RS57876B1

RS57876B1 - 1, 3, 4-tiadiazol jedinjenja i njihova upotreba pri lečenju raka

Info

Publication number: RS57876B1
Application number: RS20181101A
Authority: RS
Inventors: Maurice Raymond Verschoyle Finlay; Chukuemeka Tennyson Ekwuru; Mark David Charles; Piotr Antoni Raubo; Jonathan James Gordon Winter; Johannes Wilhelmus Maria Nissink
Original assignee: Astrazeneca Ab; Cancer Research Tech Ltd
Priority date: 2014-05-30
Filing date: 2015-05-27
Publication date: 2018-12-31
Also published as: PT3148994T; ES2688396T3; EA030937B1; US10040788B2; AU2015265703A1; HUE039879T2; DOP2016000308A; TW201609720A; US20170197954A1; UY36145A; TN2016000511A1; CA2949598A1; AP2016009578A0; CY1120836T1; CN106795150B; TWI693220B; IL249020B; NZ726790A; CR20160558A; EP3148994B1

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Opis se uopšteno odnosi na zamenjena 1,3,4-tiadiazol jedinjenja i farmaceutski prihvatljive soli navedenog. Ova jedinjenja deluju na enzimu glutaminaza 1 („GLS1“) i opis se stoga takođe odnosi na upotrebu takvih jedinjenja i soli navedenog za lečenje ili sprečavanje bolesti posredovane sa GLS1, uključujući rak. Opis se dalje odnosi na kristalne oblike jedinjenja zamenjenih 1,3,4-tiadiazol jedinjenja i farmaceutski prihvatljivih soli navedenog; farmaceutske sastave koji sadrže takva jedinjenja i soli; komplete koji sadrže takva jedinjenja i soli; metode za proizvodnju takvih jedinjenja i soli; međujedinjenja od koristi pri proizvodnji takvih jedinjenja i soli; i na metode za lečenje bolesti posredovane sa GLS1 kinazom, uključujući rak, upotrebom takvih jedinjenja i soli.

POZADINA

[0002] Glutamin je najčešća amino kiselina u plazmi i uključena je u mnogo puteva za pospešivanje rasta. Naročito, glutamin je uključen u oksidaciju u TCA ciklusu i u održavanju ravnoteže oksido-redukcije u ćeliji i takođe pruža azot za nukleotid i sintezu amino kiseline ((Curi i dr., Front. Biosc.2007, 12, 344-57; DeBardinis i Cheng, Oncogene 2009, 313-324). Mnogi rakovi se oslanjaju na metabolizam glutamina kao posledicu metaboličkih promena u ćeliji, uključujući Varburgov efekat gde se glikolitički piruvat pretvara u mlečnu kiselinu pre nego što se koristi za stvaranje Acetil CoA (Koppenol i dr., Nature Reviews 2011, 11, 325-337). Kao posledica ovog oslanjanja na metabolizam glutamina, takve ćelije raka su osetljive na promene u egzogenim nivoima glutamina. U nastavku, postoji mnogo dokaza koji predlažu da glutaminoliza ima ključnu ulogu u određenim vrstama raka (Hensley i dr., J.

Clin. Invest. 2013, 123, 3678- 3684) i da je povezana sa poznatim onkogenim predvodnicima kao što je Myc (Dang, Cancer Res.2010, 70, 859-863).

[0003] Prvi korak katabolizma glutamina do glutamata je katalizovanje sa glutaminazom, koja postoji kao 2 izoforme, GLS1 i GLS2, originalno identifikovane da se izražavaju u bubregu i jetri, redom. Glutaminaza u bubregu (GLS1) je poznato da se svojevrsnije izražava od glutaminaze u jetri (GLS2) i ima 2 povezane varijante, KGA i kraću GAC izoformu, koje se obe nalaze u mitohondrijama. (Elgadi i dr., Physiol. Genomics 1999, 1, 51-62; Cassago i dr., Proc. Natl. Acad. Sci.2012, 109, 1092-1097). Izražavanje GLS1 je povezano sa rastom tumora i malignitetima kod više vrsta bolesti (Wang i dr., Cancer Cell 2010, 18, 207-219; van der Heuval i dr., Cancer Bio. Ther. 2012, 13, 1185-1194). Inhibitori GLS1 se toga očekuju da budu od koristi pri lečenju raka, kao monoterapija ili u kombinaciji sa drugim sredstvima protiv raka. Određena jedinjenja od koristi kao inhibitori glutaminaze su poznata, na primer, iz WO2013078123, US2014142081 i Ajit i dr., Biochemical and Biophysical Research Communications 2014, 443, 32-36.

REZIME PRONALASKA

[0004] Ukratko, ovaj opis opisuje, delom, jedinjenje Formule (I):

ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il, 1,2,4-triazin-3-il ili 1,2,4-triazin-6-il;

R predstavlja vodonik, fluor ili metoksi;

R<1>predstavlja vodonik, metoksi, difluorometoksi ili trifluorometoksi; i

R<2>predstavlja metil ili etil.

[0005] Ovaj opis takođe opisuje, delom, farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač.

[0006] Ovaj opis takođe opisuje, delom, jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog za upotrebu u terapiji.

[0007] Ovaj opis takođe opisuje, delom, jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog za upotrebu pri lečenju raka.

[0008] Ovaj opis takođe opisuje, delom, upotrebu jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog, za proizvodnju medikamenta za lečenje raka.

[0009 Ovaj opis takođe opisuje, delom, metodu za lečenje raka kod toplokrvnih životinja koje imaju potrebu za takvim lečenjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog.

KRATAK OPIS SLIKA

[0010]

Slika 1: Obrazac rendgenske difrakcije praška za Oblik D (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida.

Slika 2: Umanjenje rasta tumora kod Ksenograft mišijeg modela sa (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamidom.

Slika 3: Umanjenje rasta tumora kod Ksenograft mišijeg modela sa (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamidom u kombinaciji sa Taxotere®.

OPIS PRIKAZNIH OTELOTVORENJA

[0011] Mnoga otelotvorenja prema pronalasku izneta su detaljno kroz opis i biće očigledna stručnom čitaoc. Pronalazak je definisan sa priloženim patentnim zahtevima. U prvom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I):

ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il, 1,2,4-triazin-3-il ili 1,2,4-triazin-6-il; R predstavlja vodonik, fluor ili metoksi;

R<1>predstavlja vodonik, metoksi, difluorometoksi ili trifluorometoksi; i R<2>predstavlja metil ili etil.

[0012] U daljem otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA):

ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog, gde:

[0013] U daljem otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB):

ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il, 1,2,4-triazin-3-il ili 1,2,4-triazin-6-il;

R predstavlja vodonik, fluor ili metoksi;

R<1>predstavlja vodonik, metoksi, difluorometoksi ili trifluorometoksi; i

R<2>predstavlja metil ili etil.

[0014] Radi izbegavanja sumnje, jedinjenja prema Formuli (IA) ili (IB) su takođe jedinjenja prema Formuli (I) kako njihove strukture padaju u okvir definicije Formule (I).

[0015] Piridazin-3-il, 1,2,4-triazin-3-il i 1,2,4-triazin-6-il prsteni imaju sledeće strukture:

[0016] U strukturama od iznad isprekidana linija ukazuje na mesto povezivanja odgovarajuće grupe za pirolidin azot u formuli (I), (IA) ili (IB).

[0017] Termin „farmaceutski prihvatljiv“ se koristiti za ukazivanje da je objekat (na primer so, oblik za doziranje, razblaživač ili nosač) pogodan za upotrebu kod pacijenata. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli mogu se pronaći u Handbook of Pharmaceutical Salts:

Properties, Selection and Use, P. H. Stahl i C. G. Wermuth, urednici, Weinheim/Zürich: Wiley-VCH/VHCA, 2002. Pogodna farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja prema Formuli(I), (IA) ili (IB) je, na primer, kisela adiciona so. Kisela adiciona so jedinjenje prema Formuli (I), (IA) ili (IB) može biti obrazovana dovođenjem jedinjenja u dodir sa pogodnom neorganskom ili organskom kiselinom pod uslovima poznatim stručnoj osobi. Kisela adiciona so može, na primer, biti obrazovana upotrebom neorganske kiseline izabrane iz grupe koju čine hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina i fosforna kiselina. Kisela adiciona so može, na primer, biti obrazovana upotrebom organske kiseline izabrane iz grupe koju čine trifluorosirćetna kiselina, metansulfonska kiselina i benzensulfonska kiselina.

[0018] Stoga, u jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, trifluorosirćetna kiselina, metansulfonska kiselina ili benzensulfonska kiselina. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, trifluorosirćetna kiselina, metansulfonska kiselina ili benzensulfonska kiselina. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, trifluorosirćetna kiselina, metansulfonska kiselina ili benzensulfonska kiselina.

[0019] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so hlorovodonična kiselina, ili bromovodonična kiselina. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so hlorovodonična kiselina, ili bromovodonična kiselina. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so hlorovodonična kiselina, ili bromovodonična kiselina.

[0020] Dalja pogodna farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja prema Formuli (I), (IA) ili (IB) je, na primer, kisela adiciona so. Bazna adiciona so jedinjenja prema Formuli (I), (IA) ili (IB) može biti obrazovana dovođenjem jedinjenja u dodir sa pogodnom neorganskom ili organskom kiselinom pod uslovima poznatim stručnoj osobi. Bazna adiciona so može, na primer, biti obrazovana upotrebom neorganske baze izabrane iz grupe koju čine hidroksid alkalnih metala (kao što su natrijum, kalijum ili litijum hidroksid) ili hidroksid zemnoalkalnih metala (kao što je kalcijum hidroksid ili magnezijum hidroksid). Bazna adiciona so može biti obrazovana upotrebom organske baze izabrane iz grupe koju čine metilamin, dimetilamin, trimetilamin, piperidin, morfolin i tris-(2-hidroksietil)amin.

[0021] Stoga u jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so natrijum hidroksid, kalijum hidroksid, litijum hidroksid, kalcijum hidroksid, magnezijum hidroksid, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, piperidin, morfolin ili tris-(2-hidroksietil)amin so. [0021] Stoga u jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so natrijum hidroksid, kalijum hidroksid, litijum hidroksid, kalcijum hidroksid, magnezijum hidroksid, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, piperidin, morfolin ili tris-(2-hidroksietil)amin so. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so natrijum hidroksid, kalijum hidroksid, litijum hidroksid, kalcijum hidroksid, magnezijum hidroksid, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, piperidin, morfolin ili tris-(2-hidroksietil)amin so.

[0022] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, trifluorosirćetna kiselina, metansulfonska kiselina ili benzensulfonska kiselina, natrijum hidroksid, kalijum hidroksid, litijum hidroksid, kalcijum hidroksid, magnezijum hidroksid, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, piperidin, morfolin ili tris-(2-hidroksietil)amin so. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, trifluorosirćetna kiselina, metansulfonska kiselina ili benzensulfonska kiselina, natrijum hidroksid, kalijum hidroksid, litijum hidroksid, kalcijum hidroksid, magnezijum hidroksid, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, piperidin, morfolin ili tris-(2-hidroksietil)amin so. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, trifluorosirćetna kiselina, metansulfonska kiselina ili benzensulfonska kiselina, natrijum hidroksid, kalijum hidroksid, litijum hidroksid, kalcijum hidroksid, magnezijum hidroksid, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, piperidin, morfolin ili tris-(2-hidroksietil)amin so.

[0023] Dalje otelotvorenje pruža bilo koje od ovde definisanih otelotvorenja (na primer otelotvorenje prema patentnom zahtevu 1) uz uslov da je jedan ili više specifičnih Primera (na primer jedan, dva ili tri specifična Primera, ili alternativno dva specifična Primera ili alternativno jedan specifičan Primer) izabranih iz grupe koju čine Primeri 1(a), 1(b), 2(a), 2(b), 3, 4(a), 4(b), 5(a), 5(b), 6(a), 6(b), 7(a), 7(b), 8(a), 8(b), 9(a), 9(b), 10(a), 10(b), 11, 12(a), 12(b), 13(a), 13(b), 14(a), 14(b), 15(a), 15(b), 16(a), 16(b), 17(a), 17(b), 18(a), 18(b), 19(a), 19(b), 20(a), 20(b), 21(a), 21(b), 22(a), 22(b), 23(a), 23(b), 24, 25(a), 25(b), 26(a), 26(b), 27(a), 27(b), 28(a), 28(b), 29(a), 29(b), 30(a), 30(b), 31(a), 31(b), 32(a), 32(b), 33(a), 34(b), 34(a) i 35(b) pojedinačno odbačen.

[0024] Neke vrednosti promenjivih grupa u Formuli (I), (IA) ili (IB), kao i u Formuli (II) ili (III) (kao što je opisano u daljem tekstu) su kao što sledi. Takve vrednosti mogu biti korišćene u kombinaciji sa bilo kojom od definicija, patentnih zahteva (na primer patentni zahtev 1) ili otelotvorenja ovde definisanih kako bi se pružila dalja otelotvorenja.

a) Q predstavlja 1,2,4-triazin-3-il ili 1,2,4-triazin-6-il.

b) Q predstavlja piridazin-3-il ili 1,2,4-triazin-3-il.

c) Q predstavlja 1,2,4-triazin-3-il.

d) Q predstavlja 1,2,4-triazin-6-il.

e) Q predstavlja piridazin-3-il.

f) R predstavlja vodonik ili fluor.

g) R predstavlja fluor ili metoksi.

h) R predstavlja vodonik.

i) R predstavlja fluor.

j) R predstavlja metoksi.

k) R<1>predstavlja vodonik.

l) R<1>predstavlja metoksi, difluorometoksi ili trifluorometoksi.

m) R<1>predstavlja metoksi ili difluorometoksi.

n) R<1>predstavlja metoksi ili trifluorometoksi.

o) R<1>predstavlja difluorometoksi ili trifluorometoksi.

p) R<1>predstavlja metoksi.

q) R<1>predstavlja difluorometoksi.

r) R<1>predstavlja trifluorometoksi.

s) R<2>predstavlja metil.

t) R<2>predstavlja etil.

[0025] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il ili 1,2,4-triazin-3-il.

R predstavlja vodonik.

R<1>predstavlja vodonik, metoksi, difluorometoksi ili trifluorometoksi; i

R<2>predstavlja metil ili etil.

[0026] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il ili 1,2,4-triazin-3-il.

R predstavlja fluor ili metoksi.

R<1>predstavlja vodonik, i

R<2>predstavlja metil ili etil.

[0027] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il.

R predstavlja vodonik, fluor ili metoksi;

R<1>predstavlja vodonik, i

R<2>predstavlja metil ili etil.

[0028] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il ili 1,2,4-triazin-3-il.

R predstavlja vodonik.

[0029] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il ili 1,2,4-triazin-3-il.

R predstavlja fluor ili metoksi.

R<1>predstavlja vodonik, i

R<2>predstavlja metil ili etil.

[0030] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il.

R predstavlja vodonik, fluor ili metoksi;

R<1>predstavlja vodonik, i

R<2>predstavlja metil ili etil.

[0031] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il ili 1,2,4-triazin-3-il.

R predstavlja vodonik.

[0032] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde:

1

Q predstavlja piridazin-3-il ili 1,2,4-triazin-3-il.

R predstavlja fluor ili metoksi.

R<1>predstavlja vodonik, i

R<2>predstavlja metil ili etil.

[0033] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde:

Q predstavlja piridazin-3-il.

R predstavlja vodonik, fluor ili metoksi;

R<1>predstavlja vodonik, i

R<2>predstavlja metil ili etil.

[0034] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:

(2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid;

(2R)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid;

(2S)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid;

(2R)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid;

(2S)-2-etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-Metoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

(2R)-2-etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-etoksi-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-etoksi-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid;

(2R)-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid; (2S)-2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-(trideuteriometoksi)acetamid;

(2R)-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-(trideuteriometoksi)acetamid;

(2S)-2-Deuterio-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-(trideuteriometoksi)acetamid;

(2R)-2-Deuterio-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-(trideuteriometoksi)acetamid;

(2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid;

(2R)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid;

(2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

1

(2S)-2-(3,4-Dimetoksifenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-(3,4-Dimetoksifenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-(3,4-Dimetoksifenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-(3,4-Dimetoksifenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-etoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-etoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-etoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-etoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-etoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-etoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-etoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-etoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-etoksi-2-(4-fluoro-3-metoksi-fenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-etoksi-2-(4-fluoro-3-metoksi-fenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-etoksi-2-(4-fluoro-3-metoksi-fenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-etoksi-2-(4-fluoro-3-metoksi-fenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-etoksi-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; i

(2R)-2-etoksi-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0035] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog, gde je jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:

(2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2R)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

(2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-thidiazol-2-il]acetamid;

1

(2S)-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid; i

(2R)-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid.

[0036] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:

(2S)-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid; i (2R)-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid.

[0037] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:

(2S)-2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid;

1

(2R)-2-etoksi-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

1

[0038] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:

(2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; i

(2S)-2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0039] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog.

[0040] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

2

[0041] U jednom otelotvorenju dat je, ili ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog (2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0042] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamidili farmaceutski prihvatljiva so navedenog.

[0043] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0044] U jednom otelotvorenju dat je, ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0045] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamidili farmaceutski prihvatljiva so navedenog.

[0046] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid..

[0047] U jednom otelotvorenju dat je, ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog (2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid..

[0048] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-[3-(difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog.

[0049] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-[3-(difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid .

[0050] U jednom otelotvorenju dat, ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog (2S)-2-[3-(difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0051] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamidili farmaceutski prihvatljiva so navedenog.

[0052] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0053] U jednom otelotvorenju dat je, ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog (2S)-2-etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0054] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamidili farmaceutski prihvatljiva so navedenog.

[0055] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0056] U jednom otelotvorenju dat je, ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog (2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0057] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-(4-fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamidili farmaceutski prihvatljiva so navedenog.

[0058] U jednom otelotvorenju dat je (2S)-2-(4-fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piradazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0059] U jednom otelotvorenju dat je, ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog (2S)-2-(4-fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0060] Jedinjenja i soli opisana u ovom opisu mogu postojati u solvatisanim oblicima ili nesolvatisanim oblicima. Na primer, solvatisani oblik može biti hidriran oblik, kao što je hemi-hidrat, mono-hidrat, di-hidrat, tri-hidrat ili alternativna količina navedenog. Predmetni pronalazak obuhvata svet takve solvatisane i nesolvatisane oblike jedinjenja prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljivih soli bilo kojeg od ovih jedinjenja.

