg, 0.53 mmol) i DIPEA (73 mg, 0.57 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) zagrevan je do 50°C u trajanju od 2 časa, zatim je dodata 3-metoksi-2-fenilsirćetna kiselina. Smeša je zagrevana na 50°C preko noći i zatim sipana u vodu (20 ml), talog je filtriran da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.22 (s, 1H), 7.00 - 7.06 (m, 2H), 6.78 - 6.82 (m, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.60 (m, 2H), 2.47 - 2.50 (m, 5H), 2.02 - 2.09 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.79 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 473.6

N-(5-((1S,3S)-3-(5-acetamido-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(2-metoksifenil)acetamid(94)

[0769]

[0770] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 90

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 7.29 - 7.37 (m, 2H), 6.95 -7.03 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.90 (s, 2H), 3.53 - 3.61 (m, 2H), 2.46 (m, 5H), 1.95 - 2.06 (m, 4H), 1.74 - 1.79 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 473.6

N-(5-((1S,3S)-3-(5-acetamido-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(piridin-2-il)acetamid (93)

[0771]

[0772] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 90

1H NMR (HLOROFORM-d) δ: 8.67 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.71 -7.78 (m, 1H), 7.35 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.31 (m, 1H), 4.10 (s, 2H), 3.55 - 3.64 (m, 2H), 2.47 (m, 5H), 1.95 - 2.08 (m, 4H), 1.78 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 444.6

5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin)

[0773]

Korak A: (S,S)- dibenzil ciklopentil 1,3-dikarboksilat

[0774]

[0775] U smešu cis i trans- ciklopentil 1,3-dikarboksilne kiseline (1.58 g, 10.0 mmol), Cs2CO3(8.28 g, 25.5 mmol) u DMF (20 mL) dodat je BnBr (4.36 g, 25.5 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod azotom u trajanju od 3 časa. Ostatak je razblažen vodom i ekstrahovan sa etil acetatom. Kombinovani organski rastvor je ispran vodom, sušen preko Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću standardnog postupka da bi se dobio trans-dibenzil ciklopentil 1,3-dikarboksilat.

[0776] Hiralno SFC odvajanje: cis- i trans- dibenzil ciklopentil 1,3-dikarboksilat je odojen pomoću hiralne SFC da bi se dobio (S,S)- dibenzil cikloheksil 1,3-dikarboksilat.

1H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.43 -7.34 (m, 10 H), 5.15 (s, 4H), 2.99 - 3.06 (m, 2H), 2.22 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.11 (m, 2H), 1.90 (m, 2H). LC-MS : m/z 171.2 (M-H)-. LC-MS : m/z (M+H) = 423.6

Korak B: (S,S)-ciklopentil 1,3-dikarboksilna kiselina

[0777]

[0778] U rastvor 0.5 g (S,S)-dibenzil ciklopentil 1,3-dikarboksilata u 10 mL MeOH dodat je 10% Pd na uglju (0.05 g). Suspenzija je isprana vodonikom i mešana 20 min. Zatim je filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo željeno jedinjenje. Konfiguracija je potvrđena putem poređenja optičke rotacije proizvoda sa standardnom vrednošću.

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.12 (br. s., 2H), 2.71 - 2.82 (m, 2H), 1.97 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 1.87 -1.94 (m, 2H), 1.64 - 1.76 (m, 2H). LC-MS : m/z 157.2 (M-H)-. [a] 20

D=+32.8, c = 5.0, H2O [objavljeno: [a] 20

D=+32.5, objavljeno u Aust. J. Chem.; 1979, 32,2517].

Korak C: 5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amin)

[0779]

[0780] Jedinjenje je sintetisano pomoću postupka sličnog dobijanju 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina).

1H NMR (DMSO-d6) δ: 7.06 (s, 4H), 3.49 - 3.55 (m, 2H), 2.22 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.14 - 2.20 (m, 2H), 1.78 - 1.89 (m, 2H). LC-MS : m/z 269.3 (M+H)

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(2-metoksifenil)acetamid) (284)

[0781]

[0782] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 7.14 - 7.32 (m, 4H), 6.85 - 7.03 (m, 4H), 3.54 - 3.83 (m, 12H), 2.39 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.32 (m, 2H), 1.99 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 565.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(3-(dimetilamino)fenil)acetamid) (285)

[0783]

[0784] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6): 12.66 (br. s., 2H), 7.11 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.70 (s, 2H), 6.61 (t, J = 6.0 Hz, 4H), 3.72 - 3.82 (m, 6H), 2.88 (s, 12H), 2.38 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.29 (m, 2H), 1.93 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 591.5