[0061] Atomi jedinjenja i soli opisanih u ovom opisu mogu postojati kao njihovi izotopi. Predmetni pronalazak obuhvata sva jedinjenja prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od ovih jedinjenja gde je atom zamenjen sa jednim ili više svojih izotopa (na primer jedinjenje prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so bilo kog od ovih jedinjenja gde je jedan ili više atom ugljenika<11>C ili<13>C izotop atoma ugljenika ili gde je jedan ili više atoma vodonika<18>F izotop, ili gde je jedan ili više atoma vodonika<2>H (deuterijum) ili<3>H (tricijum) izotop).

[0062] Jedinjenja i soli opisana u ovom opisu mogu postojati kao smeša tautomera.

„Tautomeri“ su strukturalni izomeri koji postoje u ravnoteži koja nastaje iz migracije atoma vodonika. Predmetni pronalazak obuhvata sva jedinjenja prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so bilo kog od ovih jedinjenja.

[0063] Jedinjenja prema Formuli (I), (IA) i (IB) i farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od ovih jedinjenja postoje kao diastereomeri zahvaljujući njihovim asimetričnim atomima ugljenika.

[0064] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, koje je diasteromerni višak (%de) ≥ 95%, ≥ 98% ili ≥ 99%. U jednom otelotvorenju, jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog je prisutno u diastereomernom višku (%de) ≥ 99%. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, koje je diasteromerni višak (%de) ≥ 95%, ≥ 98% ili ≥ 99%. U jednom otelotvorenju, jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog je prisutno u diastereomernom

2

višku (%de) ≥ 99%. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, koje je diasteromerni višak (%de) ≥ 95%, ≥ 98% ili ≥ 99%. U jednom otelotvorenju, jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog je prisutno u diastereomernom višku (%de) ≥ 99%.

[0065] Jedinjenja i soli opisane u ovom opisu mogu biti kristalne i mogu pokazivati jedan ili više kristalnih oblika. Pronalazak obuhvata takve kristalne oblike jedinjenja prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljivih soli bilo kog od ovih jedinjenja. Uopšteno je poznato da kristalni materijali mogu biti okarakterisani upotrebom konvencionalnih tehnika kao što je rendgenska difrakcija praška (XRPD), diferencijalna kalorimetrija sa skeniranjem (DSC), termalna gravimetrijska analiza (TGA), spektroskopija sa Furijeovom transformacijom difuzne refleksije infracrvenog zračenja (DRIFT), bliska infracrvena (NIR) spektroskopija, spektroskopija rastvora i/ili nuklearna magnetna rezonanca čvrstog stanja. Sadržaj vode takvih kristalnih materijala može biti određen preko Karl Fischer analize.

[0066] Posebni čvrsti oblici koji su ovde opisani pružaju XRPD obrasce suštinski iste kao što su XRPD obrasci prikazani na Slikama, i imaju promenjive 2-teta vrednosti kao što je prikazano u ovde uključenim Tabelama. Stručna osoba u oblasti će prihvatiti da se XRPD obrazac ili difraktogram može dobiti koji ima jednu ili više grešaka pri merenju u zavisnosti od uslova beleženja, kao što su oprema ili mašina koja se koristi. Slično tome, uopšteno je poznato da intenziteti kod XRPD obrasca mogu fluktuirati u zavisnosti od uslova merenja ili pripremanja uzorka kao rezultat poželjne orijentacije. Relativni intenzitet maksimuma može takođe biti pogođen sa, na primer, zrnima veličine preko 30µm i nejedinstvenim odnosima. Stručna osoba shvata da položaj refleksija može biti pogođen sa preciznom visinom pri kojoj uzorak stoji u difraktometru i takođe nulovanje difraktometra. Površinska planarnost uzorka takođe može imati mali uticaj.

[0067] Kao rezultat ovih razmatranja, predstavljeni podaci obrasca difrakcije se ne bi trebalo uzeti kao apsolutne vrednosti (Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), 'Chemical Crystallography', Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), 'X-Ray Diffraction Procedures'). Shodno bi trebalo bi prihvatiti da čvrsti oblici prema predmetnom pronalasku nisu ograničeni na kristale koji daju XRPD obrasce koji su identični sa XRPD obrascima prikazanim na Slikama i bilo koji kristali koji daju XRPD obrasce koji su suštinski isti kao oni prikazani na Slikama padaju u okvir predmetnom pronalaska. Stručna osoba u oblasti XRPD je u stanju da proceni suštinsku identičnost XRPD obrazaca. Uopšteno, greška pri merenju difrakcionog ugla kod XRPD je približno plus ili minus 0.2° 2-teta i takav stepen greške pri merenju bi se trebalo uzeti u obzir pri razmatranju obrazaca rendgenske difrakcije praška na Slikama i pri čitanju podataka sadržanih u ovde uključenim Tabelama.

[0068] Jedinjenje iz Primera 2 pokazuje kristalna svojstva i jedan kristalni oblik je ovde okarakterisan.

[0069] Stoga, u jednom otelotvorenju dat je Oblik D za (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0070] U jednom otelotvorenju dat je kristalni oblik, Oblik D za (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praška sa bar jednim specifičnim maksimumom pri 2-teta = 7.9° plus ili minus 0.2° 2-teta.

[0071] U jednom otelotvorenju dat je kristalni oblik, Oblik D za (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praška sa bar jednim specifičnim maksimumom pri 2-teta = 19.3° plus ili minus 0.2° 2-teta.

[0072] U jednom otelotvorenju dat je kristalni oblik, Oblik D za (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praška sa bar dva specifična maksimuma pri 2-teta = 7.9 i 19.3° plus ili minus 0.2° 2-teta.

[0073] U jednom otelotvorenju dat je kristalni oblik, Oblik D za (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praška sa specifičnim maksimuma pri 2-teta = 7.9, 8.3, 14.6, 18.4, 18.9, 19.3, 21.2, 24.4, 24.6 i 25.3° plus ili minus 0.2° 2-teta.

[0074] U jednom otelotvorenju dat je kristalni oblik, Oblik D za (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid, koji ima obrazac

2

rendgenske difrakcije praška suštinski isti kao obrazac rendgenske difrakcije praška prikazan na Slici 1.

[0075] Trebalo bi prihvatiti da se uz date greške kod 2-teta vrednosti može kod dva bliska maksimuma pojaviti sjedinjavanje radi formiranja jednog maksimuma pod određenim uslovima. Na primer, u okarakterisanim obrascima rendgenske difrakcije praška od iznad, maksimumi pri 7.9 i 8.3° 2-teta i maksimumi pri 18.9 i 19.3° 2-teta se mogu preklopiti pod određenim uslovima. Stoga, očigledno odsustvo maksimuma se ne bi trebalo automatski protumačiti kao nedostatak suštinske identičnosti.

[0076] Kada je navedeno da se otelotvorenje odnosi na kristalni oblik, stepen kristalnosti može biti veći od oko 60%. U nekim otelotvorenjima stepen kristalnosti je veći od oko 80%. U nekim otelotvorenjima stepen kristalnosti je veći od oko 90%. U nekim otelotvorenjima stepen kristalnosti je veći od oko 95%. U nekim otelotvorenjima stepen kristalnosti je veći od oko 98%.

[0077] Jedinjenja prema Formuli (I) mogu, na primer, biti pripremljena reakcijom jedinjenja prema Formuli (II):

[0078] Gde je Q kao što je definisano u bilo kom od otelotvorenja ovde (na primer kao što je definisano u bilo kojoj od Q definicija navedenoj pod stavkama (a)-(s) u tekstu iznad), sa jedinjenjem prema Formuli (III):

2

[0079] Gde su R, R<1>i R<2>kao što je definisano u bilo kom od otelotvorenja ovde (na primer kao što je definisano u bilo kojoj od R, R<1>, i R<2>definicija navedenoj pod stavkama (a)-(s) u tekstu iznad)) i X je napuštajuća grupa, kao što je halogeni atom (na primer atom hlora) ili hidroksi grupa. Reakcija se konvencionalno vrši u pogodnom rastvaraču (na primer, N,N-dimetilformamid ili N,N-dimetilacetamid) i u prisustvu baze (na primer, di-izopropil etilamin) na pogodnoj temperaturi (na primer na sobnoj temperaturi (oko 20 do 30°C) ili povišenoj temperaturi, kao što je između 80 i 120°C, konvencionalni pri oko 100°C. Gde X predstavlja hidroksi grupu, pogodno sredstvo za spajanje (na primer HATU) je korišćeno za obrazovanje amidne veze.

[0080] Jedinjenja prema Formuli (III) i soli navedenog su, stoga, od koristi kao međujedinjenja za pripremanje jedinjenja prema Formuli (I) i pružaju dalje otelotvorenje prema opisu. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (III) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde:

R predstavlja vodonik.

R<1>predstavlja difluorometoksi ili trifluorometoksi.

R<2>predstavlja metil ili etil; i

X predstavlja napuštajuću grupu. U jednom otelotvorenju, X je hidroksi ili hlor. U jednom otelotvorenju, X je hidroksi.

[0081] U jednom otelotvorenju data je 2-[3-(difluorometoksi)fenil]-2-metoksisirćetna kiselina, ili so navedenog.

[0082] U jednom otelotvorenju data je 2-metoksi-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]sirćetna kiselina, ili so navedenog.

[0083] U jednom otelotvorenju data je 2-etoksi-2-(4-fluorofenil)sirćetna kiselina, ili so navedenog.

[0084] U jednom otelotvorenju data je 2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-sirćetna kiselina, ili so navedenog.

[0085] U jednom otelotvorenju data je 2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-etoksi-sirćetna kiselina, ili so navedenog.

2

[0086] U jednom otelotvorenju data je 2-etoksi-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]sirćetna kiselina, ili so navedenog.

[0087] U jednom otelotvorenju data je 2-[3-(difluorometoksi)fenil]-2-metoksisirćetna kiselina.

[0088] U jednom otelotvorenju data je 2-metoksi-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]sirćetna kiselina.

[0089] U jednom otelotvorenju data je 2-etoksi-2-(4-fluorofenil)sirćetna kiselina.

[0090] U jednom otelotvorenju data je 2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-sirćetna kiselina.

[0091] U jednom otelotvorenju data je 2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-etoksi-sirćetna kiselina.

[0092] U jednom otelotvorenju data je 2-etoksi-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]sirćetna kiselina.

[0093] Jedinjenja prema formuli (II) i formuli (III) mogu biti pripremljena sa metodama sličnim onima kao što je prikazano u odeljku za Primere.

[0094] Pogodna so jedinjenja prema Formuli (III) je bazna adiciona so. Bazna adiciona so jedinjenja prema Formuli (III) može biti obrazovana dovođenjem jedinjenja u dodir sa pogodnom neorganskom ili organskom kiselinom pod uslovima poznatim stručnoj osobi. Takvi uslovi ne moraju stvoriti farmaceutski prihvatljive soli. Bazna adiciona so može, na primer, biti obrazovana upotrebom neorganske baze izabrane iz grupe koju čine hidroksid alkalnih metala (kao što su natrijum, kalijum ili litijum hidroksid) ili hidroksid zemnoalkalnih metala (kao što je kalcijum hidroksid ili magnezijum hidroksid). Bazna adiciona so može biti obrazovana upotrebom organske baze izabrane iz grupe koju čine metilamin, dimetilamin, trimetilamin, piperidin, morfolin i tris-(2-hidroksietil)amin.

[0095] Stoga u jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (III) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde je farmaceutski prihvatljiva so natrijum hidroksid, kalijum

2

hidroksid, litijum hidroksid, kalcijum hidroksid, magnezijum hidroksid, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, piperidin, morfolin ili tris-(2-hidroksietil)amin so.

[0096] Kao rezultat njihove GLS1 inhibitorske aktivnosti, jedinjenja prema Formuli (I), (IA) i (IB) i farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od ovih jedinjenja se očekuju da budu od koristi u terapiji, na primer, pri lečenju bolesti ili medicinskih stanja posredovanih bar delom sa GLS1, uključujući rak.

[0097] Kada se spomene „rak“, to obuhvata oba, rak koji nije metastazirao i takođe rak koji je metastazirao, tako da lečenje raka obuhvata lečenje oba, primarnih tumora i metastaza tumora.

[0098] U bilo kom otelotvorenju gde se spominje rak u opštem smislu sledeća otelotvorenja se mogu primeniti:

U jednom otelotvorenju rak je rak dojke. U jednom otelotvorenju rak je trostruko negativni rak dojke.

[0099] „Trostruko negativni rak dojke“ je bilo koji rak dojke koji ne pokazuje gene za receptor estrogena, receptor progesterona i Her2/neu.

[0100] U jednom otelotvorenju rak je hepatoćelijski karcinom.

[0101] U jednom otelotvorenju rak je rak pluća. U jednom otelotvorenju rak pluća je rak malih ćelija pluća. U jednom otelotvorenju rak pluća je rak ne-ćelija pluća.

[0102] U jednom otelotvorenju rak je rak pankreasa.

[0103] U jednom otelotvorenju rak je rak bešike.

[0104] U jednom otelotvorenju rak je rak koji je metastazirao.

[0105] U jednom otelotvorenju rak je rak koji nije metastazirao.

2

[0106] „GLS1 inhibitorska aktivnost“ se odnosi na smanjenje aktivnosti GLS1 kao neposredni ili posredni odgovor na prisustvo jedinjenje prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so bilo kod od ovih jedinjenja, relativno u odnosu na aktivnost GLS1 pri odsustvu jedinjenje prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so bilo kod od ovih jedinjenja. Takvo smanjenje aktivnosti može biti usled neposredne interakcije jedinjenja prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od ovih jedinjenja sa GLS1 ili usled interakcije jedinjenja prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od ovih jedinjenja sa jednim ili više faktora koji zauzvrat utiču na aktivnost GLS1. Na primer, jedinjenje prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so bilo kog od ovih jedinjenja može smanjiti GLS1 direktnim vezivanjem za GLS1, izazivanjem (neposredno ili posredno) drugi faktor za smanjenje GLS1 aktivnosti, ili sa (neposrednim ili posrednim) smanjenjem količine GLS1 prisutne u ćeliji ili organizmu.

[0107] Termin „terapija“ je namenjen na ima svoje obično značenje suočavanja sa bolesti u cilju da se u potpunosti ili delimično olakša jedan, nekoliko ili svi njeni simptomi, ili za popravljanje ili nadoknađivanje osnovne patologije. Termin „terapija“ takođe obuhvata „profilaksu“ ukoliko postoje posebna ukazivanja na suprotno. Termini „terapeutsko“ ili „terapeutski“ bi trebalo da budu protumačeni na odgovarajući način.

[0108] „Termin“ profilaksa je namenjen da ima svoje normalno značenje i da obuhvata primarnu profilaksu za sprečavanje razvijanja bolesti i sekundarnu profilaksu gde se bolest već razvila i pacijent je privremeno ili stalno zaštićen protiv otežavanja ili pogoršanja bolesti ili razvijanja novih simptoma povezanih sa bolesti.

[0109] Termin „lečenje“ se koristi kao sinonim sa „terapijom“. Slično, termin „lečiti“ može se odnositi na primenjivanje terapije, gde je „terapija“ kao što je ovde definisano.

[0110] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, za upotrebu u terapiji. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, za upotrebu u terapiji. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, za upotrebu u terapiji.

[0111] U jednom otelotvorenju data je opisana upotreba jedinjenja prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog, za proizvodnju medikamenta. U jednom otelotvorenju data je opisana upotreba jedinjenja prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog, za proizvodnju medikamenta. U jednom otelotvorenju data je opisana upotreba jedinjenja prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog, za proizvodnju medikamenta.

[0112] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog za upotrebu pri lečenju bolesti posredovane sa GLS1. U jednom otelotvorenju, navedena bolest posredovana sa GLS1 je rak. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koju čine rak dojke (na primer, trostruko negativni rak dojke), rak pluća (na primer rak ne-malih ćelija pluća), rak pankreasa, rak bešike i hepatoćelijski karcinom. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog za upotrebu pri lečenju bolesti posredovane sa GLS1. U jednom otelotvorenju, navedena bolest posredovana sa GLS1 je rak. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koju čine rak dojke (na primer, trostruko negativni rak dojke), rak pluća (na primer rak ne-malih ćelija pluća), rak pankreasa, rak bešike i hepatoćelijski karcinom. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog za upotrebu pri lečenju bolesti posredovane sa GLS1. U jednom otelotvorenju, navedena bolest posredovana sa GLS1 je rak. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koju čine rak dojke (na primer, trostruko negativni rak dojke), rak pluća (na primer rak ne-malih ćelija pluća), rak pankreasa, rak bešike i hepatoćelijski karcinom.

[0113] U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog za upotrebu pri lečenju raka. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog za upotrebu pri lečenju raka. U jednom otelotvorenju dato je jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog za upotrebu pri lečenju raka. Ovde je opisana upotreba jedinjenja prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog, za proizvodnju medikamenta za lečenje bolesti posredovane sa GLS1. U jednom otelotvorenju, navedena bolest posredovana sa GLS1 je rak. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koju čine rak dojke (na primer, trostruko negativni rak dojke), rak pluća (na primer rak ne-malih ćelija pluća), rak pankreasa, rak bešike i hepatoćelijski karcinom. Ovde je opisana upotreba

1

jedinjenja prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog, za proizvodnju medikamenta za lečenje bolesti posredovane sa GLS1. U jednom otelotvorenju, navedena bolest posredovana sa GLS1 je rak. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koju čine rak dojke (na primer, trostruko negativni rak dojke), rak pluća (na primer rak nemalih ćelija pluća), rak pankreasa, rak bešike i hepatoćelijski karcinom. Ovde je opisana upotreba jedinjenja prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog, za proizvodnju medikamenta za lečenje bolesti posredovane sa GLS1. U jednom otelotvorenju, navedena bolest posredovana sa GLS1 je rak. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koju čine rak dojke (na primer, trostruko negativni rak dojke), rak pluća (na primer rak ne-malih ćelija pluća), rak pankreasa, rak bešike i hepatoćelijski karcinom. Ovde je opisana upotreba jedinjenja prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog, za proizvodnju medikamenta za lečenje raka. Ovde je opisana upotreba jedinjenja prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog, za proizvodnju medikamenta za lečenje raka. Ovde je opisana upotreba jedinjenja prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog, za proizvodnju medikamenta za lečenje raka. Ovde je opisana metoda za lečenje bolesti u kojoj je umanjenje GLS1 od koristi kod toplokrvnih životinja koje imaju potrebu za takvih tretiranjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog. Ovde je opisana metoda za lečenje bolesti u kojoj je umanjenje GLS1 od koristi kod toplokrvnih životinja koje imaju potrebu za takvih tretiranjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog. Ovde je opisana metoda za lečenje bolesti u kojoj je umanjenje GLS1 od koristi kod toplokrvnih životinja koje imaju potrebu za takvih tretiranjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog.

[0114] Termin „terapeutski delotvorna količina“ se odnosi na količinu jedinjenja prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od ovih jedinjenja kao što je opisano u bilo kom od otelotvorenja ovde koja je delotvorna da pruži „terapiju“ ispitaniku ili da „leči“ bolest ili poremećaj kod ispitanika. U slučaju raka, terapeutski delotvorna količina može izazvati bilo kakve promene koje se mogu primetiti ili izmeriti kod ispitanika kao što je opisano u definiciji za „terapiju“, „lečenje“ i „profilaksu“ iznad. Na primer, delotvorna količina može smanjiti više ćelija raka ili tumora; smanjiti ukupnu veličinu tumora; umanjiti ili zaustaviti infiltriranje ćelije tumora u periferne organe uključujući, na

2

primer, meko tkivo i kosti; umanjiti ili zaustaviti metastazu tumora; umanjiti ili zaustaviti rast tumora; olakšati do određene granice jedan ili više simptoma povezanih sa rakom; smanjiti morbiditet i mortalitet; poboljšati kvalitet života; ili kombinacija takvih efekata. Delotvorna količina može biti količina koja je dovoljna da smanji simptome bolesti koji odgovaraju na umanjenje GLS1 aktivnosti. Za terapiju raka, efikasnost in-vivo može, na primer, biti merena procenjivanjem trajanja preživljavanja, vremena do napredovanja bolesti (TTP), brzine odgovora (RR), trajanja odgovora i/ili kvaliteta života. Kao što je prepoznato od strane stručnih u ovoj oblasti, delotvorne količine mogu biti promenjive u zavisnosti od načina davanja, upotrebe ekscipijensa, zajedničke upotrebe i drugih sredstava. Na primer, kada se koristi kombinovana terapija, količina jedinjenja prema formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so bilo kog od ovih jedinjenja opisanih u ovom opisu i količina drugih farmaceutski aktivnih sredstava su, kada se kombinuju, dvojno delotvorna pri lečenju ciljanog poremećaja kod pacijenta koji je životinja. U ovom kontekstu, kombinovane količine su u „terapeutski delotvornoj količini“ ukoliko su, kada su kombinovane“ dovoljne da smanje simptome bolesti koji odgovaraju na umanjenje aktivnosti GLS1 kao što je opisano iznad. Obično, takve količine mogu biti određene od strane stručnjaka u ovoj oblasti, na primer, počevši od opsega doza opisanog u ovom opisu za jedinjenje prema formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so bilo kod od ovih jedinjenja i potvrđenih ili drugačije objavljenih opsega doza za druga farmaceutski aktivna jedinjenja.

[0115] „Toplokrvne životinje“ obuhvataju, na primer, ljude. Ovde je opisana metoda za lečenje raka kod toplokrvnih životinja koje imaju potrebu za takvim lečenjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog. Ovde je opisana metoda za lečenje raka kod toplokrvnih životinja koje imaju potrebu za takvim lečenjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog. Ovde je opisana metoda za lečenje raka kod toplokrvnih životinja koje imaju potrebu za takvim lečenjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koju čine rak dojke (na primer, trostruko negativni rak dojke), rak pluća (na primer rak ne-malih ćelija pluća), rak pankreasa, rak bešike i hepatoćelijski karcinom.

[0116] Lečenje protiv raka opisano u ovom opisu može biti pripremljeno kao samostalna terapija ili može obuhvatati, dodatno davanju jedinjenja prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od ovih jedinjenja, konvencionalnu operaciju, radioterapiju ili hemoterapiju; ili kombinaciju takvih dodatnih terapija. Takve konvencionalne operacije, radioterapije ili hemoterapije mogu biti date istovremeno, redno ili odvojeno sa lečenjem sa jedinjenjem prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljivom soli bilo kog od ovih jedinjenja.

[0117] Stoga, ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog i bar jedna dodatna supstanca protiv tumora, za upotrebu pri lečenju raka. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog i bar jedna dodatna supstanca protiv tumora, za upotrebu pri lečenju raka. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog i bar jedna dodatna supstanca protiv tumora, za upotrebu pri lečenju raka. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog i bar jedna dodatna supstanca protiv tumora, za upotrebu pri istovremenom, odvojenom ili rednom lečenju raka. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog i bar jedna dodatna supstanca protiv tumora, za upotrebu pri istovremenom, odvojenom ili rednom lečenju raka. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog i bar jedna dodatna supstanca protiv tumora, za upotrebu pri istovremenom, odvojenom ili rednom lečenju raka. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog za upotrebu pri lečenju raka, gde se jedinjenje prema Formuli (I) daje istovremeno, odvojeno ili redno sa bar jednom dodatnom supstanca protiv tumora. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog za upotrebu pri lečenju raka, gde se jedinjenje prema Formuli (IA) daje istovremeno, odvojeno ili redno sa bar jednom dodatnom supstanca protiv tumora. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog za upotrebu pri lečenju raka, gde se jedinjenje prema Formuli (IB) daje istovremeno, odvojeno ili redno sa bar jednom dodatnom supstanca protiv tumora. Ovde je opisana metoda za lečenje raka kod toplokrvne životinje koja ima potrebu za takvim lečenjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jednu dodatno supstancu protiv tumora, gde su količine jedinjenja prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i dodatne supstance protiv tumora ujedno delotvorne u stvaranju uticaja protiv raka. Ovde je opisana metoda za lečenje raka kod toplokrvne životinje koja ima

4

potrebu za takvim lečenjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jednu dodatno supstancu protiv tumora, gde su količine jedinjenja prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i dodatne supstance protiv tumora ujedno delotvorne u stvaranju uticaja protiv raka. Ovde je opisana metoda za lečenje raka kod toplokrvne životinje koja ima potrebu za takvim lečenjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jednu dodatno supstancu protiv tumora, gde su količine jedinjenja prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i dodatne supstance protiv tumora ujedno delotvorne u stvaranju uticaja protiv raka. Ovde je opisana metoda za lečenje raka kod toplokrvne životinje koja ima potrebu za takvim lečenjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i istovremeno, odvojeno ili redno davanje bar jedne dodatne supstanca protiv tumora navedenoj toplokrvnoj životinji, gde su količine jedinjenja prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog i dodatnih supstanci protiv tumora ujedno delotvorne u stvaranju uticaja protiv raka Ovde je opisana metoda za lečenje raka kod toplokrvne životinje koja ima potrebu za takvim lečenjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i istovremeno, odvojeno ili redno davanje bar jedne dodatne supstanca protiv tumora navedenoj toplokrvnoj životinji, gde su količine jedinjenja prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog i dodatnih supstanci protiv tumora ujedno delotvorne u stvaranju uticaja protiv raka Ovde je opisana metoda za lečenje raka kod toplokrvne životinje koja ima potrebu za takvim lečenjem, koja obuhvata davanje navedenoj toplokrvnoj životinji jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i istovremeno, odvojeno ili redno davanje bar jedne dodatne supstanca protiv tumora navedenoj toplokrvnoj životinji, gde su količine jedinjenja prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog i dodatnih supstanci protiv tumora ujedno delotvorne u stvaranju uticaja protiv raka

[0118] U bilo kom otelotvorenju dodatna supstanca protiv tumora je taksan. U jednom otelotvorenju taksan je paklitaksel. U jednom otelotvorenju taksan je docetaksel (na primer Taxotere®).

[0119] U bilo kom otelotvorenju dodatna supstanca protiv tumora je terapija zasnovana na platini. U jednom otelotvorenju terapija zasnovana na platini je cisplatin, oksaliplatin ili karboplatin.

[0120] U bilo kom otelotvorenju dodatna supstanca protiv tumora je permetreksed. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog za upotrebu pri lečenju raka, gde se jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog daje u kombinaciji sa cisplatinom, permetreksedom ili docetakselom. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog za upotrebu pri lečenju raka, gde se jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog daje u kombinaciji sa cisplatinom. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog za upotrebu pri lečenju raka, gde se jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog daje u kombinaciji sa permetreksedom. Ovde je opisano jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog za upotrebu pri lečenju raka, gde se jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog daje u kombinaciji sa docetakselom. Ovde je opisan farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (I) i bar jednu dodatno supstancu protiv tumora. U jednom otelotvorenju farmaceutski sastav takođe sadrži bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. Ovde je opisan farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (IA) i bar jednu dodatno supstancu protiv tumora. U jednom otelotvorenju farmaceutski sastav takođe sadrži bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. Ovde je opisan farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (IB) i bar jednu dodatno supstancu protiv tumora. U jednom otelotvorenju farmaceutski sastav takođe sadrži bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. Ovde je opisan farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (I) i bar jednu dodatnu supstanca protiv tumora za upotrebu pri lečenju raka. U jednom otelotvorenju farmaceutski sastav takođe sadrži bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. Ovde je opisan farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (IA) i bar jednu dodatnu supstanca protiv tumora za upotrebu pri lečenju raka. U jednom otelotvorenju farmaceutski sastav takođe sadrži bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. Ovde je opisan farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (IB) i bar jednu dodatnu supstanca protiv tumora za upotrebu pri lečenju raka. U jednom otelotvorenju farmaceutski sastav takođe sadrži bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač.

[0121] U bilo kom otelotvorenju dodatna supstanca protiv tumora je taksan. U jednom otelotvorenju taksan je paklitaksel. U jednom otelotvorenju taksan je docetaksel.

[0122] U bilo kom otelotvorenju dodatna supstanca protiv tumora je terapija zasnovana na platini. U jednom otelotvorenju terapija zasnovana na platini je cisplatin, oksaliplatin ili karboplatin. Ovde je opisan komplet koji sadrži:

a) jedinjenje prema formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog, u prvom jediničnom obliku za doziranje;

b) dodatnu supstanca protiv tumora u sledećem jediničnom obliku za doziranje; c) pakovanje za sadržanje navedenog prvog i drugog oblika za doziranje; i dodatno d) uputstva za upotrebu.

Ovde je opisan komplet koji sadrži:

a) jedinjenje prema formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog, u prvom jediničnom obliku za doziranje;

Ovde je opisan komplet koji sadrži:

a) jedinjenje prema formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog, u prvom jediničnom obliku za doziranje;

[0123] U bilo kom otelotvorenju dodatna supstanca protiv tumora je taksan. U jednom otelotvorenju taksan je paklitaksel. U jednom otelotvorenju taksan je docetaksel.

[0124] U bilo kom otelotvorenju dodatna supstanca protiv tumora je terapija zasnovana na platini. U jednom otelotvorenju terapija zasnovana na platini je cisplatin, oksaliplatin ili karboplatin.

[0125] Jedinjenja prema Formuli (I), (IA) i (IB) i farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od ovih jedinjenja mogu biti data farmaceutski sastavi, koji sadrže jedan ili više farmaceutski prihvatljivih rastvarača ili nosača.

[0126] Stoga, u jednom otelotvorenju dat je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. U jednom otelotvorenju dat je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. U jednom otelotvorenju dat je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač.

[0127] Sastavi mogu biti u obliku pogodnom za oralnu upotrebu (na primer kao tablete, lozengije, tvrde ili meke kapsule, vodene ili uljane suspenzije, emulzije, rastvorljivi praškovi ili granule, sirupi ili eliksiri), za topikalnu upotrebu (na primer kreme, masti, gelovi ili vodeni ili uljani rastvori ili suspenzije), za davanje sa inhalacijom (na primer kao fino razdvojeni prašak ili tečna aerosol), za davanje sa insulfacijom (na primer kao fino razdvojeni prašak) za parenteralno davanje (na primer kao sterilni vodeni ili uljani rastvor za intravenozno, subkutano, intramuskularno ili intramuskularno doziranje) ili kao supozitorije za rektalno doziranje. Sastavi mogu biti dobijeni konvencionalnim postupcima upotrebom konvencionalnih farmaceutskih ekscipijenasa, dobro poznatih u struci. Stoga, sastavi namenjeni za oralnu upotrebu mogu sadržati, na primer, jedno ili više sredstava za bojenje, zaslađivanje, poboljšavanje ukusa i/ili konzerviranje.

[0128] U jednom otelotvorenju dat je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač, za upotrebu u terapiji. U jednom otelotvorenju dat je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač, za upotrebu u terapiji. U jednom otelotvorenju dat je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač, za upotrebu u terapiji.

[0129] U jednom otelotvorenju dat je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač, za upotrebu pri lečenju raka. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koju čine rak dojke (na primer, trostruko negativni rak dojke), rak pluća (na primer rak ne-malih ćelija pluća), rak pankreasa, rak bešike i hepatoćelijski karcinom. U jednom otelotvorenju dat je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (IA) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač, za upotrebu pri lečenju raka. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koju čine rak dojke (na primer, trostruko negativni rak dojke), rak pluća (na primer rak nemalih ćelija pluća), rak pankreasa, rak bešike i hepatoćelijski karcinom. U jednom otelotvorenju dat je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (IB) ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač, za upotrebu pri lečenju raka. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koju čine rak dojke (na primer, trostruko negativni rak dojke), rak pluća (na primer rak nemalih ćelija pluća), rak pankreasa, rak bešike i hepatoćelijski karcinom.

[0130] Jedinjenje prema Formuli (I), (IA) ili (IB) ili farmaceutski prihvatljiva so bilo kog od ovih jedinjenja će se obično davati toplokrvnoj životinji pri jediničnoj dozi unutar opsega 5-5000 mg/m<2>telesne površine životinje ili približno 0.1-100 mg/kg i ovo obično pruža terapeutski delotvornu dozu. Jedinični oblik za doziranje kao što je tableta ili kapsula obično će sadržati, na primer 1-250 mg aktivnog sastojka. Dnevna doza će neophodno biti promenjiva u zavisnosti od domaćina koji se leči, naročitog načina upotrebe, bilo kojih terapija koje se zajedno primenjuju i ozbiljnosti bolesti koja se leči. Prema tome, lekar koji leči posebnog pacijenta može odrediti optimalnu dozu.

PRIMERI

[0131] Različita otelotvorenja su prikazana sa sledećim Primerima. Pronalazak ne bi trebalo protumačiti kao da je ograničen na Primere. Za vreme pripremanja primera, uopšteno:

i. Radnje su izvršene na sobnoj temperaturi, tj., u opsegu od oko 17 do 30°C i pod atmosferskim uslovima ukoliko nije drugačije naznačeno;

ii. Isparavanja su izvršena u rotirajućem isparivaču ili upotrebom Genevac opreme in vacuo i postupci napredovanja su izvršeni nakon uklanjanja preostalih čvrstih supstanci sa filtriranjem;

iii. Prečišćavanje sa fleš hromatografijom je izvršeno na automatizovanom Isco Combiflash Companion upotrebom Grace Resolve unapred napunjenih silika kolona i (reverzne faze fleš) Isco Combiflash Rf upotrebom Redisep Gold C18 kolona; iv. Prinosi, gde su prisutni, nisu neophodno maksimalni koji se mogu dobiti;

v. Strukture krajnjih proizvoda Formule (I) su potvrđeni sa spektroskopijom nuklearne magnetne rezonance (NMR) sa vrednostima hemijskog pomeranja merenim na delta skali. Spektri protonske magnetne rezonance su određeni upotrebom Bruker Avance 700 (700MHz), Bruker Avance 500 (500 MHz), Bruker 400 (400 MHz) ili Bruker 300 (300 MHz) instrumenta; 19F NMR je određeno pri 282 MHz ili 376 MHz; 13C NMR je određeno pri 75 MHz ili 100 MHz; merenja su izvršena pri oko 20-30°C ukoliko nije drugačije naznačeno; sledeće skraćenice su korišćene: s, singlet; d, duplet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; dd, duplet dupleta; ddd, duplet dupleta dupleta; dt, duplet tripleta; dtd, duplet tripleta dupleta; dddd, duplet dupleta dupleta dupleta; td, triplet dupleta; dq, duplet kvarteta; bs, široki signal;

vi. Krajnji proizvodi Formule (I) su takođe naznačeni sa masenom spektroskopijom što je praćeno sa tečnom hromatografijom (LCMS) upotrebom HPLC sistema zasnovanog na Waters 2790/95 LC sistemu sa 2996 PDA i 2000 amu ZQ jednim četvorostrukim masenim spektrometrom. Korišćeni rastvarači su bili A= voda, B= acetonitril, C= 50:50 acetonitril:voda 0.1% mravlja kiselina i D= 50:50 acetonitril:voda 0.1% amonijum hidroksid. Pri protoku od 1.1 mL/min 5µL uzorka je ubrizgano u 50 x 2.15µm Phenomenex Gemini NX kolonu. Gradijent je bio od 95% A do 95% B u trajanju od 4.0min sa konstantnom 5% infuzijom C (za kiselu analizu, D je korišćeno za baznu analizu). Protok je održavan pri 95% B u trajanju od 0.5min pre vraćanja na početne uslove. Podaci su dobijeni iz 150 do 850amu u oba, pozitivnom i negativnom režimu na masenom spektrometru 220 -320nm na PDA. LCMS je takođe izvršena na UPLC sistemu upotrebom Waters Aquity Binary pumpe sa upravljačem uzoraka, Aquity PDA i SQD masenim spektrometrom. Korišćeni rastvarači su bili A1= 0.1% mravlja kiselina (vodena), B10.1% mravlja kiselina u acetonitrilu, A2 = 0.1% amonijum hidroksid (vodeni) i B20.1% amonijum hidroksid u acetonitrilu. Pri protoku od 1mL/min 1 µL uzorka je ubrizgano u 50 x 2.11.7um Waters BEH kolonu (pri 40°C). Gradijent je bio od 97% A1 do 97% B1 u trajanju od 1.30min pre nego što je održavan u trajanju od 0.2 min i vraćen na početne uslove (zamena A1 i B1 zar A2 i B2 za baznu analizu). Podaci su dobijeni iz 150 - 1000 amu pri pozitivnom i negativnom jonskom režimu na masenom spektrometru i 245 - 320 amu na PDA;

vii. Međujedinjenja nisu uopšteno potpuno okarakterisana i prečišćenost je procenjena sa hromatografijom na tankom sloju, masenom spektrometrijom, HPLC i/ili NMR analizom;

viii. Spektar rendgenska difrakcija praška je određen upotrebom PANalytical CubiX PRO difraktometra praćenjem uzorka kristalnog materijala na jednoj postavljenoj silikonskoj kristalnoj ploči i raspoređivanjem uzorka u tankom sloju. Uzorak je obrtan

4

pri 30 obrtaja u minutu (kako bi se poboljšala statistika brojanja) i zračen je sa rendgenskim zracima stvorenim sa dugačkom finom fokusnom bakarnom cevi pri 45kV i 40mA sa talasnom dužinom od 1.5418 angstrema.

ix. Rendgenski podaci za pojedine kristale sakupljeni su na aku AFC12 goniometru opremljenim detektorom pojačane osetljivosti (HG) Saturn724+ postavljenim na prozoru FR-E+ SuperBright generatora sa rotirajućom anodom od molibdena sa HF Varimax optics (100 µm fokus). Određivanje ćelija, sakupljanje podataka, redukovanje podataka i popravljanje prečišćavanja ćelija i apsorpcije izvršeni su upotrebom CrystalClear-SM Expert 2.0 r7 (Rigaku, 2011). Strukturni rastvor je izvršen sa SHELXS97 (Sheldrick, G.M., Acta. Cryst.2008, A64, 112-122), sa strukturnim ojačanjem izvršenim upotrebom SHELXL2012 (G. M. Sheldrick (2012), University of Göttingen, Germany). Grafika je prikazana na CrystalMaker: program za kristalne i molekularne strukture za Mac i Window (CrystalMaker Software Ltd, Oxford, England, www.crystalmaker.com). Podaci su sakupljeni pri 100K

x. Sledeće skraćenice su korišćene: h = sati(s); s.t. = sobna temperatura (∼17-30°C); conc. = koncentrovano; FCC = fleš hromatografija na koloni upotrebom silika; AIBN = azobisizobutironitril ; DCM = dihlorometan; DIPEA = di-izopropil etilamin; DMA = N,N-dimetilacetamid; DMF = N,N-dimetilformamid; DMSO = dimetilsulfoksid; EDC = 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid; Et2O = dietil eter; EtOAc = etil acetat; EtOH = etanol; HATU = 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat; HOBT = hidroksibenzotriazol; K2CO3= kalijum karbonat; MeOH = metanol; MeCN = acetonitril; MgSO4= bezvodni magnezijum sulfat; Na2SO4= bezvodni natrijum sulfat; NBS = N-bromo sukcinimid; NMP = N-metil pirolidin; TFA = trifluorosirćetna kiselina; THF = tetrahidrofuran; sat. = zasićeni vodeni rastvor; i

xi. IUPAC nazivi su stvoreni upotrebom 'SmiToSd', vlasnički program napravljen preko OpenEye Lexichem alata (http://www.eyesopen.com/lexichem-tk).