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-metoksipiridin-3-il)acetamid) (286)

[0785]

[0786] Postupak je bio isti kao za jedinjenje 37

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.71 (s, 2H), 8.09 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 7.65 (dd, J = 8.6,2.4 Hz, 2H), 6.80 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.83 (s, 6H), 3.77 (s, 4H), 3.74 (m, 2H), 2.38 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.24 - 2.34 (m, 2H), 1.89 - 2.02 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=567.8

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(5-metoksipiridin-2-il)acetamid) (287)

[0787]

[0788] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.61 (s, 2H), 8.27 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 6.84 (dd, J = 5.6, 2.4 Hz, 2H), 3.81 (s, 6H), 3.78 (s, 4H), 3.61 - 3.69 (m, 2H), 2.31 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.21 - 2.28 (m, 2H), 1.88 - 1.96 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=567.9

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid) (288)

[0789]

[0790] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.67 (s, 2H), 7.59 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.79 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.48 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 4.34 (t, J = 12.5 Hz, 8H), 3.86 (s, 4H), 3.74 - 3.79 (m, 2H), 2.40 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.27 - 2.36 (m, 2H), 1.89 - 2.02 (m, 2H). LCMS: m/z (M+H)=689.8

N,N’-(5,5’-((1S,3S)-ciklopentan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-5,2-diil))bis(2-(6-(dimetilamino)piridin-2-il)acetamid) (289)

[0791]

[0792] Postupak je bio isti kao za korak B jedinjenja 84

1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.67 (s, 2H), 7.46 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 6.52 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.55 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 3.81 (s, 4H), 3.49 (m, 2H), 2.98 (s, 12H), 2.38 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.22 -2.33 (m, 2H), 1.85 - 2.01 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=593.9

Jedinjenje 386

[0793]

Korak A: N-(5-((1S,3S)-3-(5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamid

[0794]

[0795] U rastvor 5,5’-((1S,3S)-cikloheksan-1,3-diil)bis(1,3,4-tiadiazol-2-amina) (1 g, 3.5 mmol) i tBuOK (392 mg, 3.5 mmol) u 15 mL DMF ukapavanjem je dodat metil 2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetat (0.6 g, 2.5 mmol) u 5 mL DMF. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 12 časova i ugašen zasićenim rastvorom NaHCO3. Dobijeni proizvod je prečišćen pod standardnim uslovima da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.

LC-MS : m/z (M+H)= 493.2

Korak B: (R)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-hidroksi-2-fenilacetamid

[0796]

[0797] Rastvor R-mandelinske kiseline (155 mg, 1 mmol), HBTU (380 mg, 1 mmol), N-(5-((1S,3S)-3-(5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamida (50 mg, 0.1 mmol) i DMAP (12 mg, 0.1 mmol) u 2 mL CH2Cl2je mešan 2 časa na sobnoj temperaturi. Smeša je ugašena sa H2O, ekstrahovana sa CH2Cl2i koncentrovana i prečišćena pomoću standardnog postupka da bi se dobio željeni proizvod.

1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ: 7.61 (dd, J = 8.2, 7.3 Hz, 1H), 7.54 (m, 2H), 7.37 (m, 3H), 6.81 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.61 (b.s., 1H), 4.38 (t, J = 12.2 Hz, 3H), 3.57 (m, 2H), 3.33 (s, 2H), 2.44 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.11 - 1.93 (m, 4H), 1.81 - 1.74 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 627.2

Jedinjenja 387, 388, 349, 389, 375, 390, 377 i 378, su pripremljena na analogan način kao jedinjenje 386:

(S)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-hidroksi-2-fenilacetamid (387)

[0798]

1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ: 7.62 -7.58 (dd, J = 8.3, 7.3 Hz, 1H), 7.54 (m, 2H), 7.43-7.32 (m, 3H), 6.81 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.61 (b.s., 1H), 4.38 (t, J = 12.2 Hz, 3H), 3.57 (m, 2H), 3.33 (s, 2H), 2.44 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.08 - 1.96 (m, 4H), 1.82 -1.71 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 627.2

2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(3-(trifluorometoksi)fenil)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (388)

[0799]

1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.54 (dd, J = 8.3, 7.3 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.34 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.50 (t, J = 11.8 Hz, 4H), 4.09 (s, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.60 (m, 2H), 2.59 - 2.41 (m, 2H), 2.11 - 1.91 (m,4H), 1.79 (s, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 695.2

2-ciklopropil-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid( 349)

[0800]