Primer 1(a)

(2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0132]

[0133] 5-Bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amin (229 mg, 1.27 mmol), (3R)-1-(1,2,4-triazin-3-i)pirolidin-3-amin (Međujedinjenje 1, 200 mg, 1.21 mmol) i DIPEA (0.253 mL, 1.45 mmol) su rastvoreni u DMF (5 mL) i zatvoreni u mikrotalasnu cev. Reakcija je zagrevana do 100°C u trajanju od 90 minuta u mikrotalasnom reaktoru kako bi se dobio sirovi N'-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin. LCMS je ukazala na završenu reakciju. Ovaj materijal je zatim prenet sirov u rastvor, pretpostavljajući 100% konverziju i korišćen u sledećem koraku. HATU (276 mg, 0.73 mmol) je dodat u (2S)-2-metoksi-2-fenilsirćetnu kiselinu (106 mg, 0.64 mmol), N'-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)prrolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (pripremljen kao iznad 160 mg, 0.61 mmol), i DIPEA (0.316 mL, 1.82 mmol) u DMF (3 mL) pri 0°C. Dobijeni rastvor je zatim mešan pri s.t. u trajanju od 2 h. Reakciona smeša je podeljena između n 2-metiltetrahidrofurana i vodenog slanog rastvora. Organski sloj je osušen (MgSO4), filtriran i isparen pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen sa preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5 µm silika, 50 mm prečnik, 100 mm dužina), upotrebom opadajućih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% amonijak) i MeCN kao eluente. Frakcije koje su sadržale željeno jedinjenje su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobilo (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid(118 mg, 47%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.03-2.14 (1H, m), 2.24-2.34 (1H, m), 3.31 (3H, s), 3.65 (3H, s), 3.81 (1H, s), 4.33-4.41 (1H, m), 4.98 (1H, s), 7.32-7.4 (3H, m), 7.43-7.48 (2H, m), 7.69 (1H, d), 8.31 (1H, d), 8.60 (1H, d); m/z: ES<+>[M+H]<+>412.9.

Primer 1(b)

(2R)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0134]

[0135] DIPEA (3.17 mL, 18.16 mmol) je dodat u (3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-amin (Međujedinjenje 1, 1.500 g, 9.08 mmol) i 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amin (1.635 g, 9.08 mmol) u DMF (10 mL). Dobijeni rastvor je mešan pri 100°C u trajanju od 60 minuta kako bi se dobio sirovi N'-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin.

Reakcija je zatim ohlađena do s.t. i dalje preneta sirova u rastvor. HATU (4.14 g, 10.90 mmol) je dodato u (2S)-2-metoksi-2-fenilsirćetnu kiselinu (1.509 g, 9.08 mmol), N'-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (2.4 g, 9.08 mmol) i DIPEA (4.74 ml, 27.24 mmol) u DMF (1.5 ml) na s.t. pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na s.t. u trajanju od 18 h. Reakciona smeša je isparavana dok nije bila suva i rastvorena u MeOH (20 mL). Rastvor je prečišćen sa hromatografijom sa razmenom jona upotrebom SCX2 kolone. Željeni proizvod je eluiran iz kolone upotrebom 7M amonijak/MeOH i čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio sirovi proizvod kao braon guma (3.68g).

Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 0 do 5% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve i zatim usitnjene i pretvorene u azeotrop sa smešama Et2O/heptan kako bi se dobio proizvod (2.80 g, 75%) kao žuta pena. Hiralna HPLC analiza je pokazala 95:5 smešu diastereizomera. Ovo je zatim rastvoreno u Heptan/EtOH/MeOH 50/25/25 i sirovi proizvod je prečišćen sa preparativnom HPLC (Chiralpak IA kolona, 20µm silika, 100mm prečnik, 330 mm dužina, eluent Heptan/EtOH/MeOH 50/25/25 pri 400 ml/min) kako bi se dobio (2R)-2-Metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid kao prvi eluirani izomer (žuta čvrsta supstanca, 0.100 g, 4 %) .<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 30°C) δ 2.09 (1H, dd), 2.30 (1H, dd), 3.32 (3H, s), 3.53-3.89 (4H, m), 4.38 (1H, s), 4.99 (1H, s), 7.38 (3H, dt), 7.47 (2H, d), 7.70 (1H, d), 8.32 (1H, d), 8.61 (1H, d), 12.22 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>413. (2S)-2-Metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid (Primer 1(a), 1.850 g, 66 %) je takođe izolovan iz reakcije kao drugi eluirani izomer (analitički podaci su kao što je zabeleženo iznad).

Primer 2(a)

4

(2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0136]

[0137] Smeša N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Međujedinjenje 5, 150 mg, 0.57 mmol), (2S)-2-metoksi-2-fenilsirćetne kiseline (174.4 mg, 0.57 mmol), HATU (325 mg, 0.86 mmol) i DIPEA (147 mg, 1.14 mmol) u DMF (3 mL) je mešana u trajanju od 16 h na s.t. Sirova reakciona smeša je prečišćena sa Prep-HPLC (kolona: SunFire Prep C18 OBD kolona, 5µm, 19mm x150mm; mobilna faza: MeOH i voda sa 0.1% TFA, eluiranje sa 25.0% voda sa 0.1% TFA do 50.0% voda sa 0.1% TFA u periodu trajanja od 8 minuta; detektor, UV 220, 254nm). Ovo je isporučilo proizvod (43 mg, 18%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 26°C) δ 2.00-2.10 (1H, m), 2.23-2.49 (1H, m), 3.30 (3H, s), 3.45-3.57 (3H, m), 3.71-3.76 (1H, m), 4.33-4.38 (1H, m), 4.97 (1H, s), 6.87 (1H, d), 7.30-7.47 (6H, m), 7.69 (1H, d), 8.46 (1H, d), 12.22 (1H, br); m/z: ES<+>[M+H]<+>412.

[0138] Materijal pripremljen upotrebom metode od iznad je analiziran sa XRPD i pronađeno je da je amorfan, sa tačkom topljenja od 82.1°C (početak). Eksperimenti pravljenja mulja su izvršeni na amorfnom materijalu postavljanjem 20 mg u bocu sa magnetnom mešalicom i zatim dodavanjem približno 2 mL datog rastvarača. Boca je zatim čvrsto zatvorena sa poklopcem i smeša je ostavljena da se meša na ploči magnetne mešalice. Nakon približno 3 dana, uzorak je uklonjen sa ploče, poklopac je skinut i rastvarač je ostavljen da ispari pod uslovima sredine pre analize dobijene čvrste supstance sa XRPD. Tri oblika (tipovi A, B i C) su razlikovani i određeni da su delimično kristalni. Materijal oblika A je proizveden pretvaranjem u mulj u izopropil alkoholu kao rastvaraču pri 25°C. Materijal oblika B je proizveden pretvaranjem u mulj u EtOAc kao rastvaraču pri 25°C. Materijal oblika C je proizveden pretvaranjem u mulj u MeCN kao rastvaraču pri 25°C.

[0139] Materijal oblika D proizveden je zagrevanje oblika B ili oblika C do 200°C pre hlađenja do s.t. Ovaj oblik je određen da je kristalni sa XRPD, sa sledećim karakteristikama difrakcionih maksimuma.

Tabela 1: Karakteristični maksimumi rendgenske difrakcije praška za Oblik D (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid.

[0140] Jedna rendgenska analiza kristala izvršena je na materijalu oblika D, potvrđujući da je jedinjenje diasteromer stereohemije prikazane iznad.

[0141] Primer 2(a) je takođe pripremljen u velikim razmerama upotrebom sledećeg alternativnog postupka.

[0142] N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (Međujedinjenje 5, 32.8 g, 124.56 mmol) i (2S)-2-metoksi-2-fenilsirćetna kiselina (21.73 g, 130.79 mmol) su napravljeni kao mulj u DMF (135 mL) sa DIPEA (43.4 mL, 249.12 mmol). Ciklični anhidrid 1-propanfosforaste kiseline (50% w/w in DMF, 91 mL, 155.70 mmol) dodat je u vidu kapi održavajući temperaturu sadržaja reakcije < 20°C. Čvrsta supstanca je rastvorena i analiza rastvora je pokazala da je reakcija završena. Prečišćavanje sa 13 x 50 g SCX kolonama ispoljilo se u MeOH rastvoru koji je koncentrovan u rotirajućem isparivaču kako bi se dobio

4

mulj. Mulj je razblažen sa 300 ml MTBE i proizvedena čvrsta supstanca je izolovana vakuumskom filtracijom (analitički podaci su u skladu sa onima zabeleženim iznad).

Primer 2(b)

(2R)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0143]

[0144] Rastvor N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Međujedinjenje 5, 150 mg, 0.57 mmol), (2R)-2-metoksi-2-fenilsirćetne kiseline (94 mg, 0.57 mmol), HATU (325 mg, 0.86 mmol) i DIPEA (147 mg, 1.14 mmol) u DMF (3 mL) je mešan u trajanju od 16 h na s.t. Sirovi proizvod je prečišćen sa Prep-HPLC sa sledećim uslovima: Kolona, SunFire Prep C18 OBD kolona, 5µm, 19x150mm; mobilna faza = metanol i voda koja sadrži 0.1%TFA (25.0% voda sa 0.1%TFA do 50.0% u trajanju od 8 min); detektor = UV 220,254nm. Ovi uslovi su dali 43 mg (19%) (2R)-2-Metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamida (Primer 2(b)) kao belu čvrstu supstancu; m/z: ES<+>[M+H]<+>412.

Primer 3

[0145]

[0146] HATU (319 mg, 0.84 mmol) je dodat u N'-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (Međujedinjenje 9, 185 mg, 0.70 mmol), (2S)-2-metoksi-2-fenilsirćetnu kiselinu (116 mg, 0.70 mmol) i DIPEA (0.122 mL, 0.70 mmol) u DMF (5 mL)

4

pri 0°C. Dobijeni rastvor je mešan pri 0°C u trajanju od 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa MeOH (5 mL) i prečišćena sa hromatografijom sa razmenom jona upotrebom 20g SCX kolone. Dobijeni proizvod je eluiran iz kolone upotrebom 3M amonijak/MeOH i čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 0 do 8% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio(2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid (200 mg, 69%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) δ 2.02-2.13 (1H, m), 2.21-2.34 (1H, m), 3.30 (3H, s), 3.54 (1H, dd), 3.61 (2H, dd), 3.78 (1H, dd), 4.34-4.44 (1H, m), 4.97 (1H, s), 7.30-7.40 (3H, m), 7.45 (2H, dd), 7.68 (1H, d), 8.26 (1H, s), 8.94 (1H, s), 12.21 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>413.

Primeri 4(a) i 4(b)

(2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid i (2R)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0147]

[0148] DIPEA (0.917 mL, 5.27 mmol) je dodat u (3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-amin (Međujedinjenje 1, 290 mg, 1.76 mmol) i 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amin (316 mg, 1.76 mmol) u DMF (8 mL) pri 21°C pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan pri 100°C u trajanju od 1 h, i zatim je ostavljen da se ohladi do s.t.2-Metoksi-2-(3-metoksifenil)sirćetna kiselina (Međujedinjenje 15, 180 mg, 0.92 mmol), praćena sa HATU (380 mg, 1.00 mmol) su dodati u rastvor od iznad i reakcija je ostavljena da se meša na s.t. u trajanju od 1 h. Sirovi proizvod je prečišćen sa hromatografijom sa razmenom jona, upotrebom SCX kolone. Željeni proizvod

4

je eluiran iz kolone upotrebom 1M amonijak/MeOH i frakcije su adsorbovane u silika. Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 0 do 15% MeOH (sa 5% 1M amonijak/MeOH) u EtOAc i frakcije su isparene kako bi se dobio sirovi proizvod.

Razdvajanje diastereomera je postignuto na AD koloni upotrebom 50/50, EtOH/MeOH kao eluente. Uzorak je rastvoren u EtOH (5 mL). Frakcije koje su sadržale željena jedinjenja su isparavana dok nije bila suva kako bi se dobio:

Primer 4(a) kao prvi eluirani izomer (62 mg, 8%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.09 (1H, m), 2.24-2.4 (1H, m), 3.32 (3H, s), 3.62 (2H, m), 3.76 (3H, s), 4.38 (1H, m), 4.94 (1H, s), 6.83-6.98 (1H, dd), 7.00-7.10 (2H, m), 7.29 (1H, dd), 7.66 (1H, d), 8.31 (1H, d), 8.61 (1H, d), 12.11 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>443.

Primer 4(b) kao drugi eluirani izomer (48 mg, 6).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.09 (1H, m), 2.24-2.4 (1H, m), 3.32 (3H, s), 3.62 (2H, m), 3.76 (3H, s), 4.38 (1H, m), 4.94 (1H, s), 6.83-6.98 (1H, dd), 7-7.1 (2H, m), 7.29 (1H, dd), 7.66 (1H, d), 8.31 (1H, d), 8.61 (1H, d), 12.11 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>443.

Primeri 5(a) i 5(b)

(2S)-2-Metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid i (2R)-2-Metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0149]

[0150] DIPEA (0.994 mL, 5.69 mmol) je dodat u (3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-amin dihidrohlorid (Međujedinjenje 6, 300 mg, 1.27 mmol), i 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amin (228 mg, 1.27 mmol) u DMF (4 mL). Dobijeni rastvor je mešan pri 100°C u trajanju 60

4

minuta kako bi se dobio sirovi N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin. U rastvor N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (333 mg, 1.26 mmol) u DMF (4 mL), koji je već sadržao DIPEA (0.994 mL, 5.69 mmol), je dodata 2-metoksi-2-(3-metoksifenil)sirćetna kiselina (Međujedinjenje 15, 248 mg, 1.26 mmol) što je praćeno sa HATU (481 mg, 1.26 mmol). Reakcija je ostavljena da se meša na s.t. preko noći nakon čega je procenjena kao gotova sa LCMS. Sirova reakciona smeša je napunjena u SCX2 kertridž (20g). Sirovi proizvod je prečišćen sa hromatografijom sa razmenom jona. Željeni proizvod je eluiran iz kolone upotrebom 1M amonijak/MeOH i čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio sirovi proizvod kao braon čvrsta supstanca (500 mg). Sirovi proizvod je prečišćen sa preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5 µm silika, 50 mm prečnik, 100 mm dužina), upotrebom opadajućih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% amonijak) i MeCN kao eluente. Frakcije koje su sadržale željeno jedinjenje su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio 2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid (161 mg). Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom hiralnom HPLC (Phenomenex Lux C2 kolona, 20 µm silika, 50 mm prečnik, 250 mm dužina), eluiranjem sa MeOH pri 100 mL/min Frakcije koje su sadržale željena jedinjenja su isparavana dok nije bila suva kako bi se dobio:

Primer 5(a) prvi eluirani izomer (57 mg, 0.129 mmol, 10%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.03-2.13 (1H, m), 2.23-2.33 (1H, m), 3.32 (3H, s), 3.46-3.63 (3H, m), 3.76 (4H, s), 4.33-4.45 (1H, m), 4.95 (1H, s), 6.86 (1H, dd), 6.91 (1H, ddd), 7.00-7.08 (2H, m), 7.26-7.37 (2H, m), 7.66 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.13 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>442.55.

Primer 5(b) kao drugi eluirani izomer (58 mg, 10%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.02-2.12 (1H, m), 2.23-2.34 (1H, m), 3.31 (3H, s), 3.43-3.62 (3H, m), 3.76 (4H, s), 4.33-4.45 (1H, m), 4.93 (1H, s), 6.86 (1H, dd), 6.91 (1H, ddd), 7.00-7.08 (2H, m), 7.26-7.36 (2H, m), 7.62 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.14 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>442.55.

Primeri 6(a) i 6(b)

(2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid i (2R)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid [0151]

4

[0152] DIPEA (0.917 mL, 5.27 mmol) je dodat u (3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-amin (Međujedinjenje 1, 290 mg, 1.76 mmol) i 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amin (316 mg, 1.76 mmol) u DMF (8 mL) pri 21°C pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan pri 100°C u trajanju od 1 h, i zatim je ohlađen do s.t.2-[3-(difluorometoksi)fenil]-2-metoksisirćetna kiselina (Međujedinjenje 16, 213 mg, 0.92 mmol), praćeno sa HATU (380 mg, 1.00 mmol) je dodata u rastvor i reakcija je ostavljena da se meša pri s.t. u trajanju od 1 h. Sirovi proizvod je prečišćen sa hromatografijom sa razmenom jona, upotrebom SCX kolone. Željeni proizvod je eluiran iz kolone upotrebom 1M amonijak/MeOH i frakcije su isparavane do gume (200 mg). Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 0 do 15% MeOH (sa 5% 1M amonijak/MeOH) u EtOAc. Frakcije su zatim isparene kako bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen sa preparativnom hiralnom HPLC (C2 kolona, 3 µm silika, 4.6mm prečnik, 50mm družina) upotrebom EtOH kao eluenta. Frakcije koje su sadržale željena jedinjenja su isparavana dok nije bila suva kako bi se dobio:

Jedinjenje 6(b) kao prvi eluirani izomer (65 mg, 16%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.09 (1H, m), 2.30 (1H, m), 3.34 (3H, s), 3.66 (3H, m), 3.81 (1H, m), 4.38 (1H, m), 5.02 (1H, s), 7.05-7.26 (2H, m), 7.28 (1H, s), 7.34 (1H, d), 7.45 (1H, dd), 7.70 (1H, d), 8.32 (1H, d), 8.61 (1H, d), 12.25 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>479.

Primer 6(a) kao drugi eluirani izomer (69 mg, 17%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.09 (1H, m), 2.30 (1H, m), 3.34 (3H, s), 3.66 (3H, m), 3.81 (1H, m), 4.38 (1H, m), 5.02 (1H, s), 7.05-7.26 (2H, m), 7.28 (1H, s), 7.34 (1H, d), 7.45 (1H, dd), 7.70 (1H, d), 8.32 (1H, d), 8.61 (1H, d), 12.25 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>479.

Primeri 7(a) i 7(b)

(2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid i (2R)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0153]

[0154] Smeša (3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-amin dihidrohlorida (Međujedinjenje 6, 200 mg, 0.84 mmol), 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (182 mg, 1.01 mmol), DIPEA (1, 5.73 mmol) i DMF (3 mL) je mešana pri 100°C (temperatura spoljašnjeg bloka). u trajanju od 30 min i ohlađena do s.t.2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksisirćetna kiselina (Međujedinjenje 16, 255 mg, 1.10 mmol) je dodato što je praćeno sa HATU (481 mg, 1.27 mmol) i smeša je mešana u trajanju od 30 min. Smeša je razblažena sa EtOAc (100 mL) i isprana sa zas. rastvorom natrijum hidrogenkarbonata (20 mL) i slanim rastvorom (20 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen kako bi se dobilo braon ulje. Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC (gradijent eluiranja 0 do 15% MeOH u EtOAc). Čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio 2-[3-(difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid (233 mg, 55%) kao bež čvrsta supstanca koja sadrži smešu diastereizomera. Smeša je razdvojena sa hiralnom HPLC kako bi se dobio:

Primer 7(a) kao prvi eluirani izomer (čvrsta supstanca, 80 mg, 20%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.08 (1H, dt), 2.28 (1H, dd), 3.34 (3H, s), 3.49 (1H, dd), 3.53-3.62 (2H, m), 3.75 (1H, dd), 4.29-4.48 (1H, m), 5.02 (1H, s), 6.86 (1H, dd), 7.16 (1H, dd), 7.28 (1H, s), 7.23 (1H, t), 7.30-7.36 (2H, m), 7.45 (1H, t).7.67 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.21 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>478.

Primer 7(b) kao drugi eluirani izomer (77 mg, 19%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.08 (1H, dt), 2.28 (1H, dt), 3.33 (3H, s), 3.50 (1H, dd), 3.53-3.63 (3H, m),

1

3.76 (1H, dd), 4.35-4.43 (1H, m), 5.01 (1H, s), 6.86 (1H, dd), 7.16 (1H, dd), 7.28 (1H, s), 7.30-7.36 (2H, m), 7.45 (1H, t), 7.65 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.22 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>478.

Primeri 8(a) i 8(b)

(2S)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid i (2R)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid [0155]

[0156] DIPEA (423 µL, 2.42 mmol) je dodat u (3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-amin (Međujedinjenje 1, 200 mg, 1.21 mmol), i 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amin (218 mg, 1.21 mmol) u DMF (3 mL). Dobijeni rastvor je mešan pri 100°C u trajanju od 1 h kako bi se dobio sirovi N'-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin. Reakcija je ohlađena do s.t. i polovina rastvora je korišćena kao što sledi. HATU (0.274 g, 0.72 mmol) je dodat u 2-metoksi-2-(3-(trifluorometoksi)fenil)sirćetnu kiselinu (Međujedinjenje 17, 150 mg, 0.60 mmol), N'-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (159 mg, 0.60 mmol) i DIPEA (314 µL, 1.80 mmol) u DMF (1.5 mL) na s.t. pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na s.t. u trajanju od 2 h. Reakciona smeša je isparavana dok nije bila suva i rastvorena u MeOH (20 mL). Rastvor je prečišćen sa hromatografijom sa razmenom jona upotrebom SCX2 kolone. Željeni proizvod je eluiran iz kolone upotrebom 7M amonijak/MeOH i čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio sirovi proizvod kao braon guma (196 mg). Materijal je zatim prečišćen sa hiralnom HPLC.

Optimizacija na Agilent 1100, IA koloni (20 µm silika, 4.6 mm prečnik, 250 mm dužina)

2

pokazala je da je heptan/IPA, 75/25 dao najbolje razdvajanje. Ova metoda je korišćena za preparativne radnje. Frakcije koje su sadržale željena jedinjenja su isparavana dok nije bila suva kako bi se dobio:

Primer 8(b) kao prvi eluirani izomer. Prvi eluirani izomer je ponovo prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 0 do 5% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio proizvod kao bleda žuta pena (34 mg, 11%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 2.17-2.29 (1H, m), 2.40 (1H, dtd), 3.49 (3H, s), 3.80 (3H, s), 3.96 (1H, s), 4.41-4.49 (1H, m), 4.92 (1H, s), 6.06 (1H, s), 7.21 (1H, dddd), 7.35 (1H, s), 7.38-7.46 (2H, m), 8.10 (1H, d), 8.49 (1H, d), 10.33 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>497.41.

Primer 8(a) kao drugi eluirani izomer (78 mg, 26%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 2.22 (1H, dq), 2.43 (1H, td), 3.49 (3H, s), 3.65-3.92 (3H, m), 3.99 (1H, s), 4.49 (1H, s), 4.87 (1H, s), 5.27 (1H, s), 7.22 (1H, d), 7.31 (1H, s), 7.41 (2H, dt), 8.12 (1H, d), 8.52 (1H, d), 9.88 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>497.55.

Primeri 9(a) i 9(b)

(2S)-2-Metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid i (2R)-2-Metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid [0157]

[0158] U smešu 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (330 mg, 1.83 mmol) i (3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-amin dihidrohlorida (Međujedinjenje 6, 435 mg, 1.83 mmol) u DMF (4 mL) je dodat DIPEA (1.181 mL, 6.78 mmol) i suspenzija je mešana uz zagrevanje do 100°C u trajanju od 1 h. Rastvor 2-metoksi-2-(3-(trifluorometoksi)fenil)sirćetne kiseline (Međujedinjenje 17, 504 mg, 2.02 mmol) u DMF (1mL) je zatim dodat što je praćeno sa HATU (767 mg, 2.02 mmol) i reakcija je mešana preko noći na s.t. Sirova reakciona smeša je zatim neposredno napunjena u SCX kolonu i željeni proizvod je eluiran iz kolone upotrebom 1M amonijak/MeOH i čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio proizvod kao braon guma. Sirovi proizvod je prečišćen sa preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5 µm silika, 19 mm prečnik, 100 mm dužina), upotrebom opadajućih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% amonijak) i MeCN kao eluente. Frakcije koje su sadržale željeno jedinjenje su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio proizvod kao smeša diasteroizomera (222 mg) koja je dalje prečišćena sa hiralnom prep-HPLC kao što sledi. Polarni prikaz organskih alkohola je pokazao moguće razdvajanje na C2 koloni (3 µm silika, 4.6 mm prečnik, 50 mm dužina) upotrebom smeše EtOH i MeOH kao eluente (50/50). Ova metoda je korišćena za preparativne radnje na OD koloni (20 µm silika, 50 mm prečnik, 250 mm dužina). Frakcije koje su sadržale željena jedinjenja su isparavana dok nije bila suva kako bi se dobio:

Primer 9(a) kao prvi eluirani izomer (90 mg, 10%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.02-2.13 (1H, m), 2.24-2.36 (1H, m), 3.35 (3H, s), 3.45-3.64 (3H, m), 3.76 (1H, dd), 4.33-4.45 (1H, m), 5.07 (1H, s), 6.86 (1H, dd), 7.28-7.40 (2H, m), 7.43-7.59 (3H, m), 7.69 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.26 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>496.5.

Primer 9(b) kao drugi eluirani izomer (84 mg, 9%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 1.99-2.13 (1H, m), 2.23-2.38 (1H, m), 3.35 (3H, s), 3.45-3.64 (3H, m), 3.76 (1H, dd), 4.33-4.46 (1H, m), 5.07 (1H, s), 6.86 (1H, dd), 7.29-7.39 (2H, m), 7.42-7.59 (3H, m), 7.69 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.27 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>496.5.

Primeri 10(a) i 10(b)

(2S)-2-Etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid i (2R)-2-Etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0159]

4

[0160] HATU (6.24 g, 16.41 mmol) je dodat u N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (Međujedinjenje 5, 3.6 g, 13.67 mmol), 2-etoksi-2-fenilsirćetnu kiselinu (Međujedinjenje 18, 2.464 g, 13.67 mmol) i DIPEA (2.381 mL, 13.67 mmol) u DMF (40 mL) pri 21°C pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan pri 21°C u trajanju od 1.5 h. Sirovi proizvod je prečišćen sa hromatografijom sa razmenom jona, upotrebom SCX kolone. Željeni proizvod je eluiran iz kolone upotrebom 1M amonijak/MeOH i čiste frakcije su adsorbovane u silika. Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 0 do 8% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio proizvod kao smeša diastereomera. Razdvajanje diastereomera je postignuto na AD koloni upotrebom 75/25 izopropanol/MeOH kao eluente. Uzorak je rastvoren u 30 mL IPA/MeOH. Frakcije koje su sadržale željena jedinjenja su isparavana dok nije bila suva kako bi se dobio:

Primer 6(b) kao prvi eluirani izomer (1.4 g, 24%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 1.17 (3H, t), 2.06 (1H, m), 2.22-2.35 (1H, m), 3.38-3.60 (5H, m), 3.73 (1H, m), 4.31-4.50 (1H, m), 5.07 (1H, s), 6.85 (1H, dd), 7.25-7.41 (4H, m), 7.46 (2H, m), 7.67 (1H, d), 8.46 (1H, dd), 12.16 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>426.

Primer 10(a) kao drugi eluirani izomer (1.6 g, 27%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 1.17 (3H, t), 2.06 (1H, m), 2.22-2.35 (1H, m), 3.38-3.60 (5H, m), 3.73 (1H, m), 4.31-4.50 (1H, m), 5.07 (1H, s), 6.85 (1H, dd), 7.25-7.41 (4H, m), 7.46 (2H, m), 7.67 (1H, d), 8.46 (1H, dd), 12.16 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>426.

Primer 11

[0162] (2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)sirćetna kiselina (Međujedinjenje 19, 0.224 g, 1.14 mmol) je dodata u N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (Međujedinjenje 5, 0.3 g, 1.14 mmol), EDC (0.328 g, 1.71 mmol) i HOBT (0.174 g, 1.14 mmol) u DMF (5mL). Dobijena smeša je mešana pri 25°C u trajanju od 16 h. Sirovi proizvod je prečišćen sa preparativnom HPLC (Phenomenex Gemini-NX axia Prep C18 OBD kolona, 5 µm silika, 19 mm prečnik, 100 mm dužina), upotrebom opadajućih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje su sadržale željeno jedinjenje su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio (2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid (50 mg, 10 %) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 26°C) δ2.06 (1H, td), 2.19-2.37 (1H, m), 3.26 (3H, s), 3.41-3.61 (3H, m), 3.73 (4H, s), 4.37 (1H, q), 4.88 (1H, s), 6.80-6.98 (3H, m), 7.26-7.42 (3H, m), 7.64 (1H, d), 8.47 (1H, dd), 12.15 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>442. Primeri 12(a) i 12(b)

(2S)-2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid i (2R)-2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0163]

[0164] 2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-sirćetna kiselina (Međujedinjenje 23, 0.11 g, 0.57 mmol) je suspendovana u DMF (5 mL) i hlađena u ledenom kupatilu pod azotom. DIPEA (0.3 mL, 1.71 mmol) je dodat, što je praćeno sa HATU (0.22 g, 0.57 mmol). Smeša je mešana u trajanju od 10 minuta (sa hlađenjem u ledenom kupatilu) pre dodavanja N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (Međujedinjenje 5, 0.15 g, 0.57 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreje do s.t. i mešana je u trajanju od 5 h. Zatim je isparavana dok nije bila suva. Sirovi proizvod je prečišćen sa hromatografijom sa razmenom jona, upotrebom SCX kolone. Željeni proizvod je eluiran iz kolone upotrebom 2N amonijak/MeOH. Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, eluent 7% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio proizvod kao smeša diastereizomera. Smeša diastereizomera je razdvojena sa preparativnom hiralnom HPLC (Chiralpak IA kolona, 20 µm silika, 50 mm prečnik, 250 mm dužina), Heptan/EtOH-MeOH 60/40 kako bi se dobio:

Primer 12(b) kao prvi eluirani izomer (47 mg, 35%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 26°C) δ 2.08 (1H, dt), 2.29 (1H, dtd), 3.47-3.63 (3H, m), 3.76 (1H, dd), 4.33-4.49 (1H, m), 5.00 (1H, s), 6.87 (1H, dd), 7.23 (2H, t), 7.33 (1H, dd), 7.46-7.55 (2H, m), 7.69 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.22 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>430.

Primer 12(a) kao drugi eluirani izomer (49 mg, 36%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 26°C) δ 2.08 (1H, dd), 2.30 (1H, dd), 3.18 (2H, d), 3.45-3.62 (3H, m), 3.75 (1H, dd), 4.08 (1H, q), 4.33-4.44 (1H, m), 5.00 (1H, s), 6.86 (1H, dd), 7.22 (2H, t), 7.33 (1H, dd), 7.50 (2H, dd), 7.69 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.21 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>430.

Primeri 13(a) i 13(b)

(2S)-2-Etoksi-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid i (2R)-2-Etoksi-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0165]

[0166] HATU (0.29 g, 0.76 mmol) je dodat u N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (Međujedinjenje 5, 0.2 g, 0.76 mmol), 2-etoksi-2-(4-fluorofenil)sirćetnu kiselinu (Međujedinjenje 25, 0.15 g, 0.76 mmol) i DIPEA (0.4 mL, 2.279 mmol) u DMF (2mL) na s.t. pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na s.t. u trajanju od 48 h. Reakciona smeša je razblažena sa MeOH (1mL) i puštena kroz 5 g SCX kertridž, isprana sa MeOH i zatim su osnovni proizvodi eluirani sa 2N amonijakom u MeOH. Osnovna frakcija je isparena i prečišćena dalje sa preparativnom HPLC (SunFire C18 kolona, 5µm veličina pora kolone dimenzija 50x19 mm, protok 25 mL/min i mobilna faza vode i MeCN koja sadrži 0.1% mravlju kiselinu. Eluiranje je započeto pri 95% voda:5% MeCN i držano je na tome u trajanju od 0.3 minuta pre povećanja do 5% voda:95% MeCN do 5.8 minuta pre vraćanja na početne uslove u trajanju od 0.1 minuta). Čiste frakcije su isparene i puštene kroz 5g SCX kertridž, isprane sa MeOH i zatim eluirane sa 2N amonijakom u MeOH. Osnovne frakcije su isparene i osušene preko noći u vakuumu kako bi se dobio sirovi proizvod kao smeša diastereizomera. Diastereoizomeri su razdvojeni sa preparativnom HPLC (Phenomenex Lux C2 kolona, 20 µm silika, 50 mm prečnik, 250 mm dužina, EtOH 100%, 120 ml/min) kako bi se dobio:

Primer 13(a) kao prvi eluirani izomer (30 mg, 34%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1.17 (3H, t), 2.01-2.11 (1H, m), 2.23-2.32 (1H, m), 3.37-3.59 (5H, m), 3.74 (1H, dd), 4.34-4.41 (1H, m), 5.08 (1H, s), 6.85 (1H, dd), 7.16-7.24 (2H, m), 7.31 (1H, dd), 7.46-7.53 (2H, m), 7.66 (1H, d), 8.46 (1H, dd), 12.16 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>444.

Primer 10(b) kao drugi eluirani izomer (34 mg, 37%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 27°C) δ 1.17 (3H, t), 2-2.1 (1H, m), 2.22-2.31 (1H, m), 3.38-3.58 (5H, m), 3.74 (1H, dd), 4.33-4.41 (1H, m), 5.08 (1H, s), 6.85 (1H, dd), 7.16-7.24 (2H, m), 7.31 (1H, dd), 7.46-7.53 (2H, m), 7.65 (1H, d), 8.47 (1H, dd), 12.19 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>444.

Primeri 14(a) i 14(b)

(2S)-2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid i (2R)-2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0167]

[0168] HATU (0.71 g, 1.868 mmol) je dodat u N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (Međujedinjenje 5, 0.25 g, 0.934 mmol) 2-(4-fluoro-3-metoksifenil)-2-metoksi-sirćetnu kiselinu (Međujedinjenje 26, 0.2 g, 0.934 mmol) i DIPEA (0.49 mL, 2.801 mmol) u DMF (5mL) ohlađen u ledenom kupatilu pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na s.t. preko noći. Rastvarač je uklonjen u vakuumu i ostatak je doveden u MeOH i pušten kroz 5g SCX kertridža ispran sa MeOH i zatim eluiran sa 2N amonijakom u MeOH. Osnovne frakcije su isparene i prečišćene sa FCC (0-8% MeOH u DCM) što je praćeno sa preparativnom HPLC (SunFire C18 kolona, 5 µm veličina pora, dimenzije 50x19 mm, protok 25 mL/min i mobilna faza vode i MeCN koja je sadržala 0.1% mravlju kiselinu. Eluiranje ze započeto pri 95% voda:5% MeCN i držano je na tome u trajanju od 0.3 minuta pre povećanja do 5% voda:95% MeCN do 5.8 minuta pre vraćanja na početne uslove u trajanju od 0.1 minuta). Čiste frakcije su isparene i puštene kroz 5g SCX kertridž, isprane sa MeOH i zatim eluirane sa 2N amonijakom u MeOH. Osnovne frakcije su isparene i osušene preko noći u vakuumu kako bi se dobio sirovi proizvod kao smeša diastereizomera. Diastereoizomeri su razdvojeni sa preparativnom HPLC (C2 prep kolona, 50 x 250 mm, 20µm silika, eluiranje sa 50/50 smešom EtOH/MeOH pri 110 ml/min) kako bi se dobio:

Primer 14(a) kao prvi eluirani izomer (42 mg, 33%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2.02-2.11 (1H, m), 2.23-2.32 (1H, m), 3.31 (3H, s), 3.48 (1H, dd), 3.52-3.59 (2H, m), 3.74 (1H, dd), 3.83 (3H, s), 4.33-4.42 (1H, m), 4.95 (1H, s), 6.85 (1H, dd), 7.01 (1H, ddd), 7.20 (1H, dd), 7.25 (1H, dd), 7.31 (1H, dd), 7.67 (1H, d), 8.47 (1H, dd), 12.15 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>460.