1H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) d: 7.74 (dd, J = 8.3, 7.3 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.77 (t, J = 11.8 Hz, 4H, 4H), 4.28 (s, 2H), 3.58 (m, 2H), 2.60 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 2.47 (m, 2H), 1.97-2.07 (m, 5H), 1.77 (m, 2H), 0.59 - 0.70 (m, 2H), 0.34 (q, J = 4.9 Hz, 2H); LC-MS : m/z (M+H)= 575.4

3-hidroksi-2-fenil-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(3-(trifluorometoksi)fenil)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)propanamide (389)

[0801]

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 7.44 - 7.51 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 7.32 -7.38 (m, 6H), 7.25 -7.32 (m, 2H), 5.10 (m, 1H), 3.99 - 4.15 (m, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.47 (m, 2H), 2.30 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.85 (m, 2H), 1.61 (m, 2H). LCMS : m/z (M+H)=633.5

2-(6-cijanopiridin-2-il)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(3-(trifluorometoksi)fenil)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (375)

[0802]

1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.81 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.46-7.38 (m, 2H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.33 (s, 2H), 4.07 (s, 2H), 3.60 (m, 2H), 2.49 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.07-2.10 (m, 2H), 2.00-2.05 (m, 2H), 1.71-1.95(m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)=629.2

2-(3-(aminometil)fenil)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(3-cijanofenil)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)cikloheksil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamid (390)

[0803]

1H NMR (HLOROFORM-d) d: 7.84 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.38 -7.45 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.32 (m, 1H), 7.23 (m, 2H), 4.08 (s, 2H), 4.02 (s, 2H), 3.92 (s, 2H), 3.61 (m, 2H), 2.22 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.02 (m, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.77 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 573.3

(S)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)ciklopentil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-hidroksi-2-fenilacetamid (377)

[0804]

1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.60 -7.50 (m, 3H), 7.37 (m, 3H), 6.68 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.35 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.51 (s, 1H), 5.37 (s, 1H), 4.53 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 3.88 (s, 2H), 3.84 - 3.71 (m, 2H), 2.62 - 2.46 (m, 2H), 2.40 (m, 2H), 2.10 - 1.98 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 613.2

(R)-N-(5-((1S,3S)-3-(5-(2-(6-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piridin-2-il)acetamido)-1,3,4-tiadiazol-2-il)ciklopentil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-hidroksi-2-fenilacetamid (378)

[0805]

1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.55 (m, 3H), 7.39 (m, 3H), 6.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.37 (s, 1H), 4.54 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 3.88 (s, 2H), 3.84 - 3.72 (m, 2H), 2.57 (m, 1H), 2.50 - 2.37 (m, 3H), 2.08 (m, 2H). LC-MS : m/z (M+H)= 613.2.

Claims (29)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (II) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:

   naznačeno time što X je C3-C7cikloalkilen svaki R1 i R2 je nezavisno -NH2, -N(R3)-C(O)-R4 , -C(O)-N(R3)-R4 , -N(R3)-C(O)-O-R4 , -N(R3)-C(O)-N(R3)-R4 ili -N(R3)-C(O)-SR4; svaki R3 je nezavisno vodonik, C1-6alkil ili aril; svaki R4 je nezavisno C1-6alkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, heterociklilalkil ili heterociklil, od kojih je svaki supstituisan sa 0-3 R5; svaki R5 je nezavisno C1-6alkil, C1-6alkoksi, -O-C1-6alkilenC1-6alkoksi, -O-heterociklil, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, cijano, halo, okso, -OH, -OCF3, -OCHF2, -SO2-C1- 6alkil, -NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7) 7 2, -N(R )S(O)1-2-C1-6alkil, -S(O)2N(R7)2, -N(R7)2ili -C1-6alkilen-N(R7)2, pri čemu je navedeni alkil, C1-6alkoksi, -OC1-6alkilenC1-6alkoksi, -O-heterociklil, C1-6tioalkoksi, C1-6haloalkil, C3-7cikloalkil, C3-7cikloalkilalkil, aril, heteroaril, aralkil, heteroaralkil, heterociklilalkil, heterociklil, -SO 7 2-C1-6alkil, -NO2, -N(R )-C(O)-C1-6alkil, -C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2-C1-6alkil, -S(O)2N(R7)2, -N(R7)2ili -C1-6alkilen-N(R7) 5 2izborno supstituisan sa 0-3 R8; ili dve susedne R grupe, uzete zajedno sa atomima za koje su vezane formiraju cikloalkil ili heterociklil; svaki R6je nezavisno vodonik, fluoro, C1-6alkil, -OH, -NH2, -NH(CH3), -N(CH3)2ili C1-6alkoksi; svaki R7 je nezavisno vodonik ili C1-6alkil; svaki R8 je nezavisno halo, C1-6alkil, C1-6haloalkil, -OH, -N(R7)2ili C1-6alkoksi, -O-C1- 6alkilenC1-6alkoksi, CN, NO2, -N(R7)-C(O)-C1-6alkil, - C(O)N(R7)2, -N(R7)S(O)1-2C1-6alkil ili -S(O)2N(R7)2; m je 0, 1 ili 2; n je 0, 1 ili 2; o je 1 p je 1 i pri čemu "alkil" označava zasićeni ugljovodonični lanac koji može biti prav lanac ili granati lanac, koji sadrži naznačeni broj atoma ugljenika; "aril" označava fenil, naftil ili antracenil; "heteroaril" označava 5-14 –člani aromatični sistem prstena koji ima 1-3 heteroatoma u prstenu ako je monocikličan, 1-6 heteroatoma u prstenu ako je bicikličan ili 1 -9 heteroatoma u prstenu ako je tricikličan, pri čemu su navedeni heteroatomi prstena nezavisno izabrani od O, N i S; "aralkil" označava C1-C12alkil grupu u kojoj alkil atom vodonika je zamenjen aril grupom; "heteroaralkil", označava C1-C12alkil grupu u kojoj alkil atom vodonika je zamenjen heteroaril grupom; "cikloalkil" označava ciklične, biciklične, triciklične ili policiklične nearomatične ugljovodonične grupe koje imaju 3 do 12 ugljenika. "cikloalkilalkil" označava C1-C12alkil grupu u kojoj alkil atom vodonika je zamenjen cikloalkil grupom; "heterociklilalkil", označava C1-C12alkil grupu u kojoj je alkil atom vodonika zamenjen heterocikličnom grupom; i "heterociklil" označava 3 do 14-člane ne-aromatične strukture prstena, čije strukture prstena obuhvataju jedan do četiri heteroatoma nezavisno izabranih od O, N i S; uz uslov da (1) kada je X nesupstituisani ciklopropil, R1 i R2 nisu oba -NH2ili -NH-C(O)-fenil; (2) kada je X nesupstituisani ciklopropil, i m i n su oba 1, tada R1 i R2 nisu oba -NH-C(O)-benzil.
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što m je 0 i n je 0.
3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što n je 1 i m je 1.
4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 3 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što svaki R<6>je vodonik.
5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što R<1>i R<2>su isti.
6. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što R<1>i R<2>su različiti.
7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što R<1>i R<2>su svaki -N(R<3>)-C(O)-R<4>pri čemu svaki R<3>je vodonik i svaki R<4>je aralkil ili heteroaralkil, od kojih je svaki supstituisan sa 0-3 R5.
8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što jedinjenje je jedinjenje formule (IIa):
9. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što jedinjenje je jedinjenje formule (III):
10. 10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što što jedinjenje je jedinjenje formule (IV) i q je 0, 1, 2, 3 ili 4:
11. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što jedinjenje je jedinjenje formule (IVa) i q je 0, 1, 2, 3 ili 4:
12. 12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što jedinjenje je jedinjenje formule (IVb) i q je 0, 1, 2, 3 ili 4:
13. 13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačena time što jedinjenje je jedinjenje formule (IVc) i q je 0, 1, 2, 3 ili 4:
14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je izabrano iz grupe koja se sastoji od:
15. 15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
16. 16. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
17. 17. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
18. 18. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
19. 19. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
20. 20. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
21. 21. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
22. 22. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
23. 23. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
24. 24. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
25. 25. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je
26. 26. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (II) prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 25 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač.
27. 27. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 25 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju kancera kod subjekta kod koga postoji potreba za tim.
28. 28. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 27, naznačeno time što kancer je izabran od kancera naznačenog i) niskim nivoom ekspresije E-kadherina u poređenju sa referentnim standardom, ii) visokim nivoom ekspresije vimentina u poređenju sa referentnim standardom, ili iii) niskim ili smanjenim nivoom ekspresije piruvat karboksilaze.
29. 29. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 27 ili 28, naznačeno time što je navedeni kancer izabran od nesitnoćelijskog kancera pluća, kancera dojke, hepatoćelijskog karcinoma, osteosarkoma, lipoma, hondrosarkoma, mezotelioma, kancera debelog creva, karcinoma bubrežnih ćelija, akutne mijeloidne leukemije (AML), melanoma i multiplog mijeloma. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5