Primer 14(b) kao drugi eluirani izomer (46 mg, 36%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 2.01-2.11 (1H, m), 2.22-2.31 (1H, m), 3.31 (3H, s), 3.46-3.59 (3H, m), 3.74 (1H, dd), 3.83 (3H, s), 4.32-4.42 (1H, m), 4.94 (1H, s), 6.85 (1H, dd), 7.01 (1H, ddd), 7.20 (1H, dd), 7.25 (1H, dd), 7.32 (1H, dd), 7.65 (1H, d), 8.47 (1H, dd), 12.17 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>460.

Primeri 15(a) i 15(b)

(2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid i (2R)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid

[0169]

[0170] 2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-etoksi-sirćetna kiselina (Međujedinjenje 27, 0.14 g, 0.57 mmol) i N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (Međujedinjenje 5, 0.15 g, 0.57 mmol) su izmereni u bočici sa radnim dnom. DMF (3 mL) i DIPEA (0.18 g, 1.424 mmol) su dodati što je praćeno sa HATU (0.22 g, 0.57 mmol) i dobijeni rastvor je ostavljen da se meša na s.t. pod azotom u trajanju od 3 h. Rastvarač je uklonjen pod smanjenim pritiskom i dobijena guma je rastvorena u DCM, apsorbovana u silika i prečišćena sa FCC (gradijent eluiranja 1-8% MeOH in DCM). Isparavanje čistih frakcija pod smanjenim pritiskom doprinelo je gumu. Diastereoizomeri su odvojeni od ove gume preparativnom HPLC (Amy-C kolona, 5µm veličina pora, 20mm prečnik, 250mm dužina, eluiranje sa MeOH/CO240% koji je sadržao amonijak izmenjivač) kako bi se dobio:

Primer 15(a) kao prvi eluirani izomer (25 mg, 8%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21°C) δ 1.19 (3H, t), 2.01-2.14 (1H, m), 2.22-2.36 (1H, m), 3.62-3.38 (5H, m), 3.74 (1H, dd), 4.33-4.44 (1H, m), 5.12 (1H, s), 6.86 (1H, dd), 7.16 (1H, dd), 7.24 (1H, t), 7.26-7.30 (1H, m), 7.30-7.48 (3H, m), 7.72 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.27 (1H,s). m/z: ES<+>[M+H]<+>492.

Primer 15(b) kao drugi eluirani izomer (23 mg, 8%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21°C) δ 1.19 (3H, t), 2.01-2.14 (1H, m), 2.22-2.36 (1H, m), 3.62-3.38 (5H, m), 3.74 (1H, dd), 4.33-4.44 (1H, m), 5.12 (1H, s), 6.87 (1H, dd), 7.16 (1H, dd), 7.25 (1H, t), 7.26-7.30 (1H, m), 7.30-7.48 (3H, m), 7.72 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.27 (1H, s). m/z: ES<+>[M+H]<+>492.

Primeri 16(a) i 16(b)

(2S)-2-Etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid i (2R)-2-Etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid

[0171]

[0172] DIPEA (0.15 mL, 0.85 mmol), HATU (260 mg, 0.68 mmol) i 2-etoksi-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]sirćetna kiselina (Međujedinjenje 28, 180 mg, 0.68 mmol) su dodati

1

u rastvor N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamina (međujedinjenje 5, 150 mg, 0.57 mmol) u DMF (4 mL). Smeša je mešana na s.t. u trajanju od 18 h. Ovo je zatim razblaženo sa vodom (5 mL) i zatim izvađeno na DCM (10 mL), ispareno i prečišćeno sa preparativnom HPLC (XBridge C18 kolona, 5 µm veličina pora, 50mm dužina x19 mm prečnik, protok 25 mL/min, mobilna faza, voda je sadržala 0.1% amonijum hidroksid i MeCN. Eluiranje je započeto pri 95% voda:5% MeCN i držano tako u trajanju od 1.5 minuta podizanjem do 5% voda:95% MeCN u trajanju od 8 minuta. Eluent je držan pri 95% MeCN do 12 minuta). Čiste frakcije su isparene i puštene kroz SCX kertridž, isprane sa MeOH i zatim eluirane sa 2M amonijakom u MeOH. Osnovne frakcije su isparene i osušene preko noći u vakuumu kako bi se dobio sirovi proizvod kao smeša diastereizomera.

Diastereoizomeri su zatim razdvojeni sa HPLC HPLC (Lux C4 kolona, 5 µm (20mm prečnik, 250mm dužina, MeOH koji sadrži amonijak izmenjivač, 21 mL/min) kako bi se dobio:

Primer 16(a) kao prvi eluirani izomer (46 mg, 16%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21°C) δ 1.19 (3H, t), 1.97-2.15 (1H, m), 2.18-2.36 (1H, m), 3.40-3.65 (5H, m), 3.65-3.81 (1H, m), 4.32-4.46 (1H, m), 5.17 (1H, s), 6.87 (1H, dd), 7.28-7.40 (2H, m), 7.40-7.59 (3H, m), 7.74 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 12.32 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>510.

Primer 16(b) kao drugi eluirani izomer (39 mg, 14%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21°C) δ 1.19 (3H, t), 2.06 (1H, m), 2.20-2.35 (1H, m), 3.39-3.63 (5H, m), 3.74 (1H, m), 4.34-4.44 (1H, m), 5.17 (1H, s), 6.88 (1H, dd), 7.28-7.41 (2H, m), 7.42-7.58 (3H, m), 7.73 (1H, d), 8.48 (1H, d), 12.32 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>510.

[0173] Sledeći Primeri su pripremljeni na analogni način sa Primerima 1-16 upotrebom metoda i reagenasa poznatih stručnoj osobi sa uobičajenim znanjem organske hemije:

2

4

Međujedinjenje 1

(3R)-1-(1,2,4-Triazin-3-il)pirolidin-3-amin

[0174]

[0175] terc-Butil N-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]karbamat (Međujedinjenje 2, 2.39 g, 9.01 mmol) je rastvoreno u smeši DCM (20 mL) i trifluorosirćetne kiseline (5 mL) i rastvor je ostavljen da miruje u trajanju od 1 h na s.t. pre nego što je isparen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je rastvoren u MeOH i pušten je kroz 20 g SCX kertridža ispiranjem sa MeOH što je praćeno sa 3N amonijakom u MeOH kako bi se dobio proizvod. Rastvarač je isparen pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio (3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-amin (1.460 g, 98%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 27°C) δ 1.8-1.92 (1H, m), 2.18-2.29 (1H, m), 3.45 (1H, s), 3.6-4.01 (4H, m), 8.13 (1H, d), 8.50 (1H, d); mlz: ES<+>[M+H]<+>166.

Međujedinjenje 2

terc-Butil N-[(3R)-1-(1,2,4-Triazin-3-il)pirolidin-3-il]karbamat

[0176]

[0177] 3-Metilsulfanil-1,2,4-triazin (Međujedinjenje 3, 1.5 g, 11.80 mmol), i terc-butil N-[(3R)-pirolidin-3-il]karbamat (2.64 g, 14.15 mmol) su rastvoreni u EtOH (12 mL) i zatvoreni u mikrotalasnu cev. Reakcija je zagrevana do 100°C u trajanju od 24 h u mikrotalasnom reaktoru i ohlađena je do s.t. LC/MS je pokazala 61% proizvoda i 34% nereagovanog triazina. Još terc-butil N-[(3R)-pirolidin-3-il]karbamata (0.52 g) je dodato i zagrevanje pri 100°C u mikrotalasnom reaktoru je nastavljeno u trajanju od 15 h. LC/MS je pokazala 76% proizvoda i 18% nereagovanog triazina. Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom i ostatak je podeljen između EtOAc i vodenog natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je ponovo izvađen sa svežim EtOAc i kombinovane organske materije su osušene (MgSO4), filtrirane i isparene pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 0 do 80% EtOAc u heptanu. Značajne frakcije su isparene kako bi se dobio terc-butil N-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]karbamat (2.390 g, 76%) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 27°C) δ 1.46 (9H, s), 1.96-2.07 (1H, m), 2.26-2.37 (1H, m), 3.55 (1H, s), 3.75 (2H, s), 3.90 (1H, s), 4.39 (1H, s), 4.69 (1H, s), 8.14 (1H, d), 8.53 (1H, d); m/z: ES-[M-H]<->264.

Međujedinjenje 3

3-Metilsulfanil-1,2,4-triazin

[0178]

[0179] Rastvor metil hidrazinekarbimidotioat hidrojodida (Međujedinjenje 4, 7.5 g, 32.18 mmol) u ledu/vodi (400 mL) je dodat u mešani rastvor 40% oksalaldehida (14.70 mL, 128.71 mmol), i natrijum bikarbonata (6.76 g, 80.45 mmol) u ledu/vodi (400 mL) ohlađen do 0°C. Dobijeni rastvor je mešan pri 0°C u trajanju od 5 h, zatim je izvađen sa DCM (2 x 150 mL). Ekstrakti su kombinovani isprani sa 1M limunskom kiselinom (50 mL), osušeni preko MgSO4i redukovani kako bi se dobio 3-metilsulfanil-1,2,4-triazin (3.60 g, 88%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 27°C) δ 2.68 (3H, s), 8.38 (1H, d), 8.94 (1H, d).

Međujedinjenje 4

Metil hidrazinekarbimidotioat hidrojodid

[0180]

[0181] Jodometan (0.623 mL, 10.00 mmol) je dodat u hidrazinekarbotioamid (0.911 g, 10 mmol), u EtOH (10 mL). Dobijena smeša je mešana pri 70°C u trajanju od 30 minuta.

Reakcija je ostavljena da se ohladi do s.t. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz najlonski filter. Dobijena čvrsta supstanca je zatim isprana sa Et2O i osušena pod vakuumom preko noći kako bi se dobio metil hidrazinekarbimidotioat hidrojodid (1.810 g, 78%) kao bela čvrsta supstanca koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.

Međujedinjenje 5

N'-[(3R)-1-Piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin

[0182]

[0183] U bocu od 1000 mL sa okruglim dnom je postavljen rastvor (3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-amin dihidrohlorida (Međujedinjenje 6, 10.5 g, 44.29 mmol) u DMF (400 mL), 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (7.94 g, 44.10 mmol) i DIPEA (17.07 g, 132.08 mmol).

Dobijeni rastvor je mešan u trajanju od 4 h pri 80°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen sa ponovnom kristalizacijom iz EtOH/EtOAc. Ovo se ispoljilo u N'-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diaminu kao svetlo žutoj čvrstoj supstanci (11g, 94%).1H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 2.04 (1H, td), 2.22-2.31 (1H, m), 3.43-3.62 (3H, m), 3.72 (1H, dd), 4.28 (1H, dq), 6.27 (2H, s), 6.86 (1H, dd), 7.07 (1H, d), 7.33 (1H, dd), 8.48 (1H, dd); m/z: ES<+>[M+H]<+>264.28.

[0184] Međujedinjenje 5 je takođe pripremljeno u velikim količinama u skladu sa sledećim alternativnim postupkom.

[0185] (R)-1-(Piridazin-3-il)pirolidin-3-amin (Međujedinjenje 6, slobodni bazni oblik, 25.5 g, 150.63 mmol) i 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amin (29.8 g, 165.70 mmol) sa DIPEA (39.4 mL, 225.95 mmol) je mešan kao mulj MeOH (200 mL) pri 45°C. Mulj je ohlađen do 20°C i čvrsta supstanca je izolovana vakuumskom filtracijom. 50 ml MeOH je korišćeno kao sredstvo za ispiranje za premeštanje filterskog kolača i osušen je preko noći u vakuumskoj pećnici pri 40°C. Međujedinjenje 5 (32.9 g, 83 %) je dobijeno kao bež prašak koji slobodno pluta.

Međujedinjenje 6

(3R)-1-Piridazin-3-ilpirolidin-3-amin dihidrohlorid

[0186]

[0187] U bocu od 1000 mL sa ravnim dnom postavljen je rastvor terc-butil N-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]karbamata (Međujedinjenje 7, 20 g, 75.66 mmol) u dioksanu (200 mL) i kons. HCl (100 mL). Dobijeni rastvor je mešan u trajanju od 30 minuta na s.t. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je ponovo kristalizovan iz MeOH/EtOAc u odnosu 1:2. Ovo se ispoljilo u (3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-amin dihidrohloridu kao prljavo bela čvrsta supstanca (13.4g, 75%).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 26°C) δ 2.25-2.43 (2H, m), 3.66-3.74 (1H, m), 3.78-3.90 (3H, m), 4.02-4.10 (1H, m), 7.75 (1H, d), 7.94 (1H, dd), 8.66 (1H, d), 8.77-8.98 (3H, br); m/z: ES<+>[M+H]<+>165.

[0188] Međujedinjenje 6 (slobodni bazni oblik) je takođe pripremljeno u skladu sa sledećim postupkom.

[0189] terc-butil N-[(3R)-1-(6-Hloropiridazin-3-il)pirolidin-3-il]karbamat (Međujedinjenje 8, 20 g, 107.38 mmol) u piridinu (400 mL) je pomešan sa paladijum hidroksidom na ugljeniku (Pearlman-ov katalizator, 27.5 g, 25.84 mmol) i 1-Metil-1,4-cikloheksadienu (31.0 ml, 276.13 mmol) u MeOH (1375 mL). Reakciona smeša je zatim zagrevana do 65°C u trajanju od 90 minuta. Kada je uočena potpuna konverzija, reakcija je ohlađena nazad do s.t. i katalizator je uklonjen sa filtracijom.3M hlorovodonična kiselina u MeOH (184 ml, 552.27 mmol) je zatim napunjena u reakcionu smešu i rastvor je zagrevan do 65°C u trajanju od 1 h. Kada je uočena potpuna konverzija, reakcioni rastvor je ohlađen nazad do temperature okoline i pušten je kroz 10 x 50 g SCX kolonu koja je bila prethodno eluirana sa MeOH. Jedinjenje je pušteno iz SCX kolone sa 1M amonijakom u MeOH. Dobijeni rastvor je razblažen sa toluenom (1000 mL) i koncentrovan dok nije bio suv u rotirajućem isparivaču kako bi se dobila čvrsta supstanca koja slobodno pluta. (3R)-1-Piridazin-3-ilpirolidin-3-amin je izolovan pri snazi od 97% w/w kao slobodna baza.

Međujedinjenje 7

terc-Butil N-[(3R)-1-(6-hloropiridazin-3-il)pirolidin-3-il]karbamat

[0190]

[0191] U bocu od 2000-mL sa ravnim dnom je postavljen rastvor terc-butil N-[(3R)-1-(6-hloropiridazin-3-il)pirolidin-3-il]karbamata (Međujedinjenje 8, 23 g, 76.98 mmol) u MeOH (800 mL) i paladijuma na ugljeniku (2 g). Sistem je površinski prečišćen i održavan sa gasom vodonika. Dobijeni rastvor je mešan u trajanju od 4 h na s.t. Čvrste supstance su filtrirane. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovo se ispoljilo u terc-butil N-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]karbamatu (20g, 84%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 24°C): δ 1.44 (9H, s), 2.25-2.35 (2H, m), 3.48-3.56 (1H, m), 3.70-4.10 (3H,

1

m), 4.35-4.42 (1H, m), 7.26-7.32 (1H, m), 7.70-7.75 (1H, m), 8.53-8.55 (1H, m); m/z: ES<+>[M+H]<+>265.

Međujedinjenje 8

terc-Butil N-[(3R)-1-(6-hloropiridazin-3-il)pirolidin-3-il]karbamat

[0192]

[0193] U bocu od 1000 mL sa ravnim dnom je postavljen rastvor terc-butil N-[(3R)-pirolidin-3-il]karbamata (20 g, 107.38 mmol) u piridinu (400 mL) i 3,6-dihloropridazinu (16 g, 107.40 mmol). Dobijeni rastvor je zagrevan uz polivanje preko noći. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen sa ponovnom kristalizacijom iz EtOH/Et2O u odnosu 1:3. Ovo se ispoljilo u terc-butil N-[(3R)-1-(6-hloropiridazin-3-il)pirolidin-3-il]karbamatu (23g, 72%) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 1.45 (9H, s), 2.02 (1H, dq), 2.31 (1H, td), 3.41 (1H, dd), 3.54-3.70 (2H, m), 3.78 (1H, dd), 4.37 (1H, s), 4.76 (1H, s), 6.61 (1H, d), 7.17 (1H, d); m/z: ES<+>[M+H]<+>299.

Međujedinjenje 9

N’-[(3R)-1-(1,2,4-Triazin-6-il)pirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin

[0194]

[0133] 5-Bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amin (177 mg, 0.99 mmol), (3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-amin (Međujedinjenje 10, 155 mg, 0.94 mmol) i DIPEA (0.196 mL, 1.13 mmol) su rastvoreni u DMF (4mL) i zatvoreni u mikrotalasnu cev. Reakcija je zagrevana do 100°C u trajanju od 90 minuta u mikrotalasnom reaktoru. Smeša je ohlađena do s.t. i

2

razblažena sa MeOH (4 mL) pre nego što je puštena je kroz 10g SCX kertridž, ispiranjem sa MeOH što je praćeno sa 3N metan amonijakom kako bi se dobio proizvod. Rastvarač je isparen pod redukovanim pritiskom i ostatak je usitnjen sa MeCN (10 mL) kako bi se dobio N-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]-1,3,4-tiadiazol-2,5-diamin (198 mg, 80%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) δ 1.99-2.10 (1H, m), 2.19-2.3 (1H, m), 3.51 (1H, dd), 3.59 (2H, t), 3.74 (1H, dd), 4.24-4.33 (1H, m), 6.28 (2H, s), 7.07 (1H, d), 8.26 (1H, s), 8.94 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>265.

Međujedinjenje 10

(3R)-1-(1,2,4-Triazin-6-il)pirolidin-3-amin

[0196]

[0197] terc-Butil N-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]karbamat (Međujedinjenje 11, 280 mg, 1.06 mmol) je rastvoren u smeši DCM (4 mL) i TFA (1 mL) i rastvor je ostavljen da se meša u trajanju od 1 h na s.t. pre nego što je isparen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je rastvoren u MeOH i pušten je kroz 10g SCX kertridža ispiranjem sa MeOH što je praćeno sa 3N amonijakom u MeOH kako bi se dobio proizvod. Rastvarač je isparen pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio (3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-amin (155 mg, 89%)kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) δ 1.69-1.79 (1H, m), 1.88 (2H, s), 2.00-2.10 (1H, m), 3.13-3.21 (1H, m), 3.44-3.53 (1H, m), 3.54-3.65 (3H, m), 8.20 (1H, s), 8.90 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>166.

Međujedinjenje 11

terc-Butil N-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]karbamat

[0198]

[0199] Smeša terc-butil N-[(3R)-1-(3-metilsulfanil-1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]karbamata (Međujedinjenje 12, 1.7 g, 5.46 mmol) i Renijevog nikla (približno 50% vodene smeše sa aluminijumom) (0.935 g, 5.46 mmol) u EtOH (50 mL) je zagrevana uz polivanje pod azotom u trajanju od 3 h. Katalizator je filtriran i rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio terc-butil N-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]karbamat (0.180 g, 12%) lap čvrsta supstanca zajedno sa nereagovanim početnim materijalom (0.98g).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) δ 1.39 (9H, s), 1.92 (1H, td), 2.14 (1H, dq), 3.32-3.37 (1H, m), 3.46-3.62 (2H, m), 3.67 (1H, dd), 4.09-4.21 (1H, m), 7.22 (1H, d), 8.23 (1H, s), 8.93 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>266.

Međujedinjenje 12

terc-Butil N-[(3R)-1-(3-metilsulfanil-1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]karbamat [0200]

[0201] Smeša terc-butil N-[(3R)-pirolidin-3-il]karbamata (1.452 g, 7.79 mmol) i 6-bromo-3-metilsulfanil-1,2,4-triazina (Međujedinjenje 13, 1.46 g, 7.09 mmol) i DIPEA (3.71 mL, 21.26 mmol) u butan-1-olu (15 mL) je zagrejana pri 80°C pod azotom u trajanju od 3 h.

Smeša je ohlađena do s.t. i rastvarač je isparen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je podeljen između EtOAc i slanog rastvora, vodeni sloj je ponovo izvađen sa svežim EtOAc i kombinovane organske materije su osušene (MgSO4), filtrirane i isparene pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je usitnjen sa Et2O (15 mL) kako bi se dobio terc-butil N-[(3R)-1-(3-metilsulfanil-1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]karbamat (1.750 g, 79%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 27°C) 1.46 (9H, s), δ 1.97-2.08 (1H, m), 2.27-2.40 (1H, m), 2.63 (3H, s), 3.43 (1H, dd), 3.58-3.72 (2H, m), 3.80 (1H, dd), 4.39 (1H, s), 4.66 (1H, s), 7.91 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>312.

Međujedinjenje 13

4

6-Bromo-3-metilsulfanil-1,2,4-triazin

[0202]

[0203] terc-Butil nitrit (7.59 mL, 63.78 mmol) je dodat u vidu kapi u smešu 6-bromo-1,2,4-triazin-3-amina (Međujedinjenje 14, 1.86 g, 10.63 mmol) i 1,2-dimetildisulfana (9.45 mL, 106.29 mmol) u suvom MeCN (30 mL) i reakciona smeša je mešana na s.t. u trajanju od 1 h. MeOH (3 mL) je dodat i smeša je isparena pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 0-20% EtOAc u heptanu. Frakcije koje su sadržale proizvod isparene su pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio 6-bromo-3-metilsulfanil-1,2,4-triazin (1.520 g, 69%) kao žuta guma koja je kristalizovana pri stajanju.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 27°C) δ 2.66 (3H, s), 8.43 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>205.9.

Međujedinjenje 14

6-Bromo-1,2,4-triazin-3-amin

[0204]

[0205] 1-Bromopirolidin-2,5-dion (8.13 g, 45.68 mmol) je dodat u delovima u 1,2,4-triazin-3-amin (4.18 g, 43.50 mmol) u MeCN (48 mL) i vodu (72 mL) ohlađenu do 0°C. Dobijeni rastvor je mešan pri 0°C u trajanju od 10 minuta i zatim je ostavljen da se zagreje do s.t. i mešan je u trajanju od 90 minuta. Reakcija je zatim ohlađena do 0°C i EtOAc (150 mL) i natrijum karbonat (3.23 g, 30.45 mmol) su dodati i smeša je mešana u trajanju od 5 minuta pri 0°C i zatim u trajanju od 10 minuta na s.t. Organski sloj je odvojen i vodeno ponovo izvađen sa EtOAc, kombinovane organske materije su isprane sa vodenim natrijum bikarbonatom, osušene (MgSO4), filtrirane i isparene pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je usitnjen sa MeCN (20 mL) što je praćeno sa EtOH (5 mL) kako bi se dobio 6bromo-1,2,4-triazin-3-amin (2.97 g, 39%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) δ 7.45 (2H, s), 8.39 (1H, s); m/z: ES<->[M-H]<->173

Međujedinjenje 15

2-Metoksi-2-(3-metoksifenil)sirćetna kiselina

[0206]

[0207] Rastvor kalijum hidroksida (2.267 g, 40.40 mmol) u MeOH (10 mL) je dodat u trajanju od 2 h u malim delovima u mešanu smešu 3-metoksibenzaldehida (1 g, 7.34 mmol) i bromoforma (0.771 mL, 8.81 mmol) u MeOH (5.00 mL) pri 0°C. Smeša je zatim ostavljena da se zagreje do s.t. i ostavljena je da se meša preko noći. Čvrste supstance su filtrirane pod redukovanim pritiskom, ispranjem čvrstih supstanci sa MeOH (15 mL). Filtrat je isparen do guste bele paste i zatim je ponovo rastvoren u vodi (50 mL). Ovo je zatim isprano sa Et2O (50 mL) i zatim je vodeni deo načinjen kiselim do pH 2 (∼5 mL 2M HCl rastvor). Vodena faza je zatim izvađena sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovane organske materije su osušene preko MgSO4i filtrirane, zatim su rastvarači ispareni pod redukovanim pritiskom kako bi se dobila 2-metoksi-2-(3-metoksifenil)sirćetna kiselina kao žuto ulje (1.4 g, 97%) koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 3.18 (3H, s), 3.75 (3H, s), 4.74 (1H, s), 6.82-7.05 (3H, m), 7.29 (1H, m), 12.78 (1H, s).

Međujedinjenje 16

2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksisirćetna kiselina

[0208]

[0209] Čvrsti kalijum hidroksid (5.38 g, 95.86 mmol) je dodat u delovima u trajanju od 1 h u mešani rastvor 3-(difluorometoksi)benzaldehida (3 g, 17.43 mmol), bromoforma (1.829 mL, 20.91 mmol) i vodenog MeOH (25 mL) pri 0°C. Kupka za hlađenje je uklonjena i reakcija je mešana na s.t. (jaka egzotermna reakcija je započeta). Reakcija je ostavljena da se meša preko noći. Neorganske čvrste supstance su filtrirane i isprane sa MeOH. Filtrat je koncentrovan u vakuumu do male zapremine, razblažen sa vodom (100 mL) i ispran dva puta sa Et2O (2x50 mL) i načinjen kiselim do pH=2 sporim dodavanjem 37% HCL. Smeša je izvađena sa EtOAc (3 x 50 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen kako bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 0 do 60% EtOAc u heptanu sa 0.5% mravljom kiselinom. Čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobila 2-[3-(difluorometoksi)fenil]-2-metoksisirćetna kiselina (1.710 g, 42%) kao guma.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.33 (3H, s), 4.82 (1H, s), 7.16 (2H, dd), 7.28 (1H, d), 7.23 (1H, t), 7.42-7.47 (1H, m), 12.93 (1H, s); m/z: ES<->[M-H]<->231.25. Međujedinjenje 17

2-Metoksi-2- [3-(trifluorometoksi)fenil] sirćetna kiselina

[0210]

[0207] Rastvor kalijum hidroksida (1.851 g, 33.00 mmol) u MeOH (10 mL) je dodat u trajanju od 2 h u malim delovima u mešanu smešu 3-(trifluorometoksi)benzaldehida (1.141 g, 6 mmol) i bromoforma ((0.630 mL, 7.20 mmol) u MeOH (5.00 mL) pri 0°C. Smeša je zatim ostavljena da se zagreje do s.t. i ostavljena je da se meša preko noći. Beli talog se stvorio u reakcionoj smeši. Čvrste supstance su filtrirane pod redukovanim pritiskom, ispranjem čvrstih supstanci sa MeOH (15 mL). Rastvor filtrata je isparen do guste bele paste i zatim je ponovo rastvoren u vodi (50 mL). Ovo je zatim isprano sa Et2O (50 mL) i zatim je vodena faza načinjena kiselom do pH 2 (∼5 mL 2M HCl rastvor) dajući mutni vodeni sloj. Vodena faza je izvađena u EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovane organske materije su osušene preko MgSO4i filtrirane, zatim su rastvarači ispareni pod redukovanim kako bi se dobilo bistro ulje. Sirovi proizvod je prečišćen sa FCC, gradijent eluiranja 10 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobila 2-metoksi-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]sirćetna kiselina (0.832 g, 55%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) δ 3.47 (3H, s), 4.81 (1H, s), 7.20-7.24 (1H, m), 7.33 (1H, s), 7.37-7.46 (2H, m); m/z: ES<->[M-H]<->249.4.

Međujedinjenje 18

2-Etoksi-2-fenilsirćetna kiselina

[0213] U suspenziju natrijum hidroksida 60% (3.25 g, 81.38 mmol) u suvom THF (70 mL) pri 10°C je dodat u vidu kapi u trajanju od 20 minuta rastvor EtOH (1.425 mL, 24.41 mmol) u suvom THF (70 mL). Smeša je zatim tretirana u vidu kapi sa rastvorom 2-bromo-2-fenilsirćetne kiseline (3.5 g, 16.28 mmol) u suvom THF (20 mL) u trajanju od 20 minuta. Reakciona smeša je ostavljena da se polako vrati do s.t. i mešana je u trajanju od 5 h. Smeša je pažljivo razblažena sa slanim rastvorom/2M HCl i izvađena sa EtOAc i organski sloj je ispran sa zasićenim slanim rastvorom pre nego što je osušen (MgSO4), filtriran i isparen pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio proizvod kao braon ulje (3.90 g, 133%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) δ 1.08 (3H, t), 3.33 (1H, m), 3.47 (1H, m), 4.76 (1H, s), 7.13-7.44 (5H, m), 12.56 (1H, s).

Međujedinjenje 19

(2S)-2-Metoksi-2-(4-metoksifenil)sirćetna kiselina

[0214]

[0215] U bocu od 1000 mL sa ravnim dnom površinski prečišćenu i održavanu sa inertnim okruženjem azota, su stavljeni litijum hidroksid (17.3 g, 722.4 mmol), voda (120 mL), MeOH (500 mL, 12.35 mol) i metil (2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)acetat (Međujedinjenje 20, 29 g, 137.95 mmol). Dobijeni rastvor je mešan u trajanju od 2 h pri 25°C u uljanoj kupci.

Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni ostatak je izvađen sa DCM (3 x 100 mL) i organski slojevi su kombinovani. 2 mola HCL je iskorišćeno za podešavanje smeše do pH=2. Dobijeni ostatak je izvađen sa DCM (5 x 100 mL) i organski slojevi su kombinovani. Nakon sušenja (MgSO4) isparavanje je dalo (2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)sirćetnu kiselinu kao žutu čvrstu supstancu (23g, 85%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 26°C) δ 3.39 (3H, s), 3.80 (3H, s), 4.73 (1H, s), 6.89-6.91 (2H, d), 7.32-7.35 (2H, d); m/z: ES<->[M-H]<->195.

Međujedinjenje 20

Metil (2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)acetat

[0216]

[0217] U bocu od 500 mL sa 3 grla isprana i održavana sa inertnim okruženjem azota, su postavljeni MeOH (300 mL) i metal natrijum (9.2 g, 400.18 mmol) u delovima. Rastvor je zatim polivan u trajanju od 30 minuta pre nego što je ohlađen do s.t. Metil 2-bromo-2-(4-metoksifenil)acetat (Međujedinjenje 21, 80 g, 308.76 mmol) je zatim dodato. Dobijeni rastvor je mešan u trajanju od 1 h pri 65°C u uljanoj kupci. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen sa FCC eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1:1).

Racemska smeša je zatim odvojena hiralnom HPLC sa sledećim uslovima : Kolona, CHIRALPAK IC; mobilna faza, HEX:IPA (90:10), detektor, 254nm. Protok 90g/min. Ovo se ispoljilo u metil (2R)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)acetatu kao žuto ulje (27 g, 83%), i metil (2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)acetatu kao žuta čvrsta supstanca (23 g, 71%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 26°C) δ 3.37-3.39 (3H, s), 3.71-3.73 (3H, s), 3.80 (3H, s), 4.72 (1H, s), 6.89 (2H, d), 7.35(2H, d).

Međujedinjenje 21

Metil 2-bromo-2-(4-metoksifenil)acetat

[0218]

[0219] U bocu od 2 L sa 3 grla površinski prečišćena i održavana u inertnoj sredini azota, je stavljen metil 2-(4-metoksifenil)acetat (Međujedinjenje 22, 210 g, 1.17 mol), AIBN (3 g, 18.27 mmol), NBS (208 g, 1.17 mol) i CCl4(1500 mL). Dobijeni rastvor je mešan u trajanju od 6 h pri 80°C u uljanoj kupci. Reakciona smeša je ohlađena sa vodenim/ledenim kupatilom. Čvrste supstance su filtrirane. Dobijeni rastvor je izvađen sa DCM (4 x 150 mL) i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Ovo se ispoljilo u metil 2-bromo-2(4-metoksifenil)acetatu kao žuto ulje (80g, 26%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 26°C) δ 3.79-3.82 (6H, s), 5.35 (1H, s), 6.84-6.90 (2H, d), 7.45-7.50 (2H, d).

Međujedinjenje 22

Metil 2-(4-metoksifenil)acetat

[0220]

[0221] U bocu od 500 mL sa ravnim dnom je postavljena 2-(4-metoksifenil)sirćetna kiselina (200 g, 1.20 mol), sumporna kiselina (2 mL, 37.52 mmol) i MeOH (200 mL, 4.68 mol). Dobijeni rastvor je mešan u trajanju od 2 h pri 70°C u uljanoj kupci. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je razblažen sa H2O (200 mL). pH vrednost rastvora je podešena do 7 sa natrijum bikarbonatom (5 mol/L). Dobijeni rastvor je izvađen sa DCM (3 x 300 mL) i organski slojevi su kombinovani (MgSO4) i ispareni pod redukovanim pritiskom. Ovo se ispoljilo u metil 2-(4-metoksifenil)acetatu kao braon ulje (210g, 97%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 26°C) δ 3.78-3.89 (6H, s), 5.35 (1H, s), 6.85-6.90 (2H, d), 7.45-7.50 (2H, s).

Međujedinjenje 23

2-(4-Fluorofenil)-2-metoksisirćetna kiselina

[0222]

[0223] Metil 2-(4-fluorofenil)-2-metoksiacetat (Međujedinjenje 24, 1.32 g, 6.66 mmol) je rastvoreno u MeOH (24 mL) i mešano na s.t. Rastvor kalijum hidroksida (0.45 g, 7.992 mmol) u MeOH (12 mL) je dodat o smeša je mešana u trajanju od 5 h. Smeša je isparena pod redukovanim pritiskom. Ostatak je podeljen između vode i EtOAc (70 mL pojedinačno). Vodeni sloj je ispran sa EtOAc (70 mL) i zatim je načinjen kiselim (do pH = 2) sa 2N hlorovodoničnom kiselinom. Zatim je izvađen sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani kiseli ekstrakti su osušeni (MgSO4) i ispareni pod redukovanim pritiskom kako bi se dobila 2-(4fluorofenil)-2-metoksi-sirćetna kiselina (1.16 g, 94%) kao bezbojna guma.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20°C) δ 3.42 (3H, s), 4.77 (1H, s), 7.10-7.04 (2H, m), 7.44-7.40 (2H, m). Međujedinjenje 24

Metil 2-(4-fluorofenil)-2-metoksiacetat

[0224]

[0225] Cezijum karbonat (7.64 g, 23.45 mmol) je rastvoren u DMF (20 mL) na s.t.

Jodometan (2.4 mL, 38.55 mmol) je dodat, što je praćeno sa 2-(4-fluorofenil)-2-hidroksisirćetnom kiselinom (2.0 g, 11.75 mmol) i smeša je mešana u trajanju od 48 h na s.t. DMF je isparen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je podeljen između EtOAc i vode (75 mL pojedinačno). Organske materije su isprane sa vodom (75 mL), osušene (MgSO4), isparene pod redukovanim pritiskom i prečišćene sa FCC, eluent 3:1 cikloheksan:EtOAc. Čiste frakcije su isparavane dok nisu bile suve kako bi se dobio metil 2-(4-fluorofenil)-2-metoksiacetat (1.68 g, 72%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20°C) δ 3.40 (3H, s), 3.72 (3H, s), 4.76 (1H, s), 7.09-7.03 (2H, m), 7.44-7.40 (2H, m).

Međujedinjenje 25

2-Etoksi-2-(4-fluorofenil)sirćetna kiselina

[0226]

[0227] U mešanu smešu 4-fluorobenzaldehida (2.82 mL, 26.299 mmol) i bromoforma (2.76 mL, 31.559 mmol) u EtOH (30 mL) pri 0°C je dodat, u vidu kapi u trajanju od 30 minuta, rastvor kalijum hidroksida (8.12 g, 144.645 mmol) u EtOH (60 mL). Smeša je mešana i zagrejana do s.t. preko noći. Dobijeni talog je uklonjen sa filtracijom. Filtrat je isparen kako bi se dobila pasta koja je stavljena u vodu (100 mL) i izvađena sa EtOAc (2 x 100 mL) kako bi se uklonio nereagovani aldehid. Vodena faza je zatim načinjena kiselom do pH=2 sa 2N

1

hlorovodoničnom kiselinom i izvađena sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovane organske materije su osušene (MgSO4), filtrirane i isparene pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je dalje prečišćen sa FCC (3% MeOH u DCM) kako bi se dobila 2-etoksi-2-(4-fluorofenil)sirćetna kiselina (3.76 g, 72 %) kao bistra guma.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1.14 (3H, t), 3.43-3.36 (2H, m, delimično prekriven vrhom vode), 4.87 (1H, s), 7.21-7.17 (2H, m), 7.45-7.41 (2H, m); m/z: ES<->[M-H]<->197.

Međujedinjenje 26

2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-sirćetna kiselina

[0228]

[0229] U mešanu smešu 4-fluoro-3-metoksi-benzaldehida (1.0 g, 6.488 mmol) i bromoforma (0.68 mL, 7.785 mmol) u MeOH (10 mL) pri 0°C je dodat, u vidu kapi u trajanju od 1 h, rastvor kalijum hidroksida (2.0 g, 35.682 mmol) u MeOH (20 mL). Nakon dodavanja smeša je mešana i zagrejana do s.t. preko noći. Dobijeni talog je uklonjen sa filtracijom. Filtrat je isparen kako bi se dobila pasta koja je stavljena u vodu (100 mL) i izvađena sa EtOAc (2 x 100 mL). Vodena faza je zatim načinjena kiselom do pH=2 sa 2N hlorovodoničnom kiselinom. Zatim je izvađena sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovane organske materije su osušene (MgSO4), filtrirane i isparene pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je dalje prečišćen sa FCC (gradijent eluiranja 0-5% MeOH u DCM) kako bi se dobila 2-(4-fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-sirćetna kiselina (0.66 g, 47 %) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400mHz, CDCl3, 30°C) δ 3.43 (3H, s), 3.90 (3H, s), 4.75 (1H, s), 6.95-7.00 (1H, m), 7.10-7.04 (2H, m); m/z: ES<->[M-H]<->213.

Međujedinjenje 27

2- [3-(Difluorometoksi)fenil] -2-etoksi-sirćetna kiselina

[0230]

2

[0231] U mešanu smešu 3-(difluorometoksi)benzaldehida (2.0 g, 11.61 mmol) i bromoforma (1.22 mL, 13.94 mmol) u EtOH (40 mL) pri 0°C je dodat, u vidu kapi u trajanju od 1 h, rastvor kalijum hidroksida (3.59 g, 63.90 mmol) u EtOH (20 mL). Nakon dodavanja smeša je ostavljena se meša i zagrejana je do s.t. preko noći. Talog koji se stvorio je uklonjen sa filtracijom. Filtrat je isparen kako bi se dobila pasta koja je stavljena u vodu (100 mL) i izvađena sa EtOAc (2 x 75 mL). Vodena faza je načinjena kiselom do pH 1 sa 2M HCl i izvađena sa EtOAc (2 x 75 mL). Kombinovane organske materije su osušene (MgSO4), filtrirane i isparene kako bi se dobilo bledo braon ulje. Ovo je prečišćeno sa FCC (gradijent eluiranja 5% EtOAc 0.1% mravlja kiselina u cikloheksanu do 20% EtOAc 0.1% mravlja kiselina u cikloheksanu). Čiste frakcije su isparene pod redukovanim pritiskom kako bi se dobila 2-[3-(difluorometoksi)fenil]-2-etoksi-sirćetna kiselina kao bezbojno ulje (1.8 g, 62%).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21°C) δ 1.29 (3H, t), 3.49-3.70 (2H, m), 4.89 (1H, s), 6.52 (1H, t), 7.07-7.15 (1H, m), 7.21-7.26 (1H, m), 7.28-7.35 (1H, m), 7.34-7.41 (1H, m). m/z: ES<->[M-H]<->245.

Međujedinjenje 28

2-Etoksi-2- [3-(trifluorometoksi)fenil] sirćetna kiselina

[0232]

[0233] U mešanu smešu kalijum hidroksida (1.62 g, 28.93 mmol) i bromoforma (0.55 mL, 6.31 mmol) u EtOH (15 mL) pri 0°C je dodat, polako u periodu od 10 min, rastvor 3-(trifluorometoksi)benzaldehida (0.75 mL, 5.26 mmol) u EtOH (30 mL). Nakon dodavanja smeša je ostavljena se meša dok se zagreva do s.t. preko noći. Talog je uklonjen sa filtracijom. Filtrat je isparen kako bi se dobila pasta koja je stavljena u vodu (200 mL) i izvađena sa DCM (2 x 100 mL). Ovo je stvorilo emulziju, vodena faza je načinjena kiselom sa 2M HCl (10 mL) i odvojena. Zatim je dalje izvađena sa EtOAc (100mL). Kombinovane organske materije su isparene pod redukovanim pritiskom i prečišćene sa FCC (gradijent eluiranja 0-50% EtOAc u cikloheksanu). Čiste frakcije su kombinovane i isparene pod redukovanim pritiskom kako bi se dobila 2-etoksi-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]sirćetna kiselina (690 mg, 49%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21°C) δ 1.16 (3H, t), 3.38-3.50 (1H, m), 3.53-3.66 (1H, m), 4.99 (1H, s), 7.28-7.39 (2H, m), 7.45 (1H, d), 7.53 (1H, t), 13.04 (1H, s); m/z: ES<+>[M+H]<+>265.

Biološki ogledi

[0234] Sledeći primeri su korišćeni za merenje uticaja jedinjenja prema predmetnom pronalasku: a) Ogled potentnosti GLS enzima; b) Ogled ćelijske potentosti GLS; c) Ogled ćelijske proliferacije GLS; i d) Mišiji ksenograft model. Za vreme opisivanja ogleda, uopšteno:

i. sledeće skraćenice su korišćene: CO2= ugljen dioksid DMEM = Dulbecco-va izmenjena Eagle sredina; DMSO = dimetil sulfoksid; EDTA = Etilenediaminetetrasirćetna kiselina; EGTA = Etilene glikol tetrasirćetna kiselina; FCS = fetalni serum teleta; h = sat(i); NBS = nevezujuća površina; SDS = natrijum dodecil sulfat; s.t. = sobna temperatura; TRIS = Tris(Hidroksimetil)aminometan. ii. IC50su izračunate na osnovu pametnog modela podudaranja u Genedata. IC50vrednost je koncentracija test jedinjenja koje je umanjilo 50% biološke aktivnosti. Kada je izvršeno više ponovljenih testova na datom Primeru, zabeleženi rezultat je geometrijska sredina.

Ogled a) Ogled potentnosti GLS enzima

[0235] Glutamat oksidaza/AmplexRed spojeni ogled je korišćen za merenje sposobnosti jedinjenja da se vežu za i umanje aktivnost GLS1 in vitro.6His označeni GLS protein (amino kiseline 63-669) izražen u E. Coli je prečišćen i skladišten pri -80°C u alikvotama. GLS1 je razblažen do 2 x radne koncentracije i inkubiran na r.t. kako bi se omogućilo tetramernim/dimernim oblicima da dostignu mirno stanje. Merenja u ogledu izvršena su u puferu koji je sadržao 50mM TRIS pH 7.8, 100mM NaPO4, pH 7.8, 0.001% v/v Tween20. Prečišćeni rekombinantni GLS1 protein je razblažen u puferu za ogled do 12nM i prethodno je inkubiran na s.t. u trajanju od 30 minuta. Test jedinjenja pripremljena su razblaživanjem u 100% DMSO kako bi se dobili ispravni opseg doze za odgovor na koncentraciju u 11 tačaka i odgovarajuća zapremina (2.5-60nl) raspoređena u mikro poloče za ogled sa 384 udubljenja

4

(Greiner proizvodni kod 784900) upotrebom Labcyte Echo 555 akustičnog dozera.

Koncentracija DMSO je održavana pri 2% ponovnim punjenjem sa DMSO rastvorom. 3 µL razblažen GLS1 proteina (12nM) je zatim raspoređeno u svaki otvor upotrebom BioRaptr automatizovanog dozera (ckman-Coulter) i inkubirano je u trajanju od 15 minuta na st.t.3 µL 100mM glutamina razblaženog u puferu za ogled je zatim dodato i reakcija je inkubirana na s.t. u trajanju od 60 minuta. Reakcija je zatim zaustavljena dodavanjem 45µM 6-(2-bromoetinil)-2,3-dimetil-kvinazolin-4-ona, 75µM Amplex Red, 0.375 jedinica/mL peroksidaze rena, 0.12 jedinica/mL glutamat oksidaza u 100mM TRIS pH7.5. Nakon 30 minuta na sobnoj temperaturi u mraku, ploče su očitane na Perkin Elmer EnVision upotrebom 535/590nm optičkih filtera i sirovi podaci analizirani su upotrebom Genedata kako bi se stvorile IC50vrednosti. Artefakt verzija ogleda gde su 6His obeleženi GLS protein i glutamin zamenjeni sa puferom za ogled takođe korišćeni za isključivanje nespecifičnih efekata na komponente ogleda.

Ogled b): Ogled ćelijske potentnosti GLS

[0236] Jedinjenja su procenjena za njihovo potencijalno umanjivanje GLS aktivnosti u ćelijama upotrebom PC3 spojenog ogleda merenjem pražnjenja glutamata u ćeliji. Test jedinjenja pripremljena su razblaživanjem u 100% DMSO kako bi se dobili ispravni opseg doze za odgovor na koncentraciju u 11 tačaka i odgovarajuća zapremina (5-120nl) raspoređena u mikro poloče za ogled sa 384 udubljenja (Greiner proizvodni kod 3712) upotrebom Labcyte Echo 555 akustičnog dozera. Koncentracija DMSO je održavana pri 0,3% ponovnim punjenjem sa DMSO rastvorom. PC3 ćelije su gajene u DMEM bez fenola, 10% dializovanom FCS, 2mM glutamina i nakon raspoređivanja sa tripsinizacijom postavljene su pri 5.6 x 10<3>ćelija po udubljenju u 40µl sredine za gajenje neposredno u ploče za ogled sa 384 udubljenja koje su sadržale raspoređeno jedinjenje. Nakon inkubiranja u trajanju od 6 h pri 37°C, 5% CO2sredina za gajenje je izvučena i ćelije su lizovane u 15µl pufera koji je sadržao 10mM TRIS pH7.4, 100mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1mM NaF, 20mM Na4P2O7, 2mM Na3VO4, 1% Triton X-100, 10% glicerol, 0.1% SDS i 0.5% dezoksiholat. 4µl Of ćelijskog lizata zatim je preneto u NBS ploču sa 384 udubljenja (Corning proizvodni kod 3575) i 35µl 27.5 µM Amplex Red, 0.1375 U/mL peroksidaze rena, 0.044U/mL glutamat oksidaze, 100mM TRIS pH7.5 je dodato. Nakon 30 minuta na sobnoj temperaturi u mraku, ploče su očitane na Perkin Elmer EnVision upotrebom 535/590nm optičkih filtera i sirovi podaci analizirani su upotrebom vlasničkog softvera kako bi se stvorile IC50vrednosti.

Ogled c): Ogled ćelijske proliferacije GLS

[0237] Sposobnost jedinjenja da umanje rast ćelija meren je upotrebom ogleda ćelijske proliferacije NCI-H1703 sa pločama sa 384 udubljenja. NCI-H1703 ćelije gajene su u fenolu bez crvene RPMI1640, 10% FCS i 2mM glutamina i posejane su pri gustini od 750 ćelija po udubljenju u 40µl sredine za rast u ploče sa 384 udubljenja sa čistim dnom (Corning proizvodni kod 3712) i inkubirane u trajanju od 24 h pri 37°C, 5% CO2. Test jedinjenja pripremljena su razblaživanjem u 100% DMSO kako bi se dobili ispravni opseg doze za odgovor na koncentraciju u 12 tačaka i odgovarajuća zapremina (5-120nl) raspoređena neposredno u ploče za ogled koje su sadržane ćelije. Koncentracija DMSO je održavana pri 0.3% ponovnim punjenjem sa DMSO rastvorom. Ploče su inkubirane u trajanju od 5 dana pri 37°C, 5% CO2, Sytox zelena i Saponin su dodati u krajnju koncentraciju od 2µM i 0.25% redom i inkubirane u trajanju od 6 sati pre analiziranja. Ploče su očitane na Acumen eX3 (TTP Labtech) upotrebom 488nm pobuđivanja i FITC filtera postavljenog (500-530nm) za emisiju. IC50vrednosti su izračunate poklapanjem krivih do maksimalnog umanjivanja rasta na dan nula upotrebom GeneData softvera za analiziranje.

[0238] Potentnost Primera u ogledima a) - c) prikazana je u Tabeli 2.

Tabela 2: Podaci o potentnosti za Primere u Ogledima a) - c)

Ogled d): Mišiji ksenograft model

Monoterapija

[0239] Ženke Harlan miševa bez dlake su transplantirane s.c. sa ljudskim NSCLC NCI-H3122 ćelijama kako bi se odredila in-vivo aktivnost protiv tumora za GLS inhibitore. 5 x 10<6>ćelija u 50% matrigelu (BD Bioscience) je ubrizgano s.c. u levi bok životinja. Životinje su nasumično raspoređene u grupe od 10-15 kada je tumor dostigao zapreminu od ∼200-30mm<3>i kada je lečenje započeto. Životinje su dozirane u trajanju od 17 dana sa 50mg/kg jednom dnevno peroralnim putem sa Primerom 2(a) kao monoterapijom. Tumori su mereni dva puta nedeljno sa kaliperom i zapremina tumora je izračunata upotrebom eliptične formule (π/6 x širina x širina x dužina). Statistički značaj je procenjen upotrebom t-testa sa jednim repom. Primer 2 je formulisan u 1% Polysorbate 80 i pH je podešena sa 1M HCL do krajnje koncentracije pH od pH3.5. Rezultati testiranja Primera 2(a) u NCI-H3122 mišijem ksenograft modelu su prikazani na Slici 2. Podaci su prikazani kao prosečni volumen tumora s izračunatom srednjom standardnom greškom. Lečenje NCI-H3122 ksenografta sa monoterapijom iz Primera 2(a) ispoljilo se u umanjenju rasta in-vivo.

Kombinovana terapija

[0240] Mužjaci Scid miševa su transplantirani s.c. sa ljudskim NSCLC NCI-H1703 ćelijama (ATCC - CRL-5889) kako bi se odredila in-vivo aktivnost protiv tumora za GLS inhibitore.1 x 10<7>ćelija u 50% matrigelu (BD Bioscience) je ubrizgano s.c. u levi bok životinja.

[0241] Životinje su nasumično raspoređene u grupe od 10-12 kada je tumor dostigao zapreminu od ∼200-300mm<3>i kada je lečenje započeto. Životinje su dozirane u trajanju od 16 dana sa 100mg/kg jednom dnevno peroralnim putem sa Primerom 2(a) kao monoterapijom ili u kombinaciji sa Taxotere®. U grupi doziranoj sa Taxotere® životinje su dozirane jednom nedeljno intravenoznim putem gde je Taxotere® davan 1 sat nakon peroralne doze Primera 2(a). Tumori su mereni dva puta nedeljno sa kaliperom i zapremina tumora je izračunata upotrebom eliptične formule (π/6 x širina x širina x dužina). Statistički značaj je procenjen upotrebom t-testa sa jednim repom. Taxotere® (Sanofi) je formulisan u fiziološkom rastvoru. Primer 2 je formulisan u 1% Polysorbate 80 i pH je podešena sa 1M HCL do krajnje koncentracije pH od pH3.5. Rezultati testiranja Primera 2(a) u NCI-H1703 mišijem ksenograft modelu su prikazani na Slici 3. Podaci su prikazani kao prosečni volumen tumora s izračunatom srednjom standardnom greškom. Lečenje NCI-H1703 ksenografta sa monoterapijom iz Primera 2(a) ispoljilo se u umanjenju rasta in-vivo. Lečenje NCI-H1703 ksenografta sa Primerom 2(a) doziranom u kombinaciji sa jednonedeljnim rasporedom Taxotere® ispoljilo se u kratkoj regresiji u poređenju sa Taxotere® lečenjem u vidu monoterapije.

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje prema Formuli

ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog, gde: Q predstavlja piridazin-3-il, 1,2,4-triazin-3-il ili 1,2,4-triazin-6-il; R predstavlja vodonik, fluor ili metoksi; R<1>predstavlja vodonik, metoksi, difluorometoksi ili trifluorometoksi; i R<2>predstavlja metil ili etil.
2. Jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u patentnom zahtevu 1, gde Q predstavlja piridazin-3-il ili 1,2,4-triazin-3-il.
3. Jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u patentnom zahtevu 2, gde Q predstavlja piridazin-3-il.
4. Jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3 gde R predstavlja vodonik.
5. Jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 gde R<1>predstavlja vodonik.
6. Jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 gde R<1>predstavlja metoksi, difluorometoksi ili trifluorometoksi.
7. Jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u patentnom zahtevu 6, gde R<1>predstavlja metoksi.
8. Jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7 gde R<2>predstavlja metil.
9. Jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7 gde R<2>predstavlja etil.
10. Jedinjenje prema formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u patentnom zahtevu 1, gde je jedinjenje izabrano iz grupe koju čine: (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il] acetamid; (2R)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il] acetamid; (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il] acetamid; (2R)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il] acetamid; (2S)-2-metoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-6-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il] acetamid; (2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2R)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2S)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2R)-2-metoksi-2-(3-metoksifenil)-N-[5-[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2R)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2R)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; 1 (2S)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid; (2R)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-(1,2,4-triazin-3-il)pirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid; (2S)-2-metoksi-N-[5-[[(3N)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid; (2R)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid; (2S)-2-etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2S)-2-metoksi-2-(4-metoksifenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2R)-2-etoksi-2-fenil-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2S)-2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2R)-2-(4-Fluorofenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2S)-2-etoksi-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2R)-2-etoksi-2-(4-fluorofenil)-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2S)-2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2R)-2-(4-Fluoro-3-metoksi-fenil)-2-metoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2S)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2R)-2-[3-(Difluorometoksi)fenil]-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]acetamid; (2S)-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid;and (2R)-2-etoksi-N-[5-[[(3R)-1-piridazin-3-ilpirolidin-3-il]amino]-1,3,4-tiadiazol-2-il]-2-[3-(trifluorometoksi)fenil]acetamid. 2
11. Farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10 i bar jedan farmaceutski prihvatljiv rastvarač ili nosač.
12. Jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10 za upotrebu u terapiji.
13. Jedinjenje prema Formuli (I) ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10 za upotrebu u pri lečenju raka.